RS51169B

RS51169B - Kamptotecini konjugirani na položaju 7 sa cikličnim peptidima kao citostatička sredstva

Info

Publication number: RS51169B
Application number: RSP-2009/0152A
Authority: RS
Inventors: Sergio Penco; Lucio Merlini; Franco Zunino; Loredana Vesci; Hong Ni Ming; Claudio Pisano; Alma Dal Pozzo; Giuseppe Giannini; Maria Ornella Tinti; Domenico Alloatti; Sabrina Dallavalle
Original assignee: Sigma-Tau Industrie Farmaceutiche Riunite S.P.A.; Istituto Nazionale Per Lo Studio E La Cura Dei Tumori
Priority date: 2004-05-13
Filing date: 2005-05-04
Publication date: 2010-10-31
Also published as: ITRM20040240A1; CA2563708A1; BRPI0510983A; MXPA06012884A; JP4805917B2; PL1753776T3; KR20070012530A; JP2008504235A; PT1753776E; CN1953989B; AR048949A1; ES2321114T3; US7705012B2; EP1753776A1; US20080033003A1; AU2005243417A2; AU2005243417A1; CY1108985T1; HRP20090146T3; TW200606165A

Description

KAMPTOTECINIKONJUGIRANI

NA POLOŽAJU 7 SA CIKLIČNIM

PEPTIDIMA KAO CITOSTATIČKA

SREDSTVA

Područje pronalaska

Ovaj pronalazak odnosi se na jedinjenja sa citotoksičnim dejstvom koji se sastoje od ciklopeptida koji sadrže RGD sekvencu i derivata kamptotecina, postupke njihovog dobijanja, njihovu upotrebu kao lekove i pripreme koji ih sadrži.

Naročito, jedinjenja opisani u ovom pronalasku obdareni su i sa visokim afinitetom za integrine ctvP3 i <xvpsi selektivnim citotoksičnim dejstvom na ljudske stanične linije u mikromolekularnim koncentracijama.

Pozadina pronalaska

Hemoterapijska sredstva protiv raka su lekovi sa maksimalno ograničenim terapijskim prozorom. Zapravo, budući da njihovo je citotoksično dejstvo neselektivno, ona mogu bez razlike oštetiti sve telesne stanice sa kojima dođu u kontakt.

Trenutno postoje problemi selektivnog usmeravanja citotoksičnog sredstva protiv stanica tumora, što bi omogućilo sredstvu da pojača svoje dejstvo bez oštećenja stanica zdravih okolnih tkiva, ili barem uz ograničavanje štete što je više moguće.

U literaturi, opisano je da blokiranje integrina avP3i avPsupotrebom selektivnih ciklopeptida, referentnim jedinjenjem smatra se ciklopentapeptid c(Arg-Glv-Asp-D-Phe-Val)

{ JACS,1997., 119, 1328-35; Međunarodna patentna prijava objavljena kao WO 97/06791), ili upotrebom monoklonskih antitela{ Cell,1994., 79, 1157-64) dovodi do zaustavljanja angiogeneze i do smanjenja rasta tumora. Dodatno, primećeni su takođe iantimetastatski učinci( J. Clin. invest,1995., 96, 1815). Brooks i saradnici( Science,1994., 264, 569-71) su izvestili da endotelne stanice tumorske vaskuiature i tumorske stanice same po sebi poželjno eksprimiraju integrin avp3, u poređenju sa mirnim stanicama normalnog tkiva. Među jedinjenjima u naprednom stadijumu kliničkog razvoja, možemo pomenuti c(Arg-Gly-Asp-D-Phe-MeVal), ili EMD 121974 ili cilengitid.

