RU2311461C2 - СПОСОБ ПРОДУЦИРОВАНИЯ 19-НОР-10β-КАРБОНОВЫХ КИСЛОТ ПУТЕМ ГРИБКОВОГО ОКИСЛЕНИЯ 6-ЗАМЕЩЕННЫХ- Δ6-ПРЕГНАНОВ - Google Patents
СПОСОБ ПРОДУЦИРОВАНИЯ 19-НОР-10β-КАРБОНОВЫХ КИСЛОТ ПУТЕМ ГРИБКОВОГО ОКИСЛЕНИЯ 6-ЗАМЕЩЕННЫХ- Δ6-ПРЕГНАНОВ Download PDFInfo
- Publication number
- RU2311461C2 RU2311461C2 RU2005118995/13A RU2005118995A RU2311461C2 RU 2311461 C2 RU2311461 C2 RU 2311461C2 RU 2005118995/13 A RU2005118995/13 A RU 2005118995/13A RU 2005118995 A RU2005118995 A RU 2005118995A RU 2311461 C2 RU2311461 C2 RU 2311461C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- nigrospora
- formula
- substituted
- atcc
- methyl
- Prior art date
Links
- 0 C[C@](CCC1C2(*)CC3)(C(CC4*)C1C=C(*)C2=CC3=O)C4C(C)=O Chemical compound C[C@](CCC1C2(*)CC3)(C(CC4*)C1C=C(*)C2=CC3=O)C4C(C)=O 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P33/00—Preparation of steroids
Landscapes
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для синтеза фармакологически активных 19-норстероидов. Используют гриб рода Nigrospora, способный окислять углерод в 19-ом положении 6-замещенного-Δ6-прегнана. Соединения 6-замещенных-Δ6-прегнанов окисляют в биотрансформационной среде, содержащей от 0,1 мл/л до 4 мл/л неионного детергента и от 5 г/л до 60 г/л источника углерода. Способ позволяет получить 19-нор-10β-карбоновые кислоты с высоким выходом и высокой степенью чистоты. 7 з.п. ф-лы.
Description
Область изобретения
Настоящее изобретение относится к грибковому окислению 6-замещенных-Δ6-прегнанов формулы 1 с образованием 19-нор-10β-карбоновых кислот формулы II с последующей стадией химического декарбоксилирования с получением 19-нор-6-замещенных-Δ6-прегнанов формулы III.
Предшествующий уровень техники
19-Нор-4,6-прегнадиен-6-метил-17α-ол-3,20-дион (номегестрол) и родственные молекулы формулы III представляют собой полезные стероидные промежуточные соединения для синтеза фармакологически активных 19-нор-стероидов. Например, 19-нор-4,6-прегнадиен-6-метил-17α-ол-3,20-дион (номегестрол) может быть использован для синтеза ацетата номегестрола (19-нор-4,6-прегнадиен-6-метил-17α-ол-3,20-дион 17 ацетата), стероида женского здоровья.
Известен (патент Соединенных Штатов 4284720) способ получения 19-гидрокси-стероидов из соответствующих 10-метил-стероидов андостанового или прегнанового ряда путем ферментации культурой гриба рода Nigrospora.
19-Нор-стероиды химически синтезировали из 19-гидрокси-стероидов.
Заявленный способ позволяет осуществить ферментативное окисление 6-замещенных-Δ6-прегнанов формулы I сразу до 19-нор-10β-карбоновых кислот.
КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
В целом, в настоящем изобретении предложен практический способ грибкового окисления 6-замещенных-Δ6-прегнанов формулы I с образованием 19-нор-10β-карбоновых кислот формулы II с последующей стадией химического декарбоксилирования с получением 19-нор-6-замещенных-Δ6-прегнанов формулы III.
Способ продуцирования 19-нор-10β-карбоновой кислоты формулы II,
где R1 выбран из группы, состоящей из Н, ОН, R-C(O)O-, -СН2OCH3, СН3СН(OR)O-;
R представляет собой С1-С8алкильную группу;
R2 выбран из Н, F, Cl, Br и СН3-;
R3 представляет собой Н или СН2=;
R4 представляет собой -СН2OH или -СН3,
путем грибкового окисления 6-замещенного-Δ6-прегнана формулы I,
где R1 выбран из группы, состоящей из Н, ОН, R-C(O)O-, -СН2OCH3, СН3СН(OR)O-;
R представляет собой С1-С8алкильную группу;
R2 выбран из Н, F, Cl, Br и СН3-;
R3 представляет собой Н или СН2=;
R4 представляет собой -СН2OH или -СН3,
R5 представляет собой -СНО, -СН2ОН или СН3,
включающий
приведение в контакт 6-замещенного-Δ6-прегнана формулы 1 с биотрансформирующей культурой, содержащей вид рода Nigrospora, способный окислять углерод в 19-ом положении 6-замещенного-Δ6-прегнана формулы I.
