RS62082B1 - Imidazolonilhinolini i njihova primena kao inhibitora atm kinaze - Google Patents

Description

Opis

STANJE TEHNIKE

[0001] Predmetni pronalazak se odnosi na specifična jedinjenja imidazolonilhinolina i njihovu upotrebu u inhibiciji, regulaciji i/ili modulaciji prenosa signala kinazama, naročito ATM kinazom, kao i na farmaceutske kompozicije koje sadrže ova jedinjenja, i upotrebu jedinjenja za lečenje bolesti vezano za ATM kinazu, posebno raka.

[0002] Serin/treonin proteinska kinaza ATM (kinaza mutirana kod teleangiektatične ataksije) pripada porodici PTKK kinaza sa katalitičkim domenima koji imaju homologiju sa 3-kinazama fosfoinozitida (PI3 kinaza, PI3K). Ove kinaze su uključene u niz ključnih ćelijskih funkcija kao što su rast ćelija, proliferacija ćelija, migracija, diferencijacija, preživljavanje i adhezija ćelija. Ove kinaze posebno reaguju na oštećenje DNK aktiviranjem programa zaustavljanja ćelijskog ciklusa i reparacije DNK (DDR: Odgovor na oštećenje DNK). ATM je proizvod ATM gena i igra ključnu ulogu u saniranju oštećenja dvostrukog lanca DNK (DSB. (oštećenja dvostrukog lanca) kroz homolognu rekombinaciju i nehomologno spajanje kraja na kraj (NHEJ: spajanje nehomologog kraja). Takvo oštećenje dvostrukog lanca je posebno citotoksično.

[0003] Jedna od uobičajenih karakteristika tumora kod ljudi je njihova genomska nestabilnost, pri čemu još nisu poznati specifični nedostaci mehanizma za obnavljanje DNK kod najčešćih vrsta rakova. Ova nestabilnost predstavlja terapeutsku polaznu tačku za hemoterapiju, koja se već dugo primenjuje. Postoji i nekoliko sindroma kod kojih se osnovni genetski faktor utiče na mutaciju, koja je praćena gubitkom funkcije, gena koja je modulira reakciju na oštećenje dvolančane DNK. To obuhvata ataksiju telangiektaziju, koju uzrokuje defektan ATM gen. Zajedničko svim ovim sindromima je to da oni uzrokuju ekstremnu osetljivost na zračenje (Lavin & Shiloh (1997) Annu. Rev. Immunol.15: 177; Rotman & Shiloh (1998) Hum. Mol.

Genet.7: 1555, u celini ovde uključena kao referenca). ATM-defektne ćelije su prema tome osetljive na agense odnosno mere koje uzrokuju oštećenje dvostrukog lanca DNK, što ATM čini privlačnim ciljem za hemo- i radiosenzibilizaciju u lečenju raka.

[0004] Molekuli kofeina i vortmanina, koji su inicijalno ispitivani u tom kontekstu, zaista su pokazali radiosenzibilizaciju koja se, između ostalog, pripisuje inhibiciji ATM-a, ali su, međutim, suviše toksični in vivo za moguću terapijsku upotrebu. Polazeći od hemijske strukture inhibitora PI3K-Inhibitora LY294002, KuDOS Pharmaceuticals je razvio prvi potentni i selektivni inhibitor ATM: KU-55933 (2-morfolino-6-(tiantren-1-il)-4H-piran-4-on). Ovo je omogućilo senzibilizaciju na jonizujuće zračenje i hemoterapijske agense koji oštećuju dvolančane DNK (Hickson, I., et al. (2004).Cancer Res 64, 9152-9159, u celosti ovde uključena kao referenca). Međutim, utvrđeno je da je KU-55933 neprikladan za upotrebu in vivo, verovatno zbog visoke lipofilnosti. Na osnovu KU-55933, uz neznatnu modifikaciju osnovne strukture razvijeni su KU-60019 (2-((2S,6R)-2,6-Dimetilmorfolino)-N-(5-(6-morfolino-4-okso-4H-piran- 2-il)-9H-tioksanten-2-il)acetamid) i KU-559403 2-(4-Metilpiperazin-l-il)-N-[5-(6-morfolino-4- okso-piran-2-il)tioksanten-2-il]acetamid), pri čemu su poboljšane rastvorljivost i potencija. U međuvremenu, na primer, zabeleženo je da se ćelije koje iniciraju glioblastom mogu bezbedno i efikasno senzibilizovati na zračenje pomoću KU-60019, iz čega je zaključeno da KU-60019 može da deluje za senzibilizaciju zračenjem velikog broja tumora mozga (Vecchio D. i et al. (2015), Int. J. Cancer 136: 1445, ovde uključeni kao referenca u celosti).

[0005] WO 2011/054846 otkriva inhibitore bromodomena koji su zasnovani na imidazo [4,5-c] kinolinskom lancu i mogu da se upotrebe za lečenje raka, zapaljenskih bolesti ili autoimunskih bolesti.

[0006] Obezbeđivanje malih molekula koji efikasno inhibiraju, regulišu i/ili moduliraju transdukciju signala kinazama, posebno ATM kinazama, je stoga poželjno i predstavlja cilj predmetnog pronalaska.

[0007] Takođe je poželjno da takvi inhibitori kinaze budu selektivni, odnosno da nemaju nikakvu ili znatno nižu aktivnost u poređenju sa drugim kinazama. Na ovaj način se mogu smanjiti neželjeni efekti ili prateće toksičnosti.

gde

R1 je metil,

R3 označava nerazgranati ili razgranati alkil sa 1, 2 ili 3 C-atoma, pri čemu nezavisno jedan od drugog 1, 2, 3, 4 ili 5 H-atoma može da bude zamenjeno sa Hal,

Het<1>je odabran između pirazolila, triazolila i imidazolila, gde je Het<1>nesupstituisan ili supstituisan sa jednim ili dva supstituenta koja su nezavisno izabrana iz alkila, koji mogu da budu nesupstituisani ili supstituisani jedan ili više puta halogenom, -OY, -NYY, Hal, i -Het<2>, HET označava 5-člani monociklični aromatični heterocikl, pri čemu je ovaj heterocikl povezan sa N-atomom osnovne strukture preko C-atoma u prstenu, pri čemu je ovaj heterocikl izabran od pirazolila, tiazolila i imidazolila, i može da bude nesupstituisan ili supstituisan jednim, dva ili tri supstituenta, koji su nezavisno izabrani iz grupe koju čine: Hal, A. Het<2>, -(CY2)p-OY, -(CY2)p-OZ, -(CY2)p-O-Het<2>, -(CY2)p-O-(CY2)t-Het<2>, -(CY2)p-O-(CY2),-NYY, -(CY2)P-O-(CY2),-OY, -(CY2)P-NYY, -(CY2)P-COOY, -(CY2)p-CO-NYY, i -(CY2)p-NY-COY,

A svaki nezavisno predstavlja nerazgranati ili razgranati alkil sa 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 C-atoma, pri čemu nezavisno jedan od drugog 1, 2, 3, 4, 5, 6 ili 7 H-atoma može da bude zamenjeno sa Hal,

Het<2>označava monocikličan zasićeni heterocikl sa 2, 3, 4, 5, 6 ili 7 C-atoma i 1, 2, 3 ili 4 N-, O- i/ili S-atoma, koji mogu da budu nesupstituisani ili monosupstituisani sa A,

Y je H ili A

Z označava nerazgranati ili razgranati alkenil sa 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 C-atoma, gde nezavisno jedan od drugog 1, 2, 3, 4, 5, 6 ili 7 H-atoma može da bude zamenjeno sa Hal, Hal označava F, Cl, Br ili I, i

p označava 0, 1, 2, 3, 4, 5 ili 6

t označava 1, 2, 3, 4, 5 ili 6,

i/ili njihova farmaceutski primenljiva so, solvat, tautomer ili stereoizomer.

[0009] Kao što će biti detaljnije objašnjeno u nastavku, jedinjenja treba razumeti tako da atomi, kao što su, na primer, H, C, N, u svakom slučaju uključuju i teške izotope ovih atoma. Ovo se posebno odnosi na H, pri čemu se deuterijum može povoljno da upotrebi, kao što pokazuju primeri.

[0010] Neočekivano se pokazalo da su jedinjenja prema pronalasku snažni inhibitori ATM kinaze. Selektivnost prema drugim srodnim kinazama, kao što je mTOR (ciljni receptor za rapamicin kod sisara) kinaze, još jedne proteinske kinaze iz porodice PIK kinaza (koja se takođe naziva klasa IV PI3K).

[0011] U potpunoj suprotnosti sa predmetnim pronalaskom, međunarodna patentna prijava WO 2010/139731 otkriva za tamo opisana imidazolonilhinolinska jedinjenja čija se zaštita traži, da su oni poželjno inhibitori PI3 kinaza klase I i/ili mTOR kinaze. Kinaze PI3 klase I su lipidne kinaze. Shodno tome, eksperimenlalni podaci pokazuju vrednosti IC50za mTOR u opsegu do manje od 3 nM, tj. veoma jaku inhibiciju.

[0012] Jedinjenja prema pronalasku još jednom ubedljivo pokazuju kako strukturne razlike koje se na prvi pogled čine relativno neznatnim presudno utiču na biološku aktivnost.

[0013] Pored toga, jedinjenja prema pronalasku se takođe odlikuju odsustvom često uočene, neželjene inhibicije srčanih jonskih kanala, posebno Kvl.l 1 hERG, čija blokada može dovesti do životno ugrožavajućih aritmija.

[0014] Pored toga, jedinjenja prema pronalasku se odlikuju takode i izostankom, često uočenih, 4 nepozeljnih, inhibicija kardijalnih jonskih kanala, naročito Kvl.l 1 hERG ćija blokada moze da dovede do zivotno ugrozavajućih aritmija.

[0014] Jedinjenja prema pronalasku tako otvaraju potpuno nove mogućnosti kod lečenja raka, na primer kao monoterapija kod tumora sa sposobnosću reparacije defektnog dvostrukog lanca DNK ili u kombinaciji sa radio-ili hemoterapijom, naročito kao radio-ili hemosenzibilizatori kod lečenja raka, posebno povoljno kao radiosenzibilizatori.

[0015] Jedinjenja formule (I) se stoga mogu koristiti za inhibiciju i senzibilizaciju ćelija raka na antikancerogena sredstva i/ili jonizujuće zračenje. Pronalazak se takođe odnosi na upotrebu jedinjenja formule (I) u lečenju raka, tumora i/ili metastaza, u kombinaciji sa radioterapijom i/ili antitumorskim agensom, poželjno radioterapijom.

[0016] Prethodno i u nastavku, radikali R1, R3, Y, A, Z, Het<1>, Неt<2>, HET i Hal, kao i p i t imaju gore navedena značenja za formulu (I), osim ako nije izričito navedeno drugačije. U slučaju da se pojedini ostaci pojave više puta u jedinjenju ili radikalu, ostaci nezavisno jedan od drugog preuzimaju data značenja, osim ako nije izričito drugačije navedeno. Na primer, ostaci YY u radikalu -NYY, u kojima se javljaju više puta, su identični ili različiti, ali su poželjno odabrani u svakom odabranom slučaju nezavisno jedan od dragog, iz prethodno navedenih značenja i/ili značenja datih u daljem tekstu (na primer metil i/ili etil), osim ako nije izričito drugačije naznačeno. Ako se Y javi više puta, radikal se može alternativno označiti Y', Y", Y'" i Y"". Isto se odnosi i na ostale ostatke ili brojčane promenljive. Shodno tome, formulacija „cikloalkil koji je nesupstituisan ili mono- ili polisupstituisan nezavisno jedan od drugog sa Hal, A, ... i/ili - (CY2)P-NY-COY“ znači da cikloalkilni radikal može j da bude monosupstituisan sa jednim od datih supstituenata, ili može imati nekoliko supstituenata koji su izabrani nezavisno jedan od drugog od pomenutih supstituenata, u slučaju cikloalkila Hal, A, CN, -(CY2)P-OY, -(CY2)P-NYY, -(CY2)P-COOY, -(CY2)P-CO-NYY i/ili -(CY2)p-NY-COY, na primer cikloheksil sa tri supstituenta fluor, hlor i - CH2-NH2.

[0017] Termini koji se ovde koriste za definisanje jedinjenja uglavnom se zasnivaju na pravilima IUРАС organizacije za hemijska jedinjenja, a posebno organska jedinjenja. Termini korišćeni za objašnjenje gore pomenutih jedinjenja pronalaska uvek imaju sledeća značenja, osim ako opis ili zahtevi ukazuju drugačije.

[0018] Izraz "nesupstituisani" znači da radikal, grupa ili ostatak nemaju supstituente. Izraz "supstituisani" znači da radikal, grupa ili ostatak ima jedan ili više supstituenata. Ako se u nastavku teksta pominje samo ,,supstituisani“ u vezi sa određenom grupom ili određenim radikalom, čija je supstitucija posebno definisana u vezi sa gornjom formulom (I), podrazumeva se da ova supstitucija odgovara gore navedenim, ukoliko nije drugačije navedeno. Ovde se u kontekstu pronalaska podrazumeva da radikal pozivajući se na „prethodno dato značenje“ može da preuzme sva značenja navedena u prethodnom tekstu opisa za odgovarajući radikal, bez detaljnijeg opisa.

[0019] "A" označava nerazgrant ili razgranat alkil koji ima 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 C-atoma, pri čemu nezavisno jedan od drugog 1, 2, 3, 4, 5, 6 ili 7 H-atoma može da bude zamenenjeno sa Hal. Naročito poželjan kao "A" je nerazgranat ili razgranat alkil koji ima 1, 2, 3, 4, 5 ili 6 C- atoma, pri čemu nezavisno jedan od drugog 1, 2, 3, 4 ili 5 H-atoma može da bude zamenjeno sa Hal, tj. F, Cl , Br i/ili I. Podrazumeva se da Hal u ovom kontekstu može da predstavlja različite halogene F, Cl, Br, I, to jest, na primer, 1 H može da bude zamenjen sa F, a drugi H sa Cl. Posebno je poželjan C1-4-alkil, gde je moguće da 1, 2 ili 3 H-atoma, nezavisno jedan od drugog, budu zamenjeni sa Hal. Takav C1-4-alkil, je, na primer, metil, etil, propil, izopropil, butil, izobutil, sek-butil, terc-butil, fluormetil, difluormetil, trifluormetil, pentafluoretil, 1,1,1-trifluoretil ili brom-metil, posebno poželjno metil, etil, fluormetil, difluormetil ili trifluormetil. Podrazumeva se da su odgovarajuća značenja „А“, nezavisno u radikalima formule prema pronalasku.

[0020] "Alkil" se ovde odnosi na zasićeni ugljovodonični radikal koji je nerazgranat (linearan) ili razgranat i poželjno ima 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 C-atoma, odnosno C1-10-alkiI. Primeri alkil radikala su metil, etil, propil, izopropil. 1,1-, 1,2- ili 2,2-dimetilpropil, 1-etilpropil, l-etil-1-metilpropil, 1-etil-2-metilpropil, 1,1,2- ili 1,2,2-trimetilpropil, butil, izobutil, sek-butil, terc-butil, 1-, 2- ili 3-metilbutil, 1,1-, 1,2-, 1,3-, 2,2-, 2,3- ili 3,3-dimetilbutil, 1- ili 2-etilbutil. pentil, izopentil, neopentil, terc-pentil, 1-, 2-, 3- ili 4-metilpentil, heksil.

