RU2010100910A - Способ получения инсулина (варианты) - Google Patents
Способ получения инсулина (варианты) Download PDFInfo
- Publication number
- RU2010100910A RU2010100910A RU2010100910/10A RU2010100910A RU2010100910A RU 2010100910 A RU2010100910 A RU 2010100910A RU 2010100910/10 A RU2010100910/10 A RU 2010100910/10A RU 2010100910 A RU2010100910 A RU 2010100910A RU 2010100910 A RU2010100910 A RU 2010100910A
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- insulin
- modified
- precursor
- insulin precursor
- mammal
- Prior art date
Links
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract 147
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 title claims abstract 57
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 title claims abstract 57
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 title claims abstract 57
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 claims abstract 64
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract 44
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims abstract 24
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 claims abstract 20
- 239000008267 milk Substances 0.000 claims abstract 20
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 claims abstract 20
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 claims abstract 16
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 claims abstract 11
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims abstract 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract 8
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 claims abstract 6
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims abstract 5
- 102000011632 Caseins Human genes 0.000 claims abstract 4
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 claims abstract 4
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 claims abstract 4
- 235000021247 β-casein Nutrition 0.000 claims abstract 4
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims abstract 3
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 claims abstract 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 claims abstract 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims abstract 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 claims abstract 2
- 239000007943 implant Substances 0.000 claims abstract 2
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 claims abstract 2
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 claims abstract 2
- PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N insulin (human) Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N 0.000 claims 15
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims 11
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 claims 11
- 101000976075 Homo sapiens Insulin Proteins 0.000 claims 9
- 241000283707 Capra Species 0.000 claims 8
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 claims 8
- 239000000463 material Substances 0.000 claims 8
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims 7
- 241000894007 species Species 0.000 claims 7
- 101000993774 Ovis aries Insulin Proteins 0.000 claims 6
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 claims 5
- VOUAQYXWVJDEQY-QENPJCQMSA-N 33017-11-7 Chemical class OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N1[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O)CCC1 VOUAQYXWVJDEQY-QENPJCQMSA-N 0.000 claims 3
- 108010005991 Pork Regular Insulin Proteins 0.000 claims 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims 3
- 241001494479 Pecora Species 0.000 claims 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 claims 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims 2
- FJVAQLJNTSUQPY-CIUDSAMLSA-N Ala-Ala-Lys Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN FJVAQLJNTSUQPY-CIUDSAMLSA-N 0.000 claims 1
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 102100029727 Enteropeptidase Human genes 0.000 claims 1
- 108010013369 Enteropeptidase Proteins 0.000 claims 1
- 208000013016 Hypoglycemia Diseases 0.000 claims 1
- 102000004407 Lactalbumin Human genes 0.000 claims 1
- 108090000942 Lactalbumin Proteins 0.000 claims 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 claims 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 claims 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 claims 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 claims 1
- 230000002218 hypoglycaemic effect Effects 0.000 claims 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 claims 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims 1
- 210000004216 mammary stem cell Anatomy 0.000 claims 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 claims 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 claims 1
- 235000021241 α-lactalbumin Nutrition 0.000 claims 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 abstract 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 abstract 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; CARE OF BIRDS, FISHES, INSECTS; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New breeds of animals
- A01K67/027—New breeds of vertebrates
- A01K67/0275—Genetically modified vertebrates, e.g. transgenic
- A01K67/0278—Humanized animals, e.g. knockin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/62—Insulins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/8509—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells for producing genetically modified animals, e.g. transgenic
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
- C12N15/873—Techniques for producing new embryos, e.g. nuclear transfer, manipulation of totipotent cells or production of chimeric embryos
- C12N15/877—Techniques for producing new mammalian cloned embryos
- C12N15/8771—Bovine embryos
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; CARE OF BIRDS, FISHES, INSECTS; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2207/00—Modified animals
