RU2020101596A - Рекомбинантные вирусные частицы с модифицированным тропизмом и пути их применения для нацеленного введения генетического материала в клетки человека - Google Patents
Рекомбинантные вирусные частицы с модифицированным тропизмом и пути их применения для нацеленного введения генетического материала в клетки человека Download PDFInfo
- Publication number
- RU2020101596A RU2020101596A RU2020101596A RU2020101596A RU2020101596A RU 2020101596 A RU2020101596 A RU 2020101596A RU 2020101596 A RU2020101596 A RU 2020101596A RU 2020101596 A RU2020101596 A RU 2020101596A RU 2020101596 A RU2020101596 A RU 2020101596A
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- capsid protein
- recombinant viral
- viral capsid
- protein
- paragraphs
- Prior art date
Links
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 title claims 74
- 239000002245 particle Substances 0.000 title claims 18
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims 12
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims 9
- 230000010415 tropism Effects 0.000 title claims 3
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 title 1
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 claims 63
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 claims 63
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims 27
- 238000000034 method Methods 0.000 claims 25
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims 18
- 230000008685 targeting Effects 0.000 claims 17
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims 14
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims 14
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 claims 13
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims 8
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 claims 8
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims 7
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims 6
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims 5
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 claims 4
- 102000023732 binding proteins Human genes 0.000 claims 4
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 claims 4
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims 4
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 claims 4
- 102100025222 CD63 antigen Human genes 0.000 claims 3
- 101000934368 Homo sapiens CD63 antigen Proteins 0.000 claims 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims 3
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 claims 3
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 3
- 108091005948 blue fluorescent proteins Proteins 0.000 claims 3
- 108010048367 enhanced green fluorescent protein Proteins 0.000 claims 3
- 108091005957 yellow fluorescent proteins Proteins 0.000 claims 3
- 241000702423 Adeno-associated virus - 2 Species 0.000 claims 2
- 108010002913 Asialoglycoproteins Proteins 0.000 claims 2
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 claims 2
- 101150029707 ERBB2 gene Proteins 0.000 claims 2
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 claims 2
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 claims 2
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 claims 2
- 101000591210 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase-like N Proteins 0.000 claims 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims 2
- 102100034091 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase-like N Human genes 0.000 claims 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims 2
- 108010047482 ectoATPase Proteins 0.000 claims 2
- 108010021843 fluorescent protein 583 Proteins 0.000 claims 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims 2
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 claims 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 claims 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 claims 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims 2
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 claims 2
- YMHOBZXQZVXHBM-UHFFFAOYSA-N 2,5-dimethoxy-4-bromophenethylamine Chemical compound COC1=CC(CCN)=C(OC)C=C1Br YMHOBZXQZVXHBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 claims 1
- 241001655883 Adeno-associated virus - 1 Species 0.000 claims 1
- 241000202702 Adeno-associated virus - 3 Species 0.000 claims 1
- 241000580270 Adeno-associated virus - 4 Species 0.000 claims 1
- 241001634120 Adeno-associated virus - 5 Species 0.000 claims 1
- 241000972680 Adeno-associated virus - 6 Species 0.000 claims 1
- 241001164823 Adeno-associated virus - 7 Species 0.000 claims 1
- 241001164825 Adeno-associated virus - 8 Species 0.000 claims 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 claims 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 claims 1
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 claims 1
- 102000005427 Asialoglycoprotein Receptor Human genes 0.000 claims 1
- 102000017420 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Human genes 0.000 claims 1
- 108050005493 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Proteins 0.000 claims 1
- 108091033409 CRISPR Proteins 0.000 claims 1
- 238000010354 CRISPR gene editing Methods 0.000 claims 1
- 108091005944 Cerulean Proteins 0.000 claims 1
- 241000579895 Chlorostilbon Species 0.000 claims 1
- 108091005943 CyPet Proteins 0.000 claims 1
- 108091005941 EBFP Proteins 0.000 claims 1
- 102100029725 Ectonucleoside triphosphate diphosphohydrolase 3 Human genes 0.000 claims 1
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 claims 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 claims 1
- 101001012432 Homo sapiens Ectonucleoside triphosphate diphosphohydrolase 3 Proteins 0.000 claims 1
- 101001040075 Homo sapiens Glucagon receptor Proteins 0.000 claims 1
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 claims 1
- 101000946860 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD3 epsilon chain Proteins 0.000 claims 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 claims 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 claims 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 claims 1
