RU2268721C2 - Способ выявления соединений, пригодных для лечения и/или профилактики ожирения - Google Patents
Способ выявления соединений, пригодных для лечения и/или профилактики ожирения Download PDFInfo
- Publication number
- RU2268721C2 RU2268721C2 RU2003104803/14A RU2003104803A RU2268721C2 RU 2268721 C2 RU2268721 C2 RU 2268721C2 RU 2003104803/14 A RU2003104803/14 A RU 2003104803/14A RU 2003104803 A RU2003104803 A RU 2003104803A RU 2268721 C2 RU2268721 C2 RU 2268721C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- compounds
- carbonic anhydrase
- obesity
- treatment
- prevention
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
- C12Q1/32—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving dehydrogenase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/527—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving lyase
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/06—Antihyperlipidemics
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Zoology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Hematology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Obesity (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Child & Adolescent Psychology (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области медицины, к применению соединений, способных ингибировать de novo липогенез, для лечения и/или профилактики ожирения. Изобретение включает варианты способа выявления таких соединений, где в качестве пригодных отбирают те соединения, которые способны ингибировать активность по меньшей мере одной карбоангидразы, встречающейся в организме млекопитающих, и дополнительно идентифицированы как не проявляющие противосудорожной активности. Изобретение также включает применение указанных соединений для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения и/или профилактики ожирения. Данное изобретение обеспечивает впервые установленную возможность отбора соединений для лечения и/или профилактики ожирения, за счет идентификации этих соединений как ингибиторов карбоангидраз, встречающихся в организме млекопитающих. 5 н. и 12 з.п. ф-лы.
Description
Настоящее изобретение относится к способу выявления соединений, пригодных для лечения и/или профилактики ожирения. Изобретение относится также к применению соединений, которые способны ингибировать у млекопитающих происходящий de novo липогенез и которые практически не оказывают воздействия на центральную нервную систему (ЦНС), для получения лекарственных средств, предназначенных для лечения и/или профилактики ожирения.
В настоящее время непрерывно возрастает острота проблемы, связанной с ухудшением здоровья населения по причине ожирения (или тучности), обусловленного в основном несбалансированным питанием и употреблением в пищу продуктов со слишком высоким содержанием жиров, что наиболее актуально прежде всего для промышленно развитых стран. По мере увеличения среди всего населения той или иной страны процента людей, страдающих избыточным весом, возрастает и число являющихся следствием ожирения осложнений, начиная от простой неудовлетворенности человеком своим внешним видом и заканчивая сердечно-сосудистыми заболеваниями или даже развитием некоторых форм диабета. С учетом этого к настоящему времени уже были разработаны определенные терапевтические методы, направленные на лечение или профилактику ожирения. В качестве примера при этом можно назвать применение ингибирующих липазы соединений, действие которых основано на снижении степени расщепления жиров в кишечнике и на уменьшении таким путем выхода энергии в процессе пищеварения. Таким образом, при подобной терапии пищевые жиры по меньшей мере частично вновь выводятся из организма в не разложившемся виде. Вместе с тем существует необходимость в разработке новых терапевтических подходов для лечения и/или профилактики ожирения в качестве дополнения к уже известным терапевтическим методам.
При создании изобретения неожиданно было установлено, что соединения, которые способны ингибировать у млекопитающих и прежде всего у человека происходящий de novo липогенез, пригодны для эффективного лечения и/или профилактики ожирения. При этом наилучшие результаты достигаются при применении указанных соединений в течение продолжительного периода времени, например в течение нескольких недель.
В соответствии с этим объектом настоящего изобретения является способ выявления соединений, которые пригодны для лечения и/или профилактики ожирения, заключающийся в том, что выбирают те соединения, которые способны ингибировать у млекопитающих и прежде всего у человека происходящий de novo липогенез. Помимо этого объектом изобретения является применение соединений, которые способны ингибировать у млекопитающих и прежде всего у человека происходящий de novo липогенез и которые практически не оказывают воздействия на ЦНС, например противосудорожного действия, для получения лекарственных средств, предназначенных для лечения и/или профилактики ожирения.
Под понятием "происходящий de novo липогенез" (ниже сокращенно называемый DN-Л) подразумевается синтез аутогенных жирных кислот из углеводов, происходящий в организме млекопитающих. Эта реакция синтеза происходит в цитозоле соматических клеток и основана на так называемом цикле лимонной кислоты или цикле Кребса-Мартиуса. В этом цикле в ходе аутогенной биохимической реакции из двух компонентов, одним их которых является пируват, источником которого являются углеводы, а другим является гидрокарбонат, через различные промежуточные соединения, к которым относятся, в частности, малеат, фумарат и α-кетоглутарат, в конечном итоге образуется цитрат. При этом цитрат, поскольку он синтезируется в избытке, может превращаться через промежуточный ацетил-кофермент А в свободные жирные кислоты (липидные продукты), из которых образуются жиры и которые в последующем могут накапливаться в жировых клетках (адипоцитах). Избыточное отложение образовавшихся из жирных кислот жиров в соматических клетках может в целом привести к ожирению. В цикле лимонной кислоты участвуют различные ферменты. Метаболизм, происходящий в цикле лимонной кислоты, в существенной степени зависит от количества доступного для реакции гидрокарбоната. При этом количество такого доступного для реакции гидрокарбоната в свою очередь зависит от скорости, с которой он может образовываться из диоксида углерода. Катализируют подобную равновесную реакцию, в результате которой образуется гидрокарбонат, так называемые карбоангидразы. Среди известных в настоящее время карбоангидраз и их изозимов в катализе реакций, в результате которых происходит образование гидрокарбоната, доступного для участия в цикле лимонной кислоты, в организме млекопитающих в основном участвуют изозимы карбоангидраз подтипа II (СА II) и подтипа V (СА V). Наиболее важную роль при этом играют карбоангидразы подтипа V, поскольку они присутствуют в митохондриях. В этих митохондриях также происходит цикл лимонной кислоты.
