EA044535B1 - Способ получения иммуноглобулина g против covid-19 - Google Patents
Способ получения иммуноглобулина g против covid-19 Download PDFInfo
- Publication number
- EA044535B1 EA044535B1 EA202290695 EA044535B1 EA 044535 B1 EA044535 B1 EA 044535B1 EA 202290695 EA202290695 EA 202290695 EA 044535 B1 EA044535 B1 EA 044535B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- immunoglobulin
- plasma
- solution
- cov
- sars
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 34
- 229940027941 immunoglobulin g Drugs 0.000 title claims description 13
- 208000025721 COVID-19 Diseases 0.000 title claims description 6
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 37
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 37
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 33
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 21
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 16
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 claims description 14
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims description 13
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims description 12
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 claims description 12
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 11
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 claims description 8
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 7
- 239000013049 sediment Substances 0.000 claims description 7
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 6
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 claims description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 230000010530 Virus Neutralization Effects 0.000 claims description 5
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 claims description 5
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 claims description 5
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 4
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 claims description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 4
- 241001678559 COVID-19 virus Species 0.000 claims description 3
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 claims description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims description 2
- 230000008520 organization Effects 0.000 claims 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 46
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 15
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 description 9
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 8
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 8
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 7
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 7
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 6
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 5
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 208000001528 Coronaviridae Infections Diseases 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 4
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 4
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 4
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 4
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 4
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 3
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 238000005341 cation exchange Methods 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 3
- STCOOQWBFONSKY-UHFFFAOYSA-N tributyl phosphate Chemical compound CCCCOP(=O)(OCCCC)OCCCC STCOOQWBFONSKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- 208000035049 Blood-Borne Infections Diseases 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 201000003176 Severe Acute Respiratory Syndrome Diseases 0.000 description 2
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 2
- 239000013256 coordination polymer Substances 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 230000000521 hyperimmunizing effect Effects 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 2
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- BYKRNSHANADUFY-UHFFFAOYSA-M sodium octanoate Chemical compound [Na+].CCCCCCCC([O-])=O BYKRNSHANADUFY-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 1
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 1
- 238000007445 Chromatographic isolation Methods 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 102100031673 Corneodesmosin Human genes 0.000 description 1
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 241000699673 Mesocricetus auratus Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940096437 Protein S Drugs 0.000 description 1
- 206010037423 Pulmonary oedema Diseases 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 108010031318 Vitronectin Proteins 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 208000003455 anaphylaxis Diseases 0.000 description 1
- 238000009175 antibody therapy Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000010836 blood and blood product Substances 0.000 description 1
- 229940019700 blood coagulation factors Drugs 0.000 description 1
- 229940125691 blood product Drugs 0.000 description 1
- 230000007248 cellular mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000013504 emergency use authorization Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 1
- 229940099472 immunoglobulin a Drugs 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 244000309711 non-enveloped viruses Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 238000002616 plasmapheresis Methods 0.000 description 1
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 1
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 208000005333 pulmonary edema Diseases 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 238000010187 selection method Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- -1 sulfopropyl cation Chemical class 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- NLVRHQFXQFSBQK-XWGVYQGASA-N tert-butyl N-[1-[(2S)-1-[[(2S)-4-(benzylamino)-3,4-dioxo-1-[(3S)-2-oxopyrrolidin-3-yl]butan-2-yl]amino]-3-cyclopropyl-1-oxopropan-2-yl]-2-oxopyridin-3-yl]carbamate Chemical compound C(C1=CC=CC=C1)NC(C([C@H](C[C@H]1C(NCC1)=O)NC([C@H](CC1CC1)N1C(C(=CC=C1)NC(OC(C)(C)C)=O)=O)=O)=O)=O NLVRHQFXQFSBQK-XWGVYQGASA-N 0.000 description 1
- 230000002885 thrombogenetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
Description
Область техники
Изобретение относится к медицине, а именно к способам получения иммуноглобулина G против
COVID-19, и может быть использовано при производстве лекарственных препаратов для лечения и профилактики COVID-19.
