RS60940B1

RS60940B1 - Makrociklični peptidi korisni kao imunomodulatori

Info

Publication number: RS60940B1
Application number: RS20201253A
Authority: RS
Inventors: Kevin W Gillman; Jason Goodrich; Kenneth M Boy; Yunhui Zhang; Claudio Mapelli; Michael A Poss; Li-Qiang Sun; Qian Zhao; Eric Mull; Eric P Gillis; Paul Michael Scola; David R Langley; M Nicholas Meanwell
Original assignee: Bristol Myers Squibb Co
Priority date: 2014-11-14
Filing date: 2015-11-12
Publication date: 2020-11-30
Also published as: IL252235A0; EP3218392A1; WO2016077518A1; IL252235B; NZ732676A; MA39285A; MX384024B; JP6804442B2; US20160137696A1; CN107108698B; CA2967344A1; AU2020217406A1; SMT202000578T1; EA036279B1; KR20170077248A; SI3218392T1; PL3218392T3; SG11201703754SA; TN2017000183A1; LT3218392T

Description

Opis

[0001] Predmetni pronalazak obezbeđuje nove makrociklične peptide koji inhibiraju PD-1/PD-L1 i CD80/PD-L1 protein/protein interakciju, i stoga su korisni za ublažavanje raznih bolesti, uključujući kancer uključujući kancer i infektivne bolesti.

[0002] Protein programirane smrti 1 (PD-1) je inhibitorni član CD28 familije receptora, koji takođe uključuje CD28, CTLA-4, ICOS i BTLA. PD-1 je eksprimiran na aktiviranim B ćelijama, T ćelijama, i mijeloidnim ćelijama (Agata et al., supra; Okazaki et al., Curr. Opin. Immunol., 14:779-782 (2002); Bennett et al., J. Immunol., 170:711-718 (2003)).

[0003] PD-1 protein je transmembranski protein tipa I od 55 kDa koji je deo Ig genske superfamilije (Agata et al., Int. Immunol., 8:765-772 (1996)). PD-1 sadrži membranski proksimalan imunoreceptorski tirozinski inhibitorni motiv (ITIM - immunoreceptor tirozin inhibitory motif) i membranski distalni prekidački motiv na bazi tirozina (ITSM - tirozin-based switch motif) (Thomas, M.L., J. Exp. Med., 181:1953-1956 (1995); Vivier, E. et al., Immunol. Today, 18:286-291 (1997)). Iako strukturno sličan sa CTLA-4, PD-1 nema MYPPY motiv koji je kritičan za CD80 CD86 (B7-2) vezivanje. Dva liganda za PD-1 su identifikovana, PD-L1 (B7-H1) i PD-L2 (b7-DC). Prikazano je da je aktivacija T ćelija koje eksprimiraju PD-1 snižena nakon interakcije sa ćelijama koje eksprimiraju PD-L1 ili PD-L2 (Freeman et al., J. Exp. Med., 192:1027-1034 (2000); Latchman et al., Nat. Immunol., 2:261-268 (2001); Carter et al., Eur. J. Immunol., 32:634-643 (2002)). Kako PD-L1 tako i PD-L2 su članovi B7 proteinske familije koji se vezuju za PD-1, ali se ne vezuju za druge članove CD28 familije. PD-L1 ligand je obilan u raznim humanim kancerima (Dong et al., Nat. Med., 8:787-789 (2002)). Interakcija između PD-1 i PD-L1 rezultira smanjenjem tumor infiltrirajućih limfocita, smanjenjem T-ćelijskim receptorom posredovane proliferacije, i imunim izbegavanjem od strane ćelija kancera (Dong et al., J. Mol. Med., 81:281-287 (2003); Blank et al., Cancer Immunol. Immunother., 54:307-314 (2005); Konishi et al., Clin. Cancer Res., 10:5094-5100 (2004)). Imunska supresija može da se preokrene inhibicijom lokalne interakcije PD-1 sa PD-L1, i efekat je aditivan kada je interakcija PD-1 sa PD-L2 blokirana takođe (Iwai et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 99:12293-12297 (2002); Brown et al., J. Immunol., 170:1257-1266(2003)).

[0004] Takođe je prikazano da PD-L1 interaguje sa CD80 (Butte MJ et al, Immunity;27:111-122 (2007)). Prikazano je da je interakcija PD-L1/CD80 na eksprimirajućim imunskim ćelijama inhibitorna. Prikazano je da blokada ove interakcije ukida ovu inhibitornu interakciju (Paterson AM, et al., J Immunol., 187:1097-1105 (2011); Yang J, et al. J Immunol. Aug 1;187(3):1113-9 (2011)).

[0005] Kada PD-1 eksprimirajuće T ćelije dodiruju ćelije koje eksprimiraju njegove ligande, funkcionalne aktivnosti u odgovoru na antigene stimuluse, uključujući proliferaciju, citokinsku sekreciju, i citotoksičnost, su smanjene. PD-1/PD-L1 ili PD-L2 interakcije negativno regulišu imunske odgovore tokom rešavanja infekcije ili tumora, ili tokom razvoja samo-tolerancije (Keir, M.E. et al., Annu. Rev. Immunol., 26:Epub (2008)). Hronična antigenska stimulacija, kao što je ona koja se javlja tokom tumorske bolesti ili hroničnih infekcija, rezultira T ćelijama koje eksprimiraju povišene nivoe PD-1 i disfunkcionalne su u odnosu na aktivnost prema hroničnom antigenu (pregledano u Kim et al., Curr. Opin. Imm. (2010)). Ovo je nazvano "T ćelijska istrošenost". B ćelije takođe prikazuju PD-1/PD-ligand supresiju i "istrošenost".

[0006] Blokada PD-1/PD-L1 ligacije koja koristi antitela na PD-L1 je pokazala da obnavlja i povećava T ćelijsku aktivaciju u mnogim sistemima. Pacijenti sa uznapredovalim tumorom imaju koristi od terapije sa monoklonskim antitelom na PD-L1 (Brahmer et al., New Engl. J. Med. (2012)). Preklinički životinjski modeli tumora i hroničnih infekcija su prikazali da blokada PD-1/PD-L1 putanje monoklonskim antitelima može da poboljša imune odgovore i rezultira odbacivanjem tumora ili kontrolom infekcije. Antitumorska imunoterapija putem PD-1/PD-L1 blokade može da uveća terapijski imuni odgovor na veliki broj histološki različitih tumora (Dong, H. et al., "B7-H1 pathway and its role in the evasion of tumor immunity", J. Mol. Med., 81(5):281-287 (2003); Dong, H. et al., "Tumor-associated B7-H1 promotes T-cell apoptosis: a potential mechanism of immune evasion", Nat. Med., 8(8):793-800 (2002)).

[0007] Interferencija sa PD-1/PD-L1 interakcijom izaziva povećanu T ćelijsku aktivnost u sistemima sa hroničnom infekcijom. Blokada PD-L1 je izazvala poboljšano uklanjanje virusa i obnovila je imunitet kod miševa sa hromoičnom infekcijom virusom limfocitnog horio meningitisa (Barber, D.L. et al., "Restoring function in exhausted CD8 T cells during chronic viral infection", Nature, 439(7077):682-687 (2006)). Humanizovani miševi inficirani sa HIV-1 su pokazali povećanu zaštitu protiv viremije i virusne deplecije CD4+ T ćelija (Palmer et al., J. Immunol. (2013)). Blokada PD-1/PD-L1 preko monoklonskih antitela na PD-L1 može da obnovi in vitro antigen-specifičnu fukcionalnost na T ćelije iz HIV pacijenata (Day, Nature (2006); Petrovas, J. Exp. Med. (2006); Trautman, Nature Med. (2006); D'Souza, J. Immunol. (2007); Zhang, Blood (2007); Kaufmann, Nature Imm. (2007); Kasu, J. Immunol. (2010); Porichis, Blood (2011)), HCV patients (Golden-Mason, J. Virol. (2007); Jeung, J. Leuk. Biol. (2007); Urbani, J. Hepatol. (2008); Nakamoto, PLoS Path. (2009); Nakamoto, Gastroenterology (2008)) i HBV patients (Boni, J. Virol. (2007); Fisicaro, Gastro. (2010); Fisicaro et al., Gastroenterology (2012); Boni et al., Gastro. (2012); Penna et al., J. Hep. (2012); Raziorrough, Hepatology (2009); Liang, World J. Gastro. (2010); Zhang, Gastro. (2008)).

[0008] Blokada PD-L1/CD80 interakcije je takođe pokazala da stimuliše imunitet (Yang J., et al., J Immunol. Aug 1;187(3):1113-9 (2011)). Imunska stimulacija koja je rezultat blokade PD-L1/CD80 interakcije je takođe pokazala da je poboljšana kroz kombinaciju sa blokadom daljih PD-1/PD-L1 ili PD-1/PD-L2 interakcija.

[0009] Promene u fenotipovima imunih ćelija su pretpostavljene kao značajan faktor u septičnom šoku (Hotchkiss, et al., Nat Rev Immunol (2013)). Ovi uključuju povećane nivoe PD-1 i PD-L1 (Guignant, et al, Crit. Care (2011)), Ćelije od pacijenata sa septičkim šokom sa povećanim nivoima PD-1 i PD-L1 ispoljavaju povećani nivo T ćelijske apoptoze. Antitela usmerena na PD-L1, mogu da smanje nivo Apoptoze imunih ćelija (Zhang et al, Crit. Care (2011)). Pored toga, miševi bez PD-1 eksprimiranja su otporniji na simptome septičnog šoka od miševa divljeg tipa. Yang J., et al.. J Immunol. Aug 1;187(3):1113-9 (2011)). Studije su otkrile da blokada interakcija PD-L1 koja primenjuje antitela može da suzbije neodgovarajuće imune odgovore i ublaži znake bolesti.

[0010] Dodatno povećavanju imunoloških odgovora na hronične antigene, za blokadu PD-1/PD-L1 putanje je takođe pokazano da poboljšava odgovore na vakcinaciju, uključujući terapijsku vakcinaciju u kontekstu hronične infekcije (Ha, S.J. et al., "Enhancing therapeutic vaccination by blocking PD-1-mediated inhibitory signals during chronic infection", J. Exp. Med., 205(3):543-555 (2008); Finnefrock, A.C. et al., "PD-1 blockade in rhesus macaques: impact on chronic infection and prophylactic vaccination", J. Immunol., 182(2):980-987 (2009); Song, M.-Y. et al., "Enhancement of vaccine-induced primary and memory CD8+ t-cell responses by soluble PD-1", J. Immunother., 34(3):297-306 (2011)).

[0011] Molekuli koji su ovde opisani prikazuju sposobnost za blokiranje interakcije PD-L1 sa PD-1, i u biohemijskim i eksperimentalnim sistemima na ćelijskoj bazi. Ovi rezultati su u skladu sa potencijalom za terapijsko administriranje da se poboljša imunitet u kanceru ili hroničnoj infekciji, uključujući terapijsku vakcinu.

[0012] Makrociklični peptidi koji su ovde opisani su u stanju da inhibiraju interakciju PD-L1 sa PD-1 i sa CD80. Ova jedinjenja su prikazala visoko efikasno vezivanje za PD-L1, blokadu interakcije PD-L1 bilo sa PD-1 bilo CD80, i u stanju su da pospeše poboljšanu T ćelijsku funkcionalnu aktivnost, tako ih čineći kandidatima za parenteralne, oralne, pulmonarne, nazalne, bukalne i formulacije sa produženim oslobađanjem.

[0013] Dokument WO 2014/151634 stavlja na uvid javnosti makrociklične peptide koji inhibiraju PD-1/PD-L1 interakciju.

[0014] U svom prvom tehničkom rešenju predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje sa formulom (I)

ili farmaceutski prihvatljivu so istog, gde:

A je odabrano od

gde:

označava tačku vezivanja sa karbonil grupom i

označava tačku vezivanja sa atomom azota;

n je 0 ili 1;

m je 1 ili 2;

m' je 0 ili 1;

w je 0, 1, ili 2;

R<x>je odabrano od vodonika, amino, hidroksi, i metila;

R<14>i R<15>su nezavisno odabrani od vodonika i metila;

R<16a>je odabrano od vodonika i C1-C6alkila;

R<16>je odabrano od

-(C(R<17a>)2)2-X-R<30>,

-C(R<17a>)2C(O)N(R<16a>)C(R<17a>)2-X'-R<31>,

-C(R<17a>)2[C(O)N(R<16a>)C(R<17a>)2]w'-X-R<31>,

-(C(R<17a>)(R<17>)C(O)NR<16a>)n'-H; i

-(C(R<17a>)(R<17>)C(O)NR<16a>)m'-C(R<17a>)(R<17>)-CO2H;

gde:

w' je 2 ili 3;

n' je 1-6;

m' je 0-5;

X je lanac od između 1 i 172 atoma gde su atomi odabrani od ugljenika i kiseonika i gde lanac može da sadrži jednu, dve, tri, ili četiri grupe odabrane od -NHC(O)NH-, i -C(O)NH-ugrađene tamo; i gde je lanac po izboru supstituisan sa jednom do šest grupa nezavisno odabranih od -CO2H, -C(O)NH2, -CH2C(O)NH2, i -(CH2)CO2H;

X' je lanac od između 1 i 172 atoma gde su atomi odabrani od ugljenika i kiseonika i gde lanac može da sadrži jednu, dve, tri, ili četiri grupe odabrane od -NHC(O)NH-, i -C(O)NH-ugrađene tamo; i gde je lanac po izboru supstituisan sa jednom do šest grupa nezavisno odabranih od -CO2H, -C(O)NH2, i -CH2CO2H, pod uslovom da X’ je drugačije od nesupstituisanog PEG;

R<30>je odabrano od -CO2H, -C(O)NR<w>R<x>, i -CH3gde R<w>i R<x>su nezavisno odabrani od vodonika i C1-C6alkila, pod uslovom da kada X je sav ugljenik, R<30>je drugačije od -CH3; R<31>je -CO2H, -C(O)NR<w>R<x>, -CH3, aleksa-5-SDP, i biotin;

svako R<17a>je nezavisno odabrano od vodonika, C1-C6alkil, -CH2OH, -CH2CO2H, -(CH2)2CO2H,

svako R<17>je nezavisno odabrano od vodonika, -CH3, (CH2)zN3, -(CH2)zNH2, -X-R<31>, -(CH2)zCO2H, -CH2OH, CH2C≡CH, i -(CH2)z-triazolil-X-R<35>, gde z je 1-6 i R<35>je odabrano od -CO2H, -C(O)NR<w>R<x>, CH3, biotina, -2-fluropiridina, -C(O)-(CH2)2-C(O)O-vitamina E,-C(O)O-vitamina E; i

pod uslovom da je najmanje jedno R<17>drugačije od vodonika, -CH3, ili -CH2OH; R<c>, R<f>, R<h>, R, R<m>, i R<n>su vodonik;

R<a>, R<c>, R<j>, i R<k>, su svako nezavisno odabrano od vodonika i metila;

R<1>, R<2>, R<3>, R<4>, R<5>, R<6>, R<7>, R<8>, R<9>, R<10>, R<11>, R<12>, i R<13>su nezavisno odabrani od bočnog lanca prirodne amino kiseline i bočnog lanca ne-prirodne amino kiseline ili formiraju prsten sa odgovarajućom susednom R grupom kao što je opisano ispod;

R<e>i R<k>svako, može da formira prsten sa odgovarajućom susednom R grupom i atomima za koje su povezani odabran od azetidina, pirolidina, morfolina, piperidina, piperazina, i tetrahidrotiazola; gde svaki prsten je po izboru supstituisan sa jednom do četiri grupe nezavisno odabrane od amino, cijano, metil, halo, i hidroksi;

Rje metil ili, Ri R<2>, zajedno sa atomima za koje su vezani, formiraju prsten odabran od azetidina, pirolidina, morfolina, piperidina, piperazina, i tetrahidrotiazola; gde svaki prsten je po izboru supstituisan sa jednom do četiri grupe nezavisno odabrane od amino, cijano, metil, halo, i hidroksi;

R<d>je vodonik ili metil, ili, R<d>i R<4>, zajedno sa atomima za koje su vezani, mogu formirati prsten odabran od azetidina, pirolidina, morfolina, piperidina, piperazina, i tetrahidrotiazola; gde svaki prsten je po izboru supstituisan sa jednom do četiri grupe nezavisno odabrane od amino, cijano, metil, halo, hidroksi, i fenila;

R<g>je vodonik ili metil ili R<g>i R<7>, zajedno sa atomima za koje su vezani, mogu formirati prsten odabran od azetidina, pirolidina, morfolina, piperidina, piperazina, i tetrahidrotiazola; gde svaki prsten je po izboru supstituisan sa jednom do četiri grupe nezavisno odabrane od amino, benzil po izboru supstituisane sa halo grupom, benziloksi, cijano, cikloheksil, metil, halo, hidroksi, izohinoliniloksi po izboru supstituisane sa metoksi grupom, hinoliniloksi po izboru supstituisane sa halo grupom, i tetrazolil; i gde pirolidinski i piperidinski prsten su po izboru fuzionisani sa cikloheksil, fenil, ili indol grupom; i

R<1>je metil ili, R<1>i R<12>, zajedno sa atomima za koje su vezani, formiraju prsten odabran od azetidina i pirolidina, gde svaki prsten je po izboru supstituisan sa jednom do četiri nezavisno odabrane od amino, cijano, metil, halo, i hidroksi.

[0015] U prvom aspektu prvog tehničkog rešenja predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje sa formulom (I), ili farmaceutski prihvatljivu so istog, gde A je

U drugom aspektu prvog tehničkog rešenja:

m i w su 1; i

R<14>, R<15>, i R<16a>su svako vodonik.

U trećem aspektu prvog tehničkog rešenja:

R<16>je -(C(R<17a>)2)2-X-R<30>.

U četvrtom aspektu prvog tehničkog rešenja:

svako R<17a>je vodonik;

X je lanac od između 8 i 46 atoma gde su atomi odabrani od ugljenika i kiseonika i gde lanac može da sadrži jednu, dve, ili tri C(O)NH grupe ugrađene tamo; i gde lanac je po izboru supstituisan sa jednom ili dve grupe nezavisno odabrane od -CO2H, -C(O)NH2, -CH2C(O)NH2, i -CH2CO2H; i

R<30>je odabrano od -CH3, -CO2H, i -C(O)NH2; pod uslovom da kada X je sav ugljenik, R30 je drugačije od -CH3.

[0016] U petom aspektu prvog tehničkog rešenja predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje sa formulom (I), ili farmaceutski prihvatljivu so istog, gde:

A je

m i w su 1;

R<14>, R<15>, i R<16a>su svako vodonik; i

R<16>je -C(R<17a>)2C(O)N(R<16a>)C(R<17a>)2-X'-R<31>.

[0017] U šestom aspektu prvog tehničkog rešenja:

svako R<17a>je odabrano od vodonika, -CO2H, i -CH2CO2H;

X' je lanac od između 8 i 48 atoma gde su atomi odabrani od ugljenika i kiseonika i gde lanac može da sadrži jednu, dve, ili tri C(O)NH grupe ugrađene tamo; i gde lanac je po izboru supstituisan sa jednom ili dve grupe nezavisno odabrane od -CO2H, -C(O)NH2, -CH2C(O)NH2, i -CH2CO2H; pod uslovom da X’ je drugačije od nesupstituisanog PEG; i R<30>je odabrano od -CH3, -CO2H, i -C(O)NH2.

[0018] U sedmom aspektu prvog tehničkog rešenja predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje sa formulom (I), ili farmaceutski prihvatljivu so istog, gde:

A je

m i w su 1;

R<14>, R<15>, i R<16a>su svako vodonik; i

R<16>je -C(R<17a>)2[C(O)N(R<16a>)C(R<17a>)2]w'-X-R<31>.

[0019] U osmom aspektu prvog tehničkog rešenja:

svako R<17a>je odabrano od vodonika, -CO2H, i -CH2CO2H;

X je lanac od između 8 i 48 atoma gde su atomi odabrani od ugljenika i kiseonika i gde lanac može da sadrži jednu, dve, ili tri C(O)NH grupe ugrađene tamo; i gde lanac je po izboru supstituisan sa jednom ili dve grupe nezavisno odabrane od -CO2H, -C(O)NH2, -CH2C(O)NH2, i -CH2CO2H; i

R<31>je odabrano od -CH3, -CO2H, i -C(O)NH2.

[0020] U devetom aspektu prvog tehničkog rešenja predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje sa formulom (I), ili farmaceutski prihvatljivu so istog, gde:

A je

m i w su 1;

R<14>, R<15>, i R<16a>su svako vodonik; i

R<16>je -(C(R<17a>)(R<17>)C(O)NR<16a>)n'-H.

[0021] U desetom aspektu prvog tehničkog rešenja:

svako R<17a>je vodonik; i

svako R<17>je odabrano od vodonika, -CH3, (CH2)zN3, -(CH2)zNH2, -X-R<31>, -(CH2)zCO2H, -CH2OH, CH2C≡CH, i -(CH2)z-triazolil-X-R<35>; pod uslovom da je najmanje jedno R<17>drugačije od vodonika, -CH3, ili -CH2OH;

z je 1-4;

R<31>je odabrano od -CH3, -CO2H, i -C(O)NH2;

X je lanac od između 7 i 155 atoma gde su atomi odabrani od ugljenika i kiseonika i gde lanac može da sadrži jednu, dve, ili tri C(O)NH grupe ugrađene tamo; i gde lanac je po izboru supstituisan sa jednom ili dve grupe nezavisno odabrane od -CO2H, -C(O)NH2, -CH2C(O)NH2, i -CH2CO2H; i

R<35>je odabrano od -CO2H, -C(O)NR<w>R<x>, CH3, biotina, -2-fluropiridina, -C(O)-(CH2)2-C(O)O-vitamina E, i -C(O)O-vitamina E.

[0022] U jedanaestom aspektu prvog tehničkog rešenja predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje sa formulom (I), ili farmaceutski prihvatljivu so istog, gde:

A je

m i w su 1;

R<14>, R<15>, i R<16a>su svako vodonik; i

R<16>je -(CR<17a>)(R<17>)C(O)NR<16a>)m'-C(R<17a>)(R<17>)-CO2H.

[0023] U dvanaestom aspektu prvog tehničkog rešenja:

m' je 1-3;

svako R<17a>je vodonik;

svako R<17>je odabrano od vodonika, -CH3, (CH2)zN3, -(CH2)zNH2, -X-R<31>, -(CH2)zCO2H, -CH2OH, CH2C≡CH, -(CH2)z-triazolil-X-R<35>, i C(O)O-vitamina E; i

pod uslovom da je najmanje jedno R<17>drugačije od vodonika, -CH3, ili -CH2OH;

z je 1-4;

R<31>je odabrano od -CH3, -CO2H, i -C(O)NH2;

X je lanac od između 20 i 60 atoma gde su atomi odabrani od ugljenika i kiseonika i gde lanac može da sadrži jednu, dve, ili tri C(O)NH grupe ugrađene tamo; i gde lanac je po izboru supstituisan sa jednom ili dve grupe nezavisno odabrane od -CO2H, -C(O)NH2, -CH2C(O)NH2, i -CH2CO2H; i

R<35>je odabrano od -CO2H, -C(O)NR<w>R<x>, CH3, biotina, 2-fluropiridina, -C(O)-(CH2)2-C(O)O-vitamina E, i -C(O)O-vitamina E.

[0024] U trinaestom aspektu prvog tehničkog rešenja predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje sa formulom (I), ili farmaceutski prihvatljivu so istog, gde R<1>je fenilC1-C3alkil gde fenil deo je po izboru supstituisan sa hidroksil, halo, ili metoksi; R<2>je C1-C7alkil ili, R<2>i R, zajedno sa atomima za koje su vezani, formiraju piperidinski prsten; R<3>je NR<x>R<y>(C1-C7alkil), NRR<v>karbonilC1C3alkil, ili karboksiC1-C3alkil; R<4>i R<d>, zajedno sa atomima za koje su vezani, formiraju pirolidinski prsten; R<5>je hidroksiC1-C3alkil, imidazolilC1-C3alkil, ili NR<x>R<y>(C1-C7alkil); R<6>je karboksiC1-C3alkil, NRR<v>karbonilC1-C3alkil, NR<x>R<y>(C1-C7alkil), ili C1-C7alkil; R<7>i R<g>, zajedno sa atomima za koje su vezani, formiraju pirolidinski prsten po izboru supstituisan sa hidroksi; R<8>i R<10>su benzotienil ili indolilC1-C3alkil po izboru supstituisan sa karboksiC1-C3alkil; R<9>je hidroksiC1-C3alkil, aminoC1-C3alkil, ili C1-C7alkil, R<11>je C1-C3alkoksiC1-C3alkil ili C1-C7alkil; R<12>je C1-C7alkil ili hidroksiC1-C3alkil; i R<13>je C1-C7alkil, karboksiC1-C3alkil, ili -(CH2)3NHC(NH)NH2.

[0025] U četrnaestom aspektu prvog tehničkog rešenja predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje sa formulom (I), ili farmaceutski prihvatljivu so istog, gde:

A je

m i w su 1;

R<14>, R<15>, i R<16a>su svako vodonik;

R<d>je metil ili, R<d>i R<4>, zajedno sa atomima za koje su vezani, formiraju prsten odabran od azetidina, pirolidina, morfolina, piperidina, piperazina, i tetrahidrotiazola; gde svaki prsten je po izboru supstituisan sa jednom ili dve grupe nezavisno odabrane od amino, cijano, metil, halo, hidroksi, i fenil;

R<g>je metil ili, R<g>i R<7>, zajedno sa atomima za koje su vezani, formiraju prsten odabran od azetidina, pirolidina, morfolina, piperidina, piperazina, i tetrahidrotiazola; gde svaki prsten je po izboru supstituisan sa jednom ili dve grupe nezavisno odabrane od amino, benzil po izboru supstituisane sa halo grupom, benziloksi, cijano, cikloheksil, metil, halo, hidroksi, izohinoliniloksi po izboru supstituisane sa metoksi grupom, hinoliniloksi po izboru supstituisane sa halo grupom, i tetrazolil; i gde pirolidinski i piperidinski prsten su po izboru fuzionisani sa cikloheksil, fenil, ili indol grupom; i

R<k>je metil ili, R<k>i R<11>, zajedno sa atomima za koje su vezani, formiraju prsten odabran od azetidina, pirolidina, morfolina, piperidina, piperazina, i tetrahidrotiazola; gde svaki prsten je po izboru supstituisan sa jednom ili dve grupe nezavisno odabrane od amino, cijano, metil, halo, i hidroksi.

[0026] U drugom tehničkom rešenju predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje sa formulom (II)

ili farmaceutski prihvatljivu so istog, gde:

A je odabrano od

gde:

n je 0 ili 1;

R<14>i R<15>su nezavisno odabrani od vodonik i metil;

R<16a>je odabrano od vodonika i C1-C6alkil;

R<16>je odabrano od

-(C(R<17a>)2)2-X-R<30>,

-C(R<17a>)2C(O)N(R<16a>)C(R<17a>)2-X'-R<31>,

-C(R<17a>)2[C(O)N(R<16a>)C(R<17a>)2]w'-X-R<31>,

-(C(R<17a>)(R<17>)C(O)NR<16a>)n'-H; i

-(CR<17a>)(R<17>)C(O)NR<16a>)m'-C(R<17a>)(R<17>)-CO2H; gde:

w' je 2 ili 3;

n' je 1-6;

m' je 1-5;

X je lanac od između 1 i 172 atoma gde su atomi odabrani od ugljenika i kiseonika i gde lanac može da sadrži jednu, dve, tri, ili četiri grupe odabrane od -NHC(O)NH-, i -C(O)NH ugrađene tamo; i gde je lanac po izboru supstituisan sa jednom do šest grupa nezavisno odabranih od -CO2H, -C(O)NH2, -CH2C(O)NH2, i -CH2CO2H,

X' je lanac od između 1 i 172 atoma gde su atomi odabrani od ugljenika i kiseonika i gde lanac može da sadrži jednu, dve, tri, ili četiri grupe odabrane od -NHC(O)NH-, i -C(O)NH ugrađene tamo; i gde je lanac po izboru supstituisan sa jednom do šest grupa nezavisno odabranih od -CO2H, -C(O)NH2, i -CH2CO2H, pod uslovom da X’ je drugačije od nesupstituisanog PEG;

svako R<17a>je nezavisno odabrano od vodonika, C1-C6alkila, -CH2OH, -CH2CO2H, -(CH2)2CO2H,

svako R<17>je nezavisno odabrano od vodonika, -CH3, (CH2)zN3, -(CH2)zNH2, -X-R<31>, -(CH2)zCO2H, -CH2OH, CH2C≡CH, i -(CH2)z-triazolil-X-R<35>, gde z je 1-6 i R<35>je odabrano od -CO2H, -C(O)NR<w>R<x>, CH3, biotina, -2-fluropiridina, -C(O)-(CH2)2-C(O)O-vitamina E, -C(O)O-vitamina E, i

pod uslovom da je najmanje jedno R<17>drugačije od vodonika, -CH3, ili -CH2OH;

R<a>, R<f>, R<j>, R<k>, R<l>, i R<m>su vodonik;

Ri R<c>su metil;

R<g>je odabrano od vodonika i metila;

R<1>, R<2>, R<3>, R<4>, R<5>, R<6>, R<7>, R<8>, R<9>, R<10>, R<11>, i R<12>su nezavisno odabrani od bočnog lanca prirodne amino kiseline i bočnog lanca ne-prirodne amino kiseline ili formiraju prsten sa odgovarajućom susednom R grupom kao što je opisano ispod;

R<d>je odabrano od vodonika i metila, ili, R<d>i R<4>, zajedno sa atomima za koje su vezani, formiraju prsten odabran od azetidina, pirolidina, morfolina, piperidina, piperazina, i tetrahidrotiazola; gde svaki prsten je po izboru supstituisan sa jednom do četiri grupe nezavisno odabrane od amino, cijano, metil, halo, halometil, i hidroksi;

R<e>je odabrano od vodonika i metila, ili, R<e>i R<5>, zajedno sa atomima za koje su vezani, formiraju prsten odabran od azetidina, pirolidina, morfolina, piperidina, piperazina, i tetrahidrotiazola; gde svaki prsten je po izboru supstituisan sa jednom do četiri grupe nezavisno odabrane od amino, cijano, metil, halo, halometil, i hidroksi;

R<h>je odabrano od vodonika i metila, ili, R<h>i R<8>, zajedno sa atomima za koje su vezani, formiraju prsten odabran od azetidina, pirolidina, morfolina, piperidina, piperazina, i tetrahidrotiazola; gde svaki prsten je po izboru supstituisan sa jednom jednom do četiri grupe nezavisno odabrane od amino, cijano, metil, halo, halometil, i hidroksi; i

R<1>je odabrano od vodonika i metila, ili, R<1>i R<9>, zajedno sa atomima za koje su vezani odabran od azetidina, pirolidina, morfolina, piperidina, piperazina, i tetrahidrotiazola; gde svaki prsten je po izboru supstituisan sa jednom do četiri grupe nezavisno odabrane od amino, cijano, metil, halo, halometil, i hidroksi.

[0027] U prvom aspektu drugog tehničkog rešenja predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje sa formulom (II), ili farmaceutski prihvatljivu so istog, gde

A je

n je 1;

R<16>je -(CR<17a>)(R<17>)C(O)NR<16a>)m'-C(R<17a>)(R<17>)-CO2H;

svako R<16a>je vodonik;

m' je 2, 3, ili 4;

svako R<17a>je vodonik;

svako R<17>je nezavisno odabrano od vodonika, -(CH2)zNH2, -X-R<31>i -CH2C≡CH,

z je 4;

X je lanac od između 26 i 155 atoma gde su atomi odabrani od ugljenika i kiseonika i gde lanac može da sadrži jednu, dve, ili tri C(O)NH grupe ugrađene tamo; i gde lanac je po izboru supstituisan sa jednom ili dve grupe nezavisno odabrane od -CO2H, -C(O)NH2, -CH2C(O)NH2, i -CH2CO2H; i

R<31>je -CH3, aleksa-5-SDP, i biotin.

[0028] U trećem tehničkom rešenju predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje sa formulom (I) ili njegovu terapijski prihvatljivu so za primenu u poboljšanju, stimulaciji, i/ili povećanju imunog odgovora kod subjekta kod koga postoji potreba za istim. U prvom aspektu trećeg tehničkog rešenja pronalazak dalje obuhvata administriranje dodatnog agensa pre, nakon, ili istovremeno sJedinjenjem sa formulom (I) ili njegovom terapijski prihvatljivom soli. U drugom aspektu dodatni agens je antimikrobni agens, antivirusni agens, citotoksični agens, i/ili modifikator imunog odgovora.

[0029] U četvrtom tehničkom rešenju predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje sa formulom (I) ili njegovu terapijski prihvatljivu so za primenu u inhibiranju rasta, proliferacije, ili metastaze ćelija kancera kod subjekta koji ima potrebu za njim. U prvom aspektu četvrtog tehničkog rešenja kancer je odabran od melanoma, karcinoma renalnih ćelija, skvamoznog nesitnoćelijskog kancera pluća (NSCLC - squamous non-small cell lung cancer), ne-skvamoznog NSCLC, kolorektalnog kancera, kancera prostate rezistentnog na kastraciju, kancera jajnika, kancera želuca, hepatocelularnog karcinoma, karcinoma pankreasa, karcinoma skvamoznih ćelija glave i vrata, karcinoma jednjaka, gastrointestinalnog trakta i dojke, i hematoloških maligniteta.

[0030] U petom tehničkom rešenju predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje sa formulom (I) ili njegovu terapijski prihvatljivu so za primenu u lečenju infektivne bolesti kod subjekta koji ima potrebu za njim. U prvom aspektu petog tehničkog rešenja infektivna bolest je izazvana virusom. U drugom aspektu virus je odabran od HIV, Hepatitis A, Hepatitis B, Hepatitis C, herpes virusa, i influence.

[0031] U šestom tehničkom rešenju predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje sa formulom (I) ili njegovu terapijski prihvatljivu so za primenu u lečenju septičkog ška kod subjekta koji ima potrebu za njim.

[0032] U sedmom tehničkom rešenju predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje sa formulom (II) ili njegovu terapijski prihvatljivu so za primenu u poboljšanju, stimulisanju, i/ili povećanju imunog odgovora kod subjekta koji ima potrebu za njim. U prvom aspektu sedmog tehničkog rešenja pronalazak dalje obuhvata administriranje dodatnog agensa pre, nakon, ili istovremeno sJedinjenjem formule (II) ili njegovom terapijski prihvatljivom soli. U drugom aspektu dodatni agens je antimikrobni agens, antivirusni agens, citotoksični agens, i/ili modifikator imunog odgovora. U trećem aspektu dodatni agens je HDAC inhibitor. U četvrtom tehničkom rešenju dodatni agens je TLR7 i/ili TLR8 agonist.

[0033] U osmom tehničkom rešenju predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje sa formulom (II) ili njegovu terapijski prihvatljivu so za primenu u inhibiranju rasta, proliferacije, ili metastaze ćelija kancera kod subjekta koji ima potrebu za njim. U prvom aspektu osmog tehničkog rešenja kancer je odabran od melanoma, karcinoma renalnih ćelija, skvamoznog nesitnoćelijskog kancera pluća (NSCLC - squamous non-small cell lung cancer), ne-skvamoznog NSCLC, kolorektalnog kancera, kancera prostate rezistentnog na kastraciju, kancera jajnika, kancera želuca, hepatocelularnog karcinoma, karcinoma pankreasa, karcinoma skvamoznih ćelija glave i vrata, karcinoma jednjaka, gastrointestinalnog trakta i dojke, i hematoloških maligniteta

[0034] U devetom tehničkom rešenju predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje sa formulom (II) ili njegovu terapijski prihvatljivu so za primenu u lečenju infektivne bolesti kod subjekta koji ima potrebu za njim. U prvom aspektu devetog tehničkog rešenja infektivna bolest je izazvana virusom. U drugom aspektu virus je odabran od HIV, Hepatitis A, Hepatitis B, Hepatitis C, herpes virusa, i influence.

[0035] U desetom tehničkom rešenju predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje sa formulom (II) ili njegovu terapijski prihvatljivu so za primenu u lečenju septičnog šoka kod subjekta koji ima potrebu za njim.

[0036] U predmetnom pronalasku je stavljeno na uvid javnosti jedinjenje sa formulom (III)

ili farmaceutski prihvatljiva so istog, gde:

A je odabrano od

i

gde:

označava tačku vezivanja sa karbonil grupom i označava tačku vezivanja sa atomom azota;

n je 0 ili 1;

m je 1 ili 2;

w je 0, 1, ili 2;

R<14>i R<15>su nezavisno odabrani od vodonika i metila;

R<16a>je odabrano od vodonika i C1-C6alkila;

R<16>je odabrano od

-(C(R<17a>)2)2-X-R<30>,

-C(R<17a>)2C(O)N(R<16a>)C(R<17a>)2-X'-R<31>,

-C(R<17a>)2[C(O)N(R<16a>)C(R<17a>)2]w'-X-R<31>,

-(C(R<17a>)(R<17>)C(O)NR<16a>)n'-H; i

-(C(R<17a>)(R<17>)C(O)NR<16a>)m'-C(R<17a>)(R<17>)-CO2H;

gde:

w' je 2 ili 3;

n' je 1-6; (2, 3)

m' je 0-5; (1, 2, 3)

X je lanac od između 1 i 172 atoma gde su atomi odabrani od ugljenika i kiseonika i gde lanac može da sadrži jednu, dve, tri, ili četiri grupe odabrane od -NHC(O)NH-, i -C(O)NH-ugrađene tamo; i gde je lanac po izboru supstituisan sa jednom do šest grupa nezavisno odabranih od -CO2H, -C(O)NH2, -CH2C(O)NH2, i -CH2CO2H,

svako R<17>je nezavisno odabrano od vodonika, -CH3, (CH2)zN3, -(CH2)zNH2, -X-R<31>, -(CH2)zCO2H, -CH2OH, CH2C≡CH, i -(CH2)z-triazolil-X-R<35>, gde z je 1-6 i R<35>je odabrano od -CO2H, -C(O)NR<w>R<x>, CH3, biotina, -2-fluropiridina, -C(O)-(CH2)2-C(O)O-vitamina E, i -C(O)O-vitamina E; pod uslovom da je najmanje jedno R<17>drugačije od vodonika, -CH3, ili -CH2OH;

R<c>, R<f>, R<h>, R, R<m>, i R<n>su vodonik;

R<a>, R<c>, R<j>, i R<k>, su svako nezavisno odabrano od vodonika i metila;

R<d>je vodonik ili metil, ili, R<d>i R<4>, zajedno sa atomima za koje su vezani, mogu formirati prsten odabran od azetidina, pirolidina, morfolina, piperidina, piperazina, i tetrahidrotiazola; gde svaki prsten je po izboru supstituisan sa jednom do četiri grupe nezavisno odabrane od amino, cijano, metil, halo, hidroksi, i fenil;

[0037] U predmetnom pronalasku je stavljeno na uvid javnosti jedinjenje sa formulom (IV)

ili farmaceutski prihvatljiva so istog, gde:

A je odabrano od

gde:

n je 0 ili 1;

R<14>i R<15>su nezavisno odabrani od vodonika i metila;

R<16a>je odabrano od vodonika i C1-C6alkila;

R<16>je odabrano od

-(C(R<17a>)2)2-X-R<30>,

-C(R<17a>)2C(O)N(R<16a>)C(R<17a>)2-X'-R<31>,

-C(R<17a>)2[C(O)N(R<16a>)C(R<17a>)2]w'-X-R<31>,

-(C(R<17a>)(R<17>)C(O)NR<16a>)n'-H; i

-(CR<17a>)(R<17>)C(O)NR<16a>)m'-C(R<17a>)(R<17>)-CO2H; gde:

w' je 2 ili 3;

n' je 1-6;

m' je 1-5;

R<a>, R<f>, R<j>, R<k>, R<l>, i R<m>su vodonik;

Ri R<c>su metil;

R<g>je odabrano od vodonika i metila;

R<h>je odabrano od vodonika i metila, ili, R<h>i R<8>, zajedno sa atomima za koje su vezani, formiraju prsten odabran od azetidina, pirolidina, morfolina, piperidina, piperazina, i tetrahidrotiazola; gde svaki prsten je po izboru supstituisan sa jednom do četiri grupe nezavisno odabrane od amino, cijano, metil, halo, halometil, i hidroksi; i

R<1>je odabrano od vodonika i metila, ili, Ri R<9>, zajedno sa atomima za koje su vezani odabran od azetidina, pirolidina, morfolina, piperidina, piperazina, i tetrahidrotiazola; gde svaki prsten je po izboru supstituisan sa jednom do četiri grupe nezavisno odabrane od amino, cijano, metil, halo, halometil, i hidroksi.

[0038] U jedinjenjima sa formulom (I) i (II) gde R bočni lanci su deo prstena koji je supstituisan sa metilom, razume se da metil grupa može biti na bilo kom pogodnom atomu ugljenika u prstenu, uključujući ugljenik koji je deo makrociklične osnovne strukture.

[0039] Sledeće grupe su poželjne na svakom R položaju. Aminokiselne mogu biti D- ili L-stereohemi i mogu biti supstituisane kao što je objašnjeno na drugom mestu u objavi.

[0040] U jedinjenjima sa formulom (I), poželjni R<1>bočni lanci su: fenilalanin, tirozin, 3-tien-2-il, 4-metilfenilalanin, 4-hlorofenilalanin, 3-metoksifenilalananie, izotriptofan, 3-metilfenilalanin, 1-naftilalanin, 3,4-difluorofenilalanin, 4-fluorofenilalanin, 3,4-dimetoksifenilalanin, 3,4-dihlorofenilalanin, 4-difluorometilfenilalanin, 2-metilfenilalanin, 2-naftilalanin, triptofan, 4-piridinil, 4-bromofenilalanin, 3-piridinil, 4-trifluorometilfenilalanin, 4-karboksifenilalanin, 4-metoksifenilalanin, bifenilalanin, i 3-hlorofenilalanin; i 2,4-diaminobutan.

[0041] U jedinjenjima sa formulom (I) gde R<2>nije deo prstena, poželjni R<2>bočni lanci su: alanin, serin, i glicin.

[0042] U jedinjenjima sa formulom (I), poželjni R<3>bočni lanci su: asparagin, asparaginska kiselina, glutaminska kiselina, glutamin, serin, ornitin, lizin, histidin, treonin, leucin, alanin, 2,3-diaminopropan, i 2,4-diaminobutan.

[0043] U jedinjenjima sa formulom (I) gde R<4>nije deo prstena, poželjni R<4>bočni lanci su: valin, alanin, izoleucin, i glicin.

[0044] U jedinjenjima sa formulom (I), poželjni R<5>bočni lanci su: aminometan, histidin, asparagin, 2,3-diaminopropan, serin, glicin, 2,4-diaminobutan, treonin, alanin, lizin, asparaginska kiselina, alanin, i 3-tiazolilalanin.

[0045] U jedinjenjima sa formulom (I), poželjni R<6>bočni lanci su: leucin, asparaginska kiselina, asparagin, glutaminska kiselina, glutamin, serin, lizin, 3-cikloheksan, treonin, ornitin, 2,4-diaminobutan, alanin, arginin, i ornitin (COCH3).

[0046] U jedinjenjima sa formulom (I) gde R<7>nije deo prstena, poželjni R<7>bočni lanci su: glicin, 2,4-diaminobutan, serin, lizin, arginin, ornitin, histidin, asparagin, glutamin, alanin, i 2,4-diaminobutan (C(O)ciklobutan).

[0047] U jedinjenjima sa formulom (I) poželjni R<8>bočni lanci su triptofan i 1,2-benzizotiazolinilalanin.

[0048] U jedinjenjima sa formulom (I) poželjni R<9>bočni lanci su: serin, histidin, lizin, ornitin, 2,4-dibutilamin, treonin, lizin, glicin, glutaminska kiselina, valin, 2,3-diaminopropan, arginin, asparaginska kiselina, i tirozin.

[0049] U jedinjenjima sa formulom (I) poželjni R<10>bočni lanci su: po izboru supstituisan triptofan, benzizotiazolilalanin, 1-naftilalanin, metionin.

[0050] U jedinjenjima sa formulom (I) poželjni R<11>bočni lanci su: norleucin, leucin, asparagin, fenilalanin, metionin, etoksimetan, alanin, triptofan, izoleucin, fenilpropan, glutaminska kiselina, heksan, i heptan.

[0051] U jedinjenjima sa formulom (I) gde R<12>nije deo prstena, poželjni R<12>bočni lanci su: norleucin, alanin, etoksimetan, metionin, serin, fenilalanin, metoksietan, leucin, triptofan, izoleucin, glutaminska kiselina, heksan, heptan, i glicin.

[0052] U jedinjenjima sa formulom (I) poželjni R<13>bočni lanci : arginin, ornitin, alanin, 2,4-diaminobutan, 2,3-diaminopropan, leucin, asparaginska kiselina, glutaminska kiselina, serin, lizin, treonin, ciklopropilmetan, glicin, valin, izoleucin, histidin, i 2-aminobutan.

[0053] U skladu sa predmetnim pronalaskom, otkrili smo da se peptidi specifično vezuju za PD-L1 i da su u stanju da inhibiraju interakciju PD-L1 sa PD-1 i CD80. Ovi makrociklični peptidi ispoljavaju in vitro imunomodulatornu efikasnost tako čineći ih terapijskim kandidatima za lečenje raznih bolesti uključujući kancer i infektivne bolesti.

[0054] Termini "specifično vezivanje" ili "specifično vezuju" se odnosi na interakciju između proteina i vezujućeg molekula, kao što je jedinjenje ili ligand. Interakcija je zavisna od prisustva posebne strukture (tj., enzim vezujućeg mesta, antigenske determinante ili epitopa) proteina koju prepoznaje vezujući molekul. Na primer, ukoliko jedinjenje ima specifično vezivanje za protein vezujuće mesto "A", prisustvo jedinjenja u reakciji koja sadrži protein uključujući vezujuće mesto A, i obeleženog peptida koji se specifično vezuje za protein vezujuće mesto A će smanjiti količinu obeleženog peptida vezanog za protein. Nasuprot tome, nespecifično vezivanje jedinjenja za protein ne rezultira premeštanjem zavisnim od koncentracije obeleženog peptida sa proteina.

[0055] Predmetni pronalazak je namenjen da obuhvati sve izotope atoma koji se javljaju u predmetnim jedinjenjima. Izotopi uključuju one atome koji imaju isti atomski broj ali različite masene brojeve. Kao opšti primer i bez ograničenja, izotopi vodonika uključuju deuterijum i tricijum. Izotopi ugljenika uključuju<13>C i<14>C. Izotopski-obeležena jedinjenja pronalaska mogu uopšteno biti pripremljena pomoću konvencionalnih tehnika koje su poznate onima koji su stručni u oblasti ili pomoću procesa analognih onima koji su ovde opisani, primenom odgovarajućeg izotopski-obeleženog reagensa umesto ne-obeleženog reagensa koji se inače koristi. Takva jedinjenja mogu imati razne moguće primene, na primer kao standardi i reagensi u određivanju biološke aktivnosti. U slučaju stabilnih izotopa, takva jedinjenja mogu imati potencijal da povoljno modifikuju biološka, farmakološka, ili farmakokinetička svojstva.

[0056] Dodatni aspekt predmeta opisanog ovde je primena peptida koji su stavljeni na uvid javnosti kao radio-obeleženih liganada za razvoj eseja vezivanja liganda ili za praćenje in vivo adsorpcije, metabolizma, raspodele, receptorskog vezivaja ili zauzetosti, ili dispozicije jedinjenja. Na primer, makrociklični peptid opisan ovde može biti pripremljen primenom radioaktivnog izotopa<125>I i radio-obeleženi peptid koji se dobija može da se primeni da se razvije esej vezivanja ili za studije metabolizma. Alternativno, i za istu svrhu, makrociklični peptid opisn ovde može biti pretvoren u radio-obeleženi oblik katalitičkom zamenom tricijumom primenom metoda koje su poznate onima koji su stručni u oblasti.

[0057] Makrociklični peptidi predmetnog pronalaska mogu se takođe primeniti kao agensi za PET snimanje dodavanjem radioaktivnog tračača primenom metoda koje su poznate onima koji su stručni u oblasti.

[0058] Poželjni peptidi uključuju najmanje jedan od makrocikličnih peptida obezbeđenih ovde i ovi peptidi mogu biti uključeni u farmaceutske kompozicije i kombinacije.

[0059] Definicije koje su ovde obezbeđene se primenjuju, bez ograničenja, na termine kao što su korišćeni kroz specifikaciju, sem ako nije drugačije ograničeno u određenim slučajevima.

[0060] Oni koji su stručni u oblasti hemije aminokiselina i peptida su svesni da aminokiselina uključuje jedinjenje predstavljeno opštom strukturom:

gde R i R' su kao što je razmatrano ovde.

[0061] Ukoliko nije drugačije naznačeno, termin "amino kiselina" kao što je ovde upotrebljen, samostalno ili kao deo druge grupe, uključuje, bez ograničenja, amino grupu i karboksil grupu povezane za isti ugljenik, naznačen kao "α" ugljenik, gde R i/ili R' može biti prirodan ili neprirodan bočni lanac, uključujući vodonik. Apsolutna "S" konfiguracija na "α" ugljeniku je uobičajeno nazivana "L" ili "prirodna" konfiguracija. U slučaju gde i "R" i "R'"(prim) supstituenti su jednaki vodoniku, amino kiselina je glicin i nije hiralna.

[0062] Termini "bočni lanac prirodne amino kiseline" i "bočni lanac amino kiseline koja se pojavljuje u prirodi," kao što je ovde korišćeno, se odnose na bočni lanac bilo koje od amino kiselina koje se pojavljuju u prirodi (tj., alanina, arginina, asparagina, asparaginske kiseline, cisteina, glutamina, glutaminske kiseline, glicina,-histidina, izoleucina, leucina, lizina, metionina, fenilalanina, prolina, serina, treonina, triptofana, tirozina, i valina) obično u S-konfiguraciji (tj., L-amino kiselina).

[0063] Termini "bočni lanac ne-prirodne amino kiseline" i "bočni lanac amino kiseline koja se ne pojavljuje u prirodi," kao što je ovde korišćeno, se odnose na bočni lanac bilo koje amino kiseline koja se pojavljuje u prirodi obično u R-konfiguraciji (tj., D-amino kiselina) ili na grupu drugačiju od bočnog lanca amino kiseline koja se pojavljuje u prirodi u R- ili S-konfiguraciji (tj., D- ili L-amino kiselina, redom) odabranu od:

C2-C7alkenil, C1-C3alkoksiC1-C3alkil, C1-C6alkoksikarbonilC1-C3alkil, C1-C7alkil, C1-C3alkilsulfanilC1-C3alkil, amidoC1-C3alkil, aminoC1-C3alkil, azaindolilC1-C3alkil, benzotiazolilC1-C3alkil, benzotienilC1-C3alkil, benziloksiC1-C3alkil, karboksiC1-C3alkil, C3-C14cikloalkilC1-C3alkil, difenilmetil, furanilC1-C3alkil, imidazolilC1-C3alkil, naftilC1-C3alkil, piridinilC1-C3alkil, tiazolilC1-C3alkil, tienilC1-C3alkil;

bifenilC1-C3alkil gde bifenil je po izboru supstituisan sa metil grupom;

heterociklil po izboru supstituisan sa jednom, dve, tri, četiri, ili pet grupa nezavisno odabranih od C1-C4alkoksi, C1-C4alkil, C1-C3alkilsulfonilamino, amido, amino, aminoC1-C3alkil, aminosulfonil, karboksi, cijano, halo, haloCi-C3alkil, hidroksi, -NC(NH2)2, nitro, i -OP(O)(OH)2;

indolilC1-C3alkil, gde indolil deo je po izboru supstituisan sa jednom grupom odabranom od C1-C3alkil, karboksiC1-C3alkil, halo, hidroksi, i fenil, gde fenil je dalje po izboru supstituisan sa jednom, dve, ili tri grupe nezavisno odabrane od C1-C3alkoksi, C1-C3alkil, i halo;

NR<x>R<y>(C1-C7alkil), gde R<x>i R<y>su nezavisno odabrani od vodonik, C2-C4alkeniloksikarbonil, C1-C3alkil, C1-C3alkilkarbonil, C3-C14cikloalkilkarbonil, furanilkarbonil, i fenilkarbonil. Kada alkil veznik sadrži više od jednog ugljenika dodatna NR<x>R<y>grupa može biti na lancu.

NRR<v>karbonilC1-C3alkil, gde Ri R<v>su nezavisno odabrani od vodonik, C1-C3alkil, i trifenilmetil;

fenil po izboru supstituisan sa jednom, dve, tri, četiri, ili pet grupa nezavisno odabranih od C1-C4alkoksi, C1-C4alkil, C1-C3alkilsulfonilamino, amido, amino, aminoC1-C3alkil, aminosulfonil, karboksi, cijano, halo, haloCi-C3alkil, hidroksi, -NC(NH2)2, nitro, i -OP(O)(OH)2;

fenilC1-C3alkil gde fenil deo je po izboru supstituisan sa jednom, dve, tri, četiri, ili pet grupa nezavisno odabranih od C1-C4alkoksi, C1-C4alkil, C1-C3alkilsulfonilamino, amido, amino, aminoC1-C3alkil, aminosulfonil, karboksi, cijano, halo, haloC1-C3alkil, hidroksi, -NC(NH2)2, nitro, i -OP(O)(OH)2; i

fenoksiC1-C3alkil gde fenil je po izboru supstituisan sa C1-C3alkil grupom.

[0064] Termin "aleksa-5-SDP," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na

gde W je O ili NH.

[0065] Termin "C2-C4alkenil," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na grupu ravnog ili razgranatog lanca od dva do četiri atoma ugljenika koja sadrži najmanje jednu ugljenik-ugljenik dvostruku vezu.

[0066] Termin "C2-C7alkenil," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na grupu ravnog ili razgranatog lanca od dva do sedam atoma ugljenika koja sadrži najmanje jednu ugljenik-ugljenik dvostruku vezu.

[0067] Termin "C2-C4alkeniloksi," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na C2-C4alkenil grupu vezanu za osnovni molekularni segment preko atoma kiseonika.

[0068] Termin "C1-C3alkoksi," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na C1-C3alkil grupu vezanu za osnovni molekularni segment preko atoma kiseonika.

[0069] Termin "C1-C4alkoksi," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na C1-C4alkil grupu vezanu za osnovni molekularni segment preko atoma kiseonika.

[0070] Termin "C1-C6alkoksi," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na C1-C6alkil grupu vezanu za osnovni molekularni segment preko atoma kiseonika.

[0071] Termin "C1-C3alkoksiC1-C3alkil," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na C1-C3alkoksi grupu vezanu za osnovni molekularni segment preko C1-C3alkil grupe. Termin "C1-C6alkoksikarbonil," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na C1-C6alkoksi grupu vezanu za osnovni molekularni segment preko karbonil grupe.

[0072] Termin "C1-C6alkoksikarbonilC1-C3alkil," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na C1-C6alkoksikarbonil grupu vezanu za osnovni molekularni segment preko C1-C3alkil grupe.

[0073] Termin "C1-C3alkil," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na grupu izvedenu iz zasićenog ugljovodonika ravnog ili razgranatog lanca koji sadrži od jedan do tri atoma ugljenika.

[0074] Termin "C1-C4alkil," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na grupu izvedenu iz zasićenog ugljovodonika ravnog ili razgranatog lanca koji sadrži od jedan do četiri atoma ugljenika.

[0075] Termin "C1-C6alkil," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na grupu izvedenu iz zasićenog ugljovodonika ravnog ili razgranatog lanca koji sadrži od jedan do šest atoma ugljenika.

[0076] Termin "C1-C3alkilkarbonil," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na C1-C3alkil grupu vazanu za osnovni molekularni segment preko karbonil grupe.

[0077] Termin "C1-C3alkilsulfanil," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na C1-C3alkil grupu vazanu za osnovni molekularni segment preko atoma sumpora.

[0078] Termin "C1-C3alkilsulfanilC1-C3alkil," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na C1-C3alkilsulfanil grupu vazanu za osnovni molekularni segment preko C1-C3alkil grupe.

[0079] Termin "C1-C3alkilsulfonil," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na C1-C3alkil grupu vazanu za osnovni molekularni segment preko sulfonil grupe.

[0080] Termin "C1-C3alkilsulfonilamino," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na C1-C3alkilsulfonil grupu vazanu za osnovni molekularni segment preko amino grupe.

[0081] Termin "amido," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na -C(O)NH2.

[0082] Termin "amidoC1-C3alkil," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na amido grupu vazanu za osnovni molekularni segment preko C1-C3alkil grupe.

[0083] Termin "amino," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na -NH2.

[0084] Termin "aminoC1-C3alkil," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na amino grupu vazanu za osnovni molekularni segment preko C1-C3alkil grupe.

[0085] Termin "aminosulfonil," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na amino grupu vazanu za osnovni molekularni segment preko sulfonil grupe.

[0086] Termin "azaindolilC1-C3alkil," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na azaindolil grupu vazanu za osnovni molekularni segment preko C1-C3alkil grupe. Azaindolil grupa može biti vezana za alkil segment preko bilo kog atoma u grupi koji se može supstituisati.

[0087] Termin "benzotiazolilC1-C3alkil," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na benzotiazolil grupu vazanu za osnovni molekularni preko C1-C3alkil grupe. Benzotiazolil grupa može biti vezana za alkil segment preko bilo kog atoma u grupi koji se može supstituisati.

[0088] Termin "benzotienilC1-C3alkil," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na benzotienil grupu vazanu za osnovni molekularni preko C1-C3alkil grupe. Benzotienil grupa može biti vezana za alkil segment preko bilo kog atoma u grupi koji se može supstituisati.

[0089] Termin "benziloksi," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na benzil grupu vezanu za osnovni molekularni segment preko atoma kiseonika.

[0090] Termin "benziloksiC1-C3alkil," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na benziloksi grupu vezanu za osnovni molekularni segment preko C1-C3alkil grupe.

[0091] Termin "biotin," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na:

gde W je O ili NH.

[0092] Termin "bifenilC1-C3alkil," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na bifenil grupu vezanu za osnovni molekularni segment preko C1-C3alkil grupe. Bifenil grupa može biti vezana za alkil segment preko bilo kog atoma u grupi koji se može supstituisati.

[0093] Termin "karbonil," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na -C(O)-.

[0094] Termin "karboksi," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na -CO2H.

[0095] Termin "karboksiC1-C3alkil," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na karboksi grupu vezanu za osnovni molekularni segment preko C1-C3alkil grupe.

[0096] Termin "cijano," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na -CN.

[0097] Termin "C3-C14cikloalkil," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na zasićeni monociklični, biciklični, ili triciklični ugljovodonični prstenasti sistem koji ima tri do četrnaest atoma ugljenika i nula heteroatoma. Biciklični i triciklični prstenovi mogu biti fuzionisani, spirociklični, ili premošćeni. Reprezentativni primeri cikloalkil grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, ciklopropil, ciklopentil, biciklo[3.1.1]heptil, i adamantil.

[0098] Termin "C3-C14cikloalkilC1-C3alkil," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na C3-C14cikloalkil grupu vezanu za osnovni molekularni segment preko C1-C3alkil grupe.

[0099] Termin "C3-C14cikloalkilkarbonil," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na C3-C14cikloalkil grupu vezanu za osnovni molekularni segment preko karbonil grupe.

[0100] Termin "furanilC1-C3alkil," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na furanil grupu vezanu za osnovni molekularni segment preko C1-C3alkil grupe. Furanil grupa može biti vezana za alkil segment preko bilo kog atoma u grupi koji se može supstituisati.

[0101] Termin "furanilkarbonil," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na furanil grupu vezanu za osnovni molekularni segment preko karbonil grupe.

[0102] Termini "halo" i "halogen," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na F, Cl, Br, ili I.

[0103] Termin "haloC1-C3alkil," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na C1-C3alkil grupu supstituisanu sa jednim, dva, ili tri atoma halogena.

[0104] Termin "halometil," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na metil grupu supstituisanu sa jednim, dva, ili tri atoma halogena.

[0105] Termin "heterociklil," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na peto-, šesto-, ili sedmo- člani prsten koji sadrži jedan, dva, ili tri heteroatoma nezavisno odabrana od azota, kiseonika, i sumpora. Peto-člani prsten ima nula do dve dvostruke veze i šesto- i sedmo-člani prstenovi imaju nula do tri dvostruke veze. Termin "heterociklil" takođe uključuje biciklične grupe u kojima je heterociklil prsten fuzionisan za četvoro- do šesto-člani aromatični ili ne-aromatični karbociklični prsten ili drugu monocikličnu heterociklil grupu. Heterociklil grupe predmetnog pronalaska su vezane za osnovni molekularni segment preko atoma ugljenika u grupi. Primeri heterociklil grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, benzotienil, furil, imidazolil, indolinil, indolil, izotiazolil, izoksazolil, morfolinil, oksazolil, piperazinil, piperidinil, pirazolil, piridinil, pirolidinil, pirolopiridinil, pirolil, tiazolil, tienil, i tiomorfolinil.

[0106] Termin "hidroksi," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na -OH.

[0107] Termin "imidazolilC1-C3alkil," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na imidazolil grupu vezanu za osnovni molekularni segment preko C1-C3alkil grupe. Imidazolil grupa može biti vezana za alkil segment preko bilo kog atoma u grupi koji se može supstituisati.

[0108] Termin "indolilC1-C3alkil," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na indolil grupu vezanu za osnovni molekularni segment preko C1-C3alkil grupe. Indolil grupa može biti vezana za alkil segment preko bilo kog atoma u grupi koji se može supstituisati.

[0109] Termin "naftilC1-C3alkil," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na naftil grupu vezanu za osnovni molekularni segment preko C1-C3alkil grupe. Naftil grupa može biti vezana za alkil segment preko bilo kog atoma u grupi koji se može supstituisati.

[0110] Termin "nitro," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na -NO2.

[0111] Termin "NR<x>R<y>," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na dve grupe, R<a>i R, koje su vezane za osnovni molekularni segment preko atoma azota. R<a>i Rsu nezavisno odabrani od vodonika, C2-C4alkeniloksikarbonila, C1-C3alkilkarbonila, C3-C14cikloalkilkarbonila, furanilkarbonila, i fenilkarbonila.

[0112] Termin "NR<x>R<y>(C1-C3)alkil," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na NR<x>R<y>grupu vezanu za osnovni molekularni segment preko C1-C3alkil grupe.

[0113] Termin "NRR<v>," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na dve grupe, Ri R<v>, koje su vezane za osnovni molekularni segment preko atoma azota. Ri R<v>su nezavisno odabrani od vodonika, C1-C3alkila, i trifenilmetila.

[0114] Termin "NRR<v>karbonil," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na NRR<v>grupu vezanu za osnovni molekularni segment preko karbonil grupe.

[0115] Termin "NRR<v>karbonilC1-C3alkil," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na NRR<v>karbonil grupu vezanu za osnovni molekularni segment preko C1-C3alkil grupe.

[0116] Termin "PEG," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na polietilen glikol, polimer etilen oksida predstavljen formulom

gde n je između 1 i 57. Treba razumeti da PEG grupa može biti vezana za osnovni molekularni segment preko atoma kiseonika ili atoma ugljenika.

[0117] Temin "fenoksi," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na fenil grupu vezanu za osnovni molekularni segment preko atoma kiseonika.

[0118] Termin "fenoksiC1-C3alkil," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na fenoksi grupu vezanu za osnovni molekularni segment preko C1-C3alkil grupe.

[0119] Termin "fenilC1-C3alkil," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na fenil grupu vezanu za osnovni molekularni segment preko C1-C3alkil grupe.

[0120] Termin "fenilkarbonil," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na fenil grupu vezanu za osnovni molekularni segment preko karbonil grupe.

[0121] Termin "piridinilC1-C3alkil," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na piridinil grupu vezanu za osnovni molekularni segment preko C1-C3alkil grupe. Piridinil grupa može biti vezana za alkil segment preko bilo kog atoma u grupi koji se može supstituisati.

[0122] Termin "sulfanil," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na -S-.

[0123] Termin "sulfonil," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na -SO2-.

[0124] Termin "tiazolilC1-C3alkil," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na tiazolil grupu vezanu za osnovni molekularni segment preko C1-C3alkil grupe. Tiazolil grupa može biti vezana za alkil segment preko bilo kog atoma u grupi koji se može supstituisati.

[0125] Termin "tienilC1-C3alkil," kao što je ovda korišćeno, odnosi se na tienil grupu vezanu za osnovni molekularni segment preko C1-C3alkil grupe. Tienil grupa može biti vezana za alkil segment preko bilo kog atoma u grupi koji se može supstituisati.

[0126] Termin "lečenje" odnosi se na: (i) sprečavanje pojave bolesti, poremećaja, ili stanja kod pacijenta koji može biti predisponiran za bolest, poremećaj, i/ili stanje ali još nije dijagnostifikovano da ga ima; (ii) inhibiranje bolesti, poremećaja, ili stanja, tj., zaustavljanje njegovog razvoja; i (iii) ublažavanje bolesti, poremećaja, ili stanja, tj., izazivanje regresije bolesti, poremećaja, i/ili stanja i/ili simptoma koji su u vezi sa bolešću, poremećajem, i/ili stanjem.

[0127] Termin "vitamin E," kao što je ovda korišćeno odnosi se na:

[0128] Vezivanje makrocikličnih peptida za PD-L1 može se meriti, na primer, metodama kao što su homogena vremenski razložena fluorescencija (Eng. homogeneous time-resolved fluorescence (HTRF)), Površinska plazmonska rezonancija (Eng. Surface Plasmon Resonance (SPR)), izotermalna titraciona kalorimetrija (Eng. isothermal titration calorimetry (ITC)), Nuklearna magnetno-rezonantna spektroskopija (Eng. nuclear magnetic resonance spectroscopy (NMR)) i slično. Osim toga, vezivanje makrocikličnih peptida za PD-L1eksprimiran na površini ćelija može se meriti testovima ćelijskog vezivanja koji su opisani ovde.

[0129] Administriranje ovde opisanog terapijskog agensa uključuje, bez ograničenja, administriranje terapijski efikasne količine terapijskog agensa. Izraz "terapijski efikasna količina" kako se ovde koristi odnosi se, bez ograničenja, na količinu terapijskog agensa za lečenje ili prevenciju stanja koje se može lečiti administriranjem kompozicije PD-1/PD-L1 inhibitora vezivanja koji su ovde opisani. Ta količina je dovoljna količina da pokaže detektabilan terapijski ili preventivni ili poboljšan efekat. Efekat može da uključi, na primer i bez ograničenja, lečenje ili prevenciju ovde navedenih stanja. Precizna efikasna količina za subjekta zavisiće od veličine ili zdravlja subjekta, prirode i obima stanja koje se leči, preporuke lekara i izabranih za administriranje terapija ili kombinacije terapija. Stoga, nije korisno unapred precizno navesti tačnu efikasnu količinu.

[0130] U drugom aspektu, predmetna objava se odnosi na makrociklične peptide ove predmetne objave za upotrebu u inhibiranju rasta tumorskih ćelija kod subjekta. Kao što je ovde prikazano, makrociklični peptidi ove predmetne objave su sposobni da se vežu za PD-L1, ometajući interakciju između PD-L1 i PD-1, nadmećući se sa vezivanjem PD-L1 sa anti-PD-1 monoklonskim antitelima za koja se zna da blokiraju interakciju sa PD-1, poboljšavajući CMV-specifičnu T ćelijsku IFNy sekreciju, i unapređujući HIV-specifičnu T ćelijsku IFNg sekreciju. Kao rezultat, makrociklični peptidi ove predmetne objave su korisni za modifikaciju imunog odgovora, lečenje bolesti poput kancera ili infektivne bolesti, podsticanje zaštitnog autoimunog odgovora ili stimulisanje antigen-specifičnih imunih odgovora (npr., istovremenim administriranjem PD-L1 blokirajućih peptida sa antigenom od interesa).

[0131] Da bi se ova predmetna objava mogla lakše razumeti, prvo se definišu određeni pojmovi. Dodatne definicije su iznete u detaljnom opisu.

[0132] Izrazi "Ligand Programirane Smrti 1", "Ligand Programirane Ćelijske Smrti 1", "Protein PD-L1", "PD-L1", "PDL1", "PDCDL1", "hPD-L1", "hPD-LI", "CD274" i "B7-H1" koriste se naizmenično i uključuju varijante, izoforme, vrste homologa humanog PD-L1, i analoge koji imaju najmanje jedan zajednički epitop sa PD-L1. Kompletna PD-L1 sekvenca može da se nađe pod GENBANK® Pristupnim Brojem NP_054862.

[0133] Izrazi "Programirana Smrt 1", "Programirana Ćelijska Smrt 1", "Protein PD-1", "PD-1", "PD1", "PDCD1", "hPD-1" i "hPD-I" koriste se naizmenično i uključuju varijante, izoforme, vrste homologa humanog PD-1 i analoge koji imaju najmanje jedan zajednički epitop sa PD-1. Kompletna PD-1 sekvenca može da se nađe pod GENBANK® Pristupnim Brojem U64863.

[0134] Izrazi "citotoksični antigen-4 povezan sa T limfocitima", "CTLA-4", "CTLA4", "CTLA-4 antigen" i "CD152" (videti, npr., Murata, Am. J. Pathol., 155:453-460 (1999)) se koriste naizmenično, i uključuju varijante, izoforme, vrste homologa humanog CTLA-4, i analoge koji imaju najmanje jedan zajednički epitop sa CTLA-4 (videti, npr., Balzano, Int. J. Kancer Suppl., 7:28-32 (1992)). Kompletna sekvenca nukleinskih kiselina CTLA-4 može se naći pod GENBANK® Pristupnim Brojem L15006.

[0135] Izraz "imuni odgovor" odnosi se na dejstvo, na primer, limfocita, ćelija koje prezentuju antigen, fagocitnih ćelija, granulocita, i rastvorljivih makromolekula proizvedenih od strane gore navedenih ćelija ili jetre (uključujući makrociklične peptide, citokine i komplement) što dovodi do selektivnog oštećenja, uništavanja ili uklanjana iz ljudskog tela invazivnih patogena, ćelija ili tkiva zaraženih patogenima, kancerogenim ćelijama ili u slučajevima autoimunosti ili patoloških upala, normalnih humanih ćelija ili tkiva.

[0136] "Neželjeni događaj" (Eng. adverse event AE) kako se ovde koristi je svaki nepovoljan i uglavnom nenamerni, čak i nepoželjan znak (uključujući nenormalan laboratorijski nalaz), simptom, ili bolest koji su povezani sa korišćenjem medicinskog tretmana. Na primer, neželjeni događaj može biti povezan sa aktivacijom imunog sistema ili ekspanzijom ćelija imunog sistema (npr., T ćelija) kao odgovor na lečenje. Medicinski tretman može imati jedan ili više povezanih neželjenih događaja i svaki AE može imati isti ili različit nivo ozbiljnosti. Upućivanje na metode koje mogu "izmeniti neželjene događaje" znači režim lečenja koji smanjuje učestalost i/ili ozbiljnost jednog ili više AE povezanih sa korišćenjem različitog režima lečenja.

[0137] Kako se ovde koristi, "hiperproliferativna bolest" odnosi se na stanja u kojima je rast ćelije povećan preko normalnih nivoa. Na primer, hiperproliferativne bolesti ili poremećaji uključuju maligne bolesti (npr., kancer jednjaka, kancer debelog creva, kancer žuči) i nemaligne bolesti (npr., ateroskleroza, benigna hiperplazija i benigna hipertrofija prostate).

[0138] Kako se ovde koristi, "oko" ili "koji je sačinjen u osnovi od" znači u prihvatljivom opsegu greške za specifičnu vrednost, koja je određena od strane prosečnog poznavaoca oblasti, a to će delimično zavisiti od toga kako se vrednost meri ili određuje, tj., od ograničenja sistema merenja. Na primer, "oko" ili "koji je sačinjen u osnovi od" može da znači unutar jednog ili više od jednog standardnog odstupanja prema praksi u oblasti. Alternativno, "oko" ili "koji je sačinjen u osnovi od" može da znači opseg do 20%. Dalje, posebno u pogledu bioloških sistema ili procesa, izrazi mogu značiti, do reda veličine ili do 5-puta veće vrednosti. Kada su određene verednosti date u prijavi ili patentnim zahtevima, ako nije drugačije navedeno, treba pretpostaviti da je značenje "oko" ili "koji je sačinjen u osnovi od" unutar prihvatljivog raspona greške za tu određenu vrednost.

[0139] Kao što je ovde opisano, podrazumeva se da svaki opseg koncentracije, procentni opseg, opseg odnosa ili ceo opseg obuhvata vrednost bilo kog celog broja unutar navedenog opsega i prema potrebi, njegove frakcije (kao što je jedna desetina i jedna stotina celog broja), osim ako nije drugačije naznačeno.

Kompetitivni Testovi

[0140] Predmetna objava je takođe usmerena na makrociklične peptide koji su sposobni da se takmiče sa vezivanjem referentnog antitela protiv PD-LI (MDX-1105) sa najmanje oko 20%, najmanje oko 30%, najmanje oko 40%, najmanje oko 50%, najmanje oko 60%, najmanje oko 70%, najmanje oko 80%, najmanje oko 90% i najmanje oko 100%. Takvi makrociklični peptidi mogu da dele strukturnu homologiju sa jednim ili više makrocikličnih peptida stavljenih ovde na uvid javnosti, uključujući mutant, konzervativnu supstituciju, funkcionalnu supstituciju, i forme brisanja, obezbeđujući im da se specifično vežu za PD-L1. Na primer, ako se makrociklični peptid vezuje uglavnom za isti region od PD-L1 kao referentno antitelo protiv PD-LI, makrociklični peptid treba da se veže za epitop od PD-L1 koji se bar preklapa sa PD-L1 epitopom koji vezuje monoklonsko antitelo protiv PD-L1. Područje preklapanja može biti u rasponu od jednog aminokiselinskog ostatka do nekoliko stotina aminokiselinskih ostataka. Tada bi makrociklični peptid trebalo da se nadmeće sa i/ili blokira vezivanje monoklonskog antitela protiv PD-L1 za PD-L1 i na taj način smanji vezivanje monoklonskog antitela protiv PD-L1za PD-L1, poželjno barem sa približno 50% u kompetitivnom testu.

[0141] Antitela protiv PD-L1 koja se mogu koristiti kao referentna antitela za potrebe kompetitivnog testa poznata su u oblasti. Na primer, mogu se koristiti sledeća reprezentativna antitela protiv PD-Ll: MDX-1105 (BMS); L01X-C (Serono), L1X3 (Serono), MSB-0010718C (Serono), i PD-L1 Probody (CytomX) i PD-L1 antitela stavljena na uvid javnosti u WO 2007/005874 u suvlasništvu .

[0142] Antitela protiv PD-1 koja se mogu koristiti kao referentna antitela za potrebe kompetitivnog testa poznata su u oblasti. Na primer, mogu se koristiti sledeća reprezentativna antitela protiv PD-1 : nivolumab (BMS); 17D8, 2D3, 4H1, 4A11, 7D3 i 5F4 od kojih je svako stavljeno na uvid javnosti u američkom patentu br.8,008,449 (BMS) u suvlasništvu, MK-3475 (Merck, stavljeno na uvid javnosti u američkom patentu br.8,168,757) i antitela stavljena na uvid javnosti u američkom patentu br.7, 488, 802.

Faramceutske kompozicije

[0143] U drugom aspektu, ova predmetna objava pruža kompoziciju, npr., farmaceutsku kompoziciju, koja sadrži jedan ili kombinaciju makrocikličnih peptida predmetne objave, formulisanu zajedno sa farmaceutski prihvatljivim nosačem. Takve kompozicije mogu da uključe jedan ili kombinaciju (npr., dva ili više različitih) makrocikličnih peptida, ili imunokonjugata ili bispecifičnih molekula predmetne objave. Na primer, farmaceutska kompozicija predmetne objave može da sadrži kombinaciju makrocikličnih peptida (ili imunokonjugata ili bispecifika) koji se vezuju za različite epitope na ciljnom antigenu ili koji imaju komplementarne aktivnosti.

[0144] Faramceutske kompozicije predmetne objave takođe mogu biti administrirane u kombinovanoj terapiji, tj., kombinovano sa drugim agensima. Na primer, kombinovana terapija može da uključi makrociklični peptid kombinovan sa bar jednim drugačijim antiinflamatornim ili imunosupresivnim agensom. Primeri terapijskih agenasa koji se mogu koristiti u kombinovanoj terapiji su detaljnije opisani u daljem tekstu u odeljku o upotrebi makrocikličnih peptida predmetne objave.

[0145] Kako se ovde koristi, "farmaceutski prihvatljiv nosač" uključuje bilo koji i sve rastvarače, disperzioni medijum, premaze, antibakterijske i antifungalne agense, izotonične i agense za odlaganje apsorpcije, i slično koji su fiziološki kompatibilni. Poželjno, nosač je pogodan za intravenozno, intramuskularno, subkutano, parenteralno, spinalno ili epidermalno administriranje (npr., injekcijom ili infuzijom). U zavisnosti od načina administriranja, aktivno jedinjenje, tj., makrociklični peptid, imunokonjugat, ili bispecifični molekul, može biti prevučeno materijalom koji štiti jedinjenje od dejstva kiselina i drugih prirodnih uslova koji mogu inaktivirati jedinjenje.

[0146] Farmaceutska jedinjenja predmetne objave mogu da uključe jednu ili više farmaceutski prihvatljivih soli. "Farmaceutski prihvatljiva so" ili "terapijski prihvatljiva so" odnosi se na so koja zadržava željenu biološku aktivnost matičnog jedinjenja i ne daje nikakve neželjene toksikološke efekte (videti npr., Berge, S.M. et al., J. Pharm. Sci., 66:1-19 (1977)). Primeri takvih soli uključuju kisele adicione soli i bazne adicione soli. Kisele adicione soli uključuju one koje su izvedene iz netoksičnih neorganskih kiselina, kao što su hlorovodonična, azotna, fosforna, sumporna, bromovodonična, jodovodonična, fosforasta i slično, kao i iz netoksičnih organskih kiselina kao što su alifatične mono- i dikarboksilne kiseline, fenil-supstituisane alkanoične kiseline, hidroksi alkanske kiseline, aromatične kiseline, aliftične i aromatične sulfonske kiseline i slično. Bazne adicione soli uključuju one izvedene iz zemno alkalnih metala, kao što su natrijum, kalijum, magnezijum, kalcijum i slično, kao i iz netoksičnih organskih amina, kao što su N,N'-dibenziletilendiamin, N-metilglukamin, hloroprokain, holin, dietanolamin, etilendiamin, prokain i slično.

[0147] Farmaceutska kompozicija predmetne objave takođe može da sadrži farmaceutski prihvatljiv antioksidans. Primeri farmaceutski prihvatljivih antioksidanasa uključuju: (1) antioksidanse rastvorljive u vodi, poput askorbinske kiseline, cistein hidrohlorida, natrijum bisulfata, natrijum metabisulfita, natrijum sulfita i slično; (2) antioksidanse rastvorljive u ulju, kao što su askorbil palmitat, butilirani hidroksianizol (BHA), butilirani hidroksitoluen (BHT), lecitin, propil galat, alfa-tokoferol i slično; i (3) metal helatirajuće agense, kao što su limunska kiselina, etilendiamin tetrasirćetna kiselina (EDTA), sorbitol, vinska kiselina, fosforna kiselina i slično.

[0148] Primeri pogodnih vodenih i nevodenih nosača koji se mogu koristiti u faramceutskim kompozicijama predmetne objave uključuju vodu, etanol, poliole (kao što su glicerol, propilen glikol, polietilen glikol i slično) i njihove odgovarajuće smeše, biljna ulja, poput maslinovog ulja, i injektibilne organske estre, kao što je etil oleat. Pogodna fluidnost može se održati, na primer, upotrebom materijala za oblaganje, kao što je lecitin, održavanjem potrebne veličine čestica u slučaju disperzija i upotrebom površinski aktivnih materija.

[0149] Ove kompozicije mogu takođe da sadrže ađuvanse kao što su konzervansi, agensi za vlaženje, emulgatori i disperzivni agensi. Prevencija prisustva mikroorganizama može se obezbediti i postupcima sterilizacije, supra, i uključivanjem različitih antibakterijskih i antifungalnih agenasa, na primer, parabena, hlorobutanola, fenol sorbinske kiseline i slično. Takođe može biti poželjno uključiti u kompozicije izotonične agense, kao što su šećeri, natrijum hlorid i slično. Pored toga, produžena apsorpcija farmaceutskog oblika za ubrizgavanje može se postići uključivanjem agenasa koji odlažu apsorpciju kao što su aluminijum monostearat i želatin.

[0150] Farmaceutski prihvatljivi nosači uključuju sterilne vodene rastvore ili disperzije i sterilne praškove za istovremenu pripremu sterilnih injektabilnih rastvora ili disperzija. Upotreba takvih medijuma i agenasa za farmaceutski aktivne supstance poznata je u oblasti. Osim ako je bilo koji uobičajeni medijum ili agens nespojiv sa aktivnim jedinjenjem, razmatra se njihova upotreba u faramceutskim kompozicijama predmetne objave. Dopunska aktivna jedinjenja se takođe mogu ugraditi u kompozicije.

[0151] Terapijske kompozicije obično moraju da budu sterilne i stabilne u uslovima proizvodnje i skladištenja. Kompozicija se može formulisati kao rastvor, mikroemulzija, lipozom, ili druga poručena struktura prikladna visokoj koncentraciji leka. Nosač može biti rastvarač ili disperzioni medijum koji sadrži, na primer, vodu, etanol, poliol (na primer, glicerol, propilen glikol, i tečni polietilen glikol, i slično) i njihove odgovarajuće smeše. Odgovarajuća fluidnost može se održati, na primer, upotrebom obloga kao što je lecitin, održavanjem potrebne veličine čestica u slučaju disperzije i upotrebom površinski aktivnih materija. U mnogim slučajevima, biće poželjnije da se u kompoziciju uključe izotonični agensi, na primer, šećeri, polialkoholi poput manitola, sorbitola ili natrijum hlorida. Produžena apsorpcija injekcionih kompozicija može se postići uključivanjem u kompoziciju agensa koji odlaže apsorpciju, na primer, soli monostearata i želatin.

[0152] Sterilni rastvori za ubrizgavanje mogu se pripremiti inkorporacijom aktivnog jedinjenja u potrebnoj količini u odgovarajući rastvarač sa jednim ili kombinacijom prethodno nabrojanih sastojaka, a po potrebi i sterilizacionom mikrofiltracijom. Obično, se disperzije pripremaju inkorporacijom aktivnog jedinjenja u sterilni nosač koji sadrži osnovni disperzioni medijum i ostale, od gore nabrojanih, potrebne sastojke. U slučaju sterilnih praškova za pripremu sterilnih injekcionih rastvora, poželjni postupci pripreme su sušenje vakumom i sušenje smrzavanjem (liofilizacija) koji daju prašak aktivnog sastojka plus bilo koji dodatni željeni sastojak iz njihovog prethodno sterilino filtriranog rastvora.

[0153] Količina aktivnog sastojka koja se može kombinovati sa materijalom nosača za dobijanje pojedinačne dozne forme će u velikoj meri zavisiti od subjekta koji se tretira i određenog načina administriranja. Količina aktivnog sastojka koja se može kombinovati sa materijalom nosača za proizodnju pojedinačne dozne forme će uglavnom biti ona količina kompozicije koja daje terapijski efekat. Obično, od sto posto, ova količina će se kretati od oko 0.01 procenta do oko devedeset devet procenata aktivnog sastojka, poželjno od oko 0.1 procenta do oko 70 procenata, najpoželjnije od oko 1 procenta do oko 30 procenata aktivnog sastojka u kombinaciji sa farmaceutski prihvatljivim nosačem.

[0154] Režimi doziranja se prilagođavaju tako da daju optimalni željeni odgovor (npr., terapijski odgovor). Na primer, može se administrirati jedan bolus, može biti administrirano nekoliko podeljenih doza tokom vremena ili doza može biti proporcionalno smanjena ili povećana što je naznačeno potrebama terapijske situacije. Naročito je pogodno formulisanje, parenteralne kompozicije u doznoj jediničnoj formi za lakše administriranje i ujednačenost doziranja. Dozna jedinična forma kako se ovde koristi odnosi se na fizički odvojene jedinice pogodne kao unitarne doze za subjekte koji će se tretirati; svaka jedinica sadrži unapred određenu količinu aktivnog jedinjenja izračunatu da proizvede željeni terapijski efekat u vezi sa traženim farmaceutskim nosačem. Specifikacija za dozne jedinične forme predmetne objave diktira i direktno zavisi od (a) jedinstvenih karakteristika aktivnog jedinjenja i određenog terapijskog efekta koji treba da se postigne, i (b) ograničenja koja su svojstvena u oblasti sjedinjavanja takvog aktivnog jedinjenja za lečenje osetljivosti kod pacijenata.

[0155] Za administriranje makrocikličnog peptida, dozni opseg je od oko 0.0001 do 100 mg/kg, a češće 0.01 do 5 mg/kg, telesne težine domaćina. Na primer doze mogu biti 0.3 mg/kg telesne težine, 1 mg/kg telesne težine, 3 mg/kg telesne težine, 5 mg/kg telesne težine ili 10 mg/kg telesne težine ili unutar raspona od 1-10 mg/kg. Režim lečenja kao tipični primer podrazumeva administriranje jednom dnevno, dva puta dnevno, dvo-nedeljno, tro-nedeljno, nedeljno, jednom svake dve nedelje, jednom svake tri nedelje, jednom svake četiri nedelje, jednom mesečno, jednom svaka 3 meseca ili jednom svaka tri do 6 meseci. Poželjni režimi doziranja za makrociklični peptid predmetne objave uključuju 1 mg/kg telesne težine ili 3 mg/kg telesne težine intravenskim administriranjem, pri čemu se makrociklus daje pomoću jednog od sledećih shema doziranja : (i) svake četiri nedelje po šest doza, zatim svaka tri meseca; (ii) svake tri nedelje; (iii) 3 mg/kg telesne težine jednom praćeno sa 1 mg/kg telesne težine svake tri nedelje.

[0156] U nekim tehničkim rešenjima, dva ili više makrocikličnih peptida sa različitim specifičnostima vezivanja su administrirana istovremeno, u tom slučaju doza svakog administriranog jedinjenja spada unutar naznačenog opsega. Jedinjenja se obično administriraju u više navrata. Intervali između pojedinačnih doza mogu biti, na primer, nedeljno, mesečno, svaka tri meseca ili godišnje. Intervali mogu takođe biti neredovni što se pokazuje merenjem nivoa makrocikličnog peptida u krvi prema ciljnom antigenu kod pacijenta. U nekim tehničkim rešenjima, doziranje se podešava da se postigne koncentracija u plazmi od oko 1-1000.mu.g/ml i u nekim tehničkim rešenjima oko 25-300.mu.g/ml.

[0157] Alternativno, makrociklični peptid može biti administriran kao formulacija sa produženim oslobađanjem, u tom slučaju je potrebna ređa primena. Doziranje i učestalost administriranja mogu da variraju u zavisnosti od toga da li je lečenje profilaktičko ili terapijsko. U profilaktičkim primenama, administrira se relativno mala doza u relativno retkim intervalima tokom dugog vremenskog perioda. Neki pacijenti nastavljaju da se leče do kraja života. U terapijskim primenama, ponekad je potrebna relativno visoka doza u relativno kratkim intervalima dok se progresija bolesti ne smanji ili prekine, a poželjno dok pacijent ne pokaže delimično ili potpuno poboljšanje simptoma bolesti. Nakon toga, pacijentu se može administrirati profilaktički režim.

[0158] Stvarni nivoi doziranja aktivnih sastojaka u faramaceutskim kompozicijama ove predmetne objave mogu biti različiti tako da se dobije količina aktivnog sastojka koja je efikasna za postizanje željenog terapijskog odgovora za određenog pacijenta, kompozicija i način administriranja, a da nije toksična za pacijenta. Odabrani nivoi doziranja će zavisiti od različitih farmakokinetičkih faktora uključujući aktivnost određenih kompozicija iz ove predmetne objave, ili njihovog estra, soli ili amida, načina administriranja, vremena administriranja, brzine izlučivanja određenog jedinjenja koje se koristi, trajanja lečenja, drugih lekova, jedinjenja i/ili materijala koji se koriste u kombinaciji sa određenom upotrebljenom kompozicijom, starosti, pola, težine, stanja, opšteg zdravstvenog stanja i predhodne medicinske istorije pacijenta koji se leči, kao i faktori koji su dobro poznati u medicinskoj oblasti.

