RU2019116874A - Амплификация библиотек нуклеиновых кислот с применением кинетического исключения - Google Patents

Амплификация библиотек нуклеиновых кислот с применением кинетического исключения Download PDF

Info

Publication number
RU2019116874A
RU2019116874A RU2019116874A RU2019116874A RU2019116874A RU 2019116874 A RU2019116874 A RU 2019116874A RU 2019116874 A RU2019116874 A RU 2019116874A RU 2019116874 A RU2019116874 A RU 2019116874A RU 2019116874 A RU2019116874 A RU 2019116874A
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
solution
nucleic acids
target nucleic
amplification sites
flow cell
Prior art date
Application number
RU2019116874A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2019116874A3 (ru
RU2759690C2 (ru
Inventor
Шон ХАНТЕР
Питер МАКИНЕРНИ
Джонатан БОУТЕЛЛ
Клер БЕВИС-МОТТ
Original Assignee
Иллюмина, Инк.
Иллюмина Кембридж Лимитед
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Иллюмина, Инк., Иллюмина Кембридж Лимитед filed Critical Иллюмина, Инк.
Publication of RU2019116874A3 publication Critical patent/RU2019116874A3/ru
Publication of RU2019116874A publication Critical patent/RU2019116874A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2759690C2 publication Critical patent/RU2759690C2/ru

Links

Classifications

    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L3/00—Containers or dishes for laboratory use, e.g. laboratory glassware; Droppers
    • B01L3/50—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes
    • B01L3/502—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures
    • B01L3/5025—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures for parallel transport of multiple samples
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J19/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
    • B01J19/0046—Sequential or parallel reactions, e.g. for the synthesis of polypeptides or polynucleotides; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making molecular arrays
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L3/00—Containers or dishes for laboratory use, e.g. laboratory glassware; Droppers
    • B01L3/50—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes
    • B01L3/502—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures
    • B01L3/5027—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures by integrated microfluidic structures, i.e. dimensions of channels and chambers are such that surface tension forces are important, e.g. lab-on-a-chip
    • B01L3/50273—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures by integrated microfluidic structures, i.e. dimensions of channels and chambers are such that surface tension forces are important, e.g. lab-on-a-chip characterised by the means or forces applied to move the fluids
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L3/00—Containers or dishes for laboratory use, e.g. laboratory glassware; Droppers
    • B01L3/50—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes
    • B01L3/502—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures
    • B01L3/5027—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures by integrated microfluidic structures, i.e. dimensions of channels and chambers are such that surface tension forces are important, e.g. lab-on-a-chip
    • B01L3/502738—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures by integrated microfluidic structures, i.e. dimensions of channels and chambers are such that surface tension forces are important, e.g. lab-on-a-chip characterised by integrated valves
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L7/00—Heating or cooling apparatus; Heat insulating devices
    • B01L7/52—Heating or cooling apparatus; Heat insulating devices with provision for submitting samples to a predetermined sequence of different temperatures, e.g. for treating nucleic acid samples
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6806—Preparing nucleic acids for analysis, e.g. for polymerase chain reaction [PCR] assay
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/6848—Nucleic acid amplification reactions characterised by the means for preventing contamination or increasing the specificity or sensitivity of an amplification reaction
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6869—Methods for sequencing
    • C12Q1/6874—Methods for sequencing involving nucleic acid arrays, e.g. sequencing by hybridisation
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
    • B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
    • B01J2219/00277—Apparatus
    • B01J2219/00279—Features relating to reactor vessels
    • B01J2219/00281—Individual reactor vessels
    • B01J2219/00286—Reactor vessels with top and bottom openings
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
    • B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
    • B01J2219/00277—Apparatus
    • B01J2219/00351—Means for dispensing and evacuation of reagents
    • B01J2219/00353—Pumps
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
    • B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
    • B01J2219/00277—Apparatus
    • B01J2219/00351—Means for dispensing and evacuation of reagents
    • B01J2219/00389—Feeding through valves
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
    • B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
    • B01J2219/00277—Apparatus
    • B01J2219/00351—Means for dispensing and evacuation of reagents
    • B01J2219/00418—Means for dispensing and evacuation of reagents using pressure
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
    • B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
    • B01J2219/00277—Apparatus
    • B01J2219/00497—Features relating to the solid phase supports
    • B01J2219/00527—Sheets
    • B01J2219/00529—DNA chips
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
    • B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
    • B01J2219/00583—Features relative to the processes being carried out
    • B01J2219/00585—Parallel processes
    • B01J2219/00587—High throughput processes
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
    • B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
    • B01J2219/00583—Features relative to the processes being carried out
    • B01J2219/00603—Making arrays on substantially continuous surfaces
    • B01J2219/00675—In-situ synthesis on the substrate
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
    • B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
    • B01J2219/00718—Type of compounds synthesised
    • B01J2219/0072—Organic compounds
    • B01J2219/00722—Nucleotides
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2200/00—Solutions for specific problems relating to chemical or physical laboratory apparatus
    • B01L2200/14—Process control and prevention of errors
    • B01L2200/141—Preventing contamination, tampering
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2300/00—Additional constructional details
    • B01L2300/06—Auxiliary integrated devices, integrated components
    • B01L2300/0627—Sensor or part of a sensor is integrated
    • B01L2300/0636—Integrated biosensor, microarrays
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2300/00—Additional constructional details
    • B01L2300/08—Geometry, shape and general structure
    • B01L2300/0861—Configuration of multiple channels and/or chambers in a single devices
    • B01L2300/0877—Flow chambers
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2400/00—Moving or stopping fluids
    • B01L2400/04—Moving fluids with specific forces or mechanical means
    • B01L2400/0475—Moving fluids with specific forces or mechanical means specific mechanical means and fluid pressure
    • B01L2400/0487—Moving fluids with specific forces or mechanical means specific mechanical means and fluid pressure fluid pressure, pneumatics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2521/00—Reaction characterised by the enzymatic activity
    • C12Q2521/50—Other enzymatic activities
    • C12Q2521/507—Recombinase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2521/00—Reaction characterised by the enzymatic activity
    • C12Q2521/50—Other enzymatic activities
    • C12Q2521/513—Winding/unwinding enzyme, e.g. helicase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2527/00—Reactions demanding special reaction conditions
    • C12Q2527/101—Temperature
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2565/00—Nucleic acid analysis characterised by mode or means of detection
    • C12Q2565/50—Detection characterised by immobilisation to a surface
    • C12Q2565/537—Detection characterised by immobilisation to a surface characterised by the capture oligonucleotide acting as a primer

