RU2201964C2 - Соединение wk-5344а и соединение wk-5344b, способ их получения и продуцирующий их штамм streptomyces sp. wk-5344 ferm bp-6668 - Google Patents
Соединение wk-5344а и соединение wk-5344b, способ их получения и продуцирующий их штамм streptomyces sp. wk-5344 ferm bp-6668 Download PDFInfo
- Publication number
- RU2201964C2 RU2201964C2 RU2001114212/13A RU2001114212A RU2201964C2 RU 2201964 C2 RU2201964 C2 RU 2201964C2 RU 2001114212/13 A RU2001114212/13 A RU 2001114212/13A RU 2001114212 A RU2001114212 A RU 2001114212A RU 2201964 C2 RU2201964 C2 RU 2201964C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- compound
- streptomyces
- strain
- agar
- compounds
- Prior art date
Links
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims abstract description 114
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 8
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 title description 9
- 241000187180 Streptomyces sp. Species 0.000 claims abstract description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 18
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 16
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 10
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 abstract description 16
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 10
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 abstract description 8
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 7
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 abstract description 3
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 abstract 1
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 24
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 24
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 14
- 235000017166 Bambusa arundinacea Nutrition 0.000 description 12
- 235000017491 Bambusa tulda Nutrition 0.000 description 12
- 241001330002 Bambuseae Species 0.000 description 12
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 235000015334 Phyllostachys viridis Nutrition 0.000 description 12
- 239000011425 bamboo Substances 0.000 description 12
- 150000001840 cholesterol esters Chemical class 0.000 description 11
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 11
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 9
- 108010007622 LDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 9
- 102000007330 LDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 9
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 9
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- OKKJLVBELUTLKV-MZCSYVLQSA-N Deuterated methanol Chemical compound [2H]OC([2H])([2H])[2H] OKKJLVBELUTLKV-MZCSYVLQSA-N 0.000 description 8
- 241000219198 Brassica Species 0.000 description 7
- 235000003351 Brassica cretica Nutrition 0.000 description 7
- 235000003343 Brassica rupestris Nutrition 0.000 description 7
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 7
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 7
- 238000010265 fast atom bombardment Methods 0.000 description 7
- 235000010460 mustard Nutrition 0.000 description 7
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 7
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 6
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 6
- 208000011775 arteriosclerosis disease Diseases 0.000 description 6
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 6
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 6
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 6
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 6
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 6
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 6
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 description 6
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 6
- 206010003210 Arteriosclerosis Diseases 0.000 description 5
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108010010234 HDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 5
- 102000015779 HDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 5
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 5
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 5
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 5
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 5
- QKSKPIVNLNLAAV-UHFFFAOYSA-N bis(2-chloroethyl) sulfide Chemical compound ClCCSCCCl QKSKPIVNLNLAAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 4
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L calcium sulfate Chemical compound [Ca+2].[O-]S([O-])(=O)=O OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 4
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 4
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 4
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000012336 Cholesterol Ester Transfer Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010061846 Cholesterol Ester Transfer Proteins Proteins 0.000 description 3
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 3
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 3
- 239000010441 alabaster Substances 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 3
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 3
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 3
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 3
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 3
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- GMKMEZVLHJARHF-UHFFFAOYSA-N (2R,6R)-form-2.6-Diaminoheptanedioic acid Natural products OC(=O)C(N)CCCC(N)C(O)=O GMKMEZVLHJARHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DKPFZGUDAPQIHT-UHFFFAOYSA-N Butyl acetate Natural products CCCCOC(C)=O DKPFZGUDAPQIHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BVQVNPIREVGGDE-ARJAWSKDSA-N C=C(/C=C\c(cc1)ccc1OC(c(cc1N=C)ccc1O)=O)O Chemical compound C=C(/C=C\c(cc1)ccc1OC(c(cc1N=C)ccc1O)=O)O BVQVNPIREVGGDE-ARJAWSKDSA-N 0.000 description 2
- VLSNHGRQIPHPDJ-UHFFFAOYSA-M CC(c(cc1C=O)ccc1O[Fe]/[O]=N\c(cc(cc1)C(Oc2ccc(C=C)cc2)=O)c1O)Oc1ccc(C=C)cc1 Chemical compound CC(c(cc1C=O)ccc1O[Fe]/[O]=N\c(cc(cc1)C(Oc2ccc(C=C)cc2)=O)c1O)Oc1ccc(C=C)cc1 VLSNHGRQIPHPDJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 235000005979 Citrus limon Nutrition 0.000 description 2
- 244000131522 Citrus pyriformis Species 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 2
- RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen sulfide Chemical compound S RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N Melanin Chemical compound O=C1C(=O)C(C2=CNC3=C(C(C(=O)C4=C32)=O)C)=C2C4=CNC2=C1C XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 2
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 2
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 2
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 2
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 2
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 2
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N hexanoic acid Chemical compound CCCCCC(O)=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004896 high resolution mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 229910017053 inorganic salt Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- -1 malic acid calcium salt Chemical class 0.000 description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 2
- GMKMEZVLHJARHF-SYDPRGILSA-N meso-2,6-diaminopimelic acid Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])CCC[C@@H]([NH3+])C([O-])=O GMKMEZVLHJARHF-SYDPRGILSA-N 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- OCKPCBLVNKHBMX-UHFFFAOYSA-N n-butyl-benzene Natural products CCCCC1=CC=CC=C1 OCKPCBLVNKHBMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 2
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 2
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 2
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 2
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZGGHKIMDNBDHJB-NRFPMOEYSA-M (3R,5S)-fluvastatin sodium Chemical compound [Na+].C12=CC=CC=C2N(C(C)C)C(\C=C\[C@@H](O)C[C@@H](O)CC([O-])=O)=C1C1=CC=C(F)C=C1 ZGGHKIMDNBDHJB-NRFPMOEYSA-M 0.000 description 1
- 0 *C(O)=Cc(cc1)ccc1OC(c(cc1N=C)ccc1O)=O Chemical compound *C(O)=Cc(cc1)ccc1OC(c(cc1N=C)ccc1O)=O 0.000 description 1
- UCQHWXOBJYGVRH-UHFFFAOYSA-M CC(C(CC1C=O)=CC=C1O[Fe]/[O]=N\c(cc(cc1)C(Oc2ccc(C=C)cc2)=O)c1O)OC(CC1)=CC=C1C=C Chemical compound CC(C(CC1C=O)=CC=C1O[Fe]/[O]=N\c(cc(cc1)C(Oc2ccc(C=C)cc2)=O)c1O)OC(CC1)=CC=C1C=C UCQHWXOBJYGVRH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000282836 Camelus dromedarius Species 0.000 description 1