[0159] "Terapijski efikasna doza" makrocikličnog peptida predmetne objave poželjno rezultira smanjenjem ozbiljnosti simptoma bolesti, povećanjem učestalosti i trajanja perioda bez simptoma bolesti, ili prevencijom oštećenja ili onesposobljenja zbog obelevanja od bolesti. Na primer, za lečenje tumora, "terapijski efikasna doza" poželjno inhibira rast ćelije ili rast tumora za najmanje oko 20%, poželjnije za najmanje oko 40%, čak poželjnije za najmanje oko 60% i još poželjnije za najmanje oko 80% u odnosu na subjekte koji nisu lečeni. Sposobnost jedinjenja da inhibira rast tumora i/ili HIV-a može se proceniti na sistemu životinjskog modela koji predviđa efikasnost u humanim tumorima ili virusnu efikasnost. Alternativno, ovo svojstvo kompozicije može da se proceni ispitivanjem sposobnosti jedinjenja da inhibira a takva inhibicija i testovi in vitro poznati su stručnjacima u oblasti. Terapijski efikasna količina terapijskog jedinjenja može da smanji veličinu tumora, smanji virusno opterećenje ili na drugi način ublaži simptome kod subjekta. Prosečan poznavalac oblasti biće sposoban da odredi takve količine na osnovu faktora kao što su veličina subjekta, težina simptoma subjekta i određene kompozicije ili odabranog načina administriranja.

[0160] U drugom aspektu, trenutna predmetna objava pruža farmaceutske delove kita koji sadže makrociklični peptid i drugi imunomodulator, kao što je ovde opisano. Kit takođe može dalje da sadrži uputstva za upotrebu u lečenju hiperproliferativne bolesti (kao što je kancer kako je opisano ovde) i/ili anti-virusne bolesti.

[0161] Kompozicija ove predmetne objave može da se administrira preko jednog ili više načina administriranja koristeći jednu ili više različitih metoda poznatih u oblasti. Kao što će ceniti stručnjak u oblasti, put i/ili način administriranja će se razlikovati u zavisnosti od željenih rezultata. Poželjni putevi administriranja za makrociklične peptide predmetne objave uključuju intravenozne, intramuskularne, intradermalne, intraperitonealne, subkutane, spinalne ili druge parenteralne puteve administriranja, na primer injekcijom ili infuzijom. Izraz "parenteralno administriranje" kako se ovde koristi znači načine administriranja koji nisu enteralno i topikalno administriranje, obično injekcijom, i uključuje, bez ograničenja, intravenoznu, intramuskularnu, intraarterijsku, intratekalnu, intrakapsularnu, intraorbitalnu, intrakardijalnu, intradermalnu, intraperitonealnu, transtrahealnu, subkutanu, subkutikularnu, intraartikularnu, subkapsularnu, subarahnoidnu, intraspinalnu, epiduralnu i intrasternalnu injekciju i infuziju.

[0162] Alternativno, makrociklični peptid predmetne objave može biti administriran preko neparenteralnog puta, kao što je topikalni, epidermalni ili mukozni put administriranja, na primer, intranazalno, oralno, vaginalno, rektalno, sublingvalno ili topikalno.

[0163] Aktivna jedinjenja mogu da se pripreme sa nosačima koji će zaštititi jedinjenje od brzog otpuštanja, kao što je formulacija sa kontrolisanim otpuštanjem, uključujući implante, transdermalne flastere i mikroinkapsulirane sisteme za isporuku. Biorazgradivi, mogu da se koriste biokompatibilni polimeri, kao što su etilen vinil acetat, polianhidridi, poliglikolna kiselina, kolagen, poliortoestri, i polilaktična kiselina. Mnogi postupci za pripremu takvih formulacija patentirani su ili su opšte poznati stručnjacima u oblasti. Videti, npr., Robinson, J.R., ed., Sustained i Controlled Release Drug Dejetray Systems, Marcel Dekker, Inc., Njujork (1978).

[0164] Terapijski kompozicije mogu biti administrirane sa medicinskim uređajima poznatim u oblasti. Na primer, u poželjnom tehničkom rešenju, terapijska kompozicija predmetne objave može biti administrirana sa injekcionim uređajem bez igle, poput uređaja stavljenih na uvid javnosti u američkim patentima sa brojevima

5,399,163, 5,383,851, 5,312,335, 5,064,413, 4,941,880, 4,790,824, ili 4,596,556. Primeri dobro poznatih implantata i modula korisnih u ovoj predmetnoj objavi uključuju: američki patent sa brojem 4, 487, 603, koji stavlja na uvid javnosti pumpu za mikro infuziju koja se može implantirati za isporučivanje medikamenta kontrolisanom brzinom; merički patent sa brojem 4,486,194, koji stavlja na uvid javnosti terapijski uređaj za administriranje medikamenta kroz kožu; merički patent sa brojem 4, 447, 233, koji stavlja na uvid javnosti pumpu za infuziju medikamenta za isporuku leka sa preciznom brzinom infuzije; merički patent sa brojem 4, 447, 224, koji stavlja na uvid javnosti aparat za infuziju sa promenljivim protokom za kontinuirano davanje leka; merički patent sa brojem 4, 439, 196, koji stavlja na uvid javnosti sistem isporuke osmotskog leka koji ima odeljke sa više komora; i merički patent sa brojem 4, 475, 196, koji stavlja na uvid javnosti sistem za isporuku osmotskog leka. Ovi patenti su ovde uključeni referencama. Mnogi drugi takvi implantatati, sistemi za isporuku i moduli poznati su stručnjacima u oblasti.

[0165] U nekim tehničkim rešenjima, makrociklični peptidi predmetne objave mogu biti formulisani tako da obezbede pravilnu distribuciju in vivo. Na primer, krvno moždana barijera (Eng. blood-brain barrier (BBB)) isključuje mnoštvo visoko hidrofilnih jedinjenja. Da bi se obezbedilo da terapijska jedinjenja predmetne objave prelaze BBB (ako je poželjno), mogu se formulisati, na primer, u lipozome. Za metode proizvodnje lipozoma, videti, npr., merički patent sa brojevima 4, 522, 811, 5, 374, 548, i 5, 399, 331. Lipozomi mogu da sadrže jednu ili više grupa koje se selektivno transportuju u specifične ćelije ili organe, na taj način poboljšavaju ciljanu isporuku leka (videti, npr., Ranade, V.V., J. Clin. Pharmacol., 29:685 (1989)). Tipične ciljne grupe uključuju folat ili biotin (videti, npr., američki patent sa brojem 5,416,016 odobren Low et al.); manozide (Umezawa et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., 153:1038 (1988)); makrociklične peptide (Bloeman, P.G. et al., FEBS Lett., 357:140 (1995); Owais, M. et al., Antimicrob. Agenss Chemother., 39:180 (1995)); receptor surfaktantnog proteina A (Briscoe et al., Am. J. Physiol., 1233:134 (1995)); st.120 (Schreier et al., J. Biol. Chem., 269:9090 (1994)); videti takođe Keinanen, K. et al., FEBS Lett., 346:123 (1994); Killion, J.J. et al., Immunomethods 4:273 (1994).

Primene i Metode predmetne objave

[0166] Makrociklični peptidi i kompozicije predmetne objave imaju brojne in vitro i in vivo alate koji uključuju, na primer, detekciju PD-L1 ili pojačavanje imunog odgovora blokadom PD-L1. Na primer, ovi molekuli mogu biti administrirani ćelijama u kulturi, in vitro ili ex vivo, ili humanim subjektima, npr., in vivo, da bi se poboljšao imunitet u različitim situacijama. Prema tome, u jednom aspektu, predmetna objava obezbeđuje makrociklični peptid predmetne objave za upotrebu u modifikaciji imunog odgovora kod subjekta. Poželjno, odgovor je pojačan, stimulisan ili ushodno regulisan (eng. up-regulated). U drugim aspektima, makrociklični peptid može da ima anti-cyno, anti-mišje, i/ili anti-mrmotno vezivanje i terapijsku aktivnost.

[0167] Kako se ovde koristi, izraz "subjekt" treba da se odnosi na ljude i ne-ljudske životinje. Neljudske životinje uključuju sve kičmenjake, npr., sisare i ne-sisare, kao što su ne-ljudski primati, ovce, psi, mačke, krave, konje, kokoške, mrmote, vodozemce i gmizavce, iako su sisari poželjniji, kao što su ne-humani primati, ovce, psi, mačke, krave i konji. Poželjni subjekti uključuju humane pacijente kojima je potrebno poboljšanje imunog odgovora. Tehnička rešenja su posebno pogodna za lečenje humanih pacijenata sa poremećajem koji se može lečiti povećanjem T-ćelijski posredovanog imunog odgovora. U posebnom tehničkom rešenju, pronalazak je posebno pogodan za lečenje ćelija kancera in vivo. Da bi se postiglo antigen-specifično pojačavanje imuniteta, makrociklični peptidi mogu biti administrirani zajedno sa antigenom koji je od interesa. Kada se makrociklični peptidi na PD-L1 administriraju zajedno sa drugim agensom, dva se mogu administrirati bilo kojim redosledom ili istovremeno.

[0168] Predmetna objava dalje pruža metode za detekciju prisustva humanog, mrmotskog, cyno, i/ili mišijeg antigena PD-L1 u uzorku, ili za merenje količine humanog, mrmotskog, cyno, i/ili mišijeg antigena PD-L1, koji obuhvata kontaktiranje uzorka, i kontrolni uzorak sa referentnim makrocikličnim peptidom koji se specifično vezuje za humani, mrmotski, cyno, i/ili mišiji PD-L1, pod uslovima koji omogućavaju stvaranje kompleksa između makrociklusa i humanog, mrmotskog, cyno, i/ili mišijeg PD-L1. Tada se otkriva formiranje kompleksa, pri čemu razlika u formiranju kompleksa između uzorka u poređenju sa kontrolnim uzorkom ukazuje na prisustvo humanog, mrmotskog, cyno, i/ili mišijeg antigena PD-L1 u uzorku.

[0169] S obzirom na specifično vezivanje makrocikličnih peptida predmetne objave za PD-L1, u poređenju sa CD28, ICOS i CTLA-4, makrociklični peptidi predmetne objave mogu da se koristite za specifično otkrivanje PD-L1 ekspresije na površini ćelija i, štaviše, mogu da se koriste da prečiste PD-L1 putem imunoafinitetnog prečišćavanja.

Kancer

[0170] Blokada PD-1 makrocikličnim peptidima može da poboljša imuni odgovor prema kancerogenim ćelijama kod pacijenta. Ligand za PD-1, PD-L1, nije eksprimiran u normalnim humanim ćelijama, ali je rasprostranjen u različitim humanim kancerima (Dong et al., Nat. Med., 8:787-789 (2002)). Interakcija između PD-1 i PD-L1 rezultira smanjenjem limfocita koji se infiltriraju u tumor, smanjenjem proliferacije posredovane T-ćelijskim receptorom, i imunom utajom kancerogenim ćelijama (Dong et al., J. Mol. Med., 81:281-287 (2003); Blank et al., Kancer Immunol. Immunother., 54:307-314 (2005); Konishi et al., Clin. Kancer Res., 10:5094-5100 (2004)). Suzbijanje imunosti može da se preokrene inhibiranjem lokalne interakcije PD-1 na PD-L1 a efekat je aditivan kada je interakcija PD-1 na PD-L2 takođe blokirana (Iwai et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 99:12293-12297 (2002); Brown et al., J. Immunol., 170:1257-1266 (2003)). Iako su prethodne studije pokazale da T-ćelijska proliferacija može da se obnovi inhibiranjem interakcija PD-1 na PD-L1, nije bilo izveštaja o direktnom uticaju na rast kancerogenog tumora in vivo blokiranjem PD-1/PD-L1 interakcija. U jednom aspektu, ova predmetna objava se odnosi na lečenje subjekta in vivo upotrebom makrocikličnog peptida tako da je rast kancerogenog tumora inhibiran. Makrociklični peptid može da se koristi sam za inhibiciju rasta kancerogenih tumora. Alternativno, makrociklični peptid može da se koristi zajedno sa drugim imunogenskim agensima, standardnim lečenjem kancera ili drugim makrocikličnim peptidima, kao što je opisano u daljem tekstu.

[0171] Prema tome, u jednom tehničkom rešenju, predmetna objava obezbeđuje makrociklični peptid predmetnog pronalaska za primenu u inhibiciji rasta tumorskih ćelija kod subjekta.

[0172] Poželjni kanceri čiji rast može biti inhibiran korišćenjem makrocikličnih peptida predmetne objave uključuju kancere koji obično reaguju na imunoterapiju. Neograničavajući primeri poželjnih kancera za lečenje, uključuju melanom (npr., metastatski maligni melanom), karcinom renalne ćelije (npr., karcinom svetle ćelije), kancer prostate (npr., hormonski refraktorni adenokarcinom prostate i kancer prostate otporan na kastraciju), kancer dojke, kolorektalni kancer i kancer pluća (npr., skvamozni i neskvamozni nesitnoćelijski kancer pluća). Pored toga, predmetna objava uključuje refraktorne ili ponavljajuće malignitete čiji rast može biti inhibiran korišćenjem makrocikličnih peptida ove predmetne objave.

[0173] Primeri drugih kancera koji mogu da se leče korišćenjem predmetnog pronalaska uključuju kancer kostiju, kancer pankreasa, kancer kože, kancer glave ili vrata, kožni ili intrakoularni maligni melanom, kancer materice, kancer jajnika, kancer debelog creva, rektalni kancer, kancer analne regije, kancer stomaka/želuca, kancer testisa, kancer materice, karcinom jajovoda, karcinom endometrijuma, karcinom cerviksa, karcinom vagine, karcinom vulve, Hodgkin-ovu bolest, ne-Hodgkin-ov limfom, kancer jednjaka, kancer tankog creva, kancer endokrinog sistema, kancer tiroidne žlezde, kancer paratiroidne žlezde, kancer nadbubrežne žlezde, sarkom mekog tkiva, kancer uretera, kancer penisa, hroničnu ili akutnu leukemiju uključujući akutnu mijeloidnu leukemiju, hroničnu mijeloidnu leukemiju, akutnu limfoblastičnu leukemiju, hroničnu limfoblastičnu leukemiju, čvrste tumore detinjstva, limfocitni limfom, kancer mokraćne bešike, kancer bubrega ili uretera, karcinom bubrežne karlice, neoplazmu centralnog nervnog sistema (CNS), primarni limfom CNS-a, angiogenezu tumora, tumor kičmene moždine, gliom matičnih ćelija mozga, adenom hipofize, Kaposijev sarkom, epidermoidni kancer, kancer skvamoznih ćelija, T ćelijski limfom, kancere indukovane životnom sredinom uključujući one indukovane azbestom i kombinacije navedenih kancera. Ova predmetna objava je takođe korisna za lečenje metastatskih kancera, posebno metastatskih kancera koji eksrimiraju PD-L1 (Iwai et al., Int. Immunol., 17:133-144 (2005)).

[0174] Po izboru, makrociklični peptidi na PD-L1 mogu da se kombinuju sa imunogenskim agensom, poput kancerogenih ćelija, prečišćenih tumorskih antigena (uključujući rekombinantne proteine, peptide i molekule ugljenih hidrata), ćelija i ćelija transfektovanih genima koji kodiraju imuno stimulišuće citokine (He et al., J. Immunol., 173:4919-4928 (2004)). Neograničavajući primeri tumorskih vakcina koji se mogu koristiti uključuju peptide antigena melanoma, poput peptida od gp100, MAGE antigena, Trp-2, MART1 i/ili tirozinazu, ili tumorske ćelije koje su transfektovane da eksprimiraju citokin GM-CSF (dalje diskutovano ispod).

[0175] Kod ljudi se pokazalo da su neki tumori imunogenski poput melanoma. Naslućuje se da podizanjem praga aktiviranja T ćelije blokadom PD-L1, možemo očekivati aktiviranje odgovora tumora kod domaćina.

[0176] PD-L1 blokada je verovatno najefikasnija u kombinaciji sa protokolom vakcinacije. Osmišljene su mnoge eksperimentalne strategije za vakcinaciju protiv tumora (videti Rosenberg, S., Development of Cancer Vaccines, ASCO Educational Book Spring: 60-62 (2000); Logothetis, C., ASCO Educational Book Spring: 300-302 (2000); Khayat, D., ASCO Educational Book Spring: 414-428 (2000); Foon, K., ASCO Educational Book Spring: 730-738 (2000); videti takođe Restifo, N. et al., Cancer Vaccines, poglavlje 61, str.3023-3043, u DeVita, V. et al., eds., Cancer: Principles and Practice of Oncology, peto izdanje (1997)). U jednoj od ovih strategija, vakcina se priprema koristeći autologne ili alogene ćelije tumora. Pokazalo se da su ove ćelijske vakcine najefikasnije kada su ćelije tumora transdukovane da eksprimiraju GM-CSF. Pokazano je da je GM-CSF moćan aktivator prezentacije antigena za vakcinaciju protiv tumora (Dranoff et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 3539-3543 (1993)).

[0177] Istraživanje ekspresije gena i obrasci ekspresije gena velikog obima kod različitih tumora doveli su do definicije takozvanih tumor specifičnih antigena (Rosenberg, S.A., Imunitet, 10:281-287 (1999)). U mnogim slučajevima, ovi tumor specifični antigeni su diferencirani antigeni eksprimirani u tumorima i u ćeliji iz koje je tumor nastao, na primer melanocitni antigeni gp100, MAGE antigeni i Trp-2. Ono što je još važnije, može se pokazati da su mnogi od ovih antigena mete tumor specifičnih T ćelija koje se nalaze u domaćinu. PD-L1 blokada može se koristiti zajedno sa kolekcijom rekombinantnih proteina i/ili peptida eksprimiranih u tumoru da bi se stvorio imuni odgovor na ove proteine. Na ove proteine imuni sistem normalno gleda kao na svoje antigene i zbog toga je tolerantan na njih. Tumorski antigen može takođe da uključuje protein telomerazu, koji je potreban za sintezu telomera hromozoma i koji se eksprimira u više od 85% humanih kancera i samo u ograničenom broju somatskih tkiva (Kim, N et al., Science, 266:2011-2013 (1994)). (Ova somatska tkiva mogu se zatititi od imunog napada raznim sredstvima). Tumorski antigen može takođe biti "neo-antigen" eksprimiran u ćelijama kancera zbog somatskih mutacija koje menjaju sekvencu proteina ili stvaraju fuzione proteine između dve nepovezane sekvence (tj., bcr-abl u Filadelfija hromozomu) ili idiotip od B ćelijskih tumora.

[0178] Ostale vakcine protiv tumora mogu da sadrže proteine virusa umešanih u humane kancere kao što su Humani Papiloma Virusi (HPV), Virusi Hepatitisa (HBV i HCV) i Kaposijev sarkom uzrokovan herpes virusom (eng. Kaposi's Herpes Sarcoma Virus (KHSV)). Drugi oblik tumor specifičnog antigena koji se može koristiti zajedno sa blokadom PD-L1 su prečišćeni proteini toplotnog udara (eng. heat shock proteins (HSP)) izolovani iz samog tumorskog tkiva. Ovi proteini toplotnog udara sadrže fragmente proteine iz ćelija tumora i ovi HSP-ovi su veoma efikasni u isporuci u antigen prezentirajućim ćelijama izazivajući tumorski imunitet (Suot, R. et al., Science, 269:1585-1588 (1995); Tamura, Y. et al., Science, 278:117-120 (1997)).

[0179] Dendritske ćelije (DC) su moćne antigen prezentujuče ćelije koje se mogu koristiti za praćenje antigen-specifičnih odgovora. DC se mogu proizvesti ex vivo i napuniti različitim proteinskim i peptidnim antigenima kao i ekstraktima tumorskih ćelija (Nestle, F. et al., Nat. Med., 4:328-332 (1998)). DC se takođe mogu transdukovati genetskim putem da bi se eksprimirali i ovi antigeni tumora. DC su takođe spojene direktno sa tumorskim ćelijama u svrhu imunizacije (Kugler, A. et al., Nat. Med., 6:332-336 (2000)). Kao metoda vakcinacije, DC imunizacija se može efikasno kombinovati sa blokadom PD-L1 radi aktiviranja snažnijih anti-tumorskih odgovora.

[0180] Blokada PD-L1 takođe može biti kombinovana sa standardnim načinima lečenja kancera. PD-L1 blokada može se efikasno kombinovati sa hemoterapijskim režimima. U ovim slučajevima, može biti moguće smanjiti dozu administriranog hemoterapijskog reagensa (Mokyr, M. et al., Kancer Res., 58:5301-5304 (1998)). Primer takve kombinacija je makrociklični peptid u kombinaciji sa dekarbazinom za lečenje melanoma. Sledeći primer takve kombinacije je makrociklični peptid u kombinaciji sa interleukinom-2 (IL-2) za lečenje melanoma. Naučno utemeljene kombinovane upotrebe blokade PD-L1 i hemoterapije je da ćelijska smrt, koja je posledica citotoksičnog delovanja većine hemoterapijskih jedinjenja, treba da rezultira povećanim nivoom tumorskog antigena na putu prezentacije antigena. Ostale kombinovane terapije koje mogu rezultirati sinergijom sa blokadom PD-L1 usled smrti ćelije su zračenje, operacija i nedostatak hormona. Svaki od ovih protokola stvara izvor tumorskih antigena kod domaćina. Inhibitori angiogeneze se takođe mogu kombinovati sa blokadom PD-L1. Inhibicija angiogeneze dovodi do smrti tumorske ćelije što može uvesti antigen tumora u puteve prezentacije antigena domaćina.

[0181] PD-L1 blokirajući makrociklični peptidi mogu takođe da se koriste u kombinaciji sa bispecifičnim makrocikličnim peptidima koji ciljaju efektorske ćelije koje eksprimiraju Fc alfa ili Fc gama receptor ćelijama tumora (videti, npr., američke patente sa brojevima 5, 922, 845 i 5, 837, 243). Bispecifični makrociklični peptidi se mogu koristiti za ciljanje dva odvojena antigena. Na primer bispecifični makrociklični peptidi protiv Fc receptora/protiv tumorskog antigena (npr., Her-2/neu) korišćeni su za ciljanje makrofaga na mestima tumora. Ovo ciljanje može efikasnije aktivirati odgovore specifične za tumor. T ćelijski krak ovih odgovora bi se povećao korišćenjem blokade PD-L1. Alternativno, antigen se može isporučiti direktno DC-a primenom bispecifičnih makrocikličnih peptida koji se vezuju za antigen tumora i površinski marker ćelije specifičan za dendritsku ćeliju.

[0182] Tumori izbegavaju imuni nadzor domaćina velikim brojem različitih mehanizama. Mnogi od ovih mehanizama mogu biti prevaziđeni inaktivacijom proteina koji su eksprimirani od strane tumora i koji su imunosupresivni. Oni uključuju između ostalog TGF-beta (Kehrl, J. et al., J. Exp. Med., 163:1037-1050 (1986)), IL-10 (Howard, M. et al., Immunology Today, 13:198-200 (1992)) i Fas ligand (Hahne, M. et al., Science, 274:1363-1365 (1996)). Makrociklični peptidi za svaki od ovih entiteta mogu da se koriste u kombinaciji sa anti-PD-Ll za suzbijanje dejstva imunosupresivnog agensa i favorizovanje tumor imunoloških odgovora od strane domaćina.

[0183] Ostali makrociklični peptidi koji se mogu koristiti za aktiviranje imunog odgovora domićana mogu se koristiti u kombinaciji sa anti-PD-L1. Ovo uključuje molekule na površini dendritskih ćelija koje aktiviraju DC funkciju i prezentaciju antigena. Makrociklični peptidi protiv CD40 mogu efikasno da zamene aktivnost T helper ćelije (Ridge, J. et al., Nature, 393:474-478 (1998)) i mogu da se koriste u u sprezi sa PD-1 antitelima (Ito, N. et al., Immunobiology, 201(5):527-540 (2000)). Aktiviranje makrocikličnih peptida na kostimulatorne molekule T ćelije kao što su CTLA-4 (npr., američki paten br.5,811,097), OX-40 (Weinberg, A. et al., Immunol., 164:2160-2169 (2000)), 4-1BB (Melero, I. et al., Nat. Med., 3:682-685 (1997), i ICOS (Hutloff, A. et al., Nature, 397:262-266 (1999)) takođe mogu da obezbede povećane nivoe T ćelijske aktivacije.

[0184] Transplantacija koštane srži trenutno se koristi za lečenje različitih tumora hematopoetskog porekla. Dok je bolest kalem protiv domaćina posledica ovog lečenja, terapijska korist može se dobiti od kalem protiv tumora odgovora. PD-L1 blokada može da se koristi za povećanje efikasnosti donorskih nakalemljenih tumor specifičnih T ćelija.

[0185] Postoji takođe nekoliko eksperimentalnih protokola lečenja koji uključuju ex vivo aktivaciju i ekspanziju antigen specifičnih T ćelija i usvajajući transfer tih ćelija u primaoca u smislu antigen-specifičnosti T ćelije protiv tumora (Greenberg, R. et al., Science, 285:546-551 (1999)). Ove metode takođe mogu da se koriste za aktiviranje T ćelijskih odgovora na infektivne agense kao što je CMV. Aktiviranjem Ex vivo aktivacije u prisustvu makrocikličnih peptida može se očekivati porast učestalosti i aktivnosti usvojivo prenetih T ćelija.

Zarazne bolesti

[0186] Druga tehnička rešenja predmetne objave se koriste za lečenje pacijenta koji su bili izloženi određenim toksinima ili patogenima. Prema tome, drugi aspekt predmetne objave obezbeđuje makrociklični peptid ove predmetne objave za primenu u lečenju infektivne bolesti kod subjekta.

[0187] Slično svojoj primeni na tumorima kao što je gore diskutovano, blokada PD-L1 može da se koristi sama, ili kao ađuvans, u kombinaciji sa vakcinama, za stimulaciju imunog odgovora na patogene, toksine i samo-antigene. Primeri patogena za koje ovaj terapijski pristup može biti posebno koristan, uključuju patogene za koje trenutno ne postoji efikasna vakcina, ili patogene za koje su konvencionalne vakcine manje nego potpuno efikasne. Oni uključuju, ali nisu ograničeni na HIV, Hepatitis (A, B i C), Influencu, Herpes, Giardiju, Malariju (Butler, N.S. et al., Nature Immunology 13, 188-195 (2012); Hafalla, J.C.R., et al. PLOS Patogeni; 2. februar 2012)), Leishmaniu, Stafilokokus aureus, Pseudomonas Aeruginozu. PD-L1 blokada je posebno korisna protiv utvrđenih infekcija od starne agenasa kao što je HIV koji tokom infekcije prezentuju izmenjene antigene. Ovi novi epitopi su prepoznati kao strani u vreme administriranja antihumanog PD-L1, što izaziva jak T ćelijski odgovor koji nije prigušen negativnim signalima putem PD-L1.

[0188] Neki primeri patogenih virusa koji uzrokuju infekcije koje se mogu lečiti tehničkim rešenjima predmetne objave uključuju HIV, hepatitis (A, B ili C), herpes virus (npr., VZV, HSV-1, HAV-6, HSV-II, i CMV, Epstein Barov virus), adenovirus, virus gripa, flaviviruse, ehovirus, rinovirus, koksaki virus, koronavirus, respiratorni sincicijski virus, virus zaušaka, rotavirus, virus ospica, virus rubeole, parvovirus, virusnu bolest krava, HTLV virus, virus denge, papilomavirus, molluscum virus ospica, poliovirus, virus besnila, JC virus i virus arbovirusnog encefalitisa.

[0189] Neki primeri patogenih bakterija koje izazivaju infekcije koje mogu da se leče tehničkim rešenjima predmetne objave uključuju hlamidiju, riketsijalne bakterije, mikobakterije, stafilokoke, streptokoke, pneumonokoke, meningokoke i konokoke, klebsielu, proteus, seraciu, pseudomonas, legionelu, difteriju, salmonelu, bacile, koleru, tetanus, botulinum, antraks, kugu, leptospirozu i bakteriju Lajmske bolesti.

[0190] Neki primeri patogenih gljivica koje izazivaju infekcije koje mogu da se leče tehničkim rešenjima predmetne objave uključuju Kandidu (albikans, krusei, glabrata, tropikalis, itd.), Cryptococcus neoformans, Aspergilus (fumigatus, niger, itd.), Genus Mucorales (mucor, absidia, rhizophus), Sporothrix schenkii, Blastomyces dermatitidis, Paracoccidioides brasiliensis, Coccidioides immitis i Histoplasma capsulatum.

[0191] Neki primeri patogenih parazita koji izazivaju infekcije koje mogu da se leče tehničkim rešenjima predmetne objave uključuju Entamoeba histolytica, Balantidium coli, Naegleriafowleri, Acanthamoeba sp., Giardia lambia, Cryptosporidium sp., Pneumocystis carinii, Plasmodium vivax, Babesia microti, Trypanosoma brucei, Trypanosoma cruzi, Leishmania donovani, Toxoplasma gondi i Nippostrongylus brasiliensis.

[0192] U svim gore navedenim tehničkim rešenjima, blokada PD-L1 može da se kombinuje sa drugim oblicima imunoterapije kao što je tretman citokinima (npr., interferoni, agensi koji ciljaju VEGF aktivnost ili VEGF-receptore, GM-CSF, G-CSF, IL-2), ili terapija bispecifičnim antitelom, koja omogućava pojačanu prezentaciju tumorskih antigena (videti, npr., Holliger, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993); Poljak, Structure, 2:1121-1123 (1994)).

Autoimune reakcije

[0193] Makrociklični peptidi mogu provocirati i pojačati autoimune odgovore. Zaista, indukovanje anti-tumorskih odgovora korišćenjem vakcina protiv tumorskih ćelija i peptida otkriva da mnogi anti-tumorski odgovori uključuju anti-samoreaktivnosti (depigmentacija primećena u anti-CTLA-4+GM-CSF-modifikovanom B 16 melanomu kod Van Elsas et al. supra; depigmentaciju kod Trp-2 vakcinisanih miševa (Overwijk, W. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 96:2982-2987 (1999)); autoimuni prostatitis izazvan TRAMP vakcinama ćelija tumora (Hurwitz, A., supra (2000)), vakcinaciju protiv peptidnog antigena melanoma i vitiligo primećen u kliničkim ispitivanjima na ljudima (Rosenberg, S.A. et al., J. Immunother. Emphasis Tumor Immunol., 19(1):81-84 (1996)).

[0194] Stoga je moguće razmotriti upotrebu anti-PD-L1 blokade u sprezi sa raznim sopstvenim proteinima kako bi se osmislili protokoli vakcinacije da bi se efikasno generisali imuni odgovori protiv ovih sopstvenih proteina za lečenje bolesti. Na primer, Alzhajmerova bolest uključuje neprimereno nagomilavanje A.beta. peptida u amiloidnim naslagama u mozgu; odgovori antitela protiv amiloida su u stanju da očiste ove amiloidne naslage (Schenk et al., Nature, 400:173-177 (1999)).

[0195] Ostali sopstveni proteini se takođe mogu koristiti kao mete kao što su IgE za lečenje alergije i astme, i TNF.alfa za reumatoidni artritis. Konačno, odgovori antitela na različite hormone mogu se indukovati upotrebom makrociklusa stavljenih ovde na uvid javnosti. Neutralizacijski odgovori antitela na reproduktivne hormone mogu se koristiti za kontracepciju. Neutralizacijski odgovori antitela na hormone i druge rastvorljive faktore koji su potrebni za rast pojedinih tumora takođe se može smatrati mogućim metama vakcinacije.

[0196] Analogna tehnička rešenja kao što je gore opisano, za upotrebu makrociklusa protiv PD-L1, mogu se koristiti za indukciju terapijskih autoimunih odgovora za lečenje pacijenata koji imaju neprimerenu akumulaciju drugih samo-antigena, poput amiloidnih naslaga, uključujući A.beta. u Alchajmerovoj bolesti, citokina kao što je TNF.alfa. i IgE.

Vakcine

[0197] Makrociklični peptidi se mogu koristiti za stimulisanje antigen-specifičnih imunih odgovora zajedničkim administriranjem makrociklusa protiv PD-1 sa antigenom od interesa (npr., vakcinom). Prema tome, u drugom aspektu predmetna objava obezbeđuje (i) antigen; i (ii) makrociklus protiv PD-1 predmetnog pronalaska za primenu u pojačavanju imunog odgovora na antigen kod subjekta. Antigen može biti, na primer, tumorski antigen, virusni antigen, bakterijski antigen ili antigen iz patogena. Neograničavajući primeri takvih antigena uključuju one koji su razmatrani u gornjim odeljcima, kao što su tumorski antigeni (ili tumorske vakcine) koji su gore razmatrani, ili antigene iz virusa, bakterija ili drugih patogena opisanih gore.

[0198] Pogodni putevi administriranja kompozicija (npr., makrociklični peptidi, multispecifični i bispecifični molekuli i imunokonjugati) predmetne objave in vivo i in vitro su dobro poznati u oblasti i mogu ih odabrati oni koji su prosečni poznavaoci u oblasti. Na primer, kompozicije se mogu administrirati injekcijom (npr., intravenozno ili subkutano). Pogodne doze korišćenih molekula zavisiće od starosti i težine subjekta i koncentracija i/ili formulacija kompozicije.

[0199] Kao što je prethodno opisano, makrociklični peptidi predmetne objave mogu biti zajedno administrirani sa jednim ili više drugih terapijskih agenasa, npr., citotoksičnim agensom, radiotoksičnim agensom ili imunosupresivninim agensom. Peptid može biti povezan sa agensom (kao imunokompleks) ili se može administrirati odvojeno od agensa. U poslednjem slučaju (odvojeno administriranje), peptid može biti administriran pre, posle ili istovremeno sa agensom ili se može zajedno administrirati sa drugim poznatim terapijama, npr., anti-kancer terapijom, npr., zračenjem. Takvi terapijski agensi uključuju, između ostalog, anti-neoplastične agense kao što su doksorubicin (adriamicin), cisplatin bleomicin sulfat, karmustin, hlorambucil, dekarbazin i ciklofosfamid hidroksiurea koji su sami po sebi efikasni samo na nivoima koji su toksični ili subtoksični za pacijenta. Cisplatin je intravenozno administriran kao 100 mg/doza jednom svake četiri nedelje a adriamicin je intravenozno administriran kao 60-75 mg/ml doze jednom u 21 dan. Istovremeno administriranje makrocikličnih peptida ove predmetne objave sa hemoterapijskim agensima obezbeđuje dva anti-kancer agensa koji deluju preko različitih mehanizama koji daju citotoksični efekat na ćelije humanog tumora. Takvo zajedničko administriranje može da reši probleme usled razvoja otpornosti na lekove ili promene u antigenosti tumorskih ćelija što bi ih učinilo nereaktivnim sa peptidima.

[0200] Takođe u okviru obima ove predmetne objave su kitovi-kompleti koji sadrže kompozicije predmetne objave (npr., makrociklični peptidi, bispecifični ili multispecifični molekuli ili imunokonjugati) i uputstva za upotrebu. Kit može dalje da sadrži najmanje jedan dodatni reagens, ili jedan ili više dodatnih makrocikličnih peptida predmetne objave (npr., humano antitelo koje ima komplementarnu aktivnost i koje se vezuje za epitop u PD-L1 antigenu za razliku od makrociklusa). Kitovi obično sadrže nalepnicu koja naznačava namensku upotrebu sadržaja kita. Izraz nalepnica uključuje bilo koji pisani ili snimljeni materijal isporučen u kompletu ili uz njega, ili koji na drugi način prati kit.

Kombinovana terapija

[0201] Kombinacija makrocikličnih peptida predmetne objave sa drugim PD-L1 antagonistom i/ili drugim imunomodulatorom je korisna za pojačavanje imunog odgovora protiv hiperproliferativne bolesti. Na primer, ovi molekuli se mogu administrirati ćelijama u kulturi, in vitro ili ex vivo, ili humanim subjektima, npr., in vivo, da bi se poboljšao imunitet u različitim situacijama. Prema tome, u jednom aspektu, predmetna objava obezbeđuje makrociklični peptid predmetne objave za primenu u modifikaciji imunog odgovora kod subjekta. Poželjno, odgovor je pojačan, stimulisan ili ushodno regulisan. U drugom tehničkom rešenju, predmetna objava obezbeđuje makrociklični peptid predmetne objave i subterapijsku dozu drugog imunomodulatora za primenu u promeni neželjenih događaja povezanih sa lečenjem hiperproliferativne bolesti sa imunostimulirajućim terapijskim agensom kod subjekta.

[0202] Blokada PD-L1 makrocikličnim peptidima može povećati imuni odgovor na kancerogene ćelije kod pacijenta. Kanceri čiji rast može biti inhibiran korišćenjem makrocikličnih peptida predmetne objave uključuju kancere koji obično reaguju na imunoterapiju. Reprezentativni primeri kancera za lečenje kombinovanom terapijom trenutne objave uključuju melanom (npr., metastatski maligni melanom), renalni kancer, kancer prostate, kancer dojke, kancer debelog creva i kancer pluća. Primeri drugih kancera koji se mogu rešiti korišćenjem tehničkih rešenja predmetne objave uključuju kancer kostiju, kancer pankreasa, kancer kože, kancer glave ili vrata, kožni ili intrakoularni maligni melanom, kancer materice, kancer jajnika, rektalni kancer, kancer analne regije, kancer stomaka, kancer testisa, kancer materice, karcinom jajovoda, karcinom endometrijuma, karcinom cerviksa, karcinom vagine, karcinom vulve, Hodgkinovu bolest, ne-Hodgkinov limfom, kancer jednjaka, kancer tankog creva, kancer endokrinog sistema, kancer tiroidne žlezde, kancer paratiroidne žlezde, kancer nadbubrežne žlezde, sarkom mekog tkiva, kancer uretera, kancer penisa, hroničnu ili akutnu leukemiju uključujući akutnu mijeloidnu leukemiju, hroničnu mijeloidnu leukemiju, akutnu limfoblastičnu leukemija, hroničnu limfoblastičnu leukemiju, čvrste tumore detinjstva, limfocitni limfom, kancer mokraćne bešike, kancer bubrega ili uretera, karcinom bubrežne karlice, neoplazmu centralnog nervnog sistema (CNS), primarni limfom CNS-a, angiogenezu tumora, tumor kičmene moždine, gliom matičnih ćelija mozga, adenom hipofize, Kaposijev sarkom, epidermoidni kancer, kancer skvamoznih ćelija, T ćelijski limfom, kancere indukovane životnom sredinom uključujući one indukovane azbestom i kombinacije navedenih kancera. Ova predmetna objava je takođe korisna za lečenje metastatskih kancera.

[0203] U određenim tehničkim rešenjima, kombinacija terapijskih agenasa koja sadrži najmanje jedan makrociklični peptid koji je ovde razmatran može se administrirati istovremeno kao pojedinačna kompozicija u farmaceutski prihvatljivom nosaču, ili istovremeno kao zasebne kompozicije u kojima se svaki agens može uzastopno administrirati. Na primer, drugi imunomodulator i makrociklični peptid ove predmetne objave mogu biti administrirani uzastopno, kao što je drugi imunomodulator koji se administrira prvi i makrociklični peptid drugi, ili makrociklični peptid koji se administrira prvi a drugi imunomodulator drugi. Dalje, ako se više od jedne doze kombinovane terapije administrira uzastopno, redosled uzastopnog administriranja može se preokrenuti ili zadržati istim redosledom u svakoj vremenskoj tački administriranja, uzastopna administriranja mogu se kombinovati sa istovremenim administriranjem, ili bilo kojom njihovom kombinacijom. Na primer, prvo administriranje drugog imunomodulatora i makrocikličnog peptida može biti istovremeno, drugo administriranje može biti uzastopno sa drugim imunomodulatorom kao prvim i makrocikličnim peptidom kao drugim, i treća administracija može biti istovremeno sa makrocikličnim peptidom kao prvim i drugim imunomodulatorom kao drugim, itd. Druga reprezentativna shema doziranja može da uključuje prvo administriranje koje je uzastopno sa makrocikličnim peptidom kao prvim i drugim imunomodulatorom kao drugim, a naredna administriranja mogu biti istovremena.

[0204] Po izboru, kombinacija makrocikličnog peptida i drugog imunomodulatorora može se dalje kombinovati sa imunogenskim agensom, kao što su kancerogene ćelije, prečišćeni tumorski antigeni (uključujući rekombinantne proteine, peptide i molekule ugljenih hidrata), ćelije, i ćelije transfektovane genima koji kodiraju imuno stimulišuće citokine (He et al., J. Immunol., 173:4919-4928 (2004)). Neograničavajući primeri tumorskih vakcina koji se mogu koristiti uključuju peptide antigena melanoma, poput peptida od gp100, MAGE antigena, Trp-2, MART1 i/ili tirozinaze, ili tumorskih ćelija transficiranih da eksprimuju citokin GM-CSF (dalje diskutovano ispod).

[0205] Kombinovani PD-L1 makrociklični peptid i drugi imunomodulator mogu dalje da se kombinju sa protokolom vakcinacije. Osmišljene su mnoge eksperimentalne strategije za vakcinaciju protiv tumora (videti Rosenberg, S., Development of Cancer Vaccine, ASCO Educational Book Spring: 60-62 (2000); Logothetis, C., ASCO Educational Book Spring: 300-302 (2000); Khayat, D., ASCO Educational Book Spring: 414-428 (2000); Foon, K., ASCO Educational Book Spring: 730-738 (2000); videti takođe Restifo et al., Cancer Vaccine, Poglavlje 61, str.3023-3043 in DeVita et al., eds., Cancer: Principles and Practice of Oncology, Peto izdanje (1997)). U jednoj od ovih strategija, vakcina se priprema koristeći autologne ili alogene ćelije tumora. Pokazalo se da su ove ćelijske vakcine najefikasnije kad su tumorske ćelije transdukovane da eksprimiraju GM-CSF. Pokazano je da GM-CSF moćan aktivator prezentacije antigena za vakcinaciju protiv tumora (Dranoff et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:3539-3543 (1993)).

[0206] Istraživanje ekspresije gena i obrasci ekspresije gena velikog obima kod različitih tumora doveli su do definicije takozvanih tumor specifičnih antigena (Rosenberg, Immunity, 10:281-287 (1999)). U mnogim slučajevima, ovi tumor specifični antigeni su antigeni diferencijacije eksprimirani u tumorima i u ćeliji iz koje je tumor nastao, na primer melanocitni antigeni gp100, MAGE antigeni i Trp-2. Ono što je još važnije, može se pokazati da su mnogi od ovih antigena mete tumor specifičnih T ćelija koje se nalaze u domaćinu. U određenim tehničkim rešenjima, kombinovani PD-L1 makrociklični peptid i drugi imunomodulator mogu da se koriste zajedno sa kolekcijom rekombinantnih proteina i/ili peptida eksprimiranih u tumoru da bi se stvorio imuni odgovor na ove proteine. Imuni sistem ove proteine normalno posmatra kao sopstvene-antigene i prema tome ih toleriše. Tumorski antigen takođe može da uključuje protein telomerazu, koja je potrebna za sintezu telomera hromozoma i koja se eksprimira u više od 85% humanih kancera i samo u ograničenom broju somatskih tkiva (Kim et al., Science, 266:2011-2013 (1994)). (Ova somatska tkiva mogu se zaštititi od imunog napada raznim sredstvima). Tumorski antigen može takođe da bude "neo-antigen" eksprimiran u ćelijama kancera zbog somatskih mutacija koje menjaju sekvencu proteina ili stvaraju fuzijske proteine između dve sekvence (tj., bcr-abl u Filadelfija hromozomu), ili idiotip iz B ćelijskih tumora.

[0207] Ostale vakcine protiv tumora mogu da uključuju proteine virusa upletene u humane kancere kao što su Humani Papiloma Virusi(HPV), Virusi Hepatitisa (HBV i HCV) i Kaposijev Virus Herpes Sarkoma (Kaposi's Herpes Sarcoma Virus (KHSV)). Drugi oblik tumor specifičnog antigena koji se može koristiti u sprezi sa blokadom PD-L1 makrocikličnog peptida su prečišćeni proteini toplotnog šoka (heat shock proteins (HSP)) izolovani iz samog tumorskog tkiva. Ovi proteini toplotnog šoka sadže fragmente proteina iz tumorskih ćelija i ovi HSP-ovi su visoko efikasni u isporuci u antigen prezentujuće ćelije za stvaranje tumorskog imuniteta (Suot et al., Science, 269:1585-1588 (1995); Tamura et al., Science, 278:117-120 (1997)).

[0208] Dendritske ćelije (DC) su snažne antigen prezentujuće ćelije koje mogu da se koriste za praćenje antigen-specifičnih odgovora. DC-e se mogu proizvesti ex vivo i napuniti sa različitim proteinskim i peptidnim antigenima kao i ekstraktima tumorskih ćelija (Nestle et al., Nat. Med., 4:328-332 (1998)). DC se takođe mogu transdukovati genetskim putem da bi se eksprimirali i ovi tumorski antigeni. DC su takođe spojene direktno sa tumorskim ćelijama u svrhu imunizacije (Kugler et al., Nat. Med., 6:332-336 (2000)). Kao metod vakcinacije, DC imunizacija može biti efikasno dalje kombinovana sa kombinovanim makrocikličnim peptidom protiv PD-L1 i drugim imunomodulatorom da bi se aktivirao snažniji antitumorski odgovori.

[0209] Kombinovani makrociklični peptid protiv PD-L1 i dodatni imunomodulator takođe se mogu dalje kombinovati sa standardnim lečenjima kancera. Na primer, kombinacija makrocikličnog peptida i drugog imunomodulatora može se efikasno kombinovati sa hemoterapijskim režimima. U tim slučajevima, kao što je primećeno kombinacijom makrocikličnog peptida i drugog imunomodulatora, moguće je smanjiti dozu drugog hemoterapijskog reagensa administriranog uz kombinaciju predmetne objave (Mokyr et al., Cancer Res., 58:5301-5304 (1998)). Primer takve kombinacije je kombinacija makrocikličnog peptida i drugog imunomodulatora dalje u kombinaciji sa dekarbazinom za lečenje melanoma. Drugi primer je kombinacija makrocikličnog peptida i drugog imunomodulatorskog agensa dalje u kombinaciji sa interleukinom-2 (IL-2) za lečenje melanoma. Naučno utemeljene kombinovane upotrebe PD-L1 makrocikličnog peptida i drugog imunomodulatora sa hemoterapijom je da ćelijska smrt, koja je posledica citotoksičnog delovanja većine hemoterapijskih jedinjenja, treba da dovede do povećanja nivoa tumorskog antigena na putu prezentacije antigena. Ostale kombinovane terapije koje mogu rezultirati sinergijom sa kombinovanim makrocikličnim peptidom protiv PD-L1 i dodatnim imunomodulatorom kroz ćelijsku smrt uključuju zračenje, operaciju ili nedostatak hormona. Svaki od ovih protokola stvara izvor antigena tumora kod domaćina. Inhibitori angiogeneze se takođe mogu kombinovati sa kombinovanim PD-L1 i drugim imunomodulatorom. Inhibicija angiogeneze dovodi do smrti ćelije tumora, što takođe može biti izvor antigena tumora koji se unosi u puteve prezentacije antigena domaćina.

[0210] Kombinacija PD-L1 i drugog imunomodulatora takođe se može koristiti u kombinaciji sa bispecifičnim makrocikličnim peptidima koji ciljaju Fc.alfa. ili Fc.gama. efektorske ćelije koje eksprimiraju receptor ćelijama tumora (videti, npr., američke patente sa brojevima 5,922,845 i 5,837,243). Bispecifični makrociklični peptidi se mogu koristiti za ciljanje dva odvojena antigena. Na primer bispecifični makrociklični peptidi protiv Fc receptora/protiv tumorskog antigena (npr., Her-2/neu) korišćeni su za ciljanje makrofaga do mesta tumora. Ovo ciljanje može efikasnije aktivirati odgovore specifične za tumor. T ćelijski krak ovih odgovora bi se povećao korišćenjem kombinovanog PD-L1 i drugog imunomodulatora. Alternativno, antigen se može direktno isporučiti direktno DC-ama primenom bispecifičnih makrocikličnih peptida koji se vezuju za antigen tumora i površinski marker specifičan za dendritske ćelije.

[0211] U drugom primeru, kombinacija makrocikličnog peptida i drugog imunomodulatora može da se koristi u sprezi sa anti-neoplastičnim makrocikličnim agensima, kao što su RITUXAN® (rituksimab), HERCEPTIN® (trastuzumab), BEXXAR® (tositumomab), ZEVALIN® (ibritumomab), CAMPATH® (alemtuzumab), Lymphocide (eprtuzumab), AVASTIN® (bevacizumab) i TARCEVA® (erlotinib) i slično. Kao primer i ne želeći da se vezuje teorijom, lečenje antitelom protiv kancera ili antitelom protiv kancera konjugovanim sa toksinom može dovesti do smrti ćelije kancera (npr., tumorske ćelije) što bi moglo da potencira imuni odgovor posredovan od strane drugog ciljnog imunomodulatora ili PD-L1. U oglednom tehničkom rešenju, lečenje hiperproliferativne bolesti (npr., kancerogenog tumora) može da uključi antitelo protiv kancera u kombinaciji sa makrocikličnim peptidom i drugim istovremenim ili uzastopnim imunomodulatorom ili bilo kojom njihovom kombinacijom, koja može da potencira imune odgovore domaćina protiv tumora.

[0212] Tumori izbegavaju imuni nadzor domaćina velikim brojem mehanizama. Mnogi od ovih mehanizma se mogu prevazići inaktivacijom proteina, koji su eksprimirani od tumora i koji su imunosupresivni. Ovo uključuje, između ostalog, TGF-.beta. (Kehrl, J. et al., J. Exp. Med., 163:1037-1050 (1986)), IL-10 (Howard, M. et al., Immunology Today, 13:198-200 (1992)), i Fas ligand (Hahne, M. et al., Science, 274:1363-1365 (1996)). U drugom primeru, antitela na svaki od ovih entiteta mogu se dalje kombinovati sa makrocikličnim peptidom i drugim imunomodulatorom da bi se suzbili efekti imunosupresivnih agenasa i pogodovalo imunim odgovorima protiv tumora od strane domaćina.

[0213] Ostali agensi koji se mogu koristiti za aktiviranje imunoloških odgovora domaćina mogu se dalje koristiti u kombinaciji sa makrocikličnim peptidom ove predmetne objave. Ovo uključuje molekule na površini dendritskih ćelija koji aktiviraju DC funkciju i prezentaciju antigena. Makrociklični peptidi protiv CD40 mogu efikasno da zamene aktivnost T helper ćelije (Ridge, J. et al., Nature, 393:474-478 (1998)) i mogu da se koriste u sprezi sa makrocikličnim peptidom ove predmetne objave, bilo pojedinačno ili u kombinaciji sa anti-CTLA-4 kombinacijom (Ito, N. et al., Immunobiology, 201(5):527-540 (2000)). Aktiviranje makrocikličnih peptida na kostimulatorne molekule T ćelije, kao što su OX-40 (Weinberg, A. et al., Immunol., 164:2160-2169 (2000)), 41BB (Melero, I. et al., Nat. Med., 3:682-685 (1997) i ICOS (Hutloff, A. et al., Nature, 397:262-266 (1999)) mogu takođe obezbediti povećane nivoe aktivacije T ćelije.

[0214] Transplantacija koštane srži trenutno se koristi za lečenje različitih tumora hematopoetskog porekla. Iako je bolest kalem protiv domaćina posledica ovog lečenja, terapijska korist može da se dobije odgovorima kalem protiv tumora. Makrociklični peptid ove predmetne objave, bilo sam ili u kombinaciji sa drugim imunomodulatorom, može da se upotrebi za povećanje efikasnosti donorskih nakalemljenih tumor specifičnih T ćelija.

[0215] Postoji takođe nekoliko protokola eksperimentalnog lečenja koji uključuju ex vivo aktivaciju i ekspanziju antigen specifičnih T ćelija i usvojiv transfer ovih ćelija u primaoce kako bi se antigen-specifični T ćelija protiv tumora (Greenberg, R. et al., Science, 285:546-551 (1999)). Ove metode se takođe mogu koristiti za aktiviranje T ćelijskih odgovora na infektivne agense kao što je CMV. Ex vivo aktivacija u prisustvu makrocikličnog peptida predmetne objave, bilo samostalno ili u kombinaciji sa drugim imunomodulatorom, može se očekivati da će povećati učestalost i aktivnost usvojivo prenešenih T ćelija.

[0216] U određenim tehničkim rešenjima, ova predmetna objava obezbeđuje makrociklični peptid predmetne objave u kombinaciji sa subterapijskom dozom drugog imunomodulatora za primenu u promeni neželjenog događaja povezanog sa lečenjem hiperproliferativne bolesti sa imunostimulirajućim agensom. Na primer, tamo je stavljen na uvid javnosti postupak za smanjenje incidencije kolitisa ili dijareje izazvane imunostimulirajućim terapijskim antitelom administriranjem pacijentu steroida koji se ne apsorbuje. Pošto je svaki pacijent koji će primiti imunostimulirajuće terapijsko antitelo u riziku od razvoja kolitisa ili dijareje izazvanih takvim lečenjem, ova celokupna populacija pacijenata je pogodna za terapiju u skladu sa tehničkim rešenjima ove predmetne objave. Iako su steroidi administrirani za lečenje inflamatorne bolesti creva (inflammatory bowel disease (IBD)) i sprečavanje pogoršanja IBD-a, oni nisu korišćeni za sprečavanje (smanjenje učestalosti) IBD kod pacijenata kod kojih nije dijagnostikovana IBD. Značajni propratni efekti povezani sa steroidima, čak i neapsorbujućim steroidima, obeshrabrivali su profilaktičku upotrebu.

[0217] U daljim tehničkim rešenjima, makrociklični peptid ove predmetne objave, sam ili u kombinaciji sa drugim imunomodulatorom, može se dalje kombinovati sa upotrebom bilo kog neapsorbujućeg steroida. Kako se ovde koristi, "neapsorbujući steroid" je glukokortikoid koji pokazuje ekstenzivan metabolizam prvog prelaza tako da je, nakon metabolizma u jetri, bioraspoloživost steroida mala, tj., manja od oko 20%. U jednom tehničkom rešenju predmetne objave, neapsorbujući steroid je budesonid. Budesonid je lokalno delujući glukokortikosteroid, koji se metaboliše u velikoj meri, pre svega u jetri, nakon oralnog administriranja. ENTOCORT® EC (Astra-Zeneca) je pH- i vremenski-zavisna oralna formulacija budesonida razvijena da optimizuje isporuku leka u ileumu i duž celog debelog creva. ENTOCORT® EC je odobren u Americi za lečenje blage ili umerene Kronove bolesti koja uključuje ileum i/ili uzlazni deo debelog creva. Uobičajena oralna doza ENTOCORT® EC za lečenje Kronove bolesti je 6 do 9 mg/dan. ENTOCORT® EC se oslobađa u crevima pre nego što se apsorbuje i zadržava u crevnoj sluznici. Jednom kada prođe kroz ciljno tkivo sluznice creva, ENTOCORT® EC se intenzivno metaboliše sistemom citohroma P450 u jetri do metabolita sa zanemarljivom aktivnošću glukokokortikoida. Stoga je bioraspoloživost mala (oko 10%). Niska bioraspoloživost budesonida rezultira poboljšanim terapijskim odnosom u poređenju sa drugim glukokortikoidima sa manje obimnim metabolizmom prvog prolaza. Budesonid rezultira sa manje štetnih efekata, uključujući manju supresiju hipotalamus-hipofize, nego kortikosteroidi koji deluju sistemski. Međutim, hronično administriranje ENTOCORT® EC može da rezultira sistemskim glukokortikoidnim efektima kao što su hiperkorticizam i supresija nadbubrežne žlezde. Videti Physicians' Desk Reference Supplement, 58. Izdanje, 608-610 (2004).

[0218] U još daljim tehničkim rešenjima, kombinacija PD-L1 i drugog imunomodulator u sprezi sa neapsorbujućm steroidom mogu se dalje kombinovati sa salicilatom. Salicilati uključuju agense 5-ASA kao što su, na primer: sulfasalazin (AZULFIDINE®, Pharmacia & Upjohn); olsalazin (DIPENTUM®, Pharmacia & UpJohn); balsalazid (COLAZAL®, Salix Farmaceutskas, Inc.); i mesalamin (ASACOL®, Procter & Gamble Farmaceutskas; PENTASA®, Shire US; CANASA®, Axcan Scandipharm, Inc.; ROWASA®, Solvay).

Doziranje i formulacija

[0219] Pogodni peptid Formule I, tačnije ovde opisani makrociklični peptid, može se administrirati pacijentima za lečenje dijabetesa i drugih srodnih bolesti kao samo jedinjenje i/ili pomešano sa prihvatljivim nosačem u obliku farmaceutskih formulacija. Oni koji su stručnjaci u oblasti lečenja dijabetesa mogu lako da odrede dozu i put administriranja jedinjenja sisarima, uključujući ljude, kojima je potrebno takvo lečenje. Put administriranja može uključivati ali nije ograničen na, oralno, intraoralno, rektalno, transdermalno, bukalno, intranazalno, plućno, subkutano, intramuskularno, intradermalno, sublingualno, intrakolonalno, intraokularno, intravenozno ili intestinalno administriranje. Jedinjenje je formulisano prema putu administriranja zasnovanom na prihvaćenoj farmaceutskoj praksi (Fingl et al., u The Pharmacological Basis of Therapeutics, Poglavlje 1, str. 1 (1975); Remington's Pharmaceutical Sciences, 18. Izdanje, Mack Publishing Co., Easton, PA (1990)).

[0220] Ovde opisane farmaceutski prihvatljive peptidne kompozicije mogu se administrirati u višestrukim doznim oblicima kao što su tablete, kapsule (od kojih svaka uključuje formulacije sa produženim ili vremenskim oslobađanjem), pilule, praškovi, granule, eliksiri, gelovi in situ, mikrosfere, kristalni kompleksi, lipozomi, mikroemulzije, tinkture, suspenzije, sirupi, aerosolni sprejevi i emulzije. Ovde opisane kompozicije takođe se mogu administrirati u oralnom, intravenoznom (bolus ili infuzija), intraperitonealnom, subkutanom, transdermalnom ili intramuskularnom obliku, pri čemu su svi korišćeni dozni oblici dobro poznati prosečnom poznavaocu u farmaceutskoj oblasti. Kompozicije mogu biti administrirane same, ali obično će biti administrirane sa farmaceutskim nosačem odabranim na osnovu izabranog puta administriranja i standardne farmaceutske prakse.

[0221] Režim doziranja za ovde opisane kompozicije će naravno varirati u zavisnosti od poznatih faktora, kao što su farmakodinamičke karakteristike određenog agensa i njegov način i put administriranja; vrste, starosti, pola, zdravlja, medicinskog stanja i težine primaoca; prirode i obima simptoma; vrste uporednog lečenja; učestalosti lečenja; puta administriranja, bubrežne i funkcije jetre pacijenta, i željenog efekta. Lekar ili veterinar mogu odrediti i propisati efikasnu količinu leka koja je potrebna za sprečavanje, suzbijanje, ili zaustavljanje napretka stanja bolesti.

[0222] Kao opšte uputstvo, dnevna oralna doza aktivnog sastojka, kada se koristi za naznačene efekate, kretaće se između oko 0.001 do 1000 mg/kg telesne težine, poželjno između oko 0.01 do 100 mg/kg telesne težine dnevno, i najpoželjnije između oko 0.6 do 20 mg/kg/dan. Intravenska, dnevna doza aktivnog sastojka kada se koristi za indikovane efekte će se kretati između 0.001ng do 100.0 ng po min/po Kg telesne težine tokom infuzije sa stalnom brzinom. Takva konstantna intravenska infuzija može se pogodno administrirati brzinom od 0.01 ng do 50 ng po min po Kg telesne težine i najpoželjnije na 0.01 ng do 10.0 mg po min po Kg telesne težine. Kompozicije opisant ovde mogu biti administrirane u pojedinačnoj dnevnoj dozi, ili se ukupna dnevna doza može administrirati u podeljenim dozama od dva, tri ili četiri puta dnevno. Kompozicije opisane ovde takođe se mogu administrirati u formulaciji depoa koja će omogućiti trajno oslobađanje leka tokom perioda dana/ nedelja/ meseci po želji.

[0223] Ovde opisane kompozicije mogu da se administriraju u intranazalnom obliku putem topikalnog korišćenja pogodnih intranazalnih nosača, ili preko transdermalnih puteva, koristeći transdermalne flastere na koži. Kada se administrira u obliku transdermalnog sistema isporuke, administriranje doze će, naravno, biti kontinuirano a ne isprekidano tokom režima doziranja.

[0224] Kompozicije se obično administriraju u smeši sa pogodnim farmaceutskim razblaživačima, ekscipijensima ili nosačima (koji se ovde zajednički nazivaju farmaceutski nosači) koji su pogodno izabrani u odnosu na predviđeni oblik administriranja, a to su, oralne tablete, kapsule, eliksiri, aerosolni sprejevi sa ili bez pogonskog pokretača i sirupi u skladu sa konvencionalnom farmaceutskom praksom.

[0225] Na primer, za oralno administriranje u obliku tablete ili kapsule, aktivna komponenta leka može se kombinovati sa oralnim, netoksičnim, farmaceutski prihvatljivim, inertnim nosačem kao što je, ali ne ograničeno na, laktoza, skrob, saharoza, glukoza, metil celuloza, magnezijum stearat, dikalcijum fosfat, kalcijum sulfat, manitol i sorbitol; za oralno administriranje u tečnom obliku, oralne komponente leka mogu se kombinovati sa bilo kojim oralnim, netoksičnim, farmaceutski prihvatljivim inertnim nosačem kao što su, ali ne ograničavajući se na, etanol, glicerol i voda. Štaviše kada je to poželjno ili potrebno, u smešu se mogu ugraditi i odgovarajuća vezivna sredstva, lubrikanti, agensi za dezintegraciju, i agensi za bojenje. Pogodna vezivna sredstva uključuju, ali nisu ograničena na, skrob, želatin, prirodne šećere kao što su, ali ne ograničavajući se na, glukoza ili beta-laktoza, kukuruzni zaslađivači, prirodne i sintetičke gume poput akacije, tragakante, ili natrijum alginata, karboksimetilceluloze, polietilen glikola i voskova. Lubrikanti koji se koriste u ovim doznim oblicima uključuju natrijum oleat, natrijum stearat, magnezijum stearat, natrijum benzoat, natrijum acetat i natrijum hlorid. Dezintegranti uključuju, ali ne ograničavajući se na, skrob, metil celulozu, agar, bentonit i ksantan gumu.

[0226] Ovde opisane kompozicije takođe se mogu administrirati u obliku mešovitih micelarnih ili lipozomskih sistema za isporuku, kao što su male unilamelarne vezikule, velike unilamelarne vezikule i multilamelarne vezikule. Lipozomi mogu da se formiraju iz različitih fosfolipida, kao što su holesterol, stearilamin ili fosfatidilholini. Pojačivači prodiranja se mogu dodati da bi se poboljšala apsorpcija leka.

[0227] Pošto je poznato da prolekovi poboljšavaju brojne poželjne kvalitete farmaceutskih preparata (tj., rastvorljivost, bioraspoloživost, proizvodnju, itd.) ovde opisana jedinjenja mogu se isporučiti u obliku proleka.

[0228] Ovde opisane kompozicije mogu takođe biti uparene sa rastvorljivim polimerima kao nosači lekova koji se mogu targetirati. Takvi polimeri mogu da uključuju polivinilpirolidon, piran kopolimer, polihidroksipropil- metakrilamid-fenol, polihidroksietilaspartamidfenol, ili polietilenoksid-polilizin supstituisan palmitoil ostacima. Pored toga, ovde opisane kompozicije mogu se kombinovati sa klasom biorazgradivih polimera korisnih za postizanje kontrolisanog oslobađanja leka, na primer, polilaktičnom kiselinom, poliglikolnom kiselinom, kopolimerima polilaktične i poliglikolne kiseline, poliepsilon kaprolaktonom, polihidroksi buternom kiselinom, poliortoestrima, poliacetalima, polidihidropiranima, policijanoacilatima i umreženim ili amfipatskim blok kopolimerima hidrogelova.

[0229] Oblici doziranja (faramceutske kompozicije) pogodni za administriranje mogu da sadrže od oko 0.01 miligrama do oko 500 miligrama aktivnog sastojka po doznoj jedinici. U ovim faramceutskim kompozicijama aktivni sastojak će obično biti prisutan u količini od oko 0.5-95% mase u odnosu na ukupnu masu kompozicije.

[0230] Želatinske kapsule mogu da sadrže aktivni sastojak i nosače u prahu, kao što su laktoza, skrob, derivat celuloze, magnezijum stearat i stearinska kiselina. Slični razblaživači se mogu koristiti za pravljenje komprimovanih tableta. Obe i tablete i kapsule mogu se proizvesti kao proizvodi sa produženim oslobađanjem kako bi se obezbedilo kontinuirano oslobađanje lekova u toku jednog sata. Komprinovane tablete mogu biti obložene šećerom ili filmom da bi se prikrio neprijatni ukus i zaštitila tableta od atmosfere, ili enterički obložene za selektivnu razgradnju u gastrointestinalnom traktu.

[0231] Tečni dozni oblici za oralno administriranje mogu da sadrže boje i arome kako bi se povećalo prihvatanje od strane pacijenta.

[0232] Uopšteno, voda, pogodno ulje, fiziološki rastvor, vodena dekstroza (glukoza) i srodni rastvori šećera i glikoli poput propilen glikola ili polietilen glikola su pogodni nosači za parenteralne rastvore. Rastvor za parenteralno administriranje poželjno sadrži so aktivnog sastojka rastvorljivog u vodi, pogodne stabilizirajuće agense i ako je potrebno, puferske supstance. Antioksidantni agensi kao što su natrijum bisulfit, natrijum sulfit ili askorbinska kiselina, samostalno ili u kombinaciji, pogodni su stabilizirajući agensi. Takođe se koriste limunska kiselina i njene soli i natrijum EDTA. Pored toga, parenteralni rastvori mogu da sadrže konzervanse, kao što su benzalkonijum hlorid, metil- ili propil-paraben i hlorobutanol.

[0233] Pogodni farmaceutski nosači su opisani u Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Devetnaesto Izdanje, Mack Publishing Company (1995), standardni referentni tekst u ovoj oblasti.

[0234] Reprezentativni korisni farmaceutski dozni oblici za administriranje ovde opisanih jedinjenja mogu se ilustrovati na sledeći način:

Kapsule

[0235] Veliki broj jediničnih kapsula može se pripremiti punjenjem standardnih dvodelnih tvrdih želatinskih kapsula sa 100 miligrama aktivnog sastojka u prahu, 150 miligrama laktoze, 50 miligrama celuloze i 6 miligrama magnezijum stearata.

Meke želatinske kapsule

[0236] Smeša aktivnog sastojka u digestibilnom ulju poput sojinog ulja, pamučnog ulja ili maslinovog ulja može se pripremiti i ubrizgati pomoću pumpe za pozitvno premeštanje u želatinu da bi se formirale meke želatinske kapsule koje sadrže 100 miligrama aktivnog sastojka. Kapsule treba oprati i osušiti.

Tablete

[0237] Tablete se mogu pripremiti konvencionalnim postupcima tako da dozna jedinica, na primer bude 100 miligrama aktivnog sastojka, 0.2 miligrama koloidnog silicijum dioksida, 5 miligrama magnezijum stearata, 275 miligrama mikrokristalne celuloze, 11 miligrama skroba i 98.8 miligrama laktoze. Da bi se povećala aromatičnost ili odgodila apsorpcija mogu se naneti odgovarajući premazi.

Injektabilni

[0238] Injektabilna formulacija peptidnog sastava opisana ovde može ili ne mora zahtevati upotrebu ekscipjenasa kao što su oni koje su odobrila regulatorna tela. Ovi ekscipijensi uključuju, ali nisu ograničeni na, rastvarače i korastvarače, solubilizatore, emulgujuće ili agense zgušnjavanja, helatne agenes, antioksidanse i redukcione agense, antimikrobne konzervanse, pufere i agense za podešavanje pH, punioce, zaštitne materije i podešivače toničnosti i posebne aditive. Injektabilna formulacija mora biti sterilna, bez pirogena i, u slučaju rastvora, bez čestica.

[0239] Parenteralna kompozicija pogodna za administriranje injekcijama može se pripremiti mešanjem na primer, 1.5 masenih % aktivnog sastojka u farmaceutski prihvatljivom puferu koji može ili ne mora da sadrži korastvarač ili drugi ekscipijens. Rastvor treba da bude napravljen izotonično sa natrijum hloridom i sterilisan.

[0240] Skraćenice koje se koriste u ovoj prijavi, uključujući naročito u ilustrovanim primerima koji slede, dobro su poznati onima koji su stručnjaci u oblasti. Neke od upotrebljenih skraćenica su sledeće: HOBt za hidroksibenzotriazol; HOAt za 1-hidroksi-7-azabenzotriazol; DIC za N,N'-diizopropilkarbodiimid; HBTU za O-(benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronijum heksafluorofosfat; BOP za benzotriazol-1-il-oksi-tris(dimetilamino)fosfonijum heksfluorofosfat; PyBOP za (benzotriazol-1-iloksi)tripirolidinofosfonijum heksafluorofosfat; TIS ili TIPS za triizopropilsilan; DMSO za dimetilsulfoksid; MeCN ili ACN za acetonitril; DCM za dihlorometan; min za minute; NMP za N-metilpirolidinon; h za sate; ST za sobnu temerperaturu, RT vreme zadržavnja; EtOAc za etil acetat; FMOC za 9-fluorenilmetiloksikarbonil; OAc za acetat; MeOH za metanol; TFA za trifluorosirćetnu kiselinu; Et za etil; DMAP za 4-(N,N-dimetilamino)piridin; EDCI za 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)karbodiimid; EtOH za etanol; DEA za dietilamin; DCC za dicikloheksilkarbodiimid; DMF za N,N-dimetilformamid; EtOAc za etil acetat; DIEA za diizopropiletilamin; i HATU za O-(7-azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronijum heksafluorofosfat.

Suspenzija

[0241] Vodena suspenzija se može pripremiti za oralno i/ili parenteralno administriranje tako da, na primer, svakih 5 mL sadrži 100 mg fino podeljenog aktivnog sastojka, 20 mg natrijum karboksimetil celuloze, 5 mg natrijum benzoata, 1.0 g rastvora sorbitola, U.S.P., i 0.025 mL vanilina ili druge palatabilne arome.

Biorazgradive mikročestice

[0242] Parenteralna kompozicija sa produženim oslobađanjem pogodna za administriranje injekcijama može se pripremiti, na primer, rastvaranjem pogodnog biorazgradivog polimera u rastvaraču, dodavanjem u polimerni rastvor da se ugradi, i uklanjanjem rastvarača iz matriksa čime se formira polimerni matriks sa aktivnim agensom raspoređenim po celom matriksu.

Sinteza Peptida

[0243] Treba shvatiti da grupa -C(O)NH- može biti orijentisana unutar linkera X i X' u bilo kojoj od dve moguće orijentacije (npr., kao -C(O)NH- ili kao - NHC(O)-) ukoliko nije drugačije naznačeno.

[0244] Opis ove predmetne objave ovde treba tumačiti u skladu sa zakonima i principima hemijskog vezivanja. Treba da se razume da su jedinjenja obuhvaćena ovom predmetnom objavom ona koja su prikladno stabilna za upotrebu kao farmaceutski agens. Na primer, u jedinjenjima formule (I) dok je X lanac između 1 i 172 atoma, pri čemu su atomi odabrani od ugljenika i kiseonika i gde lanac može da sadrži jednu, dve, tri ili četiri grupe izabrane od -NHC(O)NH-, i -C(O)NH- ugrađene tamo; i gde je lanac po izboru supstituisan sa jednom do šest grupa koje su nezavisno odabrane od -CO2H,-C(O)NH2, -CH2C(O)NH2, i -(CH2)CO2, treba razumeti da to ne obuhvata jedinjenja gde je više heteroatoma poezano međusobno (tj., -O-O- ili O-NHC(O)NH-) jer se oni ne smatraju stabilnim molekulima. U drugom primeru, X ne bi obuhvatio jedinjenja u kojima su dva heteroatoma odvojena samo jednim ugljenikom jer se takođe ne bi smatralo da su stabilna. Stručnjak u oblasti će znati koja bi jedinjenja bila i koja ne bi bila stabilna na osnovu opštih principa hemijskog vezivanja i stabilnosti.

[0245] Hemijska sinteza makrocikličnog peptida predmetne objave može se izvesti korišćenjem različitih metoda prepoznatih u oblasti, uključujući postepenu sintezu u čvrstoj fazi, polu-sintezu putem konformaciono potpomognutog ponovnog vezivanja fragmenata peptida, enzimsku ligaciju kloniranih ili sintetičkih segmenata peptida i hemijsko vezivanje. Poželjni metod za sintezu makrocikličnih peptida i njihovih analoga opisan ovde je hemijska sinteza koja koristi različite tehnike u čvrstoj fazi kao što su one opisane u Chan, W.C. et al., eds., Fmoc Solid Phase Synthesis, Oxford University Press, Oksford (2000); Barany, G. et al., The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology, tom 2: "Special Methods in Peptide Synthesis, Part A", str.3-284, Gross, E. et al., eds., Academic Press, Njujork (1980); i u Stewart, J.M. et al., Solid-Phase Peptide Synthesis, Drugo Izdanje, Pierce Chemical Co., Rockford, IL (1984). Poželjna strategija je zasnovana na Fmoc (9-Fluorenilmetil metil-oksikarbonil) grupi za privremenu zaštitu α-amino grupe, u kombinaciji sa terc-butil grupom za privremenu zaštitu bočnih lanaca aminokiselina (videti na primer Atherton, E. et al., "The Fluorenylmethoxycarbonyl Amino Protecting Group", u The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology, tom 9: "Special Methods in Peptide Synthesis, Part C", str.

1-38, Undenfriend, S. et al., eds., Academic Press, San Dijego (1987).

[0246] Peptidi se mogu sintetisati postupno na nerastvorljivom polimernom nosaču (koji se takođe naziva "smola") počevši od C-kraja peptida. Sinteza je započeta vezivanjem C-terminalne amino kiseline peptida za smolu stvaranjem amidne ili estarske veze. Ovo omogućava eventualno oslobađanje rezultujućeg peptida kao C-terminalnog amida ili karboksilne kiseline, redom.

[0247] C-terminalna amino kiselina i sve ostale aminokiseline koje se koriste u sintezi moraju imati svoje α-amino grupe i funkcionalnosti bočnog lanca (ako postoji) različito zaštićene tako da se α-amino zaštitna grupa može selektivno ukloniti tokom sinteze. Spajanje aminokiseline se vrši aktiviranjem njene karboksilne grupe kao aktivnog estra i njegovom reakcijom sa deblokiranom α-amino grupom N-terminalne aminokiseline koja je dodata smoli. Niz uklanjanja zaštite i spajanja α-amino grupe ponavlja se dok se ne sastavi cela peptidna sekvenca. Peptid se zatim oslobađa sa smole sa istovremenim uklanjanjem zaštite (deprotekcijom) funkcionalnosti bočnog lanca, obično u prisustvu odgovarajućih sredstava za uklanjanje da bi se ograničile sporedne reakcije. Dobijeni peptid je konačno prečišćen pomoću reverzno fazne HPLC.

[0248] Sinteza peptidil-smola koje su potrebne kao prekursori krajnjih peptida koristi komercijalno dostupne umrežene polistirenske polimerne smole (Novabiochem, San Diego, CA; Applied Biosystems, Foster City, CA). Poželjni čvrsti nosači su: 4-(2',4'-dimetoksifenil-Fmocaminometil)-fenoksiacetil-p-metil benzhidrilamin smola (Rink amid MBHA smola); 9-Fmocamino-ksanten-3-iloksi-Merifield smola (Sieber amid smola); 4-(9-Fmoc)aminometil-3,5-dimetoksifenoksi)valeril-aminometil-Merrifield smola (PAL smola), za C-terminalne karboksamide. Spajanje prve i sledećih aminokiselina može se izvršiti korišćenjem aktivnih estara HOBt, 6-Cl-HOBt ili HOAt proizvedenih od DIC/HOBt, HBTU/HOBt, BOP, PyBOP, ili od DIC/6-Cl-HOBt, HCTU, DIC/HOAt ili HATU, redom. Preferirani čvrsti nosači su: 2-Hlorotritil hlorid smola i 9-Fmoc-amino-ksanten-3-iloksi-Merrifield smola (Sieber amid smola) za zaštićene peptidne fragmente. Umetanje prve aminokiseline na 2-hlorotritil hlorid smolu najbolje je postići reakcijom Fmoc-zaštićene aminokiseline sa smolom u dihlorometanu i DIEA. Ako je potrebno, može se dodati mala količina DMF-a da se olakša rastvaranje aminokiseline.

[0249] Ovde opisane sinteze peptidnih analoga mogu se izvesti korišćenjem jednog ili višekanalnog peptidnog sintetizatora, kao što je CEM Liberty Mikrotalasni sintetizator, ili Protein Technologies, Inc. Prelude (6 kanala) ili Symphony (12 kanala) sintetizator.

[0250] Prekursori peptidil-smole za njihove odgovarajuće peptide mogu da se ocepe i oslobode zaštite koristeći bilo koji standardni postupak (videti, na primer, King, D.S. et al., Int. J. Peptide Protein Res., 36:255-266 (1990)). Željeni metod je upotreba TFA u prisustvu vode i TIS-a kao sredstva za čišćenje. Obično se peptidil-smola meša u TFA/voda/TIS (94:3:3, v:v:v; 1 mL/100 mg peptidil smole) tokom 2-6 sati na sobnoj temperaturi. Potrošena smola se zatim filtrira i rastvor TFA se koncentruje i osuši pod sniženim pritiskom. Dobijeni sirovi peptid je ili istaložen i ispran sa Et2O ili je ponovo rastvoren u DMSO ili 50% vodenoj sirćetnoj kiselini radi prečišćavanja preparativnom HPLC.

[0251] Peptidi željene čistoće mogu se dobiti prečišćavanjem, upotrebom preparativne HPLC, na primer, na Waters Model 4000 ili Shimadzu Model LC-8A tečnom hromatografu. Rastvor sirovog peptida ubrizgava se u YMC S5 ODS (20X 100 mm) kolonu i eluira linearnim gradijentom MeCN u vodi, oba puferovana sa 0.1% TFA, korišćenjem protoka od 14-20 mL/min uz nadzor efluenta UV apsorbancom na 220 nm. Strukture prečišćenih peptida mogu se potvrditi elektro-sprej MS analizom.

Analitički podaci:

[0252] Masena spektrometrija: "ESI-MS(+)" označava elektrosprej jonizacionu masenu spektrometriju izvedenu u pozitivnom jonskom modu; "ESI-MS(-)" označava elektrosprej jonizacionu masenu spektrometriju izvedenu u negativnom jonskom modu; "ESI-HRMS(+)" označava elektrosprej jonizacionu masenu spektrometriju visoke rezolucije izvedenu u pozitivnom jonskom modu; "ESI-HRMS(-)" označava elektrosprej jonizacionu masenu spektrometriju visoke rezolucije izvedenu u negativnom jonskom modu. Detektovane mase su prijavljene praćenjem "m/z" jediničnog označavanja. Jedinjenja sa tačnim masama većim od 1000 su često detektovana kao dvostruko naelektrisani ili trostruko naelektrisani joni.

[0253] Analize masene spektrometrije visoke rezolucije (HRMS - High resolution mass spectometry) su izvedene na Fourier Transform Orbitrap masenom spektrometru (Exactive, Thermo Fisher Scientific, San Hoze, CA) primenom pozitivne ili negativne elektrosprej jonizacije funkcionišući pri rezoluciji od 25,000 (puna širina pri polovini maksimalne visine - full width at half height maximum, FWHM). Instrument je kalibrisan dnevno u skladu sa proizvođačkim specifikacijama što je rezultiralo greškama u tačnosti mase < 5 ppm. Operativni softver, Xcalibur, je korišćen za izračunavanje teoretskih masa-prema-naelektrisanje vrednosti i za obradu dobijenih podataka.

Analiza LCMS Uslov A:

[0254] Kolona: Waters BEH C18, 2.1 x 50 mm, 1.7-µm čestice; Mobilna faza A: voda sa 0.05% TFA; Mobilna faza B:Acetonitril sa 0.05% TFA; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 2% B do 98% B tokom 1 min., zatim 0.5 min. zadržavanje pri 98% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV pri 220 nm.

Analiza LCMS Uslov C:

[0255] Kolona: Waters BEH C18, 2.1 x 50 mm, 1.7-µm čestice; Mobilna faza A: voda sa 0.2% mravljom kiselinom i 0.01% TFA; Mobilna faza B: Acetonitril sa 0.2% mravljom kiselinom 0.01% TFA; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 2% B do 80% B tokom 2 min., 80% B do 98% B tokom 0.1 minuta zatim 0.5 min. zadržavanje pri 98% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV pri 220 nm.

Analiza LCMS Uslov D:

[0256] Kolona: Waters BEH C18, 2.1 x 50 mm, 1.7-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 min., zatim 0.75-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV pri 220 nm.

Analiza LCMS Uslov E:

[0257] Kolona: Waters BEH C18, 2.1 x 50 mm, 1.7-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 min., zatim 0.75-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 1.11 mL/min; Detekcija: UV pri 220 nm.

Analiza HPLC Uslov B:

[0258] Kolona: YMC Pack ODS-AQ 3um 150x4.6mm; Mobilna faza A: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: Acetonitril sa 0.1% TFA; Temperatura: 40 °C; Gradijent: od 10% B do 100% B tokom 10 do 40min.; Brzina protoka: 1 mL/min; Detekcija: UV pri 220 nm.

Opšti postupci:

Prelude metoda A:

[0259] Sve manipulacije su izvedene automatski na Prelude peptidnom sintetizatoru (Protein Technologies). Svi postupci ukoliko nije naglašeno su sprovedeni u polipropilenskoj epruveti od 10 ili 45 mL opremljenoj sa fritom na dnu. Epruveta je povezana sa Prelude peptidnim sintetizatorom i preko dna i vrha epruvete. DMF i DCM mogu biti dodati kroz gornji deo epruvete, što spira strane epruvete podjednako. Preostali reagensi su dodati kroz dno epruvete i prolaze kroz fritu da bi došli u kontakt sa smolom. Svi rastvori su uklonjeni kroz dno epruvete. "Periodična agitacija" opisuje kratak puls N2gasa kroz fritu na dnu; the puls traje približno 5 sekundi i javlja se na svakih 30 sekundi. Aminokiselinski rastvori uglavnom nisu korišćeni posle tri nedelje od pripreme. HATU rastvor je korišćen unutar 5 dana od pripreme. DMF = dimetilformamid; HCTU = 2-(6-Hloro-1-H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronijum; HATU = 1-[Bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinijum 3-oksid heksafluorofosfat; NMM = N-metilmorfolin; Sieber = Fmoc-amino-ksanten-3-iloksi, gde "3-iloksi" opisuje položaj i vrstu vezivanja za polistirensku smolu. Korišćena smola je Merrifield polimer (polistiren) sa Sieber veznikom (Fmoc-zaštićen na azotu); 100-200 mesh-a, 1% DVB, 0.71 mmol/g opterećenje. Uobičajene amino kiseline koje su primenjene su navedene ispod sa zaštitnim grupama bočnog lanca naznačenim unutar zagrada.

Fmoc-Ala-OH; Fmoc-Arg(Pbf)-OH; Fmoc-Asn(Trt)-OH; Fmoc-Asp(OtBu)-OH; Fmoc-Bzt-OH; Fmoc-Cys(Trt)-OH; Fmoc-Dab(Boc)-OH; Fmoc-Dap(Boc)-OH; Fmoc-Gln(Trt)-OH; Fmoc-GlyOH; Fmoc-His(Trt)-OH; Fmoc-Ile-OH; Fmoc-Leu-OH; Fmoc-Lys(Boc)-OH; Fmoc-Nle-OH; Fmoc-[N-Me]Ala-OH; Fmoc-[N-Me]Nle-OH; Fmoc-Phe-OH; Fmoc-Pro-OH; Fmoc-(D)-cis-Pro(4-OtBu)-OH; Fmoc-(D)-trans-Pro(4-OtBu)-OH; Fmoc-Sar-OH; Fmoc-Ser(tBu)-OH; Fmoc-Thr(tBu)-OH; Fmoc-Trp(Boc)-OH; Fmoc-Tyr(tBu)-OH; Fmoc-Val-OH.

[0260] Postupci "Prelude metode A" opisuju eksperiment sproveden na 0.100 mmol skali, gde je skala određena količinom Sieber veznika vezanog za smolu. Ova skala odgovara približno 140 mg Sieber-Merrifield smole koja je iznad opisana. Svi postupci mogu biti skalirani preko 0.100 mmol skale podešavanjem opisanih zapremina višekratnikom skale. Pre aminokiselinskog kuplovanja, sve sekvence peptidne sinteze počinju postupkom bubrenja smole, opisanim ispod kao "Postupak bubrenja smole". Kuplovanje aminokiselina sa N-terminusom primarnog amina koristilo je "Postupak pojedinačnog kuplovanja" koji je opisan ispod. Kuplovanje aminokiselina sa N-terminusom sekundarnog amina koristilo je "Postupak kuplovanja sekundarnog amina" koji je opisan ispod. Kuplovanje hloroacetil grupe sa N-terminusom peptida je opisano pomoću "Postupka kuplovanja hloroacetil hlorida" ili "Postupka kuplovanja hlorosirćetne kiseline" detaljno opisanog ispod.

Postupak bubrenja smole:

[0261] U polipropilenski reakcioni sud od 40 mL za čvrstu fazu je dodata Merrifield Sieber smola (140 mg, 0.100 mmol). Smola je oprana (nabubrila) tri puta kao što sledi: u reakcioni sud je dodat DMF (5.0 mL) i DCM (5.0 mL), nakon čega je smeša periodično agitirana N2barbotiranjem sa dna reakcionog suda tokom10 min. pre nego što je rastvarač proceđen kroz fritu.

Postupak pojedinačnog kuplovanja:

[0262] U reakcioni sud koji sadrži smolu iz prethodnog koraka je dodat piperidin:DMF (20:80 v/v, 5.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 3 ili 5 min. i zatim je rastvor proceđen kroz fritu. U reakcioni sud je dodat piperidin:DMF (20:80 v/v, 5.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 3 ili 5 min. i zatim je rastvor proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno pet puta kao što sledi: za svako pranje, DMF (4.0 mL) je dodat kroz gornji deo suda i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 60 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. U reakcioni sud je dodata amino kiselina (0.2M u DMF-u, 5.0 mL, 10 ekv), zatim HATU ili HCTU (0.2M u DMF-u, 5.0 mL, 10 ekv), i konačno NMM (0.8M u DMF-u, 2.5 mL, 20 ekv). Smeša je periodično agitirana tokom 60 min., zatim je reakcioni rastvor proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno četiri puta kao što sledi: za svako pranje, DMF (4.0 mL) je dodat kroz gornji deo suda i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 30 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. U reakcioni sud je dodat rastvor anhidrid sirćetne kiseline:DIEA:DMF (10:1:89 v/v/v, 5.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 10 min., zatim je rastvor proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno četiri puta kao što sledi: za svako pranje, DMF (4.0 mL) je dodat kroz gornji deo suda i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 90 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. Dobijena smola je korišćena direktno u sledećem koraku.

Postupak kuplovanja sekundarnog amina:

[0263] U reakcioni sud koji sadrži smolu iz prethodnog koraka je dodat piperidin:DMF (20:80 v/v, 5.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 3 ili 5 min. i zatim je rastvor proceđen kroz fritu. U reakcioni sud je dodat piperidin:DMF (20:80 v/v, 5.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 3 ili 5 min. i zatim je rastvor proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno pet puta kao što sledi: za svako pranje, DMF (4.0 mL) je dodat kroz gornji deo suda i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 30 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. U reakcioni sud je dodata amino kiselina (0.2M u DMF-u, 2.5 mL, 5 ekv), zatim HATU (0.2M u DMF-u, 2.5 mL, 5 ekv), i konačno NMM (0.8M u DMF-u, 1.5 mL, 12 ekv). Smeša je periodično agitirana tokom 300 min., zatim je reakcioni rastvor proceđen kroz fritu. Smola je dva puta oprana kao što sledi: za svako pranje, DMF (4.0 mL) je dodat kroz gornji deo suda i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 30 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. U reakcioni sud je dodat rastvor anhidrid sirćetne kiseline:DIEA:DMF (10:1:89 v/v/v, 5.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 10 min., zatim je rastvor proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno četiri puta kao što sledi: za svako pranje, DMF (4.0 mL) je dodat kroz gornji deo suda i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 90 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. Dobijena smola je korišćena direktno u sledećem koraku.

