SK287607B6 - Spôsob stanovenia zlúčenín vhodných na inhibíciu aktivity aspoň jednej karboanhydrázy a použitie uvedených zlúčenín ako liečiva na liečbu a/alebo prevenciu obezity - Google Patents
Spôsob stanovenia zlúčenín vhodných na inhibíciu aktivity aspoň jednej karboanhydrázy a použitie uvedených zlúčenín ako liečiva na liečbu a/alebo prevenciu obezity Download PDFInfo
- Publication number
- SK287607B6 SK287607B6 SK61-2003A SK612003A SK287607B6 SK 287607 B6 SK287607 B6 SK 287607B6 SK 612003 A SK612003 A SK 612003A SK 287607 B6 SK287607 B6 SK 287607B6
- Authority
- SK
- Slovakia
- Prior art keywords
- compounds
- obesity
- treatment
- prevention
- identified
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
- C12Q1/32—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving dehydrogenase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/527—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving lyase
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/06—Antihyperlipidemics
Abstract
Spôsob stanovenia zlúčenín, ktoré sú vhodné na liečenie a/alebo prevenciu obezity, ktorý spočíva v stanovení schopnosti skúšaných zlúčenín potláčať de-novo-lipogenézu u cicavcov. Ďalej je opísané použitie zlúčenín, ktoré majú schopnosť potláčať de-novo-lipogenézu u cicavcov, na prípravu liečiv na liečenie a/alebo prevenciu obezity.
Description
Oblasť techniky
Vynález sa týka spôsobu stanovenia vhodných zlúčenín na liečbu alebo prevenciu obezity. Vynález sa týka najmä použitia zlúčenín, ktoré majú schopnosť potláčať de-novo-lipogenézu u cicavcov a ktoré v podstate nepôsobia na centrálny nervový systém (zentrales Nervensystem - ZNS), na prípravu liečiv na liečenie alebo prevenciu obezity.
Doterajší stav techniky
Obezita sa v súčasnosti stáva najmä vo vyspelých štátoch problémom pre zdravotný stav obyvateľstva, ktorý je dôsledkom nevyváženej a na tuky bohatej výživy. S prírastkom podielu obyvateľstva s nadmernou telesnou hmotnosťou rastú aj následky obezity, ktoré siahajú od osobnej nespokojnosti po ochorenie srdca a krvného obehu a/alebo do určitých foriem cukrovky. V súčasnosti už existujú niektoré liečebné postupy zamerané na liečenie alebo prevenciu obezity. Príkladom takého postupuje použitie látok potláčajúcich lipázy, ktoré redukujú štiepenie tukov v zažívacom trakte a týmto spôsobom aj energetický účinok prijatej potravy. Pri tejto terapii tuky aspoň čiastočne nepodliehajú rozkladu a sú vylučované. Je potrebné, aby boli vyvinuté ďalšie prostriedky na liečbu a prevenciu obezity, ktoré by doplnili doterajšie spôsoby liečby.
Podstata vynálezu
Bolo zistené, že na účinnú liečbu a/alebo prevenciu obezity sú vhodné zlúčeniny, ktoré môžu u cicavcov a najmä u ľudí potláčať de-novo-lipogenézu. Dobré výsledky sú dosiahnuté v prípadoch, keď sú tieto zlúčeniny podávané počas dlhšieho času, napríklad počas niekoľkých týždňov.
Predmetom tohto vynálezu je spôsob stanovenia zlúčenín, ktoré sú vhodné na liečbu alebo prevenciu obezity, pričom sú vybrané také zlúčeniny, ktoré sú schopné potláčať de-novo-lipogenézu u cicavcov, najmä u ľudí. Predmetom tohto vynálezu je tiež použitie zlúčenín, ktoré majú schopnosť potláčať de-novo-lipogenézu u cicavcov a ktoré v podstate nemajú žiadny vplyv na centrálnu nervovú sústavu, ako je antikonvulzívne pôsobenie, na prípravu liečiv na liečenie a/alebo prevenciu obezity.
Pojem de-novo-lipogenéza (ďalej skratka DNL) znamená syntézu telu vlastných mastných kyselín zo sacharidov v organizme cicavcov. Táto syntéza nastáva v cytozole telesných buniek, a je založená na tzv. cykle kyseliny citrónovej alebo Krebs-Martiovom cykle. Pri biochemickej reakcii prebiehajúcej v organizme z obidvoch základných zložiek, ktorými sú pyruvát, pochádzajúci zo sacharidov, a hydrogenuhličitan, cez rôzne medzistupne, ako napr. maleát, fumarát a α-ketoglutarát, nakoniec vzniká citrát. Ak je syntetizovaný prebytok citrátu, môže sa tento prebytok cez medzistupeň, ktorým je acetylkoenzým A, premieňať na mastné kyseliny (= lipidické následné produkty), ktoré vytvárajú tuky a tieto tuky sa ukladajú do tukových buniek (adipocytov). Neúmerným usádzaním tukov z mastných kyselín dochádza všeobecne k obezite. Na cykle kyseliny citrónovej sa zúčastňujú rôzne enzýmy. Látková premena prebiehajúca v citrátovom cykle závisí podstatným spôsobom od množstva hydrogenuhličitanu, ktorý je k dispozícii. Množstvo hydrogenuhličitanu, ktoré je k dispozícii závisí od rýchlosti, ktorou môže vzniknúť oxid uhličitý. Táto reakcia, ktorou vzniká hydrogenuhličitan, je katalyzovaná tzv. karboanhydrázami. Na katalýze reakcií, ktorými je poskytovaný hydrogenuhličitan pre cyklus kyseliny citrónovej sa z dosiaľ známych karboanhydráz a ich izozýmov u cicavcov zúčastnia prevažne karboanhydrázové izozýmy sub typov II (= CA II) a V (= C A V). Významné sú karboanhydrázy subtypu V, pretože sú prítomné v mitochondriách. V mitochondriách tiež prebieha cyklus kyseliny citrónovej.