[0021] "Z" ovde označava nerazgranat ili razgranat alkenil koji ima 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 C-atoma, gde nezavisno jedan od drugog 1, 2, 3, 4, 5, 6 ili 7 H-atoma može da bude zamenjeno sa Hal. Alkenili imaju najmanje jednu dvostruku C-C vezu, a naročito mogu da imaju i dve dvostruke veze (dieni). Primeri pogodnih alkenila su vinil, alil, propenil (-CH2CH=CH2; - CH=CH-CH3; -С(=СН2)-СН3), 1-, 2- ili 3-butenil, izobutenil, 2-metil-l - ili 2-butenil, 3-metil-l-butenil, 1,3-butadienil, 2-metil-l,3-butadienil, 2,3-dimetil-l,3-butadienil, 1-, 2-, 3- ili 4-pentenil i heksenil, naročito poželjno alil.

[0022] Ovde je "Het<2>" mononuklearno zasićeni heterocikl sa 2, 3, 4, 5, 6 ili 7 C-atoma i 1, 2, 3 ili 4 N-, O- i/ili S-atomima, koji je nesupstituisan ili može biti monosupstituisan sa A. Poželjno. "Het<2>" označava monociklični zasićen heterocikl sa 3, 4 ili 5 C-atoma i 1 ili 2 N- i/ili O-atoma. Primeri Het<2>su aziridinil, oksiranil, tiaranil, azetidinil, oksetanil, dioksetanil, tietanii, pirolidinil, tetrahidrofuranil, ditiolanil, oksazolidinil, piperidinil, tetrahidropiranil, piperazinil, dioksanil, tiomorfolinil, morfolinil, oksepanil, tiepanil i azepanil. Poželjni mononciklični zasićeni heterocikli koji sadrže N, npr. azetidinil, pirolidinil, piperidinil, piperazinil I morfolinil, pri čemu ovi mogu da budu nesupstituisani ili monosupstituisani sa A prema opštoj definiciji. Nesupstituisani azetidinil, pirolidinil, piperidinil, piperazinil i morfolinil su poželjna izvođenja, naročito poželjno azetidinil i piperazinil. Takođe je poželjan tetrahidropiranil. Veza "-"Het<2>u - SO2-Het<2>grupi se obično formira preko C-atoma. Inače, na primer kao supstituent HET, vezivanje može da se ostvari preko bilo kog člana prstena heterocikličke grupe, pod uslovom da deluje kao hemijski odgovarajući, i ovde je poželjna veza preko C-atoma.

[0023] U kontekstu ovog pronalaska, "HET" označava 5-člani aromatični heterocikl, pri čemu je ovaj heterocikl povezan sa N-atomom osnovne strukture preko C-atoma u prstenu, a ovaj heterocikl je izabran između pirazolila, tiazolila i imidazolila. i gde ovaj heterocikl može da bude nesupstituisan ili supstituisan sa jednim, dva ili tri supstituenta koji su nezavisno izabrani iz grupe koju čine: Hal, A, Het<2>, -(CY2)p-OY, -(CY2)P-OZ, -(CY2)p-O-Het<2>, -(CY2)p-O-(CY2)t-Het<2>, -(CY2)P-O-(CY2)tNYY, -(CY2)P-O-(CY2)P-OY, -(CY2)P-O-(CY2)t.POAA, -(CY2)P-NYY, -(CY2)p- COOY, -(CY2)p-CO-NYY, -(CY2)P-NY-COY.

[0024] Izraz ,,Hal“, ili takođe ,,halogen“, „atom halogena“, „ halogen supstituent“ označava jedan ili više atoma fluora (F), broma (Br), hlora (Cl) ili joda (I). Pojmovi ,,dihalogen“, ,,trihalogen“ i „perhalogen“ odnose se na dva, tri ili četiri supstituenta, pri čemu je svaki supstituent nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od F, Cl, Br ili I. "Halogen" poželjno znači F, Cl ili Br. Posebno su poželjni F i Cl, a naročito kada halogeni supstituenti na alkil- (haloalkil) ili alkoksi grupi su (npr. CF3i CF3O).

[0025] Indeks p poželjno označava 0, 1, 2 ili 3, a naročito poželjno 0.

Indeks t poželjno označava 1, 2, 3 ili 4, a naročito poželjno 2.

[0026] Primeri za -(CY2)p-OY, -(CY2)p-OZ, -(CY2)p-O-Het<2>, -(CY2)p-O-(CY,)rHet<2>, -(CY2)p-O-(CY,)-NYY, -(CY2)p-O-(CY2)t-OY, , -(CY2)p-NYY, -(CY2)p-COOY, -(CY2)p-CO-NYY, -(CY2)p-NY-COY, su prema tome: -OY, -OH, -O-A, -O-CH3, -O-CHF2, -O-CH2F, -O-CH2CH3, -(CH2)p-OY, -CH2-O-CH3-CH2-O-CH2CH3, -O-CH=CH2, -CH2-O-CH=CH2, -O-CH2-CH=CH2, -CH2-O-СН2-СН=СН2, -O-Het<2>, -O-CH2-Het<2>, -O-CH2CH2-Het<2>, -O-CH2-NYY, -O-CH2CH2-NYY, -O-CH2-NH2, -O-CH2CH2NH2, -O-CH2-NHCH3, -O-CH2CH2-NHCH3, -O-CH,-OY, -O-CH2CH2-OY, -O-CH2CH2CH2-OY, -O-CH2-OH, -O-CH2CH2-OH, -O-CH2CH2CH2-OH, -O-CH2-OA, -O-CH2CH2-OA, -O-СН2СН2СН2-OА, -O-СН2-ОСН3, -O-СН2СН2-ОСН2, -O-СН2СН2СН2-OСН3, -NYY, -NH2, -NHA, -NAA, -NHCH3, -N(CH3)2, -CH2-NYY, -CH2-NH2, -CH2-NHA, -CH2-NAA, -CH2-NHCH3, -CH2-N(CH3)2, -COOY, -COOA, -CH2-COOY, -СH2-СООА, -CH2-COOCH3,-CO-NYY, -CO-NAA, -CO-NHA, -CO-NH-CH3, -CH2-CO-NYY, -CH2-CO-NAA, -(CH2)p-NY- COY, -(CH2)p-NY-COA.

[0027] Pronalazak se prema tome odnosi na ona jedinjenja formule (I) u kojima bar jedan od pomenutih radikala ima jedno od gore navedenih značenja. Nespecifikovani radikali u kontekstu jedne od formule (1), njene delimične formule ili bilo kog radikala u njoj treba da imaju značenje naznačeno u formuli (I), kako je ovde otkriveno, da bi se postigao cilj pronalaska. To znači da pomenuti radikali mogu da preuzmu sva značenja koja su im dodeljena, kao što je opisano prethodno ili u daljem tekstu, uključujući bilo koja poželjna ostvarenja, a da na njih nisu ograničena i nezavisno na njihovo pojavljivanje u drugom specifičnom kontekstu. Naročito se

[0030] Prema pronalasku, u svakoj od formula (I), (II) i (IV) Het<1>je izabran između pirazolila, triazolila i imidazolila, koji mogu da budu nesupstituisani ili supstituisani kako je gore definisano za formulu (I), gde pirazolil i triazolil, a naročito [1,2,3]triazolil, su posebno poželjni.

[0031] Het<1>može da bude, na primer, nesupstituisan ili supstituisan jednim ili dva supstituenta, koji su poželjno izabrani nezavisno jedan od drugog između: alkila, koji može da bude nesupstituisan ili supstituisan jedan ili više puta halogenom, posebno sa F; -OY, -NYY, Hal, i -Het<2>, naročito poželjno metil, etil, amino, metoksi, fluormetil, difluormetil, fluor, azetidinil, pri čemu su posebno poželjni metil i etil.

1

[0032] Het<1>(u svakoj od navedenih formula) je naročito poželjno izabran od: lH-pirazol-4-il, 2H-pirazol-3-il, lH-pirazol-3-il, l-metil-lH-pirazol-4-il , 3-metil-lH-pirazol-4-il, 5-metil-lH- pirazol-3-il, 4-metil-1 H-pirazol-3-il, 1 -fluormetil-1 H-pirazol-4-il, 1 -difluormetil-1 H-pirazol-4-il, 1,3-dimetil-1 H-pirazol-4-il 1-ctil-l H-pirazol-4-il, 1 -etil-3-metil-1 H-pirazolil, 3-fluor-l-metil- lH-pirazol-4-il, 3-amino-lH-pirazol-5-il, 2H-[l,2,3]triazol-4-il, 3H-[l,2,3]triazol-4-il-, 1-metil- 1H- [l,2,3]triazol-4-il, 2-metil-2H- [l,2,3]triazol-4-il, 2-amino-lH-imidazol-4-il.6-metoksi- piridin-3-il i l-(azetidin-3-il)-3-metil-lH-pirazol-4-il. Veoma poželjan Het<1>je pirazolil, koji može da bude nesupstituisan ili supstituisan kako je gore definisano, i može da bude odabran, na primer, od 1 H-pirazol-4-il, 2H-pirazol-3-il, lH-pirazol-3-il, l-metil-lH-pirazol-4-il, 3-metil-lH- pirazol-4-il, 5-metil-lH-pirazol-3-il, 4-metil-lH-pirazol-3-iI, l-fluormetil-lH-pirazol-4-il. 1- difluormetil-l H-pirazol-4-il, 1,3-dimetil-l H-pirazol-4-il, 1 -etil-1 H-pirazol-4-il, 1 -etil-3-metil- 1 H-pirazolil, 3-fluor-l-metil-1H-pirazol-4-il, 3-amino-l H-pirazol-5-il, gde 1H-pirazol-4-il, 2H- pirazol-3-il.1H-pirazol-3-il, 1-metil-1 H-pirazol-4-il, 3-metil-I H-pirazol-4-il. 5-metil-lH-pirazol- 3-i 1, 4-metil-lH-pirazoI-3-il, 1-fluormetil-1 H-pirazol-4-il, 1,3-dimetil-lH-pirazol-4-il, 1-etil-lH- pirazol-4-il i posebno su preferirani. Alternativno, poželjno Het<1>je triazolil, koji može da bude nesupstituisan ili supstituisan kako je gore definisano, i može da bude odabran, na primer, od 2H-[ 1,2,3]triazol-4-il, 3 H- [ 1,2,3]triazol-4-il-, 1 -metil-1H-[ 1,2,3]triazol-4-il, 2-metil-2H- [1,2,3]triazol-4-il, naročito poželjno 2-metil-2H-[1,2,3]triazol-4-il.

[0033] U jedinjenjima prema pronalasku prema svakoj od formula (I), (II) i (IV), HET je odabran između sledećih 5-članih monocikličnih aromatičnih heterocikala, od kojih svaki može da bude nesupstituisan ili supstituisan kako je gore definisano: pirazolil , tiazolil, imidazolil.

[0034] Ova značenja za HET u jedinjenjima formula (I), (II), (IV) takođe se posebno primenjuju u kombinaciji sa poželjnim realizacijama za Het<1>, na primer lH-pirazol-4-il, 2H-pirazol-3-il , 1H-pirazol-3-il, 1-metil-1 H-pirazol-4-il, 3-metil-lH-pirazol-4-il, 5-metil-l H-pirazol-3-il. 4- metil-lH -pirazol-3-il, l-fluormetil-lH-pirazol-4-il, 1 -difluormetil-lH-pirazol-4-il, 1,3-dimetiI- lH-pirazol-4-il, l-etil-lH-pirazol-4-il, 1 -etil-3-metil-1H-pirazolil, 3-fluor-lmetil-lH-pirazol-4- il, 3-amino-lH-pirazol-5-il, 2H-[l,2,3]triazol-4-il,3H-[l,2,3]triazol-4-il-, 1-metil-lH-[ 1,2,3]triazol-4-il, 2-metil-2H-[ 1,2,3]triazol-4-il, 2-amino-1H-imidazol-4-il, 6-metoksipiridin-3- il i l-(azetidin-3-il)-3-metil-lH-pirazol-4-il, a naročito i posebno takođe za realizacije u kojima Het<1>predstavlja pirazolil, koji može da bude nesupstituisan ili supstituisan kao što je gore definisano i može da bude odabran, na primer, od lH-pirazoI-4-il, 2H-pirazol-3-il, 1H-pirazol-3il, l-metil-lH-pirazol-4-il, 3-metil-lH-pirazol-4-il, 5-metil-lH-pirazol-3-il, 4-metil-lH-pirazol-3il, lfluormetil-lH-pirazol-4-il. l,3-dimetil-lH-pirazol-4-il, l-etil-lH-pirazol-4-il.

[0035] Od mogućih supstituenata na HET, prednost se daje: Hal, posebno F, Cl; A, naročito metil, etil, propil; Het<2>, naročito azetidinil, tetrahidropiranil, piperazinil; -(CY2)p-OY, -(CY2)p- OA, -(CY2)p-OH, poželjno svaki sa p = 0, 1, 2, 3; -(CY2)p-OZ, -(CY2)p-O-Het<2>, -O-Het<2>, -(CY2)p-0-(CY2),-Het<2>, -O-(CY2)t-Het<2>, -O-(CH2)t-Het<2>, -(CY2)p-O-(CY2)t-NYY, -O-(CY2)t-NYY, -(CY2)p-O-(CY2),-OY, -O-(CY2)t-OY, -O-(CY2)t-OA, -O-(CY2)t-OH, -O-(CH2)t-OA, -O-(CH2)t-0H, -(CY2)p-CO-NYY, -(CY2)p-CO-NHA, na primer, aromatični heterocikli HET mogu svaki da budu supstituisani sa jednim, dva, tri ili više supstituenata koji su nezavisno izabrani iz grupe koju čine: F, Cl, metil, etil, propil, izopropil, metoksi, etoksi, propoksi, piperazinil, tetrahidropiranil, - CN, 2-mctoksietoksi, 2-hidroksietoksi, fluormetoksi, difluormetoksi, N-metilkarbamoil (-C(=O)- NH-CH3), 2-metilaminoetoksi, l-metil-azetidin-3-ilmetoksi, trideuteriometoksi, trifluormetoksi, aliloksi, piperazinil i azetidiniloksi. Nije poželjna mono- ili disupstitucija.

[0036] U drugim poželjnim realizacijama, HET je nesupstituisan, ali poželjno mono- ili disupstituisan pirazol. Ova realizacija se takođe može povoljno kombinovati sa poželjnim realizacijama Het<1>, posebno poželjna realizacija u kojima je Het<1>nesupstituisani ili supstituisani pirazolil ili nesupstituisani ili supstituisani triazolil, a posebno sa gore pomenutim posebno poželjnim realizacijama.

[0037] U poželjnim ostvarenjima svake od formula (I), (II), (IV), HET se može odabrati, na primer, iz sledećih 5-članih monocikiičnih aromatačnnih heterocikla: lH-pirazol-4-il, l-etil-3- metil-1H-pirazol-4-il, 1,2-dimetil-l H-pirazol-4-il, 1,3-dimetil-1 H-pirazol-4-il, 1 -metil-1H- pirazol-4-il, 1-(tetrahidro-piran-4-il)-1H-pirazol-4-il, 2-metil-2H-pirazol-3-iI. 3-metil-IH- pirazol-4-il, 3,5- dimetillH-pirazol-4-il, 3-fluor-l-metil-pirazol-4-il, tiazol-2-il, 2-metil-tiazol-4- il i 1-metil-lH-imidazolil. Posebno poželjni su :, 1,3-dimetil-l H-pirazol-4-il, 1 -metil-1H-pirazol-3-il, 1- (tetrahidropiran-4-il)-1 H-pirazol-4-il, i 2-metil-tiazol-4-il.

