RU2011120170A - Усовершенствованный способ пегилирования белков - Google Patents

Усовершенствованный способ пегилирования белков Download PDF

Info

Publication number
RU2011120170A
RU2011120170A RU2011120170/04A RU2011120170A RU2011120170A RU 2011120170 A RU2011120170 A RU 2011120170A RU 2011120170/04 A RU2011120170/04 A RU 2011120170/04A RU 2011120170 A RU2011120170 A RU 2011120170A RU 2011120170 A RU2011120170 A RU 2011120170A
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
methug
csf
carbohydrate
polyol
yield
Prior art date
Application number
RU2011120170/04A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2472806C1 (ru
Inventor
Никхил Умеш МОХЕ
Радхакришнан Венкатасубраманиам ТАРУР
Динеш Кумар ПАЛИВАЛ
Дивия Лал САКСЕНА
Нилеш Дагду ПАТИЛ
Муралидхаран ЧАНДРАКЕСАН
Дигамбер Срипати ПАВАЛ
Ракеш ШЕКХАВАТ
Аруна Кхаре
Сагар Сатианараян ЗАВАР
Панкадж Прабхакар МАЛЬПУРЕ
Дилип Кумар РАНА
Original Assignee
Юсв Лимитед
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Юсв Лимитед filed Critical Юсв Лимитед
Publication of RU2011120170A publication Critical patent/RU2011120170A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2472806C1 publication Critical patent/RU2472806C1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/53—Colony-stimulating factor [CSF]
    • C07K14/535—Granulocyte CSF; Granulocyte-macrophage CSF
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

1. Способ улучшения выхода реакции пегилирования r-metHuG-CSF, включающий конъюгацию r-metHuG-CSF с ПЭГ-альдегидом по свободной аминогруппе в N-конце r-metHuG-CSF в буферном растворе для пегилирования, включающем полиол формулы CHO, где n равен 3-6, или углевод, или его производное, в присутствии восстановителя.2. Способ по п.1, включающий конъюгацию r-metHuG-CSF с ПЭГ-альдегидом по свободной аминогруппе в N-конце r-metHuG-CSF в присутствии восстановителя в буферном растворе для пегилирования, включающем полиол формулы CHO, где n равен 3-6, или углевод, или его производное, где концентрация указанного полиола или углевода, или его производного находится в интервале 0,1%-10%, мас./мас..3. Способ по п.1, где полиол выбирают из группы, состоящей из глицерина, сорбита, маннита, эритрита, рибита и ксилита.4. Способ по п.3, где полиол представляет собой сорбит.5. Способ по п.1, где углевод представляет собой моносахарид, выбранный из группы, состоящей из глюкозы, фруктозы, маннозы и галактозы, или дисахарид, выбранный из группы, состоящей из лактозы, мальтозы, трегалозы и сахарозы.6. Способ по п.5, где углевод представляет собой сахарозу.7. Способ по п.1, где ПЭГ-альдегид представляет собой метоксиполиэтиленгликольпропиональдегид в 20 кД.8. Способ по п.1, где восстановитель выбирают из группы, состоящей из борогидрида натрия, цианоборогидрида натрия, диметиламинборана, триметиламинборана, триацетоксиборогидрида натрия и пиридинборана.9. Способ по п.8, где восстановитель представляет собой цианоборогидрид натрия.10. Способ по п.1, где выход пегилированного продукта монопегилированного r-metHuG-CSF составляет по меньшей мере 80%.11. Способ по п.1, где выход пегилированного продукта соста�

Claims (37)

