RU2595849C1 - Способ выявления нервных структур в тканях - Google Patents
Способ выявления нервных структур в тканях Download PDFInfo
- Publication number
- RU2595849C1 RU2595849C1 RU2015124703/15A RU2015124703A RU2595849C1 RU 2595849 C1 RU2595849 C1 RU 2595849C1 RU 2015124703/15 A RU2015124703/15 A RU 2015124703/15A RU 2015124703 A RU2015124703 A RU 2015124703A RU 2595849 C1 RU2595849 C1 RU 2595849C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- solution
- minutes
- distilled water
- glucose solution
- vessels
- Prior art date
Links
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области медицины, а именно к способу выявления нервных структур в тканях. Сущность изобретения состоит в том, что исследуемый материал первоначально перфузируют через сосуды 5% раствором глюкозы с помещением на 10-15 мин в 1-2% раствор диметилсульфоксида на дистиллированной воде с дальнейшей промывкой сосудистого русла 5% раствором глюкозы, введением в сосуды 2% раствора Co(NO3)2 на 15-20 мин и промывкой 1-2 мин 5% раствором глюкозы, далее помещением для пропитывания в смесь из 10% Na2S и 70% этилового спирта на 1-8 ч, в зависимости от структуры и массы материала, с последующей промывкой в дистиллированной воде до исчезновения запаха сероводорода, фиксацией 3-е суток в 10% нейтральном формалине и доокрашиванием полученных гистологических срезов в 0,15% галлоцианине, причем исследуемые на микропрепарате нервные волокна, особенно безмякотные, - интенсивно черные на светлом фоне, а ядра клеток и их цитоплазма - слегка синие. Использование заявленного способа позволяет повысить эффективность выявления нервных структур в тканях.1 пр.
Description
Изобретение относится к области медицины, в частности стоматологии, и может быть использовано для выявления нервных структур в зубочелюстной системе на нейрохимическом уровне.
В распоряжении нейроморфологов имеется широкий выбор методик для выявления нервных структур в тканях. Использование рекомендуемых прописей и условий на практике часто не позволяет получить желаемого результата.
Наиболее часто в нейрогистологической практике применяется методика Е.И. Рассказовой [Рассказова Е.И. Методы импрегнации нейроплазмы разных периферических нервных волокон и окончаний / Е.И. Рассказова // Вопросы психиатрии. В кн. Научные работы института психиатрии. М., Медицина, - 1956. - С. 349-353].
Сущность проведения нейрогистологической реакции по Расказовой Е.И. заключается в следующем:
A) объект исследования фиксируют на 7-10 суток в 12% растворе нейтрального формалина;
Б) режут на замораживающем микротоме;
B) промывают в проточной воде 2 ч;
Г) промывают срезы в дистиллированной воде 2 ч;
Д) помещают срезы на 30 мин в 60° спирт, после чего промывают в двух порциях дистиллированной воды;
Е) помещают срезы на 1 ч в 20% раствор AgNO3 в термостате при t=37°. Затем промывают в течение 3-5 мин в дистиллированной воде;
Ж) проводят срезы в 1% растворе кислого формалина, приготовленного на водопроводной воде, затем просушивают срезы на фильтровальной бумаге;
З) помещают срезы на 2-3 мин в аммиачное серебро с последующей проводкой в 0,5% кислого формалина на водопроводной воде при комнатной температуре;
И) помещают срезы в аммиачную воду (1:1) на 3-5 мин;
К) проводят через спирты, заключают в бальзам классическим способом.
Способом Е.И. Рассказовой нервные элементы выявляются не всегда и это частично объясняется биохимической индивидуальностью органов и тканей в различные периоды онтогенетического развития.
По выявлению нервных структур в тканевых образованиях различных органов является способ Ю.Н. Майбороды [Способ выявления нервных волокон и сосудов микроциркуляторного русла / Майборода Ю.Н. авт. свид. №1171690 от 08.04.1985].