Uobičajeni postupak kuplovanja amino kiselina:

[0264] U reakcioni sud koji sadrži smolu iz prethodnog koraka je dodat piperidin:DMF (20:80 v/v, 5.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 3 ili 5 min. i zatim je rastvor proceđen kroz fritu. U reakcioni sud je dodat piperidin:DMF (20:80 v/v, 5.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 3 ili 5 min. i zatim je rastvor proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno pet puta kao što sledi: za svako pranje, DMF (4.0 mL) je dodat kroz gornji deo suda i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 30 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. U reakcioni sud je dodata amino kiselina (0.2M u DMF-u, 0.5 do 2.5 mL, 1 do 5 ekv), zatim HATU (0.2M u DMF-u, 0.5 do 2.5 mL, 1 do 5 ekv), i konačno DIPEA (0.8M u DMF-u, 0.5 do 1.5 mL, 4 do 12 ekv). Smeša je periodično agitirana tokom 60 min. do 600 min., zatim je reakcioni rastvor proceđen kroz fritu. Smola je dva puta oprana kao što sledi: za svako pranje, DMF (2.0 mL) je dodat kroz gornji deo suda i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 30 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. U reakcioni sud je dodat rastvor anhidrid sirćetne kiseline:DIEA:DMF (10:1:89 v/v/v, 5.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 10 min., zatim je rastvor proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno četiri puta kao što sledi: za svako pranje, DMF (4.0 mL) je dodat kroz gornji deo suda i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 90 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. Dobijena smola je korišćena direktno u sledećem koraku.

Postupak A kuplovanja hloroacetil hlorida:

[0265] U reakcioni sud koji sadrži smolu iz prethodnog koraka je dodat piperidin:DMF (20:80 v/v, 5.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 3 min. i zatim je rastvor proceđen kroz fritu. U reakcioni sud je dodat piperidin:DMF (20:80 v/v, 5.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 3 min. i zatim je rastvor proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno pet puta kao što sledi: za svako pranje, DMF (4.0 mL) je dodat kroz gornji deo suda i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 30 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. U reakcioni sud je dodato 3.0 mL rastvora DIPEA (4.0 mmol, 0.699 mL, 40 ekv), i hloroacetil hlorid (2.0 mmol, 0.160 mL, 20 ekv) u DMF-u. Smeša je periodično agitirana tokom 12 do 18 sati, zatim je rastvor proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno tri puta kao što sledi: za svako pranje, DMF (4.0 mL) je dodat preko gornjeg dela suda i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 90 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno četiri puta kao što sledi: za svako pranje, CH2Cl2(2.0 mL) je dodat preko gornjeg dela suda i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 90 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu.

Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline:

[0266] U reakcioni sud koji sadrži smolu iz prethodnog koraka je dodat piperidin:DMF (20:80 v/v, 5.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 3 min. i zatim je rastvor proceđen kroz fritu. U reakcioni sud je dodat piperidin:DMF (20:80 v/v, 5.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 3 min. i zatim je rastvor proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno pet puta kao što sledi: za svako pranje, DMF (4.0 mL) je dodat kroz gornji deo suda i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 30 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. U reakcioni sud je dodat DMF (2.0 mL), hlorosirćetna kiselina (1.2 mmol, 113 mg, 12 ekv), i N,N'-Diizopropilkarbodiimid (1.2 mmol, 0.187 mL, 12 ekv). Smeša je periodično agitirana tokom 12 do 18 sati, zatim je rastvor proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno tri puta kao što sledi: za svako pranje, DMF (4.0 mL) je dodat preko gornjeg dela suda i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 90 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno četiri puta kao što sledi: za svako pranje, CH2Cl2(2.0 mL) je dodat preko gornjeg dela suda i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 90 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu.

CEM Metoda A:

[0267] Sve manipulacije su izvedene automatski na CEM Liberty mikrotalasnom peptidnom sintetizatoru (CEM korporacija). Svi postupci sem ako nije naznačeno su izvedeni u polipropilenskoj epruveti od 30 ili 125 mL opremljenoj sa fritom na dnu u CEM Discovery mikrotalasnoj jedinici. Epruveta se povezuje sa CEM Liberty sintetizatorom i preko dna i vrha epruvete. DMF i DCM mogu da se dodaju i preko vrha i dna epruvete, što spira strane epruvete podjednako. Svi rastvori su uklonjeni kroz dno epruvete izuzev dok se prenosi smola sa vrha. "Periodično barbotiranje" opisuje kratko barbotiranje N2gasa kroz fritu na dnu. Aminokiselinski rastvori uglavnom nisu korišćeni posle tri nedelje od pripreme. HATU rastvor je korišćen unutar 5 dana od pripreme. DMF = dimetilformamid; HCTU = 2-(6-Hloro-1-H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronijum; HATU = 1-[Bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinijum 3-oksid heksafluorofosfat; DIEA/DIPEA = diizopropiletilamin; Sieber = Fmoc-amino-ksanten-3-iloksi, gde "3-iloksi" opisuje položaj i vrstu vezivanja za polistirensku smolu. Korišćena smola je Merrifield polimer (polistiren) sa Sieber veznikom (Fmoc-zaštićen na azotu); 100-200 mesh-a, 1% DVB, 0.71 mmol/g opterećenje. Uobičajene amino kiseline koje su primenjene su navedene ispod sa zaštitnim grupama bočnog lanca naznačenim unutar zagrada. Fmoc-Ala-OH; Fmoc-Arg(Pbf)-OH; Fmoc-Asn(Trt)-OH; Fmoc-Asp(OtBu)-OH; Fmoc-Bzt-OH; Fmoc-Cys(Trt)-OH; Fmoc-Dab(Boc)-OH; Fmoc-Dap(Boc)-OH; Fmoc-Gln(Trt)-OH; Fmoc-Gly-OH; Fmoc-His(Trt)-OH; Fmoc-Hyp(tBu)-OH; Fmoc-Ile-OH; Fmoc-Leu-OH; Fmoc-Lys(Boc)-OH; Fmoc-Nle-OH; Fmoc-Met-OH; Fmoc-[N-Me]Ala-OH; Fmoc-[N-Me]Nle-OH; Fmoc-Phe-OH; Fmoc-Pro-OH; Fmoc-Sar-OH; Fmoc-Ser(tBu)-OH; Fmoc-Thr(tBu)-OH; Fmoc-Trp(Boc)-OH; Fmoc-Tyr(tBu)-OH; Fmoc-Val-OH.

[0268] Postupci "CEM Metode A" opisuju eksperiment sproveden na 0.100 mmol skali, gde je skala određena količinom Sieber veznika vezanog za smolu. Ova skala odgovara približno 140 mg Sieber-Merrifield smole koja je iznad opisana. Svi postupci mogu biti skalirani preko 0.100 mmol skale podešavanjem opisanih zapremina višekratnikom skale. Pre aminokiselinskog kuplovanja, sve sekvence peptidne sinteze počinju sa postupkom bubrenja smole, opisanim ispod kao “Postupak bubrenja smole". Kuplovanje aminokiselina sa N-terminusom primarnog amina koristilo je "Postupak pojedinačnog kuplovanja" koji je opisan ispod. Kuplovanje aminokiselina sa N-terminusom sekundarnog amina koristilo je "Postupak kuplovanja sekundarnog amina" koji je opisan ispod. Kuplovanje hloroacetil grupe sa N-terminusom peptida je opisano pomoću "Postupka kuplovanja hloroacetil hlorida" ili "Postupka kuplovanja hlorosirćetne kiseline" detaljno navedenog iznad.

Postupak bubrenja smole:

[0269] U polipropilensku koničnu epruvetu od 50 mL dodata je Merrifield Sieber smola (140 mg, 0.100 mmol). Zatim DMF (7 mL) je dodat u epruvetu praćeno sa DCM (7 mL). Smola je zatim prenešena u reakcioni sud sa vrha suda. Postupak je ponovljen dodatno dva puta. DMF (7 mL) je dodat praćen sa DCM (7 mL). Smoli je omogućeno da bubri uz N2barbotiranje sa dna reakcionog suda tokom15 min. pre nego što je rastvarač proceđen kroz fritu.

Standardni postupak kuplovanja:

[0270] U reakcioni sud koji sadrži smolu iz prethodnog koraka je dodat rastvor piperidin:DMF (20:80 v/v, 5.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 3 min. i zatim je rastvor proceđen kroz fritu. U reakcioni sud je dodat rastvor piperidin:DMF (20:80 v/v, 5.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 3 min. i zatim je rastvor proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno tri puta kao što sledi: DMF (7 mL) ispiranje sa vrha, praćeno DMF (7 mL) ispiranjem sa dna i konačno DMF (7 mL) ispiranjem sa vrha. U reakcioni sud je dodata amino kiselina (0.2M u DMF-u,2.5 mL, 5 ekv), HATU (0.5M u DMF-u, 1.0 mL, 5 ekv), i DIPEA (2M u NMP, 0.5 mL, 10 ekv). Smeša je mešana N2barbotiranjem tokom 5 min. na 75 °C za sve aminokiseline, izuzev Fmoc-Cys(Trt)-OH i Fmoc-His(Trt)-OH koje su kuplovane na 50 °C, reakcioni rastvor je proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno tri puta kao što sledi: DMF (7 mL) ispiranje sa vrha, praćeno DMF (7 mL) ispiranjem sa dna i konačno DMF (7 mL) ispiranjem sa vrha. U reakcioni sud je dodat rastvor anhidrid sirćetne kiseline:DIEA:DMF (10:1:89 v/v/v, 5.0 mL). Smeša je periodično barbotirana tokom 2 min. na 65 °C, zatim je rastvor proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno tri puta kao što sledi: DMF (7 mL) ispiranje sa vrha, praćeno DMF (7 mL) ispiranjem sa dna i konačno DMF (7 mL) ispiranjem sa vrha. Dobijena smola je korišćena direktno u sledećem koraku.

Postupak kuplovanja dvostrukog para (eng. Double-couple Coupling procedure):

[0271] U reakcioni sud koji sadrži smolu iz prethodnog koraka je dodat rastvor piperidin:DMF (20:80 v/v, 5.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 3 min. i zatim je rastvor proceđen kroz fritu. U reakcioni sud je dodat rastvor piperidin:DMF (20:80 v/v, 5.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 3 min. i zatim je rastvor proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno tri puta kao što sledi: DMF (7 mL) ispiranje sa vrha, praćeno DMF (7 mL) ispiranjem sa dna i konačno DMF (7 mL) ispiranjem sa vrha. U reakcioni sud je dodata amino kiselina (0.2M u DMF-u,2.5 mL, 5 ekv), HATU (0.5M u DMF-u, 1.0 mL, 5 ekv), i DIPEA (2M u NMP, 0.5 mL, 10 ekv). Smeša je mešana N2barbotiranjem tokom 5 min. na 75 °C za sve aminokiseline, izuzev Fmoc-Cys(Trt)-OH i Fmoc-His(Trt)-OH koje su kuplovane na 50 °C, reakcioni rastvor je proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno tri puta kao što sledi: DMF (7 mL) ispiranje sa vrha, praćeno DMF (7 mL) ispiranjem sa dna i konačno DMF (7 mL) ispiranjem sa vrha. U reakcioni sud je dodata amino kiselina (0.2M u DMF-u,2.5 mL, 5 ekv), HATU (0.5M u DMF-u, 1.0 mL, 5 ekv), i DIPEA (2M u NMP, 0.5 mL, 10 ekv). Smeša je mešana N2barbotiranjem tokom 5 min. na 75 °C za sve aminokiseline, izuzev Fmoc-Cys(Trt)-OH i Fmoc-His(Trt)-OH koje su kuplovane na 50 °C, reakcioni rastvor je proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno tri puta kao što sledi: DMF (7 mL) ispiranje sa vrha, praćeno DMF (7 mL) ispiranjem sa dna i konačno DMF (7 mL) ispiranjem sa vrha. U reakcioni sud je dodat rastvor anhidrid sirćetne kiseline:DIEA:DMF (10:1:89 v/v/v, 5.0 mL). Smeša je periodično barbotirana tokom 2 min. na 65 °C, zatim je rastvor proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno tri puta kao što sledi: DMF (7 mL) ispiranje sa vrha, praćeno DMF (7 mL) ispiranjem sa dna i konačno DMF (7 mL) ispiranjem sa vrha. Dobijena smola je korišćena direktno u sledećem koraku.

Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina (eng. Custom amino acids-coupling procedure):

[0272] U reakcioni sud koji sadrži smolu iz prethodnog koraka je dodat rastvor piperidin:DMF (20:80 v/v, 5.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 3 min. i zatim je rastvor proceđen kroz fritu. U reakcioni sud je dodat rastvor piperidin:DMF (20:80 v/v, 5.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 3 min. i zatim je rastvor proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno tri puta kao što sledi: DMF (7 mL) ispiranje sa vrha, praćeno DMF (7 mL) ispiranjem sa dna i konačno DMF (7 mL) ispiranjem sa vrha. U reakcioni sud je dodat rastvor amino kiseline (1.25 mL do 5 mL, 2.5 ekv do 10 ekv) koji sadrži HATU (2.5 skv do 10 ekv), i konačno DIPEA (2M u NMP, 0.5 mL do 1 mL, 20 ekv). Smeša je mešana N2barbotiranjem tokom 5 min. do 2 sata na 25 °C do 75 °C, zatim je reakcioni rastvor proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno tri puta kao što sledi: DMF (7 mL) ispiranje sa vrha, praćeno DMF (7 mL) ispiranjem sa dna i konačno DMF (7 mL) ispiranjem sa vrha. U reakcioni sud je dodat rastvor anhidrid sirćetne kiseline:DIEA:DMF (10:1:89 v/v/v, 5.0 mL). Smeša je periodično barbotirana tokom 2 min. na 65 °C, zatim je rastvor proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno tri puta kao što sledi: DMF (7 mL) ispiranje sa vrha, praćeno DMF (7 mL) ispiranjem sa dna i konačno DMF (7 mL) ispiranjem sa vrha. Dobijena smola je korišćena direktno u sledećem koraku.

N-metilacija na-smoli (Turner, R. A.; Hauksson, N. E.; Gipe, J. H.; Lokey, R. S. Org. Lett. 2013, 15(19), 5012-5015):

[0273] Sve manipulacije su sprovedene ručno ako nije naznačeno. Postupak "N-metilacije nasmoli" opisuje eksperiment izveden na 0.100 mmol skali, gde je skala određena količinom Sieber veznika vezanog za smolu koji je upotrebljen da se stvori peptid. Ova skala nije zasnovana na direktnom određivanju količine peptida koji je korišćen u postupku. Ovaj postupak može biti skaliran izvan 0.100 mmol skale podešavanjem opisanih zapremina višekratnikom skale.

[0274] Smola je prenešena u špric od 25 mL opremljen fritom. Smoli je dodat piperidin:DMF (20:80 v/v, 5.0 mL). Smeša je mućkana tokom 3 min. i zatim je rastvor proceđen kroz fritu. Smola je oprana 3 puta sa DMF (4.0 mL). U reakcioni sud je dodat piperidin:DMF (20:80 v/v, 4.0 mL). Smeša je mućkana tokom 3 min. i zatim je rastvor proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno šest puta kao što sledi: 3 puta DMF (4.0 mL) je dodat i dobijena smeša je mućkana tokom 3 sekunde pre nego što se rastvor procedi kroz fritu praćeno sa 3 dodatka DCM-a (4.0 mL) i dobijena smeša je mućkana tokom 3 sekunde pre nego što se rastvor procedi kroz fritu.

[0275] Smola je suspendovana u DMF-u (2.0 mL) i etil trifluoroacetatu (0.119 ml, 1.00 mmol), 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-enu (0.181 ml, 1.20 mmol). Smeša je stavljena na mešač tokom 60 min.. Rastvor je proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno šest puta kao što sledi: 3 puta DMF (4.0 mL) je dodat i dobijena smeša je mućkana tokom 3 sekunde pre nego što se rastvor procedi kroz fritu praćeno sa 3 dodatka DCM-a (4.0 mL) i dobijena smeša je mućkana tokom 3 sekunde pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. Smola je oprana 3 puta sa suvim THF-om (2.0 mL) da se ukloni bilo kakva zaostala voda. U bočici od 4.0 mL koja je osušena u pećnici je dodat THF (1.0 mL), trifenilfosfin (131 mg, 0.500 mmol) na suvim molekularnim sitima od 4 Å (20 mg). Mutan rastvor je prenešen na smolu i izopropil azodikarboksilat (0.097 mL, 0.5 mmol) je dodat polako. Smola je mućkana tokom 15 min.. Rastvor je proceđen kroz fritu i smola je oprana 3 puta sa suvim THF-om (2.0 mL) da se ukloni bilo kakva zaostala voda. U bočici od 4.0 mL koja je osušena u pećnici je dodat THF (1.0 mL), trifenilfosfin (131 mg, 0.500 mmol) na suvim molekularnim sitima od 4 Å (20 mg). Mutan rastvor je prenešen na smolu i diizopropil azodikarboksilat (0.097 mL, 0.5 mmol) je dodat polako. Smola je mućkana tokom 15 min.. Rastvor je proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno šest puta kao što sledi: 3 puta DMF (4.0 mL) je dodat i dobijena smeša je mućkana tokom 3 sekunde pre nego što se rastvor procedi kroz fritu praćeno sa 3 dodavanja DCM-a (4.0 mL) i dobijena smeša je mućkana tokom 3 sekunde pre nego što se rastvor procedi kroz fritu.

[0276] Smola je suspendovana u etanolu (1.0 mL) i THF-u (1.0 mL) i natrijum borohidrid (37.8 mg, 1.000 mmol) je dodat. Smeša je mešana na mešaču tokom 30 min.. Rastvor je proceđen kroz fritu i smola je oprana sukcesivno šest puta kao što sledi: 3 puta DMF (4.0 mL) je dodat i dobijena smeša je mućkana tokom 3 sekunde pre nego što se rastvor procedi kroz fritu praćeno sa 3 dodavanja DCM-a (4.0 mL) i dobijena smeša je mućkana tokom 3 sekunde pre nego što se rastvor procedi kroz fritu.

Globalna deprotekciona metoda B:

[0277] Sve manipulacije su sprovedene ručno ako nije naznačeno. Postupak "Globalne deprotekcione metode B" opisuje eksperiment izveden na 0.100 mmol skali, gde je skala određena količinom Sieber veznika vezanog za smolu. Ovaj postupak može biti skaliran izvan 0.100 mmol skale podešavanjem opisanih zapremina višekratnikom skale. "Deprotekcioni rastvor" je pripremljen primenom trifluorosirćetna kiselina:triizopropilsilan:ditiotreitol (94:3:3 v:v:m). Smola je uklonjena iz reakcionog suda i preneta u špric od 25 mL opremljen sa fritom. U špric je dodat "deprotekcioni rastvor" (5.0 mL). Smeša je mešana u mešaču tokom 5 min. Rastvor je filtriran kroz i razblažen u dietil etru (30 mL). Istaložena čvrsta supstanca je centrifugirana tokom 3 min. Rastvor supernatanta je dekantiran i čvrsta supstanca je ponovo suspendovana u dietil etru (25 mL). Suspenzija je centrifugirana tokom 3 min. Supernatant je dekantiran i preostala čvrsta supstanca je suspendovana u dietil etru (25 mL). Suspenzija je centrifugirana tokom 3 min. Supernatant je dekantiran i preostala čvrsta supstanca je osušena pod visokim vakuumom. Sirovi peptid je dobijen kao bela do prljavo bela čvrsta supstanca.

Metoda C ciklizacije:

[0278] Sve manipulacije su sprovedene ručno ako nije naznačeno. Postupak "Metoda C ciklizacije" opisuje eksperiment izveden na 0.100 mmol skali, gde je skala određena količinom Sieber veznika vezanog za smolu koji je upotrebljen da se stvori peptid. Ova skala nije zasnovana na direktnom određivanju količine peptida koji je korišćen u postupku. Ovaj postupak može biti skaliran izvan 0.100 mmol skale podešavanjem opisanih zapremina višekratnikom skale. Sirove peptidne čvrste materije su rastvorene u rastvoru acetonitril:vodeni 0.1M amonijum bikarbonatni pufer (11 mL:24 mL), i rastvor je zatim pažljivo podešen na pH = 8.5-9.0 primenom vodenog NaOH (1.0 M). Rastvor je zatim mešan primenom mešača tokom 12 do 18 sati. Reakcioni rastvor je koncentrovan i ostatak je zatim rastvoren u acetonitril:voda. Ovaj rastvor je podvrgnut reverznofaznom HPLC prečišćavanju da se dobije željeni ciklični peptid.

Priprema primera 3214

[0279]

[0280] Primer 3214 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza koji je opisan ispod.

[0281] U polipropilenski reakcioni sud od 40 mL za čvrstu fazu je dodata Sieber smola (140 mg, 0.100 mmol), i reakcioni sud je postavljen na Prelude peptidni sintetizator. Sledeći postupci su izvedeni u nizu:

"Prelude metoda A: Postupak bubrenja smole" je praćen;

"Prelude metoda A: Postupak pojedinačnog kuplovanja" je praćen sa Fmoc-Lys(Boc)-OH; "Prelude metoda A: Postupak pojedinačnog kuplovanja" je praćen sa Fmoc-Gly-OH; "Prelude metoda A: Postupak pojedinačnog kuplovanja" je praćen sa Fmoc-Gly-OH; "Prelude metoda A: Postupak pojedinačnog kuplovanja" je praćen sa Fmoc-Gly-OH; "Prelude metoda A: Postupak pojedinačnog kuplovanja" je praćen sa Fmoc-Cys(Trt)-OH; "Prelude metoda A: Postupak pojedinačnog kuplovanja" je praćen sa Fmoc-Leu-OH; "Prelude metoda A: Postupak pojedinačnog kuplovanja" je praćen sa Fmoc-Tyr(tBu)-OH; "Prelude metoda A: Postupak pojedinačnog kuplovanja" je praćen sa Fmoc-Trp(Boc)-OH; "Prelude metoda A: Postupak pojedinačnog kuplovanja" je praćen sa Fmoc-[N-Me]Glu(OtBu)-OH;

"Prelude metoda A: Postupak kuplovanja sekundarnog amina" je praćen sa Fmoc-Tyr(tBu)-OH tokom 6 h;

"Prelude metoda A: Postupak pojedinačnog kuplovanja" je praćen sa Fmoc-[N-Me]Phe-OH;

"Prelude metoda A: Postupak kuplovanja sekundarnog amina" je praćen sa Fmoc-Val-OH tokom 6 h;

"Prelude metoda A: Postupak pojedinačnog kuplovanja" je praćen sa Fmoc-Asp(OtBu)-OH;

"Prelude metoda A: Postupak pojedinačnog kuplovanja" je praćen sa Fmoc-cis-(D)-Pro(4-OH)-OH;

"Prelude metoda A: Postupak kuplovanja sekundarnog amina" je praćen sa Fmoc-[N-Me]Nle-OH tokom 6 h;

"Prelude metoda A: Postupak kuplovanja sekundarnog amina" je praćen sa Fmoc-[N-Me]Phe-OH tokom 6 h;

"Prelude metoda A: Postupak kuplovanja sekundarnog amina" je praćen sa Fmoc-Phe(3,4,5-tri-F)-OH tokom 6 h;

"Prelude metoda A: Postupak A kuplovanja hloroacetil hlorida" je praćen; "Globalna deprotekciona metoda B" je praćena;

"Metoda C ciklizacije" je praćena.

[0282] Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Phenomenex Luna 20x250 5u čestice; Mobilna faza A: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: Acetonitril sa 0.1% TFA; Gradijent: 35-95% B tokom 50 min., zatim 5-minutno zadržavanje pri 95% B; Protok: 15 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 5.3 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću “Analize HPLC Uslov B" je bila 80% primenom Gradijenta od 35% do 80% pufera B u A tokom 30 min. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.33 min; ESI-MS(+) m/z 1104.1 (M+2H). ESI-HRMS(+) mlz: Izračunato: 1103.5019 (M+2H); Nađeno: 1103.5034 (M+2H).

Priprema primera 3215

[0283]

[0284] Jedinjenje iz Primera3214 (4.7 mg, 2.130 µmol) je rastvoreno u 0.4mL DMF/ACN (1:1). DIEA (3.72 µl, 0.021 mmol) je dodat, praćeno sa 0.9 mL rastvora Aleksa-5-SDP estra (2.93mg, 3.5 µmol, Molecular Probes, A30052) u DMF/CH3CN/DMSO (1:1:1). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 h. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS primenom sledećih uslova: Kolona: YMC ODS-AQ 100 x 10mm S-5um 12nm; Mobilna faza A: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: Acetonitril sa 0.1% TFA; Gradijent: 25-75% B tokom 50 min., zatim 5-minutno zadržavanje pri 75% B; Protok: 15 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 0.75 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću “Analize HPLC Uslov B" je bila 96% primenom Gradijenta od 35% do 65% pufera B tokom 30 min. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.39 min; ESI-MS(+) m/z 1362.5 (M+2H).

Priprema primera 3619

[0285]

[0286] Primer 3619 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza koji je opisan ispod.

[0287] U polipropilensku epruvetu od 50mL je dodata Sieber smola (350 mg, 0.250 mmol), i epruveta je postavljena na CEM Liberty mikrotalasni peptidni sintetizator. Sledeći postupci su izvedeni u nizu:

"CEM Metoda A: Postupak bubrenja smole" je praćen;

"CEM Metoda A: Standardni postupak kuplovanja" je praćen sa Fmoc-Lys-OH;

"CEM Metoda A: Standardni postupak kuplovanja" je praćen sa Fmoc-Gly-OH;

"CEM Metoda A: Standardni postupak kuplovanja" je praćen sa Fmoc-Cys(Trt)-OH; "CEM Metoda A: Standardni postupak kuplovanja" je praćen sa Fmoc-Leu-OH;

"CEM Metoda A: Standardni postupak kuplovanja" je praćen sa Fmoc-Tyr(tBu)-OH; "CEM Metoda A: Standardni postupak kuplovanja" je praćen sa Fmoc- Trp(tBu)-OH; "CEM Metoda A: Standardni postupak kuplovanja" je praćen sa Fmoc-[N-Me]Glu-OH; "CEM Metoda A: Postupak kuplovanja sekundarnog amina" je praćen sa Fmoc-Tyr(tBu)-OH;

"CEM Metoda A: Standardni postupak kuplovanja" je praćen sa Fmoc-[N-Me]Phe-OH; "CEM Metoda A: Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina" je praćen sa Fmoc-Val-OH primenom 10 ekv tokom 10 min na 75 °C, praćeno sa 2 sata na sobnoj temperaturi; "CEM Metoda A: Standardni postupak kuplovanja" je praćen sa Fmoc-Asp(OtBu)-OH; "CEM Metoda A: Standardni postupak kuplovanja" je praćen sa Fmoc-Sar-OH;

"CEM Metoda A: Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina" je praćen sa Fmoc-[N-Me]Nle-OH primenom 5 ekv tokom 10 minuta;

"CEM Metoda A: Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina" je praćen sa Fmoc-[N-Me]Phe-OH primenom 5 ekv tokom 10 minuta;

"CEM Metoda A: : Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina" je praćen sa Fmoc-Phe-OH primenom 5 ekv tokom 10 minuta;

"Prelude metoda A: Postupak A kuplovanja hloroacetil hlorida" je praćen, "Globalna deprotekciona metoda B" je praćena i "Metoda C ciklizacije" je praćena.

Sirov materijal je prečišćen putem preparativne HPLC sa sledećim uslovima: Kolona: Phenomenex Luna 5u C18(2)250 x 21.2 AXIA, 100A Ser.#520221-1; Mobilna faza A: 0.1% TFA u vodi; Mobilna faza B: 0.1% TFA u acetonitrilu; Gradijent: 35-75% B tokom 40 min., zatim 5-minutni Gradijent do 85% B; Protok: 15 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije i liofilizacije. Prinos proizvoda je bio 12.9 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS Analize je bila 98% primenom "Analize LCMS uslovi A i C". Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.29 min; ESI-MS(+) m/z 1056.1 (M+2H). Analiza LCMS Uslov C: Vreme zadržavanja = 1.33 min; ESI-MS(+) m/z 1055.7 (M+2H).; ESI-HRMS(+) mlz: Izračunato: 1056.0077 (M+2H); Nađeno: 1056.0077 (M+2H).

Priprema primera 3620

[0288]

[0289] Peptidni proizvod iz Primera 3619 (8.0 mg, 3.79 µmol) je rastvoren u 40 µL DMF-a i 20 µL acetonitrila. U ovaj rastvor je dodat 2,5-dioksopirolidin-1-il 17-okso-21-(2-oksoheksahidro-1H-tieno[3,4-d]imidazol-4-il)-4,7,10,13-tetraoksa-16-azahenikozan-1-oat (2.231 mg, 3.79 µmol) i N,N-Diizopropiletilamin (6.60 µl, 0.038 mmol). Rastvor je mešan tokom 6 h. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne HPLC sa sledećim uslovima: Kolona: Phenomenex Luna 5u C18(2)250 x 21.2 AXIA, 100A Ser.#520221-1; Mobilna faza A: 0.1% TFA u vodi; Mobilna faza B: 0.1% TFA u acetonitrilu; Gradijent: 35-75% B tokom 40 min., zatim 5-minutni Gradijent do 85% B; Protok: 15 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije i dalje sušene liofilizacijom.

Prinos proizvoda je bio 4.4 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS Analize je bila 99.5% primenom "Analize LCMS uslovi A i C". Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.34 min; ESI-MS(+) m/z 1292.8 (M+2H). Analiza LCMS Uslov C: Vreme zadržavanja = 1.56 min; ESI-MS(+) m/z 1292.4 (M+2H); ESI-HRMS(+) mlz: Izračunato: 1292.1206 (M+2H); Nađeno: 1292.1219 (M+2H).

Priprema primera 3621

[0290]

[0291] Primer 3621 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 3619, sačinjenog od sledećih postupaka: "CEM Metoda A: Postupak bubrenja smole", "CEM Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "CEM Metoda A: Postupak kuplovanja sekundarnog amina", "CEM Metoda A: Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda B", i "Metoda C ciklizacije". Sirov materijal je prečišćen putem preparativne HPLC sa sledećim uslovima: Kolona: Phenomenex Luna 5u C18(2)250 x 21.2 AXIA, 100A Ser.#520221-1; Mobilna faza A: 0.1% TFA u vodi; Mobilna faza B: 0.1% TFA u acetonitrilu; Gradijent: 35-75% B tokom 40 min., zatim 5-minutni Gradijent do 85% B; Protok: 15 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije, praćeno liofilizacijom. Peptid (6.0 mg, 2.84 µmol) je rastvoren u 100 µL DMF-a. U ovaj rastvor je dodat 2,5-dioksopirolidin-1-il 2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-dodekaoksaoktatriakontan-38-oat (1.950 mg, 2.84 µmol) i N,N-Diizopropiletilamin (4.95 µl, 0.028 mmol). Rastvor je mešan tokom 3 h. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne HPLC sa sledećim uslovima: Kolona: Phenomenex Luna 5u C18(2) 250 x 21.2 AXIA, 100A Ser.#520221-1; Mobilna faza A: 0.1% TFA u vodi; Mobilna faza B: 0.1% TFA u acetonitrilu; Gradijent: 35-75% B tokom 40 min., zatim 5-minutni Gradijent do 85% B; Protok: 15 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije, praćeno liofilizacijom. Prinos proizvoda je bio 4.0 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS Analize je bila 98% primenom “Analize LCMS uslovi A i C". Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.34 min; ESI-MS(+) m/z 1341.0 (M+2H). Analiza LCMS Uslov C: Vreme zadržavanja = 1.62 min; ESI-MS(+) m/z 1341.4 (M+2H).

Priprema primera 3622

[0292]

[0293] Primer 3622 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 3619, sačinjenog od sledećih postupaka: "CEM Metoda A: Postupak bubrenja smole", "CEM Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "CEM Metoda A: Postupak kuplovanja sekundarnog amina", "CEM Metoda A: Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda B", I "Metoda C ciklizacije".Sirov materijal je prečišćen putem preparativne HPLC sa sledećim uslovima: Kolona: Phenomenex Luna 5u C18(2)250 x 21.2 AXIA, 100A Ser.#520221-1; Mobilna faza A: 0.1% TFA u vodi; Mobilna faza B: 0.1% TFA u acetonitrilu; Gradijent: 35-75% B tokom 40 min., zatim 5-minutni Gradijent do 85% B; Protok: 15 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije, praćeno liofilizacijom. Peptid (6.0 mg, 2.84 µmol) je rastvoren u 100 µL DMF-a. U ovaj rastvor je dodat 2,5-ioksopirolidin-1-il-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71,74,77,80,83,8

6,89,92,95,98,101,104,107,110,113,116,119,122,125,128,131,134,137,140,143,146-nonatetrakontaoksanonatetrakontahektan-149-oat (6.58 mg, 2.84 µmol) i N,N-Diizopropiletilamin (4.95 µl, 0.028 mmol). Rastvor je mešan tokom 3 h. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne HPLC sa sledećim uslovima: Kolona: Phenomenex Luna 5u C18(2)250 x 21.2 AXIA, 100A Ser.#520221-1; Mobilna faza A: 0.1% TFA u vodi; Mobilna faza B: 0.1% TFA u acetonitrilu; Gradijent: 35-75% B tokom 40 min., zatim 5-minutni Gradijent do 85% B; Protok: 15 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije, praćeno liofilizacijom. Prinos proizvoda je bio 3.5 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS Analize je bila 96% primenom “Analize LCMS uslovi A i C". Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.39 min; ESI-MS(+) m/z 1078.7 (M+4H). Analiza LCMS Uslov C: Vreme zadržavanja = 1.63 min; ESI-MS(+) m/z 1078.5 (M+4H).

Priprema primera 3623

[0294]

[0295] Primer 3623 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 3619, sačinjenog od sledećih postupaka: "CEM Metoda A: Postupak bubrenja smole", "CEM Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "CEM Metoda A: Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina" , "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda B", i "Metoda C ciklizacije". Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 19 x 250 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: 10-60% B tokom 25 min., zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije, praćeno liofilizacijom.

Prinos proizvoda je bio 28 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS Analize je bila 98% primenom “Analize LCMS uslovi D i E". Analiza LCMS Uslov D: Vreme zadržavanja = 1.69 min; ESI-MS(+) m/z 1088.1 (M+2H). Analiza LCMS Uslov E: Vreme zadržavanja = 1.80 min; ESI-MS(+) m/z 1088.2 (M+2H). ESI-HRMS(+) mlz: Izračunato: 1087.5070 (M+2H); Nađeno: 1087.5062 (M+2H).

Priprema primera 3624

[0296]

[0297] Peptidni proizvod iz Primera 3623 (8.0 mg, 3.68 µmol) je rastvoren u 100 µL DMF-a. U ovaj rastvor je dodat 2,5-dioksopirolidin-1-il 2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-dodekaoksaoktatriakontan-38-oat (2.78 mg, 4.05 µmol) i N,N-Diizopropiletilamin (6.41 µl, 0.037 mmol). Rastvor je mešan tokom 3 h. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 19 x 250 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: 10-60% B tokom 25 min., zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 2.5 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS Analize je bila 94% primenom “Analize LCMS uslovi D i E". Analiza LCMS Uslov D: Vreme zadržavanja = 1.71 min; ESI-MS(+) m/z 1390.2 (M+2H+2H2O); Analiza LCMS Uslov E: Vreme zadržavanja = 1.89 min; ESI-MS(+) m/z 1372.9 (M+2H); ESI-HRMS(+) mlz: Izračunato: 1372.6696 (M+2H); Nađeno: 1372.6729 (M+2H).

Priprema primera 3625

[0298]

[0299] Peptidni proizvod iz Primera 3623 (8.0 mg, 3.68 µmol) je rastvoreno u 100 µL DMF-a. U ovaj rastvor je dodat 149-((2,5-dioksopirolidin-1-il)oksi)-149-okso-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71,74,77,80,83,8

6,89,92,95,98,101,104,107,110,113,116,119,122,125,128,131,134,137,140,143,146-nonatetrakontaoksanonatetrakontahektan-56-ijum (9.38 mg, 4.05 µmol) i N,N-Diizopropiletilamin (6.41 µl, 0.037 mmol). Rastvor je mešan tokom 3 h. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 19 x 250 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: 10-60% B tokom 25 min., zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 3.4 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS Analize je bila 91% primenom “Analize LCMS uslovi D i E". Analiza LCMS Uslov D: Vreme zadržavanja = 1.76 min; ESI-MS(+) m/z 1112.0 (M+4H+4H2O). Analiza LCMS Uslov E: Vreme zadržavanja = 1.91 min; ESI-MS(+) m/z 1094.8 (M+4H).

Priprema primera 3626

[0300]

[0301] Peptidni proizvod iz Primera 3623 (8.0 mg, 3.68 µmol) je rastvoren u 100 µL DMF-a. U ovaj rastvor je dodat 2,5-dioksopirolidin-1-il 17-okso-21-(2-oksoheksahidro-1H-tieno[3,4-d]imidazol-4-il)-4,7,10,13-tetraoksa-16-azahenikozan-1-oat (2.382 mg, 4.05 µmol) i N,N-Diizopropiletilamin (6.41 µl, 0.037 mmol). Rastvor je mešan tokom 3 h. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 19 x 250 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: 10-60% B tokom 25 min., zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 2.7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS Analize je bila 92% primenom “Analize LCMS uslovi D i E". Analiza LCMS Uslov D: Vreme zadržavanja = 1.65 min; ESI-MS(+) m/z 1323.8 (M+2H). Analiza LCMS Uslov E: Vreme zadržavanja = 1.81 min; ESI-MS(+) m/z 1324.6 (M+2H). ESI-HRMS(+) mlz: Izračunato: 1324.1168 (M+2H)Nađeno: 1324.1180 (M+2H).

Analitički podaci:

[0302] Masena spektrometrija: "ESI-MS(+)" označava elektrosprej jonizacionu masenu spektrometriju izvedenu u pozitivnom jonskom modu; "ESI-MS(-)" označava elektrosprej jonizacionu masenu spektrometriju izvedenu u negativnom jonskom modu; "ESI-HRMS(+)" označava elektrosprej jonizacionu masenu spektrometriju visoke rezolucije izvedenu u pozitivnom jonskom modu; "ESI-HRMS(-)" označava elektrosprej jonizacionu masenu spektrometriju visoke rezolucije izvedenu u negativnom jonskom modu. Detektovane mase su zabeležene praćenjem "m/z" jedinične oznake. Jedinjenja sa tačnim masama većim od 1000 su često detektovane kao dvostruko-naelektrisani ili trostruko-naelektrisani joni.

Analiza uslov A:

[0303] Kolona: Waters BEH C18, 2.0 x 50 mm, 1.7-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0%B, 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: UV pri 220 nm.

Analiza uslov B:

[0304] Kolona: Waters BEH C18, 2.0 x 50 mm, 1.7-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 metanol:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 metanol:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0%B, 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 0.5 mL/min; Detekcija: UV pri 220 nm.

Analiza uslov C:

[0305] Kolona: Waters Aquity BEH C18 2.1 X 50 mm 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: voda sa 0.05% TFA; Mobilna faza B: Acetonitril sa 0.05% TFA; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 0%B, 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV pri 220 nm.

Analiza uslov D:

[0306] Kolona: Waters Aquity BEH C18 2.1 X 50 mm 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: voda sa 0.05% TFA; Mobilna faza B: metanol sa 0.05% TFA; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 0%B, 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV pri 220 nm.

Opšti postupci:

Prelude metoda A:

[0307] Sve manipulacije su izvedene automatski na Prelude peptidnom sintetizatoru (Protein Technologies). Svi postupci sem ako nije naznačeno su izvedeni u polipropilenskoj epruveti od 10 mL opremljenoj sa fritom na dnu; gde je skala reakcije premašila 0.100 mmol, polipropilenska epruveta od 40 mL opremljena sa fritom na dnu je primenjena. Epruveta se povezuje sa Prelude peptidnom sintetizatorom i preko dna i vrha epruvete. DMF i DCM mogu biti dodati kroz gornji deo epruvete, što spira strane epruvete podjednako. Preostali reagensi su dodati kroz dno epruvete i prolaze kroz fritu da bi došli u kontakt sa smolom. Svi rastvori su uklonjeni kroz dno epruvete. "Periodična agitacija" opisuje kratak puls N2 gasa kroz fritu na dnu; puls traje približno 5 sekundi i javlja se na svakih 30 sekundi. Rastvori hloroacetil hlorida u DMF-u su korišćeni unutar 24h od pripreme. Aminokiselinski rastvori uglavnom nisu korišćeni posle tri nedelje od pripreme. HATU rastvori su korišćeni unutar 5 dana od pripreme. DMF = dimetilformamid; HATU = 1-[Bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinijum 3-oksid heksafluorofosfat; DIPEA = diizopropiletilamin; Rink = (2,4-dimetoksifenil)(4-alkoksifenil)metanamin, gde "4-alkoksi" opisuje položaj i vrstu vezivanja za polistirensku smolu. Ako nije drugačije naznačeno, korišćena smola je Merrifield polimer (polistiren) sa Rink veznikom (Fmoc-zaštićen na azotu); 100-200 mesh-a, 1% DVB, 0.56 mmol/g opterećenje. Uobičajene amino kiseline koje su primenjene su navedene ispod sa zaštitnim grupama bočnog lanca naznačenim unutar zagrada. Fmoc-Ala-OH; Fmoc-Arg(Pbf)-OH; Fmoc-Asn(Trt)-OH; Fmoc-Asp(OtBu)-OH; Fmoc-Bzt-OH; Fmoc-Cys(Trt)-OH; Fmoc-Dab(Boc)-OH; Fmoc-Dap(Boc)-OH; Fmoc-Gln(Trt)-OH; Fmoc-Gly-OH; Fmoc-His(Trt)-OH; Fmoc-Hyp(tBu)-OH; Fmoc-Ile-OH; Fmoc-Leu-OH; Fmoc-Lys(Boc)-OH; Fmoc-Nle-OH; Fmoc-Met-OH; Fmoc-[N-Me]Ala-OH; Fmoc-[N-Me]Nle-OH; Fmoc-Phe-OH; Fmoc-Pro-OH; Fmoc-Sar-OH; Fmoc-Ser(tBu)-OH; Fmoc-Thr(tBu)-OH; Fmoc-Trp(Boc)-OH; Fmoc-Tyr(tBu)-OH; Fmoc-Val-OH.

[0308] Postupci "Prelude metode A" opisuju eksperiment sproveden na 0.100 mmol skali, gde je skala određena količinom Rink veznika vezanog za smolu. Ova skala odgovara sa približno 178 mg Rink-Merrifield smole koja je opisana iznad. Svi postupci mogu biti skalirani preko 0.100 mmol skale podešavanjem opisanih zapremina višekratnikom skale. Pre aminokiselinskog kuplovanja, sve sekvence peptidne sinteze počinju sa postupkom bubrenja smole, opisanim ispod kao “Postupak bubrenja smole". Kuplovanje aminokiselina sa N-terminusom primarnog amina koristilo je "Postupak pojedinačnog kuplovanja" koji je opisan ispod. Kuplovanje aminokiselina sa N-terminusom sekundarnog amina koristilo je "Dvostruko-kuplujući postupak" koji je opisan ispod. Kuplovanje hloroacetilhlorida na N-terminus peptida je opisano "Postupkom kuplovanja hloroacetil hlorida" detaljno opisanim ispod.

Postupak bubrenja smole:

[0309] Smola je oprana (nabubrila) tri puta kao što sledi: u reakcioni sud je dodat DMF (2.0 mL), nakon čega je smeša periodično agitirana (uzburkavana) tokom 10 minuta pre nego što je rastvarač proceđen kroz fritu.

Postupak pojedinačnog kuplovanja:

[0310] U reakcioni sud koji sadrži smolu iz prethodnog koraka je dodat piperidin:DMF (20:80 v/v, 2.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 3 minuta i zatim je rastvor proceđen kroz fritu. U reakcioni sud je dodat piperidin:DMF (20:80 v/v, 2.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 3 minuta i zatim je rastvor proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno šest puta kao što sledi: za svako pranje, DMF (2.0 mL) je dodat kroz gornji deo suda i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 30 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. U reakcioni sud je dodata amino kiselina (0.2M u DMF-u, 1.0 mL, 2 ekv), zatim HATU (0.2M u DMF-u, 1.0 mL, 2 ekv), i konačno DIPEA (0.8M u DMF-u, 0.5 mL, 4 ekv). Smeša je periodično agitirana tokom 15 minuta, zatim je reakcioni rastvor proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno četiri puta kao što sledi: za svako pranje, DMF (2.0 mL) je dodat kroz gornji deo suda i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 30 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. U reakcioni sud je dodat anhidrid sirćetne kiseline (2.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 10 minuta, zatim je rastvor proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno četiri puta kao što sledi: za svako pranje, DMF (2.0 mL) je dodat kroz gornji deo suda i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 90 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. Dobijena smola je korišćena direktno u sledećem koraku.

Dvostruko-kuplujući postupak:

[0311] U reakcioni sud koji sadrži smolu iz prethodnog koraka je dodat piperidin:DMF (20:80 v/v, 2.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 3 minuta i zatim je rastvor proceđen kroz fritu. U reakcioni sud je dodat piperidin:DMF (20:80 v/v, 2.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 3 minuta i zatim je rastvor proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno šest puta kao što sledi: za svako pranje, DMF (2.0 mL) je dodat kroz gornji deo suda i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 30 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. U reakcioni sud je dodata amino kiselina (0.2M u DMF-u, 1.0 mL, 2 ekv), zatim HATU (0.2M u DMF-u, 1.0 mL, 2 ekv), i konačno DIPEA (0.8M u DMF-u, 0.5 mL, 4 ekv). Smeša je periodično agitirana tokom 15 minuta, zatim je reakcioni rastvor proceđen kroz fritu. Smola je dva puta oprana kao što sledi: za svako pranje, DMF (2.0 mL) je dodat kroz gornji deo suda i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 30 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. U reakcioni sud je dodata amino kiselina (0.2M u DMF-u, 1.0 mL, 2 ekv), zatim HATU (0.2M u DMF-u, 1.0 mL, 2 ekv), i konačno DIPEA (0.8M u DMF-u, 0.5 mL, 4 ekv). Smeša je periodično agitirana tokom 15 minuta, zatim je reakcioni rastvor proceđen kroz fritu. Smola je dva puta oprana kao što sledi: za svako pranje, DMF (2.0 mL) je dodat kroz gornji deo suda i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 30 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. U reakcioni sud je dodat anhidrid sirćetne kiseline (2.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 10 minuta, zatim je rastvor proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno četiri puta kao što sledi: za svako pranje, DMF (2.0 mL) je dodat kroz gornji deo suda i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 90 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. Dobijena smola je korišćena direktno u sledećem koraku.

Postupak kuplovanja hloroacetil hlorida:

[0312] U reakcioni sud koji sadrži smolu iz prethodnog koraka je dodat piperidin:DMF (20:80 v/v, 2.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 3 minuta i zatim je rastvor proceđen kroz fritu. U reakcioni sud je dodat piperidin:DMF (20:80 v/v, 2.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 3 minuta i zatim je rastvor proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno šest puta kao što sledi: za svako pranje, DMF (2.0 mL) je dodat kroz gornji deo suda i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 30 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. U reakcioni sud je dodat DIPEA (0.8M u DMF-u, 3.0 mL, 24 ekv), zatim hloroacetil hlorid (0.8M u DMF-u, 1.65 mL, 13.2 ekv). Smeša je periodično agitirana tokom 30 minuta, zatim je rastvor proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno tri puta kao što sledi: za svako pranje, DMF (2.0 mL) je dodat preko gornjeg dela suda i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 90 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno četiri puta kao što sledi: za svako pranje, CH2Cl2(2.0 mL) je dodat preko gornjeg dela suda i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 90 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. Dobijena smola se postavlja pod struju N2tokom 15 minuta.

Symphony Metoda A:

[0313] Ovaj skup postupaka je identičan onom iz " Prelude metode A" izuzev kako je napomenuto. Za sve postupke Symphony X peptidni sintetizator (Protein Technologies) je korišćen umesto Prelude peptidnog sintetizatora i svi reagensi su dodati preko vrha reakcionog suda.

Postupak bubrenja smole:

[0314] Ovaj postupak je identičan sa "Prelude metoda A: Postupak bubrenja smole".

Postupak pojedinačnog kuplovanja:

[0315] Ovaj postupak je identičan sa "Prelude metoda A: Postupak pojedinačnog kuplovanja" izuzev što je koncentracija DIPEA rastvora bila 0.4M i 1.0 mL ovog rastvora je isporučen u reakciju.

Dvostruko-kuplujući postupak:

[0316] Ovaj postupak je identičan sa "Prelude metoda A: Dvostruko-kuplujući postupak" izuzev što je koncentracija DIPEA rastvora bila 0.4M i 1.0 mL ovog rastvora je isporučen u reakciju.

Postupak kuplovanja hloroacetil hlorida:

[0317] Ovaj postupak je identičan sa "Prelude metoda A:Postupak kuplovanja hloroacetil hlorida".

Globalna deprotekciona metoda A:

[0318] Sve manipulacije su sprovedene ručno ako nije naznačeno. Postupak "Globalna deprotekciona metoda A" opisuje eksperiment izveden na 0.100 mmol skali, gde je skala određena količinom Rink veznika vezanog za smolu. Ovaj postupak može biti skaliran izvan 0.100 mmol skale podešavanjem opisanih zapremina višekratnikom skale. "Deprotekcioni rastvor" je pripremljen kombinovanjem u staklenoj bočici od 40 mL trifluorosirćetne kiseline (22 mL), fenola (1.325 g), vode (1.25 mL) i triizopropilsilana (0.5 mL). Smola je uklonjena iz reakcionog suda i preneta u staklenu bočicu od 4 mL. U bočicu je dodat "deprotekcioni rastvor" (2.0 mL). Smeša je energično mešana u mešaču (šejkeru) (1000 OPM tokom 1 minuta, zatim 500 OPM tokom 1-2h). Smeša je filtrirana kroz špric filter od 0.2 mikrona i čvrste materije su ekstrahovane sa “deprotekcionim rastvorom” (1.0 mL) ili TFA (1.0 mL). U test epruvetu od 24 mL napunjenu sa kombinovanim filtratima je dodat Et2O (15 mL). Smeša je energično mešana nakon čega je značajna količina bele čvrste supstance istaložena. Smeša je centrifugirana tokom 5 minuta, zatim je rastvor dekantovan od čvrstih materija i odbačen. Čvrste materije su suspendovane u Et2O (20 mL); zatim smeša je centrifugirana tokom 5 minuta; i rastvor dekantovan od čvrstih materija i odbačen. Poslednji put, čvrste materije su suspendovane u Et2O (20 mL); Smeša je centrifugirana tokom 5 minuta; i rastvor dekantovan od čvrstih materija i odbačen da se dobije sirovi peptid kao bela do prljavo bela čvrsta supstanca.

Metoda A ciklizacije:

[0319] Sve manipulacije su sprovedene ručno ako nije naznačeno. Postupak "Metoda A ciklizacije" opisuje eksperiment izveden na 0.100 mmol skali, gde je skala određena količinom Rink veznika vezanog za smolu koja je upotrebljena da se stvori peptid. Ova skala nije zasnovana na direktnom određivanju količine peptida koji je korišćen u postupku. Ovaj postupak može biti skaliran izvan 0.100 mmol skale podešavanjem opisanih zapremina višekratnikom skale. Sirove peptidne čvrste materije su rastvorene u MeCN:aq.0.1M NH4OAc (1:1) do ukupne zapremine od 18-22 mL, i rastvor je zatim pažljivo podešen na pH = 8.5-9.0 primenom aq NaOH (1.0M). Rastvoru je zatim dopušteno da odstoji bez mešanja tokom 12-18h. Reakcioni rastvor je koncentrovan i ostatak je zatim rastvoren u DMSO:MeOH. Rastvor je podvrnut reverzno-faznom HPLC prečišćavanju da se dobije željeni ciklični peptid.

Opšti sintetički niz A:

[0320] "Opšti sintetički niz A" opisuje opšti niz postupaka koji su primenjeni da se dobiju ciklični peptidi opisani ovde. U svrhe ovog opšteg postupka, Postupci "Symphony Metoda A" su zamenljivi sa onima od "Prelude metode A". U polipropilenski reakcioni sud od 10 mL za čvrstu fazu je dodata "Biotin smola" (videti ispod) (161 mg, 0.050 mmol), i reakcioni sud je postavljen na Prelude peptidni sintetizator. Za sledeće postupke, primenjene su iste količine reagenasa opisanih iznad za 0.100 mmol skalu, iako u ovom opštem sintetičkom nizu količina smole koja je korišćena odgovara 0.050 mmol skali. "Prelude metoda A: Postupak bubrenja smole" je praćen. Zatim serija aminokiselinskih kuplovanja je u nizu izvedena na Prelude prateći "Prelude metoda A: Postupak pojedinačnog kuplovanja" ako je N-terminus peptida vezanog za smolu bio primarni amin ili "Prelude metoda A: Dvostruko-kuplujući postupak" ako je N-terminus peptida vezanog za smolu bio sekundarni amin. "Prelude metoda A: Postupak kuplovanja hloroacetil hlorida" je praćen; zatim "Globalna deprotekciona metoda A" je praćena; zatim "Metoda A ciklizacije" je praćena.

Opšti sintetički niz B:

[0321] "Opšti sintetički niz B" opisuje opšti niz postupaka koji su primenjeni da se dobiju ciklični peptidi opisani ovde. U svrhe ovog opšteg postupka, Postupci "Symphony Metode A" su zamenljivi sa onima od "Prelude metode A". U polipropilenski reakcioni sud od 10 mL za čvrstu fazu je dodata Rink-Merrifield smola (178 mg, 0.100 mmol), i reakcioni sud je postavljen na Prelude peptidni sintetizator. "Prelude metoda A: Postupak bubrenja smole" je praćen. Zatim serija aminokiselinskih kuplovanja je u nizu sprovedena na Prelude prateći "Prelude metoda A: Postupak pojedinačnog kuplovanja" ako je N-terminus peptida vezanog za smolu bio primarni amin ili "Prelude metoda A: Dvostruko-kuplujući postupak" ako je N-terminus peptida vezanog za smolu bio sekundarni amin. "Prelude metoda A: Postupak kuplovanja hloroacetil hlorida" je praćen; zatim "Globalna deprotekciona metoda A" je praćena; zatim "Metoda A ciklizacije" je praćena.

Priprema (S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)(metil)amino)-3-etoksipropanske kiseline

[0322]

Korak 1:

[0323] U rastvor (S)-2-amino-3-etoksipropanske kiseline(1.5 g, 11.3 mmol) u THF-u (38 ml) i vodi (19 ml) je dodat natrijum bikarbonat (2.37 g, 28.2 mmol) i Fmoc-OSu (3.80 g, 11.3 mmol). Dobijena smeša je mešana tokom 16 h.. Nakon uklanjanja THF, ostatak je zakišeljen sa 1 N HCl, ekstrahovan sa etil acetatom, osušen preko Na2SO4, zatim koncentrovan da se dobije (S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-3-etoksipropanska kiselina kao bela čvrsta supstanca, 3.6 g (90%).

Korak 2:

[0324] Smeša koja sadrži paraformaldehid (1.825 g, 60.8 mmol), (S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-3-etoksipropansku kiselinu (3.6 g, 10.1 mmol), i p-toluensulfonsku kiselinu (0.174 g, 1.01 mmol) u toluenu (100 mL) je refluksovana sa Dean-Stark-ovim azeotropnim uklanjanjem vode tokom 2h. Reakcija je zatim ohlađena na ST, oprana sa vod. zas. natrijum bikarbonatnim rastvorom, praćeno slanim rastvorom, osušena preko MgSO4, zatim filtrirana i koncentrovana u vakuumu da se dobije (S)-(9H-fluoren-9-il)metil 4-(etoksimetil)-5-oksooksazolidin-3-karboksilat kao žuto ulje, 5.16 g.

Korak 3:

[0325] (S)-(9H-fluoren-9-il)metil4-(2-metoksietil)-5-oksooksazolidin-3-karboksilat (0.4 g, 1.089 mmol) je rastvoren u CHCl3(50 mL) i rastvoru je dodat trietilsilan (0.869 mL, 5.44 mmol) praćeno sa TFA (0.923 mL, 12.0 mmol). Rastvor je mešan na ST pod pozitivnim pritiskom N2tokom 18 h. Rastvor je zatim koncentrovan da se dobije uljani ostatak. Ostatak je rastvoren u EtOAc-u i zatim ekstrahovan sa vod. zas. natrijum bikarbonatom (2 x 100 mL). Vodena faza i sve čvrste materije suspendovane na sučelju faza su prikupljene. Ova smeša je zakišeljena do pH 4-5 primenom vod. HCl, nakon čega je formiran talog. Smeša je ekstrahovana sa EtOAc-om (200 mL). Organska faza je oprana sa slanim rastvorom, osušena preko MgSO4, filtrirana i koncentrovana u vakuumu da se dobije (S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)(metil)amino)-4-metoksibutanska kiselina kao bela čvrsta supstanca, 0.35 g (87%) prinos).

Priprema primera 5001

[0326]

[0327] Primer 5001 je pripremljen prateći "Opšti sintetički niz A". Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 20-60% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 3.5 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS Analize je bila 100%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.68 min; ESI-MS(+) m/z 1171.8 (M+2H); Analiza Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.83 min; ESI-MS(+) m/z 1171.7 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1170.5781; Nađeno: 1170.5776.

Priprema primera 5002

[0328]

[0329] Primer 5002 je pripremljen prateći "Opšti sintetički niz A". Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 10-50% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 9.7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS Analize je bila 100%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.42 min; ESI-MS(+) m/z 1128.8 (M+2H); Analiza Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.57 min; ESI-MS(-) m/z 1126.8 (M-2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1128.5345 Nađeno: 1128.5349.

Priprema primera 5003

[0330]

[0331] Primer 5003 je pripremljen prateći "Opšti sintetički niz A". Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: waters xbridge c-18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 metanol: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 metanol: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: 30-70% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 11.0 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS Analize je bila 99%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.44 min; ESI-MS(+) m/z 1172.4 (M+2H); Analiza Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.55 min; ESI-MS(+) m/z 1172.3 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1171.0847; Nađeno: 1171.0862.

Priprema primera 5004

[0332]

[0333] Primer 5004 je pripremljen prateći "Opšti sintetički niz A". Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: waters xbridge c-18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 metanol: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 metanol: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: 30-70% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 8.9 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS Analize je bila 96%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.52 min; ESI-MS(+) m/z 1151.2 (M+2H); Analiza Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.61 min; ESI-MS(+) m/z 1151.3 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1150.6078; Nađeno: 1150.6096.

Priprema primera 5006

[0334]

[0335] Primer 5006 je pripremljen prateći "Opšti sintetički niz B". Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 30-70% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 26.3 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS Analize je bila 99%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.32 min; ESI-MS(+) m/z 1078.3 (M+2H); Analiza Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.42 min; ESI-MS(+) m/z 1078.2 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1077.5387 Nađeno: 1077.5396.

Priprema primera 5007

[0336]

[0337] Primer 5007 je pripremljen prateći "Opšti sintetički niz B". Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 30-70% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 36.9 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS Analize je bila 100%; Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.10 min; ESI-MS(+) m/z 923.7 (M+2H); Analiza Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.29 min; ESI-MS(+) m/z 923.7 (M+2H).

Priprema primera 5008

[0338]

[0339] Primer 5008 je pripremljen prateći "Opšti sintetički niz B" na 0.600 mmol skali. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: waters xbridge c-18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 25-65% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Materijal je dalje prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 metanol: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 metanol: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: 25-70% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 49.9 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS Analize je bila 99%; Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.15 min; ESI-MS(+) m/z 1064.9 (M+2H); Analiza Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.19 min; ESI-MS(+) m/z 1064.2 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1063.5231; Nađeno: 1063.5222.

Priprema primera 5009

[0341] Primer 5009 je pripremljen prateći "Opšti sintetički niz B". Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 55-95% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 9.0 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS Analize je bila 99%; Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.60 min; ESI-MS(+) m/z 1057.4 (M+2H); Analiza Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.81 min; ESI-MS(+) m/z 1056.6 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1056.0087; Nađeno: 1056.0069.

Priprema primera 5010

[0342]

[0343] Primer 5010 je pripremljen prateći "Opšti sintetički niz B". Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 50-90% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 14.9 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS Analize je bila 96%; Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.58 min; ESI-MS(+) m/z 1098.7 (M+2H); Analiza Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.76 min; ESI-MS(-) m/z 1096.6 (M-2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1098.0557; Nađeno: 1098.0554.

Priprema primera 5011

[0344]

[0345] Primer 5011 je pripremljen prateći "Opšti sintetički niz B". Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 50-90% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 25.8 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS Analize je bila 100%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.58 min; ESI-MS(+) m/z 1136.7 (M+2H); Analiza Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.75 min; ESI-MS(-) m/z 1134.3 (M-2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1135.5535; Nađeno: 1135.5528.

Priprema primera 5012

[0346]

[0347] Primer 5012 je pripremljen prateći "Opšti sintetički niz B". Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 50-95% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 13.8 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS Analize je bila 100%; Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.59 min; ESI-MS(-) m/z 1140.3 (M-2H); Analiza Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.81 min; ESI-MS(+) m/z 1142.4 (M+2H; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1141.5535 Nađeno: 1141.5539.

Priprema primera 5013

[0348]

[0349] Primer 5013 je pripremljen prateći "Opšti sintetički niz B". Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 40-80% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 12.1 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS Analize je bila 100%; Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.57 min; ESI-MS(-) m/z 1075.8 (M-2H; Analiza Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.75 min; ESI-MS(+) m/z 1077.8 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1077.0322 Nađeno: 1077.0330.

Priprema primera 5014

[0350]

[0351] Primer 5014 je pripremljen prateći "Opšti sintetički niz B". Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 35-80% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 15.7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS Analize je bila 100%; Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.36 min; ESI-MS(+) m/z 1035.8 (M+2H); Analiza Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.52 min; ESI-MS(-) m/z 1033.7 (M-2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1034.9885; Nađeno: 1034.9887.

Priprema primera 5015

[0352]

[0353] Primer 5015 je pripremljen kao što sledi: U bočicu od 1 drama napunjenu sa Primerom 5006 (5.8 mg, 2.7 µmol) je dodat suvi NMP.Smeša je agitirana do formiranja homogenog rastvora. U rastvor je dodat DIPEA (0.025 mL, 0.143 mmol), zatim 2,5-dioksopirolidin-1-il 2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-dodekaoksaoktatriakontan-38-oat (3.5 mg, 5.1 µmol). Bočica je postavljena na mešač koji rotira pri 500 opm tokom 30 minuta. Reakcija je kvenčovana putem dodatka etanolamina (0.020 mL). Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 10-50% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 2.0 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS Analize je bila 99%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.52 min; ESI-MS(-) m/z 1361.4 (M-2H); Analiza Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.61 min; ESI-MS(-) m/z 1361.7 (M-2H).

Priprema primera 5016

[0354]

[0355] Primer 5016 je pripremljen kao što sledi: U bočicu od 1 drama napunjenu sa Primerom 5006 (5.8 mg, 2.7 µmol) je dodat suvi NMP.Smeša je agitirana do formiranja homogenog rastvora. U rastvor je dodat DIPEA (0.025 mL, 0.143 mmol), zatim 2,5-dioksopirolidin-1-il 2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71-tetrakozaoksatetraheptakontan-74-oat (3.27 mg, 2.69 µmol). Bočica je postavljena na mešač koji rotira pri 500 opm tokom 40 minuta. Reakcija je kvenčovana putem dodatka etanolamina (0.020 mL). Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 50-90% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 2.6 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS Analize je bila 100%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.55 min; ESI-MS(-) m/z 1625.4 (M-2H); Analiza Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.67 min; ESI-MS(-) m/z 1625.7 (M-2H).

Priprema primera 5017

[0356]

[0357] Primer 5017 je pripremljen kao što sledi: U bočicu od 1 drama napunjenu sa Primerom 5006 (5.8 mg, 2.7 µmol) je dodat suvi NMP. Smeša je agitirana do formiranja homogenog rastvora. U rastvor je dodat DIPEA (0.025 mL, 0.143 mmol), zatim 2,5-dioksopirolidin-1-il 2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71,74,77,80,83,8 6,89,92,95,98,101,104,107,110,113,116,119,122,125,128,131,134,137,140,143,146-nonatetrakontaoksanonatetrakontahektan-149-oat (6.2 mg, 2.7 µmol). Bočica je postavljena na mešač koji rotitra pri 500 opm tokom 30 minuta. Reakcija je kvenčovana putem dodatka etanolamina (0.020 mL). Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 50-90% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 3.7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS Analize je bila 100%; Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.63 min; ESI-MS(+) m/z 882.5 (M+5H; Analiza Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.74 min; ESI-MS(+) m/z 882.6 (M+5H).

Priprema primera 5018

[0358]

[0359] Primer 5018 je pripremljen kao što sledi: U bočicu od 1 drama napunjenu sa Primerom 5006 (5.8 mg, 2.7 µmol) je dodat suvi NMP.Smeša je agitirana do formiranja homogenog rastvora. U rastvor je dodat DIPEA (0.025 mL, 0.143 mmol), zatim 2,5-dioksopirolidin-1-il 2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71,74,77,80,83,8 6,89,92,95,98,101,104,107,110-heptatriakontaoksatridekahektan-113-oat (4.8 mg, 2.7 µmol). Bočica je postavljena na mešač koji rotitra pri 500 opm tokom 40 minuta. Reakcija je kvenčovana putem dodatka etanolamina (0.020 mL). Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 50-90% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 3.0 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS Analize je bila 100%; Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.63 min; ESI-MS(-) m/z 1914.0 (M-2H); Analiza Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.70 min; ESI-MS(-) m/z 1912.7 (M-2H).

Analitički podaci:

[0360] Masena spektrometrija: "ESI-MS(+)" označava elektrosprej jonizacionu masenu spektrometriju izvedenu u pozitivnom jonskom modu; "ESI-MS(-)" označava elektrosprej jonizacionu masenu spektrometriju izvedenu u negativnom jonskom modu; "ESI-HRMS(+)" označava elektrosprej jonizacionu masenu spektrometriju visoke rezolucije izvedenu u pozitivnom jonskom modu; "ESI-HRMS(-)" označava elektrosprej jonizacionu masenu spektrometriju visoke rezolucije izvedenu u negativnom jonskom modu. Detektovane mase su prijavljene praćenjem "m/z" jediničnog označavanja. Jedinjenja sa tačnim masama većim od 1000 su često detektovane kao dvostruko naelektrisani ili trostruko naelektrisani joni.

Opšti postupci:

Sinteza peptida

[0361] Makrociklični peptidi predmetnog pronalaska mogu da se proizvedu metodama poznatim u oblasti, kao što mogu biti sintetisani hemijski, rekombinantno u sistemu bez ćelije, rekombinantno unutar ćelije ili mogu biti izolovani iz biološkog izvora. Hemijska sinteza makrocikličnog peptida predmetnog pronalaska se može izvesti primenom raznih metoda prepoznatih u oblasti, uključujući sintezu na čvrstoj fazi u koracima, polu-sintezu preko konformacijski potpomognutog ponovnog vezivanja peptidnih fragmenata, enzimskog vezivanja kloniranih ili sintetskih peptidnih segmenata, i hemijskog vezivanja. Poželjna metoda za sintezu makrocikličnih peptida i njihovih analoga koji su ovde opisani je hemijska sinteza koja primenjuje razne tehnike na čvrstoj fazi kao što su one opisane u Chan, W.C. et al., eds., Fmoc Solid Phase Synthesis, Oxford University Press, Oksford (2000); Barany, G. et al., The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology, tom 2: "Special Methods in Peptide Synthesis, Part A", str.3-284, Gross, E. et al., eds., Academic Press, Njujork (1980); i u Stewart, J.M. et al., Solid-Phase Peptide Synthesis, 2. izdanje, Pierce Chemical Co., Rockford, IL (1984). Poželjna strategija je zasnovana na Fmoc (9-Fluorenilmetil metil-oksikarbonil) grupi za privremenu zaštitu α-amino grupe, u kombinaciji sa terc-butil grupom za delimičnu zaštitu aminokiselinskih bočnih lanaca (videti na primer Atherton, E. et al., "The Fluorenylmetoksikarbonil Amino Protecting Group", u The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology, tom 9: "Special Methods in Peptide Synthesis, Part C", str.1-38, Undenfriend, S. et al., eds., Academic Press, San Dijego (1987).

[0362] Peptidi se mogu sintetisati u koracima na nosaču od nerastvornog polimera (takođe nazvana "smola") polazeći od C-terminusa peptida. Sinteza započinje pripajanjem C-terminalne aminokiseline peptida na smolu preko formiranja amid ili estarske veze. Ovo omogućava konačno oslobađanje dobijenog peptida kao C-terminalnog amida ili karboksilne kiseline, redom.

[0363] C-terminalna aminokiselina i sve druge aminokiseline primenjene u sintezi treba da imaju svoje α-amino grupe i funkcionalnosti bočnog lanca (ukoliko su prisutne) različito zaštićene tako da α-amino zaštitna grupa može biti selektivno uklonjena tokom sinteze. Kuplovanje aminokiseline je sprovedeno aktivacijom njene karboksilne grupe kao aktivnog estra i reakcijom istog sa odblokiranom α-amino grupom N-terminalne amino kiseline pripojene na smolu. Niz deprotekcije (uklanjanja zaštite) α-amino grupe i kuplovanja se ponavlja dok se ne sklopi celokupna peptidna sekvenca. Peptid se zatim oslobađa sa smole sa pratećom deprotekcijom funkcionalnosti bočnog lanca, obično u prisustvu odgovarajućih sakupljača da se ograniče bočne reakcije. Peptid koji se dobija se konačno prečišćava reverzno faznom HPLC.

[0364] Sinteza peptidil-smola koje su potrebne kao prekursori do finalnih peptida primenjuje komercijalno dostupne unakrsno povezane polistirenske polimerne smole (Novabiochem, San Dijego, CA; Applied Biosystems, Foster City, CA). Poželjni čvrsti nosači su: 4-(2',4'-dimetoksifenil-Fmoc-aminometil)-fenoksiacetil-p-metil benzhidrilamin smola (Rink amidna MBHA smola); 9-Fmoc-amino-ksanten-3-iloksi-Merrifield smola (Sieber amidna smola); 4-(9-Fmoc)aminometil-3,5-dimetoksifenoksi)valeril-aminometil-Merrifield smola (PAL smola), za C-terminalne karboksamide. Kuplovanje prve i sledeće amino kiseline može da se postigne primenom HOBt, 6-Cl-HOBt ili HOAt aktivnih estara proizvedenih iz DIC/HOBt, HBTU/HOBt, BOP, PyBOP, ili iz DIC/6-Cl-HOBt, HCTU, DIC/HOAt ili HATU, redom. Poželjni čvrsti nosači su: 2-Hlorotritil hlorid smola i 9-Fmoc-amino-ksanten-3-iloksi-Merrifield smola (Sieber amidna smola) za zaštićene peptidne fragmente. Opterećivanje prvom amino kiselinom 2-hlorotritil hloridne smole se najbolje postiže reagovanjem Fmoc-zaštićene amino kiseline sa smolom u dihlorometanu i DIEA. Ukoliko je neophodno, mala količina DMF-a može biti dodata da se olakša rastvaranje amino kiseline.

[0365] Sinteze peptidnih analoga koji su ovde opisani mogu da se izvedu primenom pojedinačnog ili višekanalnog peptidnog sintetizatora, kao što je CEM Liberty Microwave sintetizator, ili Protein Technologies, Inc. Prelude (6 kanala) ili Symphony (12 kanala) sintetizer.

[0366] Korisni Fmoc amino kiselinski derivati su prikazani ispod.

Primeri ortogonalno zaštićenih amino kiselina korišćenih u sintezi na čvrstoj fazi

[0367]

[0368] Prekursori peptidil-smole za njihove odgovarajuće peptide mogu da se cepaju i da se oslobode zaštite primenom bilo kojeg standardnog postupka (videti, na primer, King, D.S. et al., Int. J. Peptide Protein Res., 36:255-266 (1990)). Željena metoda je primena TFA u prisustvu vode i TIS kao sakupljača. Uobičajeno, peptidil-smola se meša u TFA/voda/TIS (94:3:3, v:v:v; 1 mL/100 mg peptidil smole) tokom 2-6 sati na sobnoj temperaturi. Utrošena smola se zatim uklanja filtriranjem i TFA rastvor se koncentriše ili suši pod sniženim pritiskom. Sirovi peptid koji se dobija se ili taloži i pere sa Et2O-om ili se ponovo rastvara direktno u DMSO ili 50% vodenoj sirćetnoj kiselini za prečišćavanje pomoću preparativne HPLC.

[0369] Peptidi sa željenom čistoćom mogu se dobiti prečišćavanjem primenom preparativne HPLC, na primer, na Waters Model 4000 ili Shimadzu Model LC-8A tečne hromatografije. Rastvor sirovog peptida se ubrizgava u YMC S5 ODS (20X 100 mm) kolonu i eluira sa linearnim gradijentom MeCN u vodi, oba puferovana sa 0.1% TFA, primenom brzine protoka od 14-20 mL/min sa efluentom praćenim pomoću UV apsorbancije pri 220 nm. Strukture prečišćenih peptida mogu biti potvrđene elektro-sprej MS analize.

[0370] Lista amino kiselina koje se ne javljaju u prirodi koje se pominju ovde je obezbeđena ispod.

[0371] Sledeće skraćenice su korišćene u Primerima i na drugom mestu ovde:

Ph = fenil

Bn = benzil

i-Bu = izo-butil

i-Pr = izo-propil

Me = metil

Et = etil

Pr = n-propil

Bu = n-butil

t-Bu = terc-butil

Trt = tritil

TMS = trimetilsilil

TIS =triizopropilsilan

Et2O = dietil etar

HOAc ili AcOH = sirćetna kiselina MeCN ili AcCN = acetonitril DMF = N,N-dimetilformamid EtOAc = etil acetat

THF = tetrahidrofuran

TFA = trifluorosirćetna kiselina TFE = α,α,α-trifluoroetanol Et2NH = dietilamin

NMM = N-metilmorfolin

NMP = N-metilpirolidon

DCM = dihlorometan

TEA = trietilamin

min. = minut(i)

h ili hr = sat(i)

L = litar

mL ili ml = mililitar

µL = mikrolitar

g = gram(i)

mg = miligram(i)

mol = mol(i)

mmol = milimol(i)

mekv = miliekvivalent

st ili ST = sobna temperatura zas ili zasić = zasićen

aq. = voden

mp = tačka topljenja (melting point)

BOP reagens = benzotriazol-1-iloksi-tris-dimetilamino-fosfonijum heksafluorofosfat (Kastrov reagens)

PyBOP reagens = benzotriazol-1-iloksi-tripirolidino fosfonijum heksafluorofosfat HBTU = 2-(1H-Benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronim heksafluorofosfat HATU = O-(7-Azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronim heksafluorofosfat HCTU = 2-(6-Hloro-1-H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronijum heksafluorofosfat T3P = 2,4,6-tripropil-1,3,5,2,4,6-trioksatrifosforinan-2,4,6-trioksid

DMAP = 4-(dimetilamino)piridin

DIEA = diizopropiletilamin

Fmoc ili FMOC = fluorenilmetiloksikarbonil

Boc ili BOC = terc-butiloksikarbonil

HOBT ili HOBT●H2O = 1-hidroksibenzotriazol hidrat

Cl-HOBt = 6-Hloro-benzotriazol

HOAT = 1-hidroksi-7-azabenzotriazol

HPLC = tečna hromatografija visokih performansi

LC/MS = tečna hromatografija visokih performansi /masena spektrometrija

MS ili Mas Spek = Masena spektrometrija

NMR = nuklearna magnetna rezonanca

Sc ili SC = sub-kutano

IP ili ip = intra-peritonealno

PRIMERI

PRIMER 0001 – SINTEZA PEPTIDA NA ČVRSTOJ FAZI I CIKLIZACIJA PEPTIDA

[0372] Postupci opisani u ovom Primeru, bilo u celosti ili u delu gde je zabeleženo, su korišćeni za sintezu makrocikličnih peptida prikazanih u Tabelama 1, 2, 3, 4 i 5.

Opšti protokol za sintezu na čvrstoj fazi i makrociklizazaciju. Na Symphony Peptide Synthesizer (Protein Technology Inc. Tucson, AZ), Prelude Peptide Synthesizer (Protein Technology Inc. Tucson, AZ), ili Liberty (CEM Matthews, NC), Sieber Amide smola (0.71 mmol/g, 0.100 mmol, 141 mg) je nabubrila sa DMF-om (7 mL x 4 min) i pomešana sa blagom strujom N2svakih 30 sekundi. Rastvarač je proceđen i naredna metoda je primenjena da se kupluje prva amino kiselina: Fmoc grupa je uklonjena sa gradivnog bloka nošenog smolom pranjem smole dva puta rastvorom 20% piperidina u DMF-u (5 mL i 2.5 minuta po pranju) i mešanjem sa blagom strujom N2svakih 30 sekundi. Smola je oprana tri puta sa DMF (5-8 mL i 1.5 min po pranju).2-((((9H-Fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)sirćetna kiselina (0.2 M rastvor u DMF-u, 0.5 mmol) je zatim dodat, praćeno aktivatorom kuplovanja (tj., HATU (Chem-Impex Int'1, 0.4M rastvor u DMF-u, 1.25 mL, 0.5 mmol)) i bazom (tj., N-metil morfolin (Aldrich, 0.8 M u DMF-u, 1.25 mL, 1 mmol)). Reakciona smeša je agitirana blagom strujom azota tokom 1 h. Reagensi su proceđeni iz reakcionog suda, i smola je oprana tri puta sa DMF (5 mL x 1.5 min). Treba nappomenuti da su tipični reagensi za Liberty CEM sledeći: HCTU (0.45 M u DMF-u) kao aktivator kuplovanja, DIEA (2M u NMP) kao baza, i 5% piperazin u DMF-u sa 0.1 M HOBt kao deprotekcioni rastvor.

[0373] Dobijeni na smoli nošen Fmoc-zaštićeni dipeptid je zatim oslobođen zaštite i kuplovan sa trećom aminokiselinom i tako nadalje na iterativan način da se dobije željeni na smoli nošen proizvod.

[0374] LCMS analiza je sprovedena na peptidnom alikvotu, koji je odcepljen sa smole (analitička količina je tretirana sa TFA/TIS (96:4) rastvorom (0.2 mL) na sobnoj temperaturi. Nakon potvrde željene linearne sekvence, Fmoc grupa je uklonjena sa N-terminusa nakon pranja smole dva puta sa rastvorom 20% piperidina u DMF-u (5 mL i 2.5 minuta po pranju) i vrtložnog mešanja kaše. Smola je oprana sa DMF (2 x 5 mL). U peptid-smolu je dodato u nizu 2-hlorosirćetna kiselina (0.6 mmol, 57 mg), DMF (5.26 mL), i DIC (0.6 mmol, 93 µL). Nova kaša je vrtložno mešana tokom 1-2 dana a u toj tački je peptid-smola oprana sa DMF (1 x 5 mL x 1 min) i DCM (3 x DCM x 1 min).

[0375] Sa peptida je uklonjena zaštita i odcepljen je sa smole nakon tretmana sa TFA/TIS (96:4) rastvorom (10 mL) tokom 1 h. Smola je uklonjena filtracijom, oprana sa koktelom za cepanje (2 x 1 mL), kombinovani filtrati su dodati u Et2O (10-15 mL) i rastvor je ohlađen na 0 °C kako bi se ostvarilo taloženje peptida iz rastvora. Kaša je centrifugirana da se peletira čvrsta supstanca i supernatant je dekantiran. Svež Et2O (25 mL) je dodat i proces je ponovljen tri puta da se operu čvrste materije. Čvrstoj materiji je dodat rastvor 0.1 M NH4HCO3/Acetonitril (od 1/1 do 3/1 (v/v), pH = 8.6) ili 6 M guanidin HCl u 100 mM NaH2PO4(pH = 8.4). Rastvor je mešan tokom 1-2 dana i praćen pomoću LCMS. Reakcioni rastvor je prečišćen pomoću preparativne HPLC da se dobije željeni product.

OPŠTI ANALITIČKI PROTOKOLI I METODE SINTEZE

Analitički podaci:

[0376] Masena spektrometrija: "ESI-MS(+)" označava elektrosprej jonizacionu masenu spektrometriju izvedenu u pozitivnom jonskom modu; "ESI-MS(-)" označava elektrosprej jonizacionu masenu spektrometriju izvedenu u negativnom jonskom modu; "ESI-HRMS(+)" označava elektrosprej jonizacionu masenu spektrometriju visoke rezolucije izvedenu u pozitivnom jonskom modu; "ESI-HRMS(-)" označava elektrosprej jonizacionu masenu spektrometriju visoke rezolucije izvedenu u negativnom jonskom modu. Detektovane mase su prijavljene praćenjem "m/z" jediničnog označavanja. Jedinjenja sa tačnim masama većim od 1000 su često detektovana kao dvostruko naelektrisani ili trostruko naelektrisani joni.

Opšti postupci:

Symphony X Metoda A:

[0377] Sve manipulacije su izvedene automatski na Symphony X peptidnom sintetizatoru (Protein Technologies). Svi postupci su sprovedeni u polipropilenskoj epruveti od 10 mL opremljenoj sa fritom na dnu. Epruveta se povezuje sa Symphony X peptidnim sintetizatorom i preko dna i vrha epruvete. DMF i DCM mogu biti dodati kroz gornji deo epruvete, što spira strane epruvete podjednako. Preostali reagensi su dodati kroz dno epruvete i prolaze kroz fritu da bi došli u kontakt sa smolom. Svi rastvori su uklonjeni kroz dno epruvete. "Periodična agitacija" opisuje kratak puls N2gasa kroz fritu na dnu; puls traje približno 5 sekundi i javlja se na svakih 30 sekundi. Hloroacetil hlorid rastvori u DMF-u su korišćeni unutar 24h od pripreme. Aminokiselinski rastvori uglavnom nisu korišćeni posle tri nedelje od pripreme. HATU rastvori su korišćeni unutar 5 dana od pripreme. DMF = dimetilformamid; HATU = 1-[Bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinijum 3-oksid heksafluorofosfat; DIPEA = diizopropiletilamin; Rink = (2,4-dimetoksifenil)(4-alkoksifenil)metanamin, gde "4-alkoksi" opisuje položaj i vrstu vezivanja za polistirensku smolu. Korišćena smola je Merrifield polimer (polistiren) sa Rink veznikom (Fmoczaštićen na azotu); 100-200 mesh-a, 1% DVB, 0.56 mmol/g opterećenje. Uobičajene amino kiseline koje su primenjene su navedene ispod sa zaštitnim grupama bočnog lanca naznačenim unutar zagrada.

[0378] Fmoc-Ala-OH; Fmoc-Arg(Pbf)-OH; Fmoc-Asn(Trt)-OH; Fmoc-Asp(OtBu)-OH; Fmoc-Bzt-OH; Fmoc-Cys(Trt)-OH; Fmoc-Dab(Boc)-OH; Fmoc-Dap(Boc)-OH; Fmoc-Gln(Trt)-OH; Fmoc-Gly-OH; Fmoc-His(Trt)-OH; Fmoc-Hyp(tBu)-OH; Fmoc-Ile-OH; Fmoc-Leu-OH; Fmoc-Lys(Boc)-OH; Fmoc-Nle-OH; Fmoc-Met-OH; Fmoc-[N-Me]Ala-OH; Fmoc-[N-Me]Nle-OH; Fmoc-Phe-OH; Fmoc-Pro-OH; Fmoc-Sar-OH; Fmoc-Ser(tBu)-OH; Fmoc-Thr(tBu)-OH; Fmoc-Trp(Boc)-OH; Fmoc-Tyr(tBu)-OH; Fmoc-Val-OH.

[0379] Postupci "Symphony X Metode A" opisuju eksperiment sproveden na 0.100 mmol skali, gde je skala određena količinom Rink veznika vezanog za smolu. Ova skala odgovara približno 178 mg Rink-Merrifield smole koja je iznad opisana. Svi postupci mogu biti skalirani preko 0.100 mmol skale podešavanjem opisanih zapremina višekratnikom skale. Pre aminokiselinskog kuplovanja, sve sekvence peptidne sinteze počinju postupkom bubrenja smole, opisanim ispod kao “Postupak bubrenja smole". Kuplovanje aminokiselina sa N-terminusom primarnog amina koristilo je "Postupak pojedinačnog kuplovanja" koji je opisan ispod. Kuplovanje aminokiselina sa N-terminusom sekundarnog amina koristilo je "Dvostruko-kuplujući postupak" koji je opisan ispod. Kuplovanje hloroacetilhlorida na N-terminus peptida je opisano pomoću "Hloroacetil hlorid kuplujućeg postupka" detaljno opisanog ispod.

Postupak bubrenja smole A:

[0380] U polipropilenski reakcioni sud od 10 mL za čvrstu fazu je dodata Merrifield:Rink smola (178 mg, 0.100 mmol). Smola je oprana (nabubrila) tri puta kao što sledi: u reakcioni sud je dodat DMF (2.0 mL), nakon čega je smeša periodično agitirana tokom 10 minuta pre nego što je rastvarač proceđen kroz fritu.

Postupak pojedinačnog kuplovanja A:

[0381] U reakcioni sud koji sadrži smolu iz prethodnog koraka je dodat piperidin:DMF (20:80 v/v, 2.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 3 minuta i zatim je rastvor proceđen kroz fritu. U reakcioni sud je dodat piperidin:DMF (20:80 v/v, 2.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 3 minuta i zatim je rastvor proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno šest puta kao što sledi: za svako pranje, DMF (2.0 mL) je dodat kroz gornji deo suda i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 30 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. U reakcioni sud je dodata amino kiselina (0.2M u DMF-u, 1.0 mL, 2 ekv), zatim HATU (0.2M u DMF-u, 1.0 mL, 2 ekv), i konačno DIPEA (0.4M u DMF-u, 1.0 mL, 4 ekv). Smeša je periodično agitirana tokom 15 minuta, zatim je reakcioni rastvor proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno četiri puta kao što sledi: za svako pranje, DMF (2.0 mL) je dodat kroz gornji deo suda i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 30 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. U reakcioni sud je dodat anhidrid sirćetne kiseline (2.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 10 minuta, zatim je rastvor proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno četiri puta kao što sledi: za svako pranje, DMF (2.0 mL) je dodat kroz gornji deo suda i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 90 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. Dobijena smola je korišćena direktno u sledećem koraku.

Dvostruko-kuplujući postupak A:

[0382] U reakcioni sud koji sadrži smolu iz prethodnog koraka je dodat piperidin:DMF (20:80 v/v, 2.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 3 minuta i zatim je rastvor proceđen kroz fritu. U reakcioni sud je dodat piperidin:DMF (20:80 v/v, 2.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 3 minuta i zatim je rastvor proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno šest puta kao što sledi: za svako pranje, DMF (2.0 mL) je dodat kroz gornji deo suda i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 30 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. U reakcioni sud je dodata amino kiselina (0.2M u DMF-u, 1.0 mL, 2 ekv), zatim HATU (0.2M u DMF-u, 1.0 mL, 2 ekv), i konačno DIPEA (0.4M u DMF-u, 1.0 mL, 4 ekv). Smeša je periodično agitirana tokom 15 minuta, zatim je reakcioni rastvor proceđen kroz fritu. Smola je dva puta oprana kao što sledi: za svako pranje, DMF (2.0 mL) je dodat kroz gornji deo suda i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 30 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. U reakcioni sud je dodata amino kiselina (0.2M u DMF-u, 1.0 mL, 2 ekv), zatim HATU (0.2M u DMF-u, 1.0 mL, 2 ekv), i konačno DIPEA (0.4M u DMF-u, 1.0 mL, 4 ekv). Smeša je periodično agitirana tokom 15 minuta, zatim je reakcioni rastvor proceđen kroz fritu. Smola je dva puta oprana kao što sledi: za svako pranje, DMF (2.0 mL) je dodat kroz gornji deo suda i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 90 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. U reakcioni sud je dodat anhidrid sirćetne kiseline (2.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 10 minuta, zatim je rastvor proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno četiri puta kao što sledi: za svako pranje, DMF (2.0 mL) je dodat kroz gornji deo suda i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 90 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. Dobijena smola je korišćena direktno u sledećem koraku.