[0038] Preferencija za gore spomenute 5-člane monociklične aromatične heterocikle takođe se posebno odnosi na jedinjenja formula (I), (II), (IV) u kombinaciji s poželjnim realizacijama za Het<1>, posebno za ostvarenja u kojima Het<1>označava pirazolil, koji može biti nesupstituiran ili supstituiran kako je gore definisano i može, na primer, da bude odabran iz gore navedenih primera. Takođe se posebno primjenjuju na realizacije u kojima Het<1>označava triazolil, i može da bude odabran, na primer, iz gore navedenih primera.

[0039] Posebna prednost se daje jedinjenjima koja su navedena u donjoj Tabeli 1, kao i njihove farmaceutski korisne soli, solvati, tautomeri i/ili stereoizomeri odn. slobodni oblici, uključujući njihove smese u svim odnosima.

1

�

�

�

[0040] Svako od značenja za R1, R3, HET i Hetl otkriveno u kontekstu gore navedenih poželjnih jedinjenja treba smatrati poželjnim značenjem odgovarajućeg radikala, nezavisno od druge supstitucije osnovne strukture molekula, tj. kao moguća značenja R1, R3, HET, i Hetl u svakom slučaju nezavisno jedno od drugog.

Dobijanje

[0041] Jedinjenja formule (I) i takođe polazni materijali za njihovo dobijanje, pripremaju se postupcima sami po sebi poznatim, kao što je opisano u literaturi (na primer u standardnim radovima poput Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie, Georg-Thieme-Verlag, Stuttgart), i/ili su poznati stručnjacima u ovom području tehnike, i to pod reakcijskim uslovima koji su poznati i prikladni za navedene hemijske reakcije. Ovde se takođe mogu da koriste

1

varijante koje su same po sebi poznate i ovde se ne opisuju detaljnije. Jedinjenja prema pronalasku mogu da se dobiju podesnim izborom ili prilagođavanjem polaznih materijala pomoću ili analogno sintezama detaljno opisanim u PRIMERIMA 1 do 13. Za većinu jedinjenja prema pronalasku, sinteza prikazana u PRIMERU i može da se na odgovarajući način modifikuje i na taj način analogno primeni. Derivati amina i esteri ili analozi borne kiseline koji se mogu upotrebiti u odgovarajućim sintezama dati su sumarno u Shemi 4 u daljem tekstu. Takođe, referenca upućuje na opis WO 2010/139731 koji je referencom u potpunosti uključen u ovo otkriće.

[0042] Postupak i naknadna obrada reakcione smese mogu se u principu izvoditi kao šaržna reakcija ili u kontinuiranom reakcijom. Kontinuirana reakcija uključuje, na primer, reakciju u reaktoru s kontinuiranim mešanjem u rezervoaru, kaskadu protočnih reaktora sa mešanjem, reaktor sa povratnim tokom ili poprečnim protokom, cevne reaktore ili u mikroreaktoru. Reakcione smese mogu se obraditi, po potrebi, filtracijom kroz čvrste faze, hromatografijom, razdvajanjem faza koje se ne mešaju (npr. ekstrakcija), adsorpcijom na čvstim podlogama, predestilovanjem rastvarača i/ili azeotropne smese, selektivnom destilacijom, sublimacijom, kristalizacijom, ko-kristalizacijom ili nanofiltracijom na membranama.

[0043] Polazna jedinjenja su obično poznata. Ako su nova, mogu da se pripreme poznatim metodama. Po potrebi, polazni materijali mogu da se formiraju in-situ, tako da se ne izoluju iz reakcione smese, već odmah dalje reaguju dajući jedinjenja prema pronalasku. Takođe je moguće fazno izvođenje reakcije.

Farmaceutski upotrebljivi oblici

[0044] U okviru pronalaska, jedinjenja prema pronalasku su definisana tako da su obuhvaćene farmaceutski upotrebljive soli, solvati uključujući hidrate, prekursore jedinjenja, tautomere i optički aktivne oblike (kao što su, na primer, stereoizomeri, dijastereomeri, enantiomeri, racemati). Pronalazak se takođe odnosi na upotrebu smesa jedinjenja formule (I), na primer smesa dva dijastereomera, na primer u odnosu 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:10, 1:100 ili 1:1000. Posebno su poželjne smese stereoizomernih jedinjenja.

[0045] Pod solvatima jedinjenja podrazumeva se dodavanje molekula inertnih rastvarača u jedinjenja koji nastaju usled njihove međusobne privlačnosti. Solvali su npr. mono- ili dihidrati ili alkoholati.

1

[0046] Navedena jedinjenja prema pronalasku mogu da se upotrebe u konačnom obliku koji nije oblik soli. S druge strane, ovaj pronalazak takođe obuhvata upotrebu ovih jedinjenja u obliku njihovih farmaceutski prihvatljivih soli, koje se mogu dobiti iz različitih organskih i neorganskih kiselina i baza prema postupcima poznatim u tehnici. Farmaceutski prihvatljivi oblici soli jedinjenja prema pronalasku uglavnom se proizvode konvencionalnim metodama. Ako jedinjenja sadrže karboksilnu grupu, jedna od njihovih prikladnih soli može da se dobije reakcijom jedinjenja sa pogodnom bazom dajući odgovarajuću adicionu so baze. Takve baze su, na primer, hidroksidi alkalnih metala (npr. kalijum hidroksid, natrijum hidroksid i litijum hidroksid), hidroksidi zemnoalkalnih metala (npr. barijum hidroksid i kalcijum hidroksid), alkoholati alkalnih metala (npr. kalijum etoksid i natrijum propanolat) i različite organske baze kao što su piperidin, dietanolutamin i N-metilglutamin. Baza može da se konvertuje u pripadajuće adicione soli kiseline, na primer reakcijom ekvivalentnih količina baze i kiseline u inertnom rastvaraču, kao što je, na primer, etanol, i naknadnim isparavanjem. Za ovu reakciju posebno su pogodne kiseline koje daju fiziološki prihvatljive soli, kao što su halogenovodonici (npr. hlorovodonik, bromvodonik ili jodovodonik), druge mineralne kiseline i njihove odgovarajuće soli (npr. sulfat, nitrat ili fosfat i slično), alkil- i mono-arilsulfonati (npr. etansulfonat, toluensulfonat i benzensulfonat) kao i druge organske kiseline i njihove odgovarajuće soli (npr. acetat, trifluoracetat, tartrat, maleat, sukcinat, citrat, benzoat, salicilal, askorbat i slično, Soli sa fiziološki neprihvatljivim kiselinama. npr. za pikrate, mogu se koristiti za izolovanje i/ili prečišćavanje jedinjenja prema pronalasku.

[0047] S obzirom na gore rečeno, može se videti da izraz „farmaceutski upotrebljiva so“, ili takođe „farmaceutski nesporna“ ili „farmaceutski prihvatljiva“ so, treba u ovom kontekstu razumeti kao jedinjenje prema pronalasku koja je u obliku jedne od svojih soli, posebno kada ovaj oblik soli daje poboljšano famrakokinetičko svojstvo jedinjenju u poređenju sa njegovim slobodnim oblikom. Farmaceutski prihvatljiv oblik soli jedinjenja takođe može dati ovom jedinjenju željeno farmakokinetičko svojstvo i može čak i pozitivno da utiče na farmakodinamiku jedinjenja uzimajući u obzir njegovu terapijsku efikasnost u telu.

[0048] Zbog svoje molekulske strukture, jedinjenja prema pronalasku mogu da budu hiralna i shodno tome da se javljaju u različitim enantiomernim oblicima. Stoga mogu da budu u racemskom ili optički aktivnom obliku. Budući da farmaceutska aktivnost racemata ili stereoizomera jedinjenja formule (I) mogu da se razlikuju, može da bude poželjna up otreba

2

enantiomera. U tim slučajevima krajnji proizvod ili čak intermedijerni proizvod mogu da se razdvoje u enantiomerna jedinjenja hemijskim ili fizičkim merenjima poznatim stručnjaku ili se već mogu koristiti kao takvi u sintezi.

[0049] Dobro je poznato da atomi mogu imati atomske mase ili masene brojeve koji mogu da se razlikuju od uobičajenih atomskih masa ili masenih brojeva. Primeri izotopa koji su komercijalno dostupni i koji se poznatim postupcima mogu ugraditi u jedinjenje prema pronalasku su izotopi vodonika, ugljenika, azota, kiseonika, fosfora, fluora i hlora, na primer.<2>H,<3>H,<13>C,<14>C,<l5>N,<18>О,<l7>O,<31>P,<32>P,<35>S,<18>F i<36>C1. Inkorporacija težih izotopa, posebno deuterijuma (<2>H) u jedinjenje prema pronalasku ima terapeutske prednosti koje se temelje na većoj metaboličkoj stabilnosti ovog jedinjenja obeleženog izotopom. Veća metabolička stabilnost direktno dovodi do povećanog poluživota in vivo, što omogućuje niže doze.

[0050] Definicije atoma H, C, N itd., kako se koriste u jedinjenjima prema pronalasku, se prema tome odnose i na teže izotope ovih atoma.

[0051] Posebna prednost je prema pronalasku, data upotrebi D (deuterijuma,<2>H) umesto vodonika (<1>H). Deuterijum se, na primer, može ugraditi u jedinjenja prema pronalasku pomoću odgovarajućeg supstituenta na HET, npr. trideuteriometil ili trideuteriometoksi.

Upotreba

[0052] Neočekivano je utvrđeno da jedinjenja prema pronalasku dovode do specifične inhibicije proteinskih kinaza, posebno ATM kinaze. Shodno tome, ovaj pronalazak osigurava ATM inhibitore koji su odabrani od jedinjenja prema pronalasku.

[0053] U kontekstu ovde predstavljenog pronalaska, po prvi put su obezbeđena nova jedinjenja 2,3-dihidro-1H-imidazol[4,5-c]hinolina. Jedinjenja prema pronalasku afinitetno i/ili selektivno kontrolišu serin-treonin proteinske kinaze, a posebno ATM kinazu. Jedinjenja formule (I) odlikuju se visokom specifičnošću i stabilnošću, niskim proizvodnim troškovima i jednostavnim rukovanjem. Takva svojstva čine osnovu za ponovljiv način delovanja i pouzdanu i sigurnu interakciju sa odgovarajućim ciljnim strukturama. Pronalazak takođe uključuje upotrebu prisutnih 2,3-dihidro-1H-imidazol[4,5-c]kinolin-derivata za inhibiciju, regulaciju i/ili modulaciju signalne kaskade serintreonin-proteinskih kinaza, posebno ATM kinaze, i tako nude nove alate za istraživanje i/ili dijagnostiku.

[0054] Pronalazak se prema tome takođe odnosi na upotrebu jedinjenja prema pronalasku i/ili njihovih fiziološki prihvatljivih solvata, soli, tautomera i/ili stereoizomera, uključujući njihove smese u svim odnosima, za inhibiciju serin-treonin-proteinskih kinaza, posebno ATM kinaze. Izraz "inhibicija" odnosi se na svako smanjenje aktivnosti zasnovano na delovanju specifičnih jedinjenja prema pronalasku, na način da potonji mogu da komuniciraju sa ciljnim molekulom na takav način da je omogućeno prepoznavanje, vezivanje i blokiranje. Jedinjenja se odlikuju visokim afinitetom za ATM kinazu, što osigurava pouzdano vezanje i po mogućnosti potpunu blokadu aktivnosti kinaze. Jedinjenja su takođe veom selektivna i tako omogućavaju isključivo i direktno prepoznavanje ATM kinaze. Pojam "prepoznavanje" ovde se odnosi na bilo koju vrstu interakcije između jedinjenja i ciljanih molekula, posebno kovalentne ili nekovalentne veze, kao što su kovalentna veza, hidrofobne/ hidrofilne interakcije, van der Waalsove sile, jonsko privlačenje, vodonične veze, interakcije ligandreceptor, sparivanja baza nukleotida ili interakcija između epitopa i mesta vezivanja antitiela.

[0055] Jedinjenja prema pronalasku i/ili njihove fiziološki prihvatljive soli, tautomeri i/ili stereoizomeri, uključujući njihove smese u svim odnosima, pogodni su za lečenje bolesti koje su uzrokovane, posredovane i/ili uznapredovale aktivnošću serin-treonin-proteinskih kinaza, posebno ATM.

[0056] Predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenja i/ili njihove fiziološki prihvatljive solvate, soli, tautomere i/ili stereoizomere, uključujući njihove smese u svim odnosima za upotrebu kao lek. Prema pronalasku, jedinjenja prema pronalasku i/ili njihove fiziološki prihvatljive soli, tautomeri i/ili stereoizomeri, uključujući njihove smese u svim odnosima, za upotrebu u lečenju bolesti koje su uzrokovane, posredovane i/ili uznapredovale aktivnošću serin-treonin-proteinskih kinaza, posebno ATM.

[0057] Predmetni pronalazak se prema tome takođe odnosi na jedinjenja prema pronalasku i/ili njihove fiziološki prihvatljive solvate, soli, tautomere i/ili stereoizomere, uključujući njihove smese u svim odnosima, za upotrebu u lečenju bolesti koje su uzrokovane, posredovane i/ili uznapredovale aktivnošću serin-treonin-proteinskih kinaza, posebno ATM kinaze. Predmetni pronalazak se prema tome takođe odnosi na upotrebu jedinjenja prema pronalasku i/ili njihovih fiziološki prihvatljivih solvata, soli, tautomera i/ili stereoizomera, uključujući njihove smese u svim odnosima, za proizvodnju leka za lečenje bolesti koje su uzrokovane, posredovane i/ili uznapredovale aktivnošću serin-treonin-proteinskih kinaza, posebno ATM kinaze. Drugim rečima, ovaj pronalazak takođe otkriva jedinjenje prema pronalasku i/ili njegovu farmaceutski prihvatljivu sol, solvat, tautomer ili stereoizomer za uporabu u lečenju bolesti na koje utiče inhibicija ATM kinaze.

[0058] Razvijeni su odgovarajući modeli ili sistemi modela kako bi se identifikovao odgovarajući put prenosa signala i pokazale interakcije između različitih puteva prenosa signala, npr. modeli ćelijske kulture (Khwaja i et al. (1997) EMBO 16: 2783) i modeli transgenih životinja (White et al. (2001) Oneogene 20: 7064). Da bi se odredile određene faze u kaskadi prenosa signala, za moduliranje signala (Stephens et al. (2000) Biochemical J 351: 95) mogu da se koriste jedinjenja u interakciji. Uz to, jedinjenja prema pronalasku mogu takođe da se koriste kao reagensi za ispitivanje puteva prenosa signala zavisnih od kinaze, na životinjama i/ili modelima ćelijskih kultura ili u kliničkim bolestima navedenim u ovoj prijavi. Kao što je ovde diskutovano, ovi signalni putevi relevantni su za različite bolesti. Shodno tome, jedinjenja prema pronalasku su korisna u profilaksi, terapiji i/ili praćenju toka bolesti koje zavise od signalnih puteva koji uključuju serin-treoninproteinske kinaze, poželjno ATM kinazu. Ovaj pronalazak se takođe odnosi na jedinjenja prema pronalasku i/ili njihove fiziološki prihvatljive solvate, soli, tautomere i/ili stereoizomere, uključujući njihove smese u svim odnosima, za upotrebu u lečenju raka, tumora i/ili metastaza ili njihovih upotreba u proizvodnji leka za ove namene.

