RS60163B1

RS60163B1 - Farmakofor koji indukuje trail

Info

Publication number: RS60163B1
Application number: RS20200336A
Authority: RS
Inventors: Kim D Janda; Nicholas T Jacob; Jonathan W Lockner
Original assignee: Scripps Research Inst
Priority date: 2014-03-31
Filing date: 2015-03-30
Publication date: 2020-05-29
Also published as: ES2779979T3; KR20220163533A; HUE069651T2; KR102473930B1; AU2020286314A1; EP3662910B1; CA2944452A1; JP2021119157A; EP3125898A1; JP2017511321A; US10239877B2; HRP20200478T1; JP6873201B2; LT3662910T; SMT202400497T1; WO2015153468A1; US20170107221A1; JP6756435B2; EP3125898B1; KR20160138513A

Description

Opis

IZJAVA O PODRŠCI VLADE

[0001] Ovaj pronalazak je napravljen uz dodatnu novčanu podršku vlade na temelju HHSN27200700038C, AI077644, AI079436, i AI094348, nagrađen od strane Nacionalnog instituta za zdravlje (National Institutes of Health). Vlada Sjedinjenih Američkih Država ima izvesna prava na ovaj pronalazak.

STANJE TEHNIKE

[0002] Imunonadzor kancera se odnosi na različite funkcije efektora imunog sistema koji mogu da modifikuju i indukovanu i spontanu karcinogenezu. TNF-srodni apoptozaindukujući ligand (TRAIL) je citokin imunonadzora koji je veoma značajno uključen u ovom postupku usled svoje sposobnosti da selektivno indukuje apoptozu u ćelijama kancera nad normalnim ćelijama (S. R. Wiley, K. Schooley, P. J. Smolak, W. S. Din, C. P. Huang, J. K. Nicholl, G. R. Sutherland, T. D. Smith, C. Rauch, C. A. Smith, Immunity 1995, 3, 673-682; A. Ashkenazi, V. M. Dixit, Science 1998; H. Walczak, R. E. Miller, K. Ariail, B. Gliniak, T. S. Griffith, M. Kubin, W. Chin, J. Jones, A. Woodward, T. Le, et al., Nat. Med.

1999, 5, 157-163; and A. Ashkenazi, R. C. Pai, S. Fong, S. Leung, D. A. Lawrence, S. A. Marsters, C. Blackie, L. Chang, A. E. McMurtrey, A. Hebert, et al., J. Clin. Invest.1999, 104, 155-162). TNF-srodni apoptoza-indukujući ligand gen je eksprimiran u raznovrsnim tkivima i ćelijama (S. R. Wiley, K. Schooley, P. J. Smolak, W. S. Din, C. P. Huang, J. K. Nicholl, G. R. Sutherland, T. D. Smith, C. Rauch, C. A. Smith, Immunity 1995, 3, 673-682); uključujući dendritske ćelije, ćelije prirodne ubice (NK), i moncite/ makrofage (M. J. Smyth, K. Takeda, Y. Hayakawa, J. J. Peschon, M. R. M. van den Brink, H. Yagita, Immunity 2003, 18, 1-6.). Njegova genska ekspresija je pod kontrolom nekoliko transkripcionih regulatora, kao što su faktori transkripcije NF- κB i p53 (K. Kuribayashi, G. Krigsfeld, W. Wang, J. Xu, P. A. Mayes, D. T. Dicker, G. S. Wu, W. S. El-Deiry, Cancer Biol. Ther. 2008, 7, 2034-2038.). Smanjenje ekspresije TNF-srodnog apoptozaindukujućeg liganda (TRAIL) neutralizujućim antitelima i ablacijom ekspresije TNFsrodnih apoptoza-indukujućih liganda (TRAIL) na miševima koji nemaju TNF-srodnog apoptoza-indukujuće liganda (TRAIL) gena daje kao rezultat razvoj karcinogenom indukovane fibrosarkome, sarkome, i limfome; posebno kod p53 nokautiranih miševa (E. Cretney, K. Takeda, H. Yagita, M. Glaccum, J. J. Peschon, M. J. Smyth, J. Immunol.

2002; and K. Takeda, M. J. Smyth, E. Cretney, Y. Hayakawa, N. Kayagaki, H. Yagita, K. Okumura, J. Exp. Med. 2002, 195, 161-169). Ovi podaci su takođe dosledni sa zapažanjima da promena u ekspresiji TNF-srodnog apoptoza-indukujuće liganda (TRAIL) u imunim ćelijama se dovodi u vezu sa TRAIL otpornošću u ćelijama kancera (N. S. M. Azahri, M. M. Kavurma, Cell. Mol. Life Sci. 2013, 70, 3617-3629). Dakle, efektori proizvodnje TNF-srodnog apoptoza-indukujućeg liganda (TRAIL) u imunim ćelijama su od kliničkog značaja (M. J. Smyth, K. Takeda, Y. Hayakawa, J. J. Peschon, M. R. M. van den Brink, H. Yagita, Immunity 2003, 18, 1-6.) i mogli bi biti korišćeni kao sredstva da se postigne model sistema za proučavanje služenog signalnog sistema imunonadzora.

KRATAK OPIS

[0003] Ovaj pronalazak je usmeren na različita izvođenja, na jedinjenje i farmaceutsku supstancu koja obuhvata delotvornu količinu jedinjenja koja može da indukuje ekspresiju TNF-srodnog apoptoza-indukujućeg liganda (TRAIL) gena u ćelijama koje mogu da eksprimiraju da gen TNF-srodnog apoptoza-indukujućeg liganda (TRAIL) proizvodi citokin TNF-srodni apoptoza-indukujući liganda (TRAIL). TNF-srodni apoptoza-indukujući ligand (TRAIL) (citokin) može selektivno indukovati apoptozu u ćelijama kancera nad normalnim ćelijama. Samim tim, ovaj opis obezbeđuje jedinjenje i lek koji je delotvoran za lečenje različitih kancera. Bez namere da se ograničimo na teoriju, opisano jedinjenje i farmaceutska supstanca indukuje ekspresiju TNF-srodnog apoptoza-indukujućeg liganda (TRAIL).

[0004] U različitim izvođenjima, ovaj pronalazak je usmeren na jedinjenje iz formule (I)

pri čemu

Cyc je 5-člani do 8-člani heterociklil prsten koji obuhvata jedan atom azota, sa grupom iz formule Ar<1>-CR2-koja je vezana na atom azota;

Ar<1>i Ar<2>su svaka nezavisno izabrane aril grupe koje su nezavisno supstituisane sa 0, 1, ili 2 J grupe;

R je nezavisno_H ili (C1-C6)alkil;

J je nezavisno_(C1-C6)alkil, (C3-C9)cikloalkil, (C3-C9)cikloalkil(C1-C6)alkil, ili halo; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

Alen i saradnici (J.E. Allen et al, Science Translational Medicine, 6 February 2013, vol. 5, no.171, pages 1-13), opisuju molekul, označen TIC10, kao antitumorsko terapijsko sredstvo. TIC10 kako su prikazali Allen i saradnici. poseduje linearnu tricikličnu hemijsku strukturu.

Ovaj opis obezbeđuje farmaceutsku supstancu koja obuhvata jedinjenje izabrano iz grupe koja obuhvata

U različitim izvođenjima, jedinjenje korišćeno da se indukuje TNF-srodni apoptozaindukujući ligand (TRAIL) je jedinjenje 2

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so. IUPAC naziv za jedinjenje 2 je 7-benzil-4-(2-metilbenzil)-1,2,6,7,8,9-heksahidroimidazo[1,2-a]pirido[3,4-e]pirimidin-5(4H)-on.