Symphony aminokiselinski N-terminalni zaustavni postupak:

[0383] U polipropilenski reakcioni sud od 10 mL za čvrstu fazu je dodata Merrifield:Rink smola (178 mg, 0.100 mmol). Smola je oprana (nabubrila) tri puta kao što sledi: u reakcioni sud je dodat DMF (2.0 mL), nakon čega je smeša periodično agitirana tokom 10 minuta pre nego što je rastvarač proceđen kroz fritu.

U reakcioni sud koji sadrži Rink smolu iz prethodnog koraka je dodat piperidin:DMF (20:80 v/v, 2.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 3 minuta i zatim je rastvor proceđen kroz fritu. U reakcioni sud je dodat piperidin:DMF (20:80 v/v, 2.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 3 minuta i zatim je rastvor proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno šest puta kao što sledi: za svako pranje, DMF (2.0 mL) je dodat kroz gornji deo suda i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 30 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. U reakcioni sud je dodata amino kiselina (0.2M u DMF-u, 1.0 mL, 2 ekv), zatim HATU (0.2M u DMF-u, 1.0 mL, 2 ekv), i konačno DIPEA (0.4M u DMF-u, 1.0 mL, 4 ekv). Smeša je periodično agitirana tokom 15 minuta, zatim je reakcioni rastvor proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno četiri puta kao što sledi: za svako pranje, DMF (2.0 mL) je dodat kroz gornji deo suda i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 30 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. U reakcioni sud je dodat anhidrid sirćetne kiseline (2.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 10 minuta, zatim je rastvor proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno četiri puta kao što sledi: za svako pranje, DMF (2.0 mL) je dodat kroz gornji deo suda i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 90 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. U reakcioni sud je dodat piperidin:DMF (20:80 v/v, 2.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 3 minuta i zatim je rastvor proceđen kroz fritu. U reakcioni sud je dodat piperidin:DMF (20:80 v/v, 2.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 3 minuta i zatim je rastvor proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno pet puta kao što sledi: za svako pranje, DMF (2.0 mL) je dodat kroz gornji deo suda i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 90 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno tri puta kao što sledi: za svako pranje, DCM (2.0 mL) je dodat kroz gornji deo suda i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 90 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. Smola koja se dobija je postavljena ispod struje azota tokom 15 minuta.

Postupak A kuplovanja hloroacetil hlorida:

[0384] U reakcioni sud koji sadrži smolu iz prethodnog koraka je dodat piperidin:DMF (20:80 v/v, 2.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 3 minuta i zatim je rastvor proceđen kroz fritu. U reakcioni sud je dodat piperidin:DMF (20:80 v/v, 2.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 3 minuta i zatim je rastvor proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno šest puta kao što sledi: za svako pranje, DMF (2.0 mL) je dodat kroz gornji deo suda i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 30 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. U reakcioni sud je dodat DIPEA (0.4M u DMF-u, 4.0 mL, 16 ekv), zatim hloroacetil hlorid (0.8M u DMF-u, 1.50 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 30 minuta, zatim je rastvor proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno tri puta kao što sledi: za svako pranje, DMF (2.0 mL) je dodat preko gornjeg dela suda i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 90 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno četiri puta kao što sledi: za svako pranje, CH2Cl2(2.0 mL) je dodat preko gornjeg dela suda i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 90 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. Dobijena smola se postavlja pod struju N2tokom 15 minuta.

Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline:

[0385] U reakcioni sud koji sadrži smolu iz prethodnog koraka je dodat piperidin:DMF (20:80 v/v, 2.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 3 minuta i zatim je rastvor proceđen kroz fritu. U reakcioni sud je dodat piperidin:DMF (20:80 v/v, 2.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 3 minuta i zatim je rastvor proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno četiri puta kao što sledi: za svako pranje, DMF (2.0 mL) je dodat kroz gornji deo suda i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 30 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. U reakcioni sud je dodata hlorosirćetna kiselina (0.2M u DMF-u, 1.0 mL, 2 ekv), zatim HATU (0.2M u DMF-u, 1.0 mL, 2 ekv), i konačno DIPEA (0.4M u DMF-u, 1.0 mL, 4 ekv). Smeša je periodično agitirana tokom 15 minuta, zatim je reakcioni rastvor proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno tri puta kao što sledi: za svako pranje, DMF (2.0 mL) je dodat kroz gornji deo suda i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 30 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno četiri puta kao što sledi: za svako pranje, CH2Cl2(2.0 mL) je dodat kroz gornji deo suda i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 90 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. Smola koja se dobija je sušena tokom 5 minuta.

Globalna deprotekciona metoda A:

[0386] Sve manipulacije su sprovedene ručno ako nije naznačeno. Postupak "Globalna deprotekciona metoda A" opisuje eksperiment izveden na 0.100 mmol skali, gde je skala određena količinom Rink veznika vezanog za smolu. Ovaj postupak može biti skaliran izvan 0.100 mmol skale podešavanjem opisanih zapremina višekratnikom skale. "Deprotekcioni rastvor" (rastvor za uklanjanje zaštite) je pripremljen kombinovanjem u staklenoj bočici od 40 mL trifluorosirćetne kiseline (22 mL), fenola (1.325 g), vode (1.25 mL) i triizopropilsilana (0.5 mL). Smola je uklonjena iz reakcionog suda i preneta u staklenu bočicu od 4 mL. U bočicu je dodat "deprotekcioni rastvor" (2.0 mL). Smeša je energično mešana u šejkeru (1000 OPM tokom 1 minuta, zatim 500 OPM tokom 90 minuta). Smeša je filtrirana kroz polipropilensku epruvetu od 10 mL opremljenu sa fritom na dnu dozvoljavajući u kapima dodavanje u test epruvetu od 24 mL koja sadrži 15 mL dietil etra dajući beli talog. Čvrste materije (smola) u epruveti su ekstrahovane jednom sa "deprotekcionim rastvorom" (1.0 mL) dozvoljavajući u kapima dodavanje u etar. Smeša je centrifugirana tokom 7 minuta, zatim je rastvor dekantovan od čvrstih materija i odbačen. Čvrste materije su suspendovane u Et2O (20 mL); zatim smeša je centrifugirana tokom 5 minuta; i rastvor dekantovan od čvrstih materija i odbačen. Poslednji put, čvrste materije su suspendovane u Et2O (20 mL); Smeša je centrifugirana tokom 5 minuta; i rastvor dekantovan od čvrstih materija i odbačen da se dobije sirovi peptid kao bela do prljavo bela čvrsta supstanca.

Metoda A ciklizacije:

[0387] Sve manipulacije su sprovedene ručno ako nije naznačeno. Postupak "Metoda A ciklizacije" opisuje eksperiment izveden na 0.100 mmol skali, gde je skala određena količinom Rink veznika vezanog za smolu koja je upotrebljena da se stvori peptid. Ova skala nije zasnovana na direktnom određivanju količine peptida koji je korišćen u postupku. Ovaj postupak može biti skaliran izvan 0.100 mmol skale podešavanjem opisanih zapremina višekratnikom skale. Sirove peptidne čvrste materije su rastvorene u metanolu (10 mL), i rastvor je zatim pažljivo podešen na pH = 9.0-11 primenom N,N-Diizopropilamina. Rastvor je zatim mešan tokom 18-24h. Reakcioni rastvor je koncentrovan i ostatak je zatim rastvoren u MeOH. Rastvor je podvrnut reverzno-faznom HPLC prečišćavanju da se dobije željeni ciklični peptid.

Analiza Uslov A:

[0388] Kolona: X-Bridge C18, 2.0 x 50 mm, 3.5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 0%B, 0-100% B tokom 8 minuta, zatim 1.0-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV pri 220 nm.

Priprema (S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-6-undekanamidoheksanske kiseline

[0389]

[0390] U tikvicu sa okruglim dnom napunjenu sa (S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-6-aminoheksanskom kiselinom (2.5 g, 6.79 mmol), undekanoil hloridom (1.647 ml, 7.46 mmol), i dihlorometanom (27 ml) dodat je N-etil-N-izopropilpropan-2-amin (3.56 ml, 20.36 mmol). Početna suspenzija je odmah postala žuta i zatim bistra. Nakon 10 minuta čvrsta supstanca je počela da se taloži. Reakcija je mešana tokom 20 sati na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je razblažena sa 20 ml dihlorometana i sipana u zasićen rastvor amonijum hlorida. Slojevi su razdvojeni i vodeni je opran sa 20% metanol/hloroform rastvorom. Kombinovane organske materije su oprane slanim rastvorom, osušene preko magnezijum sulfata, filtrirane, i koncentrovane da se dobije lepljiva žuta čvrsta supstanca. Dobijeni ostatak je podvrgnut silika gel hromatografiji (0-5% metanol/dihlorometan gradijent) da se dobije (S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-6-undekanamidoheksanska kiselina (2.81 g, 5.24 mmol, 77 % prinos) kao žuta pena.<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 7.80 - 7.71 (m, 2H), 7.63 - 7.52 (m, 2H), 7.39 (t, J=7.0 Hz, 2H), 7.34 - 7.27 (m, 2H), 4.49 - 4.29 (m, 2H), 4.27 - 4.14 (m, 1H), 3.24 (br. s., 1H), 2.35 (t, J=7.5 Hz, 1H), 2.29 - 2.06 (m, 2H), 1.89 (br. s., 1H), 1.86 - 1.72 (m, 1H), 1.72 - 1.63 (m, 1H), 1.62 - 1.46 (m, 4H), 1.39 - 1.14 (m, 18H), 0.92 - 0.86 (m, 3H).

(S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-6-tetradekanamidoheksanska kiselina

[0391]

[0392]<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 7.88 (dd, J=7.2, 4.1 Hz, 2H), 7.77 - 7.69 (m, 2H), 7.44 -7.37 (m, 2H), 7.35 - 7.28 (m, 2H), 4.29 - 4.17 (m, 2H), 3.95 - 3.84 (m, 1H), 3.63 - 3.52 (m, 1H), 3.10 (q, J=7.4 Hz, 1H), 3.05 - 2.94 (m, 2H), 2.01 (t, J=7.4 Hz, 2H), 1.46 (d, J=6.8 Hz, 3H), 1.34 (dd, J=13.1, 5.0 Hz, 3H), 1.24 - 1.20 (m, 22H), 0.86 - 0.82 (m, 3H)

(S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-6-stearamidoheksanska kiselina

[0393]

[0394]<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 7.92 - 7.84 (m, 2H), 7.72 (d, J=7.5 Hz, 2H), 7.44 - 7.36 (m, 2H), 7.36 - 7.26 (m, 2H), 4.35 - 4.22 (m, 2H), 4.20 (d, J=7.5 Hz, 1H), 3.94 - 3.85 (m, 1H), 3.00 (br. s., 2H), 2.17 (t, J=7.4 Hz, 1H), 2.09 - 1.91 (m, 1H), 1.69 (d, J=6.8 Hz, 1H), 1.65 - 1.51 (m, 1H), 1.46 (d, J=7.0 Hz, 2H), 1.34 (dd, J=13.1, 5.0 Hz, 2H), 1.24 - 1.19 (m, 30H), 0.87 - 0.82 (m, 3H).

Priprema modifikovane rink smole A

[0396] Bočica od 20 ml za scintilaciju je napunjena sa Merrifield Rink smolom (0.56 mmol/g opterećenje) (1.0 g, 0.560 mmol). Smola je nabubrila u 5 ml DMF tokom 10 minuta. Rastvor od 8 ml 20:80 piperidin:DMF rastvora je dodat je dobijena suspenzija je mešana na mini-šejkeru tokom 2 sata. Smola je izolovana prenošenjem sadržaja bočice u polipropilensku reakcionu epruvetu od 10 ml i filtriranjem vakuumskom filtracijom. Smola je oprana sa 30 ml DMF praćeno sa 30 ml dihlorometana i poslednje sa 5 ml dietil etra. Smola je prenešena u bočicu od 20 ml. U bočicu koja sadrži smolu je dodato 5 ml DMF da smola nabubri. Nakon 10 minuta (S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-6-undekanamidoheksanska kiselina (0.601 g, 1.120 mmol), 0.2M 2-(3H-[1,2,3]triazolo[4,5-b]piridin-3-il)-1,1,3,3-tetrametilizouronijum heksafluorofosfat(V) u DMF-u (5.60 ml, 1.120 mmol), i 0.4M N-etil-N-izopropilpropan-2-amin u DMF-u (5.60 ml, 2.240 mmol) su dodati. Bočica je mešana preko noći na mini-šejkeru. Smola je izolovana prenošenjem sadržaja bočice u polipropilensku reakcionu epruvetu od 10 ml i filtriranjem vakuumskom filtracijom. Smola je oprana sa 50 ml DMF, 50 ml dihlorometana, i 10 ml dietil etra. Smola koja se dobija je osušena u vakuumu i primenjena kao 0.56 mmol/g opterećenje.

Priprema modifikovane rink smole B

[0397] Modifikovana rink smola B je napravljena praćenjem identičnog postupka za modifikovanu Rink smolu A.

Priprema modifikovane rink smole C

[0398] Modifikovana rink smola C je napravljena praćenjem identičnog postupka za modifikovanu Rink smolu A sa jedinim izuzetkom što je N-Fmoc-N Palmitoil-L Lizin kupljen od Chem-Impex International-a.

Priprema modifikovane rink smole D

[0399] Modifikovana rink smola D je napravljena praćenjem identičnog postupka za modifikovanu Rink smolu A.

Priprema modifikovane 2-hlorotritil hlorid smole A

[0400]

[0401] U bočicu od 40 mL je dodata 2-hlorotritil hlorid smola (1.42 mmol/g opterećenje) (1.985 g, 2.78 mmol). Smola je nabubrila u 15 ml dihlorometana tokom 10 minuta. Rastvor (0.5 g, 0.869 mmol), FMOC-21-amino-4,7,10,13,16,19-heksaoksaheneikozanske kiseline u 2 ml dihlorometana praćeno sa N-etil-N-izopropilpropan-2-aminom (0.986 ml, 5.65 mmol) je dodat i smeša je mešana preko noći na ST na mini šejkeru. Nakon 20 h smeša je razblažena sa 2 ml metanola, i mešana tokom 2 h da se kvenčuje bilo kakva neizreagovana hlorotritil smola. Smola je vakuumski filtrirana u polipropilenskoj reakcionoj epruveti i oprana sa 100 ml DMF, 100 ml dihlorometana, i konačno 10 ml dietil etra. Smola je osušena na vazduhu i primenjena kao 0.44 mmol/g opterećenje.

Priprema modifikovane 2-hlorotritil hlorid smole B

[0402]

[0403] U bočicu od 40 mL je dodata 2-hlorotritil hlorid smola (1.42 mmol/g opterećenje) (2.129 g, 2.98 mmol). Smola je nabubrila u 15 ml dihlorometana tokom 10 minuta. Rastvor S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-6-undekanamidoheksanske kiseline (0.5 g, 0.932 mmol), u 2 ml dihlorometana praćeno sa N-etil-N-izopropilpropan-2-aminom (1.06 ml, 6.06 mmol) je dodat i smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi na mini šejkeru. Nakon 20 h smeša je razblažena sa 2 ml metanola, i mešana tokom 2 h da se kvenčuje bilo kakva neizreagovana hlorotritil smola. Smola je vakuumski filtrirana u polipropilenskoj reakcionoj epruveti i oprana sa 100 ml DMF-a , 100 ml dihlorometana, i konačno 10 ml dietil etra. Smola je osušena na vazduhu i primenjena kao 0.44 mmol/g opterećenje.

Priprema primera 11001

[0404]

[0405] Primer 11001 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Postpak standardnog kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak kuplovanja hloroacetil kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana Rink smola D je primenjena u ovoj sintezi.

[0406] Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 30-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 5.2 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS Analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 7.34 min; ESI-MS(+) m/z 1105.4 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1105.6498 (M+2H) Nađeno: 1105.6494 (M+2H).

Priprema primera 11002

[0407]

[0408] Primer 11002 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Postpak standardnog kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", “Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline”, "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana Rink smola D je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 30-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 3.9 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS Analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 7.10 min; ESI-MS(+) m/z 1133.5 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1133.1543 (M+2H) Nađeno: 1133.1496 (M+2H).

Priprema primera 11003

[0409]

[0410] Primer 11003 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A", i " Metoda A ciklizacije". Modifikovana Rink smola A je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 30-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 3.5 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.66 min; ESI-MS(+) m/z 1200.4 (M+2H).

Priprema primera 11004

[0411]

[0412] Primer 11004 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A", i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana Rink smola A je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 30-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 10.7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.73 min; ESI-MS(+) m/z 1171.9 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1171.1299 (M+2H) Nađeno: 1171.1302 (M+2H)

Priprema primera 11005

[0413]

[0414] Primer 11005 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A", i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana Rink smola A je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 30-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 4.8 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.78 min; ESI-MS(+) m/z 1142.5 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1142.6192 (M+2H) Nađeno: 1142.6193 (M+2H).

Priprema primera 11006

[0416] Primer 11006 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana Rink smola A je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 30-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 9.2 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.66 min; ESI-MS(+) m/z 1161.7 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1161.6088 (M+2H) Nađeno: 1161.6075 (M+2H)

Priprema primera 11007

[0417]

[0418] Primer 11007 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana Rink smola A je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 30-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 16.0 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.64 min; ESI-MS(+) m/z 1191.0 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1090.0797 (M+2H) Nađeno: 1090.0779(M+2H).

Priprema primera 11008

[0419]

[0420] Primer 11008 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana Rink smola A je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 30-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 12.2 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.55 min; ESI-MS(+) m/z 1133.3 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1133.0981 (M+2H) Nađeno: 1133.0950 (M+2H).

Priprema primera 11009

[0422] Primer 11009 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana Rink smola A je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 30-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 19.8 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 96%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.81 min; ESI-MS(+) m/z 1147.7 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1147.5875 (M+2H) Nađeno: 1147.5867 (M+2H).

Priprema primera 11010

[0423]

[0424] Primer 11010 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana Rink smola A je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 30-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 19.4 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.83 min; ESI-MS(+) m/z 1154.9 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1154.5954 (M+2H) Nađeno: 1154.9533 (M+2H).

Priprema primera 11011

[0425]

[0426] Primer 11011 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana Rink smola A je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 30-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 8.7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 96%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.37 min; ESI-MS(+) m/z 1154.8 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1154.5954 (M+2H) Nađeno: 1154.5941 (M+2H).

Priprema primera 11012

[0427]

[0428] Primer 11012 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana Rink smola A je primenjena u ovoj sintezi. FMOC-21-amino-4,7,10,13,16,19-heksaoksaheneikozanska kiselina je primenjena sa "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina". Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 15-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 8.7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 96%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.68 min; ESI-MS(+) m/z 1265.3 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1264.6791 (M+2H) Nađeno: 1264.6764 (M+2H).

Priprema primera 11013

[0430] Primer 11013 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana Rink smola B je primenjena u ovoj sintezi. FMOC-21-Amino-4,7,10,13,16,19-heksaoksaheneikozanska kiselina je primenjena sa "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina". Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 15-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 12.7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 5.04 min; ESI-MS(+) m/z 1351.2 (M+2H).

Priprema primera 11014

[0431]

[0432] Primer 11014 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana Rink smola B je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 30-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 7.7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.97 min; ESI-MS(+) m/z 1241.1 (M+2H).

Priprema primera 11015

[0433]

[0434] Primer 11015 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana Rink smola B je primenjena u ovoj sintezi. FMOC-21-Amino-4,7,10,13,16,19-heksaoksaheneikozanska kiselina je primenjena sa "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina". Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 30-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 7.1 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 5.44 min; ESI-MS(+) m/z 1292.7 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1292.7160 (M+2H). Nađeno: 1292.7148 (M+2H).

Priprema primera 11016

[0435]

[0436] Primer 11016 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana Rink smola B je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 30-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 8.3 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%.; Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 5.27 min; ESI-MS(+) m/z 1182.7 (M+2H)

Priprema primera 11017

[0437]

[0438] Primer 11017 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana Rink smola B je primenjena u ovoj sintezi. FMOC-21-Amino-4,7,10,13,16,19-heksaoksaheneikozanska kiselina je primenjena sa "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina". Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 30-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 5.2 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 95%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.81 min; ESI-MS(+) m/z 1408.1 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1407.7431 (M+2H) Nađeno: 1407.7430 (M+2H).

Priprema primera 11018

[0439]

[0440] Primer 11018 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana Rink smola C je primenjena u ovoj sintezi. FMOC-21-Amino-4,7,10,13,16,19-heksaoksaheneikozanska kiselina je primenjena sa "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina". Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 30-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 11.2 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 96%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 5.16 min; ESI-MS(+) m/z 1421.8 (M+2H).

Priprema primera 11019

[0441]

[0442] Primer 11019 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana Rink smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 30-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 40.2 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 6.11 min; ESI-MS(+) m/z 1091.45 (M+2H).

Priprema primera 11020

[0443]

[0444] Primer 11020 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana Rink smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 30-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 41.0 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 97%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 5.93 min; ESI-MS(+) m/z 1119.83 (M+2H).

Priprema primera 11021

[0445]

[0446] Primer 11021 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana Rink smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 30-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 14.4 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 6.36 min; ESI-MS(+) m/z 1265.9 (M+2H).

Priprema primera 11022

[0447]

[0448] Primer 11022 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana Rink smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 30-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 5.7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 97%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 6.13 min; ESI-MS(+) m/z 1250.51 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1249.1930 (M+2H) Nađeno: 1249.1934 (M+2H).

Priprema primera 11023

[0449]

[0450] Primer 11023 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana Rink smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 30-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 3.8 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 95%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 6.41 min; ESI-MS(+) m/z 1235.4 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1235.6878 (M+2H) Nađeno: 1235.6832 (M+2H).

Priprema primera 11024

[0451]

[0452] Primer 11024 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana Rink smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 30-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 7.2 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 97%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 5.68 min; ESI-MS(+) m/z 1220.5 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1220.6823 (M+2H) Nađeno: 1220.6810 (M+2H).

Priprema primera 11025

[0453]

[0454] Primer 11025 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana Rink smola A je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 30-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 3.8 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 95%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 5.74 min; ESI-MS(+) m/z 1234.6 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1234.6798 (M+2H) Nađeno: 1234.6796.

Priprema primera 11026

[0456] Primer 11026 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana Rink smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 30-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 11.7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 5.81 min; ESI-MS(+) m/z 1206.0 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1206.1690 (M+2H) Nađeno: 1206.1690 (M+2H).

Priprema primera 11027

[0458] Primer 11027 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana Rink smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 30-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 9.3 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 5.92 min; ESI-MS(+) m/z 1177.6 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1177.6583 (M+2H) Nađeno: 1177.6585 (M+2H).

Priprema primera 11028

[0459]

[0460] Primer 11028 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana Rink smola C je primenjena u ovoj sintezi. FMOC-21-Amino-4,7,10,13,16,19-heksaoksaheneikozanska kiselina je primenjena sa "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina". Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 15-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 7.8 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 5.57 min; ESI-MS(+) m/z 1363.2 (M+2H).

Priprema primera 11029

[0461]

[0462] Primer 11029 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana Rink smola C je primenjena u ovoj sintezi. FMOC-21-Amino-4,7,10,13,16,19-heksaoksaheneikozanska kiselina je primenjena sa "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina". Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 15-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 16.7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 6.01 min; ESI-MS(+) m/z 1306.8 (M+2H).

Priprema primera 11030

[0463]

[0464] Primer 11030 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana Rink smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 30-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 7.2 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 95%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 5.40 min; ESI-MS(+) m/z 1153.4 (M+2H).

Priprema primera 11031

[0465]

[0466] Primer 11031 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana Rink smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 30-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 13.0 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 5.88 min; ESI-MS(+) m/z 1125.1 (M+2H).

Priprema primera 11032

[0467]

[0468] Primer 11032 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Rink smola je primenjena u ovoj sintezi. FMOC-21-Amino-4,7,10,13,16,19-heksaoksaheneikozanska kiselina je primenjena sa "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina". Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 15-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 14.4 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 2.99 min; ESI-MS(+) m/z 1442.3 (M+2H).

Priprema primera 11033

[0470] Primer 11034 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", “Postupak B kuplovanja hlorosirćetne kiseline”, "Globalna deprotekciona metoda C”, i "Metoda X ciklizacije". Rink smola je primenjena u ovoj sintezi. FMOC-21-Amino-4,7,10,13,16,19-heksaoksaheneikozanska kiselina je primenjena sa "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina". Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 15-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 20.7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.26 min; ESI-MS(+) m/z 1181.4 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1181.0772 (M+2H) Nađeno: 1181.0757 (M+2H).

Priprema primera 11034

[0471]

[0472] Primer 11034 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Rink smola je primenjena u ovoj sintezi. FMOC-21-Amino-4,7,10,13,16,19-heksaoksaheneikozanska kiselina je primenjena sa "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina". Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 15-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 20.8 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.63 min; ESI-MS(+) m/z 1168.0 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1167.0616 (M+2H).

Nađeno: 1167.0624 (M+2H).

Priprema primera 11035

[0473]

[0474] Primer 11035 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Rink smola je primenjena u ovoj sintezi. FMOC-21-Amino-4,7,10,13,16,19-heksaoksaheneikozanska kiselina je primenjena sa "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina". Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 15-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 33.2 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.63 min; ESI-MS(+) m/z 1138.4 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1138.5517 (M+2H).

Nađeno: 1138.5508 (M+2H).

Priprema primera 11036

[0475]

[0476] Primer 11036 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Rink smola je primenjena u ovoj sintezi. FMOC-21-Amino-4,7,10,13,16,19-heksaoksaheneikozanska kiselina je primenjena sa "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina". Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 15-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 12.2 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.88 min; ESI-MS(+) m/z 1081.9 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1081.0374 (M+2H)Nađeno: 1081.0358 (M+2H).

Priprema primera 11037

[0477]

[0478] Primer 11037 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Rink smola je primenjena u ovoj sintezi. FMOC-21-Amino-4,7,10,13,16,19-heksaoksaheneikozanska kiselina je primenjena sa "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina". Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 15-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 11.4 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.91 min; ESI-MS(+) m/z 1109.6 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1109.5481 (M+2H)

Nađeno: 1109.5472 (M+2H).

Priprema primera 11038

[0479]

[0480] Primer 11038 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Rink smola je primenjena u ovoj sintezi. FMOC-21-Amino-4,7,10,13,16,19-heksaoksaheneikozanska kiselina je primenjena sa "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina". Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 15-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 18.7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.55 min; ESI-MS(+) m/z 1182.1 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1181.0828 (M+2H) Nađeno: 1181.0816 (M+2H).

Priprema primera 11039

[0482] Primer 11039 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Rink smola je primenjena u ovoj sintezi. FMOC-21-Amino-4,7,10,13,16,19-heksaoksaheneikozanska kiselina je primenjena sa "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina". Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 15-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 13.7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.69 min; ESI-MS(+) m/z 1123.6 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1123.5677 (M+2H)

Nađeno: 1123.5694 (M+2H).

Priprema primera 11040

[0484] Primer 11040 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Rink smola je primenjena u ovoj sintezi. FMOC-21-Amino-4,7,10,13,16,19-heksaoksaheneikozanska kiselina je primenjena sa "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina". Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 15-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 19.5 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.69 min; ESI-MS(+) m/z 1096.0 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1095.0586 (M+2H)

Nađeno: 1095.0567 (M+2H).

Priprema primera 11041

[0485]

[0486] Primer 11041 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Rink smola je primenjena u ovoj sintezi. FMOC-21-Amino-4,7,10,13,16,19-heksaoksaheneikozanska kiselina je primenjena sa "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina". Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 15-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 21.7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 97%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.50 min; ESI-MS(+) m/z 1153.7 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1152.5721 (M+2H)

Nađeno: 1153.5719 (M+2H).

Priprema primera 11042

[0487]

[0488] Primer 11042 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola A je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 21.3 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.66 min; ESI-MS(+) m/z 1081.5 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1081.5294 (M+2H) Nađeno: 1081.5288 (M+2H).

Priprema primera 11043

[0489]

[0490] Primer 11043 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola A je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 20.7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 97%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.66 min; ESI-MS(+) m/z 1110.8 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1110.0401 (M+2H) Nađeno: 1110.0392 (M+2H).

Priprema primera 11044

[0491]

[0492] Primer 11044 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola A je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 10.7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 97%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.66 min; ESI-MS(+) m/z 1117.1 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1117.0479 (M+2H) Nađeno: 1117.0452 (M+2H).

Priprema primera 11045

[0493]

[0494] Primer 11045 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola A je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 16.0 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.66 min; ESI-MS(+) m/z 1085.1 (M+2H).

Priprema primera 11046

[0495]

[0496] Primer 11046 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola A je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 21.4 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.48 min; ESI-MS(+) m/z 1084.5 (M+2H).

Priprema primera 11047

[0497]

[0498] Primer 11047 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola A je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 20.7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.44 min; ESI-MS(+) m/z 1084.4 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1084.5346 (M+2H) Nađeno: 1084.5362 (M+2H).

Priprema primera 11060

[0499]

[0500] Primer 11060 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola je primenjena u ovoj sintezi. FMOC-21-Amino-4,7,10,13,16,19-heksaoksaheneikozanska kiselina je primenjena sa "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina". Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 22.4 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99%.

Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.83 min; ESI-MS(+) m/z 1177.0 (M+2H).

Priprema primera 11061

[0501]

[0502] Primer 11061 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola je primenjena u ovoj sintezi. FMOC-21-Amino-4,7,10,13,16,19-heksaoksaheneikozanska kiselina je primenjena sa "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina". Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 28.3 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99%.

Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.97 min; ESI-MS(+) m/z 1182.5 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1182.6316 (M+2H) Nađeno: 1182.6275 (M+2H).

Priprema primera 11062

[0503]

[0504] Primer 11062 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola B je primenjena u ovoj sintezi. FMOC-21-Amino-4,7,10,13,16,19-heksaoksaheneikozanska kiselina je primenjena sa "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina". Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 2.8 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.36 min; ESI-MS(+) m/z 1232.5 (M+2H).

Priprema primera 11063

[0505]

[0506] Primer 11063 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 15-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 27.4 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.11 min; ESI-MS(+) m/z 1139.7 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1139.6265 (M+2H) Nađeno: 1139.6252 (M+2H).

Priprema primera 11064

[0508] Primer 11064 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 26 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98.7%; Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.90 min; ESI-MS(+) m/z 1019.9 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1019.0426 (M+2H) Nađeno: 1019.0407 (M+2H).

Priprema primera 11065

[0510] Primer 11065 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 37 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 97.3%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.706 min; ESI-MS(+) m/z 1158.0 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1157.0723 (M+2H) Nađeno: 1157.0697 (M+2H).

Priprema primera 11066

[0511]

[0512] Primer 11066 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 48 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98.5%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.578 min; ESI-MS(+) m/z 1098.7 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1098.0533 (M+2H) Nađeno: 1098.0513 (M+2H).

Priprema primera 11067

[0513]

[0514] Primer 11067 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 36.3 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.225 min; ESI-MS(+) m/z 1158.6 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1157.5643 (M+2H) Nađeno: 1157.5622 (M+2H).

Priprema modifikovane 2-hlorotritil hlorid smole C

[0515]

[0516] U bočicu od 40 mL je dodata 2-hlorotritil hlorid smola (1.2 mmol/g opterećenje) (6.37 g, 7.65 mmol). Smola je nabubrila u 15 ml dihlorometan tokom 10 minuta. Rastvor (1.2 g, 2.83 mmol), FMOC- dodat11-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)undekanske kiseline u 5 ml dihlorometana praćeno sa N-etil-N-izopropilpropan-2-aminom (3.45 ml, 19.83 mmol) je dodat i smeša je mešana preko noći na ST na mini šejkeru. Nakon 20 h smeša je razblažena sa 3 ml metanola, i mešana tokom 2 h da se kvenčuje bilo kakva neizreagovana hlorotritil smola. Smola je vakuumski filtrirana u polipropilenskoj reakcionoj epruveti i oprana sa 100 ml DMF , 100 ml dihlorometana, i konačno 10 ml dietil etra. Smola je osušena na vazduhu i primenjena kao 0.44 mmol/g opterećenje.

Priprema primera 11068

[0517]

[0518] Primer 11068 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 32 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99.2%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.781 min; ESI-MS(+) m/z 1200.0 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1199.1374 (M+2H) Nađeno: 1199.1379 (M+2H).

Priprema primera 11069

[0519]

[0520] Primer 11069 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 27 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 96.9%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.598 min; ESI-MS(+) m/z 1135.2 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1134.0695 (M+2H) Nađeno: 1134.0691 (M+2H).

Priprema primera 11070

[0522] Primer 11070 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 31 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98.4%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.715 min; ESI-MS(+) m/z 1106.0 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1105.0668 (M+2H) Nađeno: 1105.0663 (M+2H).

Priprema primera 11071

[0523]

[0524] Primer 11071 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 32 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99.2%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.733 min; ESI-MS(+) m/z 1077.3 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1076.5561 (M+2H) Nađeno: 1076.5547 (M+2H).

Priprema primera 11072

[0525]

[0526] Primer 11072 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 51 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98.6%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.655 min; ESI-MS(+) m/z 1035.0 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1034.0297 (M+2H) Nađeno: 1034.0269 (M+2H).

Priprema primera 11073

[0527]

[0528] Primer 11073 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 29 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98.7%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.038 min; ESI-MS(+) m/z 1157.6 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1156.6054 (M+2H) Nađeno: 1156.6029 (M+2H).

Priprema primera 11074

[0529]

[0530] Primer 11074 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 29 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98.7%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.038 min; ESI-MS(+) m/z 1157.6 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1156.6054 (M+2H) Nađeno: 1156.6029 (M+2H).

Priprema primera 11075

[0531]

[0532] Primer 11075 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 40 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98.1%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.878 min; ESI-MS(+) m/z 1193.2 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1192.1240 (M+2H) Nađeno: 1192.1227 (M+2H).

Priprema primera 11076

[0533]

[0534] Primer 11076 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 42 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.088 min; ESI-MS(+) m/z 1042.1 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1041.0319 (M+2H) Nađeno: 1041.0309 (M+2H).

Priprema primera 11077

[0535]

[0536] Primer 11077 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 38 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.050 min; ESI-MS(+) m/z 1070.4 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1069.5426 (M+2H) Nađeno: 1069.5405 (M+2H).

Priprema primera 11078

[0537]

[0538] Primer 11078 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 40 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.903 min; ESI-MS(+) m/z 1098.7 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1098.0533 (M+2H) Nađeno: 1098.0508 (M+2H).

Priprema primera 11079

[0539]

[0540] Primer 11079 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 46 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98.9%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.533 min; ESI-MS(+) m/z 1127.7 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1126.5641 (M+2H) Nađeno: 1126.5608 (M+2H).

Priprema primera 11080

[0541]

[0542] Primer 11080 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 27 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99.0%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.235 min; ESI-MS(+) m/z 1194.8 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1193.1136 (M+2H) Nađeno: 1193.1127 (M+2H).

Priprema primera 11081

[0543]

[0544] Primer 11081 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 38 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98.5%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.743 min; ESI-MS(+) m/z 1167.8 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1166.6185 (M+2H) Nađeno: 1166.6167 (M+2H).

Priprema primera 11082

[0545]

[0546] Primer 11082 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 28 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99.3%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.688 min; ESI-MS(+) m/z 1010.1 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1009.0106 (M+2H) Nađeno: 1009.0103 (M+2H).

Priprema primera 11083

[0547]

[0548] Primer 11083 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 31 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98.8%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.576 min; ESI-MS(+) m/z 1161.2 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1160.1027 (M+2H) Nađeno: 1160.1039 (M+2H).

Priprema primera 11084

[0549]

[0550] Primer 11084 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 27 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98.2%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.625 min; ESI-MS(+) m/z 1038.3 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1037.5213 (M+2H) Nađeno: 1037.5221 (M+2H).

Priprema primera 11085

[0551]

[0552] Primer 11085 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 22 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99.7%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.951 min; ESI-MS(+) m/z 1104.7 (M+2H).

Priprema primera 11086

[0553]

[0554] Primer 11086 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 32 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 95.8%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.088 min; ESI-MS(+) m/z 1160.8 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1159.6107 (M+2H) Nađeno: 1159.6104 (M+2H).

Priprema primera 11087

[0555]

[0556] Primer 11087 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 22 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99.5 %. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.595 min; ESI-MS(+) m/z 1252.0 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1251.1918 (M+2H) Nađeno: 1251.1919 (M+2H).

Priprema primera 11088

[0557]

[0558] Primer 11088 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 22 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 94.1%. Analiza LCMS Uslov A: 4min Gradijent 1min hold: Vreme zadržavanja = 2.300 min; ESI-MS(+) m/z 1311.5 (M+2H).

Priprema primera 11089

[0559]

[0560] Primer 11089 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 23 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 87.6%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.923 min; ESI-MS(+) m/z 1100.9 (M+2H).

Priprema primera 11090

[0561]

[0562] Primer 11090 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 21 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98.5%; Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 5.395 min; ESI-MS(+) m/z 1192.7 (M+2H).

Priprema primera 11091

[0563]

[0564] Primer 11091 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 27 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98.9%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.256 min; ESI-MS(+) m/z 1093.9 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1093.0794 (M+2H) Nađeno: 1093.0779 (M+2H).

Priprema primera 11092

[0565]

[0566] Primer 11092 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 31 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 95.9%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.031 min; ESI-MS(+) m/z 1148.4 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1159.6107 (M+2H) Nađeno: 1159.6104 (M+2H).

Priprema primera 11093

[0567]

[0568] Primer 11093 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 16 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 95.6%. Analiza LCMS Uslov A: 9min Gradijent 1min hold: Vreme zadržavanja = 3.920 min; ESI-MS(+) m/z 1101.9 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1101.0586 (M+2H) Nađeno: 1101.0578 (M+2H).

Priprema primera 11094

[0569]

[0570] Primer 11094 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 23 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98.3%. Analiza LCMS Uslov A: 9min Gradijent 1 min hold: Vreme zadržavanja = 4.023 min; ESI-MS(+) m/z 1101.5 (M+2H).

Priprema primera 11095

[0571]

[0572] Primer 11095 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 25 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98.4%. Analiza LCMS Uslov A: 4min Gradijent 1 min hold: Vreme zadržavanja = 2.288 min; ESI-MS(+) m/z 1101.9 (M+2H).

Priprema primera 11096

[0573]

[0574] Primer 11096 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 13 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.056 min; ESI-MS(+) m/z 1094.4 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1093.5714 (M+2H) Nađeno: 1093.5685 (M+2H).

Priprema primera 11097

[0575]

[0576] Primer 11097 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 39 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 94.4%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.953 min; ESI-MS(+) m/z 1102.3 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1101.5506 (M+2H) Nađeno: 1101.5499 (M+2H).

Priprema primera 11098

[0577]

[0578] Primer 11098 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 17 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98.5%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.878 min; ESI-MS(+) m/z 1127.9 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1127.0561 (M+2H) Nađeno: 1127.0564 (M+2H)

Priprema primera 11099

[0579]

[0580] Primer 11099 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 33 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 96.3%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.035 min; ESI-MS(+) m/z 1122.8 (M+2H).

Priprema primera 11100

[0581]

[0582] Primer 11100 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 31 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.08 min; ESI-MS(+) m/z 1122.8 (M+2H).

Priprema primera 11101

[0583]

[0584] Primer 11101 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 43 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.16 min; ESI-MS(+) m/z 1094.3 (M+2H)

Priprema modifikovane 2-hlorotritil hlorid smole D

[0585]

[0586] U bočicu od 20 ml za scintilaciju je dodat (S)-N-FMOC-OKTILGLICIN (180 mg, 0.440 mmol), 2-hlorotritil hlorid (1000 mg, 1.400 mmol), CH2Cl2(10 mL), i N-etil-N-izopropilpropan-2-amin (398 mg, 3.08 mmol). Bočica je zatvorena i mešana preko noći na šejkeru koji simulira pokret ručnog zgloba. Sledećeg dana reakcija je završena dodavanjem 2 ml metanola i mešanjem tikvice dodatna 2 h. Smola je zatim filtrirana i oprana sa CH2Cl2, DMF 3x, CH2Cl23x, i konačno dietil etrom. Smola je osušena u vakuumu i primenjena kao što jeste za sintezu peptida. Smola je primenjena za sintezu peptida sa pretpostavljenim opterećenjem od 0.44 mekv/g.

Priprema primera 11102

[0587]

[0588] Primer 11102 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola D je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 30 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98.4%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 5.223 min; ESI-MS(+) m/z 1093.0 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1092.1205 (M+2H) Nađeno: 1092.1202 (M+2H).

Priprema primera 11103

[0589]

[0590] Primer 11103 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola D je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 18 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.445 min; ESI-MS(+) m/z 1086.9 (M+2H).

Priprema C16amin modifikovane 4-(4-Formil-3-metoksi-fenoksi)butiril AM smole A

[0591]

[0592] U bočicu od 20 ml je dodata 4-(4-formil-3-metoksi-fenoksi)butiril AM smola (0.94mmol/g) (2 g, 1.880 mmol), heksadekan-1-amin (1.816 g, 7.52 mmol), natrijum triacetoksiborohidrid (1.594 g, 7.52 mmol), DMF (10 mL), i sirćetna kiselina (.1 mL). Bočica je zatvorena i mućkana tokom 48 h na orbitalnom šejkeru. Nakon 48 sati reakciona smeša je filtrirana i sirova smola je oprana 5X sa DMF, 3X metanolom, 5X CH2Cl2-om, i konačno sa dietil etrom. Smola je sušena preko noći pod vakuumom. Pretpostavlja se da je opterećenje 0.94mmol/g i korišćeno je kako jeste u narednim koracima.

Priprema C16amin modifikovane 4-(4-formil-3-metoksi-fenoksi)butiril AM smole B

[0593]

[0594] U bočicu od 40 mL je dodata C16amin modifikovana 4-(4-formil-3-metoksi-fenoksi)butiril AM smola A (1 g, 0.940 mmol), 0.2 M 2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)sirćetna kiselina u DMF-u (9.40 ml, 1.880 mmol), 0.2M HATU u DMF-u (9.40 ml, 1.880 mmol), i 0.2M Hunig-ova baza u DMF-u (9.40 ml, 3.76 mmol). Bočica je zatvorena i agitirana na orbitalnom šejkeru preko noći. Sledećeg dana reakciona smeša je filtrirana i sirova smola je oprana 5X sa DMF, 5X CH2Cl2, i konačno 2X sa dietil etrom. Smola je sušena preko noći pod vakuumom. Pretpostavlja se da je opterećenje .94mmol/g i korišćeno je kako jeste u narednim koracima.

Priprema primera 11104

[0595]

[0596] Primer 11104 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". C16amin modifikovana 4-(4-formil-3-metoksi-fenoksi)butiril AM smola B je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 15-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 5 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99.5%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 6.025 min; ESI-MS(+) m/z 1078.25 (M+2H).

Priprema C18amin modifikovane 4-(4-formil-3-metoksi-fenoksi)butiril AM smole A

[0597]

[0598] U bočicu od 20 ml je dodata 4-(4-formil-3-metoksi-fenoksi)butiril AM smola 0.94 mmol/g opterećenje (2 g, 1.880 mmol), oktadekan-1-amin (2.53 g, 9.40 mmol), DMF (10 mL), sirćetna kiselina (.1 mL) i natrijum triacetoksiborohidrid (1.992 g, 9.40 mmol). Bočica je zatvorena i mućkana tokom 48 h na orbitalnom šejkeru. Nakon 48 sati reakciona smeša je filtrirana i sirova smola je oprana 5X sa DMF-om, 3X metanolom, 5X CH2Cl2-om, i konačno sa dietil etrom. Smola je sušena preko noći pod vakuumom. Pretpostavljeno je da je opterećenje 0.94mmol/g i korišćeno je kako jeste u narednim koracima.

Priprema primera 11105

[0599]

[0600] Primer 11105 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". C18amin modifikovana 4-(4-formil-3-metoksi-fenoksi)butiril AM smola A je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent 15-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 5.8 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99.5%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 6.523 min; ESI-MS(+) m/z 1063.85 (M+2H).

Priprema C14amin modifikovane 4-(4-formil-3-metoksi-fenoksi)butiril AM smole A

[0601]

[0602] U bočicu od 20 ml je dodata 4-(4-formil-3-metoksi-fenoksi)butiril AM smola 0.94 mmol/g opterećenje (2 g, 1.880 mmol), DMF (15 mL), tetradekan-1-amin (1.204 g, 5.64 mmol), natrijum triacetoksiborohidrid (1.594 g, 7.52 mmol), i sirćetna kiselina (.1 mL). Bočica je zatvorena i mućkana preko noći na orbitalnom šejkeru. Sledećeg dana smola je filtrirana i oprana 3x sa metanolom, 3x sa DMF, 3x sa CH2Cl2, i konačno 1x sa Et2O. Smola je osušena pod vakuumom i primenjena kao što jeste u narednim reakcijama. Pretpostavljeno je da je opterećenje 0.94mmol/g i korišćeno je kako jeste u narednim koracima.

Priprema C14amin modifikovane 4-(4-formil-3-metoksi-fenoksi)butiril AM smole B

[0603]

[0604] U bočicu od 40 mL je dodata C14amin modifikovana 4-(4-Formil-3-metoksifenoksi)butiril AM smola A (1 g, 0.940 mmol), 0.2 M 2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)sirćetna kiselina u DMF-u (9.40 ml, 1.880 mmol) (99026-115), 0.2M HATU (9.40 ml, 1.880 mmol) u DMF-u, i 0.2 M Hunig-ova baza u DMF-u (9.40 ml, 3.76 mmol). Bočica je zatvorena i mućkana na orbitalnom šejkeru preko noći. Sledećeg dana smola je uklonjena filtriranjem i oprana 3x sa DMF, 3x sa CH2Cl2, 3x sa DMF, 1x sa CH2Cl2, i konačno 1x sa Et2O. Sirova smola je osušena pod visokim vakuumom. Pretpostavljeno je da je opterećenje 0.94mmol/g i korišćeno je kako jeste u narednim koracima.

Priprema primera 11106

[0605]

[0606] Primer 11106 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". C14amin modifikovana 4-(4-Formil-3-metoksi-fenoksi)butiril AM smola B je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent 15-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 13 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98.9%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 5.688 min; ESI-MS(+) m/z 1036.00 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1035.0921 (M+2H) Nađeno: 1035.0925 (M+2H).

Priprema primera 11107

[0607]

[0608] Primer 11107 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". C14amin modifikovana 4-(4-Formil-3-metoksi-fenoksi)butiril AM smola B je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 15-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 12 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99.3%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 5.883 min; ESI-MS(+) m/z 1077.47 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1076.6288 (M+2H) Nađeno: 1076.6286 (M+2H),g

Priprema primera 11108

[0609]

[0610] Primer 11108 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije”. C16 amin modifikovana 4-(4-Formil-3-metoksi-fenoksi)butiril AM smola B je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 15-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 17 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 92%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 6.185 min; ESI-MS(+) m/z 1127.9 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1127.6321 (M+2H) Nađeno: 1127.6329 (M+2H).

Priprema primera 11109

[0611]

[0612] Primer 11109 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije”. C16 amin modifikovana 4-(4-Formil-3-metoksi-fenoksi)butiril AM smola B je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 15-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 23 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 91%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 6.091 min; ESI-MS(+) m/z 1092.87 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1092.1079 (M+2H) Nađeno: 1092.1081 (M+2H).

Priprema primera 11110

[0613]

[0614] Primer 11100 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije”. C16 amin modifikovana 4-(4-Formil-3-metoksi-fenoksi)butiril AM smola B je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 15-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 28 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 94%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 6.488 min; ESI-MS(+) m/z 1125.34 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1124.6268 (M+2H) Nađeno: 1124.6228 (M+2H).

Priprema primera 11111

[0615]

[0616] Primer 11111 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije”. C16 amin modifikovana 4-(4-Formil-3-metoksi-fenoksi)butiril AM smola B je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 15-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 12.9 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 96%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 6.473 min; ESI-MS(+) m/z 1140.55 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1139.6321 (M+2H) Nađeno: 1139.6274 (M+2H).

Priprema C16amin modifikovane 4-(4-Formil-3-metoksi-fenoksi)butiril AM smole C

[0617]

[0618] U bočicu od 20 ml je dodata C16amin modifikovana 4-(4-Formil-3-metoksi-fenoksi)butiril AM smola A (600 mg, 0.540 mmol), 11-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)undekanoinska kiselina (457 mg, 1.080 mmol), DMF (5 mL), 0.2 M HATU u DMF-u (5.40 mL, 1.080 mmol), i 0.2M Hunig-ova baza u DMF-u (5.40 mL, 2.160 mmol). Bočica je zatvorena i mućkana tokom 24 h na orbitalnom šejkeru. Nakon 24 sata reakciona smeša je filtrirana i sirova smola je oprana sa metanolom, 5X sa DMF, 5X CH2Cl2, i konačno sa dietil etrom. Smola je sušena preko noći pod vakuumom. Pretpostavljeno je da je opterećenje 0.94 mmol/g i korišćeno je kako jeste u narednim koracima.

Priprema primera 11112

[0619]

[0620] Primer 11112 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije”. C16 amin modifikovana 4-(4-Formil-3-metoksi-fenoksi)butiril AM smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 15-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 6.958 min; ESI-MS(+) m/z 1160.02 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1159.1865 (M+2H) Nađeno: 1159.1849 (M+2H).

Priprema (S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-6-((S)-5-(terc-butoksi)-5-okso-4-tetradekanamidopentanamido)heksanske kiseline.

[0621]

[0622] U tikvicu od 250 ml sa okruglim dnom je dodata(S)-4-amino-5-(terc-butoksi)-5-oksopentanska kiselina (3 g, 14.76 mmol), CH2Cl2(100 mL), tetradekanoil hlorid (4.01 g, 16.24 mmol), i Hunig-ova baza (5.67 mL, 32.5 mmol). Tikvica je držana pod zaštitnim slojem (eng. blanket) azota zatvorena i mešana na ST tokom 24 h. Nakon 24 sata reakciona smeša je sipana u levak za odvajanje i oprana sa zasić amonijum hloridom. Vodeni sloj je ekstrahovan sa 10% metanol hloroform rastvorom 3 x. Organske frakcije su kombinovane i oprane sa slanim rastvorom. Organski sloj je odvojen, osušen preko Na2SO4i evaporisan u vakuumu dajući (S)-5-(terc-butoksi)-5-okso-4-tetradekanamidopentansku kiselinu (6.1 g, 14.75 mmol, 100 % prinos) kao gusto ulje. Ovaj materijal je primenjen kakav jeste u narednom koraku.<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 4.50 - 4.29 (m, 1H), 3.68 (kvin, J=6.7 Hz, 1H), 3.09 (q, J=7.5 Hz, 1H), 2.43 - 2.27 (m, 2H), 2.27 - 2.06 (m, 2H), 1.73 - 1.55 (m, 2H), 1.47 (s, 9H), 1.39 - 1.17 (m, 20H), 1.00 -0.80 (m, 3H).

[0623] U tikvicu od 50 ml sa okruglim dnom je dodata (S)-5-(terc-butoksi)-5-okso-4-tetradekanamidopentanska kiselina (2 g, 4.84 mmol), DMF (10 mL), perfluorofenil 2,2,2-trifluoroacetat (2.71 g, 9.67 mmol) i PIRIDIN (0.860 mL, 10.64 mmol). Tikvica je zatvorena sa septumom i držana je pod zaštitnim slojem (eng. blanket) azota i mešana preko noći na st. Sledećeg dana reakcija je sipana u zasićeni rastvor limunske kiseline i ekstrahovana sa CH2Cl23x. Organski slojevi su kombinovani i oprani sa slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4i evaporisani u vakuumu. Sirovi proizvod (S)-1-terc-butil 5-(perfluorofenil) 2-tetradekanamidopentandioat (2.65 g, 4.57 mmol, 95 % prinos) je primenjen kakav jeste kakav jeste bez prečišćavanja.

[0624] U tikvicu od 50 ml sa okruglim dnom je dodata (S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-6-aminoheksanska kiselina (1.653 g, 4.49 mmol), DMF (15 mL), (S)-1-terc-butil 5-(perfluorofenil) 2-tetradekanamidopentandioat (2.6 g, 4.49 mmol), i Hunig-ova baza (0.940 mL, 5.38 mmol). Tikvica je zatvorena memranom i držana pod zaštitnim slojem azota. Dopušteno je da se reakcija meša tokom 48 h na st. Nakon 48 h reakcija je bila homogena. Reakciona smeša je sipana u zasićeni rastvor limunske kiseline, i ekstrahovana sa CH2Cl23x.

Organske frakcije su kombinovane, osušene preko Na2SO4 i evaporisane u vakuumu. Sirovo ulje je prečišćeno pomoću silika gel hromatografije eluiranjem sa prvo 100% CH2Cl2, zatim 5% metanolom u 95% CH2Cl2. Čiste frakcije su kombinovane i evaporisane u vakuumu dajući (S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-6-((S)-5-(terc-butoksi)-5-okso-4-tetradekanamidopentanamido)heksansku kiselinu (2.35 g, 2.92 mmol, 65.1 % prinos) kao viskozno ulje.<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 7.78 (d, J=7.5 Hz, 2H), 7.62 (br. s., 2H), 7.41 (t, J=7.4 Hz, 2H), 7.32 (t, J=7.4 Hz, 2H), 6.54 (br. s., 1H), 5.72 (m, 2H), 4.39 (m, 4H), 4.27 -4.14 (m, 1H), 3.28 (m, 2H), 2.26 (m, 4H), 2.15 (m, 2H), 1.92 (m, 2H), 1.62 (m, 4H), 1.48 (s, 9H), 1.26 (br. s., 20H), 0.89 (t, J=6.8 Hz, 3H).

Priprema primera 11114

[0625]

[0626] Primer 11114 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana rink smola E je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 15-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 15 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.978 min; ESI-MS(+) m/z 1275.18 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1274.6803 (M+2H) Nađeno: 1274.6791 (M+2H).

Priprema primera 11115

[0627]

[0628] Primer 11115 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije”. C16 amin modifikovana 4-(4-formil-3-metoksi-fenoksi)butiril AM smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 15-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 4 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 95%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 6.930 min; ESI-MS(+) m/z 1131.54 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1130.6758 (M+2H) Nađeno: 1130.6747 (M+2H).

Priprema primera 11116

[0629]

[0630] Primer 11116 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana rink smola E je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 15-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 25 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 95.2%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 5.106 min; ESI-MS(+) m/z 1247.0 (M+2H) ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1246.1696 (M+2H) Nađeno: 1246.1684 (M+2H).

Priprema primera 11119

[0631]

[0632] Primer 11119 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije”. C16 amin modifikovana 4-(4-Formil-3-metoksi-fenoksi)butiril AM smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 15-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 18 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 93%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 5.968 min; ESI-MS(+) m/z 1189.5 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1188.6813 (M+2H) Nađeno: 1188.6821 (M+2H).

Priprema primera 11120

[0633]

[0634] Primer 11120 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije”. C16 amin modifikovana 4-(4-Formil-3-metoksi-fenoksi)butiril AM smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 15-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 12 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 5.688 min; ESI-MS(+) m/z 1183.6 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1182.6323 (M+2H) Nađeno: 1182.6317 (M+2H).

Priprema primera 11123

[0635]

[0636] Primer 11123 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana rink smola E je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 23 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 95.3%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.773 min; ESI-MS(+) m/z 1276.7 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1275.6643 (M+2H) Nađeno: 1275.6645 (M+2H).

Priprema primera 11124

[0637]

[0638] Primer 11124 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije”. C16 amin modifikovana 4-(4-Formil-3-metoksi-fenoksi)butiril AM smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 15-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 8 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 6.405 min; ESI-MS(+) m/z 1220.3 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1219.1894 (M+2H) Nađeno: 1219.1888 (M+2H).

Priprema primera 11125

[0639]

[0640] Primer 11125 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana rink smola E je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 17 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 95%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.780 min; ESI-MS(+) m/z 1341.8 (M+2H).

Priprema primera 11126

[0641]

Priprema primera 11126A

[0642]

[0643] Primer 11126A je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Rink smola je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 27 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.625 min; ESI-MS(+) m/z 1107.0 (M+2H).

Priprema 1-terc-butil 16-(perfluorofenil) heksadekandioata

[0644]

[0645] U bočicu od 1 drama je dodat 16-(terc-butoksi)-16-oksoheksadekanska kiselina (100 mg, 0.292 mmol), DMF (.8 mL), perfluorofenil 2,2,2-trifluoroacetat (164 mg, 0.584 mmol) i piridin (0.052 mL, 0.642 mmol). Bočica je zatvorena sa septumom i mešana je preko noći na st. Sledećeg dana sirova reakciona smeša je naneta na silika gel kolonu i prečišćena, eluiranjem sa 5% EtOAc/95% Heksani do 30% EtOAc/70% Heksani. Željeni proizvod je bio prvi pik koji eluira. veoma slaba UV Detekcija... Čiste frakcije su kombinovane i evaporisane u vakuumu dajući 1-terc-butil 16-(perfluorofenil) heksadekandioat (132 mg, 0.260 mmol, 89 % prinos) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 2.68 (s, 2H), 2.22 (s, 2H), 1.79 (s, 2H), 1.59 (s, 4H), 1.47 (s, 9H), 1.29 (br. s., 18H).

Priprema 11126B

[0646]

[0647] U bočicu od 1 drama je dodat Primer 11126A (27 mg, 0.012 mmol), DMF (.7 mL), N-etil-N-izopropilpropan-2-amin (9.47 mg, 0.073 mmol), i 1-terc-butil 16-(perfluorofenil) heksadekandioat (11.18 mg, 0.022 mmol). Dozvoljeno je da se reakcija meša preko noći na st. Sledećeg dana reakcija je bila potpuna pomoću LC/MS. Sirova reakcija je sipana u dietil etar i formiran je talog. Talog je prikupljen pomoću centrifuge i dietil etar je odstranjen dekantovanjem. Sirova čvrsta supstanca 14 mg je preneta u sledeći korak kakav jeste bez prečišćavanja. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 5.428 min; ESI-MS(+) m/z 1269.3 (M+2H).

[0648] U bočicu od 1 drama je dodat Primer 11126B (14 mg, 5.52 µmol), i 0.8 mL standardnog rastvora za cepanje. Reakcija je mešana na ST tokom 15 min i reakcija je proverena pomoću LC/MS. Reakcija je bila potpuna i sirova reakciona smeša je sipana u 15 mL dietil etra. Dobijena čvrsta supstanca je prikupljena nakon centrifugiranja. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 15-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 6 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98.6%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.040 min; ESI-MS(+) m/z 1241.1 (M+2H) ESI-HRMS(+) m/z:Izračunato: 1240.1458 (M+2H)

Nađeno: 1240.1445 (M+2H).

Priprema primera 11128

[0649]

[0650] Primer 11128 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije”. C16 amin modifikovana 4-(4-Formil-3-metoksi-fenoksi)butiril AM smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 15-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 20 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98.3%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 5.568 min; ESI-MS(+) m/z 1277.8 (M+2H).

Priprema modifikovane 2-hlorotritil hlorid smole E

[0651]

[0652] U scint bočicu od 20 ml je dodata (S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-4-(terc-butoksi)-4-oksobutanska kiselina (0.370 g, .9 mmol), 2-hlorotritil smola 1.42 mmol/g opterećenje (2.057 g, 2.88 mmol), CH2Cl2(15 mL), i Hunig-ova baza (1.022 mL, 5.85 mmol). Bočica je zatvorena i mućkana na orbitalnom šejkeru preko noći na st. Sledećeg dana reakcija je razblažena sa 2 ml metanola i mućkana tokom dodatna 2 sata. Smola je zatim izdvojena filtriranjem, oprana sa DMF 3x, CH2Cl24x, i konačno dietil etrom. Smola je osušena u vakuumu i primenjena kao što jeste za sintezu peptida sa pretpostavljenim opterećenjem od 0.44 mekv/g.

Priprema primera 11129

[0653]

[0654] Primer 11129 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola E je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 48 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 95.6%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.828 min; ESI-MS(+) m/z 1070.4 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1069.5426 (M+2H) Nađeno: 1069.5392 (M+2H).

Priprema modifikovane 2-hlorotritil hlorid smole F

[0655]

U scint bočicu od 20 ml je dodata (S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-5-(tercbutoksi)-5-oksopentanska kiselina (0.383 g, .9 mmol), 2-Hlorotritil smola 1.42 mmol/g opterećenje (2.057 g, 2.88 mmol), CH2Cl2(15 mL), i Hunig-ova baza (1.022 mL, 5.85 mmol). Bočica je zatvorena i mućkana na orbitalnom šejkeru preko noći na st. Sledećeg dana reakcija je razblažena sa 2 ml metanola i mućkana tokom dodatna 2 sata. Smola je zatim izdvojena filtriranjem, oprana sa DMF 3x, CH2Cl24x, i konačno dietil etrom. Smola je osušena u vakuumu i primenjena kao što jeste za sintezu peptida sa pretpostavljenim opterećenjem od 0.44 mekv/g.

Priprema primera 11130

[0656]

[0657] Primer 11130 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola F je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 32 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.803 min; ESI-MS(+) m/z 1077.6 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1076.5504 (M+2H) Nađeno: 1076.5462 (M+2H).

Priprema primera 11131

[0658]

[0659] Primer 11131 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola E je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 40 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98.8%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.720 min; ESI-MS(+) m/z 1067.0 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1066.0321 (M+2H) Nađeno: 1066.0323 (M+2H).

Priprema primera 11132

[0660]

[0661] Primer 11132 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola F je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 16 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 95.9%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.725 min; ESI-MS(+) m/z 1074.0 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1073.0399 (M+2H) Nađeno: 1073.0393 (M+2H).

Priprema PEG amin modifikovane 4-(4-Formil-3-metoksi-fenoksi)butiril AM smole D

[0662]

[0663] U posudu od 50 ml pod pritiskom je dodata 4-(4-formil-3-metoksi-fenoksi)butiril AM smola 0.94 mmol/g opterećenje (1.5 g, 1.350 mmol), (9H-fluoren-9-il)metil (3-(2-(2-(3-aminopropoksi)etoksi)etoksi)propil)karbamat hidrohlorid (0.711 g, 1.485 mmol), natrijum triacetoksihidroborat (1.431 g, 6.75 mmol), DMF (20 mL), i sirćetna kiselina (.2 mL). Tikvica je zatvorena i mućkana preko noći na mešalici koja simulira pokret ručnog zgloba. Sledećeg dana smola je izdvojena filtriranjem i oprana sa metanolom 2x, DMF 3x, i CH2Cl24 x.. Smola je sušena preko noći pod vakuumom. Pretpostavljeno je da je opterećenje 0.94mmol/g i primenjena kakva jeste u narednom koraku.

Priprema PEG amin modifikovane 4-(4-Formil-3-metoksi-fenoksi)butiril AM smole E

[0664]

[0665] U bočicu od 7 ml je dodata PEG amin modifikovana 4-(4-Formil-3-metoksi-fenoksi)butiril AM smola D (0.222 g, .2 mmol), 16-(terc-butoksi)-16-oksoheksadekanska kiselina (0.137 g, 0.400 mmol), HATU (2.000 mL, 0.400 mmol), N-etil-N-izopropilpropan-2-amin (2.000 mL, 0.800 mmol) i DMF (4 mL). Bočica je mućkana na mešalici koja simulira pokret ručnog zgloba preko noći. Sledećeg dana smola je filtrirana i oprana sa DMF 3 x, i CH2Cl24 x, zatim Et2O. Smola je sušena preko noći pod vakuumom. Pretpostavljeno je da je opterećenje 0.94mmol/g i korišćeno je kako jeste u narednim koracima.

Priprema primera 11133

[0666]

[0667] Primer 11133 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". PEG amin modifikovana 4-(4-Formil-3-metoksi-fenoksi)butiril AM smola E je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent 15-100% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 3 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99.6%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 5.353 min; ESI-MS(+) m/z 1167.1 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1166.1391 (M+2H) Nađeno: 1166.1370 (M+2H).

Priprema 1-terc-butil 16-(perfluorofenil) heksadekandioata

[0668]

[0669] U tikvicu od 50 ml sa okruglim dnom je dodata 18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanska kiselina (807 mg, 2.178 mmol), N,N-dimetilformamid (8 mL), piridin (379 mg, 4.79 mmol), i perfluorofenil 2,2,2-trifluoroacetat (1220 mg, 4.36 mmol). Tikvica je zatvorena sa septumom i držana pod zaštitnim slojem azota i mešana preko noći na st. Sledećeg dana reakcija je sipana u zasićeni rastvor limunske kiseline i ekstrahovana sa CH2Cl23x. Organski slojevi su kombinovani i oprani slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4i evaporisani u vakuumu. Sirovi proizvod 1-tercbutil 18-(perfluorofenil) oktadekandioat (1.1 g, 2.050 mmol, 94 % prinos) je primenjen kakav jeste bez prečišćavanja.

Priprema (S)-5-(terc-butoksi)-4-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)-5-oksopentanske kiseline

[0670]

[0671] U scint bočicu od 20 ml je dodat 1-terc-butil 18-(perfluorofenil) oktadekandioat (500 mg, 0.932 mmol), (S)-4-amino-5-(terc-butoksi)-5-oksopentanska kiselina (189 mg, 0.932 mmol), N,N-dimetilformamid (3 mL), i N-etil-N-izopropilpropan-2-amin (157 mg, 1.211 mmol). Dozvoljeno je da se reakcija meša tokom 24 h na st. Nakon 24 h reakcija je bila homogena. Reakciona smeša je sipana u zasićeni rastvor limunske kiseline, i ekstrahovana sa CH2Cl23x. Organske frakcije su kombinovane, oprana sa slanim rastvorom, osušene preko Na2SO4i evaporisane u vakuumu. Sirovo ulje (S)-5-(terc-butoksi)-4-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)-5-oksopentanske kiseline (518 mg, 0.932 mmol, 100 % prinos) je primenjeno kakvo jeste bez prečišćavanja.<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 6.33 (m., 1H), 4.56 (m, 1H), 2.45 (m, 2H), 2.24 (m, 5H), 1.95 (m, 1H), 1.61 (m., 5H), 1.49 (s, 9H), 1.46 (s, 9H), 1.26 (m, 23H)

Priprema (S)-1-terc-butil 5-(perfluorofenil) 2-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)pentandioata

[0672]

[0673] U scint bočicu od 20 ml je dodata(S)-5-(terc-butoksi)-4-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)-5-oksopentanska kiselina (518 mg, 0.932 mmol),N,N-dimetilformamid (3 mL), piridin (162 mg, 2.050 mmol), i perfluorofenil 2,2,2-trifluoroacetat (522 mg, 1.864 mmol). Dozvoljeno je da se reakcija meša tokom 24 h na st. Nakon 24 h reakciona smeša je sipana u zasićeni rastvor limunske kiseline, i ekstrahovana sa CH2Cl23x. Organske frakcije su kombinovane, oprane sa slanim rastvorom, osušene preko Na2SO4i evaporisane u vakuumu. Sirovo ulje (S)-1-terc-butil 5-(perfluorofenil) 2-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)pentandioata (670 mg, 0.928 mmol, 100 % prinos) je primenjeno kakvo jeste u narednom koraku.

Priprema (S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-6-((S)-5-(terc-butoksi)-4-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)-5-oksopentanamido)heksanske kiseline

[0674]

[0675] U bočicu od 1 drama je dodat (S)-1-terc-butil 5-(perfluorofenil) 2-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)pentandioat (330 mg, 0.457 mmol), N,N-Dimetilformamid (2 mL), N-etil-N-izopropilpropan-2-amin (177 mg, 1.372 mmol), i (S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-6-aminoheksanska kiselina (168 mg, 0.457 mmol). Dozvoljeno je da se reakcija meša tokom 24 h na st. Nakon 24 h reakcija je bila homogena. Reakciona smeša je sipana u zasićeni rastvor limunske kiseline, i ekstrahovana sa CH2Cl23x. Organske frakcije su kombinovane, osušene preko Na2SO4i evaporisane u vakuumu. Sirovo ulje je prečišćeno pomoću silika gel hromatografije eluiranjem sa prvo 100% CH2Cl2, zatim 5% metanolom u 95% CH2Cl2. Čiste frakcije su kombinovane i evaporisane u vakuumu dajući (S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-6-((S)-5-(terc-butoksi)-4-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)-5-oksopentanamido)heksansku kiselinu (106 mg, 0.117 mmol, 25.6 % prinos) kao viskozno ulje. Kolona PHENOMENEX-LUNA 2.0 X 30mm 3um čestice; Mobilna faza A: 10:90 metanol:voda sa 10 mM trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 90:10 metanol:voda sa 10 mM trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 0%B, 0-100% B tokom 5 minuta, zatim 1.0-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV pri 220 nm. Analiza LCMS: Vreme zadržavanja = 5.740 min; ESI-MS(+) m/z 906.86 (M+H).

Priprema modifikovane 2-hlorotritil hlorid smole G

[0676]

[0677] U bočicu od 20 ml za scintilaciju je dodata 2-hlorotritil smola 1.42 mmol/g opterećenje (267 mg, 0.374 mmol), CH2Cl2(4 mL), (S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-6-((S)-5-(terc-butoksi)-4-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)-5-oksopentanamido)heksanska kiselina (106 mg, 0.117 mmol), i N-etil-N-izopropilpropan-2-amin (106 mg, 0.819 mmol). Bočica je zatvorena i mešana preko noći na šejkeru koji simulira pokret ručnog zgloba. Sledećeg dana reakcija je završena dodavanjem 2 ml metanola i mešanjem tikvice dodatna 2 h. Smola je zatim filtrirana i oprana sa CH2Cl2, DMF 3x, CH2Cl23x i konačno dietil etrom. Smola je osušena u vakuumu i primenjena kao što jeste za sintezu peptida sa pretpostavljenim opterećenjem od 0.44 mekv/g.

Priprema primera 11134

[0678]

[0679] Primer 11134 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola G je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 30 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 26 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.280 min; ESI-MS(+) m/z 1222.0 (M+2H).

Priprema primera 11135

[0680]

[0681] Primer 11135 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola D je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 24 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.141 min.

Priprema primera 11136

[0682]

[0683] Primer 11136 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 22 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 95.2%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.930 min; ESI-MS(+) m/z 1141.0969 (M+2H).

Priprema modifikovane 2-hlorotritil hlorid smole H

[0684]

Korak 1:

[0685]

[0686] Difenil fosforazidat (1.738 ml, 8.04 mmol) je dodat u rastvor 18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanske kiseline (1.49 g, 4.02 mmol) i trietilamina (1.115 ml, 8.04 mmol) u toluenu (16.08 ml) na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je zagrevana pod refluksom preko noći. Reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu i kvenčovana sa 5% rastvorom limunske kiseline. Smeša je koncentrovana na polovinu zapremine u vakuumu i zatim ekstrahovana 3 puta sa dihlorometanom. Kombinovane organske supstance su oprane sa slanim rastvorom, osušene preko MgSO4, filtrirane, i koncentrovane da se dobije sirovi proizvod. Sirovi proizvod je rastvoren u dihlorometanu i nanet na 40 g ISCO silika gel kertridž. Proizvod je eluiran pomoću 0-25% gradijenta etil acetat/Heksani. Slične frakcije su kombinovane i koncentrovane da se dobije tercbutil 17-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)heptadekanoat (0.384 g, 0.681 mmol, 16.94 % prinos) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 7.78 (d, J=7.3 Hz, 2H), 7.61 (d, J=7.5 Hz, 2H), 7.41 (t, J=7.4 Hz, 2H), 7.33 (td, J=7.4, 1.0 Hz, 2H), 4.41 (d, J=7.0 Hz, 2H), 4.24 (d, J=6.8 Hz, 1H), 3.20 (q, J=6.8 Hz, 2H), 2.21 (t, J=7.5 Hz, 2H), 1.61 - 1.48 (m, 4H), 1.45 (s, 9H), 1.26 (s, 24H).

Korak 2:

[0687]

[0688] Trifluorosirćetna kiselina (1.5 mL, 19.47 mmol) je dodata u rastvor terc-butil 17-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)heptadekanoata (0.375 g, 0.665 mmol) u dihlorometanu (5 mL). Reakciona smeša je iz žute postala tamna nakon 2 minuta. Rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 3 sata. Reakciona smeša je proverena pomoću<1>HNMR i određeno je da je završena u ovo vreme. Reakciona smeša je koncentrovana u vakuumu. Ostatak koji se dobija je preuzet u 5 ml dihlorometana i ponovo koncentrovan. Ovaj proces je ponovljen 3 puta i žuta čvrsta supstanca koja se dobija je osušena pod vakuumom preko noći. 17-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)heptadekanska kiselina je izolovana u kvantitativnom prinosu kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 7.78 (d, J=7.5 Hz, 2H), 7.63 - 7.58 (m, 2H), 7.41 (t, J=7.4 Hz, 2H), 7.33 (td, J=7.5, 1.1 Hz, 2H), 4.41 (d, J=6.8 Hz, 2H), 4.27 - 4.19 (m, 1H), 3.25 - 3.09 (m, 2H), 2.36 (t, J=7.5 Hz, 2H), 1.70 - 1.59 (m, 2H), 1.55 - 1.40 (m, 2H), 1.27 (br. s., 24H).

Korak 3:

[0689]

[0690] U bočicu od 20 ml je dodata 2-hlorotritil hlorid smola (1.605 g, 1.926 mmol) i 7 ml dihlorometana da smola nabubri.9-((((16-karboksiheksadecil)karbamoil )oksi)metil)-9H-fluoren-1-ilijum (0.305 g, 0.602 mmol) u 5 ml dihlorometana i N-etil-N-izopropilpropan-2-amin (0.841 ml, 4.82 mmol) su dodati u bočicu koja sadrži smolu. Posuda je zatvorena i mućkana preko noći na sobnoj temperaturi na mešalici koja simulira pokret ručnog zgloba. Sledećeg dana reakcija je razblažena sa 5 ml metanola, i posuda je mućkana tokom 2 h da se kvenčuje bilo kakva neizreagovana hlorotritil smola. Smola je filtrirana, i oprana sa DMF tri puta, CH2Cl23 puta, i konačno Et2O-om. Smola koja se dobija je osušena na vazduhu i primenjena kakva jeste pod pretpostavkom 0.44 mekv/g opterećenja.

Priprema modifikovane 2-hlorotritil hlorid smole I

[0691]

[0692] Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola I je napravljena praćenjem identičnog postupka za modifikovanu 2-hlorotritil smolu A.

Priprema modifikovane 2-hlorotritil hlorid smole J

[0693]

[0694] Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola J je napravljena praćenjem identičnog postupka za modifikovanu 2-hlorotritil smolu A.

Priprema modifikovane 2-hlorotritil hlorid smole K

[0695]

[0696] Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola K je napravljena praćenjem identičnog postupka za modifikovanu 2-hlorotritil smolu A.

Priprema modifikovane 2-hlorotritil hlorid smole L

[0697]

[0698] Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola L je napravljena praćenjem identičnog postupka za modifikovanu 2-hlorotritil smolu A.

Priprema modifikovane 2-hlorotritil hlorid smole M

[0699]

Korak 1: Priprema 18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanske kiseline:

[0700]

[0701] Suspenzija oktadekandionske kiseline (15 g, 47.7 mmol) u toluenu (191 ml) je dovedena do refluksa u tikvici od 1 l sa okruglim dnom i 3 grla. Kada je sva kiselina bila u rastvoru, 1,1-diterc-butoksi-N,N-dimetilmetanamin (22.87 ml, 95 mmol) je dodat u kapima tokom 30 minuta. Reakciona smeša je zagrevana pod refluksom preko noći. Reakcija je zaustavljena nakon 20 ukupnih sati zagrevanja. Reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu dajući talog čvrstih supstanci. Smeša je filtrirana vakuumskom filtracijom. Bela čvrsta supstanca koja se dobija je suspendovana u 200 ml dihlorometana i mešana tokom 15 minuta. Preostale čvrste supstance su uklonjene putem vakuumske filtracije. Prikupljene čvrste supstance su ponovo suspendovane u dihlorometanu i mešane tokom 15 minuta. Nakon druge filtracije kombinovani filtrati su koncentrovani u vakuumu i dobijeni beli prašak osušen pod vakuumom. 18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanska kiselina (10.14 g, 27.4 mmol, 57.4 % prinos) je izolovana kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 2.35 (t, J=7.5 Hz, 2H), 2.21 (t, J=7.5 Hz, 2H), 1.70 - 1.52 (m, 4H), 1.45 (s, 9H), 1.36 - 1.22 (m, 24H).

Korak 2:

[0702]

[0703] U tikvicu od 250 ml sa okruglim dnom je dodata 18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanska kiselina (8.58 g, 23.15 mmol), piridin (4.68 ml, 57.9 mmol), DMF (50 ml), i perfluorofenil 2,2,2-trifluoroacetat (7.96 ml, 46.3 mmol). Tikvica je zatvorena sa septumom i držana pod atmosferom azota i mešana tokom noći na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je sipana u zasićeni rastvor limunske kiseline i ekstrahovana sa CH2Cl2tri puta. Organski slojevi su kombinovani i oprani slanim rastvorom, osušeni preko MgSO4, i evaporisani u vakuumu. Sirovi proizvod je prečišćen silika gel hromatografijom eluiranjem sa 0% etil acetat/100% Heksani do 55% etil acetat/45% Heksani. Čiste frakcije su kombinovane i evaporisane u vakuumu dajući 1-terc-butil 18-(perfluorofenil) oktadekandioat (8.37 g, 15.60 mmol, 67.4 % prinos) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 2.66 (t, J=7.5 Hz, 2H), 2.23 - 2.19 (m, 2H), 1.84 - 1.73 (m, 2H), 1.59 (d, J=7.3 Hz, 2H), 1.45 (s, 9H), 1.44 - 1.38 (m, 2H), 1.33 - 1.25 (m, 24H).

Korak 3:

[0704]

[0705] U tikvicu od 500 ml sa okruglim dnom je dodat 1-terc-butil 18-(perfluorofenil) oktadekandioat (14.2 g, 26.5 mmol), H-GLU-OBZL (5.71 g, 24.06 mmol), DMF (160 ml), i N-etil-N-izopropilpropan-2-amin (12.60 ml, 72.2 mmol). Tikvica je zatvorena sa septumom i držana pod atmosferom azota i mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je bila heterogena. Nakon 25 sati reakciona smeša je sipana u zasićeni rastvor limunske kiseline i ekstrahovana sa CH2Cl23x. Organski slojevi su kombinovani i oprani slanim rastvorom, osušeni preko MgSO4i evaporisani u vakuumu. Sirovi proizvod je prečišćen na silika gel hromatografiji eluiranjem sa 0-7% gradijentom CH2Cl2/MeOH. Čiste frakcije su kombinovane i evaporisane u vakuumu dajući (S)-5-(benziloksi)-4-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)-5-oksopentansku kiselinu (7.74 g, 13.12 mmol, 54.6 % prinos) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 7.41 - 7.30 (m, 5H), 6.28 (d, J=7.8 Hz, 1H), 5.18 (s, 2H), 4.70 (td, J=8.0, 5.0 Hz, 1H), 2.46 - 2.32 (m, 2H), 2.22 (q, J=7.9 Hz, 5H), 2.05 - 1.91 (m, 1H), 1.60 (dt, J=15.3, 7.4 Hz, 4H), 1.45 (s, 9H), 1.30 - 1.25 (m, 24H).

Korak 4:

[0706]

[0707] U tikvicu od 100 ml sa okruglim dnom je dodata(S)-5-(benziloksi)-4-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)-5-oksopentanska kiselina (1.69 g, 2.87 mmol), dihlorometan (14.33 ml), (9H-fluoren-9-il)metil (3-(2-(2-(3-aminopropoksi)etoksi)etoksi)propil)karbamat hidrohlorid (1.373 g, 2.87 mmol), 2-(3H-[1,2,3]triazolo[4,5-b]piridin-3-il)-1,1,3,3-tetrametilisouronijum heksafluorofosfat(V) (1.416 g, 3.72 mmol), i N-etil-N-izopropilpropan-2-amin (1.497 ml, 8.60 mmol). Tikvica je zatvorena sa septumom i držana pod zaštitnim slojem azota i mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Reakcija je bila potpuna pomoću LC/MS. Rastvarač je evaporisan u vakuumu. Sirovi proizvod je prečišćen na silika gel hromatografiji eluiranjem sa 20% aceton/Heksani do 60% aceton/40% Heksani. Čiste frakcije su kombinovane i evaporisane u vakuumu dajući(S)-terc-butil 22-((benziloksi)karbonil)-1-(9H-fluoren-9-il)-3,19,24-triokso-2,8,11,14-tetraoksa-4,18,23-triazahentetrakontan-41-oat (2.54 g, 2.504 mmol, 87 % prinos) kao žutu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 7.76 (d, J=7.5 Hz, 2H), 7.61 (d, J=7.5 Hz, 2H), 7.43 - 7.37 (m, 2H), 7.36 - 7.28 (m, 7H), 6.83 (d, J=7.3 Hz, 1H), 6.54 (br. s., 1H), 5.51 - 5.43 (m, 1H), 5.21 - 5.10 (m, 2H), 4.58 - 4.50 (m, 1H), 4.40 (d, J=7.0 Hz, 2H), 4.25 - 4.17 (m, 1H), 3.65 - 3.48 (m, 12H), 3.37 - 3.25 (m, 4H), 2.23 - 2.18 (m, 7H), 2.07 - 1.94 (m, 1H), 1.76 - 1.71 (m, 2H), 1.66 - 1.53 (m, 6H), 1.45 (s, 9H), 1.30 - 1.23 (m, 24H).

Korak 5:

[0708]

[0709] U tikvicu od 100 ml sa okruglim dnom je dodat(S)-terc-butil 22-((benziloksi)karbonil)-1-(9H-fluoren-9-il)-3,19,24-triokso-2,8,11,14-tetraoksa-4,18,23-triazahentetrakontan-41-oat (0.95 g, 0.937 mmol), metanol (20 ml), i 10% paladijum na ugljeniku (0.100 g, 0.094 mmol). Tikvica je zatvorena sa septumom i napunjena vodonikom preko balona. Dozvoljeno je da se smeša meša preko noći. Reakcija je kontrolisana pomoću LC/MS i bila je potpuna. Reakcija je filtrirana kroz celit da se ukloni katalizator filtrat je evaporisan u vakuumu da se dobije (S)-22-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)-1-(9H-fluoren-9-il)-3,19-diokso-2,8,11,14-tetraoksa-4,18-diazatrikozan-23-ska kiselina (0.76 g, 0.822 mmol, 88 % prinos). Ovaj materijal je primenjen kakav jeste bez prečišćavanja. LC/MS: (M+H)<+>= 925.10.

Korak 6: Modifikovana 2-hlorotritil smola M

[0710]

[0711] U posudu za peptid od 75 ml je dodata 2-hlorotritil hlorid smola (1.580 g, 2.53 mmol) i dihlorometan (15.80 ml). Nakon 10 minuta, (S)-22-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)-1-(9H-fluoren-9-il)-3,19-diokso-2,8,11,14-tetraoksa-4,18-diazatrikozan-23-ska kiselina (0.73 g, 0.790 mmol), 1-hloro-4-metilbenzen (0.093 ml, 0.790 mmol), i N-etil-N-izopropilpropan-2-amin (1.101 ml, 6.32 mmol) su dodati. Posuda je zatvorena i mućkana na mešalici koja simulira pokret ručnog zgloba tokom 45 minuta. LC/MS analiza poređenja odnosa internog standarda, 1-hloro-4-metilbenzena (68.1 mg, 0.538 mmol) naspram polazne kiseline ukazuje da je reakcija potpuna ili na potpunu potrošnju kiseline. Smola je zatim razblažena sa 20 ml rastvora 9:1 Metanol / Hunigova baza i brzo filtrirana i oprana sa DMF tri puta, CH2Cl23 puta, i konačno dietil etrom. Smola je osušena u vakuumu i primenjena kao što jeste za sintezu peptida sa pretpostavljenim opterećenjem od 0.5 mekv/g.

Priprema modifikovane 2-hlorotritil hlorid smole N

[0712]

[0713] Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola N je napravljena praćenjem identičnog postupka za modifikovanu 2-hlorotritil smolu M.

Priprema modifikovane 2-hlorotritil hlorid smole O

[0714]

[0715] Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola O je napravljena praćenjem identičnog postupka za modifikovanu 2-hlorotritil smolu M.

Priprema modifikovane 2-hlorotritil hlorid smole P

[0716]

[0717] Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola P je napravljena praćenjem identičnog postupka za modifikovanu 2-hlorotritil smolu M.

Priprema modifikovane 2-hlorotritil hlorid smole Q

[0718]

[0719] Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola Q je napravljena praćenjem identičnog postupka za modifikovanu 2-hlorotritil smolu M.

Priprema modifikovane 2-hlorotritil hlorid smole R

[0720]

[0721] U posudu za peptide je dodata 5-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)pentanska kiselina (.118 g, 0.348 mmol), Hlorotritil smola (0.795 g, 1.113 mmol), N-etil-N-izopropilpropan-2-amin (0.424 mL, 2.434 mmol),i CH2Cl2(6 mL). Posuda je zatvorena i mešana preko noći na šejkeru koji simulira pokret ručnog zgloba. Sledećeg dana reakcija je završena dodavanjem 3 ml metanola i mućkanjem tikvice tokom dodatna 2 h. Smola je zatim filtrirana i oprana sa CH2Cl2, DMF 3x, CH2Cl23x i konačno dietil etrom. Smola je osušena u vakuumu i korišćena kakva jeste, pretpostavljeno opterećenje od 0.44 mekv/g je primenjeno za pripremu željenih peptida.

Priprema primera 11137

[0722]

[0723] Primer 11137 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola R je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 16 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 92.2%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.120 min.

Priprema primera 11138

[0724]

[0725] Primer 11138 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 95.1%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.641 min; ESI-MS(+) m/z 1159.1391 (M+2H).

Priprema primera 11139

[0726]

[0727] Primer 11139 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 6 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.286 min; ESI-MS(+) m/z 1213.6656 (M+2H).

Priprema primera 11140

[0728]

[0729] Primer 11140 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola G je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 6 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 97.3%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.435 min.

Priprema modifikovane 2-hlorotritil hlorid smole S

[0730]

Korak 1:

[0731]

[0732] U tikvicu od 50 ml sa okruglim dnom je dodat H-LYS(FMOC)-OH (367 mg, 0.996 mmol), N,N-Dimetilformamid (8 mL), 1-terc-butil 18-(perfluorofenil) oktadekandioat (641 mg, 1.195 mmol), i Hunig-ova baza (0.522 mL, 2.99 mmol). Tikvica je zatvorena sa septumom i držana pod zaštitnim slojem azota i mešana preko noći na st. Sledećeg dana reakcija je sipana u zasićeni rastvor limunske kiseline i ekstrahovana sa CH2Cl23x. Organski slojevi su kombinovani i oprani slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4 i evaporisani u vakuumu. Sirovi proizvod je prečišćen na silika gel hromatografiji eluiranjem sa 100% CH2Cl2zatim 5% MeOH-om u 95% CH2Cl2. Čiste frakcije su kombinovane i evaporisane u vakuumu dajući (S)-6-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-2-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)heksansku kiselinu (332 mg, 0.460 mmol, 46.2 % prinos).<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 7.79 (d, J=7.5 Hz, 2H), 7.60 (d, J=7.3 Hz, 2H), 7.47 - 7.38 (m, 2H), 7.37 - 7.30 (m, 2H), 6.44 (m, 1H), 5.00 (t, J=6.3 Hz, 1H), 4.60 - 4.50 (m, 1H), 4.50 - 4.33 (m, 2H), 4.30 - 4.14 (m, 1H), 3.22 (m, 2H), 2.42 - 2.33 (m, 1H), 2.22 (t, J=7.5 Hz, 4H), 1.94 (br. s., 1H), 1.80 (m, 1H), 1.71 - 1.51 (m, 6H), 1.48 - 1.45 (m, 9H), 1.38 - 1.12 (m, 24H).