Все существующие возможные методы ингибирования DN-Л в клетках млекопитающих направлены на снижение интенсивности метаболизма, происходящего в цикле лимонной кислоты. Тем самым можно уменьшать концентрацию продуцируемого в избытке цитрата, доступного для синтеза жирных кислот. Согласно настоящему изобретению ингибировать DN-Л предпочтительно за счет ингибирования карбоангидраз, катализирующих реакции, в результате которых образуется участвующий в цикле лимонной кислоты гидрокарбонат. При этом согласно изобретению предпочтительно ингибировать карбоангидразы подтипов II и/или V, более предпочтительно CA V.
Соединения, которые способны неспецифически ингибировать карбоангидразы (т.е. неспецифические или традиционные СА-ингибиторы), известны и их уже достаточно давно применяют в различных терапевтических целях, в основном в качестве диуретиков, или в офтальмологии. Обзорную информацию об областях применения подобных традиционных СА-ингибиторов можно найти у С.Т.Supuran, Expert Opinion on Therapeutic Patents, 10 (5) (2000), cc.575-600. В отличие от этого под "специфическими СА-ингибиторами" подразумеваются соединения, которые ингибируют в основном только один подтип СА (например, СА V) или определенную группу СА-подтипов. До настоящего времени не имелось сведений о применении традиционных СА-ингибиторов для целенаправленного лечения и/или профилактики ожирения.
Считается, что основная причина ожирения в подавляющем большинстве известных случаев состоит в сравнительно высоком содержании чужеродных жиров в потребляемой человеком пище. В высокоразвитых странах, таких как США, на долю жиров во всей потребляемой тучными людьми пище приходится до 30%. В соответствии с этим согласно имеющимся на сегодняшний день данным приводящие к ожирению отложения жира обусловлены преимущественно чрезмерным потреблением пищевых жиров, на которые ингибирование DN-Л, сопровождающего метаболизм углеводов, не оказывает никакого воздействия.
До настоящего времени ингибирование DN-Л, хотя оно и позволяет также уменьшить накопление жирных кислот в адипоцитах, рассматривалось вследствие незначительного влияния DN-Л на процесс накопления жирных кислот в соматических клетках как неперспективный путь лечения и/или профилактики ожирения у человека. Обзорную информацию, отражающую мнение большинства специалистов по этому вопросу, можно найти, например, у М.К. Hellerstein, European Journal of Clinical Nutrition, 53 (1) (1999), cc.53-65. Подобное преобладающее среди специалистов мнение препятствовало до настоящего времени целенаправленному поиску или разработке лекарственных средств для лечения и/или профилактики ожирения, принцип действия которых основан на ингибировании DN-Л.
Однако при создании настоящего изобретения неожиданно было установлено, что соединения, способные ингибировать DN-Л у млекопитающих и прежде всего у человека, могут эффективно использоваться для лечения и/или профилактики ожирения и прежде всего при введении этих соединений соответствующим пациентам в течение продолжительного периода времени, например в течение шести недель. В соответствии с этим продолжительное ингибирование DN-Л позволяет существенно уменьшить вес тела у страдающих ожирением людей даже несмотря на то, что собственно процесс DN-Л оказывает лишь незначительное влияние на накопление жира в адипоцитах. Именно длительное ингибирование DN-Л, которое в принципе сопровождается незначительным однократным эффектом, оказывает аккумулирующее действие, которое в целом и приводит к значительному уменьшению веса тела.
Тот факт, что предлагаемый в изобретении способ действительно позволяет целенаправленно выявлять соединения, пригодные для лечения и/или профилактики ожирения, можно подтвердить на примере такого соединения, как топирамат. Топирамат представляет собой антиэпилептическое средство, известное из заявки ЕР 0138441 А2. Кроме того, топирамат, как известно, обладает широким фармакологическим спектром действия. Так, в частности, топирамат способен блокировать зависящие от напряжения натриевые каналы и тем самым стабилизировать мембранный потенциал клеток, он активирует рецепторы гамма-аминомасляной кислоты (ГАМК) и усиливает тем самым опосредуемое ГАМК ингибирование, он обладает действием ингибитора карбоангидраз и помимо этого обладает способностью ингибировать рецепторы каината/АМПК (амино-3-гидрокси-5-метилизоксазол-4-пропионовой кислоты), представляющие собой подтип глутаматных рецепторов, что сопровождается ингибированием индуцируемых АМПК потоков. В соответствии с этим топирамат проявляет ярко выраженное действие на ЦНС. Вместе с тем до настоящего времени остается неизвестным, обусловлены ли противосудорожные свойства топирамата вышеуказанными факторами, имеющими фармакологическое значение.
Из заявки WO 98/00130 известно далее, что топирамат обладает и определенными фармакологическими свойствами, благодаря которым он предположительно пригоден для лечения ожирения. Подобные свойства топирамата были выявлены случайно в качестве побочных действий, обнаруженных в ходе продолжительных исследований, проводившихся на страдающих эпилепсией пациентах. Однако до настоящего времени не удалось установить, какими именно фармакологическими свойствами топирамата обусловлена потеря веса, наблюдавшаяся у страдающих эпилепсией пациентов. Топирамат относится к группе обладающих противосудорожным действием соединений общей формулы I, которые в заявке WO 98/00130 указаны как пригодные для лечения ожирения.