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Clinical Laboratory Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Claims (31)

1. Способ, включающий:
реакцию на проточной ячейке первого раствора и отличающегося от него второго раствора, проводимую посредством протекания первого раствора по массиву сайтов амплификации, находящихся на проточной ячейке, и затем посредством протекания второго раствора по массиву сайтов амплификации;
где первый раствор включает совокупность нуклеиновых кислот-мишеней и первую смесь реагентов, которая включает нуклеозидтрифосфаты (НТФ) и один или более ферментов репликации, причем находящиеся в первом растворе нуклеиновые кислоты-мишени переносятся к сайтам амплификации и связываются с сайтами амплификации со скоростью переноса, и под действием первой смеси реагентов происходит амплификация нуклеиновых кислот-мишеней, которые прикреплены к сайтам амплификации, в результате чего получают клональные популяции ампликонов, полученных из соответствующих нуклеиновых кислот-мишеней, и при этом ампликоны образуются со скоростью амплификации, которая превышает скорость переноса;
и второй раствор включает вторую смесь реагентов и не содержит нуклеиновых кислот-мишеней, причем второй раствор предназначен для увеличения количества ампликонов в клональных популяциях, находящихся на сайтах амплификации.
2. Способ по п. 1, в котором вторая смесь реагентов включает НТФ и один или более ферментов репликации первой смеси реагентов.
3. Способ по п. 1, в котором проточная ячейка включает совокупность праймеров, присоединенных к проточной ячейке в сайтах амплификации, и в проточной ячейке первый раствор вступает в реакцию связывания нуклеиновых кислот-мишеней и ампликонов с первой подгруппой праймеров, и также в проточной ячейке второй раствор вступает в реакцию образования дополнительных ампликонов и связывания дополнительных ампликонов с по меньшей мере некоторыми праймерами, содержащимися в подгруппе праймеров, доступных для взаимодействия и отличающихся от праймеров первой подгруппы.
4. Способ по п. 1, дополнительно включающий удаление первого раствора из проточной ячейки перед пропусканием второго раствора по массиву сайтов амплификации, находящихся на проточной ячейке, в результате чего единственные нуклеиновые кислоты-мишени, присутствующие в проточной ячейке во время протекания второго раствора по массиву сайтов амплификации, связаны с проточной ячейкой и не представляют собой нуклеиновые кислоты-мишени, свободно перемещаются в первом растворе.
5. Способ по п. 1, в котором массив сайтов амплификации расположен на поверхности проточной ячейки, и первый раствор пропускают через впускное отверстие проточной ячейки по поверхности проточной ячейки, а затем второй раствор пропускают через впускное отверстие по поверхности проточной ячейки.
6. Способ по п. 1, в котором проточная ячейка включает совокупность праймеров, присоединенных к проточной ячейке в сайтах амплификации, и по меньшей мере некоторые из праймеров связываются с нуклеиновыми кислотами-мишенями, находящимися в первом растворе, под воздействием первого раствора, протекающего по массиву сайтов амплификации, после чего протекание второго раствора, который не содержит нуклеиновых кислот-мишеней, по массиву сайтов амплификации не приводит к дополнительному связыванию праймеров с нуклеиновыми кислотами-мишенями.
7. Способ по п. 1, в котором нуклеиновые кислоты-мишени пропускают по массиву сайтов амплификации, находящихся на проточной ячейке, только в первом растворе.
8. Способ по п. 1, в котором вторая смесь реагентов включает НТФ и полимеразу.
9. Способ по п. 1, в котором вторая смесь реагентов включает один или более из следующих ферментов: геликазу и рекомбиназу.
10. Способ по п. 1, в котором вторая смесь реагентов включает праймер, содержащий по меньшей мере одну из следующих последовательностей: последовательность праймера Р5 или последовательность праймера Р7.
11. Способ по п. 1, в котором сайты амплификации представляют собой лунки на поверхности проточной ячейки, где лунки отделены друг от друга промежуточными участками на поверхности.
12. Способ по п. 1, дополнительно включающий регулирование скорости переноса нуклеиновых кислот-мишеней к сайтам амплификации с помощью одного или более следующих воздействий: регулирования концентрации нуклеиновых кислот-мишеней в первом растворе, регулирования вязкости первого раствора, регулирования среднего размера нуклеиновых кислот-мишеней и наличия или отсутствия реагента фазового исключения в первом растворе.
13. Способ по п. 1, дополнительно включающий регулирование скорости амплификации нуклеиновых кислот-мишеней с помощью одного или более следующих воздействий: регулирования концентрации НТФ в первой смеси реагентов, регулирования концентрации одного или более ферментов репликации в первой смеси реагентов и регулирования температуры на сайтах амплификации.
14. Способ по п. 1, в котором первый раствор и второй раствор пропускают по массиву сайтов амплификации в изотермических условиях.
15. Жидкостная система, включающая:
распределитель реагентов, включающий по меньшей мере один клапан, находящийся в гидравлическом взаимодействии с впускным отверстием проточной ячейки, которая включает массив сайтов амплификации, где распределитель реагентов дополнительно включает совокупность каналов, соединяющих посредством гидравлического взаимодействия по меньшей мере один клапан и соответствующие резервуары для реагентов; и
контроллер, включающий один или более процессоров, где контроллер предназначен для управления по меньшей мере одним клапаном и насосом, направляющими первый раствор через впускное отверстие по массиву сайтов амплификации, находящихся на проточной ячейке, и затем направляющими второй, отличающийся от первого раствор через впускное отверстие по массиву сайтов амплификации, находящихся на проточной ячейке;
где первый раствор включает совокупность нуклеиновых кислот-мишеней и первую смесь реагентов, которая включает нуклеозидтрифосфаты (НТФ) и один или более ферментов репликации; количество нуклеиновых кислот-мишеней в первом растворе превышает количество сайтов амплификации в массиве; первый раствор вступает на проточной ячейке в реакцию, приводящую к образованию на сайтах амплификации клональных популяций ампликонов, полученных из соответствующих нуклеиновых кислот-мишеней; находящиеся в первом растворе нуклеиновые кислоты-мишени переносятся к сайтам амплификации и связываются с сайтами амплификации со скоростью переноса, и под действием первой смеси реагентов происходит амплификация нуклеиновых кислот-мишеней, которые прикреплены к сайтам амплификации, что приводит к образованию ампликонов со скоростью амплификации, которая превышает скорость переноса;
при этом второй раствор включает вторую смесь реагентов и не содержит нуклеиновых кислот-мишеней, и второй раствор вступает на проточной ячейке в реакцию, приводящую к увеличению количества ампликонов в клональных популяциях ампликонов, находящихся на сайтах амплификации.
16. Жидкостная система по п. 15, в которой вторая смесь реагентов имеет такой же состав, что и первая смесь реагентов.
17. Жидкостная система по п. 15, в которой контроллер предназначен для управления по меньшей мере одним клапаном и насосом, с помощью которых производят смешивание анализируемой матрицы, которая включает нуклеиновые кислоты-мишени, с первой смесью реагентов с образованием первого раствора, и контроллер также предназначен для управления по меньшей мере одним клапаном и насосом, с помощью которых получают второй раствор путем смешивания друг с другом второй смеси реагентов, в которую не добавляют анализируемой матрицы.
18. Жидкостная система по п. 15, в которой контроллер предназначен для управления по меньшей мере одним клапаном и насосом, с помощью которых перед пропусканием второго раствора по массиву сайтов амплификации, находящихся на проточной ячейке, из проточной ячейки удаляют первый раствор, в результате чего единственные нуклеиновые кислоты-мишени, присутствующие в проточной ячейке во время протекания второго раствора по массиву сайтов амплификации, связаны с проточной ячейкой, а не свободно перемещаются в первом растворе.
19. Способ, включающий:
смешивание в резервуаре первой смеси реагентов с таким количеством нуклеиновых кислот-мишеней, которое подходит для получения первого раствора, причем первая смесь реагентов включает нуклеозидтрифосфаты (НТФ) и один или более ферментов репликации;
течение первого раствора из резервуара по массиву сайтов амплификации, находящихся на проточной ячейке, и при этом находящиеся в первом растворе нуклеиновые кислоты-мишени переносятся к сайтам амплификации и связываются с сайтами амплификации со скоростью переноса, причем под действием первой смеси реагентов происходит амплификация нуклеиновых кислот-мишеней, которые прикреплены к сайтам амплификации, что приводит к образованию клональных популяций ампликонов, полученных из соответствующих нуклеиновых кислот-мишеней, где ампликоны образуются со скоростью амплификации, которая превышает скорость переноса;
после вытекания первого раствора из резервуара, смешивание второй смеси реагентов в резервуаре без добавления в резервуар дополнительного количества нуклеиновых кислот-мишеней, что приводит к получению второго раствора, где вторая смесь реагентов включает добавочные количества свежих НТФ и один или более ферментов репликации; и
протекание второго раствора из резервуара по массиву сайтов амплификации, находящихся на проточной ячейке, где вторая смесь реагентов вступает в реакцию с ампликонами, что приводит к повышению количества ампликонов в клональных популяциях, находящихся на сайтах амплификации.
20. Способ по п. 19, в котором как первая смесь реагентов, так и вторая смесь реагентов включает буферный компонент, причем вторая смесь реагентов включает большее количество буферного компонента, чем первая смесь реагентов, для компенсации не добавленного во второй раствор дополнительного количества нуклеиновых кислот-мишеней.
RU2019116874A 2017-01-05 2017-12-15 Амплификация библиотек нуклеиновых кислот с применением кинетического исключения RU2759690C2 (ru)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201762442680P 2017-01-05 2017-01-05
US62/442,680 2017-01-05
GBGB1704754.9A GB201704754D0 (en) 2017-01-05 2017-03-24 Kinetic exclusion amplification of nucleic acid libraries
GB1704754.9 2017-03-24
PCT/US2017/066751 WO2018128777A1 (en) 2017-01-05 2017-12-15 Kinetic exclusion amplification of nucleic acid libraries