1. Способ улучшения выхода реакции пегилирования r-metHuG-CSF, включающий конъюгацию r-metHuG-CSF с ПЭГ-альдегидом по свободной аминогруппе в N-конце r-metHuG-CSF в буферном растворе для пегилирования, включающем полиол формулы CnH2n+2On, где n равен 3-6, или углевод, или его производное, в присутствии восстановителя.
2. Способ по п.1, включающий конъюгацию r-metHuG-CSF с ПЭГ-альдегидом по свободной аминогруппе в N-конце r-metHuG-CSF в присутствии восстановителя в буферном растворе для пегилирования, включающем полиол формулы CnH2n+2On, где n равен 3-6, или углевод, или его производное, где концентрация указанного полиола или углевода, или его производного находится в интервале 0,1%-10%, мас./мас..
3. Способ по п.1, где полиол выбирают из группы, состоящей из глицерина, сорбита, маннита, эритрита, рибита и ксилита.
4. Способ по п.3, где полиол представляет собой сорбит.
5. Способ по п.1, где углевод представляет собой моносахарид, выбранный из группы, состоящей из глюкозы, фруктозы, маннозы и галактозы, или дисахарид, выбранный из группы, состоящей из лактозы, мальтозы, трегалозы и сахарозы.
6. Способ по п.5, где углевод представляет собой сахарозу.
7. Способ по п.1, где ПЭГ-альдегид представляет собой метоксиполиэтиленгликольпропиональдегид в 20 кД.
8. Способ по п.1, где восстановитель выбирают из группы, состоящей из борогидрида натрия, цианоборогидрида натрия, диметиламинборана, триметиламинборана, триацетоксиборогидрида натрия и пиридинборана.
9. Способ по п.8, где восстановитель представляет собой цианоборогидрид натрия.
10. Способ по п.1, где выход пегилированного продукта монопегилированного r-metHuG-CSF составляет по меньшей мере 80%.
11. Способ по п.1, где выход пегилированного продукта составляет по меньшей мере 95%.
12. Способ по п.1, где выход пегилированного продукта составляет по меньшей мере 98%.
13. Способ по п.11, где непрореагировавший r-metHuG-CSF составляет не более 5%.
14. Способ по п.12, где непрореагировавший r-metHuG-CSF составляет не более 2%.
15. Способ по п.1, где пегилированный r-metHuG-CSF далее подвергают ионообменной хроматографии и монопегилированный r-metHuG-CSF элюируют с линейным градиентом 0-500 мМ соли.
16. Способ по п.1, где чистота по эксклюзионной хроматографии элюированнного и собранного монопегилированного r-metHuG-CSF составляет ≥99%.
17. Способ по п.1, где буфер для пегилирования выбирают из группы, состоящей из ацетата, цитрата, глутамата, сорбата, сукцината, 2-(N-морфолино)этансульфоновой кислоты (MES) или фосфата, с молярностью 0,5 мМ - 100 мМ.
18. Способ по п.17, где буфер для пегилирования представляет собой 100 мМ фосфатный буфер, рН 5,0 с 5% сорбита или 5% сахарозы.
19. Способ получения ПЭГ-r-metHuG-CSF в масштабе в граммовых количествах, включающий конъюгацию r-metHuG-CSF с ПЭГ-альдегидом по свободной аминогруппе в N-конце r-metHuG-CSF в присутствии восстановителя в буферном растворе для хранения, включающем полиол формулы CnH2n+2On, где n равен 3-6, или углевод, или его производное, причем усовершенствованием является конъюгация r-metHuG-CSF с ПЭГ-альдегидом в буферном растворе для хранения, имеющем молярность в интервале 10 мМ - 50 мМ, включающем полиол формулы CnH2n+2On, где n равен 3-6, или углевод или его производное, с устранением стадии замены буфера на буфер для пегилирования.
