RU2010107271A

RU2010107271A - Оптимизированный способ очистки рекомбинантного белка фактора роста

Info

Publication number: RU2010107271A
Application number: RU2010107271/10A
Authority: RU
Inventors: Уте ЭРИНГЕР (DE); Уте ЭРИНГЕР; Эва КОЛЬШТРУНГ (DE); Эва КОЛЬШТРУНГ
Original assignee: Биофарм Гезелльшафт Цур Биотехнологишен Энтвиклунг Фон Фармака Мбх (De); Биофарм Гезелльшафт Цур Биотехнологишен Энтвиклунг Фон Фармака Мбх
Priority date: 2007-07-27
Filing date: 2008-06-20
Publication date: 2011-09-10
Also published as: EP2173767B1; CN101990546A; RU2491290C2; EP2173767A1; CA2694453C; PT2173767E; HK1154031A1; EP2019117A1; CN101990546B; AU2008281090B2; WO2009015736A1; CA2694453A1; JP2010534690A; AU2008281090A1; US8187837B2; US20110160441A1

Abstract

1. Способ получения очищенного рекомбинантного GDF-5-подобного белка, который включает этапы разрушения бактериальных клеток и солюбилизацию телец включения для получения солюбилизированного мономера GDF-5-подобного белка, в котором ! а) бактериальные клетки разрушают с помощью гомогенизатора высокого давления при давлении разрушения между 800 и 900 бар; и/или ! б) выделенные тельца включения обрабатывают денатурирующим буфером для солюбилизации, содержащим L-аргинин. ! 2. Способ по п.1, в котором буфер для солюбилизации содержит 4-8 М мочевину и 400-500 мМ аргинин, предпочтительно 6 М мочевину и 500 мМ аргинин. ! 3. Способ по п.1, в котором буфер для солюбилизации содержит хелатор в концентрации от 5 до 100 мМ. ! 4. Способ по п.1, в котором буфер для солюбилизации имеет рН между 9,0 и 11,0. ! 5. Способ по п.1, дополнительно включающий удаление высокомолекулярных примесей непосредственно после этапа солюбилизации телец включения путем применения одного или более способов, выбранных из группы, состоящей из центрифугирования, объемной фильтрации и стерилизующей фильтрации. ! 6. Способ по п.1, дополнительно включающий удаление с помощью диафильтрации упомянутого L-аргинина из раствора, содержащего солюбилизированный белок телец включения. ! 7. Способ по п.1, в котором штамм-хозяин, экспрессирующий GDF-5-подобный белок в тельцах включения, является штаммом Е.coli, предпочтительно выбранным из штаммов Е.coli D1210 и Е.coli W3110. ! 8. GDF-5-подобный белок, полученный способом по любому из пп.4-7. ! 9. Белок по п.8, который содержит аминокислоты с 1 по 119 или с 1 по 120 последовательности SEQ ID NO: 3 (зрелый человеческий GDF-5). ! 10. Белок по п.8, который содержит аминокислоты с 400 по 501

Claims

1. Способ получения очищенного рекомбинантного GDF-5-подобного белка, который включает этапы разрушения бактериальных клеток и солюбилизацию телец включения для получения солюбилизированного мономера GDF-5-подобного белка, в котором

а) бактериальные клетки разрушают с помощью гомогенизатора высокого давления при давлении разрушения между 800 и 900 бар; и/или

б) выделенные тельца включения обрабатывают денатурирующим буфером для солюбилизации, содержащим L-аргинин.

2. Способ по п.1, в котором буфер для солюбилизации содержит 4-8 М мочевину и 400-500 мМ аргинин, предпочтительно 6 М мочевину и 500 мМ аргинин.

3. Способ по п.1, в котором буфер для солюбилизации содержит хелатор в концентрации от 5 до 100 мМ.

4. Способ по п.1, в котором буфер для солюбилизации имеет рН между 9,0 и 11,0.

5. Способ по п.1, дополнительно включающий удаление высокомолекулярных примесей непосредственно после этапа солюбилизации телец включения путем применения одного или более способов, выбранных из группы, состоящей из центрифугирования, объемной фильтрации и стерилизующей фильтрации.

6. Способ по п.1, дополнительно включающий удаление с помощью диафильтрации упомянутого L-аргинина из раствора, содержащего солюбилизированный белок телец включения.

7. Способ по п.1, в котором штамм-хозяин, экспрессирующий GDF-5-подобный белок в тельцах включения, является штаммом Е.coli, предпочтительно выбранным из штаммов Е.coli D1210 и Е.coli W3110.

8. GDF-5-подобный белок, полученный способом по любому из пп.4-7.

9. Белок по п.8, который содержит аминокислоты с 1 по 119 или с 1 по 120 последовательности SEQ ID NO: 3 (зрелый человеческий GDF-5).

10. Белок по п.8, который содержит аминокислоты с 400 по 501 последовательности SEQ ID NO: 1 (домен цистинового узла человеческого GDF-5).

11. Белок по п.8, который содержит аминокислоты с 1 по 119 и с 1 по 120 последовательности SEQ ID NO: 4 (зрелый мономерный человеческий GDF-5).

12. Применение раствора, содержащего мочевину и L-аргинин, для солюбилизации бактериальных телец включения для получения содержащегося в них мономера GDF-5-подобного белка.