RU2191600C1 - Способ получения антирабической вакцины - Google Patents

Способ получения антирабической вакцины Download PDF

Info

Publication number
RU2191600C1
RU2191600C1 RU2001134269/13A RU2001134269A RU2191600C1 RU 2191600 C1 RU2191600 C1 RU 2191600C1 RU 2001134269/13 A RU2001134269/13 A RU 2001134269/13A RU 2001134269 A RU2001134269 A RU 2001134269A RU 2191600 C1 RU2191600 C1 RU 2191600C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
virus
vnk
rabies
strain
culture
Prior art date
Application number
RU2001134269/13A
Other languages
English (en)
Inventor
Н.Д. Скичко
С.Н. Красуткин
Н.В. Мельник
В.С. Иванов
Н.И. Зенов
Original Assignee
Скичко Николай Данилович
Мельник Николай Васильевич
Зенов Николай Иванович
Иванов Виктор Серафимович
Красуткин Сергей Николаевич
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Скичко Николай Данилович, Мельник Николай Васильевич, Зенов Николай Иванович, Иванов Виктор Серафимович, Красуткин Сергей Николаевич filed Critical Скичко Николай Данилович
Priority to RU2001134269/13A priority Critical patent/RU2191600C1/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2191600C1 publication Critical patent/RU2191600C1/ru

Links

Images

Landscapes

  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Изобретение относится к ветеринарной биотехнологии и может быть использовано при промышленном производстве высокоиммуногенных безвредных антирабических вакцин. Способ включает приготовление посевного материала из штамма вируса бешенства "Щелково-51", инфицирование посевным материалом культуры перевиваемых клеток ВНК-21, культивирование вируса бешенства, сбор вируссодержащей жидкости, инактивацию вируса и последующее приготовление целевого продукта в жидкой или лиофилизированной форме. Посевной материал получают в культуре клеток ВНК-21. При этом первично репродуцированный вирус подвергают термической обработке до сохранения в обрабатываемой популяции 0,001-0,0001% интрацеребральных мышиных ЛД50. Полученную вируссодержащую суспензию, содержащую термостабильные вирусные частицы, используют для инфицирования культуры клеток ВНК-21. Причем термическую обработку первично репродуцированного в клетках ВНК-21 штамма вируса бешенства "Щелково-51" проводят в течение 140-160 ч при температуре 37-38oС. При более производительном и технологическом способе изготовления вакцина обладает большей иммуногенной потенцией и более надежно будет защищать животных от бешенства. Этот эффект объясним тем, что в результате термообработки в популяции вируса стали преобладать наиболее устойчивые полноценные вирионы. 1 з.п.ф-лы, 1 табл.

