RU2640185C1 - Способ выявления нейронов и их аксонов в центральной нервной системе - Google Patents
Способ выявления нейронов и их аксонов в центральной нервной системе Download PDFInfo
- Publication number
- RU2640185C1 RU2640185C1 RU2017110011A RU2017110011A RU2640185C1 RU 2640185 C1 RU2640185 C1 RU 2640185C1 RU 2017110011 A RU2017110011 A RU 2017110011A RU 2017110011 A RU2017110011 A RU 2017110011A RU 2640185 C1 RU2640185 C1 RU 2640185C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- solution
- neurons
- axons
- glucose
- glucose solution
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 16
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 title claims abstract description 14
- 210000003050 axon Anatomy 0.000 title claims abstract description 9
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 title claims abstract description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims abstract description 19
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims abstract description 19
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 14
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims abstract description 11
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 10
- 210000001787 dendrite Anatomy 0.000 claims abstract description 7
- 101710134784 Agnoprotein Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 241000021559 Dicerandra Species 0.000 claims abstract description 4
- 235000010654 Melissa officinalis Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- 239000000865 liniment Substances 0.000 claims abstract description 4
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 claims abstract description 3
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 claims abstract description 3
- 239000008187 granular material Substances 0.000 claims abstract description 3
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 abstract 3
- ORTQZVOHEJQUHG-UHFFFAOYSA-L copper(II) chloride Chemical compound Cl[Cu]Cl ORTQZVOHEJQUHG-UHFFFAOYSA-L 0.000 abstract 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 6
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 5
- INPLXZPZQSLHBR-UHFFFAOYSA-N cobalt(2+);sulfide Chemical compound [S-2].[Co+2] INPLXZPZQSLHBR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 4
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QIGBRXMKCJKVMJ-UHFFFAOYSA-N Hydroquinone Chemical compound OC1=CC=C(O)C=C1 QIGBRXMKCJKVMJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 2
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 2
- 210000004126 nerve fiber Anatomy 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N silver(1+) nitrate Chemical compound [Ag+].[O-]N(=O)=O SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GRVFOGOEDUUMBP-UHFFFAOYSA-N sodium sulfide (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].[S-2] GRVFOGOEDUUMBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AQSOTOUQTVJNMY-UHFFFAOYSA-N 7-(dimethylamino)-4-hydroxy-3-oxophenoxazin-10-ium-1-carboxylic acid;chloride Chemical compound [Cl-].OC(=O)C1=CC(=O)C(O)=C2OC3=CC(N(C)C)=CC=C3[NH+]=C21 AQSOTOUQTVJNMY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen sulfide Chemical compound S RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 210000003403 autonomic nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 230000003376 axonal effect Effects 0.000 description 1
- 230000003851 biochemical process Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000000133 brain stem Anatomy 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UFMZWBIQTDUYBN-UHFFFAOYSA-N cobalt dinitrate Chemical compound [Co+2].[O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O UFMZWBIQTDUYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910001981 cobalt nitrate Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000000609 ganglia Anatomy 0.000 description 1
- 230000001744 histochemical effect Effects 0.000 description 1
- 229910000037 hydrogen sulfide Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000011005 laboratory method Methods 0.000 description 1
- 230000001722 neurochemical effect Effects 0.000 description 1
- 210000004789 organ system Anatomy 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 230000001734 parasympathetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 229910001961 silver nitrate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003307 slaughter Methods 0.000 description 1
- 229910052979 sodium sulfide Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61D—VETERINARY INSTRUMENTS, IMPLEMENTS, TOOLS, OR METHODS
- A61D99/00—Subject matter not provided for in other groups of this subclass
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Изобретение относится к нейробиологии и может использоваться для выявления нейронов и их аксонов на нейрохимическом уровне у животных (крыс, кроликов, кошек). Изобретение относится к способу выявления нейронов и их аксонов в центральной нервной системе, включающему промывку 5% раствором глюкозы сосудов исследуемого материала, помещение его в 10% раствор NaS, промывку 5% раствором глюкозы и дистиллированной водой, приготовление срезов и заливку их бальзамом, отличающееся тем, что после промывки сосудов исследуемого материала 5% раствором глюкозы в них на 15-20 минут вводят 0,133 м раствор CoClили CoSOна 5% глюкозе и после помещения в 10% раствор NaS, который вымывают раствором глюкозы, ополаскивают 5-10 минут в 10% растворе формалина, а замороженные срезы быстро, не более 10 секунд, обрабатывают в 0,1% растворе AgNO, тщательно промывают в дистиллированной воде, с дальнейшим обезвоживанием и бальзамированием, причем в исследуемых нейронах на микропрепаратах выявляются черные гранулы COS и тончайшие аксоны и дендриты темно-коричневого оттенка. Способ обеспечивает повышение эффективности выявления нейронов, их аксонов и дендритов.
