RU2348429C2 - Иммуноглобулин человека противосибиреязвенный для внутривенного введения - Google Patents
Иммуноглобулин человека противосибиреязвенный для внутривенного введения Download PDFInfo
- Publication number
- RU2348429C2 RU2348429C2 RU2006129089/15A RU2006129089A RU2348429C2 RU 2348429 C2 RU2348429 C2 RU 2348429C2 RU 2006129089/15 A RU2006129089/15 A RU 2006129089/15A RU 2006129089 A RU2006129089 A RU 2006129089A RU 2348429 C2 RU2348429 C2 RU 2348429C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- human
- anthrax
- antibodies
- antianthrax
- drug
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицинским иммунобиологическим сывороточным препаратам, используемым для экстренной профилактики и лечения сибиреязвенной инфекции у людей. Сущность изобретения включает получение готовой лекарственной формы иммуноглобулина человека противосибиреязвенного для внутривенного введения, представляющей собой 5,0±0,5% белковую фракцию, содержащую 100% IgG, выделенную из плазмы крови доноров, проверенных на отсутствие антител к вирусам иммунодефицита человека и гепатитов и иммунизированных комбинированной сибиреязвенной вакциной. Преимущество изобретения заключается в повышении длительности сохранения иммунитета. 1 табл.
Description
Изобретение относится к медицинским иммунобиологическим сывороточным препаратам, используемым для экстренной профилактики и лечения сибиреязвенной инфекции у людей.
Одним из известных сывороточных препаратов для внутривенного введения является иммуноглобулин человека нормальный (Справочник по применению бактерийных и вирусных препаратов. /Под ред. С.Г.Дзагурова, Ф.Ф.Резепова. - М., Медицина, 1975, 223 с.; Руководство по вакцинному и сывороточному делу. /Под ред. П.Н.Бургасова. - М., Медицина, 1978, 440 с.). Данный препарат используется для лечения тяжелых токсических форм бактериальных и вирусных инфекций, а также послеоперационных осложнений, сопровождающихся септицемией. Активным компонентом его являются иммуноглобулины, обладающие активностью антител различной специфичности. Препарат обладает неспецифической активностью, проявляющейся в повышении общей резистентности организма. Однако использование данного препарата для лечения сибирской язвы неэффективно.
Известен глобулин противосибиреязвенный лошадиный жидкий и сухой, выпускаемый Научно-исследовательским институтом микробиологии МО РФ (г.Киров), представляющий собой 8-10% раствор иммуноактивных γ- и β-глобулиновых фракций гипериммунной лошадиной противосибиреязвенной сыворотки (Патент РФ №2214836 «Глобулин противосибиреязвенный лошадиный сухой»).
Недостатком вышеуказанного препарата, прежде всего, является его гетерогенность. Белки, входящие в его состав, обладают выраженными антигенными свойствами для человека. Введение данного препарата в организм человека может сопровождаться сенсибилизирующим действием сывороточных белков (сывороточная болезнь, анафилактический шок), что требует предварительного определения индивидуальной чувствительности организма к белкам данного препарата путем постановки специальной внутрикожной пробы.
К причинам, препятствующим достижению полноценного результата для экстренной профилактики и лечения, относится то, что при введении глобулина противосибиреязвенного лошадиного в мышцу адсорбция препарата происходит медленно, уровень антител в крови реципиента достигает максимума только на 3…6 сутки, и до 30% введенного препарата «утилизируется» в месте введения. Кроме того, создаваемый данным препаратом пассивный иммунитет носит кратковременный характер, длительность его составляет 1…2 недели. Кратковременность иммунитета обуславливается, главным образом, образованием антител к белкам введенной сыворотки, являющейся для организма чужеродным антигеном. По этой же причине после повторного введения препарата длительность пребывания антител в организме еще больше уменьшается в результате действия ранее образовавшихся антител к белкам введенного препарата.
Задачей настоящего изобретения является получение готовой лекарственной формы иммуноглобулина человека противосибиреязвенного жидкого и сухого для внутривенного введения.
Решение поставленной задачи достигается тем, что глобулин для внутривенного введения содержит специфически активные белки гомологичного происхождения.