- A01K2207/15—Humanized animals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; CARE OF BIRDS, FISHES, INSECTS; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2217/00—Genetically modified animals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; CARE OF BIRDS, FISHES, INSECTS; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2227/00—Animals characterised by species
- A01K2227/10—Mammal
- A01K2227/101—Bovine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; CARE OF BIRDS, FISHES, INSECTS; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2267/00—Animals characterised by purpose
- A01K2267/01—Animal expressing industrially exogenous proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
- C12N2830/008—Vector systems having a special element relevant for transcription cell type or tissue specific enhancer/promoter combination
Abstract
1. Способ получения инсулина, включающий создание отличного от человека трансгенного млекопитающего, которое образует в молоке модифицированный предшественник инсулина, получение молока от указанного млекопитающего, очистку модифицированного предшественника инсулина из молока, дающую в результате чистый модифицированный предшественник инсулина, превращение указанного предшественника инсулина в инсулин и очистку инсулина. !2. Способ по п.1, в котором отличное от человека трансгенное млекопитающее создают клонированием последовательности нуклеиновой кислоты, которая кодирует модифицированный предшественник инсулина, в плазмиду, посредством которого последовательность функционально связывают с промотором, который будет направлять экспрессию последовательности в клетках молочной железы с получением в результате экспрессирующей плазмиды, производят трансфекцию соматических клеток экспрессирующей плазмидой с инкорпорированием плазмиды в геном соматических клеток с получением в результате трансгенных соматических клеток, энуклеируют зрелую яйцеклетку с получением яйцеклетки с удаленным ядром, проводят слияние одной из соматических клеток с указанной яйцеклеткой, приводящее к образованию одноклеточного эмбриона, имплантируют эмбрион в матку млекопитающего-реципиента и производят мониторирование беременности до рождения трансгенного млекопитающего. ! 3. Способ по п.2, в котором промотор представляет собой β-казеиновый промотор, а инсулин и модифицированный предшественник инсулина представляют собой инсулин млекопитающего и модифицированный предшественник инсулина млекопитающего соотве�
Claims (42)
1. Способ получения инсулина, включающий создание отличного от человека трансгенного млекопитающего, которое образует в молоке модифицированный предшественник инсулина, получение молока от указанного млекопитающего, очистку модифицированного предшественника инсулина из молока, дающую в результате чистый модифицированный предшественник инсулина, превращение указанного предшественника инсулина в инсулин и очистку инсулина.
2. Способ по п.1, в котором отличное от человека трансгенное млекопитающее создают клонированием последовательности нуклеиновой кислоты, которая кодирует модифицированный предшественник инсулина, в плазмиду, посредством которого последовательность функционально связывают с промотором, который будет направлять экспрессию последовательности в клетках молочной железы с получением в результате экспрессирующей плазмиды, производят трансфекцию соматических клеток экспрессирующей плазмидой с инкорпорированием плазмиды в геном соматических клеток с получением в результате трансгенных соматических клеток, энуклеируют зрелую яйцеклетку с получением яйцеклетки с удаленным ядром, проводят слияние одной из соматических клеток с указанной яйцеклеткой, приводящее к образованию одноклеточного эмбриона, имплантируют эмбрион в матку млекопитающего-реципиента и производят мониторирование беременности до рождения трансгенного млекопитающего.
3. Способ по п.2, в котором промотор представляет собой β-казеиновый промотор, а инсулин и модифицированный предшественник инсулина представляют собой инсулин млекопитающего и модифицированный предшественник инсулина млекопитающего соответственно.
4. Способ по п.3, в котором инсулин млекопитающего и модифицированный предшественник инсулина млекопитающего представляют собой соответственно человеческий инсулин и модифицированный предшественник человеческого инсулина, инсулин крупного рогатого скота и модифицированный предшественник инсулина крупного рогатого скота, свиной инсулин и модифицированный предшественник свиного инсулина, овечий инсулин и модифицированный предшественник овечьего инсулина, козий инсулин и модифицированный предшественник козьего инсулина или инсулин грызуна и модифицированный предшественник инсулина грызуна.
5. Способ по п.4, в котором инсулин млекопитающего и модифицированный предшественник инсулина млекопитающего представляют собой человеческий инсулин и модифицированный предшественник человеческого инсулина.
6. Способ по п.2, в котором млекопитающее представляет собой крупный рогатый скот, образующий в молоке модифицированный предшественник человеческого инсулина, геном которой включает интегрированную плазмиду, включающую последовательность, кодирующую модифицированный предшественник человеческого инсулина и β-казеиновый промотор, который направляет экспрессию последовательности в клетках молочной железы указанного млекопитающего.
7. Способ по п.2, в котором млекопитающее представляет собой крупный рогатый скот, образующий в молоке слитый белок, содержащий фрагмент α-лактальбумина, сайт расщепления энтерокиназы и модифицированный предшественник человеческого инсулина, геном которого включает интегрированную плазмиду, причем плазмида содержит последовательность, кодирующую слитый белок и β-казеиновый промотор, который управляет экспрессией последовательности в клетках молочной железы указанного млекопитающего.