[0005] Ovaj opis omogućava postupak za lečenje različitih kancera, koji obuhvata isporuku pacijentu delotvorne količine jedinjenja iz formule (I), kao što je jedinjenje 2. Taj postupak za lečenje širokog spektra kancera kod sisara, pri čemu je širok spektar kancera kod sisara koje treba lečiti izabran iz grupe koja obuhvata kancer jajnika, debelog creva, dojke, jetre, pankreasa, gastrointestinalni, glave i vrata, grlića materice, prostate, kancere pluća, melanome, glioblastome, mijelome, iz neuroblastoma izvedene tumore centralnog nervnog sistema (CNS), monocitne leukemije, leukemije izvedene iz B ćelije, leukemije izvedene iz T-ćelije, limfomi izvedeni iz B ćelije, limfomi izvedeni iz T ćelije, i tumori izvedeni iz ćelije mastocita, i njihove kombinacije.

KRATAK OPIS SLIKA NACRTA

[0006]

Slika 1 pokazuje a) Indukovanje mRNK TNF-srodnog apoptoza-indukujućeg liganda (TRAIL) u ćelijama čistog klona (RAW ćelijama) tretiranim tokom 48 sati sa naznačenom dozom linearnog izomera (1) ili angularnog izomera 2; b) Indukovanje mRNK TNF-srodnog apoptoza-indukujućeg liganda (TRAIL) na 5 µM jedinjenja 1 i jedinjenja 2 tokom naznačenih vremenskih perioda. c) Od doze zavisan odgovor na angularno (2) i (9). Jedinjenje 2a je uzorak dobijen iz NCI repozitorijuma, jedinjenje 2b je jedinjenje sintetisano ovde; pokazalo se da oba jedinjenje koje ima strukturu 2. Slika 2 pokazuje poređenje struktura imidazolinopirimidanona neaktivnog jedinjenja 1 i aktivnog jedinjenja 2 u vezi sa ekspresijom TNF-srodnog apoptoza-indukujućeg liganda (TRAIL). Strukture svakog su potvrđene rendgenskom kristalografskom analizom.

Slika 3 pokazuje strukturu konstitucionalnog izomera, jedinjenje 9.

Slika 4 pokazuje uporedne strukture jedinjenja 1 i jedinjenja 2.

Slika 5 pokazuje rendgensku kristalnu strukturu dobijenu za jedinjenje 2.

Slika 6 pokazuje rendgensku kristalnu strukturu dobijenu za jedinjenje 9.

Slika 7 pokazuje ogled održivosti ćelije koji poredi aktivnost 20 mM koncentracije različitih jedinjenja uključujući Jedinjenje 2 (HIPPO) i jedinjenja A do R ovde.

DETALJAN OPIS

[0007] Ovaj opis obezbeđuje jedinjenje iz formule (I)

pri čemu

Cyc je 5-člani do 8-člani monociklični heterociklil prsten koji obuhvata jedan atom azota, sa grupom iz formule Ar<1>-CR2- koja se vezuje na prsten atoma azota; Ar<1>i Ar<2>su svaki nezavisno aril grupe koje se supstituišu sa 0, 1, ili 2 J grupama; R je nezavisno H ili (C1-C6)alkil;

J je nezavisno (C1-C6)alkil, (C3-C9)cikloalkil, (C3-C9)cikloalkil(C1-C6)alkil, ili halo ili (C1-C6)haloalkil;

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0008] Preporučljivo, jedinjenje iz formule (I) je jedinjenje unutr formule (IA) podvrste

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0009] Preciznije, jedinjenje iz formule (IA) je jedinjenje pri čemu su Ar<1>i Ar<2>svako fenil grupa supstituisana 0, 1, ili 2 J grupama; i,

R pri svakoj pojavi je nezavisno H ili (C1-C6)alkil;

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0010] Preporučljivo, jedinjenje iz formule (I) je jedinjenje 2

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0011] U različitim izvođenjima, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje iz

formule (I) koje nije jedinjenje 2.

[0012] Ovaj opis još obezbeđuje jedinjenje iz formule (I)

pri čemu

Cyc je 5-člani do 8-člani monociklični heterociklil prsten koji obuhvata jedan atom azota, sa grupom iz formuleAr<1>-CR2- vezanom na atom azota;

Ar<1>i Ar<2>su aril grupe koje su supstituisane sa 0, 1, ili 2 J grupama;

R je nezavisno H ili (C1-C6)alkil;

J je nezavisno (C1-C6)alkil, (C3-C9)cikloalkil, (C3-C9)cikloalkil(C1-C6)alkil, halo, ili (C1-C6)haloalkil; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu za lečenje kancera.

[0013] Preporučljivo, jedinjenje je jedinjenje izabrano iz podvrste iz formule (IA)

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0014] Još preporučljivije, jedinjenje iz formule (IA), Ar<1>i Ar<2>je fenil grupa supstituisana sa 0, 1, ili 2 J grupama.

[0015] Najpreporučljivije, jedinjenje iz formule (I) je jedinjenje 2

[0016] U različitim izvođenjima, ovaj pronalazak opisuje postupak za lečenje različitih kancera sa jedinjenjem iz formule (I) pri čemu to jedinjenje iz formule (I) nije jedinjenje 2.

[0017] Taj postupak je moguće koristiti za lečenje širokog spektra kancera kod sisara, pri čemu je širok spektar kancera kod sisara koje treba lečiti izabran iz grupe koja obuhvata kancer jajnika, debelog creva, dojke, jetre, pankreasa, gastrointestinalni, glave i vrata, grlića materice, prostate, kancere pluća, melanome, glioblastome, mijelome, iz neuroblastoma izvedene tumore centralnog nervnog sistema (CNS), monocitne leukemije, leukemije izvedene iz B ćelije, leukemije izvedene iz T-ćelije, limfome izvedene iz B ćelije, limfome izvedene iz T ćelije, i tumore izvedene iz ćelije mastocita, i njihove kombinacije.

[0018] Još jedan imidazolinopirimidinon, (koji se ovde zove jedinjenje 1) je opisan u prijavi patenata iz SAD 20120276088 objavljenoj 01. novembra 2012. Ova prijava patenta opisuje linearno jedinjenje 1 koje se ovde koristi u svrhe poređenja. Sintetisali smo jedinjenje 1 u četiri koraka iz 4-hloronikotinske kiseline (Šema 1).

Šema 1

Sinteza jedinjenja 1 : (a) SOCl2, 90 °C, 1 sat, zatim 2-metiltioimidazolin hidrojodid, Et3N, CH2Cl2, 0 °C do rt, 19 sati, 96%; (b) 2-metilbenzilamin, K3PO4, N,N-dimetilacetamid, refluks, 1 sat, 79%; (c) 45 psi H2(g), PtO2, MeOH/TFA, rt, 5 sati, 80%; (d) benzaldehid, Na(OAc)3BH, AcOH, CH2Cl2, rt, 4 sat, 87%.

