RU2020101279A - Рекомбинантные вирусные векторы с модифицированным тропизмом и пути их применения для нацеленного введения генетического материала в клетки человека - Google Patents
Рекомбинантные вирусные векторы с модифицированным тропизмом и пути их применения для нацеленного введения генетического материала в клетки человека Download PDFInfo
- Publication number
- RU2020101279A RU2020101279A RU2020101279A RU2020101279A RU2020101279A RU 2020101279 A RU2020101279 A RU 2020101279A RU 2020101279 A RU2020101279 A RU 2020101279A RU 2020101279 A RU2020101279 A RU 2020101279A RU 2020101279 A RU2020101279 A RU 2020101279A
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- capsid protein
- protein
- recombinant viral
- paragraphs
- cell
- Prior art date
Links
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 title claims 22
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims 9
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims 4
- 230000010415 tropism Effects 0.000 title claims 4
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 title claims 2
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 claims 51
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 claims 51
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims 46
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims 28
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 24
- 238000000034 method Methods 0.000 claims 24
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 claims 18
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims 16
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims 16
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 claims 14
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims 13
- 102000023732 binding proteins Human genes 0.000 claims 10
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 claims 10
- 239000002458 cell surface marker Substances 0.000 claims 9
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 claims 8
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 claims 8
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 claims 7
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims 7
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 claims 7
- 241000702423 Adeno-associated virus - 2 Species 0.000 claims 6
- 241001164825 Adeno-associated virus - 8 Species 0.000 claims 6
- 241000972680 Adeno-associated virus - 6 Species 0.000 claims 5
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims 5
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims 4
- 102100029725 Ectonucleoside triphosphate diphosphohydrolase 3 Human genes 0.000 claims 3
- 101001012432 Homo sapiens Ectonucleoside triphosphate diphosphohydrolase 3 Proteins 0.000 claims 3
- 101001040075 Homo sapiens Glucagon receptor Proteins 0.000 claims 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims 2
- 108010002913 Asialoglycoproteins Proteins 0.000 claims 2
- 101000785944 Homo sapiens Asialoglycoprotein receptor 1 Proteins 0.000 claims 2
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 claims 2
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 claims 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims 2
- 241000288906 Primates Species 0.000 claims 2
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 claims 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims 2
- 102000051237 human ASGR1 Human genes 0.000 claims 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims 2
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 claims 2
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 claims 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims 2
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 claims 1
- 241001655883 Adeno-associated virus - 1 Species 0.000 claims 1
- 241000202702 Adeno-associated virus - 3 Species 0.000 claims 1
- 241000580270 Adeno-associated virus - 4 Species 0.000 claims 1
- 241001634120 Adeno-associated virus - 5 Species 0.000 claims 1
- 241001164823 Adeno-associated virus - 7 Species 0.000 claims 1
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 claims 1
- 108091033409 CRISPR Proteins 0.000 claims 1
- 238000010354 CRISPR gene editing Methods 0.000 claims 1
- 108010008532 Deoxyribonuclease I Proteins 0.000 claims 1
- 102000007260 Deoxyribonuclease I Human genes 0.000 claims 1
- 102100040890 Glucagon receptor Human genes 0.000 claims 1
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 claims 1
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 claims 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 claims 1
- 102100021244 Integral membrane protein GPR180 Human genes 0.000 claims 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims 1
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 claims 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims 1
- 210000004958 brain cell Anatomy 0.000 claims 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 claims 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 claims 1
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 claims 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 claims 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 claims 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims 1
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 claims 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 claims 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 claims 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 claims 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 claims 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 claims 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 claims 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 claims 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 claims 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 claims 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 claims 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/081—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from DNA viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2809—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2851—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the lectin superfamily, e.g. CD23, CD72
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2869—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against hormone receptors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/569—Single domain, e.g. dAb, sdAb, VHH, VNAR or nanobody®
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/40—Fusion polypeptide containing a tag for immunodetection, or an epitope for immunisation
- C07K2319/41—Fusion polypeptide containing a tag for immunodetection, or an epitope for immunisation containing a Myc-tag
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/10011—Adenoviridae
- C12N2710/10022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/10011—Adenoviridae
- C12N2710/10041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2710/10042—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector virus or viral particle as vehicle, e.g. encapsulating small organic molecule
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
- C12N2750/00011—Details
- C12N2750/14011—Parvoviridae
- C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
- C12N2750/14122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
- C12N2750/00011—Details
- C12N2750/14011—Parvoviridae
- C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
- C12N2750/14141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2750/14143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
- C12N2750/00011—Details
- C12N2750/14011—Parvoviridae
- C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
- C12N2750/14141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2750/14145—Special targeting system for viral vectors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2810/00—Vectors comprising a targeting moiety
- C12N2810/50—Vectors comprising as targeting moiety peptide derived from defined protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Neurology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Claims (115)
1. Рекомбинантный вирусный капсидный белок, содержащий эпитоп, который является гетерологичным по отношению к капсидному белку,
где гетерологичный эпитоп или его часть специфически связывают паратоп антитела, и
где вирусный капсидный белок образует рекомбинантный вирусный капсид с пониженным или устраненным природным тропизмом.
