RU2191600C1 - Способ получения антирабической вакцины - Google Patents
Способ получения антирабической вакцины Download PDFInfo
- Publication number
- RU2191600C1 RU2191600C1 RU2001134269/13A RU2001134269A RU2191600C1 RU 2191600 C1 RU2191600 C1 RU 2191600C1 RU 2001134269/13 A RU2001134269/13 A RU 2001134269/13A RU 2001134269 A RU2001134269 A RU 2001134269A RU 2191600 C1 RU2191600 C1 RU 2191600C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- virus
- vnk
- rabies
- strain
- culture
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к ветеринарной биотехнологии и может быть использовано при промышленном производстве высокоиммуногенных безвредных антирабических вакцин. Способ включает приготовление посевного материала из штамма вируса бешенства "Щелково-51", инфицирование посевным материалом культуры перевиваемых клеток ВНК-21, культивирование вируса бешенства, сбор вируссодержащей жидкости, инактивацию вируса и последующее приготовление целевого продукта в жидкой или лиофилизированной форме. Посевной материал получают в культуре клеток ВНК-21. При этом первично репродуцированный вирус подвергают термической обработке до сохранения в обрабатываемой популяции 0,001-0,0001% интрацеребральных мышиных ЛД50. Полученную вируссодержащую суспензию, содержащую термостабильные вирусные частицы, используют для инфицирования культуры клеток ВНК-21. Причем термическую обработку первично репродуцированного в клетках ВНК-21 штамма вируса бешенства "Щелково-51" проводят в течение 140-160 ч при температуре 37-38oС. При более производительном и технологическом способе изготовления вакцина обладает большей иммуногенной потенцией и более надежно будет защищать животных от бешенства. Этот эффект объясним тем, что в результате термообработки в популяции вируса стали преобладать наиболее устойчивые полноценные вирионы. 1 з.п.ф-лы, 1 табл.
Description
Изобретение относится к ветеринарной биотехнологии и может быть использовано при промышленном производстве высокоиммуногенных безвредных антирабических вакцин против бешенства животных.
Известен способ получения антирабической вакцины, включающий репродукцию вируса бешенства штамм "Щелково-51" в культуре перевиваемых клеток ВНК-21, внесение по окончании репродукции вируса в вируссодержащую суспензию стабилизатора - полиакриловую кислоту или ее соль, затем инактиватора - димер этиленимина ((ДЭИ) до концентрации 0,1-0,3%, инкубации смеси при 37oС в течение 20-24 ч с последующей расфасовкой полученной вакцины для сублимационного высушивания или реализации в жидком виде ((RU 2134590 С, опубл. 20.08.1999).
Однако в известном способе ДЭИ используют в высокой концентрации, что приводит к значительной потере первоначальной иммуногенной активности вируса в процессе изготовления вакцины.
Кроме того, в получаемом материале, особенно на первых этапах репродукции, содержится значительное количество неполноценных дефектных вирионов, что не в полной мере способствует проявлению иммуногенной потенции штамма "Щелково-51".
Наиболее близким аналогом является способ получения антирабической вакцины, включающий репродукцию штамма вируса бешенства "Щелково-51" в культуре перевиваемых клеток ВНК-21, внесение в вируссодержащую суспензию инактиватора бета-пропиолактона до концентрации 0,02-0,03%, инкубацию смеси при температуре 4-6oС в течение 2-4 ч с последующим добавлением стабилизирующей среды на основе пептона, сахарозы и желатина, и адъюванта сапонина (RU 955577 А, опубл. 15.08.1994).
Недостатком ближайшего аналога является то, что по существующей технологии обязательна стадия получения посевного материала путем размножения вируса "Щелково-51" в мозге овец. Из-за значительной инфицированности овец возбудителем скрейпи существует постоянная угроза его попадания с мозговой тканью в состав изготовляемой вакцины, как следствие этого, распространение прионовой инфекции среди прививаемого поголовья сельскохозяйственных и домашних животных. Поэтому процесс получения мозгового посевного материала является очень ответственной, трудоемкой и дорогостоящей операцией, связанной с тщательным отбором животных и контролем мозговой вируссодержащей ткани и изготовленных серий вакцины на наличие посторонних агентов.
Задачей изобретения является усовершенствование промышленной технологии производства антирабической вакцины из штамма "Щелково-51".
Технический результат изобретения заключается в упрощении технологии производства вакцины, сокращении затрат, повышении иммуногенности и безопасности получаемой вакцины за счет получения полноценных вирионов с полным спектром антигенов и исключения возможности включения в ее состав возбудителя скрейпи.