Уровень техники
Коронавирусная инфекция (COVID-19) - это острое вирусное заболевание с преимущественным поражением верхних дыхательных путей, вызванное коронавирусом острого тяжелого респираторного синдрома 2 типа (SARS-CoV-2). Текущая эпидемическая ситуация требует эффективных и специфических лекарств для профилактики и лечения коронавирусной инфекции.
Одним из первых решений систем здравоохранения во всем мире было использование плазмы, содержащей антитела к SARS-CoV-2, для лечения заболевания. Указанный метод лечения использовался при многих вспышках инфекционных заболеваний в прошлом, начиная со времен испанского гриппа. Результаты нескольких исследований подтверждают положительный эффект использования плазмы, содержащей антитела к SARS-CoV-2, для лечения пациентов с COVID-19 на различных стадиях заболевания. В то же время использование плазмы крови человека всегда сопряжено с риском посттрансфузионных осложнений различного характера, в том числе заражением гемотрансмиссивными инфекциями, повышенным риском тромбообразования, риском развития неконтролируемой продукции цитокинов, факторов свертывания крови и других молекул, которые могут ухудшить состояние пациентовреципиентов.
Терапия антителами может быть мощным инструментом, помогающим в лечении больных COVID19. Однако требуются более безопасные методы пассивной иммунизации, чем переливание плазмы, содержащей антитела к SARS-CoV-2. Существуют несколько препаратов на основе моноклональных антител, нейтрализующих SARS-CoV-2 (nAbs), которые получили разрешение для экстренного использования при коронавирусной инфекции. При этом, наряду со многими преимуществами моноклональных антител, в случае наличия мутации вируса в области значимых эпитопов S-белка SARS-CoV-2, к которым обычно и разрабатываются nAbs, такие препараты теряют эффективность, вплоть до полного отсутствия. В качестве альтернативы для лечения COVID-19 можно использовать поликлональные иммуноглобулины, полученные из плазмы доноров, содержащей нейтрализующие SARS-CoV-2 антитела. Гипериммунные иммуноглобулины неоднократно показали свою эффективность против многочисленных бактериальных и вирусных инфекций в прошлом.
Способы производства препаратов крови, включая фракционирование плазмы, последующие этапы очистки продукта и специализированные процедуры, направленные на инактивацию или удаление вирусов, обеспечивают большую безопасность пациентов при использовании препаратов иммуноглобулинов по сравнению с использованием необработанной плазмы для переливания. Кроме того, использование иммуноглобулина, полученного из плазмы большого числа доноров, обеспечивает широкую специфичность иммуноглобулинов в отношении различных изолятов вирусов и гарантирует их нейтрализующую активность. Следовательно, гипериммунный иммуноглобулин G (IgG) против SARS-CoV-2, полученный из большого пула плазмы, может быть эффективным против различных изолятов SARS-CoV-2 у пациентов с COVID-19 при отсутствии риска нежелательных явлений, возможных при переливании плазмы.
Известны следующие способы получения иммуноглобулина G из плазмы крови.
Известен способ получения иммуноглобулина, раскрытый в патенте РФ на изобретение № 2372939 (опубл. 17.12.2007). Известный способ включает очистку раствора иммуноглобулина, выделенного спиртовым фракционированием по методу Кона, обработку сольвент-детергентной смесью, в качестве которой используют 0,05 М ацетатный буферный раствор при рН 5,5, содержащий 1 мас.% три-нбутилфосфата и 1 мас.% полисорбата 80 при перемешивании, с последующим разбавлением 0,05 М ацетатным буферным раствором при рН 5,5, содержащим 1 мас.% октаноата натрия, 0,15 М хлорида натрия и пропиленгликоль в концентрации 0,2 г/л, после чего иммуноглобулин иммобилизируют на сульфопропилкатионитном сорбенте и осуществляют промывание в две стадии с помощью колоночной хроматографии с последующей элюцией, причем на первой стадии промывания используют 0,05 М ацетатный буферный раствор при рН 5,5, содержащий 1 мас.% октаноата натрия, 0,15 М хлорида натрия и пропиленгликоль в концентрации 0,2 г/л.