2. Рекомбинантный вирусный капсидный белок по п. 1, где длина эпитопа составляет по меньшей мере 1 аминокислоту.
3. Рекомбинантный вирусный капсидный белок по п. 1 или 2, содержащий замену, вставку или делецию в аминокислотном положении, связанном с природным тропизмом вирусного капсида, так что рекомбинантный вирусный капсидный белок образует вирусный капсид с пониженным вплоть до устраненного природным тропизмом.
4. Рекомбинантный вирусный капсидный белок по пп. 1-3, где вирусный капсидный белок получен с помощью гена капсида аденоассоциированного вируса (AAV), где необязательно гетерологичный эпитоп вставлен в положении, выбранном из группы, состоящей из I587 из AAV2, I585 из AAV6, I590 из AAV8, I453 из AAV9, I589 из AAV9 и любых соответствующих аминокислот серотипа AAV, который инфицирует приматов, где необязательно серотип AAV, который инфицирует приматов, выбран из группы, состоящей из AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8 и AAV9.
5. Рекомбинантный вирусный капсидный белок по п. 4, где аденоассоциированный вирус представляет собой AAV2.
6. Рекомбинантный вирусный капсидный белок по п. 4, где аденоассоциированный вирус представляет собой AAV6.
7. Рекомбинантный вирусный капсидный белок по п. 4, где аденоассоциированный вирус представляет собой AAV8.
8. Рекомбинантный вирусный капсидный белок по п. 4, где аденоассоциированный вирус представляет собой AAV9.
9. Рекомбинантный вирусный капсидный белок по любому из пп. 1-8, где
(i) вирусный капсидный белок представляет собой генетически модифицированный капсидный белок VP1 AAV2, и эпитоп вставлен после аминокислоты в положении I453 или I587 и/или заменяет ее;
(ii) вирусный капсидный белок представляет собой генетически модифицированный капсидный белок VP1 AAV6, и эпитоп вставлен после аминокислоты в положении I585 и/или заменяет ее;
(iii) вирусный капсид представляет собой генетически модифицированный капсидный белок VP1 AAV8, и эпитоп вставлен после аминокислоты в положении I590 и/или заменяет ее;
(iv) вирусный капсидный белок представляет собой генетически модифицированный капсидный белок VP1 AAV9, и эпитоп вставлен после аминокислоты в положении I453 или I589 и/или заменяет ее.
10. Рекомбинантный вирусный капсидный белок по любому из пп. 1-9, где вирусный капсидный белок кодируется геном капсида AAV2, модифицированным для экспрессии эпитопа, фланкированого аминокислотами N587 и R588 капсидного белка VP1 AAV2.
11. Рекомбинантный вирусный капсидный белок по любому из пп. 1-9, где вирусный капсидный белок получен с помощью гена капсида AAV6, и эпитоп вставлен непосредственно после аминокислоты Q585.
12. Рекомбинантный вирусный капсидный белок по любому из пп. 1-9, где вирусный капсидный белок получен с помощью гена капсида AAV8, и где эпитоп вставлен непосредственно после аминокислоты N590 капсидного белка VP1 AAV8.
13. Рекомбинантный вирусный капсидный белок по любому из пп. 1-9, где вирусный капсидный белок получен с помощью гена капсида AAV9, эпитоп вставлен в капсидный белок после аминокислоты в положении G453 или A589 капсидного белка VP1 AAV9 и/или заменяет ее, и где капсидный белок при этом содержит дополнительную мутацию.