ОПРЕДЕЛЕНИЯ
Ниже приведены определения и объяснения терминов, используемых по всему этому документу, включая как описание изобретения, так и формулу изобретения.
Все температуры даны в градусах Цельсия.
"Об/мин" обозначает обороты в минуту.
"ТСХ" обозначает тонкослойную хроматографию.
"ВЭЖХ" обозначает высокоэффективную жидкостную хроматографию.
"psig" (pounds per square inch gage) обозначает размерность давления в фунтах на квадратный дюйм.
"ОО" обозначает обратный осмос.
Когда используют смеси растворителей, отношения используемых растворителей даны в единицах объем/объем (об./об.).
Когда используют растворимость твердого вещества в растворителе, отношение твердого вещества к растворителю дано в единицах масса/объем (мас./об.).
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
В общем, данное изобретение относится к грибковому окислению 6-замещенных-Δ6-прегнанов формулы I,
где R1 выбран из группы, состоящей из Н, ОН, R-C(O)O-, -CH2OCH3, СН3СН(OR)O-;
R представляет собой C1-С8алкильную группу;
R2 выбран из Н, F, Cl, Br и СН3-;
R3 представляет собой Н или СН2=;
R4 представляет собой -CH2OH или -СН3,
R5 представляет собой -СНО, -CH2OH или СН3,
с получением 19-нор-10β-карбоновых кислот формулы II,
где R, R1, R2, R3, R4 являются такими же, как и R, R1, R2, R3, R4 в формуле I.
Любой нитевидный гриб рода Nigrospora, способный окислять углерод в 19-ом положении 6-замещенных-Δ6-прегнанов формулы I, может быть использован для продуцирования 19-нор-10β-карбоновых кислот формулы II. Методику, приведенную в Примере 1, можно использовать для того, чтобы определить, способен ли конкретный нитевидный гриб рода Nigrospora окислять углерод в 19-ом положении 6-замещенных-Δ6-прегнанов формулы I.
19-Нор-10β-карбоновые кислоты формулы II затем могут быть выделены и подвергнуты химическому декарбоксилированию с получением 19-нор-6-замещенных-Δ6-прегнанов формулы III,
где R, R1, R2, R3, R4 являются такими же, как и R, R1, R2, R3, R4 в формуле I.
Авторами изобретения обнаружено, что приведение в контакт 6-замещенных-Δ6-прегнанов формулы I с определенными штаммами Nigrospora, в частности Nigrospora sphaerica ATCC 12772, Nigrospora gorlenkoanum ATCC 24718 и Nigrospora oryzae ATCC 42775, давало 19-нор-10β-карбоновые кислоты формулы II.
В способе по настоящему изобретению биотрансформационная среда содержит поверхностно-активное вещество и высокий уровень источника углерода. Поверхностно-активное вещество выбрано из группы неионных детергентов, включающих неионные амиды, неионные сложные эфиры, такие как этоксилированные алкилфенолы и сложные эфиры полиоксиэтилен-сорбитана, эмульгирующие воска, неионные этоксилаты, тристирилфенолэтоксилаты, спиртовые этоксилаты, такие как октилфеноксиполиэтоксиэтанол, этоксилированные меркаптаны, блокированные (capped) этоксилаты, блоксополимеры и обратные сополимеры.
Предпочтительно, в качестве поверхностно-активных веществ используют этоксилированные алкилфенолы, сложные эфиры полиоксиэтилен-сорбитана или октилфеноксиполиэтоксиэтанол. Используемая концентрация неионного детергента может составлять от приблизительно 0,1 мл/л или 0,1 г/л до приблизительно 4 мл/л или 4 г/л, но обычно от приблизительно 1 мл/л или 1 г/л до приблизительно 2 мл/л или 2 г/л.
Источник углерода выбран из групп, состоящих из моносахаридов, дисахаридов, трисахаридов, гидролизованных полисахаридов и сахарных спиртов. Обычно в качестве источника углерода используют глюкозу. Концентрация источника углерода может составлять от приблизительно 2 г/л до приблизительно 100 г/л, но обычно от приблизительно 5 г/л до приблизительно 60 г/л.