Na potlačenie DNL v bunkách cicavcov sú rôzne možnosti. Ich cieľom je vo všetkých prípadoch potláčať látkovú výmenu, ktorá prebieha v cykle kyseliny citrónovej. Tým sa môže znížiť koncentrácia prebytočné produkovaného citrátu, ktorý je k dispozícii na syntézu mastných kyselín. Podľa tohto vynálezu môže byť produkcia DNL výhodne potlačená tak, že sa potlačia karboanhydrázy, ktoré katalyzujú reakcie dodávajúce hydrogenuhličitan pre cyklus kyseliny citrónovej. Cieľom tohto vynálezu je výhodné potlačenie karboanhydráz subtypov II a/alebo V, výhodne karboanhydráz CA V.
Zlúčeniny, ktoré môžu nešpecifický potláčať karboanhydrázy (= nešpecifické alebo klasické CA-inhibítory) sú známe a sú už dlhší čas používané ako liečivá, najmä ako diuretiká, alebo v oftalmológii. Prehľad použitia týchto klasických CA-inhibítorov uvádza napr. C.T.Supuran v Expert Opinion on Therapeutic Patents, 10 (5), 575-600, (2000). Slovné spojenie „špecifické CA-inhibítory“ znamená také zlúčeniny, ktoré prevažnou mierou potláčajú len jeden subtyp CA (napr. subtyp CA V) alebo určitú skupinu subtypov CA. Použitie klasických CA-inhibítorov na cielené liečenie a/alebo prevenciu obezity nie je dosiaľ známe.
Všeobecne sa predpokladá, že väčšina známych prípadov obezity je spôsobená nadmerným podielom tukov v potravinách. Vo vyspelých krajinách, ako sú Spojené štáty americké, tvoria tuky až 30 % príjmu potra2 vy obéznych ľudí. Podľa súčasných poznatkov dochádza k ukladaniu tukov a následne k obezite prevažne v dôsledku príjmu tukov v potravinách, preto potlačenie DNL ovplyvňujúce metabolizmus sacharidov nemá na tento proces žiadny vplyv.
Aj keď sa potlačením DNL dosiahne zníženie ukladania mastných kyselín v adipozytoch, je príspevok DNL na tomto efekte, znižujúcom ukladanie mastných kyselín v telesných bunkách dosiaľ považovaný za nedostatočný na liečenie a/alebo prevenciu ľudskej obezity. Súhrn odborných názorov na tento problém sa nachádza napr. v publikácii M.K.Hellerstein, European Journal of Clinical Nutrition 53 (1) 53-65, (1999). Tento názor, prevládajúci v odbornom svete, stál dosiaľ v ceste cielenému hľadaniu a vývoju liečiv na liečenie a/alebo prevenciu obezity, ktoré by spočívalo na princípe potlačenia DNL.
V rámci tohto vynálezu bolo s prekvapením zistené, že zlúčeniny, ktoré majú schopnosť potláčať DNL u cicavcov, najmä u ľudí, môžu byť účinnejšie použité na liečenie a/alebo prevenciu obezity, najmä v prípadoch, keď tieto zlúčeniny môžu byť chorými užívané počas dlhšieho času, napr. v období dlhšom ako šesť týždňov. Tieto obézne osoby môžu dosiahnuť v priebehu tohto dlhšieho obdobia významné zníženie telesnej hmotnosti potlačením DNL, aj keď DNL má len relatívne nízky vplyv na telesný tuk ukladaný v adipocytoch. Potlačením DNL počas dlhšieho obdobia sa tento nízky vplyv môže tak akumulovať, že celkovo môže spôsobiť významné zníženie telesnej hmotnosti.
Na príklade látky Topiramat sa dá ukázať, že spôsob podľa tohto vynálezu je skutočne vhodný na cielené hľadanie zlúčenín vhodných na liečenie a/alebo prevenciu obezity. Topiramat je antiepileptikum opísané v EP 0 138 441 A2. O Topiramate je známe, že vykazuje multifaktoriálne farmakologické pôsobenie. Môže blokovať sodíkové kanály závislé od napätia a tým stabilizovať membránový potenciál buniek, aktivuje GABA-Receptory a tým zosilňuje inhibíciu spôsobenú GABA, pôsobí ako inhibítor karboanhydrázy a nakoniec je schopný potláčať kainat/AMPA-receptory, ktoré sú jedným typom glutamátových receptorov, čím dochádza k zníženiu výskytu AMPA-indukovaných prúdov. Topiramat tiež vykazuje výrazné pôsobenie na CNS. Nie je známe, či antiepileptické vlastnosti Topiramatu súvisia s už uvedenými farmakologicky relevantnými faktormi.
Z dokumentu WO 98/00130 je známe, že Topiramat má tiež farmakologické vlastnosti, z ktorých vyplýva, že by mohol byť vhodný na liečenie obezity. Tieto vlastnosti boli zistené ako sprievodné účinky pri dlhodobom skúšaní jeho liečivých účinkov na epilepsiu. Dosiaľ nie je známe, ktoré farmakologické vlastnosti Topiramatu spôsobujú pokles telesnej hmotnosti pacientov trpiacich epilepsiou. Topiramat patrí do skupiny antikonvulzívnych látok na liečenie obezity všeobecného vzorca (I), opísaných v dokumente WO 98/00130.
Teraz mohlo byť dokázané, že použitím spôsobu podľa tohto vynálezu je Topiramat silným CA-inhibítorom, že je silným inhibítorom najmä karboanhydráz subtypov II a V, vyskytujúcich sa u cicavcov, a že účinne potláča DNL v bunkách cicavcov. Podľa postupu použitého podľa tohto vynálezu sa mohlo dokázať, že dosiaľ nevysvetliteľné účinky tejto látky spôsobujúcej zníženie telesnej hmotnosti u pacientov trpiacich epilepsiou sú vedľajšími farmakologickými účinkami Topiramatu, ktoré v podstate spočívajú v jeho schopnosti účinne potláčať DNL u cicavcov.