20. Способ по п.19, где буфер для хранения выбирают из группы, состоящей из ацетата, цитрата, глутамата, сорбата, сукцината, 2-(N-морфолино)этансульфоновой кислоты (MES) или фосфата.
21. Способ по п.20, где буфер для хранения представляет собой 20 мМ ацетатный буфер, рН 5,0 с 5% сорбита.
22. Способ по п.19, где выход пегилированного продукта монопегилированного r-metHuG-CSF составляет по меньшей мере 80%.
23. Способ по п.19, где выход пегилированного продукта составляет по меньшей мере 95%.
24. Способ по п.19, где выход пегилированного продукта составляет по меньшей мере 98%.
25. Способ по п.23, где непрореагировавший r-metHuG-CSF составляет не более 5%.
26. Способ по п.24, где непрореагировавший r-metHuG-CSF составляет не более 2%.
27. Способ получения ПЭГ-r-metHuG-CSF в масштабе в граммовых количествах, включающий конъюгацию r-metHuG-CSF с ПЭГ-альдегидом по свободной аминогруппе в N-конце r-metHuG-CSF в присутствии восстановителя в буферном растворе для хранения, имеющем молярность в интервале 10 мМ - 50 мМ, включающем полиол формулы CnH2n+2On, где n равен 3-6, или углевод, или его производное, отличающийся тем, что ПЭГ-альдегид добавляют в стехиометрическом молярном отношении 2,5 относительно r-metHuG-CSF.
28. Способ по п.27, где буфер для хранения выбирают из группы, состоящей из ацетата, цитрата, глутамата, сорбата, сукцината, 2-(N-морфолино)этансульфоновой кислоты (MES) или фосфата.
29. Способ по п.28, где буфер для хранения представляет собой 20 мМ ацетатный буфер, рН 5,0 с 5% сорбита.
30. Способ по п.27, где выход пегилированного продукта монопегилированного r-metHuG-CSF составляет по меньшей мере 80%.
31. Способ по п.27, где выход пегилированного продукта составляет по меньшей мере 95%.
32. Способ по п.27, где выход пегилированного продукта составляет по меньшей мере 98%.
33. Способ по п.31, где непрореагировавший r-metHuG-CSF составляет не более 5%.
34. Способ по п.32, где непрореагировавший r-metHuG-CSF составляет не более 2%.
35. Способ получения ПЭГ-r-metHuG-CSF в масштабе в граммовых количествах, включающий конъюгацию r-metHuG-CSF с ПЭГ-альдегидом по свободной аминогруппе в N-конце в буферном растворе для хранения, включающем полиол формулы CnH2n+2On, где n равен 3-6, или углевод, или его производное, выделение монопегилированного r-metHuG-CSF с использованием ионообменной хроматографии и элюирование, и концентрирование собранного монопегилированного r-metHuG-CSF против буфера для хранения, имеющего молярность в интервале 10 мМ - 50 мМ, состоящего, по существу, из полиола формулы CnH2n+2On, где n равен 3-6, или углевода, или его производного и неионогенного поверхностно-активного вещества, отличающийся тем, что чистота концентрированного монопегилированного r-metHuG-CSF составляет ≥99%.
36. Способ по п.35, где неионогенное поверхностно-активное вещество представляет собой полиоксиэтиленмоноолеат сорбитана.
37. Способ по п.35, где буфер для хранения представляет собой 10 мМ раствор ацетата натрия, рН 4,0 с 5% сорбита и 0,0033% полисорбата 20.
RU2011120170/04A 2008-10-20 2009-05-04 Усовершенствованный способ пегилирования белков RU2472806C1 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
IN2261/MUM/2008 2008-10-20
IN2261MU2008 2008-10-20
PCT/IN2009/000262 WO2010089756A2 (en) 2008-10-20 2009-05-04 An improved process for pegylation of proteins