[0059] Tumor je posebno odabran iz grupe oboljenja skvamoznog epitela, bešike, želuca, bubrega, glave, vrata, jednjaka, grlića materice, štitaste žlezde, creva, jetre, mozga, prostate, urogenitalnog trakta, limfnog sistema, larinksa, pluća, kože, krvi i imunskog sistema i/ili rak je odabran iz grupe koju čine monocitna leukemija, adenokarcinom pluća, rak malih ćelija pluća, rak pankreasa, glioblastom, rak debelog creva, rak dojke, akutna mijelocitna leukemija, hronična mijelocitna leukemija, akutna limfatična leukemija, hronična mijelocitna leukemija, hronična limfatična leukemija, Hodžkinov limfom i ne-Hodžkinov limfom.

[0060] Ovo otkriće se odnosi i na postupak za proizvodnju leka, poželjno za upotrebu u lečenju raka i/ili tumora, poželjno gore navedenih vrsta raka odn. tumora, koji obuhvata:

i. utvrđivanje da koncentracija pri kojoj se jedinjenj pronalaska i/ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, solvat, tautomer ili stereoizomer postiže 50% inhibicije aktivnosti ATM kinaze iznosi 500 nM ili manje, poželjno od 100 nM, 10 nM, 1 nM. ili manje i

2

ii. priprema farmaceutske kompozicije koja sadrži jedinjenje.

[0061] Određivanje 50% inhibicije aktivnosti ATM kinaze poželjno se izvodi uz pomoć ovde opisanog testa (IC50 ATM).

[0062] Jedinjenja prema pronalasku i/ili njihovi fiziološki prihvatljivi solvati, soli, tautomeri i/ili stereoizomeri, uključujući njihove smese u svim odnosima, takođe mogu da budu pogodna za upotrebu u usporavanju procesa starenja, pri čemu se usporavanje odvija na osnovu poređenja životnog veka tretiranog domaćina ili njegovih ćelija, ćelijskih kultura, tkiva ili organa sa odgovarajućim pozitivnim ili negativnim kontrolama i/ili statistikom.

[0063] Pronalazak takođe podučava postupak za lečenje raka, tumora i/ili metastaza, gde efikasna količina najmanje jednog jedinjenja prema pronalasku i/ili njegovih fiziološki prihvatljivih solvata, soli, tautomera i/ili stereoizomera, uključujući njihove smese u svim odnosima se daje subjektu koji se leči. Poželjni subjekti u svrhu pronalaska su ljudi ili životinje, naročito požcljno ljudi. Stručnjak u ovoj oblasti je svestan da može da primeni jedinjenja prema pronalasku, koja se naravno mogu koristiti i kao farmaceutska sredstva prema pronalasku, u različitim dozama organizmu, posebno humanom pacijentu. Stručnjak može rutinskim eksperimentima da odredi efikasnu količinu i vrstu primene. Prethodno učenje pronalaska i njegovih izvođenja je validno i može da se primeni na metod lečenja bez ograničenja, ukoliko se čini odgovarajućim.

[0064] Predmetni pronalazak se takođe odnosi na upotrebu jedinjenja prema pronalasku i/ili njegovog farmaceutski upotrebljivog derivata, soli, solvata, tautomera ili stereoizomera za inhibiciju protein kinaze, i to naročito ATM kinaze in vitro. Navedena upotreba jedinjenja prema pronalasku i/ili njihovih farmaceutski upotrebljivih solvata, soli, tautomera i/ili stereoizomera, uključujuci njihove smese u svim odnosima, za inhibiciju serin-treonin-proteinskih kinaza, posebno ATM kinaze, može se izvršiti na in vitro ili in vivo modelima. Osetljivost određene ćelije na tretman jedinjenjima prema pronalasku može se utvrditi ispitivanjem in vitro. Tipično, ćelijska kultura se inkubira sa jedinjenjem predmetnog pronalaska u različitim koncentracijama tokom određenog vremenskog perioda koji je dovoljan da aktivni agensi indukuju ćelijsku smrt ili da inhibiraju ćelijsku proliferaciju, vitalnost ili migraciju ćelije, obično između oko sat vremena i nedelju dana. Kultivisane ćelije iz uzorka biopsije mogu se koristiti za testiranje in vitro. Zatim se određuje količina ćelija preostalih nakon tretmana. Upotreba in vitro se posebno izvodi na uzorcima vrsta sisara koji su oboleli od raka, tumora, metastaza, poremećaja angiogeneze, retrovirusnih bolesti, imunoloških bolesti i/ili patogenih procesa starenja. Domaćin ili pacijent može da pripada bilo kojoj vrste sisara, npr. vrsta primata, posebno ljudi, ali i glodara (uključujuci miševe, pacove i hrčke), zečeva, konja, goveda, pasa, mačaka itd. Životinjski modeli su od interesa za eksperimentalna ispitivanja, pri čemu se obezbeđuje model za lečenje bolesti kod ljudi.

[0065] Testiranje nekoliko specifičnih jedinjenja omogućava odabir jedinjenja ili aktivnog sastojka koji se čini najpogodnijim za lečenje pacijenta. Doza izabranog jedinjenja in vivo povoljno se podudara sa osetljivošću kinaze i/ili težinom bolesti pacijenta s obzirom na podatke in vitro, kao rezultat toga, terapijska efikasnost je znatno povećana. Doza će varirati u zavisnosti od specifičnog upotrebljenog jedinjenja, specifične bolesti, statusa pacijenta itd. Tipično je terapijska doza dovoljna da značajno smanji neželjenu populaciju ćelija u ciljnom tkivu, a da istovremeno održi vitalnost pacijenta.

[0066] Lečenje se generalno nastavlja sve dok ne dođe do značajnog smanjenja, na primer, najmanje oko 50 % smanjenja opterećenja ćelija, i može se nastaviti sve dok u telu u biti više ne budu otkrivene neželjene ćelije. U takvim ispitivanjima, jedinjenja prema pronalasku pokazuju i izazivaju inhibirajuće dejstvo, što se obično dokumentuje vrednostima IC50u pogodnom opsegu, poželjno u mikromolarnom opsegu i još poželjnije u nanomolarnom opsegu. Kinaza je inhibirana na 50 %, naročito kada je koncentracija jedinjenja manja od 1 μM, poželjno jednaka ili manja od 0,5 μМ, naročito poželjno manja od 0,1 μM, 0,05 μM ili 0,001 μM. Ova koncentracija se naziva 1C50vrednost i poželjno se određuje pomoću ovde opisanog testa (IC50 ATM). Prema uobičajenoj nomenklaturi, „μM“ označava mikromole po litru. ,,nM“ za nanomole po litru.

Ispitivanja

[0067] Jedinjenja prema pronalasku pokazuju korisnu biološku aktivnost koja se može otkriti u ovde opisanim testovima, kao što su na primer testovi na bazi enzima.

[0068] Merenje aktivnosti kinaze je tehnika dobro poznata stručnjacima. U literaturi su opisani generički sistemi testova za određivanje aktivnosti kinaze sa supstratima, npr. Histon (Alessi et

24

2

al. (1996) FEBS Lett. 399(3): 333) ili osnovnim proteinom mijelina (Campos-Gonzalez i Glenney (1992) JBC 267: 14535). Dostupni su različiti sistemi ispitivanja za identifikaciju inhibitora kinaze. U testu scintilacione blizine (Sorg et al. (2002) J Biomolecular Screening 7: 11) i FlashPlate testu, radioaktivna fosforilacija proteina ili peptida kao supstrata meri se ATP- om. Ako je prisutno inhibitorno jedinjenje, ne može se otkriti nikakav ili smanjeni radioaktivni signal. Pored toga, tehnologije Fluorescentnog rezonantnog prenosa energije homogenom tehnikom vremenski razlučene fluorescencije (HTR-FRET-) i tehnologije fluorescentne polarizacije (FP-) su korisne kao metode ispitivanja (Sills et al. (2002) J Biomolecular Screening 191). Druge neradioaktivne ELISA metode koriste specifična fosfo-antitela (fosfo-AK). Fosfo- AK vezuje samo fosforilovani supstrat. Ovo vezivanje se može detektovani hemiluminescencijom koristeći drugo anti-Schaf antitelo konjugovano sa peroksidazom.

[0069] U kontekstu ovog pronalaska, inhibicija aktivnosti ATM-a poželjno se određuje uz pomoć sledećeg ispitivanja:

Analiza ATM kinaze - Određivanje inhibicije ATM (IC50 ATM):

[0070] Vrednost IC50je određena uz pomoć biohemijskog testa ATM kinaze. Analiza se sastoji od dva koraka: enzimske reakcije i koraka detekcije. Prvo su ATM proteini (Ataxia Telangiectasia Mutiran) i ispitivana supstanca inkubiraju u različitim koncentracijama plus protein supstrata p53 i ATP. ATM posreduje u fosforilaciji p53 na nekoliko položaja, uključujući između ostalog aminokiselinu S15. Količina fosforilovanog p53 otkriva se uz pomoć specifičnih antitela i TR-FRET-tehnike. ATM enzimski test izvodi se kao TR-FRET-(HTRF ™, Cisbio Bioassays) na 384 ležišta. U prvom se koraku prečišćeni humani rekombinantni ATM (humani ATM, pune dužine, GenBank-ID NM 000051, eksprimiran u ćelijskoj liniji sisara) inkubira u puferu za analiziranje tokom 15 minuta sa inhibitorom ATM u različitim koncentracijama i bez supstance za testiranje kao negativna ili neutralna kontrola. Pufer za ispitivanje sadrži 25 mM HEPES pH 8,0, 10 mM Mg(CH3COO)2, 1 mM MnCb, 0,1% BSA, 0.01% Brij® 35, 5 mM ditiotreitol (DTT). Rastvori supstance za ispitivanje dozirani su u mikrotitarske pločice sa ECHO 555 (Labcyte). U drugom koraku dodaju se prečišćeni humani rekombinantni cmycobeleženi p53 (humani p53, pune dužine, GenBank ID BC003596, eksprimiran u Sf21 ćelijama insekata) i ATP i reakciona smesa se inkubira na 22°C tokom 30 - 35 minuta. Farmakološki relevantna količina za ispilivanje je 5 μl. Konačne koncentracije u testu tokom inkubacije reakcione smese

2

su 0,3 - 0,4 nM ATM, 50 - 75 nM p53 i 10 μM ATP. Enzimska reakcija se zaustavlja dodavanjcm EDTA. Stvaranje fosforilovanog p53 kao rezultat reakcije posredovane ATM-om u prisustvu ATP-a otkrivaju specifična antitela [označena fluoroforama europijuma (Eu) kao donorom i d2 kao akceptor (Cisbio bioanalize)], koja omogućavaju FRET. U tu svrhu, u reakcionu smesu je dodato 2 μl stop rastvora koji sadrži antitela (12,5 mM HEPES pH 8,0, 125 mM EDTA, 30 mМ natrijum hlorid, 300 mM kalijum fluorid, 0.006 % Tween-20, 350,005 % Brij®, 0,21 nM anti-fosfo p53(serl 5)-Eu antitelo, 15 nM anti-cmyc-d2 antitelo). Nakon obično 2 sata inkubacije (između 1,5 i 15 sati), ploče se analiziraju na razvoj signala u čitaču ploča (EnVision, PerkinElmer) primenom TRF načina (kao i uz lasersko pobuđivanje). Nakon pobude donorskog europijuma na talasnoj dužini od 340 nm, meri se fluorescentna svetlost koja se emituje i iz akceptora d2 na 665 nm i iz donorskog Eu na 615 nm. Količina fosforilovanog p53 je direktno proporcionalna količniku emitovanih količina svetlosti, odnosno relativnim jedinicama fluorescencije (RFU) na 665 nm i 615 nm. Podaci merenja obrađeni su pomoću softvera Genedata Screener. Određivanje 1C50se vrši naročito prilagođavanjem krive doza-efekat na tačke podataka pomoću nelinearne regresione analize.

IC50= polovina maksimalne inhibitorne koncentracije

ATP = adenozin trifosfat

TR-FRET = fluorescentni rezonantni prenos energije homogenom tehnikom vremenski razlučcne fluorescencije

HTRF® = homogena vremenski razlučena fluorescencija

HEPES = 2-(4-(2-hidroksietil)-l-piperazinil)-etansulfonska kiselina

Mg(CH3COO)2= magnezijum acetat

MnCl2= mangan (II)-hlorid

BSA = goveđi serum albumin

EDTA = etilendiamintetraacetat

TRF = fluorescencija razlučena vremenom

[0071] Aktivnost tvari prema pronalasku u staničnom okruženju može se odrediti pomoću sedećih testova:

2

Celularni test pCHK2:

[0072] Da bi se identifikovale supstance koje inhibiraju fosforilaciju proteinske kinaze CHK2 na aminokiselmskom treoninu68, u ćelijama HCT116 korišćen je test analize „visokog sadržaja“ zasnovan na imunofluorescenciji.

[0073] In vitro analiza imunofluorescencije zasnovan na ćelijama za identifikaciju inhibitora fosforilacije CHK2 (fosfo-Thr68) indukovane bleomicinom u ćelijskoj liniji HCT116 humanog raka debelog creva; HCT116 ćelije su zasejane u definisanoj gustini ćelija u pločama sa 384 ležišta u medijumu za kulturu (DMEM sa visokim sadržajem glukoze, 2 mM GlutaMax, 1 mM Na-piruvat, 10% FCS) i inkubirane preko noći na 37°C i 10% CO2. Sledećeg dana, supstance za testiranje su dodate u definisanom opsegu koncentracija (1nM do 30μM) u kombinaciji sa 10μμM bleomicina, pri čemu se koncentracija DMSO rastvarača održava konstantnom na 0,5%. Nakon četiri sata inkubacije na 37°C i 10% CO2ćelije su fiksirane (15min 4% formaldehida u PBS), permeabilizovane (10min 0,2% Triton Х-100 u PBS) i nakon blokiranja nespecifičnih mesta vezivanja (10% kozjeg seruma, 1% BSA u PBS) inkubirano preko noći na 4°C sa specifičnim anti-pCHK2 antitelom (Cell Signaling #2661). Detekcija pCHK2 (Thr68) izvodi se pomoću Alexa488-obeleženog sekundarnog anti-zečjeg-IgG-antitela. Paralelno bojenje DNK propidijum jodidom omogućava određivanje broja ćelija. Signal pCHK2 se detektuje pomoću slike sa visokim sadržajem (IMX Ultra kompanije Molecular Devices) i automatskom analizom slike pomoću softvera MetaXpress koji pripada uređaju. Određuje se broj ćelijskih jezgara koja imaju signal pCHK2 preko definisane pozadine.

[0074] Nadalje, učinak, posebno inhibicija, drugih kinaza, a time i selektivnost jedinjenja prema pronalasku može se odrediti pomoću sledećih ispitivanja:

mTOR (humani)

[0075] mTOR (čovek) inkubiran je sa 50 mM HEPES pH 7,5, 1 mM EGTA, 0,01% Tween 20, 2 mg/ml supstrata, 3 mM MnCl2i [γ-<33>P-ATP] (specifična aktivnost približno 500 cpm/pmol, koncentracija prema potrebi). Reakcija je započela dodavanjem rastvora MgATP. Posle inkubacije tokom 40 minuta na sobnoj temperaturi, reakcija je zaustavljena dodavanjem 3% fosforne kiseline. Zatim je naneto10 μL reakcionog rastvora na filter podlogu P30 i ispere tri

2

puta po 5 minuta u 75 mM fosforne kiseline i jednom u metanolu, osuši i proceni pomoću tečnog scintilacijskog brojača.

