CS254050B1

CS254050B1 - Sposob přípravy acetyldigoxinu

Info

Publication number: CS254050B1
Application number: CS383986A
Authority: CS
Inventors: Jan Fuska; Bohumil Proksa; Alzbeta Khandlova
Original assignee: Jan Fuska; Bohumil Proksa; Alzbeta Khandlova
Priority date: 1986-05-26
Filing date: 1986-05-26
Publication date: 1987-12-17

Abstract

Riešenie sa týká spósobu přípravy acetyldigoxinu tak, že sa do tekutého média obsahujúceho zdroj uhíka a dusíka naočkuje kultúra Penicillium vermiculatum Dang. CCM F-276 alebo Aspergillus niger CCM F- -330, potom sa přidá 10—60 mg lanatozidu C na 100 ml pódy a nechá sa kultivovat pri 26 až 30 °C po dobu 8 až 24 hodin. Filtrát vyfermentovanej půdy sa extrahuje chlorovanými uhlovodíkmi, s výhodou chloroformom, extrakt sa zahusti a získaný pevný produkt sa přečistí rekryštalizáciou zo zmesi rozpúšťadiel chloroform : benzén. Filtrát pódy možno extrahovat tiež estermi kyseliny octovej s výhodou octanom etylnatým.

Description

254050 . Vynález sa týká spůsobu přípravy acetyl- digoxinu selektívnou mikrobiálnou degluko- zidáciou lanatozidu C pomocou mikroorga-

nizmov Penicillium vermiculátum Dang. CCM F-276 alebo Aspergillus niger CCM F-330. V predkladanom riešení sa uvádza spo-sob přípravy acetyldigoxinu, ktorého pod-stata spočívá v tom, že sa do živnej půdyobsahujúcej zdroj uhlíka, organického a an-organického dusíka, naočkovanej kultúrouP. vermiculátum přidá lanatozid C (100 až500 mg . L-1) rozpuštěný v polárnom roz-púšťadle, s výhodou v dimetylformamide akultivuje sa 8—24 hodin pri teplote 26—30stupňov Celzia za stálého miešania a pre-vzdušňovania. Po transformácii sa filtrátpůdy, ktorá obsahuje acetyldigoxin extra-huje chloroformom, získaný extrakt sa povysušení, za zníženého tlaku zbaví rozpúš-ťadla a surový produkt sa rekryštalizuje zozmesi rozpúšťadiel benzen : etanol (3 : 1).Na extrakciu látky z filtrátu možno takistopoužit ďalšie chlorované uhlovodíky s poč-tom uhlíkov 1—5 s výhodou dichlórmetánalebo estery kyseliny octovej s výhodou oc-tan etylnatý.

Acetyldigoxin je biela krystalická látka,u ktorej holi namerané nasledujúce hodno-ty: t. t. 203—206°C (rozklad), pre sumárnyvzorec C43H66O15 823,0, vypočítané: C 62,75pere. H 8,08 %, nájdené C 62,59 %, H 7,96 %.IC (KBr) v cm"1: 3 410, 2 966, 2 943, 1741,1720, 1 631, 1457, 1 347. Krystalická látkaposkytla pri tenkovrstevnej chromatografiina Silufole v sústavách benzén : etanol :: voda (30 : 10 : 0,3) jednu škvrnu s hod-notami Rf 0,41 a v sústave octan etylnatý :: metanol : voda (79 : 19 : 11) škvrnu s Rf0,85. Důkaz aglykonu sa robil po hydrolýzezískanej látky s kyselinou sírovou. Pri ten-kovrstevnej chromatografii na SilufoleR vsústave benzén : octan etylnatý (1:1) po-skytla látka jednu škvrnu s Rf 0,28 a v sú-stave octan etylnatý taktiež jednu škvrnu sRf 0,11, ktoré bolí identické so skvrnami zís-kanými rovnakým postupom zo standarduacetyldigoxinu. V pokusoch použité kmene P. vermicula-tum aj A. niger transformujú přidaný lana-tozid C velmi selektívne, bez dalších sprie-vodných metabolitov takmer kvantitativnéza 8—24 hodin. V nasledujúcich príkladoch sú uvedenésposoby transformácie lanatozidu C na a-cetyldigoxin. Příklad 1