Предпочтительно, гриб выращивают в глубинной культуре в аэробных условиях с использованием любой методики, известной в данной области техники, а окислительную реакцию осуществляют in situ. Желательный гриб Nigrospora культивируют с использованием условий, способов, источников углерода и источников азота, известных специалистам в данной области техники. В общем, для грибкового 19-окисления при получении используют методику первичного и вторичного вегетативных посевов. Альтернативно, первичный вегетативный посев можно использовать непосредственно для инокуляции биотрансформационной среды для грибкового 19-окисления.
Первичные вегетативные посевные культуры инкубируют в течение периода от приблизительно 24 до приблизительно 96 часов (предпочтительно около 48-72 часов) при температуре от приблизительно 20°С до приблизительно 37°С (предпочтительно около 28°С) и рН от приблизительно 3,0 до приблизительно 7,5. Вторичную вегетативную посевную среду инокулируют от приблизительно 0,006% до приблизительно 0,25% [об./об.] первичной вегетативной посевной культурой, но обычно от приблизительно 0,012% до приблизительно 0,1% [об./об.] и инкубируют в течение периода от приблизительно 36 до приблизительно 72 часов (предпочтительно около 48-60 часов) при температуре от приблизительно 20°С до приблизительно 37°С (предпочтительно около 28°С). Значение рН вторичной посевной среды может составлять от приблизительно 3,0 до приблизительно 7,5, но предпочтительно от приблизительно 5,0 до приблизительно 7,0. Биотрансформационную среду, которая может быть такой же или подобной вторичной вегетативной посевной среде, инокулируют от приблизительно 1% до приблизительно 10% [об./об.] вторичной вегетативной посевной культурой (предпочтительно от приблизительно 3% до приблизительно 5%). После периода начальной инкубации от приблизительно 12 до приблизительно 72 часов (предпочтительно от приблизительно 16 до приблизительно 24 часов) к биотрансформирующей культуре добавляют стероидные субстраты формулы I, предпочтительно микронизированные. Микронизированные стероидные субстраты формулы I можно добавлять в виде сухого порошка или водной суспензии, либо в виде однократной добавки или серии добавок, либо путем непрерывной подачи. Предпочтительно использовать микронизированные стероидные субстраты формулы I в концентрации выше 1 г/л, более предпочтительно выше 2 г/л, еще более предпочтительно выше 4 г/л. Биотрансформации стероидных субстратов формулы I с образованием 19-окисленных продуктов формулы II дают осуществиться в течение от приблизительно 1 до приблизительно 9 суток, но обычно от приблизительно 2 до приблизительно 6 суток. Превращение можно контролировать хроматографическим способом, таким как ВЭЖХ, известным специалистам в данной области техники. Подходящий способ ВЭЖХ предложен в примере 1.
Сразу после завершения биотрансформации стероидных субстратов формулы I до 19-окисленных продуктов формулы II соединения формулы II можно выделить с использованием любой методики из ряда известных в данной области техники. Предпочтительно, исчерпанную ферментационную среду, цельную или отфильтрованную, экстрагируют органическим растворителем, не смешивающимся с водой, таким как метиленхлорид, снижая рН до тех пор, пока продукт формулы II не окажется в форме кислоты. Не смешивающийся с водой органический растворитель затем концентрируют упариванием. Продукт формулы II затем экстрагируют в воду, повышая рН до тех пор, пока продукт формулы II, представляющий собой карбоновую кислоту, не будет ионизирован (рН от 8 до 9). Этот водный экстракт разбавляют смешивающимся с водой растворителем, таким как метанол, и рН снижают до тех пор, пока продукт формулы II вновь не перейдет в форму кислоты (рН от 3 до 4). Неочищенный продукт формулы II медленно кристаллизуют путем выпаривания смешивающегося с водой растворителя.
Стероидные соединения формулы II могут быть подвергнуты химическому декарбоксилированию с получением стероидных соединений формулы III. Стадию декарбоксилирования осуществляют с использованием условий и реагентов, известных, специалистам в данной области техники. В общем, соединения формулы II растворяют в полярном растворителе вместе с кислотным катализатором. Смесь нагревают для осуществления желаемого декарбоксилирования. Обычно карбоновую кислоту обрабатывают каталитическим количеством соляной кислоты в водном метаноле при кипячении с обратным холодильником в течение 30 минут для осуществления желаемого декарбоксилирования. Однако растворитель и кислота не являются важными. Подходит любой растворитель, который будет растворять как субстрат карбоновую кислоту, так и кислотный катализатор. Предпочтительные растворители включают пиридин, пиколин, диметилсульфоксид (ДМСО), гексаметилфосфорамид (НМРА), сульфолан, диметилформамид, диметилацетамид, N-метилпирролидон, ацетонитрил, ацетон, метанол, этанол, н-пропанол, изопропанол или их водные смеси. Метанол является наиболее предпочтительным растворителем. Соединения формулы II растворяют в концентрации от приблизительно 10 мг/мл до приблизительно 500 мг/мл (предпочтительно около 100-300 мг/мл).