[0019] Ukratko, acilacija aktivirane karboksilne kiseline, posle čega sledi reakcija dvostrukog izmeštanja, i naknadna hidrogenacija i reduktivna aminacija su dali jedinjenje 1 u 52% ukupnog prinosa. Ova struktura jedinjenja 1 je potvrđena masenom spektrometrijom, spektroskopski nuklearnom magnentnom rezonancom (NMR), i rendgenskim kristalografskim analizama (videti odeljak Primeri).

[0020] Biološka aktivnost jedinjenja 1 je izmerena RT-PCR analizom ekspresije mRNK TNF-srodnog apoptoza-indukujućeg liganda (TRAIL) u mišjoj makrofagnoj ćelijskoj liniji RAW 264.7. Nije primećena nikakva promena u ekspresiji mRNK TNF-srodnog apoptozaindukujućeg liganda (TRAIL) u odnosu na kontrole, čak i pri dozama veličine od 10 µM (Slika 1a) ili sa produženom izloženošću (Slika 1b). Kao što je prikazano na Slici 1, jedinjenje 2a, (dobijeno iz NCI), ispoljava željenu biološku aktivnost TNF-srodnog apoptoza-indukujućeg liganda (TRAIL), kao što je sintetisano jedinjenje 2b, ali ne i sintetisano jedinjenje 1. Samim tim, postoji potreba u ovoj oblasti da se stvori biološki aktivan imidazolinopirimidinon, što je angularnije jedinjenje iz formule (I), a posebno jedinjenje 2.

[0021] Jedinjenje 2 je dobijeno u tri koraka u 82% prinosa (Šema 2). Dobijen je sintetički proizvod, ovde nazvan jedinjenje 2b, i njegova struktura je potvrđena kao 2.

Šema 2

Sinteza jedinjenja 2: (a) metil hloroformat, Et3N, CH2Cl2, 0 °C do rt, 44 sata, 97%; (b) 2-metilbenzilamin, MeOH, AcOH, refluks, 45 sati, 87%; (c) NaOMe, MeOH, refluks, 18 sati, 97%.

[0022] Mešavina guanidina 7 i 1-benzil-4-oksopiperidin-3-karboksilat hidrohlorida (8) u refluksujućem metanolu i natrijum metoksidu je dala 2b skoro isključivo; količina u tragovima jedinjenja 1 je detektovana pomoću<1>H NMR posle razrade ove reakcije, ali je uklonjena naknadnim prečišćavanjem. Mi racionalizujemo ovaj rezultat imajući u vidu da imidazolinil azoti iz 7 poseduju i statističke i sterne prednosti u odnosu na benzilni azot iz 7. Početni napad azotom na keton karbonilu iz 8 daje kao međuproizvod aminokarbinol, koje pretrpi intramolekularnu ciklokondenzaciju da bi obezbedio sintetički uzorak 2b. Njegova struktura 2 je potvrđena masenom spektrometrijom i NMR spektroskopijom.

[0023] Jedinjenje 2, dobijeno kao sintetički uzorak 2b je moglo da indukuje ekspresiju mRNK TNF-srodnog apoptoza-indukujućeg liganda (TRAIL), kao što je bio slučaj sa repozitornim jedinjenjem 2a (Slika 1c).

[0024] Samim tim, angularno jedinjenje 2 (koje su pronalazači prikazali ovde kao aktivni faktor indukovanja TNF-srodnog apoptoza-indukujućeg liganda) ima strukturu

1

Jedinjenja 1 (ne čini se da je aktivno) ima strukturu

i izomerno linearno jedinjenje da ima strukturu 9

Od ova tri jedinjenja, samo jedinjenje 2 ispoljava željenu biološku aktivnost TNF-srodnog apoptoza-indukujućeg liganda (TRAIL).

[0025] Rendgenske kristalne strukture, uzete kao što je opisano u odeljku Primeri, su date na Slikama.

[0026] Ova otkrića obezbeđuju odnos struktura-aktivnost pri čemu je angularna fuzija tricikličnog jezgra neophodnost farmakofora da indukuje u makrofagima TNF-srodan apoptoza-indukujući ligand(TRAIL).

[0027] Naša sinteza iz tri koraka jedinjenja 2 je počela sa dobijanjem karbamata 6 (T. Smejkal, D. Gribkov, Geier, M. Keller, B. Breit, Chemistry 2010, 16, 2470-2478) i njegovo pretvaranje u guanidin 7 (W. K. Fang, P. X. Nguyen, Chow, T. M. Heidelbaugh, D. G. Gomez, M. E. Garst, S. C. Sinha, Allergan Inc., USA, 2011). Ako je 1,1-diamin nesimetričan, izomerna mešavina proizvoda jeste moguća (videti: J. V. Greenhill, M. J. Ismail, P. N. Edwards, P. J. Taylor, J Chem Soc Perk T 21985, 1255-1264; C. Romano, E. Delacuesta, C. Avendano, F. Florencio, J. Sainzaparicio, Tetrahedron 1988, 44, 71857192; F. Esser, K. H. Pook, A. Carpy, Synthesis-Stuttgart 1990, 72-78). Mešavina guanidina 7 i 1-benzil-4-oksopiperidin-3-karboksilat hidrohlorida u refluksujućem metanolu (uz pomoć NaOMe) je dala jedinjenje 2 skoro isključivo; količina u tragovima jedinjenja 1 je detektovana pomoću<1>H NMR a posle razrade ove reakcije. Mi racionalizujemo ovaj rezultat imajući u vidu da imidazolinil azoti iz 7 poseduju i statističke i sterne prednosti u odnosu na benzilni azot iz 7. Prvobitni napad azotom na keton karbinil daje aminokarbinol međuproizvod, koji pretrpi intramolekularnu ciklokondenzaciju da bi se obezbedilo 2.

[0028] K2CO3-posredovana reakcija β-keto estra sa 2-amino-2-oksazolinom (tip nesimetričnog 1,1- diamina) daje mešavinu linearnih i angularnih proizvoda (I. Forfar, C. Jarry, M. Laguerre, J. M. Leger, I. Pianet, Tetra- hedron 1999, 55, 12819-12828). Autori su akumulirali empirijski i teoretski dokaz da bi podržali gledište da "atom endocikličnog azota jeste najnukleofilniji i napada većinu elektrofilnog ugljenika iz tog biselektrofila. Zatvarač prstena između eksocikličnog atoma azota i drugi elektrofilni centar zaključuje sintezu bicikličnog heterocikla." Ovo je dosledno sa našim zapažanjima za sintezu 7 preko slične strategije.

[0029] Da bi se ponovila salijentna karakteristika iz ove sinteze, upotrebom natrijum metoksida u refluksujućem metanolu (M. F. Koehler, P. Bergeron, E. Blackwood, K. K. Bowman, Y. H. Chen, G. Deshmukh, X. Ding, J. Epler, K. Lau, L. Lee, L. Liu, C. Ly, S. Malek, J. Nonomiya, J. Oeh, D. F. Ortwine, D. Sampath, S. Sideris, L. Trinh, T. Truong, J. Wu, Z. Pei, J. P. Lyssikatos, J. Med. Chem. 2012, 55, 10958-10971), jedinjenje 2 je proizvedeno skoro ekskluzivno. Ako se izvede kondenzacija u prisustvu baze i/ili na višoj temperaturi, onda je dovoljno sredstava dostupno za statistički i sterno verovatniji aminokarbinol međuproizvod da bi pretrpeo brzu međumolekularnu ciklokondenzaciju koja vodi do jedinjenja 2.