Do 25 varných baniek o objeme 500 mlpřipraví sa podá nasledujúceho zloženia:(g . L-1) glukóza 20, kvasničný extrakt 5,sójová múka 5, NaCl 5, KH2PO4 5, vodovod-ná voda 1 liter, pH 6,5-7,0. Póda sa sterili-zovala 15 minút pri 120 °C a po ochladení sanaočkovala 15 ml vegetatívneho inokula Pe-

nicillium vermiculátum. Kultivácia pri tep-lote 28 °C na rotačnej trepačke s 220 ot .. min-1. Po 24 hodinovej kultivácii sa dokaždej banky přidalo 30 mg lanatozidu Crozpuštěného v 0,3 ml dimetylformamidu.Celkom sa v pokuse použilo 720 mg lanato-zidu C. Transformácia sa ukončila v 20. ho-dině kultivácie, kedy bol přidaný substráttakmer kvantitativné transformovaný. My-célium použitého mikroorganizmu sa oddě-lilo filtráciou, získaný filtrát (1,900 ml, pH 6.1) , sa extrahoval trikrát za sebou chloro-formom (v pomere 2 : 1), za neustáléhomiešania po dobu 15—20 minút, pri labora-torně]' teplote. Získané extrakty sa spojili,bezvodým síranom sodným výsušili a zazníženého tlaku zahustili. Po zahuštění aochladení na +4°C sa vylúčil acetyldigo-xin, ktorý sa oddělil filtráciou a premyl di-etyléterom. Po přidaní dietyléteru, ktorý sazískal po premytí prvého podielu surovéhoproduktu k matečným lúhom, vypadla ďal-šia časť acetyldigoxinu. Získané surové pro-dukty sa spojili a rekryštalizovali zo zmesirozpúšťadiel chloroform : benzén (1 : 3).Celkom sa získalo 420 mg čistého acetyldi-goxinu, čo představuje výťažok 62 % vzhťa-dom na použitý substrát. Příklad 2

V pokuse sa použila půda rovnakého zlo-ženia ako v pokuse 1. Po 24 hodinovej kul-tivácii sa do půdy přidalo 60 mg lanatoziduC na 100 ml půdy. Transformácia sa ukon-čila v 24 hodině. Číry filtrát (1,800 ml, pH 6.2) sa trikrát za sebou extrahoval octanometylnatým (v pomere 2:1). Spojené extrak-ty po vysušení bezvodým síranom sodnýmsa zahustili a po ochladení na —(-4 °C sa vy-lúčil acetyldigoxin. K matečným lúhom sapřidal dvojnásobný objem dietyléteru, čímsa získal další podiel acetyldigoxinu. Suro-vé produkty sa rekryštalizovali zo zmesi oc-tan etylnatý : benzén (3 : 1). Celkom sa zís-kalo 510 mg čistého acetyldigoxinu, čo před-stavuje 63,7 % výťažok, vzhladom k použi-tému substrátu. Příklad 3

Postup biotransformácie lanatozidu C bolrovnaký ako je uvedený v příklade 1, alevytvořený acetyldigoxin sa extrahoval di-chlórmetánom. Výťažok vzhfadom k použi-tému substrátu bol 57,2 °/o. Příklad 4

Postup biotransformácie bol rovnaký ako je uvedený v příklade 1, ale ako mikroorga- nizmus sa použil kmen Aspergillus niger CCM F-330. Výťažok acetyldigoxinu vzhfa- dom k použitému substrátu bol 48,7 %.

Claims

254050 PREDMET

1. Sposob přípravy acetyldigoxinu vyzna-čujúci sa tým, že sa do tekutého média ob-sahujúceho zdroj uhlíka, organického a an-organického dusíka naočkuje kultura Peni-cillium vermiculatum Dang. CCM F-276 a-lebo Aspergillus niger CCM F-330, přidá sa10 až 60 mg lanatozidu C rozpuštěného vpolárnom rozpúšťadle na 100 ml pódy, zmessa kultivuje pri teplote 26 až 30 °C za stá-lého miešania a vzdušnenia po dobu 12 až24 h, přefiltruje sa, získaný filtrát sa ex-trahuje organickými rozpúšťadlami, extraktsa po vysušení zahustí a zvyšok sa krysta-lizuje.
2. Spůsob pódia bodu 1 vyznačujúci sa VYNALEZU tým, že ako polárné rozpúšťadlo na rozpus-tenie lanatozidu C sa použije dimetylform-amid.
3. Sposob podlá bodu 1 vyznačujúci satým, že filtrát po kultivácii sa extrahujechlorovanými uhlovodíkmi s počtom uhlí-kov 1 až 4, s výhodou chloroformom, aleboestermi kyseliny octovej s alkoholmi s poč-tom uhlíkov 1 až 3, s výhodou octanom e-tylnatým.
4. Sposob podlá bodu 1 vyznačujúci satým, že zvyšok po odpaření extrahovadla sakrystalizuje zo zmesi chloroform — benzén,alebo octan etylnatý — benzén.