Подходящим кислотным катализатором является кислота, которая имеет рКа менее 4,9. Такие кислоты включают соляную кислоту, бромистоводородную кислоту, серную кислоту, ледяную уксусную кислоту, фосфорную кислоту, бензолсульфоновую кислоту, бромуксусную кислоту, хлоруксусную кислоту, лимонную кислоту, дихлоруксусную кислоту, щавелевую кислоту, трифторуксусную кислоту и трихлоруксусную кислоту. Конечная концентрация кислоты в метаноле составляет от 0,001 н. (рН 3) до 0,1 н. (рН 1), предпочтительно около 0,01 н. (рН 2). Реакционную среду нагревают до температуры от 40°С до 80°С (предпочтительно около 50-60°С) в течение от приблизительно 1 часа до приблизительно 24 часов (предпочтительно от 4 до 12 часов). Соединения формулы III можно выделить из этой реакционной смеси с использованием любой методики из ряда известных в данной области техники; предпочтительной методикой является кристаллизация путем концентрирования упариванием и/или охлаждения.
Декарбоксилирование также можно осуществить в две стадии: первая, декарбоксилирование с получением 3-кето-Δ5(10)-промежуточного соединения, с последующей стадией изомеризации до соединения (III). Декарбоксилирование до 3-кето-Δ5(10)-промежуточного соединения можно осуществить путем перемешивания в ДМСО при комнатной температуре (15-25°С) в течение 16 часов. 3-Кето-Δ5(10)-промежуточное соединение затем подвергают изомеризации до соединения III путем обработки кислотой, имеющей рКа менее 4,9, как описано выше.
ПРИМЕРЫ
Без дополнительного уточнения считается, что специалист в данной области техники может, используя предшествующие описания, применить настоящее изобретение в его наиболее полной степени. Следующие подробные примеры описывают как получить различные соединения и/или осуществить различные способы по данному изобретению и их следует истолковывать как только иллюстративные и никак не ограничивающие предшествующее описание каким-либо образом. Специалисты в данной области техники сразу узнают подходящие отклонения от этих методик как в отношении реагирующих веществ, так и в отношении условий реакции и методик.
ПРИМЕР 1
Превращение 4,6-прегнадиен-6-метил-17α-ол-3,20-диона в 19-нор-4,6-прегнадиен-6-метил-17α-ол-3,20-дион-10β-карбоновую кислоту осуществляют с использованием глубинной культуры Nigrospora sphaerica ATCC 12772 с последующим декарбоксилированием до 19-нор-4,6-прегнадиен-6-метил-17α-ол-3,20-диона.
(А) Стадия первичного посева
Замороженные вегетативные клетки Nigrospora sphaerica ATCC 12772 оттаивают, переносят на чашки с картофельным агаром с декстрозой (PDA) и инкубируют при 28°С в течение 72 часов. Для инокуляции силиконизированных встряхиваемых колб на 500 мл с делениями, содержащих 100 мл первичной посевной среды, используют одиночные мицелиальные пробки (6-7 мм в диаметре). Первичная посевная среда состоит из (на литр OO воды) декстрина, 50 г; соевой муки, 35 г; глюкозы, 5 г; гексагидрата хлорида кобальта, 2 мг; кремнийорганического пеногасителя (SAG 471), 0,5 мл; рН предварительной стерилизации 7,0-7,2 доводили гидроксидом натрия (2 н.). Встряхиваемые колбы, содержащие первичную посевную среду, стерилизуют в течение 30 минут при 121°С с использованием автоклава. Nigrospora sphaerica АТСС 12772 инкубируют в течение 48 часов при 28°С, используя инкубатор-шейкер с контролируемыми условиями, установленный на 270 об/мин (2''-орбитальный ход).