14. Рекомбинантный вирусный капсидный белок по п. 13, где дополнительная мутация представляет собой W503A.
15. Рекомбинантный вирусный капсидный белок по любому из пп. 1-14, где эпитоп содержит аминокислотную последовательность EQKLISEEDL, при этом эта аминокислотная последовательность или ее часть специфически связывает паратоп антитела, и необязательно.
16. Рекомбинантный вирусный капсидный белок по любому из пп. 1-15, где эпитоп содержит аминокислотную последовательность EQKLISEEDL, при этом эта аминокислотная последовательность или ее часть специфически связывает паратоп антитела, и
где аминокислотная последовательность EQKLISEEDL фланкирована по меньшей мере 5 смежными аминокислотами капсидного белка AAV и функционально связана с ними.
17. Рекомбинантный вирусный капсидный белок по п. 16, где вирусный капсидный белок содержит аминокислотную последовательность, представленную под SEQ ID NO:2, аминокислотную последовательность, представленную под SEQ ID NO:4, аминокислотную последовательность, представленную под SEQ ID NO:25, аминокислотную последовательность, представленную под SEQ ID NO:26, или аминокислотную последовательность, представленную под SEQ ID NO:27.
18. Рекомбинантный вирусный капсидный белок по любому из пп. 1-17, где рекомбинантный вирусный капсидный белок или вирусный капсид, содержащий рекомбинантный вирусный капсидный белок, не способны инфицировать клетку-мишень в отсутствие полиспецифической связывающей молекулы, содержащей паратоп антитела, где необязательно в отсутствие полиспецифической связывающей молекулы, содержащей паратоп антитела, эффективность трансдукции вирусного капсидного белка или вирусного капсида, содержащего рекомбинантный вирусный капсидный белок,
(i) понижена на по меньшей мере 10%,
(ii) понижена на по меньшей мере 20%,
(iii) понижена на по меньшей мере 30%,
(iv) понижена на по меньшей мере 40%,
(v) понижена на по меньшей мере 50%,
(vi) понижена на по меньшей мере 60%,
(vii) понижена на по меньшей мере 70%,
(viii) понижена на по меньшей мере 80%,
(ix) понижена на по меньшей мере 90% или
(x) устранена.
19. Выделенная нуклеиновая кислота, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую рекомбинантный вирусный капсидный белок по любому из пп. 1-18.
20. Выделенная нуклеиновая кислота по п. 19, где нуклеотидная последовательность кодирует рекомбинантный вирусный капсидный белок, который содержит аминокислотную последовательность, представленную под SEQ ID NO:2, аминокислотную последовательность, представленную под SEQ ID NO:4, аминокислотную последовательность, представленную под SEQ ID NO:25, аминокислотную последовательность, представленную под SEQ ID NO:26, или аминокислотную последовательность, представленную под SEQ ID NO:27.
21. Рекомбинантный вирусный вектор, содержащий представляющий интерес нуклеотид, заключенный в рекомбинантный вирусный капсид по п. 20, где необязательно рекомбинантный вирусный капсид является мозаичным капсидом.
22. Рекомбинантный вирусный вектор по п. 21, где представляющий интерес нуклеотид находится под контролем промотора, выбранного из группы, состоящей из вирусного промотора, бактериального промотора, промотора млекопитающего, промотора птицы, промотора рыбы, промотора насекомого и любой их комбинации.
23. Рекомбинантный вирусный вектор по п. 22, где представляющий интерес нуклеотид находится под контролем промотора, отличного от человеческого.
24. Рекомбинантный вирусный вектор по п. 23, где представляющий интерес нуклеотид фланкирован последовательностями ITR AAV.
25. Рекомбинантный вирусный вектор по любому из пп. 21-24, где представляющим интерес нуклеотидом является репортерный ген.
26. Рекомбинантный вирусный вектор по п. 25, где репортерный ген кодирует зеленый флуоресцентный белок.
27. Рекомбинантный вирусный вектор по любому из пп. 21-24, где представляющий интерес нуклеотид выбран из группы, состоящей из суицидного гена, нуклеотида, кодирующего антитело или его фрагмент, нуклеотида, кодирующего систему CRISPR/Cas или ее часть(части), нуклеотида, кодирующего антисмысловую РНК, нуклеотида, кодирующего siRNA, и их комбинации.