Na základe toho možno očakávať, že použitím postupov podľa tohto vynálezu bude možné v budúcnosti stanovovať zlúčeniny vhodné na liečenie a/alebo prevenciu obezity. Spôsob podľa tohto vynálezu prvýkrát umožňuje pomerne rýchlo a ľahko stanoviť farmakologicky zaujímavé zlúčeniny na princípe ich schopnosti potlačenia DNL. Použitím postupov podľa tohto vynálezu môžu byť na základe tohto princípu vybrané pomocou prvého orientačného postupu látky potenciálne vhodné na liečenie a prevenciu obezity, bez nutnosti vykonávať dlhé a drahé pokusy in vivo, ako sú pokusy, pri ktorých sa zisťuje vplyv kŕmenia na pokusných zvieratách.
Toto zistenie prinieslo prekvapujúce výsledky, lebo pri predchádzajúcom výskume farmakologických vlastností bol jeho účinok ako CA-inhibítora vždy hodnotený ako nevýrazný alebo len nízky a z hľadiska terapeutického ako bezvýznamný (pozri napr. B.E.Maryanoff a kol., Journal of Medicinal Chemistry 30, 880-887 (1987); B.E.Maryanoff a kol., Journal of Medicinal Chemistry 41 1315-1343 (1998); S.J.Dodgson a kol., Epilepsia 41 (1), 35-39 (2000)). V uvedených štúdiách boli na stanovenie CA-inhibičného účinku Topiramatu použité vždy skúšobné roztoky obsahujúce CA rôznych cicavcov, ktoré navyše ešte obsahovali rôzne telové orgány ako krv alebo rôzne tkanivá.
Podľa prvého uskutočnenia tohto vynálezu sa môžu nájsť zlúčeniny vhodné na liečenie a/alebo prevenciu obezity tak, že sú vybrané také zlúčeniny, ktoré majú schopnosť aspoň u niektorých cicavcov potláčať aktivitu karboanhydrázy. Pokusne môže byť uvedená aspoň jedna skúšaná zlúčenina do styku s jednou karboanhydrázou a následne sa môžu známym spôsobom identifikovať tie zlúčeniny, ktoré potláčajú aktivitu aspoň jednej karboanhydrázy. Výhodne sa pri tomto uskutočnení používajú karboanhydrázy cicavcov ako ľudí alebo hlodavcov, napr. krýs, myší alebo morčiat, najmä karboanhydrázy subtypov II a/alebo V. Výhodné je použitie ľudských karboanhydráz. Vhodné karboanhydrázy môžu byť napr. z cicavcov izolované a prípadne prečistené, alebo môžu byť výhodne pripravené známymi chemickými alebo biotechnologickými postupmi.
V preferovanom variante tohto prvého uskutočnenia môže byť meraná zmena aktivity karboanhydrázy vplyvom skúšaných zlúčenín pomocou známej in vitro skúšky enzymatickej aktivity, pri ktorej sú používané izolované a od sprievodných látok aspoň z väčšej časti vyčistené karboanhydrázy. Výhodne sú používané karboanhydrázy pripravené chemickým alebo biotechnologickým spôsobom, lebo tieto sú k dispozícii na použitie v mimoriadne čistej forme. Skúšky na stanovenie in vitro aktivity karboanhydráz sú známe. V rámci in vitro skúšok enzymatickej aktivity uskutočňovaných pri postupoch podľa tohto vynálezu, pri ktorých je meraná zmena aktivity karboanhydrázy, sa napr. používa skúška, pri ktorej sa meria zmena pH vplyvom karboanhydrázy (pozri K.M.Wilbur, N.G.Andersen, Journal of Biological Chemistry 176 147-154 (1948); G.Sanyal, T.H.Mären, Journal of Biological Chemistry 256, 608-612 (1981), uskutočňuje sa meranie pri použití stop-flow metódy (pozri R.G.Khalifah, Journal of Biological Chemistry 246, 2561-2573 (1971)) alebo sa používa 4-nitrofenylacetátesterázová metóda (pozri Y.Pocker, J.T. Stone, Journal of the American Chemical Society 87 5497-5498 (1965)). Pri poslednej spomenutej skúške sa meria rýchlosť hydrolýzy 4-nitrofenyl-acetátu vplyvom skúšanej karboanhydrázy, pričom je využívaná schopnosť karboanhydráz pôsobiť súčasne ako esterázy.
V tejto súvislosti je na použitie pri postupoch podľa tohto vynálezu vynikajúci spôsob stanovenia CA-inhibičného účinku zlúčenín, opísaný v publikácii C.T.Supuran a kol., European Journal of Medicinal Chemistry 33, 577-594 (1998) (pozri najmä str. 592; ďalej citované ako „Supuran a kol.“) alebo v publikácii A.Scozzafava a kol., Journal of Medicinal Chemistry 42 3690-3700 (1999) (pozri najmä str. 3697; ďalej citované ako „Scozzafava a kol.“). Opis vynálezu, ktorý je predmetom tejto prihlášky vynálezu, sa vyslovene vzťahuje na uvedené spôsoby stanovenia podľa Supurana a spolupracovníkov a podľa Scozzafava a spolupracovníkov. Zlúčeniny, ktoré podľa jedného z týchto in vitro stanovenia aktivít podľa Supurana a spolupracovníkov alebo podľa Scozzafava a spolupracovníkov vykazujú hodnoty koncentrácií IC50 10 pmol/l alebo nižšie (t. j. majú vyššiu účinnosť), môžu byť v zmysle tohto vynálezu vybrané ako vhodné zlúčeniny s CA— inhibičnými účinkami (= CA-inhibítory). Ak má byť stanovená aktivita ľudských CA-subtypov, môžu byť vhodnejšie iné metódy, ako je metóda založená na 4-nitrofenylacetát-esteráze. Vhodné môžu byť najmä metódy, ktoré tiež umožňujú sledovať pomerne rýchly priebeh reakcie.