(Б) Стадия вторичного посева
Сто миллилитров вторичной посевной среды в силиконизированных встряхиваемых колбах на 500 мл с делениями инокулируют, используя 0,2 мл вегетативной первичной посевной культуры (0,2% [об./об.] процент инокуляции). Вторичная посевная среда содержит (на литр OO воды) глюкозу, 30 г; соевую муку, 12,5 г; твердый кукурузный экстракт, 10 г; октилфеноксиполиэтоксиэтанол, 0,25 мл; кремнийорганический пеногаситель (SAG 471), 0,5 мл; рН предварительной стерилизации 6,5-6,6 доводили гидроксидом натрия (2 н.). Встряхиваемые колбы, содержащие вторичную посевную среду, стерилизуют в течение 30 минут при 121°С с использованием автоклава. Nigrospora sphaerica АТСС 12772 инкубируют в течение приблизительно 52 часов при 28°С, используя инкубатор-шейкер с контролируемыми условиями, установленный на 270 об/мин (2''-орбитальный ход).
(В) Биотрансформация стероидов
Сто миллилитров среды для биотрансформации стероидов в силиконизированных встряхиваемых колбах на 500 мл с делениями инокулируют, используя 5 мл вегетативной вторичной посевной культуры (5% [об./об.] процент инокуляции). Среда для биотрансформации стероидов по существу является такой же, как и вторичная посевная среда, за исключением того, что содержание октилфеноксиполиэтоксиэтанола увеличено от 0,25 мл/л до 2 мл/л. Приблизительно через 22 часа после инокуляции к 100 мл ферментационной среды добавляют 0,5 г микронизированного 4,6-прегнадиен-6-метил-17α-ол-3,20-диона, суспендированного в минимальном объеме 0,2% [об./об.] октилфеноксиполиэтоксиэтанола.
Биотрансформирующие культуры ежедневно анализируют на 19-нор-4,6-прегнадиен-6-метил-17α-ол-3,20-дион-10β-карбоновую кислоту с использованием ВЭЖХ. Один миллилитр цельной исчерпанной ферментационной среды экстрагируют 3 мл теплого ацетонитрила. Клетки отделяют от водно-ацетонитрильной смеси путем центрифугирования (3000×g в течение 10 минут) и 5 мкл экстракта вводят в колонку для ВЭЖХ. Условия для ВЭЖХ являются следующими: хроматограф Spectra-Physics, оснащенный С18 обращенно-фазовой колонкой (150×4,6 мм); температура колонки 30°С; подвижная фаза (изократическая), ацетонитрил/0,25% фосфорная кислота (55/45, [об./об.]); скорость потока = 0,5 мл/мин; детекция, 287 нм; время проскока = 20 минут. Биотрансформация 4,6-прегнадиен-6-метил-17α-ол-3,20-диона до 19-нор-4,6-прегнадиен-6-метил-17α-ол-3,20-дион-10β-карбоновой кислоты завершается приблизительно через 2 суток.
(Г) Методика выделения и декарбоксилирования
Цельную исчерпанную ферментационную среду от пяти 100-мл ферментации при сборе экстрагируют 250 мл метиленхлорида, снижая рН до 4. Барду повторно экстрагируют дополнительными 200 мл метиленхлорида. Обогащенные метиленхлоридные экстракты выделяют путем центрифугирования и затем объединяют, очищают и концентрируют упариванием приблизительно до 50 мл. Продукт (19-нор-4,6-прегнадиен-6-метил-17α-ол-3,20-дион-10β-карбоновую кислоту) затем экстрагируют в 50 мл воды, повышая рН до 9. Этот обогащенный водный экстракт разбавляют 50 мл метанола и рН снижают до 4. Неочищенный продукт кристаллизуют выпариванием метанола. Твердые вещества выделяют из водной суспензии путем фильтрации, промывают 15 мл воды и сушат с получением 1,22 г неочищенной кристаллической 19-нор-4,6-прегнадиен-6-метил-17α-ол-3,20-дион-10β-карбоновой кислоты.
1,22 г неочищенной 19-нор-4,6-прегнадиен-6-метил-17α-ол-3,20-дион-10β-карбоновой кислоты растворяют в 4 мл метанола, содержащего 0,1 мл 85%-ной фосфорной кислоты, и реакционную смесь нагревают до 55°С. Реакционную смесь анализируют каждый час на 19-нор-4,6-прегнадиен-6-метил-17α-ол-3,20-дион, используя ВЭЖХ. Пять микролитров реакционной смеси разбавляют в 1 мл ацетонитрила и 5 мкл вводят в колонку для ВЭЖХ. Условия для ВЭЖХ такие же, как описано выше. Декарбоксилирование 19-нор-4,6-прегнадиен-6-метил-17α-ол-3,20-дион-10β-карбоновой кислоты до 19-нор-4,6-прегнадиен-6-метил-17α-ол-3,20-диона завершается приблизительно через 4 часа. Реакционную смесь охлаждают до -10°С, а кристаллы отфильтровывают и промывают 1 мл метанола при -10°С с получением 0,72 г 19-нор-4,6-прегнадиен-6-метил-17α-ол-3,20-диона 99,4% чистоты.