Ruoslati i saradnici( Current Opinion in Oncology,1998., 10, 560-5) pokazali su da RGD analozi koji se vežu za endotel tumora, kad su konjugirani sa citotoksičnim sredstvom doksorubicinom, stvaraju jedinjenja koja su delotvornija i manje toksična od samog doksorubicina. Ti autori su takođe pokazali, bez bilo kakve opravdane sumnje, da se učinak može pripisati konjugaciji za RGD, budući da je vezivanje antagonizirano samim slobodnim peptidom (Arap, Pasqualini i Ruoslati:Science,1998., 279, 377-380). Kasnije, isti autori izveli su druge eksperimente koje se sastoje od hemijskog vezivanja pro-apoptotične sekvence peptida za RGD analog, pokazujući da su nova jedinjenja selektivno toksična za angiogene endotelne stanice i imaju antikancerozno dejstvo kod miševa (Ruoslati:Nature Medicine,1999., 5, 1032-8).

Marcus i saradnici, u Međunarodnoj patentnoj prijavi objavljenoj kao WO 01/17563, opisuju specifično antikancerozno dejstvo citotoksičnih sredstva, kao što je kamptotecin, konjugiranih pomoću umetka, koji se sastoji od jedne ili više aminokiselina, za nepeptidni inhibitorni antagonist integrina avP3i ctvP3-

Aoki i saradnici, opisuju uCancer Gene Therapy,2001, 8, 783-787, specifično antikancerozno dejstvo histidiliranog oligolizina konjugiranog sa RGD sekvencom, otkrivajući rezultate usađivanja tumora kod miševa.

Koncept vezivanja za staničnu površinu posredovanog integrinima predložen je za prenos gena (Hart, i suradnici:J. Biol. Chem.,1994., 269,12468-12474).

Ustanovljeno je da 7-iminometil ili 7-oksimetil konjugirani derivati kamptotecina, moguće pomoću odgovarajućih umetaka, sa derivatima ciklopeptida koji sadrže RGD sekvencu, obdareni su sa visokim, selektivnim antikanceroznim dejstvom i mogu se korisno upotrebiti za dobijanje lekova za lečenje tumora.

Na osnovu njihovog selektivnog citotoksičnog dejstva na tumorske stanice, jedinjenja saglasno ovom pronalasku daju lekove sa manjim i manje ozbiljnim nuspojavama.

Detaljniopispronalaska

Predmet ovog pronalaska su derivati kamptotecina konjugirani sa derivatima ciklopeptida koji sadrže RGD sekvencu. Dobijene molekule zadržavaju neizmenjene i citotoksične osobine originalnih kamptotecina i osobine vezivanja integrina sa afinitetom uporedivim sa onim primećenim kod nekonjugiranih ciklopeptida. Rezultat ove kombinacije je pogodovati koncentraciji citotoksičnog sredstva u onim stanicama koje najviše eksprimiraju integrine tipa otv(33i avPs(za usađivanje). Citotoksično sredstvo iskazuje svoje intracelularno dejstvo u konjugiranom i/ili slobodnom obliku pomoću enzimskog ili hidrolitičnog dejstva.

Cilj ovog pronalaska su jedinjenja formule (I)

u kojima:

i je 0 ili 1;

R, je grupa -CH=N-(0)m-R2-Z-X-Y;

gde m je 0 ili 1;

R2je odabran iz grupe koju sačinjavaju linearni ili razgranjeni CrC7 alkilen, linearni ili razgranjeni C2-C7alkenilen, C3-C10cikloalkilen, C3-C10cikloalkenilen, C6-C14arilen, arilen (C6-Ci4)-alkilen (CrC6), alkilen (CrC6)-arilen (C6-C14), aromatski ili nearomatski heterocikl (C3-C14), koji sadrži najmanje jedan heteroatom izabran iz grupe koju sačinjavaju O, N, S, heterocikloalkilen (C3-C10koji sadrži najmanje jedan heteroatom izabran iz sgrupe koju sačinjavaju O, N, S)-alkilen (C^Cs), alkilen (C^CeJ-heterocikloalkilen (C3-C10koji sadrži najmanje jedan heteroatom izabran iz grupe koju sačinjavaju O, N, S); poliaminoalkil grupa formule -(CH2)mi-NR8-(CH2)ni-NR9-(CH2-CH2-CH2-NR9)p1-H, gde mii n1tkoji mogu biti jednaki ili različiti, su celi broj od 0 do 6;