Сущность изобретения. Способ получения антирабической вакцины включает приготовление посевного материала из штамма вируса бешенства "Щелково-51", инфицирование посевным материалом культуры перевиваемых клеток ВНК-21, культивирование вируса бешенства, сбор вируссодержащей жидкости, инактивацию вируса с последующим приготовлением целевого продукта в жидкой или лиофилизированной форме, и отличается тем, что посевной материала получают в культуре клеток ВНК-21, при этом первично репродуцированный вирус подвергают термической обработке до сохранения в обрабатываемой популяции 0,001-0,0001% интрацеребральных мышиных ЛД50, а полученную вируссодержащую суспензию, содержащую термостабильные вирусные частицы, используют для инфицирования культуры клеток ВНК-21. Причем термическую обработку первично репродуцированного в клетках ВНК-21 штамма вируса бешенства "Щелково-51" проводят в течение 140-160 ч при температуре 37-38oС.
Для получения посевного материала полностью исключаются овцы. В результате термообработки в термостабильной популяции вируса стали преобладать наиболее устойчивые полноценные вирионы. Кроме того, эффективность культивирования вируса, прошедшего термическую стадию обработки, значительно выше по сравнению с контролем, что проявляется как в динамике накопления вируса, так и в повышении выхода вируса в целом (увеличивается количество сборов вируса).
Вакцины, приготовленные согласно изобретению, при более производительном и технологичном способе изготовления обладают большей иммуногенной потенцией и более надежно будут защищать животных от бешенства.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами.
Пример. Для приготовления вакцины используют культуру перевиваемых клеток ВНК-21, которую получают роллерным способом в виде кругового монослоя в бутылях. В качестве ростовой и поддерживающей питательной среды используют среду на основе среды 199, среды Игла и 10%-ной нативной сыворотки крупного рогатого скота. 2-3-суточный монослой клеток отделяют от поверхности стекла бутылей общепринятым способом, например с помощью версена и трипсина, и ресуспендируют в ростовой среде.
Полученную клеточную взвесь заражают посевным материалом, подготовленным следующим образом: исходный производственный штамм вируса бешенства "Щелково-51" подвергают термообработке до сохранения им инфекционной активности от 0,0001 до 0,001% интрацеребральных мышиных ЛД50.
Для этого первично репродуцированный вирус пассируют в культуре клеток ВНК-21 при температуре 37,5oС в течение 140-160 ч. Далее вируссодержащую суспензию, содержащую термостабильные вирусные частицы, используют в качестве посевного материала для инфицирования и репродуцирования в культуре клеток ВНК-21.
Культивирование осуществляют роллерным способом при температуре 37oС. Затем проводят сбор вируссодержащей жидкости на 2, 3, 4, 5 и 6 сутки культивирования. Замену ростовой питательной среды проводят после каждого сбора вируса. Начиная с 4-х суток культивирования включение сыворотки крупного рогатого скота в состав питательной среды не требуется. Полученные сборы инактивируют известным способом, например бетапропиолактоном или ДЭИ.
Для изготовления сухих антирабических вакцин к 2-м частям инактивированной вируссодержащей жидкости добавляют 1 часть среды высушивания.
Для изготовления жидкой антирабической вакцины к инактивированной вируссодержащей жидкости добавляют адъювант - 6%-ную гидроокись алюминия.
Готовые вакцины проходят биологический контроль на белых мышах по методу NIH (Института здравоохранения США). Индексы иммуногенности вакцин, полученных согласно изобретению, намного выше, чем у вакцин, полученных по известным технологиям. Данные контроля приведены в таблице.
Как видно из таблицы, полученная вакцина имеет высокую иммуногенную активность при более производительном и технологичном способе изготовления.
