RU2616266C1 - Способ получения иммуноглобулинового препарата для наружного применения - Google Patents
Способ получения иммуноглобулинового препарата для наружного применения Download PDFInfo
- Publication number
- RU2616266C1 RU2616266C1 RU2015154398A RU2015154398A RU2616266C1 RU 2616266 C1 RU2616266 C1 RU 2616266C1 RU 2015154398 A RU2015154398 A RU 2015154398A RU 2015154398 A RU2015154398 A RU 2015154398A RU 2616266 C1 RU2616266 C1 RU 2616266C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- admixtures
- immunoglobulin
- preparation
- ballast
- concentration
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Mycology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине и биотехнологии и касается способа получения иммуноглобулиновых препаратов, очищаемых от примесей солями металлов из экстрактов осадка Б (III фракции по Кону). Способ получения иммуноглобулинового препарата для наружного применения включает стадию экстракции осадка Б (III фракция по Кону) раствором хлористого натрия, удаление балластных примесей и выделение целевого продукта методом ультрафильтрации в присутствии комплексообразующих соединений. При этом удаление балластных примесей осуществляют путем последовательной обработки экстракта сначала мертиолатом в концентрации 0,1%, а затем сульфатом меди в концентрации 0,005-0,06% при величине рН 8,0. Технический результат, получаемый при осуществлении изобретения, заключается в повышении клинической эффективности иммуноглобулинового препарата для наружного применения за счет повышения содержания иммуноглобулинов классов А и М, сохранения специфической биологической активности антител препарата путем совершенствования технологии осаждения балластных примесей; исключении токсического воздействия на пациента и персонал путем исключения использования при осаждении примесей хлороформа и полиэтиленгликоля. 3 пр.
Description
Изобретение относится к медицине и биотехнологии и касается способа получения иммуноглобулиновых препаратов, очищаемых от примесей солями металлов из экстрактов осадка Б (III фракции по Кону).
У человека существует пять классов антител - IgA, IgD, IgE, IgG, IgM. Основную массу из их общего количества составляет IgG - до 70%, в меньших количествах содержится IgA - 10-15% и IgM - 5-10%, наименьшее количество приходится на оставшиеся IgD и IgE - одинаково по 0,2%.
Некоторые функции отдельных классов иммуноглобулинов дублируются, например активация комплемента и усиление фагоцитоза у IgG и IgM, но это дублирование является лишь следствием проявления индивидуальных свойств каждого.
IgA - основной класс антител в секретах (молоке, слюне, слезах, желчи, секретах дыхательных путей, кишечного тракта и влагалища), защищает слизистые оболочки и нейтрализует вирусы и бактериальные токсины.
IgD - единственная известная его функция - роль рецептора для антигена.
IgE - защищает слизистые оболочки, контактирующие с окружающей средой. Молекулы иммуноглобулина прикрепляются к специфическим рецепторам поверхности тучных клеток и базофилов, и если происходит связывание с антигеном, то образуется комплекс, стимулирующий освобождение из клеток медиаторов аллергических реакций.
IgG - единственные антитела, переходящие от матери к плоду через плаценту, иммуноглобулин производится в больших количествах при вторичном иммунном ответе. Помимо активации системы комплемента молекулы IgG связываются с макрофагами и нейтрофилами. Эти фагоцитирующие клетки могут связывать, поглощать и разрушать внедрившиеся микроорганизмы, покрытые IgG-антителами, которые вырабатываются в ответ на инфекцию.
IgM - основной класс антител, выделяемых в кровь на ранних стадиях первичного иммунного ответа. Присоединение антигена к молекуле IgM индуцирует его связывание с системой комплемента и его активацию. Если антиген расположен на поверхности внедрившегося микроорганизма, то в результате активации система комплемента осуществляет биохимическую атаку, приводящую к гибели микроорганизма [1].
Иммуноглобулины IgD и IgE по причине их малого количества очень трудно выделить, и при производстве иммуноглобулиновых препаратов на них, как правило, не обращают внимания. Поэтому основной целью производителей является создание препаратов, содержащих или один IgG (для внутривенного введения) или комплекс IgG, IgA, IgM в разных сочетаниях (для перорального и назального применения).