Известен способ очистки иммуноглобулина, раскрытый в патенте РФ на изобретение № 2332247 (опубл. 01.06.2007). Известный способ включает ее растворение в буферном растворе, вирусную сольвент-детергентную инактивацию и хроматографическую очистку, осуществляемую путем пропускания раствора через систему из трех последовательно соединенных колонок, заполненных анионитом, гидрофобным сорбентом и катионитом, соответственно, с промывкой системы колонок, элюированием иммуноглобулина с катионита буферным раствором, и направлением на регенерацию анионита и гидрофобного сорбента.
Известен способ хроматографического выделения иммуноглобулина, раскрытый в патенте РФ на изобретение № 2467783 (опубл. 27.11.2012) - прототип. Известный способ включает растворение в буферном растворе белковой фракции плазмы крови, в качестве которой используют осадок А спиртового фракционирования плазмы крови по Кону. Производят предварительную очистку полученного раствора
- 1 044535 в двух последовательно соединенных колонках, заполненных гидрофобным сорбентом и анионитом, соответственно, с последующим пропусканием через упомянутые две колонки буферного раствора. После сбора предварительно очищенной жидкой фракции, содержащей иммуноглобулин, ее направляют на вирусную сольвент-детергентную инактивацию, а затем на хроматографическую очистку, осуществляемую в системе из трех последовательно соединенных колонок, заполненных анионитом, гидрофобным сорбентом и катионитом, соответственно. Проводят элюирование иммуноглобулина с колонки, заполненной катионитом, а колонки с анионитом и гидрофобным сорбентом направляют на регенерацию.
Общими недостатками известных аналогов являются сравнительно невысокая чистота полученного препарата иммуноглобулина G, а также отсутствие специализированных технологических стадий и режимов производства иммуноглобулина, связанных с использованием в качестве сырья плазмы крови, содержащей антитела к вирусу SARS-CoV-2.
Раскрытие сущности изобретения
Техническая задача, положенная в основу настоящего изобретения, заключается в создании эффективного технологического процесса производства высокоочищенного вирусбезопасного иммуноглобулина G против COVID-19.
Технический результат заключается в получении иммуноглобулина G против COVID-19.
В качестве изобретения заявлен способ получения иммуноглобулина G против COVID-19, включающий отбор плазмы доноров, спиртовое фракционирование плазмы с получением осадка II+III по Кону, растворение полученного осадка II+III в буферном растворе, вирусную сольвент-детергентную инактивацию и хроматографическую очистку. В отличие от прототипа в качестве плазмы доноров используют плазму, содержащую антитела к вирусу SARS-CoV-2, с коэффициентом позитивности более 2, установленным с использованием метода твердофазного иммуноферментного анализа при помощи тестсистем, для которых коэффициент корреляции между результатами определения содержания антител методом ИФА с активностью, установленной в реакции вируснейтрализации, составляет не менее 0,9, причем раствор элюата после хроматографической очистки подвергают противовирусной фильтрации, концентрированию, диафильтрации и финальному концентрированию, после чего полученный раствор иммуноглобулина подвергают стерилизующей фильтрации и выдерживают при рН 4,0-4,5 и температуре 37±1°C в течение 24-48 ч.
Настоящее изобретение проиллюстрировано таблицей, в которой представлены показатели специфической активности иммуноглобулина против COVID-19 в отношении различных штаммов SARS-CoV-2.
В настоящее время согласно временным методическим рекомендациям Профилактика, диагностика и лечение новой коронавирусной инфекции (COVID-19) для прямого переливания используют плазму, содержащую нейтрализующие SARS-CoV-2 антитела в концентрации, оцененной в реакции вируснейтрализации (РВН) с титром не менее 1/160.
Для определения содержания нейтрализующих SARS CoV-2 антител в образцах плазмы человека используется классический метод определения титра вируснейтрализующих антител (ВНА) - реакция вируснейтрализации (РВН). Применительно к SARS-CoV-2 (Патоген II группы) использование РВН является достаточно трудоемким и сложным методом, требующим наличия специальной лаборатории, обладающей соответствующей лицензией и позволяющей работать с патогенами II группы и, конкретно, с коронавирусами. Это не позволяет применять метод определения титра ВНА массово.