Skúškou enzymatickej aktivity metódou podľa Scozzafava a kol. (pozri skôr), ktorá je založená na reakcii
4-nitrofenylacetát-esterázy (pôvodne opísanej v publikácii Y.Pocker a J.T.Stone, Biochemistry 6 668-678 (1967), bolo v rámci tohto vynálezu dokázané, že Topiramat vykazuje výrazné inhibičné pôsobenie na ľudskú karboanhydrázu subtypu II, získanú biotechnologickým spôsobom (IC50 = 5 nmol/1), a že toto inhibičné pôsobenie je výrazne silnejšie, ako inhibičné pôsobenie klasických CA-inhibítorov acetazolamidu alebo metazolamidu, ktoré boli použité ako porovnávacie látky. Ľudská karboanhydráza subtypu II bola získaná spôsobom opísaným v publikácii Scozzofava a kol.
Takou istou skúškou bolo dokázané, že Topiramat vykazuje tiež výrazné inhibičné pôsobenie na karboanhydrázu myší subtypu Va (= mCA Va) (IC50 = 74 nmol/1) získanú biotechnologickým spôsobom. V tomto prípade bol odlišne, od predpisu uvádzaného v publikácii Scozzafava a kol., použitý enzým mCA Va v koncentrácii 120 nM. Karboanhydráza mCA Va bola získaná postupom, opísaným v publikácii H.R.Heck a kol., Journal of Biological Chemistry 269, 24742-24746, na základe v podstate známeho spôsobu. Bol použitý kmeň baktérií BL 21 (DE3) a plazmidvektor koordinujúci mCA Va sekvenciu, pod kontrolou T7-promótora indukovaného izopropyl-p-D-tiogalaktopyranosidom (IPTG). Bakteriálna kultúra bola naočkovaná pri 37 °C počas miešania v kvapalnom médiu Luria-Bertani obsahujúcom ampicilín (100 pg/ml) a jej rast bol spektrofotometricky sledovaný pri 600 nm. Keď bakteriálna kultúra vstúpila do exponenciálnej rastovej fázy, bol pridaný IPTG v konečnej koncentrácii 1 nmol/1. Po trojhodinovej inkubačnej dobe (37 °C, počas miešania) bola bakteriálna kultúra odstredená pri 7000 g počas 15 minút a horná vrstva bola odstránená. Do získaného peletu bola pridaná redestilovaná voda a lyzozým (1,00 pg/ml). Bunky boli rozložené ultrazvukom tak, že sa na suspenzie baktérií s objemom 10 ml, pôsobilo v hore otvorených nádobkách ultrazvukom, premšovane štyrikrát počas 3 minút. Po každom trojminútovom pôsobení ultrazvuku sa stanovila absorpcia vzoriek pri 600 nm, pričom sa vždy 100 μΐ vzorka rozriedila 900 μΐ redestilovanej vody. Konečný stav bol dosiahnutý, keď bola hodnota absorpcie vzorky pri 600 nm asi 1/10 počiatočnej hodnoty. Po ukončení rozkladu buniek bol pridaný CaCl2-viažuci pufer (výrobok firmy Stratagene), a získaný bunkový lyzát bol podrobený čisteniu na kolóne naplnenej kalmodulínovou sorpčnou živicou. Toto čistenie je založené na vysokej afinite kalmodulínovej domény viazanej na živicu v koncovej skupine, schopnej viazať sa na túto doménu, obsahujúcej dusík získaného proteínu mCA Va. Čistenie sa uskutočňuje v podstate známym spôsobom (pozri príručka „Affinity LIC Cloning and Protein Purification Kit Manual“ firmy Stratagene).
Podľa druhého uskutočnenia spôsobu podľa tohto vynálezu je možné nájsť látky vhodné na liečenia a/alebo prevenciu tým spôsobom, že sa vyberú také zlúčeniny, ktoré znižujú množstvo produktov látkovej výmeny, vznikajúcich v cykle kyseliny citrónovej v izolovaných živých bunkách cicavcov, alebo znižujú množstvo lipidických následných produktov cyklu kyseliny citrónovej. Ako produkty látkovej výmeny cyklu kyseliny citrónovej, ktorých množstvo sa vplyvom skúšaných zlúčenín merateľne znižuje, sú vhodné v kyslom prostredí rozpustné produkty látkovej výmeny, ako sú citrát, maleát, fumarát a/alebo α/alebo a-ketoglutarát, výhodne citrát. Ako produkty látkovej výmeny sú ďalej vhodné lipidické následné produkty cyklu kyseliny citrónovej, ako sú voľné mastné kyseliny. V druhom uskutočnení je tiež skúmaná schopnosť zlúčenín potláčať aktivitu aspoň jednej karboanhydrázy cicavcov; použitý skúšobný model je len ináč usporiadaný ako v predchádzajúcom uskutočnení. Princípom tohto druhého spôsobuje v podstate známy prenos rádioaktivity zo substrátov cyklu kyseliny citrónovej označených 14C-izotopom na metabolické medziprodukty alebo na následné produkty cyklu kyseliny citrónovej izolované zo žijúcich buniek cicavcov a porovnanie zistených výsledkov s výsledkami získanými za rovnakých podmienok, ale za prítomnosti zlúčenín, ktoré majú CAinhibičné účinky. V tomto uskutočnení môžu byť úspešne použité izolované živé bunky hlodavcov, ako sú krysy, myši alebo morčatá. Výhodne sú používané ľudské bunky. Ak sú použité bunky hlodavcov, prichádzajú do úvahy adipocyty alebo hepatocyty. Výhodné je použitie adipocytov hlodavcov. Ak sú použité ľudské bunky, môžu nimi byť adipocyty alebo hepatocyty. Výhodné je použitie ľudských hepatocytov. Bunky cicavcov použité pri tomto uskutočnení vynálezu môžu byť získané bežnými spôsobmi množenia a klonovania buniek. Môžu byť použité prirodzené alebo biotechnologický modifikované bunky cicavcov. Pri stanovení prenosu rádioaktivity do medziproduktov cyklu kyseliny citrónovej, ktoré sú rozpustné v kyslom prostredí, sa ako 14C-označený substrát výhodne používa 14C-hydrogénuhličitan (= NaH[l4C]O3). Pri stanovení prenosu rádioaktivity do lipidických následných produktov cyklu kyseliny citrónovej, sa ako 14C-označený substrát výhodne používa [U-14C]glukóza.