Как следует из анализа функциональных свойств классов иммуноглобулинов, препараты, предназначенные для лечения слизистых человека, должны содержать в больших количествах IgA и IgM.
IgA - как обеспечивающий защиту слизистых от внедрения патогенных агентов. Если же проникновение инфекционного начала уже произошло, то как блокирующий дальнейшее поступление бактерий или вирусов через «входные ворота инфекции» и нейтрализующий их.
IgM - как пусковой механизм первичного иммунного ответа организма и активатор системы комплемента.
Содержание IgG также необходимо в препарате, но его необязательно должно быть много, так как его недостаток в препарате с лихвой компенсируется вторичным иммунным ответом организма на инфекцию. В данном случае гораздо важнее на начальном этапе инфекционного процесса помочь организму организовать оборону посредством функциональных особенностей IgA и IgM.
В последнее время расширяется область применения иммуноглобулиновых препаратов для лечения инфекционных заболеваний человека. Помимо энтерального применения комплексного иммуноглобулинового препарата (КИП) в борьбе с острыми кишечными инфекциями предложено использовать его для лечения острых респираторных заболеваний у детей [2, 3]. Применяется КИП также местно в комбинированных препаратах с интерфероном [4].
Известен способ получения иммуноглобулиновых композиций, состоящих из IgG, IgA, IgM, для внутривенного применения, включающий гомогенизацию осадка Б в 0,01 М фосфатном буферном растворе (PBS) с рН 7,6, добавление в него соли ртути (мертиолата) до конечной концентрации 0,1%, отделение осадка иммуноглобулинов с последующей гомогенизацией, обработку протамином и очистку полученного раствора от нерастворимых примесей [5].
Основным недостатком этого изобретения является то, что оно может быть использовано только для получения иммуноглобулинов для тест-систем.
Известен способ получения иммуноглобулинового препарата для перорального применения, в соответствии с которым осадок Б экстрагируют в десятикратном объеме 0,9% раствора хлорида натрия при комнатной температуре и постоянном перемешивании 0,1-3,0% хлороформом, удаляют балластные примеси центрифугированием, обрабатывают фракции иммуноглобулинов сульфатом меди с конечной концентрацией 0,1-2,0% при рН раствора 6-8, раствор центрифугируют и обрабатывают раствором ЭДТА в концентрации 0,2-1,0%, диализируют и концентрируют методом ультрафильтрации до концентрации белка 6%, стабилизируют, подвергают осветляющей и стерилизующей фильтрации и высушивают сублимацией [6].
Однако препарат, полученный по известному способу [6], не предназначен для наружного использования (местного применения на слизистых), в том числе в качестве глазных капель, для назального применения. Использование хлороформа при его получении оказывает токсическое действие на пациента и персонал, снижает биологическую эффективность целевого продукта. Известный способ предполагает повышение концентрации только иммуноглобулина класса М.
В качестве прототипа нами выбран способ получения иммуноглобулинов, обладающих антибактериальной и антивирусной активностью, предназначенных для применения в виде назальных капель [7]. Известное средство создано на основе комплексного иммуноглобулинового препарата (КИП) с использованием глицерина.
Однако использование фармацевтически приемлемых добавок, в том числе глицерина, сопровождается снижением содержания иммуноглобулинов классов А и М и, соответственно, повышением иммуноглобулина класса G. Снижены также возможности применения препарата на других слизистых, так наличие глицерина не позволяет использовать его в офтальмологии.
Нами поставлена задача разработать способ получения иммуноглобулинового препарата для наружного применения, обладающего повышенным содержанием иммуноглобулинов классов А и М и высокой биологической активностью при упрощении технологического процесса стадии удаления балластных примесей.
Технический результат, получаемый при осуществлении изобретения, заключается в:
- повышении клинической эффективности иммуноглобулинового препарата для наружного применения за счет повышения содержания иммуноглобулинов классов А и М, сохранения специфической биологической активности антител препарата путем совершенствования технологии осаждения балластных примесей;
- исключении токсического воздействия на пациента и персонал путем исключения использования при осаждении примесей хлороформа и полиэтиленгликоля.