Преимущество использования предлагаемого способа получения иммуноглобулина против COVID19 заключается в том, что трудоемкий, дорогостоящий и длительный по исполнению метод РВН заменен на более простой и рутинный аналитический метод - твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА), который позволяет проводить тестирование большого количества образцов плазмы в короткое время лабораториям любых организаций, занятых заготовкой плазмы, что существенно упрощает процедуру отбора плазмы и расширяет сырьевую базу, поскольку при производстве препарата иммуноглобулина человека используют крупные пулы, состоящие из более чем 1000 образцов плазмы человека.
В результате исследования образцов методом ИФА в плазме крови установлены пороговые значения количества антител к SARS-CoV-2: коэффициент позитивности (КП) не менее 2,0 или титр не менее 20 АКЕ/мл (за 1 единицу АКЕ (антиковидная единица) образца принята величина, обратная его титру вирус нейтрализующих антител (ВНА)), которые соответствуют ВНА в РВН 1/20.
При использовании иммуноглобулинов для внутривенного введения при терапии COVID-19 исключаются риски, связанные с переливанием плазмы, такие как заражение гемотрансмиссивными инфекциями, реакции, связанные с несовместимостью донорской крови и крови реципиента (АВОнесовместимая трансфузия), анафилактические реакции, сердечная недостаточность и отек легких, вызванные большим объемом перелитой плазмы и т.д. Помимо этого в плазме не контролируется содержание иммуноглобулина А, цитокинов, факторов свертывания крови и других молекул, которые могут ухудшить состояние пациента-реципиента.
Преимущества использования предлагаемого способа получения иммуноглобулина против COVID19 заключаются также в обеспечении вирусной безопасности готового препарата путем включения в производственный процесс нескольких ортогональных стадий, направленных на инактивацию и/или удаление вирусов (обработка смесью сольвент/детергента, противовирусная фильтрация, выдерживание при
- 2 044535 низких значениях рН), кроме того стадии спиртового фракционирования и хроматографической очистки также вносят вклад в инактивацию и/или удаление вирусов, в результате чего достигается снижение вирусной нагрузки на более 10 log для оболочечных и более 5 log для безоболочечных вирусов (при требовании ВОЗ - не менее 4 log). Плазма для переливания обрабатывается только патогенредуцирующими агентами и облучением ультрафиолетовым светом.
Преимуществом использования предлагаемого способа получения иммуноглобулина против COVID-19 является также то, что в процессе производства иммуноглобулина происходит концентрирование антител в 6-22 раза по сравнению с исходной плазмой, поэтому возможно использовать сырье с титром РВН 1/20, которое не используется для прямого переливания, что существенно расширяет сырьевую базу.
Преимущества использования концентрированного иммуноглобулина для лечения COVID-19 заключается в высоком и точном содержании nAb и, что более важно, в их разнообразии. Высококонцентрированный иммуноглобулин может обеспечивать более широкий диапазон противовирусной активности по сравнению с плазмой за счет взаимодействия с различными эпитопами коронавируса и активации различных клеточных механизмов, а нейтрализующие антитела против всех циркулирующих штаммов вирусов всегда присутствуют в конечном продукте (табл. 1).
Результаты проведенных испытаний препарата показали, что иммуноглобулин против COVID-19, полученный согласно заявляемому способу, безопасен, не обладает тромбогенным действием, содержит в 1 мл специфических антител к SARS-CoV-2 минимум в 8 раз больше по сравнению с исходной плазмой и защищает животных от летальной инфекции, вызванной SARS-CoV-2, у сирийских хомяков с индуцированным иммунодефицитом при заражении вирусом в дозе 101 TCID50 на животное: 40-дневная выживаемость животных в группе препарата КОВИД-глобулин при введении за 24 ч до заражения составила 66,6%, при введении через 2 ч после заражения - 100%, при введении через 48 ч после заражения - 87,5%. Кроме того, иммуноглобулин против COVID-19, полученный из пула плазмы, включающего более 1000 донаций, эффективен против различных циркулирующих штаммов SARS-CoV-2.
Описание осуществления изобретения
Пример 1.