Publications (3)

Publication Number Publication Date
RU2019116874A3 RU2019116874A3 (ru) 2021-02-05
RU2019116874A true RU2019116874A (ru) 2021-02-05
RU2759690C2 RU2759690C2 (ru) 2021-11-16

Family

ID=58688040

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2019116874A RU2759690C2 (ru) 2017-01-05 2017-12-15 Амплификация библиотек нуклеиновых кислот с применением кинетического исключения

Country Status (15)

Country Link
US (2) US10808277B2 (ru)
EP (1) EP3565901A4 (ru)
JP (2) JP7022754B2 (ru)
KR (1) KR102292759B1 (ru)
CN (1) CN110268070A (ru)
AU (2) AU2017390190A1 (ru)
BR (1) BR112019012497A2 (ru)
CA (1) CA3046028C (ru)
GB (1) GB201704754D0 (ru)
IL (1) IL267742A (ru)
MX (2) MX2019006365A (ru)
MY (1) MY193199A (ru)
RU (1) RU2759690C2 (ru)
TW (1) TWI776830B (ru)
WO (1) WO2018128777A1 (ru)

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10869800B2 (en) 2018-03-26 2020-12-22 Augustine Biomedical + Design, LLC Relocation module and methods for surgical equipment
US11426318B2 (en) 2020-05-20 2022-08-30 Augustine Biomedical + Design, LLC Medical module including automated dose-response record system
US11291602B2 (en) 2018-03-26 2022-04-05 Augustine Biomedical + Design, LLC Relocation module and methods for surgical equipment
US11219570B2 (en) 2018-03-26 2022-01-11 Augustine Biomedical + Design, LLC Relocation module and methods for surgical equipment
US10507153B2 (en) 2018-03-26 2019-12-17 Augustine Biomedical + Design, LLC Relocation modules and methods for surgical field
US11432982B2 (en) 2018-03-26 2022-09-06 Augustine Biomedical + Design, LLC Relocation module and methods for surgical equipment
US11160710B1 (en) 2020-05-20 2021-11-02 Augustine Biomedical + Design, LLC Relocation module and methods for surgical equipment
SG11202012811RA (en) 2019-05-31 2021-01-28 Illumina Inc Flow cell with one or more barrier features
TW202104901A (zh) 2019-06-19 2021-02-01 美商伊路米納有限公司 儀器中的試劑交換
WO2021110695A1 (en) * 2019-12-02 2021-06-10 Illumina Cambridge Limited Time-based cluster imaging of amplified contiguity preserved liarary fragments of genomic dna
WO2021168097A1 (en) * 2020-02-19 2021-08-26 Genapsys, Inc. Methods and systems for nucleic acid processing
CN115777024A (zh) * 2020-09-14 2023-03-10 伊鲁米纳公司 用于扩增多核苷酸的组合物和方法
CN114517145A (zh) * 2020-11-20 2022-05-20 京东方科技集团股份有限公司 生物分子捕获机构和微流控芯片
US20240110221A1 (en) * 2022-09-30 2024-04-04 Illumina, Inc. Methods of modulating clustering kinetics

