SK612003A3 - Method for locating compounds which are suitable for the treatment and/or prophylaxis of obesity - Google Patents

Method for locating compounds which are suitable for the treatment and/or prophylaxis of obesity Download PDF

Info

Publication number
SK612003A3
SK612003A3 SK61-2003A SK612003A SK612003A3 SK 612003 A3 SK612003 A3 SK 612003A3 SK 612003 A SK612003 A SK 612003A SK 612003 A3 SK612003 A3 SK 612003A3
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
compounds
obesity
treatment
prevention
ability
Prior art date
Application number
SK61-2003A
Other languages
Slovak (sk)
Other versions
SK287607B6 (en
Inventor
Johannes Hebebrand
Jochen Antel
Ulf Preuschoff
Samuel David
Holger Sann
Michael Weske
Original Assignee
Solvay Pharm Gmbh
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Solvay Pharm Gmbh filed Critical Solvay Pharm Gmbh
Publication of SK612003A3 publication Critical patent/SK612003A3/en
Publication of SK287607B6 publication Critical patent/SK287607B6/en

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/26Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
    • C12Q1/32Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving dehydrogenase
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/527Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving lyase
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00Drugs for disorders of the metabolism
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04Anorexiants; Antiobesity agents
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06Antihyperlipidemics

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Child & Adolescent Psychology (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

The invention relates to a method for locating compounds which are suitable for the treatment and/or prophylaxis of obesity, whereby the ability of the examined compounds to inhibit de novo lipogenase in mammals and/or humans is determined. Also disclosed is the use of compounds which are capable of inhibiting de novo lipogenase in mammals in the production of medicaments for the treatment and/or phophylaxis of obesity.

Description

Spôsob stanovenia vhodných zlúčenín na liečbu alebo prevenciu obezityA method for determining suitable compounds for the treatment or prevention of obesity

Oblasť techniky ;Technical field;

Vynález sa týka spôsobu stanovenia vhodných zlúčenín na liečbu alebo prevenciu obezity. Vynález sa týka najmä použitia zlúčenín, ktoré majú schopnosť potláčať de-novo-lipogenéziu u cicavcov a ktoré v podstate nepôsobia na centrálny nervový systém (zentrales Nervensystem - ZNS), na prípravu liečiv na liečenie alebo prevenciu obezity.The invention relates to a method for determining suitable compounds for the treatment or prevention of obesity. In particular, the invention relates to the use of compounds which have the ability to inhibit de-lipo-lipogenesis in mammals and which do not substantially affect the central nervous system (Zentrales Nervensystem - ZNS) for the preparation of medicaments for the treatment or prevention of obesity.

Doterajší stav technikyBACKGROUND OF THE INVENTION

Obezita sa v súčasnosti stáva najmä vo vyspelých štátoch problémom pre zdravotný stav obyvateľstva, ktorý je dôsledkom nevyváženej a na tuky bohatej výživy. S prírastkom podielu obyvateľstva s nadmernou telesnou hmotnosťou rastú aj následky obezity, ktoré siahajú od osobnej nespokojnosti po ochorenie srdca a krvného obehu a/alebo do určitých foriem cukrovky. V súčasnosti už existujú niektoré liečebné postupy zamerané na liečenie alebo prevenciu obezity. Príkladom takého postupu je použitie látok potláčajúcich lipázy, ktoré redukujú štiepenie tukov v zažívacom trakte a týmto spôsobom aj energetický účinok prijatej potravy. Pri tejto terapii tuky aspoň čiastočne nepodliehajú rozkladu a sú vylučované. Je potrebné, aby boli vyvinuté ďalšie prostriedky na liečbu a prevenciu obezity, ktoré by doplnili doterajšie spôsoby liečby.Obesity is currently becoming a problem for the health of the population, especially in developed countries, as a result of an unbalanced and fat-rich diet. As the proportion of the population with excessive body weight increases, so do the consequences of obesity, ranging from personal dissatisfaction to heart disease and circulation and / or certain forms of diabetes. There are already some treatments for treating or preventing obesity. An example of such a procedure is the use of lipase suppressants that reduce fat breakdown in the digestive tract and in this way also the energy effect of the ingested food. In this therapy, the fats are at least partially non-degradable and are excreted. Additional means for treating and preventing obesity need to be developed to complement existing therapies.

Podstata vynálezuSUMMARY OF THE INVENTION

Bolo zistené, že na účinnú liečbu alebo prevenciu obezity sú vhodné zlúčeniny, ktoré môžu u cicavcov a najmä u ľudí potláčať de-novo-lipogenéziu. Dobré výsledky sú dosiahnuté v prípadoch, keď sú tieto zlúčeniny podávané počas dlhšej doby, napríklad počas niekoľkých týždňov.It has been found that compounds that can inhibit de novo-lipogenesis in mammals, and especially in humans, are useful for the effective treatment or prevention of obesity. Good results are obtained when these compounds are administered over a prolonged period of time, for example for several weeks.

Predmetom tohto vynálezu je spôsob stanovenia zlúčenín, ktoré sú vhodné na liečbu alebo prevenciu obezity, pričom sú vybrané také zlúčeniny, ktoré sú schopné potláčať de-novo-lipogenéziu u cicavcov, najmä u ľudí. Predmetom tohto vynálezu je tiež použitie zlúčenín, ktoré majú schopnosť potláčať de-novo-lipogenéziu u cicavcov a ktoré v podstate nemajú žiadny vplyv na centrálnu nervovú sústavu, ako je antikonvulzívne pôsobenie, na prípravu liečiv na liečenie alebo prevenciu obezity.It is an object of the present invention to provide compounds which are useful in the treatment or prevention of obesity, wherein such compounds are capable of inhibiting de-lipo-lipogenesis in mammals, especially humans. It is also an object of the present invention to use compounds having the ability to inhibit de-lipo-lipogenesis in mammals and which have substantially no effect on the central nervous system, such as anticonvulsant action, in the preparation of medicaments for treating or preventing obesity.

Pojem de-novo-lipogenézia (ďalej skratka DNL) znamená syntézu telu vlastných mastných kyselín zo sacharidov v organizme cicavcov. Táto syntéza nastáva v cytozóle telesných buniek, a je založená na tzv. cykle kyseliny citrónovej alebo Krebs-Martiovom cykle. Pri biochemickej reakcii prebiehajúcej v organizme z obidvoch základných zložiek, ktorými sú pyruvát, pochádzajúci zo sacharidov, a hydrogénuhličitan, cez rôzne medzistupne, ako napr. maleát, fumarát a α-ketoglutarát, nakoniec vzniká citrát. Ak je syntetizovaný prebytok citrátu, môže sa tento prebytok cez medzistupeň, ktorým je acetylkoenzým A, premieňať na mastné, kyseliny (= lipidické následné produkty) , ktoré vytvárajú tuky a tieto tuky sa ukladajú do tukových buniek (adipocytov). Neúmerným usádzaním tukov z mastných kyselín dochádza všeobecne k obezite.The term de-novo-lipogenesis (hereinafter abbreviated as DNL) means the synthesis of the body's own fatty acids from carbohydrates in a mammalian organism. This synthesis occurs in the cytosol of body cells, and is based on the so-called. the citric acid cycle or the Krebs-Martio cycle. In a biochemical reaction taking place in the body from both essential constituents, which are carbohydrate-derived pyruvate, and bicarbonate, via various intermediate steps such as e.g. maleate, fumarate and α-ketoglutarate, eventually citrate is formed. If an excess of citrate is synthesized, this excess can be converted to the fatty acids (= lipidic downstream products) that form fats through the intermediate stage, which is acetyl coenzyme A, and these fats are stored in adipocytes. Inadequate deposition of fatty acid fats generally leads to obesity.

Na cykle kyseliny citrónovej sa zúčastňujú rôzne enzýmy.Various enzymes are involved in the citric acid cycle.

Látková premena prebiehajúca v citrátovom cykle závisí podstatným spôsobom na množstve hydrogénuhlíčitanú, ktorý je k dispozícii.The metabolism taking place in the citrate cycle depends essentially on the amount of bicarbonate available.