Новый препарат представляет собой 5,0±0,5% гамма-глобулин, содержащий не менее 95% IgG с титром антител к протективному антигену (ПА) в ИФА не менее 1:1600, полученный из плазмы крови доноров, иммунизированных комбинированной сибиреязвенной вакциной, содержащих антитела к ПА сибиреязвенного микроба в титре не менее 1:400 по результатам ИФА.
Выделение белковой фракции IgG состоит из следующих этапов:
1. Отбор доноров, проверенных на отсутствие антител к вирусам иммунодефицита человека и гепатитов, и их последующая иммунизация комбинированной сибиреязвенной вакциной.
2. Забор плазмы крови доноров через 20…22 дня после иммунизации методом прерывистого двойного плазмафереза и определение специфической активности образцов плазмы (титра антител к ПА сибиреязвенного микроба) методом непрямого твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА).
3. Отбор, по результатам ИФА, образцов плазмы, содержащих антитела к ПА сибиреязвенного микроба в титре 1:400 и выше.
4. Получение концентрата иммуноглобулина G по схеме, составленной на основе 6-го метода Cohn и 9-го метода Cohn - Onkley (Наставление по применению ботулинических сывороток типов В, С, Е, F, очищенных методом пептического переваривания, концентрированных. Утв. МЗ СССР 09.12.1983 г.).
5. Приготовление внутривенной формы иммуноглобулина путем кислотно-ферментативного гидролиза.
Белковая фракция IgG, выделенная из плазмы крови доноров, иммунизированных комбинированной сибиреязвенной вакциной, является гомологичной, нереактогенной для человеческого организма и обладает специфической активностью к ПА сибиреязвенного микроба.
Проведенный анализ, включающий поиск по патентным и научно-техническим источникам информации и выявление источников, содержащих сведения об аналогах заявленного изобретения, позволил установить, что заявитель не обнаружил источник, характеризующийся признаками, тождественными всем существенным признакам заявленного изобретения. Сущность изобретения заключается в получении готовой лекарственной формы иммуноглобулина человека противосибиреязвенного, представляющей собой специфически активную белковую фракцию, выделенную из плазмы крови доноров, предварительно иммунизированных комбинированной сибиреязвенной вакциной СТИ-1, проверенных на отсутствие антител к вирусам иммунодефицита человека и гепатитов, содержащую специфические антитела.
Возможность практического осуществления заявляемого изобретения подтверждается следующим примером.
Пример
В реактор загружают иммунную плазму с титром антител 1:400 в объеме 40 л, 53% этиловым спиртом, охлажденным до минус 12°С, проводят осаждение фракции крови - фибриногена, являющегося «бросовым» осадком. Осажденный фибриноген выделяют из реакционной смеси центрифугированием на суперцентрифуге СГО-100 при скорости вращения ротора 15000 об/мин. Получают центрифугат I в количестве 45 л (1,13 л/л плазмы).
Центрифугат I возвращают в реактор, где 53% этиловым спиртом, охлажденным до температуры минус 12°С, проводят осаждение фракции иммуноглобулинов. Осадок выделяют из реакционной смеси центрифугированием на суперцентрифуге СГО-100 при скорости вращения ротора 15000 об/мин. Получают 1,7 кг осадка фракции II+III с титром антител к возбудителю сибирской язвы в разведении 1:400.
Полученный осадок «выпрессовывают» при температуре минус 25°С для удаления свободного этилового спирта.
В дальнейшем проводят фракционирование осадка фракции II+III (иммуноглобулинов).
Для этого проводят отмывку осадка от низкомолекулярных белков. Осадок растворяют 5% этиловым спиртом, приготовленным на 0,85% растворе хлористого натрия. Полученную суспензию охлаждают в реакторах до минус (1,5…2)°С, осаждение (отмывку) проводят 50% этиловым спиртом.
Затем осуществляют осаждение бета-глобулинов и липоидов.
Для этого реакционную смесь после длительного выстаивания пропускают через суперцентрифугу СГО. Полученный осадок (фракция иммуноглобулинов) вновь растворяют в 0,014 М растворе хлористого натрия и охлаждают в реакторе до температуры +0,1-0,2°С. Концентрацию водородных ионов доводят до 4,95…4,98 ед. рН.