Preferovaný variant druhého uskutočnenia stanovenia schopnosti zlúčenín potláčať DNL u cicavcov je uvedený v publikácii S.A.Hazen a kol., FASEB Journal 10 (4)(1996) 481-490 (ďalej citovaný ako „Hazen a kol.“). Opis vynálezu, ktorý je predmetom tejto prihlášky vynálezu, sa výslovne vzťahuje na uvedený spôsob stanovenia podľa Hazena a kol. Zlúčeniny, ktoré podľa tohto stanovenia aktivít podľa Hazena a spolupracovníkov významne potláčajú prenos rádioaktivity 14C-označených látok, sú prekurzory cyklu kyseliny citrónovej, napr. prenos z l4C-hydrogenuhličitanu do citrátu, maleátu, fumarátu a/alebo α-keto-glutarátu s IS50hodnotou aspoň 10 pmol/l alebo nižšou (=vyššia účinnosť), môžu byť vybrané ako vhodné zlúčeniny v zmysle tohto vynálezu.
V skúšobnom modeli, opísanom Hazenom a spolupracovníkmi ktorý bol aplikovaný v rámci tohto vynálezu, vykazoval Topiramat výraznú schopnosť potláčať vznik rozpustných produktov látkovej výmeny v kyslom prostredí cyklu kyseliny citrónovej, adipocytmi línie buniek 3T3-F442A krýs, získaných biotechnologickým spôsobom. Toto pôsobenie Topiramatu (IC50= =348 nmol/1) bolo výrazne silnejšie ako pôsobenie klasického CA-inhibítora Etoxyolamidu, s ktorým bolo vykonané meranie ako s porovnávacou látkou.
Vo výhodnejšom variante spôsobu stanovenia zlúčenín, ktoré sú vhodné na liečbu a/alebo na prevenciu obezity, sú vybrané také zlúčeniny, ktoré sa v uvedenom uskutočnení tohto vynálezu, najmä v uvedenej in vitro skúške enzymatickej aktivity, ukázali byť vhodnými na potlačenie aspoň jednej karboanhydrázy cicavca a ktoré sa tiež v uvedenom druhom uskutočnení tohto vynálezu ukázali byť vhodnými na zníženie množstva produktov látkovej výmeny vytváranými izolovanými živými bunkami cicavcov v cykle kyseliny citrónovej. V prvom uskutočnení tohto vynálezu môže byť rýchle a účinne preskúmaná schopnosť jednotlivých zlúčenín potláčať karboanhydráty cicavcov. Druhé uskutočnenie tohto vynálezu poskytuje okrem iných informácie o tom, či majú vyšetrované zlúčeniny tiež schopnosť prenikať do mitochondrií žijúcich buniek cicavcov, kde sa vyskytuje CA V. Na výber vhodných zlúčenín môže byť použité prvé a druhé uvedené uskutočnenie tohto vynálezu, alebo môže byť toto uskutočnenie použité v ľubovoľnom poradí.
Podľa toho vynálezu sú zlúčeniny, ktoré majú schopnosť potláčať DNL u cicavcov, vhodné na prípravu liečiv na liečenie a/alebo prevenciu obezity. Pritom sú vybrané také zlúčeniny, ktoré majú schopnosť potláčať aspoň jednu karboanhydrázu cicavcov. Vybrané zlúčeniny musia byť fyziologicky znášanlivé a musia spĺňať požiadavky všeobecne kladené na liečivá, t. j. napr. požiadavky, ktoré sa vzťahujú na bezpečnosť a znášanlivosť liečiv. Výhodné je použitie zlúčenín, ktoré potláčajú karboanhydrázy cicavcov subtypu II a/alebo V. Výhodnejšie je použitie zlúčenín, ktoré špecificky potláčajú CA II a/alebo CA V, najmä CA V.
Zo súčasného stavu techniky známe zlúčeniny, vyznačujúce sa CA-inhibičným pôsobením, ktoré pri dlhšom užívaní spôsobujú pacientom zníženie telesnej hmotnosti, napr. Topiramat, vykazujú tiež výrazné pôsobenie na centrálny nervový systém, ako je antikonvulzívne pôsobenie. Zlúčeniny, ktoré majú byť užívané počas dlhšieho odobia na účely liečenia a/alebo prevencie obezity, nemôžu mať vedľajšie účinky na centrálny nervový systém. Zlúčeninám, ktorým bolo uvedeným spôsobom zistené, že sú vhodné na liečenie a/alebo prevenciu obezity, môže byť vyšetrované ich pôsobenie na centrálny nervový systém. Napr. môže byť zisťované antikonvulzívne pôsobenie. Na sledovanie antikonvulzívnych vlastností je napr. vhodný tzv. „Supramaximal-Elektroschocktest“ (SES-Test), ktorý je tiež nazývaný „Maximal-Elektroschocktest“ (MES-Test), opísaný v publikácii G.Cben a kol., Proceedings of the Society for Experimental Biology and Medicíne, 87 (1954) 334-339 (ďalej citované ako „Chen a kol.“) a v publikácii J.E.P.Toman a kol., Journal of Neurophysiology 9 (1946) 231 (ďalej citované ako „Toman a kol.“). Opis vynálezu, ktorý je predmetom tejto prihlášky vynálezu, sa výslovne vzťahuje na uvedené skúšky podľa Chena a spolupracovníkov a podľa Tomana a spolupracovníkov. Zlúčeniny, ktoré majú byť užívané dlhší čas na účely liečenia a/alebo prevencie obezity, by sa mali v uvedenej skúške podľa Chena a spolupracovníkov a podľa Tomana a spolupracovníkov ukázať ako v podstate neúčinné a výhodne by tiež pri dávkach vyšších ako aspoň 100 mg/kg p.o. nemali vykazovať žiadne významné účinky podľa bežných kritérií tejto skúšky (t. j. „Protective Dose“ PD50 podľa G.Chena a kol.