- 108091027967 Small hairpin RNA Proteins 0.000 claims 1
- 102100035794 T-cell surface glycoprotein CD3 epsilon chain Human genes 0.000 claims 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims 1
- 241000545067 Venus Species 0.000 claims 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims 1
- 108010006523 asialoglycoprotein receptor Proteins 0.000 claims 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 claims 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 claims 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 claims 1
- 239000002458 cell surface marker Substances 0.000 claims 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 claims 1
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 claims 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims 1
- 229910052876 emerald Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000010976 emerald Substances 0.000 claims 1
- 229960003692 gamma aminobutyric acid Drugs 0.000 claims 1
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical compound NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 claims 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 claims 1
- 101150066555 lacZ gene Proteins 0.000 claims 1
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 claims 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 claims 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 claims 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims 1
- 108010054624 red fluorescent protein Proteins 0.000 claims 1
- 229910052594 sapphire Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000010980 sapphire Substances 0.000 claims 1
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 claims 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 claims 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 claims 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 claims 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 claims 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/315—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Streptococcus (G), e.g. Enterococci
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
- A61K48/0008—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/33—Fusion polypeptide fusions for targeting to specific cell types, e.g. tissue specific targeting, targeting of a bacterial subspecies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/70—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/70—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction
- C07K2319/735—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction containing a domain for self-assembly, e.g. a viral coat protein (includes phage display)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
- C12N2750/00011—Details
- C12N2750/14011—Parvoviridae
- C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
- C12N2750/14122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
- C12N2750/00011—Details
- C12N2750/14011—Parvoviridae
- C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
- C12N2750/14123—Virus like particles [VLP]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
- C12N2750/00011—Details
- C12N2750/14011—Parvoviridae
- C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
- C12N2750/14141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
- C12N2750/00011—Details
- C12N2750/14011—Parvoviridae
- C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
- C12N2750/14141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2750/14145—Special targeting system for viral vectors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
- C12N2750/00011—Details
- C12N2750/14011—Parvoviridae
- C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
- C12N2750/14151—Methods of production or purification of viral material
- C12N2750/14152—Methods of production or purification of viral material relating to complementing cells and packaging systems for producing virus or viral particles
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Virology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Claims (100)
1. Рекомбинантный вирусный капсидный белок, содержащий первого партнера связывающейся пары белок:белок, функционально связанного с капсидным белком, где необязательно первый партнер представляет собой пептидную метку, и где необязательно первый партнер и/или мутация обеспечивают уменьшение или устранение природного тропизма капсидного белка.
2. Рекомбинантный вирусный капсидный белок по п. 1, дополнительно содержащий второго родственного партнера связывающейся пары белок:белок, где первый и второй партнеры связаны ковалентной связью.
3. Рекомбинантный вирусный капсидный белок по п. 2, где ковалентная связь представляет собой изопептидную связь.
4. Рекомбинантный вирусный капсидный белок по любому из пп. 2, 3, где второй партнер функционально связан с нацеливающим лигандом, где необязательно нацеливающий лиганд представляет собой связывающий фрагмент.
5. Рекомбинантный вирусный капсидный белок по любому из пп. 1-4, где первый партнер фланкирован первым и/или вторым линкером, который(ые) соединяет(ют) первого партнера с капсидным белком, и где длина каждого из первого и/или второго линкера независимо составляет по меньшей мере одну аминокислоту.
6. Рекомбинантный вирусный капсидный белок по п. 5, где первый и второй линкеры не являются идентичными.
7. Рекомбинантный вирусный капсидный белок по п. 5, где первый и второй линкеры являются идентичными, и их длина составляет 10 аминокислот.
8. Рекомбинантный вирусный капсидный белок по любому из пп. 1-7, дополнительно содержащий мутацию по аминокислотному положению, участвующему в связывании вирусного капсидного белка с его природным рецептором, где мутация предусматривает вставку гетерологичного пептида в капсидный белок, замену одной или более аминокислот капсидного белка на гетерологичный пептид, делецию одной или более аминокислот капсидного белка или их комбинацию.