28. Композиция, содержащая (а) рекомбинантный вирусный вектор по любому из пп. 21-27 и (b) полиспецифическую связывающую молекулу, содержащую паратоп антитела, который специфически связывает эпитоп, где необязательно полиспецифическая связывающая молекула дополнительно содержит перенацеливающий лиганд, который специфически связывает рецептор, экспрессируемый на клетке-мишени, где полиспецифическая связывающая молекула необязательно является биспецифической связывающей молекулой.
29. Композиция по п. 28, где вирусный вектор и полиспецифическая связывающая молекула присутствуют в соотношении 1:4.
30. Композиция по п. 28 или 29, где паратоп антитела представляет собой Fv-домен.
31. Композиция по п. 30, где Fv-домен непосредственно слит с константным доменом тяжелой цепи.
32. Композиция по любому из пп. 28-31, где перенацеливающий лиганд представляет собой антитело или его часть.
33. Композиция по любому из пп. 28-32, где полиспецифическая связывающая молекула представляет собой биспецифическое антитело, и
где каждый из паратопа и перенацеливающего лиганда содержит отдельный Fv-домен, слитый с первым и вторым константным доменом тяжелой цепи.
34. Композиция по п. 33, где первая и вторая тяжелые цепи связываются с белком А с разными значениями аффинности связывания.
35. Композиция по любому из пп. 28-32, где полиспецифическая связывающая молекула представляет собой биспецифическое антитело, и
где перенацеливающий лиганд содержит антитело с тетрамерной структурой, содержащее две идентичные тяжелые цепи иммуноглобулина и две идентичные легкие цепи, и
где паратоп, который связывает гетерологичный эпитоп, присоединен к C-концу или N-концу одной или обеих тяжелых цепей и/или к C-концу или N-концу одной или обеих тяжелых цепей.
36. Композиция по п. 35, где паратоп представляет собой scFv, где необязательно scFv содержит аминокислотную последовательность, представленную под SEQ ID NO:37.
37. Композиция по любому из пп. 28-36, где гетерологичный эпитоп содержит аминокислотную последовательность EQKLISEEDL или ее часть, и где паратоп антитела специфически связывает аминокислотную последовательность EQKLISEEDL или ее часть.
38. Композиция по любому из пп. 28-37, где перенацеливающий лиганд специфически связывает белок клеточной поверхности, который представляет собой маркер клеточной поверхности.
39. Композиция по п. 38, где маркер клеточной поверхности представляет собой асиалогликопротеин 1 (ASGR1).
40. Композиция по п. 38, где маркер клеточной поверхности представляет собой CD3.
41. Композиция по п. 38, где маркер клеточной поверхности представляет собой ENTPD3.
42. Композиция по любому из пп. 28-41, дополнительно содержащая фармацевтически приемлемый носитель.
43. Способ направления рекомбинантного вирусного вектора по любому из пп. 21-27 на клетку-мишень, включающий
приведение в контакт рекомбинантного вирусного вектора с полиспецифической связывающей молекулой,
где полиспецифическая связывающая молекула содержит (i) паратоп антитела, который специфически связывает эпитоп, и (ii) перенацеливающий лиганд, который специфически связывает белок, экспрессируемый на поверхности клетки-мишени.
44. Способ по п. 43, где клетка-мишень находится в условиях in vivo.
45. Способ по п. 43 или 44, где указанное приведение в контакт выполняют ex vivo.
46. Способ доставки представляющего интерес нуклеотида в клетку-мишень, экспрессирующую белок клеточной поверхности, включающий приведение в контакт клетки-мишени с композицией по любому из пп. 28-42, где полиспецифическая связывающая молекула содержит перенацеливающий лиганд, который связывает белок клеточной поверхности.
47. Способ по п. 46, где клетка-мишень находится в условиях in vitro.
48. Способ по п. 46, где клетка-мишень находится в условиях in vivo в субъекте.
49. Способ по п. 48, где субъектом является человек.
50. Способ по любому из пп. 46-49, где клетка-мишень является клеткой человека.
51. Способ по любому из пп. 46-50, где клетка-мишень выбрана из группы, состоящей из клетки печени, клетки головного мозга, Т-клетки, клетки почки, клетки кишечника, клетки поджелудочной железы, раковой клетки и клетки, инфицированной гетерологичным патогеном.