ПРИМЕР 2
Превращение 4,6-прегнадиен-6-метил-17α-ол-3,20-диона в 19-нор-4,6-прегнадиен-6-метил-17α-ол-3,20-дион-10β-карбоновую кислоту осуществляют, используя глубинную культуру Nigrospora gorlenkoanum ATCC 24718, с последующим декарбоксилированием до 19-нор-4,6-прегнадиен-6-метил-17α-ол-3,20-диона.
При условиях, описанных в ПРИМЕРЕ 1, получили 1,18 г неочищенной кристаллической 19-нор-4,6-прегнадиен-6-метил-17α-ол-3,20-дион-10β-карбоновой кислоты. Это вещество затем превращали с получением 0,75 г 19-нор-4,6-прегнадиен-6-метил-17α-ол-3,20-диона 99,7% чистоты.
ПРИМЕР 3
Превращение 4,6-прегнадиен-6-метил-17α-ол-3,20-диона в 19-нор-4,6-прегнадиен-6-метил-17α-ол-3,20-дион-10β-карбоновую кислоту осуществляют, используя глубинную культуру Nigrospora oryzae ATCC 42775, с последующим декарбоксилированием до 19-нор-4,6-прегнадиен-6-метил-17α-ол-3,20-диона.
При условиях, описанных в ПРИМЕРЕ 1, получили 1,20 г неочищенной кристаллической 19-нор-4,6-прегнадиен-6-метил-17α-ол-3,20-дион-10β-карбоновой кислоты. Это вещество затем превращали с получением 0,65 г 19-нор-4,6-прегнадиен-6-метил-17α-ол-3,20-диона 99,2% чистоты.
Claims (8)
1. Способ продуцирования 19-нор-10β-карбоновой кислоты формулы II
где R1 выбран из группы, состоящей из Н, ОН, R-C(O)O-, -CH2ОСН3, СН3СН(OR)O-;
R представляет собой С1-С8алкильную группу;
R2 выбран из Н, F, Cl, Br и СН3-;
R3 представляет собой Н или СН2=;
R4 представляет собой -СН2ОН или -СН3, путем грибкового окисления 6-замещенного-Δ6-прегнана формулы I
где R1 выбран из группы, состоящей из Н, ОН, R-C(O)O-, -СН2OCH3, СН3СН(OR)O-;
R представляет собой С1-С8алкильную группу;
R2 выбран из Н, F, Cl, Br и СН3-;
R3 представляет собой Н или СН3=;
R4 представляет собой -СН2ОН или -СН3,
R5 представляет собой -СНО, -CH2OH или -СН3,
включающий приведение в контакт 6-замещенного-Δ6-прегнана формулы I с биотрансформационной средой, содержащей вид рода Nigrospora, способный окислять углерод в 19-м положении 6-замещенного-Δ6-прегнана формулы I, где биотрансформационная среда содержит от приблизительно 0,1 мл/л до приблизительно 4 мл/л неионного детергента и от приблизительно 5 г/л до приблизительно 60 г/л источника углерода, выбранного из групп, состоящих из моносахаридов, дисахаридов, трисахаридов, гидролизованных полисахаридов и сахарных спиртов.
2. Способ по п.1, где вид рода Nigrospora выбран из Nigrospora sphaerica АТСС 12772, Nigrospora gorlenkoanum ATCC 24718 и Nigrospora oryzae ATCC 42775.
3. Способ по п.2, где вид рода Nigrospora представляет собой Nigrospora sphaerica ATCC 12772.
4. Способ по п.2, где вид рода Nigrospora представляет собой Nigrospora gorlenkoanum ATCC 24718.
5. Способ по п.2, где вид рода Nigrospora представляет собой Nigrospora oryzae ATCC 42775.
6. Способ по п.1, где R5 представляет собой -СНО.
7. Способ по п.1, где R5 представляет собой -СН2ОН.
