RU2017120211A - Мутантные микроорганизмы, устойчивые к гибели под действием лактозы - Google Patents

Мутантные микроорганизмы, устойчивые к гибели под действием лактозы Download PDF

Info

Publication number
RU2017120211A
RU2017120211A RU2017120211A RU2017120211A RU2017120211A RU 2017120211 A RU2017120211 A RU 2017120211A RU 2017120211 A RU2017120211 A RU 2017120211A RU 2017120211 A RU2017120211 A RU 2017120211A RU 2017120211 A RU2017120211 A RU 2017120211A
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
lactose
specified
microorganism
transporter
sequence
Prior art date
Application number
RU2017120211A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2746410C2 (ru
RU2017120211A3 (ru
Inventor
Жори БОПРЕ
Софи ДЕ МЭЗЕНЬЕР
Эрик ТИММЕРМАНС
Original Assignee
Инбиос Н.В.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Инбиос Н.В. filed Critical Инбиос Н.В.
Publication of RU2017120211A publication Critical patent/RU2017120211A/ru
Publication of RU2017120211A3 publication Critical patent/RU2017120211A3/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2746410C2 publication Critical patent/RU2746410C2/ru

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09Recombinant DNA-technology
    • C12N15/10Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K14/00Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C07K14/24Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Enterobacteriaceae (F), e.g. Citrobacter, Serratia, Proteus, Providencia, Morganella, Yersinia
    • C07K14/245Escherichia (G)
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09Recombinant DNA-technology
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/80Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
    • C12N15/81Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10Transferases (2.)
    • C12N9/1048Glycosyltransferases (2.4)
    • C12N9/1051Hexosyltransferases (2.4.1)
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12PFERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/12Disaccharides
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12YENZYMES
    • C12Y204/00Glycosyltransferases (2.4)
    • C12Y204/01Hexosyltransferases (2.4.1)
    • C12Y204/01022Lactose synthase (2.4.1.22)

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Claims (18)

1. Способ получения микроорганизмов, устойчивых к явлению гибели под действием лактозы, выращенных в окружении, в котором лактоза комбинируется с другим источником углерода, где способ включает:
a. мутирование экспрессии лактозного транспортера в микроорганизмах, где указанная мутация приводит к экспрессии указанного лактозного транспортера,
b. выращивание мутированных микроорганизмов на среде, включающей источник углерода, отличный от лактозы,
c. добавление лактозы к указанной среде в процессе роста указанных мутированных микроорганизмов, и
d. отбор микроорганизмов, устойчивых к явлению гибели под действием лактозы, растущих на указанной среде, включающей лактозу, которые сохраняют, по меньшей мере, 50% от уровня транспорта лактозы в клетку, достигаемого с экспрессионной кассетой дикого типа указанного лактозного транспортера.
2. Способ по п. 1, где стадию а) осуществляют путем введения гетерологичного промотора перед эндогенным или экзогенным геном лактозного транспортера, и/или путем мутирования нетранслируемой области перед кодирующей последовательностью, которая содержит последовательность связывания рибосомы или последовательность Козак, и/или путем модифицирования частоты использования кодонов эндогенного гена лактозного транспортера.
3. Способ по п. 2, где введение гетерологичного промотора перед эндогенным или экзогенным геном лактозного транспортера осуществляют за счет а) делеции эндогенных лактозных транспортеров из генома и введения их в другой участок в геноме указанного микроорганизма, или b) за счет введения гетерологичного промотора перед эндогенными лактозными транспортерами, или с) за счет нокаута эндогенного лактозного промотора и введения гетерологичного промотора в тот же участок генома указанного микроорганизма.
4. Способ по пп. 1-3, где указанный экспрессированный лактозный транспортер обнаруживают с помощью трансляционного связывания с репортерным геном и/или через связывание с аптамером.
5. Способ по пп. 1-4, где указанный экспрессированный лактозный транспортер обнаруживают посредством генетических конструкций, приведенных в SEQ ID n° 2, 3, 4 и/или 5.
6. Способ по пп. 1-5, где указанный лактозный транспортер представляет собой лактозную пермеазу.
7. Способ по пп. 1-6, где указанный микроорганизм представляет собой бактериальную, дрожжевую или грибную клетку.
8. Последовательности промотора, последовательности нетранслируемой области перед кодирующей последовательностью, которые содержат последовательности связывания рибосомы или последовательности Козак, и/или последовательности лактозной пермеазы, приводящие к экспрессии лактозного транспортера, которые не приводят к фенотипу гибели под действием лактозы, и которые получают способом по пп. 1-7.
9. Микроорганизм, устойчивый к явлению гибели под действием лактозы, выращенный в окружении, в котором лактоза комбинируется с другим (другими) источником (источниками) углерода, и получаемый способом по пп. 1-7.
10. Микроорганизм по п. 9, содержащий гетерологичную последовательность перед геном лактозного транспортера, приведенную в SEQ ID N° 1, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56 или 57.
11. Микроорганизм по пп. 9-10, в котором гены, кодирующие ферменты из путей деградации лактозы и/или галактозы, являются менее функциональными или нефункциональными.
12. Применение микроорганизма и/или последовательности по пп. 9-11 и/или 8, соответственно, для производства специальных продуктов на основе лактозы и/или галактозы.
13. Применение микроорганизма и/или последовательности по п. 12, где указанные специальные продукты на основе лактозы представляют собой специальные углеводы, гликолипиды и галактозилированные соединения.
14. Применение микроорганизма по п. 13, где указанные специальные углеводы представляют собой 2-фукозиллактозу, или 2'-фукозиллактозу, или 3-фукозиллактозу, или 2',3-дифукозиллактозу, или лакто-N-триозу, или лакто-N-тетраозу, или лакто-N-тетраозу, или 3'-сиалиллактозу, или 6'-сиалиллактозу.
RU2017120211A 2014-11-14 2015-11-12 Мутантные микроорганизмы, устойчивые к гибели под действием лактозы RU2746410C2 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP14193151 2014-11-14
EP14193151.9 2014-11-14
PCT/EP2015/076449 WO2016075243A1 (en) 2014-11-14 2015-11-12 Mutant microorganisms resistant to lactose killing