Заготовку, хранение и транспортировку антиковидной плазмы осуществляют в соответствии с требованиями, установленными постановлением Правительства Российской Федерации от 22 июня 2019 г. № 797 Об утверждении Правил заготовки, хранения, транспортировки и клинического использования донорской крови и ее компонентов и о признании утратившими силу некоторых актов Правительства Российской Федерации, приказом Министерства здравоохранения Российской Федерации от 28.10.2020 № 183н 1166н Об утверждении порядка прохождения донорами медицинского обследования и перечня медицинских противопоказаний (временных и постоянных) для сдачи крови и (или) ее компонентов и сроков отвода, которому подлежит лицо при наличии временных медицинских показаний, от донорства крови и (или) ее компонентов.
Отбор осуществляют методом плазмафереза и (или) методом центрифугирования из единицы крови.
Помимо установленных обязательных требований отбор доноров осуществляют по результатам предварительного исследования на наличие IgG к SARS-CoV-2, с помощью иммуноферментных (иммунохемилюминесцентных) тест-систем, зарегистрированных в установленном порядке и разрешенных к использованию на территории Российской Федерации, для которых экспериментально установлена корреляция (коэффициент корреляции более 0,9) между результатами определения содержания антител в плазме с вируснейтрализующей активностью, определенной в реакции вируснейтрализации.
В качестве сырья для получения иммуноглобулина против COVID-19 используют плазму доноров, содержащую антитела к вирусу SARS-CoV-2 с коэффициентом позитивности (КП) не менее 2 (титром не менее 20 АКЕ/мл), установленным методом ИФА.
350 л антиковидной плазмы загружают в реактор и проводят фракционирование плазмы крови по Кону до осадка II+III, после чего получают 18,0 кг осадка II+III. Полученный осадок II+III растворяют в натрий-ацетатном буферном растворе. Затем раствор подвергают вирусной сольвент-детергентной инактивации в присутствии смеси вирусинактивирующих агентов (сольвент-детергента), в качестве которых используют Твин-80 и трибутилфосфат. Вирусинактивированный раствор направляют на хроматографическую очистку, в процессе которой раствор пропускают через три последовательно соединенные хроматографические колонны, заполненные соответственно гидрофобным, анионообменным и катионообменным сорбентом.
После хроматографической очистки раствор подвергают противовирусной фильтрации через систему из последовательно соединенных фильтров с задерживающим рейтингом 0,2 мкм и 20 нм. Затем проводят концентрирование и перевод в буфер готовой лекарственной формы препарата иммуноглобулина путем диафильтрации с использованием мембран тангенциальной фильтрации с пределом отсечения 30 кДа и финальное концентрирование до содержания белка 80-120 г/л. Полученный раствор подвергают стерилизующей фильтрации и проводят дополнительную инактивацию вирусов путем выдерживания раствора при низком значении рН (4,0-4,5) и температуре 37±1°C в течение 24-48 ч.
- 3 044535
В результате осуществления способа получают препарат иммуноглобулина против COVID-19 для внутривенного введения с содержанием белка 10,0%, содержанием антител к SARS-CoV-2 не менее 160
АКЕ/мл (или 1072 BAU/мл (binding antibody units, единицы связывающих антител)), установленным методом ИФА.
Пример 2.
Заготовку, хранение и транспортировку антиковидной плазмы и отбор доноров осуществляют как в примере 1.
В качестве сырья для получения иммуноглобулина против COVID-19 используют плазму доноров, содержащую антитела к вирусу SARS-CoV-2 с КП не менее 4 (титром не менее 40 АКЕ/мл), установленным методом ИФА.
350 л антиковидной плазмы загружают в реактор и проводят фракционирование плазмы крови по Кону до осадка II+III, после чего получают 18,0 кг осадка II+III. Полученный осадок II+III растворяют в натрий-ацетатном буферном растворе. Затем раствор подвергают вирусной сольвент-детергентной инактивации в присутствии смеси вирусинактивирующих агентов (сольвент-детергента), в качестве которых используют твин-80 и трибутилфосфат. Вирусинактивированный раствор направляют на хроматографическую очистку, в процессе которой раствор пропускают через три последовательно соединенные хроматографические колонны, заполненные соответственно гидрофобным, анионообменным и катионообменным сорбентом.