8. Способ по п.2, в котором соматические клетки представляют собой фибробласты.
9. Способ по п.2, в котором трансгенные соматические клетки получают путем выделения у самки, трансгенной по образованию в своем молоке модифицированного предшественника инсулина.
10. Способ по п.9, в котором трансгенные соматические клетки представляют собой фибробласты.
11. Способ по любому из пп.5-7, в котором экспрессирующая плазмида дополнительно включает ген устойчивости к неомицину.
12. Способ по п.11, в котором экспрессирующая плазмида представляет собой pβmhuIP.
13. Способ по п.11, в котором экспрессирующая плазмида представляет собой pNJK IP.
14. Способ по п.11, в котором экспрессирующая плазмида представляет собой pβKLE IP.
15. Способ по любому из пп.1, 2, 9, в котором млекопитающее представляет собой виды крупного рогатого скота, виды свиней, виды овец, виды коз или виды грызунов.
16. Способ по п.15, в котором млекопитающее принадлежит к видам крупного рогатого скота.
17. Способ по любому из пп.1, 2, 9, в котором инсулин и модифицированный предшественник инсулина представляют собой, соответственно, инсулин млекопитающего и модифицированный предшественник инсулина млекопитающего.
18. Способ по п.17, в котором инсулин млекопитающего и модифицированный предшественник инсулина млекопитающего представляют собой, соответственно, человеческий инсулин и модифицированный предшественник человеческого инсулина, инсулин крупного рогатого скота и модифицированный предшественник инсулина крупного рогатого скота, свиной инсулин и модифицированный предшественник свиного инсулина, овечий инсулин и модифицированный предшественник овечьего инсулина, козий инсулин и модифицированный предшественник козьего инсулина или инсулин грызунов и модифицированный предшественник инсулина грызунов.
19. Способ по п.18, в котором инсулин млекопитающего и модифицированный предшественник инсулина млекопитающего представляют собой, соответственно, человеческий инсулин и модифицированный предшественник человеческого инсулина.
20. Способ по любому из пп.1, 2, 9, в котором модифицированный предшественник инсулина не вызывает гипогликемию у отличного от человека трансгенного млекопитающего.
21. Способ по п.20, в котором модифицированный предшественник инсулина включает модифицированный С-пептид.
22. Способ по п.21, в котором модифицированный С-пептид включает аминокислоты, которые обычно не обнаруживают в природных предшественниках инсулина.
23. Способ по п.22, в котором модифицированный С-пептид включает следующие три аминокислоты: Ala-Ala-Lys.
24. Способ по п.21, в котором модифицированный предшественник инсулина дополнительно включает модифицированную В-цепь.
25. Способ по п.24, в котором модифицированная В-цепь включает все аминокислоты природной В-цепи кроме С-концевой аминокислоты.
26. Способ по пп.1, 2, 9, в котором последовательность, кодирующая модифицированный предшественник инсулина, функционально связанная с промотором, направляющим экспрессию последовательности нуклеиновой кислоты в клетках молочной железы, обнаруживают в соматических клетках и половых клетках млекопитающего.
27. Способ по п.1, в котором очистка модифицированного предшественника инсулина из молока включает очистку молока отличного от человека трансгенного млекопитающего и хроматографию очищенного молока с получением в результате очищенного модифицированного предшественника инсулина.
28. Способ по п.1, в котором превращение модифицированного предшественника инсулина в инсулин и очистка инсулина включает ферментное расщепление и транспептидацию модифицированного предшественника инсулина с получением транспептидированного материала и хроматографию расщепленного транспептидированного материала с получением чистого инсулина.
29. Способ по п.1, в котором проводят очистку модифицированного предшественника инсулина из молока отличного от человека трансгенного млекопитающего, которое образует в молоке модифицированный предшественник инсулина с получением в результате очищенного молока и производят катионообменную хроматографию очищенного молока и дальнейшую обращенно-фазовую хроматографию с получением в результате чистого модифицированного предшественника инсулина.
30. Способ по любому из пп.27-29, в котором хроматография представляет собой ионообменную хроматографию, такую как катионобменную или обращенно-фазовую хроматографию.
31. Способ по п.30, в котором хроматография является многостадийной.