Description
Изобретение относится к области ветеринарии, в частности нейробиологии, и может быть использовано для выявления нейронов и их аксонов на нейрохимическом уровне у животных (крыс, кроликов, кошек).
В расположении нейроморфологов и нейробиологов имеется широкий спектр методик для выявления нервных структур в органах, системах органов и в тканях. Классические методы выявления нейронов в центральной нервной системе и, в частности, в стволе мозга по Н.Н. Боголелепову, Нисслю, Гольджи, Марки, Ferrari, Kishida и многие другие, очень трудоемки, требуют применения весьма дорогих реактивов и оборудования. Существующие методики, хотя и окрашивают нейроны с их дендритами, не выявляют тончайших нервных волокон в структурных образованиях мозга.
Наиболее близким из способов выявления нервных элементов в тканях и, в частности, выявления нейронов в ЦНС является метод с азотнокислым кобальтом по Де Фано [Пирс Э. Гистохимия. Теоретическая и прикладная. М. 1962; Лойд 3., Госсрау Р., Шиблер Т. Гистохимия ферментов. Лабораторные методы. М., «Мир», 1982].
Суть метода заключается в следующем:
а) кусочки толщиной 3-4 мм фиксируют в смеси следующего состава: Co(N03)2 1 г, дистиллированной воды 100 см3, кислого формалина 15 см3. Продолжительность фиксации - 6-8 часов для молодых и 12-24 часа для взрослых тканей. Комнатная температура;
б) фиксированный материал быстро ополаскивают и помещают в 1,5% раствор азотнокислого серебра (AgN03), в темноте, при комнатной температуре на 24-48 часа, в зависимости от величины кусочков;
в) далее, после быстрого ополаскивания в дистиллированной воде, кусочки материала переносят на 8-24 часа для восстановления в смесь: гидрохинона 1-2 г, нейтрального формалина 15 см3, воды 100 см3, сульфида натрия (безводный) 0,1-0,5 г (количество сульфида натрия достаточное, чтобы в ванне сразу появилась желтоватая окраска). Раствор готовят перед самым употреблением.
г) далее исследуемый материал быстро ополаскивают водой, заливают в парафин или целлоидин.
Однако проведение метода Де Фано является малоинформативным, так как неспецифичность окраски нервных структур и окружающих их соединительно-тканных и клеточных образований приводит к наслаиванию ионов Ag+ на основные компоненты ткани.
Наиболее близким по технической сущности является способ выявления нервных структур в тканях. Патент №2595849. Суть данного способа заключалась в следующем:
а) перфузируют кусочки исследуемого материала через сосуды 5% раствором глюкозы;
б) на 10-15 минут исследуемый материал помещают в 1-2% раствор диметил-сульфоксида на дистиллированной воде с последующей промывкой сосудистого русла 5% раствором глюкозы шприцом;
в) далее шприцом вводят в сосуды 2% раствор Co(NO3)2 нa 15-20 минут;
г) промывают 5% раствором глюкозы в течение 1-2 минут;
д) помещают объект исследования в смесь следующего состава: 10%Na2S и 70% этиловый спирт - от 1 до 8 часов (время определяют эмпирическим путем в зависимости от структуры и массы органа);
е) промывают в дистиллированной воде до исчезновения запаха сероводорода;
ж) фиксируют в 10% нейтральном формалине - 3 суток;
з) приготавливают на замораживающем микротоме гистологические срезы и докрашивают их в 0,15% растворе галлоцианина. Время окрашивания варьируют от 16 до 24 часов;
и) проводят традиционную проводку через реактивы, заключение в бальзам по стандартной методике.