Осаждение бета-глобулинов и липоидов проводят 50% этиловым спиртом (скорость подачи в начале осаждения 20 л/час, в конце осаждения - 12 л/час), охлажденным до минус 16°С. Концентрацию водородных ионов при этом устанавливают на уровне 5,22 ед. рН. После длительного перемешивания и «выстаивания» смесь центрифугируют на суперцентрифуге СГО, полученный осадок бета-глобулинов и липоидов актируют и получают 1,3 кг осадка.
Дополнительное удаление липоидов проводят подщелачиванием растворов до значений 5,56 ед. рН 1М раствором натрия двууглекислого с одновременным повышением температуры с минус 5…6 до минус 4,5°С. После перемешивания смесь центрифугируют, полученные осадки липоидов актируют и получают 0,08 кг осадка.
Осаждение гамма-глобулиновой фракции проводят 50% этиловым спиртом в присутствии натрия хлористого и натрия двууглекислого при концентрации водородных ионов 6,97 ед. рН в начале осаждения, 7,2 ед. рН - в конце осаждения и при температуре смеси в конце осаждения минус 9,5°С.
После 15-часового выстаивания и перемешивания смесь центрифугируют.
В результате центрифугирования получают осадок гамма-глобулиновой фракции весом 0,6 кг (выход с 1 л плазмы - 1,5 г/л).
На завершающем этапе проводят удаление из осадка технологического этилового спирта, который составляет 70% веса осадка и имеет крепость 40°.
Для этого используют фильтры «Biomax-30» установки «Pellicon-2» (фирма «Millihore» США). Полное удаление этилового спирта достигается 5-кратным разведением осадка водой для инъекций и проведением пяти циклов ультрафильтрации через фильтры «Biomax-30».
Ультрафильтрация позволяет, одновременно с удалением спирта из раствора, провести концентрирование белка. В данном случае белок концентрируется с 1,8% в начале ультрафильтрации до 11,5% - в конце.
В дальнейшем устанавливают содержание белка в растворе 5,0±0,5%, рН 7,0±0,5, иммуноглобулин подвергают стерилизующей фильтрации и разливают по флаконам.
Полученный таким образом иммуноглобулин человека противосибиреязвенный для внутривенного введения является гомологичным и практически нереактогенным для человеческого организма препаратом, выгодно отличающимся от глобулина противосибиреязвенного лошадиного объемом безопасной для введения дозы, скоростью возникновения и длительностью создаваемого пассивного иммунитета до 30 суток. Препарат позволяет эффективно и более безопасно проводить экстренную профилактику и лечение больных сибиреязвенной инфекцией различной степени тяжести.
Основные показатели качества иммуноглобулина человека противосибиреязвенного для внутривенного введения представлены в таблице.
Основные показатели качества иммуноглобулина человека противосибиреязвенного для внутривенного введения | |
Наименование показателя качества | Иммуноглобулин человека противосибиреязвенный |
Подлинность | Выявляются только белки сыворотки крови человека, белки животного происхождения отсутствуют |
Прозрачность, ед. опт. плотн. | 0,01 |
Цветность, ед. | 0,017 |
Содержание белка, % | 5,4 |
Электрофоретическая однородность | 100% γ-глобулин человека |
Стерильность | стерилен |
Пирогенность | непирогенен |
Токсичность | нетоксичен |
рН, ед. рН | 6,65 |
Титр антител к ПА в ИФА, ед. титра | Не менее 1:1600 |
Фракционный состав в иммуноэлектрофорезе | Интенсивная дуга IgG человека и одна дополнительная дуга |
Индекс превентивных свойств, отн. ед. | 0,5 |
Содержание хлоридов, % | 0,9 |
Содержание глюкозы, % | 0,54 |
Содержание гликокола, % | 0,63 |
Молекулярные параметры | Димеры IgG человека - 3,3% Мономеры - 84,9% Фрагменты - 11,8% |
Антикомплементарная активность | 0 ед. СН50 комплемента на 1 мг белка |
Claims (1)