9. Рекомбинантный вирусный капсидный белок по любому из пп. 1-8, где эффективность трансдукции рекомбинантного вирусного капсидного белка
(i) снижена на 10%,
(ii) снижена на 20%,
(iii) снижена на 30%,
(iv) снижена на 40%,
(v) снижена на 50%,
(vi) снижена на 60%,
(vii) снижена на 70%,
(viii) снижена на 80%,
(ix) снижена на 90% или
(x) устранена.
10. Рекомбинантный вирусный капсидный белок по любому из пп. 1-9, где вирусный капсидный белок получен с помощью гена капсида аденоассоциированного вируса (AAV), где ген капсида кодирует капсидный белок VP1, VP2 и/или VP3 AAV и необязательно дополнительно содержит мутацию по аминокислотному положению, участвующему в связывании капсида.
11. Рекомбинантный вирусный капсидный белок по п. 10, где AAV выбран из группы, состоящей из AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8 и AAV9.
12. Рекомбинантный вирусный капсидный белок по п. 10, где аденоассоциированный вирус представляет собой AAV2.
13. Рекомбинантный вирусный капсидный белок по п. 10, где аденоассоциированный вирус представляет собой AAV9.
14. Рекомбинантный вирусный капсидный белок по любому из пп. 1-13, где связывающаяся пара белок:белок представляет собой
(i) SpyTag:SpyCatcher,
(ii) SpyTag:KTag,
(iii) Isopeptag:пилин-C,
(iv) SnoopTag:SnoopCatcher или
(v) SpyTag002:SpyCatcher002.
15. Рекомбинантный вирусный капсидный белок по любому из пп. 1-14, где совокупная длина первого партнера и любого линкера составляет не более приблизительно 50 аминокислот.
16. Рекомбинантный вирусный капсидный белок по любому из пп. 1-15, где первый партнер представляет собой SpyTag.
17. Рекомбинантный вирусный капсидный белок по любому из пп. 2-16, где второй родственный партнер представляет собой SpyCatcher.
18. Рекомбинантный вирусный капсидный белок по любому из пп. 2-16, где второй родственный партнер представляет собой KTag.
19. Рекомбинантный вирусный капсидный белок по любому из пп. 2-15, где первый партнер представляет собой KTag, а второй родственный партнер представляет собой SpyTag.
20. Рекомбинантный вирусный капсидный белок по любому из пп. 2-15, где первый партнер представляет собой SnoopTag, а второй родственный партнер представляет собой SnoopCatcher.
21. Рекомбинантный вирусный капсидный белок по любому из пп. 2-15, где первый партнер представляет собой isopeptag, а второй родственный партнер представляет собой пилин-C.
22. Рекомбинантный вирусный капсидный белок по любому из пп. 2-15, где первый партнер представляет собой SpyTag002, а второй родственный партнер представляет собой SpyCatcher002.
23. Рекомбинантный вирусный капсидный белок по любому из пп. 1-22, где рекомбинантный вирусный капсидный белок или вирусный капсид, содержащий рекомбинантный вирусный капсидный белок, характеризуется способностью инфицировать клетку-мишень, находящейся в пределах от уменьшенной до устраненной, в отсутствие соответствующего нацеливающего лиганда по сравнению с вирусным капсидным белком или капсидом, содержащими соответствующий нацеливающий лиганд.
24. Рекомбинантный вирусный капсидный белок по любому из пп. 4-23, где связывающий фрагмент представляет собой антитело или его часть.
25. Рекомбинантный вирусный капсидный белок по п. 24, где антитело или его часть слиты с SpyCatcher.
26. Рекомбинантный вирусный капсидный белок по п. 25, где антитело или его часть слиты с линкером на С-конце, и линкер слит с SpyCatcher на С-конце линкера.
27. Рекомбинантный вирусный капсидный белок по п. 26, где линкер содержит последовательность, изложенную под SEQ ID NO:48 (GSGESG).
28. Рекомбинантный вирусный капсидный белок по любому из пп. 4-27, где нацеливающий лиганд содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:46.