RBi R9, koji mogu biti jednaki ili različiti, izabrani su iz grupe koju sačinjavaju H, linearni ili razgranjeni C,- C6 alkil, Boe, Cbz; monosaharidi, kao što je 6-D-galaktozil, ili 6-D-glukozil; svaka od gore navedenih grupa može po potrebi biti supstituirana sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koju sačinjavaju CN, NOz, NH2, OH, SH, COOH, COO-(alkil)(C1-C5), CONH-(alkil)(C1-C5), S03H, S03-(alkil)(Cn-C5), pritom aikil grupa je linearna ili razgranjena; atom halogena;

Z je ili odsutan, ili izabran od -NH-, -CO-, -O-;

X je ili odsutan, ili je izabran iz grupe koju sačinjavaju - COCHR3NH-, -COCHR6(CH2)n2R4-, - R4-CH2(OCH2CH2)n3OCH2R4-, -R4(Q)R4-, -R5[Ar<g->NH(CH2)n1CO]n4Rs-, -RS-[N-gvanidinopropil-Gly]n3R5-, -CON [CH2)n4NHR7]CH2-, gdje n, je celi broj od 2 do 6, n2je celi broj od 0 do 5, n3je celi broj od 0 do 50, n4je celi broj od 2 do 7;

R3 je H ili linearni ili razgranjeni d-C4alkil, po potrebi supstituiran sa -COOH, -CONH2, -NH2ili -OH; C6-C14aril;

R4je izabran iz grupe koju sačinjavaju: -NH-, -CO-, -CONH-, -NHCO-;

R5je ili odsutan ili je -R4(Q)R4-;

R6je ili vodorodni atom, -NH2;

R7je vodorodni atom ili linearni ili razgranjeni ( C,- CA) alkil;

Q je izabran iz grupe koju sačinjavaju: linearni ili razgranjeni d-C6 alkilen; linearni ili razgranjeni C3-Cio cikloalkilen; linearni ili razgranjeni C2-C6alkenilen; linearni ili razgranjeni C3-C10ciklo-alkenilen; C6-Ci4arilen; arilen (C6-C14)-alkilen; (C^Ce), alkilen (CrCgJ-arilen (C6-C14); aromatski ili nearomatski heterociklil (C3-C14), koji sadrži najmanje jedan heteroatom izabran iz grupe koju sačinjavaju O, N, S;

Y je formula c(Arg-Gly-Asp-AArAA2), u kojoj:

c znači ciklički;

AAtje izabran iz grupe koju sačinjavaju: (D)-Phe, (D)-Trp, (D)-Tyr, (D)-2-naftilAla, (D)-4-terbutil-Phe, (D)-4,4'-bifenil-Ala, (D)-4-CF3-Phe, (D)-4-acetilamino-Phe;

AA2je izabran iz grupe koju sačinjavaju: NW-CH[(CH2)n7-CO]-CO, NW-CH[(CH2)n5-NM-CO, NW-[4-(CH2)ns-CO]-Phe, NW-[4-(CH2)n5-NH]-Phe, [NW]-Gly, NW-Val, gde W je odabran od

H, linearnog ili razgranjenog d-C6alkila, -(CH2)n5-COOH gde n7je cijeli broj od 0 do 5, 4-karboksibenzil, 4-aminometilbenzil;

Ni-oksidi, racemične smese, njihovi pojedinačni enantiomeri, njihovi pojedinačni dijastereomeri, oblici E i Z, njihove smese, farmaceutski prihvatljive soli.

Ovaj pronalazak takođe pruža postupke dobivanja gore pomenutih jedinjenja formule (I).