>100 mg/kg p.o.; pričom PD50-hodnoty podľa G.Chena a kol. zodpovedajú v podstate bežnému dávkovaniu ako „Minimal Effective Dosis“ - MED). Zlúčeniny, ktoré boli na základe uvedeného spôsobu stanovenia zlúčenín určené ako vhodné, a pri ktorých bolo dodatočne zistené, že sú podľa uvedeného MES-Testu podľa Chena a spolupracovníkov v podstate neúčinné, sú mimoriadne vhodné na prípravu liečiv na liečenie a/alebo prevenciu obezity. Uvedené skúšky SES-Test (prípadne MES-Test) sú farmakologické štandardné skúšky, ktoré môžu byť firmami poskytujúcimi služby v príslušnej oblasti (napr. firma „Panlabs“) vykonávané ako rutinné skúšky.
Zlúčeniny, ktorým bolo podľa tohto vynálezu zistené, že sú vhodné na liečenie a/alebo prevenciu obezity môžu byť spolu s bežnými farmaceutickými pomocnými látkami v rôznych liekových formách, ako sú napr. tablety, kapsuly, čapíky alebo roztoky. Tieto liekové formy môžu byť pripravované známymi spôsobmi pri použití bežných pevných alebo kvapalných nosičov, ako sú mliečny cukor, škrob alebo mastenec, prípadne kvapalné parafíny a/alebo uvoľňovač tabliet, látok zlepšujúcich rozpustnosť alebo konzervačných činidiel. Liekové formy vhodné na použitie podľa tohto vynálezu sú opísané napr. tiež v EP 0 138 441 A2, ako aj v WO 98/00130.
Claims (12)
- PATENTOVÉ NÁROKY že sa použijú karboanhydrázy, vyskytuže sa použijú karboanhydrázy, vyskytuže sa použijú karboanhydrázy subtypov1. Spôsob stanovenia zlúčenín vhodných na liečbu a/alebo prevenciu obezity, vyznačujúci sa tým, že aspoň jedna zlúčenina je uvedená do kontaktu s aspoň jednou karboanhydrázou a identifikujú sa tie zlúčeniny, ktoré inhibujú aktivitu aspoň jednej karboanhydrázy.
- 2. Spôsob podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, júce sa v organizmoch hlodavcov alebo v ľudskom organizme.
- 3. Spôsob podľa nároku 2, vyznačujúci sa tým, júce sa v ľudskom organizme.
- 4. Spôsob podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým,II a/alebo V, vyskytujúce sa v organizmoch cicavcov, najmä v ľudskom organizme.
- 5. Spôsob podľa nároku 4, vyznačujúci sa tým, že sa použijú karboanhydrázy subtypu V, vyskytujúce sa v organizmoch cicavcov, najmä v ľudskom organizme.
- 6. Spôsob podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že karboanhydrázy sú prítomné ako izolované enzýmy získané chemickými alebo biotechnologickými postupmi, a kde zmena aktivity karboanhydráz pod vplyvom zlúčenín je stanovená in vitro skúškou enzymatickej aktivity.
- 7. Spôsob podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že sa ako vhodné stanovia tie zlúčeniny, ktoré majú schopnosť znižovať množstvo produktov látkovej výmeny, vznikajúcich v cykle kyseliny citrónovej izolovaných žijúcich buniek cicavcov.
- 8. Spôsob podľa nároku 7, vyznačujúci sa tým, že je určené zníženie množstva citrátu, maleátu, fumarátu, a/alebo cc-ketoglutarátu vznikajúcich v bunkách v cykle kyseliny citrónovej a/alebo zníženie tvorby následných lipidových produktov v cykle kyseliny citrónovej pod vplyvom zlúčenín.
- 9. Spôsob podľa nároku 7, vyznačujúci sa tým, že ako uvedené izolované žijúce bunky sú použité ľudské bunky alebo bunky hlodavcov.
- 10. Spôsob podľa nároku 9, vyznačujúci sa tým, že sú použité adipocyty alebo hepatocyty11. Spôsob stanovenia zlúčenín vhodných na liečbu a/alebo prevenciu obezity, vyznačujúci sa tým, že sa vyberú zlúčeniny, ktoré boli stanovené ako vhodné zlúčeniny v spôsobe, ako je uvedený v nároku 6 a dodatočne v spôsobe podľa nároku 7.
- 12. Spôsob stanovenia zlúčenín vhodných na liečbu a/alebo prevenciu obezity, vyznačujúci sa tým, že sa vyberú zlúčeniny, ktoré boli identifikované ako vhodné zlúčeniny v spôsobe podľa nároku 1, a ktoré boli dodatočne identifikované ako neúčinné v štandardnom teste na určenie antikonvulzívnych vlastností.