С помощью предлагаемого в изобретении способа удалось установить, что топирамат является высокоактивным СА-ингибитором, прежде всего высокоактивным ингибитором встречающихся в организме млекопитающих карбоангидраз подтипов II и V, и что топирамат способен эффективно ингибировать DN-Л в клетках млекопитающих. В соответствии с этим с помощью предлагаемого в изобретении способа впервые оказалось возможным подтвердить тот факт, что фармакологическое побочное действие топирамата, которое до настоящего времени не поддавалось объяснению и которое проявляется в потере веса пациентами, страдающими эпилепсией, в основном обусловлено его способностью эффективно ингибировать DN-Л у млекопитающих. С учетом этого можно ожидать, что предлагаемый в изобретении способ в перспективе позволит выявлять соединения, пригодные для лечения и/или профилактики ожирения. Тем самым с помощью предлагаемого в изобретении способа впервые появляется возможность сравнительно быстро и просто выявлять фармакологически активные соединения, действие которых основано на ингибировании DN-Л. Настоящее изобретение, таким образом, позволяет по меньшей мере на первой, ориентировочной стадии отбора выявлять без проведения длительных и дорогостоящих опытов in vivo, таких, например, как опыты с откармливанием подопытных животных, соединения, действие которых основано на указанном выше принципе и которые пригодны для лечения и/или профилактики ожирения.
Подобные результаты являются неожиданными с учетом того факта, что в проводившихся ранее исследованиях фармакологических свойств топирамата его СА-ингибирующая эффективность всегда расценивалась как незначительная или даже только как слишком низкая и поэтому не представляющая интерес с терапевтической точки зрения (см., например, В.Е.Maryanoff др.. Journal of Medicinal Chemistry, 30 (1987), cc.880-887; В.Е.Maryanoff и др., Journal of Medicinal Chemistry, 41 (1998), cc.1315-1343; S.J.Dodgson и др., Epilepsia 41 (1), (2000), cc.35-39). В этих проводившихся ранее исследованиях для оценки СА-ингибирующей активности топирамата в каждом случае использовали опытные растворы, содержащие СА различных млекопитающих, а также различные компоненты организма, такие как кровь или ткань того или иного органа.
В соответствии с первым вариантом осуществления предлагаемого в изобретении способа пригодные для лечения и/или профилактики ожирения соединения выявляют, отбирая в качестве пригодных те соединения, которые способны ингибировать активность по меньшей мере одной встречающейся в организме млекопитающих карбоангидразы. Так, например, с этой целью по меньшей мере одно исследуемое соединение можно вводить в контакт по меньшей мере с одной карбоангидразой и затем известным методом идентифицировать те соединения, которые ингибируют активность этой по меньшей мере одной карбоангидразы. В этом варианте осуществления предлагаемого в изобретении способа предпочтительно применять карбоангидразы, встречающиеся в организме млекопитающих, например человека или грызунов, в частности крыс, мышей или морских свинок, прежде всего карбоангидразы подтипов II и/или V. Наиболее предпочтительно применять карбоангидразы, встречающиеся в организме человека. Пригодные для применения в этих целях карбоангидразы можно, например, выделять из организма указанных млекопитающих и при необходимости очищать либо их можно получать, что предпочтительно, с помощью известных химических или биотехнологических методов.
В первом варианте осуществления предлагаемого в изобретении способа изменение активности карбоангидраз под влиянием исследуемых соединений предпочтительно оценивать с помощью хорошо известного опыта по определению ферментативной активности in vitro, используя при этом карбоангидразы в виде выделенных и практически не содержащих примеси ферментов. Предпочтительно при этом использовать карбоангидразы, полученные химическими или биотехнологическими методами, поскольку такие методы позволяют получать их в наиболее чистой форме. Опыты по определению активности карбоангидраз in vitro хорошо известны в данной области. К опытам по определению ферментативной активности in vitro, которые в соответствии с настоящим изобретением позволяют определять изменение активности карбоангидраз, относятся, например, метод, основанный на измерении изменения значения рН под влиянием карбоангидраз (см. К.М.Wilbur, N.G.Andersen, Journal of Biological Chemistry, 176 (1948), cc.147-154; G.Sanyal, Т.Н.Maren, Journal of Biological Chemistry, 256 (1981), cc.608-612), метод остановленной струи (см. R.G.Khalifah, Journal of Biological Chemistry, 246 (1971), cc.2561-2573) или метод, основанный на использовании 4-нитрофенилацетатэстеразы (см. Y.Pocker, J.T.Stone, Journal of the American Chemical Society, 87 (1965), cc.5497-5498). В последнем из указанных методов определяют скорость гидролиза 4-нитрофенилацетата под влиянием исследуемой карбоангидразы, при этом используется свойство карбоангидраз оказывать то же воздействие, что и эстеразы.
В этом отношении для определения СА-ингибирующих свойств соединений согласно изобретению предпочтительно использовать метод тестирования, описанный у С.Т.Supuran и др. в European Journal of Medicinal Chemistry, 33 (1998)), сс.577-594 (см. прежде всего с.592) или у A.Scozzafava и др. в Journal of Medicinal Chemistry, 42 (1999), cc.3690-3700 (см. прежде всего с.3696). Эти описанные у Supuran и др. и Scozzafava и др. методы тестирования включены в настоящее описание в качестве ссылки. Соединения, значения ингибирующей концентрации IC50 которых при их тестировании одним из вышеуказанных стандартных методов по определению активности in vitro, описанных у Supuran и др. или Scozzafava и др., составляют по меньшей мере 10 мкмолей/л или менее (что соответствует более высокой эффективности), могут быть отобраны в соответствии с настоящим изобретением как пригодные соединения, обладающие СА-ингибирующим действием (т.е. как СА-ингибиторы). При необходимости определения активности некоторых подтипов человеческих СА может оказаться целесообразным использовать иные методы, отличные от основанного на применении 4-нитрофенилацетатэстеразы метода. Так, в частности, может оказаться более целесообразным использовать методы, позволяющие сравнительно быстро проводить необходимые реакции и контролировать их протекание.