Ovaj pronalazak sadrži upotrebu jedinjenja sa gore pomenutom opštom formulom (I) kao aktivnih sastojaka za lekove, i naročito za lekove koji su korisni kao inhibitori topoizomeraze I. Među terapijskim primenama koje proizlaze iz inhibicije topoizomeraze I, pominjemo tumore i parazitske ili virusne infekcije.

Obzirom na njihova naročita farmakološka svojstva, jedinjenja formule (I) takođe su korisni za dobijanje lekova za lečenje tumora i njihovih metastatskih oblika.

Ovaj pronalazak takođe sadrži farmaceutske proiyvode koji sadrže jedinjenja formule (I) kao aktivne sastojke, u smesama sa najmanje jednim farmaceutski prihvatljivim nosačem i/ili pomoćnim sredstvom.

Jedinjenja saglasno ovom pronalazku su rezultat kondenzacije molekule kamptotecina, funkcionalizirane na položaju 7, sa ciklopeptidom koji sadrži sekvencu Arg-Gly-Asp. Ova strukturna kombinacija ima prednost favoriziranja koncentracije citotoksičnog sredstva (kamptotecina) u stanicama koje najviše eksprimiraju integrine tipa avP3i avPs. Citotoksično sredstvo iskazuje svoje dejstvo u konjugiranom i/ili slobodnom obliku preko enzimskog ili hidrolitičnog dejstva.

Definicije raznih funkcionalnih grupa i ostataka, kao i definicije farmaceutski prihvatljivih soli koje se pojavljuju u gore pomenutoj formuli (I), su uobičajeno znanje bilo kojeg stručnog hemičara i nisu potrebne naročite definicije. Međutim, referenca na takve grupe može se pronaći u tehničkoj i patentnoj literaturi, npr. u Međunarodnim patentnim prijavama objavljenim kao WO 00/53607 (derivati kamptotecina koji imaju antitumorsko dejstvo), VVO 03/101995 (kamptotecin s modificiranim laktonskim prstenom; i=1) i VVO 03/101996 (ester na položaju 20 kamptotecina), prijavljenima u ime sadašnjeg podnositelja.

Jedna početna grupa poželjnih jedinjenja sastoji se od jedinjenja formule (I) u kojima m = 1. U ovoj prvoj grupi, R2 je poželjno alkilen, i poželjnije metilen ili etilen, X je odsutan.

Još jedna grupa poželjnih jedinjenja sastoji se od jedinjenja formule (I) u kojima X = R4CH2(OCH2CH2)n3OCH2R4].

Najpoželjnija jedinjenja prema ovom pronalazku su sljedeći:

dalje u tekstu označen kao ST2686; dalje u tekstu označen kao ST2724; i

dalje u tekstu označen kao ST2742;

Jedinjenja formule (I) mogu se pripremiti postupkom koji je niže opisan i prikazan primerima za poželjna jedinjenja saglasno pronalasku. Ovaj postupak sačinjava dalji cilj pronalaska.

U osnovi, jedinjenja formule (I) koji su cilj ovog pronalaska, pripremaju se pomoću kondenzacije kamptotecina, čija pentaciklička struktura je nakratko ovde prikazana skraćenicom CP, prikladno funkcionaliziranom na položaju 7, sa derivatom ciklopeptida Yv

Reakcija kondenzacije može se šematski prikazati na sledići način:

gde 7-CP predstavlja policikličku strukturu 7-supstituiranog kamptotecina i Z,, X, i Y, predstavljaju pojedinačno grupe Z, X i Y kao što je definirano u formuli I, eventualno prikladno funkcionalizirane i/ili zaštićene tako da se dobiju konjugirana jedinjenja formule I.

7-CP derivati dobijaju se upotrebom poznatih postupaka, kao što su oni opisani u EP1044977, ili uJ. Med. Chem.,2001., 44, 3264-3274, S.Dallavalle i saradnici, dok se reakcija kondenzacije može provesti upotrebom uobičajenih postupaka, kao što je opisano u, na primjer,Journal of Controlled Release,2003., 91, 61-73; S.S. Dharap i saradnici;Journal of Medicinal Chem.,2003., 46,190-3, R. Bhatt;

Ciklopeptid Yimože se pripremiti saglasno uobičajenim tehnikama sinteze peptida, kao što je opisano u Primjerima 1 do 6.