Korak 2:

[0733]

[0734] U posudu za peptide je dodata Hlorotritil smola (921 mg, 1.474 mmol), (S)-6-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-2-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)heksanska kiselina (332 mg, 0.460 mmol), CH2Cl2(10 mL), 1-hloro-4-metilbenzen (17.49 mg, 0.138 mmol), i N-etil-N-izopropilpropan-2-amin (0.561 mL, 3.22 mmol). Posuda je zatvorena i mućkana na mešalici koja simulira pokret ručnog zgloba tokom 30 min. Reakcija je završena pomoću analiziranja LC/MS i poređenjem odnosa internog standarda 1-hloro-4-metilbenzena (17.49 mg, 0.138 mmol) naspram polazne kiseline. Smola je zatim razblažena sa 20 ml rastvora 9:1 Metanol / Hunig-ova baza i brzo filtrirana i oprana sa DMF 3x, CH2Cl22x i konačno dietil etrom. Smola je osušena u vakuumu i primenjena je kakva jeste sa pretpostavljenim opterećenjem od 0.5 mekv/g za sintezu željenih proteina.

Priprema primera 11141

[0735]

[0736] Primer 11141 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola S je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 12 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 95.9%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 5.230 min; ESI-MS(+) m/z 1157.1375 (M+2H).

Priprema primera 11142

[0737]

[0738] Primer 11142 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola S je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 9 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 97.6%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.743 min; ESI-MS(+) m/z 1279.7212 (M+2H).

Priprema primera 11143

[0739]

[0740] Primer 11143 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola S je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 3 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.895 min; ESI-MS(+) m/z 1128.6300 (M+2H).

Priprema primera 11144

[0741]

[0742] Primer 11139 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 6 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.286 min; ESI-MS(+) m/z 1213.6656 (M+2H).

Priprema primera 11145

[0743]

[0744] Primer 11145 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 13 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.505 min; ESI-MS(+) m/z 1167.6096 (M+2H).

Priprema primera 11146

[0745]

[0746] Primer 11146 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola S je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 6 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.691 min; ESI-MS(+) m/z 1214.1614 (M+2H).

Priprema primera 11147

[0747]

[0748] Primer 11147 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 24 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 89.3%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.501 min; ESI-MS(+) m/z 1209.0971 (M+2H).

Priprema primera 11148

[0749]

[0750] Primer 11148 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 14 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.696 min; ESI-MS(+) m/z 1151.5832 (M+2H).

Priprema primera 11149

[0751]

[0752] Primer 11149 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 18 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 92.1%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.865 min; ESI-MS(+) m/z 1051.5311 (M+2H).

Priprema primera 11150

[0753]

[0754] Primer 11150 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola G je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 6 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.425 min; ESI-MS(+) m/z 1278.6850 (M+2H).

Priprema primera 11151

[0755]

[0756] Primer 11151 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 11 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98.8%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.235 min; ESI-MS(+) m/z 1167.1178 (M+2H).

Priprema primera 11152

[0757]

[0758] Primer 11152 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola M je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 96.9%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.945 min; ESI-MS(+) m/z 1230.1853 (M+2H).

Priprema modifikovane 2-hlorotritil hlorid smole T

[0759]

Korak 1:

[0760]

[0761] U tikvicu od 50 ml sa okruglim dnom je dodata(S)-4-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-2-aminobutanska kiselina (200 mg, 0.588 mmol), N,N-dimetilformamid (5 mL), 1-terc-butil 18-(perfluorofenil) oktadekandioat (347 mg, 0.646 mmol), i Hunig-ova baza (0.308 mL, 1.763 mmol). Tikvica je zatvorena sa septumom i držana pod zaštitnim slojem azota i mešana preko noći na st. Sledećeg dana reakcija je sipana u zasićeni rastvor limunske kiseline i ekstrahovana sa CH2Cl23x. Organski slojevi su kombinovani i oprani slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4i evaporisani u vakuumu. Sirovi proizvod je prečišćen na silika gel hromatografiji eluiranjem sa 100% CH2Cl2zatim 5% MeOH-om u 95% CH2Cl2. Čiste frakcije su kombinovane i evaporisane u vakuumu dajući (S)-4-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-2-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)butansku kiselinu (67 mg, 0.097 mmol, 16.46 % prinos). Kolona: X-Bridge C18, 2.0 x 50 mm, 3.5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 0%B, 0-100% B tokom 5 minuta, zatim 1.0-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV pri 220 nm. Vreme zadržavanja = 3.866 min; ESI-MS(-) m/z 691.6 (M-H).

Korak 2:

[0762]

[0763] U bočicu od 20 ml za scintilaciju je dodata (S)-4-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-2-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)butanska kiselina (64 mg, 0.092 mmol), Hlorotritil smola (196 mg, 0.314 mmol), CH2Cl2(4 mL), i N-etil-N-izopropilpropan-2-amin (0.113 mL, 0.647 mmol). Bočica je zatvorena i mešana preko noći na šejkeru koji simulira pokret ručnog zgloba. Sledećeg dana reakcija je završena dodavanjem 3 ml metanola i mućkanjem tikvice dodatni 1 h. Smola je zatim filtrirana i oprana sa CH2Cl2, DMF 3x, CH2Cl23x i konačno dietil etrom. Smola je primenjena kakva jeste sa pretpostavljenim opterećenjem od 0.5 mekv/g za sledeće korake sinteze.

Korak 3:

[0764]

[0765] U posudu za peptide je je dodata naznačena smola (0.209 g, 0.092 mmol), DMF (3 mL), PIPERIDIN (0.182 mL, 1.840 mmol) i posuda je zatvorena i mućkana na mešalici koja simulira pokret ručnog zgloba tokom 1h. Nakon 1 sata, smola je zatim filtrirana i oprana sa CH2Cl2, DMF 3x, CH2Cl23x i konačno dietil etrom. Smola je osušena u vakuumu i korišćena kakva jeste u narednom koraku. Smola je primenjena kakva jeste sa pretpostavljenim opterećenjem od 0.5 mekv/g za sledeće korake sinteze.

Korak 4:

[0766]

[0767] U tikvicu od 50 ml sa okruglim dnom je dodat 1-(9-FLUORENILMETILOKSIKARBONIL-AMINO)-4,7,10-TRIOKSA-13-TRIDEKANAMIN HIDROHLORID (1g, 2.088 mmol), THF (15 mL), Hunig-ova baza (0.474 mL, 2.71 mmol), i 1,1'-KARBONILDIIMIDAZOL (0.372 g, 2.296 mmol). Rastvor je mešan pod zaštitnim slojem azota preko noći. Sledećeg dana reakcija je kontrolisana pomoću LC/MS i reakcija se završila. Reakcioni rastvarač je evaporisan u vakuumu i sirovo ulje je prečišćeno pomoću silika gel hromatografije eluiranjem sa 3%/97% meoH/CH2CL2. Čiste frakcije su kombinovane i evaporisane u vakuumu dajući (9H-fluoren-9-il)metil (1-(1H-imidazol-1-il)-1-okso-6,9,12-trioksa-2-azapentadekan-15-il)karbamat (1.022 g, 1.905 mmol, 91 % prinos).<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 8.18 (s, 1H), 7.78 (d, J=7.5 Hz, 2H), 7.61 (d, J=7.5 Hz, 2H), 7.47 (s, 1H), 7.41 (t, J=7.4 Hz, 2H), 7.32 (td, J=7.5, 0.9 Hz, 2H), 7.21 (br. s., 1H), 7.05 (dd, J=1.5, 0.8 Hz, 1H), 5.57 (br. s., 1H), 4.43 (d, J=7.5 Hz, 2H), 4.30 - 4.16 (m, 1H), 3.72 - 3.60 (m, 8H), 3.60 - 3.53 (m, 4H), 3.49 (t, J=5.3 Hz, 2H), 3.30 (q, J=5.9 Hz, 2H), 1.96 - 1.85 (m, 2H), 1.80 - 1.69 (m, 2H). Kolona: X-Bridge C18, 2.0 x 50 mm, 3.5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 0%B, 0-100% B tokom 4 minuta, zatim 1.0-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV pri 220 nm. Vreme zadržavanja = 2.538 min; ESI-MS(+) m/z 537.3 (M+H).

Korak 5:

[0768]

[0769] U tikvicu od 25 ml sa okruglim dnom je dodat (9H-fluoren-9-il)metil (1-(1H-imidazol-1-il)-1-okso-6,9,12-trioksa-2-azapentadekan-15-il)karbamat (400 mg, 0.745 mmol), acetonitril (3 mL) i JODOMETAN (0.093 mL, 1.491 mmol). Reakcija je mešana pod zaštitnim slojem azota preko noći. Sledećeg dana reakcija je kontrolisana pomoću LC/MS i bila je potpuna. Reakcioni rastvarač je evaporisan u vakuumu i sirova čvrsta susptanca je primenjena kakva jeste bez prečišćavanja. Kolona: X-Bridge C18, 2.0 x 50 mm, 3.5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 0%B, 0-100% B tokom 4 minuta, zatim 1.0-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV pri 220 nm. Vreme zadržavanja = 3.256 min.

Korak 6:

[0770]

[0771] U posudu za peptide je dodat iznad modifikovana hlorotritil smola (0.069 g, .092 mmol), CH2Cl2(2 mL), Hunig-ova baza (0.064 mL, 0.368 mmol) i jodometilimidazolijum reagens (0.076 g, 0.138 mmol). Posuda je zatvorena i mešana preko noći na šejkeru koji simulira pokret ručnog zgloba. Sledećeg dana smola je filtrirana i oprana sa CH2Cl2, DMF 3x, CH2Cl23x i konačno dietil etrom. Smola je osušena u vakuumu i primenjena kao što jeste za sintezu peptida. Pretpostavljeno opterećenje od 0.44 mekv/g.

Priprema primera 11153

[0772]

[0773] Primer 11153 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola T je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 3.6 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 97%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.848 min; ESI-MS(+) m/z 1237.6914 (M+2H).

Priprema primera 11154

[0774]

[0775] Primer 11154 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 15 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 97.7%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.581 min.

Priprema primera 11155

[0776]

[0777] Primer 11155 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola M je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 3 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 97.3%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.100 min; ESI-MS(+) m/z 1277.7061 (M+2H).

Priprema primera 11156

[0778]

[0779] Primer 11156 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola M je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 16 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.335 min; ESI-MS(+) m/z 1258.6989 (M+2H).

Priprema modifikovane 2-hlorotritil hlorid smole U

[0780]

Korak 1:

[0781]

[0782] U tikvicu od 50 ml sa okruglim dnom je dodata (S)-3-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-2-aminopropanska kiselina, HCl (218 mg, .6 mmol), N,N-dimetilformamid (6 mL), 1-terc-butil 16-(perfluorofenil) heksadekandioat (397 mg, 0.780 mmol), i Hunig-ova baza (0.314 mL, 1.800 mmol). Tikvica je zatvorena sa septumom i držana pod zaštitnim slojem azota i mešana preko noći na st. Sledećeg dana reakcija je sipana u zasićeni rastvor limunske kiseline i ekstrahovana sa CH2Cl23x. Organski slojevi su kombinovani i oprani slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4i evaporisani u vakuumu. Sirovi proizvod je prečišćen na silika gel hromatografiji eluiranjem sa 100% CH2Cl2zatim 5% MeOH u 95% CH2Cl2. Čiste frakcije su kombinovane i evaporisane u vakuumu dajući (S)-3-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-2-(16-(terc-butoksi)-16-oksoheksadekanamido)propansku kiselinu (386 mg, 0.593 mmol, 99 % prinos). Kolona: X-Bridge C18, 2.0 x 50 mm, 3.5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 0%B, 0-100% B tokom 6 minuta, zatim 1.0-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV pri 220 nm. Vreme zadržavanja = 4.570 min; ESI-MS(-) m/z 649.7 (M-H).

Korak 2:

[0783]

[0784] U posudu za peptide je dodata hlorotritil smola (1076 mg, 1.721 mmol), (S)-3-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-2-(16-(terc-butoksi)-16-oksoheksadekanamido)propanska kiselina (350 mg, 0.538 mmol), CH2Cl2(8 mL), 1-hloro-4-metilbenzen (68.1 mg, 0.538 mmol), i N-etil-N-izopropilpropan-2-amin (0.656 mL, 3.76 mmol). Posuda je zatvorena i mućkana na mešalici koja simulira pokret ručnog zgloba tokom 20 min. Reakcija je završena pomoću analiziranja LC/MS i poređenjem odnosa internog standarda 1-hloro-4-metilbenzena (68.1 mg, 0.538 mmol) naspram polazne kiseline. Smola je zatim razblažena sa 20 ml rastvora 9:1 Metanol / Hunig-ova baza i brzo filtrirana i oprana sa DMF 3x, CH2Cl22x i konačno dietil etrom. Smola je osušena u vakuumu i korišćena kakva jeste sa pretpostavljenim opterećenjem od 0.5 mekv/g.

Priprema primera 11157

[0785]

[0786] Primer 11157 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola U je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 22 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.103 min; ESI-MS(+) m/z 1261.1862 (M+2H).

Priprema modifikovane 2-hlorotritil hlorid smole V

[0787]

Korak 1:

[0788]

[0789] U tikvicu od 100 ml sa okruglim dnom je dodata16-(terc-butoksi)-16-oksoheksadekanska kiselina (5900 mg, 17.23 mmol), N,N-dimetilformamid (30 mL), piridin (3.48 mL, 43.1 mmol), i perfluorofenil 2,2,2-trifluoroacetat (9649 mg, 34.5 mmol). Tikvica je zatvorena sa septumom i držana pod zaštitnim slojem azota i mešana preko noći na st. Sledećeg dana reakcija je sipana u zasićeni rastvor limunske kiseline i ekstrahovana sa CH2Cl23x. Organski slojevi su kombinovani i oprani slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4i evaporisani u vakuumu. Sirovi proizvod 1-tercbutil 16-(perfluorofenil) heksadekandioat (8.7 g, 17.11 mmol, 99 % prinos) je primenjen kakav jeste bez prečišćavanja.<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 2.68 (t, J=7.4 Hz, 2H), 2.23 (t, J=7.5 Hz, 2H), 1.89 - 1.71 (m, 2H), 1.65 - 1.54 (m, 2H), 1.47 (s, 9H), 1.28 (m, 20H).

Korak 2

[0790]

[0791] U tikvicu od 50 ml sa okruglim dnom je dodata (S)-4-amino-5-(benziloksi)-5-oksopentanska kiselina (800 mg, 3.37 mmol), N,N-Dimetilformamid (8 mL), 1-terc-butil 16-(perfluorofenil) heksadekandioat (2229 mg, 4.38 mmol), i Hunig-ova baza (1.767 mL, 10.12 mmol). Tikvica je zatvorena sa septumom i držana pod zaštitnim slojem azota i mešana preko noći na st. Sledećeg dana reakcija je sipana u zasićeni rastvor limunske kiseline i ekstrahovana sa CH2Cl23x. Organski slojevi su kombinovani i oprani slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4i evaporisani u vakuumu. Sirovi proizvod je prečišćen na silika gel hromatografiji eluiranjem sa 100% CH2Cl2zatim 5% MeOH-om u 95% CH2Cl2. Čiste frakcije su kombinovane i evaporisane u vakuumu dajući (S)-5-(benziloksi)-4-(16-(terc-butoksi)-16-oksoheksadekanamido)-5-oksopentansku kiselinu (0.836 g, 1.488 mmol, 44.1 % prinos). Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.641 min; ESI-MS(-) m/z 560.6 (M-H);<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 7.36 (m, 5H), 6.37 (m, 1H), 5.18 (s, 2H), 4.67 (m, 1H), 2.40 (m, 1H), 2.21 (m, 6H), 2.02 (m, 1H), 1.61 (m, 6H), 1.45 (s, 9H), 1.40 - 1.16 (m, 18H).

Korak 3:

[0792]

[0793] U tikvicu od 50 ml sa okruglim dnom je dodata (S)-5-(benziloksi)-4-(16-(terc-butoksi)-16-oksoheksadekanamido)-5-oksopentanska kiselina (836 mg, 1.488 mmol), CH2Cl2(8 mL), 1-(9-Fluorenilmetiloksikarbonil-amino)-4,7,10-trioksa-13-tridekanamin hidrohlorid (713 mg, 1.488 mmol), Hunig-ova baza (0.780 mL, 4.46 mmol) i HATU (736 mg, 1.935 mmol). Tikvica je zatvorena sa septumom i držana pod zaštitnim slojem azota i mešana preko noći na st. Sledećeg dana reakcioni rastvarač je evaporisan u vakuumu. Sirovi proizvod je prečišćen na silika gel hromatografiji eluiranjem sa 20%Aceton/80%Heksani do 60% Aceton/40% Heksani. Čiste frakcije su kombinovane i evaporisane u vakuumu dajući (S)-terc-butil 22-((benziloksi)karbonil)-1-(9H-fluoren-9-il)-3,19,24-triokso-2,8,11,14-tetraoksa-4,18,23-triazanonatriakontan-39-oat (520 mg, 0.527 mmol, 35.4 % prinos). Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 6.096 min; ESI-MS(+) m/z 987.0 (M+H);<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 7.79 (d, J=8.0 Hz, 2H), 7.63 (d, J=8.0 Hz, 2H), 7.42 (t, J=8.0 Hz, 2H), 7.38 - 7.30 (m, 7H), 6.83 (m, 1H), 6.53 (m, 1H), 5.49 (m, 1H), 5.18 (m, 2H), 4.58 (m, 1H), 4.42 (d, J=4.0 Hz, 2H), 4.23 (m, 1H), 3.63 (m, 6H), 3.55 (m, 6H), 3.33 (m, 4H), 2.22 (m, 7H), 2.02 (m, 1H), 1.77 (m, 4H), 1.63 (m, 4H), 1.47 (s, 9H), 1.37 -1.20 (m, 20H).

Korak 4:

[0794]

[0795] U tikvicu od 25 ml sa okruglim dnom je dodat(S)-terc-butil 22-((benziloksi)karbonil)-1-(9H-fluoren-9-il)-3,19,24-triokso-2,8,11,14-tetraoksa-4,18,23-triazanonatriakontan-39-oat (520 mg, 0.527 mmol), metanol (10 mL), i PALADIJUM NA UGLJENIKU (56.1 mg, 0.053 mmol). Tikvica je zatvorena sa septumom i napunjena sa VODONIKOM (1.063 mg, 0.527 mmol) putem balona. Sledećeg dana reakcija je kontrolisana pomoću LC/MS i bila je potpuna. Reakcija je filtrirana kroz celit da se ukloni katalizator i filtrat je evaporisan u vakuumu dajući (S)-22-(16-(terc-butoksi)-16-oksoheksadekanamido)-1-(9H-fluoren-9-il)-3,19-diokso-2,8,11,14-tetraoksa-4,18-diazatrikozan-23-sku kiselinu (415 mg, 0.463 mmol, 88 % prinos). Ovaj materijal je primenjen kakav jeste bez prečišćavanja. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.535 min; ESI-MS(-) m/z 895.0 (M-H).

Korak 5: Modifikovana hlorotritil smola V

[0796]

[0797] U posudu za peptide je dodata 2-hlorotritil smola (926 mg, 1.482 mmol), (S)-22-(16-(tercbutoksi)-16-oksoheksadekanamido)-1-(9H-fluoren-9-il)-3,19-diokso-2,8,11,14-tetraoksa-4,18-diazatrikozan-23-ska kiselina (415 mg, 0.463 mmol), CH2Cl2(8 mL), 1-hloro-4-metilbenzen (58.6 mg, 0.463 mmol), i N-etil-N-izopropilpropan-2-amin (0.565 mL, 3.24 mmol). Posuda je zatvorena i mućkana na mešalici koja simulira pokret ručnog zgloba tokom 30 min. Reakcija je završena pomoću analiziranja LC/MS i poređenjem odnosa internog standarda 1-hloro-4-metilbenzena (58.6 mg, 0.463 mmol) naspram polazne kiseline. Smola je zatim razblažena sa 20 ml rastvora 9:1 metanol / Hunig-ova baza i brzo filtrirana i oprana sa DMF 3x, CH2Cl23x i konačno dietil etrom. Smola je osušena u vakuumu i primenjena kao što jeste za sintezu peptida sa pretpostavljenim opterećenjem od 0.5 mekv/g.

Priprema primera 11158

[0798]

[0799] Primer 11158 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola V je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 42 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.710 min; ESI-MS(+) m/z 1302.1958 (M+2H).

Priprema primera 11159

[0800]

[0801] Primer 11159 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola Vje primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 30 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 97.9%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.701 min; ESI-MS(+) m/z 1309.2045 (M+2H).

Priprema primera 11160

[0802]

[0803] Primer 11160 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola M je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 23 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 97.1%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.636 min; ESI-MS(+) m/z 1316.2122 (M+2H).

Priprema primera 11161

[0804]

[0805] Primer 11161 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola V je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 40 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 97.9%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.161 min; ESI-MS(+) m/z 1216.1731 (M+2H).

Priprema primera 11162

[0806]

[0807] Primer 11162 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola V je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 22 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 96.3%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.825 min.

Priprema primera 11163

[0808]

[0809] Primer 11163 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola M je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 11 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.066 min; ESI-MS(+) m/z 1323.2176 (M+2H).

Priprema primera 11164

[0810]

[0811] Primer 11164 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola U je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.668 min; ESI-MS(+) m/z 1347.2103 (M+2H).

Priprema primera 11165

[0813] Primer 11165 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola U je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 28 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 94.8%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.653 min; ESI-MS(+) m/z 1354.2194 (M+2H).

Priprema primera 11166

[0814]

[0815] Primer 11166 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola M je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 12 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 93.1%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.690 min; ESI-MS(+) m/z 1316.2126 (M+2H).

Priprema primera 11167

[0816]

[0817] Primer 11167 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola M je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 24 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.811 min; ESI-MS(+) m/z 1323.2204 (M+2H).

Priprema primera 11168

[0818]

[0819] Primer 11168 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola V je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 34 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.798 min; ESI-MS(+) m/z 1244.6830 (M+2H).

Priprema primera 11169

[0820]

[0821] Primer 11169 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola V je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 29 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 96%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.423 min; ESI-MS(+) m/z 1359.7108 (M+2H).

Priprema primera 11170

[0822]

[0823] Primer 11170 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola V je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 32 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 96.3%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.426 min; ESI-MS(+) m/z 1366.7180 (M+2H).

Priprema primera 11171

[0824]

[0825] Primer 11171 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola V je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 35 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.001 min; ESI-MS(+) m/z 1251.6929 (M+2H).

Priprema modifikovane hlorotritil hlorid smole W

[0826]

[0827] U tikvicu od 50 ml sa okruglim dnom je dodata (S)-3-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-2-aminopropanska kiselina, HCl (500 mg, 1.378 mmol), N,N-dimetilformamid (12 mL), 1-terc-butil 18-(perfluorofenil) oktadekandioat (1109 mg, 2.067 mmol), i Hunig-ova baza (0.963 mL, 5.51 mmol). Tikvica je zatvorena sa septumom i držana pod zaštitnim slojem azota i mešana preko noći na st. Sledećeg dana reakcija je sipana u zasićeni rastvor limunske kiseline i ekstrahovana sa CH2Cl23x. Organski slojevi su kombinovani i oprani slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4i evaporisani u vakuumu. Sirovi proizvod je prečišćen na silika gel hromatografiji eluiranjem sa 100% CH2Cl2zatim 5% MeOH-om u 95% CH2Cl2. Čiste frakcije su kombinovane i evaporisane u vakuumu dajući (S)-3-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-2-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)propansku kiselinu (774 mg, 1.140 mmol, 83 % prinos). Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.698 min; ESI-MS(-) m/z 677.7 (M-H);<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 7.78 (d, J=7.5 Hz, 2H), 7.59 (d, J=7.5 Hz, 2H), 7.42 (t, J=7.4 Hz, 2H), 7.33 (t, J=7.2 Hz, 2H), 7.26 (d, J=5.0 Hz, 1H), 5.67 (s, 1H), 4.59 - 4.49 (m, 1H), 4.41 (d, J=7.0 Hz, 2H), 4.23 (t, J=7.2 Hz, 1H), 3.83 - 3.69 (m, 1H), 3.67 - 3.55 (m, 1H), 2.32 - 2.16 (m, 4H), 1.70 - 1.53 (m, 4H), 1.46 (s, 9H), 1.36 - 1.17 (m, 24H).

Korak 2:

[0828]

[0829] U posudu za peptide je dodata 2-hlorotritil smola (2280 mg, 3.65 mmol), (S)-3-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-2-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)propanska kiselina (774 mg, 1.140 mmol), CH2Cl2(16 mL), 1-hloro-4-metilbenzen (43.3 mg, 0.342 mmol), i N-etil-N-izopropilpropan-2-amin (1.390 mL, 7.98 mmol). Posuda je zatvorena i mućkana na mešalici koja simulira pokret ručnog zgloba tokom 30 min. Reakcija je završena pomoću analiziranja LC/MS i poređenjem odnosa internog standarda 1-hloro-4-metilbenzena (43.3 mg, 0.342 mmol) naspram polazne kiseline. Smola je zatim razblažena sa 20 ml rastvora 9:1 metanol / Hunig-ova baza i brzo filtrirana i oprana sa DMF 3x, CH2Cl23x i konačno dietil etrom. Smola je osušena u vakuumu i primenjena je kao što jeste sa pretpostavljenim opterećenjem od 0.5 mekv/g za sintezu željenih proteina.

Priprema primera 11172

[0830]

[0831] Primer 11172 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola W je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 27 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 93.5%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.218 min; ESI-MS(+) m/z 1193.6278 (M+2H).

Priprema primera 11173

[0833] Primer 11173 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola W je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 35 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 95.9%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.218 min; ESI-MS(+) m/z 1200.6358 (M+2H).

Priprema primera 11174

[0835] Primer 11174 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola M je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 29 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 95.3%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.303 min; ESI-MS(+) m/z 1344.6838 (M+2H).

Priprema primera 11175

[0837] Primer 11175 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola M je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 19 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 97.8%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.71 min; ESI-MS(+) m/z 1316.7013 (M+2H).

Priprema primera 11176

[0839] Primer 11176 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola S je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 25 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 97.5%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.005 min; ESI-MS(+) m/z 1214.6502 (M+2H).

Priprema primera 11177

[0841] Primer 11177 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola S je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 27 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98.6%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.010 min; ESI-MS(+) m/z 1221.6584 (M+2H).

Priprema primera 11178

[0842]

[0843] Primer 11178 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola M je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 25 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 96.7%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.985 min; ESI-MS(+) m/z 1324.6806 (M+2H).

Priprema primera 11179

[0844]

[0845] Primer 11179 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola M je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 30 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 95.5%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.928 min; ESI-MS(+) m/z 1350.1861 (M+2H).

Priprema primera 11180

[0846]

[0847] Primer 11180 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola W je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 40 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 97.7%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.750 min; ESI-MS(+) m/z 1275.2005 (M+2H).

Priprema primera 11181

[0848]

[0849] Primer 11181 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola W je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 25 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 97.8%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.383 min; ESI-MS(+) m/z 1361.2253 (M+2H).

Priprema primera 11182

[0850]

[0851] Primer 11182 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola W je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 21 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 94.9%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.000 min.

Priprema primera 11183

[0852]

[0853] Primer 11183 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola W je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 27 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 97.0%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.933 min.

Priprema primera 11184

[0855] Primer 11184 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola V je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 21 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 96.0%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.803 min.

Priprema primera 11185

[0856]

[0857] Primer 11185 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola W je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 25 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 94.5%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.056 min.

Priprema primera 11186

[0858]

[0859] Primer 11186 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola S je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 30 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 95%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.163 min.

Priprema primera 11187

[0860]

[0861] Primer 11187 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", “Postupak A kuplovanja hloroacetil hlorida”, "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola A je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 25-75% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 15.5 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov C: Vreme zadržavanja = 2.01 min; ESI-MS(+) m/z 1050.2 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1050.0926 (M+2H).

Priprema primera 11188

[0862]

[0863] Primer 11188 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", “Postupak A kuplovanja hloroacetil hlorida”, "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola A je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 25-75% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 23.5 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 5.12 min; ESI-MS(+) m/z 1078.9 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1078.6024 (M+2H).

Priprema primera 11189

[0864]

[0865] Primer 11189 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", “Postupak A kuplovanja hloroacetil hlorida”, "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola A je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: waters CSH C-18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: 20-60% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 17 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza LCMS Uslov C: Vreme zadržavanja = 2.06 min; ESI-MS(+) m/z 1107.3 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1107.1154 (M+2H).

Priprema primera 11190

[0866]

[0867] Primer 11190 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", “Postupak A kuplovanja hloroacetil hlorida”, "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola A je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 25-75% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min.Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 10.7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza LCMS Uslov C: Vreme zadržavanja = 4.46 min; ESI-MS(+) m/z 1136.5 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1136.1179 (M+2H).

Priprema primera 11191

[0868]

[0869] Primer 11191 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", “Postupak A kuplovanja hloroacetil hlorida”, "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola B je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 30-70% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 6.4 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 96%. Analiza LCMS Uslov D: Vreme zadržavanja = 2.54 min; ESI-MS(+) m/z 1064.0 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1064.1084 (M+2H).

Priprema primera 11192

[0870]

[0871] Primer 11192 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", “Postupak A kuplovanja hloroacetil hlorida”, "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola B je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 30-85% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 7.1 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza LCMS Uslov C: Vreme zadržavanja = 2.08 min; ESI-MS(+) m/z 1092.5 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1092.6200 (M+2H).

Priprema primera 11193

[0872]

[0873] Primer 11205 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", “Postupak A kuplovanja hloroacetil hlorida”, "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola B je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 30-70% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 8.3 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 5.14 min; ESI-MS(+) m/z 1121.4 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1121.1305 (M+2H).

Priprema primera 11194

[0874]

[0875] Primer 11194 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", “Postupak A kuplovanja hloroacetil hlorida”, "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 30-70% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 9.2 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza LCMS Uslov C: Vreme zadržavanja = 1.80 min; ESI-MS(+) m/z 1093.3 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1093.0963 (M+2H).

Priprema primera 11195

[0876]

[0877] Primer 11195 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", “Postupak A kuplovanja hloroacetil hlorida”, "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 25-65% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 7.7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 97%. Analiza LCMS Uslov D: Vreme zadržavanja = 1.82 min; ESI-MS(+) m/z 1122.4 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1122.0992 (M+2H).

Priprema primera 11196

[0878]

[0879] Primer 11196 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", “Postupak A kuplovanja hloroacetil hlorida”, "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 15-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 9.4 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 97%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.84 min; ESI-MS(+) m/z 1036.3 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1036.0766 (M+2H).

Priprema primera 11197

[0880]

[0881] Primer 11197 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", “Postupak A kuplovanja hloroacetil hlorida”, "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola C je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 15-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 7.2 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.73 min; ESI-MS(+) m/z 1064.7 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1064.5886 (M+2H).

Priprema primera 11198

[0882]

[0883] Primer 11198 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", “Postupak A kuplovanja hloroacetil hlorida”, "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola D je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 10-80% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 17.1 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.25 min; ESI-MS(+) m/z 1162.7 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1162.6110 (M+2H).

Priprema primera 11199

[0884]

[0885] Primer 11199 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", “Postupak A kuplovanja hloroacetil hlorida”, "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola D je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 10-80% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 12.8 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99%. Analiza LCMS Uslov B: Vreme zadržavanja = 3.38 min; ESI-MS(+) m/z 1115.4 (M+2H).

Priprema primera 11200

[0886]

[0887] Primer 11200 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", “Postupak A kuplovanja hloroacetil hlorida”, "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola D je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 10-85% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 20.5 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99%. Analiza LCMS Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.22 min; ESI-MS(+) m/z 1191.4 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1191.1218 (M+2H).

Priprema primera 11201

[0888]

[0889] Primer 11201 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", “Postupak A kuplovanja hloroacetil hlorida”, "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola D je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 10-80% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 19.2 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.40 min; ESI-MS(+) m/z 1143.7 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1143.6036 (M+2H).

Priprema primera 11202

[0890]

[0891] Primer 11202 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", “Postupak A kuplovanja hloroacetil hlorida”, "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola D je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 10-80% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min.

Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 14 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.57 min; ESI-MS(+) m/z 1114.8 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1114.6003 (M+2H).

Priprema primera 11203

[0892]

[0893] Primer 11203 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", “Postupak A kuplovanja hloroacetil hlorida”, "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola D je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 10-85% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 19 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99%. Analiza LCMS Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.44 min; ESI-MS(+) m/z 1162.4 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1162.1192 (M+2H).

Priprema primera 11204

[0894]

[0895] Primer 11204 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", “Postupak A kuplovanja hloroacetil hlorida”, "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola E je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 20-60% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 16.7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 97%. Analiza LCMS Uslov D: Vreme zadržavanja = 1.94 min; ESI-MS(+) m/z 1022.4 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1022.0615 (M+2H).

Priprema primera 11205

[0896]

[0897] Primer 11205 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", “Postupak A kuplovanja hloroacetil hlorida”, "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola E je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 20-60% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 15.5 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 95%. Analiza LCMS Uslov D: Vreme zadržavanja = 1.87 min; ESI-MS(+) m/z 1050.3 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1050.5731 (M+2H).

Priprema primera 11206

[0898]

[0899] Primer 11206 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", “Postupak A kuplovanja hloroacetil hlorida”, "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola E je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 50-90% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 15.5 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 95%. Analiza LCMS Uslov D: Vreme zadržavanja = 1.84 min; ESI-MS(+) m/z 1079.1 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1079.0823 (M+2H).

Priprema primera 11207

[0900]

[0901] Primer 11207 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", “Postupak A kuplovanja hloroacetil hlorida”, "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola E je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 15-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 24.7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.14 min; ESI-MS(+) m/z 1098.2 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1098.0917 (M+2H).

Priprema primera 11208

[0902]

[0903] Primer 11208 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", “Postupak A kuplovanja hloroacetil hlorida”, "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola E je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 10-50% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 6 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza LCMS Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.41 min; ESI-MS(+) m/z 1108.5 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1108.0856 (M+2H).

Priprema primera 11209

[0904]

[0905] Primer 11209 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", “Postupak A kuplovanja hloroacetil hlorida”, "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola E je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 15-55% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 9.5 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza LCMS Uslov D: Vreme zadržavanja = 1.83 min; ESI-MS(+) m/z 1070.0 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1069.5802 (M+2H).

Priprema primera 11210

[0906]

[0907] Primer 11210 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", “Postupak A kuplovanja hloroacetil hlorida”, "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola E je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 15-55% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 3.7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.96 min; ESI-MS(+) m/z 1126.8 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1126.6015 (M+2H).

Priprema primera 11211

[0908]

[0909] Primer 11211 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", “Postupak A kuplovanja hloroacetil hlorida”, "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola E je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 15-55% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 7.6 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 96%. Analiza LCMS Uslov C: Vreme zadržavanja = 1.46 min; ESI-MS(+) m/z 1155.2 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1155.6043 (M+2H).

Priprema primera 11212

[0910]

[0911] Primer 11212 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", “Postupak A kuplovanja hloroacetil hlorida”, "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola E je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 15-75% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 18 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 97%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.97 min; ESI-MS(+) m/z 1108.2 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1108.0828 (M+2H).

Priprema primera 11213

[0912]

[0913] Primer 11213 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", “Postupak A kuplovanja hloroacetil hlorida”, "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola E je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 15-75% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 14.4 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.58 min; ESI-MS(+) m/z 1155.9 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1155.6020 (M+2H).

Priprema primera 11214

[0915] Primer 11214 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", “Postupak A kuplovanja hloroacetil hlorida”, "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola E je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 15-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 8.8 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.34 min; ESI-MS(+) m/z 1173.3 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1173.1503 (M+2H).

Priprema primera 11215

[0917] Primer 11215 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", “Postupak A kuplovanja hloroacetil hlorida”, "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola E je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 15-75% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 13 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.02 min; ESI-MS(+) m/z 1108.3 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1107.5930 (M+2H).

Priprema primera 11216

[0918]

[0919] Primer 11216 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", “Postupak A kuplovanja hloroacetil hlorida”, "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola E je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 15-75% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 17.7mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.72 min; ESI-MS(+) m/z 1155.3 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1155.1126 (M+2H).

Priprema primera 11217

[0920]

[0921] Primer 11217 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", “Postupak A kuplovanja hloroacetil hlorida”, "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola E je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 15-75% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 17.9 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.55 min; ESI-MS(+) m/z 1165.6 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1165.5995 (M+2H).

Priprema primera 11218

[0922]

[0923] Primer 11218 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", “Postupak A kuplovanja hloroacetil hlorida”, "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola E je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 10-80% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 17.7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.17 min; ESI-MS(+) m/z 1213.1 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1213.1169 (M+2H).

Priprema primera 11219

[0924]

[0925] Primer 11219 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", “Postupak A kuplovanja hloroacetil hlorida”, "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola E je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 15-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 21.7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 96%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.83 min; ESI-MS(+) m/z 1220.8 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1220.6713 (M+2H).

Priprema primera 11220

[0926]

[0927] Primer 11220 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", “Postupak A kuplovanja hloroacetil hlorida”, "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola E je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 10-80% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 17.3 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.49 min; ESI-MS(+) m/z 1184.2 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1184.1140 (M+2H).

Priprema primera 11221

[0928]

[0929] Primer 11221 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", “Postupak A kuplovanja hloroacetil hlorida”, "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola E je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 10-80% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 15.8 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.79 min; ESI-MS(+) m/z 1136.6 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1136.5948 (M+2H).

Priprema primera 11222

[0930]

[0931] Primer 11222 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hloroacetil hlorida Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola E je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 10-80% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 23.7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 97%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.47 min; ESI-MS(+) m/z 1184.3 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1184.1132 (M+2H).

Priprema primera 11223

[0932]

[0933] Primer 11223 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", “Postupak A kuplovanja hloroacetil hlorida”, "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola E je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 10-80% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 24.8 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.79 min; ESI-MS(+) m/z 1136.8 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1136.5948 (M+2H).

Priprema primera 11224

[0934]

[0935] Primer 11224 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola F je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 15-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 14 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99%. Analiza LCMS Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.13 min; ESI-MS(+) m/z 1317.0 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1316.2122 (M+2H).

Priprema primera 11225

[0937] Primer 11225 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola F je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 10-75% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 35.3 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.27 min; ESI-MS(+) m/z 1374.2 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1373.7259 (M+2H).

Priprema primera 11226

[0938]

[0939] Primer 11226 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola F je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 15-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 18.7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza LCMS Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.54min; ESI-MS(+) m/z 1337.5 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1337.2332 (M+2H).

Priprema primera 11227

[0940]

[0941] Primer 11227 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola F je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 15-75% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 24.7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99%. Analiza LCMS Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.32 min; ESI-MS(+) m/z 1345.5 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1345.2147 (M+2H).

Priprema primera 11228

[0942]

[0943] Primer 11228 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola F je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 10-75% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 24.7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza LCMS Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.28 min; ESI-MS(+) m/z 1352.7 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1352.2227 (M+2H).

Priprema primera 11229

[0944]

[0945] Primer 11229 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola F je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 15-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 14.1 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.35 min; ESI-MS(+) m/z 1309.8 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1309.2043 (M+2H).

Priprema primera 11230

[0946]

[0947] Primer 11230 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola F je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 10-75% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 23.4 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.68 min; ESI-MS(+) m/z 1380.5 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1380.7350 (M+2H).

Priprema primera 11231

[0948]

[0949] Primer 11231 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola F je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 15-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 19 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.54 min; ESI-MS(+) m/z 1330.5 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1330.2260 (M+2H).

Priprema primera 11232

[0950]

[0951] Primer 11232 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola G je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 10-75% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 23.4 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.28 min; ESI-MS(+) m/z 1367.1 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1366.7180 (M+2H).

Priprema primera 11233

[0952]

[0953] Primer 11233 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola G je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 10-75% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 29.4 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.18 min; ESI-MS(+) m/z 1345.3 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1345.2151 (M+2H).

Priprema primera 11234

[0954]

[0955] Primer 11234 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola G je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 15-75% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 19.7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.35 min; ESI-MS(+) m/z 1317.1 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1316.2133 (M+2H).

Priprema primera 11235

[0956]

[0957] Primer 11235 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola G je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 10-75% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 18.4 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99%. Analiza LCMS Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.26 min; ESI-MS(+) m/z 1374.1 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1373.7263 (M+2H).

Priprema primera 11236

[0958]

[0959] Primer 11236 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola G je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 10-75% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 21 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 97%. Analiza LCMS Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.31 min; ESI-MS(+) m/z 1338.1 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1338.2058 (M+2H).

Priprema primera 11237

[0960]

[0961] Primer 11237 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola G je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 15-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 14.7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 97%. Analiza LCMS Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.45 min; ESI-MS(+) m/z 1309.3 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1309.2068 (M+2H).

Priprema primera 11238

[0962]

[0963] Primer 11238 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola H je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 15-80% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 27.7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99%. Analiza LCMS Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.37 min; ESI-MS(+) m/z 1295.5 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1295.1866 (M+2H).

Priprema primera 11239

[0965] Primer 11239 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola H je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 15-80% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 21.4 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99%.

Analiza LCMS Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.42 min; ESI-MS(+) m/z 1295.6 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1295.1864 (M+2H).

Priprema primera 11240

[0966]

[0967] Primer 11240 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola H je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 15-75% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 25.7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99%. Analiza LCMS Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.35 min; ESI-MS(+) m/z 1353.1 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1352.7005 (M+2H).

Priprema primera 11241

[0968]

[0969] Primer 11241 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola H je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 15-75% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 18.4 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99%. Analiza LCMS Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.31 min; ESI-MS(+) m/z 1360.0 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1359.7091 (M+2H).

Priprema primera 11242

[0970]

[0971] Primer 11242 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola H je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 15-80% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 27.4 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.54 min; ESI-MS(+) m/z 1209.3 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1209.1651 (M+2H).

Priprema primera 11243

[0972]

[0973] Primer 11243 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola H je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 15-75% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 21.7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99%. Analiza LCMS Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.34 min; ESI-MS(+) m/z 1302.5 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1302.1978 (M+2H).

Priprema primera 11244

[0974]

[0975] Primer 11244 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola H je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 15-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 33.7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 96%. Analiza LCMS Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.14 min; ESI-MS(+) m/z 1324.3 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1324.1926 (M+2H).

Priprema primera 11245

[0976]

[0977] Primer 11245 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola H je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 15-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 26.3 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99%. Analiza LCMS Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.15 min; ESI-MS(+) m/z 1331.5 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1331.2001 (M+2H).

Priprema primera 11246

[0978]

[0979] Primer 11246 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola I je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 15-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 12.1 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99%. Analiza LCMS Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.59 min; ESI-MS(+) m/z 1337.4 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1337.2369 (M+2H).

Priprema primera 11247

[0980]

[0981] Primer 11247 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola I je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 15-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 12.8 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.61 min; ESI-MS(+) m/z 1330.4 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1330.2305 (M+2H).

Priprema primera 11248

[0982]

[0983] Primer 11248 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola I je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 15-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 4.4 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.79 min; ESI-MS(+) m/z 1244.5 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1244.2027 (M+2H).

Priprema primera 11249

[0984]

[0985] Primer 11249 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A", i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola I je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 30mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 5.9 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 97%. Analiza LCMS Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.49 min; ESI-MS(+) m/z 1395.2.

Priprema primera 11250

[0986]

[0987] Primer 11250 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A", i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola I je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 30mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 12.4 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.49 min; ESI-MS(+) m/z 1388.2.

Priprema primera 11251

[0988]

[0989] Primer 11251 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A", i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola I je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 30mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 17 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.47 min; ESI-MS(+) m/z 1366.7.

Priprema primera 11252

[0991] Primer 11252 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A", i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola I je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 30mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-60% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 18 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 97%. Analiza LCMS Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.47 min; ESI-MS(+) m/z 1359.7.

Priprema primera 11253

[0993] Primer 11253 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola J je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 30mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 25-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 18.5 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 95%. Analiza LCMS Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.23 min; ESI-MS(+) m/z 1295.4.

Priprema primera 11254

[0994]

[0995] Primer 11254 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola J je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 30mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 25-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 30.6 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.21 min; ESI-MS(+) m/z 1288.5.

Priprema primera 11255

[0996]

[0997] Primer 11255 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola J je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 30mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 25-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 9.7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 96%. Analiza LCMS Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.20 min; ESI-MS(+) m/z 1295.4.

Priprema primera 11256

[0998]

[0999] Primer 11256 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola J je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 30mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 25-70% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 21.5 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 97%. Analiza LCMS Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.20 min; ESI-MS(+) m/z 1288.5.

Priprema primera 11257

[1000]

[1001] Primer 11257 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola N je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 10-75% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 22.1 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 97%. Analiza LCMS Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.38 min; ESI-MS(+) m/z 1316.7 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1316.2101 (M+2H).

Priprema primera 11258

[1002]

[1003] Primer 11258 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola N je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 10-75% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 23.1 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.66 min; ESI-MS(+) m/z 1223.4 (M+2H); ESI-HRMS(+) m/z: 1223.1770 (M+2H).

Priprema primera 11259

[1004]

[1005] Primer 11259 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola Q je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 30mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 25-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 4.1 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza LCMS Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.40 min; ESI-MS(+) m/z 1202.5.

Priprema primera 11260

[1006]

[1007] Primer 11260 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola Q je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 30mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 25-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 12.2 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99%. Analiza LCMS Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.34 min; ESI-MS(+) m/z 1231.1

Priprema primera 11261

[1008]

[1009] Primer 11261 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak B kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak B kuplovanja sekundarnog amina”, "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana 2-hlorotritil hlorid smola Q je primenjena u ovoj sintezi. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 30mm x 250mm; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 25-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 17.0 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 97%. Analiza LCMS Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.11 min; ESI-MS(+) m/z 1324.7

Priprema primera 11262

[1010]

[1011] Primer 11262 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola W je primenjena u ovoj sintezi.

[1012] Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 21 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 90.9%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.83 min; ESI-HRMS(+) m/z: 1329.7089 (M+2H) Priprema primera 11263

[1013]

[1014] Primer 11263 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola W je primenjena u ovoj sintezi.

[1015] Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 19 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 95.7%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.17 min; ESI-HRMS(+) m/z: 1345.6943 (M+2H)

Priprema primera 11264

[1016]

[1017] Primer 11264 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola W je primenjena u ovoj sintezi.

[1018] Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 21 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 97.3%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.23 min; ESI-HRMS(+) m/z: 1338.6835 (M+2H).

Priprema primera 11265

[1019]

[1020] Primer 11265 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola W je primenjena u ovoj sintezi.

[1021] Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 23 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98.4%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.23 min; ESI-HRMS(+) m/z: 1345.6946 (M+2H)

Priprema primera 11266

[1022]

[1023] Primer 11266 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola W je primenjena u ovoj sintezi.

[1024] Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 24 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98.0%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.19 min.

Priprema primera 11267

[1025]

[1026] Primer 11267 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001 izuzev that reakcija was run on 0.6 mmol scale, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola W je primenjena u ovoj sintezi.

[1027] Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 280 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 95.6%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 3.98 min; ESI-HRMS(+) m/z: 1370.7382 (M+2H).

Priprema primera 11268

[1028]

[1029] Primer 11268 je pripremljen kao što sledi. U bočicu od 1 drama je dodat Primer 11267 (30 mg, 10.11 µmol) u vodi (.5 mL). U ovo je dodat t-BuOH (.5 mL) i 3-(2-(2-(2-(2-azidoetoksi)etoksi)etoksi)etoksi)-2-fluoropiridin (6.35 mg, 0.020 mmol). Rastvor je mešan i zatim NATRIJUM ASKORBAT (2.60 mg, 0.013 mmol) i rastvor bakar(II) sulfat pentahidrata (0.015 mL, 3.03 µmol) je dodat. Dozvoljeno je da se reakcija meša na ST tokom 2 h. Reakcija je kontrolisana pomoću LC/MS i bila je potpuna. Sirova reakciona smeša je ubrizgana direktno na reverzno-faznu hromatografsku kolonu.

[1030] Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 16.3 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98.7%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.01 min; ESI-HRMS(+) m/z: 1528.6 (M+2H)

Priprema primera 11269

[1031]

[1032] Primer 11269 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001, sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola W je primenjena u ovoj sintezi.

[1033] Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 21 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 90.6%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.25 min; ESI-HRMS(+) m/z: 1330.7059 (M+2H).

Priprema primera 11270

[1034]

[1035] Primer 11270 je pripremljen praćenjem opšteg sintetičkog niza opisanog za pripremu primera 0001 izuzev što se odvijao na 0.8 mmol skali i sačinjenog od sledećih opštih postupaka: "Symphony Metoda A: Postupak bubrenja smole", "Symphony Metoda A: Standardni postupak kuplovanja", "Symphony Metoda A: Postupak A kuplovanja sekundarnog amina", "Uobičajeni postupak kuplovanja aminokiselina", "Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline", "Globalna deprotekciona metoda A”, i "Metoda A ciklizacije". Modifikovana hlorotritil smola W je primenjena u ovoj sintezi.

[1036] Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 140 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 97.4%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.07 min; ESI-HRMS(+) m/z: 1363.7277 (M+2H).

Priprema primera 11271

[1037]

[1038] Primer 11271 je pripremljen kao što sledi. U bočicu od 1 drama je dodat Primer 11270 (40 mg, 0.015 mmol) u vodi (.5 mL). U ovo je dodat t-BuOH (.5 mL) i 3-(2-(2-(2-(2-azidoetoksi)etoksi)etoksi)etoksi)-2-fluoropiridin (9.22 mg, 0.029 mmol). Rastvor je mešan i zatim NATRIJUM ASKORBAT (3.78 mg, 0.019 mmol) i rastvor bakar(II) sulfat pentahidrata (0.022 mL, 4.40 µmol) je dodat. Dozvoljeno je da se reakcija meša na ST tokom 2 h. Reakcija je kontrolisana pomoću LC/MS i bila je potpuna. Sirova reakciona smeša je ubrizgana direktno na reverzno-faznu hromatografsku kolonu.

[1039] Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC sa sledećim uslovima: Kolona: XSelect CSH Prep C18, 5-µm OBD, 19mm x 250mm. Mobilna faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 20-65% B tokom 25 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 17.0 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 93.0%. Analiza LCMS Uslov A: Vreme zadržavanja = 4.24 min; ESI-HRMS(+) m/z: 1520.7970 (M+2H).

Analitički podaci:

[1040] Masena spektrometrija: "ESI-MS(+)" označava elektrosprej jonizacionu masenu spektrometriju izvedenu u pozitivnom jonskom modu; "ESI-MS(-)" označava elektrosprej jonizacionu masenu spektrometriju izvedenu u negativnom jonskom modu; "ESI-HRMS(+)" označava elektrosprej jonizacionu masenu spektrometriju visoke rezolucije izvedenu u pozitivnom jonskom modu; "ESI-HRMS(-)" označava elektrosprej jonizacionu masenu spektrometriju visoke rezolucije izvedenu u negativnom jonskom modu. Detektovane mase su prijavljene praćenjem "m/z" jediničnog označavanja. Jedinjenja sa tačnim masama većim od 1000 su često detektovana kao dvostruko naelektrisani ili trostruko naelektrisani joni.

Analiza Uslov A:

[1041] Kolona: Waters BEH C18, 2.0 x 50 mm, 1.7-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0%B, 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: UV pri 220 nm.

Analiza Uslov B:

[1042] Kolona: Waters BEH C18, 2.0 x 50 mm, 1.7-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 metanol:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 metanol:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0%B, 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 0.5 mL/min; Detekcija: UV pri 220 nm.

Analiza Uslov C:

[1043] Kolona: Waters Aquity UPLC BEH C18, 2.1 x 50 mm, 1.7-µm čestice; Mobilna faza A: 100% Voda:0.05% TFA; Mobilna faza B: 100% Acetonitril:0.05%TFA; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 2-98% B tokom 1.5 minuta, zatim 0.5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV pri 220 nm.

Analiza Uslov D:

[1044] Kolona: PHENOMENEX-LUNA 2.0 X 30mm 3um; Mobilna faza A: 90% voda - 10% Metanol-0.1% TFA; Mobilna faza B: 10% Voda -90% Metanol-0.1% TFA; Gradijent: 0-100% B tokom 2 minuta, zatim 1 do 4 minuta zadržavanje pri 100% B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: UV pri 220 nm.

Analiza Uslov E:

[1045] Kolona: Xbridge Phenyl, 3.0 x 150 mm, 3.5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 5-100% B tokom 15 minuta; Protok: 0.5 mL/min; Detekcija: UV pri 220 nm.

Analiza Uslov F:

[1046] Kolona: XBridge C18, 3.0 x 150 mm, 3.5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 10-100% B tokom 30 minuta; Protok: 0.5 mL/min; Detekcija: UV pri 220 nm.

Analiza Uslov G:

[1047] Kolona: Waters CSH C18, 2.0 x 50 mm, 1.7-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0%B, 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: UV pri 220 nm.

Analiza Uslov H:

[1048] Kolona: Xbridge C18, 3.0 x 150 mm, 3.5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 10-100% B tokom 18 minuta; Protok: 0.5 mL/min; Detekcija: UV pri 220 nm.

Analiza Uslov I:

[1049] Kolona: XSelectCSH C18, 3.0 x 150 mm, 3.5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 10-100% B tokom 15 minuta; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV pri 220 nm.

Analiza Uslov J:

[1050] Kolona: Zorbax Bonus RP, 3.0 x 150 mm, 3.5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 10-100% B tokom 15 minuta; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV pri 220 nm.

Analiza Uslov K:

[1051] Kolona: Waters Aquity UPLC BEH C18, 2.1 x 50 mm, 1.7-µm čestice; Mobilna faza A: 100% Voda:0.05% TFA; Mobilna faza B: 100% Acetonitril:0.05%TFA; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 2-98% B tokom 3.0 minuta, zatim 0.5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV pri 220 nm.

Opšti postupci za primere intermedijere 1300A-1400L:

[1052] Sve manipulacije su izvedene automatski na Symphony-X peptidnom sintetizatoru (Protein Technologies). Sve procedure sem ako nije naznačeno su izvedene u polipropilenskoj epruveti od 10 mL opremljenoj sa fritom na dnu. Epruveta je povezana sa Prelude peptidnim sintetizatorom i preko dna i vrha epruvete. DMF i DCM mogu biti dodati kroz gornji deo epruvete, što spira strane epruvete podjednako. Preostali reagensi su dodati kroz dno epruvete i prolaze kroz fritu da bi došli u kontakt sa smolom. Svi rastvori su uklonjeni kroz dno epruvete. "Periodična agitacija" opisuje kratak puls N2gasa kroz fritu na dnu; puls traje približno 5 sekundi i javlja se na svakih 30 sekundi.

Hloroacetil hlorid rastvori u DMF-u su korišćeni unutar 24h od pripreme. Aminokiselinski rastvori uglavnom nisu korišćeni posle tri nedelje od pripreme. HATU rastvor je korišćen unutar 5 dana od pripreme. DMF = dimetilformamid; HATU = 1-[Bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinijum 3-oksid heksafluorofosfat; DIPEA = diizopropiletilamin; Rink = (2,4-dimetoksifenil)(4-alkoksifenil)metanamin, gde "4-alkoksi" opisuje položaj i vrstu vezivanja za polistirensku smolu. Korišćena smola je Merrifield polimer (polistiren) sa Rink veznikom (Fmoczaštićen na azotu); 100-200 mesh-a, 1% DVB, 0.56 mmol/g opterećenje. Uobičajene amino kiseline koje su primenjene su navedene ispod sa zaštitnim grupama bočnog lanca naznačenim unutar zagrada. Fmoc-Ala-OH; Fmoc-Arg(Pbf)-OH; Fmoc-Asn(Trt)-OH; Fmoc-Asp(OtBu)-OH; Fmoc-Bzt-OH; Fmoc-Cys(Trt)-OH; Fmoc-Dab(Boc)-OH; Fmoc-Dap(Boc)-OH; Fmoc-Gln(Trt)-OH; Fmoc-Gly-OH; Fmoc-His(Trt)-OH; Fmoc-Hyp(tBu)-OH; Fmoc-Ile-OH; Fmoc-Leu-OH; Fmoc-Lys(Boc)-OH; Fmoc-Nle-OH; Fmoc-Met-OH; Fmoc-[N-Me]Ala-OH; Fmoc-[N-Me]Nle-OH; Fmoc-Phe-OH; Fmoc-Pra-OH; Fmoc-Pro-OH; Fmoc-Sar-OH; Fmoc-Ser(tBu)-OH; Fmoc-Thr(tBu)-OH; Fmoc-Trp(Boc)-OH; Fmoc-Tyr(tBu)-OH; Fmoc-Val-OH.

[1053] Za karboksamidne proizvode: Postupci opisuju eksperiment sproveden na 0.100 mmol skali, gde je skala određena količinom Rink veznika vezanog za smolu. Ova skala odgovara sa približno 178 mg Rink-Merrifield smole koja je iznad opisana. Pre aminokiselinskog kuplovanja, sve sekvence peptidne sinteze počinju sa postupkom bubrenja smole, opisanim ispod kao “Postupak bubrenja smole". Kuplovanje aminokiselina sa N-terminusom primarnog amina koristilo je "Postupak pojedinačnog kuplovanja" koji je opisan ispod. Kuplovanje aminokiselina sa N-terminusom sekundarnog amina koristilo je "Dvostruko-kuplujući postupak" koji je opisan ispod. Kuplovanje hloroacetilhlorida na N-terminus peptida je opisano pomoću "Postupka kuplovanja hloroacetil hlorida" detaljno opisanog ispod.

Postupak bubrenja smole:

[1054] U polipropilenski reakcioni sud od 10 mL za čvrstu fazu je dodata Merrifield:Rink smola (178 mg, 0.100 mmol). Smola je oprana (nabubrila) tri puta kao što sledi: u reakcioni sud je dodat DMF (2.0 mL), nakon čega je smeša periodično agitirana tokom 10 minuta pre nego što je rastvarač proceđen kroz fritu.

Postupak pojedinačnog kuplovanja:

[1055] U reakcioni sud koji sadrži smolu iz prethodnog koraka je dodat piperdin:DMF (20:80 v/v, 2.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 3 minuta i zatim je rastvor proceđen kroz fritu. U reakcioni sud je dodat piperdin:DMF (20:80 v/v, 2.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 3 minuta i zatim je rastvor proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno šest puta kao što sledi: za svako pranje, DMF (2.0 mL) je dodat preko gornjeg dela suda (ne kroz fritu na dnu) i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 30 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. U reakcioni sud je dodata amino kiselina (0.2M u DMF-u, 1.0 mL, 2 ekv), zatim HATU (0.2M u DMF-u, 1.0 mL, 2 ekv), i konačno DIPEA (0.4M u DMF-u, 1.0 mL, 4 ekv). Smeša je periodično agitirana tokom 15 minuta, zatim je reakcioni rastvor proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno četiri puta kao što sledi: za svako pranje, DMF (2.0 mL) je dodat preko gornjeg dela suda (ne kroz fritu na dnu) i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 30 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. U reakcioni sud je dodat anhidrid sirćetne kiseline (2.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 10 minuta, zatim je rastvor proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno četiri puta kao što sledi: za svako pranje, DMF (2.0 mL) je dodat preko gornjeg dela suda (ne kroz fritu na dnu) i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 90 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. Dobijena smola je korišćena direktno u sledećem koraku.

Pojedinačno kuplovanjeza-(S)-2-amino-3-(1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)propansku kiselinu:

[1056] Kuplovanje je sprovedeno kao iznad, samo što je primenjeno vreme uzburkavanja od 30 min.

Dvostruko-kuplujući postupak:

[1057] U reakcioni sud koji sadrži smolu iz prethodnog koraka je dodat piperdin:DMF (20:80 v/v, 2.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 3 minuta i zatim je rastvor proceđen kroz fritu. U reakcioni sud je dodat piperdin:DMF (20:80 v/v, 2.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 3 minuta i zatim je rastvor proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno šest puta kao što sledi: za svako pranje, DMF (2.0 mL) je dodat preko gornjeg dela suda (ne kroz fritu na dnu) i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 30 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. U reakcioni sud je dodata amino kiselina (0.2M u DMF-u, 1.0 mL, 2 ekv), zatim HATU (0.2M u DMF-u, 1.0 mL, 2 ekv), i konačno DIPEA (0.4M u DMF-u, 1.0 mL, 4 ekv). Smeša je periodično agitirana tokom 15 minuta, zatim je reakcioni rastvor proceđen kroz fritu. Smola je dva puta oprana kao što sledi: za svako pranje, DMF (2.0 mL) je dodat preko gornjeg dela suda (ne kroz fritu na dnu) i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 30 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. U reakcioni sud je dodata amino kiselina (0.2M u DMF-u, 1.0 mL, 2 ekv), zatim HATU (0.2M u DMF-u, 1.0 mL, 2 ekv), i konačno DIPEA (0.4M u DMF-u, 1.0 mL, 4 ekv). Smeša je periodično agitirana tokom 15 minuta, zatim je reakcioni rastvor proceđen kroz fritu. Smola je dva puta oprana kao što sledi: za svako pranje, DMF (2.0 mL) je dodat preko gornjeg dela suda (ne kroz fritu na dnu) i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 30 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. U reakcioni sud je dodat anhidrid sirćetne kiseline (2.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 10 minuta, zatim je rastvor proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno četiri puta kao što sledi: za svako pranje, DMF (2.0 mL) je dodat preko gornjeg dela suda (ne kroz fritu na dnu) i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 90 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. Dobijena smola je korišćena direktno u sledećem koraku.

Postupak kuplovanja hloroacetil hlorida:

[1058] U reakcioni sud koji sadrži smolu iz prethodnog koraka je dodat piperdin:DMF (20:80 v/v, 2.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 3 minuta i zatim je rastvor proceđen kroz fritu. U reakcioni sud je dodat piperdin:DMF (20:80 v/v, 2.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 3 minuta i zatim je rastvor proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno šest puta kao što sledi: za svako pranje, DMF (2.0 mL) je dodat preko gornjeg dela suda (ne kroz fritu na dnu) i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 30 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. U reakcioni sud je dodat DIPEA (0.4M u DMF-u, 3.0 mL, 24 ekv), zatim hloroacetil hlorid (0.8M u DMF-u, 1.5 mL, 13.2 ekv). Smeša je periodično agitirana tokom 30 minuta, zatim je rastvor proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno tri puta kao što sledi: za svako pranje, DMF (2.0 mL) je dodat preko gornjeg dela suda (ne kroz fritu na dnu) i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 90 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno četiri puta kao što sledi: za svako pranje, CH2Cl2(2.0 mL) je dodat preko gornjeg dela suda (ne kroz fritu na dnu) i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 90 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. Dobijena smola se postavlja pod struju N2tokom 15 minuta nakon čega smola postaje kruta i lako se njome manipuliše.

Za C-terminalne proizvode karboksilne kiseline:

[1059] Postupci opisuju eksperiment sproveden na 0.100 mmol skali, gde je skala određena količinom 2-hlorotritil veznika vezanog za smolu. Komercijalna Fmoc-Gly-2-hlorotritil smola je primenjena, obično kao 0.92 mekv/g opterećenje. Ova skala odgovara sa približno 109 mg Fmoc-Gly-2-hlorotritil smole koja je opisana iznad. Pre aminokiselinskog kuplovanja, sve sekvence peptidne sinteze počinju sa postupkom bubrenja smole, opisanim ispod kao “Postupak bubrenja smole". Kuplovanje aminokiselina sa N-terminusom primarnog amina koristilo je "Postupak pojedinačnog kuplovanja" koji je opisan ispod. Kuplovanje aminokiselina sa N-terminusom sekundarnog amina koristilo je "Dvostruko-kuplujući postupak" koji je opisan ispod. Kuplovanje hloroacetilhlorida na N-terminus peptida je opisano pomoću "Postupka kuplovanja hloroacetil hlorida" koji je detaljno opisan ispod.

Postupak bubrenja smole:

[1060] U polipropilenski reakcioni sud od 10 mL za čvrstu fazu je dodata Merrifield:Rink smola (178 mg, 0.100 mmol). Smola je oprana (nabubrila) tri puta kao što sledi: u reakcioni sud je dodat DMF (2.0 mL), nakon čega je smeša periodično agitirana tokom 10 minuta pre nego što je rastvarač proceđen kroz fritu.

Postupak pojedinačnog kuplovanja:

[1061] U reakcioni sud koji sadrži smolu iz prethodnog koraka je dodat piperdin:DMF (20:80 v/v, 2.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 3 minuta i zatim je rastvor proceđen kroz fritu. U reakcioni sud je dodat piperdin:DMF (20:80 v/v, 2.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 3 minuta i zatim je rastvor proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno šest puta kao što sledi: za svako pranje, DMF (2.0 mL) je dodat preko gornjeg dela suda (ne kroz fritu na dnu) i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 30 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. U reakcioni sud je dodata amino kiselina (0.2M u DMF-u, 1.0 mL, 2 ekv), zatim HATU (0.2M u DMF-u, 1.0 mL, 2 ekv), i konačno DIPEA (0.4M u DMF-u, 1.0 mL, 4 ekv). Smeša je periodično agitirana tokom 15 minuta, zatim je reakcioni rastvor proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno četiri puta kao što sledi: za svako pranje, DMF (2.0 mL) je dodat preko gornjeg dela suda (ne kroz fritu na dnu) i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 30 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. U reakcioni sud je dodat DIPEA (0.4M u DMF-u, 1.0 mL, 4 ekv), zatim anhidrid (2.0 mL) sirćetne kiseline. Smeša je periodično agitirana tokom 10 minuta, zatim je rastvor proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno četiri puta kao što sledi: za svako pranje, DMF (2.0 mL) je dodat preko gornjeg dela suda (ne kroz fritu na dnu) i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 90 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. Dobijena smola je korišćena direktno u sledećem koraku.

Pojedinačno kuplovanje za-(S)-2-amino-3-(1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)propansku kiselinu:

[1062] Kuplovanje je sprovedeno kao iznad, samo što je primenjeno vreme agitacije od 30 min.

Dvostruko-kuplujući postupak:

[1063] U reakcioni sud koji sadrži smolu iz prethodnog koraka je dodat piperdin:DMF (20:80 v/v, 2.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 3 minuta i zatim je rastvor proceđen kroz fritu. U reakcioni sud je dodat piperdin:DMF (20:80 v/v, 2.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 3 minuta i zatim je rastvor proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno šest puta kao što sledi: za svako pranje, DMF (2.0 mL) je dodat preko gornjeg dela suda (ne kroz fritu na dnu) i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 30 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. U reakcioni sud je dodata amino kiselina (0.2M u DMF-u, 1.0 mL, 2 ekv), zatim HATU (0.2M u DMF-u, 1.0 mL, 2 ekv), i konačno DIPEA (0.4M u DMF-u, 1.0 mL, 4 ekv). Smeša je periodično agitirana tokom 15 minuta, zatim je reakcioni rastvor proceđen kroz fritu. Smola je dva puta oprana kao što sledi: za svako pranje, DMF (2.0 mL) je dodat preko gornjeg dela suda (ne kroz fritu na dnu) i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 30 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. U reakcioni sud je dodata amino kiselina (0.2M u DMF-u, 1.0 mL, 2 ekv), zatim HATU (0.2M u DMF-u, 1.0 mL, 2 ekv), i konačno DIPEA (0.4M u DMF-u, 1.0 mL, 4 ekv). Smeša je periodično agitirana tokom 15 minuta, zatim je reakcioni rastvor proceđen kroz fritu. Smola je dva puta oprana kao što sledi: za svako pranje, DMF (2.0 mL) je dodat preko gornjeg dela suda (ne kroz fritu na dnu) i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 30 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. U reakcioni sud je dodat DIPEA (0.4M u DMF-u, 1.0 mL, 4 ekv), zatim anhidrid (2.0 mL) sirćetne kiseline. Smeša je periodično agitirana tokom 10 minuta, zatim je rastvor proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno četiri puta kao što sledi: za svako pranje, DMF (2.0 mL) je dodat preko gornjeg dela suda (ne kroz fritu na dnu) i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 90 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. Dobijena smola je korišćena direktno u sledećem koraku.

Postupak kuplovanja hloroacetil hlorida:

[1064] U reakcioni sud koji sadrži smolu iz prethodnog koraka je dodat piperdin:DMF (20:80 v/v, 2.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 3 minuta i zatim je rastvor proceđen kroz fritu. U reakcioni sud je dodat piperdin:DMF (20:80 v/v, 2.0 mL). Smeša je periodično agitirana tokom 3 minuta i zatim je rastvor proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno šest puta kao što sledi: za svako pranje, DMF (2.0 mL) je dodat preko gornjeg dela suda (ne kroz fritu na dnu) i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 30 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. U reakcioni sud je dodat DIPEA (0.4M u DMF-u, 3.0 mL, 24 ekv), zatim hloroacetil hlorid (0.8M u DMF-u, 1.5 mL, 13.2 ekv). Smeša je periodično agitirana tokom 30 minuta, zatim je rastvor proceđen kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno tri puta kao što sledi: za svako pranje, DMF (2.0 mL) je dodat preko gornjeg dela suda (ne kroz fritu na dnu) i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 90 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. Smola je oprana sukcesivno četiri puta kao što sledi: za svako pranje, CH2Cl2(2.0 mL) je dodat preko gornjeg dela suda (ne kroz fritu na dnu) i smeša koja se dobija je periodično agitirana tokom 90 sekundi pre nego što se rastvor procedi kroz fritu. Dobijena smola se postavlja pod struju N2tokom 15 minuta nakon čega je smola postala kruta i lako se njome manipulisalo.

Opšti postupak deprotekcije:

[1065] "Rastvor za deprotekciju" je pripremljen kombinovanjem u staklenoj bočici od 40 mL trifluorosirćetne kiseline (22 mL), fenola (1.325 g), vode (1.25 mL) i triizopropilsilana (0.5 mL). Smola je uklonjena iz reakcionog suda i preneta u staklenu bočicu od 4 mL. U bočicu je dodat "rastvor za deprotekciju" (2.0 mL). Smeša je energično mešana u šejkeru (1000 OPM tokom 1 minuta, zatim 500 OPM tokom 1.5h). Smeša je filtrirana kroz špric filter od 0.2 mikrona u 18X150 mm test epruvetu, i čvrste supstance su ekstrahovane sa drugom porcijom "rastvora za deprotekciju" (1.0 mL). Kombinovani filtrati, u 18X150 mm test epruveti, su razblaženi sa Et2O (15 mL) nakon čega je značajna količina bele čvrste supstance istaložena. Smeša je centrifugirana tokom 2 minuta, zatim je rastvor dekantiran. Čvrste materije su suspendovane u Et2O (20 mL); Smeša je centrifugirana tokom 5 minuta; i rastvor je dekantiran. Poslednji put, čvrste materije su suspendovane u Et2O (20 mL); Smeša je centrifugirana tokom 5 minuta; i rastvor je dekantiran.

Postupak ciklizacije:

[1066] Čvrste materije su rastvorene u 20 mL MeCN:vod. 0.1M NH4OAc (1:1), i rastvor je pažljivo podešen na pH = 8.5-9.0 primenom vod NaOH (1.0M). Rastvoru je zatim dozvoljeno da odstoji (nije neophodno mešanje) preko noći (približ. 18h). 1 mL DMSO je dodato, i rekcioni rastvor je koncentrovan u SpeedVac centrifugalnom evaporatoru preko noći uz blago zagrevanje. Približno 1 mL MeOH-a je dodato ostatku, i rastvor koji se dobija je prečišćen pomoću metode opisane u zasebnim primerima. Kao alternativni postupak ciklizacije, materijal dobijen iz reakcije .1 mmol skale je preuzet u ~20 mL MeOH koji sadrži ∼5 kapi Hunig-ove baze (pH ∼10). Ovo je ostavljeno da odstoji na ST bez mešanja preko noći. Rastvarači su uklonjeni u vakuumu i ostatak je prečišćen kao što je opisano u zasebnim primerima.

Opšti postupak formacije triazola za primere 13051-13077, 13120-13128, 13141-13164, i 14121-14126:

[1067] U rastvor (ili u nekim slučajevima suspenziju) alkin i azid komponenata u 1:1 voda:tBuOH (∼0.016 M) je dodato 1.3 ekv. (naspram peptida) natrijum (R)-2-((S)-1,2-dihidroksietil)-4-hidroksi-5-okso-2,5-dihidrofuran-3-olata. Zatim 0.2 ekv (naspram peptida) CuSO4(kao 0.05 mg/µL vodeni rastvor) je dodat, i dobijeni rastvor je mešan na ST tokom ∼18 h. Smeša je ubrizgana direktno na preparatornoj HPLC, kako je opisano u specifičnim primerima.

Opšti postupak formacije triazola za primere 14051-14102:

[1068] Smeša INT-1400J (48 mg, 0.023 mmol), (R)-2,5,7,8-tetrametil-2-((4R,8R)-4,8,12-trimetiltridecil)hroman-6-il 4-((5-azidopentil)amino)-4-oksobutanoata (17.64 mg, 0.028 mmol), natrijum (R)-2-((S)-1,2-dihidroksietil)-4-hidroksi-5-okso-2,5-dihidrofuran-3-olata (6.39 mg, 0.032 mmol) i bakar(II) sulfat pentahidrata (2.290 mg, 9.17 µmol) u t-BuOH (459 µl) / Voda (459 µl) je mešana na ST preko noći.

Priprema Fmoc-(S)-propargilglicin-2-hlorotritil smole

[1069] U rastvor 2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)pent-4-inske kiseline (0.671 g, 2.000 mmol) u 3 mL DMF i 20 mL DCM je dodat DIPEA (1.397 ml, 8.00 mmol). Dobijeni rastvor je dodat u 2.0 g hlorotritil hlorid smole (1.2 mekv/g), i dobijena smeša je mućkana tokom 2 h na st. Rastvarači su uklonjeni filtriranjem, i smola je prekrivena sa 17:2:1 DCM/MeOH/DIPEA (mućkana sa 10 mL rastvora tokom 15 min zatim filtrirana). Ovo je ponovljeno još dva puta. Smola je oprana dva puta sa DCM, 4 puta sa DMF, i 6 puta sa DCM. (svaki ciklus je ∼10 min, praćeno filtracijom (Buchner-ov levak). Smola je osušena pod N2, dajući prinos 2.2 g smole, procenjeno opterećenje od 0.9 mmol/g.

Priprema 2-(2-(2-metoksietoksi)etoksi)-N-(prop-2-in-1-il)acetamida

[1070]

[1071] U rastvor 2-(2-(2-metoksietoksi)etoksi)sirćetne kiseline (1.53 g, 8.59 mmol) u THF-u (28.6 ml) je dodat prop-2-in-1-amin (0.660 ml, 10.30 mmol) i DIPEA (3.00 ml, 17.17 mmol). HBTU (3.91 g, 10.30 mmol) je zatim dodat, i smeša je mešana na st. Nakon ∼1.5 h, LC/MS je ukazala da je reakcija napredovala do skoro potpune. Rastvarač je dekantiran od belog taloga, i koncentrovan je u vakuumu. Ostatak je preuzet u EtOAc, zatim ekstrahovan sa NaHCO3da se ukloni bilo kakva neizreagovana kiselina. Organski sloj je zatim ekstrahovan dva puta sa 0.1 M HCl da bi se uklonio višak baze. Organski ekstrakti su zatim osušeni preko MgSO4, filtrirani, i koncentrovani in vacuo. Ostatak je nanešen na silika gel (40g) i eluiran sa CH2Cl2(60 mL), zatim gradijentom do 25% aceton/ CH2Cl2tokom 600 mL, i konačno zadržavanje pri 25% aceton/ CH2Cl2za 300 mL. Odgovarajuće frakcije su kombinovane da se dobije 2-(2-(2-metoksietoksi)etoksi)-N-(prop-2-in-1-il)acetamid (102.2 mg, 0.475 mmol, 5.53 % prinos).<1>H NMR (500MHz, HLOROFORM-d) δ 7.41 (br. s., 1H), 4.11 (dd, J=5.6, 2.6 Hz, 2H), 4.05 (s, 2H), 3.74 - 3.67 (m, 6H), 3.63 - 3.60 (m, 2H), 3.43 (s, 3H), 2.23 (t, J=2.5 Hz, 1H).

Priprema N-(prop-2-in-1-il)stearamida

[1072]

[1073] U rastvor tetradekanoil hlorida (200 mg, 0.810 mmol) u tetrahidrofuranu (2026 µl) je dodat prop-2-in-1-amin (208 µl, 3.24 mmol). Nakon vikenda, željeni proizvod je otkriven pomoću LC/MS. Rastvarač u višku je uklonjen u vakuumu, i voda je dodata. pH je podešen na ~10 sa 1M NaOH, i smeša je ekstrahovana 3 puta u CH2Cl2. Kombinovani organski ekstrakti su osušeni preko MgSO4, filtrirani, i koncentrovani in vacuo. Hromatografija sa gradijentom EtOAc/Heksan dala je željeni materijal.<1>H NMR (500MHz, HLOROFORM-d) δ 5.57 (br. s., 1H), 4.08 (dd, J=5.3, 2.5 Hz, 2H), 2.25 (t, J=2.6 Hz, 1H), 2.23 - 2.19 (m, 2H), 1.65 (m, 6H), 1.31 (m, 24H), 0.92 - 0.87 (m, 3H).

Priprema N-(5-azidopentil)-2-(2-(2-metoksietoksi)etoksi)acetamida

[1074]

[1075] U rastvor 2-(2-(2-metoksietoksi)etoksi)sirćetne kiseline (400 mg, 2.245 mmol) u THF-u (7483 µl) je dodat 5-azidopentan-1-amin (317 mg, 2.469 mmol) i DIPEA (784 µl, 4.49 mmol). HBTU (936 mg, 2.469 mmol) je zatim dodat, i smeša je mešana na st. Nakon ∼1.5 h, LC/MS je ukazala da je reakcija napredovala do skoro potpune. Rastvarač je dekantiran od belog taloga, i koncentrovan je u vakuumu. Ostatak je preuzet u EtOAc, zatim ekstrahovan sa NaHCO3 da se ukloni bilo kakva neizreagovana kiselina. Organski sloj je zatim ekstrahovan dva puta sa 0.1 M HCl da bi se uklonio višak baze. Organski ekstrakti su zatim osušeni preko MgSO4, filtrirani, i koncentrovani in vacuo. Materijal je primenjen kakav jeste za dalju hemijsku obradu. LC/MS: (M+H)<+>= 289.15.

(R)-2,5,7,8-tetrametil-2-((4R,8R)-4,8,12-trimetiltridecil)hroman-6-il 4-((5-azidopentil)amino)-4-oksobutanoat

[1076]

Korak 1: Priprema (R)-2,5,7,8-tetrametil-2-((4R,8R)-4,8,12-trimetiltridecil)hroman-6-il 4-((5-azidopentil)amino)-4-oksobutanoata

[1077] Smeša 5-azidopentan-1-amina (0.320 g, 2.419 mmol), Vitamin E sukcinata (1.07 g, 2.016 mmol), DIPEA (0.704 ml, 4.03 mmol) i HBTU (0.765 g, 2.016 mmol) u THF-u (6.72 ml) je mešana na ST preko noći. Sirovi proizvod koji se dobija je prečišćen pomoću Biotage (silika gel, 300 g, 0 do 20% aceton / CH2Cl2) da se dobije (R)-2,5,7,8-tetrametil-2-((4R,8R)-4,8,12-trimetiltridecil)hroman-6-il 4-((5-azidopentil)amino)-4-oksobutanoat (1.29 g, 2.013 mmol, 100 % prinos). Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 4.87 min; ESI-MS(+) m/z 641.4 (M H)<+>;<1>H NMR (500MHz, METANOL-d4) δ 3.26 - 3.15 (m, 4H), 2.95 (t, J=6.7 Hz, 2H), 2.62 (dt, J=12.8, 6.6 Hz, 4H), 2.13 - 2.06 (m, 3H), 1.99 -1.96 (m, 3H), 1.84 -1.81 (m, 3H), 1.90 - 1.76 (m, 2H), 1.69 - 1.02 (m, 30H), 0.98 - 0.79 (m, 12H)

2-(2-(2-(2-azidoetoksi)etoksi)etoksi)etil ((R)-2,5,7,8-tetrametil-2-((4R,8R)-4,8,12-trimetiltridecil)hroman-6-il) sukcinat

[1078]

Korak 1: Priprema 2-(2-(2-(2-azidoetoksi)etoksi)etoksi)etil((R)-2,5,7,8-tetrametil-2-((4R,8R)-4,8,12-trimetiltridecil)hroman-6-il)sukcinata

[1079] Smeša 2-(2-(2-(2-azidoetoksi)etoksi)etoksi)etanola u t-butilmetil etru (3.77 ml, 1.884 mmol), Vitamin E sukcinata (1.0 g, 1.884 mmol), DMAP (0.092 g, 0.754 mmol) i EDCI (1.138 g, 5.93 mmol) u CH2Cl2(11.35 ml) je mešana na ST preko noći. Sirov proizvod koji se dobija je prečišćen pomoću Biotage (silika gel, 300 g, 0 do 20% aceton / CH2Cl2) da se dobije 2-(2-(2-(2-azidoetoksi)etoksi)etoksi)etil ((R)-2,5,7,8-tetrametil-2-((4R,8R)-4,8,12-trimetiltridecil)hroman-6-il) sukcinat (1.37 g, 1.872 mmol, 99 % prinos). Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 5.18 min; ESI-MS(+) m/z 732.5 (M H)<+>

<1>H NMR (500MHz, METANOL-d4) δ 4.31 - 4.21 (m, 2H), 3.74 - 3.60 (m, 12H), 3.38 - 3.34 (m, 2H), 2.95 (dd, J=7.5, 5.3 Hz, 2H), 2.78 (dd, J=7.4, 5.4 Hz, 2H), 2.64 (t, J=6.8 Hz, 2H), 2.12 - 2.07 (m, 3H), 2.01 (s, 3H), 1.99 - 1.94 (m, 3H), 1.90 - 1.75 (m, 2H), 1.66 - 1.03 (m, 24H), 0.94 - 0.83 (m, 12H)

17-azido-3,6,9,12,15-pentaoksaheptadecil ((R)-2,5,7,8-tetrametil-2-((4R,8R)-4,8,12-trimetiltridecil)hroman-6-il)sukcinat

[1080]

Korak 1: Priprema 17-hidroksi-3,6,9,12,15-pentaoksaheptadecil 4-metilbenzensulfonata:

[1081] 3,6,9,12,15-Pentaoksaheptadekan-1,17-diol (8 g, 28.3 mmol) je rastvoren u THF (30 mL). Piridin (7.13 mL, 88 mmol) je dodat u smešu praćeno sa 4-metilbenzen-1-sulfonil hloridom (5.41 g, 28.4 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 sata. Smeša je koncentrovana rotovap-om (rotacionim evaporatorom). Ostatak koji se dobija je rastvoren u dihlorometanu, opran dva puta zasićenim vodenim natrijum bikarbonatom. Kombinovani vodeni slojevi su ponovoekstrahovani dihlorometanom. Kombinovane organske supstance su oprane dva puta IN hlorovodoničnom kiselinom i jednom slanim rastvorom. Organske materije su osušene preko MgSO4, filtrirane, koncentrovane do suva da se dobije 17-hidroksi-3,6,9,12,15-pentaoksaheptadecil 4-metilbenzensulfonat (5.10 g, 11.68 mmol, 41.2 % prinos) koji je primenjen kakav jeste u narednom koraku. Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 1.37 min; ESI-MS(+) m/z 437.3 (M H)<+>

Korak 2: Priprema 17-azido-3,6,9,12,15-pentaoksaheptadekan-1-ola

[1082] 17-Hidroksi-3,6,9,12,15-pentaoksaheptadecil 4-metilbenzensulfonat (5.10 g, 11.68 mmol) je rastvoren u EtOH (37.4 ml). Natrijum azid (2.97 g, 45.7 mmol) je dodat u smešu praćeno sa vodom (1.498 ml). Smeša je zagrevana do refluksa i držana uz mešanje tokom 15 sati. Mutna reakciona smeša je koncentrovana roto-vap-om. Ostatak je tretiran vodom. Smeša je ekstrahovana dva puta dihlorometanom. Kombinovane organske supstance su oprane dva puta vodenim natrijum bikarbonatom. Organske materije su osušene preko MgSO4, filtrirane i zatim koncentrovane do suva. Ostatak je prečišćen putem Biotage (Silika; 300g; 0 do 9% D MeOH / Dihlorometan tokom 2400 mL). Kompletan efluent je prikupljen u 16x150 kultivacione epruvete. Frakcije sa najvećim pikom , kako je određeno pomoću TLC (silika; 5% MeOH-CH2Cl2; jodna komora) je izolovana i koncentrovana do suva.17-azido-3,6,9,12,15-pentaoksaheptadekan-1-ol (3.08 g, 10.02 mmol, 86 % prinos) je dobijen kao bistro bezbojno ulje. Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 1.19 min; ESI-MS(+) m/z 330.2 (M Na);<1>H NMR (500MHz, METANOL-d4) δ 3.73 - 3.61 (m, 20H), 3.60 - 3.55 (m, 2H), 3.39 (t, J=4.9 Hz, 2H).

Korak 3: Priprema 17-azido-3,6,9,12,15-pentaoksaheptadekan-1-ola

[1083] Smeša 17-azido-3,6,9,12,15-pentaoksaheptadekan-1-ola (0.579 g, 1.884 mmol), Vitamin E sukcinata (1.0 g, 1.884 mmol), DMAP (0.092 g, 0.754 mmol) i EDCI (1.138 g, 5.93 mmol) u CH2Cl2-u (11.35 ml) je mešana na ST preko noći. Sirov proizvod koji se dobija je prečišćen pomoću Biotage (SG, 300 g, 0 do 40% aceton / CH2Cl2) da se dobije 17-azido-3,6,9,12,15-pentaoksaheptadecil ((R)-2,5,7,8-tetrametil-2-((4R,8R)-4,8,12-trimetiltridecil)hroman-6-il) sukcinat (1.20 g, 1.463 mmol, 78 % prinos)._Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 5.50 min; ESI-MS(+) m/z 842.6 (M Na).

<1>H NMR (500MHz, METANOL-d4) δ 4.31 - 4.23 (m, 2H), 3.73 - 3.70 (m, 2H), 3.69 - 3.59 (m, 18H), 3.40 - 3.30 (m, 2H), 2.98 - 2.91 (m, 2H), 2.80 - 2.75 (m, 2H), 2.64 (t, J=6.8 Hz, 2H), 2.09 (s, 3H), 2.01 (s, 3H), 1.98 (s, 3H), 1.89 - 1.76 (m, 2H), 1.61 - 1.50 (m, 4H), 1.48 - 1.01 (m, 20H), 0.94 - 0.83 (m, 12H).

23-azido-3,6,9,12,15,18,21-heptaoksatrikozil ((R)-2,5,7,8-tetrametil-2-((4R,8R)-4,8,12-trimetiltridecil)hroman-6-il) sukcinat

[1084]

Korak 1: Priprema 23-hidroksi-3,6,9,12,15,18,21-heptaoksatrikozil 4-metilbenzensulfonata:

[1085] 3,6,9,12,15,18,21-Heptaoksatrikozan-1,23-diol (5.5 g, 14.85 mmol) je rastvoren u THF-u (30 mL). Piridin (3.73 mL, 46.2 mmol) je dodat u smešu praćeno sa 4-metilbenzen-1-sulfonil hloridom (2.84 g, 14.88 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je koncentrovana pomoću roto-vap-a. Ostatak je rastvoren u dihlorometanu, opran dva puta zasićenim vodenim natrijum bikarbonatom. Kombinovani vodeni slojevi su ponovno ekstrahovani dihlorometanom. Kombinovane organske supstance su oprane dva puta IN hlorovodoničnom kiselinom i jednom slanim rastvorom. Organske materije su osušene MgSO4, filtrirane, koncentrovane do suva da se dobije 23-hidroksi-3,6,9,12,15,18,21-heptaoksatrikozil 4-metilbenzensulfonat (2.58 g, 4.92 mmol, 33.1 % prinos) koji se koristi kakav jeste u narednom koraku. Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 1.41 min; ESI-MS(+) m/z 525.3 (M+H)<+>

Korak 2: Priprema 23-azido-3,6,9,12,15,18,21-heptaoksatrikozan-1-ola

[1086] 23-Hidroksi-3,6,9,12,15,18,21-heptaoksatrikozil 4-metilbenzensulfonat (2.58 g, 4.92 mmol) je rastvoreno u EtOH-u (15.76 ml). Natrijum azid (1.250 g, 19.23 mmol) je dodat u smešu praćeno sa vodom (0.630 ml). Smeša je zagrevana do refluksa i držana uz mešanje tokom 15 sati. Mutna reakciona smeša je koncentrovana pomoću roto-vapa. Ostatak je tretiran sa vodom. Materijal je ekstrahovan dva puta dihlorometanom. Kombinovane organske materije su oprane dva puta vodenim natrijum bikarbonatom. Organske materije su osušene MgSO4, filtrirane i zatim koncentrovane do suva. Ostatak je prečišćen putem Biotage (Silika; 300g; 0 do 10% MeOH / Dihlorometan tokom 2400 mL). Kompletan efluent je prikupljen u 16x150 kultivacione epruvete. Frakcija sa najvećim pikom, kako je određeno pomoću TLC (silika; 5% MeOH-CH2Cl2; jodna komora) je izolova i koncentrovana do suva. 23-azido-3,6,9,12,15,18,21-heptaoksatrikozan-1-ol (1.55 g, 3.92 mmol, 80 % prinos) je dobijen kao bistro bezbojno ulje. Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 1.18 min; ESI-MS(+) m/z 396.3 (M H)<+>;<1>H NMR (500MHz, METANOL-d4) δ 3.75 - 3.60 (m, 28H), 3.60 - 3.54 (m, 2H), 3.43 - 3.37 (m, 2H).