По результатам теста по определению ферментативной активности, основанного на описанном у Scozzafava и др. (см. выше) методе с использованием 4-нитрофенилацетатэстеразы (первоначально описан у Y.Pocker и J.T.Stone, Biochemistry, 6 (1967), cc.668-678), согласно настоящему изобретению было установлено, что топирамат проявляет ярко выраженное ингибирующее действие на полученную одним из биотехнологических методов человеческую карбоангидразу подтипа II (IC50=5 нмолей/л) и что это ингибирующее действие является значительно более сильным по сравнению с ингибирующим действием, которое проявляли ацетазоламид или метазоламид, которые являются традиционными СА-ингибиторами и которые использовали в опытах в качестве контрольных веществ. Человеческую карбоангидразу подтипа II получали по методу, описанному у Scozzafava и др.
По результатам этого же теста было установлено, что топирамат обладает также ярко выраженным ингибирующим действием на полученную биотехнологическим методом мышиную карбоангидразу подтипа Va (mCA Va) (IC50=74 нмолей/л). Однако в отличие от описанного у Scozzafava и др. протокола проведения опыта в данном случае фермент mCA Va применяли в концентрации 120 нМ. Фермент mCA Va получали известным путем по методу, описанному у H.R.Heck и др. в Journal of Biological Chemistry, 269 (1994), cc.24742-24746. С этой целью использовали штамм бактерий Escherichia coli BL 21 (DE3), который трансфектировали плазмидным вектором, содержащим кодирующую mCA Va последовательность под контролем Т7-промотора, индуцируемого изопропил-β-тиогалактопиранозидом (ИПТГ). Культуру бактерий вносили при 37°С в жидкую среду Луриа-Бертани, дополненную ампициллином (100 мкг/мл), и рост этой культуры отслеживали спектрофотометрически при длине волны 600 нм. По достижении культурой бактерий экспоненциальной фазы роста добавляли ИПТГ в конечной концентрации 1 ммоль/л. После инкубации в течение 3 ч (при 37°С и при перемешивании) культуру бактерий центрифугировали в течение 15 мин при 7000 g и супернатант отбрасывали. Полученный после центрифугирования остаток (дебрис) растворяли в 0,1-кратном объеме дважды дистиллированной воды и добавляли лизоцим (100 мкг/мл). Клетки лизировали обработкой ультразвуком. С этой целью аликвоты по 10 мл полученной суспензии бактерий помещали в отрытый сверху стеклянный сосуд и каждый такой образец обрабатывали ультразвуком 4 раза по 3 мин. После каждого ультразвукового импульса определяли поглощение излучения образцами при длине волны 600 нм, для чего по 100 мкл каждого образца разбавляли 900 мкл дважды дистиллированной воды. Процесс завершали в тот момент, когда поглощение излучения образцом при длине волны 600 нм снижалось приблизительно до 1/10 от его исходного уровня. После лизиса клеток добавляли CaCl2-буфер для связывания (фирмы Stratagene) и полученный клеточный лизат очищали на колонке со смолой, обладающей аффинностью к кальмодулину. Подобный метод очистки основан на высокой аффинности связанных со смолой доменов кальмодулина к связывающейся с кальмодулином пептидной метке, которая присутствует на N-конце экспрессируемого протеина mCA Va. Очистку проводили известным методом (см. справочник "Affinity LIC Cloning and Protein Purification Kit Manual" фирмы Stratagene).
В соответствии со вторым вариантом осуществления предлагаемого в изобретении способа пригодные для лечения и/или профилактики ожирения соединения выявляют путем отбора тех соединений, которые способны уменьшать количество метаболитов, образующихся в цикле лимонной кислоты, происходящем в выделенных живых клетках млекопитающих, или липидных продуктов, образующихся в цикле лимонной кислоты. Приемлемыми метаболитами, которые образуются в цикле лимонной кислоты и количество которых уменьшается под влиянием исследуемых соединений на поддающуюся измерению величину, являются растворимые в кислотах метаболиты, такие как цитрат, малеат, фумарат и/или α-кетоглутарат. Предпочтителен при этом цитрат. К числу других приемлемых метаболитов относятся липидные продукты, образующиеся в цикле лимонной кислоты, такие как свободные жирные кислоты. В этом втором варианте осуществления предлагаемого в изобретении способа в конечном итоге также определяют способность исследуемых соединений ингибировать активность по меньшей мере одной встречающейся в организме млекопитающих карбоангидразы, однако применяемая в этом случае модель тестирования отличается от той, которая используется в описанном выше первом варианте осуществления способа. Принцип, лежащий в основе метода тестирования, используемого во втором варианте осуществления способа по изобретению, заключается в том, чтобы известным путем определять поглощение радиоактивного излучения, испускаемого меченными изотопом 14С субстратами, используемыми в цикле лимонной кислоты, метаболическими промежуточными или конечными продуктами, образующимися в цикле лимонной кислоты, происходящем в выделенных живых клетках млекопитающих, и сравнивать полученные результаты с результатами, которые получены в остальном в тех же условиях, но под влиянием обладающих СА-ингибирующим действием соединений. В этом варианте осуществления предлагаемого в изобретении способа предпочтительно использовать выделенные живые клетки таких грызунов, как крысы, мыши или морские свинки, или человека. Предпочтительны при этом клетки человека. В качестве клеток грызунов используются адипоциты и гепатоциты. Предпочтительны при этом адипоциты грызунов. В качестве клеток человека также можно использовать адипоциты и гепатоциты. Предпочтительны при этом гепатоциты человека. Используемые в этом варианте осуществления способа клетки млекопитающих можно получать обычными методами культивирования и/или клонирования. При этом можно применять естественные или модифицированные биотехнологическими методами клетки млекопитающих. Если при тестировании соединений описанным выше методом требуется определять поглощение радиоактивного излучения растворимыми в кислотах промежуточными продуктами, образующимися в цитратном цикле, то в качестве меченного изотопом 14С субстрата предпочтительно использовать 14С-гидрокарбонат (т.е. NaH[14С]O3). Если же при тестировании соединений описанным выше методом требуется определять поглощение радиоактивного излучения конечными продуктами, образующимися в цитратном цикле, то в качестве меченного изотопом 14С субстрата предпочтительно использовать [U-14С]глюкозу.