PI3K р110α/р85α (humani), neradioaktivni test

[0076] PI3K p110α/p85α (čovek) inkubiran je u puferu za ispitivanje koji se sastoji od 10 μM fosfatidilinozitol-4,5-bisfosfata i MgATP (koncentracija prema potrebi). Reakcija je započeta dodavanjem rastvora ATP. Posle inkubacije tokom 40 minuta na sobnoj temperaturi, reakcija je zaustavljena dodavanjem rastvora koji se sastoji od EDTA i biotinilinovanog fosfatidilinozitol- 3,4,5-trisfosfata. Na kraju je dodat pufer za detekciju, koji se sastoji od anti-GST monoklonalnih antitela obeleženih europijumom, GRPl PH domena obeleženog GST-om i streptavidin alofikocijanina. Ploča je očitana pomoću homogene vremenski razlučene fluorescencije (HTRF) i odgovarajući signali su procenjeni pomoću formulc HTRF = 10000 х (Em665nm/Em620nm).

P13K р110β/р85α (humani), neradioaktivni test

[0077] PI3K p110β/p85α (čoveka) inkubiran je u puferu za ispitivanje koji se sastoji od 10 μM fosfatidilinozitol-4,5-bisfosfata i MgATP (koncentracija prema potrebi). Reakcija je započeta dodavanjem rastvora MgATP. Posle vremena inkubacije od 30 minuta na sobnoj temperaturi, reakcija je zaustavljena dodavanjem rastvora koji se sastoji od EDTA i biotinilinovanog fosfatidilinozitol-3,4,5-trisfosfata. Na kraju je dodat pufer za detekciju koji se sastoji od anti- GST monoklonskog antitela obeleženog europijumom, GRP1 PH domena obeleženog GST-om i streptavidin alofikocijanina. Ploča je očitana pomoću homogene vremenski razlučene fluorescencije (HTRF) i odgovarajući signali su procenjeni pomoću formule HTRF = 10000 х (Em665nm/Em620nm).

P13K р110δ/р85α (humani), neradioaktivni test

[0078] PI3K p110δ/р85α (čoveka) inkubiran je u puferu za ispitivanje koji se sastojao od 10 μM fosfatidilinozitol-4,5-bisfosfata i MgATP (koncentracija prema potrebi). Reakcija je započeta dodavanjem rastvora MgATP. Posle vremena inkubacije od 30 minuta na sobnoj temperaturi, reakcija je zaustavljena dodavanjem rastvora koji se sastoji od EDTA i biotinilinovanog fosfatidilinozitol-3,4,5-trisfosfata. Na kraju je dodat pufer za detekciju koji se sastoji od anti- GST monoklonalnog antitela obeleženog europijumom, GRP1 PH domena obeleženog GST-om i streptavidin alofikocijanina. Ploča je očitana pomoću homogene vremenski razlučene

2

fluorescencije (HTRF) i odgovarajući signali su procenjeni pomoću formule HTRF = 10000 х (Em665nm/Em620nm).

PI3K (р120γ) (humani), neradioaktivni test

[0079] PI3K (pl20γ) (čoveka) inkubiran je u puferu za ispitivanje koji se sastojao od 10 μM fosfatidilinozitol-4,5-bisfosfata i MgATP (koncentracija prema potrebi). Reakcija je započeta dodavanjem rastvora MgATP. Posle vremena inkubacije od 30 minuta na sobnoj temperaturi. reakcija je zaustavljena dodavanjem rastvora koji se sastoji od EDTA i biotinilinovanog fosfatidilinozitol-3,4,5-trisfosfata. Na kraju je dodat pufer za detekciju koji se sastoji od anti- GST monoklonalnog antitela obeleženog evropijumom, GRP1 PH domena obeleženog GST-om i streptavidin alofikocijanina. Ploča je očitana pomoću homogene vremenski razlučene fluorescencije (HTRF) i odgovarajući signali su procenjeni pomoću formule HTRF = 10000 х (Etn665nm/Em620nm).

MgATP = magnezijum 5'-O-[hidroksi({[(hidroksifosfinato)oksi]fosfinato}oksi)-fosforiljadenozin

MgCl2= magnezijum dihlorid

EGTA = etilen glikol-bis(aminoetiletar)-N,N,N',N'-tetrasirćetna kiselina

Tween 20 = polisorbat 20

Lekovi / Farmaceutska kompozicija

[0080] Pronalazak se takođe odnosi na lek ili medikament koji sadrži najmanje jedno jedinjenje prema pronalasku i/ili njegove fiziološki prihvatljive solvate, soli, tautomere i/ili stereoizomere, uključujući njihove smese u svim odnosima.

[0081] Pronalazak se takođe odnosi na farmaceutsku kompoziciju koja sadrži efikasnu količinu najmanje jednog jedinjenja prema pronalasku i/ili jedne od njegovih fiziološki prihvatljivih soli, solvata, tautomera i/ili stereoizomera, uključujući njihove smese u svim odnosima, opciono zajedno sa najmanje jednim farmaceutski kompatibilnim ekscipijensom ili po izboru nosač i/ili ekscipijens.

[0082] Pod ,,lekom“, ,,medikamentom“ kao i „farmaceutskom kompozicijom“ ili „farmaceutskom formulacijom“ podrazumeva se bilo koje sredstvo koje se može koristiti u profilaksi, terapiji, praćenju ili pratećem lečenju pacijenata koji barem privremeno ima patogene modifikacije ukupnog stanja odn. pokazuju stanje pojedinih delova organizma pacijenta, ponajpre kao rezultat raka, tumora i/ili metastaza.

[0083] Da bi se povećao zaštitni ili terapeutski efekat jedinjenja prema pronalasku, mogu se dodati farmaceutski prihvatljivi adjuvansi. Za potrebe pronalaska, bilo koja supstanca koja omogućava, pojačava ili modifikuje efekat sa jedinjenjima prema pronalasku je ,,adjuvans“. Poznati adjuvansi su, na primer, jedinjenja aluminijuma kao što su aluminijum hidroksid ili aluminijum fosfat, saponini poput npr. QS 21, muramil dipeptid ili muramil tripeptid, proteini poput gama interferona ili TNF, MF 59, fosfat dibilholin, skvalen ili polioli. Istovremena primena albumina jajeta u kompletnom Freundovom adjuvansu takođe može da indukuje povećan ćelijski-posredovan imunitet i na taj način podrži efekat neutralisanja nastalih antitela. Dalje, DNK koja ima imunostimulaciono svojstvo ili koja kodira protein sa pomoćnim dejstvom, kao što je citokin, može da se primeniti paralelno ili u konstrukt.

[0084] Prema pronalasku, farmaceutski agens se može uneti u ćeliju ili organizam na bilo koji način koji omogućava kinazama da dođu u kontakt sa jedinjenjima koja se nalaze u kompoziciji. usled čega se indukuje odgovor. Farmaceutski agens ovog pronalaska može da se koristi oralno, transdermalno, transmukozno, transuretalno, vaginalno, rektalno, plućno, enteralno ili parenteralno. Odabrani tip primene zavisi od indikacije, doze koja se primenjuje, pojedinačno specifičnih parametara itd. Konkretno, različiti tipovi primene omogućavaju terapiju specifičnu za određenu lokaciju koja minimizira neželjene efekte i smanjuje dozu aktivnog sastojka. Veoma poželjne injekcije su intradermalne, potkožne, intramuskularne ili intravenske injekcije. Aplikacija se može primeniti, na primer, uz pomoć takozvanih pištolja za vakcinaciju ili pomoću šprica. Takođe je moguće obezbediti supstancu u obliku aerosola koji udiše organizam, po mogućnosti humani pacijent.

[0085] Oblici doziranja farmaceutskog agensa proizvode se sa uobičajenim čvrstim ili tečnim nosačima i/ili razblaživačima i pomoćnim sredstvima koja se uobičajeno koriste u skladu sa željenom vrstom primene u odgovarajućoj dozi i na način poznat sam po sebi. U principu, farmaceutski prihvatljivi i ekscipijensi poznati stručnjacima u ovoj oblasti mogu tako da budu deo farmaceutskog sredstva prema pronalasku, pri čemu količina pomoćne materije koja se kombinuje sa aktivnim sastojkom da bi se proizvela pojedinačna doza, varira u zavisnosti od

30

1

osobe koja treba da se leči i vrste administracije. Ovi farmaceutski prihvatljivi aditivi uključuju soli, pufere, punila, stabilizatore, agense za kompleksiranje, antioksidante, rastvarače, vezivna sredstva, lubrikanse, obloge za tablete, arome, boje, konzervanse, sredstva za suspndovanje i slično. Primeri takvih pomoćnih supstanci su voda, biljna ulja, benzil alkoholi, alkilen glikol, polietilen glikol, kolifor, glicerin triacetat, želatin, ugljeni hidrati kao što su laktoza ili skrob, hidroksipropilmetil celuloza (HPMC), magnezijum stearat, talk i vazelin.

[0086] Farmaceutska formulacija se može koristiti kao tableta, film tableta, dražeja, pastila, kapsula, pilula, prah, granulat, sirup, sok, kapi, rastvor, disperzija, suspenzija, supozitor, emulzija, implantat, krema, gel, mast, pasta, losion, serum, ulje, sprej, aerosol, adheziv, gips ili zavoj. Tablete, film tablete, dražeje, pastile, kapsule, pilule, praškovi, granulati, sirupi. sokovi, kapi, rastvori, disperzije ili suspenzije - takođe u obliku depoa - poželjno se mogu pripremiti u obliku oralnih doza. Dalje, treba uzeti u obzir parenteralne oblike doziranja, poput supozitorija, suspenzija, emulzija, implantata ili rastvora, po mogućstvu uljanih ili vodenih rastvora. Za lokalnu primenu, aktivni farmaceutski sastojak kombinuje se sa najmanje jednim farmaceutski prihvatljivim nosačem, kao što je na primer mikrokristalna celuloza, i u datom slučaju sa drugim pomoćnim sredstvima, poput hidratantnih krema, da bi se stvorile čvrste formulacije koje mogu da se nanesu na kožu, poput krema, gelova masti, paste, praškova ili emulzija ili se formulišu na uobičajeni način u tečne formulacije koje se mogu primeniti na kožu, kao što su, na primer, rastvori, suspenzije, losioni. serumi, ulja, sprejevi ili aerosoli. Poželjno je da je farmaceutski agens u obliku rastvora za injekcije. Vodeni medijumi poput na primer destilovane vode ili fizioloških rastvora soli mogu da se koriste za pripremu rastvora za injekcije, koji uključuju kisele i bazne adicione soli. Farmaceutski agens takođe može da bude u obliku čvrste smese, na primer u liofilizovanom stanju, a zatim pripremljen dodavanjem sredstva za rastvaranje, kao što je destilovana voda, pre upotrebe. Stručnjak u ovoj oblasti upoznat je sa principima proizvodnje liofilizata.

[0087] Koncentracija aktivnog jedinjenja u formulaciji može da iznosi 0,1 do 100 težinskih procenata. Ključno je da farmaceutska kompozicija sadrži kao aktivni sastojak efikasnu količinu jedinjenja zajedno sa farmaceutski prihvatljivim pomoćnim supstancama. Pojmovi "efikasna količina", "efektivna količina" ili "efektivna doza" ovde se koriste naizmenično i označavaju količinu farmaceutski aktivnog sastojka koja ima profilaktički ili terapeutski relevantan efekat na bolest ili patološku promenu u ćeliji, tkivu, organu ili sisaru. „Profilaktičko dejstvo“ sprečava

31

2

izbijanje bolesti ili čak infekciju patogenom nakon prodora pojedinih predstavnika na takav način da se njihovo naknadno širenje znatno smanji ili su čak potpuno inaktivirani. „Profilaktičko dejstvo“ takođe uključuje povećanje normalne fiziološke funkcije. Profilaksa je naročito preporučljiva ako pojedinac ima predispoziciju za pojavu gore pomenutih bolesti, kao što su na primer porodična anamneza, genetski nedostatak ili nedavno preboljena bolest. „Terapeutski relevantno dejstvo“ delimično ili u potpunosti oslobađa od jednog, više ili svih simptoma bolesti ili dovodi do delimičnog ili potpunog preokreta u normalno stanje jednog, više ili svih fizioloških ili biohemijskih parametara koji su povezani ili uzročno uključeni u bolest ili patološka promena. Praćenje napretka se takođe podrazumeva kao vrsta terapijskog tretmana kada se jedinjenja daju u određenim intervalima, na primer kako bi se u potpunosti eliminisali simptomi bolesti. Odgovarajuća doza ili raspon doza za primenu jedinjenja prema pronalasku je dovoljno velik da se postigne željeni profilaktički ili terapeutski efekat indukovanja biološkog ili medicinskog odgovora. Generalno, doza će varirati u zavisnosti od starosti, konstitucije i pola pacijenta i uzimaće u obzir težinu bolesti. Podrazumeva se da specifična doza, učestalost i trajanje primene takođe zavise od različitih faktora, kao što su sposobnost ciljanja i vezivanja jedinjenja, hranljive navike pojedinca koji se leči, način primene, brzina izlučivanja i kombinacija sa drugim lekovima. Pojedinačna doza može prilagoditi kako u odnosu na primarnu bolest, tako i u odnosu na pojavu mogućih komplikacija. Tačnu dozu može odrediti stručnjak u ovoj oblasti koristeći poznata sredstva i postupke. Ovo učenje pronalaska je validno i može se primeniti bez ograničenja na farmaceutsku kompoziciju koja sadrži jedinjenja prema pronalasku, ukoliko se čini smislenim.

[0088] U jednom izvođenju pronalaska, jedinjenja se primenjuju u dozi od 0,01 mg do 1 g po jedinici doze, poželjno između 1 do 700 mg, naročito poželjno 5 do 100 mg. Dnevna doza je naročito između 0,02 i 100 mg/kg telesne težine.

[0089] Zbog njihove iznenađujuće jake i/ili selektivne inhibicije kinaze, naročito inhibicije ATM kinaze, koje regulišu ćelijske procese popravljanjem dvolančane DNK, jedinjenja prema pronalasku mogu se davati u povoljno malim dozama, dok postižu sličnu ili čak superiornu biološku efikasnost u poređenju sa manje potentnim odn. manje selektivnim inhibitorima. Pored toga, visoko selektivna inhibicija se generalno takođe ogleda u smanjenju neželjenih efekata.

[0090] Svi navedeni kao i dalji sastojci odn. komponente leka odn. farmaceutske formulacije su poznati stručnjaku i mogu se podvrgnuti posebnoj formulaciji za podučavanje prema pronalasku u rutinskim eksperimentima.

Kombinovana terapija

[0091] Lekovi i farmaceutske kompozicije koji sadrže jedinjenja prema pronalasku i upotreba ovih jedinjenja za lečenje poremećaja posredovanih kinazom predstavljaju vrlo perspektivan pristup za širok spektar terapija, omogućavajući postizanje direktnog i neposrednog ublažavanja simptoma kod ljudi i životinja. Ovo je posebno povoljno za efikasnu kontrolu ozbiljnih bolesti kao što je rak, bilo kao monoterapija, kao što je gore opisano, bilo u kombinaciji sa drugim terapijama, kao što su hemoterapija ili radioterapija. Ključno učešće ATM u procesima popravke DNK i dokaz da nedostatak ATM kinaze čini ćelije sisara osetljivijim na zračenje omogućava terapijsku primenu inhibitora specifičnih za ATM u kontekstu lečenja, na primer, čvrstih tumora raka zračenjem i/ili poželjno ciljana hemoterapija na oštećenje dvolančane DNK.

[0092] Da bi podržala medicinski efekat, farmaceutska kompozicija može, prema tome, u jednom izvođenju pronalaska takođe da sadrži jedan ili više aktivnih sastojaka, na primer sredstvo protiv raka, pri čemu je moguća istovremena ili uzastopna administracija. Terapijski efekat farmaceutske kompozicije prema pronalasku može da se sastoji, na primer, u činjenici da određeni antitumorski agensi imaju bolji efekat zbog inhibicije kinaze ili se smanjuje broj neželjenih efekata ovih lekova smanjenjem doze. Shodno tome, jedinjenja prema pronalasku mogu se davati u kombinaciji sa drugim aktivnim sastojcima, uključujući antitumorske agense.