- 108010004103 Chylomicrons Proteins 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 235000019750 Crude protein Nutrition 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- PLUBXMRUUVWRLT-UHFFFAOYSA-N Ethyl methanesulfonate Chemical compound CCOS(C)(=O)=O PLUBXMRUUVWRLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N L-rhamnopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N L-rhamnose Natural products CC(O)C(O)C(O)C(O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- PCZOHLXUXFIOCF-UHFFFAOYSA-N Monacolin X Natural products C12C(OC(=O)C(C)CC)CC(C)C=C2C=CC(C)C1CCC1CC(O)CC(=O)O1 PCZOHLXUXFIOCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-N-methylprop-2-en-1-amine Chemical compound CN(CCC1=CNC2=C1C=CC=C2)CC=C GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine Chemical compound O=NN(C)C(=N)N[N+]([O-])=O VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000007817 Olea europaea Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- TUZYXOIXSAXUGO-UHFFFAOYSA-N Pravastatin Natural products C1=CC(C)C(CCC(O)CC(O)CC(O)=O)C2C(OC(=O)C(C)CC)CC(O)C=C21 TUZYXOIXSAXUGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N Raffinose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N 0.000 description 1
- 241000576755 Sclerotia Species 0.000 description 1
- 108010073771 Soybean Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003425 Tyrosinase Human genes 0.000 description 1
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N UNPD196149 Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1C(O)C(O)C(O)C(COC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010062497 VLDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 238000005276 aerator Methods 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 1
- 208000037849 arterial hypertension Diseases 0.000 description 1
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- HDRTWMBOUSPQON-ODZAUARKSA-L calcium;(z)-but-2-enedioate Chemical compound [Ca+2].[O-]C(=O)\C=C/C([O-])=O HDRTWMBOUSPQON-ODZAUARKSA-L 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003354 cholesterol ester transfer protein inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 235000019646 color tone Nutrition 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 239000002385 cottonseed oil Substances 0.000 description 1
- 235000012343 cottonseed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000013058 crude material Substances 0.000 description 1
- 238000012364 cultivation method Methods 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 229960000633 dextran sulfate Drugs 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000012407 engineering method Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 229960003765 fluvastatin Drugs 0.000 description 1
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 235000001727 glucose Nutrition 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000037 hydrogen sulfide Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 150000002634 lipophilic molecules Chemical class 0.000 description 1
- 150000004668 long chain fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- PCZOHLXUXFIOCF-BXMDZJJMSA-N lovastatin Chemical compound C([C@H]1[C@@H](C)C=CC2=C[C@H](C)C[C@@H]([C@H]12)OC(=O)[C@@H](C)CC)C[C@@H]1C[C@@H](O)CC(=O)O1 PCZOHLXUXFIOCF-BXMDZJJMSA-N 0.000 description 1
- QLJODMDSTUBWDW-UHFFFAOYSA-N lovastatin hydroxy acid Natural products C1=CC(C)C(CCC(O)CC(O)CC(O)=O)C2C(OC(=O)C(C)CC)CC(C)C=C21 QLJODMDSTUBWDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002261 magnesium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 159000000003 magnesium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000001630 malic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 1
- 239000013028 medium composition Substances 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003471 mutagenic agent Substances 0.000 description 1
- KELXKDDAALYTDI-BTVCFUMJSA-N nitric acid;(2r,3s,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal Chemical compound O[N+]([O-])=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O KELXKDDAALYTDI-BTVCFUMJSA-N 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 239000006877 oatmeal agar Substances 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 125000001477 organic nitrogen group Chemical group 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M potassium benzoate Chemical compound [K+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- TUZYXOIXSAXUGO-PZAWKZKUSA-N pravastatin Chemical compound C1=C[C@H](C)[C@H](CC[C@@H](O)C[C@@H](O)CC(O)=O)[C@H]2[C@@H](OC(=O)[C@@H](C)CC)C[C@H](O)C=C21 TUZYXOIXSAXUGO-PZAWKZKUSA-N 0.000 description 1
- 229960002965 pravastatin Drugs 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 229940043274 prophylactic drug Drugs 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004952 protein activity Effects 0.000 description 1
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002545 silicone oil Polymers 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L sodium thiosulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=S AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000019345 sodium thiosulphate Nutrition 0.000 description 1
- 229940001941 soy protein Drugs 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 239000001052 yellow pigment Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/008—Preparation of nitrogen-containing organic compounds containing a N-O bond, e.g. nitro (-NO2), nitroso (-NO)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F15/00—Compounds containing elements of Groups 8, 9, 10 or 18 of the Periodic Table
- C07F15/02—Iron compounds
- C07F15/025—Iron compounds without a metal-carbon linkage
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P9/00—Preparation of organic compounds containing a metal or atom other than H, N, C, O, S or halogen
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/465—Streptomyces
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине и биологии. Соединения WK-5344А и WK-5344В обладают ингибирующим действием в отношении белка, переносящего сложный эфир холестерина. Способ предусматривает выращивание штамма Streptomyces sp. WK-5344 FERM ВР-6668, при этом соединение WK-5344А и соединение WK-5344В аккумулируются в среде, затем соединение WK-5344А и соединение WK-5344В выделяют. Изобретение позволяет получить вещества, эффективные для профилактики и лечения заболеваний, вызываемых накапливанием холестерина в организме человека. 4 с.п.ф-лы, 8 ил.
Description
Изобретение относится к соединению WK-5344A и к соединению WK-5344B, а также к способу получения данных соединений. В частности, настоящее изобретение относится к новым соединениям WK-5344A и WK-5344B, обладающим ингибирующим действием в отношении белка, переносящего сложный эфир холестерина, а также к способу получения данных соединений.
Описание уровня техники
Известны различные профилактические лекарственные препараты для предупреждения инфаркта миокарда и инсульта, возникающих вследствие отложения холестерина на стенках сосудов, такого как артериосклероз, вызванный артериальной гипертензией у взрослых. Такие лекарственные препараты включают, например, правастатин, мевинолин и флувастатин (Endo A. Journal of Medicinal Chemistry 28, 401-405, 1985 and Endo A. Journal of Lipid Research 33, 1569-1582, 1992).
Известны различные профилактические лекарственные препараты для предупреждения инфаркта миокарда и инсульта, возникающих вследствие отложения холестерина на стенках сосудов, такого как артериосклероз, вызванный артериальной гипертензией у взрослых. Такие лекарственные препараты включают, например, правастатин, мевинолин и флувастатин (Endo A. Journal of Medicinal Chemistry 28, 401-405, 1985 and Endo A. Journal of Lipid Research 33, 1569-1582, 1992).
Возникновение инфаркта миокарда и инсульта и течение этих заболеваний являются очень сложными и многогранными процессами. Следовательно, для лечения данных заболеваний требуются соединения, обладающие различными механизмами действия.
В последнее время в результате введения западных норм повседневного питания возрастает смертность вследствие инфаркта миокарда и инсульта в результате отложения холестерина на стенках сосудов и существует проблема заболеваний, связанных с образом жизни. Большая часть холестерина этерифицируется главным образом в печени и кишечнике длинноцепочечными жирными кислотами с образованием сложных эфиров холестерина, которые выделяются в кровь в качестве компонентов хиломикрона и липопротеинов очень низкой плотности и циркулируют в крови главным образом как компоненты липопротеинов низкой плотности и липопротеинов высокой плотности.
Липопротеины низкой плотности, которые переносят холестерин, поставляемый из печени в периферические ткани, представляют собой фактор риска, способствующий возникновению артериосклероза. Наоборот, липопротеины высокой плотности аккумулируют холестерин из периферических тканей и, как полагают, являются фактором, подавляющим развитие артериосклероза. Именно белок, переносящий сложный эфир холестерина, принимает участие в обменной реакции сложного эфира холестерина между обоими видами липопротеинов, и это связано с формированием липопротеинов низкой плотности.
Следовательно, соединение, которое ингибирует функционирование белка, переносящего сложный эфир холестерина, приводит к снижению количества липопротеинов низкой плотности, фактора риска развития артериосклероза, в крови и в противоположность этому проявляет антиартериосклеротическое действие вследствие повышения количества липопротеинов высокой плотности, которые подавляют артериосклероз, и, таким образом, является эффективным в случае указанных заболеваний.