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2011120170A true RU2011120170A (ru) 2012-11-27
RU2472806C1 RU2472806C1 (ru) 2013-01-20

Family

ID=42542457

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2011120170/04A RU2472806C1 (ru) 2008-10-20 2009-05-04 Усовершенствованный способ пегилирования белков

Country Status (7)

Country Link
US (1) US8586710B2 (ru)
EP (1) EP2337794B1 (ru)
BR (1) BRPI0919827B8 (ru)
CA (1) CA2741209C (ru)
MX (1) MX2011004195A (ru)
RU (1) RU2472806C1 (ru)
WO (1) WO2010089756A2 (ru)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014176309A1 (en) 2013-04-23 2014-10-30 Nizyme, Inc. Methods and compositions for treating diseases
US20200237923A1 (en) * 2015-10-14 2020-07-30 The Johns Hopkins University Protein bioconjugation method
USD849464S1 (en) 2017-09-19 2019-05-28 Whirlpool Corporation Coffee maker
WO2020140021A2 (en) * 2018-12-28 2020-07-02 Coherus Biosciences, Inc. Process for producing, isolating, and purifying modified recombinant proteins

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1990006952A1 (en) * 1988-12-22 1990-06-28 Kirin-Amgen, Inc. Chemically modified granulocyte colony stimulating factor
US5824784A (en) * 1994-10-12 1998-10-20 Amgen Inc. N-terminally chemically modified protein compositions and methods
JP2004510751A (ja) 2000-10-05 2004-04-08 アレス　トレーディング　ソシエテ　アノニム 位置選択的液相ペグ化
EP1835938B1 (en) * 2004-12-27 2013-08-07 Baxter International Inc. Polymer-von willebrand factor-conjugates
EP2630972B1 (en) * 2006-07-25 2017-08-30 Lipoxen Technologies Limited N-terminal polysialylation
WO2008051383A2 (en) * 2006-10-19 2008-05-02 Amgen Inc. Use of alcohol co-solvents to improve pegylation reaction yields
WO2008055972A2 (en) * 2006-11-09 2008-05-15 Novo Nordisk A/S N-terminal pegylated prolactin receptor molecules

Also Published As

Publication number Publication date
RU2472806C1 (ru) 2013-01-20
US20110196134A1 (en) 2011-08-11
BRPI0919827B8 (pt) 2021-05-25
BRPI0919827B1 (pt) 2020-04-07
WO2010089756A3 (en) 2010-12-16
US8586710B2 (en) 2013-11-19
WO2010089756A2 (en) 2010-08-12
EP2337794A2 (en) 2011-06-29
EP2337794B1 (en) 2013-07-31
MX2011004195A (es) 2011-09-27
BRPI0919827A8 (pt) 2018-04-17
BRPI0919827A2 (pt) 2016-02-10
CA2741209C (en) 2016-12-20
CA2741209A1 (en) 2010-08-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20220133898A1 (en) Derivatisation of Insulin with Polysaccharides
RU2011120170A (ru) Усовершенствованный способ пегилирования белков
AU694919B2 (en) Conjugation-stabilized polypeptide compositions
CA2637687C (en) Arginine deiminase conjugate for the treatment of tumors
JP2009544681A5 (ru)
US20180369270A1 (en) Heparosan-polypeptide and heparosan-polynucleotide drug conjugates and methods of making and using same
JP2009034028A (ja) β−グルコシダーゼ及びその製造方法並びにそれを利用したβ型配糖体の製造方法
JPH04504117A (ja) グリコシル化インシュリン
Piszkiewicz et al. Glycoside hydrolysis. III. Intramolecular acetamido group participation in the specific acid catalyzed hydrolysis of methyl 2-acetamido-2-deoxy-. beta.-D-glucopyranoside
JP6771756B2 (ja) β−ガラクトシダーゼ
KR20130105174A (ko) 고온성 베타-글루코시다아제를 이용한 희귀 진세노사이드 컴파운드 엠씨, 컴파운드 와이 및 아글리콘 프로토파낙사디올 생산
US20200190130A1 (en) Sialidase inhibitors and preparation thereof
KR102156395B1 (ko) 아스로박터 속 미생물을 이용하여 과당전이 스테비올 배당체를 제조하는 방법
KR101926180B1 (ko) 지소화성 고분지 알파 리밋 덱스트린 및 그 제조방법
KR101408985B1 (ko) 페니실리움 아큘레툼 유래 베타-글루코시다아제를 이용한 다양한 희귀 진세노사이드 제조방법
KR101897765B1 (ko) 신규의 1-데옥시노지리마이신 유도체 및 이의 혈당강하제로서의 용도
Tanaka et al. Acid hydrolysis kinetics of soil carbohydrates
US9102970B2 (en) Process for production of recombinant human growth hormone using growth media with added trace elements from E. coli cells
CN115746081A (zh) 一种多肽衍生物及其制备方法
CN102171361B (zh) 利用含有硼葡萄糖酸钙络合物的培养基生产胸膜炎肺炎放线杆菌毒素ApxI的方法
KR20020029138A (ko) 서머스 칼도필러스 지케이24 균주 유래 재조합 효소 및 이를 이용한 진세노사이드 알디의 제조방법
US20120231448A1 (en) Low cell toxicity antibiotic hygromycin b

Legal Events

Date Code Title Description
PD4A Correction of name of patent owner