Family Cites Families (85)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB8810400D0 (en) 1988-05-03 1988-06-08 Southern E Analysing polynucleotide sequences
US5130238A (en) 1988-06-24 1992-07-14 Cangene Corporation Enhanced nucleic acid amplification process
CA2044616A1 (en) 1989-10-26 1991-04-27 Roger Y. Tsien Dna sequencing
US5223414A (en) 1990-05-07 1993-06-29 Sri International Process for nucleic acid hybridization and amplification
US5455166A (en) 1991-01-31 1995-10-03 Becton, Dickinson And Company Strand displacement amplification
US5556773A (en) 1993-08-06 1996-09-17 Yourno; Joseph Method and apparatus for nested polymerase chain reaction (PCR) with single closed reaction tubes
AU687535B2 (en) 1994-03-16 1998-02-26 Gen-Probe Incorporated Isothermal strand displacement nucleic acid amplification
US5552278A (en) 1994-04-04 1996-09-03 Spectragen, Inc. DNA sequencing by stepwise ligation and cleavage
US5641658A (en) 1994-08-03 1997-06-24 Mosaic Technologies, Inc. Method for performing amplification of nucleic acid with two primers bound to a single solid support
US5750341A (en) 1995-04-17 1998-05-12 Lynx Therapeutics, Inc. DNA sequencing by parallel oligonucleotide extensions
GB9620209D0 (en) 1996-09-27 1996-11-13 Cemu Bioteknik Ab Method of sequencing DNA
GB9626815D0 (en) 1996-12-23 1997-02-12 Cemu Bioteknik Ab Method of sequencing DNA
US6023540A (en) 1997-03-14 2000-02-08 Trustees Of Tufts College Fiber optic sensor with encoded microspheres
US6327410B1 (en) 1997-03-14 2001-12-04 The Trustees Of Tufts College Target analyte sensors utilizing Microspheres
WO1998044152A1 (en) 1997-04-01 1998-10-08 Glaxo Group Limited Method of nucleic acid sequencing
US6391622B1 (en) * 1997-04-04 2002-05-21 Caliper Technologies Corp. Closed-loop biochemical analyzers
US6511803B1 (en) 1997-10-10 2003-01-28 President And Fellows Of Harvard College Replica amplification of nucleic acid arrays
AR021833A1 (es) 1998-09-30 2002-08-07 Applied Research Systems Metodos de amplificacion y secuenciacion de acido nucleico
US20050191698A1 (en) 1999-04-20 2005-09-01 Illumina, Inc. Nucleic acid sequencing using microsphere arrays
EP1923471B1 (en) 1999-04-20 2012-12-19 Illumina, Inc. Detection of nucleic acid reactions on bead arrays
US20060275782A1 (en) 1999-04-20 2006-12-07 Illumina, Inc. Detection of nucleic acid reactions on bead arrays
US6355431B1 (en) 1999-04-20 2002-03-12 Illumina, Inc. Detection of nucleic acid amplification reactions using bead arrays
US6274320B1 (en) 1999-09-16 2001-08-14 Curagen Corporation Method of sequencing a nucleic acid
US7244559B2 (en) 1999-09-16 2007-07-17 454 Life Sciences Corporation Method of sequencing a nucleic acid
ATE492652T1 (de) 2000-02-07 2011-01-15 Illumina Inc Nukleinsäuredetektionsverfahren mit universellem priming
US7582420B2 (en) 2001-07-12 2009-09-01 Illumina, Inc. Multiplex nucleic acid reactions
US6913884B2 (en) 2001-08-16 2005-07-05 Illumina, Inc. Compositions and methods for repetitive use of genomic DNA
US6770441B2 (en) 2000-02-10 2004-08-03 Illumina, Inc. Array compositions and methods of making same
CN100462433C (zh) 2000-07-07 2009-02-18 维西根生物技术公司 实时序列测定