Краткое описание и цель изобретения
Авторы настоящего изобретения исследовали продукт метаболизма микроорганизмов, выделенных из почв, для того, чтобы выявить новые биологически активные вещества, и обнаружили, что культивируемая масса свежевыделенного из почвы микробного штамма WK-5344 продуцирует соединения, обладающие ингибирующей активностью в отношении белка, переносящего сложный эфир холестерина. В результате выделения из указанной культивируемой массы и очистки указанного ингибитора белка, переносящего сложный эфир холестерина, и так как эти соединения обладали такой химической структурой, которая ранее не была известна, авторы настоящего изобретения обозначили указанные вещества как соединение WK-5344A и соединение WK-5344B.
Авторы настоящего изобретения исследовали продукт метаболизма микроорганизмов, выделенных из почв, для того, чтобы выявить новые биологически активные вещества, и обнаружили, что культивируемая масса свежевыделенного из почвы микробного штамма WK-5344 продуцирует соединения, обладающие ингибирующей активностью в отношении белка, переносящего сложный эфир холестерина. В результате выделения из указанной культивируемой массы и очистки указанного ингибитора белка, переносящего сложный эфир холестерина, и так как эти соединения обладали такой химической структурой, которая ранее не была известна, авторы настоящего изобретения обозначили указанные вещества как соединение WK-5344A и соединение WK-5344B.
Настоящее изобретение выполнено в соответствии с результатами этих исследований.
Целью настоящего изобретения является соединение WK-5344A, имеющее следующую структурную формулу:
Другой целью настоящего изобретения является соединение WK-5344B, имеющее следующую структурную формулу:
Кроме того, целью настоящего изобретения является способ получения соединения WK-5344A или его соли и соединения WK-5344B или его соли, который включает культивирование микроорганизма, относящегося к роду Streptomyces и обладающего способностью продуцировать соединение WK-5344A и соединение WK-5344B, аккумулирование соединения WK-5344A и соединения WK-5344B в культивируемой массе и выделение соединения WK-5344A и соединения WK-5344B из указанной культивируемой массы.
Другой целью настоящего изобретения является соединение WK-5344B, имеющее следующую структурную формулу:
Кроме того, целью настоящего изобретения является способ получения соединения WK-5344A или его соли и соединения WK-5344B или его соли, который включает культивирование микроорганизма, относящегося к роду Streptomyces и обладающего способностью продуцировать соединение WK-5344A и соединение WK-5344B, аккумулирование соединения WK-5344A и соединения WK-5344B в культивируемой массе и выделение соединения WK-5344A и соединения WK-5344B из указанной культивируемой массы.
Описание предпочтительного выполнения изобретения
Согласно предпочтительному варианту реализации настоящего изобретения, настоящее изобретение относится к способу получения новых соединений - соединения WK-5344A и соединения WK-5344B или солей этих соединений, согласно которому микроорганизм, относящийся к роду Streptomyces и обладающий способностью продуцировать соединение WK-5344A и соединение WK-5344B, представляет собой Streptomyces sp. WK-5344. Настоящее изобретение также относится к микроорганизму, относящемуся к роду Streptomyces и обладающему способностью продуцировать соединение WK-5344A и соединение WK-5344B, причем указанный микроорганизм представляет собой Streptomyces sp. WK-5344 (FERM BP-6668).
Согласно предпочтительному варианту реализации настоящего изобретения, настоящее изобретение относится к способу получения новых соединений - соединения WK-5344A и соединения WK-5344B или солей этих соединений, согласно которому микроорганизм, относящийся к роду Streptomyces и обладающий способностью продуцировать соединение WK-5344A и соединение WK-5344B, представляет собой Streptomyces sp. WK-5344. Настоящее изобретение также относится к микроорганизму, относящемуся к роду Streptomyces и обладающему способностью продуцировать соединение WK-5344A и соединение WK-5344B, причем указанный микроорганизм представляет собой Streptomyces sp. WK-5344 (FERM BP-6668).
Микроорганизм, обладающий способностью продуцировать соединение WK-5344A и соединение WK-5344B (здесь и далее обозначен как микроорганизм, продуцирующий соединение WK-5344), относится к роду Streptomyces и обладает достаточной способностью продуцировать соединение WK-5344A и соединение WK-5344B без ограничений. Примером предпочтительного микробного штамма, используемого для продуцирования соединения WK-5344A и соединения WK-5344B, являющихся предметом настоящего изобретения, является Streptomyces sp. WK-5344, который выделен из свежесобранной почвы авторами настоящего изобретения.
Таксономические свойства указанного штамма являются следующими.
Морфологические свойства
Вегетативный мицелий хорошо растет на различных агаровых средах и не наблюдается никакой фрагментации. Воздушный мицелий обильно растет на агаре, содержащем неорганические соли и крахмал, и на агаре, содержащем глицерин и аспарагин, проявляя окраску от белой до серой. Согласно микроскопическим исследованиям, воздушный мицелий образует спирали и цепи из более чем 20 спор. Форма спор является овальной, и споры имеют размер 1,0x0,5 мкм. Поверхность спор покрыта шипиками. Ни склероций, ни спорангий, ни зооспора не наблюдаются.
Вегетативный мицелий хорошо растет на различных агаровых средах и не наблюдается никакой фрагментации. Воздушный мицелий обильно растет на агаре, содержащем неорганические соли и крахмал, и на агаре, содержащем глицерин и аспарагин, проявляя окраску от белой до серой. Согласно микроскопическим исследованиям, воздушный мицелий образует спирали и цепи из более чем 20 спор. Форма спор является овальной, и споры имеют размер 1,0x0,5 мкм. Поверхность спор покрыта шипиками. Ни склероций, ни спорангий, ни зооспора не наблюдаются.
Культуральные свойства на различных агаровых средах
Культуральные свойства продуцирующего штамма, являющегося предметом настоящего изобретения, выявленные согласно методу Ширлинга и Готтлиба (Е.В. Shirling and D. Gottlieb, Internationale Journal of Systematic Bacteriology, 16, 313, 1966), приведены ниже. Оттенки окраски определяли в соответствии с руководством Color Harmony Manual, 4th ED. (Container Corporation of America, Chicago, 1958), используемым в качестве стандарта для определения окраски, и указывали наименование оттенка окраски и ее код (в круглых скобках). Ниже приведены, если не оговаривается особо, результаты визуальных наблюдений за состоянием культуры указанного штамма, полученные на различных культуральных средах при 27oС в течение 2 недель.
Культуральные свойства продуцирующего штамма, являющегося предметом настоящего изобретения, выявленные согласно методу Ширлинга и Готтлиба (Е.В. Shirling and D. Gottlieb, Internationale Journal of Systematic Bacteriology, 16, 313, 1966), приведены ниже. Оттенки окраски определяли в соответствии с руководством Color Harmony Manual, 4th ED. (Container Corporation of America, Chicago, 1958), используемым в качестве стандарта для определения окраски, и указывали наименование оттенка окраски и ее код (в круглых скобках). Ниже приведены, если не оговаривается особо, результаты визуальных наблюдений за состоянием культуры указанного штамма, полученные на различных культуральных средах при 27oС в течение 2 недель.