Množstvo hydrogénuhličitanú, ktoré je k dispozícii závisí na rýchlosti, ktorou môže vzniknúť oxid vzniká hydrogénuhličitan, karboanhydrázami. Na katalýze hydrogénuhličitan pre cyklus známych karboanhydráz a ich uhličitý. Táto reakcia, ktorou je katalyzovaná tzv.The amount of bicarbonate available depends on the rate at which the oxide can form bicarbonate, by carboanhydrases. On the catalysis of bicarbonate for the cycle of known carbonic anhydrases and their carbon dioxide. This reaction, which catalyzes the so-called.

reakcií, ktorými je poskytovaný kyseliny citrónovej sa z dosiaľ izozýmov u cicavcov zúčastnia prevažne karboanhydrázové izozýmy subtypov II (= CA II) a V prítomné v mitochondriách. V mitochondriách (= CA V) . Významné sú karboanhydrázy subtypu V, pretože sú tiež prebieha cyklus kyseliny citrónovej.The carboanhydrase isozymes of subtypes II (= CA II) and V present in mitochondria are predominantly involved in the reactions provided by citric acid among mammalian isozymes. In mitochondria (= CA V). Carboanhydrases of subtype V are important because they are also in the citric acid cycle.

Na potlačenie DNL v bunkách cicavcov sú Ich cielom je ktorá prebieha vo všetkých' prípadoch potláčať v cykle kyseliny citrónovej.To suppress DNLs in mammalian cells, they are intended to be suppressed in all cases in the citric acid cycle.

koncentrácia k dispozícii vynálezu môže rôzne možnosti.the concentration available to the invention may vary.

látkovú výmenu,metabolism,

Tým sa môže znížiť tak, že sa pre cyklus kyseliny citrónovej. výhodné potlačenie karboanhydráz karboanhydráz CA V.This can be reduced by taking for the citric acid cycle. advantageous suppression of carbonic anhydrase carbonic anhydrase CA V.

ktoré môžu nešpecifický potláčať karboanhydrázy dodávajúcewhich may non-specifically suppress carboanhydrases supplying

Pre účely subtypov II prebytočné produkovaného citrátu, ktorý je pre syntézu mastných kyselín. Podľa tohto byť produkcia DNL výhodne potlačená potlačia karboanhydrázy, ktoré katalyzujú reakcie hydrogénuhličitan tohto vynálezu je a/alebo V, výhodneFor the purposes of subtype II, excess citrate produced is for the synthesis of fatty acids. Accordingly, the production of DNL is preferably suppressed by suppressing the carbonic anhydrases that catalyze the reaction of the bicarbonate of the invention is and / or V, preferably

Zlúčeniny, (= nešpecifické alebo klasické CA-inhibítory) dlhšiu dobu používané ako liečiva, najmä ako v oftalmológii. Prehľad použitia týchto sú známe a diuretiká, klasických sú už aleboCompounds (= non-specific or classical CA-inhibitors) used for a long time as medicaments, especially as in ophthalmology. An overview of the use of these are known and diuretics, classic ones are already or

CA-inhibítorov uvádza napr. C.T.Supuran v Expert Opinion on Therapeutic Patents, 10 (5), 575-600, (2000). Slovné spojenie „špecifické CA-inhibítory znamená také zlúčeniny, ktoré prevažnou mierou potláčajú len jeden subtyp CA (napr. subtyp CA V) alebo určitú skupinu subtypov CA. Použitie klasických C’A-inhibítorov na cielené liečenie a/alebo prevenciu obezity nie je dosiaľ známe.CA-inhibitors disclose e.g. C. T. Supuran in Expert Opinion on Therapeutic Patents, 10 (5), 575-600, (2000). The phrase "specific CA-inhibitors" refers to those compounds that predominantly suppress only one CA subtype (e.g., CA V subtype) or a particular group of CA subtypes. The use of classical C'A-inhibitors for the targeted treatment and / or prevention of obesity is not yet known.

Všeobecne sa predpokladá, že väčšina známych prípadov obezity je spôsobená nadmerným podielom tukov v potravinách. Vo vyspelých krajinách, ako sú Spojené štáty americké, tvoria tuky až 30% príjmu potravy obéznych ľudí. Podľa súčasných poznatkov dochádza k ukladaniu tukov a následne k obezite prevažne v dôsledku príjmu tukov v potravinách, preto potlačenie DNL ovplyvňujúce metabolizmus sacharidov nemá na tento proces žiadny vplyv.It is generally believed that most of the known cases of obesity are due to an excessive proportion of fat in foods. In developed countries such as the United States of America, fats account for up to 30% of obese people 's food intake. According to current knowledge, fat deposition and consequently obesity are predominantly due to fat intake in food, therefore the suppression of DNL affecting carbohydrate metabolism has no effect on this process.

Aj keď sa potlačením DNL dosiahne zníženie ukladania mastných kyselín v adipozytoch, je príspevok DNL na tomto efekte, znižujúcom ukladanie mastných kyselín v telesných bunkách dosiaľ považovaný za nedostatočný pre liečenie a/alebo prevenciu ľudskej obezity. Súhrn odborných názorov na tento problém sa nachádza napr. v publikácii M.K.Hellerstein, European Journal of Clinical Nutrition 53 (1) 53-65, (1999). Tento názor, prevládajúci v odbornom svete stál dosiaľ v ceste cielenému hľadaniu a vývoju liečiv na liečenie a/alebo prevenciu obezity, ktoré by spočívalo na princípe potlačenia DNL.Although suppression of DNL results in a reduction in fatty acid deposition in adiposytes, the contribution of DNL to this effect, reducing fatty acid deposition in body cells, is still considered insufficient for the treatment and / or prevention of human obesity. A summary of expert opinions on this issue can be found eg. in M. K. Hellerstein, European Journal of Clinical Nutrition 53 (1) 53-65, (1999). This view, prevailing in the professional world, has hitherto been in the way of the targeted search and development of drugs for the treatment and / or prevention of obesity based on the principle of DNL suppression.

V rámci tohto vynálezu bolo s prekvapením zistené, že zlúčeniny, ktoré majú schopnosť potláčať DNL u cicavcov, najmä u ľudí, môžu byť účinnejšie použité na liečenie a/alebo prevenciu obezity, najmä v prípadoch, keď tieto zlúčeniny môžu byť chorými užívané počas dlhšej doby, napr. v období dlhšom ako šesť týždňov. Tieto obézne osoby môžu dosiahnuť v priebehu tohto dlhšieho obdobia významné zníženie telesnej hmotnosti potlačením DNL, aj keď DNL má len relatívne nízky vplyv na telesný tuk ukladaný v adipocytoch. Potlačením DNL počas dlhšieho obdobia sa tento nízky vplyv môže tak akumulovať, že celkovo môže spôsobiť významné zníženie telesnej hmotnosti.It has been surprisingly found in the present invention that compounds having the ability to inhibit DNL in mammals, particularly humans, can be used more effectively for the treatment and / or prevention of obesity, particularly where these compounds can be used by patients for a prolonged period of time. , e.g. over a period of more than six weeks. These obese persons can achieve significant weight loss during this longer period by suppressing DNL, although DNL has only a relatively low effect on adipocyte body fat. By suppressing DNL over an extended period of time, this low impact can accumulate so that it can cause a significant weight loss overall.

Na príklade látky Topiramat sa dá ukázať, že spôsob podľa tohto vynálezu je skutočne vhodný na cielené hľadanie zlúčenín vhodných na liečenie a/alebo prevenciu obezity. Topiramat .je antiepileptikum opísané v EP 0 138 441 A2. . . 0 Topiramate je známe, že vykazuje multifaktoriálne farmakologické pôsobenie. Môže blokovať sodíkové kanály závislé na napätí i a tým stabilizovať membránový potenciál buniek, aktivuje GABAReceptory a tým zosilňuje inhibíciu spôsobenú GABA, pôsobí ako inhibítor karboanhydrázy a nakoniec je schopný potláčať kainat/AMPA-receptory, ktoré sú jedným typom glutamátových receptorov, čím dochádza k zníženiu výskytu AMPA-indukovaných prúdov. Topiramat tiež vykazuje výrazné pôsobenie na ZNS. Nie je známe, či antiepileptické vlastnosti Topiramatu súvisia s už uvedenými farmakologicky relevantnými faktormi.As an example of Topiramate, it can be shown that the method according to the invention is indeed suitable for the targeted search for compounds suitable for the treatment and / or prevention of obesity. Topiramate is an antiepileptic drug described in EP 0 138 441 A2. . . Topiramate is known to have a multifactorial pharmacological action. Can block sodium channels voltage dependent and thus stabilize the membrane potential of cells, activates GABAReceptory and thereby amplifies the inhibition caused by GABA, acts as a carbonic anhydrase inhibitor and finally is able to suppress the kainate / AMPA receptors, which are one type of glutamate receptors, thereby reducing occurrence of AMPA-induced currents. Topiramate also shows a pronounced effect on ZNS. It is not known whether the antiepileptic properties of Topiramate are related to the pharmacologically relevant factors mentioned above.