WO2002044425A2 (en) 2000-12-01 2002-06-06 Visigen Biotechnologies, Inc. Enzymatic nucleic acid synthesis: compositions and methods for altering monomer incorporation fidelity
AR031640A1 (es) 2000-12-08 2003-09-24 Applied Research Systems Amplificacion isotermica de acidos nucleicos en un soporte solido
GB0127564D0 (en) 2001-11-16 2002-01-09 Medical Res Council Emulsion compositions
US7057026B2 (en) 2001-12-04 2006-06-06 Solexa Limited Labelled nucleotides
US7399590B2 (en) 2002-02-21 2008-07-15 Asm Scientific, Inc. Recombinase polymerase amplification
US20040002090A1 (en) 2002-03-05 2004-01-01 Pascal Mayer Methods for detecting genome-wide sequence variations associated with a phenotype
WO2004018497A2 (en) 2002-08-23 2004-03-04 Solexa Limited Modified nucleotides for polynucleotide sequencing
US7595883B1 (en) 2002-09-16 2009-09-29 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Biological analysis arrangement and approach therefor
AU2003272438B2 (en) 2002-09-20 2009-04-02 New England Biolabs, Inc. Helicase dependent amplification of nucleic acids
CA2513889A1 (en) 2003-01-29 2004-08-19 454 Corporation Double ended sequencing
WO2005003304A2 (en) 2003-06-20 2005-01-13 Illumina, Inc. Methods and compositions for whole genome amplification and genotyping
WO2005010145A2 (en) 2003-07-05 2005-02-03 The Johns Hopkins University Method and compositions for detection and enumeration of genetic variations
JP2007525571A (ja) 2004-01-07 2007-09-06 ソレクサ リミテッド 修飾分子アレイ
CN101914620B (zh) 2004-09-17 2014-02-12 加利福尼亚太平洋生命科学公司 核酸测序的方法
EP3257949A1 (en) 2005-06-15 2017-12-20 Complete Genomics Inc. Nucleic acid analysis by random mixtures of non-overlapping fragments
US7405281B2 (en) 2005-09-29 2008-07-29 Pacific Biosciences Of California, Inc. Fluorescent nucleotide analogs and uses therefor
GB0522310D0 (en) 2005-11-01 2005-12-07 Solexa Ltd Methods of preparing libraries of template polynucleotides
WO2007107710A1 (en) 2006-03-17 2007-09-27 Solexa Limited Isothermal methods for creating clonal single molecule arrays
EP2018622B1 (en) 2006-03-31 2018-04-25 Illumina, Inc. Systems for sequence by synthesis analysis
WO2008002502A2 (en) * 2006-06-23 2008-01-03 Illumina, Inc. Devices and systems for creation of dna cluster arrays
WO2008051530A2 (en) 2006-10-23 2008-05-02 Pacific Biosciences Of California, Inc. Polymerase enzymes and reagents for enhanced nucleic acid sequencing
US8349167B2 (en) 2006-12-14 2013-01-08 Life Technologies Corporation Methods and apparatus for detecting molecular interactions using FET arrays
US8262900B2 (en) 2006-12-14 2012-09-11 Life Technologies Corporation Methods and apparatus for measuring analytes using large scale FET arrays
EP2653861B1 (en) 2006-12-14 2014-08-13 Life Technologies Corporation Method for sequencing a nucleic acid using large-scale FET arrays
WO2008093098A2 (en) 2007-02-02 2008-08-07 Illumina Cambridge Limited Methods for indexing samples and sequencing multiple nucleotide templates
EP2173467B1 (en) 2007-07-13 2016-05-04 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Method and apparatus using electric field for improved biological assays
US20090226975A1 (en) 2008-03-10 2009-09-10 Illumina, Inc. Constant cluster seeding
AU2009231582B2 (en) 2008-04-03 2015-02-26 iRepertoire, Inc. Amplicon rescue multiplex polymerase chain reaction for amplificaton of multiple targets