Агар, содержащий сахарозу и нитрат
Рост - хороший, оттенок светло-горчичный, желтовато-коричневый (2ie)
Реверсия - светло-горчичный, желтовато-коричневый - зеленый мшистый (2ie-24lg)
Воздушный мицелий - обильный, пепельный (5fe)
Растворимый пигмент - не продуцируется
Агар, содержащий глюкозу и аспарагин (ISP)
Рост - хороший, оттенок "бамбук" (2gс)
Реверсия - хороший, оттенок "бамбук" (2gс)
Воздушный мицелий - обильный, светло-алебастровый - пепельный (13ba-5fe)
Растворимый пигмент - пастельно-желтый (1db)
Агар, содержащий глицерин и аспарагин (ISP)
Рост - хороший, оттенок светло-коричневый (2ес)
Реверсия - оттенок "бамбук" (2gс)
Воздушный мицелий - обильный, светло-алебастровый - пепельный (13ba-5fe)
Растворимый пигмент - пастельно-желтый (1db)
Агар, содержащий неорганические соли и крахмал (ISP)
Рост - хороший, оттенок "бамбук" (2gс)
Реверсия - оттенок "верблюд" (3ie)
Воздушный мицелий - обильный, пепельный (5fe)
Растворимый пигмент - не продуцируется
Агар, содержащий тирозин (ISP)
Рост - хороший, оттенок "бамбук" (2gс)
Реверсия - светло-горчичный, желтовато-коричневый - зеленый мшистый (2ie-24lg)
Воздушный мицелий - обильный, светло-алебастровый (13bа)
Растворимый пигмент - не продуцируется
Агар, содержащий овсяную муку (ISP)
Рост - умеренный, оттенок "бамбук" - золотисто-желтый (2fb-2kb)
Реверсия - оттенок "бамбук" - приглушенный коричневый (2fb-2li)
Воздушный мицелий - умеренный, пепельный (5fe)
Растворимый пигмент - лимонного цвета (lgc)
Агар, содержащий дрожжевой экстракт и солодовый экстракт (ISP)
Рост - хороший, оттенок "бамбук" (2gс)
Реверсия - горчичный (2lе)
Воздушный мицелий - обильный, жемчужно-серый (13сb)
Растворимый пигмент - оливково-желтый (1lе)
Питательный агар
Рост - умеренный, оттенок "бамбук" (2gс)
Реверсия - оттенок "золотой самородок" (2nс)
Воздушный мицелий - умеренный, пепельный (5fe)
Растворимый пигмент - не продуцируется
Агар, содержащий пептон, дрожжевой экстракт и железо (ISP)
Рост - умеренный, оттенок тускло-золотистый (2ng)
Реверсия - светло-горчичный, желтовато-коричневый (2ie)
Воздушный мицелий - скудный, белый (а)
Растворимый пигмент - не продуцируется
Глюкозно-нитратный агар (ISP)
Рост - умеренный, оттенок светло-горчичный, желтовато-коричневый (2ie)
Реверсия - горчичный (2le)
Воздушный мицелий - умеренный, белый (а)
Растворимый пигмент - золотистый (1 1/21c)
Агар, содержащий глицерин и кальциевую соль яблочной кислоты
Рост - умеренный, оттенок "бамбук" (2gс)
Реверсия - светло-пшеничный - оттенок "бамбук" (2еа-2gс)
Воздушный мицелий - обильный, жемчужный (3bа)
Растворимый пигмент - лимонного цвета (lgс)
Агар, содержащий глюкозу и пептон
Рост - умеренный, оттенок "бамбук" (2gс)
Реверсия - светло-пшеничный - золотисто-желтый (2ea-2kb)
Воздушный мицелий - скудный, белый (а)
Растворимый пигмент - не продуцируется
Физиологические свойства
(1) Меланиновый пигмент
(а) Агар, одержащий тирозин, - отсутствует
(b) Агар, содержащий пептон, дрожжевой экстракт и железо, - отсутствует
(c) Среда, содержащая глюкозу, пептон и желатину, - отсутствует
(d) Бульон, содержащий триптон и дрожжевой экстракт, - отсутствует
(2) Тирозиназная реакция - отрицательная
(3) Продуцирование сероводорода - отсутствует
(4) Восстановление нитратов - положительно
(5) Разжижение желатины (21-23oС) (желатиновая среда, содержащая глюкозу и пептон) - отсутствует
(6) Гидролиз крахмала - положительно
(7) Коагуляция снятого молока (37oС) - отрицательно
(8) Пептонизация снятого молока (37oС) - положительно
(9) Температура роста - 9-37oС
(10) Утилизация источников углерода (среда Придхэма и Готтлиба). Утилизирует: глюкозу, арабинозу, ксилозу, мелибиозу, маннит, рамнозу, фруктозу и инозит. Незначительно утилизирует: рафинозу и сахарозу.
Рост - хороший, оттенок светло-горчичный, желтовато-коричневый (2ie)
Реверсия - светло-горчичный, желтовато-коричневый - зеленый мшистый (2ie-24lg)
Воздушный мицелий - обильный, пепельный (5fe)
Растворимый пигмент - не продуцируется
Агар, содержащий глюкозу и аспарагин (ISP)
Рост - хороший, оттенок "бамбук" (2gс)
Реверсия - хороший, оттенок "бамбук" (2gс)
Воздушный мицелий - обильный, светло-алебастровый - пепельный (13ba-5fe)
Растворимый пигмент - пастельно-желтый (1db)
Агар, содержащий глицерин и аспарагин (ISP)
Рост - хороший, оттенок светло-коричневый (2ес)
Реверсия - оттенок "бамбук" (2gс)
Воздушный мицелий - обильный, светло-алебастровый - пепельный (13ba-5fe)
Растворимый пигмент - пастельно-желтый (1db)
Агар, содержащий неорганические соли и крахмал (ISP)
Рост - хороший, оттенок "бамбук" (2gс)
Реверсия - оттенок "верблюд" (3ie)
Воздушный мицелий - обильный, пепельный (5fe)
Растворимый пигмент - не продуцируется
Агар, содержащий тирозин (ISP)
Рост - хороший, оттенок "бамбук" (2gс)
Реверсия - светло-горчичный, желтовато-коричневый - зеленый мшистый (2ie-24lg)
Воздушный мицелий - обильный, светло-алебастровый (13bа)
Растворимый пигмент - не продуцируется
Агар, содержащий овсяную муку (ISP)
Рост - умеренный, оттенок "бамбук" - золотисто-желтый (2fb-2kb)
Реверсия - оттенок "бамбук" - приглушенный коричневый (2fb-2li)
Воздушный мицелий - умеренный, пепельный (5fe)
Растворимый пигмент - лимонного цвета (lgc)
Агар, содержащий дрожжевой экстракт и солодовый экстракт (ISP)
Рост - хороший, оттенок "бамбук" (2gс)
Реверсия - горчичный (2lе)
Воздушный мицелий - обильный, жемчужно-серый (13сb)
Растворимый пигмент - оливково-желтый (1lе)
Питательный агар
Рост - умеренный, оттенок "бамбук" (2gс)
Реверсия - оттенок "золотой самородок" (2nс)
Воздушный мицелий - умеренный, пепельный (5fe)
Растворимый пигмент - не продуцируется
Агар, содержащий пептон, дрожжевой экстракт и железо (ISP)
Рост - умеренный, оттенок тускло-золотистый (2ng)
Реверсия - светло-горчичный, желтовато-коричневый (2ie)
Воздушный мицелий - скудный, белый (а)
Растворимый пигмент - не продуцируется
Глюкозно-нитратный агар (ISP)
Рост - умеренный, оттенок светло-горчичный, желтовато-коричневый (2ie)
Реверсия - горчичный (2le)
Воздушный мицелий - умеренный, белый (а)
Растворимый пигмент - золотистый (1 1/21c)
Агар, содержащий глицерин и кальциевую соль яблочной кислоты
Рост - умеренный, оттенок "бамбук" (2gс)
Реверсия - светло-пшеничный - оттенок "бамбук" (2еа-2gс)
Воздушный мицелий - обильный, жемчужный (3bа)
Растворимый пигмент - лимонного цвета (lgс)
Агар, содержащий глюкозу и пептон
Рост - умеренный, оттенок "бамбук" (2gс)
Реверсия - светло-пшеничный - золотисто-желтый (2ea-2kb)
Воздушный мицелий - скудный, белый (а)
Растворимый пигмент - не продуцируется
Физиологические свойства
(1) Меланиновый пигмент
(а) Агар, одержащий тирозин, - отсутствует
(b) Агар, содержащий пептон, дрожжевой экстракт и железо, - отсутствует
(c) Среда, содержащая глюкозу, пептон и желатину, - отсутствует
(d) Бульон, содержащий триптон и дрожжевой экстракт, - отсутствует
(2) Тирозиназная реакция - отрицательная
(3) Продуцирование сероводорода - отсутствует
(4) Восстановление нитратов - положительно
(5) Разжижение желатины (21-23oС) (желатиновая среда, содержащая глюкозу и пептон) - отсутствует
(6) Гидролиз крахмала - положительно
(7) Коагуляция снятого молока (37oС) - отрицательно
(8) Пептонизация снятого молока (37oС) - положительно
(9) Температура роста - 9-37oС
(10) Утилизация источников углерода (среда Придхэма и Готтлиба). Утилизирует: глюкозу, арабинозу, ксилозу, мелибиозу, маннит, рамнозу, фруктозу и инозит. Незначительно утилизирует: рафинозу и сахарозу.