Korak 3: Priprema 17-azido-3,6,9,12,15-pentaoksaheptadekan-1-ola

[1087] Smeša 23-azido-3,6,9,12,15,18,21-heptaoksatrikozan-1-ola (0.745 g, 1.884 mmol), Vitamin E sukcinata (1.0 g, 1.884 mmol), DMAP (0.092 g, 0.754 mmol) i EDCI (1.138 g, 5.93 mmol) u CH2Cl2(11.35 ml) je mešana na ST preko noći. Sirov proizvod koji se dobija je prečišćen pomoću Biotage (SG, 300 g, 0 do 50% aceton / CH2Cl2) da se dobije 23-azido-3,6,9,12,15,18,21-heptaoksatrikozil ((R)-2,5,7,8-tetrametil-2-((4R,8R)-4,8,12-trimetiltridecil)hroman-6-il) sukcinat (0.77 g, 0.848 mmol, 45.0 % prinos).

Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 5.04 min; ESI-MS(+) m/z 908.9 (M H)<+ 1>H NMR (500MHz, METANOL-d4) δ 4.30 - 4.23 (m, 2H), 3.77 - 3.56 (m, 28H), 3.42 - 3.35 (m, 2H), 2.96 (dd, J=7.5, 5.3 Hz, 2H), 2.84 - 2.73 (m, 2H), 2.64 (t, J=6.8 Hz, 2H), 2.09 (s, 3H), 2.00 (d, J=17.1 Hz, 6H), 1.83 (dq, J=18.4, 6.7 Hz, 2H), 1.64 - 1.04 (m, 24H), 0.97 - 0.79 (m, 12H).

[1088]

Korak 1: Priprema 2,5,8,11-tetraoksatridekan-13-il 4-metilbenzensulfonata

[1089] 2,5,8,11-Tetraoksatridekan-13-ol (5.0 g, 24.01 mmol) je rastvoren u THF-u (20.01 ml). Piridin (5.83 ml, 72.0 mmol) je dodat u smešu praćeno sa 4-metilbenzen-1-sulfonil hloridom (5.49 g, 28.8 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je koncentrovana rotovap-om. Ostatak je rastvoren u dihlorometanu. Materijal je opran dva puta zasićenim vodenim natrijum bikarbonatom. Kombinovani vodeni slojevi su ponovno ekstrahovani dihlorometanom. Kombinovane organske materije su oprane dva puta IN hlorovodoničnom kiselinom i jednom slanim rastvorom. Organske materije su osušene MgSO4, filtrirane i zatim koncentrovane do suva da se dobije 2,5,8,11-tetraoksatridekan-13-il 4-metilbenzensulfonat (4.12 g, 11.37 mmol, 47.3 % prinos) koji je primenjen kakav jeste u narednom koraku.

Korak 2: Priprema 13-azido-2,5,8,11-tetraoksatridekana

[1090] 2,5,8,11-Tetraoksatridekan-13-il 4-metilbenzensulfonat (4.12 g, 11.37 mmol) je rastvoren u EtOH-u (18.22 ml). Natrijum azid (1.478 g, 22.73 mmol) je dodat u smešu praćeno sa vodom (0.729 ml). Smeša je zagrevana do refluksa i držana uz mešanje tokom 15 sati. Mutna reakciona smeša je koncentrovana roto-vap-om. Ostatak je tretiran sa vodom. Materijal je ekstrahovan dva puta dihlorometanom. Kombinovane organske materije su oprane dva puta vodenim natrijum bikarbonatom. Organske materije su osušene MgSO4, filtrirane i zatim koncentrovane do suva. Ostatak je prečišćen putem Biotage (Silika; 300g; 0 do 9% D MeOH / Dihlorometan tokom 2400 mL). Kompletan efluent je prikupljen u 16x150 kultivacione epruvete. Frakcija sa najvećim pikom, kako je određeno pomoću TLC (silika; 5% MeOH-CH2Cl2; jodna komora) je izolovana i koncentrovana do suva. 13-azido-2,5,8,11-tetraoksatridekan (1.17 g, 5.02 mmol, 44.1 % prinos) je dobijen kao bistro bezbojno ulje. [M+H]<+>pri m/z 234, i natrijum adukt [M+Na]<+>pri m/z 256;<1>H NMR (400MHz, METANOL-d4) δ 3.74 - 3.60 (m, 12H), 3.58 - 3.53 (m, 2H), 3.43 - 3.35 (m, 5H).

(S)-16-((3-azido-1-karboksipropil)amino)-16-oksoheksadekanska kiselina

[1091]

Korak 1: Priprema 16-(terc-butoksi)-16-oksoheksadekanska kiselina

[1092] Heksadekandionska kiselina (4.5 g, 15.71 mmol) je suspendovana u toluenu (28.1 ml) i ameša je zagrevana do refluksa. 1,1-di-terc-butoksi-N,N-dimetilmetanamin (10.10 ml, 42.1 mmol) je dodat u kapima tokom 30 min. Smeša je reflukovana preko noći. Rastvarač je uklonjen u vakuumu na 50°C i sirovi materijal je suspendovan u CH2Cl2/EtOAc (75 mL.1:1) i mešan tokom 15 min. Čvrste materije su uklonjene filtracijom i oprane sa CH2Cl2(25 mL). Filtracija je evaporisana u vakuumu. Materijal koji se dobija je suspendovan u CH2Cl2(6 mL), ohlađen ledom tokom 10 minuta, i filtriran. Rastvarač je uklonjen u vakuumu da se ostane sirovi proizvod koji je prečišćen fleš hromatografijom (silika gel, EtOAc/Heksan) da se dobije 16-(terc-butoksi)-16-oksoheksadekanska kiselina (2.56 g, 7.47 mmol, 47.6 % prinos). Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 5.04 min; ESI-MS(+) m/z 269.3 [M - OC(CH3)3];<1>H NMR (500MHz, METANOL-d4) δ 2.33 - 2.18 (m, 4H), 1.66 - 1.54 (m, 4H), 1.50 - 1.43 (m, 9H), 1.40 - 1.25 (m, 20H).

Korak 2: Priprema (S)-metil 2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-4-azidobutanoata

[1093] U smešu (2S)-N-FMOC-4-AZIDO-BUTANSKE KISELINE (1.0 g, 2.73 mmol) u MeOH (4.21 ml) / CH2Cl2(12.64 ml) je dodat (TRIMETILSILIL)DIAZOMETAN u dietil etru (2.047 ml, 4.09 mmol). Dobijena smeša je mešana na ST tokom 2 h. Smeša je koncentrovana da se dobije (S)-metil 2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-4-azidobutanoat, koji je primenjen kakav jeste u narednom koraku.<1>H NMR (500MHz, METANOL-d4) δ 7.81 (d, J=7.6 Hz, 2H), 7.73 -7.63 (m, 2H), 7.47 - 7.22 (m, 4H), 4.41 (d, J=6.7 Hz, 2H), 4.35 - 4.17 (m, 2H), 3.82 - 3.70 (m, 3H), 3.49 - 3.34 (m, 2H), 2.21 - 2.04 (m, 1H), 1.97 - 1.80 (m, 1H).

Korak 3: Priprema (S)-metil 4-azido-2-((terc-butoksikarbonil)amino)butanoata

[1094] Smeša (S)-metil 2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-4-azidobutanoata (1.038 g, 2.73 mmol) i dietilamina (4.0 mL, 38.3 mmol) u CH2Cl2(4 mL) je mešana na ST tokom 2 h. LCMS je prikazala nestanak Č.M. (eng. S.M.) i formaciju proizvoda zajedno sa pikovima koji se odnose na Fmoc. Koncentrovan i rezultujući proizvod je primenjen kakav jeste u narednom koraku.<1>H NMR (500MHz, METANOL-d4) δ3.85 - 3.69 (m, 3H), 3.63 - 3.52 (m, 1H), 3.51 - 3.40 (m, 2H), 2.05 - 1.91 (m, 1H), 1.88 - 1.76 (m, 1H).

Korak 4: Priprema (S)-terc-butil 16-((4-azido-1-metoksi-1-oksobutan-2-il)amino)-16-oksoheksadekanoata

[1095] Smeša (S)-metil 2-amino-4-azidobutanoata (0.432 g, 2.73 mmol), 16-(terc-butoksi)-16-oksoheksadekanske kiseline (0.935 g, 2.73 mmol), DIPEA (1.907 ml, 10.92 mmol) i HBTU (1.035 g, 2.73 mmol) u THF-u (27.3 ml) je mešana na ST preko noći. Sirov proizvod koji se dobija je prečišćen pomoću Biotage (SG, 300 g, 0 do 10% aceton / CH2Cl2) da se dobije (S)-terc-butil 16-((4-azido-1-metoksi-1-oksobutan-2-il)amino)-16-oksoheksadekanoat (1.3 g, 2.69 mmol, 99 % prinos). Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 2.62 min; ESI-MS(+) m/z 483.3 (M+H)<+>

Korak 5: Priprema (S)-4-azido-2-(16-(terc-butoksi)-16-oksoheksadekanamido)butanske kiseline

[1096] (S)-terc-butil 16-((4-azido-1-metoksi-1-oksobutan-2-il)amino)-16-oksoheksadekanoat (1.3 g, 2.69 mmol), je rastvoren u THF-u (13.47 ml) praćeno sa dodatkom LiOH (0.323 g, 13.47 mmol) i vode (13.47 ml). Reakcija je mešana na ST tokom 3 h. Koncentrovana reakciona smeša do suva. Rezultujuća (S)-4-azido-2-(16-(terc-butoksi)-16-oksoheksadekanamido)butanska kiselina je primenjen kakva jeste u narednom koraku.

Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 2.56 min; ESI-MS(+) m/z 469.4 (M+H)<+>

Korak 6: Priprema (S)-16-((3-azido-1-karboksipropil)amino)-16-oksoheksadekanske kiseline

[1097] Smeša (S)-4-azido-2-(16-(terc-butoksi)-16-oksoheksadekanamido)butanske kiseline (1261 mg, 2.69 mmol) i TFA (3 mL, 38.9 mmol) u DCM-u (20 mL) je mešana na ST tokom 2 h. Sirov proizvod koji se dobija je prečišćen pomoću Prep-HPLC (rastvarač A = 10% MeOH - 90% H2O -0.1% TFA, rastvarač B = 90% MeOH - 10% H2O - 0.1% TFA. Kolona: PHENOMENEX LUNA 30 x 100mm, S10, Brzina protoka: 40 ml / min, 50 - 100% B, 10 min i zaustavljanje na 12 min) da se dobije (S)-16-((3-azido-1-karboksipropil)amino)-16-oksoheksadekanska kiselina (326 mg, 0.790 mmol, 29.4 % prinos). Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 2.30 min; ESI-MS(+) m/z 413.3 (M+H)<+>;<1>H NMR (500MHz, METANOL-d4) δ 4.52 (dd, J=9.3, 4.7 Hz, 1H), 3.53 - 3.35 (m, 2H), 2.34 - 2.21 (m, 4H), 2.19 - 2.07 (m, 1H), 1.99 - 1.84 (m, 1H), 1.63 (dkvin, J=14.1, 7.1 Hz, 4H), 1.48 - 1.17 (m, 20H).

(S)-metil 4-azido-2-palmitamidobutanoat

[1098]

Korak 1: Priprema (S)-metil 2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-4-azidobutanoata

[1099] U smešu (2S)-N-FMOC-4-AZIDO-BUTANSKE KISELINE (1.0 g, 2.73 mmol) u MeOH (4.21 ml) / CH2Cl2(12.64 ml) je dodat (TRIMETILSILIL)DIAZOMETAN u dietil etru (2.047 ml, 4.09 mmol). Dobijena smeša je mešana na ST tokom 2 h. Smeša je koncentrovana dase dobije (S)-metil 2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-4-azidobutanoat, koji je primenjen kakav jeste u narednom koraku.<1>H NMR (500MHz, METANOL-d4) δ 7.81 (d, J=7.6 Hz, 2H), 7.73 7.63 (m, 2H), 7.47 - 7.22 (m, 4H), 4.41 (d, J=6.7 Hz, 2H), 4.35 - 4.17 (m, 2H), 3.82 - 3.70 (m, 3H), 3.49 - 3.34 (m, 2H), 2.21 - 2.04 (m, 1H), 1.97 - 1.80 (m, 1H).

Korak 2: Priprema (S)-metil 4-azido-2-((terc-butoksikarbonil)amino)butanoate

[1100] Smeša (S)-metil 2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-4-azidobutanoata (1.038 g, 2.73 mmol) i dietilamina (4.0 mL, 38.3 mmol) u CH2Cl2(4 mL) je mešana na ST tokom 2 h. LCMS je prikazala nestanak Č.M. i formaciju proizvoda zajedno sa pikovima koji se odnose na Fmoc. Koncentrovan i rezultujući proizvod je primenjen kao što jeste u narednom koraku.<1>H NMR (500MHz, METANOL-d4) δ 3.85 - 3.69 (m, 3H), 3.63 - 3.52 (m, 1H), 3.51 - 3.40 (m, 2H), 2.05 - 1.91 (m, 1H), 1.88 - 1.76 (m, 1H).

Korak 3: Priprema (S)-metil 4-azido-2-palmitamidobutanoata

[1101] Smeša (S)-metil 2-amino-4-azidobutanoata, TFA (544 mg, 2.00 mmol), palmitinske kiseline (513 mg, 2.000 mmol), DIPEA (1397 µl, 8.00 mmol) i HBTU (758 mg, 2.000 mmol) u THF-u (6667 µl) je mešana na ST preko noći. Sirov proizvod koji se dobija je prečišćen pomoću Biotage (SG, 300 g, 0 do 85% EtOAc / Heksan) da se dobije (S)-metil 4-azido-2-palmitamidobutanoat (477 mg, 1.203 mmol, 60.1 % prinos)._Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 2.75 min; ESI-MS(+) m/z 397.3 (M+H)<+>;<1>H NMR (500MHz, METANOL-d4) δ 4.53 (dd, J=9.2, 5.0 Hz, 1H), 3.74 (s, 3H), 3.51 - 3.35 (m, 2H), 2.31 - 2.22 (m, 2H), 2.15 - 2.06 (m, 1H), 1.97 - 1.86 (m, 1H), 1.70 - 1.57 (m, 2H), 1.41 - 1.28 (m, 24H), 0.94 - 0.84 (m, 3H).

Korak 4: Priprema (S)-metil 4-azido-2-palmitamidobutanoata

[1102] (S)-Metil 4-azido-2-palmitamidobutanoat (477 mg, 1.203 mmol), je rastvoren u THF (6014 µl) praćeno dodatkom LiOH (144 mg, 6.01 mmol) i vode (6014 µl). Reakcija je mešana na ST tokom 3 h. Koncentrovana reakciona smeša do suva. Rastvoren je ostatak sa vodom i dodata 1 N HCl da se zakiseli. Ekstrahovano sa CH2Cl2(x 3). Organski sloj je prikupljen , osušen preko MgSO4, filtriran i koncentrovan da se dobije (S)-4-azido-2-palmitamidobutanska kiselina (440 mg, 1.150 mmol, 96 % prinos). Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 2.71 min; ESI-MS(+) m/z 383.3 (M+H)<+>

<1>H NMR (500MHz, METANOL-d4) δ 4.56 - 4.47 (m, 1H), 3.52 - 3.34 (m, 2H), 2.32 - 2.22 (m, 2H), 2.14 (dddd, J=14.3, 7.8, 6.9, 4.9 Hz, 1H), 2.01 - 1.86 (m, 1H), 1.72 - 1.56 (m, 2H), 1.49 -1.12 (m, 24H), 1.01 - 0.80 (m, 3H).

(S)-1-azido-40-karboksi-37,42-diokso-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-undekaoksa-36,41-diazanonapentakontan-59-ska kiselina

[1103]

Korak 1: Priprema 18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanske kiseline

[1104] Oktadekanska kiselina (7.5 g, 23.85 mmol) je suspendovana u toluenu (42.6 ml) i smeša je zagrevana do refluksa. 1,1-di-terc-butoksi-N,N-dimetilmetanamin (15.33 ml, 63.9 mmol) je dodat u kapima tokom 30 min. Smeša je refluksovana preko noći. Rastvarač je uklonjen u vakuumu na 50 °C i sirovi materijal je suspendovan u CH2Cl2/EtOAc (110 mL. 1:1) i mešan tokom 15 min. Čvrste materije su uklonjene filtracijom i oprane sa CH2Cl2(40 mL). Filtracija je evaporisana u vakuumu. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom (SG, 0 do 25% Aceton / CH2Cl2) da se dobije 18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanska kiselina (3.95 g, 10.66 mmol, 44.7 % prinos). Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 5.04 min; ESI-MS(+) m/z 297.3 [M - OC(CH3)3]<1>H NMR (500MHz, METANOL-d4) δ 2.29 (t, J=7.5 Hz, 2H), 2.22 (t, J=7.4 Hz, 2H), 1.67 - 1.53 (m, 4H), 1.50 - 1.42 (m, 9H), 1.40 - 1.25 (m, 24H).

Korak 2: Priprema 1-terc-butil 18-(2,5-dioksopirolidin-1-il) oktadekandioata

[1105] DCC (5.11 ml, 5.11 mmol) je dodat u rastvor 18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanske kiseline (1.72 g, 4.64 mmol) i 1-hidroksipirolidin-2,5-diona (0.588 g, 5.11 mmol) u DMF-u (48 mL). Smeša je mešana na ST preko noći. Smeša je filtrirana i koncentrovana da se dobije 1-tercbutil 18-(2,5-dioksopirolidin-1-il) oktadekandioat koji je primenjen kakav jeste u narednom koraku.

Korak 3: Priprema (S)-5-(terc-butoksi)-4-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)-5-oksopentanske kiseline

[1106] Voda (5.80 ml) je dodata smeši (S)-4-amino-5-(terc-butoksi)-5-oksopentanske kiseline (1.038 g, 5.11 mmol), 1-terc-butil 18-(2,5-dioksopirolidin-1-il) oktadekandioata (2.171 g, 4.64 mmol), NATRIJUM BIKARBONATA (0.468 g, 5.57 mmol) u THF-u (17.41 ml). Rezultujući bistar rastvor je mešan na ST tokom 4 h. Sav THF je uklonjen, HCl (6.04 ml, 6.04 mmol) je dodat i pH je podešen na 2-3 pri 0°C. Suspenzija koja se dobija je ekstrahovana sa CH2Cl2(x3), Organski sloj je koncentrovan. Sirov proizvod koji se dobija je prečišćen fleš hromatografijom (aceton / CH2Cl20 do 25%) da se dobije (S)-5-(terc-butoksi)-4-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)-5-oksopentanska kiselina (2.29 g, 4.12 mmol, 89 % prinos) kao bela čvrsta supstanca. Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 2.74 min; ESI-MS(+) m/z 555.6 (M+H)<+ 1>H NMR (500MHz, METANOL-d4) δ 4.32 (dd, J=9.0, 5.3 Hz, 1H), 2.45 - 2.33 (m, 2H), 2.30 -2.06 (m, 5H), 1.99 - 1.82 (m, 3H), 1.78 - 1.53 (m, 2H), 1.53 - 1.44 (m, 18H), 1.44 - 1.26 (m, 24H).

Korak 4: Priprema (S)-terc-butil 1-azido-40-(terc-butoksikarbonil)-37,42-diokso-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-undekaoksa-36,41-diazanonapentakontan-59-oata

[1107] U rastvor (S)-5-(terc-butoksi)-4-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)-5-oksopentanske kiseline (438 mg, 0.789 mmol) u DMF-u (1593 µl) je dodata Hunig-ova baza (275 µl, 1.577 mmol) i HATU (400 mg, 1.051 mmol). 35-azido-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-undekaoksapentatriakontan-1-amin (300 mg, 0.526 mmol) je zatim dodat, i rastvor je mešan na st. Smeša je mešana preko noći.

Smeša je sipana u vodu i ekstrahovana 3 puta u CH2Cl2. Kombinovani organski ekstrakti su osušeni preko MgSO4, filtrirani, i koncentrovani in vacuo da se dobije (S)-terc-butil 1-azido-40(terc-butoksikarbonil)-37,42-diokso-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-undekaoksa-36,41-diazanonapentakontan-59-oat koji se primenjuje kakav jeste u narednom koraku. Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 2.84 min; ESI-MS(+) m/z 1109.1 (M+H)<+>

Korak 5: Priprema (S)-1-azido-40-karboksi-37,42-diokso-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-undekaoksa-36,41-diazanonapentakontan-59-ske kiseline

[1108] Smeša (S)-terc-butil 1-azido-40-(terc-butoksikarbonil)-37,42-diokso-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-undekaoksa-36,41-diazanonapentakontan-59-oat (280 mg, 0.253 mmol) i TFA (3 mL, 38.9 mmol) u DCM (3.0 mL) je mešana na ST tokom 2 h. Sirov proizvod koji se dobija je prečišćen pomoću Prep-HPLC (Rastvarač A = 10% MeOH - 90% H2O - 0.1% TFA, Rastvarač B = 90% MeOH - 10% H2O - 0.1% TFA. Kolona: PHENOMENEX LUNA 30 x 100mm, S10, Brzina protoka: 40 ml / min, 50 - 100% B, 10 min i zaustavljanje na 12 min) da se dobije (S)-1-azido-40-karboksi-37,42-diokso-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-undekaoksa-36,41-diazanonapentakontan-59-ska kiselina (124 mg, 0.124 mmol, 49.3 % prinos). Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 2.43 min; ESI-MS(+) m/z 996.9 (M+H)<+>;<1>H NMR (500MHz, METANOL-d4) δ 4.44 - 4.35 (m, 1H), 3.84 - 3.27 (m, 48H), 2.39 - 2.11 (m, 7H), 2.04 - 1.87 (m, 1H), 1.71 -1.55 (m, 4H), 1.44 - 1.18 (m, 24H).

(S)-1-azido-16-karboksi-13,18-diokso-3,6,9-trioksa-12,17-diazapentatriakontan-35-ska kiselina

[1109]

Korak 1: U rastvor 2-(2-(2-(2-azidoetoksi)etoksi)etoksi)etanamina (113 mg, 0.517 mmol) u DMF-u (4498 µl) je dodata Hunig-ova baza (314 µl, 1.799 mmol), zatim (S)-5-(tercbutoksi)-4-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)-5-oksopentanska kiselina (250 mg, 0.450 mmol). HATU (342 mg, 0.900 mmol) je zatim dodat, i dobijeni rastvor je mešan na st. LC/MS je prikazala konverziju u željeni m/z. Uklonjen DMF na visokom vakuumu, zatim ostatak je nanešen na silika gel (40g) i eluiran sa DCM (100 mL), zatim gradijentom do 75% DCM/aceton tokom 540 mL i konačno zadržavanje pri 75% DCM/aceton tokom 150 mL. Željene frakcije su kombinovane. Materijal je preuzet u sledeći korak kakav jeste. Korak 2: U rastvor (S)-terc-butil 1-azido-16-(terc-butoksikarbonil)-13,18-diokso-3,6,9-trioksa-12,17-diazapentatriakontan-35-oata (414.0 mg, 0.548 mmol) u DCM-u (5476 µl) je dodat TFA (1266 µl, 16.43 mmol). LC/MS je ukazala na sporu reakciju, pa je narednih 14 ekv TFA dodato i smeša je dodatno mešana. Nakon dodatnih ∼6 h, LC/MS je ukazala na skoro potpunu reakciju. Rastvarači su uklonjeni u vakuumu. Smeša je preuzeta u smešu Hunig-ova baza/MeOH (∼1%). Reakciona smeša je prečišćen pomoću PREP HPLC u 5 ubrizgavanja: (30 X 100 mm HPLC Luna Axia C1850 do 100% A:B tokom 10 min, 5 min pri 100%B (A je 90:10:0.1 voda:MeOH:TFA; B je 90:10:0.1 MeOH:voda:TFA)). Željene frakcije su kombinovane i koncentrovane da se dobije (S)-1-azido-16-karboksi-13,18-diokso-3,6,9-trioksa-12,17-diazapentatriakontan-35-ska kiselina (112.4 mg, 0.124 mmol, 22.64 % prinos). LC/MS: (M+H)<+>= 644.45.

(S)-1-azido-22-karboksi-19,24-diokso-3,6,9,12,15-pentaoksa-18,23-diazahentetrakontan-41-ska kiselina

[1110]

Korak 1: Priprema 18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanske kiseline

[1111] OKTADEKANDIONSKA KISELINA (7.5 g, 23.85 mmol) je suspendovana u toluenu (42.6 ml) i smeša je zagrevana do refluksa .1,1-di-terc-butoksi-N,N-dimetilmetanamin (15.33 ml, 63.9 mmol) je dodat u kapima tokom 30 min. Smeša je refluksovana preko noći. Rastvarač je uklonjen u vakuumu na 50 °C i sirov materijal je suspendovan u CH2Cl2/EtOAc (110 mL. 1:1) i mešan tokom 15 min. Čvrste materije su uklonjene filtracijom i oprane sa CH2Cl2 (40 mL). Filtracija je evaporisana u vakuumu. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom (SG, 0 do 25% aceton / CH2Cl2) da se dobije 18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanska kiselina (3.95 g, 10.66 mmol, 44.7 % prinos). Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 5.04 min; ESI-MS(+) m/z 297.3 [M - OC(CH3)3];<1>H NMR (500MHz, METANOL-d4) δ 2.29 (t, J=7.5 Hz, 2H), 2.22 (t, J=7.4 Hz, 2H), 1.67 - 1.53 (m, 4H), 1.50 - 1.42 (m, 9H), 1.40 - 1.25 (m, 24H).

Korak 2: Priprema 1-terc-butil 18-(2,5-dioksopirolidin-1-il) oktadekandioata

[1112] DCC (5.11 ml, 5.11 mmol) je dodat u rastvor 18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanske kiseline (1.72 g, 4.64 mmol) i 1-hidroksipirolidin-2,5-diona (0.588 g, 5.11 mmol) u DMF-u (48 mL). Smeša je mešana na ST preko noći. Smeša je filtrirana i koncentrovana da se dobije 1-tercbutil 18-(2,5-dioksopirolidin-1-il) oktadekandioat koji je primenjen kakav jeste u narednom koraku.

[1113] Voda (5.80 ml) je dodata smeši (S)-4-amino-5-(terc-butoksi)-5-oksopentanske kiseline (1.038 g, 5.11 mmol), 1-terc-butil 18-(2,5-dioksopirolidin-1-il) oktadekandioata (2.171 g, 4.64 mmol), NATRIJUM BIKARBONATA (0.468 g, 5.57 mmol) u THF-u (17.41 ml). Bistri rastvor koji se dobija je mešan na ST tokom 4 h. Sav THF je uklonjen, HCl (6.04 ml, 6.04 mmol) je dodat i pH je podešen na 2-3 na 0°C. Suspenzija koja se dobija je ekstrahovana sa CH2Cl2(x3). Organski sloj je koncentrovan. Sirov proizvod koji se dobija je prečišćen fleš hromatografijom (aceton / CH2Cl20 do 25%) da se dobije (S)-5-(terc-butoksi)-4-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)-5-oksopentanska kiselina (2.29 g, 4.12 mmol, 89 % prinos) kao bela čvrsta supstanca. Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 2.74 min; ESI-MS(+) m/z 555.6 (M+H)<+ 1>H NMR (500MHz, METANOL-d4) δ 4.32 (dd, J=9.0, 5.3 Hz, 1H), 2.45 - 2.33 (m, 2H), 2.30 - 2.06 (m, 5H), 1.99 - 1.82 (m, 3H), 1.78 - 1.53 (m, 2H), 1.53 - 1.44 (m, 18H), 1.44 - 1.26 (m, 24H).

Korak 4: Priprema (S)-terc-butil 1-azido-22-(terc-butoksikarbonil)-19,24-diokso-3,6,9,12,15-pentaoksa-18,23-diazahentetrakontan-41-oata

[1114] U rastvor (S)-5-(terc-butoksi)-4-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)-5-oksopentanske kiseline (225 mg, 0.405 mmol) u DMF-u (4048 µl) je dodata Hunig-ova baza (212 µl, 1.214 mmol) i HATU (308 mg, 0.810 mmol). 17-azido-3,6,9,12,15-pentaoksaheptadekan-1-amin, HCl (139 mg, 0.405 mmol) je zatim dodat, i rastvor je mešan na st. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom (220 g, silika gel, 10 do 60% Aceton / CH2Cl2) da se dobije (S)-terc-butil 1-azido-22-(terc-butoksikarbonil)-19,24-diokso-3,6,9,12,15-pentaoksa-18,23-diazahentetrakontan-41-oat (330 mg, 0.391 mmol, 97 % prinos). Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 2.88 min; ESI-MS(+) m/z 844.7 (M+H)<+>;<1>H NMR (500MHz, METANOL-d4) δ 4.30 - 4.23 (m, 1H), 3.74 - 3.60 (m, 18H), 3.60 - 3.52 (m, 2H), 3.43 - 3.35 (m, 4H), 2.34 - 2.28 (m, 2H), 2.28 - 2.19 (m, 4H), 2.15 - 2.08 (m, 1H), 1.98 - 1.87 (m, 1H), 1.69 - 1.53 (m, 4H), 1.52 - 1.44 (m, 18H), 1.41 - 1.27 (m, 24H).

Korak 5: Priprema (S)-1-azido-22-karboksi-19,24-diokso-3,6,9,12,15-pentaoksa-18,23-diazahentetrakontan-41-ske kiseline

[1115] Smeša (S)-terc-butil 1-azido-22-(terc-butoksikarbonil)-19,24-diokso-3,6,9,12,15-pentaoksa-18,23-diazahentetrakontan-41-oat (330 mg, 0.391 mmol) i TFA (0.422 mL, 5.47 mmol) u DCM-u (3.0 mL) je mešana na ST tokom 2 h. Sirov proizvod koji se dobija je prečišćen pomoću Prep-HPLC (Rastvarač A = 10% MeOH - 90% H2O - 0.1% TFA, Rastvarač B = 90% MeOH -10% H2O - 0.1% TFA. Kolona: PHENOMENEX LUNA 30 x 150mm, S10, Brzina protoka: 40 ml / min, 50 - 100% B, 10 min i zastoj na 13 min) da se dobije (S)-1-azido-22-karboksi-19,24-diokso-3,6,9,12,15-pentaoksa-18,23-diazahentetrakontan-41-ska kiselina (101 mg, 0.138 mmol, 35.3 % prinos). Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 2.42 min; ESI-MS(+) m/z 732.5 (M+H)<+>

(S)-1-azido-28-karboksi-25,30-diokso-3,6,9,12,15,18,21-heptaoksa-24,29-diazaheptatetrakontan-47-ska kiselina

[1116]

Korak 1 U rastvor 23-azido-3,6,9,12,15,18,21-heptaoksatrikosan-1-amina (204 mg, 0.517 mmol) u DMF-u (4498 µl) je dodata Hunig-ova baza (314 µl, 1.799 mmol), zatim (S)-5-(terc-butoksi)-4-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)-5-oksopentanska kiselina (250 mg, 0.450 mmol). HATU (342 mg, 0.900 mmol) je zatim dodat, i dobijeni rastvor je mešan na st. LC/MS je prikazala konverziju u željeni m/z. Uklonjen DMF na visokom vakuumu, zatim je ostatak nanešen na silika gel (40g) i eluiran sa DCM (90 mL), zatim gradijent do 75% DCM/aceton tokom 540 mL i konačno zadržavanje pri 75% DCM/aceton tokom 150 mL. Željene frakcije su kombinovane da se dobije (S)-terc-butil 1-azido-28-(terc-butoksikarbonil)-25,30-diokso-3,6,9,12,15,18,21-heptaoksa-24,29-diazaheptatetrakontan-47-oat (394.2 mg, 0.423 mmol, 94 % prinos).

Korak 2: U rastvor(S)-terc-butil 1-azido-28-(terc-butoksikarbonil)-25,30-diokso-3,6,9,12,15,18,21-heptaoksa-24,29-diazaheptatetrakontan-47-oata (394.2 mg, 0.423 mmol) u DCM-u (4229 µl) je dodat TFA (456 µl, 5.92 mmol). LC/MS je ukazao na sporu reakciju, te je drugih 14 ekv TFA dodato i smeša je dalje mešana. Nakon dodatnih ∼6 h, LC/MS je naznačila skoro potpunu reakciju. Rastvarači su uklonjeni u vakuumu. Smeša je preuzeta u MeOH. Reakciona smeša je prečišćena pomoću PREP HPLC u 7 ubrizgavanja: (30 X 100 mm HPLC Luna Axia C1850 do 100% A:B tokom 10 min, 5 min pri 100%B (A je 90:10:0.1 voda:MeOH:TFA; B je 90:10:0.1 MeOH:voda:TFA)). Odgovarajuće frakcije su podvrgnute Speedvac-u. Izolovana je (S)-1-azido-28-karboksi-25,30-diokso-3,6,9,12,15,18,21-heptaoksa-24,29-diazaheptatetrakontan-47-ska kiselina (121.0 mg, 0.148 mmol, 34.9 % prinos). LC/MS: (M+H)<+>= 820.60.<1>H NMR (500MHz, HLOROFORM-d) δ 7.30 (d, J=6.4 Hz, 1H), 7.04 (t, J=5.2 Hz, 1H), 4.51 (q, J=6.2 Hz, 1H), 3.72 - 3.64 (m, 27H), 3.63 - 3.59 (m, 2H), 3.56 - 3.49 (m, 1H), 3.47 - 3.39 (m, 3H), 2.62 -2.54 (m, 1H), 2.48 - 2.40 (m, 1H), 2.36 (t, J=7.4 Hz, 2H), 2.26 (t, J=7.6 Hz, 2H), 2.19 -2.08 (m, 2H), 1.65 (kvin, J=7.4 Hz, 4H), 1.39 - 1.24 (m, 25H).

(S)-18-((3-azido-1-karboksipropil)amino)-18-oksooktadekanska kiselina

[1117]

Korak 1: Priprema 18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanske kiseline

[1118] OKTADEKANDIONSKA KISELINA (7.5 g, 23.85 mmol) je suspendovana u toluenu (42.6 ml) i smeša je zagrevana do refluksa .1,1-di-terc-butoksi-N,N-dimetilmetanamin (15.33 ml, 63.9 mmol) je dodat u kapima tokom 30 min. Smeša je refluksovana preko noći. Rastvarač je uklonjen u vakuumu na 50°C i sirov materijal je suspendovan u CH2Cl2/EtOAc (110 mL. 1:1) i mešan tokom 15 min. Čvrste materije su uklonjene filtracijom i oprane sa CH2Cl2 (40 mL). Filtracija je evaporisana u vakuumu. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom (300 g, SG, 100 % CH2Cl21000 mL prvo i zatim 0 do 25% aceton / CH2Cl2, 2000 mL) da se dobije 18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanska kiselina (3.82 g, 10.31 mmol, 43.2 % prinos). Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 2.85 min; ESI-MS(+) m/z 297.3 [M - OC(CH3)3] ;<1>H NMR (500MHz, METANOL-d4) δ 2.29 (t, J=7.5 Hz, 2H), 2.22 (t, J=7.3 Hz, 2H), 1.67 - 1.53 (m, 4H), 1.46 (s, 9H), 1.31 (m, 24H).

[1119] U smešu (2S)-N-FMOC-4-AZIDO-BUTANSKE KISELINE (1.0 g, 2.73 mmol) u MeOH (4.21 ml) / CH2Cl2(12.64 ml) je dodat (TRIMETILSILIL)DIAZOMETAN u dietil etru (2.047 ml, 4.09 mmol). Dobijena smeša je mešana na ST tokom 2 h. Smeša je koncentrovana da se dobije (S)-metil 2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-4-azidobutanoat, koji je primenjen kakav jeste u narednom koraku.<1>H NMR (500MHz, METANOL-d4) δ 7.81 (d, J=7.6 Hz, 2H), 7.73 7.63 (m, 2H), 7.47 - 7.22 (m, 4H), 4.41 (d, J=6.7 Hz, 2H), 4.35 - 4.17 (m, 2H), 3.82 - 3.70 (m, 3H), 3.49 - 3.34 (m, 2H), 2.21 - 2.04 (m, 1H), 1.97 - 1.80 (m, 1H). Ste

p 3: Priprema (S)-metil 4-azido-2-((terc-butoksikarbonil)amino)butanoata

[1120] Smeša (S)-metil 2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-4-azidobutanoata (1.038 g, 2.73 mmol) i dietilamina (4.0 mL, 38.3 mmol) u CH2Cl2(4 mL) je mešana na ST tokom 2 h. LCMS je prikazala nestanak Č.M. i stvaranje proizvoda zajedno sa pikovima koji se odnose na Fmoc. Koncentrovan je i dobijeni proizvod je primenjen kakav jeste u narednom koraku.<1>H NMR (500MHz, METANOL-d4) δ 3.85 - 3.69 (m, 3H), 3.63 - 3.52 (m, 1H), 3.51 - 3.40 (m, 2H), 2.05 -1.91 (m, 1H), 1.88 - 1.76 (m, 1H).

Korak 4: Priprema (S)-terc-butil 18-((4-azido-1-metoksi-1-oksobutan-2-il)amino)-18-oksooktadekanoata

[1121] Smeša (S)-metil 2-amino-4-azidobutanoata (0.432 g, 2.73 mmol), 18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanske kiseline (1.012 g, 2.73 mmol), DIPEA (1.907 ml, 10.92 mmol) i HBTU (1.035 g, 2.73 mmol) u THF-u (27.3 ml) je mešana na ST preko noći. Sirov proizvod koji se dobija je prečišćen pomoću Biotage (silika gel, 300 g, 0 do 10% aceton / CH2Cl2) da se dobije (S)-tercbutil 18-((4-azido-1-metoksi-1-oksobutan-2-il)amino)-18-oksooktadekanoat (1.37 g, 2.68 mmol, 98 % prinos). Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 2.87 min; ESI-MS(+) m/z 533.3 (M+Na)<+>;<1>H NMR (500MHz, METANOL-d4) δ 4.54 (dd, J=9.2, 5.0 Hz, 1H), 3.78 - 3.70 (m, 3H), 3.49 - 3.37 (m, 2H), 2.30 - 2.19 (m, 2H), 2.15 - 2.04 (m, 1H), 1.97 - 1.91 (m, 1H), 1.91 -1.83 (m, 2H), 1.68 - 1.53 (m, 4H), 1.46 (s, 9H), 1.31 (br. s., 24H).

Korak 5: Priprema (S)-4-azido-2-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)butanske kiseline

[1122] (S)-terc-butil 18-((4-azido-1-metoksi-1-oksobutan-2-il)amino)-18-oksooktadekanoat (1.37 g, 2.68 mmol), je rastvoren u THF (13.41 ml) praćeno dodatkom litijum hidroksida (0.321 g, 13.41 mmol) i vode (13.41 ml). Reakcija je mešana na ST preko noći. Reakciona smeša je koncentrovana do suva. Dobijena (S)-4-azido-2-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)butanska kiselina je primenjen kakva jeste u narednom koraku. Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 2.62 min; ESI-MS(+) m/z 497.4 (M+H)<+>.

Korak 6: Priprema (S)-18-((3-azido-1-karboksipropil)amino)-18-oksooktadekanske kiseline

[1123] Smeša (S)-4-azido-2-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)butanske kiseline (1.332 g, 2.68 mmol) i TFA (2.89 ml, 37.5 mmol) u DCM (20 ml) je mešana na ST tokom 2 h. Sirov proizvod koji se dobija je prečišćen pomoću Prep-HPLC (Rastvarač A = 10% MeOH - 90% H2O - 0.1% TFA, Rastvarač B = 90% MeOH - 10% H2O - 0.1% TFA. Kolona: PHENOMENEX LUNA 30 x 100mm, S10, Brzina protoka: 40 ml / min, 50 - 100% B, 10 min i zaustavljanje na 12 min) da se dobije (S)-18-((3-azido-1-karboksipropil)amino)-18-oksooktadekanska kiselina (451 mg, 1.024 mmol, 38.2 % prinos). Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 2.42 min; ESI-MS(+) m/z 441.2 (M+H)<+>;<1>H NMR (500MHz, METANOL-d4) δ 4.51 (dd, J=9.4, 4.8 Hz, 1H), 3.51 - 3.36 (m, 3H), 2.37 - 2.22 (m, 4H), 2.19 - 2.08 (m, 1H), 1.99 - 1.88 (m, 1H), 1.68 - 1.54 (m, 4H), 1.40 -1.22 (m, 24H).

(S)-1-azido-39-karboksi-37,41-diokso-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-undekaoksa-36,40-diazaoktapentakontan-58-ska kiselina

[1124]

Korak 1: Priprema 18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanske kiseline

[1125] OKTADEKANDIONSKA KISELINA (7.5 g, 23.85 mmol) je suspendovana u toluenu (42.6 ml) i smeša je zagrevana do refluksa .1,1-di-terc-butoksi-N,N-dimetilmetanamin (15.33 ml, 63.9 mmol) je dodavan u kapima tokom 30 min. Smeša je refluksovana preko noći. Rastvarač je uklonjen u vakuumu na 50 °C i sirov materijal je suspendovan u CH2Cl2/EtOAc (110 mL.1:1) i mešan tokom 15 min. Čvrste materije su uklonjene filtracijom i oprane sa CH2Cl2(40 mL). Filtracija je evaporisana u vakuumu. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom (SG, 0 do 25% aceton / CH2Cl2) da se dobije 18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanska kiselina (3.95 g, 10.66 mmol, 44.7 % prinos). Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 5.04 min; ESI-MS(+) m/z 297.3 [M - OC(CH3)3];<1>H NMR (500MHz, METANOL-d4) δ 2.29 (t, J=7.5 Hz, 2H), 2.22 (t, J=7.4 Hz, 2H), 1.67 - 1.53 (m, 4H), 1.50 - 1.42 (m, 9H), 1.40 - 1.25 (m, 24H).

Korak 2: Priprema 1-terc-butil 18-(2,5-dioksopirolidin-1-il) oktadekandioata

[1126] DCC (5.11 ml, 5.11 mmol) je dodat u rastvor 18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanske kiseline (1.72 g, 4.64 mmol) i 1-hidroksipirolidin-2,5-diona (0.588 g, 5.11 mmol) u DMF-u (48 mL). Smeša je mešana na ST preko noći. Smeša je filtrirana i koncentrovana da se dobije 1-tercbutil 18-(2,5-dioksopirolidin-1-il) oktadekandioat koji je primenjen kakav jeste u narednom koraku.

Korak 3: Priprema (S)-4-(terc-butoksi)-3-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)-4-oksobutanske kiseline

[1127] Voda (6.74 ml) je dodata u smešu (S)-3-amino-4-(terc-butoksi)-4-oksobutanske kiseline (1.122 g, 5.93 mmol), 1-terc-butil 18-(2,5-dioksopirolidin-1-il) oktadekandioata (2.52 g, 5.39 mmol), NATRIJUM BIKARBONATA (0.543 g, 6.47 mmol) u THF-u (20.21 ml). Bistri rastvor koji se dobija je mešan na ST tokom 4 h. Sav THF je uklonjen, HCl (7.01 ml, 7.01 mmol) je dodata i pH je podešen na 2-3 na 0°C. Suspenzija koja se dobija je ekstrahovana sa CH2Cl2(x3), Organski sloj je koncentrovan. Proizvod koji se dobija je primenjen kakav jeste. Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 2.83 min; ESI-MS(+) m/z 542.3 (M+H)<+>;<1>H NMR (500MHz, METANOL-d4) δ 4.64 (t, J=6.1 Hz, 1H), 2.83 - 2.67 (m, 2H),, 2.29 - 2.18 (m, 2H), 1.91 - 1.81 (m, 1H), 1.78 - 1.67 (m, 1H), 1.67 - 1.53 (m, 4H), 1.53 - 1.39 (m, 18H), 1.39 - 1.26 (m, 24H).

Korak 4: Priprema (S)-terc-butil 1-azido-39-(terc-butoksikarbonil)-37,41-diokso-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-undekaoksa-36,40-diazaoktapentakontan-58-oata

[1128] U rastvor (S)-4-(terc-butoksi)-3-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)-4-oksobutanske kiseline (200 mg, 0.369 mmol) u DMF-u (3692 µl) je dodata Hunig-ova baza (193 µl, 1.108 mmol) i HATU (281 mg, 0.738 mmol). 35-azido-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-undekaoksapentatriakontan-1-amin (211 mg, 0.369 mmol) je zatim dodat, i rastvor je mešan na ST tokom 3 h. Dobijeni proizvod je primenjen kakav jeste. Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 2.79 min; ESI-MS(+) m/z 1194.7 (M+H)<+>.

Korak 5: Priprema (S)-1-azido-39-karboksi-37,41-diokso-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-undekaoksa-36,40-diazaoktapentakontan-58-ske kiseline

[1129] Smeša (S)-terc-butil 1-azido-39-(terc-butoksikarbonil)-37,41-diokso-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-undekaoksa-36,40-diazaoktapentakontan-58-oata (404 mg, 0.369 mmol) i TFA (2 mL, 26.0 mmol) u DCM (5 mL) je mešana na ST tokom 2 h. Sirov proizvod koji se dobija je prečišćen pomoću Prep-HPLC (Rastvarač A = 10% MeOH - 90% H2O - 0.1% TFA, Rastvarač B = 90% MeOH - 10% H2O - 0.1% TFA. Kolona: PHENOMENEX LUNA 30 x 150mm, S10, Brzina protoka: 40 ml / min, 50 - 100% B, 12 min i zaustavljanje na 13 min) da se dobije (S)-1-azido-39-karboksi-37,41-diokso-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-undekaoksa-36,40-diazaoktapentakontan-58-ska kiselina (128 mg, 0.130 mmol, 35.3 % prinos) (4-stepeni prinos). Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 2.44 min; ESI-MS(+) m/z 982.5 (M+H)<+>.

(S)-1-azido-15-karboksi-13,17-diokso-3,6,9-trioksa-12,16-diazatetratriakontan-34-ska kiselina

[1130]

Korak 1: Priprema 18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanske kiseline

[1131] OKTADEKANDIONSKA KISELINA (7.5 g, 23.85 mmol) je suspendovana u toluenu (42.6 ml) i smeša je zagrevana do refluksa .1,1-di-terc-butoksi-N,N-dimetilmetanamin (15.33 ml, 63.9 mmol) je dodavan u kapima tokom 30 min. Smeša je refluksovana preko noći. Rastvarač je uklonjen u vakuumu na 50 °C i sirov materijal je suspendovan u CH2Cl2/EtOAc (110 mL.1:1) i mešan tokom 15 min. Čvrste materije su uklonjene filtracijom i oprane sa CH2Cl2(40 mL). Filtracija je evaporisana u vakuumu. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom (SG, 0 do 25% Aceton / CH2Cl2) da se dobije 18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanska kiselina (3.95 g, 10.66 mmol, 44.7 % prinos). Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 5.04 min; ESI-MS(+) m/z 297.3 [M - OC(CH3)3];<1>H NMR (500MHz, METANOL-d4) δ 2.29 (t, J=7.5 Hz, 2H), 2.22 (t, J=7.4 Hz, 2H), 1.67 - 1.53 (m, 4H), 1.50 - 1.42 (m, 9H), 1.40 - 1.25 (m, 24H).

Korak 2: Priprema 1-terc-butil 18-(2,5-dioksopirolidin-1-il) oktadekandioata

[1132] DCC (5.11 ml, 5.11 mmol) je dodat u rastvor 18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanske kiseline (1.72 g, 4.64 mmol) i 1-hidroksipirolidin-2,5-diona (0.588 g, 5.11 mmol) u DMF-u (48 mL). Smeša je mešana na ST preko noći. Smeša je filtrirana i koncentrovana da se dobije 1-tercbutil 18-(2,5-dioksopirolidin-1-il) oktadekandioat koji je primenjen kakav jeste u narednom koraku.

[1133] Voda (6.74 ml) je dodata u smešu (S)-3-amino-4-(terc-butoksi)-4-oksobutanske kiseline (1.122 g, 5.93 mmol), 1-terc-butil 18-(2,5-dioksopirolidin-1-il) oktadekandioata (2.52 g, 5.39 mmol), NATRIJUM BIKARBONATA (0.543 g, 6.47 mmol) u THF-u (20.21 ml). Bistri rastvor koji se dobija je mešan na ST tokom 4 h. Sav THF je uklonjen, HCl (7.01 ml, 7.01 mmol) je dodat i pH je podešen na 2-3 na 0°C. Suspenzija koja se dobija je ekstrahovana sa CH2Cl2(x3), Organski sloj je koncentrovan. Dobijeni proizvod je primenjen kakav jeste. Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 2.83 min; ESI-MS(+) m/z 542.3 (M+H)<+>;<1>H NMR (500MHz, METANOL-d4) δ 4.64 (t, J=6.1 Hz, 1H), 2.83 - 2.67 (m, 2H),, 2.29 - 2.18 (m, 2H), 1.91 - 1.81 (m, 1H), 1.78 - 1.67 (m, 1H), 1.67 - 1.53 (m, 4H), 1.53 - 1.39 (m, 18H), 1.39 - 1.26 (m, 24H).

Korak 4: Priprema (S)-terc-butil 1-azido-15-(terc-butoksikarbonil)-13,17-diokso-3,6,9-trioksa-12,16-diazatetratriakontan-34-oata

[1134] U rastvor (S)-4-(terc-butoksi)-3-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)-4-oksobutanske kiseline (350 mg, 0.646 mmol) u DMF-u (6460 µl) je dodata Hunigova baza (338 µl, 1.938 mmol) i HATU (491 mg, 1.292 mmol). 2-(2-(2-(2-azidoetoksi)etoksi)etoksi)etanamin (141 mg, 0.646 mmol) je zatim dodat, i rastvor je mešan na ST tokom 3 h. Dobijeni proizvod je primenjen kakav jeste. Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 2.90 min; ESI-MS(+) m/z 742.5 (M+H)<+>

Korak 5: Priprema (S)-1-azido-15-karboksi-13,17-diokso-3,6,9-trioksa-12,16-diazatetratriakontan-34-ske kiseline

[1135] Smeša (S)-terc-butil 1-azido-15-(terc-butoksikarbonil)-13,17-diokso-3,6,9-trioksa-12,16-diazatetratriakontan-34-oata (479 mg, 0.646 mmol) i TFA (2 mL, 26.0 mmol) u DCM-u (10 mL) je mešana na ST tokom 2 h. Sirov proizvod koji se dobija je prečišćen pomoću Prep-HPLC (Rastvarač A = 10% MeOH - 90% H2O - 0.1% TFA, Rastvarač B = 90% MeOH - 10% H2O -0.1% TFA. Kolona: PHENOMENEX LUNA 30 x 150mm, S10, Brzina protoka: 40 ml / min, 50 -100% B, 10 min i zaustavljanje na 12 min) da se dobije (S)-1-azido-15-karboksi-13,17-diokso3,6,9-trioksa-12,16-diazatetratriakontan-34-ska kiselina (119 mg, 0.189 mmol, 29.2 % prinos) (4 stepeni prinos); Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 2.44 min; ESI-MS(+) m/z 630.2 (M+H)<+>.

Priprema INT-1300A

[1136]

[1137] Sledeći peptid je sintetisan na .2 mmol skali u skladu sa postupcima iznad. Podvučeni koraci su koristili dvostruko-kuplujući postupak. ClAc-Tyr-[N-Me]Ala-Asn-Pro-Dap-Leu-Hyp-Trp-Ser-Bzt-[N-Me]Nle-[N-Me]Nle-Arg-Cys-Gly- [(S)-propargilglicin]. Nakon deprotekcije (uklanjanja zaštite) i ciklizacije u skladu sa postupcima iznad, jedinjenje je prečišćeno kao što sledi: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: waters xbridge c-18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 40-80% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 37.8 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.56 min; ESI-MS(+) m/z 986.7 (M 2H), najzastupljeniji jon; Analiza Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.86 min; ESI-MS(+) m/z 986.7 (M 2H), najzastupljeniji jon.

Priprema INT-1300B

[1138]

[1139] Sledeći peptid je sintetisan na .2 mmol skali prema Postupcima iznad. Podvučeni koraci su koristili dvostruko-kuplujući postupak. ClAc-Tyr-[N-Me]Ala-Asn-Pro-Dap-Leu-Hyp-Trp-Ser-Bzt-[N-Me]Nle-[N-Me]Nle-Arg-Cys-Gly- [(S)-azido-Dab]. Nakon deprotekcije i ciklizacije u skladu sa postupcima iznad, jedinjenje je prečišćeno kao što sledi: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 50-90% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 50.4 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.61 min; ESI-MS(+) m/z 1002.2 (M 2H), najzastupljeniji jon; Analiza Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.82 min; ESI-MS(+) m/z 1002.2 (M 2H), najzastupljeniji jon.

Priprema INT-1300C

[1140]

[1141] Sledeći peptid je sintetisan na .1 mmol skali prema postupcima iznad. Podvučeni koraci su koristili dvostruko-kuplujući postupak. ClAc-Tyr-[N-Me]Ala-Asn-Pro-Dap-Leu-Hyp-Trp-Ser-Bzt-[N-Me]Nle-[N-Me]Nle-Arg-Cys-Gly-Gly- [(S)-azido-Dab]; Nakon deprotekcije i ciklizacije u skladu sa postupcima iznad, jedinjenje je prečišćeno kao što sledi: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 45-85% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 9.3 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.60 min; ESI-MS(+) m/z 1030.7 (M 2H), najzastupljeniji jon; Analiza Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.83 min; ESI-MS(+) m/z 1030.6 (M 2H), najzastupljeniji jon; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1029.9931 (M+2H)Nađeno: 1029.9898 (M+2H).

Priprema INT-1300V

[1142]

[1143] Sledeći peptid je sintetisan na .1 mmol skali prema postupcima iznad. Podvučeni koraci su koristili dvostruko-kuplujući postupak, a ostaci ispisani kurzivom su kuplovani 30 min pojedinačnim kuplovanjem. ClAc-Tyr-[N-Me]Ala-Asn-Pro-Dap-Leu-Hyp-Trp-Dab-[(S)-2-amino-3-(1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)propanska kiselina]--[N-Me]Nle-[N-Me]Nle-Leu-Cys-Gly-[(S)-propargilglicin]; gde je (S) propargilglicin inkorporisan na 2-hlorotritil smolu. Nakon deprotekcije i ciklizacije u skladu sa postupcima iznad, jedinjenje je prečišćeno kao što sledi: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 45-85% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 16.4 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 96%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.49 min; ESI-MS(+) m/z 992.3 (M 2H), najzastupljeniji jon. Analiza Uslov B: Vreme zadržavanja = 3.02 min; ESI-MS(+) m/z 992.3 (M 2H), najzastupljeniji jon; ESI-HRMS(+) m/z:Izračunato: 991.9953 (M+2H) Nađeno: 991.9926 (M+2H).

Priprema INT-1300W

[1144]

[1145] Sledeći peptid je sintetisan na .2 mmol skali prema postupcima iznad. Podvučeni koraci su koristili dvostruko-kuplujući postupak, a ostaci pisani kurzivom su kuplovani 30 min pojedinačnim kuplovanjem. ClAc-Tyr-[N-Me]Ala-Asn-Pro-Dap-Leu-Hyp-Trp-Dab-[(S)-2-amino-3-(1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)propanska kiselina]--[N-Me]Nle-[N-Me]Nle-Leu-Cys-Gly-[(S)-propargilglicin]. Nakon deprotekcije i ciklizacije u skladu sa postupcima iznad, jedinjenje je prečišćeno kao što sledi: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 50-90% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Materijal je dalje prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 10-50% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 58.8 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 97%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.55 min; ESI-MS(+) m/z 991.9 (M 2H), najzastupljeniji jon; Analiza Uslov B: Vreme zadržavanja = 3.11 min; ESI-MS(+) m/z 991.8 (M 2H), najzastupljeniji jon.

Priprema INT-1300X

[1146]

[1147] Sledeći peptid je sintetisan na .2 mmol skali prema postupcima iznad. Podvučeni koraci su koristili dvostruko-kuplujući postupak, a ostaci pisani kurzivom su kuplovani 30 min pojedinačnim kuplovanjem. ClAc-Tyr-[N-Me]Ala-Asn-Pro-Dap-Leu-Hyp-Trp-Ser-[(S)-2-amino-3-(1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)propanska kiselina]--[N-Me]Nle-[N-Me]Nle-Leu-Cys-Gly-[(S)-propargilglicin]; Nakon deprotekcije i ciklizacije u skladu sa postupcima iznad, jedinjenje je prečišćeno kao što sledi: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 10-50% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 39.9 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.51 min; ESI-MS(+) m/z 985.2 (M 2H), najzastupljeniji jon.

Analiza Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.62 min; ESI-MS(+) m/z 985.4 (M 2H), najzastupljeniji jon ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 984.9875 (M+2H)

Nađeno: 984.9877 (M+2H).

Priprema INT-1300Y

[1148]

[1149] Sledeći peptid je sintetisan na .4 mmol skali prema postupcima iznad. Podvučeni koraci su koristili dvostruko-kuplujući postupak, a ostaci pisani kurzivom su kuplovani 30 min pojedinačnim kuplovanjem. ClAc-Tyr-[N-Me]Ala-Asp-Pro-His-Lys-Hyp-Trp-Lys-[(S)-2-amino-3-(1-(earboksimetil)-1H-indol-3-il)propanska kiselina]-[N-Me]Nle-[N-Me]Nle-Glu-Cys-Gly-[(S)-propargilglicin]; gde je (S) propargilglicin inkorporisan na 2-hlorotritil smolu. Nakon deprotekcije i ciklizacije u skladu sa postupcima iznad, jedinjenje je prečišćeno kao što sledi: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 35-75% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Materijal je dalje prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 0-40% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 56.8 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.06 min; ESI-MS(+) m/z 1047.8 (M 2H), najzastupljeniji jon; Analiza Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.19 min; ESI-MS(+) m/z 1048.0 (M 2H), najzastupljeniji jon; ESI-HRMS(+) m/z:

Izračunato: 1047.4931 (M+2H); Nađeno: 1047.4899 (M+2H).

Priprema INT-130AA

[1150]

[1151] Sledeći peptid je sintetisan na 0.8 mmol skali prema postupcima iznad. Podvučeni koraci su koristili dvostruko-kuplujući postupak, a ostaci pisani kurzivom su kuplovani 30 min pojedinačnim kuplovanjem. ClAc-Tyr-[N-Me]Ala-Asn-Pro-Dap-Leu-Hyp-Trp-Dab-[(S)-2amino-3-(1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)propanska kiselina]-[N-Me]Nle-[N-Me]Nle-Leu-Cys-Gly-Gly-[(S)-propargilglicin]; gde je (S) propargilglicin inkorporisan na 2-hlorotritil smolu. Nakon deprotekcije i ciklizacije u skladu sa postupcima iznad, jedinjenje je prečišćeno kao što sledi: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: CSH C18, 30 x 150 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: 10-50% B tokom 30 minuta, zatim 7-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 50 mL/min. Uzorak je podeljen u 6 injekcija u koncentraciji od 130 umol po injekciji. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 102.7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.69 min; ESI-MS(+) m/z 1021.1 (M 2H), najzastupljeniji jon; Analiza Uslov G: Vreme zadržavanja = 1.56 min; ESI-MS(+) m/z 1021.3 (M 2H), najzastupljeniji jon; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1020.5060 (M+2H) Nađeno: 1020.5045 (M+2H).

Priprema INT-130AB

[1152]

[1153] Sledeći peptid je sintetisan na .8 mmol skali prema postupcima iznad. Podvučeni koraci su koristili dvostruko-kuplujući postupak, a ostaci pisani kurzivom su kuplovani 30 min pojedinačnim kuplovanjem. ClAc-Tyr-[N-Me]Ala-Asn-Pro-Dap-Leu-Hyp-Trp-Dab-[(S)-2-amino-3-(1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)propanska kiselina]-[N-Me]Nle-[N-Me]Nle-Leu-Cys-Gly-Gly-Gly-[(S)-propargilglicin]; gde je (S) propargilglicin inkorporisan na 2-hlorotritil smolu. Nakon deprotekcije i ciklizacije u skladu sa postupcima iznad, jedinjenje je prečišćeno kao što sledi: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters CSH C18, 30 x 150 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: 5-45% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 132.1 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.47 min; Analiza Uslov B: Vreme zadržavanja = 1.51 min; ESI-MS(+) m/z 1050.3 (M 2H), najzastupljeniji jon; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1049.0168 (M+2H)

Nađeno: 1049.0156 (M+2H).

Priprema INT-130AD

[1154]

[1155] Sledeći peptid je sintetisan na .4 mmol skali prema postupcima iznad. Podvučeni koraci su koristili dvostruko-kuplujući postupak, a ostaci pisani kurzivom su kuplovani 30 min pojedinačnim kuplovanjem. ClAc-Tyr-[N-Me]Ala-Asn-Pro-Dap-Leu-Hyp-Trp-Dab-[(S)-2-amino-3-(1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)propanska kiselina]-[N-Me]Nle-[N-Me]Nle-Glu-Cys-Gly-[Pra]; gde je propargilglicin inkorporisan na 2-hlorotritil smolu. Nakon deprotekcije i ciklizacije u skladu sa postupcima iznad, jedinjenje je prečišćeno kao što sledi: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters CSH C18, 30 x 150 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: 5-45% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 50 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 46.7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 97%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.31 min; ESI-MS(+) m/z 1001.3 (M 2H), najzastupljeniji jon; Analiza Uslov G: Vreme zadržavanja = 2.19 min; ESI-MS(+) m/z 1000.2 (M 2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 999.9746 (M+2H)

Nađeno: 999.9723 (M+2H).

Priprema INT-130AE

[1157] Sledeći peptid je sintetisan na .4 mmol skali prema postupcima iznad. Podvučeni koraci su koristili dvostruko-kuplujući postupak, a ostaci pisani kurzivom su kuplovani 30 min pojedinačnim kuplovanjem. ClAc-Tyr-[N-Me]Ala-Asp-Pro-Dap-Leu-Hyp-Trp-Dab-[(S)-2-amino-3-(1-(karboksimetil)-1H-indo1-3-il)propanska kiselina]-[N-Me]Nle-[N-Me]Nle-Glu-Cys-Gly-[Pra]; gde je propargilglicin inkorporisan na 2-hlorotritil smolu. Nakon deprotekcije i ciklizacije u skladu sa postupcima iznad, jedinjenje je prečišćeno kao što sledi: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters CSH C18, 30 x 150 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: 5-45% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 50 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 51.0 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 96%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.23 min; ESI-MS(+) m/z 1001.2 (M 2H), najzastupljeniji jon. Analiza Uslov G: Vreme zadržavanja = 1.27 min; ESI-MS(+) m/z 1000.9 (M 2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1000.4666 (M+2H)

Nađeno: 1000.4646 (M+2H).

Priprema INT-130AF

[1158]

[1159] Sledeći peptid je sintetisan na .8 mmol skali prema postupcima iznad. Podvučeni koraci su koristili dvostruko-kuplujući postupak, a ostaci pisani kurzivom su kuplovani 30 min pojedinačnim kuplovanjem. ClAc-Tyr-[N-Me]Ala-Asn-Pro-Dap-Leu-Hyp-Trp-Dab-[(S)-2-amino-3-(1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)propanska kiselina]-[N-Me]Nle-[N-Me]Nle-Leu-Cys-[Pra]; gde je propargilglicin inkorporisan na 2-hlorotritil smolu. Nakon deprotekcije i ciklizacije u skladu sa postupcima iznad, jedinjenje je prečišćeno kao što sledi: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne HPLC sa sledećim uslovima: Kolona: Phenomenex Gemini NX-C18, 50 x 250 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.05% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.05% trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: 10-50% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 125 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 152.1 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.56 min; ESI-MS(+) m/z 964.1 (M 2H); Analiza Uslov G: Vreme zadržavanja = 1.39 min; ESI-MS(+) m/z 965.2 (M 2H), najzastupljeniji jon; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 963.4846 (M+2H)

Nađeno: 963.4825 (M+2H).

Priprema INT-130AG

[1160]

[1161] Sledeći peptid je sintetisan na .8 mmol skali prema postupcima iznad. Podvučeni koraci su koristili dvostruko-kuplujući postupak, a ostaci pisani kurzivom su kuplovani 30 min pojedinačnim kuplovanjem. ClAc-Tyr-[N-Me]Ala-Asn-Pro-Dap-Leu-Hyp-Trp-Dab-[(S)-2-amino-3-(1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)propanska kiselina]-[N-Me]Nle-[N-Me]Nle-Glu-Cys-[Pra]; gde je propargilglicin inkorporisan na 2-hlorotritil smolu. Nakon deprotekcije i ciklizacije u skladu sa postupcima iznad, jedinjenje je prečišćeno kao što sledi: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Phenomenex Gemini NX-C18, 50 x 250 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.05% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.05% trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: 5-45% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 125 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 154.1 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.28 min Analiza Uslov G: Vreme zadržavanja = 1.25 min; ESI-HRMS(+) m/z:

Izračunato: 971.4638 (M+2H) Nađeno: 971.4620 (M+2H).

Priprema INT-130AH

[1162]

[1163] Sledeći peptid je sintetisan na .8 mmol skali prema postupcima iznad. Podvučeni koraci su koristili dvostruko-kuplujući postupak, a ostaci pisani kurzivom su kuplovani 30 min pojedinačnim kuplovanjem. ClAc-Tyr-[N-Me]Ala-Asn-Pro-Dap-Leu-Hyp-Trp-Dab-[(S)-2-amino-3-(1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)propanska kiselina]-[N-Me]Nle-[N-Me]Nle-Asp-Cys-[Pra]; gde je propargilglicin inkorporisan na 2-hlorotritil smolu. Nakon deprotekcije i ciklizacije u skladu sa postupcima iznad, jedinjenje je prečišćeno kao što sledi: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne HPLC sa sledećim uslovima: Kolona: Phenomenex Gemini NX-C18, 50 x 250 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.05 trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.05% trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: 5-45% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 125 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 147.7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.29 min; ESI-MS(+) m/z 965.3 (M 2H); Analiza Uslov G: Vreme zadržavanja = 1.24 min; ESI-MS(+) m/z 964.9 (M 2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 964.4560 (M+2H)Nađeno: 964.4535 (M+2H).

Priprema INT-130AI

[1164]

[1165] Sledeći peptid je sintetisan na .1 mmol skali prema postupcima iznad. Podvučeni koraci su koristili dvostruko-kuplujući postupak, dok kuplovanje napisano kurzivom je bilo pojedinačno, 30 min kuplovanje. ClAc-Tyr-hPro-Asn-Pro-Dap-Leu-Hyp-Trp-Dab-[(S)-2-amino-3-(1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)propanska kiselina]-mNle-mNle-Leu-Cys-Gly-[(S)-propargilglicin]. Nakon deprotekcije i ciklizacije u skladu sa postupcima iznad, jedinjenje je prečišćeno kao što sledi: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Phenomenex Gemini NX-C18, 50 x 250 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: 10-50% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 100 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 158.7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.556 min; ESI-MS(+) m/z 1005.1 (M 2H), najzastupljeniji jon; Analiza Uslov G: Vreme zadržavanja = 1.382 min; ESI-MS(+) m/z 1005.3 (M 2H), najzastupljeniji jon; ESI-HRMS(+) m/z:Izračunato: 1005.0031 (M+2H) Nađeno: 1005.0015 (M+2H).

Priprema INT-130AJ

[1166]

[1167] Sledeći peptid je sintetisan na .1 mmol skali prema postupcima iznad. Podvučeni koraci su koristili dvostruko-kuplujući postupak. ClAc-Tyr-hPro-Asn-Pro-Dap-Leu-Hyp-Trp-Dab-[(S)-2-amino-3-(1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)propanska kiselina]-mNle-mNle-Glu-Cys-Gly-[(S)-propargilglicin]. Nakon deprotekcije i ciklizacije u skladu sa postupcima iznad, jedinjenje je prečišćeno kao što sledi: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Phenomenex Gemini NX-C18, 50 x 250 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: 5-45% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 100 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 107.7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.281 min; ESI-MS(+) m/z 1013.1 (M 2H), najzastupljeniji jon; Analiza Uslov G: Vreme zadržavanja = 1.282 min; ESI-MS(+) m/z 1013.2 (M 2H), najzastupljeniji jon; ESI-HRMS(+) m/z:Izračunato: 1012.9824 (M+2H)Nađeno: 1012.9797 (M+2H).

Priprema INT-130AK

[1168]

[1169] Sledeći peptid je sintetisan na 0.1 mmol skali prema postupcima iznad. Podvučeni koraci su koristili dvostruko-kuplujući postupak. ClAc-Tyr-hPro-Asn-Pro-DapMe-Leu-Hyp-Trp-Dab-[(S)-2-amino-3-(1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)propanska kiselina]-mNle-mNle-Leu-Cys-Gly-[(S)-propargilglicin]. Nakon deprotekcije i ciklizacije u skladu sa postupcima iznad, jedinjenje je prečišćeno kao što sledi: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne Prep HPLC sa sledećim uslovima: Kolona: Phenomenex Gemini NX-C18, 50 x 250 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: 10-50% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 125 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 241.9 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.555 min; ESI-MS(+) m/z 1012.1 (M 2H), najzastupljeniji jon; Analiza Uslov G: Vreme zadržavanja = 1.396 min; ESI-MS(+) m/z 1012.2 (M 2H), najzastupljeniji jon; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1012.0109 (M+2H)Nađeno: 1012.0089 (M+2H).

Priprema INT-130AL

[1170]

[1171] Sledeći peptid je sintetisan na .1 mmol skali prema postupcima iznad. Podvučeni koraci su koristili dvostruko-kuplujući postupak. ClAc-Tyr-hPro-Asn-Pro-DapMe-Leu-Hyp-Trp-Dab-[(S)-2-amino-3-(1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)propanska kiselina]-mNle-mNle-Glu-Cys-Gly-[(S)-propargilglicin]. Nakon deprotekcije i ciklizacije u skladu sa postupcima iznad, jedinjenje je prečišćeno kao što sledi: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Phenomenex Gemini NX-C18, 50 x 250 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: 5-45% B tokom 30 minuta, zatim 7-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 100 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 218.0 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.316 min; ESI-MS(+) m/z 1020.2 (M 2H), najzastupljeniji jon; Analiza Uslov G: Vreme zadržavanja = 1.294 min; ESI-MS(+) m/z 1020.2 (M 2H), najzastupljeniji jon; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1019.9902 (M+2H)Nađeno: 1019.9881 (M+2H).

Priprema primera 13051

[1172]

[1173] Intermedijer 1300B (10 mg, 4.99 □mol) i N-(prop-2-in-1-il)tetradekanamid (3.98 mg, 0.015 mmol) su reagovali kao u opštem postupku formiranja triazola da se dobije sirovi proizvod. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 35-85% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Materijal je dalje prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 60-100% B tokom 20 minuta, zatim 10-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 2.5 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 2.32 min; ESI-MS(+) m/z 1134.9 (M 2H); Analiza Uslov B: Vreme zadržavanja = 3.35 min; ESI-MS(+) m/z 1135.1 (M 2H), najzastupljeniji jon; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1134.1026 (M+2H)

Nađeno: 1134.1028 (M+2H).

Priprema primera 13052

[1174]

[1175] Intermedijer 1300B (8.5 mg, 4.25 µmol) i 2-(2-(2-metoksietoksi)etoksi)-N-(prop-2-in-1-il)acetamid (2.74 mg, 0.013 mmol) su reagovali kao u opštem postupku formiranja triazola da se dobije sirovi proizvod. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 50-90% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 6.3 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.56 min; ESI-MS(+) m/z 1109.9 (M 2H); Analiza Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.81 min; ESI-MS(+) m/z 1109.8 (M 2H), najzastupljeniji jon.

Priprema primera 13121

[1176]

[1177] Intermedijer 130AB (26.1 mg, 12 µmol) i (S)-4-azido-2-palmitamidobutanska kiselina (13.7 mg, 0.031 mmol) su reagovali kao u opštem postupku formiranja triazola da se dobije sirovi proizvod. Reakcioni rastvor je razblažen blago u MeOH i prečišćen pomoću prep HPLC (2 ubrizgavanja): 30 X 100 mm HPLC Phenomenex Luna 5µm 10 do 100% A:B tokom 15 min, 3 min pri 100%B (A je 90:10 voda:CH3CN sa 0.1% TFA; B je 10:90 voda:CH3CN sa 0.1% TFA)). Prinos proizvoda je bio 11.7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99%. Analiza Uslov H: Vreme zadržavanja = 10.92 min

Analiza Uslov I: Vreme zadržavanja = 9.94 min; ESI-HRMS(+) m/z:

Izračunato: 1269.1667 (M+2H) Nađeno: 1269.1648 (M+2H).

Priprema primera 13122

[1178]

[1179] Intermedijer 130AA (25.5 mg, 13 □mol) i (S)-4-azido-2-palmitamidobutanska kiselina (13.8 mg, 0.031 mmol) su reagovali kao u opštem postupku formiranja triazola da se dobije sirovi proizvod. Reakcioni rastvor je razblažen blago u MeOH i prečišćen pomoću prep HPLC (2 ubrizgavanja): 30 X 100 mm HPLC Phenomenex Luna 5µm 10 do 100% A:B tokom 15 min, 3 min pri 100%B (A je 90:10 voda:CH3CN sa 0.1% TFA; B je 10:90 voda:CH3CN sa 0.1% TFA)). Prinos proizvoda je bio 8.1 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 94%. Analiza Uslov I: Vreme zadržavanja = 10.06 min

Analiza Uslov J: Vreme zadržavanja = 8.63 min; ESI-HRMS(+) m/z:

Izračunato: 1240.6560 (M+2H) Nađeno: 1240.6546 (M+2H).

Priprema primera 13123

[1180]

[1181] Intermedijer 130AA (41.3 mg, 20 µmol) i (S)-1-azido-28-karboksi-25,30-diokso-3,6,9,12,15,18,21-heptaoksa-24,29-diazaheptatetrakontan-47-ska kiselina (24.9 mg, 0.030 mmol) su reagovali kao u opštem postupku formiranja triazola da se dobije sirovi proizvod. Reakcioni rastvor je razblažen blago u MeOH i prečišćen pomoću prep HPLC (2 ubrizgavanja): 30 X 100 mm HPLC Phenomenex Luna 5µm 10 do 100% A:B tokom 15 min, 3 min pri 100%B (A je 90:10 voda:CH3CN sa 0.1% TFA; B je 10:90 voda:CH3CN sa 0.1% TFA)). Prinos proizvoda je bio 26.2 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 94%. Analiza Uslov I: Vreme zadržavanja = 9.54 min

Analiza Uslov J: Vreme zadržavanja = 8.13 min; ESI-HRMS(+) m/z:

Izračunato: 1430.2663 (M+2H) Nađeno: 1430.2656 (M+2H).

Priprema primera 13124

[1182]

[1183] Intermedijer 130AB (40.7 mg, 19 µmol) i (S)-1-azido-28-karboksi-25,30-diokso-3,6,9,12,15,18,21-heptaoksa-24,29-diazaheptatetrakontan-47-ska kiselina (23.9 mg, 0.029 mmol) su reagovali kao u opštem postupku formiranja triazola da se dobije sirovi proizvod. Reakcioni rastvor je razblažen blago u MeOH i prečišćen pomoću prep HPLC (2 ubrizgavanja): 30 X 100 mm HPLC Phenomenex Luna 5µm 10 do 100% A:B tokom 15 min, 3 min pri 100%B (A je 90:10 voda:CH3CN sa 0.1% TFA; B je 10:90 voda:CH3CN sa 0.1% TFA)). Prinos proizvoda je bio 24.3 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 95%. Analiza Uslov I: Vreme zadržavanja = 9.49 min; Analiza Uslov J: Vreme zadržavanja = 8.08 min; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1458.7770 (M+2H)Nađeno: 1458.7743 (M+2H).

Priprema primera 13125

[1184]

[1185] Intermedijer 130AD (22.1 mg, 11 µmol) i (S)-4-azido-2-palmitamidobutanska kiselina (6.1 mg, 0.014 mmol) su reagovali kao u opštem postupku formiranja triazola da se dobije sirovi proizvod. Reakcioni rastvor je razblažen blago u MeOH i prečišćen pomoću prep HPLC (2 ubrizgavanja): 30 X 100 mm HPLC Phenomenex Luna 5µm 10 do 100% A:B tokom 15 min, 3 min pri 100%B (A je 90:10 voda:CH3CN sa 0.1% TFA; B je 10:90 voda:CH3CN sa 0.1% TFA)). Prinos proizvoda je bio 9.5 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 90%. Analiza Uslov I: Vreme zadržavanja = 9.24 min; Analiza Uslov J: Vreme zadržavanja = 8.00 min; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1220.1245 (M+2H)

Nađeno: 1220.1208 (M+2H).

Priprema primera 13126

[1186]

[1187] Intermedijer 130AE (24.5 mg, 12 µmol) i (S)-4-azido-2-palmitamidobutanska kiselina (6.8 mg, 0.015 mmol) su reagovali kao u opštem postupku formiranja triazola da se dobije sirovi proizvod. Reakcioni rastvor je razblažen blago u MeOH i prečišćen pomoću prep HPLC (2 ubrizgavanja): 30 X 100 mm HPLC Phenomenex Luna 5µm 10 do 100% A:B tokom 15 min, 3 min pri 100%B (A je 90:10 voda:CH3CN sa 0.1% TFA; B je 10:90 voda:CH3CN sa 0.1% TFA)). Prinos proizvoda je bio 10.3 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 95%. Analiza Uslov I: Vreme zadržavanja = 9.36 min

Analiza Uslov J: Vreme zadržavanja = 8.15 min; ESI-HRMS(+) m/z:

Izračunato: 1220.6165 (M+2H) Nađeno: 1220.6133 (M+2H).

Priprema primera 13129

[1188]

[1189] Intermedijer 130AF (35 mg, 18.0 µmol) i (S)-18-((3-azido-1-karboksipropil)amino)-18-oksooktadekanska kiselina (10.01 mg, 0.023 mmol), su reagovali kao u opštem postupku formiranja triazola iznad da se dobije sirovi proizvod. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću Prep-HPLC (Kolona: Phenomenex Luna C1830 x100 mm 5um, Rastvarač A = 90:10 H2O:ACN 0.1% TFA, Rastvarač B = 10:90 H2O:CAN 0.1% TFA. Brzina protoka: 40 ml / min, 10 -100% B. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 11.7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 96%. Analiza Uslov C: Vreme zadržavanja = 1.162 min; ESI-MS(+) m/z 1185.50 (M 2H), najzastupljeniji jon.

Priprema primera 13130

[1190]

[1191] Intermedijer 130AG (40.65 mg, 21.0 µmol) i (S)-18-((3-azido-1-karboksipropil)amino)-18-oksooktadekanska kiselina (11.53 mg, 0.026 mmol), su reagovali kao u opštom postupku formacije triazola iznad da se dobije sirovi proizvod. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 40-80% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 4.9 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 93%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.541 min; ESI-MS(+) m/z 1191.5 (M 2H), najzastupljeniji jon; Analiza Uslov G: Vreme zadržavanja = 1.682 min; ESI-MS(+) m/z 1192.2 (M 2H), najzastupljeniji jon; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1191.6138 (M+2H)

Nađeno: 1191.6106 (M+2H).

Priprema primera 13131

[1192]

[1193] Intermedijer 130AH (40.37 mg, 21.0 µmol) i (S)-18-((3-azido-1-karboksipropil)amino)-18-oksooktadekanska kiselina (11.53 mg, 0.026 mmol), su reagovali u opštem postupku iznad za formiranje triazola da se dobije sirovi proizvod. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 40-80% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 2.1 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 95%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.815 min; Analiza Uslov K: Vreme zadržavanja = 1.684 min; ESI-MS(+) m/z 1185.2 (M 2H), najzastupljeniji jon; ESI-HRMS(+) mlz:

Izračunato: 1184.6059 (M+2H) Nađeno: 1184.6031 (M+2H).

Priprema primera 13132

[1194]

[1195] Intermedijer 130AI (46.4 mg, 23.0 µmol) i (S)-18-((3-azido-1-karboksipropil)amino)-18-oksooktadekanska kiselina (11.19 mg, 0.025 mmol), su reagovali u opštem postupku iznad za formiranje triazola da se dobije sirovi proizvod. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters CSH C18, 19 x mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: 30-70% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 7.2 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza Uslov G: Vreme zadržavanja = 1.888 min; ESI-MS(+) m/z 817.9 (M 3H), najzastupljeniji jon; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1225.1531 (M+2H)

Nađeno: 1225.1521 (M+2H).

Priprema primera 13133

[1196]

[1197] Intermedijer 130AK (56.5 mg, 28.0 µmol) i (S)-18-((3-azido-1-karboksipropil)amino)-18-oksooktadekanska kiselina (13.53 mg, 0.031 mmol), su reagovali u opštem postupku iznad za formiranje triazola da se dobije sirovi proizvod. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters CSH C18, 19 x mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: 30-70% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 9.8 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.788 min; ESI-MS(+) m/z 1232.2 (M 2H), najzastupljeniji jon; Analiza Uslov G: Vreme zadržavanja = 1.843 min; ESI-MS(+) m/z 1233.1 (M 2H), najzastupljeniji jon; ESI-HRMS(+) m/z:Izračunato: 1232.1609 (M+2H) Nađeno: 1232.1579 (M+2H).

Metoda B ciklizacije:

[1198] Sve manipulacije su sprovedene ručno ako nije naznačeno. Postupak "Metoda B ciklizacije" opisuje eksperiment izveden na 0.100 mmol skali, gde je skala određena količinom smole primenjene da se stvori peptid. Ova skala nije zasnovana na direktnom određivanju količine peptida koji je korišćen u postupku. Ovaj postupak može biti skaliran izvan 0.100 mmol skale podešavanjem opisanih zapremina višekratnikom skale. Sirove peptidne čvrste materije su rastvorene u metanolu (∼24 mL) koji sadrži ∼3 kapi N,N-Diizopropiletilamina. Baznom (pH >9) rastvoru je dozvoljeo zatim da odstoji tokom 18-24h. U rastvor koji se dobija, 1 mL DMSO je dodato, i porcija metanola je uparena pod sniženim pritiskom da se dobije koncentrovani DMSO rastvor sirovog, ciklizovanog proizvoda. Rastvor je podvrnut reverzno-faznom HPLC prečišćavanju da se dobije željeni ciklični peptid.

Analiza Uslov 13A:

[1199] Kolona: X-Select CSH C18, 3.0 x 150 mm, 3.5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 10-100% B tokom 15 minuta; Protok: 0.5 mL/min; Detekcija: UV pri 220 nm.

Analiza Uslov 13B:

[1200] Kolona: Zorbax Bonus-RP C18, 3.0 x 150 mm, 3.5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 10-100% B tokom 15 minuta; Protok: 0.5 mL/min; Detekcija: UV pri 220 nm.

Priprema 1-terc-butil 18-(perfluorofenil) oktadekandioata

[1201]

[1202] U rastvor 18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanske kiseline (5.00 g, 13.49 mmol) u DMF-u (54.0 ml) je dodat piridin (3.82 ml, 47.2 mmol), praćeno sa pentafluorofenil trifluoroacetatom (5.81 ml, 33.7 mmol). Formirao se gel, i dodatni štapić za mešanje je dodat u reakcionu smešu. Smeša je energično mešana preko noći. Reakciona smeša je filtrirana (Buchner-ov levak/papir) da se dobije bela čvrsta supstanca, koja je oprana sa malom količinom DMF-a. Atmosfera bogata azotom je usisavana kroz filter pogaču tokom nekoliko sati da bi se dobio 1-terc-butil 18-(perfluorofenil) oktadekandioat (6.24 g, 11.63 mmol, 86 % prinos).

Priprema (S)-1-terc-butil 5-(perfluorofenil)2-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)pentandioata

[1203]

[1204] U rastvor (S)-5-(terc-butoksi)-4-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)-5-oksopentanske kiseline (350 mg, 0.630 mmol) u DMF-u (2519 µl) je dodat piridin (178 µl, 2.204 mmol), praćeno sa pentafluorofenil trifluoroacetatom (271 µl, 1.574 mmol). Bočica koja sadrži dobijeni rastvor je isprana sa azotom, i zatvorena preko noći. Primećeni proizvod je praćen pomoću LC/MS. Smeša je razblažena sa vodom i limunskom kiselinom, i ekstrahovana 3 puta sa EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su osušeni preko MgSO4, filtrirani, i koncentrovani in vacuo. Ostatak je primenjen kakav jeste za dalju hemijsku obradu.

Priprema (S)-5-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-2-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)pentanske kiseline

[1205]

[1206] U rastvor 1-terc-butil 18-(perfluorofenil) oktadekandioata (1.666 g, 3.10 mmol) u DMF-u (21.71 ml) je dodat (S)-5-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-2-aminopentanska kiselina (1.0 g, 2.82 mmol) i Hunig-ova baza (1.478 ml, 8.47 mmol). Smeša je mešana na st. LC/MS je prikazala formiranje željenog proizvoda. Smeša je razblažena sa vodenim rastvorom limunske kiseline, i ekstrahovana 3 puta u CH2Cl2-u. Kombinovani organski ekstrakti su osušeni preko MgSO4, filtrirani, i koncentrovani in vacuo.

[1207] „Bulk“ materijal je prečišćen pomoću Prep HPLC: (50 X 250 mm HPLC Sunfire C1810µm 0 do 100% A:B tokom 40 min, 10 min pri 100%B (A je 90:10:0.1 voda:MeOH:TFA; B je 90:10:0.1 MeOH:voda:TFA)). Naknadne serije su prečišćene pri 100% B (izokratski) tokom 15 min. Frakcije su grupisane, podešene na neutralni pH sa Hunig-ovom bazom, i koncentrovane u rotovap-u. Preostali vodeni sloj je ekstrahovan 3 puta sa EtOAc, filtrirani, i koncentrovani u vakuumu da se dobije (S)-5-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-2-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)pentanska kiselina (1.33 g, 1.881 mmol, 66.7 % prinos).

Priprema (S)-4-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-2-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)butanske kiseline

[1208]

[1209] U suspenziju 1-terc-butil 18-(perfluorofenil) oktadekandioata (1.155 g, 2.152 mmol) u DMF-u (1.66E+04 µl) je dodata (S)-4-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-2-aminobutanska kiselina (827 mg, 2.430 mmol) i Hunig-ova baza (1128 µl, 6.46 mmol). Smeša je energično mešana tokom vikenda. LC/MS je prikazala željeni proizvod. Smeša je razblažena sa vodenim rastvorom limunske kiseline, i ekstrahovana 3 puta u CH2Cl2-u. Kombinovani organski ekstrakti su osušeni preko MgSO4, filtrirani, i koncentrovani in vacuo. Materijal je preuzet u mutni rastvor u MeOH-u. Filtracija kroz .45 um fritu je bila spora (nekoliko filtera je korišćeno) da se dobije bistar rastvor. Prečišćen pomoću Prep HPLC: (50 X 250 mm HPLC Sunfire C18 10µm 100% B tokom 14 min, (A je 90:10:0.1 voda:MeOH:TFA; B je 90:10:0.1 MeOH:voda:TFA)). Frakcije su grupisane, podešene na neutralno sa Hunig-ovom bazom, i koncentrovane u rotovapu. Izolovana je (S)-4-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-2-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)butanska kiselina (778.42 mg, 1.123 mmol, 52.2 % prinos).

Priprema (S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-4-((S)-5-(terc-butoksi)-4-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)-5-oksopentanamido)butanske kiseline

[1210]

[1211] U rastvor sirovog(S)-1-terc-butil 5-(perfluorofenil) 2-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)pentandioata (455 mg, .63 mmol) u DMF-u (6300 µl) je dodata Hunig-ova baza (440 µl, 2.52 mmol), zatim (S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-4-aminobutanska kiselina (214 mg, 0.630 mmol). Smeša je mešana na ST preko noći. Smeša je razblažena sa limunskom kiselinom i ekstrahovana 3 puta u EtOAc-u. Kombinovani organski slojevi su oprani slanim rastvorom, osušeni preko MgSO4, filtrirani, i koncentrovani in vacuo. Ostatak je prečišćen pomoću Prep HPLC: (50 X 250 mm HPLC Sunfire C1810µm 10 do 100% A:B tokom 30 min, 5 min pri 100%B (A je 90:10:0.1 voda:MeOH:TFA; B je 90:10:0.1 MeOH:voda:TFA)). Materijal je eluiran tokom 100% B izokratske sekcije, tako da gradijent nije bio neophodan. Frakcije su neutralizovane Hunig-ovom bazom i koncentrovane na speedvac-u.