Z dokumentu WO 98/00130 je známe, že Topiramat má tiež farmakologické vlastnosti, z ktorých vyplýva, že by mohol byť vhodný na liečenie obezity. Tieto vlastnosti boli zistené ako sprievodné účinky pri dlhodobom skúšaní jeho liečivých účinkov na epilepsiu. Dosial nie je známe, ktoré farmakologické vlastnosti Topiramatu spôsobujú pokles telesnej hmotnosti pacientov trpiacich epilepsiou. Topiramat patri do skupiny antikonvulzivnych látok na liečenie obezity všeobecného vzorca I, opísaných v dokumente WO 98/00130.It is known from WO 98/00130 that Topiramate also has pharmacological properties which indicate that it could be useful in the treatment of obesity. These properties have been found to be concomitant in long-term trials of its therapeutic effects on epilepsy. It is not yet known which pharmacological properties of Topiramate cause a decrease in body weight of patients suffering from epilepsy. Topiramate belongs to the group of anticonvulsants for the treatment of obesity of the general formula I described in WO 98/00130.

Teraz mohlo byť dokázané, že použitím spôsobu podlá tohto vynálezu je Topiramat silným CA--inhibí torom, že je silným inhibítorom najmä karboanhydráz subtypov II a V, vyskytujúcich sa u cicavcov, a že účinne potláča DNL v bunkách cicavcov. Podlá postupu použitého podľa tohto vynálezu sa mohlo dokázať, že dosial nevysvetliteľné účinky tejto látky spôsobujúcej zníženie telesnej hmotnosti u pacientov trpiacich epilepsiou sú vedľajšími farmakologickými účinkami Topiramatu, ktoré v podstate spočívajú v jeho schopnosti účinne potláčať DNL u cicavcov.It has now been shown that, using the method of the invention, Topiramate is a potent CA-inhibitor, is a potent inhibitor in particular of the carboanhydrases of subtypes II and V occurring in mammals, and that it effectively suppresses DNL in mammalian cells. According to the method of the present invention, it has been shown that the hitherto unexplained effects of weight loss in patients suffering from epilepsy are side effects of Topiramat, essentially consisting in its ability to effectively suppress DNL in mammals.

Na základe toho možno očakávať, že použitím postupoví podľa tohto vynálezu bude možné v budúcnosti stanovovať zlúčeniny vhodné na liečenie a/alebo prevenciu obezity. Spôsob podľa tohto vynálezu prvýkrát umožňuje pomerne rýchlo a ľahko stanoviť farmakologicky zaujímavé zlúčeniny na princípe ich schopnosti potlačenia DNL. Použitím postupov podľa tohto vynálezu môžu byť na základe tohto princípu vybrané pomocou prvého orientačného postupu látky potenciálne vhodné na liečenie a prevenciu obezity, bez nutnosti vykonávať dlhé a drahé pokusy in vivo, ako sú pokusy, pri ktorých sa zisťuje vplyv kŕmenia na pokusných zvieratách.Accordingly, it is expected that by using the process of the present invention it will be possible in the future to determine compounds suitable for the treatment and / or prevention of obesity. The method according to the invention makes it possible for the first time to determine the pharmacologically interesting compounds relatively quickly and easily on the basis of their ability to inhibit DNL. Using the methods of the invention, on the basis of this principle, substances potentially suitable for the treatment and prevention of obesity can be selected by first guideline without having to carry out long and expensive in vivo experiments, such as those in which the effect of feeding on experimental animals is investigated.

Toto zistenie prinieslo prekvapujúce výsledky, lebo pri predchádzajúcom výskume farmakologických vlastností bol jeho účinok ako CA-inhibítora vždy hodnotený ako nevýrazný alebo len nízky a z hľadiska terapeutického ako bezvýznamný (pozri napr. B.E.Maryanoff a kol., (Journal of Medicinal Chemistry 30, 880-887 (1987); B.E.Maryanoff a kol., Journal of Medicinal Chemistry 41 1315-1343 (1998); S.J.Dodgson a kol., Epilepsia 41 (1), 35-39 (2000)). V horeuvedených štúdiách boli pre stanovenie CA-inhibičného účinku Topiramatu použité vždy skúšobné roztoky obsahujúce CA rôznych cicavcov, ktoré navyše ešte obsahovali rôzne telové orgány ako krv alebo rôzne tkanivá.This finding has produced surprising results since, in a previous investigation of pharmacological properties, its effect as a CA-inhibitor has always been assessed as insignificant or only minor and therapeutically as insignificant (see, e.g., BEMaryanoff et al., (Journal of Medicinal Chemistry 30, 880-). 887 (1987); BEMaryanoff et al., Journal of Medicinal Chemistry 41 1315-1343 (1998); SJDodgson et al., Epilepsy 41 (1), 35-39 (2000)). Inhibitory effect of Topiramate used always test solutions containing CA of different mammals, which additionally contained different body organs such as blood or different tissues.

Podľa prvého uskutočnenia tohto vynálezu sa môžu nájsť zlúčeniny vhodné na liečenie a/alebo prevenciu obezity tak, že sú vybrané také zlúčeniny, ktoré majú schopnosť aspoň u niektorých cicavcov potláčať aktivitu karboanhydrázy. Pokusne môže byť uvedená aspoň jedna skúšaná zlúčenina do styku s jednou karboanhydrázou a následne sa môžu známym spôsobom identifikovať tie zlúčeniny, ktoré potláčajú aktivitu aspoň jednej karboanhydrázy. Výhodne sa pri tomto uskutočnení používajú karboanhydrázy cicavcov ako ľudí alebo hlodavcov, napr. krýs, myší alebo morčiat, najmä karboanhydrázy subtypov II a/alebo V. Výhodné je použitie ľudských karboanhydráz. Vhodné karboanhydrázy môžu byť napr. z cicavcov izolované a prípadne prečistené, alebo môžu byť výhodne pripravené známymi chemickými alebo biotechnologickými postupmi.According to a first embodiment of the invention, compounds suitable for the treatment and / or prevention of obesity may be found by selecting those compounds which have the ability to inhibit the activity of carbonic anhydrase in at least some mammals. Experimentally, at least one test compound may be contacted with a single carbonic anhydrase and subsequently those compounds that suppress the activity of at least one carbonic anhydrase can be identified in a known manner. Preferably, carboanhydrases of mammals such as humans or rodents are used in this embodiment, e.g. rats, mice or guinea pigs, in particular carbonic anhydrases of subtypes II and / or V. Human carbonic anhydrases are preferred. Suitable carbonic anhydrases may be e.g. from mammals isolated and optionally purified, or may conveniently be prepared by known chemical or biotechnological techniques.

V preferovanom variante tohto prvého uskutočnenia môže byť meraná zmena aktivity karboanhydrázy vplyvom skúšaných zlúčenín pomocou známej in vitro skúšky enzymatickej aktivity, pri ktorej sú používané izolované a od sprievodných látok aspoň z väčšej časti vyčistené karboanhydrázy. Výhodne sú používané karboanhydrázy pripravené chemickým alebo biotechnologickým spôsobom, lebo tieto sú k dispozícii na použitie v mimoriadne čistej forme. Skúšky na stanovenie in vitro aktivity karboanhydráz sú známe. V rámci in vitro skúšok enzymatickej aktivity uskutočňovaných pri postupoch podľa tohto vynálezu, pri ktorých je meraná zmena aktivity karboanhydrázy, sa napr. používa skúška, pri ktorej sa meria zmena pH vplyvom karboanhydrázy (pozri K.M.Wilbur, N.G.Andersen, Journal of Biological Chemistry 176 147-154 (1948); G.Sanyal, T.H.Mären, Journal of Biological Chemistry 256, 608-612 (1981), uskutočňuje sa meranie pri použití stop-flow metódy (pozri R.G.Khalifah, Journal of Biological Chemistry 246, 2561-2573 (1971)) alebo sa používaIn a preferred variation of this first embodiment, the change in carbonic anhydrase activity can be measured by the test compounds using a known in vitro enzymatic activity assay using isolated and at least largely purified carbonic anhydrase. Preferably, the carbonic anhydrases used are prepared by a chemical or biotechnological process, as these are available for use in an extremely pure form. Assays for determining the in vitro activity of carbonic anhydrases are known. In vitro in vitro enzymatic activity assays performed in the methods of the invention, in which the change in carbonic anhydrase activity is measured, e.g. using an assay to measure pH change due to carbonic anhydrase (see KM Wilbur, NGAndersen, Journal of Biological Chemistry 176 147-154 (1948); G.Sanyal, THMären, Journal of Biological Chemistry 256, 608-612 (1981) , the measurement is performed using the stop-flow method (see RGKhalifah, Journal of Biological Chemistry 246, 2561-2573 (1971)) or used

4-nitrofenylacetátesterázová metóda (pozri Y.Pocker, J.T.Stone, Journal of the Američan Chemical Society 87 5497-5498 (1965)). Pri poslednej spomenutej skúške sa meria rýchlosť hydrolýzy 4-nitrofenyl-acetátu vplyvom skúšanej karboanhydrázy, pričom je využívaná schopnosť karboanhydráz pôsobiť súčasne ako esterázy.4-nitrophenyl acetate esterase method (see Y.Pocker, J.T. Stone, Journal of the American Chemical Society 87 5497-5498 (1965)). In the latter test, the rate of hydrolysis of 4-nitrophenyl acetate is measured by the carbonic anhydrase under test, utilizing the ability of the carbonic anhydrase to act simultaneously as esterases.