(11) Разложение целлюлозы - отрицательно
Состав клеточных стенок
Диаминопимелиновая кислота клеточных стенок относится к LL-типу.
Состав клеточных стенок
Диаминопимелиновая кислота клеточных стенок относится к LL-типу.
Таксономические свойства штамма, являющегося предметом настоящего изобретения, можно суммировать следующим образом.
Диаминопимелиновая кислота клеточных стенок относится к LL-типу. Вегетативный мицелий хорошо растет на различных агаровых средах, фрагментация не наблюдается. Форма воздушного мицелия является спиральной с длинной цепочкой спор. Поверхность споры покрыта шипиками. Различные свойства культуры проявляются в коричневатых оттенках окраски вегетативного мицелия и от белого до серого оттенка окраски воздушного мицелия. Образования растворимого пигмента представляют собой зеленовато-желтый пигмент на агаровой среде, содержащей дрожжевой и солодовый экстракты, на агаровой среде, содержащей овсяную муку, на агаровой среде, содержащей глюкозу и аспарагин, на агаровой среде, содержащей глицерин и аспарагин, на агаровой среде, содержащей глюкозу и нитрат, на агаровой среде, содержащей глицерин и малеат кальция.
Согласно результатам этих наблюдений, штамм, являющийся предметом настоящего изобретения, был идентифицирован как штамм, принадлежащий к роду Streptomyces, и был отнесен к Streptomyces sp. WK-5344.
Указанный штамм был депонирован в международном депозитарии International Patent Organism Depositary в Национальном институте National Institute of Advanced Industrial Science and Technology, расположенном по адресу AIST Tsukuba Central 6, 1-1, Higashi 1-chome Tsukuba-shi, Ibaraki-ken, 305-8566, Japan, под наименованием FERM BP-6668 1 марта 1999 года.
Несмотря на то, что микробный штамм, продуцирующий соединение WK-5344, был указан в качестве предпочтительного штамма настоящего изобретения, таксономические свойства очень легко видоизменяются вследствие того, что основные свойства микроорганизмов не являются стабильными. Он, как хорошо известно, способен к мутации как вследствие природных видоизменений, так и к мутации, обычно происходящей при искусственных воздействиях, таких как ультрафиолетовое излучение, радиоактивное излучение, или при воздействии мутагенных агентов, таких как N-метил-N'-нитро-N-нитрозогуанидин и этилметансульфонат. Следовательно, в соответствии с настоящим изобретением могут быть использованы штаммы, обладающие способностью продуцировать соединение WK-5344 и принадлежащие к роду Streptomyces, включая искусственные и природные мутанты. Штаммы, видоизмененные методами клеточной инженерии, такими как слияние клеток и генная инженерия, также включены в штамм, продуцирующий соединение WK-5344.
При продуцировании соединения WK-5344A и соединения WK-5344B, которые являются предметом настоящего изобретения, микроорганизм, продуцирующий соединение WK-5344 и относящийся к роду Streptomyces, выращивается на предпочтительной среде. При культивировании указанного микроорганизма обычно используют метод культивирования для обычных микроорганизмов. Примерами среды служат такие питательные среды, которые содержат усвояемые микроорганизмами источники углерода, легко усваиваемые микроорганизмами источники азота и, если необходимо, добавки неорганических солей.
Примерами вышеуказанных усвояемых микроорганизмами источников углерода являются глюкоза, сахароза, меласса, крахмал, декстрин, целлюлоза, глицерин и органические кислоты, которые используются в отдельности или в сочетании. Примерами легко усваиваемых микроорганизмами источников азота являются органические источники азота, такие как пептон, мясной экстракт, дрожжевой экстракт, сухие дрожжи, порошок соевых бобов, жидкий кукурузный экстракт, масло хлопковых семян, казеин, гидролизат соевого белка, аминокислоты и мочевина, а также неорганические источники азота, такие как нитрат и аммонийная соль, которые используются в отдельности или в сочетании.
Кроме того, если необходимо, добавляют неорганическую соль, такую как соль натрия, соль калия, соль кальция, соль магния и фосфат, а также соль тяжелого металла. В среду может быть добавлено незначительное количество азотсодержащего компонента, вещества, стимулирующего рост, или предшественника для стимулирования роста настоящего штамма и продуцирования соединения WK-5344A и соединения WK-5344B.
Культивирование может быть осуществлено в аэробных условиях, например при встряхивании культуры или при аэрационном перемешивании культуры. Значение рН среды, как правило, поддерживают таким, чтобы оно соответствовало нейтральным условиям. Для промышленного продуцирования предпочтительным является использование погружного аэратора. Культивирование можно осуществлять в интервале температуры 20-37oС, как правило, при 24-30oС, предпочтительно при 27oС. Продолжительность культивирования, как правило, составляет 2-6 дней для жидкой культуры, чтобы аккумулировать соединение WK-5344A и соединение WK-5344B, и культивирование может быть закончено, когда достигнут максимум продуцирования соединения WK-5344A и соединения WK-5344B.
Условия культивирования, такие как состав среды, температура культивирования, скорость перемешивания, объем аэрации, могут регулироваться и выбираться таким образом, чтобы получить наиболее предпочтительные условия в зависимости от используемого типа штамма и внешних условий. В случае жидкой культуры, если происходит вспенивание, могут быть использованы антивспенивающие средства, такие как силиконовое масло, растительное масло и поверхностно-активные агенты.
Поскольку соединение WK-5344A и соединение WK-5344B, которые накапливаются в культивируемой массе, содержаться в культуральной жидкости или в культуральном мицелии, культивируемую массу отфильтровывают, используя фильтрующее средство, такое как Целит (Celite) или Хайфлосуперселл (Hyflosupercell), или центрифугируют для того, чтобы разделить культуральную жидкость и мицелий, которые экстрагируют органическим растворителем, после чего экстракты преимущественно концентрируют и выделяют соединение WK-5344A и соединение WK-5344B.