US20100035252A1 (en) 2008-08-08 2010-02-11 Ion Torrent Systems Incorporated Methods for sequencing individual nucleic acids under tension
US20100137143A1 (en) 2008-10-22 2010-06-03 Ion Torrent Systems Incorporated Methods and apparatus for measuring analytes
UA117022C2 (uk) 2008-12-19 2018-06-11 Ксілеко, Інк. Спосіб переробки біомаси
US8716467B2 (en) * 2010-03-03 2014-05-06 Gen9, Inc. Methods and devices for nucleic acid synthesis
US20110312760A1 (en) * 2010-06-17 2011-12-22 Geneasys Pty Ltd Reagent microvial with authentication integrated circuit
WO2011159942A1 (en) 2010-06-18 2011-12-22 Illumina, Inc. Conformational probes and methods for sequencing nucleic acids
WO2012040387A1 (en) * 2010-09-24 2012-03-29 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Direct capture, amplification and sequencing of target dna using immobilized primers
EP2633069B1 (en) 2010-10-26 2015-07-01 Illumina, Inc. Sequencing methods
WO2012058096A1 (en) 2010-10-27 2012-05-03 Illumina, Inc. Microdevices and biosensor cartridges for biological or chemical analysis and systems and methods for the same
US8951781B2 (en) 2011-01-10 2015-02-10 Illumina, Inc. Systems, methods, and apparatuses to image a sample for biological or chemical analysis
WO2012106072A2 (en) * 2011-02-03 2012-08-09 Illumina, Inc. Methods for minimizing sequence specific bias
EP2718465B1 (en) 2011-06-09 2022-04-13 Illumina, Inc. Method of making an analyte array
US10378051B2 (en) 2011-09-29 2019-08-13 Illumina Cambridge Limited Continuous extension and deblocking in reactions for nucleic acids synthesis and sequencing
EP3305400A3 (en) 2011-10-28 2018-06-06 Illumina, Inc. Microarray fabrication system and method
WO2013096692A1 (en) 2011-12-21 2013-06-27 Illumina, Inc. Apparatus and methods for kinetic analysis and determination of nucleic acid sequences
US9803239B2 (en) * 2012-03-29 2017-10-31 Complete Genomics, Inc. Flow cells for high density array chips
US9012022B2 (en) 2012-06-08 2015-04-21 Illumina, Inc. Polymer coatings
US8895249B2 (en) 2012-06-15 2014-11-25 Illumina, Inc. Kinetic exclusion amplification of nucleic acid libraries
US9512422B2 (en) 2013-02-26 2016-12-06 Illumina, Inc. Gel patterned surfaces
BR112016000456B1 (pt) 2013-08-08 2021-06-01 Illumina, Inc Sistema e método de reutilização de reagentes
US9944924B2 (en) 2014-01-16 2018-04-17 Illumina, Inc. Polynucleotide modification on solid support
EP2921556A1 (en) 2014-03-21 2015-09-23 Lexogen GmbH Copy number preserving RNA analysis method
SG10201809312QA (en) 2014-05-16 2018-11-29 Illumina Inc Nucleic acid synthesis techniques
AU2015273232B2 (en) 2014-06-13 2021-09-16 Illumina Cambridge Limited Methods and compositions for preparing sequencing libraries
AU2015323936B2 (en) 2014-09-29 2021-03-11 Illumina Cambridge Limited Recombinase mutants
ES2802405T3 (es) 2014-11-11 2021-01-19 Illumina Cambridge Ltd Métodos y matrices para producir y secuenciar agrupaciones monoclonales de ácido nucleico
ES2870097T3 (es) 2014-12-15 2021-10-26 Illumina Inc Método de colocación molecular individual sobre un sustrato
DK3303614T3 (da) * 2015-05-29 2020-05-18 Illumina Cambridge Ltd Forbedret anvendelse af overfladeprimere i klynger