Однако и этот способ не дает полной информации о структуре нейронов и их дендритов и, особенно, нейронов ганглиев парасимпатического отдела вегетативной нервной системы, их связей и требует проведения дополнительной окраски стромы, что приводит к искажению структуры аксональных волокон.
Задачей изобретения является повышение эффективности выявления нейронов, их аксонов и дендритов, информативности биохимических процессов и экономичности.
Поставленная задача достигается первоначальной перфузией исследуемого материала в 5% растворе глюкозы с последующим введением в сосуды 0,133 м раствора 
или CoSO4 на 5% растворе глюкозы и дальнейшим помещением исследуемых кусочков мозга в 10% раствор Na2S с 70° этиловым спиртом с кратковременным ополаскиванием (10-15 минут) в 10% растворе формалина с докрашиванием срезов в 0,1% растворе AgNO3.
Способ осуществляют следующим образом:
1. Сразу после забоя животного, промывают сосуды мозга теплым 5% раствором глюкозы при t=37-40°С.
2. Вводят в сосуды 0,133 м раствор на 5% глюкозе на 15-20 минут. При отсутствии можно использовать CoSO4.
3. Вымывают раствор кобальта теплым 5% раствором глюкозы.
4. Кусочки мозга помещают в 10% раствор Na2S на 5-10 часов. Последняя готовится следующим образом - 31 г. Na2S-9Н2O+69 мл дистиллированной воды. Эту смесь фильтруют перед использованием и к 2 мл 10% раствора Na2S добавляют 100 мл 70° спирта.
5. Вымывают Na2S раствором глюкозы, кусочки мозга ополаскивают в течение 5-10 минут в 10% растворе формалина, промывают в дистиллированной воде, режут на замораживающем микротоме.
6. Срезы быстро обрабатывают, не более 10 секунд, в 0,1% растворе AgNO3, тщательно промывают в дистиллированной воде с последующим обезвоживанием и заливают в бальзам.
Результат: В нейронах выявляются черные гранулы сульфида кобальта (CoS), которые их маркируют (CO2+Na2S→CoS→черный осадок). Кроме того, выявляются тончайшие нервные волокна аксонов и дендритов (CoS+2Ag→Ag2S) темно-коричневого цвета.
Применение методики позволяет сделать заключение о достаточно высокой чувствительности и селективности разработанного гистохимического метода на основе реакции сульфида кобальта в сочетании с солями серебра.
Claims (1)
- Способ выявления нейронов и их аксонов в центральной нервной системе, включающий промывку 5% раствором глюкозы сосудов исследуемого материала, помещение его в 10% раствор Na2S, промывку 5% раствором глюкозы и дистиллированной водой, приготовление срезов и заливку их бальзамом, отличающееся тем, что после промывки сосудов исследуемого материала 5% раствором глюкозы в них на 15-20 минут вводят 0,133 м раствор CoCl2 или CoSO4 на 5% глюкозе и после помещения в 10% раствор Na2S, который вымывают раствором глюкозы, ополаскивают 5-10 минут в 10% растворе формалина, а замороженные срезы быстро, не более 10 секунд, обрабатывают в 0,1% растворе AgNO3, тщательно промывают в дистиллированной воде, с дальнейшим обезвоживанием и бальзамированием, причем в исследуемых нейронах на микропрепаратах выявляются черные гранулы COS и тончайшие аксоны и дендриты темно-коричневого оттенка.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017110011A RU2640185C1 (ru) | 2017-03-24 | 2017-03-24 | Способ выявления нейронов и их аксонов в центральной нервной системе |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017110011A RU2640185C1 (ru) | 2017-03-24 | 2017-03-24 | Способ выявления нейронов и их аксонов в центральной нервной системе |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2640185C1 true RU2640185C1 (ru) | 2017-12-26 |
Family
ID=63857415