Выделение соединения WK-5344A и соединения WK-5344B из культуральной жидкости осуществляют экстрагированием культурального фильтрата несмешивающимся с водой органическим растворителем, таким как этилацетат, бутилацетат или бензол, и концентрированием экстракта в вакууме для того, чтобы получить соединение WK-5344A и соединение WK-5344B. Указанное неочищенное вещество может быть очищено известными методами, применяемыми для очистки липофильных соединений, например методом колоночной хроматографии с использованием носителя, такого как силикагель или оксид алюминия, для получения очищенного соединения WK-5344A и очищенного соединения WK-5344B.
Для того, чтобы выделить соединение WK-5344A и соединение WK-5344B из мицелия, мицелий экстрагируют водным смешивающимся с водой органическим растворителем, таким как водный метанол, концентрируют экстракт в вакууме, экстрагируют концентрат несмешивающимся с водой органическим растворителем, таким как этилацетат, бутилацетат или бензол, затем очищают экстракт с последующим объединением или без объединения с вышеуказанным экстрактом, полученным из культуральной жидкости, получая при этом соединение WK-5344A и соединение WK-5344B.
Физико-химические свойства соединения WK-5344A и соединения WK-5344B, которые являются предметом настоящего изобретения, приведены ниже.
Соединение WK-5344A
Молекулярная формула: С45Н30N3O13Fе [по данным FAB масс-спектроскопии высокого разрешения, бомбардировка быстрыми атомами (положительный заряд), m/z, (M+H), измерено: 877, 1203; вычислено: 877, 1206].
Молекулярная формула: С45Н30N3O13Fе [по данным FAB масс-спектроскопии высокого разрешения, бомбардировка быстрыми атомами (положительный заряд), m/z, (M+H), измерено: 877, 1203; вычислено: 877, 1206].
Молекулярный вес: 876 [m/z, 877 (M+H)+ и 899 (N+Na)+ по данным FAB масс-спектроскопии, бомбардировка быстрыми атомами (положительный заряд)].
Удельное вращение: [α] - 3000o (с=0,01, метанол).
УФ-спектр: УФ-спектр, полученный в метаноле, приведен на фиг.1. Характеристические максимумы наблюдаются при 280, 305 (плечо), 440 и 690 нм.
ИК-спектр: ИК-спектр (таблетки с КВr) приведен на фиг.2. λ , см-1: 3400, 1728, 1701, 1597, 1493, 1385, 1284, 1207 и 1105.
Растворимость: соединение растворимо в метаноле, этаноле, ацетонитриле, этилацетате, хлороформе и диметилсульфоксиде. Нерастворимо в воде.
Характеристика вещества: нейтральное.
Окраска и внешний вид вещества: зеленоватый порошок.
Протонный ядерный магнитный резонанс (ПМР): фиг.3 (Varian-спектрометр, в дейтерированном метаноле, 400 МГц).
Ядерный магнитный резонанс (ЯМР) углеродных атомов: фиг.4 (Varian-спектрометр, в дейтерированном метаноле, 100 МГц).
Структура соединения WK-5344A, определенная путем анализа приведенных выше физико-химических характеристик и спектральных данных, является следующей:
Соединение WK-5344B
Молекулярная формула: C46H30N3O14Fe [по данным FAB масс-спектроскопии высокого разрешения, бомбардировка быстрыми атомами (положительный заряд), m/z, (M+H), измерено: 905, 1151; вычислено: 905, 1155].
Соединение WK-5344B
Молекулярная формула: C46H30N3O14Fe [по данным FAB масс-спектроскопии высокого разрешения, бомбардировка быстрыми атомами (положительный заряд), m/z, (M+H), измерено: 905, 1151; вычислено: 905, 1155].
Молекулярный вес: 904 [m/z, 905 (М+Н)+ по данным FAB масс-спектроскопии, бомбардировка быстрыми атомами, (положительный заряд)].
Удельное вращение: [α] -1000o (с=0,01, метанол).
УФ-спектр: УФ-спектр, полученный в метаноле, приведен на фиг.5. Характеристические максимумы наблюдаются при 285, 303 (плечо), 445 и 698 нм.
ИК-спектр: ИК-спектр (таблетки с КВг) приведен на фиг.6. λ , см-1: 3400, 1718, 1701, 1597, 1508, 1385, 1281, 1196 и 1105.
Растворимость: соединение растворимо в метаноле, этаноле, ацетонитриле, этилацетате, хлороформе и диметилсульфоксиде. Нерастворимо в воде.
Характеристика вещества: нейтральное.
Окраска и внешний вид вещества: зеленоватый порошок.
Протонный ядерный магнитный резонанс (ПМР): фиг.7 (Varian-спектрометр, в дейтерированном метаноле, 400 МГц).
Ядерный магнитный резонанс (ЯМР) углеродных атомов: фиг.8 (Varian-спектрометр, в дейтерированном метаноле, 100 МГц).
Структура соединения WK-5344B, определенная путем анализа приведенных выше физико-химических характеристик и спектральных данных, является следующей:
Как описано выше, физико-химические характеристики соединения WK-5344A и соединения WK-5344B раскрыты детально, ни о каких соединениях, которые обладали такими же свойствами, ранее не сообщалось, вследствие чего установлено, что соединение WK-5344A и соединение WK-5344B являются новыми соединениями.
Как описано выше, физико-химические характеристики соединения WK-5344A и соединения WK-5344B раскрыты детально, ни о каких соединениях, которые обладали такими же свойствами, ранее не сообщалось, вследствие чего установлено, что соединение WK-5344A и соединение WK-5344B являются новыми соединениями.
Биологические свойства и ингибирующая активность соединения WK-5344A и соединения WK-5344B, являющихся предметом настоящего изобретения, приведены ниже.
Ингибирующая активность в отношении белка человека, переносящего сложный эфир холестерина.
Воздействие на белок, переносящий сложные эфиры холестерина, определено с использованием неочищенного белка, полученного из плазмы человека, согласно методу, описанному Като и др. Journal of Biological Chemistry, 264, 4082-4087, 1989.
Смешивали реконструированный липопротеин высокой плотности (здесь и далее сокращенно HDL), содержащий 25 мкл [1-14C] сложного эфира холестерина, 10 мкл липопротеина низкой плотности человека (здесь и далее сокращенно LDL), 30 мкл 7 мМ 5,5-дитио-бис-нитробензойной кислоты и 5 мкл частично очищенного белка, переносящего сложный эфир холестерина. Суммарное количество реакционной смеси, составлявшее 150 мкл, подвергали взаимодействию при 37oС в течение 30 минут.
После завершения реакции к реакционной смеси добавляют 5 мкл 0,1% декстрансульфата, 5 мкл 6 мМ MgCl2 и 20 мкл фосфатного буфера, доведенного до ионной силы, равной 0,16, смесь помещают на лед на 20 минут. Полученную смесь центрифугируют при 4oС со скоростью 13000 об/мин в течение 15 минут. Собирают выпавшую в осадок LDL-фракцию. LDL-фракцию растворяют в 180 мкл 0,1 н. NaOH и определяют в LDL количество перенесенного сложного эфира холестерина с помощью жидкостного сцинтилляционного счетчика. Согласно полученным результатам, 50% ингибирование активности белка, переносящего сложный эфир холестерина, составляет 0,54 мкг/мл для соединения WK-5344A и 2,0 мкг/мл для соединения WK-5344B.