29. Рекомбинантный вирусный капсидный белок по любому из пп. 4-28, где нацеливающий лиганд специфически связывается с молекулой клеточной поверхности, где необязательно маркер клеточной поверхности представляет собой
(i) асиалогликопротеин 1 (ASGR1),
(ii) ENTPD3,
(iii) PTPRN,
(iv) CD20,
(v) CD63 или
(vi) Her2.
30. Рекомбинантный вирусный капсидный белок по п. 29, где молекула клеточной поверхности представляет собой асиалогликопротеин 1 (ASGR1).
31. Рекомбинантный вирусный капсидный белок по п. 29, где молекула клеточной поверхности представляет собой CD63.
32. Рекомбинантный вирусный капсидный белок по п. 29, где молекула клеточной поверхности представляет собой ENTDP3.
33. Рекомбинантный вирусный капсид, содержащий рекомбинантный вирусный капсидный белок по любому из пп. 1-32.
34. Рекомбинантный вирусный капсид по п. 33, дополнительно содержащий эталонный вирусный капсидный белок, в котором отсутствует какой-либо партнер специфической связывающейся пары.
35. Рекомбинантный вирусный капсид по п. 34, где каждый из рекомбинантного вирусного капсидного белка и эталонного вирусного капсидного белка содержит мутацию по меньшей мере одного остатка, участвующего в связывании вирусной частицы с ее природным лигандом.
36. Рекомбинантный вирусный капсид по любому из пп. 34, 35, содержащий рекомбинантный вирусный капсидный белок и эталонный вирусный капсидный белок в соотношении от 1:1 до 1:15.
37. Рекомбинантный вирусный вектор, содержащий представляющий интерес нуклеотид, заключенный в рекомбинантный вирусный капсид по любому из пп. 33-36.
38. Рекомбинантная вирусная частица по п. 37, где представляющий интерес нуклеотид находится под контролем промотора, выбранного из группы, состоящей из вирусного промотора, бактериального промотора, промотора млекопитающего, промотора птицы, промотора рыбы, промотора насекомого и любой их комбинации.
39. Рекомбинантная вирусная частица по п. 37, где представляющий интерес нуклеотид находится под контролем человеческого промотора.
40. Рекомбинантная вирусная частица по п. 37, где представляющий интерес нуклеотид находится под контролем промотора, отличного от человеческого.
41. Рекомбинантная вирусная частица по любому из пп. 37-40, где представляющий интерес нуклеотид представляет собой репортерный ген.
42. Рекомбинантная вирусная частица по п. 41, где репортерный ген кодирует зеленый флуоресцентный белок.
43. Рекомбинантная вирусная частица по п. 41, где репортерный ген кодирует зеленый флуоресцентный белок, β-галактозидазу (кодируемую геном lacZ), усиленный зеленый флуоресцентный белок (eGFP), MmGFP, синий флуоресцентный белок (BFP), усиленный синий флуоресцентный белок (eBFP), mPlum, mCherry, tdTomato, mStrawberry, J-Red, DsRed, mOrange, mKO, mCitrine, Venus, YPet, желтый флуоресцентный белок (YFP), усиленный желтый флуоресцентный белок (eYFP), Emerald, CyPet, голубой флуоресцентный белок (CFP), Cerulean, T-Sapphire, люциферазу, щелочную фосфатазу или их комбинацию.
44. Рекомбинантная вирусная частица по любому из пп. 37-40, где представляющий интерес нуклеотид выбран из группы, состоящей из гена, кодирующего терапевтический белок, суицидального гена, нуклеотида, кодирующего антитело или его фрагмент, нуклеотида, кодирующего систему CRISPR/Cas или ее часть(части), нуклеотида, кодирующего антисмысловую РНК, и нуклеотида, кодирующего shRNA.
45. Композиция, содержащая (а) вирусный капсид по любому из пп. 33-36 или вирусный вектор по любому из пп. 37-44 и (b) фармацевтически приемлемый носитель.
46. Способ доставки представляющего интерес нуклеотида в клетку-мишень, предусматривающий приведение клетки-мишени в контакт с вирусной частицей по любому из пп. 37-44 или композицией по п. 45, и где вирусный капсид содержит нацеливающий лиганд, который специфически связывается с белком, экспрессируемым на поверхности клетки-мишени.