В этом втором варианте осуществления предлагаемого в изобретении способа способность соединений ингибировать DN-Л в организме млекопитающих предпочтительно определять по методу, описанному у S.A.Hazen и др. в FASEB Journal, 10 (4) (1996), cc.481-490. Этот описанный у Hazen и др. метод тестирования включен в настоящее описание в качестве ссылки. Соединения, которые при их тестировании указанным методом, описанным у Hazen и др., способны в значительной степени ингибировать поглощение радиоактивного излучения, испускаемого меченными изотопом 14С веществами, которые могут служить предшественниками в цикле лимонной кислоты, например поглощение испускаемого 14С-гидрокарбонатом радиоактивного излучения цитратом, малеатом, фумаратом и/или α-кетоглутаратом, т.е. соединения, ID50-значение которых в соответствии с этим составляет по меньшей мере 10 мкмолей/л или менее (что соответствует более высокой эффективности), могут быть отобраны в соответствии с настоящим изобретением как пригодные соединения, удовлетворяющие определенным критериям.
По результатам теста, который соответствует описанному у Hazen и др. методу тестирования и который проводили в соответствии с настоящим изобретением, было установлено, что топирамат проявляет ярко выраженное ингибирующее действие на образование растворимых в кислотах метаболитов в цикле лимонной кислоты, происходящем в полученных биотехнологическим методом крысиных адипоцитах линии 3T3-F442A. Подобное ингибирующее действие топирамата (IC50=348 нмолей/л) существенно превышало действие такого традиционного СА-ингибитора, как этоксзоламид, который использовали в качестве контрольного вещества.
Согласно наиболее предпочтительному варианту осуществления предлагаемого в изобретении способа выявления соединений, пригодных для лечения и/или профилактики ожирения, отбирают те соединения, которые в соответствии с описанным выше первым вариантом осуществления способа, прежде всего по результатам вышеописанного теста по определению ферментативной активности in vitro, были отобраны как пригодные по их способности ингибировать по меньшей мере одну встречающуюся в организме млекопитающих карбоангидразу и которые дополнительно в соответствии с описанным выше вторым вариантом осуществления способа также были отобраны как пригодные по их способности уменьшать количество метаболитов, образующихся в цикле лимонной кислоты, происходящем в выделенных живых клетках млекопитающих. Первый вариант осуществления способа позволяет достаточно быстро и эффективно оценивать способность соединений ингибировать встречающиеся в организме млекопитающих карбоангидразы. Второй вариант осуществления способа позволяет получать, в частности, первичные данные о наличии у исследуемых соединений также способности проникать в митохондрии живых клеток млекопитающих, в которых локализована СА V. Для отбора пригодных соединений описанные выше первый и второй варианты осуществления предлагаемого в изобретении способа можно проводить параллельно или последовательно в любом порядке.
Согласно изобретению соединения, которые способны ингибировать DN-Л у млекопитающих, пригодны для получения лекарственных средств, предназначенных для лечения и/или профилактики ожирения. При этом отбирают те соединения, которые способны ингибировать по меньшей мере одну карбоангидразу, встречающуюся в организме млекопитающих. Очевидно, что отобранные соединения должны быть физиологически совместимыми и удовлетворять общим требованиям, предъявляемым к лекарственным действующим веществам, например требованиям касательно безвредности и переносимости. Предпочтительно применять соединения, которые способны ингибировать встречающиеся в организме млекопитающих карбоангидразы подтипов II и/или V. Наиболее предпочтительны при этом соединения, которые способны специфически ингибировать СА II и/или СА V, прежде всего СА V.
Известные в настоящее время соединения, например топирамат, которые обладают СА-ингибирующим действием и при длительном применении которых у пациентов наблюдается уменьшение веса их тела, оказывают также ярко выраженное действие на ЦНС, в частности противосудорожное действие. Однако наличие побочных действий на ЦНС у соединений, предназначенных для применения в течение продолжительного периода времени для лечения и/или профилактики ожирения, часто нежелательно. Поэтому соединения, которые в соответствии с предлагаемым в изобретении способом были отобраны как пригодные для лечения и/или профилактики ожирения, можно дополнительно проверять на наличие у них каких-либо действий на ЦНС. Так, например, подобные соединения на возможное наличие у них противосудорожных свойств. Для исследования соединений на наличие у них противосудорожных свойств можно использовать, например, так называемый "тест с супермаксимальным электрошоком" (СЭШ-тест, иногда называемый также "тестом с максимальным электрошоком" или сокращенно МЭШ-тест), описанный у G.Chen и др. в Proceedings of the Society for Experimental Biology and Medicine, 87 (1954), cc.334-339, и у J.E.P.Toman и др. в Journal of Neurophysiology, 9 (1946), с.231. Этот описанный у Chen и др. и у Toman и др. метод тестирования включен в настоящее описание в качестве ссылки. Так, в частности, соединения, предназначенные для введения пациентам в течение длительного периода времени для лечения и/или профилактики ожирения, практически не должны проявлять никакой активности при их исследовании с помощью указанного выше СЭШ-теста, описанного у Chen и др. и Toman и др., а при их применении и в повышенных дозах, составляющих по меньшей мере 100 мг/кг при пероральном введении, предпочтительно не должны проявлять действия, которые согласно принятым для данного теста критериям рассматриваются как значимые (т.е. согласно G.Chen и др. "защитная доза" PD50 должна составлять ≥100 мг/кг при пероральном введении, при этом указанные в работе G.Chen и др. значения PD50 по существу соответствуют широко используемому для обозначения дозы понятию "минимальная эффективная доза", МЭД). Соединения, которые были отобраны как пригодные в соответствии с предлагаемым в изобретении способом и которые дополнительно к этому в МЭШ-тесте, описанном у Chen и др., не проявили практически никакой активности, наиболее пригодны для получения лекарственных средств, предназначенных для лечения и/или профилактики ожирения. Указанные выше СЭШ - (соответственно МЭШ-) тесты являются стандартными фармакологическими тестами, которые могут проводиться по общепринятой методике предоставляющими подобные услуги организациями и фирмами (например, фирмой "Panlabs").