Способ осуществляется следующим образом:
A) кусочки органа размером 1,0-1,5 см3 фиксируют в течение 14 дней в 12% растворе нейтрального формалина (Ph=7,2-7,4), который сменяют 2-3 раза за весь период фиксации;
Б) после фиксации материал промывают сначала в проточной, а затем в дистиллированной воде - 2-3 ч соответственно;
B) приготавливают на замораживающем микротоме гистологические срезы в количестве 8-10, помещают на 10-15 мин в 1-5% раствор диметилсульфоксида на дистиллированной воде;
Г) из среды диметилсульфоксида, предварительно осушенные фильтровальной бумагой, переносят на 15-30 мин в 5% раствор AgNO3;
Д) срезы проводят через ряд ванночек с 0,5-1% раствором кислого формалина (Ph=6,0-6,3) на смеси отстоявшейся водопроводной и кипяченой воды в соотношении 1:2;
Е) переносят срезы на 1-2 мин в раствор аммиачного серебра, в котором аммиака должно быть на 1-2 капли больше с целью подавления окрашивания элементов стромы;
Ж) из аммиачного серебра срезы помещают в 0,25-0,5% раствора нейтрального формалина на водопроводной воде комнатной температуры до приобретения ими соломенного оттенка;
З) фиксацию окрашенных срезов осуществляют в аммиачной воде из расчета 1 часть 25% аммиачного спирта и 4 части дистиллированной воды в течение 1 ч. Затем срезы промывают в дистиллированной воде 12 ч со сменой воды 2-3 раза;
И) обезвоживание в спиртах, карбоксилоле, ксилоле, заключение в бальзам производится общеизвестным способом.
Этот способ весьма трудоемкий, не дает полной информации о топографии нервного аппарата - нервных окончаний и, особенно, нейронов ганглиев парасимпатического отдела вегетативной нервной системы, их связей и требует проведения дополнительной окраски стромы. Кроме того, применяя методики импрегнации на основе AgNO3, невозможно судить о биохимических процессах в изучаемых объектах.
Наиболее близким из способов выявления нервных элементов является метод с азотнокислым кобальтом по Де Фано [Пирс Э. Гистохимия. Теоретическая и прикладная. М. 1962; Лойд З., Госсрау Р., Шиблер Т. Гистохимия ферментов. Лабораторные методы. М., «Мир», - 1982].
Суть метода заключается в следующем:
а) кусочки толщиной 3-4 мм фиксируют в смеси следующего состава: Со(NO3)2 - 1 г, дистиллированной воды 100 см3, кислого формалина 15 см3. Продолжительность фиксации 6-8 ч для молодых и 12-24 ч для взрослых тканей. Комнатная температура;
б) фиксированный материал быстро ополаскивают и помещают в 1,5% раствор азотнокислого серебра (AgNO3), в темноте, при комнатной температуре на 24-48 ч, в зависимости от величины кусочков;
в) далее, после быстрого ополаскивания в дистиллированной воде кусочки материала переносят на 8-24 ч для восстановления в смесь: гидрохинона 1-2 г, нейтрального формалина 15 см3, воды 100 см3, сульфида натрия (безводный!) 0,1-0,5 г (количество сульфида натрия достаточное, чтобы в ванне сразу появилась желтоватая окраска). Раствор готовят перед самым употреблением;
г) далее исследуемый материал быстро ополаскивают водой, заливают в парафин или целлоидин.
Однако проведение метода Де Фано является малоинформативным, так как неспецифичность окраски нервных структур и окружающих их соединительно-тканных и клеточных образований, приводит к наслаиванию ионов Ag+ на основные компоненты ткани.
Задачей изобретения является повышение эффективности выявления нервных элементов, информативности биохимических процессов и экономичности.
Поставленная задача достигается первоначальной перфузией исследуемого материала в 5% растворе глюкозы, выдержкой в растворе диметилсульфоксида на дистиллированной воде, промывкой в 5% растворе глюкозы сосудистого русла и заполнение его раствором 2% Со(NO3)2, последующей промывкой 5% раствором глюкозы и дальнейшим погружением исследуемого материала в смесь 10% Na2S с 70% этиловым спиртом от 1 до 8 ч, промывкой до исчезновения запаха сероводорода, фиксацией трое суток в 10% нейтральном формалине с последующим докрашиванием гистологических срезов в 0,15% галлоцианине до 24 ч.