47. Способ по п. 46, где клетка-мишень находится in vitro.
48. Способ по п. 46, где клетка-мишень находится in vivo у субъекта.
49. Способ по п. 48, где субъектом является человек.
50. Способ по любому из пп. 46-49, где клетка-мишень представляет собой клетку-мишень человека.
51. Способ по п. 50, где клетка-мишень представляет собой клетку печени человека, и где нацеливающий лиганд связывается с асиалогликопротеиновым рецептором человека (ASGR1).
52. Способ по п. 50, где клетка-мишень представляет собой нейронную клетку человека, и где нацеливающий лиганд связывается с GABA.
53. Способ по п. 50, где клетка-мишень представляет собой Т-клетку человека, и где нацеливающий лиганд связывается с CD3, необязательно CD3ε.
54. Способ по п. 50, где нацеливающий лиганд связывается с PTPRN.
55. Способ по п. 50, где клетка-мишень представляет собой гемопоэтическую клетку человека, и где нацеливающий лиганд связывается с CD34.
56. Способ по п. 50, где клетка-мишень представляет собой клетку почки человека.
57. Способ по п. 50, где клетка-мишень представляет собой раковую клетку человека, и где нацеливающий лиганд связывается с опухолеассоциированным антигеном.
58. Способ по п. 57, где опухолевый антиген представляет собой Е6, Е7 или Her2.
59. Способ по п. 50, где нацеливающий лиганд связывается с CD20.
60. Способ по п. 50, где нацеливающий лиганд связывается с рецептором глюкагона человека.
61. Способ по любому из пп. 46-50, где нацеливающий лиганд специфически связывается с CD63.
62. Способ по любому из пп. 46-50, где нацеливающий лиганд специфически связывается с эктонуклеозидтрифосфатдифосфогидролазой 3 человека (hENTPD3).
63. Способ получения вирусного капсидного белка с помощью каркаса и/или адаптера, предусматривающий
(а) осуществление вставки нуклеиновой кислоты, кодирующей первого партнера специфической связывающейся пары белок:белок и необязательно линкер, в последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую вирусный капсидный белок, с образованием нуклеотидной последовательности, кодирующей генетически модифицированный капсидный белок, содержащий первого партнера специфической связывающейся пары и необязательно линкер, и
(b) культивирование упаковывающей клетки в условиях, достаточных для продуцирования вирусных частиц, где упаковывающая клетка содержит нуклеиновую кислоту.
64. Способ получения вирусной частицы, предусматривающий культивирование упаковывающей клетки в условиях, достаточных для продуцирования вирусных частиц, где упаковывающая клетка содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую генетически модифицированный капсидный белок, содержащий первого партнера специфической связывающейся пары белок:белок и необязательно аминокислотный линкер, который соединяет первого партнера с капсидным белком.
65. Способ по п. 63 или 64, где упаковывающая клетка дополнительно содержит хелперную плазмиду и/или плазмиду для переноса, содержащую представляющий интерес нуклеотид.
66. Способ по любому из пп. 63-65, где упаковывающая клетка дополнительно содержит плазмиду, кодирующую эталонный мозаичный капсид.
67. Способ по любому из пп. 63-66, дополнительно предусматривающий лизирование упаковывающей клетки и выделение векторов на основе аденоассоциированного вируса из клеточного лизата.
68. Способ по любому из пп. 63-67, дополнительно предусматривающий
а. удаление клеточного дебриса,
b. обработку супернатанта, содержащего вирусные частицы, с помощью нуклеаз,
c. концентрирование вирусных частиц,
d. очистку вирусных частиц и
e. любую комбинацию a.-d.
69. Способ по любому из пп. 63-68, где нуклеотидная последовательность, кодирующая генетически модифицированный капсидный белок, дополнительно содержит мутацию аминокислоты по положению, участвующему в природном тропизме капсидного белка, где мутация предусматривает вставку гетерологичного пептида в капсидный белок, замену одной или более аминокислот капсидного белка на гетерологичный пептид, делецию одной или более аминокислот капсидного белка или их комбинацию.
70. Вирусная частица, полученная в соответствии со способом по любому из пп. 63-69.