Also Published As

Publication number Publication date
AU2021250878A1 (en) 2021-11-11
IL267742A (en) 2019-08-29
CA3046028C (en) 2023-09-19
JP2020505003A (ja) 2020-02-20
WO2018128777A1 (en) 2018-07-12
KR20190099328A (ko) 2019-08-26
RU2019116874A3 (ru) 2021-02-05
JP7022754B2 (ja) 2022-02-18
US11661627B2 (en) 2023-05-30
US10808277B2 (en) 2020-10-20
JP2022033726A (ja) 2022-03-02
TWI776830B (zh) 2022-09-11
BR112019012497A2 (pt) 2020-04-14
US20180187252A1 (en) 2018-07-05
EP3565901A4 (en) 2020-09-02
AU2021250878B2 (en) 2023-11-30
CA3046028A1 (en) 2018-07-12
MY193199A (en) 2022-09-26
MX2022006265A (es) 2022-06-29
AU2017390190A1 (en) 2019-06-20
EP3565901A1 (en) 2019-11-13
TW201825686A (zh) 2018-07-16
US20210010071A1 (en) 2021-01-14
CN110268070A (zh) 2019-09-20
MX2019006365A (es) 2019-10-15
GB201704754D0 (en) 2017-05-10
RU2759690C2 (ru) 2021-11-16
KR102292759B1 (ko) 2021-08-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2019116874A (ru) Амплификация библиотек нуклеиновых кислот с применением кинетического исключения
JP2022033726A5 (ru)
US11795494B2 (en) Multi-primer amplification method for barcoding of target nucleic acids
CN103343092B (zh) 基于矿物油饱和pdms材料的数字pcr芯片的制作方法
JP2017506877A5 (ru)
US20140065631A1 (en) Microfluidic Chip, Device and System for the Generation of Aqueous Droplets in Emulsion Oil for Nucleic Acid Amplification
WO2008109176A8 (en) Assays and other reactions involving droplets
JP2013527769A5 (ru)
US9347097B2 (en) Arrangement for determining the concentration of nucleic acids
JP2012522517A5 (ru)
EP2265375A1 (en) Integrated microfluidic device and methods
US20200086321A1 (en) Method and Device for Encapsulating Cell in Liquid Droplet for Single-Cell Analysis
WO2013028643A1 (en) Preparation of polynucleotides on a solid substrate for sequencing
CN102586226B (zh) 一种基于连续液滴操控的微流控芯片核酸纯化平台
RU2018144299A (ru) Способ амплификации кольцевой днк
CN109678727A (zh) 一种微通道硝化反应合成2-乙基-5-硝基苯胺的方法
CN101921867B (zh) 一站式pcr方法
CN104961700B (zh) 一种利用微反应装置制备莠去津的方法
CN102146447A (zh) 巢式共扩增聚合酶链式反应试剂盒
CN110982882B (zh) 用于单细胞固定-隔离并原位核酸扩增的微流控芯片及其应用
CN104846112B (zh) 一种用于核酸测序的emPCR体系
CN212189151U (zh) 一种数字微流控芯片及其检测系统
CN108732370B (zh) 一种试剂的均分方法
EP3890886A1 (en) Controlling dna concentration for str analysis
CN105400692A (zh) 等温核酸扩增装置及等温核酸扩增实验方法