- Иммуноглобулин человека противосибиреязвенный для внутривенного введения, представляющий собой 5,0±0,5% гамма-глобулин, содержащий 100% IgG с титром антител к ПА в ИФА не менее 1:1600, полученный из плазмы крови доноров, иммунизированных комбинированной сибиреязвенной вакциной, содержащей антитела к ПА сибиреязвенного микроба в титре не менее 1:400 по результатам ИФА.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2006129089/15A RU2348429C2 (ru) | 2006-08-10 | 2006-08-10 | Иммуноглобулин человека противосибиреязвенный для внутривенного введения |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2006129089/15A RU2348429C2 (ru) | 2006-08-10 | 2006-08-10 | Иммуноглобулин человека противосибиреязвенный для внутривенного введения |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2006129089A RU2006129089A (ru) | 2008-02-20 |
RU2348429C2 true RU2348429C2 (ru) | 2009-03-10 |
Family
ID=39266838
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2006129089/15A RU2348429C2 (ru) | 2006-08-10 | 2006-08-10 | Иммуноглобулин человека противосибиреязвенный для внутривенного введения |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2348429C2 (ru) |
-
2006
- 2006-08-10 RU RU2006129089/15A patent/RU2348429C2/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Руководство по вакцинному и сывороточному делу./Под ред. П.Н.Бургасова. - М.: Медицина, 1978, с.349-360. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2006129089A (ru) | 2008-02-20 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2612899C2 (ru) | Способ получения композиции иммуноглобулинов | |
EA023382B1 (ru) | Способ получения высококонцентрированного препарата иммуноглобулина для подкожного применения | |
CN111454354A (zh) | 抗2019-nCoV的抗体、制剂及其制备方法和应用 | |
Perper et al. | A rapid method for purification of large quantities of anti-lymphocytic serum. | |
CN110078824B (zh) | 一种白色霞水母毒素抗毒血清的制备方法 | |
RU2348429C2 (ru) | Иммуноглобулин человека противосибиреязвенный для внутривенного введения | |
RU2673546C1 (ru) | Способ получения иммуноглобулина против лихорадки эбола из сыворотки крови лошадей, жидкого | |
AU2020287911A1 (en) | Method and kit for testing potency of immunoglobulin compositions | |
US4541953A (en) | Preparation of anti-T-lymphocyte globulin | |
CN113278067A (zh) | 一种新型冠状病毒猪源性免疫球蛋白的制备方法 | |
RU2661028C2 (ru) | Фармацевтическая композиция для пассивной иммунизации против бешенства, фармацевтический набор, способ применения фармацевтического набора | |
Hofmann et al. | Protection of mice against tick-borne encephalitis by different classes of immunoglobulins | |
RU2770425C2 (ru) | Способ получения иммуноглобулина противооспенного из сыворотки крови лошадей | |
RU2519765C1 (ru) | Способ получения антитимоцитарного глобулина для внутривенного введения | |
RU2264826C1 (ru) | Способ получения антитимоцитарного глобулина для внутривенного введения | |
CN100349918C (zh) | 呼吸道合胞病毒和腺病毒特异性免疫球蛋白制备方法 | |
RU2150960C1 (ru) | Способ получения иммуноглобулина противодифтерийного человека | |
RU2616266C1 (ru) | Способ получения иммуноглобулинового препарата для наружного применения | |
RU2815252C1 (ru) | Способ получения очищенного гетерологического иммуноглобулина против лихорадки Эбола | |
RU2257916C1 (ru) | Препарат, содержащий иммуноглобулин против лихорадки марбург из сыворотки крови лошадей жидкий (иммуноглобулин лошадиный марбург) | |
RU2158136C1 (ru) | Способ получения igm-содержащего концентрата иммуноглобулина | |
RU2189833C2 (ru) | Способ получения иммуноглобулинового препарата | |
EA044535B1 (ru) | Способ получения иммуноглобулина g против covid-19 | |
RU2238106C2 (ru) | Препарат внутривенного противоаллергического иммуноглобулина и способ его получения | |
RU2255766C2 (ru) | Способ получения иммуноглобулинового препарата для профилактики и терапии бактериальных и вирусных инфекций, иммуноглобулиновый препарат для профилактики и терапии бактериальных и вирусных инфекций (варианты) и суппозитории на основе иммуноглобулинового препарата |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PC43 | Official registration of the transfer of the exclusive right without contract for inventions |
Effective date: 20120510 |
|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20140811 |