RU2009137971A

RU2009137971A - Способ оптического просветления образцов биологических тканей

Info

Publication number: RU2009137971A
Application number: RU2009137971/05A
Authority: RU
Inventors: Ольга Игоревна Ефимова (RU); Ольга Игоревна Ефимова; Константин Владимирович Анохин (RU); Константин Владимирович Анохин
Priority date: 2009-10-14
Filing date: 2009-10-14
Publication date: 2011-04-20
Also published as: RU2429462C2

Abstract

1. Способ оптического просветления образцов биологической ткани, включающий фиксацию ткани в растворе формальдегида, дегидратацию в водных растворах спиртов, инкубацию образца ткани в гексане, отличающийся тем, что образец ткани дегидратируют в 2-бутоксиэтаноле, последовательно инкубируют в смеси метанол: диметилсульфоксид: 30% перекись водорода, взятых в соотношении 4:1:1, в течение 1-24 ч, затем в смеси хлороформ: метанол, взятых в соотношении 2-1:1, в течение 1 ч, а затем в гексане в течение 1 ч и в 2-бутоксиэтаноле в течение 24 ч, после чего погружают образец в состав ароматических углеводородов с коэффициентом преломления от 1,548 до 1,558 с последующей выдержкой от 1 до 48 ч. ! 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что для фиксации образца ткани используют погружение в свежеприготовленный раствор 1-5% параформальдегида в фосфатно-солевом буфере в течение 24-48 ч. ! 3. Способ по п.1, отличающийся тем, что ткань дегидратируют последовательно в несколько этапов в водных растворах 2-бутоксиэтанола с концентрациями, ступенчато повышающимися от 30 до 100% в течение 1-24 ч на каждом этапе. ! 4. Способ по п.1, отличающийся тем, что образец ткани хранят в 2-бутоксиэтаноле при комнатной температуре или при 4°С. ! 5. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве составов ароматических углеводородов используют ароматические углеводороды из группы: этил циннамат или смесь этил циннамата с бензиловым спиртом при их соотношении 2:1, или смесь этил циннамата с метил салицилатом при их соотношении 3:2, или смесь этил циннамата с ксилолом при их соотношении 6:1, или смесь бензил бензоата с бензиловым спиртом при их соотношении 2:1, или смесь метил салицилата: бензил бен

Claims

1. Способ оптического просветления образцов биологической ткани, включающий фиксацию ткани в растворе формальдегида, дегидратацию в водных растворах спиртов, инкубацию образца ткани в гексане, отличающийся тем, что образец ткани дегидратируют в 2-бутоксиэтаноле, последовательно инкубируют в смеси метанол: диметилсульфоксид: 30% перекись водорода, взятых в соотношении 4:1:1, в течение 1-24 ч, затем в смеси хлороформ: метанол, взятых в соотношении 2-1:1, в течение 1 ч, а затем в гексане в течение 1 ч и в 2-бутоксиэтаноле в течение 24 ч, после чего погружают образец в состав ароматических углеводородов с коэффициентом преломления от 1,548 до 1,558 с последующей выдержкой от 1 до 48 ч.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что для фиксации образца ткани используют погружение в свежеприготовленный раствор 1-5% параформальдегида в фосфатно-солевом буфере в течение 24-48 ч.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что ткань дегидратируют последовательно в несколько этапов в водных растворах 2-бутоксиэтанола с концентрациями, ступенчато повышающимися от 30 до 100% в течение 1-24 ч на каждом этапе.

4. Способ по п.1, отличающийся тем, что образец ткани хранят в 2-бутоксиэтаноле при комнатной температуре или при 4°С.

5. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве составов ароматических углеводородов используют ароматические углеводороды из группы: этил циннамат или смесь этил циннамата с бензиловым спиртом при их соотношении 2:1, или смесь этил циннамата с метил салицилатом при их соотношении 3:2, или смесь этил циннамата с ксилолом при их соотношении 6:1, или смесь бензил бензоата с бензиловым спиртом при их соотношении 2:1, или смесь метил салицилата: бензил бензоата при их соотношении 5:3.

6. Способ по п.1, отличающийся тем, что образец погружают в этил циннамат, нагретый до температуры 37-40°С.

7. Способ по п.1, отличающийся тем, что инкубацию просветляемых образцов толщиной от 100 до 500 мкм проводят в течение 1 ч.

8. Способ по п.1, отличающийся тем, что инкубацию просветляемых образцов толщиной от 0,5 до 1,5 см проводят в течение 24 ч.

9. Способ по п.1, отличающийся тем, что между этапами отбеливания в растворе Дента и инкубации в смеси хлороформ: метанол дополнительно проводят регидратацию образцов в серии спиртов с последовательно понижающейся концентрацией и окраску стандартными гистологическими методами whole mount (целиковых образцов) с последующей дегидратацией.

10. Способ по п.9, отличающийся тем, что ткань дегидратируют последовательно в несколько этапов в водных растворах 2-бутоксиэтанола с концентрациями, ступенчато повышающимся от 30 до 100% в течение 1-24 ч на каждом этапе.

11. Способ по п.1, отличающийся тем, что после каждого этапа инкубации образец ткани дополнительно отмывают в 2-бутоксиэтаноле в течение 1-24 ч.