[0093] U poželjnom rešenju pronalaska, farmaceutski sastav prema pronalasku kombinuje se ili sadrži antitumorski agens. Shodno tome, ovaj pronalazak se takođe odnosi na jedinjenje prema pronalasku i/ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, solvat, tautomer ili stereoizomer za upotrebu u lečenju raka, tumora i/ili metastaza u kombinaciji sa najmanje jednim sredstvom protiv raka.

[0094] Kako se ovde koristi, termin "sredstvo protiv raka" se odnosi na bilo koje sredstvo koje se administrira pacijentu sa rakom, tumorima i/ili metastazama u svrhu lečenja raka.

[0095] Sredstvo protiv raka je naročito poželjno odabrano iz grupe koja obuhvata citokine, hemokine, pro-apoptotična sredstva, interferone, radioaktivna jedinjenja, modulatore receptora

4

estrogena, modulatore androgenih receptora, modulatore retinoidnih receptora, citotoksične supstance, citostatike, inhibitore prenil-protein-transferaze i inhibitore angiogeneze ili njihove kombinacije. Poželjno je da sredstvo protiv raka promeni, naročito oslabi, metabolizam nukleinske kiseline i/ili proteina, deobu ćelija, replikaciju DNK, biosintezu purina, pirimidina i/ili biosintezu aminokiselina, ekspresiju gena, obradu mRNK, sintezu proteina, apoptozu ili njihove kombinacije.

[0096] Sredstva protiv raka kojima se daje prednost prema pronalasku su ona koja oštećuju DNK tumorskih ćelija i tako intervenišu u replikaciji DNK, transkripciji DNK ili ekspresiji gena. Sledeći su posebno pogodni za ovo:

• Alkikujući agensi, kao što su altretamin, bendamustin, busulfan. karmustin, hlorambucil, hlormetin, ciklofosfamid, dakarbazin, ifosfamid, improsulfantozilat, lomustin. melfalan, mitobronitol, mitolaktol, nimustin, ranimustin, temozolomid, tiotepa, treosulfan, mehloretamin, karbokvon, apazikvon, fotemustin, glufosfamid, palifosfamid, pipobroman, trofosfamid, uramustin,

• Jedinjenja platine kao što su karboplatin, cisplatin, eptaplatin, miriplatin hidrat, oksaliplatin, lobaplatin, nedaplatin, pikoplatin, satraplatin;

• lnhibitori DDR (odgovor na oštećenje DNK), kao što su inhibitori topoizomeraze, npr.

etopozid, irinotekan, razoksan, sobuzoksan, topotekan, kamptotecin, doksorubicin, amsakrin; Inhibitori poli-(ADP-riboza)-polimeraze (PARP), npr. talazoparib, olaparib, veliparib, rukaparib, CEP 9722, MK4827, BGB-290; Inhibitori ATR (ataxia telangiectasia i Rad3 povezani), npr. VE-822, AZ20, AZD6738;

• sredstva za modifikovanje DNK kao što su amrubicin, bisantren, decitabin, mitoksantron, prokarbazin, trabektedin, klofarabin, amsakrin, brostalicin, piksantron, laromustin;

• antitumorski antibiotici, kao što su bleomicin, daktinomicin, doksorubicin, epirubicin.

idarubicin, levamisol, miltefosin, mitomicin C, romidepsin, streptozocin, valrubicin, cinostatin, zorubicin, daunurubicin, plikamicin, aklarubicin, peplomicin, pirarubicin;

• alfa emiteri, kao što je alfaradin (<223>Ra dihlorid, Xofgio),<211>At,<213>Bi,<225>Ac,<227>Th.

[0097] Naročito poželjm su bleomicin, alfaradin, i DDR inhibitori, na primer etopozid, irinotekan, razoksan, sobuzoksan, topotekan, kamptotecin, doksorubicin, amsakrin; talazoparib, olaparib, veliparib, rukaparib, CEP 9722, MK4827, BGB-290; VE-822, AZ20, AZD6738.

[0098] Pronalazak se takođe može primeniti kao komplet koji sadrži jedinjenja pronalaska. Komplet se sastoji od zasebnih pakovanja (a) efektivne količine jedinjenja prema pronalasku i/ili njegove fiziološki prihvatljive soli, solvate, tautomere i/ili stereoizomere, uključujući smese u svim proporcijama, i (b) efektivne količine dodatnog aktivnog sastojka. Dodatni aktivni sastojak je poželjno sredstvo protiv raka.

[0099] Komplet sadrži odgovarajuće spremnike kao što su na primer kutije ili kartoni, pojedinačne bočice, vrećice ili ampule. Komplet može da sadrži, na primer, zasebne ampule, od kojih svaka sadrži efikasnu količinu jedinjenja prema pronalasku i/ili njegove farmaceutski upotrebljive solvate, soli, tautomere i/ili stereoizomere, uključujući njihove smese u svim proporcijama, i efektivnu količinu dodatnog aktivnog farmaceutskog sastojka, rastvorenog ili u liofilizovanom obliku. Komplet pronalaska takođe može da sadrži tekst sa pisanim uputstvima ili koji upućuje korisnika na pisana uputstva koja objašnjavaju kako se koriste jedinjenja pronalaska.

[0100] Dalja realizacija ovog pronalaska odnosi se na jedinjenja prema pronalasku u kombinaciji sa radioterapijom i/ili sa najmanje jednim dodatnim aktivnim sastojkom, poželjno u kombinaciji sa radioterapijom i/ili sredstvom protiv raka. Drugim rečima, naredna realizacija ovog pronalaska odnosi se na jedinjenja prema pronalasku za upotrebu u lečenju raka, tumora i/ili metastaza u kombinaciji sa radioterapijom. Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje jedinjenje prema pronalasku i/ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, solvat, tautomer ili stereoizomer za upotrebu u senzibilizaciji ćelija raka u odnosu na sredstvo protiv raka i/ili jonizujuće zračenje.

[0101] Tehničke metode zračenja koje se klinički koriste, poželjno uključuju fotonsko zračenje (klasično, elektromagnetno rendgensko-/gama zračenje), protonsko zračenje, zračenje teškim jonima (jonizovani ugljenik) i neutronsko zračenje, bez ograničenja na iste. Ove radioterapije i druge pogodne terapije zračenjem u smislu pronalaska su poznate stručnjaku u ovoj oblasti, kao na primer iz Herrmann et al. (2006) Klinička radijaciona biologija, Elsevier München, 4. izdanje, 67-68; Bhide & Nutting (2010) BMC Medicine 8: 25; Choi & Hung (2010) Current Urology Reports 11(3): 172. Kao najčešća primena, zračenje fotona je tehnički moguće korišćenjem IMRT (intenzitetno modulisane radioterapije) metode kao i metode snimanja (trodimenzionalno konformna radioterapija) u planiranju i izvođenju zračenja kako bi se osiguralo da fokus bude što precizniji. Jedinjenja prema pronalasku postižu sinergijske učinke u postojećim terapijama i zračenjima i/ili obnavljaju efikasnost postojećih terapija i zračenja. Još jedna realizacija pronalaska odnosi se na upotrebu najmanje jednog jedinjenja i/ili njegovih farmaceutski prihvatljivih soli, solvata, tautomera i/ili stereoizomera, uključujući njihove smese u svim proporcijama, za senzibilizaciju ćelija raka u odnosu na sredstvo protiv raka i/ili jonizujuće zračenje (radioterapija) pod uslovom da se senzibilizacija ne odvija in vivo na telu čoveka ili životinje.

[0102] Senzibilizacija se poželjno sprovodi ех vivo ili in vitro administracijom jedinjenja ćelijama, ćelijskim kulturama, tkivima ili organima koji sadrže serin-treonin-proteinske kinaze. Ех vivo upotreba se posebno primenjuje na životinjske ćelije koje potiču iz životinjskog organizma koji je pogoden bolešću odabranom iz grupe rakova, tumora, metastaza i/ili poremećaja angiogeneze. Ех vivo-obrađene ćelije mogu se ili držati u kulturi radi praćenja ili preneti na životinju, koja može da bude životinja domaćin ili druga životinja. Ех vivo senzibilizacija prema pronalasku je posebno korisna za ispitivanje specifičnog učinka jedinjenja, tako da se in vivo doza može unapred postaviti procenom ovih podataka dobijenih ех vivo. Kao rezultat, terapeutski učinak je značajno povećan. Altemativno, pronalazak je takođe dizajniran za upotrebu in vivo i odnosi se na najmanje jedno jedinjenje prema pronalasku i/ili njegove fiziološki prihvatljive soli, tautomere i/ili stereoizomere, uključujući njihove smese u svim odnosima, za upotrebu za senzibilizaciju ćelija raka na sredstvo protiv raka i/ili jonizujuće zračenje.

[0103] Ukratko, treba napomenuti da se jedinjenja prema pronalasku mogu koristiti pojedinačno i/ili u kombinaciji sa drugim merama lečenja, kao što su, na primer, hirurške intervencije, imunoterapija, terapija zračenjem i/ili hemoterapija. Potonji se odnose na ciljanu terapiju bilo kojim NME (tj. NCE i/ili NBE) kao mono- i/ili On-Target-/Off-Target kombinovanu terapiju.

[0104] Kao što se koristi u specifikaciji, uključujući priložene patentne zahteve, oblici reči u jednini, kao što su na primert „jedno”, „jedna”, „jedan”, ,,taj” ili ,,to”, uključuju ekvivalent u množini, osim ako kontekst jasno ne ukazuje na nešto drugačije. Na primer, referenca na „jedinjenje“ uključuje jedno jedinjenje ili više jedinjenja, koja opet mogu biti identična ili različita, ili referenca na „postupak" uključuje ekvivalentne korake i postupke poznate stručnjacima u ovoj oblasti.

PRIMERI

[0105] Pronalazak je bliže objašnjen u nastavku na osnovu neograničavajućih primera za specifična izvođenja i uporednih primera. Primere (posebno primere jedinjenja) treba tumačiti naročito u smislu da nisu ograničeni na posebno ilustrovane kombinacije karakteristika, već da se ilustrovane osobine zauzvrat mogu slobodno kombinovati sve dokle god je postignut cilj pronalaska.

Analitičke metode

[0106] NMR (<1>H) provedena je sa sledećim parametrima.

Uređaji: Bruker Avance DRX 500, Bruker Avance 400, Bruker DPX 300 standardni uslovi (mogu se razlikovati u pojedinim slučajevima)

Referenca: TMS

TD (Vremenski domen = broj tačaka podataka ili digitalna rezolucija): 65536 Rastvarač: DMSO-d6

NS (Broj skeniranja = učestalost skeniranja): 32

SF (frekvencija spektrometra = frekvencija prenosa): videti gore

TE (temperatura): 297 K Konstante kuplovanja (J) date su u hercima (Hz)

[0107] HPLC-MS izvedena je sa sledećim parametrima.

[0108] Instrumenti:

• Shimadzu LCMS-2020,

• Shimadzu SP-M20A 2010EV

• Shimadzu UFLC-MS 20IOEV

[0109] Korišćene kolone:

• Shim-pack VP-ODS,

• Shim-pack XR-ODS,

• Kinetex ХВ-С18100A,

• Xbridge BEH C18,

• Gemini-NX 3u C18110А

• ACE UltraCore 2.5 SuperC 18

[0110] Metode: gradijenti rastvarača sa

• A: voda 0,1 % mravlja kiselina, B: acetonitril 0,1 % mravlja kiselina;

• A : voda 0,05% trifluorsirćetna kiselina, B : acetonitril 0,05% trifluorsirćetna kiselina

• A: voda 5 mM amonijum karbonata. B: acetonitril

[0111] Talasna dužina detekcije: 220 nm

MS-tip: APl-ES Opis sinteza

PRIMER 1: Sinteza l-(3-fluor-2-piridil)-7-metoksi-3-metil-8-(l-metilpirazol-4-il)imidazo [4,5-c]hinolin-2-on (Uporedni primer 14)

[0112]

а. Sinteza 5-brom-4-metoksi-2-[[(E)-2-nitrovinil]amino]benzojeve kiseline

[0113] Rastvor natrijum hidroksida (14,7 g, 368 mmol) u vodi (33 ml) dodat je u kapima uz mešanje nitrometana (0,63 ml, 11,7 mmol) na sobnoj temperaturi. Smesa je zatim polako zagrevana na 45°C tokom 5 minuta uz mešanje. Reakcioni rastvor je zatim ohlađen na sobnu temperaturu i ponovo je u kapima dodat nitrometan (0,63 ml, 11,7 mmol). Reakciona smesa je zatim mešana narednih 10 minuta, pri čemu se formirao bistri, crvenkasti rastvor. Posle kratkog zagrevanja (5 minuta) na 50°C, smesa je ohlađena na sobnu temperaturu i dekantirana na led (11 g). Vodeni rastvor je pažljivo zakiseljen do pH < 2 dodatkom konc. hlorovodonične kiseline, a zatim odmah uz mešanje dodat u rastvor 2-amino-5-brom-4-metoksi-benzojeve kiseline (8,00 g, 32,5 mmol) u vodi (259 ml), zakiseljena dodatkom konc. hlorovodonične kiseline (126 mL, 2,75 mol). Dobijena suspenzija je mešana preko noći i zatim profiltrirana. Ostatak je osušen na 50°, pri čemu je dobijeno 9,60 g (93 %) 5-brom-4-metoksi-2 -[[(E)-2-nitrovinil] amino]benzojeve kiseline kao bezbojne čvrste supstance.