V tejto súvislosti je pre použitie pri postupoch podľa tohto vynálezu vynikajúci spôsob stanovenia CA-inhibičného účinku zlúčenín, opísaný v publikácii C.T.Supuran a kol., European Journal of Medicinal Chemistry 33, 577-594 (1998) (pozri najmä str. 592; ďalej citované ako „Supuran a kol.'') alebo v publikácii A.Scozzafava a kol., Journal of Medicinal Chemistry 42 3690-3700 (1999) (pozri najmä str. 3697; ďalej citované ako „Scozzafava a kol.). Popis vynálezu, ktorý je fIn this regard, the method of determining the CA-inhibitory effect of the compounds described in CTSupuran et al., European Journal of Medicinal Chemistry 33, 577-594 (1998) (see, in particular, page 592; cited as "Supuran et al.") or in A.Scozzafava et al., Journal of Medicinal Chemistry 42 3690-3700 (1999) (see especially p. 3697; hereinafter cited as "Scozzafava et al.). The description of the invention, which is f

predmetom tejto prihlášky vynálezu, sa vyslovene vzťahuje na horeuvedené spôsoby stanovenia podľa Supurana a spolupracovníkov a podľa Scozzafava a spolupracovníkov. Zlúčeniny, ktoré podľa jedného z týchto in vitro stanovenia aktivít podľa Supurana a spolupracovníkov alebo podľa Scozzafava a spolupracovníkov vykazujú hodnoty koncentrácií IČ5o 10 gmol/l alebo nižšie (t.j. majú vyššiu účinnosť), môžu byť v zmysle tohto vynálezu vybrané ako vhodné zlúčeniny s CA-inhibičnými účinkami (= CA-inhibítory). Ak má byť stanovená aktivita ľudských CA-subtypov, môžu byť vhodnejšie iné metódy, ako je metóda založená na 4-nitrofenylacetát-esteráze. Vhodné môžu byť najmä metódy, ktoré tiež umožňujú sledovať pomerne rýchly priebeh reakcie.the subject matter of the present invention explicitly relates to the above methods of determination according to Supuran and co-workers and according to Scozzafava and co-workers. Compounds which, according to one of these in vitro assays for Supuran and coworkers or Scozzafava and coworkers, exhibit IR 5 values of 10 gmol / l or lower (i.e., have higher potency) may be selected as suitable compounds according to the invention. CA-inhibitory effects (= CA-inhibitors). If the activity of the human CA-subtypes is to be determined, other methods than the 4-nitrophenylacetate esterase-based method may be more appropriate. Particularly suitable may be methods which also make it possible to observe the relatively rapid reaction progress.

Skúškou enzymatickej aktivity metódou podľa Scozzafava a kol. (pozri vyššie), ktorá je založená na reakcii 4-nitrofenylacetát-esterázy (pôvodne opísanej v publikácii Y.Pocker a J.T.Stone, Biochemistry 6 668-678 (1967), bolo v rámci tohto vynálezu dokázané, že Topiramat vykazuje výrazné inhibičné pôsobenie na ľudskú karbo'ánhydrázu subtypu II, získanú biotechnologickým spôsobom (IC50 = 5 nmol/1), a že toto inhibičné pôsobenie je výrazne silnejšie, ako. inhibičné pôsobenie klasických CA-inhibítorov acetazolamidu alebo metazolamidu, ktoré boli použité ako porovnávacie látky. Ľudská karboanhydráza subtypu II bola získaná spôsobom opísaným v publikácii Scozzofava a kol.Assay for enzymatic activity by the method of Scozzafava et al. (see above), which is based on the reaction of 4-nitrophenylacetate esterase (originally described in Y.Pocker and JTStone, Biochemistry 6 668-678 (1967)), it has been shown in the present invention that Topiramat exhibits a significant inhibitory action on human carboanhydrase of subtype II, obtained by biotechnology (IC50 = 5 nmol / l), and that this inhibitory action is significantly more potent than that of the classical CA-inhibitors of acetazolamide or metazolamide used as comparators. II was obtained as described in Scozzofava et al.

Takou istou skúškou bolo dokázané, že Topiramat vykazuje tiež výrazné inhibičné pôsobenie na karboanhydrázu myší subtypu Va (= mCA Va) (IC50 = 74 nmol/1) získanú' biotechnologickým spôsobom. V tomto prípade bol odlišne, od predpisu' uvádzaného v publikácii Scozzafava a kol., použitý enzým mCA Va v koncentrácii 120 nM. Karboanhydráza mCA Va bola získaná postupom, opísaným v publikácii H.R.Heck a kol., Journal of Biological Chemistry 269, 24742-24746, na základe v podstate známeho spôsobu. Bol použitý kmeň baktérií BL 21 (DE3) a plazmidvektor koordinujúci mCA Va sekvenciu, pod kontrolou T7-promótora indukovaného izopropyl-β-ϋ-tiogalaktopyranosidom (IPTG). Bakteriálna kultúra bola naočkovaná pri 37°C počas miešania v kvapalnom médiu Luria-Bertani obsahujúcom ampicilín (100 pg/ml) a jej rast bol spektrofotometricky sledovaný priBy the same assay, Topiramate also showed a significant inhibitory effect on carboanhydrase of the mouse subtype Va (= mCA Va) (IC50 = 74 nmol / l) obtained by biotechnology. In this case, the enzyme mCA Va at a concentration of 120 nM was used differently from the protocol of Scozzafava et al. Carboanhydrase of mCA Va was obtained according to the method described by H. R. Heck et al., Journal of Biological Chemistry 269, 24742-24746, following a substantially known method. The BL 21 (DE3) strain and plasmid-coordinator of the mCA Va sequence were used, under the control of the isopropyl-β---thiogalactopyranoside-induced T7 promoter (IPTG). The bacterial culture was inoculated at 37 ° C with stirring in Luria-Bertani liquid medium containing ampicillin (100 µg / ml) and its growth was monitored spectrophotometrically at

600 nm.600 nm.

Keď bakteriálna kultúra vstúpila do exponenciálnej rastovej fázy, bol pridanýWhen the bacterial culture entered the exponential growth phase, it was added

IPTG v konečnej koncentrácii 1 nmol/1.IPTG at a final concentration of 1 nmol / L.

Po trojhodinovéj inkubačnej dobe (37°C, počas miešania) bola bakteriálna kultúra odstredená pri 7000 g počas 15 minút a horná vrstva bola odstránená. Do získaného peletu bola pridaná redestilovaná voda a lyzozým (1,00 pg/ml). Bunky boli rozložené ultrazvukom tak, že sa na suspenzie baktérií s objemom 10 ml, pôsobilo v hore otvorených nádobkách ultrazvukom, prerušovane štyrikrát počas 3 minút. Po každom trojminútovom pôsobení ultrazvuku sa stanovila absorpcia vzoriek pri 600 nm, pričom sa vždy 100 μΐ vzorka rozriedila 900 μΐ redestilovanej vody. Konečný stav bol dosiahnutý, keď bola hodnota absorpcie vzorky pri 600 nm asi 1/10 počiatočnej hodnoty. Po ukončení rozkladu buniek bol pridaný CaCl2-viažuci pufor (výrobok firmy Stratagene), a získaný bunkový lyzát bol podrobený čisteniu na kolóne naplnenej kalmodulínovou sorpčnou živicou. Toto čistenie je založené na vysokej afinite kalmodulínovej domény viazanej na živicu v koncovej skupine, schopnej viazať sa na túto doménu, obsahujúcej dusík získaného proteínu mCA Va.After a three hour incubation period (37 ° C, with stirring), the bacterial culture was centrifuged at 7000 g for 15 minutes and the upper layer was removed. Redistilled water and lysozyme (1.00 µg / ml) were added to the obtained pellet. Cells were lysed by ultrasound by treating 10 ml of bacterial suspensions in ultra-sonicated containers, intermittently four times for 3 minutes. After each 3-minute ultrasound treatment, the absorption of the samples was determined at 600 nm, each time 100 μΐ of the sample was diluted with 900 μΐ of redistilled water. The final state was reached when the absorption value of the sample at 600 nm was about 1/10 of the initial value. After the cell digestion was complete, CaCl 2 -binding buffer (manufactured by Stratagene) was added, and the cell lysate obtained was subjected to purification on a column packed with a calmodulin sorption resin. This purification is based on the high affinity of the resin-bound calmodulin domain in the terminal group capable of binding to that nitrogen-containing domain of the obtained mCA Va protein.