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2021109889A Division RU2021109889A (ru) 2014-11-14 2015-11-12 Мутантные микроорганизмы, устойчивые к гибели под действием лактозы

Publications (3)

Publication Number Publication Date
RU2017120211A true RU2017120211A (ru) 2018-12-14
RU2017120211A3 RU2017120211A3 (ru) 2019-04-25
RU2746410C2 RU2746410C2 (ru) 2021-04-13

Family

ID=51893928

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2021109889A RU2021109889A (ru) 2014-11-14 2015-11-12 Мутантные микроорганизмы, устойчивые к гибели под действием лактозы
RU2017120211A RU2746410C2 (ru) 2014-11-14 2015-11-12 Мутантные микроорганизмы, устойчивые к гибели под действием лактозы

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2021109889A RU2021109889A (ru) 2014-11-14 2015-11-12 Мутантные микроорганизмы, устойчивые к гибели под действием лактозы

Country Status (12)

Country Link
US (2) US10858684B2 (ru)
EP (1) EP3218509B1 (ru)
JP (2) JP6765372B2 (ru)
KR (1) KR102579346B1 (ru)
CN (2) CN107075506B (ru)
AU (2) AU2015345073B9 (ru)
BR (1) BR112017006295B1 (ru)
CA (1) CA2958786A1 (ru)
DK (1) DK3218509T3 (ru)
RU (2) RU2021109889A (ru)
SG (1) SG11201701585VA (ru)
WO (1) WO2016075243A1 (ru)