Description

Изобретение относится к ветеринарной биотехнологии и может быть использовано при промышленном производстве высокоиммуногенных безвредных антирабических вакцин против бешенства животных.
Известен способ получения антирабической вакцины, включающий репродукцию вируса бешенства штамм "Щелково-51" в культуре перевиваемых клеток ВНК-21, внесение по окончании репродукции вируса в вируссодержащую суспензию стабилизатора - полиакриловую кислоту или ее соль, затем инактиватора - димер этиленимина ((ДЭИ) до концентрации 0,1-0,3%, инкубации смеси при 37oС в течение 20-24 ч с последующей расфасовкой полученной вакцины для сублимационного высушивания или реализации в жидком виде ((RU 2134590 С, опубл. 20.08.1999).
Однако в известном способе ДЭИ используют в высокой концентрации, что приводит к значительной потере первоначальной иммуногенной активности вируса в процессе изготовления вакцины.
Кроме того, в получаемом материале, особенно на первых этапах репродукции, содержится значительное количество неполноценных дефектных вирионов, что не в полной мере способствует проявлению иммуногенной потенции штамма "Щелково-51".
Наиболее близким аналогом является способ получения антирабической вакцины, включающий репродукцию штамма вируса бешенства "Щелково-51" в культуре перевиваемых клеток ВНК-21, внесение в вируссодержащую суспензию инактиватора бета-пропиолактона до концентрации 0,02-0,03%, инкубацию смеси при температуре 4-6oС в течение 2-4 ч с последующим добавлением стабилизирующей среды на основе пептона, сахарозы и желатина, и адъюванта сапонина (RU 955577 А, опубл. 15.08.1994).
Недостатком ближайшего аналога является то, что по существующей технологии обязательна стадия получения посевного материала путем размножения вируса "Щелково-51" в мозге овец. Из-за значительной инфицированности овец возбудителем скрейпи существует постоянная угроза его попадания с мозговой тканью в состав изготовляемой вакцины, как следствие этого, распространение прионовой инфекции среди прививаемого поголовья сельскохозяйственных и домашних животных. Поэтому процесс получения мозгового посевного материала является очень ответственной, трудоемкой и дорогостоящей операцией, связанной с тщательным отбором животных и контролем мозговой вируссодержащей ткани и изготовленных серий вакцины на наличие посторонних агентов.
Задачей изобретения является усовершенствование промышленной технологии производства антирабической вакцины из штамма "Щелково-51".
Технический результат изобретения заключается в упрощении технологии производства вакцины, сокращении затрат, повышении иммуногенности и безопасности получаемой вакцины за счет получения полноценных вирионов с полным спектром антигенов и исключения возможности включения в ее состав возбудителя скрейпи.
Сущность изобретения. Способ получения антирабической вакцины включает приготовление посевного материала из штамма вируса бешенства "Щелково-51", инфицирование посевным материалом культуры перевиваемых клеток ВНК-21, культивирование вируса бешенства, сбор вируссодержащей жидкости, инактивацию вируса с последующим приготовлением целевого продукта в жидкой или лиофилизированной форме, и отличается тем, что посевной материала получают в культуре клеток ВНК-21, при этом первично репродуцированный вирус подвергают термической обработке до сохранения в обрабатываемой популяции 0,001-0,0001% интрацеребральных мышиных ЛД50, а полученную вируссодержащую суспензию, содержащую термостабильные вирусные частицы, используют для инфицирования культуры клеток ВНК-21. Причем термическую обработку первично репродуцированного в клетках ВНК-21 штамма вируса бешенства "Щелково-51" проводят в течение 140-160 ч при температуре 37-38oС.
Для получения посевного материала полностью исключаются овцы. В результате термообработки в термостабильной популяции вируса стали преобладать наиболее устойчивые полноценные вирионы. Кроме того, эффективность культивирования вируса, прошедшего термическую стадию обработки, значительно выше по сравнению с контролем, что проявляется как в динамике накопления вируса, так и в повышении выхода вируса в целом (увеличивается количество сборов вируса).
Вакцины, приготовленные согласно изобретению, при более производительном и технологичном способе изготовления обладают большей иммуногенной потенцией и более надежно будут защищать животных от бешенства.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами.
Пример. Для приготовления вакцины используют культуру перевиваемых клеток ВНК-21, которую получают роллерным способом в виде кругового монослоя в бутылях. В качестве ростовой и поддерживающей питательной среды используют среду на основе среды 199, среды Игла и 10%-ной нативной сыворотки крупного рогатого скота. 2-3-суточный монослой клеток отделяют от поверхности стекла бутылей общепринятым способом, например с помощью версена и трипсина, и ресуспендируют в ростовой среде.
Полученную клеточную взвесь заражают посевным материалом, подготовленным следующим образом: исходный производственный штамм вируса бешенства "Щелково-51" подвергают термообработке до сохранения им инфекционной активности от 0,0001 до 0,001% интрацеребральных мышиных ЛД50.
Для этого первично репродуцированный вирус пассируют в культуре клеток ВНК-21 при температуре 37,5oС в течение 140-160 ч. Далее вируссодержащую суспензию, содержащую термостабильные вирусные частицы, используют в качестве посевного материала для инфицирования и репродуцирования в культуре клеток ВНК-21.
Культивирование осуществляют роллерным способом при температуре 37oС. Затем проводят сбор вируссодержащей жидкости на 2, 3, 4, 5 и 6 сутки культивирования. Замену ростовой питательной среды проводят после каждого сбора вируса. Начиная с 4-х суток культивирования включение сыворотки крупного рогатого скота в состав питательной среды не требуется. Полученные сборы инактивируют известным способом, например бетапропиолактоном или ДЭИ.
Для изготовления сухих антирабических вакцин к 2-м частям инактивированной вируссодержащей жидкости добавляют 1 часть среды высушивания.
Для изготовления жидкой антирабической вакцины к инактивированной вируссодержащей жидкости добавляют адъювант - 6%-ную гидроокись алюминия.
Готовые вакцины проходят биологический контроль на белых мышах по методу NIH (Института здравоохранения США). Индексы иммуногенности вакцин, полученных согласно изобретению, намного выше, чем у вакцин, полученных по известным технологиям. Данные контроля приведены в таблице.
Как видно из таблицы, полученная вакцина имеет высокую иммуногенную активность при более производительном и технологичном способе изготовления.

Claims (2)

1. Способ получения антирабической вакцины, включающий приготовление посевного материала из штамма вируса "Щелково-51", инфицирование посевным материалом культуры перевиваемых клеток ВНК-21, культивирование вируса бешенства, сбор вируссодержащей жидкости, инактивацию вируса с последующим приготовлением целевого продукта в жидкой или лиофилизированной форме, отличающийся тем, что посевной материал получают в культуре клеток ВНК-21, при этом первично репродуцированный вирус подвергают термической обработке до сохранения им в обрабатываемой популяции 0,001-0,0001% интрацеребральных мышиных ЛД50, а полученную вируссодержащую суспензию, содержащую термостабильные вирусные частицы, используют для инфицирования культуры клеток ВНК-21.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что термическую обработку проводят в течение 140-160 ч при температуре 37-38oС.
RU2001134269/13A 2001-12-20 2001-12-20 Способ получения антирабической вакцины RU2191600C1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2001134269/13A RU2191600C1 (ru) 2001-12-20 2001-12-20 Способ получения антирабической вакцины