Kad se željeni ciklopeptid dobije, bit će upotrijebljen u reakciji kondenzacije u svom zaštićenom obliku, i zaštitne grupe biće uklonjene tek nakon dobijanja konačnog jedinjenja. Uklanjanje zaštite izvodi se upotrebom poznatih postupaka, npr. kiselih uslova, upotrebom čiste trifluoroctene kiseline ili u prisutnosti hloriranih organskih rastvarača.

Derivat kamptotecina 7-CP-CH=N-(0)m-R2-ZiX1dobija se upotrebom postupaka koji su poznati stručnjacima u tom području.

Ključni međuprodukt sastoji se od amino(alkoksi)-iminometil-kamptotecina, čija priprema je opisana u Međunarodnim patentnim prijavama objavljenim kao VVO 03/101995 i VVO 03/101996, počevši od 7-formi I kamptotecina, reakcijom analognom onoj opisanoj u gore opisanom patentu EP 1 044 977.

7-formi Ikamptotecin je poznato jedinjenja, čija priprema je opisana u Međunarodnoj patentnoj prijavi objavljenoj kao WO 00/53607 i u referencama navedenim onde, gde je, među ostalim, takođe opisana priprema Ni-oksida.

Vidi također Dallavalle S., i saradnici:Bioorg. Med. Chem. Lett.,2001., 11(3): 291-4; Dallavalle S., i suradnici:J. Med. Chem.,2000., 43(21): 3963-9.

Y(-COOH) jedinjenja su nova i sačinjavaju budući cilj ovog pronalaska, naročito kao međuprodukti za dobijanje jedinjenja formule (I).

Jedinjenja opisana u ovom pronalasku su inhibitori topoizomeraze I i prema tome su korisni kao lekovi, naročito za lečenje bolesti kod kojih je korisna inhibicija pomenute topoizomeraze. Naročito, jedinjenja prema ovom pronalasku iskazuju antiproliferativno dejstvo, i prema tome upotrebljavaju se radi svojih terapijskih svojstava, i imaju fizikalno-hemijska svojstva koja ih čine prikladnima za formuliranje u farmaceutske priparate.

Farmaceutski preparati sadrže najmanje jedno jedinjenja formule (I) kao aktivni sastojak, u takvoj količini, kako bi se postiglo značajno terapijsko dejstvo. Preparati pokriveni ovim pronalaskom su potpuno uobičajeni i dobijaju se upotrebom postupaka koji su uobičajena praksa u farmaceutskoj industriji. Prema izabranom putu primene, preparati će biti u čvrstom ili tekućem obliku i prikladni za oralnu, parenteralnu ili intravensku primenu. Preparati saglasno ovom pronalasku sadrže, zajedno sa aktivnim sastojkom, najmanje jedan farmaceutski prihvatljivi nosač ili pomoćno sredstvo. Naročito mogu biti korisna formulacijska pomoćna sredstva, kao što su, na primjer, sredstva za solubiliziranje, sredstva za dispergiranje, sredstva za suspendiranje ili sredstva za emulgiranje.

Jedinjenja formule (I) takođe se mogu upotrebiti u kombinaciji sa drugim aktivnim sastojcima, kao što su, na primer, antikancerozna sredstva ili drugi lekovi sa antiparazitskim ili antivirusnim dejstvom, i u odvojenim oblicima doviranja i u samo jedinom obliku doziranja.