[0030] Pored toga, sintetisana su srodna jedinjenja označena A do R. Karakteristike jedinjenja označenih A do R su date u Tabeli 1 dole u tekstu:

Tabela 1

1 (nastavak)

[0031] Kako se ovde koriste, oblici jednine ("a," "an" i "the") obuhvataju odgovarajuću množinu osim ako nije drugačije navedeno.

[0032] Pojam "oko" kako je ovde korišćen, kada se odnosi na brojčanu vrednost ili opseg, omogućava stepen varijabilnosti u vrednosti ili opsegu, na primer, unutar 10%, ili unutar 5% navedene vrednosti ili navedene granice opsega.

[0033] Svi procenti supstanci su dati kao težinski procenti, osim ako nije drugačije navedeno.

[0034] Pojam "bolest" ili "poremećaj" ili "loše stanje" se koriste ravnopravno, i koriste se da se odnose na bolesti ili stanja pri čemu TNF-srodni apoptoza-indukujući ligand (TRAIL), kao što je indukovanje ekspresije gena TNF-srodnog apoptoza-indukujućeg ligand a(TRAIL) u nekoj ćeliji, igra ulogu u biohemijskim mehanizmima uključenim u bolest ili loše stanje ili njihove simptom(e) kao što je terapijski delotvorno dejstvo moguće je postići sa delotvornom količinom ili koncentracijom sintetičkog liganda iz ovog pronalaska da bi se indukovala ekspresija TNF-srodnog apoptoza-indukujućeg liganda (TRAIL) i indukovala apoptoza, npr., selektivno u ćelijama kancera. Na primer, kanceri koje treba lečiti jedinjenjima iz ovog pronalaska obuhvataju širok spektar kancera sisara, pri čemu je širok spektar kancera kod sisara koje treba lečiti izabran iz grupe koja obuhvata tumore jajnika, debelog creva, dojke, kancere pluća, mijelome, tumore centralnog sistema (CNS) izvedene iz neuroblasta, monocitne leukemije, leukemije izvedene iz B ćelije, leukemije izvedene iz T ćelije, limfome izvedene iz B ćelije, limfome izvedene iz T ćelije, i tumore izvedene iz ćelije mastocita, i njihove kombinacije.

[0035] Izraz "delotvorna količina", kada se koristi da se opiše terapija za pojedinca koji boluje od nekog poremećaja,

se odnosi na količinu ili koncentraciju jedinjenja iz ovog pronalaka koja je delotvorna da se indukuje eksprimovanje TNF-srodnog apoptoza-indukujućeg liganda (TRAIL) u tkivima pojedinca.

[0036] Pojmovi "halo" ili "halogen" ili "halid" sami po sebi ili kao deo drugog supstituenta znače, osim ako nije drugačije navedeno, atom fluora, hlora, broma, ili joda, preporučljivo, atom fluora, hlora, ili broma.

[0037] "So" kao što je dobro poznato u toj oblasti obuhvata organsko jedinjenje kao što je 4 karboksilna kiselina, sulfonska kiselina, ili amin, u jonskom obliku, u kombinaciji sa anjonom. Na primer, kiseline u svom anjonskom obliku mogu da formiraju soli sa katjonima kao što su katjoni metala, na primer natrijum, kalijum, i slični; sa solima anonijaka kao što je NH4<+>ili katjonima različitih amina, uključujući tetraalkil amonijačne soli kao što je tetrametilamonijak, ili drugi katjoni kao što je trimetilsulfonijum, i slični. "Farmaceutski prihvatljiva" ili "farmakološki prihvatljiva" so je so formirana iz jona koji je odobren za humanu potrošnju i generalno je netoksičan, kao što je so hlorida ili so natrijuma. "Cviterjon" je interna so kao što se može formirati u molekulu koji ima najmanje dve jonizujuće grupe, jednu koja formira anjon i drugu katjon, koji služe da budu ravnoteža jedan drugom. Na primer, aminokiseline kao što je glicin mogu da postoje u obliku cviterjona. "Cviterjon" je so obuhvaćena ovde korišćenim značenjem. Jedinjenja iz ovog pronalaska mogu uzeti oblik soli. Pojam "soli" obuhvata soli dodatih slobodnih kiselina ili slobodnih baza koje su jedinjenja iz ovog pronalaska. Soli mogu da budu "farmaceutski prihvatljive soli." Pojam "farmaceutski prihvatljive soli" se odnosi na soli koje poseduju profile toksičnosti unutar opsega koji omogućava korisnost u farmaceutskim primenama. Farmaceutski neprihvatljive soli mogu isto tako da poseduju svojstva kao što je visoka kristalnost, koje imaju korisnost u praktičnoj primeni ovog pronalaska, kao što je na primer korisnost u postupku sinteze, prečišćavanja ili formulacije jedinjenja iz ovog pronalaska. "Farmaceutski ili farmakološki prihvatljiv" obuhvata molekularne entitete i supstance koji ne poseduju neželjenu, alergijsku ili drugu nepovoljnu reakciju kada su isporučeni životinji, ili čoveku, kako je prikladno. Za isporuku leka humanim subjektima, preparati treba da zadovolje sterilnost, pirogenost, i opšte standarde bezbednosti i čistoće kako je propisao Zavod za biološke standarde Savezne agencije za hranu i lekove SAD (FDA Office of Biologics standards).

PRIMERI

Opšti postupci

1

[0038] Sve reakcije su izvedene pod atmosferom argona sa suvim rastvaračima korišćenjem anhidrovanih uslova osim ako nije drugačije navedeno. Hemikalije su kupljene od kompanija Acros Organics, Oakwood Products, and Sigma-Aldrich. One su korišćene u stanju u kom su primljene osim ako nije drugačije napomenuto. Suvi dihlorometan (CH2Cl2) je dobijen destilacijom iznad kalcijum hidrida (CaH2). Suvi metanol (MeOH) je dobijen preko destilacije iznad strugodina magnezijuma. Reagensi su kupljeni na najvišem komercijalnom kvalitetu i korišćeni bez daljeg prečišćavanja, osim ako nije drugačije navedeno. Prinosi se odnose na hromatografski i spektroskopski (<1>H NMR) homogene materijale, osim ako nije drugačije navedeno. Reakcije su nadgledane pomoću tankoslojne hromatografije (TLC) su izvedene na 0,25 mm E. Merck ploče od silika gela (60F-254) uz upotrebu UV svetla kao sredstva vizualizacije, ili osnovnog vodenog kalijum permanganata (KMnO4), i toplote kao sredstva za razvoj. E. Merck silika gel (60, veličina čestice 0,040-0,063 mm) je korišćen za svetleću hromatografiju na koloni. Odvajanja pripremne tankoslojne hromatografije (PTLC) su izvedena na 0,50 mm E. Merck pločama od silika gela (60F-254). Koncentracija organskih rastvarača je izvedena na rotacionom isparivaču pod smanjenim pritiskom posle čega je usledila dalja evakuacija korišćenjem mehaničke pumpe sa dva stadijuma. NMR spektri su zabeleženi na instrumentima Bruker DRX-600, DRX-500, i AMX-400 i kalibrirani korišćenjem rezidualnog nedeuterisanog rastvarača kao interne reference (CHCl3 @ δ 7,26 ppm<1>H NMR, δ 77,16 ppm<13>C NMR; CD3OD @ δ 4,87 ppm<1>H NMR, δ 49,00 ppm<13>C NMR). Sledeće skraćenice (ili njihove kombinacije) su korišćene da bi se objasnili<1>H NMR mnogostrukosti: s = singlet, d = dublet, t =triplet, m = multiplet, br = široka. Maseni spektri visoke rezolucije (HRMS) su registrovani na Agilent LC/MSD TOF masenom spektrometru pomoću eksperimenata sa uređajem za refleksiju koji meri vreme leta jonizacijom elektroraspršivanjem. IR spektri su zabeleženi na bilo PerkinElmer Spectrum 100 FTIR spektrometru sa ATR pristupom ili Jasco 480 Plus FTIR spektrometru. Tačke topljenja su registrovane na aparatu Fisher-Johns 12-144 tačke topljenja i dati su bez ikakvih korekcija.