Способ осуществляют следующим образом:
A) сначала перфузируют кусочки исследуемого материала через сосуды 5% раствором глюкозы, чтобы смыть кровь;
Б) на 10-15 мин исследуемый материал помещают в 1-2% раствор диметилсульфоксида на дистиллированной воде с последующей промывкой сосудистого русла 5% раствором глюкозы шприцом;
B) далее шприцом вводят в сосуды 2% раствор Со(NO3)2 на 15-20 мин;
Г) промывают 5% раствором глюкозы в течение 1-2 мин;
Д) помещают объект исследования в смесь следующего состава: 10% Na2S и 70% этиловый спирт от 1 до 8 ч (время определяют эмперическим путем в зависимости от структуры и массы органа);
Е) промывают в дистиллированной воде до исчезновения запаха сероводорода;
Ж) фиксируют в 10% нейтральном формалине 3 суток;
З) приготавливают на замораживающем микротоме гистологические срезы и докрашивают в 0,15% галлоцианина. Время окрашивания варьирует от 16 до 24 ч;
И) проводят традиционную проводку через реактивы, заключение в бальзам по стандартной методике.
Результат: нервные волокна (особенно безмякотные) - интенсивно черные на светлом фоне. Ядра клеток и их цитоплазма слегка синие.
Количество выявляемых нервных структур на единицу площади среза составляет 11,1±0,09, по сравнению с методом Де Фано - 4,9±0,07 (p<0,05).
Использование предлагаемого технического решения позволяет более полно выявить интраорганные компоненты нервных структур в различных по своей морфохимической природе органах и тканях. Присутствие отрицательного заряда на биологических субстратах способствует удержанию возле них положительно заряженного иона Со++ в нейроплазме нервных волокон за счет электростатической связи между Со++ и диметилсульфоксидом. Благодаря диметилсульфоксиду концентрация Со++ в нервных проводниках становится более высокой, что способствует повышению чувствительности (катионизации) соединений кобальта в предлагаемом способе.
Способ более экономичен - не требует использования AgNO3, время проведения анализа сокращается на сутки.
Claims (1)
- Способ выявления нервных структур в тканях, включающий фиксацию в формалине, приготовление гистологических срезов, отличающийся тем, что исследуемый материал первоначально перфузируют через сосуды 5% раствором глюкозы с помещением на 10-15 мин в 1-2% раствор диметилсульфоксида на дистиллированной воде с дальнейшей промывкой сосудистого русла 5% раствором глюкозы, введением в сосуды 2% раствора Co(NO3)2 на 15-20 мин и промывкой 1-2 мин 5% раствором глюкозы, далее помещением для пропитывания в смесь из 10% Na2S и 70% этилового спирта на 1-8 ч, в зависимости от структуры и массы материала, с последующей промывкой в дистиллированной воде до исчезновения запаха сероводорода, фиксацией трое суток в 10% нейтральном формалине и доокрашиванием полученных гистологических срезов в 0,15% галлоцианине, причем исследуемые на микропрепарате нервные волокна, особенно безмякотные, - интенсивно черные на светлом фоне, а ядра клеток и их цитоплазма - слегка синие.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2015124703/15A RU2595849C1 (ru) | 2015-06-23 | 2015-06-23 | Способ выявления нервных структур в тканях |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2015124703/15A RU2595849C1 (ru) | 2015-06-23 | 2015-06-23 | Способ выявления нервных структур в тканях |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2595849C1 true RU2595849C1 (ru) | 2016-08-27 |
Family
ID=56891943
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2015124703/15A RU2595849C1 (ru) | 2015-06-23 | 2015-06-23 | Способ выявления нервных структур в тканях |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2595849C1 (ru) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2640185C1 (ru) * | 2017-03-24 | 2017-12-26 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Ставропольский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО СтГМУ Минздрава России) | Способ выявления нейронов и их аксонов в центральной нервной системе |
RU2790929C1 (ru) * | 2022-05-18 | 2023-02-28 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр онкологии имени Н.Н. Петрова" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ подготовки секционного материала для электронномикроскопического исследования нервной системы |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SU1573386A1 (ru) * | 1988-05-11 | 1990-06-23 | Киевский Медицинский Институт Им.Акад.А.А.Богомольца | Способ вы влени миелинизированных нервных волокон на гистологическом препарате |
RU2094806C1 (ru) * | 1994-02-14 | 1997-10-27 | Новокузнецкий государственный институт усовершенствования врачей | Способ диагностики некроза в гистологических срезах |