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017110011A RU2640185C1 (ru) | 2017-03-24 | 2017-03-24 | Способ выявления нейронов и их аксонов в центральной нервной системе |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2640185C1 (ru) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1520385A1 (ru) * | 1987-04-22 | 1989-11-07 | Кубанский государственный медицинский институт им.Красной Армии | Способ вы влени нейронов |
| CN102914650A (zh) * | 2012-06-14 | 2013-02-06 | 北京大成生物工程有限公司 | 神经元特异性烯醇化酶定量检测试剂盒及其制备方法与应用 |
| RU2595849C1 (ru) * | 2015-06-23 | 2016-08-27 | Максим Викторович Гоман | Способ выявления нервных структур в тканях |
-
2017
- 2017-03-24 RU RU2017110011A patent/RU2640185C1/ru active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1520385A1 (ru) * | 1987-04-22 | 1989-11-07 | Кубанский государственный медицинский институт им.Красной Армии | Способ вы влени нейронов |
| CN102914650A (zh) * | 2012-06-14 | 2013-02-06 | 北京大成生物工程有限公司 | 神经元特异性烯醇化酶定量检测试剂盒及其制备方法与应用 |
| RU2595849C1 (ru) * | 2015-06-23 | 2016-08-27 | Максим Викторович Гоман | Способ выявления нервных структур в тканях |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Luepke | Hen's egg chorioallantoic membrane test for irritation potential | |
| Furness et al. | Aqueous aldehyde (Faglu) methods for the fluorescence histochemical localization of catecholamines and for ultrastructural studies of central nervous tissue | |
| CN108061677A (zh) | 用于生物材料的澄清试剂和其用途 | |
| EP2703801A1 (en) | Method for making biological material transparent and use thereof | |
| Forzán et al. | Clinical pathology of amphibians: a review | |
| Sasaki et al. | Preservation of cell cycle characteristics in solid tumor in vitro | |
| Sugahara et al. | Gene expression analysis of lamprey embryos | |
| RU2640185C1 (ru) | Способ выявления нейронов и их аксонов в центральной нервной системе | |
| RU2595849C1 (ru) | Способ выявления нервных структур в тканях | |
| Lyck et al. | Immunohistochemical visualization of neurons and specific glial cells for stereological application in the porcine neocortex | |
| Tkachenko et al. | Blood oxidative stress and antioxidant defense profile of White Stork Ciconia ciconia chicks reflect the degree of environmental pollution | |
| CN106662511B (zh) | 组织透明溶液及其应用 | |
| Chu et al. | Morphological and cytochemical identification of the Golgi apparatus | |
| Yamashita et al. | A quantitative analysis of the annual testicular cycle of the brittle-star Amphipholis kochii by means of autoradiographic investigation | |
| RU2429462C2 (ru) | Способ оптического просветления образцов биологических тканей | |
| CN102660644B (zh) | 调控斑马鱼卵黄蛋白原mRNA水平的方法 | |
| CN113008646B (zh) | 一种消除柑橘固定样品组织切片中沉淀物质的方法 | |
| Keskin et al. | Glycohistochemical study on the Denizli cock testis | |
| RU2620559C1 (ru) | Способ окрашивания препаратов цельных биологических тканей и органов методом клик-гистохимии (варианты) | |
| De la Cruz Pino et al. | Optimized technique to extract and fix Olive ridley turtle hatchling retina for histological study | |
| Aryani et al. | Histology and Histomorphometry of Kidney on Domestic Chicken (Gallus gallus domesticus) During Pre and Post Hatch | |
| Licata et al. | Levels of Cd (II), Mn (II), Pb (II), Cu (II), and Zn (II) in common buzzard (Buteo buteo) from Sicily (Italy) by derivative stripping potentiometry | |
| RU2797189C1 (ru) | Способ выявления микротопографии нейронов в центральной нервной системе | |
| Luker et al. | Laboratory exercises in Zoology | |
| Dettmeyer et al. | Histothanatology: Autolysis, putrefaction, and mummification |