Соединения, которые в соответствии с предлагаемым в изобретении способом были отобраны как пригодные для лечения и/или профилактики ожирения, можно по общепринятой технологии перерабатывать в качестве действующих веществ совместно с обычными фармацевтическими вспомогательными веществами в галеновы композиции, например в таблетки, капсулы, суппозитории или растворы. Такие галеновы композиции можно получать известными методами с использованием обычных твердых или жидких носителей, таких, например, как лактоза, крахмал или тальк, либо жидких парафинов и/или с использованием обычных фармацевтических вспомогательных веществ, например разрыхлителей для таблеток, гидротропных солюбилизаторов или консервантов. Фармацевтические композиции, пригодные для применения согласно изобретению, известны, например, из заявки ЕР 0138441 А2, а также из публикации WO 98/00130.
Claims (17)
1. Способ выявления соединений, пригодных для лечения и/или профилактики ожирения, отличающийся тем, что в качестве пригодных отбирают те соединения, которые способны ингибировать активность по меньшей мере одной карбоангидразы, встречающейся в организме млекопитающих.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что по меньшей мере одно соединение вводят в контакт по меньшей мере с одной карбоангидразой и затем идентифицируют те соединения, которые способны ингибировать активность этой по меньшей мере одной карбоангидразы.
3. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют карбоангидразы, встречающиеся в организме грызунов и человека.
4. Способ по п.3, отличающийся тем, что используют карбоангидразы, встречающиеся в организме человека.
5. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют карбоангидразы подтипов II и/или V, встречающиеся в организме млекопитающих, прежде всего человека.
6. Способ по п.5, отличающийся тем, что используют карбоангидразы подтипа V, встречающиеся в организме млекопитающих, прежде всего человека.
7. Способ по п.2, отличающийся тем, что используют карбоангидразы, которые представлены в виде выделенных ферментов, полученных химическим или биотехнологическим методом, при этом изменение активности карбоангидраз под влиянием исследуемых соединений определяют в тесте по определению ферментативной активности in vitro.
8. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве пригодных отбирают те соединения, которые способны уменьшать количество метаболитов, образующихся в цикле лимонной кислоты, происходящем в выделенных живых клетках млекопитающих.
9. Способ по п.8, отличающийся тем, что определяют уменьшение количества образующегося в происходящем в клетках цикле лимонной кислоты цитрата, малеата, фумарата, α-кетоглутарата и/или уменьшение образования липидных конечных продуктов цикла лимонной кислоты под влиянием исследуемых соединений.
10. Способ по п.8, отличающийся тем, что используют выделенные живые клетки грызунов или человека.
11. Способ по п.10, отличающийся тем, что используют адипоциты или гепатоциты.
12. Способ выявления соединений, которые пригодны для лечения и/или профилактики ожирения, отличающийся тем, что отбирают те соединения, которые идентифицированы как пригодные способом по п.7 и дополнительно способом по п.8.
13. Способ выявления соединений, которые пригодны для лечения и/или профилактики ожирения, при этом отбирают те соединения, которые идентифицированы как пригодные соединения способом по п.1 и которые дополнительно по результатам стандартного теста по определению противосудорожных свойств идентифицированы как практически не проявляющие активности.
14. Применение соединений, способных ингибировать по меньшей мере одну встречающуюся в организме млекопитающих карбоангидразу, для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения и/или профилактики ожирения.
15. Применение по п.14 соединений, способных ингибировать встречающиеся в организме млекопитающих карбоангидразы подтипов II и/или V.
16. Применение по п.14 соединений, которые практически не обладают противосудорожными свойствами.