Čistenie sa uskutočňuje v podstate známym spôsobom (pozri príručka „Affinity LIC Cloning and Protein Purification Kit Manual firmyStratagene).Purification is carried out in a manner known per se (see the Affinity LIC Cloning and Protein Purification Kit Manual of Stratagene).

Podľa druhého uskutočnenia spôsobu podľa tohto vynálezu je možné nájsť látky vhodné na liečenia a/alebo prevenciu tým spôsobom, produktov citrónovej znižujú kyseliny že sa vyberú také látkovej výmeny, v izolovaných ktoré znižujú množstvo v cykle kyseliny cicavcov, zlúčeniny, vznikajúcich živých bunkách množstvo lipidických následných citrónovej. Ako produkty látkovej produktov výmeny alebo cyklu cyklu kyseliny citrónovej, ktorých množstvo sa vplyvom skúšaných zlúčenín merateľne znižuje, sú vhodné v kyslom prostredí rozpustné produkty látkovej výmeny, ako sú citrát, maleát, fumarát a/alebo α/alebo ! α-ketoglutarát, výhodne citrát. Ako produkty látkovej výmeny sú ďalej vhodné lipidické následné produkty cyklu kyseliny citrónovej, ako sú voľné mastné kyseliny. V druhom uskutočnení je tiež skúmaná schopnosť zlúčenín potláčať aktivitu aspoň jednej karboanhydrázy cicavcov; použitý skúšobný model je len ináč usporiadaný ako v predchádzajúcom uskutočnení. Princípom tohto druhého spôsobu je v podstate známy prenos rádioaktivity zo substrátov cyklu kyseliny citrónovej označených 14C-izotopom na metabolické medziprodukty alebo citrónovej izolované na následné produkty cyklu kyseliny zo žijúcich buniek cicavcov a porovnanie zistených výsledkov podmienok, ale za s výsledkami získanými za prítomnosti zlúčenín, rovnakých ktoré majúAccording to a second embodiment of the method according to the invention, it is possible to find substances suitable for the treatment and / or prevention in that the citric acid-lowering products are selected such that the metabolism is selected in which they reduce the amount of mammalian acid cycles. citric acid. Acid-soluble metabolic products, such as citrate, maleate, fumarate and / or α /, are suitable as the metabolic products of the citric acid cycle or cycle, the amount of which is measurably reduced due to the test compounds . α-ketoglutarate, preferably citrate. Lipidic subsequent products of the citric acid cycle, such as free fatty acids, are further suitable as metabolic products. In a second embodiment, the ability of the compounds to inhibit the activity of at least one mammalian carbonic anhydrase is also examined; the test model used is only otherwise arranged as in the previous embodiment. The principle of this second method is essentially the known transfer of radioactivity from 14 C-isotope-labeled citric acid cycle substrates to metabolic intermediates or citric acid isolated on subsequent products of the acid cycle from living mammalian cells and comparing the observed conditions results but with those obtained in the presence of compounds. the same they have

CA-inhibičné účinky.CA-inhibitory effects.

tomto uskutočnení môžu použité izolované živé alebo morčatá. Výhodne použité bunky hlodavcov, hepatocyty. Výhodné je použité ľudské bunky, bunky hlodavcov ako sú používané ľudské p'richádzajú do úvahy použitie môžu sú byť úspešne krysy, myši bunky. Ak sú adipocyty alebo adipocytov hlodavcov.isolated live or guinea pigs may be used in this embodiment. Preferably used rodent cells, hepatocytes. Preferably, human cells are used, rodent cells such as those used by human can be used can be successfully rat, mouse cells. When adipocytes or adipocytes are rodents.

nimi byť adipocyty alebo hepatocyty. Výhodné je použitie ľudských hepatocytov.these may be adipocytes or hepatocytes. The use of human hepatocytes is preferred.

Bunky cicavcov použité pri tomto uskutočnení získané bežnými spôsobmi množenia a klonovania buniek. Môžu vynálezu môžu byť byť použité prirodzené alebo biotechnologický modifikované bunky cicavcov. Pri stanovení prenosu rádioaktivity do medziproduktov cyklu kyseliny v kyslom ktoré sú rozpustné substrát výhodne používa prenosu prostredí, sa ako 14C-hydrogénuhličitan lipidických následných produktov sa ako 14C-označený substrát výhodne rádioaktivity do cyklu kyseliny citrónovej, používa [U-14C] glukóza.The mammalian cells used in this embodiment are obtained by conventional methods of cell proliferation and cloning. Natural or biotechnologically modified mammalian cells may be used in the invention. When determining the transfer of radioactivity to acid-cycle intermediates which are a soluble substrate, preferably transfer of the environment is used as 14 C-lipidic bicarbonate of the subsequent products as 14 C-labeled substrate of preferably radioactivity into the citric acid cycle using [U- 14 C] glucose .

druhéhosecond

Preferovaný variant schopnosti zlúčenín potláčať DNL v publikácii S.A.Hazen a kol., FASEB uskutočnenia stanovenia u cicavcov je uvedenýA preferred variant of the ability of the compounds to inhibit DNL in S.A. Hazen et al., FASEB for performing assays in mammals is disclosed.

Journal 10 (4) (1996) 481a kol. Zlúčeniny,Journal 10 (4) (1996) 481a et al. compounds

-490 (ďalej citovaný ako „Hazen a kol.)· Opis vynálezu, ktorý je predmetom tejto prihlášky vynálezu, sa výslovne vzťahuje na horeuvedený spôsob stanovenia podľa Hazena ktoré podľa tohto stanovenia aktivít spolupracovníkov významne potláčajú prenos-490 (hereinafter referred to as "Hazen et al.") The disclosure of the present invention expressly relates to the above Hazen assay method, which, according to this assay of collaborator activities, significantly inhibits transmission

-označených látok, sú prekurzory cyklu kyseliny citrónovej, napr. prenos z 14C-hydrogénuhličitanu do citrátu, maleátu, podľa Hazena a rádioaktivity 14Cfumarátu a/alebo α-keto-glutarátu s IS5o~hodnotou aspoň 10 gmol/l alebo nižšou (=vyššia účinnosť), môžu byť vybrané ako vhodné zlúčeniny v zmysle tohto vynálezu.the labeled substances are precursors of the citric acid cycle, e.g. transfer from 14 C-bicarbonate to citrate, maleate, Hazen and 14 Cfumarate and / or α-keto-glutarate with an IS 5 of at least 10 gmol / l or less (= higher efficacy) may be selected as suitable compounds within the meaning of the invention.

V skúšobnom modeli, opísanom Hazenom a spolupracovníkmi ktorý bol aplikovaný v rámci tohto vynálezu, vykazoval Topiramat výraznú schopnosť potláčať vznik rozpustných produktov látkovej výmeny v kyslom prostredí cyklu kyseliny citrónovej, adipocytmi línie buniek 3T3-F442A krýs, získaných biotechnologickým spôsobom. Toto pôsobenie Topiramátu (ICso= =348 nmol/1) bolo výrazne silnejšie ako pôsobenie klasického CA-inhibitora Etoxyolamidu, s ktorým bolo vykonané meranie ako s porovnávacou látkou. ! In the test model described by Hazen and co-workers of the present invention, Topiramate showed a significant ability to suppress the formation of soluble metabolic products in the acidic environment of the citric acid cycle by adipocytes of the rat 3T3-F442A cell line, obtained by biotechnology. This action of Topiramate (IC 50 = 348 nmol / L) was significantly more potent than that of the classical CA-inhibitor Etoxyolamide, which was measured as a reference. !