Sintetički postupci

[0039]

1

(4-hloropiridin-3-il)(2-(metiltio)-4,5-dihidro-1H-imidazol-1-il)metanon (Referentno jedinjenje 3)

[0040] Mešavina 4-hloronikotinske kiseline (1,00 g, 6,35 mmol) i SOCl2 (15 mL) je mešana na 90 °C tokom 1 sat. Uklanjanje SOCl2 rotacionim isparavanjem je dalo hidrohlorid hlorida 4-hloronikotinske kiseline kao bledožutu čvrstu supstancu, koja je postavljena pod balonom argona, ohlađena do 0 °C, i rastvorena u CH2Cl2 (45 mL). Rastvor 2-metiltio-2-imidazolin hidrojodid (1,32 g, 5,40 mmol) i Et3N (2,92 mL, 20,95 mmol) u CH2Cl2 (75 mL) je dodat preko kanule. Rastvor boje svetlog ćilibara je mešan na sobnoj temperaturi tokom noći. Posle 19 sati, CH2Cl2 (150 mL) je dodata i rastvor dobijen kao rezultat je opran sa zasićenim vodenim NaHCO3 (2 X 100 mL) i slanog rastvora (2 X 100 mL). Organski sloj je osušen (Na2SO4) i koncentrovan u vakumu. Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu (19:1 CH2Cl2/MeOH) je dalo 3 (1,32 g, 96%) kao svetložuti sirup.

Rf = 0.19 (silika gel, 19:1 CH2Cl2/MeOH)

IR (uredno) νmaks 1661, 1574, 1377, 1200, 903, 724 cm<-1>

<1>H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 8.56 (d, J = 5.5 Hz, 1 H), 8.54 (s, 1 H), 7.37 (d, J = 5.2 Hz, 1 H), 4.15 - 3.65 (m, 2 H), 3.93 (t, J = 8.3 Hz, 2 H), 2.37 (s, 3 H)

<13>C NMR (150 MHz, CDCl3) δ 162.1, 151.9, 148.6, 131.9, 124.7, 54.1, 48.5, 15.6 HRMS (ESI-TOF) izračunato. Za C10H10ClN3OSH<+>[M+ H<+>] 256.0306, pronađeno 256.0309

10-(2-metilbenzil)-2,3-dihidroimidazo[1,2-a]pirido[4,3-d]pirimidin-5(10H)-on (Referentno jedinjenje 4)

[0041] Mešavina 3 (1,30 g, 5,08 mmol), 2-metilbenzilamina (1,89 mL, 15,25 mmol), K3PO4 usitnjenog u prah (1,08 g, 5,08 mmol), i N,N-dimetilacetamida (10 mL) je zagrejana na refluksu tokom 1 sat. Mešavina dobijena kao rezultat je ohlađena i particionirana između CH2Cl2 (30 mL) i H2O (30 mL). Organski sloj je osušen (Na2SO4) i koncentrovan u vakumu. Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu (19:1 CH2Cl2/MeOH) i trituracija sa hladnim heksanima je dala 4 (1,17 g, 79%) kao belu čvrstu supstancu.

m.p. 182-188 °C (heksani)

1

Rf = 0.32 (silika gel, 19:1 CH2Cl2/MeOH)

IR (uredno) νmaks 1674, 1634, 1591, 1455, 1400, 1284, 747 cm<-1>

<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 9.15 (s, 1 H), 8.45 (d, J = 5.9 Hz, 1 H), 7.23 (d, J = 7.4 Hz, 1 H), 7.19 (t, J = 7.4 Hz, 1 H), 7.11 (t, J = 7.4 Hz, 1 H), 6.84 (d, J = 7.7 Hz, 1 H), 6.55 (d, J = 5.9 Hz, 1 H), 5.21 (s, 2 H), 4.20 (t, J = 8.9 Hz, 2 H), 3.96 (t, J = 8.9 Hz, 2 H), 2.41 (s, 3 H)<13>C NMR (150 MHz, CDCl3) δ 158.0, 154.6, 151.0, 150.2, 147.7, 135.0, 131.6, 131.0, 127.8, 126.7, 124.2, 111.9, 107.9, 50.2, 46.7, 45.3, 19.2

HRMS (ESI-TOF) izrač. za C17H16N4OH<+>[M H<+>] 293.1397, pronađeno 293.1397

0-(2-metilbenzil)-2,3,6,7,8,9-heksahidroimidazo[1,2-a]pirido[4,3-d]pirimidin-5(10H)-on (Referentno jedinjenje 5)

[0042] Mešavina 4 (300 mg, 1,03 mmol), PtO2 (60 mg), MeOH (3 mL), i TFA (3 mL) je hidrogenisana (45 psi) u Parr mešaču tokom 5 sati. Mešavina je filtrirana kroz Celite® podlogu da bi se uklonio katalizator, zatim je koncentrovana u vakumu. Bezbojni sirup je rastvoren u 1:1 EtOAc/H2O (40 mL), učinjen baznim dodavanjem 2 M NaOH (10 mL), i slojevi su odvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (40 mL). Kombinovani organski slojevi su oprani sa slanim rastvorom (20 mL), osušeni (Na2SO4), i koncentrovani u vakumu. Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu (19:1:0.1 CH2Cl2/Me- OH/NH4OH) je dalo 5 (244 mg, 80%) kao belu čvrstu supstancu.

m.p. 170-174 °C (MeOH)

Rf = 0,12 (silika gel, 19:1:0.1 CH2Cl2/MeOH/NH4OH)

IR (uredno) νmaks 3287, 1660, 1627, 1605, 1472, 1293, 919 cm<-1>

<1>H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 7.20 - 7.14 (m, 3 H), 6.92 - 6.90 (m, 1 H), 4.98 (s, 2 H), 4.05 (t, J = 9.4 Hz, 2 H), 3.82 (t, J = 9.4 Hz, 2 H), 3.68 (t, J = 1.9 Hz, 2 H), 2.95 (t, J = 5.8 Hz, 2 H), 2.30 (s, 3 H), 2.28 - 2.25 (m, 2 H), 1.66 (br s, 1 H)

<13>C NMR (150 MHz, CDCl3) δ 160.0, 152.8, 147.2, 134.6, 133.8, 130.7, 127.4, 126.8, 123.7, 106.6, 49.9, 46.0, 45.2, 42.7, 42.2, 25.5, 19.1

HRMS (ESI-TOF) izračunato za C17H20N4OH+ [M H<+>] 297.1710, pronađeno 297.1709

1

7-benzil-10-(2-metilbenzil)-2,6,7,8,9,10-heksahidroimidazo[1,2-a]pirido[4,3-d]pirimidin-5(3H)-on (Referentno jedinjenje 1)