После хроматографической очистки раствор подвергают противовирусной фильтрации через систему из последовательно соединенных фильтров с задерживающим рейтингом 0,2 мкм и 20 нм. Затем проводят концентрирование и перевод в буфер готовой лекарственной формы препарата иммуноглобулина путем диафильтрации с использованием мембран тангенциальной фильтрации с пределом отсечения 30 кДа и финальное концентрирование до содержания белка 80-120 г/л. Полученный раствор подвергают стерилизующей фильтрации и проводят дополнительную инактивацию вирусов путем выдерживания раствора при низком значении рН (4,0-4,5) и температуре 37±1°C в течение 24-48 ч.
В результате осуществления способа получают препарат иммуноглобулина против COVID-19 для внутривенного введения с содержанием белка 10,0%, содержанием антител к SARS-CoV-2 не менее 320 АКЕ/мл (или 2144 BAU/мл), установленным методом ИФА.
Пример 3.
Заготовку, хранение и транспортировку антиковидной плазмы и отбор доноров осуществляют как в примере 1.
В качестве сырья для получения иммуноглобулина против COVID-19 используют плазму доноров, содержащую антитела к вирусу SARS-CoV-2 с КП не менее 8 (титром не менее 80 АКЕ/мл), установленным методом ИФА.
350 л антиковидной плазмы загружают в реактор и проводят фракционирование плазмы крови по Кону до осадка II+III, после чего получают 18,0 кг осадка II+III. Полученный осадок II+III растворяют в натрий-ацетатном буферном растворе. Затем раствор подвергают вирусной сольвент-детергентной инактивации в присутствии смеси вирусинактивирующих агентов (сольвент-детергента), в качестве которых используют Твин-80 и трибутилфосфат. Вирусинактивированный раствор направляют на хроматографическую очистку, в процессе которой раствор пропускают через три последовательно соединенные хроматографические колонны, заполненные соответственно гидрофобным, анионообменным и катионообменным сорбентом.
После хроматографической очистки раствор подвергают противовирусной фильтрации через систему из последовательно соединенных фильтров с задерживающим рейтингом 0,2 мкм и 20 нм. Затем проводят концентрирование и перевод в буфер готовой лекарственной формы препарата иммуноглобулина путем диафильтрации с использованием мембран тангенциальной фильтрации с пределом отсечения 30 кДа и финальное концентрирование до содержания белка 80-120 г/л. Полученный раствор подвергают стерилизующей фильтрации и проводят дополнительную инактивацию вирусов путем выдерживания раствора при низком значении рН (4,0-4,5) и температуре 37±1°C в течение 24-48 ч.
В результате осуществления способа получают препарат иммуноглобулина против COVID-19 для внутривенного введения с содержанием белка 10,0%, содержанием антител к SARS-CoV-2 не менее 640 АКЕ/мл (или 4288 BAU/мл), установленным методом ИФА.
-
Claims (4)
- Таблица. Специфическая активность иммуноглобулина против COVID-19 в отношении различных штаммов SARS-CoV-2 (титр в РВН, величина обратная разведению), п=8 № п/п ВЛ.1Л (Ухань) ВЛ.1.7 (UK, Alpha) В.1.351 (SA, Beta) В.1.1.28/Р.1 (Brasilia, Gamma) В.1.617.2 (India, Delta)1 1280 320 20 40 802 640 160 80 80 803 >1280 320 40 160 1604 1280 320 40 160 805 >1280 160 40 80 1606 1280 640 80 320 3207 640 80 20 80 808 1280 >640 160 320 640ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Способ получения иммуноглобулина G против COVID-19, включающий отбор плазмы доноров, спиртовое фракционирование плазмы с получением осадка П+Ш по Кону, растворение полученного осадка П+Ш в буферном растворе, вирусную сольвент-детергентную инактивацию и хроматографическую очистку, отличающийся тем, что в качестве плазмы доноров используют плазму, содержащую антитела к вирусу SARS-CoV-2, с коэффициентом позитивности более 2, установленным с использованием метода твердофазного иммуноферментного анализа при помощи тест-систем, для которых коэффициент корреляции между результатами определения содержания антител методом ИФА с активностью, установленной в реакции вируснейтрализации, составляет не менее 0,9, причем раствор элюата после хроматографической очистки подвергают противовирусной фильтрации, предварительному концентрированию, диафильтрации и финальному концентрированию, после чего полученный раствор иммуноглобулина подвергают стерилизующей фильтрации и проводят дополнительную вирусинактивацию, выдерживая при pH 4,0-4,5 и температуре 37±1°С в течение 24-48 ч.