RU2256179C1 (ru) * | 2004-05-07 | 2005-07-10 | Государственное учреждение Санкт-Петербургский Научно-исследовательский институт уха, горла, носа и речи Министерства Здравоохранения РФ (НИИ ЛОР) | Способ выявления в ткани нервных волокон адренергической и холинергической природы |
RU2355311C1 (ru) * | 2007-11-08 | 2009-05-20 | Федеральное Государственное учреждение Российский научно-исследовательский нейрохирургический институт им. Проф. А.Л. Поленова | Способ комплексной посмертной патоморфологической диагностики заболеваний головного мозга |
-
2015
- 2015-06-23 RU RU2015124703/15A patent/RU2595849C1/ru active
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SU1573386A1 (ru) * | 1988-05-11 | 1990-06-23 | Киевский Медицинский Институт Им.Акад.А.А.Богомольца | Способ вы влени миелинизированных нервных волокон на гистологическом препарате |
RU2094806C1 (ru) * | 1994-02-14 | 1997-10-27 | Новокузнецкий государственный институт усовершенствования врачей | Способ диагностики некроза в гистологических срезах |
RU2256179C1 (ru) * | 2004-05-07 | 2005-07-10 | Государственное учреждение Санкт-Петербургский Научно-исследовательский институт уха, горла, носа и речи Министерства Здравоохранения РФ (НИИ ЛОР) | Способ выявления в ткани нервных волокон адренергической и холинергической природы |
RU2355311C1 (ru) * | 2007-11-08 | 2009-05-20 | Федеральное Государственное учреждение Российский научно-исследовательский нейрохирургический институт им. Проф. А.Л. Поленова | Способ комплексной посмертной патоморфологической диагностики заболеваний головного мозга |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2640185C1 (ru) * | 2017-03-24 | 2017-12-26 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Ставропольский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО СтГМУ Минздрава России) | Способ выявления нейронов и их аксонов в центральной нервной системе |
RU2790929C1 (ru) * | 2022-05-18 | 2023-02-28 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр онкологии имени Н.Н. Петрова" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ подготовки секционного материала для электронномикроскопического исследования нервной системы |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Irving | The sudanophil material at sites of calcification | |
Yang et al. | The association between prolactin and metabolic parameters in PCOS women: a retrospective analysis | |
CN108061677A (zh) | 用于生物材料的澄清试剂和其用途 | |
Wang et al. | Development of a three-dimensional adipose tissue model for studying embryonic exposures to obesogenic chemicals | |
Sasaki et al. | Preservation of cell cycle characteristics in solid tumor in vitro | |
Parida et al. | Hematological and plasma biochemistry in Psammophilus blanfordanus (Sauria: Agamidae) | |
Manger et al. | Amplification of potential thermogenetic mechanisms in cetacean brains compared to artiodactyl brains | |
Fu et al. | Monitoring the effects of pharmacological reagents on mitochondrial morphology | |
RU2595849C1 (ru) | Способ выявления нервных структур в тканях | |
Tamborski et al. | Central dopamine turnover in guinea pig pups during separation from their mothers in a novel environment. | |
CN104764889B (zh) | 用于定位竹类植物组织内源激素iaa的改良方法 | |
Freund et al. | Addition of formaldehyde releaser imidazolidinyl urea and MOPS buffer to urine samples enables delayed processing for flow cytometric analysis of urinary cells: A simple, two step conservation method of urinary cells for flow cytometry | |
CN102023207B (zh) | 在整体斑马鱼上进行酶联免疫吸附检测的方法及其应用 | |
Zhong et al. | Reverse mode of the sodium/calcium exchanger subtype 3 in interstitial cells of Cajal from rat bladder | |
Narayanan et al. | Determining factors for optimal neuronal and glial Golgi-Cox staining | |
Tryland et al. | Serum chemistry of free‐ranging white whales (Delphinapterus leucas) in Svalbard | |
Boolootian | Response of the testes of purple sea urchins to variations in temperature and light | |
Dancey et al. | Section preparation of human marrow for light microscopy. | |
Forty et al. | Ontogeny of the renal urotensin II system in the rat | |
RU2640185C1 (ru) | Способ выявления нейронов и их аксонов в центральной нервной системе | |
Slodownik et al. | The human skin/chick chorioallantoic membrane model accurately predicts the potency of cosmetic allergens | |
JP5196522B2 (ja) | 移植用膵島の評価方法 | |
Watts | A simple capillary tube method for the determination of the specific gravity of 25 and 50 micro l quantities of urine. | |
RU2612149C1 (ru) | Способ определения активности миелопероксидазы нейтрофилов в мазках крови животных | |
RU2429462C2 (ru) | Способ оптического просветления образцов биологических тканей |