4

b. Sinteza 6-brom-7-metoksi-3-nitro-lH-hinolin-4-ona

[0114] 5-brom-4-metoksi-2-((E)-2-nitro-vinilamino)-benzojeva kiselina (4,0 g, 12,6 mmol) je rastvorena u N,N-dimetilformamidu (150 ml). Zatim je na sobnoj temperaturi uz mešanje dodat 1,1'-karbonildiimidazol (3,07 g, 18,9 mmol). Reakcioni rastvor je mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Zatim je dodat acetonitril (120 ml). Dobijena suspenzija je ohlađena i zatim profiltrirana. Žuti ostatak je ispran dietiletrom i osušen preko noći na 40°C, pri čemu je dobijeno 3,0 g (80 %) 6-brom-7-metoksi-3-nitro-lH-hinolin-4-ona u obliku bezbojne čvrste supstance.

c. Sinteza 6-brom-4-hlor-7-metoksi-3-nitro-hinolina

[0115] 6-brom-7-metoksi-3-nitro-lH-hinolin-4-on (2,50 g, 8,36 mmol) je stavljen u suvu atmosferu azota. Zatim su dodati fosforil hlorid (20 ml, 215 mmol) i N,N-dimetilformamid (0,13 ml, 1,68 mmol). Reakcioni rastvor je zagrevan uz mešanje na 115°C tokom 12 sati. Zatim je koncentrovan u vakuumu, a dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (petroleter/etil acetat sirćetne kiseline = 87:13, zapreminski udeli), dajući 2,40 g (90 %) 6-brom- 4-hlor-7-metoksi-3-nitro-hinolin kao bezbojnu čvrstu supstancu.

d. Sinteza 6-brom-N-(3-fluor-2-piridil)-7-metoksi-3-nitro-hinolin-4-amina

[0116] 3-fluorpiridin-2 -amin (390 mg, 3,48 mmol), rastvoren u N,N-dimetilformamidu (10 ml), je prvobitno uveden u suvoj atmosferu azota. Zatim je rastvoru dodat natrijum hidrid (630 mg, 26,3 mmol) i smesa je mešana na sobnoj temperaturi još 5 minuta. Zatim je u reakcionu smesu dodat 6-brom-4-hlor-7-metoksi-3-nitro-hinolin (1,00 g, 3,15 mmol), mešano je 30 minuta na sobnoj temperaturi, a zatim završeno dodavanjem ledene vode (100 ml). Vodeni rastvor je ekstrahovan tri puta sa po 100 mL etil acetata sirćetne kiseline. Sjedinjene organske faze su osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, profiltrirane i koncentrovane do suva u vakuumu, dajući 1,0 g (81 %) 6-brom-N-(3-fluor-2-piridil)-7-metoksi-3-nitrohinoIin-4-amin kao žutu čvrstu supstancu. e. Sinteza 6-brom-N-4-(3-fluor-2-piridil)-7-metoksi-hinolin-3,4-diamina

[0117] 6 -brom-N-(3-fluor-2-piridil)-7-metoksi-3-nitrohinolin-4-amin (1,0 g. 2,54 mmol) rastvoren je u metanolu (50 ml) koji je inicijalno dodat pod zaštitnom atmosferom azota. Zatim јe u rastvor dodat Raney-Ni (100 mg, 1,17 mmol) i reakciona smesa je mešana u atmosferi vodonika 30 minuta pod normalnim pritiskom. Nakon prečišćavanja azotom, suspenzija jc profiltrirana i filtrat je koncentrovan do suva u vakuumu, dajući 0,8 g (87 %) 6-brom-N-4-(3- fluor-2-piridil)-7-metoksi-hinolin-3,4-diamina kao žutu čvrstu supstancu.

f. Sinteza 8-brom-l-(3-fluor-2-piridil)-7-metoksi-3H-imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona

[0118] 6-brom-N-4-(3-fluor-2-piridil)-7-metoksi-hinolin-3,4-diamin (0,8 g, 2,20 mmol) rastvoren u tetrahidrofuranu (25 ml) je inicijalno dodat. Zatim su dodati 1,1'-karbonildiimidazol (1,78 g, 11,0 mmol) i Hünigova baza (1,42 g, 11,0 mmol). Reakcioni rastvor je zagrevan uz mešanje na 40°C tokom 2 sata. Nakon toga dodata je ledena voda (200 ml). Vodena faza je ekstrahovana tri puta sa po 50 ml etil acetata sirćetne kiseline svaki put. Kombinovane organske faze su osušene iznad anhidrovanog natrijum sulfata, profiltrirane i koncentrovane do suva u vakuumu, dobijeno je 0,8 g (93 %) 8-brom-l-(3-fluor-2-piridil)-7-metoksi-3H-imidazo [4,5- c]hinolin-2-ona kao svetlo žuta čvrsta supstanca.

g. Sinteza 8-brom-l-(3-fluor-2-piridil)-7-metoksi-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona

[0119] Pod zaštitnom atmosferom suvog azota, 8-brom-l-(3-fIuor-2-piridil)-7-meloksi-3H-imidazo[4,5-c]hinolin-2-on (0.8 g, 2, 06) mmol) je rastvoren u N,N-dimetilformamidu (10 ml). Zatim su dodati natrijum hidrid (412 mg, 17,2 mmol) i metil jodid (1,46 g, 10,3 mmol). Reakciona smesa je mešana jedan sat na sobnoj temperaturi. Zatim je reakcija prekinuta dodavanjem ledene vode (100 ml). Dobijeni talog se profiltriran i osušen u vakuumu, dajući 0,6 g (72%) 8-brom-l-(3-fluor-2-piridil)-7-metoksi-3-metil-imiđazo[4,5-c]hinolin-2-ona u obliku svetlo žute čvrste supstance. h. Sinteza l-(3-fluor-2-piridil)-7-metoksi-3-metil-8-( 1 -metilpirazol-4-iI)imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona (jedinjenja iz primera 14)

[0120] U atmosferi inertnog gasa argona, u zatvorenom aparatu inicijalno su dodati 8-brom-l-(3-fluor-2-piridil)-7-metoksi-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-on (150 mg, 0,37 mmol), l-mctil-4-(tetrametil-l,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol (93 mg, 0,45 mmol), Pd(PPh3)4(43 mg, 0,04 mmol) i kalijum karbonat (103 mg, 0,75 mmol) u 1,4-dioksanu (10 ml) i vodi (3 ml). Reakciona smesa je zagrevana na 80°C tokom 2 sata uz mešanje. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i reakciona smesa je koncentrovana do suva u vakuumu. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (etil acetat sirćetne kiseline/metanol = 10:1, zapreminske proporcije). Eluat je koncentrovan do suva i dobijeni sirovi proizvod je konačno prečišćen pomoću preparativne RP-HPLC (voda/acetonitril). Posle koncentovanja frakcija proizvoda, l-(3-fluor-2-piridil)-7- metoksi-3-metil-8-(l-metilpirazol-4-il)imidazo [4,5-c]hinolin-2-on (60 mg, 40%, primer iz jedinjenja 14) je dobijen kao bezbojna čvrsta supstanca.

PRIMER 2: Sinteza 7-metoksi-3-metil-8-(l-metilpirazol-4-il)-l-tiazol-2-il-imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona (primer jedinjenja 47 )

[0121]

4

i. Sinteza terc-butil 8-brom-7-metoksi-2-okso-3H-imidazo[4,5-c]hinolin-l-karboksilata

[0122] 7m-butil N-(3-amino-6-brom-7-metoksihinolin-4-il)karbamat (50,0 mg, 0,14 mmol), ditrihlorometil karbonat (119 mg, 0,40 mmol) i trietilamin (0,18 ml, 1,29 mmol) rastvoreni su u dihlormetanu (3 ml) i smesa je mešana 2 sata na 25°C. Smesa je koncentrovana do suva u vakuumu, a ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (etil acetat sirćetne kiseline: metanol = 10:1, zapreminske proporcije). Dobijeno je 50,0 mg (93 %) terc-butil 8-brom-7- metoksi-2-okso-3H-imidazo[4,5-c]hinolin-l-karboksilata u obliku bezbojne čvrste supstance.

k. Sinteza 7-metoksi-3-metil-8-(l-metilpirazol-4-il)-l -tiazol-2-il-imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona [0123] Pod argonom u zatvorenom sudu, 7-metoksi-3-metil-8-(l-metilpirazol-4-il)-1H-imidazo[4,5-c]hinolin-2-on (20 mg, 0,06 mmol), 2-brom-l ,3-tiazol (20 mg, 0,12 mmol), Cul (20,00 mg, 0,11 mmol), K3PO4(50 mg, 0,24 mmol) su rastvoreni u toluenu (4 ml). Zatim je na sobnoj temperaturi dodat (lS,2S)-l-N,2-N-dimetilcikloheksan-l,2-diamin (30 mg, 0,21 mmol). Smesa je mešana i zagrevana na 100°C tokom 18 sati. Ohlađeni rastvor je koncentrovan do suva u vakuumu, a ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (voda/0,05% NH4HCO3: acetonitril = 10:1). Dobijeno je 10 mg (43 %) 7-metoksi-3-metil-8-(l-metilpirazol-4-il)-l-tiazol- 2-ilimidazo[4,5-c]hinoIin-2-on kao bezbojna čvrsta supstanca.

PRIMER 3: Sinteza 1 -[5-(azetidin-3-ilmetoksi)-3-fluor-piridin-2-il]-7-metoksi-3-metil-8-( 1 -metil-1H-pirazol-4-il)-l,3-dihidro-imidazo[4,5-c]hinolin-2-on (uporedni primer)

i. U balon sa okruglim grlom od 500 ml, dodati su l-(5-bcnziloksi-3-fluor-2-piridil)-7-mctoksi-3-metil-8-(l-metilpirazol-4-il)imidazo[4,5-c]hinolin-2-on (1,1 g, 2,15 mmol), MeOH (200 ml), i Pd/C (229 mg, 2,15 mmol), zatim je balon ispran je sa H2i održavanaje atmosfera 11. Rastvor je mešan na sobnoj temperaturi 8 sati. Čvrsta supstanca je profiltrirana i smesa je koncentrovana u vakuumu. Dobijeno je 740 mg (80%) l-(3-fluor-5-hidroksi-2-piridil)-7-metoksi-3-metil-8-(l- metilpirazol-4-il)imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona kao belu čvrstu supstancu.

ii. U reakcioni sud od 30 ml dodati su l-(3-fluor-5-hidroksi-2-piridil)-7-metoksi-3-metil-8-( 1 -metilpirazol-4-il)imidazo[4,5-c]hinolin-2-on (100 mg, 0,23 mmol, 98%), 3-(brom-metil)azetidin- lterc-butilkarbamat (80 mg, 0,32 mmol). kalijum karbonat (66,2 mg, 0, 48mmol) i N,N-dimetilformamid (10 ml). Rastvor je mešan preko noći na 50°C. Reakcija je zatim prekinuta dodavanjem 10 ml vode. Zatim je rastvor ekstrahovan tri puta sa po 10 ml etil acetata. a sjedinjene organske faze su sušene iznad anhidrovanog natrijum sulfata, profiltrirane i koncentrovane u vakuumu. Dobijeno je 160 mg (>100%) 3-[[5-fluor-6-[7-metoksi-3-metil-8-( 1 - metilpirazol-4-il)-2-okso-imidazo[4,5-c]hinolin-l-il]-3-piridil]oksimetiI]azetidin-l -terc- butilkarbamata kao žuto ulje.

4

iii. U balon sa okruglim dnom od 50 ml, dodati su 3-[[5-fluor-6-[7-metoksi-3-metil-8-(lmetilpirazol-4-il)-2-okso-imidazo[4,5-c]hinolin-l-il]-3-piridil]oksimetil]azetidin-l-tercbutilkarbamat (160 mg, 0,27 mmol, 99%), dihlormetan (5 mL) i trifluorsirćetna kiselina (1 mL). Rastvor je mešan preko noći na 25°C. Dobijeni sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC. Dobijeno je 30 mg (21%) 1 -[5-(azetidm-3-ilmetoksi)-3-fluor-piridin-2-il]-7-metoksi-3-metil-8-(l-metil-lH-pirazol-4-il)-l,3-dihidro-imidazo[4,5-c]hinolin-2-on kao žuta čvrsta supstanca. PRIMER 8: Sinteza l-[3-fluor-5-(trideuteriometoksi)-2-piridil]-7-metoksi-3-metil-8-( 1 -metilpirazol-4-il)imidazo[4,5-c]hinolin-2-on (uporedni primer 155)

[0126] U balon sa okruglim dnom od inicijalno su uvedeni 25 ml 1-(3-fluor-5-hidroksi-2-piridil)- 7-metoksi-3-metil-8-(l-metilpirazol-4-il)imidazo-[4,5-c]hinolin-2-on (80 mg, 0,19 mmol, 98%), N,N-dimetilformamid (5,00 ml), kalijum karbonat (51,7 mg, 0,37 mmol) i jod(D3)metan (57,1 mg, 0,37 mmol, 95%). Rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta. Tok reakcije praćen je pomoću LCMS (dihlorometan/MeOH = 10:1). Reakcija je zatim prekinuta dodavanjem 50 ml ledene vode. Rastvor je ekstrahovan u tri puta sa 20 ml etil acetata i organske faze su kombinovane. Smesa je uparena u vakuumu, dajući 38,5 mg (47%) l-[3-fluor-5-(trideuteriometoksi)-2-piridil]-7-metoksi-3-metil-8-(l-metilpirazol-4-il)imidazo[4,5-c]hinolin-2- on u obliku bele čvrste supstance.

PRIMER 9: Sinteza l-(3-fluor-5-piperazin-l-ilpiridin-2-il)-7-metoksi-3-metil-8-(l-metil-1H- pirazol-4-il)-l ,3-dihidro-imidazo[4,5-c]hinolin-2-on (uporedni primer 123)

4

[0128] U zatvorenu reakcijsku posudu od 30 ml, koja je isprana argonom i držana u atmosferi inertnog gasa argona, inicijalno su dodati 1-(5-hlor-3-fluor-2-piridil)-7-metoksi-3-metil-8-(l -metilpirazol-4-il)imidazo[4,5-c]hinolin-2-on (100 mg, 0,22 mmol, 95%), piperazin-1 -tercbutilkarbamat (128 mg, 0,65 mmol, 95%), Pd2(dba)3(21 mg, 0,02 mmol), Xantphos (27 mg, 0.05 mmol), Cs2CO2(150 mg, 0,46 mmol) i toluen (10 ml). Smesa je mešana na 90°C preko noći, a zatim koncentrisana u vakuumu. Ostatak je prečisćen na silika gelu sa EtOAc/MeOH (95:5, zapreminske jedinice). Dobijeno je 120 mg (94%) 4-[5-fluor-6-[7-metoksi-3-metil-8-(l - metilpirazol-4-il)-2-oksoimidazo-[4,5-c]hmolin-l-il]-3-piridil]piperazin-l -terc-butilkarbamat u obliku žute čvrste supstance.

[0129] ii. U balon sa okruglim dnom od 25 ml inicijalno su dodati 4-[5-fluor-6-[7-metoksi-3- metil-8-(l-metilpirazol-4-il)-2-okso-imidazo[4,5-c]hinolin-l-il]-3-piridil]piperazin-l-terc- butilkarbamat (115 mg, 0,18 mmol, 92%), dihlorometan (10 ml) i trifluorsircetna kiselina (4 ml). Smesa je mešana u vodenom / ledenom kupatilu na 0°C tokom 30 minuta i koncentrisana u vakuumu. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC. Dobijeno je 50 mg (55%) 1- (3-fluor-5-piperazin-l-ilpiridin-2-il)-7-metoksi-3-metil-8-( 1 -metil-lH-pirazol-4-il)-l,3-dihidro- imidazo[4,5-c]hinolin-2-on u obliku bele čvrste supstance.

PRIMER 10: Sinteza 5-fluor-6-[7-metoksi-3-metil-8-( 1 -metil-1H-pirazol-4-il)-2-okso-2,3-dihidro-imidazo[4,5-c]hinolm-l-il]-N-metil-nikotinamida (uporedni primer 138)

[0130]

4

i. U reakcioni sud od 8 ml u početku je dodat rastvor sumporne kiseline (2 ml, 98%) u vodi (2 ml) i 5-fluor-6-[7-metoksi-3-metil-8-(1-metilpirazol-4-il)-2-okso-imidazo[4.5-c]hinolin-l-il]piridin-3-nitril (110 mg, 0,26 mmol). Smesa je mešana na 80°C preko noći. Natrijum hidroksid (4 mol/L) je korišcen za podešavanje pH-vrednosti na 8. Smesa je koncentrovana u vakuumu, a ostatak je prečišćen na silika gelu sa 0,5% vodenim rastvorom NH4HCO3i CH3CN (82/18). Dobijeno je 70 mg (61%) 5-fluor-6-[7-metoksi-3-metil-8-(1-metilpirazol-4-il)-2-okso-imidazo[4,5-cjhinolin-l-il]piridin-3-karboksilne kiseline u obliku bele čvrste supstance.

ii. U zatvorenoj reakcionoj posudi od 30 ml, inicijalno su dodati 5-fluor-6-[7-metoksi-3-metil-8-(l-metilpirazol-4-il)-2-okso-imidazo[4,5-c]hinolin-l-il]piridin-3-karboksilna kiselina (65,0 mg, 0,14 mmol), rastvor metilamina (10 mg, 0,32 mmol) u tetrahidrofuranu (0,5 ml), trietilamin (44 mg, 0,43 mmol), BOP (64,9 mg, 0,15 mmol) i tetrahidrofuran (5 ml). Rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 18 sati i koncentrovan u vakuumu, ostatak je razblažen sa 10 ml EtOAc. Smesa je osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana u vakuumu. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC. Dobijeno je 20 mg (30%) 5-fluor-6-[7- metoksi-3-metil-8-(lmetil-1H-pirazol-4-il)-2-okso-2,3-dihidro-imidazo[4,5-c]hinolin-l-il]-N- metil-nikotinamida u obliku bele čvrste supstance.