Jedinjenja saglasno ovom pronalasku korisni su kao lekovi sa antikanceroznim dejstvom, npr. kod ne-mikrocitoma i raka pluća sa malim stanicama, ili kod kolorektalnog ili raka prostate, glioblastoma i neuroblastoma, raka grlića maternice, raka jajnika, raka probavnog sastava, raka jetre, Kaposi-jevog sarkoma, raka bubrega, sarkoma i osteosarkoma, raka testisa, raka dojke, raka gušterače, melanom, raka mokraćnog meura i glave i vrata. Jedna od prednosti koje se postižu pomoću jedinjenja saglasno ovom pronalasku, je kombinacija dejstva antitopoizomeraze, koja odgovara kamptotecinskom delu molekule, i dejstva inhibicije integrina, koji omogućuje ciklopeptidni deo molekule. Rezultat je moguće sjedinjeno dejstvo jedinjenja saglasno ovom pronalasku, što će biti dobro prihvaćeno u onkološkom sektoru, od strane stručnjaka u tom području. Zapravo, ciklopeptidni deo, koji sadrži sekvencu Arg-Gly-Asp, ne samo da usmeruje molekulu prema tumorima koji eksprimiraju integrine, nego je, kad dostigne cilj, sposoban za iskazivanje mnogih funkcija, koje se kreću od internalizacije citotoksičnog dela molekule na dejstvo inhibicije integrina, sa prednostima koje iz toga proizlaze, naročito sa obzirom na inhibiciju tumorske angiogeneze. Ciklopeptidni deo, kads se odvoji od kamptotecinskog dela, takođe je sposoban za iskazivanje svog dejstva na udaljenost od mesta tumora, i prema tome jedinjenja saglasno ovom pronalasku se takođe se pokazuju korisnima za sprečavanje ili lečenje metastatskih oblika.

Lekovi koji su cilj ovog pronalaska takođe se mogu upotrebiti za lečenje parazitskih bolesti.

Primeri koji slede dalje ilustriraju ovaj pronalazak.

Upotrijebljene su sledeće skraćenice:

Aad (aminoadipinska kiselina);

Amb (aminometilbenzil);

Amp (aminometilfenilalanin);

Boe (ter-butoksikarbonil);

CSA (kamfosulfonska kiselina);

CTH (hidrogeniranje sa katalitičkim prienosom);

DCC (dicikloheksilkarbodiimid);

DCM (diklorometan);

DIEA (diizopropiletilamin);

DMF (dimetilformamid);

Fmoc (9-fluorenilmetiloksikarbonil);

HOBT (hidroksibenzotriazol);

NMP (N-metil-pirolidon);

Pht (ftaloil);

Pmc (pentametilkroman-6-sulfonil);

ST1968 (2-aminoetoksiiminometil-kamptotecin)

TBTU (tetrafluoroborat-0-benzotriazol-1-il-tetrametiluronij);

TFA (trifl u orocten a kisel i n a).

Primer 1

Sinteza c( Arq( Pmc)- Glv- Asp( OtBu)- D- Phe- Amp) ( zaštićeni ST2581)

1,587 mmol Fmoc-Gly-Res (Res = Sasrin Resin<®>, Bachem) suspendira se uz mešanje u 75 ml DMF 30 minuta, nakon čega se dodaje 18 ml piperidina, nastavljajući mešanje daljnjih 30 minuta. Smola, filtrirana i isprana sa DMF, suspendira se u 50 ml NMP (N-metil-pirolidon) 15 minuta, nakon čega se dodaju Fmoc-Arg(Pmc)-OH, HOBT, TBTU i DIEA (3,174 mmol svakog); nakon 2 sata mešanja, suspenzija se filtrira i ispere sa DMF. Nakon uklanjanja zaštite sa piperidinom, spajanje se ponovi sa drugim aminokiselinama u slijedu, ponavljajući radnju svaki put kao što je opisano iznad, naime: Fmoc-Amp(Cbz)-OH, Fmoc-D-Phe-OH, i Fmoc-Asp(OtBu)-OH. Nakon zadnjeg uklanjanja zaštite sa Fmoc-N-kraja, linearni pentapeptid se otpusti iz smole pomoću 45 ml 1 % TFA u DCM. Ovo se rastvara u približno 1 I CH3CN, i dodaje se 4,761 mmol HOBT i TBTU i 10 ml DIEA; rastvor se održava uz mešanje 30 minuta, rastvor se upari do malog volumena i taloženje produkta dovršava se sa vodom. Filtrirani sirovi produkt rastvara se u 27 ml smese MeOH i DMF 1:1; 5 mmol amonij formijata i dodaje se 0,55 g 10 % Pd/C i ostavi 30 minuta uz mešanje na sobnoj temperaturi. Suspenzija se filtrira preko celita i osuši do suhoće. Ostatak se pročišćava preparatornom RP-HPLC (stepen: Alltima<®>C-18, Ailtech; mobilna faza 50 % CH3CN u vodi +0,1 % TFA; vrieme zadržavanja (Rt) = 9,13 minuta). Dobija se 483 mg bijelog praška.

