t
О)
Изобретение относитс к биологии и медицине, а именно к гистологии, эмбриологии, патанатомии, и может быть использовано дл вы влени стру турных компонентов органов, тканей. Цель изобретени - одновременное окрашивание всех структурных элементов среза, включа нервы. Способ осуществл етс следующим образом. Берут исследуемый материал, помещают в 10-12%-ный нейтральный формалий на 1-3 сут и более, так как срок хранени в фиксаторе не ограничен. Промывают биоптат в проточной воде комнатйой температуры 1-6 ч, споласкивают в. дистиллированной воде. На замораживающем микротоме готов т срезы толщиной 10-50 мкм и помещают в чашку со свежей дистиллированной водой. Когда все срезы подготовлены и собраны в чашке с водой, их перенос в свежеприготовленный водно-спиртовой раствор красител Гимза-Романовского при следующем соотношении комп нентов, мас.%: 96 градусный этиловый спирт0,4-0,8 Краситель Гимза- Романовского4-11 ВодаОстальное Причем, и спирт, и краситель Гим за-Романовского ввод т выводу капл ми. Помещенные срезы оставл ют в кра сителе на 1-72 ч в зависимости от п ставленной цели и характера объекта например при окраске плотных срезов их помещают на 48-72 ч. Затем срезы извлекают, промывают в водопроводной вод-е до исчезновени синего окрашивани воды, споласкива в дистиллированной воде,, помещают н . предметное стекло, расправл ют, обсушивают бумажным фильтром и заключают в глицерин или другую среду традиционным способом. При исследовании окрашенного гистологического препарата отчетливо вы вл ютс попе речно-полосатые мышечные волокна,. сосуды, клеточные и неклеточные элементы тканей и нервы. Пример 1. Проводитс гистологический анализ фрагмента органа., подлежащего оперативному вмешательст ву. Биоптат фиксируют в 10-12%-ном нейтральном формалине 1 сут, промывают в водопроводной воде 4 ч, споласкивают в дистиллированной воде, готов т срезы толщиной 10-50 мкм на замораживающем микротоме, перенос т срезы в чашку со свежей дистиллированной водой на врем подготовкивсех срезов, подлежащих окраске. Готов т водно-спиртовой раствор красител Гимза-Романовского при следующем соотношении компонентов, мас.%:96 градусный этиловый спирт0,4 Краситель ГимзаРомановского4 Вода Остальное В приготовленный раствор помещают срезы на 48 ч. Затем срезы промывают водопроводной водой до исчезновени синего окрашивани воды, споласкирают дистиллированной водой, .помещают срез на предметное стекло, обсушивают бумажным фильтром, заключают в глицерин. Заключение: данный фрагмент органа неудачно выбран дл оперативного вмешательства в св зи с тем, что здесь проход т крупные нервы, окрашенные в фиолетовый цвет, артерии, встречаетс множество сосудов микроциркул торного русла, стенки которых чрезвычайно тонки, эритроциты окрашены в желтоватый или розовый цвет; цвет межклеточного вещества измен етс от голубого до синего. I Необходимо изменить зону оперативного вмешательства. Пример 2. Окраску подготовленных ранее (см. пример 1) срезов ведут в водно-спиртовом растворе красител Гимза-Романовского при следующем соотношении компонентов, мас.%: 96-градусный этиловый спирт0 4 . Краситель ГимзаРомановского1 . Вода Остальное В приготовленный раствор помещают срезы на j1 -48 ч, а затем их промывают до исчезновени синего окрашивани промывочной воды и провод т все подготовительные операции дл заключени окрашенных срезов в глицерин или другую среду. Заключение: данный фрагмент органа неудачно выбран дл оперативного вмешательства в св зи с тем, что видны артери и ветв щийс нерв. Базапьна мембрана артерии голубовата , мьтшечные клетки ее стенки голубые с синим дром. Тучные кле св занные с артерией и нервом, ок шены в фиолетовый цвет. Межклеточ вещество серо-синее или розовое. Гистологический анализ подтверж ет: необходимо изменить зону опер тивного вмешательства. Пример 3. Окраску подгото ленных ранее (с.м. пример 1) срезо ведут в водно-спиртовом растворе к сител Гимза-Романовского, при сле ющем составе компонентов мае.: , 96-градусный этиловый спирт0,8 Краситель ГимзаРомановского7 Вода , В приготовленный водно-спиртово раствор красител помещают срезы н 1-48 ч, затем их промывают до исчезновени синего окрашивани пром ночной воды. Далее ведут все подго вительные операции дл заключени окрашенных срезов в глицерин или a гую среду. При микроскопировании срезов от четливо видны нервы, окрашенные в фиолетовый цвет, сосуды, клеточные и неклеточные элементы тканей. Пример 4. При вскрытии кош ки через 40 мин после воздействи лазерным излучением или электрическим , током берут образец ( зык, кожа подкожные мьш1цы и т.д.) фиксируют в 10-12%-ном нейтральном формалине 3 сут, промывают образцы 3 ч в проточной воде, споласкивают в дистиллированной воде. Готов т на замораживающем микротоме срезы толщиной 15-50 мкм и перенос т 50-70 срезов в чашку Петри с чистой дистиллировйнной водой, а затем - на 42 ч в сосуд со свежеприготовленным водноспиртовым раствором красител Гиыза Романовского при следующем соотношении компонентов, мас.%: 96-градусный этиловый спирт0,79 Краситель ГимзаРомановского11 Вода Остальное Далее окрашенные срезы промывают в водопроводной воде до исчезновени синего окрашивани промывочной воды и споласкивают в дистиллированной воде. Помещают окрашенный срез на предметное стекло, расправл ют , обсушив его бумажным фильтром, заключают в глицерин или другую среду. При микроскопическом изучении срезов установлены реактивные изменени нервов, сосудов и соединительных элементов. Заключение: используемые параметры воздействи вызывают адаптационно-, трофические изменени в составе тканей и органа. При окраске в течение 24 ч видны нервы без признаков деструктивных изменений, окрашенные в темно-фиолетовый цвет; сосуд (артериола ) , клетки мьш ечной оболочки Голубоватые со светло-синим дром; активные клетки с признаками дегранул ции . Их цитоплазма интенсивно окрашена в фиолетовый и темно-красный цвет. Межклеточное вещество голубоватосерое . При окраске в течение 72 ч виден нерв; полнокровна венула и форменные элементы крови в ней; артериола с уплотненной базальной мембраной , тучные клетки с прийн.аками дегранул ции; межклеточное зещество с извитыми коллагеновыми волокнами .Нерв окрашен в фиолетовый цвет. Базальные мембраны сосудов темнофиолетовые или синие. Тучные клетки имеют разные оттенки и цвета в зависимости от их использовани . Встречаютс темно-фиолетовые, сиреневые, те№но-красные .- Эритроциты крови розовые или желтоватые, дра лейкоцитов голубые , зернистость специфическа . Гладкомьш1ечные клетки артериолы голубые со светлым синим дром. Ядра соединительных клеток голубые. Межклеточное вещество от бледно-голубого до интенсивного синего, встречаютс участки межклеточного вещества , окрашенного в розовый цвет. Использование предлагаемого спосо-. а приготовлени гистологических репаратов дл микроскопи 4еских иследований позвол ет обеспечить 00Z-Hoe вы вление нервов по сравнеию со всеми известными способами риготовлени гистологических препаатов дл микроскопических исследоаний с вы влением всех структурных лементов ткани.