Сущность изобретения заключается в следующем.
Способ получения иммуноглобулинового препарата для наружного применения включает стадию экстракции осадка Б (III фракция по Кону) раствором хлористого натрия, удаление балластных примесей и выделение целевого продукта методом ультрафильтрации в присутствии комплексообразующих соединений. При этом удаление балластных примесей осуществляют путем последовательной обработки экстракта сначала мертиолатом в концентрации 0,1%, а затем сульфатом меди в концентрации 0,005-0,06%) при величине рН 8,0.
Повышенное содержание иммуноглобулинов классов А и М в препарате обеспечивается использованием для выделения примесных белков предлагаемых нами солей металлов.
Нами впервые показано, что сочетание мертиолата с сульфатом меди при рН, равном 8, обеспечивает комплексное повышенное содержание (более 30%) в препарате иммуноглобулинов IgA и IgM, что повышает эффективность местного применения препарата, например на слизистых глаз. Кроме того, такое сочетание исключает необходимость введения в препарат консервантов и стабилизаторов. Близкий к нейтральному рН препарата при использовании 0,85%-ного раствора хлорида натрия исключает необходимость введения дополнительных веществ для обеспечения изотоничности препарата.
Мягкая очистка препарата в предлагаемом способе позволяет сохранить специфическую активность его антител. Используемые соли металлов (предлагаемая последовательность их использования и указанная величина рН) позволяют уменьшить содержание примесных белков и липопротеинов в целевом продукте, произвести его эффективную очистку.
Осуществление способа должным образом раскрыто в примерах.
Преимущества предлагаемого способа получения иммуноглобулинового препарата доказаны в специальной серии экспериментов. Содержание иммуноглобулинов определяли в реакции преципитации и методом радиальной иммунодиффузии по методическим рекомендациям Чернохвостовой Е.В. с соавт., 1984. Количество ионов меди определяли в соответствии с ГФ XI. Определение титра антител против сальмонелл и шигелл осуществляли методом РИГА согласно ФС 422-3347-97, а содержание общих липидов - с помощью «Bio-la-test» Lachema.
Пример 1. Осадок Б растворяли в 0,85%-ном растворе хлорида натрия при соотношении 1:10. Полученный белковый раствор подвергали очистке от нерастворимых примесей и титрованию до рН 8,0. Фракционирование проводили в два этапа. На первом этапе удаляли основное количество примесных белков введением в смесь мертиолата в конечной концентрации 0,1% и центрифугированием. На втором этапе доочищали иммуноглобулиновую фракцию обработкой супернатанта сульфатом меди в конечной концентрации 0,005% в смеси. Отделение иммуноглобулиновой фракции осуществляли гравитационным осаждением. Затем концентрат иммуноглобулинов разводили 0,85%-ным раствором хлорида натрия с добавлением 0,1 М ЭДТА и диализировали.
Концентрация белка в препарате составляла 8%. Содержание иммуноглобулинов: IgG - 40%, IgM - 30%, IgA - 30%. Титр антител к сальмонеллам - 1:1280 и шигеллам - 1:640. Электрофоретическая однородность - 99%.
Пример 2. Осадок Б растворяли в 0,85%-ном растворе хлорида натрия при соотношении 1:10. Полученный белковый раствор подвергали очистке от нерастворимых примесей и титрованию до рН 8,0. Фракционирование проводили в два этапа. На первом этапе удаляли основное количество примесных белков введением в смесь мертиолата в конечной концентрации 0,1% и центрифугированием. На втором этапе доочищали иммуноглобулиновую фракцию обработкой супернатанта сульфатом меди в конечной концентрации 0,03% в смеси. Отделение иммуноглобулиновой фракции осуществляли гравитационным осаждением. Затем концентрат иммуноглобулинов разводили 0,85%-ным раствором хлорида натрия с добавлением 0,1 М ЭДТА и диализировали.
Концентрация белка в препарате составляла 8%. Содержание иммуноглобулинов: IgG - 38%, IgM - 31%, IgA - 31%. Титр антител к сальмонеллам - 1:1280 и шигеллам - 1:640. Электрофоретическая однородность - 99%.