32. Способ по п.28, в котором ферментное расщепление представляет собой трипсинолизис.
33. Способ по любому из пп.27-29, в котором хроматография представляет собой обращенно-фазовую хроматографию.
34. Способ по п.31, в котором проводят три стадии хроматографии.
35. Способ по п.34, в котором стадии хроматографии включают использование матриц с обращенной фазой.
36. Способ по п.35, в котором матрицы с обращенной фазой представляют собой С4 или С18 матрицы с обращенной фазой.
37. Способ получения инсулина, включающий создание отличного от человека трансгенного млекопитающего, которое образует в молоке модифицированный предшественник инсулина, получение молока от указанного млекопитающего, очистку молока, обработку очищенного молока катионообменной хроматографией с получением продукта катионообменной хромотографии, обращенно-фазовую хроматографию продукта катионообменной хроматографии с получением в результате чистого модифицированного предшественника инсулина, трипсинолизис и транспептидацию чистого модифицированного предшественника инсулина с получением трипсинизированного и транспептидированного материала, первую обращенно-фазовую хроматографию трипсинизированного и транспептидированного материала с получением первого обращенно-фазовой хроматографией материала, вторую обращенно-фазовую хроматографию первого обращенно-фазовой хроматографией материала с получением второго обращенно-фазовой хроматографией материала и третью обращенно-фазовую хроматографию второго обращенно-фазовой хроматографией материала с получением в результате чистого инсулина.
38. Способ по п.37, в котором инсулин и модифицированный предшественник инсулина являются соответственно инсулином млекопитающего и модифицированным предшественником инсулина млекопитающего.
39. Способ по п.38, в котором инсулин млекопитающего и модифицированный предшественник инсулина млекопитающего представляют собой, соответственно, человеческий инсулин и модифицированный предшественник человеческого инсулина, инсулин крупного рогатого скота и модифицированный предшественник инсулина крупного рогатого скота, свиной инсулин и модифицированный предшественник свиного инсулина, овечий инсулин и модифицированный предшественник овечьего инсулина, козий инсулин и модифицированный предшественник козьего инсулина или инсулин грызунов и модифицированный предшественник инсулина грызунов.
40. Способ по п.39, в котором инсулин млекопитающего и модифицированный предшественник инсулина млекопитающего являются соответственно человеческим инсулином и модифицированным предшественником человеческого инсулина.
41. Способ по п.40, в котором отличное от человека трансгенное млекопитающее представляет собой свинью, овцу, козу или грызуна.
42. Способ по п.40, в котором млекопитающее представляет собой вид крупного рогатого скота.
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US92909807P | 2007-06-13 | 2007-06-13 | |
| US92909507P | 2007-06-13 | 2007-06-13 | |
| US60/929,098 | 2007-06-13 | ||
| US60/929,095 | 2007-06-13 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2010100910A true RU2010100910A (ru) | 2011-07-20 |
Family
ID=40156522
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2010100910/10A RU2010100910A (ru) | 2007-06-13 | 2008-06-13 | Способ получения инсулина (варианты) |
| RU2010100911/10A RU2010100911A (ru) | 2007-06-13 | 2008-06-13 | Плазмида, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую модифицированный предшественник инсулина, и способ ее трансфекции в клетки млекопитающего, трансгенное млекопитающее, продуцирующее указанный предшественник, и способ его получения |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2010100911/10A RU2010100911A (ru) | 2007-06-13 | 2008-06-13 | Плазмида, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую модифицированный предшественник инсулина, и способ ее трансфекции в клетки млекопитающего, трансгенное млекопитающее, продуцирующее указанный предшественник, и способ его получения |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US20090228999A1 (ru) |