Families Citing this family (35)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101731263B1 (ko) * 2016-04-25 2017-05-02 서울대학교 산학협력단 코리네박테리움 글루타미쿰을 이용한 2'-푸코실락토오스의 생산방법
PL3315610T3 (pl) 2016-10-29 2021-06-14 Jennewein Biotechnologie Gmbh Sposób wytwarzania fukozylowanych oligosacharydów
WO2018122225A1 (en) 2016-12-27 2018-07-05 Inbiose N.V. In vivo synthesis of sialylated compounds
AU2018374516B2 (en) * 2017-12-01 2024-03-07 Societe Des Produits Nestle S.A. Human milk fortifier composition
WO2019209241A1 (en) * 2018-04-23 2019-10-31 Dupont Nutrition Biosciences Aps Increasing export of 2' fucosyllactose from microbial cells through the expression of a heterologous nucleic acid
WO2019209245A1 (en) * 2018-04-23 2019-10-31 Dupont Nutrition Biosciences Aps Increasing activity of 2' fucosyllactose transporters endogenous to microbial cells
US10519475B1 (en) * 2018-11-21 2019-12-31 Amyris, Inc. Biosynthesis of compounds in yeast
WO2020127417A2 (en) 2018-12-18 2020-06-25 Inbiose N.V. PRODUCTION OF 3-FUCOSYLLACTOSE AND LACTOSE CONVERTING α-1,3-FUCOSYLTRANSFERASE ENZYMES
CN109735479B (zh) * 2019-01-30 2022-04-01 光明乳业股份有限公司 一种合成2’-岩藻糖基乳糖的重组枯草芽孢杆菌及其构建方法与应用
EP3999635A1 (en) 2019-07-19 2022-05-25 Inbiose N.V. Production of fucosyllactose in host cells
WO2021122708A1 (en) 2019-12-17 2021-06-24 Inbiose N.V. Lactose converting alpha-1,2-fucosyltransferase enzymes
KR20220114632A (ko) 2019-12-18 2022-08-17 인바이오스 엔.브이. 숙주 세포에서 시알릴화 올리고당의 생산
WO2021160827A2 (en) 2020-02-14 2021-08-19 Inbiose N.V. Production of glycosylated product in host cells
WO2021160830A1 (en) 2020-02-14 2021-08-19 Inbiose N.V. Glycominimized bacterial host cells
EP3954769A1 (en) 2020-08-10 2022-02-16 Inbiose N.V. Production of oligosaccharide mixtures by a cell
WO2022034078A1 (en) 2020-08-10 2022-02-17 Inbiose N.V. Method to produce a purified mixture of different oligosaccharides produced by cell cultivation or microbial fermentation
EP4192946A1 (en) 2020-08-10 2023-06-14 Inbiose N.V. Cellular production of di- and/or oligosaccharides
EP4192945A1 (en) 2020-08-10 2023-06-14 Inbiose N.V. Cellular production of sialylated di- and/or oligosaccharides
EP4192970A1 (en) 2020-08-10 2023-06-14 Inbiose N.V. Production of alpha-1,3 glycosylated form of fuc-a1,2-gal-r
WO2022034079A2 (en) 2020-08-10 2022-02-17 Inbiose N.V. Process for purification of an oligosaccharide solution produced by cell cultivation or microbial fermentation
WO2022129470A1 (en) 2020-12-18 2022-06-23 Inbiose N.V. Variant sucrose permease polypeptides
EP4019534A1 (en) 2020-12-22 2022-06-29 Chr. Hansen HMO GmbH Microbial cells possessing a reduced lactose internalization for producing an oligosaccharide
AU2022210808A1 (en) 2021-01-20 2023-08-31 Inbiose N.V. Production of oligosaccharides comprising ln3 as core structure in host cells
KR20230170961A (ko) 2021-04-16 2023-12-19 인바이오스 엔.브이. 시알릴화 이당 및/또는 올리고당의 세포 생산
EP4323507A2 (en) 2021-04-16 2024-02-21 Inbiose N.V. Fermentative production
KR20230172003A (ko) 2021-04-16 2023-12-21 인바이오스 엔.브이. 바이오산물의 세포 생산
EP4370664A1 (en) 2021-07-16 2024-05-22 Inbiose N.V. Lacto-n-biose converting fucosyltransferases
CN113881586B (zh) * 2021-09-27 2023-03-10 四川大学 耐高温、耐高糖、耐高盐酿酒酵母菌株及构建方法和应用
KR20240114773A (ko) 2021-12-14 2024-07-24 인바이오스 엔.브이. 알파-1,3-푸코실화된 화합물의 생산
WO2023110994A1 (en) 2021-12-14 2023-06-22 Inbiose N.V. Production of alpha-1,4-fucosylated compounds
CN114645070B (zh) * 2022-02-28 2022-12-20 北京焉支山科技有限公司 一种己糖-6-磷酸组合物的制备方法及其在化妆品中的应用
WO2024017987A1 (en) 2022-07-20 2024-01-25 Inbiose N.V. Production of oligosaccharides in host cells
WO2024165525A1 (en) 2023-02-06 2024-08-15 Inbiose N.V. Production of a saccharide, lactobionic acid and/or glycosylated forms of lactobionic acid
WO2024165524A1 (en) 2023-02-06 2024-08-15 Inbiose N.V. Production of a saccharide by a cell with reduced synthesis of lactobionic acid
WO2024165611A1 (en) 2023-02-07 2024-08-15 Inbiose N.V. Production of a disaccharide and/or milk oligosaccharide by a cell with reduced synthesis of udp-glcnac