[0043] Rastvor 5 (230 mg, 0,78 mmol) i benzaldehida (103 µL, 1,02 mmol) u CH2Cl2 (2,5 mL) je tretiran sa AcOH (76 µL, 1,35 mmol) i Na(OAc)3BH (267 mg, 1,26 mmol) na sobnoj temperaturi. Mešavina je mešana tokom 4 sata, zatim je razblažena sa CH2Cl2 (10 mL) i oprana sa zasićenim vodenim NaHCO3 (10 mL). Vodeni sloj je ekstrahovan sa CH2Cl2 (10 mL). Kombinovani organski slojevi su bili osušeni (Na2SO4) i koncentrovani u vakumu. Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu (19:1 CH2Cl2/MeOH) je dalo 1 (261 mg, 87%) kao belu čvrstu supstancu.

m.p. 166-168 °C (MeOH)

Rf = 0.25 (silika gel, 19:1 CH2Cl2/MeOH)

IR (uredno) νmaks 2866, 2358, 2339, 1616, 1456, 983 cm<-1>

<1>H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 7.37 - 7.28 (m, 4 H), 7.26 - 7.14 (m, 4 H), 6.93 - 6.91 (m, 1 H), 4.98 (s, 2 H), 4.06 (t, J = 9.4 Hz, 2 H), 3.84 (t, J = 9.4 Hz, 2 H), 3.64 (s, 2 H), 3.38 (s, 2 H), 2.54 (t, J = 5.7 Hz, 2 H), 2.37 (t, J = 5.5 Hz, 2 H), 2.29 (s, 3 H) 13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ 159.8, 152.9, 147.1, 137.6, 134.6, 133.7, 130.7, 129.2, 128.5, 127.5, 127.4, 126.8, 123.7, 105.7, 62.1, 49.9, 49.6, 48.6, 46.4, 45.3, 26.1, 19.1 HRMS (ESI-TOF) izračunato za C24H26N4OH<+>[M H<+>] 387.2179,

pronađeno 387.2189

Metil 2-(metiltio)-4,5-dihidro-1H-imidazol-1-karboksilat (Referentno jedinjenje 6)

[0044] Rastvor 2-metiltio-2-imidazolin hidrojodida (12,21 g, 50 mmol) i Et3N (16 mL, 115 mmol) u CH2Cl2 (50 mL) na 0 °C je tretiran sa metil hloroformatom (5,0 mL, 65 mmol) ukapavanjem. Mešavina je ostavljena da se zagreje do sobne temperature i mešana je tokom noći. Posle 44 sata, mešavina je razblažena sa EtOAc (200 mL), mešana, zatim je

1

filtrirana da bi se uklonile nerastvorljive soli. Soli su isprane sa EtOAc (50 mL). Filtrat je koncentrovan u vakumu, i dao je 6 (8,47 g, 97%) kao čvrstu belu supstancu.

Rf = 0.33 (silika gel, 19:1 CH2Cl2/MeOH)

IR (uredno) νmaks 1717, 1576, 1429, 1378, 1218, 1023, 758 cm<-1>

<1>H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 3.92 - 3.85 (m, 4 H), 3.78 (s, 3 H), 2.41 (s, 3 H)

13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ 159.7, 152.5, 53.9, 53.2, 47.5, 15.2

HRMS (ESI-TOF) izrač. za C6H10N2O2SH<+>[M H<+>] 175.0536, pronađeno 175.0539

N-(2-metilbenzil)-4,5-dihidro-1H-imidazol-2-amin (Referentno jedinjenje 7)

[0045] Rastvor 6 (1,5 g, 8,61 mmol) i 2-metilbenzilamina (1,08 mL, 8,74 mmol) u MeOH (48 mL) je tretiran sa AcOH (4,8 mL). Rastvor je mešan na nežnom refluksu. Posle 45 sati, rastvor je ohlađen do sobne temperature i koncentrovan u vakumu. Ostatak je rastvoren u CH2Cl2 (100 mL), opran sa 1 M NaOH (55 mL), slanim rastvorom (55 mL), osušen iznad Na2SO4, filtriran, i koncentrovan u vakumu. Trituracija sa hladnim CH3CN je dala 7 (1,42 g, 87%) kao čvrstu supstancu bele boje.

Rf = 0,14 (silika gel, 9:1:0.1 CH2Cl2/MeOH/NH4OH)

IR (uredno) νmaks 2862, 2358, 1684, 1635, 1521, 1349, 1238 cm<-1>

<1>H NMR (600 MHz, CD3OD) δ 7.25 - 7.15 (m, 4 H), 4.34 (s, 2 H), 3.61 (s, 4 H), 2.32 (s, 3 H)

<13>C NMR (150 MHz, CD3OD) δ 163.0, 161.5, 137.4, 136.7, 131.4, 128.8, 128.5, 127.2, 46.2, 45.8, 18.9 HRMS (ESI-TOF) izračunato za C11H15N3H<+>[M

H<+>] 190.1339, pronađeno 190.1344.

7-benzil-4-(2-metilbenzil)-1,2,6,7,8,9-heksahidroimidazo[1,2-a]pirido[3,4-e]pirimidin-5(4H)-on (Jedinjenje 2)

[0046] Mešavina metil 1-benzil-4-oksopiperidin-3-karboksilat hidrohlorida, 8, (568 mg, 2,0

2

mmol) i 7 (795 mg, 4,2 mmol) je tretirana sa rastvorom natrijum metoksida u MeOH (0,5 M, 3,0 mL, 1,5 mmol). Mešavina je mešana na blagom refluksu tokom noći. Posle 18 sati, reakcija je ohlađena do sobne temperature, razblažena sa CH2Cl2 (50 mL), oprana sa slanim rastvorom (20 mL), osušena iznad Na2SO4, filtrirana, i koncentrovana u vakumu. Prečišćavanje hromatografijom na silica gelu (19:1 CH2Cl2/MeOH) je dalo 2 (753 mg, 97%) kao svetlo žutu čvrstu supstancu.

m.p. 132-135 °C (MeOH)

Rf = 0.25 (silika gel, 19:1 CH2Cl2/MeOH)

IR (uredno) νmaks 2750, 2358, 1646, 1616, 1487, 1296, 738 cm<-1>

<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.33 (m, 5 H), 7.11 (m, 4 H), 5.05 (s, 2 H), 3.89 (m, 4 H), 3.67 (s, 2 H), 3.32 (s, 2 H), 2.68 (m, 2 H), 2.51 (m, 2 H), 2.40 (s, 3 H)<13>C NMR (150 MHz, CDCl3) δ 161.6, 153.4, 145.8, 137.7, 135.7, 134.4, 130.4,129.3, 128.6, 127.5, 127.0, 126.0, 125.4, 102.1, 62.5, 50.7, 49.7, 48.3, 47.1, 43.3, 27.0, 19.4 HRMS (ESI-TOF) izračunato za C24H26N4OH<+>[M H<+>] 387.2179, pronađeno 387.2166

Tabela 1. Poređenje<13>C NMR hemijskih prelazaka za jedinjenja 1, 2, i 9

JWL JWL NCI MK

(1) (2) (2) (9)

159,8 161,6 161,5 160,7

152,9 153,4 153,4 160,4

147,1 145,8 145,8 154,5

137,6 137,7 137,6 138,4

134,6 135,7 135,7 137,0

133,7 134,4 134,3 133,6

130,7 130,4 130,3 130,9

129,2 129,3 129,3 129,3

128,5 128,6 128,6 129,0

127,5 127,5 127,5 128,5

127,4 127,0 126,9 128,2

126,8 126,0 126,0 127,3

123,7 125,4 125,3 126,3

105,7 102,1 102,2 109,2

62,1 62,5 62,4 62,7

49,9 50,7 50,5 50,1

49,6 49,7 49,6 49,6

48,6 48,3 48,3 46,9

46,4 47,1 47,1 44,5

45,3 43,3 43,3 40,6

26,1 27,0 26,9 32,4

19,1 19,4 19,4 19,3

Spektri su registrovani na 150 MHz u CDCl3.