Пример 3. Осадок Б растворяли в 0,85%-ном растворе хлорида натрия при соотношении 1:10. Полученный белковый раствор подвергали очистке от нерастворимых примесей и титрованию до рН 8,0. Фракционирование проводили в два этапа. На первом этапе удаляли основное количество примесных белков введением в смесь мертиолата в конечной концентрации 0,1% и центрифугированием. На втором этапе доочищали иммуноглобулиновую фракцию обработкой супернатанта сульфатом меди в конечной концентрации 0,06% в смеси. Отделение иммуноглобулиновой фракции осуществляли гравитационным осаждением. Затем концентрат иммуноглобулинов разводили 0,85%-ным раствором хлорида натрия с добавлением 0,1 М ЭДТА и диализировали.
Концентрация белка в препарате составляла 8%. Содержание иммуноглобулинов: IgG - 43%, IgM - 32%, IgA - 25%. Титр антител к сальмонеллам - 1:640 и шигеллам - 1:640. Электрофоретическая однородность - 97%.
Предлагаемый способ обеспечивает повышенное содержание в препарате иммуноглобулинов классов А и М, что позволит использовать препарат для местного применения, например в качестве глазных капель или на других слизистых.
Источники информации
1. Молекулярная биология клетки / Б. Албертс, Д. Брей, Дж. Льюис, М. Рэфф, К. Робертс, Дж. Уотсон: В 3-х тт., 2-е изд., перераб. и доп., Т. 3. Пер. с англ. – М.: Мир, 1994. - 504 с.
2. Соколов А.Л. Некоторые аспекты применения КИП (Комплексного иммунологического препарата) в педиатрии. – М.: МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского, 2003. - 64 с.
3. Грачева Н.М., Петрова М.С., Аваков А.А., Партин О.С. Иммуноглобулиновые препараты для энтерального применения в практике лечения детей и взрослых / Новые лекарственные препараты - 2003. - Вып. 4. - С. 33-42.
4. Иммунобиологические препараты и перспективы их применения в инфектологии / Под ред. Г.Г. Онищенко, В.А. Алешкина, С.С. Афанасьева, В.В. Поспеловой. - М.: ГОУ ВУНМЦ МЗ РФ, 2002. - 608 с.
5. US 5359038 С1.
6. RU 2189833 С2.
7. RU 2453336 С1.
Claims (1)
- Способ получения иммуноглобулинового препарата для наружного применения, включающий стадию экстракции осадка Б (III фракция по Кону) раствором хлористого натрия, удаление балластных примесей и выделение целевого продукта методом ультрафильтрации в присутствии комплексообразующих соединений, отличающийся тем, что удаление балластных примесей осуществляют путем последовательной обработки экстракта сначала мертиолатом в концентрации 0,1%, а затем сульфатом меди в концентрации 0,005-0,06% при величине pH 8,0.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2015154398A RU2616266C1 (ru) | 2015-12-18 | 2015-12-18 | Способ получения иммуноглобулинового препарата для наружного применения |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2015154398A RU2616266C1 (ru) | 2015-12-18 | 2015-12-18 | Способ получения иммуноглобулинового препарата для наружного применения |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2616266C1 true RU2616266C1 (ru) | 2017-04-13 |
Family
ID=58642527
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2015154398A RU2616266C1 (ru) | 2015-12-18 | 2015-12-18 | Способ получения иммуноглобулинового препарата для наружного применения |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2616266C1 (ru) |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE3820556A1 (de) * | 1988-06-16 | 1989-12-21 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur bestimmung von allergenspezifischen antikoerpern in koerperfluessigkeiten |
WO2000074728A1 (en) * | 1999-06-04 | 2000-12-14 | Duke University | Novel reagents for detection and purification of antibody fragments |
RU2247578C1 (ru) * | 2004-04-27 | 2005-03-10 | Государственное учреждение "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского Министерства здравоохранения Российской Федерации" | Состав, обладающий противомикробным действием |
RU2371200C1 (ru) * | 2008-06-03 | 2009-10-27 | Федеральное государственное учреждение науки "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Г.Н. Габричевского Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека" (ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора) | Способ получения иммуноглобулинового препарата |