8. Способ по п.1, где R5 представляет собой -СН3.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US44154203P | 2003-01-21 | 2003-01-21 | |
| US60/441,542 | 2003-01-21 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2005118995A RU2005118995A (ru) | 2006-02-27 |
| RU2311461C2 true RU2311461C2 (ru) | 2007-11-27 |
Family
ID=32771940
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2005118995/13A RU2311461C2 (ru) | 2003-01-21 | 2004-01-09 | СПОСОБ ПРОДУЦИРОВАНИЯ 19-НОР-10β-КАРБОНОВЫХ КИСЛОТ ПУТЕМ ГРИБКОВОГО ОКИСЛЕНИЯ 6-ЗАМЕЩЕННЫХ- Δ6-ПРЕГНАНОВ |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7300771B2 (ru) |
| EP (1) | EP1587942B1 (ru) |
| JP (1) | JP2006515518A (ru) |
| KR (1) | KR20050095617A (ru) |
| CN (1) | CN100338225C (ru) |
| AR (1) | AR042738A1 (ru) |
| AT (1) | ATE392483T1 (ru) |
| AU (1) | AU2004205797A1 (ru) |
| BR (1) | BRPI0406853A (ru) |
| CA (1) | CA2511653A1 (ru) |
| DE (1) | DE602004013123D1 (ru) |
| IL (1) | IL169118A0 (ru) |
| MX (1) | MXPA05007535A (ru) |
| PL (1) | PL377997A1 (ru) |
| RS (1) | RS20050504A (ru) |
| RU (1) | RU2311461C2 (ru) |
| TW (1) | TWI281946B (ru) |
| WO (1) | WO2004065612A1 (ru) |
| ZA (1) | ZA200504673B (ru) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7396534B2 (en) * | 2004-05-11 | 2008-07-08 | Unilever Home & Personal Care Usa, Division Of Conopco, Inc. | Cosmetic compositions containing Nigrospora sphaerica extracts |
| CN106978356B (zh) * | 2017-03-24 | 2019-10-25 | 湖北省荆楚药材研究院 | 一株产bostrycin的蕲艾内生真菌HCH285 |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3039926A (en) * | 1958-10-10 | 1962-06-19 | Pfizer & Co C | 19-hydroxy pregnenes |
| FR1281867A (fr) * | 1959-12-02 | 1962-01-19 | Takeda Pharmaceutical Ind | Procédé d'oxygénation de stéroïdes en position 19 par voie microbiologique |
| CH425774A (de) * | 1961-07-14 | 1966-12-15 | Ciba Geigy | Verfahren zur Herstellung von 19-Nor-steroiden |
| US3212969A (en) * | 1961-11-17 | 1965-10-19 | Syntex Corp | 16-methyl-19-nor-delta4, 6-pregnadiene-3, 20-dione |
| US3475275A (en) * | 1966-02-01 | 1969-10-28 | Sankyo Co | Method for the production of 3alpha,5-cyclo-6beta,19-oxido-5alpha- androstan-17-one |
| FR1586869A (ru) * | 1968-06-19 | 1970-03-06 | ||
| DE2901564A1 (de) * | 1979-01-12 | 1980-07-24 | Schering Ag | Verfahren zur herstellung von 19hydroxysteroiden der androstan- und pregnanreihe |
| US4560656A (en) * | 1981-09-28 | 1985-12-24 | Fritzsche Dodge & Olcott Inc. | Production of γ-decalactone |
| JP2627915B2 (ja) * | 1988-03-09 | 1997-07-09 | 雪印乳業株式会社 | ２０―カルボキシプレグナン誘導体の製造方法 |
| DE10233723A1 (de) * | 2002-07-24 | 2004-02-12 | Schering Ag | Mikrobiologische Verfahren zur Herstellung von 7α-substituierten 11α-Hydroxysteroiden, daraus herstellbare 7α,17α-substituierte 11β-Halogensteroide, deren Herstellungsverfahren und Verwendung sowie pharmazeutische Präparate, die diese Verbindungen enthalten, sowie daraus herstellbare 7α-substituierte Estra-1,3,5(10)-triene |
-
2004
- 2004-01-09 CN CNB2004800025554A patent/CN100338225C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2004-01-09 RS YUP-2005/0504A patent/RS20050504A/sr unknown
- 2004-01-09 MX MXPA05007535A patent/MXPA05007535A/es not_active Application Discontinuation
- 2004-01-09 AU AU2004205797A patent/AU2004205797A1/en not_active Abandoned
- 2004-01-09 EP EP04701068A patent/EP1587942B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2004-01-09 AT AT04701068T patent/ATE392483T1/de not_active IP Right Cessation
- 2004-01-09 PL PL377997A patent/PL377997A1/pl not_active Application Discontinuation