Как описано выше, соединение WK-5344A и соединение WK-5344B, которые являются предметом настоящего изобретения, проявляют значительную ингибирующую активность в отношении белка, переносящего сложный эфир холестерина, и, как полагают, являются полезными для профилактики лечения заболеваний, вызванных накоплением холестерина в организме человека.
На фиг. 1 приведен УФ-спектр соединения WK-5344A, являющегося предметом настоящего изобретения (в СН3ОН).
На фиг. 2 приведен ИК-спектр соединения WK-5344A, являющегося предметом настоящего изобретения (таблетки с KBr).
На фиг.3 приведен спектр протонного ядерного магнитного резонанса соединения WK-5344A, являющегося предметом настоящего изобретения (CD3OD).
На фиг.4 приведен спектр ядерного магнитного резонанса углеродных атомов соединения WK-5344A, являющегося предметом настоящего изобретения (CD3OD).
На фиг. 5 приведен УФ-спектр соединения WK-5344B, являющегося предметом настоящего изобретения (в СН3ОН).
На фиг. 6 приведен ИК-спектр соединения WK-5344B, являющегося предметом настоящего изобретения (таблетки с KBr).
На фиг.7 приведен спектр протонного ядерного магнитного резонанса соединения WK-5344B, являющегося предметом настоящего изобретения (CD3OD).
На фиг.8 приведен спектр ядерного магнитного резонанса углеродных атомов соединения WK-5344B, являющегося предметом настоящего изобретения (СD3OD).
Подробное описание выполнения изобретения
Приведенный ниже пример иллюстрирует настоящее изобретение, но не ограничивает его объем.
Приведенный ниже пример иллюстрирует настоящее изобретение, но не ограничивает его объем.
100 мл среды (доведенной до рН 7,0), содержащей 2,4% крахмала, 0,5% экстракта дрожжей, 0,1% глюкозы, 0,3% пептона, 0,3% мясного экстракта и 0,4% СаСО3 в 500 мл колбе Эрленмейера, закупоренной хлопчатобумажным материалом, стерилизуют паром. После охлаждения платиновую петлю Streptomyces sp. WK-5344 FERM BP-6668, выращенного на агаровой среде, асептически высевают на указанную выше среду и при встряхивании культивируют при 27oС в течение 72 часов, получая при этом семенную культуральную жидкость.
Стерилизуют паром среду (значение рН доведено до 6,5), содержащую 4,0% растворимого крахмала, 2,0% экстрагированной растворителем подсушенной соевой муки, 32 мкл/л 0,1 н. раствора тиосульфата натрия, 0,05% FeSO4•7H2O, 0,05% КН2РO4 и 0,03% KCl в 30-литровом встряхиваемом реакторе-ферментере. После охлаждения асептически инокулируют 200 мл семенной культуральной жидкости и культивируют при встряхивании со скоростью 20 об/мин и аэрировании 10 литров в минуту при 27oС в течение 96 часов.
После завершения культивирования мицелий, полученный центрифугированием культуральной жидкости, экстрагируют 6 л ацетона. Экстракт концентрируют в вакууме для того, чтобы удалить ацетон, доводят значение рН до 5,0, экстрагируют 10 л этилацетата, концентрируют экстракт в вакууме, получая при этом 9,20 г неочищенного соединения. Неочищенное соединение распределяют между гексаном, метанолом и водой (40:19:1), собирают вещество WK-5344, которое распределилось в нижний слой, и концентрируют в вакууме, получая при этом 1,29 г неочищенного соединения. Неочищенное соединение суспендируют в 10 мл ацетонитрила, помещают на колонку с ODS (20 мл, Senshu Co., SSC-ODS-7515-12) и хроматографируют, элюируя ацетонитрилом, содержащим 0,05% фосфорной кислоты. Отбирают 12 мл фракцию элюата и собирают фракции, содержащие активный ингредиент. После удаления ацетонитрила фракцию - водный слой - экстрагируют этилацетатом и высушивают в вакууме, получая при этом 157 мг неочищенного активного вещества.
157 мг неочищенного активного вещества растворяют в 1,57 мл метанола, помещают на колонку с ODS (147 мл, Senshu Co., SSC-ODS-7515-12) и хроматографируют при ступенчатом элюировании ацетонитрилом, содержащим 0,05% фосфорной кислоты. Отбирают 12 мл фракцию элюата и собирают фракции, содержащие активный ингредиент. После удаления ацетонитрила фракцию - водный слой - экстрагируют этилацетатом и высушивают в вакууме, получая при этом 19,5 мг неочищенного активного вещества.
19,5 мг неочищенного активного вещества растворяют в 0,5 мл хлороформа, помещают на колонку с силикагелем (126 мл, Kiesel gel 60) и хроматографируют, элюируя хлороформом и метанолом. Каждую фракцию фракционируют с 12 мл. В результате выделяют 1,69 мг соединения WK-5344A и 1,12 мг соединения WK-5344B.
Эффект изобретения
Как описано выше, микроорганизм, относящийся к роду Streptomyces и обладающий способностью продуцировать соединение WK-5344A и соединение WK-5344B, выращивали в среде для аккумулирования соединения WK-5344A и соединения WK-5344B в культивируемой массе. Соединение WK-5344A и соединение WK-5344B выделяют из указанной культивируемой массы, получая при этом вещества, обладающие ингибирующим действием на белок, переносящий сложный эфир холестерина. Указанные соединения, как ожидается, оказывают профилактическое и терапевтическое действие в отношении заболеваний взрослых, таких как инфаркт миокарда и инсульт, вызываемых артериальным склерозом.
Как описано выше, микроорганизм, относящийся к роду Streptomyces и обладающий способностью продуцировать соединение WK-5344A и соединение WK-5344B, выращивали в среде для аккумулирования соединения WK-5344A и соединения WK-5344B в культивируемой массе. Соединение WK-5344A и соединение WK-5344B выделяют из указанной культивируемой массы, получая при этом вещества, обладающие ингибирующим действием на белок, переносящий сложный эфир холестерина. Указанные соединения, как ожидается, оказывают профилактическое и терапевтическое действие в отношении заболеваний взрослых, таких как инфаркт миокарда и инсульт, вызываемых артериальным склерозом.
Claims (4)
1. Соединение WK-5344A, представленное следующей формулой: (см. графическую часть)
или его соль.
или его соль.
2. Соединение WK-5344В, представленное следующей формулой: (см. графическую часть)
или его соль.
или его соль.
3. Способ получения соединения WK-5344A и соединения WK-5344В или их фармацевтически приемлемой соли, включающий культивирование микроорганизма, относящегося к штамму Streptomyces sp. WK-5344 FERM BP-6668, обладающего способностью продуцировать соединение WK-5344A и соединение WK-5344B в среде, аккумулирование соединения WK-5344A и соединения WK-5344B в культуральной среде и выделение соединения WK-5344A и соединения WK-5344 из указанной культуральной среды, и, при необходимости, превращение указанных соединений в их фармацевтически приемлемые соли.