52. Способ по любому из пп. 46-51, где клетка-мишень является клеткой печени человека.
53. Способ по любому из пп. 46-52, где белок клеточной поверхности представляет собой асиалогликопротеиновый рецептор 1 человека (hASGR1).
54. Способ по любому из пп. 46-51, где клетка-мишень является Т-клеткой человека.
55. Способ по п. 54, где белок клеточной поверхности представляет собой CD3.
56. Способ по любому из пп. 46-51, где белок клеточной поверхности представляет собой рецептор глюкагона человека (hGCGR).
57. Способ по любому из пп. 46-50, где клетка-мишень является клеткой кишечника.
58. Способ по любому из пп. 46-50, где клетка-мишень является клеткой поджелудочной железы.
59. Способ по п. 57 и 58, где белок клеточной поверхности представляет собой ENTPD3.
60. Способ инактивации вирусного капсидного белка, включающий
(a) вставку нуклеиновой кислоты, кодирующей гетерологичный эпитоп, в последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую вирусный капсидный белок, с образованием нуклеотидной последовательности, кодирующей генетически модифицированный капсидный белок, содержащий гетерологичный эпитоп, и
(b) культивирование упаковывающей клетки в условиях, достаточных для продуцирования вирусных векторов, где упаковывающая клетка содержит нуклеотидную последовательность.
61. Способ получения вирусного вектора, включающий культивирование упаковывающей клетки в условиях, достаточных для продуцирования вирусных векторов, где упаковывающая клетка содержит плазмиду, кодирующую рекомбинантный капсидный белок по любому из пп. 1-18.
62. Способ по п. 60 или 61, где упаковывающая клетка дополнительно содержит плазмиду-помощника и/или плазмиду для переноса, содержащую представляющий интерес нуклеотид.
63. Способ по любому из пп. 60-62, дополнительно включающий выделение самокомплементарных векторов на основе аденоассоциированного вируса из культурального супернатанта.
64. Способ по любому из пп. 60-63, дополнительно включающий осуществление лизиса упаковывающей клетки и выделение однонитевых векторов на основе аденоассоциированного вируса из клеточного лизата.
65. Способ по любому из пп. 60-64, дополнительно включающий
a. удаление клеточного дебриса,
b. обработку супернатанта, содержащего вирусные векторы, ДНКазой I и MgCl2,
c. концентрирование вирусных векторов,
d. очистку вирусных векторов и
e. любую комбинацию a.-d.
66. Вирусный вектор, полученный согласно способу по любому из пп. 60-65.
67. Упаковывающая клетка для получения вирусного вектора, содержащая плазмиду, кодирующую капсидный белок по любому из пп. 1-18.
68. Связывающая молекула, содержащая паратоп, который связывает SEQ ID NO:6, где паратоп содержит последовательности HCVR, LCVR, HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 и/или LCDR3 из scFv, кодируемого последовательностью нуклеиновой кислоты, представленной под SEQ ID NO:28.
69. Связывающая молекула по п. 68, где паратоп антитела представляет собой Fv-домен.
70. Связывающая молекула по п. 69, где Fv-домен непосредственно слит с константным доменом тяжелой цепи.
71. Связывающая молекула по любому из пп. 68-70, где связывающая молекула представляет собой биспецифическое антитело и дополнительно содержит перенацеливающий лиганд, и
где каждый из паратопа и перенацеливающего лиганда содержит отдельный Fv-домен, слитый с первым и вторым константным доменом тяжелой цепи.
72. Связывающий белок по п. 71, где первая и вторая тяжелые цепи связываются с белком А с разными значениями аффинности связывания.
73. Связывающий белок по любому из пп. 68-69, где связывающая молекула представляет собой биспецифическое антитело и дополнительно содержит перенацеливающий лиганд, и
где перенацеливающий лиганд содержит антитело с тетрамерной структурой, содержащее две идентичные тяжелые цепи иммуноглобулина и две идентичные легкие цепи, и
где паратоп присоединен к C-концу или N-концу одной или обеих тяжелых цепей и/или к C-концу или N-концу одной или обеих тяжелых цепей.
74. Связывающий белок по п. 73, где паратоп представляет собой scFv, где необязательно scFv содержит аминокислотную последовательность, представленную под SEQ ID NO:37.