- 2004-01-09 BR BR0406853-0A patent/BRPI0406853A/pt not_active IP Right Cessation
- 2004-01-09 DE DE602004013123T patent/DE602004013123D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2004-01-09 JP JP2006500301A patent/JP2006515518A/ja not_active Abandoned
- 2004-01-09 CA CA002511653A patent/CA2511653A1/en not_active Abandoned
- 2004-01-09 RU RU2005118995/13A patent/RU2311461C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2004-01-09 KR KR1020057013360A patent/KR20050095617A/ko active IP Right Grant
- 2004-01-09 WO PCT/IB2004/000107 patent/WO2004065612A1/en active IP Right Grant
- 2004-01-19 AR ARP040100139A patent/AR042738A1/es unknown
- 2004-01-20 TW TW093101630A patent/TWI281946B/zh not_active IP Right Cessation
- 2004-01-20 US US10/760,785 patent/US7300771B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2005
- 2005-06-08 ZA ZA200504673A patent/ZA200504673B/en unknown
- 2005-06-09 IL IL169118A patent/IL169118A0/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR20050095617A (ko) | 2005-09-29 |
| MXPA05007535A (es) | 2005-09-21 |
| EP1587942B1 (en) | 2008-04-16 |
| DE602004013123D1 (de) | 2008-05-29 |
| RS20050504A (en) | 2007-06-04 |
| US7300771B2 (en) | 2007-11-27 |
| AU2004205797A1 (en) | 2004-08-05 |
| TWI281946B (en) | 2007-06-01 |
| RU2005118995A (ru) | 2006-02-27 |
| CN1742090A (zh) | 2006-03-01 |
| TW200418986A (en) | 2004-10-01 |
| EP1587942A1 (en) | 2005-10-26 |
| CA2511653A1 (en) | 2004-08-05 |
| ATE392483T1 (de) | 2008-05-15 |
| JP2006515518A (ja) | 2006-06-01 |
| AR042738A1 (es) | 2005-06-29 |
| WO2004065612A1 (en) | 2004-08-05 |
| ZA200504673B (en) | 2006-07-26 |
| CN100338225C (zh) | 2007-09-19 |
| BRPI0406853A (pt) | 2005-12-27 |
| IL169118A0 (en) | 2007-07-04 |
| PL377997A1 (pl) | 2006-02-20 |
| US20040175784A1 (en) | 2004-09-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPS6340192B2 (ru) | ||
| RU2311461C2 (ru) | СПОСОБ ПРОДУЦИРОВАНИЯ 19-НОР-10β-КАРБОНОВЫХ КИСЛОТ ПУТЕМ ГРИБКОВОГО ОКИСЛЕНИЯ 6-ЗАМЕЩЕННЫХ- Δ6-ПРЕГНАНОВ | |
| JPH0428710B2 (ru) | ||
| EP1534732B1 (en) | 5 androsten-3-ol steroid intermediates and processes for their preparation | |
| JP2003268254A (ja) | 発酵法による紅麹色素の製造方法 | |
| WO2001081611A1 (en) | A novel process for the manufacture and purification of compactin | |
| MXPA06003504A (es) | Metodo de fermentacion para la preparacion de testolactona por especies de fusarium. | |
| US20040265948A1 (en) | Microbial method for hydrolysis and oxidation of androst-5-ene and pregn-5-ene steroid esters | |
| JPH01206999A (ja) | プレグネノーオキサゾリンの製造法 | |
| US20040171853A1 (en) | Microbial process to prepare5-androsten-3beta,7alpha, 15alpha-triol-17-one and related analogues | |
| HU204575B (en) | Process for producing 1-methyl-1,4-androstadiene-3,17-dion | |
| KR840001194B1 (ko) | 메크로라이드의 제조방법 | |
| JPS63154695A (ja) | 新規抗生物質ｓｆ２４４６物質及びその製造法 | |
| EP0702086A1 (en) | Process for producing antibiotics | |
| JPS6219158B2 (ru) | ||
| CS254050B1 (cs) | Sposob přípravy acetyldigoxinu | |
| EP1679317A2 (en) | 5-Androsten-3 -ol steroid intermediates and processes for fheir preparation | |
| PL153070B2 (pl) | SPOSÓB WYTWARZANIA 17^-H YD R O K S¥-aZ-M ETYLO -4,6-A N D R O STA D IEN -3-O N U | |
| JPS59186998A (ja) | １７−シアノ−１２，１７−ジヒドロキシアンドロスタ−１，４−ジエン−３−オン | |
| NZ197869A (en) | 5-0-mycarosyl-20-dihydro-20,23-dideoxytylonolide derivatives |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| TK4A | Correction to the publication in the bulletin (patent) |
Free format text: AMENDMENT TO CHAPTER -FG4A- IN JOURNAL: 33-2007 FOR TAG: (57) |
|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20090110 |