Rendgenske kristalne strukture

[0047] Dobijene su rendgenske kristalne strukture jedinjenja 2 (kao sintetički uzorak 2b) i 9. Parametri su dati dole u tekstu, i strukture dobijene date su na Slikama 5 i 6, prema opisanom redosledu.

Jedinjenje 2 (ima i naziv HIPPO)

[0048] Studije rendgenske difrakcije jednog kristala su rađene na Bruker X8 APEX II Ultra CCD difraktometru opremljenom sa Mo K α zračenjem Bistra bezbojna ploča dimenzija 0,18 x 0,16 x 0,08 mm jedinjenja 2 je montirana na Cryoloop sa Paratone uljem. Podaci su prikupljeni u pari sa gasom azotom na 100 K korišćenjem snimaka. Rastojanje kristala do detektora je bilo 50 mm korišćenjem 5 s vremena izlaganja sa 1,0° širinom snimka. Prikupljanje podataka je bilo 99,9% završeno do 25.00° u θ. Ukupno 14019 refleksija je prikupljeno koje su obuhvatale indekse, -11<=h<=10, 11<=k<=11, -19<=l<=18.4833 refleksije su, utvrđeno je bile simetrično nezavisne, sa Rint od 0,0391. Indeksiranje i rafiniranje jedinične ćelije je ukazalo na primitivnni, triklinički kristalni sistem. Utvrđeno je da je prostorna grupa P-1. Podaci su integrisani korišćenjem Bruker SAINT softverskog programa i skalirani korišćenjem SADABS softverskog programa. Rastvor direktnim postupcima (SHELXT) je proizveo kompletan model faziranja dosledan sa predloženom strukturom.

[0049] Svi atomi nevodonika su rafinisani anizotropno, potpuno matričnim najmanjim kvadratima (SHELXL). Svi atomi vodonika su postavljeni korišćenjem modela 'vožnje'. Njihove pozicije su sadržale s obzirom na njihov roditeljski atom korišćenjem odgovarajuće HFIX naredbe u SHELXL.

[0050] Kristalografski pdoaci su pregledno prikazani dole u tekstu. Puni metrički parametri su dostupni iz CCDC pod brojem 981022. Videti Sliku 5.

Podaci o kristalu i prečišćavanje strukture za jedinjenje 2

[0051]

Idantifikacioni kod Janda01(2)

Empirijska formula C24H26N4O

Molekularna formula C24H26N4O

Molarna masa 386,49

Temperatura 100 K

Talasna dužina 0,71073

Kristalni sistem Triklinski

Prostorna grupa P-1

Dimenzije jedinične ćelije a = 8,1173(11) Åα= 85,638(3)°<b = 8,4320(11)>Å β= 85,045(3)° c = 14,6360(19) Åγ= 83,059(3)°Zapremina 988,5(2) Å<3>

Z 2

Gustina (izračunata) 1.298 Mg/m<3>

Koeficijent apsorpcije 0,082 mm<-1>1

F(000) 412

Veličina kristala 0,18 x 0,16 x 0,08 mm<3>

Boja kristala, spoljni oblik bezbojna pločica

Teta opseg za prikupljanje podataka 2,439 do 29,252°

Opsezi indeksa -11<=h<=10, -11<=k<=11, -19<=l<=18

Prikupljeno refleksija 14019

2

Nezavisne refleksije4833 [R(int) = 0,0391]

Potpunost do teta = 25,000° 99,9%

Korekcija apsorpcije Poluempirijski iz ekvivalenta

Maks. i min. prenos 0,0976 i 0,0673

Postupak rafiniranja Potpuno matrični najmanji kvadrat na F<2>

Podaci / ograničenja / parametri 4833 / 0 / 263

Ispravnost usklađenosti na F<2>1,027

Finalni R indeksi [I>2sigma(I)] R1= 0,0433, wR2 = 0,1082

R indeksi (svi podaci) R1 = 0,0697, wR2 = 0,1181

Koeficijent ekstinkcije Nije dostupno

Najveća razlika vršne i najdonje 0,320 i -0,204 e.Å<-3>

vrednosti

[0052] Bezbojni kristal jedinjenja 9 je montiran na Cryoloop sa uljem Paratone i podaci su prikupljeni na 100 K na Bruker APEX II CCD sa Mo K α zračenjem (generisanim iz Mo rotacione anode). Podaci su ispravljeni za apsorpciju sa SADABS i struktura je rešena direktnim postupcima.

[0053] Svi nevodonični atomi su rafinirani anizotropno potpuno matričnim najmanjim kvadratima na F<2>i svi atomi vodonika su postavljeni u izračunatim pozicijama sa odgovarajućim parametrima kretanja.

Najviša vršna vrednost 0,20 na 0,42240,6962 0,1821 [0,63 A iz C9]

Najdublja donja vrednost -0,23 na 0,09120,4660 0,3644 [0,93 A iz C17]

Kristalografski parametri su sažeto prikazani dole u tekstu. Puni metrički parametri su dostupni iz CCDC pod brojem 981024. Videti Sliku 6.

Podaci o kristalu i struktura rafiniranja za jedinjenje 9

[0054]

Idantifikacioni kod Janda03(9)

Empirijska formula C24H26N4O

Molekularna formula C24H26N4O

Molarna masa 386,49

Temperatura 100 K

Talasna dužina 0,71073

Kristalni sistem Triklinski

Prostorna grupa P-1

Dimenzije jedinične ćelije a = 5,6439(18) Åα= 93,194(9)°<b = 10,537(4)>Å β= 91,021(6)° c = 16.502(5) Åγ= 96,745(5)°Zapremina 972,8(6) Å<3>

Z 2

Gustina (izračunata) 1.319 Mg/m<3>

Koeficijent apsorpcije 0,083 mm<-1>

F(000) 412

Veličina kristala 0,22 x 0,02 x 0,02 mm<3>

Boja kristala, spoljni oblik Bezbojni štapić

Teta opseg za prikupljanje podataka 1,95 do 26,34°

Opsezi indeksa -6<=h<=6, -13<=k<=12, -20<=l<=18

Prikupljeno refleksija 10564

Nezavisne refleksije3904 [R(int) = 0,0507]

Potpunost do teta = 25,000° 99,9%

Korekcija apsorpcije Poluempirijski iz ekvivalenta

Maks. i min. prenos 0,0976 i 0,0673

Postupak rafiniranja Potpuno matrični najmanji kvadrat na F<2>

Podaci / ograničenja / parametri 3904 / 0 / 263

Ispravnost usklađenosti na F<2>1003

Finalni R indeksi [I>2sigma(I)] R1 = 0,0430, wR2 = 0,0942

R indeksi (svi podaci) R1 = 0,0719, wR2 = 0,1068

Najveća razlika vršne i najdonje 0,201 i -0,229 e.Å<-3>

vrednosti

Biološki postupci

Postupci ćelijske kulture:

[0055] RAW 264.7 ćelije (ATCC TIB-71) su održavanje u podlozi za rast Dulbekoove modifikovane Iglove podloge (DMEM sa 4,5 g/L glukoze i piruvata, Gibco BRL, Invitrogen Corp., USA) suplementirano sa L-glutaminom, penicillinom/streptomicinom, neesencijalnim amino kiselinama (100x koncentrovanih, Invitrogen Corp.), 10mM HEPES, pH 7,4 (1 M koncentrovano, Invitrogen), i 10% seruma goveđeg fetusa (FBS, Hyclone); (V. V. Kravchenko, R. J. Ulevitch, G. F. Kaufmann, Methods Mol. Biol. 2011, 692, 133-145).