Ostatak je preuzet u EtOAc i opran dva puta vodom i jednom slanim rastvorom. Organski sloj je osušen preko MgSO4, filtriran, i koncentrovan in vacuo da se dobije (S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-4-((S)-5-(terc-butoksi)-4-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)-5-oksopentanamido)butanska kiselina (288 mg, 0.328 mmol, 52.1 % prinos).

Priprema (S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-3-((S)-5-(terc-butoksi)-4-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)-5-oksopentanamido)propanske kiseline

[1212]

[1213] U rastvor sirovog(S)-1-terc-butil 5-(perfluorofenil) 2-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)pentandioata (1163 mg, 1.611 mmol) u DMF-u (1.61E+04 µl) je dodata Hunig-ova baza (1125 µl, 6.44 mmol), zatim (S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-3-aminopropanska kiselina (578 mg, 1.772 mmol). Smeša je ostavljena da se meša na ST preko noći. LC/MS je prikazala formiranje proizvoda. Smeša je razblažena vodom. Limunska kiselina je dodata, dajući beli talog. Smeša je ekstrahovana sa EtOAc-om, i nakon energičnog mućkanja čvrsta materija je rastvorena. Formirala se emulzija, i DCM i slana voda su dodati da pomognu u razdvajanju slojeva. Kombinovani slojevi su propušteni kroz jastučić od celita da se pomogne emulziono razdvajanje, ostavljajući lepljiv ostatak na slitu. Slojevi su razdvojeni, i vodena faza je oprana sa DCM. Kombinovani organski ekstrakti su oprani slanim rastvorom, osušeni preko MgSO4, filtrirani, i koncentrovani in vacuo. Ostatak je prečišćen pomoću Prep HPLC: (50 X 250 mm HPLC Sunfire C18 10µm 100% B tokom 14 min (A je 90:10:0.1 voda:MeOH:TFA; B je 90:10:0.1 MeOH:voda:TFA)). Frakcije su neutralizovane Hunig-ovom bazom i koncentrovane na rotovap-u da se dobije (S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-3-((S)-5-(terc-butoksi)-4-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)-5-oksopentanamido)propanska kiselina kiselina (940 mg, 1.088 mmol, 67.5 % prinos).

Priprema modifikovane hlorotritil smole 13A

[1214] 2-Hlorotritil smola (713 mg, 1.141 mmol) je nabubrila sa CH2Cl2(7 mL). Rastvor (S)-5-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-2-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)pentanske kiseline (252 mg, 0.356 mmol), Hunig-ova baza (0.405 mL, 2.317 mmol), i 1-hloro-4-metilbenzen (0.021 mL, 0.178 mmol) u CH2Cl2(3.5 mL) je pripremljen, analiziran pomoću LC/MS, i dodat u smolu koja je nabubrila. Smeša je mućkana na st, praćenje nestanka ČM. Nakon ∼45 min, materijal je skoro potpuno vezan za smolu. 13 mL smeše 9:1 MeOH/Hunig-ova baza je dodato, i smeša je filtrirana tokom 1 minuta. Smola je isprana 3 puta sa DCM (mešanje tokom ∼20 s između pranja). Smola je zatim mućkana sa ∼20 mL DMF tokom 5 min, zatim filtrirana. Ovo je ponovljeno još 2 puta sa DMF, zatim 3 puta sa DCM. Smola je osušena na fritovanom levku sa N2koji se propušta kroz smolu. Ukupna masa smole je 0.76 g.60.06 mg smole je uzeto i mućkano je tokom 1 min sa 1 mL 20% heksafluoroizopropanola u DCM. Filtrirano i isprano sa još rastvora za cepanje, zatim DCM-om. Koncentracija kombinovanih filtrata je dala 11.94 mg (.01689 mmol) razgrađenog materijala. Tako izmereno opterećenje je bilo 0.281 mekv/g, i inkorporisani prinos je bio 60%.

Priprema modifikovane hlorotritil smole 13B

[1215] 2-Hlorotritil smola (1622 mg, 2.60 mmol) je nabubrila sa CH2Cl2(1.59E+04 µl). Rastvor (S)-4-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-2-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)butanske kiseline (561.95 mg, 0.811 mmol), Hunig-ove baze (921 µl, 5.27 mmol), i 1-hloro-4-metilbenzena (48.0 µl, 0.405 mmol) u CH2Cl2(7951 µl) je pripremljeno, analizirano pomoću LC/MS, i dodato u smolu koja je nabubrila. Smeša je mućkana na st, praćenje nestanka ČM. Nakon ∼45 min, materijal je skoro potpuno vezan za smolu. 30 mL smeše 9:1 MeOH/ Hunig-ova baza je dodato, i smeša je filtrirana tokom 1 minuta. S Smola je isprana 3 puta sa DCM (mešanje tokom ∼20 s između pranja). Smola je zatim mućkana sa ∼20 mL DMF tokom 5 min, zatim filtrirana. Ovo je ponovljeno još 2 puta sa DMF, zatim 3 puta sa DCM. Smola je osušena na fritovanom levku sa N2koji se propušta kroz smolu. Ukupna masa smole je 1.93 g. 76.45 mg mg smole je i mućkano je tokom 1 min sa 1 mL 20% heksafluoroizopropanola u DCM. Filtrirano i isprano sa još rastvora za cepanje, zatim DCM-om. Koncentracija kombinovanih filtrata je dala 20.67 mg (.02983 mmol) razgrađenog materijala. Tako izmereno opterećenje je bilo 0.39 mekv/g, i inkorporisani prinos je bio 93%.

Priprema modifikovane hlorotritil smole 13C

[1216] 2-Hlorotritil smola (656 mg, 1.049 mmol) je nabubrila sa CH2Cl2(6431 µl). Nakon 10 min, 186 uL Hunig-ove baze je dodato, i beli dim koji nastaje je ispran iz boce azotom. Rastvor (S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-4-((S)-5-(terc-butoksi)-4-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)-5-oksopentanamido)butanske kiseline (288 mg, 0.328 mmol), Hunig-ove baze (372 µl, 2.132 mmol), i 1-hloro-4-metilbenzena (19.42 µl, 0.164 mmol) u CH2Cl2-u (3215 µl) je pripremljen, analiziran pomoću LC/MS, i dodan u smolu kojaj je nabubrila. NAPOMENA: 0.5 mL porcija DMF-a je dodata da potpomogne u rastvaranju polaznog materijala. Smeša je mućkana na st, praćenje na nestanak ČM. Činilo se da reakcija zastaje, pa se drugih 186 uL Hunigove baze dodaje. Nakon dodatnih 30 min nije primećen značajni napredak. 131 mg hlorotritil smole je dodato, i ponovo smeša je mućkana na ST preko noći. LC/MS i dalje pokazuje ČM, ali reakcija je ionako završena. 30 mL smeše 9:1 MeOH/Hunig-ova baza je dodato, i smeša je filtrirana unutar minuta. Smola je isprana 3 puta sa DCM (mešanje tokom ∼20 s između ispiranja). Smola je zatim mućkana sa ∼20 mL DMF tokom 5 min, zatim filtrirana. Ovo je ponovljeno još 2 puta sa DMF, zatim 3 puta sa DCM. Smola je osušena na fritovanom levku sa N2koji je propuštan kroz smolu.

Ukupna masa smole je bila 954 mg. 49.96 mg smole je mućkano tokom 1 min sa 2 mL 20% heksafluoroizopropanola u DCM-u. Filtrirano i isprano sa još rastvora za cepanje, zatim DCM-om. Koncentracija kombinovanih filtrata je dala 10.16 mg (.01157 mmol) razgrađenog materijala. Tako, izmereno opterećenje je bilo 0.23 mekv/g, i inkorporisani prinos je bio 67%.

Priprema modifikovane hlorotritil smole 13D

[1217] 2-Hlorotritil smola (2176 mg, 3.48 mmol) je nabubrila sa CH2Cl2(2.13E+04 µl). Nakon 10 min, 186 uL Hunig-ove baze je dodato, i beli dim koji se dobija je ispran iz boce sa azotom. Rastvor (S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-3-((S)-5-(terc-butoksi)-4-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)-5-oksopentanamido)propanske kiseline (940 mg, 1.088 mmol), Hunigove baze (1235 µl, 7.07 mmol), i 1-hloro-4-metilbenzena (64.4 µl, 0.544 mmol) u CH2Cl2(1.07E+04 µl) je pripremljen, analiziran pomoću LC/MS, i dodat u smolu koja je nabubrila. Smeša je mućkana na st, praćenje na nestanak ČM. Reakcija je bila ∼97% završena u ∼1 h. 100 mL smeše 9:1 MeOH/Hunig-ova baza je dodato, i smeša filtrirana tokom 1 minuta. Smola je isprana 3 puta sa DCM (mešanje tokom ∼20 s između pranja). Smola je zatim mućkana sa ∼60 mL DMF tokom 5 min, zatim filtrirana. Ovo je ponovljano još 2 puta sa DMF, zatim 3 puta sa DCM. Smola je osušena na fritovanom levku sa N2koji je propuštan kroz smolu. Ukupna masa smole je 2.57 g. 85.11 mg smole je mućkano tokom 1 min sa 2 mL 20% heksafluoroizopropanola u DCM. Filtrirana i isprana sa još rastvora za cepanje, zatim DCM. Koncentracija kombinovanih filtrata je dala 17.51 mg (.02026 mmol) razgrađenog materijala. Stoga, izmereno opterećenje je bilo 0.238 mekv/g, i inkorporisani prinos je bio 56%.

Priprema primera 13141

[1218]

[1219] Primer 13141 je sintetisan na .1 mmol skali u skladu sa opštim postupcima iznad, uključujući Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline. Podvučeni koraci su koristili dvostrukokuplujući postupak, a ostaci pisani kurzivom su kuplovani 30 min pojedinačnim kuplovanjem. ClAc-Tyr-Pip-Asn-Pro-Dap-Leu-Hyp-Trp-Dab-[(S)-2-amino-3-(1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)propanska kiselina]-[N-Me]Nle-[N-Me]Nle-Leu-Cys-Gly-Asp(OtBu)-[Modifikovana smola 13A]. Nakon uklanjanja zaštite praćenjem Globalnog deprotekcionog postupka B i ciklizacije prema Metodi B ciklizacije, jedinjenje je prečišćeno kao što sledi: Ostatak je podeljen i višestruka injektiranja su učinjena na 19 X 250 XSelect CSH Prep C185 um OBD koloni, 20 mL/min, 20 do 65% B tokom 25 min, 5 min pri 100%B, 5 min pri 20%B (A je 90% voda/10% ACN/0.1% TFA; B je 90% ACN/10% voda/0.1% TFA). Konc amonijak je primenjen da se podese frakcije na pH 7, i frakcije su koncentrovane na speedvac-u. Analitički podaci su podržali prijavu (6S,13S)-1-((7S,13R,16S,19S,22S,25S,28S,31S,33aS,35R,39S,42S,44aS,50S,52aR)-31-((1H-indol-3-il)metil)-50-(2-amino-2-oksoetil)-28-(2-aminoetil)-42-(aminometil)-19,22-dibutil-25-((1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)metil)-35-hidroksi-7-(4-hidroksibenzil)-16,39-diizobutil-20,23 -dimetil-6,9,15,18,21,24,27,30,33,38,41,44,49,52-tetradekaoksopentakontahidro-1H-pirido[1,2-g]dipirolo[1,2-m:1',2'-v][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43]tiatetradekaazaciklopentatetrakontin-13-il)-1,4,8,15-tetraokso-2,5,9,14-tetraazahentriakontan-6,13,31-trikarboksilne kiseline (6.01 mg, 2.242 µmol, 2.242 % prinos). Analiza Uslov 13A: rt 9.96 min. Analiza Uslov 13B: rt 8.61 min.; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1220.1553 (M+2H) Nađeno: 1220.1573 (M+2H).

Priprema primera 13142

[1220]

[1221] Primer 13142 je sintetisan na .1 mmol skali prema opštim postupcima iznad, uključujući Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline. Podvučeni koraci su koristili dvostruko-kuplujući postupak, a ostaci pisani kurzivom su kuplovani 30 min pojedinačnim kuplovanjem. ClAc-Tyr-Pip-Asn-Pro-Dap-Leu-Hyp-Trp-Dab-[(S)-2-amino-3-(1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)propanska kiselina]-[N-Me]Nle-[N-Me]Nle-Leu-Cys-Gly-Glu(OtBu)-[Modifikovana smola 13A]. Nakon deprotekcije koja prati Globalni Deprotekcioni postupak B i ciklizacije prema Metodi B ciklizacije, jedinjenje je prečišćeno kao što sledi: Ostatak je podeljen i višestruka ubrizgavanja su učinjena na 19 X 250 XSelect CSH Prep C185 um OBD koloni, 20 mL/min, 20 do 65% B tokom 25 min, 5 min pri 100%B, 5 min pri 20%B (A je 90% voda/10% ACN/0.1% TFA; B je 90% ACN/10% voda/0.1% TFA). Konc. amonijak je primenjen da se frakcije podese na pH 7, i frakcije su koncentrovane na speedvac-u. Preostala čvrsta materija je sadržala veliku količinu amonijum trifluoroacetata, koji je uklonjen višestrukim ciklusima liofilizacije da se dobije (6S,14S)-1-((7S,13R,16S,19S,22S,25S,28S,31S,33aS,35R,39S,42S,44aS,50S,52aR)-31-((1H-indol-3-il)metil)-50-(2-amino-2-oksoetil)-28-(2-aminoetil)-42-(aminometil)-19,22-dibutil-25-((1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)metil)-35-hidroksi-7-(4-hidroksibenzil)-16,39-diizobutil-20,23 -dimetil-6,9,15,18,21,24,27,30,33,38,41,44,49,52-tetradekaoksopentakontahidro-1H-pirido[1,2-g]dipirolo[1,2-m:1',2'-v][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43]tiatetradekaazaciklopentatetrakontin-13-il)-1,4,9,16-tetraokso-2,5,10,15-tetraazadotriakontan-6,14,32-trikarboksilna kiselina, 2 TFA (3.66 mg, 1.296 µmol, 1.296 % prinos). Analiza Uslov 13A: rt 10.00 min. Analiza Uslov 13B: rt 8.64 min.; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1227.1631 (M+2H) Nađeno: 1227.1669 (M+2H).

Priprema primera 13143

[1222]

[1223] Primer 13143 je sintetisan na .1 mmol skali prema opštim postupcima iznad, uključujući Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline. Podvučeni koraci su koristili dvostruko-kuplujući postupak, a ostaci pisani kurzivom su kuplovani 30 min pojedinačnim kuplovanjem. ClAc-Tyr-Pip-Asn-Pro-Dap-Leu-Hyp-Trp-Dab-[(S)-2-amino-3-(1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)propanska kiselina]-[N-Me]Nle-[N-Me]Nle-Leu-Cys-Gly-Glu(OtBu)-[Modifikovana smola 13B]. Nakon deprotekcije koja prati Globalni deprotekcioni postupak B i ciklizacije prema Metodi B ciklizacije, jedinjenje je prečišćeno kao što sledi: Ostatak je podeljen i višestruka ubrizgavanja su načinjena na 19 X 250 XSelect CSH Prep C18 5 um OBD koloni, 20 mL/min, 20 do 65% B tokom 25 min, 5 min pri 100%B, 5 min pri 20%B (A je 90% voda/10% ACN/0.1% TFA; B je 90% ACN/10% voda/0.1% TFA). ACN je uklonjen od frakcija na rotovap-u, i vodena porcija je liofilizovana. Analitički podaci su podržali prijavu (6S,13S)-1-((7S,13R,16S,19S,22S,25S,28S,31S,33aS,35R,39S,42S,44aS,50S,52aR)-31-((1H-indol-3-il)metil)-50-(2-amino-2-oksoetil)-28-(2-aminoetil)-42-(aminometil)-19,22-dibutil-25-((1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)metil)-35-hidroksi-7-(4-hidroksibenzil)-16,39-diizobutil-20,23-dimetil-6,9,15,18,21,24,27,30,33,38,41,44,49,52-tetradekaoksopentakontahidro-1H-pirido[1,2-g]dipirolo[1,2-m:1',2'-v][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43]tiatetradekaazaciklopentatetrakontin-13-il)-1,4,9,15-tetraokso-2,5,10,14-tetraazahentriakontan-6,13,31-trikarboksilne kiseline (5.93 mg, 2.406 µmol, 2.406 % prinos). Analiza Uslov 13A: rt 9.97 min. Analiza Uslov 13B: rt 8.61 min.; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1220.1553 (M+2H)

Nađeno: 1220.1601 (M+2H).

Priprema primera 13144

[1224]

[1225] Primer 13144 je sintetisan na .1 mmol skali prema opštim postupcima iznad, uključujući Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline. Podvučeni koraci su koristili dvostruko-kuplujući postupak, a ostaci pisani kurzivom su kuplovani 30 min pojedinačnim kuplovanjem. ClAc-Tyr-Pip-Asn-Pro-Dap-Leu-Hyp-Trp-Dab-[(S)-2-amino-3-(1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)propanska kiselina]-[N-Me]Nle-[N-Me]Nle-Leu-Cys-Gly-Asp(OtBu)-[Modifikovana smola 13B]. Nakon deprotekcije koja prati Globalni deprotekcioni postupak B i ciklizacije prema Metodi B ciklizacije, jedinjenje je prečišćeno kao što sledi: Ostatak je podeljen i višestruka ubrizgavanja su načinjena na 30 X 150 XSelect CSH Prep C18 5 um OBD koloni, 40 mL/min, 20 do 65% B tokom 25 min, 5 min pri 100%B, 5 min pri 20%B (A je 90% voda/10% ACN/0.1% TFA; B je 90% ACN/10% voda/0.1% TFA). ACN je uklonjen od frakcija na rotovap-u, i vodena porcija je liofilizovana. Analitički podaci su podržali prijavu (6S,12S)-1-((7S,13R,16S,19S,22S,25S,28S,31S,33aS,35R,39S,42S,44aS,50S,52aR)-31-((1H-indol-3-il)metil)-50-(2-amino-2-oksoetil)-28-(2-aminoetil)-42-(aminometil)-19,22-dibutil-25-((1(karboksimetil)-1H-indol-3-il)metil)-35-hidroksi-7-(4-hidroksibenzil)-16,39-diizobutil-20,23-dimetil-6,9,15,18,21,24,27,30,33,38,41,44,49,52-tetradekaoksopentakontahidro-1H-pirido[1,2-g]dipirolo[1,2-m:1',2'-v][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43]tiatetradekaazaciklopentatetrakontin-13-il)-1,4,8,14-tetraokso-2,5,9,13-tetraazatriakontan-6,12,30-trikarboksilne kiseline, 2 TFA (9.57 mg, 3.43 µmol, 3.43 % prinos). Analiza Uslov 13A: rt 9.98 min. Analiza Uslov 13B: rt 8.66 min.; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1213.1474 (M+2H) Nađeno: 1213.1513 (M+2H).

Priprema primera 13145

[1226]

[1227] Primer 13145 je sintetisan na .1 mmol skali prema opštim postupcima iznad, uključujući Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline. Podvučeni koraci su koristili dvostruko-kuplujući postupak, a ostaci pisani kurzivom su kuplovani 30 min pojedinačnim kuplovanjem. ClAc-[p-Fluorofenilalanin]-Pip-Asp-Pro-Dap-Leu-Hyp-Trp-Dab-[(S)-2-amino-3-(1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)propanska kiselina]-[N-Me]Nle-[N-Me]Nle-Leu-Cys-Gly-Asp(OtBu)-[Modifikovana smola 13A]. Nakon deprotekcije koja prati Globalni deprotekcioni postupak B i ciklizacije prema Metodi B ciklizacije, jedinjenje je prečišćeno kao što sledi: Ostatak je podeljen i višestruka ubrizgavanja su načinjena na 30 X 150 XSelect CSH Prep C185 um OBD koloni, 40 mL/min, 20 do 65% B tokom 25 min, 5 min pri 100%B, 5 min pri 20%B (A je 90% voda/10% ACN/0.1% TFA; B je 90% ACN/10% voda/0.1% TFA). ACN je uklonjen od frakcija na rotovap-u, i vodena porcija je liofilizovana. Analitički podaci su podržali prijavu (6S,13S)-1-((7S,13R,16S,19S,22S,25S,28S,31S,33aS,35R,39S,42S,44aS,50S,52aR)-31-((1H-indol-3-il)metil)-28-(2-aminoetil)-42-(aminometil)-19,22-dibutil-50-(karboksimetil)-25-((1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)metil)-7-(4-fluorobenzil)-3 5-hidroksi-16,3 9-diizobutil-20,23-dimetil-6,9,15,18,21,24,27,30,33,38,41,44,49,52-tetradekaoksopentakontahidro-1H-pirido[1,2-g]dipirolo[1,2-m:1',2'-v][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43]tiatetradekaazaciklopentatetrakontin-13-il)-1,4,8,15-tetraokso-2,5,9,14-tetraazahentriakontan-6,13,31-trikarboksilne kiseline, 2 TFA (10.57 mg, 3.88 µmol). Analiza Uslov 13A: rt 11.43 min. Analiza Uslov 13B: rt 9.57 min.; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 814.7658 (M+3H)

Nađeno: 814.7697 (M+3H).

Priprema primera 13146

[1228]

[1229] Primer 13146 je sintetisan na .1 mmol skali prema opštim postupcima iznad, uključujući Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline. Podvučeni koraci su koristili dvostruko-kuplujući postupak, a ostaci pisani kurzivom su kuplovani 30 min pojedinačnim kuplovanjem. ClAc-[p-Fluorofenilalanin]-Pip-Asp-Pro-Dap-Leu-Hyp-Trp-Dab-[(S)-2-amino-3-(1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)propanska kiselina]-[N-Me]Nle-[N-Me]Nle-Leu-Cys-Gly-Glu(OtBu)-[Modifikovana smola 13A]. Nakon deprotekcije koja prati Globalni deprotekcioni postupak B i ciklizacije prema Metodi B ciklizacije, jedinjenje je prečišćeno kao što sledi: Ostatak je podeljen i dva ubrizgavanja su načinjena na 30 X 150 XSelect CSH Prep C185 um OBD koloni, 40 mL/min, 20 do 65% B tokom 25 min, 5 min pri 100%B, 5 min pri 20%B (A je 90% voda/10% ACN/0.1% TFA; B je 90% ACN/10% voda/0.1% TFA). ACN je uklonjen od frakcija na rotovap-u, i vodena porcija je liofilizovana. Analitički podaci su podržali prijavu (6S,14S)-1-((7S,13R,16S,19S,22S,25S,28S,31S,33aS,35R,39S,42S,44aS,50S,52aR)-31-((1H-indol-3-il)metil)-28-(2-aminoetil)-42-(aminometil)-19,22-dibutil-50-(karboksimetil)-25-((1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)metil)-7-(4-fluorobenzil)-3 5-hidroksi-16,3 9-diizobutil-20,23-dimetil-6,9,15,18,21,24,27,30,33,38,41,44,49,52-tetradekaoksopentakontahidro-1H-pirido[1,2-g]dipirolo[1,2-m:1',2'-v][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43]tiatetradekaazaciklopentatetrakontin-13-il)-1,4,9,16-tetraokso-2,5,10,15-tetraazadotriakontan-6,14,32-trikarboksilne kiseline, 2 TFA (4.03 mg, 1.441 µmol). Analiza Uslov 13A: rt 11.50 min. Analiza Uslov 13B: rt 9.55 min.; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1228.6529 (M+2H) Nađeno: 1228.6581 (M+2H).

Priprema primera 13147

[1230]

[1231] Primer 13147 je sintetisan na .1 mmol skali prema opštim postupcima iznad, uključujući Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline. Podvučeni koraci su koristili dvostruko-kuplujući postupak, a ostaci pisani kurzivom su kuplovani 30 min pojedinačnim kuplovanjem. ClAc-[pFluorofenilalanin]-Pip-Asp-Pro-Dap-Leu-Hyp-Trp-Dab-[(S)-2-amino-3-(1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)propanska kiselina]-[N-Me]Nle-[N-Me]Nle-Leu-Cys-Gly-Asp(OtBu)-[Modifikovana smola 13B]. Nakon deprotekcije koja prati Globalni deprotekcioni postupak B i ciklizacije prema Metodi B ciklizacije, jedinjenje je prečišćeno kao što sledi: Ostatak je podeljen i dva ubrizgavanja su načinjena na 30 X 150 XSelect CSH Prep C185 um OBD koloni, 40 mL/min, 20 do 65% B tokom 25 min, 5 min pri 100%B, 5 min pri 20%B (A je 90% voda/10% ACN/0.1% TFA; B je 90% ACN/10% voda/0.1% TFA). ACN je uklonjen od frakcija na rotovap-u, i vodena porcija je liofilizovana. Analitički podaci su podržali prijavu (6S,12S)-1-((7S,13R,16S,19S,22S,25S,28S,31S,33aS,35R,39S,42S,44aS,50S,52aR)-31-((1H-indol-3-il)metil)-28-(2-aminoetil)-42-(aminometil)-19,22-dibutil-50-(karboksimetil)-25-((1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)metil)-7-(4-fluorobenzil)-35-hidroksi-16,39-diizobutil-20,23-dimetil-6,9,15,18,21,24,27,30,33,38,41,44,49,52-tetradekaoksopentakontahidro-1H-pirido[1,2-g]dipirolo[1,2-m:1',2'-v][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43]tiatetradekaazaciklopentatetrakontin-13-il)-1,4,8,14-tetraokso-2,5,9,13-tetraazatriakontan-6,12,30-trikarboksilne kiseline, 2 TFA (17.72 mg, 6.60 µmol). Analiza Uslov 13A: rt 11.38 min. Analiza Uslov 13B: rt 9.47 min.; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1214.6355 (M+2H)

Nađeno: 1214.6373 (M+2H).

Priprema primera 13148

[1232]

[1233] Primer 13148 je sintetisan na .1 mmol skali prema opštim postupcima iznad, uključujući Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline. Podvučeni koraci su koristili dvostruko-kuplujući postupak, a ostaci pisani kurzivom su kuplovani 30 min pojedinačnim kuplovanjem. ClAc-[p-Fluorofenilalanin]-Pip-Asp-Pro-Dap-Leu-Hyp-Trp-Dab-[(S)-2-amino-3-(1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)propanska kiselina]-[N-Me]Nle-[N-Me]Nle-Leu-Cys-Gly-Glu(OtBu)-[Modifikovana smola 13B]. Nakon deprotekcije koja prati Globalni deprotekcioni postupak B i ciklizacije prema Metodi B ciklizacije, jedinjenje je prečišćeno kao što sledi: Ostatak je podeljen i višestruka ubrizgavanja su načinjena na 30 X 150 XSelect CSH Prep C185 um OBD koloni, 40 mL/min, 20 do 65% B tokom 25 min, 5 min pri 100%B, 5 min pri 20%B (A je 90% voda/10% ACN/0.1% TFA; B je 90% ACN/10% voda/0.1% TFA). ACN je uklonjen od frakcija na rotovap-u, i vodena porcija je liofilizovana. Analitički podaci su podržali prijavu (6S,13S)-1-((7S,13R,16S,19S,22S,25S,28S,31S,33aS,35R,39S,42S,44aS,50S,52aR)-31-((1H-indol-3-il)metil)-28-(2-aminoetil)-42-(aminometil)-19,22-dibutil-50-(karboksimetil)-25-((1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)metil)-7-(4-fluorobenzil)-35-hidroksi-16,39-diizobutil-20,23-dimetil-6,9,15,18,21,24,27,30,33,38,41,44,49,52-tetradekaoksopentakontahidro-1H-pirido[1,2-g]dipirolo[1,2-m:1',2'-v][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43]tiatetradekaazaciklopentatetrakontin-13-il)-1,4,9,15-tetraokso-2,5,10,14-tetraazahentriakontan-6,13,31-trikarboksilne kiseline, 2 TFA (13.42 mg, 4.77 µmol). Analiza Uslov 13A: rt 12.60 min. Analiza Uslov 13B: rt 10.67 min.; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1221.6451 (M+2H) Nađeno: 1221.6421 (M+2H).

Priprema primera 13149

[1234]

[1235] Primer 13149 je sintetisan na .1 mmol skali prema opštim postupcima iznad, uključujući Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline. Podvučeni koraci su koristili dvostruko-kuplujući postupak, a ostaci pisani kurzivom su kuplovani 30 min pojedinačnim kuplovanjem. ClAc-Tyr-Pip-Asn-Pro-Dap-Leu-Hyp-Trp-Dab-[(S)-2-amino-3-(1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)propanska kiselina]-[N-Me]Nle-[N-Me]Nle-Leu-Cys-Gly-[Modifikovana smola 13C]. Nakon deprotekcije koja prati Globalni deprotekcioni postupak B i ciklizacije prema Metodi B ciklizacije, jedinjenje je prečišćeno kao što sledi: Ostatak je podeljen i višestruka ubrizgavanja su načinjena na 30 X 150 XSelect CSH Prep C185 um OBD koloni, 40 mL/min, 20 do 65% B tokom 25 min, 5 min pri 100%B, 5 min pri 20%B (A je 90% voda/10% ACN/0.1% TFA; B je 90% ACN/10% voda/0.1% TFA). ACN je uklonjen od frakcija na rotovap-u, i vodena porcija je liofilizovana. Analitički podaci su podržali prijavu (6S,13S)-1-((7S,13R,16S,19S,22S,25S,28S,31S,33aS,35R,39S,42S,44aS,50S,52aR)-31-((1H-indol-3-il)metil)-50-(2-amino-2-oksoetil)-28-(2-aminoetil)-42-(aminometil)-19,22-dibutil-25-((1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)metil)-35-hidroksi-7-(4-hidroksibenzil)-16,39-diizobutil-20,23-dimetil-6,9,15,18,21,24,27,30,33,38,41,44,49,52-tetradekaoksopentakontahidro-1H-pirido[1,2-g]dipirolo[1,2-m:1',2'-v][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43]tiatetradekaazaciklopentatetrakontin-13-il)-1,4,10,15-tetraokso-2,5,9,14-tetraazahentriakontan-6,13,31-trikarboksilne kiseline, 2 TFA (22.17 mg, 7.64 µmol). Analiza Uslov 13A: rt 11.04 min. Analiza Uslov 13B: rt 9.76 min.; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1220.1553 (M+2H)

Nađeno: 1220.1526 (M+2H).

Priprema primera 13150

[1236]

[1237] Primer 13150 je sintetisan na 0.1 mmol skali prema opštim postupcima iznad, uključujući Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline. Podvučeni koraci su koristili dvostruko-kuplujući postupak, a ostaci pisani kurzivom su kuplovani 30 min pojedinačnim kuplovanjem. ClAc-[p-Fluorofenilalanin]-Pip-Asp-Pro-Dap-Leu-Hyp-Trp-Dab-[(S)-2-amino-3-(1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)propanska kiselina]-[N-Me]Nle-[N-Me]Nle-Leu-Cys-Gly-[Modifikovana smola 13C]. Nakon deprotekcije koja prati Globalni deprotekcioni postupak B i ciklizacije prema Metodi B ciklizacije, jedinjenje je prečišćeno kao što sledi: Ostatak je podeljen i višestruka ubrizgavanja su načinjena na 30 X 150 XSelect CSH Prep C185 um OBD koloni, 40 mL/min, 20 do 65% B tokom 25 min, 5 min pri 100%B, 5 min pri 20%B (A je 90% voda/10% ACN/0.1% TFA; B je 90% ACN/10% voda/0.1% TFA). ACN je uklonjen od frakcija na rotovap-u, i vodena porcija je liofilizovana. Analitički podaci su podržali prijavu (6S,13S)-1-((7S,13R,16S,19S,22S,25S,28S,31S,33aS,35R,39S,42S,44aS,50S,52aR)-31-((1H-indol-3-il)metil)-28-(2-aminoetil)-42-(aminometil)-19,22-dibutil-50-(karboksimetil)-25-((1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)metil)-7-(4-fluorobenzil)-35-hidroksi-16,39-diizobutil-20,23-dimetil-6,9,15,18,21,24,27,30,33,38,41,44,49,52-tetradekaoksopentakontahidro-1H-pirido[1,2-g]dipirolo[1,2-m:1',2'-v][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43]tiatetradekaazaciklopentatetrakontin-13-il)1,4,10,15-tetraokso-2,5,9,14-tetraazahentriakontan-6,13,31-trikarboksilne kiseline, 2 TFA (12.96 mg, 4.37 µmol). Analiza Uslov 13A: rt 12.52 min. Analiza Uslov 13B: rt 10.61 min.; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1221.6451 (M+2H)

Nađeno: 1221.6429 (M+2H).

Priprema primera 13151

[1238]

[1239] Primer 13151 je sintetisan na .1 mmol skali prema opštim postupcima iznad, uključujući Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline. Podvučeni koraci su koristili dvostruko-kuplujući postupak, a ostaci pisani kurzivom su kuplovani 30 min pojedinačnim kuplovanjem. ClAc-[p-Metoksifenilalanin]-Pip-Asn-Pro-His-Leu-Hyp-Trp-Dab-[(S)-2-amino-3-(1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)propanska kiselina]-[N-Me]Nle-[N-Me]Nle-Leu-Cys-Gly-[Modifikovana smola 13C]. Nakon deprotekcije koja prati Globalni deprotekcioni postupak B i ciklizacije prema Metodi B ciklizacije, jedinjenje je prečišćeno kao što sledi: Ostatak je podeljen i višestruka ubrizgavanja su načinjena na 30 X 150 XSelect CSH Prep C185 um OBD koloni, 40 mL/min, 20 do 65% B tokom 25 min, 5 min pri 100%B, 5 min pri 20%B (A je 90% voda/10% ACN/0.1% TFA; B je 90% ACN/10% voda/0.1% TFA). ACN je uklonjen od frakcija na rotovap-u, i vodena porcija je liofilizovana. Analitički podaci su podržali prijavu (6S,13S)-1-((7S,13R,16S,19S,22S,25S,28S,31S,33aS,35R,39S,42S,44aS,50S,52aR)-42-((1H-imidazol-4-il)metil)-31-((1H-indol-3-il)metil)-50-(2-amino-2-oksoetil)-28-(2-aminoetil)-19,22-dibutil-25((1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)metil)-35-hidroksi-16,39-diizobutil-7-(4-metoksibenzil)-20,23-dimetil-6,9,15,18,21,24,27,30,33,38,41,44,49,52-tetradekaoksopentakontahidro-1H-pirido[1,2-g]dipirolo[1,2-m:1',2'-v][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43]tiatetradekaazaciklopentatetrakontin-13-il)-1,4,10,15-tetraokso-2,5,9,14-tetraazahentriakontan-6,13,31-trikarboksilne kiseline, 2 TFA (18.49 mg, 6.63 µmol). Analiza Uslov 13A: rt 11.80 min. Analiza Uslov 13B: rt 10.12 min.; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1252.6685 (M+2H)

Nađeno: 1252.6670 (M+2H).

Priprema primera 13152

[1240]

[1241] Primer 13152 je sintetisan na .1 mmol skali prema opštim postupcima iznad, uključujući Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline. Podvučeni koraci su koristili dvostruko-kuplujući postupak, a ostaci pisani kurzivom su kuplovani 30 min pojedinačnim kuplovanjem. ClAc-Tyr-Pip-Asn-Pro-Dap-Leu-Hyp-Trp-Dab-[(S)-2-amino-3-(1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)propanska kiselina]-[N-Me]Nle-[N-Me]Nle-Leu-Cys-Gly-[Modifikovana smola 13D]. Nakon deprotekcije koja prati Globalni deprotekcioni postupak B i ciklizacije prema Metodi B ciklizacije, jedinjenje je prečišćeno kao što sledi: Ostatak je podeljen i višestruka ubrizgavanja su načinjena na 30 X 150 XSelect CSH Prep C185 um OBD koloni, 40 mL/min, 20 do 65% B tokom 25 min, 5 min pri 100%B, 5 min pri 20%B (A je 90% voda/10% ACN/0.1% TFA; B je 90% ACN/10% voda/0.1% TFA). ACN je uklonjen od frakcija na rotovap-u, i vodena porcija je liofilizovana. Analitički podaci potvrđuju (6S,12S)-1-((7S,13R,16S,19S,22S,25S,28S,31S,33aS,35R,39S,42S,44aS,50S,52aR)-31-((1H-indol-3-il)metil)-50-(2-amino-2-oksoetil)-28-(2-aminoetil)-42-(aminometil)-19,22-dibutil-25-((1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)metil)-35-hidroksi-7-(4-hidroksibenzil)-16,39-diizobutil-20,23-dimetil-6,9,15,18,21,24,27,30,33,38,41,44,49,52-tetradekaoksopentakontahidro-1H-pirido[1,2-g]dipirolo[1,2-m:1',2'-v][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43]tiatetradekaazaciklopentatetrakontin-13-il)-1,4,9,14-tetraokso-2,5,8,13-tetraazatriakontan-6,12,30-trikarboksilna kiselina, 2 TFA (20.36 mg, 6.90 µmol, 6.90 % prinos). Analiza Uslov 13A: rt 10.51 min. Analiza Uslov 13B: rt 9.22 min.; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1213.1474 (M+2H) Nađeno: 1213.1440 (M+2H).

Priprema primera 13153

[1242]

[1243] Primer 13153 je sintetisan na .1 mmol skali prema opštim postupcima iznad, uključujući Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline. Podvučeni koraci su koristili dvostruko-kuplujući postupak, a ostaci pisani kurzivom su kuplovani 30 min pojedinačnim kuplovanjem. ClAc-Tyr-[N-Me]Ala-Asn-Pro-Dap-Leu-Hyp-Trp-Dab-[(S)-2-amino-3-(1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)propanska kiselina]-[N-Me]Nle-[N-Me]Nle-Leu-Cys-Gly-[Modifikovana smola 13D]. Nakon deprotekcije koja prati Globalni deprotekcioni postupak B i ciklizacije prema Metodi B ciklizacije, jedinjenje je prečišćeno kao što sledi: Ostatak je podeljen i višestruka ubrizgavanja su načinjena na 30 X 150 XSelect CSH Prep C18 5 um OBD koloni, 40 mL/min, 20 do 65% B tokom 25 min, 5 min pri 100%B, 5 min pri 20%B (A je 90% voda/10% ACN/0.1% TFA; B je 90% ACN/10% voda/0.1% TFA). ACN je uklonjen od frakcija na rotovap-u, i vodena porcija je liofilizovana. Analitički podaci su podržali prijavu (6S,12S)-1-((6S,9S,12S,18R,21S,24S,27S,30S,33S,36S,38aS,40R,44S,47S,49aS)-36-((1H-indol-3-il)metil)-6-(2-amino-2-oksoetil)-33-(2-aminoetil)-47-(aminometil)-24,27-dibutil-30-((1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)metil)-40-hidroksi-12-(4-hidroksibenzil)-21,44-diizobutil-9,10,25,28-tetrametil-5,8,11,14,20,23,26,29,32,35,38,43,46,49-tetradekaoksooktatetrakontahidrodipirolo[2,1-g1:2',1'-x][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43]tiatetradekaazaciklopentatetrakontin-18-il)-1,4,9,14-tetraokso-2,5,8,13-tetraazatriakontan-6,12,30-trikarboksilne kiseline, 2 TFA (21.88 mg, 7.91 µmol, 7.91 % prinos). Analiza Uslov 13A: rt 10.37 min. Analiza Uslov 13B: rt 9.04 min.; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1200.1396 (M+2H) Nađeno: 1200.1373 (M+2H).

Priprema primera 13154

[1244]

[1245] Primer 13154 je sintetisan na .1 mmol skali prema opštim postupcima iznad, uključujući Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline. Podvučeni koraci su koristili dvostruko-kuplujući postupak, a ostaci pisani kurzivom su kuplovani 30 min pojedinačnim kuplovanjem. ClAc-[pMetoksifenilalanin]-Pip-Asn-Pro-His-Gln-Hyp-Trp-Dab-[(S)-2-amino-3-(1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)propanska kiselina]-[N-Me]Nle-[N-Me]Nle-Leu-Cys-Gly-[Modifikovana smola 13D]. Nakon deprotekcije koja prati Globalni deprotekcioni postupak B i ciklizacije prema Metodi B ciklizacije, jedinjenje je prečišćeno kao što sledi: Ostatak je podeljen i višestruka ubrizgavanja su načinjena na 30 X 150 XSelect CSH Prep C185 um OBD koloni, 40 mL/min, 20 do 65% B tokom 25 min, 5 min pri 100%B, 5 min pri 20%B (A je 90% voda/10% ACN/0.1% TFA; B je 90% ACN/10% voda/0.1% TFA). ACN je uklonjen od frakcija na rotovap-u, i vodena porcija je liofilizovana. Analitički podaci su podržali prijavu (6S,12S)-1-((7S,13R,16S,19S,22S,25S,28S,31S,33aS,35R,39S,42S,44aS,50S,52aR)-42-((1H-imidazol-4-il)metil)-31-((1H-indol-3-il)metil)-50-(2-amino-2-oksoetil)-39-(3-amino-3-oksopropil)-28-(2-aminoetil)-19,22-dibutil-25-((1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)metil)-35-hidroksi-16-izobutil-7-(4-metoksibenzil)-20,23-dimetil-6,9,15,18,21,24,27,30,33,38,41,44,49,52-tetradekaoksopentakontahidro-1H-pirido[1,2-g]dipirolo[1,2-m:1',2'-v][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43]tiatetradekaazaciklopentatetrakontin-13-il)-1,4,9,14-tetraokso-2,5,8,13-tetraazatriakontan-6,12,30-trikarboksilne kiseline, 2 TFA (6.71 mg, 2.209 µmol, 2.209 % prinos). Analiza Uslov 13A: rt 11.04 min. Analiza Uslov 13B: rt 9.34 min.; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1253.1480 (M+2H) Nađeno: 1253.1443 (M+2H).

Priprema primera 13155

[1246]

[1247] Primer 13155 je sintetisan na .1 mmol skali prema opštim postupcima iznad, uključujući Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline. Podvučeni koraci su koristili dvostruko-kuplujući postupak, a ostaci pisani kurzivom su kuplovani 30 min pojedinačnim kuplovanjem. ClAc-[p-Metoksifenilalanin]-Pip-Asn-Pro-His-Gln-Hyp-Trp-Dab-[(S)-2-amino-3-(1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)propanska kiselina]-[N-Me]Nle-[N-Me]Nle-Leu-Cys-Gly-[Modifikovana smola 13D]. Nakon deprotekcije koja prati Globalni deprotekcioni postupak B i ciklizacije prema Metodi B ciklizacije, jedinjenje je prečišćeno kao što sledi: Ostatak je podeljen i višestruka ubrizgavanja su načinjena na 30 X 150 XSelect CSH Prep C185 um OBD koloni, 40 mL/min, 20 do 65% B tokom 25 min, 5 min pri 100%B, 5 min pri 20%B (A je 90% voda/10% ACN/0.1% TFA; B je 90% ACN/10% voda/0.1% TFA). ACN je uklonjen od frakcija na rotovap-u, i vodena porcija je liofilizovana. Analitički podaci su podržali prijavu (6S,12S)-1-((7S,13R,16S,19S,22S,25S,28S,31S,33aS,35R,39S,42S,44aS,50S,52aR)-42-((1H-imidazol-4-il)metil)-31-((1H-indol-3-il)metil)-39-(3-amino-3-oksopropil)-28-(2-aminoetil)-19,22-dibutil-50-(karboksimetil)-25-((1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)metil)-35-hidroksi-16-izobutil-7-(4-metoksibenzil)-20,23-dimetil-6,9,15,18,21,24,27,30,33,38,41,44,49,52-tetradekaoksopentakontahidro-1H-pirido[1,2-g]dipirolo[1,2-m:1',2'-v][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43]tiatetradekaazaciklopentatetrakontin-13-il)-1,4,9,14-tetraokso-2,5,8,13-tetraazatriakontan-6,12,30-trikarboksilne kiseline, 2 TFA (10.61 mg, 3.49 µmol, 3.49 % prinos). Analiza Uslov 13A: rt 11.19 min. Analiza Uslov 13B: rt 9.48 min.; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1253.6400 (M+2H) Nađeno: 1253.6372(M+2H).

Priprema primera 13156

[1248]

[1249] Primer 13156 je sintetisan na .1 mmol skali prema opštim postupcima iznad, uključujući Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline. Podvučeni koraci su koristili dvostruko-kuplujući postupak, a ostaci pisani kurzivom su kuplovani 30 min pojedinačnim kuplovanjem. ClAc-[p-Metoksifenilalanin]-Pip-Asn-Pro-His-Gln-Hyp-Trp-Dab-[(S)-2-amino-3-(1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)propanska kiselina]-[N-Me]Nle-[N-Me]Nle-Leu-Cys-Gly-Asp(OtBu)-[Modifikovana smola 13B]. Nakon deprotekcije koja prati Globalni deprotekcioni postupak B i ciklizacije prema Metodi B ciklizacije, jedinjenje je prečišćeno kao što sledi: Ostatak je podeljen i višestruka ubrizgavanja su načinjena na 30 X 150 XSelect CSH Prep C185 um OBD koloni, 40 mL/min, 20 do 65% B tokom 25 min, 5 min pri 100%B, 5 min pri 20%B (A je 90% voda/10% ACN/0.1% TFA; B je 90% ACN/10% voda/0.1% TFA). ACN je uklonjen od frakcija na rotovap-u, i vodena porcija je liofilizovana. Analitički podaci su podržali prijavu (6S,12S)-1-((7S,13R,16S,19S,22S,25S,28S,31S,33aS,35R,39S,42S,44aS,50S,52aR)-42-((1H-imidazol-4-il)metil)-31-((1H-indol-3-il)metil)-50-(2-amino-2-oksoetil)-39-(3-amino-3-oksopropil)-28-(2-aminoetil)-19,22-dibutil-25-((1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)metil)-35-hidroksi-16-izobutil-7-(4-metoksibenzil)-20,23-dimetil-6,9,15,18,21,24,27,30,33,38,41,44,49,52-tetradekaoksopentakontahidro-1H-pirido[1,2-g]dipirolo[1,2-m:1',2'-v][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43]tiatetradekaazaciklopentatetrakontin-13-il)-1,4,8,14-tetraokso-2,5,9,13-tetraazatriakontan-6,12,30-trikarboksilne kiseline, 2 TFA (10.73 mg, 3.53 µmol, 3.53 % prinos). Analiza Uslov 13A: rt 10.92 min. Analiza Uslov 13B: rt 9.27 min.; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1253.1480 (M+2H) Nađeno: 1253.1448 (M+2H).

Priprema primera 13157

[1250]

[1251] Primer 13157 je sintetisan na .1 mmol skali prema opštim postupcima iznad, uključujući Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline. Podvučeni koraci su koristili dvostruko-kuplujući postupak, a ostaci pisani kurzivom su kuplovani 30 min pojedinačnim kuplovanjem. ClAc-[p-Metoksifenilalanin]-Pip-Asp-Pro-His-Gln-Hyp-Trp-Dab-[(S)-2-amino-3-(1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)propanska kiselina]-[N-Me]Nle-[N-Me]Nle-Leu-Cys-Gly-Asp(OtBu)-[Modifikovana smola 13B]. Nakon deprotekcije koja prati Globalni deprotekcioni postupak B i ciklizacije prema Metodi B ciklizacije, jedinjenje je prečišćeno kao što sledi: Ostatak je podeljen i višestruka ubrizgavanja su načinjena na 30 X 150 XSelect CSH Prep C185 um OBD koloni, 40 mL/min, 20 do 65% B tokom 25 min, 5 min pri 100%B, 5 min pri 20%B (A je 90% voda/10% ACN/0.1% TFA; B je 90% ACN/10% voda/0.1% TFA). ACN je uklonjen od frakcija na rotovap-u, i vodena porcija je liofilizovana. Analitički podaci su podržali prijavu (6S,12S)-1-((7S,13R,16S,19S,22S,25S,28S,31S,33aS,35R,39S,42S,44aS,50S,52aR)-42-((1H-imidazol-4-il)metil)-31-((1H-indol-3-il)metil)-39-(3-amino-3-oksopropil)-28-(2-aminoetil)-19,22-dibutil-50-(karboksimetil)-25-((1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)metil)-35-hidroksi-16-izobutil-7-(4-metoksibenzil)-20,23-dimetil-6,9,15,18,21,24,27,30,33,38,41,44,49,52-tetradekaoksopentakontahidro-1H-pirido[1,2-g]dipirolo[1,2-m:1',2'-v][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43]tiatetradekaazaciklopentatetrakontin-13-il)1,4,8,14-tetraokso-2,5,9,13-tetraazatriakontan-6,12,30-trikarboksilne kiseline, 2 TFA (12.14 mg, 4.22 µmol, 4.22 % prinos). Analiza Uslov 13A: rt 11.09 min. Analiza Uslov 13B: rt 9.42 min.; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1253.6400 (M+2H) Nađeno: 1253.6367 (M+2H).

Priprema primera 13158

[1252]

[1253] Primer 13158 je sintetisan na .1 mmol skali prema opštim postupcima iznad, uključujući Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline. Podvučeni koraci su koristili dvostruko-kuplujući postupak, a ostaci pisani kurzivom su kuplovani 30 min pojedinačnim kuplovanjem. ClAc-Tyr-Pip-Asn-Pro-Dap-Leu-Hyp-Trp-Dab-[(S)-2-amino-3-(1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)propanska kiselina]-[N-Me]Nle-[N-Me]Nle-Leu-Cys-Gly-[morfolin-3R-karboksilna kiselina]-Asp(OtBu)-[Modifikovana smola 13B]. Nakon deprotekcije koja prati Globalni deprotekcioni postupak B i ciklizacije prema Metodi B ciklizacije, jedinjenje je prečišćeno kao što sledi: Ostatak je podeljen i višestruka ubrizgavanja su načinjena na 30 X 150 XSelect CSH Prep C185 um OBD koloni, 40 mL/min, 20 do 65% B tokom 25 min, 5 min pri 100%B, 5 min pri 20%B (A je 90% voda/10% ACN/0.1% TFA; B je 90% ACN/10% voda/0.1% TFA). ACN je uklonjen od frakcija na rotovapu, i vodena porcija je liofilizovana. Analitički podaci su podržali prijavu 18-(((S)-3-((R)-4-((S)-3-(2-((7S,13R,16S,19S,22S,25S,28S,31S,33aS,35R,39S,42S,44aS,50S,52aR)-31-((1H-indol-3-il)metil)-50-(2-amino-2-oksoetil)-28-(2-aminoetil)-42-(aminometil)-19,22-dibutil-25-((1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)metil)-35-hidroksi-7-(4-hidroksibenzil)-16,39-diizobutil-20,23 dimetil-6,9,15,18,21,24,27,30,33,38,41,44,49,52-tetradekaoksopentakontahidro-1H-pirido[1,2-g]dipirolo[1,2-m:1',2'-v][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43]tiatetradekaazaciklopentatetrakontin-13-karboksamido)acetamido)-3-karboksipropanoil)morfolin-3-karboksamido)-1-karboksipropil)amino)-18-oksooktadekanske kiseline, 2 TFA (22.68 mg, 7.38 µmol, 7.38 % prinos). Analiza Uslov 13A: rt 10.15 min. Analiza Uslov 13B: rt 8.82 min.; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1269.6713 (M+2H) Nađeno: 1269.6671 (M+2H).

Priprema primera 13159

[1254]

[1255] Primer 13159 je sintetisan na .1 mmol skali prema opštim postupcima iznad, uključujući Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline. Podvučeni koraci su koristili dvostruko-kuplujući postupak, a ostaci pisani kurzivom su kuplovani 30 min pojedinačnim kuplovanjem. ClAc-Tyr-Pip-Asn-Pro-Dap-Leu-Hyp-Trp-Dab-[(S)-2-amino-3-(1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)propanska kiselina]- [N-Me]Nle-[N-Me]Nle-Leu-Cys-Gly-[2-(2-aminoetoksi)sirćetna kiselina]-Asp(OtBu)-[Modifikovana smola 13B]. Nakon deprotekcije koja prati Globalni deprotekcioni postupak B i ciklizacije prema Metodi B ciklizacije, jedinjenje je prečišćeno kao što sledi: Ostatak je podeljen i višestruka ubrizgavanja su načinjena na 30 X 150 XSelect CSH Prep C185 um OBD koloni, 40 mL/min, 20 do 65% B tokom 25 min, 5 min pri 100%B, 5 min pri 20%B (A je 90% voda/10% ACN/0.1% TFA; B je 90% ACN/10% voda/0.1% TFA). ACN je uklonjen od frakcija na rotovapu, i vodena porcija je liofilizovana. Analitički podaci su podržali prijavu (6S,18S)-1-((7S,13R,16S,19S,22S,25S,28S,31S,33aS,35R,39S,42S,44aS,50S,52aR)-31-((1H-indol-3-il)metil)-50-(2-amino-2-oksoetil)-28-(2-aminoetil)-42-(aminometil)-19,22-dibutil-25-((1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)metil)-35-hidroksi-7-(4-hidroksibenzil)-16,39-diizobutil-20,23-dimetil-6,9,15,18,21,24,27,30,33,38,41,44,49,52-tetradekaoksopentakontahidro-1H-pirido[1,2-g]dipirolo[1,2-m:1',2'-v][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43]tiatetradekaazaciklopentatetrakontin-13-il)-1,4,8,14,20-pentaokso-12-oksa-2,5,9,15,19-pentaazaheksatriakontan-6,18,36-trikarboksilne kiseline, 2 TFA (12.14 mg, 3.97 µmol, 3.97 % prinos). Analiza Uslov 13A: rt 10.01 min. Analiza Uslov 13B: rt 8.70 min.; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1263.6713 (M+2H) Nađeno: 1263.6668 (M+2H).

Priprema primera 13160

[1256]

[1257] Primer 13160 je sintetisan na .1 mmol skali prema opštim postupcima iznad, uključujući Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline. Podvučeni koraci su koristili dvostruko-kuplujući postupak, a ostaci pisani kurzivom su kuplovani 30 min pojedinačnim kuplovanjem. ClAc-Tyr-Pip-Asn-Pro-Dap-Leu-Hyp-Trp-Dab-[(S)-2-amino-3-(1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)propanska kiselina]-[N-Me]Nle-[N-Me]Nle-Leu-Cys-Gly-[3-aminopropanska kiselina]-Asp(OtBu)-[Modifikovana smola 13B]. Nakon deprotekcije koja prati Globalni deprotekcioni postupak B i ciklizacije prema Metodi B ciklizacije, jedinjenje je prečišćeno kao što sledi: Ostatak je podeljen i višestruka ubrizgavanja su načinjena na 30 X 150 XSelect CSH Prep C185 um OBD koloni, 40 mL/min, 20 do 65% B tokom 25 min, 5 min pri 100%B, 5 min pri 20%B (A je 90% voda/10% ACN/0.1% TFA; B je 90% ACN/10% voda/0.1% TFA). ACN je uklonjen od frakcija na rotovapu, i vodena porcija je liofilizovana. Analitički podaci su podržali prijavu (6S,16S)-1-((7S,13R,16S,19S,22S,25S,28S,31S,33aS,35R,39S,42S,44aS,50S,52aR)-31-((1H-indol-3-il)metil)-50-(2-amino-2-oksoetil)-28-(2-aminoetil)-42-(aminometil)-19,22-dibutil-25-((1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)metil)-35-hidroksi-7-(4-hidroksibenzil)-16,39-diizobutil-20,23-dimetil-6,9,15,18,21,24,27,30,33,38,41,44,49,52-tetradekaoksopentakontahidro-1H-pirido[1,2-g]dipirolo[1,2-m:1',2'-v][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43]tiatetradekaazaciklopentatetrakontin-13-il)-1,4,8,12,18-pentaokso-2,5,9,13,17-pentaazatetratriakontan-6,16,34-trikarboksilne kiseline, 2 TFA (11.56 mg, 4.03 µmol). Analiza Uslov 13A: rt 10.00 min. Analiza Uslov 13B: rt 8.69 min.; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1248.6660 (M+2H) Nađeno: 1248.6622 (M+2H).

Priprema primera 13161

[1258]

[1259] Primer 13161 je sintetisan na .1 mmol skali prema opštim postupcima iznad, uključujući Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline. Podvučeni koraci su koristili dvostruko-kuplujući postupak, a ostaci pisani kurzivom su kuplovani 30 min pojedinačnim kuplovanjem. ClAc-Tyr-Pip-Asn-Pro-Dap-Leu-Hyp-Trp-Dab-[(S)-2-amino-3-(1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)propanska kiselina]-[N-Me]Nle-[N-Me]Nle-Leu-Cys-Gly-[3-(2-aminoetoksi)propanska kiselina]-Asp(OtBu)-[Modifikovana smola 13B]. Nakon deprotekcije koja prati Globalni deprotekcioni postupak B i ciklizacije prema Metodi B ciklizacije, jedinjenje je prečišćeno kao što sledi: Ostatak je podeljen i višestruka ubrizgavanja su načinjena na 30 X 150 XSelect CSH Prep C185 um OBD koloni, 40 mL/min, 20 do 65% B tokom 25 min, 5 min pri 100%B, 5 min pri 20%B (A je 90% voda/10% ACN/0.1% TFA; B je 90% ACN/10% voda/0.1% TFA). ACN je uklonjen od frakcija na rotovap-u, i vodena porcija je liofilizovana. Analitički podaci su podržali prijavu (6S,19S)-1-((7S,13R,16S,19S,22S,25S,28S,31S,33aS,35R,39S,42S,44aS,50S,52aR)-31-((1H-indol-3-il)metil)-50-(2-amino-2-oksoetil)-28-(2-aminoetil)-42-(aminometil)-19,22-dibutil-25-((1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)metil)-35-hidroksi-7-(4-hidroksibenzil)-16,39-diizobutil-20,23-dimetil-6,9,15,18,21,24,27,30,33,38,41,44,49,52-tetradekaoksopentakontahidro-1H-pirido[1,2-g]dipirolo[1,2-m:1',2'-v][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43]tiatetradekaazaciklopentatetrakontin-13-il)-1,4,8,15,21-pentaokso-12-oksa-2,5,9,16,20-pentaazaheptatriakontan-6,19,37-trikarboksilne kiseline, 2 TFA (22.02 mg, 7.55 µmol, 7.55 % prinos). Analiza Uslov 13A: rt 10.01 min. Analiza Uslov 13B: rt 8.69 min.; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1270.6791 (M+2H) Nađeno: 1270.6751 (M+2H).

Priprema primera 13162

[1260]

[1261] Primer 13162 je sintetisan na .1 mmol skali prema opštim postupcima iznad, uključujući Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline. Podvučeni koraci su koristili dvostruko-kuplujući postupak, a ostaci pisani kurzivom su kuplovani 30 min pojedinačnim kuplovanjem. ClAc-Tyr-Pip-Asn-Pro-Dap-Leu-Hyp-Trp-Dab-[(S)-2-amino-3-(1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)propanska kiselina]-[N-Me]Nle-[N-Me]Nle-Leu-Cys-Gly-[4-aminobutanska kiselina]-Asp(OtBu)-[Modifikovana smola 13B]. Nakon deprotekcije koja prati Globalni deprotekcioni postupak B i ciklizacije prema Metodi B ciklizacije, jedinjenje je prečišćeno kao što sledi: Ostatak je podeljen i višestruka ubrizgavanja su načinjena na 30 X 150 XSelect CSH Prep C185 um OBD koloni, 40 mL/min, 20 do 65% B tokom 25 min, 5 min pri 100%B, 5 min pri 20%B (A je 90% voda/10% ACN/0.1% TFA; B je 90% ACN/10% voda/0.1% TFA). ACN je uklonjen od frakcija na rotovapu, i vodena porcija je liofilizovana. Analitički podaci su podržali prijavu (6S,17S)-1-((7S,13R,16S,19S,22S,25S,28S,31S,33aS,35R,39S,42S,44aS,50S,52aR)-31-((1H-indol-3-il)metil)-50-(2-amino-2-oksoetil)-28-(2-aminoetil)-42-(aminometil)-19,22-dibutil-25-((1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)metil)-35-hidroksi-7-(4-hidroksibenzil)-16,39-diizobutil-20,23 -dimetil-6,9,15,18,21,24,27,30,33,38,41,44,49,52-tetradekaoksopentakontahidro-1H-pirido[1,2-g]dipirolo[1,2-m:1',2'-v][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43]tiatetradekaazaciklopentatetrakontin-13-il)-1,4,8,13,19-pentaokso-2,5,9,14,18-pentaazapentatriakontan-6,17,35-trikarboksilne kiseline, 2 TFA (17.91 mg, 6.08 µmol, 6.08 % prinos). Analiza Uslov 13A: rt 10.07 min. Analiza Uslov 13B: rt 8.73 min.; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1255.6738 (M+2H) Nađeno: 1255.6692 (M+2H).

Priprema primera 13163

[1262]

[1263] Primer 13163 je sintetisan na .1 mmol skali prema opštim postupcima iznad, uključujući Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline. Podvučeni koraci su koristili dvostruko-kuplujući postupak, a ostaci pisani kurzivom su kuplovani 30 min pojedinačnim kuplovanjem. ClAc-Tyr-Pip-Asn-Pro-Dap-Leu-Hyp-Trp-Dab-[(S)-2-amino-3-(1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)propanska kiselina]-[N-Me]Nle-[N-Me]Nle-Leu-Cys-Gly-[3-(2-(2-aminoetoksi)etoksi)propanska kiselina]-Asp(OtBu)-[Modifikovana smola 13B]. Nakon deprotekcije koja prati Globalni deprotekcioni postupak B i ciklizacije prema Metodi B ciklizacije, jedinjenje je prečišćeno kao što sledi: Ostatak je podeljen i višestruka ubrizgavanja su načinjena na 30 X 150 XSelect CSH Prep C185 um OBD koloni, 40 mL/min, 20 do 65% B tokom 25 min, 5 min pri 100%B, 5 min pri 20%B (A je 90% voda/10% ACN/0.1% TFA; B je 90% ACN/10% voda/0.1% TFA). ACN je uklonjen od frakcija na rotovap-u, i vodena porcija je liofilizovana. Analitički podaci su podržali prijavu (6S,22S)-1-((7S,13R,16S,19S,22S,25S,28S,31S,33aS,35R,39S,42S,44aS,50S,52aR)-31-((1H-indol-3-il)metil)-50-(2-amino-2-oksoetil)-28-(2-aminoetil)-42-(aminometil)-19,22-dibutil-25-((1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)metil)-35-hidroksi-7-(4-hidroksibenzil)-16,39-diizobutil-20,23-dimetil-6,9,15,18,21,24,27,30,33,38,41,44,49,52-tetradekaoksopentakontahidro-1H-pirido[1,2-g]dipirolo[1,2-m:1',2'-v][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43]tiatetradekaazaciklopentatetrakontin-13-il)-1,4,8,18,24-pentaokso-12,15-dioxa-2,5,9,19,23-pentaazatetrakontan-6,22,40-trikarboksilne kiseline, 2 TFA (18.29 mg, 5.85 µmol, 5.85 % prinos). Analiza Uslov 13A: rt 10.00 min. Analiza Uslov 13B: rt 8.68 min.; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1292.6713 (M+2H) Nađeno: 1292.6887 (M+2H).

Priprema primera 13164

[1264]

[1265] Primer 13164 je sintetisan na .1 mmol skali prema opštim postupcima iznad, uključujući Postupak A kuplovanja hlorosirćetne kiseline. Podvučeni koraci su koristili dvostruko-kuplujući postupak, a ostaci pisani kurzivom su kuplovani 30 min pojedinačnim kuplovanjem. ClAc-Tyr-Pip-Asn-Pro-Dap-Leu-Hyp-Trp-Dab-[(S)-2-amino-3-(1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)propanska kiselina]-[N-Me]Nle-[N-Me]Nle-Leu-Cys-Gly-[5-aminopentanska kiselina]-Asp(OtBu)-[Modifikovana smola 13B]. Nakon deprotekcije koja prati Globalni deprotekcioni postupak B i ciklizacije prema Metodi B ciklizacije, jedinjenje je prečišćeno kao što sledi: Ostatak je podeljen i višestruka ubrizgavanja su načinjena na 30 X 150 XSelect CSH Prep C185 um OBD koloni, 40 mL/min, 20 do 65% B tokom 25 min, 5 min pri 100%B, 5 min pri 20%B (A je 90% voda/10% ACN/0.1% TFA; B je 90% ACN/10% voda/0.1% TFA). ACN je uklonjen od frakcija na rotovapu, i vodena porcija je liofilizovana. Analitički podaci su podržali prijavu (6S,18S)-1-((7S,13R,16S,19S,22S,25S,28S,31S,33aS,35R,39S,42S,44aS,50S,52aR)-31-((1H-indol-3-il)metil)-50-(2-amino-2-oksoetil)-28-(2-aminoetil)-42-(aminometil)-19,22-dibutil-25-((1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)metil)-35-hidroksi-7-(4-hidroksibenzil)-16,39-diizobutil-20,23-dimetil-6,9,15,18,21,24,27,30,33,38,41,44,49,52-tetradekaoksopentakontahidro-1H-pirido[1,2-g]dipirolo[1,2-m:1',2'-v][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43]tiatetradekaazaciklopentatetrakontin-13-il)-1,4,8,14,20-pentaokso-2,5,9,15,19-pentaazaheksatriakontan-6,18,36-trikarboksilne kiseline, 2 TFA (10.63 mg, 3.48 µmol, 3.48 % prinos). Analiza Uslov 13A: rt 10.06 min. Analiza Uslov 13B: rt 8.73 min.; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1262.6816 (M+2H) Nađeno: 1262.6773 (M+2H).

Priprema INT-1400A

[1266]

[1267] Sledeći peptid je sintetisan na a .2 mmol skali prema postupcima iznad. Podvučeni koraci su koristili dvostruko-kuplujući postupak. ClAc-Tyr-mAla-Asp-Pro-His-Lys-Hyp-Trp-Lys-TrpmNle-mNle-Glu-Cys-Gly-[(S)-propargilglicin]-Gly. Nakon deprotekcije i ciklizacije u skladu sa postupcima iznad, jedinjenje je prečišćeno kao što sledi: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 15-55% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 97.7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.39 min; ESI-MS(+) m/z 1046.9 (M 2H), najzastupljeniji jon; Analiza Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.05 min; ESI-MS(+) m/z 1046.8 (M 2H), najzastupljeniji jon; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1046.5091 (M+2H)Nađeno: 1046.5058 (M+2H).

Priprema INT-1400B

[1268]

[1269] Sledeći peptid je sintetisan na .2 mmol skali prema postupcima iznad. Podvučeni koraci su koristili dvostruko-kuplujući postupak. ClAc-Tyr-mAla-Asp-Pro-His-Lys-Hyp-Trp-Lys-TrpmNle-mNle-Glu-Cys-Gly-[(S)-propargilglicin]-Asp; Nakon deprotekcije i ciklizacije u skladu sa postupcima iznad, jedinjenje je prečišćeno kao što sledi: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 15-55% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 59.5 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.69 min; ESI-MS(+) m/z 1076.2 (M 2H), najzastupljeniji jon; Analiza Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.91 min; ESI-MS(+) m/z 1076.1 (M 2H), najzastupljeniji jon; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1075.5118 (M+2H) Nađeno: 1075.5094 (M+2H).

Priprema INT-1400C

[1271] Sledeći peptid je sintetisan na . 1 mmol skali prema postupcima iznad. Podvučeni koraci su koristili dvostruko-kuplujući postupak. ClAc-Tyr-mAla-Asp-Pro-His-Gln-Hyp-Ttp-Ser-TrpmNle-mNle-Glu-Cys-Gly-[(S)-propargilglicin]-Gly. Nakon deprotekcije i ciklizacije u skladu sa postupcima iznad, jedinjenje je prečišćeno kao što sledi: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 10-50% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije.

Prinos proizvoda je bio 20.2 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.40 min; ESI-MS(+) m/z 1026.5 (M 2H), najzastupljeniji jon; Analiza Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.79 min; ESI-MS(+) m/z 1026.5 (M 2H), najzastupljeniji jon; ESI-HRMS(+) m/z:

Izračunato: 1025.9594 (M+2H) Nađeno: 1025.9591 (M+2H).

Priprema INT-1400D

[1273] Sledeći peptid je sintetisan na .2 mmol skali prema postupcima iznad. Podvučeni koraci su koristili dvostruko-kuplujući postupak. ClAc-Tyr-mAla-Asp-Pro-His-Lys-Hyp-Trp-Lys-"Trp"-mNle-mNle-Glu-Cys-Gly-[(S)-propargilglicin]-Gly. Nakon deprotekcije i ciklizacije u skladu sa postupcima iznad, jedinjenje je prečišćeno kao što sledi: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 35-75% B tokom 30 minuta, zatim 6-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 57.9 mgs, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.16 min; ESI-MS(-) m/z 1076.6 (M 2H), najzastupljeniji jon; Analiza Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.23 min; ESI-MS(+) m/z 1076.3 (M 2H), najzastupljeniji jon; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1075.5118 (M+2H)Nađeno: 1075.5086 (M+2H).

Priprema INT-1400E

[1274]

[1275] Sledeći peptid je sintetisan na .2 mmol skali prema postupcima iznad. Podvučeni koraci su koristili dvostruko-kuplujući postupak. ClAc-Tyr-mAla-Asp-Pro-His-Lys-Hyp-Trp-Lys-"Trp"-mNle-mNle-Glu-Cys-Gly-[(S)-propargilglicin]-Asp. Nakon deprotekcije i ciklizacije u skladu sa postupcima iznad, jedinjenje je prečišćeno kao što sledi: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 30-75% B tokom 30 minuta, zatim 6-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 66.6 mgs, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 94%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.12 min; ESI-MS(-) m/z 1105.5 (M 2H), najzastupljeniji jon; Analiza Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.19 min; ESI-MS(+) m/z 11055.4 (M 2H), najzastupljeniji jon; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1104.5146 (M+2H). Nađeno: 1104.5115 (M+2H).

Priprema INT-1400F

[1276]

[1277] Sledeći peptid je sintetisan na .2 mmol skali prema postupcima iznad. Podvučeni koraci su koristili dvostruko-kuplujući postupak. ClAc-Tyr-mAla-Asp-Pro-His-Lys-Hyp-Trp-Lys-TrpmNle-mNle-Glu-Cys-Gly-[(S)-propargilglicin]. Nakon deprotekcije i ciklizacije u skladu sa postupcima iznad, jedinjenje je prečišćeno kao što sledi: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 35-75% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 87.3 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.39 min; ESI-MS(+) m/z 1019.0 (M 2H), najzastupljeniji jon; Analiza Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.53 min; ESI-MS(+) m/z 1018.9 (M 2H), najzastupljeniji jon; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1017.9984 (M+2H)Nađeno: 1017.9944 (M+2H).

Priprema INT-1400G

[1278]

[1279] Sledeći peptid je sintetisan na .2 mmol skali prema postupcima iznad. Podvučeni koraci su koristili dvostruko-kuplujući postupak. ClAc-Tyr-mAla-Asn-Pro-Dap-Leu-Hyp-Trp-Ser-TrpmNle-mNle-Arg-Cys-Gly-[(S)-propargilglicin]. Nakon deprotekcije i ciklizacije u skladu sa postupcima iznad, jedinjenje je prečišćeno kao što sledi: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 35-80% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 44.2 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.62 min; ESI-MS(+) m/z 977.7 (M 2H), najzastupljeniji jon; Analiza Uslov B: Vreme zadržavanja = 3.16 min; ESI-MS(+) m/z 977.7 (M 2H), najzastupljeniji jon; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 977.4933 (M+2H) Nađeno: 977.4906 (M+2H).

Priprema INT-1400H

[1280]

[1281] Sledeći peptid je sintetisan na .2 mmol skali prema postupcima iznad. Podvučeni koraci su koristili dvostruko-kuplujući postupak. ClAc-Tyr-mAla-Asp-Pro-His-Gln-Hyp-Trp-Ser-TrpmNle-mNle-Glu-Cys-Gly-[(S)-propargilglicin]; Nakon deprotekcije i ciklizacije u skladu sa postupcima iznad, jedinjenje je prečišćeno kao što sledi: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 5-45% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 23.9 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.45 min; ESI-MS(+) m/z 997.5 (M 2H), najzastupljeniji jon; Analiza Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.87 min; ESI-MS(+) m/z 997.9 (M 2H), najzastupljeniji jon; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 997.4487 (M+2H)Nađeno: 997.4486 (M+2H).

Priprema INT-14001

[1282]

[1283] Sledeći peptid je sintetisan na . 1 mmol skali prema postupcima iznad. Podvučeni koraci su koristili dvostruko-kuplujući postupak. ClAc-Tyr-mAla-Asn-Pro-Dap-Leu-Hyp-Trp-Ser-[(S)-2-amino-3-(1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)propanska kiselina]-mNle-mNle-E-Cys-Gly-[(S)-propargilglicin]. Nakon deprotekcije i ciklizacije u skladu sa postupcima iznad, jedinjenje je prečišćeno kao što sledi: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 20-40% B tokom 20 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 42.1 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 98%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.26 min; ESI-MS(+) m/z 993.3 (M 2H), najzastupljeniji jon; Analiza Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.68 min; ESI-MS(+) m/z 993.3 (M 2H), najzastupljeniji jon; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 992.9667 (M+2H) Nađeno: 992.9660 (M+2H).

Priprema INT-1400J

[1284]

[1285] Sledeći peptid je sintetisan na .2 mmol skali prema postupcima iznad. Podvučeni koraci su koristili dvostruko-kuplujući postupak. ClAc-Tyr-mAla-Asp-Pro-His-Lys-Hyp-Trp-Lys-[(S)-2-amino-3-(1-(karboksimetil)-1H-indol-3-il)propanska kiselina]-mNle-mNle-Glu-Cys-Gly-[(S)-propargilglicin]; Nakon deprotekcije i ciklizacije u skladu sa postupcima iznad, jedinjenje je prečišćeno kao što sledi: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 0-40% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 78.3 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.25 min; ESI-MS(+) m/z 1047.6 (M 2H), najzastupljeniji jon

Analiza Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.65 min; ESI-MS(+) m/z 1047.4 (M 2H), najzastupljeniji jon ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1047.0011 (M+2H) Nađeno: 1046.9960 (M+2H).

Priprema INT-1400K

[1286]

[1287] Sledeći peptid je sintetisan na a .1 mmol skali prema postupcima iznad. Podvučeni koraci su koristili dvostruko-kuplujući postupak. ClAc-F3Phe-mPhe-mNle-dPro-Asp-Val-mPhe-OrndPro-Trp-Tyr-Leu-Cys-Gly-[(S)-propargilglicin]. Nakon deprotekcije i ciklizacije u skladu sa postupcima iznad, jedinjenje je prečišćeno kao što sledi: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 25-65% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije.

Prinos proizvoda je bio 88.5 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 95%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.87 min; ESI-MS(+) m/z 975.7 (M 2H), najzastupljeniji jon. Analiza Uslov B: Vreme zadržavanja = 3.25 min; ESI-MS(+) m/z 975.1 (M 2H), najzastupljeniji jon; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 974.4593 (M+2H) Nađeno: 974.4571 (M+2H).

Priprema INT-1400L

[1288]

[1289] Sledeći peptid je sintetisan na .1 mmol skali prema postupcima iznad. Podvučeni koraci su koristili dvostruko-kuplujući postupak. ClAc-F3Phe-mPhe-mNle-dHyp-Asp-Val-mPhe-AspdPro-Trp-Tyr-Leu-Cys-Gly-[(S)-propargilglicin]; Nakon deprotekcije i ciklizacije u skladu sa postupcima iznad, jedinjenje je prečišćeno kao što sledi: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 50-90% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 70.7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.47 min; ESI-MS(+) m/z 983.5 (M 2H), najzastupljeniji jon; Analiza Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.74 min; ESI-MS(+) m/z 983.7 (M 2H), najzastupljeniji jon; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 982.9306 (M+2H) Nađeno: 982.9300 (M+2H).

Analitički podaci:

[1290] Masena spektrometrija: "ESI-MS(+)" označava elektrosprej jonizacionu masenu spektrometriju izvedenu u pozitivnom jonskom modu; "ESI-MS(-)" označava elektrosprej jonizacionu masenu spektrometriju izvedenu u negativnom jonskom modu; "ESI-HRMS(+)" označava elektrosprej jonizacionu masenu spektrometriju visoke rezolucije izvedenu u pozitivnom jonskom modu; "ESI-HRMS(-)" označava elektrosprej jonizacionu masenu spektrometriju visoke rezolucije izvedenu u negativnom jonskom modu. Detektovane mase su prijavljene praćenjem "m/z" jediničnog označavanja. Jedinjenja sa tačnim masama većim od 1000 su često detektovane kao dvostruko naelektrisani ili trostruko naelektrisani joni.

Analiza Uslov A:

[1291] Kolona: Waters BEH C18, 2.0 x 50 mm, 1.7-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0%B, 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: UV pri 220 nm.

Analiza Uslov B:

[1292] Kolona: Waters BEH C18, 2.0 x 50 mm, 1.7-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 metanol:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 metanol:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0%B, 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 0.5 mL/min; Detekcija: UV pri 220 nm.

Analiza Uslov C:

[1293] Kolona: Waters Aquity UPLC BEH C18, 2.1 x 50 mm, 1.7-µm čestice; Mobilna faza A: 100% Voda:0.05% TFA; Mobilna faza B: 100% Acetonitril:0.05%TFA; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 2-98% B tokom 1.5 minuta, zatim 0.5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV pri 220 nm.

Analiza Uslov D:

[1294] Kolona: PHENOMENEX-LUNA 2.0 X 30mm 3um; Mobilna faza A: 90% Voda - 10% Metanol-0.1% TFA; Mobilna faza B: 10% Voda -90% Metanol-0.1% TFA; Gradijent: 0-100% B tokom 2 minuta, zatim 1 do 4 minuta zadržavanje pri 100% B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: UV pri 220 nm.

Analiza Uslov E:

[1295] Kolona: Xbridge Phenyl, 3.0 x 150 mm, 3.5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 5-100% B tokom 15 minuta; Protok: 0.5 mL/min; Detekcija: UV pri 220 nm.

Analiza Uslov F:

[1296] Kolona: XBridge C18, 3.0 x 150 mm, 3.5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 10-100% B tokom 30 minuta; Protok: 0.5 mL/min; Detekcija: UV pri 220 nm.

Analiza Uslov G:

[1297] Kolona: Waters CSH C18, 2.0 x 50 mm, 1.7-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0%B, 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: UV pri 220 nm.

Analiza Uslov H:

[1298] Kolona: Xbridge C18, 3.0 x 150 mm, 3.5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 10-100% B tokom 18 minuta; Protok: 0.5 mL/min; Detekcija: UV pri 220 nm.

Analiza Uslov I:

[1299] Kolona: XSelectCSH C18, 3.0 x 150 mm, 3.5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 10-100% B tokom 15 minuta; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV pri 220 nm.

Analiza Uslov J:

[1300] Kolona: Zorbax Bonus RP, 3.0 x 150 mm, 3.5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 10-100% B tokom 15 minuta; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV pri 220 nm.

Analiza Uslov K:

[1301] Kolona: Waters Aquity UPLC BEH C18, 2.1 x 50 mm, 1.7-µm čestice; Mobilna faza A: 100% Voda:0.05% TFA; Mobilna faza B: 100% Acetonitril:0.05%TFA; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 2-98% B tokom 3.0 minuta, zatim 0.5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV pri 220 nm.

Priprema 14051

[1302]

[1303] Intermedijer 1400A (20 mg, 9.56 µmol) i (R)-2,5,7,8-tetrametil-2-((4R,8R)-4,8,12-trimetiltridecil)hroman-6-il 4-((5-azidopentil)amino)-4-oksobutanoat (18.38 mg, 0.029 mmol) su reagovali u opštem postupku iznad za formiranje triazola da se dobije sirovi proizvod. Sirovi materijal je prečišćen putem Prep-HPLC (Rastvarač A = 10% MeOH - 90% H2O - 0.1% TFA, Rastvarač B = 90% MeOH - 10% H2O - 0.1% TFA. Kolona: PHENOMENEX LUNA 30 x 100mm, S10, Brzina protoka: 40 ml / min, 55 - 100% B, 25 min, zatim 6-minutno zadržavanje pri 100% B). Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem brze vakuumske evaporacije. Prinos proizvoda je bio 7.22 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 90%.Analiza Uslov C: Vreme zadržavanja = 1.64 min; ESI-MS(+) m/z 1367.8 (M 2H), najzastupljeniji jon. Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 2.48 min; ESI-MS(+) m/z 1367.4 (M 2H), najzastupljeniji jon.

Priprema 14052

[1304]

[1305] Intermedijer 1400A (20 mg, 9.56 µmol) i 23-azido-3,6,9,12,15,18,21-heptaoksatrikozil ((R)-2,5,7,8-tetrametil-2-((4R,8R)-4,8,12-trimetiltridecil)hroman-6-il) sukcinat (26.0 mg, 0.029 mmol) su reagovali u opštem postupku iznad za formiranje triazola da se dobije sirovi proizvod. Sirovi materijal je prečišćen putem Prep-HPLC (Rastvarač A = 10% MeOH - 90% H2O - 0.1% TFA, Rastvarač B = 90% MeOH - 10% H2O - 0.1% TFA. Kolona: PHENOMENEX LUNA 30 x 100mm, S10, Brzina protoka: 40 ml / min, 55 - 100% B, 25 min, zatim 10-minutno zadržavanje pri 100% B). Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem brze vakuumske evaporacije. Prinos proizvoda je bio 11 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 90%. Analiza Uslov C: Vreme zadržavanja = 1.66 min; ESIMS(+) m/z 1501.5 (M 2H), najzastupljeniji jon; Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 2.63 min; ESI-MS(+) m/z 1001.1 (M 3H), najzastupljeniji jon.

Priprema 14053

[1306]

[1307] Intermedijer 1400A (20 mg, 9.56 µmol) i 17-azido-3,6,9,12,15-pentaoksaheptadecil ((R)-2,5,7,8-tetrametil-2-((4R,8R)-4,8,12-trimetiltridecil)hroman-6-il) sukcinat (23.52 mg, 0.029 mmol) su reagovali u opštem postupku iznad za formiranje triazola da se dobije sirovi proizvod. Sirovi materijal je prečišćen putem Prep-HPLC (Rastvarač A = 10% MeOH - 90% H2O - 0.1% TFA, Rastvarač B = 90% MeOH - 10% H2O - 0.1% TFA. Kolona: PHENOMENEX LUNA 30 x 100mm, S10, Brzina protoka: 40 ml / min, 55 - 100% B, 25 min, zatim 7-minutno zadržavanje pri 100% B). Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem brze vakuumske evaporacije. Prinos proizvoda je bio 5.3 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 90%. Analiza Uslov C: Vreme zadržavanja = 1.66 min; ESI-MS(+) m/z 1457.4 (M 2H), najzastupljeniji jon; Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 3.22 min; ESI-MS(+) m/z 971.8 (M 3H), najzastupljeniji jon.

Priprema 14054

[1309] Intermedijer 1400C (20 mg, 9.75 µmol) i (R)-2,5,7,8-tetrametil-2-((4R,8R)-4,8,12-trimetiltridecil)hroman-6-il 4-((5-azidopentil)amino)-4-oksobutanoat (18.38 mg, 0.029 mmol) su reagovali u opštem postupku iznad za formiranje triazola da se dobije sirovi proizvod. Sirovi materijal je prečišćen putem Prep-HPLC (Rastvarač A = 10% MeOH - 90% H2O - 0.1% TFA, Rastvarač B = 90% MeOH - 10% H2O - 0.1% TFA. Kolona: PHENOMENEX LUNA 30 x 100mm, S10, Brzina protoka: 40 ml / min, 55 - 100% B, 25 min, zatim 10-minutno zadržavanje pri 100% B). Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem brze vakuumske evaporacije. Prinos proizvoda je bio 8.2 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 90%. Analiza Uslov C: Vreme zadržavanja = 1.76 min; ESI-MS(+) m/z 1347.3 (M 2H), najzastupljeniji jon. Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 2.79 min; ESI-MS(+) m/z 898.3 (M 3H), najzastupljeniji jon.

Priprema 14055

[1310]

[1311] Intermedijer 1400C (20 mg, 9.75 µmol) i 23-azido-3,6,9,12,15,18,21-heptaoksatrikozil ((R)-2,5,7,8-tetrametil-2-((4R,8R)-4,8,12-trimetiltridecil)hroman-6-il) sukcinat (26.6 mg, 0.029 mmol) su reagovali u opštem postupku iznad za formiranje triazola da se dobije sirovi proizvod. Sirovi materijal je prečišćen putem Prep-HPLC (Rastvarač A = 10% MeOH - 90% H2O - 0.1% TFA, Rastvarač B = 90% MeOH - 10% H2O - 0.1% TFA. Kolona: PHENOMENEX LUNA 30 x 100mm, S10, Brzina protoka: 40 ml / min, 55 - 100% B, 25 min, zatim 15-minutno zadržavanje pri 100% B). Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem brze vakuumske evaporacije. Prinos proizvoda je bio 9.0 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 90%. Analiza Uslov C: Vreme zadržavanja = 1.82 min; ESI-MS(+) m/z 1480.9 (M 2H), najzastupljeniji jon; Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 2.99 min; ESI-MS(+) m/z 1480.9 (M 2H), najzastupljeniji jon.

Priprema 14056

[1312]

[1313] Intermedijer 1400B (20 mg, 9.30 µmol) i (R)-2,5,7,8-tetrametil-2-((4R,8R)-4,8,12-trimetiltridecil)hroman-6-il 4-((5-azidopentil)amino)-4-oksobutanoat (17.88 mg, 0.028 mmol) su reagovali u opštem postupku iznad za formiranje triazola da se dobije sirovi proizvod. Sirovi materijal je prečišćen putem Prep-HPLC (Rastvarač A = 10% MeOH - 90% H2O - 0.1% TFA, Rastvarač B = 90% MeOH - 10% H2O - 0.1% TFA. Kolona: PHENOMENEX LUNA 30 x 100mm, S10, Brzina protoka: 40 ml / min, 55 - 100% B, 25 min, zatim 6-minutno zadržavanje pri 100% B). Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem brze vakuumske evaporacije. Prinos proizvoda je bio 4.3 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 90%. Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 2.42 min; ESI-MS(+) m/z 931.4 (M 3H), najzastupljeniji jon.

Priprema primera 14057

[1314]

[1315] Intermedijer 1400B (20 mg, 9.30 µmol) i 23-azido-3,6,9,12,15,18,21-heptaoksatrikozil ((R)-2,5,7,8-tetrametil-2-((4R,8R)-4,8,12-trimetiltridecil)hroman-6-il) sukcinat (25.3 mg, 0.028 mmol) su reagovali u opštem postupku iznad za formiranje triazola da se dobije sirovi proizvod. Sirovi materijal je prečišćen putem Prep-HPLC (Rastvarač A = 10% MeOH - 90% H2O - 0.1% TFA, Rastvarač B = 90% MeOH - 10% H2O - 0.1% TFA. Kolona: PHENOMENEX LUNA 30 x 100mm, S10, Brzina protoka: 40 ml / min, 55 - 100% B, 25 min, zatim 10-minutno zadržavanje pri 100% B). Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem brze vakuumske evaporacije

Prinos proizvoda je bio 4.3 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 90%. Analiza Uslov C: Vreme zadržavanja = 1.44 min; ESI-MS(+) m/z 929.3 (M 2H); Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 2.66 min; ESI-MS(+) m/z 929.8 (M 2H), najzastupljeniji jon.

Priprema primera 14058

[1316]

[1317] Intermedijer 1300A (20 mg, 10.15 µmol) i (R)-2,5,7,8-tetrametil-2-((4R,8R)-4,8,12-trimetiltridecil)hroman-6-il 4-((5-azidopentil)amino)-4-oksobutanoat (19.51 mg, 0.030 mmol) su reagovali u opštem postupku iznad za formiranje triazola da se dobije sirovi proizvod. Sirovi materijal je prečišćen putem Prep-HPLC (Rastvarač A = 10% MeOH - 90% H2O - 0.1% TFA, Rastvarač B = 90% MeOH - 10% H2O - 0.1% TFA. Kolona: PHENOMENEX LUNA 30 x 100mm, S10, Brzina protoka: 40 ml / min, 55 - 100% B, 25 min, zatim 10-minutno zadržavanje pri 100% B). Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem brze vakuumske evaporacije. Prinos proizvoda je bio 1.5 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 90%. Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 2.77 min; ESI-MS(+) m/z 1307.3 (M 2H).

