RU2016133315A

RU2016133315A - Фармацевтическая композиция, содержащая эритроциты, в которых заключен фермент, зависимый от пиридоксальфосфата, и его кофактор

Info

Publication number: RU2016133315A
Application number: RU2016133315A
Authority: RU
Inventors: Янн ГОДФРЕН; Ванесса БОРЖО; Фабьен ГЭ; Тома КОРТЕЗ
Original assignee: Эритек Фарма
Priority date: 2014-02-12
Filing date: 2015-02-12
Publication date: 2018-02-16
Also published as: EP3104875A2; BR112016017337B1; WO2015121348A3; CA2938469A1; EP3718562A1; AU2015217045B2; CN111358941A; SG11201606264SA; JO3522B1; BR112016017337A2; CN111358941B; IL246941B; US10046009B2; WO2015121348A2; FR3017299B1; JP6563958B2; FR3017299A1; US10780126B2; KR20160121532A; US20210008114A1

Claims

1. Фармацевтическая композиция, содержащая эритроциты и фармацевтически приемлемый носитель, причем внутри эритроцитов заключен фермент, зависимый от пиридоксальфосфата, и пиридоксальфосфат.

2. Композиция по п. 1, содержащая также нефосфатный предшественник пиридоксальфосфата, заключенный внутри эритроцитов и/или присутствующий вне эритроцитов.

3. Композиция по п. 2, содержащая в качестве нефосфатной формы предшественника пиридоксальфосфата пиридоксаль, пиридоксин и/или пиридоксамин.

4. Композиция по любому из предыдущих пунктов, содержащая также фосфатный предшественник пиридоксальфосфата, заключенный внутри эритроцитов.

5. Композиция по п. 4, содержащая в качестве фосфатного предшественника пиридоксальфосфата пиридоксинфосфат и/или пиридоксаминфосфат.

6. Композиция по любому из предыдущих пунктов, содержащая от 0,01 мг до 30 мг фермента, зависимого от пиридоксальфосфата, в 1 мл эритроцитов.

7. Композиция по любому из пп. 1-5, содержащая от 0,05 мкмоль до 600 мкмоль заключенного внутри эритроцитов пиридоксальфосфата и/или пиридоксинфосфата, и/или пиридоксаминфосфата в 1 л эритроцитов.

8. Композиция по любому из пп. 1-5, содержащая также пиридоксинкиназу, пиридоксинфосфат-оксидазу и/или агент, ингибирующий пиридоксальфосфат-фосфатазу.

9. Композиция по любому из пп. 1-5, содержащая в качестве фермента, зависимого от пиридоксальфосфата, метиониназу, тирозин-фенол-лиазу, тирозинаминотрансферазу или цистатионин-бета-синтазу.

10. Способ терапевтического лечения для истощения или снижения уровня в плазме крови или в кровотоке субстрата, выбираемого из группы, состоящей из метионина, гомоцистеина и тирозина, у нуждающегося в том пациента, включающий введение указанному индивиду эффективного количества композиции, содержащей эритроциты и фармацевтически приемлемый носитель, причем внутри эритроцитов заключен фермент, зависимый от пиридоксальфосфата, и пиридоксальфосфат.

11. Способ терапевтического лечения для истощения или снижения уровня в плазме крови или в кровотоке субстрата, выбираемого из группы, состоящей из метионина, гомоцистеина и тирозина, у нуждающегося в том пациента, включающий введение указанному индивиду эффективного количества композиции, содержащей эритроциты, внутри которых заключен фермент, зависимый от пиридоксальфосфата, и введение нефосфатной формы витамина В₆, причем пациенту вводят указанную композицию и нефосфатную форму витамина В₆.

12 Способ по п. 10 или 11, в котором нуждающийся в нем пациент является индивидом, больным раком.

13. Способ по п. 10 или 11, в котором нуждающийся в нем пациент является индивидом, больным гомоцистеинурией или гипергомоцистеинемией или сердечнососудистым заболеванием, и фермент, зависимый от пиридоксальфосфата, выбирают из группы, состоящей из метиониназы и цистатионин-бета-синтазы.