Vo výhodnejšom variante spôsobu stanovenia zlúčenín, ktoré sú vhodné na liečbu a/alebo na prevenciu obezity, sú vybrané také zlúčeniny, ktoré sa v horeuvedenom uskutočnení tohto vynálezu, najmä v uvedenej in vitro skúške enzymatickej aktivity, ukázali byť vhodnými na potlačenie aspoň jednej karboanhydrázy cicavca a ktoré sa tiež v horeuvedenom druhom uskutočnení tohto vynálezu ukázali byť vhodnými na zníženie iIn a more preferred variation of the method of determining compounds that are useful in the treatment and / or prevention of obesity, those compounds which, in the above-mentioned embodiment of the invention, particularly in said in vitro enzymatic activity assay, have been shown to be suitable for suppressing at least one mammalian carboanhydrase are selected. and which have also been shown to be useful in reducing the i

množstva produktov látkovej výmeny vytváranými izolovanými živými bunkami cicavcov v cykle kyseliny citrónovej. V prvom uskutočnení tohto vynálezu môže byť rýchle a účinne preskúmaná schopnosť jednotlivých zlúčenín potláčať karboanhydráty cicavcov. Druhé uskutočnenie tohto vynálezu poskytuje okrem iných informácie o tom, či majú vyšetrované zlúčeniny tiež schopnosť prenikať do mitochondrii žijúcich buniek cicavcov, kde sa vyskytuje CA V. Pre výber vhodných zlúčenín môže byť použité prvé a druhé horeuvedené uskutočnenie tohto vynálezu, alebo môže byť toto uskutočnenie použité v ľubovoľnom poradí.the amount of metabolic products produced by isolated living mammalian cells in the citric acid cycle. In a first embodiment of the invention, the ability of the individual compounds to inhibit mammalian carboanhydrates can be rapidly and efficiently investigated. The second embodiment of the present invention provides, inter alia, whether the investigated compounds also have the ability to penetrate into the mitochondria of living mammalian cells containing CA V. The first and second embodiments of the present invention may be used to select suitable compounds or may be used in any order.

Podľa toho vynálezu sú zlúčeniny, ktoré majú schopnosť potláčať DNL u cicavcov, vhodné na prípravu liečiv na liečenie a/alebo prevenciu obezity. Pritom sú vybrané také zlúčeniny, ktoré majú schopnosť potláčať aspoň jednu karboanhydrázu cicavcov. Vybrané zlúčeniny musia byť fyziologicky znášanlivé a musia spĺňať požiadavky všeobecne kladené na liečivá, t.j. napr. požiadavky, ktoré sa vzťahujú na bezpečnosť a znášanlivosť liečiv. Výhodné je použitie zlúčenín, ktoré potláčajú .karboanhydrázy cicavcov subtypu II a/alebo V. Výhodnejšie je použitie zlúčenín, ktoré špecificky potláčajú CA II a/alebo CA V, najmä CA V.According to the invention, compounds having the ability to inhibit DNL in mammals are useful in the preparation of medicaments for the treatment and / or prevention of obesity. Compounds having the ability to inhibit at least one mammalian carboanhydrase are selected. The selected compounds must be physiologically tolerable and meet the general requirements for drugs, i. e.g. requirements relating to the safety and compatibility of medicinal products. Preference is given to the use of compounds which inhibit carboanhydrases of mammals of subtype II and / or V. More preferred is the use of compounds which specifically inhibit CA II and / or CA V, in particular CA V.

Zo súčasného stavu techniky známe zlúčeniny, vyznačujúce sa CA-inhibičným pôsobením, ktoré pri dlhšom užívaní spôsobujú pacientom zníženie telesnej hmotnosti, napr. Topiramat, vykazujú tiež výrazné pôsobenie na centrálny nervový systém, ako je antikonvulzivne pôsobenie. Zlúčeniny, ktoré majú byť užívané počas dlhšej doby za účelom liečenia a/alebo prevencie obezity, nemôžu mať vedľajšie účinky na centrálny nervový systém. Zlúčeninám, ktorým bolo horeuvedeným spôsobom zistené, že sú vhodné na liečenie a/alebo prevenciu obezity, môže byť vyšetrované ich pôsobenie na centrálny nervový systém. Napr. môže byť zisťované antikonvulzivne pôsobenie. Na sledovanie antikonvulzívnych vlastností je napr. vhodný tzv. „Supramaximal-Elektroschocktest (SES-Test), ktorý je tiež nazývaný „Maximal-Elektroschocktest (MES-Test), opísaný v publikácii G.Chen a kol., Proceedings of the Society for Experimental Biology and Medicíne, 87 (1954) 334-339 (ďalej citované ako „Chen a kol.) a v publikácii J.E.P.Toman a kol., Journal of Neurophysiology 9 (1946) 231 (ďalej citované ako „Toman a kol.). Opis vynálezu, ktorý je predmetom tejto prihlášky vynálezu, sa výslovne vzťahuje na horeuvedené skúšky podľa Chena a spolupracovníkov a podľa Tomana a spolupracovníkov. Zlúčeniny, ktoré majú byť užívané dlhšiu dobu za účelom liečenia a/alebo prevencie obezity, by sa mali v horeuvedenej skúške podľa Chena a spolupracovníkov a podľa Tomana a spolupracovníkov ukázať ako v podstate neúčinné a výhodne by tiež pri dávkach vyšších ako aspoň 100 mg/kg p.o. nemali vykazovať žiadne významné účinky podlá bežných kritérií tejto skúšky (t.j. „Protective Dose PD50 podľa G.Chena a kol. >100 mg/kg p.o.; pričom PDso-hodnoty podľa G.Chena a kol. zodpovedajú v podstate bežnému dávkovaniu ako „Minimal Effective Dosis - MED). Zlúčeniny, ktoré boli na základe horeuvedeného spôsobu stanovenia zlúčenín určené ako vhodné, a u ktorých bolo dodatočne zistené, že sú podľa horeuvedeného MES-Testu podlá Chena a spolupracovníkov v podstate neúčinné, sú mimoriadne vhodné na prípravu liečiv na liečenie a/alebo prevenciu obezity. Horeuvedené skúšky SES-Test (prípadne MES-Test) sú farmakologické štandardné skúšky, ktoré môžu byť firmami poskytujúcimi služby v príslušnej oblasti (napr. firma „Panlabs) vykonávané ako rutinné skúšky.Compounds having CA-inhibitory action are known in the art which, when used for a long time, cause patients to lose weight, e.g. Topiramate also exhibits a pronounced action on the central nervous system, such as anticonvulsant action. Compounds that are to be used for a long time to treat and / or prevent obesity cannot have central nervous system side effects. Compounds which have been found to be useful in the treatment and / or prevention of obesity as described above may be examined for their action on the central nervous system. E.g. anticonvulsant action can be detected. To monitor anticonvulsant properties, e.g. suitable so-called. Supramaximal-Elektroschocktest (SES-Test), also called the "Maximal-Elektroschocktest (MES-Test), described in G.Chen et al., Proceedings of the Society for Experimental Biology and Medicine, 87 (1954) 334- 339 (hereinafter referred to as "Chen et al.") And JEPToman et al., Journal of Neurophysiology 9 (1946) 231 (hereinafter referred to as "Toman et al.). The description of the invention, which is the subject of this application, expressly relates to the above tests by Chen and co-workers and by Toman and co-workers. Compounds intended to be used for a long time to treat and / or prevent obesity should be shown to be substantially ineffective in the above-mentioned Chen and co-workers and Toman and co-workers tests, and preferably also at doses higher than at least 100 mg / kg po should not show any significant effects according to the usual criteria of this test (ie "Protective Dose PD 50 by G. Chen et al.> 100 mg / kg po; with PD 50 values according to G. Chen et al. Minimal Effective Dosis (MED). Compounds which have been determined to be suitable based on the above compound determination method and which have additionally been found to be substantially ineffective by Chen and co-workers according to the above MES-Test are particularly suitable for the preparation of medicaments for the treatment and / or prevention of obesity. The above-mentioned SES-Test (or MES-Test) are pharmacological standard tests that can be performed as routine tests by service providers in the relevant area (eg Panlabs).

Zlúčeniny, ktorým bolo podľa tohto vynálezu zistené, že sú vhodné na liečenie a/alebo prevenciu obezity môžu byť spolu s bežnými farmaceutickými pomocnými látkami v rôznych liekových formách, ako sú napr. tablety, kapsule, čapíky alebo roztoky. Tieto liekové formy môžu byť pripravované známymi spôsobmi pri použití bežných pevných alebo kvapalných nosičov, ako sú mliečny cukor, škrob alebo mastok, prípadne kvapalné parafíny a/alebo uvolňovač tabliet, látok zlepšujúcich rozpustnosť alebo konzervačných činidiel. Liekové formy vhodné na použitie podľa tohto vynálezu sú opísané napr. tiež v EP 0 138 441 A2, ako aj v WO 98/00130.Compounds which have been found to be useful in the treatment and / or prevention of obesity according to the invention may be formulated in various dosage forms, such as e.g. tablets, capsules, suppositories or solutions. These dosage forms can be prepared by known methods using conventional solid or liquid carriers such as milk sugar, starch or talc, optionally liquid paraffins and / or tablet release agents, solubility enhancers or preservatives. Dosage forms suitable for use in the present invention are described e.g. also in EP 0 138 441 A2 and in WO 98/00130.

