RU2371200C1 - Способ получения иммуноглобулинового препарата - Google Patents
Способ получения иммуноглобулинового препарата Download PDFInfo
- Publication number
- RU2371200C1 RU2371200C1 RU2008122064/15A RU2008122064A RU2371200C1 RU 2371200 C1 RU2371200 C1 RU 2371200C1 RU 2008122064/15 A RU2008122064/15 A RU 2008122064/15A RU 2008122064 A RU2008122064 A RU 2008122064A RU 2371200 C1 RU2371200 C1 RU 2371200C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- immunoglobulin
- concentration
- fraction
- centrifugation
- copper sulfate
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине и биотехнологии и касается способа получения иммуноглобулиновых препаратов. Способ получения иммуноглобулинового препарата включает последовательную обработку спиртового осадка Б (III фракции по Кону) десятикратным объемом 0,9% раствора хлорида натрия, хлороформом в конечной концентрации 0,1-3,0%, центрифугирование, добавление к центрифугату при рН 6-8 сульфата меди, удаление осадка центрифугированием, с последующим выделением целевого продукта методом ультрафильтрации в присутствии комплексообразующих соединений, его стабилизации, осветляющей и стерилизующей фильтрации, при этом сульфат меди используют в концентрации 0,003-0,03%. Изобретение обеспечивает повышение содержания выделяемой фракции иммуноглобулина А и повышение качества продукта.
Description
Изобретение относится к медицине и биотехнологии и касается способа получения иммуноглобулиновых препаратов, выделяемых экстракцией из осадка Б (III фракции по Кону).
Известен способ получения комплексного иммуноглобулинового препарата для энтерального применения, включающий экстракцию спиртового осадка Б ((III фракции Кона) хлороформом в концентрации 10% в десятикратном объеме 0,9% раствора хлорида натрия с последующим осаждением фракции иммуноглобулинов полиэтиленгликолем в концентрации 12% (RU, патент 2084229 C1, A61K 35/14, 20.07.1997).
Основным недостатком этого изобретения является то, что длительная обработка хлороформом приводит к потерям эффекторных функций иммуноглобулинов, их полимеризации и снижению титра антител в продукте.
Наиболее близким по своей сути к заявляемому является способ получения иммуноглобулинового препарата, в соответствии с которым осадок Б экстрагируют в десятикратном объеме 0,9% раствора хлорида натрия при комнатной температуре и постоянном перемешивании 0,1-3,0% хлороформом, удаляют балластные примеси центрифугированием, обрабатывают фракции иммуноглобулинов сульфатом меди с конечной концентрацией 0,1-2,0% при рН раствора 6-8, раствор центрифугируют и обрабатывают раствором ЭДТА в концентрации 0,2-1,0%, диализируют и концентрируют методом ультрафильтрации до концентрации белка 6%, стабилизируют, подвергают осветляющей и стерилизующей фильтрации и высушивают сублимацией (RU, патент 2189833 С2, A61K 39/395, 35/16, 27.09.2002).
Основным недостатком прототипа является использование избыточных концентраций сульфата меди для осаждения липопротеидов и примесных белков, что приводит к снижению содержания выделяемых из осадка Б иммуноглобулинов, в частности фракции IgA.
В основу заявляемого изобретения положена задача повышения содержания выделяемой фракции иммуноглобулина А и соответствующее повышение качества продукта.
Задача решена тем, что в процессе последовательной обработки экстракта сульфат меди используют в концентрации 0,003-0,03%.
В результате проведенных исследований нами впервые показано, что использование сульфата меди даже в таких незначительных количествах, как в прототипе, приводит к потере фракции IgA с примесными белками. Поскольку ионов меди присутствует в растворе больше, чем требуется для удаления балластных примесных белков, они начинают взаимодействовать с иммуноглобулином А, связывают его и выводят в осадок. В результате происходит перераспределение фракций иммуноглобулинов и за счет потерь фракции IgA увеличивается содержание фракции IgM. Именно этим и объясняется повышенный выход фракции IgM в прототипе.
Согласно изобретению повышение содержания выделяемой фракции иммуноглобулина А и соответствующее повышение качества продукта обеспечивается тем, что в процессе последовательной обработки экстракта сульфат меди используют в концентрации 0,003-0,03%.
Заявляемый способ получения иммуноглобулинового препарата является новым и в литературе не описан.
Техническим результатом заявляемого изобретения является повышение содержания выделяемой фракции иммуноглобулина А и соответствующее повышение качества продукта.