- 13. Použitie zlúčenín, ktoré boli identifikované spôsobom podľa nároku 1 ako vhodné na liečenie a/alebo prevenciu obezity, na prípravu liečiva na liečbu a/alebo prevenciu obezity.Koniec dokumentu
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE10035227A DE10035227A1 (de) | 2000-07-20 | 2000-07-20 | Verfahren zum Auffinden von Verbindungen, welche zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Fettleibigkeit geeignet sind |
| PCT/EP2001/008051 WO2002007821A1 (de) | 2000-07-20 | 2001-07-12 | Verfahren zum auffinden von verbindungen, welche zur behandlung und/oder prophylaxe von obesitas geeignet sind |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SK612003A3 SK612003A3 (en) | 2003-06-03 |
| SK287607B6 true SK287607B6 (sk) | 2011-03-04 |
Family
ID=7649538
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SK61-2003A SK287607B6 (sk) | 2000-07-20 | 2001-07-12 | Spôsob stanovenia zlúčenín vhodných na inhibíciu aktivity aspoň jednej karboanhydrázy a použitie uvedených zlúčenín ako liečiva na liečbu a/alebo prevenciu obezity |
Country Status (27)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP1307262B1 (sk) |
| JP (1) | JP2004504053A (sk) |
| KR (1) | KR100818827B1 (sk) |
| CN (1) | CN1443085B (sk) |
| AR (1) | AR028730A1 (sk) |
| AT (1) | ATE278441T1 (sk) |
| AU (2) | AU7753401A (sk) |
| BR (1) | BR0112547A (sk) |
| CA (1) | CA2416647A1 (sk) |
| CZ (1) | CZ2003156A3 (sk) |
| DE (2) | DE10035227A1 (sk) |
| DZ (1) | DZ3393A1 (sk) |
| ES (1) | ES2230346T3 (sk) |
| HK (1) | HK1057499A1 (sk) |
| HU (1) | HUP0302309A3 (sk) |
| IL (2) | IL153971A0 (sk) |
| MX (1) | MXPA02012907A (sk) |
| NO (1) | NO20030233L (sk) |
| NZ (1) | NZ523960A (sk) |
| PL (1) | PL201165B1 (sk) |
| PT (1) | PT1307262E (sk) |
| RU (1) | RU2268721C2 (sk) |
| SK (1) | SK287607B6 (sk) |
| TR (1) | TR200402670T4 (sk) |
| TW (1) | TWI274157B (sk) |
| UA (1) | UA74588C2 (sk) |
| WO (1) | WO2002007821A1 (sk) |
Families Citing this family (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2007538054A (ja) | 2004-05-19 | 2007-12-27 | ゾルファイ ファーマスーティカルズ ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | 肥満および関係する病気の予防または治療のためのｎ−スルファモイル−ｎ′−アリールピペラジンを含有する薬剤 |
| MY147767A (en) | 2004-06-16 | 2013-01-31 | Janssen Pharmaceutica Nv | Novel sulfamate and sulfamide derivatives useful for the treatment of epilepsy and related disorders |
| AU2006249577A1 (en) | 2005-05-20 | 2006-11-30 | Janssen Pharmaceutica N.V. | Process for preparation of sulfamide derivatives |
| AR057570A1 (es) | 2005-11-14 | 2007-12-05 | Solvay Pharm Gmbh | Derivados de n-sulfamoil-n'-benzopiranopiperidinas espirocondensadas, composiciones farmaceuticas que los comprenden, un procedimiento para su preparacion y su uso en la preparacion de medicamentos para el tratamiento de enfermedades mediadas por las isoenzimas anhidrasas carbonicas subtipos ii y/o |
| US8716231B2 (en) | 2005-12-19 | 2014-05-06 | Janssen Pharmaceutica Nv | Use of benzo-fused heterocycle sulfamide derivatives for the treatment of pain |
| US8937096B2 (en) | 2005-12-19 | 2015-01-20 | Janssen Pharmaceutica Nv | Use of benzo-fused heterocyle sulfamide derivatives for the treatment of mania and bipolar disorder |
| AR058389A1 (es) | 2005-12-19 | 2008-01-30 | Janssen Pharmaceutica Nv | Uso de derivados heterociclicos benzo-fusionados de sulfamida para el tratamiento de la obesidad |
| US8691867B2 (en) | 2005-12-19 | 2014-04-08 | Janssen Pharmaceutica Nv | Use of benzo-fused heterocycle sulfamide derivatives for the treatment of substance abuse and addiction |
| US8497298B2 (en) | 2005-12-19 | 2013-07-30 | Janssen Pharmaceutica Nv | Use of benzo-fused heterocycle sulfamide derivatives for lowering lipids and lowering blood glucose levels |
| AU2007253814A1 (en) | 2006-05-19 | 2007-11-29 | Janssen Pharmaceutica N.V. | Co-therapy for the treatment of epilepsy |
| ES2660170T3 (es) | 2007-01-25 | 2018-03-21 | NAIA Metabolic, Inc. | Sensibilizadores a la insulina y métodos de tratamiento |
| EA018567B1 (ru) | 2008-06-23 | 2013-08-30 | Янссен Фармацевтика Нв | Кристаллическая форма (2s)-(-)-n-(6-хлор-2,3-дигидробензо[1,4]диоксин-2-илметил)сульфамида |
| US8815939B2 (en) | 2008-07-22 | 2014-08-26 | Janssen Pharmaceutica Nv | Substituted sulfamide derivatives |
| BR112014029308A2 (pt) * | 2012-05-24 | 2017-06-27 | Verva Pharmaceuticals Ltd | um método de melhorar a função hepática |
| CN106770611B (zh) * | 2016-12-22 | 2019-01-29 | 广西师范大学 | 一种用于细胞原位检测小分子化合物进入线粒体的方法 |
| RU2771430C1 (ru) * | 2021-09-21 | 2022-05-04 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научный центр неврологии" (ФГБНУ НЦН) | Способ количественного определения антиконвульсантов в плазме крови больных эпилепсией |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4552897A (en) * | 1983-02-01 | 1985-11-12 | American Cyanamid Company | Salts of 1-(aminodihalophenyl)-2-aminoethanols and antilipogenic compositions prepared therefrom |
| US6288095B1 (en) * | 1987-09-04 | 2001-09-11 | Beecham Group P.L.C. | Compounds |