| EP (2) | EP2061896A1 (ru) |
| JP (2) | JP2010528677A (ru) |
| CN (2) | CN101755054A (ru) |
| AU (2) | AU2008266995A1 (ru) |
| BR (1) | BRPI0811390A2 (ru) |
| CA (2) | CA2690564A1 (ru) |
| CO (2) | CO6300796A2 (ru) |
| MX (2) | MX2009013371A (ru) |
| RU (2) | RU2010100910A (ru) |
| WO (2) | WO2008156668A1 (ru) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20120123089A1 (en) * | 2009-07-09 | 2012-05-17 | Biocon Limited | Preparative non-linear gradient based chromatographic method and purified products thereof |
| CN102816819B (zh) * | 2012-08-13 | 2014-10-29 | 山东阿华生物药业有限公司 | 提高人胰岛素前体融合蛋白酶切转换成b30缺苏氨酸人胰岛素产率的方法 |
| ES2755181T3 (es) | 2013-02-13 | 2020-04-21 | Lab Francais Du Fractionnement | Anticuerpos anti-TNF-alfa altamente galactosilados y usos de los mismos |
| WO2014140927A2 (en) * | 2013-02-13 | 2014-09-18 | Laboratoire Francais Du Fractionnement Et Des Biotechnologies | Proteins with modified glycosylation and methods of production thereof |
| WO2016080399A1 (ja) | 2014-11-20 | 2016-05-26 | 国立大学法人京都大学 | 哺乳動物の標的ゲノム領域にｄｎａをノックインする方法及び細胞 |
| CN105219774B (zh) * | 2015-10-10 | 2019-04-30 | 广西大学 | 猪胰岛素特异性表达启动子pip2及其应用 |
| CN117327681A (zh) * | 2022-12-31 | 2024-01-02 | 义翘神州(泰州)科技有限公司 | 促进哺乳动物细胞表达蛋白正确折叠的分子伴侣质粒及其应用 |
Family Cites Families (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4654324A (en) * | 1981-08-27 | 1987-03-31 | Eli Lilly And Company | Human proinsulin pharmaceutical formulations |
| US5322775A (en) * | 1986-06-30 | 1994-06-21 | Pharmaceutical Proteins Ltd. | Peptide production |
| US5633076A (en) * | 1989-12-01 | 1997-05-27 | Pharming Bv | Method of producing a transgenic bovine or transgenic bovine embryo |
| US5831141A (en) * | 1991-01-11 | 1998-11-03 | United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Expression of a heterologous polypeptide in mammary tissue of transgenic non-human mammals using a long whey acidic protein promoter |
| US6011197A (en) * | 1997-03-06 | 2000-01-04 | Infigen, Inc. | Method of cloning bovines using reprogrammed non-embryonic bovine cells |
| CN1058972C (zh) * | 1997-08-15 | 2000-11-29 | 中国农业大学 | 用动物乳房生产人的生长激素 |
| US6451527B1 (en) * | 1997-08-29 | 2002-09-17 | Selective Genetics, Inc. | Methods using genetic package display for selecting internalizing ligands for gene delivery |
| US20030005468A1 (en) * | 1998-06-19 | 2003-01-02 | Meade Harry M. | Methods and vectors for improving nucleic acid expression |
| AU4380599A (en) * | 1998-06-26 | 2000-01-17 | Ppl Therapeutics (Scotland) Limited | Methods for production of recombinant polypeptides |
| NZ518263A (en) * | 1999-10-14 | 2004-03-26 | Gtc Biotherapeutics Inc | Methods of producing a target molecule in a transgenic animal and purification of the target molecule |
| US7105314B2 (en) * | 2001-04-02 | 2006-09-12 | Novo Nordisk A/S | Method for making human insulin precursors |
| AU2004278747B2 (en) * | 2003-09-30 | 2011-04-28 | Sterrenbeld Biotechnologie North America, Inc. | A process for producing exogenous protein in the milk of transgenic mammals and a process for purifying proteins therefrom |
| CN101413003A (zh) * | 2003-09-30 | 2009-04-22 | 斯特林贝尔德生物技术北美公司 | 在转基因哺乳动物的奶中生产外源蛋白的方法以及从其中纯化蛋白的方法 |
-
2008
- 2008-06-13 EP EP08768440A patent/EP2061896A1/en not_active Withdrawn
- 2008-06-13 AU AU2008266995A patent/AU2008266995A1/en not_active Abandoned
- 2008-06-13 JP JP2010512195A patent/JP2010528677A/ja not_active Withdrawn
- 2008-06-13 MX MX2009013371A patent/MX2009013371A/es not_active Application Discontinuation