14. Способ по п. 12, в котором при раке опухолевые клетки ауксотрофны по метионину или тирозину и фермент, зависимый от пиридоксальфосфата, выбирают из группы, состоящей из метиониназы и тирозин-фенол-лиазы.

15. Способ по п. 10 или 11, в котором нуждающийся в нем пациент является индивидом, больным синдромом Рихнера-Ханхарта (тирозинемией типа II) и фермент, зависимый от пиридоксальфосфата, является тирозинаминотрансферазой.

16. Способ получения фармацевтической композиции, содержащей эритроциты, внутри которых заключен фермент, зависимый от пиридоксальфосфата, содержащей также фармацевтически приемлемый носитель и пиридоксальфосфат и при необходимости фосфатный или нефосфатный предшественник пиридоксальфосфата, причем указанный способ включает следующие этапы: при необходимости осадок эритроцитов промывают и центрифугируют один или несколько раз в физиологическом буферном растворе; суспензия эритроцитов контактирует с гипотонической жидкой средой, что приводит к открыванию пор в клеточной мембране эритроцитов; суспензия эритроцитов контактирует с ферментом, зависимым от пиридоксальфосфата, до или после открывания пор; указанный фермент поступает внутрь эритроцитов; поры в клеточной мембране эритроцитов закрываются под действием гипертонического буферного раствора, и собирают суспензию эритроцитов с восстановленным закрытым состоянием пор клеточной мембраны, содержащих указанный фермент; при необходимости суспензию эритроцитов инкубируют для удаления наиболее хрупких эритроцитов; суспензию эритроцитов промывают и держат в консервирующем растворе; причем в указанном способе:

- пиридоксальфосфат и/или фосфатный предшественник пиридоксальфосфата (если он присутствует) заключены в эритроцитах вместе с ферментом, зависимым от пиридоксальфосфата,

- нефосфатный предшественник пиридоксальфосфата (если он присутствует) добавляется в суспензию эритроцитов до или после открывания пор клеточной мембраны эритроцитов, и/или

- нефосфатный предшественник пиридоксальфосфата (если он присутствует) добавляется в ходе инкубации или в консервирующий раствор.

17. Способ по п. 16, в котором пиридоксальфосфат заключен внутри эритроцитов вместе с ферментом, зависимым от пиридоксальфосфата, и в суспензию эритроцитов до и/или после открывания пор клеточной мембраны, и/или во время инкубации, и/или в консервирующий раствор добавляется по меньшей мере один нефосфатный предшественник пиридоксальфосфата.

18. Способ по п. 17, в котором нефосфатный предшественник является пиридоксином.

19. Способ получения метиониназы, включающий этапы:

(a) культивирование бактерий, трансформированных таким образом, что они продуцируют метиониназу; центрифугирование культуры этих клеток и сбор осадка;

(b) суспендирование полученного осадка в буферном растворе для лизиса, лизис бактериальных клеток, центрифугирование полученной взвеси и сбор супернатанта;

(c) обработка полученного супернатанта осаждающим агентом, осаждение и сбор осадка;

(d) проведение с осадком двух циклов кристаллизации или осаждения с использованием полиэтиленгликоля при температуре, составляющей от около 25°C до около 40°C, ии сбор осадка;

(e) суспендирование полученного осадка в солюбилизирующем буферном растворе, проведение с ним двух циклов анионообменной хроматографии и сбор раствора метиониназы;

(f) проведение дополнительной стадии тонкой очистки путем хроматографии с полученным раствором метиониназы и сбор раствора очищенного фермента.

20. Способ по п. 19, в котором после лизиса на этапе (b) и перед центрифугированием лизат клеток осветляют, используя катионный коагулянт, предпочтительно полиэтиленимин.

21. Способ по п. 19 или 20, в котором на этапе (с) осаждение осуществляется с использованием сульфата аммония.

22. Способ по п. 19 или 20, в котором на этапе (d) используется полиэтиленгликоль PEG-6000.

23. Способ по п. 19 или 20, в котором на этапе (d) первое осаждение полиэтиленгликолем осуществляется в присутствии сульфата аммония, а второе осаждение полиэтиленгликолем осуществляется в присутствии неорганической соли.

24. Способ по п. 19 или 20, в котором на этапе (е) хроматография проводится с использованием DEAE-сефарозы.