17. Применение соединений, которые впервые идентифицированы способом по п.1 как пригодные для лечения и/или профилактики ожирения, для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения и/или профилактики ожирения.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE10035227.8 | 2000-07-20 | ||
| DE10035227A DE10035227A1 (de) | 2000-07-20 | 2000-07-20 | Verfahren zum Auffinden von Verbindungen, welche zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Fettleibigkeit geeignet sind |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2003104803A RU2003104803A (ru) | 2004-07-10 |
| RU2268721C2 true RU2268721C2 (ru) | 2006-01-27 |
Family
ID=7649538
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2003104803/14A RU2268721C2 (ru) | 2000-07-20 | 2001-07-12 | Способ выявления соединений, пригодных для лечения и/или профилактики ожирения |
Country Status (27)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP1307262B1 (ru) |
| JP (1) | JP2004504053A (ru) |
| KR (1) | KR100818827B1 (ru) |
| CN (1) | CN1443085B (ru) |
| AR (1) | AR028730A1 (ru) |
| AT (1) | ATE278441T1 (ru) |
| AU (2) | AU2001277534B9 (ru) |
| BR (1) | BR0112547A (ru) |
| CA (1) | CA2416647A1 (ru) |
| CZ (1) | CZ2003156A3 (ru) |
| DE (2) | DE10035227A1 (ru) |
| DZ (1) | DZ3393A1 (ru) |
| ES (1) | ES2230346T3 (ru) |
| HK (1) | HK1057499A1 (ru) |
| HU (1) | HUP0302309A3 (ru) |
| IL (2) | IL153971A0 (ru) |
| MX (1) | MXPA02012907A (ru) |
| NO (1) | NO20030233L (ru) |
| NZ (1) | NZ523960A (ru) |
| PL (1) | PL201165B1 (ru) |
| PT (1) | PT1307262E (ru) |
| RU (1) | RU2268721C2 (ru) |
| SK (1) | SK287607B6 (ru) |
| TR (1) | TR200402670T4 (ru) |
| TW (1) | TWI274157B (ru) |
| UA (1) | UA74588C2 (ru) |
| WO (1) | WO2002007821A1 (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2653478C2 (ru) * | 2012-05-24 | 2018-05-08 | Найя Матаболик Инк. | Способ улучшения функции печени |
| US10172837B2 (en) | 2007-01-25 | 2019-01-08 | NAIA Metabolic, Inc. | Insulin sensitisers and methods of treatment |
Families Citing this family (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005110413A2 (en) | 2004-05-19 | 2005-11-24 | Solvay Pharmaceuticals Gmbh | Medicaments containing n-sulfamoyl-n'-arylpiperazines for the prophylaxis or treatment of obesity and related conditions |
| MY147767A (en) | 2004-06-16 | 2013-01-31 | Janssen Pharmaceutica Nv | Novel sulfamate and sulfamide derivatives useful for the treatment of epilepsy and related disorders |
| AU2006249577A1 (en) | 2005-05-20 | 2006-11-30 | Janssen Pharmaceutica N.V. | Process for preparation of sulfamide derivatives |
| AR057570A1 (es) | 2005-11-14 | 2007-12-05 | Solvay Pharm Gmbh | Derivados de n-sulfamoil-n'-benzopiranopiperidinas espirocondensadas, composiciones farmaceuticas que los comprenden, un procedimiento para su preparacion y su uso en la preparacion de medicamentos para el tratamiento de enfermedades mediadas por las isoenzimas anhidrasas carbonicas subtipos ii y/o |
| AR058389A1 (es) * | 2005-12-19 | 2008-01-30 | Janssen Pharmaceutica Nv | Uso de derivados heterociclicos benzo-fusionados de sulfamida para el tratamiento de la obesidad |
| US8716231B2 (en) | 2005-12-19 | 2014-05-06 | Janssen Pharmaceutica Nv | Use of benzo-fused heterocycle sulfamide derivatives for the treatment of pain |
| US8691867B2 (en) | 2005-12-19 | 2014-04-08 | Janssen Pharmaceutica Nv | Use of benzo-fused heterocycle sulfamide derivatives for the treatment of substance abuse and addiction |
| US8497298B2 (en) | 2005-12-19 | 2013-07-30 | Janssen Pharmaceutica Nv | Use of benzo-fused heterocycle sulfamide derivatives for lowering lipids and lowering blood glucose levels |
| US8937096B2 (en) | 2005-12-19 | 2015-01-20 | Janssen Pharmaceutica Nv | Use of benzo-fused heterocyle sulfamide derivatives for the treatment of mania and bipolar disorder |
| JP2009537635A (ja) | 2006-05-19 | 2009-10-29 | ジヤンセン・フアーマシユーチカ・ナームローゼ・フエンノートシヤツプ | 癲癇の処置のための共同−療法 |
| CA2729056A1 (en) | 2008-06-23 | 2010-01-21 | Janssen Pharmaceutica Nv | Crystalline form of (2s)-(-)-n-(6-chloro-2,3-dihydro-benzo[1,4]dioxin-2-ylmethyl)-sulfamide |
| US8815939B2 (en) | 2008-07-22 | 2014-08-26 | Janssen Pharmaceutica Nv | Substituted sulfamide derivatives |
| CN106770611B (zh) * | 2016-12-22 | 2019-01-29 | 广西师范大学 | 一种用于细胞原位检测小分子化合物进入线粒体的方法 |
| RU2771430C1 (ru) * | 2021-09-21 | 2022-05-04 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научный центр неврологии" (ФГБНУ НЦН) | Способ количественного определения антиконвульсантов в плазме крови больных эпилепсией |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4552897A (en) * | 1983-02-01 | 1985-11-12 | American Cyanamid Company | Salts of 1-(aminodihalophenyl)-2-aminoethanols and antilipogenic compositions prepared therefrom |
| US6288095B1 (en) * | 1987-09-04 | 2001-09-11 | Beecham Group P.L.C. | Compounds |
| US5126324A (en) * | 1990-06-07 | 1992-06-30 | Genentech, Inc. | Method of enhancing growth in patients using combination therapy |
| DE69305091T2 (de) * | 1992-10-29 | 1997-03-13 | Genentech Inc | Methode zur behandlung oder verhütung von fettleibigkeit |
| AU693478B2 (en) * | 1994-11-10 | 1998-07-02 | Metabolic Pharmaceuticals Limited | Treatment of obesity |
| AP1285A (en) * | 1996-06-28 | 2004-06-24 | Ortho Mcneil Pharm Inc | Anticonvulsant sulfamate derivatives useful in treating obesity. |
| US20030100594A1 (en) * | 2001-08-10 | 2003-05-29 | Pharmacia Corporation | Carbonic anhydrase inhibitor |
-
2000