Priprema primera 14059

[1318]

[1319] Intermedijer 1400A (25 mg, 0.012 mmol) i (S)-4-azido-2-palmitamidobutanska kiselina (13.71 mg, 0.036 mmol) su reagovali u opštem postupku iznad za formiranje triazola da se dobije sirovi proizvod. Sirovi materijal je prečišćen putem Prep-HPLC (Rastvarač A = 10% MeOH - 90% H2O - 0.1% TFA, Rastvarač B = 90% MeOH - 10% H2O - 0.1% TFA. Kolona: PHENOMENEX LUNA 30 x 100mm, S10, Brzina protoka: 40 ml / min, 55 - 100% B, 30 min). Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem brze vakuumske evaporacije. Prinos proizvoda je bio 1.5 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 90%. Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 2.32 min; ESI-MS(+) m/z 1238.8 (M 2H).

Priprema primera 14060

[1320]

[1321] Intermedijer 1400A (20 mg, 9.56 µmol) i 2-(2-(2-(2-azidoetoksi)etoksi)etoksi)etil((R)-2,5,7,8-tetrametil-2-((4R,8R)-4,8,12-trimetiltridecil)hroman-6-il) sukcinat (20.99 mg, 0.029 mmol), su reagovali u opštem postupku iznad za formiranje triazola da se dobije sirovi proizvod. Sirovi materijal je prečišćen putem Prep-HPLC (Rastvarač A = 10% MeOH - 90% H2O - 0.1% TFA, Rastvarač B = 90% MeOH - 10% H2O - 0.1% TFA. Kolona: PHENOMENEX LUNA 30 x 100mm, S10, Brzina protoka: 40 ml / min, 55 - 100% B, 30 min, zatim 3-minutno zadržavanje pri 100% B). Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem brze vakuumske evaporacije. Prinos proizvoda je bio 1.5 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 90%.Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 2.52 min; ESI-MS(+) m/z 1413.1 (M 2H), najzastupljeniji jon.

Priprema primera 14061

[1322]

[1323] Intermedijer 1400B (25 mg, 0.012 mmol) i (S)-4-azido-2-palmitamidobutanska kiselina (13.34 mg, 0.035 mmol) su reagovali u opštem postupku iznad za formiranje triazola da se dobije sirovi proizvod. Sirovi materijal je prečišćen putem Prep-HPLC (Rastvarač A = 10% MeOH - 90% H2O - 0.1% TFA, Rastvarač B = 90% MeOH - 10% H2O - 0.1% TFA. Kolona: PHENOMENEX LUNA 30 x 100mm, S10, Brzina protoka: 40 ml / min, 55 - 100% B, 30 min). Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem brze vakuumske evaporacije Prinos proizvoda je bio 9.0 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 90%. Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 2.31 min; ESI-MS(+) m/z 1267.7 (M 2H), najzastupljeniji jon.

Priprema primera 14062

[1324]

[1325] Intermedijer 1400C (25 mg, 0.012 mmol) i (S)-4-azido-2-palmitamidobutanska kiselina (13.99 mg, 0.037 mmol) su reagovali u opštem postupku iznad za formiranje triazola da se dobije sirovi proizvod. Sirovi materijal je prečišćen putem Prep-HPLC (Rastvarač A = 10% MeOH - 90% H2O - 0.1% TFA, Rastvarač B = 90% MeOH - 10% H2O - 0.1% TFA. Kolona: PHENOMENEX LUNA 30 x 100mm, S10, Brzina protoka: 40 ml / min, 55 - 100% B, 30 min). Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem brze vakuumske evaporacije. Prinos proizvoda je bio 10.0 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 90%. Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 2.47 min; ESI-MS(+) m/z 1217.9 (M 2H), najzastupljeniji jon.

Priprema primera 14063

[1326]

[1327] Intermedijer 1400A (20 mg, 9.56 µmol) i 13-azido-2,5,8,11-tetraoksatridekan (6.69 mg, 0.029 mmol) su reagovali u opštem postupku iznad za formiranje triazola da se dobije sirovi proizvod. Sirovi materijal je prečišćen putem Prep-HPLC (Rastvarač A = 10% MeOH - 90% H2O - 0.1% TFA, Rastvarač B = 90% MeOH - 10% H2O - 0.1% TFA. Kolona: PHENOMENEX LUNA 30 x 100mm, S10, Brzina protoka: 40 ml / min, 35 - 100% B, 45 min). Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem brze vakuumske evaporacije. Prinos proizvoda je bio 9.0 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 90%. Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 1.83 min; ESI-MS(+) m/z 1163.7 (M 2H), najzastupljeniji jon.

Priprema primera 14064

[1328]

[1329] Intermedijer 1400A (25 mg, 0.012 mmol) i (S)-16-((3-azido-1-karboksipropil)amino)-16-oksoheksadekanska kiselina (14.79 mg, 0.036 mmol) su reagovali u opštem postupku iznad za formiranje triazola da se dobije sirovi proizvod. Sirovi materijal je prečišćen putem Prep-HPLC (Rastvarač A = 10% MeOH - 90% H2O - 0.1% TFA, Rastvarač B = 90% MeOH - 10% H2O -0.1% TFA. Kolona: PHENOMENEX LUNA 30 x 100mm, S10, Brzina protoka: 40 ml / min, 45 -100% B, 40 min, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B). Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem brze vakuumske evaporacije. Prinos proizvoda je bio 20.0 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 90%. Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 2.09 min; ESI-MS(+) m/z 1253.6 (M 2H).

Priprema primera 14065

[1330]

[1331] Intermedijer 1400B (25 mg, 0.012 mmol) i (S)-16-((3-azido-1-karboksipropil)amino)-16-oksoheksadekanska kiselina (14.39 mg, 0.035 mmol) su reagovali u opštem postupku iznad za formiranje triazola da se dobije sirovi proizvod. Sirovi materijal je prečišćen putem Prep-HPLC (Rastvarač A = 10% MeOH - 90% H2O - 0.1% TFA, Rastvarač B = 90% MeOH - 10% H2O -0.1% TFA. Kolona: PHENOMENEX LUNA 30 x 100mm, S10, Brzina protoka: 40 ml / min, 50 -100% B, 50 min). Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem brze vakuumske evaporacije.

Prinos proizvoda je bio 13.0 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 90%. Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 2.15 min; ESI-MS(+) m/z 1282.5 (M 2H), najzastupljeniji jon.

Priprema primera 14066

[1332]

[1333] Intermedijer 1400G (25 mg, 0.013 mmol) i (S)-16-((3-azido-1-karboksipropil)amino)-16-oksoheksadekanska kiselina (6.33 mg, 0.015 mmol) su reagovali u opštem postupku iznad za formiranje triazola da se dobije sirovi proizvod. Sirovi materijal je prečišćen putem Prep-HPLC (Rastvarač A = 10% MeOH - 90% H2O - 0.1% TFA, Rastvarač B = 90% MeOH - 10% H2O -0.1% TFA. Kolona: PHENOMENEX LUNA 30 x 100mm, S10, Brzina protoka: 40 ml/min, 50 -90% B, 60 min). Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem brze vakuumske evaporacije. Prinos proizvoda je bio 10.0 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 90%. Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 2.18 min; ESI-MS(+) m/z 1184.6 (M 2H), najzastupljeniji jon.

Priprema primera 14067

[1334]

[1335] Intermedijer 1400F (25 mg, 0.013 mmol) i (S)-16-((3-azido-1-karboksipropil)amino)-16-oksoheksadekanska kiselina (7.60 mg, 0.018 mmol) su reagovali u opštem postupku iznad za formiranje triazola da se dobije sirovi proizvod. Sirovi materijal je prečišćen putem Prep-HPLC (Rastvarač A = 10% MeOH - 90% H2O - 0.1% TFA, Rastvarač B = 90% MeOH - 10% H2O -0.1% TFA. Kolona: PHENOMENEX LUNA 30 x 100mm, S10, Brzina protoka: 40 ml / min, 55 -90% B, 60 min). Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem brze vakuumske evaporacije. Prinos proizvoda je bio 2.0 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 90%. Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 2.16 min; ESI-MS(+) m/z 1225.1 (M 2H), najzastupljeniji jon.

Priprema primera 14068

[1336]

[1337] Intermedijer 1400H (25 mg, 0.013 mmol) i (S)-16-((3-azido-1-karboksipropil)amino)-16-oksoheksadekanska kiselina (6.21 mg, 0.015 mmol) su reagovali u opštem postupku iznad za formiranje triazola da se dobije sirovi proizvod. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge Shield RP18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 20-60% B tokom 30 minuta, zatim 15-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 6.5 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza Uslov B: Vreme zadržavanja = 1.76 min; ESI-MS(+) m/z 1204.3 (M 2H), najzastupljeniji jon. ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1203.5830 (M+2H)

Nađeno: 1203.5818 (M+2H).

Priprema primera 14069

[1338]

[1339] Intermedijer 1400C (19.5 mg, 9.51 µmol) i (S)-16-((3-azido-1-karboksipropil)amino)-16-oksoheksadekanska kiselina (4.71 mg, 0.011 mmol) su reagovali u opštem postupku iznad za formiranje triazola da se dobije sirovi proizvod. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge Shield RP18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 15-55% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 5.2 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 96%. Analiza Uslov B: Vreme zadržavanja = 1.75 min; ESI-MS(+) m/z 1232.8 (M 2H), najzastupljeniji jon. ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1232.0937 (M+2H)

Nađeno: 1232.0902 (M+2H).

Priprema primera 14070

[1340]

[1341] Intermedijer 1400I (30 mg, 0.015 mmol) i (S)-16-((3-azido-1-karboksipropil)amino)-16-oksoheksadekanska kiselina (7.48 mg, 0.018 mmol) su reagovali u opštem postupku iznad za formiranje triazola da se dobije sirovi proizvod. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 35-75% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Materijal je dalje prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 10-50% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 3.9 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.43 min; ESI-MS(+) m/z 1199.4 (M 2H), najzastupljeniji jon; Analiza Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.57 min; ESI-MS(+) m/z 1199.9 (M 2H), najzastupljeniji jon. ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1199.1010 (M+2H) Nađeno: 1199.1018 (M+2H).

Priprema primera 14071

[1342]

[1343] Intermedijer 1400E (39 mg, 0.018 mmol) i (S)-16-((3-azido-1-karboksipropil)amino)-16-oksoheksadekanska kiselina (8.74 mg, 0.021 mmol) su reagovali u opštem postupku iznad za formiranje triazola da se dobije sirovi proizvod. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 35-75% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 14.4 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 97%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.32 min; ESI-MS(+) m/z 874.5 (M 3H); Analiza Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.71 min; ESI-MS(+) m/z 874.8 (M 3H); ESI-HRMS(+) m/z:

Izračunato: 1310.6489 (M+2H)Nađeno: 1310.6461 (M+2H).

Priprema primera 14072

[1344]

[1345] Intermedijer 1400J (35 mg, 0.017 mmol) i (S)-4-azido-2-palmitamidobutanska kiselina (7.68 mg, 0.020 mmol) su reagovali kao u opštem postupku formiranja triazola iznad da se dobije sirov proizvod. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 55-95% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 9.0 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 97%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.80 min; ESI-MS(+) m/z 826.1 (M 3H), najzastupljeniji jon; Analiza Uslov B: Vreme zadržavanja = 3.13 min; ESI-MS(+) m/z 1238.8 (M 2H) ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1238.1483 (M+2H) Nađeno: 1238.1484 (M+2H).

Priprema primera 14073

[1346]

[1347] Intermedijer 1400K (30 mg, 0.015 mmol) i (S)-16-((3-azido-1-karboksipropil)amino)-16-oksoheksadekanska kiselina (7.62 mg, 0.018 mmol) su reagovali kao u opštem postupku formiranja triazola iznad da se dobije sirov proizvod. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 60-100% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 12.0 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.92 min; ESI-MS(+) m/z 1181.0 (M 2H); Analiza Uslov B: Vreme zadržavanja = 3.12 min; ESI-MS(+) m/z 1181.1 (M 2H), najzastupljeniji jon; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1180.5936 (M+2H) Nađeno: 1180.5931 (M+2H).

Priprema primera 14074

[1348]

[1349] Intermedijer 1400L (30 mg, 0.015 mmol) i (S)-16-((3-azido-1-karboksipropil)amino)-16-oksoheksadekanska kiselina (7.56 mg, 0.018 mmol) su reagovali kao u opštem postupku formiranja triazola iznad da se dobije sirov proizvod. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 45-85% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 25.4 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.68 min; ESI-MS(+) m/z 1189.5 (M 2H); Analiza Uslov B: Vreme zadržavanja = 3.20 min; ESI-MS(+) m/z 1189.5 (M 2H); ESI-HRMS(+) m/z:

Izračunato: 1189.0649 (M+2H) Nađeno: 1189.0642 (M+2H).

Priprema primera 14075

[1350]

[1351] Intermedijer 1400J (40 mg, 0.019 mmol) i (S)-16-((3-azido-1-karboksipropil)amino)-16-oksoheksadekanska kiselina (9.46 mg, 0.023 mmol) su reagovali kao u opštem postupku formiranja triazola iznad da se dobije sirov proizvod. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 40-80% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Materijal je dalje prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 0-35% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 5.7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.34 min; ESI-MS(+) m/z 936.2 (M 2H); Analiza Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.97 min; ESI-MS(+) m/z 936.2 (M 2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 960.9769 (M+2H) Nađeno: 960.9749 (M+2H).

Priprema primera 14076

[1353] Intermedijer 1300V (30 mg, 0.015 mmol) i (S)-16-((3-azido-1-karboksipropil)amino)-16-oksoheksadekanska kiselina (7.49 mg, 0.018 mmol) su reagovali kao u opštem postupku formiranja triazola iznad da se dobije sirov proizvod. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 40-80% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Materijal je dalje prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: 25-65% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 2.0 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.43 min; ESI-MS(+) m/z 1198.6 (M 2H), najzastupljeniji jon; Analiza Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.86 min; ESI-MS(+) m/z 1198.7 (M 2H), najzastupljeniji jon.

Priprema primera 14077

[1354]

[1355] Intermedijer 1300V (10 mg, 5.04 µmol) i (S)-4-azido-2-palmitamidobutanska kiselina (2.32 mg, 6.05 µmol) su reagovali kao u opštem postupku formiranja triazola iznad da se dobije sirov proizvod. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 25-65% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 3.2 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.85 min; ESI-MS(+) m/z 1184.2 (M 2H); ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1003.5215 (M+2H) Nađeno: 1003.5189 (M+2H).

Priprema primera 14078

[1356]

[1357] Intermedijer 1300Y (30 mg, 0.014 mmol) i (S)-16-((3-azido-1-karboksipropil)amino)-16-oksoheksadekanska kiselina (7.09 mg, 0.017mmol) su reagovali kao u opštem postupku formiranja triazola iznad da se dobije sirov proizvod. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: waters xbridge c-18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 10-50% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 10.2 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 96%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.28 min; ESI-MS(+) m/z 836.3 (M 3H), najzastupljeniji jon; Analiza Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.35 min; ESI-MS(+) m/z 836.8 (M 3H), najzastupljeniji jon.

Priprema primera 14079

[1358]

[1359] Intermedijer 1300Y (10 mg, 4.77 µmol) i (S)-4-azido-2-palmitamidobutanska kiselina (2.19 mg, 5.73 µmol) su reagovali kao u opštem postupku formiranja triazola iznad da se dobije sirov proizvod. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: waters xbridge c-18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 30-70% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 2.5 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 96%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.50 min; ESI-MS(+) m/z 1239.5 (M 2H), najzastupljeniji jon.

Priprema primera 14080

[1360]

[1361] Intermedijer 1300X (8 mg, 4.06 µmol) i (S)-4-azido-2-palmitamidobutanska kiselina (1.87 mg, 4.87 µmol) su reagovali kao u opštem postupku formiranja triazola iznad da se dobije sirov proizvod. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 25-65% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 3.4 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 96%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 2.12 min; ESI-MS(+) m/z 1176.7 (M 2H), najzastupljeniji jon.

Priprema primera 14081

[1362]

[1363] Intermedijer 1400K (10 mg, 5.13 µmol) i (S)-4-azido-2-palmitamidobutanska kiselina (2.36 mg, 6.16 µmol) su reagovali kao u opštem postupku formiranja triazola iznad da se dobije sirov proizvod. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: waters xbridge c-18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM; amonijum acetata; Gradijent: 35-75% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 3.5 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 2.44 min; ESI-MS(+) m/z 1166.0 (M 2H), najzastupljeniji jon.

Priprema primera 14082

[1364]

[1365] Intermedijer 1400J (48 mg, 0.023 mmol) i (R)-2,5,7,8-tetrametil-2-((4R,8R)-4,8,12-trimetiltridecil)hroman-6-il 4-((5-azidopentil)amino)-4-oksobutanoat (17.64 mg, 0.028 mmol) su reagovali kao u opštem postupku formiranja triazola iznad da se dobije sirov proizvod. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: waters xbridge c-18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: 60-100% B tokom 25 minuta, zatim 10-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Materijal je dalje prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge Fenil, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 38-78% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 2.6 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza Uslov C: Vreme zadržavanja = 1.62 min; ESI-MS(+) m/z 912.8 (M 3H), najzastupljeniji jon.

Priprema primera 14083

[1366]

[1367] Intermedijer 1300X (26 mg, 0.013 mmol) i (S)-16-((3-azido-1-karboksipropil)amino)-16-oksoheksadekanska kiselina (6.54 mg, 0.016mmol) su reagovali kao u opštem postupku formiranja triazola iznad da se dobije sirov proizvod. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 40-80% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Materijal je dalje prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 30-70% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 3.1 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.42 min; ESI-MS(+) m/z 1191.8 (M 2H), najzastupljeniji jon. Analiza Uslov B: Vreme zadržavanja = 2.86 min; ESI-MS(+) m/z 1191.6 (M 2H), najzastupljeniji jon.

Priprema primera 14084

[1368]

[1369] Intermedijer 1400L (10 mg, 5.09 µmol) i (S)-4-azido-2-palmitamidobutanska kiselina (2.34 mg, 6.11 µmol) su reagovali kao u opštem postupku formiranja triazola iznad da se dobije sirov proizvod. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 30-70% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 2.7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.87 min; ESI-MS(+) m/z 1175.3 (M 2H), najzastupljeniji jon; Analiza Uslov B: Vreme zadržavanja = 3.10 min; ESI-MS(+) m/z 1175.7 (M 2H), najzastupljeniji jon.

Priprema primera 14085

[1370]

[1371] Intermedijer 1300Y (54.8 mg, 0.026 mmol) i (R)-2,5,7,8-tetrametil-2-((4R,8R)-4,8,12-trimetiltridecil)hroman-6-il 4-((5-azidopentil)amino)-4-oksobutanoat (20.12 mg, 0.031 mmol) su reagovali kao u opštem postupku formiranja triazola iznad da se dobije sirov proizvod. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge Fenil, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: 40-80% B tokom 30 minuta, zatim 10-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 15.2 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza Uslov C: Vreme zadržavanja = 1.87 min; ESI-MS(+) m/z 912.8 (M 3H), najzastupljeniji jon.

Priprema primera 14086

[1372]

[1373] Intermedijer 1400E (48.5 mg, 0.022 mmol) i (R)-2,5,7,8-tetrametil-2-((4R,8R)-4,8,12-trimetiltridecil) hroman-6-il 4-((5-azidopentil)amino)-4-oksobutanoat (16.89 mg, 0.026 mmol) su reagovali kao u opštem postupku formiranja triazola iznad da se dobije sirov proizvod. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge Fenil, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: 35-75% B tokom 30 minuta, zatim 10-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 18.3 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%.

Analiza Uslov C: Vreme zadržavanja = 2.90 min; ESI-MS(+) m/z 951.3 (M 3H), najzastupljeniji jon.

Priprema primera 14087

[1374]

[1375] Intermedijer 1400K (54 mg, 0.028 mmol) i (R)-2,5,7,8-tetrametil-2-((4R,8R)-4,8,12-trimetiltridecil)hroman-6-il 4-((5-azidopentil)amino)-4-oksobutanoat (21.32 mg, 0.033 mmol) su reagovali kao u opštem postupku formiranja triazola iznad da se dobije sirov proizvod. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge Fenil, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: 60-100% B tokom 30 minuta, zatim 10-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 35.9 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza Uslov C: Vreme zadržavanja = 3.23 min; ESI-MS(+) m/z 1295.2 (M 2H), najzastupljeniji jon.

Priprema primera 14088

[1376]

[1377] Intermedijer 1400L (54 mg, 0.027 mmol) i (R)-2,5,7,8-tetrametil-2-((4R,8R)-4,8,12-trimetiltridecil)hroman-6-il 4-((5-azidopentil)amino)-4-oksobutanoat (21.13 mg, 0.033 mmol) su reagovali kao u opštem postupku formiranja triazola iznad da se dobije sirov proizvod. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: waters CSH c-18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: 80-100% B tokom 30 minuta, zatim 15-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 29.2 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza Uslov C: Vreme zadržavanja = 2.91 min; ESI-MS(+) m/z 869.9 (M 3H), najzastupljeniji jon.

Priprema primera 14089

[1379] Intermedijer 1300V (13 mg, 6.55 µmol) i 3-(2-(2-(2-(2-azidoetoksi)etoksi)etoksi)etoksi)-2-fluoropiridin (2.060 mg, 6.55 µmol), su reagovali kao u opštem postupku formiranja triazola iznad da se dobije sirov proizvod. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: 15-55% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Materijal je dalje prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 10-50% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 1.0 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.60 min; ESI-MS(+) m/z 1149.3 (M 2H), najzastupljeniji jon; Analiza Uslov B: Vreme zadržavanja = 3.13 min; ESI-MS(+) m/z 1149.4 (M 2H), najzastupljeniji jon; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1149.0648 (M+2H) Nađeno: 1149.0635 (M+2H).

Priprema primera 14090

[1380]

[1381] Intermedijer 1300W (12.7 mg, 6.41 µmol) i 3-(2-(2-(2-(2-azidoetoksi)etoksi)etoksi)etoksi)-2-fluoropiridin (2.014 mg, 6.41 µmol), su reagovali kao u opštem postupku formiranja triazola iznad da se dobije sirov proizvod. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 45-85% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Materijal je dalje prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 10-50% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 1.7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 97%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.63 min; ESI-MS(+) m/z 1148.9 (M 2H), najzastupljeniji jon; Analiza Uslov B: Vreme zadržavanja = 3.20 min; ESI-MS(+) m/z 1148.9 (M 2H), najzastupljeniji jon.

Priprema primera 14092

[1382]

[1383] Intermedijer 1400J (20 mg, 9.55 µmol) i (S)-1-azido-40-karboksi-37,42-diokso-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-undekaoksa-36,41-diazanonapentakontan-59-ska kiselina (11.42 mg, 0.011 mmol) su reagovali kao u opštem postupku formiranja triazola iznad da se dobije sirov proizvod. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: 20-60% B tokom 30 minuta, zatim 10-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 4.9 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 95%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.39 min; ESI-MS(+) m/z 1028.8 (M - 3H), najzastupljeniji jon; Analiza Uslov B: Vreme zadržavanja = 3.08 min; ESI-MS(+) m/z 1028.8 (M - 3H), najzastupljeniji jon; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1544.8138 (M+2H) Nađeno: 1544.8114 (M+2H).

Priprema primera 14093

[1384]

[1385] Intermedijer 1300V (30 mg, 15.0 µmol) i (S)-1-azido-40-karboksi-37,42-diokso-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-undekaoksa-36,41-diazanonapentakontan-59-ska kiselina (18.08 mg, 0.018 mmol) su reagovali kao u opštem postupku formiranja triazola iznad da se dobije sirov proizvod. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: 35-75% B tokom 30 minuta, zatim 7-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Materijal je dalje prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 30-70% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 2.6 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Analiza Uslov A: Vreme zadržavanja = 1.96 min; ESI-MS(+) m/z 994.3 (M 3H), najzastupljeniji jon; ESI-HRMS(+) m/z:

Izračunato: 1489.8080 (M+2H) Nađeno: 1489.8043 (M+2H).

Priprema primera 14095

[1386]

[1387] Intermedijer 1300V (80 mg, 40.0 µmol) i (S)-18-((3-azido-1-karboksipropil)amino)-18-oksooktadekanska kiselina (17.77 mg, 0.040 mmol) su reagovali kao u opštem postupku formiranja triazola iznad da se dobije sirov proizvod. Sirov proizvod je prečišćen putem Prep-HPLC (Kolona: XBridge Prep C1830 x100 mm 5um, Rastvarač A = 10 mM Amonijum acetata u 95 : 5 H2O / ACN, Rastvarač B = 10 mM Amonijum acetata u 5 : 95 H2O/ACN,. Brzina protoka: 40 ml / min, 15 - 50% B, 60 min, Senz = 100%). Prinos proizvoda je bio 24 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 90%. Analiza Uslov E: Vreme zadržavanja = 2.51 min; ESI-MS(+) m/z 1213.12 (M 2H), najzastupljeniji jon; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1212.1452 (M+2H) Nađeno: 1212.1405 (M+2H).

Priprema primera 14096

[1388]

[1389] Intermedijer 1300W (50 mg, 25.0 µmol) i (S)-18-((3-azido-1-karboksipropil)amino)-18-oksooktadekanska kiselina (11.11 mg, 0.025 mmol) su reagovali kao u opštem postupku formiranja triazola iznad da se dobije sirov proizvod. Sirov proizvod je prečišćen putem Prep-HPLC (Kolona: XBridge Prep C1830 x100 mm 5um, Rastvarač A = 10 mM Amonijum acetat u 95 : 5 H2O / ACN, Rastvarač B = 10 mM Amonijum acetat u 5 : 95 H2O / ACN,. Brzina protoka: 40 ml/min, 15 - 50% B, 60 min, Senz = 100%). Prinos proizvoda je bio 14 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 90%. Analiza Uslov E: Vreme zadržavanja = 2.62 min; ESI-MS(+) m/z 1212.31 (M 2H), najzastupljeniji jon; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1211.6532 (M+2H) Nađeno: 1211.6525 (M+2H).

Priprema primera 14097

[1390]

[1391] Intermedijer 1300W (500 mg, 25.0 µmol) i (S)-1-azido-40-karboksi-37,42-diokso-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-undekaoksa-36,41-diazanonapentakontan-59-ska kiselina (25.10 mg, 0.025 mmol) su reagovali kao u opštem postupku formiranja triazola iznad da se dobije sirov proizvod. Sirov proizvod je prečišćen putem Prep-HPLC (Kolona: XBridge Prep C1830 x100 mm 5um, Rastvarač A = 10 mM Amonijum acetata u 95 : 5 H2O / ACN, Rastvarač B = 10 mM Amonijum acetata u 5 : 95 H2O / ACN,. Brzina protoka: 40 ml / min, 15 -50% B, 60 min, Senz = 100%). Prinos proizvoda je bio 11 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 90%. Analiza Uslov E: Vreme zadržavanja = 2.57 min; ESI-MS(+) m/z 1489.99 (M 2H), najzastupljeniji jon; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1489.3160 (M+2H) Nađeno: 1489.3155 (M+2H).

Priprema primera 14098

[1392]

[1393] Intermedijer 1300V (50 mg, 25.0 µmol) i (S)-1-azido-16-karboksi-13,18-diokso-3,6,9-trioksa-12,17-diazapentatriakontan-35-ska kiselina (16.23 mg, 0.025 mmol) su reagovali kao u opštem postupku formiranja triazola iznad da se dobije sirov proizvod. Sirov proizvod je prečišćen putem Prep-HPLC (Kolona: XBridge Prep C18 30 x100 mm 5um, Rastvarač A = 10 mM Amonijum acetata u 95 : 5 H2O / ACN, Rastvarač B = 10 mM Amonijum acetata u 5 : 95 H2O / ACN,. Brzina protoka: 40 ml / min, 15 -50% B, 60 min, Senz = 100%). Prinos proizvoda je bio 29 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 90%. Analiza Uslov E: Vreme zadržavanja = 2.50 min; ESI-MS(+) m/z 1314.37 (M 2H), najzastupljeniji jon ESI-HRMS(+) m/z:Izračunato: 1313.7031 (M+2H) Nađeno: 1313.7031 (M+2H).

Priprema primera 14099

[1394]

[1395] Intermedijer 1300V (50 mg, 25.0 µmol) i (S)-1-azido-28-karboksi-25,30-diokso-3,6,9,12,15,18,21-heptaoksa-24,29-diazaheptatetrakontan-47-ska kiselina (20.67 mg, 0.025 mmol) su reagovali kao u opštem postupku formiranja triazola iznad da se dobije sirov proizvod. Sirov proizvod je prečišćen putem Prep-HPLC (Kolona: XBridge Prep C1830 x100 mm 5um, Rastvarač A = 10 mM Amonijum acetata u 95 : 5 H2O / ACN, Rastvarač B = 10 mM Amonijum acetata u 5 : 95 H2O / ACN,. Brzina protoka: 40 ml / min, 15 -50% B, 60 min, Senz = 100%). Prinos proizvoda je bio 51 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 90%. Analiza Uslov E: Vreme zadržavanja = 2.52 min; ESI-MS(+) m/z 1402.83 (M 2H), najzastupljeniji jon ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1401.7555 (M+2H) Nađeno: 1401.7561 (M+2H).

Priprema primera 14100

[1396]

[1397] Intermedijer 1300V (50 mg, 25.0 µmol) i (S)-1-azido-22-karboksi-19,24-diokso-3,6,9,12,15-pentaoksa-18,23-diazahentetrakontan-41-ska kiselina (18.45 mg, 0.025 mmol) su reagovali kao u opštem postupku formiranja triazola iznad da se dobije sirov proizvod. Sirov proizvod je prečišćen putem Prep-HPLC (Kolona: XBridge Prep C1830 x100 mm 5um, Rastvarač A = 10 mM Amonijum acetat u 95 : 5 H2O / ACN, Rastvarač B = 10 mM Amonijum acetat u 5 : 95 H2O / ACN,. Brzina protoka: 40 ml/min, 15 - 50% B, 60 min, Senz = 100%). Prinos proizvoda je bio 26 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 90%. Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 2.25 min; ESI-MS(+) m/z 1358.8 (M 2H), najzastupljeniji jon ESI-HRMS(+) mlz:

Izračunato: 1357.7293 (M+2H) Nađeno: 1357.7263 (M+2H).

Priprema primera 14101

[1398]

[1399] Intermedijer 1300V (57 mg, 29.0 µmol) i (S)-1-azido-15-karboksi-13,17-diokso-3,6,9-trioksa-12,16-diazatetratriakontan-34-ska kiselina (18.10 mg, 0.029 mmol) su reagovali kao u opštem postupku formiranja triazola iznad da se dobije sirov proizvod. Sirov proizvod je prečišćen putem Prep-HPLC (Kolona: XBridge Prep C18 30 x100 mm 5um, Rastvarač A = 10 mM Amonijum acetat u 95 : 5 H2O / ACN, Rastvarač B = 10 mM Amonijum acetat u 5 : 95 H2O / ACN,. Brzina protoka: 40 ml / min, 15 -50% B, 60 min, Senz = 100%). Prinos proizvoda je bio 15 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 90%. Analiza Uslov E: Vreme zadržavanja = 2.50 min; ESI-MS(+) m/z 1307.4 (M 2H), najzastupljeniji jon; ESI-HRMS(+) m/z:Izračunato: 1306.6953 (M+2H) Nađeno: 1306.6927 (M+2H).

Priprema primera 14102

[1400]

[1401] Intermedijer 1300V (75 mg, 38.0 µmol) i (S)-1-azido-39-karboksi-37,41-diokso-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-undekaoksa-36,40-diazaoktapentakontan-58-ska kiselina (37.1 mg, 0.038 mmol) su reagovali kao u opštem postupku formiranja triazola iznad da se dobije sirov proizvod. Sirov proizvod je prečišćen putem Prep-HPLC (Kolona: XBridge Prep C1830 x100 mm 5um, Rastvarač A = 10 mM Amonijum acetat u 95 : 5 H2O / ACN, Rastvarač B = 10 mM Amonijum acetat u 5 : 95 H2O / ACN,. Brzina protoka: 40 ml / min, 15 -50% B, 60 min, Senz = 100%). Prinos proizvoda je bio 25 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 90%. Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 2.31 min; ESI-MS(+) m/z 1483.4 (M 2H), najzastupljeniji jon. ESI-HRMS(+) m/z:Izračunato: 988.8692 (M+3H)

Nađeno: 988.8696 (M+3H).

Priprema primera 14103

[1403] Intermedijer 1300V (75 mg, 38.0 µmol) i (S)-1-azido-39-karboksi-37,41-diokso-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-undekaoksa-36,40-diazaoktapentakontan-58-ska kiselina (37.1 mg, 0.038 mmol), su reagovali kao u opštem postupku formiranja triazola iznad da se dobije sirov proizvod. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Xbridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 10 mm Amonijum acetata u 95 : 5 H2O:ACN; Mobilna faza B: 10 mm Amonijum acetata u 5:95 H2O:ACN; Gradijent: 15-50% B tokom 60 minuta, Protok: 40 mL/min, Senz: 100%. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 25 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 90%. Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 2.243 min; ESI-MS(+) m/z 1483.4 (M 2H), najzastupljeniji jon; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1482.8001 (M+2H)

Nađeno: 1482.7974 (M+2H).

Priprema primera 14104

[1404]

[1405] Intermedijer 130AI (75 mg, 37.0 µmol) i (S)-1-azido-40-karboksi-37,42-diokso-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-undekaoksa-36,41-diazanonapentakontan-59-ska kiselina (37.2 mg, 0.037 mmol), su reagovali kao u opštem postupku formiranja triazola iznad da se dobije sirov proizvod. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Xbridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 10 mm Amonijum acetata u 95 : 5 H2O:ACN; Mobilna faza B: 10 mm Amonijum acetata u 5:95 H2O:ACN; Gradijent: 15-50% B tokom 60 minuta, Protok: 40 mL/min, Senz: 100%. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 33 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 90%. Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 2.27 min; ESI-MS(+) m/z 1002.5 (M 3H), najzastupljeniji jon; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1502.8163 (M+2H)

Nađeno: 1502.8137.

Priprema primera 14105

[1406]

[1407] Intermedijer 130AK (75 mg, 37.0 µmol) i (S)-1-azido-40-karboksi-37,42-diokso-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-undekaoksa-36,41-diazanonapentakontan-59-ska kiselina (36.9 mg, 0.037 mmol), su reagovali kao u opštem postupku formiranja triazola iznad da se dobije sirov proizvod. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Xbridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 10 mm Amonijum acetata u 95 : 5 H2O:ACN; Mobilna faza B: 10 mm Amonijum acetata u 5:95 H2O:ACN; Gradijent: 15-50% B tokom 60 minuta, Protok: 40 mL/min, Senz: 100%. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 31 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 90%. Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 2.27 min; ESI-MS(+) m/z 1007.2 (M 3H), najzastupljeniji jon; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1509.8242 (M+2H)

Nađeno: 1509.8224.

Priprema primera 14106

[1408]

[1409] Intermedijer 130AJ (75 mg, 37.0 µmol) i (S)-1-azido-40-karboksi-37,42-diokso-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-undekaoksa-36,41-diazanonapentakontan-59-ska kiselina (36.9 mg, 0.037 mmol), su reagovali kao u opštem postupku formiranja triazola iznad da se dobije sirov proizvod. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Xbridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 10 mm Amonijum acetata u 95 : 5 H2O:ACN; Mobilna faza B: 10 mm Amonijum acetata u 5:95 H2O:ACN; Gradijent: 15-50% B tokom 60 minuta, Protok: 40 mL/min, Senz: 100%. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 26 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 90%. Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 2.24 min; ESI-MS(+) m/z 1007.8 (M 3H), najzastupljeniji jon; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1510.7956 (M+2H)

Nađeno: 1510.7940.

Priprema primera 14107

[1410]

[1411] Intermedijer 130AL (75 mg, 37.0 µmol) i (S)-1-azido-40-karboksi-37,42-diokso-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-undekaoksa-36,41-diazanonapentakontan-59-ska kiselina (36.6 mg, 0.037 mmol), su reagovali kao u opštem postupku formiranja triazola iznad da se dobije sirov proizvod. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Xbridge C18, 30 x 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 10 mm Amonijum acetata u 95 : 5 H2O:ACN; Mobilna faza B: 10 mm Amonijum acetata u 5:95 H2O:ACN; Gradijent: 15-50% B tokom 60 minuta, Protok: 40 mL/min, Senz: 100%. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 29 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 90%. Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 2.23 min; ESI-MS(+) m/z 1012.5 (M 3H), najzastupljeniji jon; ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1517.8034 (M+2H)

Nađeno: 1517.8015.

Priprema INT-1400M

[1412]

[1413] Peptid iznad je sintetisan na 1.0 mmol skali prema postupcima iznad. Podvučeni koraci su koristili proceduru dvostrukog kuplovanja. ClAc-Tyr(Me)-Pip-Asp-Pro-Dap-Gln-Hyp-Trp-Dab-Trp'-mNle-mNle-Glu-Cys-Cly-[(S)-propargilglicin]

[1414] Nakon deprotekcije i ciklizacije prema postupcima iznad, jedinjenje je prečišćeno na sledeći način:

Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 30 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 15-55% B tokom 30 minuta, zatim 7-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 50 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 30 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 66.9%. Analiza Uslov E: Vreme zadržavanja = 2.55 min; ESI-MS(-) m/z 1026.7 (M - 2H), najzastupljeniji jon.

Priprema INT-1400N

[1415]

[1416] Peptid iznad je sintetisan na 1.8 mmol skali prema postupcima iznad. Podvučeni koraci su koristili proceduru dvostrukog kuplovanja. ClAc-Tyr(4-F)-Pip-Asp-Pro-Dap-Leu-Hyp-Trp-Dab-Trp'-mNle-mNle-Leu-Cys-Gly-[(S)-propargilglicin]

[1417] Nakon deprotekcije i ciklizacije prema postupcima iznad, jedinjenje je prečišćeno na sledeći način: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 30 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 15-55% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 50 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije..

Prinos proizvoda je bio 90 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 52.5%. Analiza Uslov E: Vreme zadržavanja = 1.73 min; ESI-MS(+) m/z 1007.0 (M 2H), najzastupljeniji jon.

Priprema primera 14121

[1418]

[1419] Intermedijer 1400M (30 mg, 7.59 µmol) i (S)-18-((3-azido-1-karboksipropil)amino)-18-oksooktadekanska kiselina (3.34 mg, 7.59 µmol) su reagovali kao u opštoj proceduri formiranja triazola da se dobije sirov proizvod. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: (Kolona: XBridge Prep C18 30 x100 mm 5um, Rastvarač A = 10 mM Amonijum acetata u 95 : 5 H2O/ACN, Rastvarač B = 10 mM Amonijum acetata u 5 : 95 H2O / ACN,. Brzina protoka: 40 ml/min, 15-50% B, 60 min). Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Prinos proizvoda je bio 8.0 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 97%.

Analiza Uslov C: Vreme zadržavanja = 1.15 min; ESI-MS(+) m/z 832.9 (M 3H) Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 2.29 min; ESI-MS(+) m/z 1248.4 (M 2H) Analiza Uslov E: Vreme zadržavanja = 2.45 min; ESI-MS(-) m/z 830.0 (M - 3H) ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1248.1194 (M+2H) Nađeno: 1248.1185 (M+2H).

Priprema primera 14122

[1420]

[1421] Intermedijer 1400N (90 mg, 23 µmol) i (S)-18-((3-azido-1-karboksipropil)amino)-18-oksooktadekanska kiselina (10.34 mg, 23 µmol) su reagovali kao u opštoj proceduri formiranja triazola da se dobije sirov proizvod. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: (Kolona: XBridge Prep C18 30 x100 mm 5um, Rastvarač A = 10 mM Amonijum acetata u 95 : 5 H2O / ACN, Rastvarač B = 10 mM Amonijum acetata u 5 : 95 H2O / ACN,. Brzina protoka: 40 ml / min, 15 -50% B, 60 min). Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije.

Prinos proizvoda je bio 12.0 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 97%. Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 2.47 min; ESI-MS(+) m/z 1227.2 (M 2H) Analiza Uslov E: Vreme zadržavanja = 2.45 min; ESI-MS(+) m/z 1227.2 (M 2H) ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1226.6429 (M+2H) Nađeno: 1226.6408 (M+2H).

Priprema 1-terc-butil 18-(perfluorofenil) oktadekandioata

[1422]

[1423] U rastvor 18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanske kisleine (5.00 g, 13.49 mmol) u DMF-u (54.0 ml) je dodat piridin (3.82 ml, 47.2 mmol), praćeno sa pentafluorofenil trifluoroacetatom (5.81 ml, 33.7 mmol). Gel se formirao, i dodatni štapić je dodat reakcionoj smeši. Smeša je mešana snažno tokom noći. Reakciona smeša je filtrirana (Buchner levak/papir) da se dobije bela čvrsta supstanca, koja je oprana malom količinom DMF-a. Atmosfera bogata azotom je isisana kroz filter pogaču tokom nekoliko sati da se dobije 1-terc-butil 18-(perfluorofenil) oktadekandioat (6.50 g, 11.63 mmol, 90 % prinos). Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 4.12 min; ESI-MS(+) m/z 559.1 (M Na).

Priprema preparata (S)-5-(benziloksi)-4-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)-5-oksopentanske kiseline

[1424]

[1425] Smeša (S)-4-amino-5-(benziloksi)-5-oksopentanske kiseline (1.1 g, 4.64 mmol), 1-tercbutil 18-(perfluorofenil) oktadekandioata (2.488 g, 4.64 mmol) i Hunigove baze (1.053 ml, 6.03 mmol) u DMF-u (15.45 ml) je mešana tokom 24 h na st. Nakon 24 h reakcije je bila homogena. Reakciona smeša je sipana u zasićeni rastvor limunske kiseline, i ekstrahovana sa CH2Cl2(3 x 50ml). Organske frakcije su kombinovane, oprane slanim rastvorom, osušene preko Na2SO4i evaporisane u vakuumu. Rezultujući sirovi proizvod je prečišćen pomoću Biotage (SG, 300 g, 0 do 25% acetona / CH2Cl2) da se dobije (S)-5-(benziloksi)-4-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)-5-oksopentanska kiselina (1.31 g, 2.221 mmol, 47.9 % prinos). Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 2.99 min; ESI-MS(+) m/z 591.2 (M 1);<1>H NMR (500MHz, METANOL-d4) δ 7.41 - 7.28 (m, 5H), 5.22 - 5.14 (m, 2H), 4.49 (dd, J=9.2, 5.3 Hz, 1H), 2.42 -2.35 (m, 2H), 2.27 - 2.19 (m, 4H), 2.19 - 2.13 (m, 1H), 1.96 (ddt, J=14.2, 9.0, 7.1 Hz, 1H), 1.65 -1.52 (m, 4H), 1.48 - 1.41 (m, 9H), 1.37 (br. s., 1H), 1.33 - 1.26 (m, 24H).

Priprema (S)-1-benzil 5-(perfluorofenil) 2-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)pentandioata

[1426]

[1427] U 100 ml RBF (tikvica sa ravnim dnom) je dodata (S)-5-(benziloksi)-4-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)-5-oksopentanska kiselina (1.31 g, 2.221 mmol), N,N-Dimetilformamid (7.40 ml), piridin (0.387 g, 4.89 mmol), i perfluorofenil 2,2,2-trifluoroacetat (1.244 g, 4.44 mmol). Reakciji je dozvoljeno da se meša tokom 24 h na st. Nakon 24 h reakciona smeša je sipana u zasićeni rastvor limunske kiseline, i ekstrahovana sa CH2Cl2(3 x 50ml). Organske frakcije su kombinovane, oprane sa slanim rastvorom, osušene preko Na2SO4i evaporisane u vakuumu. Sirovo ulje (S)-1-benzil5-(perfluorofenil) 2-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)pentandioat je korišćeno kao u narednom koraku.

Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 3.60 min; ESI-MS(+) m/z 757.2 (M 1).

Priprema (S)-terc-butil 11-((benziloksi)karbonil)-1-(9H-fluoren-9-il)-3,8,13-triokso-2-oksa-4, 7,12-triazatriakontan-30-oata

[1428]

[1429] Smeša (9H-fluoren-9-il)metil (2-aminoetil)karbamata, HCl (0.850 g, 2.67 mmol), (S)-1-benzil 5-(perfluorofenil) 2-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)pentandioata (1.679 g, 2.221 mmol) i Hunigove baze (1.164 ml, 6.66 mmol) u DMF-u (10 ml) je mešana tokom 24 h pri st. Nakon 24 h reakcija je bila homogena. Reakciona smeša je sipana u zasićeni rastvor limunske kiseline, i ekstrahovana sa CH2Cl2(3 x 50ml). Organske frakcije su kombinovane, oprane slanim rastvorom, osušene preko Na2SO4i evaporisane u vakuumu. Sirov proizvod je triturisan sa MeCN da se dobije (S)-terc-butil 11-((benziloksi)karbonil)-1-(9H-fluoren-9-il)-3,8,13-triokso-2-oksa-4,7,12-triazatriakontan-30-oat (1.448 g, 1.695 mmol, 76.3 % prinos). Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 3.61 min; ESI-MS(+) m/z 855.5 (M 1)<1>H NMR (500MHz, METANOL-d4) δ 7.81 (d, J=7.6 Hz, 2H), 7.66 (d, J=7.5 Hz, 2H), 7.40 (t, J=7.5 Hz, 2H), 7.37 - 7.24 (m, 7H), 5.12 (d, J=2.3 Hz, 2H), 4.49 - 4.42 (m, 1H), 4.33 (dd, J=6.9, 4.4 Hz, 2H), 4.24 - 4.16 (m, 1H), 3.26 - 3.14 (m, 4H), 2.34 - 2.13 (m, 7H), 1.93 (dt, J=9.5, 6.9 Hz, 1H), 1.66 -1.52 (m, 4H), 1.46 (s, 9H), 1.37 - 1.20 (m, 24H).

Priprema (S)-5-((2-aminoetil)amino)-2-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)-5-oksopentanske kiseline

[1430]

[1431] Smeša (S)-terc-butil 11-((benziloksi)karbonil)-1-(9H-fluoren-9-il)-3,8,13-triokso-2-oksa-4,7,12-triazatriakontan-30-oata (1.448 g, 1.695 mmol) u Metanolu (28.3 ml) je dodata PALADIJUMU NA UGLJENIKU (0.180 g, 0.170 mmol). Epruveta je zatvorena septumom i napunjena VODONIKOM pomoću balona. Sledećeg dana reakcija je filtrirana kroz celit da se ukloni katalizator i filtrat je evaporisan u vakuumu da se dobije (S)-5-((2-aminoetil)amino)-2-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)-5-oksopentanska kiselina koja je korišćena kao takva. Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 2.44 min; ESI-MS(+) m/z 542.2 (M 1)

Priprema (S)-5-((2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)etil)amino)-2-(18-(tercbutoksi)-18-oksooktadekanamido)-5-oksopentanske kiseline

[1432]

[1433] (S)-5-((2-aminoetil)amino)-2-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)-5-oksopentanska kiselina (0.918 g, 1.694 mmol) u DCM-u (42.4 ml) pri 0 °C je dodata DIEA (0.888 ml, 5.08 mmol) i 9-FLUORENILMETIL HLOROFORMATU (0.482 g, 1.864 mmol). Rezultujućem rastvoru je omogućeno da se ugreje do st, mešan tokom noći. Sirov proizvod je prečišćen putem Prep-HPLC (Rastvarač A = 10% Acetonitril - 90% H2O - 0.1% TFA, Rastvarač B = 90% Acetonitril - 10% H2O - 0.1% TFA. Kolona: waters-sunFire OBD30 x 100mm, S10, Brzina protoka: 40 ml / min, 45 - 100% B, 10 min, dodatnih 6 min nakon 100% B) da se dobije (S)-5-((2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)etil)amino)-2-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)-5-oksopentanska kiselina (443 mg, 0.580 mmol, 34.2 % prinos), 2 koraka. Analiza Uslov C: Vreme zadržavanja = 1.84 min; ESI-MS(+) m/z 764.5 (M 1)<1>H NMR (500MHz, METANOL-d4) δ 7.81 (d, J=7.5 Hz, 2H), 7.67 (d, J=7.5 Hz, 2H), 7.40 (t, J=7.5 Hz, 2H), 7.37 - 7.29 (m, 2H), 4.42 (dd, J=9.2, 4.8 Hz, 1H), 4.35 (dd, J=6.9, 4.0 Hz, 2H), 4.28 - 4.17 (m, 1H), 3.30 - 3.18 (m, 4H), 2.36 - 2.12 (m, 7H), 2.02 - 1.91 (m, 1H), 1.69 - 1.52 (m, 4H), 1.46 (s, 9H), 1.40 - 1.20 (m, 24H).

Priprema modifikovane hlorotricil smole 14A

[1434]

[1435] U smešu (S)-5-((2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)etil)amino)-2-(18-(tercbutoksi)-18-oksooktadekanamido)-5-oksopentanske kiseline (443 mg, 0.580 mmol) i Hunigove baze (658 µl, 3.77 mmol) rastvorene u CH2Cl2 (5857 µl) je dodat 4-HLOROTOLUEN (73.4 mg, 0.580 mmol). LC/MS ove smeše je uzet kao standard. Nabubriti 1-hloro-2-(hloro(fenil)(ptolil)metil)benzen (1160 mg, 1.855 mmol) smolu sa CH2Cl2(1.17E+04 µl) zatim dodati rastvor kiseline i DIEA. Smola je protrešena (nadgledati iznošenjem alikvota i uzimanjem LC/MS da se uporedi sa standardnim LC/MS tokom) tokom 45 min. Dodato je 25 mL 9:1 smeše MeOH/DIEA u reakcioni sud i smola je odmah filtrirana. Smola je isprana 3 puta sa DCM (mešajući tokom ~20 s između ispiranja). Smola je zatim protrešena sa ∼20 mL DMF tokom 5 min, zatim filtrirana. Ovo je ponovljeno još 2 puta sa DMF, zatim 3 puta sa DCM. Smola je osušena preko fritovanog levka sa N2 propuštenim kroz smolu.

Konačna masa: 1.5065g, Teo. opterećenje: 260 mg / 0.1mmol, izrač. opterećenje: 371 mg / 0.1mmol (bazirano na 70 % prinosa).

[1436] Primer 14123 je sintetisan na 0.2 mmol skali prema opštim procedurama iznad, uključujući postupak kuplovanja hlorosirćetne kiseline A. Podvučeni koraci su koristili proceduru dvostrukog kuplovanja, a ostaci ispisani kurzivom su kuplovani 30 min pojedinačnim kuplovanjem. C1Ac-Tyr(4-F)-Pip-Asp-Pro-Dap-Leu-Hyp-Trp-Dab-Trp'-mNle-mNle-Leu-Cys-Gly-((S)-4-((((9Hfluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-5-(terc-butoksi)-5-oksopentanska kiselina)-[Modifikovana smola 14A]. Nakon deprotekcije koja prati Globalni deprotekcioni postupak B i ciklizacije prema Metodi B ciklizacije, jedinjenje je prečišćeno na sledeći način: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 25-65% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Materijal je dalje prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters CSH C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: 10-100% B tokom 15 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije.

Prinos proizvoda je bio 1.4 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 96%. Analiza Uslov C: Vreme zadržavanja = 2.02 min; ESI-MS(+) m/z 838.7 (M 3) ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1257.1564 (M+2H) Nađeno: 1257.1641 (M+2H).

Priprema primera 14124

[1437]

[1438] Primer 14123 je sintetisan na 0.2 mmol skali prema opštoj proceduri iznad, uključujući postupak kuplovanja hlorosirćetne kiseline A. Podvučeni koraci su koristili proceduru dvostrukog kuplovanja, a ostaci ispisani kurzivom su kuplovani 30 min pojedinačnim kuplovanjem. ClAc-Tyr(4-F)-Pip-Asp-Pro-Dap-Leu-Hyp-Trp-Dab-Ttp'-mNle-mNle-Leu-Cys-Gly-((S)-3 -((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-4-(terc-butoksi)-4-oksobutanska kiselina)-[Modifikovana smola 14A]. Nakon deprotekcije koja prati Globalni deprotekcioni postupak B i ciklizacije prema Metodi B ciklizacije, jedinjenje je prečišćeno na sledeći način: Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 25-65% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Materijal je dalje prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters CSH C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: 10-100% B tokom 15 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Materijal je dalje prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters CSH C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: 20-60% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije.

Prinos proizvoda je bio 7.8 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 93%. Analiza Uslov E: Vreme zadržavanja = 1.90 min; ESI-MS(+) m/z 1250.9 (M 2) ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1250.1486 (M+2H) Nađeno: 1250.1547 (M+2H)

Priprema 4-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)butanske kiseline

[1439]

[1440] Smeša 4-aminobutanske kiseline (250 mg, 2.424 mmol), 1-terc-butil 18-(perfluorofenil) oktadekandioata (1301 mg, 2.424 mmol) i Hunigove baze (550 µl, 3.15 mmol) u DMF-u (8081 µl) je mešana tokom 24 h pri st. Nakon 24 h reakcija je bila homogena. Reakciona smeša je sipana u zasićeni rastvor limunske kiseline, i ekstrahovana sa CH2Cl2(3 x 50ml). Organske frakcije su kombinovane, oprane slanim rastvorom, osušene preko Na2SO4i evaporisane u vakuumu. Sirov proizvod 4-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)butanska kiselina je korišćen kao takav. Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 2.02 min; ESI-MS(+) m/z 456.2 (M 1)

Priprema terc-butil 1-azido-37,42-diokso-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-undekaoksa-36,41-diazanonapentakontan-59-oata

[1441]

[1442] U rastvor 4-(18-(terc-butoksi)-18-oksooktadekanamido)butanske kiseline (0.552 g, 1.212 mmol) u DMF-u (12.12 ml) je dodata Hunigova baza (0.635 ml, 3.64 mmol) i HATU (0.922 g, 2.424 mmol). 35-azido-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-undekaoksapentatriakontan-1-amin (0.692 g, 1.212 mmol) je zatim dodat, i rastvor je mešan na st. Smeša je mešana tokom noći. Reakciona smeša je sipana u zasićeni rastvor limunske kiseline, i ekstrahvana sa CH2Cl2(3 x 50ml). Organske frakcije su kombinovane, oprane slanim rastvorom, osušene preko Na2SO4i evaporisane u vakuumu. Sirov proizvod terc-butil 1-azido-37,42-diokso-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-undekaoksa-36,41-diazanonapentakontan-59-oat je korišćen kao takav.

Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 2.96 min; ESI-MS(+) m/z 1008.8 (M 1).

Priprema 1-azido-37,42-diokso-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-undekaoksa-36,41-diazanonapentakontan-59-ske kiseline

[1443]

[1444] Smeša terc-butil 1-azido-37,42-diokso-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-undekaoksa-36,41-diazanonapentakontan-59-oata (1.222 g, 1.212 mmol) i TFA (3.0 ml, 38.9 mmol) u DCM (10 ml) je mešana na ST preko noći. Reakciona smeša je sipana u slani rastvor, i ekstrahovana sa CH2Cl2(3 x 50ml). Organske frakcije su kombinovane i evaporisane u vakuumu. Rezultujući sirov proizvod je prečišćen pomoću Prep-HPLC (Rastvarač A = 10% MeOH - 90% H2O - 0.1% TFA, Rastvarač B = 90% MeOH - 10% H2O - 0.1% TFA. Kolona: PHENOMENEX LUNA 30 x 100mm, S10, Brzina protoka: 40 ml / min, 55 - 100% B, 10 min, zaustavljanje na 13 min) da se dobije 1-azido-37,42-diokso-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-undekaoksa-36,41-diazanonapentakontan-59-ska kiselina (696 mg, 0.731 mmol, 60.3 % prinos), 3 koraka. Analiza Uslov C: Vreme zadržavanja = 1.24 min; ESI-MS(+) m/z 952.6 (M 1)<1>H NMR (500MHz, HLOROFORM-d) δ 6.90 (t, J=5.0 Hz, 1H), 6.69 - 6.58 (m, 1H), 3.74 - 3.52 (m, 44H), 3.44 (q, J=5.2 Hz, 2H), 3.39 (t, J=5.1 Hz, 2H), 3.29 (q, J=6.0 Hz, 2H), 2.30 (dt, J=17.9, 7.2 Hz, 4H), 2.23 - 2.09 (m, 2H), 1.84 (kvin, J=6.6 Hz, 2H), 1.61 (sekst, J=7.7 Hz, 4H), 1.39 - 1.17 (m, 24H).

Priprema primera 14125

[1445]

[1446] Intermedijer 1300V (151 mg, 76 µmol) i 1-azido-37,42-diokso-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-undekaoksa-36,41-diazanonapentakontan-59-ska kiselina (72.5 mg, 76 µmol) su reagovali kao u opštoj proceduri formiranja triazola da se dobije sirov proizvod. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 32-54% B tokom 14 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije.. Prinos proizvoda je bio 45.8 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 95%. Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 2.47 min; ESI-MS(+) m/z 979.5 (M 3H) Analiza Uslov E: Vreme zadržavanja = 2.01 min; ESI-MS(+) m/z 979.4 (M 3H) ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1467.8131 (M+2H) Nađeno: 1467.8079 (M+2H).

Priprema terc-butil 18-((3-azidopropil)amino)-18-oksooktadekanoata

[1447]

[1448] Smeša 3-azidopropan-1-amina (250 mg, 2.497 mmol), 1-terc-butil 18-(perfluorofenil) oktadekandioata (1340 mg, 2.497 mmol) i Hunigove baze (567 µl, 3.25 mmol) u DMF-u (8323 µl) je mešana tokom 24 h na st. Nakon 24 h reakcija je bila homogena. Reakciona smeša je sipana u zasićeni rastvor limunske kiseline, i ekstrahovana sa CH2Cl2(3 x 50ml). Organske frakcije su kombinovane, oprane slanim rastvorom, osušene preko Na2SO4i evaporisane u vakuumu. Sirov proizvod terc-butil 18-((3-azidopropil)amino)-18-oksooktadekanoat je korišćen kao takav.

Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 2.76 min; ESI-MS(+) m/z 475.1 (M Na).

Priprema 18-((3-azidopropil)amino)-18-oksooktadekanske kiseline

[1449]

[1450] Smeša terc-butil 18-((3-azidopropil)amino)-18-oksooktadekanoata (750 mg, 1.657 mmol) i TFA (3.0 ml, 38.9 mmol) u DCM (10 ml) je mešana na ST tokom 2 h. Rezultujući sirov proizvod je prečišćen pomoću Prep-HPLC (Rastvarač A = 10% MeOH - 90% H2O - 0.1% TFA, Rastvarač B = 90% MeOH - 10% H2O - 0.1% TFA. Kolona: PHENOMENEX LUNA 30 x 100mm, S10, Brzina protoka: 40 ml / min, 50 - 100% B, 10 min, zaustavljanje na 13 min) da se dobije 18-((3-azidopropil)amino)-18-oksooktadekanska kiselina (138 mg, 0.348 mmol, 21.00 % prinos), 2 koraka. Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 2.67 min; ESI-MS(+) m/z 419.1 (M Na)<1>H NMR (500MHz, HLOROFORM-d) δ 7.28 (s, 1H), 3.47 - 3.28 (m, 4H), 2.40 - 2.27 (m, 2H), 2.24 - 2.14 (m, 2H), 1.87 - 1.76 (m, 2H), 1.65 (dq, J=14.9, 7.7 Hz, 4H), 1.40 - 1.18 (m, 24H).

Priprema primera 14126

[1452] Intermedijer 1300V (170 mg, 86 µmol) i 18-((3-azidopropil)amino)-18-oksooktadekanska kiselina (34 mg, 86 µmol) su reagovali kao u opštoj proceduri formiranja triazola da se dobije sirov proizvod. Sirov materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; Gradijent: 28-56% B tokom 22 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Materijal je dalje prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: 25-65% B tokom 30 minuta, zatim 5-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije.

Prinos proizvoda je bio 20.3 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 97%. Analiza Uslov D: Vreme zadržavanja = 2.41 min; ESI-MS(+) m/z 1190.7 (M 2H) Analiza Uslov E: Vreme zadržavanja = 2.02 min; ESI-MS(+) m/z 1190.4(M 2H) ESI-HRMS(+) m/z: Izračunato: 1190.1503 (M+2H) Nađeno: 1190.1474 (M+2H).

METODE ZA TESTIRANJE SPOSOBNOSTI MAKROCIKLIČNIH PEPTIDA DA SE NADMEĆU SA VEZIVANJEM PD-1 ZA PD-L1 PRIMENOM ESEJA VEZIVANJA SA HOMOGENOM VREMENSKI RAZDVOJENOM FLUORESCENCIJOM (HTRF)

[1453] Sposobnost makrocikličnih peptida predmetnog pronalaska da se vežu za PD-L1 je ispitivano primenom PD-1/PD-L1 eseja vezivanja sa homogenom vremenski razdvojenom fluorescencijom (Homogenous Time-Resolved Fluorescence - HTRF).

Metode

[1454] Eseji vezivanja sa homogenom vremenski razdvojenom fluorescencijom (HTRF) rastvorljivog PD-1 za rastvorljiv PD-L1. Rastvorljiv PD-1 i rastvorljiv PD-L1 odnosi se na proteine sa karboksil-krajnjim skraćenjima koja uklanjaju transmembransko-obuhvatajuće regione i fuzionisani sa heterolognim sekvencama, posebno Fc delom sekvence humanog imunoglobulina G (Ig) ili heksahistidinskom epitopskom oznakom (His). Sve studije vezivanja su sprovedene u HTRF esejskom puferu koji se sastoji od dPBS obogaćenog sa 0.1% (m/v) goveđim serumskim albuminom i 0.05% (v/v) Tween-20. Za PD-1-Ig/PD-L1-His esej vezivanja, inhibitori su prethodno inkubirani sa PD-L1-His (10 nM konačna) tokom 15m u 4 µl esejskog pufera, praćeno dodatkom PD-1-Ig (20 nM konačna) u 1 µl esejskog pufera i daljom inkubacijom tokom 15m. PD-L1 fuzioni proteini bilo iz humane, cinomolgus makaka, mišije, ili drugih vrsta su korišćeni. HTRF detekcija je postignuta primenom europijum kripat-obeleženog anti-Ig monoklonskog antitela (1 nM konačna) i alofikocijanin (APC) obeleženog anti-His monoklonskog antitela (20 nM konačna). Antitela su bila razblažena u HTRF detekcionom puferu i 5 µl je raspodeljeno povrh reakcije vezivanja. Reakciji je dozvoljeno da se uravnoteži tokom 30 minuta i signal (665nm/620nm odnos) je dobijen primenom EnVision fluorometra. Dodatni eseji vezivanja su utvrđeni između PD-1-Ig/PD-L2-His (20 i 5 nM, redom), CD80-His/PD-L1-Ig (100 i 10 nM, redom) i CD80-His/CTLA4-Ig (10 i 5 nM, redom). Studije vezivanja/nadmetanja između biotinilovanog jedinjenja br. 71 i humanog PD-L1-His su sprovedene kao što sledi. Makrociklični peptidni inhibitori su prethodno inkubirani sa PD-L1-His (10 nM konačna) tokom 60 minuta u 4 µl pufera za esej praćeno sa dodatkom biotinilovanog jedinjenja br. 71 (0.5 nM konačna) u 1 µl pufera za esej. Vezivanju je dozvoljeno da se uravnoteži tokom 30 minuta što je praćeno dodatkom europijum kripatom obeleženog Streptavidina (2.5 pM konačna) i APC-obeleženog anti-His (20 nM konačna) u 5 µl HTRF pufera. Reakciji je dozvoljeno da se uravnoteži tokom 30m i signal (665nm/620nm odnos) je dobijen primenom EnVision fluorometra.

[1455] Rekombinantni proteini. Karboksil-skraćen humani PD-1 (amino kiseline 25-167) sa C-terminalnom epitopskom oznakom humanog Ig [hPD-1 (25-167)-3S-IG] i humani PD-L1 (amino kiseline 18-239) sa C-terminalnom His epitopskom oznakom [hPD-L1(19-239)-tobacco vein mottling virus protease cleavage site (TVMV)-His] su eksprimirani u HEK293T ćelijama i prečišćeni sekvencijalno pomoću afinitetne hromatografije rekombinantnog proteina A i ekskluzionom hromatografijom po veličini. Humani PD-L2-His (Sino Biologicals), CD80-His (Sino Biologicals), CTLA4-Ig (RnD Systems) su svi dobijeni iz komercijalnih izvora.

Sekvenca rekombinantnog humanog PD-1-Ig hPD1(25-167)-3S-IG

[1456]

[1458] Rezultati su prikazani u Tabeli 1. Kao što je prikazano, makrociklični peptidi predmetne objave su demonstrirali snažnu inhibiciju PD-1-Ig vezujuće aktivnosti za PD-L1-TVMV-His (PD-L1-His). Opsezi su kao što sledi: A = 0.10-1.6 µM; B = 0.01-0.099 µM; C = 0.0003 -0.0099 µM.

Tabela 1

Claims

Patentni zahtevi 1. Jedinjenje sa formulom (I)

ili farmaceutski prihvatljiva so istog, gde: A je odabrano od

gde: označava tačku vezivanja sa karbonil grupom i označava tačku vezivanja sa atomom azota; n je 0 ili 1; m je 1 ili 2; m' je 0 ili 1; w je 0, 1, ili 2; R<x>je odabrano od vodonika, amino, hidroksi, i metila; R<14>i R<15>su nezavisno odabrani od vodonika i metila; R<16a>je odabrano od vodonika i C1-C6alkila; R<16>je odabrano od -(C(R<17a>)2)2-X-R<30>, -C(R<17a>)2C(O)N(R<16a>)C(R<17a>)2-X'-R<31>, -C(R<17a>)2[C(O)N(R<16a>)C(R<17a>)2]w'-X-R<31>, -(C(R<17a>)(R<17>)C(O)NR<16a>)n'-H; i -(C(R<17a>)(R<17>)C(O)NR<16a>)m'-C(R<17a>)(R<17>)-CO2H; gde: w' je 2 ili 3; n' je 1-6; m' je 0-5; X je lanac od između 1 i 172 atoma gde su atomi odabrani od ugljenika i kiseonika i gde lanac može da sadrži jednu, dve, tri, ili četiri grupe odabrane od -NHC(O)NH-, i -C(O)NHugrađene tamo; i gde je lanac po izboru supstituisan sa jednom do šest grupa nezavisno odabranih od -CO2H, -C(O)NH2, -CH2C(O)NH2, i -(CH2)CO2H; X' je lanac od između 1 i 172 atoma gde su atomi odabrani od ugljenika i kiseonika i gde lanac može da sadrži jednu, dve, tri, ili četiri grupe odabrane od -NHC(O)NH-, i -C(O)NH-ugrađene tamo; i gde je lanac po izboru supstituisan sa jednom do šest grupa nezavisno odabranih od -CO2H, -C(O)NH2, i -CH2CO2H, pod uslovom da X’ je drugačije od nesupstituisanog PEG; R<30>je odabrano od -CO2H, -C(O)NR<w>R<x>, i -CH3gde R<w>i R<x>su nezavisno odabrani od vodonika i C1-C6alkila, pod uslovom da kada X je sav ugljenik, R<30>je drugačije od -CH3; R<31>je -CO2H, -C(O)NR<w>R<x>, -CH3, aleksa-5-SDP, i biotin; svako R<17a>je nezavisno odabrano od vodonika, C1-C6alkila, -CH2OH, -CH2CO2H, -(CH2)2CO2H, svako R<17>je nezavisno odabrano od vodonika, -CH3, (CH2)zN3, -(CH2)zNH2, -X-R<31>, -(CH2)zCO2H, -CH2OH, CH2C=CH, i -(CH2)z-triazolil-X-R<35>, gde z je 1-6 i R<35>je odabrano od -CO2H, -C(O)NR<w>R<x>, CH3, biotina, -2-fluropiridina, -C(O)-(CH2)2-C(O)O-vitamina E,-C(O)O-vitamina E; i

pod uslovom da je najmanje jedno R<17>drugačije od vodonika, -CH3, ili -CH2OH; R<c>, R<f>, R<h>, R, R<m>, i R<n>su vodonik; R<a>, R<e>, R<j>, i R<k>, su svako nezavisno odabrano od vodonika i metila; R<1>, R<2>, R<3>, R<4>, R<5>, R<6>, R<7>, R<8>, R<9>, R<10>, R<11>, R<12>, i R<13>su nezavisno odabrani od bočnog lanca prirodne amino kiseline i bočnog lanca ne-prirodne amino kiseline ili formiraju prsten sa odgovarajućom susednom R grupom kao što je opisano ispod; R<e>i R<k>svako, može da formira prsten sa odgovarajućom susednom R grupom i atomima za koje su povezani odabran od azetidina, pirolidina, morfolina, piperidina, piperazina, i tetrahidrotiazola; gde svaki prsten je po izboru supstituisan sa jednom do četiri grupe nezavisno odabrane od amino, cijano, metil, halo, i hidroksi; Rje metil ili, Ri R<2>, zajedno sa atomima za koje su vezani, formiraju prsten odabran od azetidina, pirolidina, morfolina, piperidina, piperazina, i tetrahidrotiazola; gde svaki prsten je po izboru supstituisan sa jednom do četiri grupe nezavisno odabrane od amino, cijano, metil, halo, i hidroksi; R<d>je vodonik ili metil, ili, R<d>i R<4>, zajedno sa atomima za koje su vezani, mogu formirati prsten odabran od azetidina, pirolidina, morfolina, piperidina, piperazina, i tetrahidrotiazola; gde svaki prsten je po izboru supstituisan sa jednom do četiri grupe nezavisno odabrane od amino, cijano, metil, halo, hidroksi, i fenil; R<g>je vodonik ili metil ili R<g>i R<7>, zajedno sa atomima za koje su vezani, mogu formirati prsten odabran od azetidina, pirolidina, morfolina, piperidina, piperazina, i tetrahidrotiazola; gde svaki prsten je po izboru supstituisan sa jednom do četiri grupe nezavisno odabrane od amino, benzil po izboru supstituisane sa halo grupom, benziloksi, cijano, cikloheksil, metil, halo, hidroksi, izohinoliniloksi po izboru supstituisane sa metoksi grupom, hinoliniloksi po izboru supstituisane sa halo grupom, i tetrazolil; i gde pirolidinski i piperidinski prsten su po izboru fuzionisani sa cikloheksil, fenil, ili indol grupom; i R<1>je metil ili, R<1>i R<12>, zajedno sa atomima za koje su vezani, formiraju prsten odabran od azetidina i pirolidina, gde svaki prsten je po izboru supstituisan sa jednom do četiri nezavisno odabrane od amino, cijano, metil, halo, i hidroksi.
2. Jedinjenje iz patentnog zahteva 1, ili farmaceutski prihvatljiva so istog, gde A je
3. Jedinjenje iz patentnog zahteva 2, ili farmaceutski prihvatljiva so istog, gde: m i w su 1; i R<14>, R<15>, i R<16a>su svako vodonik.
4. Jedinjenje iz patentnog zahteva 3, ili farmaceutski prihvatljiva so istog, gde R<16>je -(C(R<17a>)2)2-X-R<30>.
5. Jedinjenje iz patentnog zahteva 4, ili farmaceutski prihvatljiva so istog, gde: svako R<17a>je vodonik; X je lanac od između 8 i 46 atoma gde su atomi odabrani od ugljenika i kiseonika i gde lanac može da sadrži jednu, dve, ili tri C(O)NH grupe ugrađene tamo; i gde lanac je po izboru supstituisan sa jednom ili dve grupe nezavisno odabrane od -CO2H, -C(O)NH2, -CH2C(O)NH2, i -CH2CO2H; i R<30>je odabrano od -CH3, -CO2H, i -C(O)NH2; pod uslovom da kada X je sav ugljenik, R30 je drugačije od -CH3.
6. Jedinjenje iz patentnog zahteva 3, ili farmaceutski prihvatljiva so istog, gde R<16>je -C(R<17a>)2C(O)N(R<16a>)C(R<17a>)2-X'-R<31>.
7. Jedinjenje iz patentnog zahteva 6, ili farmaceutski prihvatljiva so istog, gde svako R<17a>je odabrano od vodonika, -CO2H, i -CH2CO2H; X' je lanac od između 8 i 48 atoma gde su atomi odabrani od ugljenika i kiseonika i gde lanac može da sadrži jednu, dve, ili tri C(O)NH grupe ugrađene tamo; i gde lanac je po izboru supstituisan sa jednom ili dve grupe nezavisno odabrane od -CO2H, -C(O)NH2, -CH2C(O)NH2, i -CH2CO2H; pod uslovom da X’ je drugačije od nesupstituisanog PEG; i R<30>je odabrano od -CH3, -CO2H, i -C(O)NH2.
8. Jedinjenje iz patentnog zahteva 3, ili farmaceutski prihvatljiva so istog, gde R<16>je -C(R<17a>)2[C(O)N(R<16a>)C(R<17a>)2]w'-X-R<31>.
9. Jedinjenje iz patentnog zahteva 8, ili farmaceutski prihvatljiva so istog, gde svako R<17a>je odabrano od vodonika, -CO2H, i -CH2CO2H; X je lanac od između 8 i 48 atoma gde su atomi odabrani od ugljenika i kiseonika i gde lanac može da sadrži jednu, dve, ili tri C(O)NH grupe ugrađene tamo; i gde lanac je po izboru supstituisan sa jednom ili dve grupe nezavisno odabrane od -CO2H, -C(O)NH2, -CH2C(O)NH2, i -CH2CO2H; i R<31>je odabrano od -CH3, -CO2H, i -C(O)NH2.
10. Jedinjenje iz patentnog zahteva 3, ili farmaceutski prihvatljiva so istog, gde R<16>je -(C(R<17a>)(R<17>)C(O)NR<16a>)n'-H.
11. Jedinjenje iz patentnog zahteva 10, ili farmaceutski prihvatljiva so istog, gde svako R<17a>je vodonik; i svako R<17>je odabrano od vodonika, -CH3, (CH2)zN3, -(CH2)zNH2, -X-R<31>, -(CH2)zCO2H, -CH2OH, CH2C=CH, i -(CH2)z-triazolil-X-R<35>; pod uslovom da je najmanje jedno R<17>drugačije od vodonika, -CH3, ili -CH2OH; z je 1-4; R<31>je odabrano od -CH3, -CO2H, i -C(O)NH2; X je lanac od između 7 i 155 atoma gde su atomi odabrani od ugljenika i kiseonika i gde lanac može da sadrži jednu, dve, ili tri C(O)NH grupe ugrađene tamo; i gde lanac je po izboru supstituisan sa jednom ili dve grupe nezavisno odabrane od -CO2H, -C(O)NH2, -CH2C(O)NH2, i -CH2CO2H; i R<35>je odabrano od -CO2H, -C(O)NR<w>R<x>, CH3, biotina, -2-fluropiridina, -C(O)-(CH2)2-C(O)O-vitamina E, i -C(O)O-vitamina E.
12. Jedinjenje iz patentnog zahteva 3, ili farmaceutski prihvatljiva so istog, gde R<16>je -(CR<17a>)(R<17>)C(O)NR<16a>)m'-C(R<17a>)(R<17>)-CO2H.
13. Jedinjenje iz patentnog zahteva 12, ili farmaceutski prihvatljiva so istog, gde m' je 1-3; svako R<17a>je vodonik; svako R<17>je odabrano od vodonika, -CH3, (CH2)zN3, -(CH2)zNH2, -X-R<31>, -(CH2)zCO2H, -CH2OH, CH2CC≡H, -(CH2)z-triazolil-X-R<35>, i C(O)O-vitamina E; i

pod uslovom da je najmanje jedno R<17>drugačije od vodonika, -CH3, ili -CH2OH; z je 1-4; R<31>je odabrano od -CH3, -CO2H, i -C(O)NH2; X je lanac od između 20 i 60 atoma gde su atomi odabrani od ugljenika i kiseonika i gde lanac može da sadrži jednu, dve, ili tri C(O)NH grupe ugrađene tamo; i gde lanac je po izboru supstituisan sa jednom ili dve grupe nezavisno odabrane od -CO2H, -C(O)NH2, -CH2C(O)NH2, i -CH2CO2H; i R<35>je odabrano od -CO2H, -C(O)NR<w>R<x>, CH3, biotina, 2-fluropiridina, -C(O)-(CH2)2-C(O)O-vitamina E, i -C(O)O-vitamina E.
14. Jedinjenje iz patentnog zahteva 2, ili farmaceutski prihvatljiva so istog, gde R<1>je fenilC1-C3alkil gde fenil deo je po izboru supstituisan sa hidroksil, halo, ili metoksi; R<2>je C1-C7alkil ili, R<2>i R, zajedno sa atomima za koje su vezani, formiraju piperidinski prsten; R<3>je NR<x>R<y>(C1-C7alkil), NRR<v>karbonilC1-C3alkil, ili karboksiC1-C3alkil; R<4>i R<d>, zajedno sa atomima za koje su vezani, formiraju pirolidinski prsten; R<5>je hidroksiC1-C3alkil, imidazolilC1-C3alkil, ili NR<x>R<y>(C1-C7alkil); R<6>je karboksiC1-C3alkil, NRR<v>karbonilC1-C3alkil, NR<x>R<y>(C1-C7alkil), ili C1-C7alkil; R<7>i R<g>, zajedno sa atomima za koje su vezani, formiraju pirolidinski prsten po izboru supstituisan sa hidroksi; R<8>i R<10>su benzotienil ili indolilC1-C3alkil po izboru supstituisan sa karboksiC1-C3alkil; R<9>je hidroksiC1-C3alkil, aminoCi-C3alkil, ili C1-C7alkil, R<11>je C1-C3alkoksiC1-C3alkil ili C1-C7alkil; R<12>je C1-C7alkil ili hidroksiC1-C3alkil; i R<13>je C1-C7alkil, karboksiC1-C3alkil, ili -(CH2)3NHC(NH)NH2.
15. Jedinjenje iz patentnog zahteva 2, ili farmaceutski prihvatljiva so istog, gde: R<d>je metil ili, R<d>i R<4>, zajedno sa atomima za koje su vezani, formiraju prsten odabran od azetidina, pirolidina, morfolina, piperidina, piperazina, i tetrahidrotiazola; gde svaki prsten je po izboru supstituisan sa jednom ili dve grupe nezavisno odabrane od amino, cijano, metil, halo, hidroksi, i fenil; R<g>je metil ili, R<g>i R<7>, zajedno sa atomima za koje su vezani, formiraju prsten odabran od azetidina, pirolidina, morfolina, piperidina, piperazina, i tetrahidrotiazola; gde svaki prsten je po izboru supstituisan sa jednom ili dve grupe nezavisno odabrane od amino, benzil po izboru supstituisane sa halo grupom, benziloksi, cijano, cikloheksil, metil, halo, hidroksi, izohinoliniloksi po izboru supstituisane sa metoksi grupom, hinoliniloksi po izboru supstituisane sa halo grupom, i tetrazolil; i gde pirolidinski i piperidinski prsten su po izboru fuzionisani sa cikloheksil, fenil, ili indol grupom; i R<k>je metil ili, R<k>i R<11>, zajedno sa atomima za koje su vezani, formiraju prsten odabran od azetidina, pirolidina, morfolina, piperidina, piperazina, i tetrahidrotiazola; gde svaki prsten je po izboru supstituisan sa jednom ili dve grupe nezavisno odabrane od amino, cijano, metil, halo, i hidroksi.
16. Jedinjenje sa formulom (II)

ili farmaceutski prihvatljiva so istog, gde: A je odabrano od

gde: n je 0 ili 1; R<14>i R<15>su nezavisno odabrani od vodonika i metila; R<16a>je odabrano od vodonika i C1-C6alkila; R<16>je odabrano od -(C(R<17a>)2)2-X-R<30>, -C(R<17a>)2C(O)N(R<16a>)C(R<17a>)2-X'-R<31>, -C(R<17a>)2[C(O)N(R<16a>)C(R<17a>)2]w'-X-R<31>, -(C(R<17a>)(R<17>)C(O)NR<16a>)n'-H; i -(CR<17a>)(R<17>)C(O)NR<16a>)m'-C(R<17a>)(R<17>)-CO2H; gde: w' je 2 ili 3; n' je 1-6; m' je 1-5; X je lanac od između 1 i 172 atoma gde su atomi odabrani od ugljenika i kiseonika i gde lanac može da sadrži jednu, dve, tri, ili četiri grupe odabrane od -NHC(O)NH-, i -C(O)NH ugrađene tamo; i gde je lanac po izboru supstituisan sa jednom do šest grupa nezavisno odabranih od -CO2H, -C(O)NH2, -CH2C(O)NH2, i -CH2CO2H, X' je lanac od između 1 i 172 atoma gde su atomi odabrani od ugljenika i kiseonika i gde lanac može da sadrži jednu, dve, tri, ili četiri grupe odabrane od -NHC(O)NH-, i -C(O)NH ugrađene tamo; i gde je lanac po izboru supstituisan sa jednom do šest grupa nezavisno odabranih od -CO2H, -C(O)NH2, i -CH2CO2H, pod uslovom da X’ je drugačije od nesupstituisanog PEG; R<30>je odabrano od -CO2H, -C(O)NR<w>R<x>, i -CH3gde R<w>i R<x>su nezavisno odabrani od vodonika i C1-C6alkila, pod uslovom da kada X je sav ugljenik, R<30>je drugačije od -CH3; R<31>je -CO2H, -C(O)NR<w>R<x>, -CH3, aleksa-5-SDP, i biotin; svako R<17a>je nezavisno odabrano od vodonika, C1-C6alkila, -CH2OH, -CH2CO2H, -(CH2)2CO2H, svako R<17>je nezavisno odabrano od vodonika, -CH3, (CH2)zN3, -(CH2)zNH2, -X-R<31>, -(CH2)zCO2H, -CH2OH, CH2CC≡H, i -(CH2)z-triazolil-X-R<35>, gde z je 1-6 i R<35>je odabrano od -CO2H, -C(O)NR<w>R<x>, CH3, biotina, -2-fluropiridina, -C(O)-(CH2)2-C(O)O-vitamina E, -C(O)O-vitamina E, i

pod uslovom da je najmanje jedno R<17>drugačije od vodonika, -CH3, ili -CH2OH; R<a>, R<f>, R<j>, R<k>, R<l>, i R<m>su vodonik; Ri R<c>su metil; R<g>je odabrano od vodonika i metila; R<1>, R<2>, R<3>, R<4>, R<5>, R<6>, R<7>, R<8>, R<9>, R<10>, R<11>, i R<12>su nezavisno odabrani od bočnog lanca prirodne amino kiseline i bočnog lanca ne-prirodne amino kiseline ili formiraju prsten sa odgovarajućom susednom R grupom kao što je opisano ispod; R<d>je odabrano od vodonika i metila, ili, R<d>i R<4>, zajedno sa atomima za koje su vezani, formiraju prsten odabran od azetidina, pirolidina, morfolina, piperidina, piperazina, i tetrahidrotiazola; gde svaki prsten je po izboru supstituisan sa jednom do četiri grupe nezavisno odabrane od amino, cijano, metil, halo, halometil, i hidroksi; R<e>je odabrano od vodonika i metila, ili, R<e>i R<5>, zajedno sa atomima za koje su vezani, formiraju prsten odabran od azetidina, pirolidina, morfolina, piperidina, piperazina, i tetrahidrotiazola; gde svaki prsten je po izboru supstituisan sa jednom do četiri grupe nezavisno odabrane od amino, cijano, metil, halo, halometil, i hidroksi; R<h>je odabrano od vodonika i metila, ili, R<h>i R<8>, zajedno sa atomima za koje su vezani, formiraju prsten odabran od azetidina, pirolidina, morfolina, piperidina, piperazina, i tetrahidrotiazola; gde svaki prsten je po izboru supstituisan sa jednom do četiri grupe nezavisno odabrane od amino, cijano, metil, halo, halometil, i hidroksi; i Rje odabrano od vodonika i metila, ili, Ri R<9>, zajedno sa atomima za koje su vezani odabran od azetidina, pirolidina, morfolina, piperidina, piperazina, i tetrahidrotiazola; gde svaki prsten je po izboru supstituisan sa jednom do četiri grupe nezavisno odabrane od amino, cijano, metil, halo, halometil, i hidroksi.
17. Jedinjenje iz patentnog zahteva 16, ili farmaceutski prihvatljiva so istog, gde A je

n je 1; R<16>je -(CR<17a>)(R<17>)C(O)NR<16a>)m'-C(R<17a>)(R<17>)-CO2H; svako R<16a>je vodonik; m' je 2, 3, ili 4; svako R<17a>je vodonik; svako R<17>je nezavisno odabrano od vodonika, -(CH2)zNH2, -X-R<31>i -CH2C=CH, z je 4; X je lanac od između 26 i 155 atoma gde su atomi odabrani od ugljenika i kiseonika i gde lanac može da sadrži jednu, dve, ili tri C(O)NH grupe ugrađene tamo; i gde lanac je po izboru supstituisan sa jednom ili dve grupe nezavisno odabrane od -CO2H, -C(O)NH2, -CH2C(O)NH2, i -CH2CO2H; i R<31>je -CH3, aleksa-5-SDP, i biotin.
18. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili 16 odabrano od:

ili farmaceutski prihvatljiva so istog.
19. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 odabrano od:

ili farmaceutski prihvatljiva so istog.
20. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 odabrano od:

Ċ

i

ili farmaceutski prihvatljiva so istog.
21. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 odabrano od:

Ili farmaceutski prihvatljiva so istog.
22. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 odabrano od:

Ċ

i

ili farmaceutski prihvatljiva so istog.
23. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili 16 odabrano od:

Ċ

i

ili farmaceutski prihvatljiva so istog.
24. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 odabrano od:

Ċ

i

ili farmaceutski prihvatljiva so istog.
25. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 odabrano od:

Ċ

i

ili farmaceutski prihvatljiva so istog.
26. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 koje je

ili farmaceutski prihvatljiva so istog.
27. Jedinjenje iz patentnog zahteva 1 ili terapijski prihvatljiva so istog za primenu u poboljšanju, stimulisanju, i/ili povećanju imunog odgovora kod subjekta koji ima potrebu za istim.
28. Jedinjenje ili terapijski prihvatljiva so istog za primenu prema patentnom zahtevu 27 koja dalje obuhvata administriranje dodatnog agensa pre, nakon, ili istovremeno sa jedinjenjem iz patentnog zahteva 1 ili terapijski prihvatljivom soli istog.
29. Jedinjenje ili terapijski prihvatljiva so istog za primenu prema patentnom zahtevu 28 gde dodatni agens je antimikrobni agens, antivirusni agens, citotoksični agens, i/ili modifikator imunog odgovora.
30. Jedinjenje ili terapijski prihvatljiva so istog za primenu prema patentnom zahtevu 28 gde dodatni agens je HDAC inhibitor.
31. Jedinjenje ili terapijski prihvatljiva so istog za primenu prema patentnom zahtevu 28 gde dodatni agens je TLR7 i/ili TLR8 agonist.
32. Jedinjenje iz patentnog zahteva 1 ili terapijski prihvatljiva so istog za primenu u inhibiranju rasta, proliferacije, ili metastaze ćelija kancera kod subjekta koji ima potrebu za istim.
33. Jedinjenje ili terapijski prihvatljiva so istog za primenu prema patentnom zahtevu 32 gde je kancer odabran od melanoma, karcinoma bubrežnih ćelija, skvamoznog ne-sitnoćelijskog kancera pluća (squamous non-small cell lung cancer - NSCLC), ne-skvamoznog NSCLC, kolorektalnog kancera, kastraciono-rezistentnog kancera prostate, kancera jajnika, kancera želuca, hepatocelularnog karcinoma, karcinoma pankreasa, karcinoma skvamoznih ćelija glave i vrata, karcinoma jednjaka, gastrointestinalnog trakta i dojke, i hematoloških maligniteta.
34. Jedinjenje iz patentnog zahteva 1 ili terapijski prihvatljiva so istog za primenu u lečenju infektivne bolesti kod subjekta koji ima potrebu za istim.
35. Jedinjenje ili terapijski prihvatljiva so istog za primenu prema patentnom zahtevu 34 gde infektivna bolest je izazvana virusom.
36. Jedinjenje ili terapijski prihvatljiva so istog za primenu prema patentnom zahtevu 35 gde virus je odabran od HIV, Hepatitis A, Hepatitis B, Hepatitis C, herpes virusa, i influence.
37. Jedinjenje iz patentnog zahteva 1 ili terapijski prihvatljiva so istog za primenu u lečenju septičnog šoka kod subjekta koji ima potrebu za istim. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5