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2001134269/13A RU2191600C1 (ru) 2001-12-20 2001-12-20 Способ получения антирабической вакцины

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2191600C1 true RU2191600C1 (ru) 2002-10-27

Family

ID=20254771

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2001134269/13A RU2191600C1 (ru) 2001-12-20 2001-12-20 Способ получения антирабической вакцины

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2191600C1 (ru)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014168510A1 (ru) * 2013-04-11 2014-10-16 Федеральное Казенное Предприятие "Щелковский Биокомбинат" Способ получения антирабической вакцины
RU2537183C2 (ru) * 2012-12-17 2014-12-27 Открытое Акционерное Общество "Институт Биотехнологий Ветеринарной Медицины" Способ получения инактивированной антирабической вакцины при безопорном выращивании клеток и репродукции в них вируса в укороченном цикле культивирования
RU2816765C1 (ru) * 2023-11-07 2024-04-04 Общество с ограниченной ответственностью "БИОТЕХНО" Способ получения культуральной инактивированной вакцины против вируса бешенства

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2537183C2 (ru) * 2012-12-17 2014-12-27 Открытое Акционерное Общество "Институт Биотехнологий Ветеринарной Медицины" Способ получения инактивированной антирабической вакцины при безопорном выращивании клеток и репродукции в них вируса в укороченном цикле культивирования
WO2014168510A1 (ru) * 2013-04-11 2014-10-16 Федеральное Казенное Предприятие "Щелковский Биокомбинат" Способ получения антирабической вакцины
RU2538617C2 (ru) * 2013-04-11 2015-01-10 Федеральное Казенное Предприятие "Щелковский Биокомбинат" Способ получения антирабической вакцины
RU2816765C1 (ru) * 2023-11-07 2024-04-04 Общество с ограниченной ответственностью "БИОТЕХНО" Способ получения культуральной инактивированной вакцины против вируса бешенства

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US3520972A (en) Feline virus vaccines obtained by propagation and serial passage attenuation of virulent feline viruses in diploid feline embryo tissue cell serial passage subculture strains
CN1800374A (zh) 一种重组伪狂犬病-猪繁殖与呼吸综合征基因工程毒株及应用
CN1217212A (zh) 甲肝-麻疹二联疫苗及其生产方法
GB1522006A (en) Feline calicivirus vaccine and a process for the production thereof
RU2191600C1 (ru) Способ получения антирабической вакцины
CN108517318A (zh) 一种猪流行性腹泻病毒的变异毒株及其应用
RU2287343C1 (ru) Способ получения антирабической вакцины
US4021302A (en) Cell cultures
CN109666653B (zh) 一种狂犬病疫苗病毒的传代培养方法、狂犬病疫苗的制备方法
CN101525597B (zh) 新的甲型肝炎灭活疫苗病毒毒株及其培养方法
CN107881154B (zh) 貉细小病毒弱毒疫苗株及其在制备貉细小病毒弱毒疫苗中的用途
RU2294760C2 (ru) Вакцина инактивированная сорбированная против ящура типа а
CN110237247A (zh) 一种利用细胞工厂生产ⅰ群禽腺病毒灭活疫苗的方法
RU2035918C1 (ru) Способ изготовления вакцины против вирусного гепатита утят
CN112057612B (zh) 一种用wsl细胞系制备非洲猪瘟病毒活疫苗的应用及其制备方法
Abdualiyeva et al. Improving the Technology of obtaining an inactivated Antirabic vaccine from CVS-11 strain
RU2077338C1 (ru) Способ изготовления антирабической вакцины инактивированной культуральной
RU2142816C1 (ru) Способ получения антигерпетической вакцины и лекарственная форма на ее основе
CN110862956B (zh) 一种新城疫病毒/全悬浮chok1细胞株及其制法和采用该细胞株制备的抗原及疫苗
RU2631129C1 (ru) Способ изготовления вакцины против ящура и вакцина против ящура
RU955576C (ru) Способ получения вакцины против вирусного энтерита норок
RU2129442C1 (ru) Способ получения вакцины против чумы плотоядных
US4412002A (en) Process for preparing hepatitis A virus
CN1443844A (zh) 新的甲型肝炎病毒毒株,制备甲肝灭活疫苗的方法及所得疫苗
BR102016004653A2 (pt) processo compacto de produção de vacina antirrábica veterinária utilizando células bhk-21, vírus pv e método de perfusão

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20041221

NF4A Reinstatement of patent

Effective date: 20070320

QZ4A Changes in the licence of a patent

Effective date: 20040304

QZ41 Official registration of changes to a registered agreement (patent)

Free format text: LICENCE FORMERLY AGREED ON 20040304

Effective date: 20130307

MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20151221