PRIMER 11: Sinteza l-[3-fluor-5-(trideuteriometoksi)-4-piridil]-7-metoksi-3-metil-8-( 1 -metilpirazol-4-il)imidazo[4,5-c]hinolin-2-on (uporedni primer 145)

[0131]

4

[0132] U reakcioni sud od 8ml, inicijalno su dodati l-(3-fluor-5-hidroksi-4-piridil)-7-metoksi-3-metil-8-(l-metilpirazol-4-il)imidazo[4,5-c]hinolin-2-on (145) mg, 0,33 mmol, 97%), CD3OD (0,3 ml), kalijum karbonat (143 mg, 1,03 mmol) i N,N-dimetilformamId (3 ml). Smesa je mešana na 100°C preko noći. Reakcija je zatim prekinuta dodavanjem 10 ml vode. Rastvor je ekstrahovan tri puta sa po 10 ml etil acetata. Organske faze su kombinovane, osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovane u vakuumu. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC. Dobijeno je 20 mg (14%) l-[3-fluor-5-(trideuteriornetoksi)-4-piridil]-7- metoksi-3-metil-8-(lmetilpirazol-4-il)imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona kao bele čvrste supstance.

PRIMER 12: Sinteza l-(3-fluor-5-metoksi-piridin-4-il)-8-(l-fluormetil-1H-pirazol-4-il)-7-metoksi-3-metil-l,3-dihidro-imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona (uporedni primer 140)

[0134] U zatvorenom reakcionom sudu od 30 ml, inicijalno su dodati l-(3-fluor-5-metoksi-4-piridil)-7-metoksi-3-metil-8-(1H-pirazol-4-il)imidazo[4,5-c]hinolin-2-on (60 mg, 0,14 mmol, 97%), kalijum karbonat (57,6 mg, 0,42 mmol) i N,N-dimetilformamid (5 ml). Smesa je mešana na sobnoj temperaturi 5 minuta i ohlađena na 0°C. Dodat je bromfluormetan (165 mg, 1,39 mmol, 95%), smesa je zagrevana na sobnoj temperaturi i mešana dodatni sat. Reakcija je zatim zaustavljena dodavanjem 50 ml vode. Rastvor je ekstrahovan tri puta sa po 30 ml etil acetata, a

4

organske faze su spojene i koncentrovane u vakuumu. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC. Dobijeno je 5 mg (8%) l-(3-fluor-5-metoksi-piridin-4-il)-8-(l-fluormetil- 1 H-pirazol-4-il)-7-metoksi-3-metil-l,3-dihidro-imidazo[4,5-c]hinolin-2-on kao bela čvrsta supstanca.

[0135] Skraćenice uobičajene u oblasti tehnike koje se koriste imaju sledeća značenja: MeOH: metanol; Pd(PPh3)4:Tetrakis(trifenilfosfin)paladijum; EtOAc: etil acetat; BOP: benzotriazoliloksitris(dimetilamino)-fosfonijum heksafluorfosfat; Pd2(dba)3:

Tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum

PRIMER 14: Primeri jedinjenja koja su pripremljena u skladu sa prethodnim primerima ili analogno njima, mogu se naći u donjoj Tabeli 2. Korišćeni derivati amina, estri borne kiseline ili analozi su sažeti su u donjoj shemi 4.

[0136]

�

�

�

[0138] Za ostale primere jedinjenja, sledeće povoljne vrednosti već je bilo moguće odrediti:

Što se tiče mTOR-a, sledeći primeri povezivanja imaju IC50 (ATM) koji je najmanje 2000 puta veći (u odnosu na IC50 (mTOR)), pri čemu u nekim primerima jedinjenja odnos IC50 (ATM): IC50 (mTOR) čak prelazi 100.000: 118, 121, 141.

[0139| Što se tiče P13Kbeta, sledeći primer veze ima IC50 (ATM) koji je najmanje 2000 puta veći (u odnosu na IC50 (PI3Kbeta)): 118.

PRIMER 15: Sledeće jedinjenje koje se može pripremiti na odgovarajući odn. analogan način može se naći u Tabeli 4 u daljem tekstu.

1

Primer A: injekcione naočare

[0141] Podešeno je pH 6,8 rastvora 100 g aktivnog sastojka prema pronalasku i 5 g dinatrijum hidrogenfosfata, u 3 1 dvostruko destilovane vode sa 2 N hlorovodoničnom kiselinom, sterilno se profiltrira, napuni u čaše za injekcije, liofilizuje pod sterilnim uslovima i sterilno zatvori. Svaka injekciona čaša sadrži 5 mg aktivnog sastojka prema pronalasku.

Primer B: supozitorije

[0142] Smesa od 20 g aktivnog sastojka prema pronalasku sa 100 g sojinog lecitina i 1400 g kakao putera rastopi se, sipa u kalupe i ostavi da se ohladi. Svaka supozitorija sadrži 20 mg aktivnog sastojka prema pronalasku.

Primer C: Rastvor

[0143] Rastvor se priprema od 1 g aktivnog sastojka prema pronalasku, 9,38 g NaH2PO4, *2 H2O, 28,48 g Na2HPO4*12 H2O i 0,1 g benzalkonijum hlorida u 940 ml dvostruko destilovane vode. pH je podešeno na 6,8, dopuni do 1 l i steriliše zračenjem. Ovaj rastvor može da se koristiti u obliku kapi za oči.

Primer D: mast

[0144] 500 mg aktivnog sastojka prema pronalasku se pomeša sa 99,5 g vazelina pod aseptičnim uslovima.

Primer E: tablete

[0145] Smesa od 1 kg aktivnog sastojka prema pronalasku, 4 kg laktoze, 1,2 kg krompirovog skroba, 0,2 kg talka i 0,1 kg magnezijum stearata kompresuje se u tablete na uobičajeni način, tako da svaka tableta sadrži 10 mg aktivnog sastojka prema pronalasku

Primer F: Dražeje

[0146] Kao u primeru E, tablete su komprimovane, koje su zatim na uobičajeni način obložene oblogom od saharoze, krompirovog skroba, talka, traganta i boje.

Primer G: kapsule

[0147] 2 kg aktivnog sastojka prema pronalasku puni se u tvrde želatinske kapsule na uobičajeni način, tako da svaka kapsula sadrži 20 mg aktivnog sastojka prema pronalasku.

2

Primer H: ampule

[0148] Rastvor od 1 kg aktivnog sastojka prema pronalasku u 60 l dvostruko destilovane vode je sterilno profiltriran, napunjen u ampule, liofilizovan u sterilnim uslovima i zatvoren pod sterilnim uslovima. Svaka ampula sadrži 10 mg aktivnog sastojka prema pronalasku,

Primer I: sprej za inhalaciju

[0149] 14 g aktivnog sastojka prema pronalasku se rastvara u 10 1 izotoničnog rastvora NaCl i rastvor se puni u komercijalno dostupne posude za raspršivanje sa mehanizmom pumpe. Rastvor se može raspršiti u usta ili nos. Jedan sprej (približno 0,1 ml) odgovara dozi od oko 0,14 mg.

Claims (14)

1. R1 je metil, R3 označava nerazgranat ili razgranat alkil sa 1, 2 ili 3 C-atoma, pri čemu, nezavisno jedan od drugog, 1, 2, 3, 4 ili 5 H-atoma može da bude zamenjeno sa Hal, Het<1>je odabran od pirazolila, triazolila i imidazolila, pri čemu Het<1>može da bude nesupstituisan ili mono- ili disupstituisan, nezavisno jedan od drugog, alkilom, koji može da bude ne supstituisan ili mono- ili polisupstituisan sa halogenom, -OY, -NYY, Hal i -Het<2>, HET označava 5-člani monociklični aromatični heterocikl, gde je ovaj heterocikl vezan za N-atom skeleta preko prstenastog C-atoma i gde je ovaj heterocikl izabran od pirazolila, tiazolila i imidazolila i može da bude nesupstituisan ili supstituisan sa jednim, dva ili tri supstituienta, koji su izabrani, nezavisno jedan od drugog, iz grupe koju čine: Hal, A, Het<2>, -(CY2)p-OY, -(CY2)p-OZ, -(CY2)p-O-Het<2>, -(CY2)p-O-(CY2)1-Het<2>, -(CY2)p-O- (CY2)-NYY, -(CY2)P-O-(CY2)t-OY, -(CY2)P-NYY, -(CY2)P-COOY, -(CY2)p-CO-NYY, i -(CY2)P-NY-COY, A u svakom slučaju nezavisno označava nerazgranati ih razgranati alkil koji ima 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 C-atoma, gde, nezavisno jedan od drugog, l, 2, 3, 4, 5, 6 ili 7 H- atoma može da bude zamenjeno sa Hal, Het<2>označava monocikličan zasićen heterocikl sa 2, 3, 4.5, 6 ili 7 C-atoma i 1, 2, 3 ili 4 N-, O- i/ili S-atoma, koji mogu da budu nesupstituisani ili monosupstituisani sa A, 4 Y označava H ili A, Z označava nerazgranati ili razgranati alkenil sa 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 C-atoma, gde, nezavisno jedan od drugog, 1, 2, 3, 4, 5, 6 ili 7 H-atoma može da bude zamenjeno sa Hal, Hal označava F, Cl, Br ili I, i p označava 0, 1, 2, 3, 4, 5 ili 6 t označava 1, 2, 3, 4, 5 ili 6, i/ili njegova farmaceutski upotrebljiva so, solvat, tautomer ili stereoizomer.
2. 2. Jedinjenje formule (I) prema zahtevu I, naznačeno time, što HET može da bude supstituisan sa jedan, dva ili tri supstituenta koja su odabarana, nezavisno jedan od drugog, iz grupe koju čine: F, Cl, metil, etil, propil, izopropil, metoksi, etoksi, propoksi, piperazinil, tetrahidropiranil, 2-metoksietoksi, 2-hidroksietoksi, fluormetoksi, difluormetoksi, N- metilkarbamoil (-C(=O)-NH-CH3), 2-metilamino-etoksi, 1 -metil-azelidin-3-ilmetoksi, trideuteriometoksi, trifluormetoksi, aliloksi i azetidiniloksi, i/ili njegova farmaceutski upotrebljiva so, solvat, tautomer, stereoizomer.
3. 3. Jedinjenje formule (I) prema zahtevu 1 ili 2, naznačeno time, što HET je odabran od: 1H-pirazol-4-il, 1 -etil-3-metil-1 H-pirazol-4-il, 1,2-dimetil-lH-pirazol-4-il, 1,3-dimetil-lH- pirazol-4-il, 1 -metil-1 H-pirazol-4-il, 1 -(tetrahidropiran-4-il)-l H-pirazol-4-il, 2-metil-2H-pirazol- 3-il, 3-metillH-pirazol-4-il, 2-metil-tiazol-4-il, 3,5-dimetil-lH-pirazol-4-il, 3-fluor-l-metil- pirazol-4-il, tiazoI-2-il, i 1-metil-1H-imidazolil, i/ili njegova farmaceutski upotrebljiva so, solvat, tautomer, stereoizomer.
4. 4. Jedinjenje formule (I) prema zahtevu 1, 2 ili 3, naznačeno time, što Het<1>je pirazolil, koji može da bude nesupstituisan ili supstituisan kao što je definisano u zahtevu 1, i/ili njegova farmaceutski upotrebljiva so, solvat, tautomer, stereoizomer.
5. 5. Jedinjenje formule (I) prema zahtevu 1, 2 ili 3, naznačeno time, što Het<1>je triazolil, poželjno [1,2,3]triazolil, koji može da bude nesupstituisan ili supstituisan kao što je definisano u zahtevu 1 ili 2, i/ili njegova farmaceutski upotrebljiva so, solvat, tautomer, stereoizomer.
6. 6. Jedinjenje formule (I) prema jednom od zahteva 1 do 4, naznačeno time, što Het<1>je nesupstituisan ili supstituisan jednim ili dva supstituenta odabrana, nezavisno jedan od drugog, od metila, etila, amino, metoksi, fluormetila, difluormetila, fluora, azetidinila, i/ili njegova farmaceutski upotrebljiva so, solvat, tautomer, stereoizomer.
7. 7. Jedinjenje formule (I) prema jednom od zahteva 1 do 4, naznačeno time, što Het<1>je odabran od: lH-pirazol-4-il, 2H-pirazol-3-il, 1H-pirazol-3-il, l-metil-lH-pirazol-4-il, 3-metil- lH-pirazol-4-il, 5-metil-lH-pirazol-3-il, 4-metil-lH-pirazol-3-il, l-fluormetil-lH-pirazoi-4-il, 1- difluormetil-lH-pirazol-4-il, 1,3-dimetil-l H-pirazol-4-il, l-etil-lH-pirazol-4-il, 1 -etil-3-metil- 1 H-pirazolil, 3-fluor-l -metil-1 H-pirazol-4-il, 3-amino-lH-pirazol-5-il, 2H-[ 1,2,3]triazoI-4-il, 3H-[1,2,3]triazol-4-il-, 1-metil-lH-[l,2,3]triazol-4-il, 2-metil-2H-[l,2,3]triazol-4-il, 2-amino-lH- imidazol-4-il, i l-(azetidin-3-il)-3-metil-lH-pirazol-4-il, i/ili njegova farmaceutski upotrebljiva so, solvat, tautomer, stereoizomer.
8. 8. Jedinjenje formule (I) prema jednom od zahteva 1 do 7, naznačeno time, što R3 je metil, i/ili njegova farmaceutski upotrebljiva so, solvat, tautomer, stereoizomer.
9. i/ili njegova farmaceutski upotrebljiva so, solvat, tautomer, stereoizomer.
10. 10. Jedinjenje prema jednom od zahteva 1 do 9 i/ili njegova farmaceutski upotrebijiva so, solvat, tautomer ili stereoizonier, naznačeno time, što je za upotrebu kao lek.
11. 11. Jedinjenje prema jednom od zahteva 1 do 9 i/ili njegova farmaceutski upotrebljiva so, solvat, tautomer ili stereoizomer, naznačeno time, što je za upotrebu u lečenju raka, tumora i/ili metastaza, po izboru u kombinaciji sa radioterapijom ili najmanje jednim sredstvom protiv raka.
12. 12. Jedinjenje prema jednom od zahteva 1 do 9 i/ili njegova farmaceutski upotrebljiva so, solvat, tautomer ili stereoizomer, naznačeno time, što je za upotrebu u senzibilizaciji ćelija raka nа sredstvo protiv raka i/ili jonizujuće zračenje.
13. 13. Farmaceutska kompozicija naznačena time, što sadrži efikasnu količinu najmanje jednog jedinjenja prema jednom od zahteva 1 do 9 i/ili njegovu farmaceutski upotrebljivu so, solvat, tautomer ili stereoizomer, po izboru zajedno sa najmanje jednim farmaceutski podnošljivim ekscipijensom.
14. 14. Komplet, naznačen time, što se sastoji od zasebnih pakovanja (a) efikasne količine jedinjenja prema jednom od zahteva 1 do 9 i/ili njegove farmaceutski upotrebljive soli, solvata, tautomera ili stereoizomera, i (b) efikasne količine sredstva protiv raka. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5 1