- 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что элюат после хроматографической очистки подвергают противовирусной фильтрации через систему из последовательно соединенных фильтров с задерживающим рейтингом 0,2 мкм и 20 нм.
- 3. Способ по п.1, отличающийся тем, что при диафильтрации раствора иммуноглобулина G используют мембраны тангенциальной фильтрации с пределом отсечения 30 кДа.
- 4. Способ по п.1, отличающийся тем, что финальное концентрирование раствора иммуноглобулина G проводят до достижения содержания белка 80-120 г/л.Евразийская патентная организация, ЕАПВРоссия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA044535B1 true EA044535B1 (ru) | 2023-08-31 |
Family
ID=
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| León et al. | Pathogenic mechanisms underlying adverse reactions induced by intravenous administration of snake antivenoms | |
| Vandeberg et al. | Production of anti‐SARS‐CoV‐2 hyperimmune globulin from convalescent plasma | |
| RU2612899C2 (ru) | Способ получения композиции иммуноглобулинов | |
| SK18662000A3 (sk) | Spôsob výroby imunoglobulínov na intravenózne podanie a ďalších imunoglobulínových produktov | |
| Dixit et al. | Benefits of using heterologous polyclonal antibodies and potential applications to new and undertreated infectious pathogens | |
| Berger | A history of immune globulin therapy, from the Harvard crash program to monoclonal antibodies | |
| JP7073333B2 (ja) | 免疫グロブリン組成物を調製するためのプロセス | |
| EP0234405B1 (de) | Verwendung eines immunglobulinhaltigen Präparates zur Prophylaxe und Therapie von AIDS beim Menschen | |
| EA044535B1 (ru) | Способ получения иммуноглобулина g против covid-19 | |
| KR20110114555A (ko) | 혈액으로부터 이뮤노글로불린을 수득하기 위한 시스템 및 방법 | |
| US20240024459A1 (en) | Method for producing an antigen corresponding to the inactivated sars-cov-2 virus, antigen corresponding to the inactivated sars-cov-2 virus, antigenic composition, kits, and uses thereof | |
| Lasocka et al. | Passive immunization in the combat against infectious diseases (COVID-19 included) | |
| RU2470664C2 (ru) | Способ получения иммуноглобулина для внутривенного введения, обогащенного иммуноглобулином м, и препарат, полученный этим способом | |
| Cheng et al. | Process steps for the fractionation of immunoglobulin (Ig) G depleted of IgA, isoagglutinins, and devoid of in vitro thrombogenicity | |
| AU2021284903A1 (en) | Hyperimmune IgG and/or IgM compositions and method for preparing thereof and method for obtaining hyperimmune human plasma from a donor | |
| Hofmann et al. | Protection of mice against tick-borne encephalitis by different classes of immunoglobulins | |
| Maciel-Fritoli et al. | Comparability study between downstream methodologies using physicochemical characteristics of hyperimmune serum for human use | |
| RU2257916C1 (ru) | Препарат, содержащий иммуноглобулин против лихорадки марбург из сыворотки крови лошадей жидкий (иммуноглобулин лошадиный марбург) | |
| RU2348429C2 (ru) | Иммуноглобулин человека противосибиреязвенный для внутривенного введения | |
| JPH01135725A (ja) | 抗−ｐＨ不安定アルフアインターフエロン抗体の製造方法 | |
| WO2022101666A1 (en) | Modular manufacturing unit, and components and methods for manufacturing infectious disease therapeutics using same | |
| WO2021239790A1 (en) | Method for the treatment of virus infection with ivig and convalescent plasma | |
| RU2342952C1 (ru) | Препарат, содержащий иммуноглобулин против боливийской геморрагической лихорадки из сыворотки крови лошадей, раствор для внутримышечного введения | |
| RU2561596C2 (ru) | Способ приготовления вирусинактивированных растворов иммуноглобулинов с низким остаточным содержанием каприловой кислоты | |
| RU2264826C1 (ru) | Способ получения антитимоцитарного глобулина для внутривенного введения |