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5858752A (en) 1995-06-07 1999-01-12 The General Hospital Corporation Fucosyltransferase genes and uses thereof
MY148510A (en) * 2006-03-09 2013-04-30 Centre Nat Rech Scient Method for producing sialylated oligosaccharides
CA3098403C (en) * 2011-02-16 2022-05-10 Glycosyn LLC Biosynthesis of human milk oligosaccharides in engineered bacteria
EP2791367B1 (en) * 2011-12-16 2019-04-24 Inbiose N.V. Mutant microorganisms to synthesize colanic acid, mannosylated and/or fucosylated oligosaccharides
CN102604849B (zh) * 2012-03-23 2013-08-14 天津科技大学 一株高效利用乳糖生产燃料乙醇的酿酒酵母工程菌
US9816122B2 (en) * 2012-09-25 2017-11-14 Glycom A/S Glycoconjugate synthesis

Also Published As

Publication number Publication date
BR112017006295A2 (pt) 2017-12-12
CN114015714A (zh) 2022-02-08
CN107075506B (zh) 2022-06-03
KR20170076650A (ko) 2017-07-04
AU2015345073B2 (en) 2021-04-08
EP3218509A1 (en) 2017-09-20
BR112017006295B1 (pt) 2023-10-17
AU2021204038B2 (en) 2024-03-14
CA2958786A1 (en) 2016-05-19
AU2015345073B9 (en) 2021-04-29
AU2021204038A1 (en) 2021-07-08
SG11201701585VA (en) 2017-05-30
RU2021109889A (ru) 2021-05-06
KR102579346B1 (ko) 2023-09-15
JP2017534292A (ja) 2017-11-24
DK3218509T3 (da) 2024-05-21
RU2746410C2 (ru) 2021-04-13
US20210095321A1 (en) 2021-04-01
AU2015345073A1 (en) 2017-03-23
RU2017120211A3 (ru) 2019-04-25
JP2021000116A (ja) 2021-01-07
US20180066294A1 (en) 2018-03-08
US10858684B2 (en) 2020-12-08
JP6765372B2 (ja) 2020-10-07
WO2016075243A1 (en) 2016-05-19
CN107075506A (zh) 2017-08-18
EP3218509B1 (en) 2024-02-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2017120211A (ru) Мутантные микроорганизмы, устойчивые к гибели под действием лактозы
Song et al. CRISPR-Cas9D10A nickase-assisted genome editing in Lactobacillus casei
US8865468B2 (en) Homologous recombination in an algal nuclear genome
JP2022520428A (ja) Ruvcドメインを有する酵素
RU2014128987A (ru) Быстрый способ клонирования и экспрессии сегментов гена родственной вариабельной области антитела
CN104651401A (zh) 一种mir-505双等位基因敲除的方法
JP6473510B2 (ja) ビブリオで汎用される遺伝子ノックアウト用の自殺ベクターおよびその利用
CN107151677B (zh) 基于CRISPR/Cas9多基因敲除低转染效率细胞系的方法
US11680270B2 (en) Recombinant acid-resistant yeast with inhibited lactate metabolism and alcohol production and method of producing lactic acid using the same
WO2015158115A1 (zh) 一种简便高效的基因编辑方法
CN104561077A (zh) 重组工程介导的谷氨酸棒杆菌atcc 13032的基因敲除方法
CN111793647A (zh) Cd226基因人源化非人动物的构建方法及应用
JP2014207885A (ja) 遺伝子改変クロストリジウム・サッカロパーブチルアセトニカム
Wei et al. Efficient generation of the mouse model with a defined point mutation through haploid cell-mediated gene editing
CN111321154B (zh) 基于高等真菌灵芝功能基因编辑的调节灵芝酸产量的方法
CA2969294A1 (en) Clostridium acetobutylicum strains unable to produce hydrogen and useful for the continuous production of chemicals and fuels
CN103923940A (zh) 一种定点整合外源基因的方法
CN109628361B (zh) 整合双拷贝功能性f4菌毛操纵子基因猪源益生菌ep1克隆株、构建方法及应用
CN107523568B (zh) 毕赤酵母的一种组成型启动子及其应用
US9157086B2 (en) Shuttle vectors for Corynebacterium and Escherichia coli
US20200017867A1 (en) Method of Producing Transformant
Mahipant et al. An alternative genome-integrated method for undomesticated Bacillus subtilis and related species
KR102226714B1 (ko) tetA 유전자를 이용한 이중선별에 의한 대장균의 지놈 엔지니어링 방법
JP6499587B2 (ja) 形質転換体およびその製造方法、ならびに乳酸の製造方法
JP6274502B2 (ja) 相同組換えの頻度が増大されたクリプトコッカス属のウラシル要求性の菌株を取得する方法