4. Штамм Streptomyces sp. WK-5344 FERM BP-6668, обладающий способностью продуцировать соединение WK-5344A и соединение WK-5344В.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PCT/JP1999/001101 WO2000053792A1 (fr) | 1999-03-08 | 1999-03-08 | Substances wk-5344a et wk-5344b et leur procede de production |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2001114212A RU2001114212A (ru) | 2003-02-27 |
| RU2201964C2 true RU2201964C2 (ru) | 2003-04-10 |
Family
ID=14235131
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2001114212/13A RU2201964C2 (ru) | 1999-03-08 | 1999-03-08 | Соединение wk-5344а и соединение wk-5344b, способ их получения и продуцирующий их штамм streptomyces sp. wk-5344 ferm bp-6668 |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6512008B1 (ru) |
| EP (1) | EP1160330B1 (ru) |
| JP (1) | JP4351395B2 (ru) |
| KR (1) | KR100436036B1 (ru) |
| CN (1) | CN1139660C (ru) |
| AU (1) | AU751849B2 (ru) |
| BR (1) | BR9916018A (ru) |
| CA (1) | CA2350913C (ru) |
| DE (1) | DE69932746D1 (ru) |
| HU (1) | HUP0105166A3 (ru) |
| NO (1) | NO20012606L (ru) |
| NZ (1) | NZ511728A (ru) |
| RU (1) | RU2201964C2 (ru) |
| WO (1) | WO2000053792A1 (ru) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7115279B2 (en) | 2000-08-03 | 2006-10-03 | Curatolo William J | Pharmaceutical compositions of cholesteryl ester transfer protein inhibitors |
| EP1269994A3 (en) | 2001-06-22 | 2003-02-12 | Pfizer Products Inc. | Pharmaceutical compositions comprising drug and concentration-enhancing polymers |
| AR038375A1 (es) | 2002-02-01 | 2005-01-12 | Pfizer Prod Inc | Composiciones farmaceuticas de inhibidores de la proteina de transferencia de esteres de colesterilo |
| SG146695A1 (en) | 2003-09-26 | 2008-10-30 | Japan Tobacco Inc | Method of inhibiting remnant lipoprotein production |
| WO2006098394A1 (ja) * | 2005-03-14 | 2006-09-21 | Japan Tobacco Inc. | 脂質吸収抑制方法および脂質吸収抑制剤 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5272174A (en) * | 1985-09-13 | 1993-12-21 | Sankyo Company, Limited | Hydroxy-ML-236B derivatives, their preparation and use |
-
1999
- 1999-03-08 KR KR10-2001-7006383A patent/KR100436036B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1999-03-08 NZ NZ511728A patent/NZ511728A/xx unknown
- 1999-03-08 BR BR9916018-8A patent/BR9916018A/pt not_active IP Right Cessation
- 1999-03-08 EP EP99973760A patent/EP1160330B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-03-08 RU RU2001114212/13A patent/RU2201964C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1999-03-08 CA CA002350913A patent/CA2350913C/en not_active Expired - Fee Related
- 1999-03-08 US US09/857,268 patent/US6512008B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1999-03-08 JP JP2000603413A patent/JP4351395B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1999-03-08 AU AU32754/99A patent/AU751849B2/en not_active Withdrawn - After Issue
- 1999-03-08 WO PCT/JP1999/001101 patent/WO2000053792A1/ja active IP Right Grant
- 1999-03-08 HU HU0105166A patent/HUP0105166A3/hu unknown
- 1999-03-08 CN CNB998155659A patent/CN1139660C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1999-03-08 DE DE69932746T patent/DE69932746D1/de not_active Expired - Lifetime
-
2001
- 2001-05-28 NO NO20012606A patent/NO20012606L/no unknown
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ENDO A, Compactin (ML-236B) and related compounds as potential cholosterol lowering agents that inhibit HMG-CoA reductase, Journal of medecinal chemistry, 1985, v.28, №4, p.401-405. ENDO A. The discovery and development of HMG-CoA reductase inhibitors, Journal of Lipid Research, 1992, v.33, p.1569-1582. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU751849B2 (en) | 2002-08-29 |
| EP1160330A1 (en) | 2001-12-05 |
| HUP0105166A3 (en) | 2003-10-28 |
| CA2350913C (en) | 2007-01-30 |
| US6512008B1 (en) | 2003-01-28 |
| JP4351395B2 (ja) | 2009-10-28 |
| CN1139660C (zh) | 2004-02-25 |
| KR20010107979A (ko) | 2001-12-07 |
| HUP0105166A2 (hu) | 2002-04-29 |
| BR9916018A (pt) | 2001-11-13 |
| AU3275499A (en) | 2000-09-28 |
| NO20012606L (no) | 2001-11-08 |
| DE69932746D1 (de) | 2006-09-21 |
| NO20012606D0 (no) | 2001-05-28 |
| KR100436036B1 (ko) | 2004-06-12 |
| EP1160330B1 (en) | 2006-08-09 |
| CA2350913A1 (en) | 2000-09-14 |
| WO2000053792A1 (fr) | 2000-09-14 |
| NZ511728A (en) | 2003-06-30 |
| CN1333836A (zh) | 2002-01-30 |
| EP1160330A4 (en) | 2003-07-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP4095772B2 (ja) | 新規生理活性物質スルフォスチン、その製造法及びその用途 | |
| JPH10287662A (ja) | Ｆｏ−５６３７ａ物質及びｂ物質並びにそれらの製造法 | |
| KR100366258B1 (ko) | 신규 kf-1040 물질 및 그 제조법 | |
| KR0135600B1 (ko) | 항암 항생물질 mi43-37f11, 그 제조방법 및 그 용도 | |
| US5334587A (en) | Compounds, named the "Leustroducsins", their preparation and their therapeutic uses | |
| RU2201964C2 (ru) | Соединение wk-5344а и соединение wk-5344b, способ их получения и продуцирующий их штамм streptomyces sp. wk-5344 ferm bp-6668 | |
| KR100446323B1 (ko) | Ｇｍ-95 물질, 이의 제조 방법 및 용도 | |
| US5914348A (en) | Substance FA-70D, process for producing the same, and uses thereof | |
| JPH1045738A (ja) | 抗生物質エポキシキノマイシンｃおよびｄとその製造法ならびに抗リウマチ剤 | |
| HUT56395A (en) | Process for producing ws7622a, b, c, and d materials and their derivatives | |
| JPH03157372A (ja) | Ｙｌ―０１８６９ｐ物質及びその製造法 | |
| AU2002301970B2 (en) | WK-5344A substance and WK-5344B substance and production thereof | |
| US6818422B2 (en) | Substances K97-0239 and process for producing the same | |
| MXPA01005565A (en) | Substances wk-5344a and wk-5344b and process for producing the same | |
| JP2002332297A (ja) | 生理活性化合物チロペプチンａおよびｂとその製造方法 | |
| JPH06135982A (ja) | 新規生理活性物質ｈｒ０４ | |
| JPH06157520A (ja) | 新規物質ｈｑ２４ | |
| JPH06339395A (ja) | 新規生理活性物質及びその製造法 | |
| JPH0631283B2 (ja) | 生理活性物質ｆａ−１８１９，その製造法およびそれを含有する治療剤 | |
| JPS62205055A (ja) | 新規生理活性物質ｓｋ−１８９４およびその製造法 | |
| EP1489187A1 (en) | Osteoclast differentiation inhibitors | |
| JPH0815435B2 (ja) | 新規血小板凝集抑制物質ｏｍ−４８４２ａ、その製造法およびその用途 | |
| JPS62190193A (ja) | 新規血小板凝集抑制物質アグリセリドａ，ｂ，ｃそれらの製造法およびそれらの用途 | |
| JP2000344768A (ja) | 新規化合物ａ−７７５４３及びその製造法 | |
| WO1997003944A1 (en) | Aliphatic tricarboxylic acid compounds and their production process |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20070309 |