Claims (17)

1. Spôsob stanovenia zlúčenín vhodných na liečbu alebo prevenciu obezity, vyznačujúci sa tým, že sa vyberú zlúčeniny, ktoré majú schopnosť potláčať de-novo-lipogenéziu u cicavcov, najmä u ludi.What is claimed is: 1. A method for the determination of compounds suitable for the treatment or prevention of obesity, which comprises selecting compounds which have the ability to suppress de novo-lipogenesis in mammals, particularly humans. 2. Spôsob podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že ako vhodné sa stanovia také zlúčeniny, ktoré majú schopnosť potláčať aktivitu aspoň jednej karboanhydrázy, vyskytujúcej sa v organizme cicavcov.The method according to claim 1, characterized in that those compounds having the ability to inhibit the activity of at least one carboanhydrase occurring in the mammalian organism are determined to be suitable. 3. Spôsob podľa nároku 2, vyznačujúci sa tým, že sa aspoň jedna zlúčenina uvedie do'styku s aspoň jednou karboanhydrázou a následne sa identifikujú tie zlúčeniny, ktoré potláčajú aktivitu aspoň jednej karboanhydrázy.The method of claim 2, wherein the at least one compound is contacted with the at least one carbonic anhydrase and subsequently those compounds that suppress the activity of the at least one carbonic anhydrase are identified. 4. Spôsob podľa nároku 2, vyznačujúci sa tým, že sa použijú karboanhydrázy, vyskytujúce sa v organizmoch hlodavcov alebo v ľudskom organizme.Method according to claim 2, characterized in that carboanhydrases occurring in rodent organisms or in the human organism are used. 5. 5th Spôsob process podľa nároku 4, vyznačujúci according to claim 4, characterized by s with a and tým, by že sa that is použijú karboanhydrázy, vyskytujúce use the carbonic anhydrases occurring sa the v in ľudskom human organizme. body. 6. 6th Spôsob process podľa nároku 2, vyznačuj úci according to claim 2, characterized in s with a and tým, by že sa that is použijú karboanhydrázy subtypov II use carboanhydrases of subtype II a/alebo V, and / or V,
vyskytujúce sa v organizmoch cicavcov, najmä v ľudskom organizme.occurring in mammalian organisms, in particular in the human organism.
7. Spôsob podľa nároku 6, vyznačujúci sa tým, že sa použijú karboanhydrázy subtypu V, vyskytujúce sa v organizmoch cicavcov, najmä v ľudskom organizme.The method according to claim 6, characterized in that carboanhydrases of subtype V occurring in mammalian organisms, in particular in the human organism, are used. 8. Spôsob podľa nároku 3, vyznačujúci sa tým, že karboanhydrázy sú enzýmy získané chemickým alebo biotechnologickým postupom, a tým, že sa zmena aktivity týchto karboanhydráz pod vplyvom uvedených zlúčenín stanoví in vitro skúškou enzymatickej aktivity.The method according to claim 3, characterized in that the carbonic anhydrase is an enzyme obtained by a chemical or biotechnological process, and in that the change in activity of the carbonic anhydrase under the influence of said compounds is determined by an in vitro enzyme activity assay. 9. Spôsob podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že sa ako vhodné stanovia tie zlúčeniny, ktoré majú schopnosť znižovať množstvo produktov látkovej výmeny, vznikajúcich v cykle kyseliny citrónovej izolovaných žijúcich buniek cicavcov.The method according to claim 1, characterized in that those compounds having the ability to reduce the amount of metabolic products resulting from the citric acid cycle of isolated living mammalian cells are determined to be suitable. 10. Spôsob podlá nároku 9, vyznačujúci sa tým, že sa určuje zníženie tvorby citrátu, maleátu, fumarátu, α-ketoglutarátu a/alébo následných lipidických produktov, vznikajúcich v cykle kyseliny citrónovej vplyvom uvedených zlúčenín.Method according to claim 9, characterized in that the reduction of citrate, maleate, fumarate, α-ketoglutarate and / or subsequent lipidic products resulting from the citric acid cycle is determined by the action of said compounds. 11. Spôsob podľa nároku 9, vyznačujúci sa tým, že ako uvedené izolované žijúce bunky sú použité ľudské bunky alebo bunky hlodavcov.The method of claim 9, wherein said isolated living cells are human or rodent cells. 12. Spôsob podlá nároku 11, vyznačujúci sa tým, že sú použité adipocyty, alebo hepatocyty.Method according to claim 11, characterized in that adipocytes or hepatocytes are used. 13. Spôsob stanovenia zlúčenín vhodných na liečbu a/alebo prevenciu obez.ity, vyznačujúci sa tým, že sa stanovia zlúčeniny, ktoré boli postupom podľa nároku 8 a dodatočne postupom podľa nároku 9 identifikované ako vhodné na tento účel.Method for the determination of compounds suitable for the treatment and / or prevention of obesity, characterized in that compounds which have been identified as suitable for this purpose by the method of claim 8 and additionally by the method of claim 9 are determined. 14. Spôsob stanovenia zlúčenín vhodných na liečbu a/alebo prevenciu obezity, vyznačujúci sa tým, že sa vyberú zlúčeniny, ktoré boli postupom podľa nároku 1 identifikované ako vhodné na tento účel, a ktoré boli tiež štandardným testom na. stanovenie antikonvulzívnych vlastností identifikované ako v podstate neúčinné.Method for the determination of compounds suitable for the treatment and / or prevention of obesity, characterized in that compounds which have been identified as suitable for this purpose by the process of claim 1 and which are also a standard test for. determination of anticonvulsant properties identified as essentially ineffective. 15. Použitie zlúčenín, ktoré sú schopné potláčať de-novo-lipogenéziu u cicavcov, na prípravu liečiva na liečbu a/alebo prevenciu obezity.Use of compounds which are capable of inhibiting de-novo-lipogenesis in mammals for the preparation of a medicament for the treatment and / or prevention of obesity. 16. Použitie podľa nároku 15, vyznačujúce sa tým, že uvedenými zlúčeninami sú zlúčeniny, ktoré majú schopnosť potláčať aspoň jednu karboanhydrázu, vyskytujúcu sa v organizmoch cicavcov.Use according to claim 15, characterized in that said compounds are compounds having the ability to inhibit at least one carboanhydrase found in mammalian organisms. 17. Použitie podľa nároku 15 alebo 16, vyznačujúce sa t ý m, že uvedenými zlúčeninami sú zlúčeniny, ktoré majú schopnosť potláčať karboanhydrázy subtypov II a/alebo V, vyskytujúce sa v organizmoch cicavcov.Use according to claim 15 or 16, characterized in that said compounds are compounds which have the ability to inhibit carboanhydrases of subtypes II and / or V occurring in mammalian organisms. 18. Použitie podlá nároku 15, vyznačujúce sa tým, že uvedenými zlúčeninami sú zlúčeniny, ktoré v podstate nemajú antikonvulzivne vlastnosti.Use according to claim 15, characterized in that said compounds are compounds which have substantially no anticonvulsant properties. 19. Použitie zlúčenín, ktoré boli podľa nároku 1 identifikované ako vhodné na liečenie a/alebo prevenciu obezity, na prípravu liečiva na liečbu a/alebo prevenciu obezity.Use of the compounds which according to claim 1 have been identified as suitable for the treatment and / or prevention of obesity, for the preparation of a medicament for the treatment and / or prevention of obesity.
SK61-2003A 2000-07-20 2001-07-12 Method for locating compounds which are suitable for the treatment and/or prophylaxis of obesity SK287607B6 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE10035227A DE10035227A1 (en) 2000-07-20 2000-07-20 Selection and use of lipogenesis inhibitors for the treatment and prevention of obesity
PCT/EP2001/008051 WO2002007821A1 (en) 2000-07-20 2001-07-12 Method for locating compounds which are suitable for the treatment and/or prophylaxis of obesity

Publications (2)

Publication Number Publication Date
SK612003A3 true SK612003A3 (en) 2003-06-03
SK287607B6 SK287607B6 (en) 2011-03-04

Family

ID=7649538

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK61-2003A SK287607B6 (en) 2000-07-20 2001-07-12 Method for locating compounds which are suitable for the treatment and/or prophylaxis of obesity

Country Status (27)