75. Связывающий белок по любому из пп. 69-72, дополнительно содержащий перенацеливающий лиганд, который представляет собой антитело или его часть.
76. Связывающий белок по п. 75, где перенацеливающий лиганд специфически связывает белок клеточной поверхности, который представляет собой маркер клеточной поверхности.
77. Связывающий белок по п. 76, где маркер клеточной поверхности представляет собой асиалогликопротеин 1 (ASGR1).
78. Связывающий белок по п. 76, где маркер клеточной поверхности представляет собой CD3.
79. Связывающий белок по п. 76, где маркер клеточной поверхности представляет собой GCGR.
80. Связывающий белок по п. 76, где маркер клеточной поверхности представляет собой ENTPD3.
81. Композиция, содержащая (а) рекомбинантный вирусный вектор по любому из пп. 21-27 и (b) связывающий белок по любому из пп. 68-81.
82. Композиция по п. 81, где вирусный вектор и полиспецифическая связывающая молекула присутствуют в соотношении 1:4.
83. Композиция по п. 81 или 82, дополнительно содержащая фармацевтически приемлемый носитель.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201762525704P | 2017-06-27 | 2017-06-27 | |
| US62/525,704 | 2017-06-27 | ||
| PCT/US2018/039874 WO2019006043A1 (en) | 2017-06-27 | 2018-06-27 | RECOMBINANT VIRAL VECTORS WITH MODIFIED TROPISM AND USES THEREOF FOR TARGETED INTRODUCTION OF GENETIC MATERIAL INTO HUMAN CELLS |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2020101279A true RU2020101279A (ru) | 2021-07-27 |
| RU2020101279A3 RU2020101279A3 (ru) | 2022-02-04 |
| RU2809246C2 RU2809246C2 (ru) | 2023-12-08 |
Family
ID=
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Nonnenmacher et al. | Rapid evolution of blood-brain-barrier-penetrating AAV capsids by RNA-driven biopanning | |
| US20210355481A1 (en) | Aav capsid proteins for nucleic acid transfer | |
| JP2024026872A (ja) | アデノ随伴ウイルス変異体及びその使用方法 | |
| AU2018290882B2 (en) | Tropism-modified recombinant viral vectors and uses thereof for the targeted introduction of genetic material into human cells | |
| CN104520421A (zh) | 用于生产腺伴随病毒的细胞系 | |
| JP6346143B2 (ja) | 組換え弱毒化パルボウイルス | |
| Wagner et al. | Synthetic biology: emerging concepts to design and advance adeno‐associated viral vectors for gene therapy | |
| EP3253792A1 (en) | Anti-tau constructs | |
| US20200231986A1 (en) | Production of adeno-associated viruses in insect cells | |
| TW202110869A (zh) | 修飾之病毒顆粒及其用途 | |
| JP2023171525A (ja) | Ａａｖキメラ | |
| WO2020218419A1 (ja) | 脳に指向性を有するａａｖ変異体 | |
| KR20210128399A (ko) | 암-표적화되고, 바이러스-암호화된, 조절 가능한 t 세포 (catvert) 또는 nk 세포 (catvern) 링커 | |
| WO2022166949A1 (zh) | 抗aav2单克隆抗体及其制备方法和应用 | |
| JP6929230B2 (ja) | スペーサーを含む核酸分子およびその使用の方法 | |
| KR20230078625A (ko) | 개선된 아데노 연관 바이러스 유전자 치료 벡터 | |
| CN116836267A (zh) | 检测猫泛白细胞减少症病毒的抗体及其应用 | |
| CA3233698A1 (en) | Viral particles retargeted to skeletal muscle | |
| JPWO2020242984A5 (ru) | ||
| WO2023214346A1 (en) | Novel recombinant aav vp2 fusion polypeptides | |
| RU2020101596A (ru) | Рекомбинантные вирусные частицы с модифицированным тропизмом и пути их применения для нацеленного введения генетического материала в клетки человека | |
| KR100483597B1 (ko) | 재조합 아데노부속바이러스 유전자 전달체 생산용 벡터시스템 | |
| RU2021133286A (ru) | Модифицированные вирусные частицы и пути их применения | |
| CA3203945A1 (en) | Combination of deoxyribonuclease enzyme and cell therapies for treatment of cancer | |
| CA3125411A1 (en) | Modified adeno-associated viral vectors for use in genetic engineering |