Claims (2)
1. Способ получения антирабической вакцины, включающий приготовление посевного материала из штамма вируса "Щелково-51", инфицирование посевным материалом культуры перевиваемых клеток ВНК-21, культивирование вируса бешенства, сбор вируссодержащей жидкости, инактивацию вируса с последующим приготовлением целевого продукта в жидкой или лиофилизированной форме, отличающийся тем, что посевной материал получают в культуре клеток ВНК-21, при этом первично репродуцированный вирус подвергают термической обработке до сохранения им в обрабатываемой популяции 0,001-0,0001% интрацеребральных мышиных ЛД50, а полученную вируссодержащую суспензию, содержащую термостабильные вирусные частицы, используют для инфицирования культуры клеток ВНК-21.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что термическую обработку проводят в течение 140-160 ч при температуре 37-38oС.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2001134269/13A RU2191600C1 (ru) | 2001-12-20 | 2001-12-20 | Способ получения антирабической вакцины |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2001134269/13A RU2191600C1 (ru) | 2001-12-20 | 2001-12-20 | Способ получения антирабической вакцины |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2191600C1 true RU2191600C1 (ru) | 2002-10-27 |
Family
ID=20254771
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2001134269/13A RU2191600C1 (ru) | 2001-12-20 | 2001-12-20 | Способ получения антирабической вакцины |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2191600C1 (ru) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2014168510A1 (ru) * | 2013-04-11 | 2014-10-16 | Федеральное Казенное Предприятие "Щелковский Биокомбинат" | Способ получения антирабической вакцины |
RU2537183C2 (ru) * | 2012-12-17 | 2014-12-27 | Открытое Акционерное Общество "Институт Биотехнологий Ветеринарной Медицины" | Способ получения инактивированной антирабической вакцины при безопорном выращивании клеток и репродукции в них вируса в укороченном цикле культивирования |
RU2816765C1 (ru) * | 2023-11-07 | 2024-04-04 | Общество с ограниченной ответственностью "БИОТЕХНО" | Способ получения культуральной инактивированной вакцины против вируса бешенства |
-
2001
- 2001-12-20 RU RU2001134269/13A patent/RU2191600C1/ru not_active IP Right Cessation
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2537183C2 (ru) * | 2012-12-17 | 2014-12-27 | Открытое Акционерное Общество "Институт Биотехнологий Ветеринарной Медицины" | Способ получения инактивированной антирабической вакцины при безопорном выращивании клеток и репродукции в них вируса в укороченном цикле культивирования |
WO2014168510A1 (ru) * | 2013-04-11 | 2014-10-16 | Федеральное Казенное Предприятие "Щелковский Биокомбинат" | Способ получения антирабической вакцины |
RU2538617C2 (ru) * | 2013-04-11 | 2015-01-10 | Федеральное Казенное Предприятие "Щелковский Биокомбинат" | Способ получения антирабической вакцины |
RU2816765C1 (ru) * | 2023-11-07 | 2024-04-04 | Общество с ограниченной ответственностью "БИОТЕХНО" | Способ получения культуральной инактивированной вакцины против вируса бешенства |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US3520972A (en) | Feline virus vaccines obtained by propagation and serial passage attenuation of virulent feline viruses in diploid feline embryo tissue cell serial passage subculture strains | |
CN1800374A (zh) | 一种重组伪狂犬病-猪繁殖与呼吸综合征基因工程毒株及应用 | |
CN1217212A (zh) | 甲肝-麻疹二联疫苗及其生产方法 | |
GB1522006A (en) | Feline calicivirus vaccine and a process for the production thereof | |
RU2191600C1 (ru) | Способ получения антирабической вакцины | |
CN108517318A (zh) | 一种猪流行性腹泻病毒的变异毒株及其应用 | |
RU2287343C1 (ru) | Способ получения антирабической вакцины | |
US4021302A (en) | Cell cultures | |
CN109666653B (zh) | 一种狂犬病疫苗病毒的传代培养方法、狂犬病疫苗的制备方法 | |
CN101525597B (zh) | 新的甲型肝炎灭活疫苗病毒毒株及其培养方法 | |
CN107881154B (zh) | 貉细小病毒弱毒疫苗株及其在制备貉细小病毒弱毒疫苗中的用途 | |
RU2294760C2 (ru) | Вакцина инактивированная сорбированная против ящура типа а | |
CN110237247A (zh) | 一种利用细胞工厂生产ⅰ群禽腺病毒灭活疫苗的方法 | |
RU2035918C1 (ru) | Способ изготовления вакцины против вирусного гепатита утят | |
CN112057612B (zh) | 一种用wsl细胞系制备非洲猪瘟病毒活疫苗的应用及其制备方法 | |
Abdualiyeva et al. | Improving the Technology of obtaining an inactivated Antirabic vaccine from CVS-11 strain | |
RU2077338C1 (ru) | Способ изготовления антирабической вакцины инактивированной культуральной | |
RU2142816C1 (ru) | Способ получения антигерпетической вакцины и лекарственная форма на ее основе | |
CN110862956B (zh) | 一种新城疫病毒/全悬浮chok1细胞株及其制法和采用该细胞株制备的抗原及疫苗 | |
RU2631129C1 (ru) | Способ изготовления вакцины против ящура и вакцина против ящура | |
RU955576C (ru) | Способ получения вакцины против вирусного энтерита норок | |
RU2129442C1 (ru) | Способ получения вакцины против чумы плотоядных | |
US4412002A (en) | Process for preparing hepatitis A virus | |
CN1443844A (zh) | 新的甲型肝炎病毒毒株,制备甲肝灭活疫苗的方法及所得疫苗 | |
BR102016004653A2 (pt) | processo compacto de produção de vacina antirrábica veterinária utilizando células bhk-21, vírus pv e método de perfusão |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20041221 |
|
NF4A | Reinstatement of patent |
Effective date: 20070320 |
|
QZ4A | Changes in the licence of a patent |
Effective date: 20040304 |
|
QZ41 | Official registration of changes to a registered agreement (patent) |
Free format text: LICENCE FORMERLY AGREED ON 20040304 Effective date: 20130307 |
|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20151221 |