Country Link
EP (1) EP1307262B1 (en)
JP (1) JP2004504053A (en)
KR (1) KR100818827B1 (en)
CN (1) CN1443085B (en)
AR (1) AR028730A1 (en)
AT (1) ATE278441T1 (en)
AU (2) AU7753401A (en)
BR (1) BR0112547A (en)
CA (1) CA2416647A1 (en)
CZ (1) CZ2003156A3 (en)
DE (2) DE10035227A1 (en)
DZ (1) DZ3393A1 (en)
ES (1) ES2230346T3 (en)
HK (1) HK1057499A1 (en)
HU (1) HUP0302309A3 (en)
IL (2) IL153971A0 (en)
MX (1) MXPA02012907A (en)
NO (1) NO20030233L (en)
NZ (1) NZ523960A (en)
PL (1) PL201165B1 (en)
PT (1) PT1307262E (en)
RU (1) RU2268721C2 (en)
SK (1) SK287607B6 (en)
TR (1) TR200402670T4 (en)
TW (1) TWI274157B (en)
UA (1) UA74588C2 (en)
WO (1) WO2002007821A1 (en)

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1997370B (en) 2004-05-19 2011-06-01 索尔瓦药物有限公司 Use of n-sulfamoyl-n'-arylpiperazines in preparing medicine for the prophylaxis or treatment of obesity and related conditions
MY147767A (en) 2004-06-16 2013-01-31 Janssen Pharmaceutica Nv Novel sulfamate and sulfamide derivatives useful for the treatment of epilepsy and related disorders
JP2008545650A (en) 2005-05-20 2008-12-18 ジヤンセン・フアーマシユーチカ・ナームローゼ・フエンノートシヤツプ Method for producing sulfamide derivative
AR057570A1 (en) 2005-11-14 2007-12-05 Solvay Pharm Gmbh DERIVATIVES OF N-SULFAMOIL-N'-BENZOPIRANOPIPERIDINAS ESPIROCONDENSADAS, PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS THAT INCLUDE THEM, A PROCEDURE FOR THEIR PREPARATION AND ITS USE IN THE PREPARATION OF MEDICINES FOR THE TREATMENT OF DISEASES MEDIATED BY ISOIDAS IIB
US8691867B2 (en) 2005-12-19 2014-04-08 Janssen Pharmaceutica Nv Use of benzo-fused heterocycle sulfamide derivatives for the treatment of substance abuse and addiction
US8937096B2 (en) 2005-12-19 2015-01-20 Janssen Pharmaceutica Nv Use of benzo-fused heterocyle sulfamide derivatives for the treatment of mania and bipolar disorder
US8716231B2 (en) 2005-12-19 2014-05-06 Janssen Pharmaceutica Nv Use of benzo-fused heterocycle sulfamide derivatives for the treatment of pain
US8497298B2 (en) 2005-12-19 2013-07-30 Janssen Pharmaceutica Nv Use of benzo-fused heterocycle sulfamide derivatives for lowering lipids and lowering blood glucose levels
US8492431B2 (en) 2005-12-19 2013-07-23 Janssen Pharmaceutica, N.V. Use of benzo-fused heterocycle sulfamide derivatives for the treatment of obesity
TW200812573A (en) 2006-05-19 2008-03-16 Janssen Pharmaceutica Nv Co-therapy for the treatment of epilepsy and related disorders
PL2106260T3 (en) 2007-01-25 2018-06-29 NAIA Metabolic, Inc. Insulin sensitisers and methods of treatment
MX2011000090A (en) 2008-06-23 2011-03-02 Janssen Pharmaceutica Nv Disposable patch and reusable sensor assembly for use in medical device localization and mapping systems.
US8815939B2 (en) 2008-07-22 2014-08-26 Janssen Pharmaceutica Nv Substituted sulfamide derivatives
JP6360826B2 (en) * 2012-05-24 2018-07-18 ネイア メタボリック、インコーポレイテッド Liver function improvement method
CN106770611B (en) * 2016-12-22 2019-01-29 广西师范大学 A method of entering mitochondria for cell in-situ detection small molecule compound
RU2771430C1 (en) * 2021-09-21 2022-05-04 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научный центр неврологии" (ФГБНУ НЦН) Method for the quantitative determination of anticonvulsants in the blood plasma of patients with epilepsy

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4552897A (en) * 1983-02-01 1985-11-12 American Cyanamid Company Salts of 1-(aminodihalophenyl)-2-aminoethanols and antilipogenic compositions prepared therefrom
US6288095B1 (en) * 1987-09-04 2001-09-11 Beecham Group P.L.C. Compounds
US5126324A (en) * 1990-06-07 1992-06-30 Genentech, Inc. Method of enhancing growth in patients using combination therapy
AU675996B2 (en) * 1992-10-29 1997-02-27 Genentech Inc. Method for treatment or prevention of obesity
AU693478B2 (en) * 1994-11-10 1998-07-02 Metabolic Pharmaceuticals Limited Treatment of obesity
CA2258893C (en) * 1996-06-28 2005-06-14 Ortho-Mcneil Pharmaceutical, Inc. Anticonvulsant sulfamate derivatives useful in treating obesity
US20030100594A1 (en) * 2001-08-10 2003-05-29 Pharmacia Corporation Carbonic anhydrase inhibitor

Also Published As

Publication number Publication date
EP1307262A1 (en) 2003-05-07
RU2268721C2 (en) 2006-01-27
SK287607B6 (en) 2011-03-04
MXPA02012907A (en) 2003-09-22
AU7753401A (en) 2002-02-05
BR0112547A (en) 2003-07-01
NZ523960A (en) 2004-12-24
PL201165B1 (en) 2009-03-31
HUP0302309A2 (en) 2003-11-28
KR20030022284A (en) 2003-03-15
NO20030233L (en) 2003-03-19
JP2004504053A (en) 2004-02-12
PL363518A1 (en) 2004-11-29
WO2002007821A1 (en) 2002-01-31
IL153971A0 (en) 2003-07-31
DZ3393A1 (en) 2002-01-31
UA74588C2 (en) 2006-01-16
PT1307262E (en) 2004-12-31
CN1443085A (en) 2003-09-17
CN1443085B (en) 2010-04-28
EP1307262B1 (en) 2004-10-06
DE10035227A1 (en) 2002-01-31
TWI274157B (en) 2007-02-21
AR028730A1 (en) 2003-05-21
HK1057499A1 (en) 2004-04-08
IL153971A (en) 2009-07-20
AU2001277534B2 (en) 2005-09-29
CA2416647A1 (en) 2003-01-20
KR100818827B1 (en) 2008-04-01
AU2001277534B9 (en) 2006-02-23
TR200402670T4 (en) 2004-11-22
ES2230346T3 (en) 2005-05-01
ATE278441T1 (en) 2004-10-15
NO20030233D0 (en) 2003-01-17
DE50104023D1 (en) 2004-11-11
CZ2003156A3 (en) 2003-06-18
HUP0302309A3 (en) 2005-06-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SK612003A3 (en) Method for locating compounds which are suitable for the treatment and/or prophylaxis of obesity
US6946243B2 (en) Method of identifying compounds suitable for treatment and/or prophylaxis of obesity
Johnson et al. Why has butyrylcholinesterase been retained? Structural and functional diversification in a duplicated gene
US20180098964A1 (en) Genotype specific methods for treating human subjects using 4-methylpyrazole
Ryan et al. Isolation and characterization of cells resistant to ML236B (compactin) with increased levels of 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase.
Miyajima et al. Molecular characterization of gene expression in human lactate dehydrogenase‐A deficiency
Inoue et al. Brain aldehyde dehydrogenase activity in rat strains with high and low ethanol preferences
Deitrich et al. Effect of administered ethanol on protein kinase C in human platelets
JP2023517997A (en) A novel nutrient for enhancing load-induced muscle hypertrophy
ZA200300444B (en) Method for locating compounds which are suitable for the treatment and/or prophylaxis of obesity.
Hanke et al. Metabolic transformation of rabbit skeletal muscle cells in primary culture in response to low glucose
Willemsen et al. A novel 4 bp deletion mutation in the FALDH gene segregating in a Turkish family with Sjögren-Larsson syndrome
Redila et al. Effects of ethanol on an acetaldehyde drug discrimination with a conditioned taste aversion procedure
Chen et al. Lower micromolar activity of the antifungal imidazoles on the bacterial-type bifunctional aldehyde/alcohol dehydrogenase (AdhE) in Cryptosporidium parvum and in vitro efficacy against the zoonotic parasite
Sandler et al. Tyramine and depressive illness
CN118021831A (en) Application of Protodioscin as ACE2 Agonist
CN118105369A (en) Eight compounds capable of improving ACE2 activity
Kalant Current world trends in alcoholism research
SONONE EFFECT OF THE DRUG IMIPRAMINE ON ENZYMES OF RAT BRAIN

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Patent lapsed due to non-payment of maintenance fees

Effective date: 20120712