71. Упаковывающая клетка для получения вирусной частицы, содержащая плазмиду, кодирующую рекомбинантный вирусный капсидный белок по любому из пп. 1-32.
72. Рекомбинантный вектор, кодирующий рекомбинантный вирусный капсидный белок по любому из пп. 1-32.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201762525708P | 2017-06-27 | 2017-06-27 | |
| US62/525,708 | 2017-06-27 | ||
| PCT/US2018/039878 WO2019006046A2 (en) | 2017-06-27 | 2018-06-27 | RECOMBINANT VIRAL PARTICLES WITH MODIFIED TROPISM AND USES THEREOF FOR TARGETED INTRODUCTION OF GENETIC MATERIAL INTO HUMAN CELLS |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2020101596A true RU2020101596A (ru) | 2021-07-27 |
| RU2020101596A3 RU2020101596A3 (ru) | 2022-03-22 |
| RU2811426C2 RU2811426C2 (ru) | 2024-01-11 |
Family
ID=
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2807751C1 (ru) * | 2022-12-27 | 2023-11-21 | Автономная некоммерческая образовательная организация высшего образования "Научно-технологический университет "Сириус" | Способ получения рекомбинантного вируса везикулярного стоматита |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2807751C1 (ru) * | 2022-12-27 | 2023-11-21 | Автономная некоммерческая образовательная организация высшего образования "Научно-технологический университет "Сириус" | Способ получения рекомбинантного вируса везикулярного стоматита |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Nonnenmacher et al. | Rapid evolution of blood-brain-barrier-penetrating AAV capsids by RNA-driven biopanning | |
| HRP20230538T1 (hr) | Rekombinantne virusne čestice s modificiranim tropizmom i njihove upotrebe za ciljano uvođenje genetičkog materijala u humane stanice | |
| CN102439157B (zh) | 包含腺伴随病毒构建体的靶向传导气道细胞组合物 | |
| US20170218379A1 (en) | Compositions and methods for self-regulated inducible gene expression | |
| JP6956416B2 (ja) | トランスポゾン系、それを含むキット及びそれらの使用 | |
| US20220257760A1 (en) | Cancer-targeted, virus-encoded, regulatable t (catvert) or nk cell (catvern) linkers | |
| JP7278978B2 (ja) | ヒト化ａｓｇｒ１座位を含む非ヒト動物 | |
| Hartmann et al. | GluA4-Targeted AAV vectors deliver genes selectively to interneurons while relying on the AAV receptor for entry | |
| JP2021534766A (ja) | ガラクトース血症の処置のための遺伝子治療 | |
| US20070130629A1 (en) | Renal Regulatory Elements and Methods of Use Thereof | |
| Moulay et al. | Polymers for improving the in vivo transduction efficiency of AAV2 vectors | |
| US20210139563A1 (en) | Fusion Proteins Comprising a Cell Surface Marker Specific VHH | |
| JPWO2020242984A5 (ru) | ||
| JP2023511626A (ja) | ヒト化ｐｎｐｌａ３遺伝子座を含む非ヒト動物および使用方法 | |
| RU2021133286A (ru) | Модифицированные вирусные частицы и пути их применения | |
| CN114539429B (zh) | 融合蛋白组合物及其应用 | |
| Weinmann | Massively parallel in vivo characterization of novel adeno-associated viral (AAV) capsids using DNA/RNA barcoding and next generation sequencing | |
| US20220372467A1 (en) | Enhanced platforms for unnatural amino acid incorporation in mammalian cells | |
| RU2020101279A (ru) | Рекомбинантные вирусные векторы с модифицированным тропизмом и пути их применения для нацеленного введения генетического материала в клетки человека | |
| US20240124892A1 (en) | Adeno-associated viruses and methods and materials for making and using adeno-associated viruses | |
| WO2023154861A1 (en) | Compositions and methods for screening 4r tau targeting agents | |
| WO2023214346A1 (en) | Novel recombinant aav vp2 fusion polypeptides | |
| AU2001269862B2 (en) | Renal regulatory elements and methods of use thereof | |
| Kontermann et al. | Recombinant adenoviruses for in vivo expression of antibody fragments | |
| CN116790615A (zh) | 一种用于过敏性疾病的基因治疗载体核酸构建体及其使用方法 |