- 2008-06-13 CN CN200880022856A patent/CN101755054A/zh active Pending
- 2008-06-13 RU RU2010100910/10A patent/RU2010100910A/ru unknown
- 2008-06-13 WO PCT/US2008/007398 patent/WO2008156668A1/en active Application Filing
- 2008-06-13 BR BRPI0811390-4A2A patent/BRPI0811390A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2008-06-13 US US12/138,526 patent/US20090228999A1/en not_active Abandoned
- 2008-06-13 AU AU2008266993A patent/AU2008266993A1/en not_active Abandoned
- 2008-06-13 EP EP08768438A patent/EP2061895A1/en not_active Withdrawn
- 2008-06-13 RU RU2010100911/10A patent/RU2010100911A/ru unknown
- 2008-06-13 CA CA2690564A patent/CA2690564A1/en not_active Abandoned
- 2008-06-13 US US12/138,529 patent/US20090187999A1/en not_active Abandoned
- 2008-06-13 CN CN200880022998.8A patent/CN101802210A/zh active Pending
- 2008-06-13 CA CA2690565A patent/CA2690565A1/en not_active Abandoned
- 2008-06-13 MX MX2009013421A patent/MX2009013421A/es not_active Application Discontinuation
- 2008-06-13 WO PCT/US2008/007400 patent/WO2008156670A1/en active Application Filing
- 2008-06-13 JP JP2010512197A patent/JP2010528678A/ja not_active Withdrawn
-
2010
- 2010-01-13 CO CO10002779A patent/CO6300796A2/es not_active Application Discontinuation
- 2010-01-13 CO CO10002774A patent/CO6300794A2/es not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP2061896A1 (en) | 2009-05-27 |
| EP2061895A1 (en) | 2009-05-27 |
| MX2009013421A (es) | 2010-03-22 |
| RU2010100911A (ru) | 2011-07-20 |
| CA2690565A1 (en) | 2008-12-24 |
| CA2690564A1 (en) | 2008-12-24 |
| BRPI0811390A2 (pt) | 2014-12-30 |
| JP2010528678A (ja) | 2010-08-26 |
| MX2009013371A (es) | 2010-01-25 |
| US20090187999A1 (en) | 2009-07-23 |
| AU2008266995A1 (en) | 2008-12-24 |
| CN101802210A (zh) | 2010-08-11 |
| CN101755054A (zh) | 2010-06-23 |
| CO6300794A2 (es) | 2011-07-21 |
| WO2008156670A1 (en) | 2008-12-24 |
| US20090228999A1 (en) | 2009-09-10 |
| WO2008156668A1 (en) | 2008-12-24 |
| AU2008266993A1 (en) | 2008-12-24 |
| JP2010528677A (ja) | 2010-08-26 |
| CO6300796A2 (es) | 2011-07-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2010100910A (ru) | Способ получения инсулина (варианты) | |
| Bleck et al. | Transgenic alteration of sow milk to improve piglet growth and health | |
| WO1988010118A1 (en) | Expression of proteins in milk | |
| WO2005033274A3 (en) | A process for producing exogenous protein in the milk of trangenic mammals and a process for purifying proteins therefrom | |
| US6713662B1 (en) | Production of collagen in the milk of transgenic mammals | |
| JP3789928B2 (ja) | 成長ホルモンアンタゴニスト | |
| EP1661456B1 (en) | Method of constructing nuclear-transplanted egg, parthenogenetic embryo and parthenogenetic mammal | |
| JP5078074B2 (ja) | 核移植卵、単為発生胚および単為発生非ヒト哺乳動物の作出方法 | |
| CN1402781A (zh) | 克隆和转基因哺乳动物的生产方法 | |
| US20230234906A1 (en) | Use of 2-pentanone and specific receptor thereof in manufacture of products regulating cell functions | |
| US20070016969A1 (en) | Expression vector for hirudin and transformed cells and transgenic animals containing said vector | |
| KR20180134455A (ko) | 인간 mcp 및 인간 tbm 발현용 유전자 구조체 및 이를 포함하는 벡터 | |
| RU2006114685A (ru) | Способ продуцирования экзогенного белка в молоке трансгенных млекопитающих и способ очистки белков из молока | |
| Seong et al. | Generation of transgenic silkworms for production of erythropoietin in Bombyx mori | |
| Müller¹ et al. | LARGE TRANSGENIC ANIMALS-THEIR MAKING AND THEIR USE | |
| KR20050022416A (ko) | 사람 에리트로포이에틴을 생산하는 형질전환 복제돼지 및이의 생산 방법 | |
| CN101413003A (zh) | 在转基因哺乳动物的奶中生产外源蛋白的方法以及从其中纯化蛋白的方法 | |
| US7659443B2 (en) | Method of constructing nucleus-implanted egg, parthenogenetic embryo and parthenogenetic mammal | |
| Cavard et al. | Transgenic mouse models for the study of the skin |