<1>H-NMR (DMSO-d6) 5 8,3, 8,07, 8,04, 7,90, 7,80, 7,33, 7,15, 7,07, 4,62, 4,50, 4,35, 4,12, 4,01, 3,15, 3,03, 2,96-2,65, 2,58, 2,48, 2,32, 2,02, 1,75, 1,50, 1,35, 1,23.

Molekulska masa (Maldi-Tof): 973

Primer 2

Sinteze c( Arq( Pmc)- Glv- Asp)( OtBuVD- Phe- Aad) ( zaštićeni ST2650)

0,69 mmola Fmoc-Gly-Res obrađuje se točno kao što je opisano u Primeru 1, s tom razlikom da se u ovom slučaju treća i četvrta aminokiselina dodaju u obliku dipeptida Fmoc-D-Phe-Aad(OBzl)-OH. Nakon uklanjanja zaštite pomoću CTH, i pročišćavanja sirovog produkta

preparatornom RP-HPLC (mobilna faza: 66 % CH3CN u vodi + 0,1 % TFA; Rt = 17,29 minuta), dobija se 187 mg čistog peptida.

<1>H-NMR (DMSO-d6) 5 7,23, 4,58, 4,20-3,90, 3,28, 3,05, 2,99, 2,85, 2,74-2,35, 2,15, 2,05, 1,85-1,25.

Molekulska masa (Maldi-Tof): 940

Primer 3

Sinteza c( Arq( PmcVGIv- Asp( OtBu)- D- Phe- N- Me- Amp) ( zaštićeni ST2700)

Suspenziji Fmoc-Phe(4-Pht-N-CH2)-COOH u bezvodnom toluenu dovedenoj do refluksa dodaje se 2 ekv CSA i 20 ekv paraformaldehida, podeljeno u 4 obroka u intervalima od 15 minuta. Smesa se ostavi da se ohladi, razredi sa 120 ml toluena i opere sa 5 % NaHC03i vodom. Nakon uparavanja rastvarača, ostatak se rastvara u 15 ml CHCI3+ 15 ml TFA + 700 ul Et3SiH; smjesa se ostavlja u mraku da reagira 42 sata. Nakon uparavanja rastvarača, ostatak se pročisti filtracijom na silikagelu. Ukupni prinos: 90 %.

Linearni peptid sintetizira se u čvrstoj fazi kao što je opisano u Primjru 1, umetnuvši Fmoc-N-Me-Phe-(4-Pht-N-CH2)-COOH kao treću aminokiselinu, pripremljenu kao što je gore opisano. U ovom slučaju uklanjanje zaštite sa N-Fmoc-kraja na smoli izvedeno je sa 30 %-tnim diizopropilaminom (300 ekv) u rastvoru u DMF (zahvaljujući prisutnosti ftalimida). Nakon ciklizacije, 500 mg peptida vruće se rastvara u 10 ml apsolutnog EtOH, kojem je dodano 0,9 ml rastvora NH2-NH2 H20 1M u etanolu. Nakon dvočasovnog zagrejavanja pri temperaturi refluksa, rastvarač se upari dok ostatak suspendira u 10 ml DCM + 10 ml rastvora Na2C03uz snažno mućkanje. Sirovi konačni produkt rekuperira se iz organske faze nakon uparavanja i pročišćavanja preparatornom RP-HPLC (mobilna faza: 52 % CH3CN u vodi + 0,1 % TFA; Rt = 10 minuta).