Преимущества предлагаемого способа получения иммуноглобулинового препарата доказаны экспериментальными исследованиями. Содержание иммуноглобулинов определяли в реакции преципитации и методом радиальной иммунодиффузии по методическим рекомендациям Чернохвостовой Е.В. с соавт., 1984. Определение титра антител против сальмонелл и шигелл осуществляли методом РПГА согласно ФС 422-3347-97. Гравитационное осаждение примесей осуществляли в центрифугах MLW T24D. Ультафильтрацию - на установке с полыми волокнами или фильтрационной установке Millipore.
Сущность изобретения поясняется на следующих примерах, показывающих повышение содержания выделяемой фракции иммуноглобулина А и соответствующее повышение качества продукта.
Пример 1. К осадку Б добавляли в соотношении 1:10 раствор хлорида натрия в концентрации 0,9% при постоянном перемешивании. После разведения к суспензии добавляли хлороформ до конечной концентрации 1,0% в суспензии, смесь перемешивали в течение 10 мин и центрифугировали. Центрифугат титровали до рН 6,0-8,0 и при комнатной температуре добавляли к нему сульфат меди до конечной концентрации 0,015% в смеси. Осадок липопротеидов и примесных белков отделяли центрифугированием. Затем вводили ЭДТА до конечной концентрации в растворе 0,5% и концентрировали иммуноглобулиновую фракцию до содержания белка 6,0%. К концентрату добавляли стабилизаторы и подвергали осветляющей и стерилизующей фильтрации на мембранах Millipore с диаметром пор 0,8-0,45-0,22 нм. При необходимости препарат высушивали методом сублимационного или распылительного обезвоживания.
Концентрация белка в препарате составляла 6,1%. Содержание иммуноглобулинов: IgG - 56,0%, IgM - 22,0%, IgA - 22,0% (по прототипу: IgG - 56,0%, IgM - 27,0%, IgA - 17,0%). Титр антител к сальмонеллам и шигеллам - 1:1280 (по прототипу - 1:1280).
Пример 2. К осадку Б добавляли в соотношении 1:10 раствор хлорида натрия в концентрации 0,9% при постоянном перемешивании. После разведения к суспензии добавляли хлороформ до конечной концентрации 0,1% в суспензии, смесь перемешивали в течение 15 мин. Устанавливали рН суспензии 7,5, при комнатной температуре добавляли сульфат меди 0,03% при постоянном перемешивании в течение 10 мин и центрифугированием выделяли иммуноглобулиновую фракцию. Обрабатывали ее раствором ЭДТА с конечной концентрацией 1,0% в смеси, затем подвергали ультрафильтрации и концентрировали. Концентрат стабилизировали, осветляли, стерилизовали и, при необходимости, высушивали.
Концентрация белка в препарате составляла 6,5%. Содержание иммуноглобулинов: IgG - 58,2%, IgM - 20,5%, IgA - 21,3% (по прототипу: IgG - 55,0%, IgM - 28,0%, IgA - 17,0%). Титр антител к сальмонеллам и шигеллам - 1:1280 (по прототипу - 1:1280).
Пример 3. К осадку Б добавляли в соотношении 1:10 раствор хлорида натрия в концентрации 0,9% при постоянном перемешивании. После разведения к суспензии добавляли хлороформ до конечной концентрации 3,0% в суспензии, смесь перемешивали в течении 10-15 мин и центрифугировали. Центрифугат титровали до рН 6,5 и при комнатной температуре добавляли к нему сульфат меди до конечной концентрации 0,003% в смеси. Балластные примеси отделяли центрифугированием. Затем вводили ЭДТА до конечной концентрации в растворе 1%, подвергали ультрафильтрации и концентрированию. К концентрату добавляли стабилизаторы, подвергали осветлению и стерилизации и, при необходимости, высушивали.
Концентрация белка в препарате составляла 5,8%. Содержание иммуноглобулинов: IgG - 60,3%, IgM - 15,7%, IgA - 24,0% (по прототипу: IgG - 52,0%, IgM - 30,0%, IgA - 18,0%). Титр антител к сальмонеллам и шигеллам - 1:1280 (по прототипу - 1:1280).
Таким образом, предлагаемый способ, основанный на сочетании последовательного действия хлороформа в концентрации 0,1-3,0% и сульфата меди в концентрации 0,003-0,03%, позволяет повысить содержание выделяемых иммуноглобулинов А. Кроме того, повышается содержание иммуноглобулинов G. Все указанное приводит к повышению качества продукта при одинаковой производительности с прототипом.