RU2371199C1 (ru) * | 2008-06-03 | 2009-10-27 | Федеральное государственное учреждение науки "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Г.Н. Габричевского Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека" (ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора) | Способ получения иммуноглобулинового препарата |
-
2015
- 2015-12-18 RU RU2015154398A patent/RU2616266C1/ru active
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE3820556A1 (de) * | 1988-06-16 | 1989-12-21 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur bestimmung von allergenspezifischen antikoerpern in koerperfluessigkeiten |
WO2000074728A1 (en) * | 1999-06-04 | 2000-12-14 | Duke University | Novel reagents for detection and purification of antibody fragments |
RU2247578C1 (ru) * | 2004-04-27 | 2005-03-10 | Государственное учреждение "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского Министерства здравоохранения Российской Федерации" | Состав, обладающий противомикробным действием |
RU2371200C1 (ru) * | 2008-06-03 | 2009-10-27 | Федеральное государственное учреждение науки "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Г.Н. Габричевского Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека" (ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора) | Способ получения иммуноглобулинового препарата |
RU2371199C1 (ru) * | 2008-06-03 | 2009-10-27 | Федеральное государственное учреждение науки "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Г.Н. Габричевского Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека" (ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора) | Способ получения иммуноглобулинового препарата |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
León et al. | Pathogenic mechanisms underlying adverse reactions induced by intravenous administration of snake antivenoms | |
DE69329642T2 (de) | Breitreaktive opsonische antikörper die mit gemeinsamen antigenen von staphylococcus reagieren | |
DE3019847C2 (de) | Verfahren zur Herstellung von Humaninterferon | |
JPH0453849B2 (ru) | ||
RU2616266C1 (ru) | Способ получения иммуноглобулинового препарата для наружного применения | |
Bertazzi et al. | Activation of the complement system and leukocyte recruitment by Tityus serrulatus scorpion venom | |
DE602004005963T2 (de) | Verwendung von vogelantikörpern | |
CN112745388B (zh) | 一种白色霞水母精制抗毒素的制备方法 | |
AU1677492A (en) | Antivenom immunesera | |
RU2361612C1 (ru) | Иммуноглобулиновая основа для иммунобиологических препаратов и способ ее получения, суппозитории и мазь для профилактики и терапии бактериальных и вирусных заболеваний | |
KR20080108556A (ko) | 약물로 작용하는 치군군야-특이적 면역글로블린 농축액 | |
TWI639615B (zh) | 一種利用雙硫鍵重組技術製造抗蛇毒血清之方法及其產物 | |
US20220079999A1 (en) | Antivenom compositions and uses thereof | |
KR20150077954A (ko) | 계란 난황으로부터 면역글로불린 y와 포스비틴을 연속적으로 분리추출하는 방법 | |
CN100349918C (zh) | 呼吸道合胞病毒和腺病毒特异性免疫球蛋白制备方法 | |
RU2348429C2 (ru) | Иммуноглобулин человека противосибиреязвенный для внутривенного введения | |
RU2084229C1 (ru) | Способ получения иммуноглобулинового препарата для профилактики и терапии бактериальных и вирусных заболеваний | |
RU2257916C1 (ru) | Препарат, содержащий иммуноглобулин против лихорадки марбург из сыворотки крови лошадей жидкий (иммуноглобулин лошадиный марбург) | |
Badea et al. | Immunoglobulins: Functions, biosynthesis and biological properties | |
Soria et al. | Comparative evaluation of polyclonal antibodies in the characterization of nematocyst proteins from Australian Irukandji and Chironex fleckeri Species | |
RU2189833C2 (ru) | Способ получения иммуноглобулинового препарата | |
CN106890192A (zh) | 一种增强记忆的源自血浆的混合物及其制备方法和应用 | |
RU2264826C1 (ru) | Способ получения антитимоцитарного глобулина для внутривенного введения | |
Sánchez et al. | Pilot-scale evaluation of a dynamic body-feed filtration system for primary clarification of snake antivenoms produced by the caprylic acid method | |
CN107921079A (zh) | 由组分iii制造静脉注射免疫球蛋白的方法 |