- 2000-07-20 DE DE10035227A patent/DE10035227A1/de not_active Withdrawn
-
2001
- 2001-06-15 AR ARP010102883A patent/AR028730A1/es unknown
- 2001-07-12 WO PCT/EP2001/008051 patent/WO2002007821A1/de active IP Right Grant
- 2001-07-12 PL PL363518A patent/PL201165B1/pl not_active IP Right Cessation
- 2001-07-12 IL IL15397101A patent/IL153971A0/xx unknown
- 2001-07-12 TR TR2004/02670T patent/TR200402670T4/xx unknown
- 2001-07-12 AU AU2001277534A patent/AU2001277534B9/en not_active Ceased
- 2001-07-12 JP JP2002513551A patent/JP2004504053A/ja active Pending
- 2001-07-12 AU AU7753401A patent/AU7753401A/xx active Pending
- 2001-07-12 SK SK61-2003A patent/SK287607B6/sk not_active IP Right Cessation
- 2001-07-12 CA CA002416647A patent/CA2416647A1/en not_active Abandoned
- 2001-07-12 DZ DZ013393A patent/DZ3393A1/xx active
- 2001-07-12 KR KR1020037000620A patent/KR100818827B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2001-07-12 ES ES01955345T patent/ES2230346T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-07-12 EP EP01955345A patent/EP1307262B1/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-07-12 CN CN018129730A patent/CN1443085B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2001-07-12 CZ CZ2003156A patent/CZ2003156A3/cs unknown
- 2001-07-12 AT AT01955345T patent/ATE278441T1/de active
- 2001-07-12 BR BR0112547-8A patent/BR0112547A/pt not_active Application Discontinuation
- 2001-07-12 HU HU0302309A patent/HUP0302309A3/hu unknown
- 2001-07-12 PT PT01955345T patent/PT1307262E/pt unknown
- 2001-07-12 DE DE50104023T patent/DE50104023D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-07-12 MX MXPA02012907A patent/MXPA02012907A/es active IP Right Grant
- 2001-07-12 RU RU2003104803/14A patent/RU2268721C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2001-07-12 NZ NZ52396001A patent/NZ523960A/xx not_active IP Right Cessation
- 2001-07-16 TW TW090117382A patent/TWI274157B/zh not_active IP Right Cessation
- 2001-12-07 UA UA2003021453A patent/UA74588C2/uk unknown
-
2003
- 2003-01-15 IL IL153971A patent/IL153971A/en not_active IP Right Cessation
- 2003-01-17 NO NO20030233A patent/NO20030233L/no unknown
-
2004
- 2004-01-15 HK HK04100307.4A patent/HK1057499A1/xx not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| пп.1-20 формулы, с.1 и 2 описания. МАШКОВСКИЙ М.Д. Лекарственные средства. - М.: Медицина, 1986, ч.1, с.485-486. MARYANOFF B.E. et al. Structure-activity studies on anticonvulsant sugar sulfamates related to topiramate. Enhanced potency with cyclic sulfate derivatives. J. Med. Chem. 1998, Apr.9; 41 (8): 1315-43, реферат Medline. * |
| пп.6, 11, 15 формулы, с.1 описания. * |
| примеры 2 и 5. * |
| формула, реферат, с.1-5 описания. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US10172837B2 (en) | 2007-01-25 | 2019-01-08 | NAIA Metabolic, Inc. | Insulin sensitisers and methods of treatment |
| RU2653478C2 (ru) * | 2012-05-24 | 2018-05-08 | Найя Матаболик Инк. | Способ улучшения функции печени |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2268721C2 (ru) | Способ выявления соединений, пригодных для лечения и/или профилактики ожирения | |
| US6946243B2 (en) | Method of identifying compounds suitable for treatment and/or prophylaxis of obesity | |
| US7396659B2 (en) | Inhibitors of nitric oxide synthase to treat type 1 diabetes | |
| Giles et al. | Changes in protein kinase C in early cardiomyopathy and in gracilis muscle in the BB/Wor diabetic rat | |
| Bueno et al. | L-carnitine and propionyl-L-carnitine improve endothelial dysfunction in spontaneously hypertensive rats: different participation of NO and COX-products | |
| JP2008510723A (ja) | 血管新生の治療法 | |
| JP2007519688A (ja) | メタボリックシンドロームの治療または予防に特に有効な組成物 | |
| US20050169903A1 (en) | Methods for identifying agents that inhibit serum aging factors and uses and compositions thereof | |
| Hift et al. | Variegate porphyria in South Africa, 1688-1996-new developments in an old disease | |
| Peters-Golden | Molecular mechanisms of leukotriene synthesis: the changing paradigm | |
| WO2000057871A2 (en) | Methods for identifying agents that inhibit serum aging factors and uses and compositions thereof | |
| US20080213270A1 (en) | Neurotensin as a marker and therapeutic target for sepsis | |
| EP1787115A2 (en) | Methods of diagnosis of attention deficit hyperactivity disorder (adhd) | |
| Nunes et al. | Semicarbazide-sensitive amine oxidase activity and total nitrite and nitrate concentrations in serum: novel biochemical markers for type 2 diabetes? | |
| US20120088839A1 (en) | Composition for regulating cellular senescence comprising [n-2-(cyclohexyloxyl)-4-nitrophenyl]-methanesulfonamide | |
| ZA200300444B (en) | Method for locating compounds which are suitable for the treatment and/or prophylaxis of obesity. | |
| WO2021260966A1 (ja) | アデノシン産生酵素を標的とする組成物 | |
| CN118166061A (zh) | 一种cd38蛋白抑制剂及其筛选方法和在抗衰老中的应用 | |
| Edgett | Regulation of SIRT1, sirt3, PGC-1α, and LRP130 in response to energetic stress in human skeletal muscle | |
| Rodger et al. | Leukotrienes: New Concepts and Targets for Therapy | |
| Gong et al. | Articles in PresS. J Appl Physiol (September 15, 2005). doi: 10.1152/japplphysiol. 00873.2005 | |
| Fife | Soluble Epoxide Hydrolase as a Target for Modulation of the Inflammatory Response | |
| Blythe et al. | The role of retinoid metabolism by alcohol and aldehyde dehydrogenases in differentiation of cultured neuronal cells |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20120713 |