Claims (1)
- Способ получения иммуноглобулинового препарата, предусматривающий последовательную обработку спиртового осадка Б (III фракции по Кону) десятикратным объемом 0,9%-ного раствора хлорида натрия, хлороформом в конечной концентрации 0,1-3,0%, центрифугирование, добавление к центрифугату при рН 6-8 сульфата меди, удаление осадка центрифугированием с последующим выделением целевого продукта методом ультрафильтрации в присутствии комплексообразующих соединений, его стабилизации, осветляющей и стерилизующей фильтрации, отличающийся тем, что сульфат меди используют в концентрации 0,003-0,03%.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2008122064/15A RU2371200C1 (ru) | 2008-06-03 | 2008-06-03 | Способ получения иммуноглобулинового препарата |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2008122064/15A RU2371200C1 (ru) | 2008-06-03 | 2008-06-03 | Способ получения иммуноглобулинового препарата |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2371200C1 true RU2371200C1 (ru) | 2009-10-27 |
Family
ID=41353010
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2008122064/15A RU2371200C1 (ru) | 2008-06-03 | 2008-06-03 | Способ получения иммуноглобулинового препарата |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2371200C1 (ru) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2502509C1 (ru) * | 2012-11-22 | 2013-12-27 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Комбинированный антибактериальный препарат для лечения острых кишечных инфекций |
| RU2503451C1 (ru) * | 2012-11-22 | 2014-01-10 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Комбинированный антибактериальный препарат для лечения острых кишечных инфекций |
| RU2616266C1 (ru) * | 2015-12-18 | 2017-04-13 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Способ получения иммуноглобулинового препарата для наружного применения |
-
2008
- 2008-06-03 RU RU2008122064/15A patent/RU2371200C1/ru active
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2502509C1 (ru) * | 2012-11-22 | 2013-12-27 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Комбинированный антибактериальный препарат для лечения острых кишечных инфекций |
| RU2503451C1 (ru) * | 2012-11-22 | 2014-01-10 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Комбинированный антибактериальный препарат для лечения острых кишечных инфекций |
| RU2616266C1 (ru) * | 2015-12-18 | 2017-04-13 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Способ получения иммуноглобулинового препарата для наружного применения |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2363234C2 (ru) | Способы выделения белка, направленные на снижение содержания фитиновой кислоты | |
| JP5762951B2 (ja) | 分泌性免疫グロブリンの豊富な乳画分の製造方法 | |
| RU2371200C1 (ru) | Способ получения иммуноглобулинового препарата | |
| NL8601814A (nl) | Werkwijze voor het extraheren van eiwitten uit melk, produkten, toepassingen van de werkwijze en farmaceutische preparaten. | |
| Brião et al. | Is downstream ultrafiltration enough for production of food-grade phycocyanin from Arthrospira platensis? | |
| HUE029232T2 (en) | A method for preparing injectable formulations of protein derived from blood, and materials obtained using said method | |
| WO2002102487A2 (en) | Process for preparing protein isolate from milk, whey, colostrum, and the like | |
| RU2390253C1 (ru) | Способ получения лактоферрина из молочного сырья | |
| WO2020058936A1 (pt) | Processo para purificar um anticorpo a partir da gema de ovo, seus produtos e usos | |
| RU2371199C1 (ru) | Способ получения иммуноглобулинового препарата | |
| CA3232192A1 (en) | Extracellular vesicles derived from milk and process for isolating the same | |
| JP2012503596A5 (ru) | ||
| KR20150077954A (ko) | 계란 난황으로부터 면역글로불린 ｙ와 포스비틴을 연속적으로 분리추출하는 방법 | |
| JP2014113063A (ja) | 水分散性の高いヘム鉄及び乳タンパク質を含む複合体のナノ粒子の製造方法 | |
| JP5261732B2 (ja) | シアル酸含有オリゴ糖の製造方法 | |
| KR101437259B1 (ko) | 계란 난백으로부터 라이소자임과 오보알부민을 연속적으로 분리추출하는 추출방법 | |
| WO2016156752A1 (fr) | Procédé de purification d'une protéine recombinante thérapeutique à partir d'un lait transgénique | |
| RU2639261C1 (ru) | Способ получения противоклещевого иммуноглобулина из донорской иммунной плазмы | |
| RU2586255C1 (ru) | Способ получения продукта, содержащего иммуноглобулины g,a,m | |
| CN101698680A (zh) | IgY免疫球蛋白的PEG与凝胶色谱联用纯化方法 | |
| JP2005336230A (ja) | 脂肪球皮膜物質中の脂質の分離回収方法 | |
| RU2189833C2 (ru) | Способ получения иммуноглобулинового препарата | |
| RU2671537C2 (ru) | Препарат гиалуронидазы и способ его получения | |
| RU2158137C1 (ru) | Способ получения иммуноглобулинового препарата | |
| JP2003159094A (ja) | 卵黄抗体の無菌的製造法 |