| US5126324A (en) * | 1990-06-07 | 1992-06-30 | Genentech, Inc. | Method of enhancing growth in patients using combination therapy |
| EP0669832B1 (en) * | 1992-10-29 | 1996-09-25 | Genentech, Inc. | Method for treatment or prevention of obesity |
| AU693478B2 (en) * | 1994-11-10 | 1998-07-02 | Metabolic Pharmaceuticals Limited | Treatment of obesity |
| EP0915697B1 (en) * | 1996-06-28 | 2002-09-18 | Ortho-McNeil Pharmaceutical, Inc. | Anticonvulsant sulfamate derivatives useful in treating obesity |
| US20030100594A1 (en) * | 2001-08-10 | 2003-05-29 | Pharmacia Corporation | Carbonic anhydrase inhibitor |
-
2000
- 2000-07-20 DE DE10035227A patent/DE10035227A1/de not_active Withdrawn
-
2001
- 2001-06-15 AR ARP010102883A patent/AR028730A1/es unknown
- 2001-07-12 DE DE50104023T patent/DE50104023D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-07-12 CA CA002416647A patent/CA2416647A1/en not_active Abandoned
- 2001-07-12 AU AU7753401A patent/AU7753401A/xx active Pending
- 2001-07-12 PL PL363518A patent/PL201165B1/pl not_active IP Right Cessation
- 2001-07-12 HU HU0302309A patent/HUP0302309A3/hu unknown
- 2001-07-12 BR BR0112547-8A patent/BR0112547A/pt not_active Application Discontinuation
- 2001-07-12 MX MXPA02012907A patent/MXPA02012907A/es active IP Right Grant
- 2001-07-12 IL IL15397101A patent/IL153971A0/xx unknown
- 2001-07-12 JP JP2002513551A patent/JP2004504053A/ja active Pending
- 2001-07-12 ES ES01955345T patent/ES2230346T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-07-12 PT PT01955345T patent/PT1307262E/pt unknown
- 2001-07-12 CN CN018129730A patent/CN1443085B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2001-07-12 WO PCT/EP2001/008051 patent/WO2002007821A1/de active IP Right Grant
- 2001-07-12 RU RU2003104803/14A patent/RU2268721C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2001-07-12 KR KR1020037000620A patent/KR100818827B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2001-07-12 DZ DZ013393A patent/DZ3393A1/xx active
- 2001-07-12 EP EP01955345A patent/EP1307262B1/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-07-12 AT AT01955345T patent/ATE278441T1/de active
- 2001-07-12 TR TR2004/02670T patent/TR200402670T4/xx unknown
- 2001-07-12 NZ NZ52396001A patent/NZ523960A/xx not_active IP Right Cessation
- 2001-07-12 SK SK61-2003A patent/SK287607B6/sk not_active IP Right Cessation
- 2001-07-12 CZ CZ2003156A patent/CZ2003156A3/cs unknown
- 2001-07-12 AU AU2001277534A patent/AU2001277534B9/en not_active Ceased
- 2001-07-16 TW TW090117382A patent/TWI274157B/zh not_active IP Right Cessation
- 2001-12-07 UA UA2003021453A patent/UA74588C2/uk unknown
-
2003
- 2003-01-15 IL IL153971A patent/IL153971A/en not_active IP Right Cessation
- 2003-01-17 NO NO20030233A patent/NO20030233L/no unknown
-
2004
- 2004-01-15 HK HK04100307.4A patent/HK1057499A1/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| SK287607B6 (sk) | Spôsob stanovenia zlúčenín vhodných na inhibíciu aktivity aspoň jednej karboanhydrázy a použitie uvedených zlúčenín ako liečiva na liečbu a/alebo prevenciu obezity | |
| US6946243B2 (en) | Method of identifying compounds suitable for treatment and/or prophylaxis of obesity | |
| US6511800B1 (en) | Methods of treating nitric oxide and cytokine mediated disorders | |
| Saha et al. | Lipid abnormalities in tissues of the KKAy mouse: effects of pioglitazone on malonyl-CoA and diacylglycerol | |
| Benoit et al. | Loss of quinone reductase 2 function selectively facilitates learning behaviors | |
| Koechling et al. | Effects of 3-amino-1, 2, 4-triazole on brain catalase in the mediation of ethanol consumption in mice | |
| JP2002511850A (ja) | 報酬欠損症候群の対立遺伝子多遺伝子診断および処置 | |
| Ryan et al. | Isolation and characterization of cells resistant to ML236B (compactin) with increased levels of 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase. | |
| Reilly et al. | A peroxisomal acyltransferase in mouse identifies a novel pathway for taurine conjugation of fatty acids | |
| Miyajima et al. | Molecular characterization of gene expression in human lactate dehydrogenase‐A deficiency | |
| AU2010258821A1 (en) | Genotype specific methods for treating human subjects using 4- methylpyrazole | |
| Takabe et al. | Gene expression induced by BO-653, probucol and BHQ in human endothelial cells | |
| Kosel et al. | In vitro metabolism of citalopram by monoamine oxidase B in human blood | |
| ZA200300444B (en) | Method for locating compounds which are suitable for the treatment and/or prophylaxis of obesity. | |
| Lee et al. | Rat malonyl-CoA decarboxylase; cloning, expression in E. coli and its biochemical characterization | |
| Sandler et al. | Tyramine and depressive illness | |
| SONONE | EFFECT OF THE DRUG IMIPRAMINE ON ENZYMES OF RAT BRAIN | |
| Linnér | Noradrenergic augmentation strategies in the pharmacological treatment of depression and schizophrenia: an experimental study |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of maintenance fees |
Effective date: 20120712 |