RNK RT-PCR Eksperimenti:

2

[0056] Ćelije su raspoređene u pregrade na pločama sa 6 pregrada (Corning Costar 3506) razblažene 1:5 u 3 mL podloge za rast, podloga je promenjena pošto su se ćelije prislonile. Posle inkubacije od 12 sati, ćelije su tretirane sa opisanom koncentracijom jedinjenja u DMSO, i inkubirane u prisustvu tog jedinjenja ili pomoćnog farmaceutskog sredstva tokom opisane količine vremena. U ovom trenutku, podloga je uklonjena i ćelije su tretirane sa TRIzol reagensom (Life Technologies), i RNK je ekstrahovana preko obuhvaćenog protokola. RNK koncentracija je određena upotrebom Hitachi U-2000 UV-Vis spektrofotometra i uzorci su razblaženi do 12 µg / 5 µL u H2O. Ovo rešenje je razblaženo 1:5 u H2O i 1 µL ovog rastvora je pomešano sa 50 µL od RT-PCR reakcione mešavine (Qiagen Onestep RT-PCR komplet) i početnice TNF-srodnog apoptozaindukujućeg liganda (TRAIL) Mišja: mTRAIL-F: 5’-GACACCATTTCTACAGTTCCAG-3’ (SEK ID BR.1), mTRAIL-R: 5’-CGGATAGCTGGTGTACTTGTAG-3’ 3’ (SEK ID BR.2). Humana: hTrail-F2: 5’-ACAGACCTGCGT- GCTGATCGTG-3’ 3’ (SEK ID BR. 3) (ekson 1) hTrail-R2: 5’-ACGAGCTGACGGAGTTGCCAC-3’ 3’ (SEK ID BR.4) (ekson 2).

[0057] RT-PCR je provučen na PCR sistemu Applied Biosystems Gene Amp 9700 PCR. RT-PCR proizvodi su analizirani na 5,5% akrilamidnom gelu u TAE puferu (T. Maniatis, E. F. Fritsch, J. Sambrook, Molecular Cloning: a Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, 1989).

[0058] RAW 264.7 ćelije su raspoređene u pregrade na ~500 ćelije/pregrade u Costar pločama sa 96 pregrada (Corning Inc, NY) u Dulbekovoj modifikovanoj Iglovoj podlozi bez fenola (DMEM sa 4,5 g/L glukoza, Gibco BRL, Invitrogen Corporation, USA) dopunjena sa 10% fetusnog goveđeg seruma (Gibco BRL, Invitrogen Corp., USA), L-gluatamin, piruvat, penicilin/streptomicin, i neesencijalne aminokiseline (100x koncentrovano iz kompanije Invitrogen). Posle 4 sata, ćelije su tretirane trostruko sa pomoćnim farmaceutskm sredstvom, liznim puferom, 20 µM jedinjenja 2 (HIPPO), ili 20 µM od 18 izvedenih jedinjenja (A do R) kao što je navedeno u Tabeli 1, gore u tekstu. Posle 48 sati, održivost ćelija je procenjena kolorimetrijskim XTT formazan ogledom (Cell Signaling Tech.) prema protokolu proizvođača. Relativna apsorpcija je normalizovana na ćelije tretirane pomoćnim farmaceutskim sredstvom (negativna kontrola) i ćelije tretirane liznim puferom (pozitivna kontrola) korišćenjem Prism 5 za Mac (GraphPad). Slika 7 sažeto prikazuje rezultate ovog ogleda. Slika 7 pokazuje poređenje jedinjenja označenih A do R naspram HIPPO u njihovoj sposobnosti da ublaže razmnožavanje RAW 264.7 ćelija kancera. Jedinjenja označena A do F ispoljavaju sličnu aktivnost sa HIPPO, pokazuju da je modifikacija supstituenta amid azota izvan tricikličnog jezgra dobro podneta i da predstavlja auksofor.

2

Claims

Patentni zahtevi 1. Jedinjenje iz formule (I)

pri čemu Cyc je 5-člani do 8-člani monociklični heterociklil prsten koji obuhvata jedan atom azota, pri čemu je grupa iz formule Ar<1>-CR2 vezana na prsten atoma azota; Ar<1>i Ar<2>su svaki nezavisno aril grupe koje su supstituisane sa 0, 1, ili 2 J grupama; R je nezavisno H ili (C1-C6)alkil; J je nezavisno (C1-C6)alkil, (C3-C9)cikloalkil, (C3-C9)cikloalkil(C1-C6)alkil, halo, ili (C1-C6)haloalkil; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
2. Jedinjenje iz patentnog zahteva 1, pri čemu je jedinjenje obuhvaćeno formulom (IA) podvrste

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
3. Jedinjenje iz patentnog zahteva 2, pri čemu su svako Ar<1>i Ar<2>fenil grupa supstituisana sa 0, 1, ili 2 J grupama; i, 2 R pri svakoj pojavi je nezavisno H ili (C1-C6)alkil; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
4. Jedinjenje iz patentnog zahteva 1, pri čemu je jedinjenje

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
5. Jedinjenje iz formule (I)

pri čemu Cyc je 5-člani do 8-člani monociklični heterociklil prsten koji obuhvata jedan atom azota, pri čemu je grupa iz formule Ar<1>-CR2 vezana na atom azota; Ar<1>i Ar<2>su aril grupe koje su supstituisane sa 0, 1, ili 2 J grupama; R je nezavisno H ili (C1-C6)alkil; J je nezavisno (C1-C6)alkil, (C3-C9)cikloalkil, (C3-C9)cikloalkil(C1-C6)alkil, halo, ili (C1-C6)haloalkil; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu za lečenje kancera.
6. Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 5, pri čemu je to jedinjenje jedinjenje iz formule (IA)

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
7. Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 6, pri čemu je svako Ar<1>i Ar<2>fenil grupa supstituisana sa 0, 1, ili 2 J grupama.
8. Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 5, pri čemu je jedinjenje iz formule (I) formula 2
9. Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 5, pri čemu je taj kancer izabran iz grupe koja obuhvata kancer jajnika, debelog creva, dojke, jetre, pankreasa, gastrointestinalnog trakta, glave i vrata, grlića materice, prostate, kancere pluća, melanome, glioblastome, mijelome, tumore centralnog nervnog sistema (CNS) izvedene iz neuroblastoma, monocitnih leukemija, leukemija izvedenih iz B ćelije, leukemija izvedenih iz T ćelije, limfoma izvedenih iz B ćelije, limfoma izvedenih iz T ćelije, i iz matične ćelije izvedene iz tumora, i njihovih kombinacija. 1