<1>H-NMR (CDCI3) 5 8,29-7,66, 7,38-7,07, 4,95-4,77, 4,09, 3,41, 3,05-2,81, 2,51, 2,05, 1,74, 1,40, 1,26.

Molekulska masa (Maldi-Tof): 987

Primer 4

Sinteza cfArq( PmcyG) v- Asp( OtBuVD- Phe- Amp( CO-( CH,) ? - COOH )] ( zaštićeni ST2649)

120 mg ciklopeptida c[Arg(Pmc)-Gly-Asp(OtBu)-D-Phe-Amp] TFA (pripravljenog kao što je opisano u Primeru 1) rastvara se u 3,6 ml smese DCM-DMF 2:1, zajedno sa stehiometrijskom količinom TEA i anhidrida sukcinske kiseline. Nakon 1 sata, reakcijska smesa razređuje se sa 30 ml DCM i opere sa vodom. Organska faza, osušena i koncentrirana, dala je ostatak od 100 mg čistog produkta.

Analitička RP-HPLC: stepen: Purosfere STAR<®>, Merck; mobilna faza: 45 % CH3CN u vodi+ 0,1 % TFA;

Rt = 13,17 minuta.

<1>H-NMR(DMSO-d6) 8 8,20-7,75, 7,19-7,02, 4,58, 4,45, 4,36, 4,30, 4,20, 4,05, 3,00, 2,97-2,57, 1,83, 1,62, 1,32.

Molekulska masa (Maldi-Tof): 1073

Primer 5

Sinteza c( Arq( Pmc)- Glv- Asp( OtBu)- D- Phe- N- Amb- Glv) ( zaštićeni ST2701)

Rastvoru 1,22 mmol Boc-monozaštićenog p-ksililendiamina u 6 ml THF dodaj se 1,83 mmol TEA i, kap po kap, rastvor 1,22 mmol benzil bromacetata u 2 ml THF. Smesa se ostavlja uz mešanje tokom noći, nakon čega se rastvarač upari i ostatak pročisti na flash stubu (CHCI3-EtOAc, 9:1). Dobija se 0,69 mmol N-(4-Boc-NH-CH2-benzil)-glicin benzilestera.

250 mg Fmoc-D-Phe-OH rastvara se u 27 ml DCM i dodaje se 40 uJ difosgena i 230 uJ simkolidina; nakon 15 minuta dodaje se 190 mg prethodno pripremljenog estera, rastvorenog u 3 ml DCM. Nakon 3 sata, reakcijskoj smjesi doda je se 80 ul N-Me-piperazina i miješa 10 minuta, nakon čega se smjesa razredi sa 10 ml DCM i načini se ekstrakcija sa vodom, HCI 0,5N, vodom, 5 % NaHC03i vodom. Nakon uparavanja rastvarača, ostatak se pročisti flash kromatografijom na silikagelu (DCM-EtOAc, 9:1). Prinos: 80 %.

U 100 mg tako dobijenog produkta, rastvorenog u 6 ml MeOH, dodaje se 76 ul AcOH i 42 mg HCOONH,, smesa se hladi do 0 °C, i dodaje se 50 mg 10 % Pd/C. Nakon 30 minuta, reakcijska smesa filtrira se preko celita. Filtrat se osuši do suhoće i pročisti na flash stubu (CHCI3-MeOH 9:1). Prinos: 90 %.

190 mg tako dobijenog produkta rastvara se u 1,2 ml TFA i osuši do suhoće (uklanjanje zaštite Boe); ostatak se ponovo rastvori u 9 ml 10 % Na2C03+ 6 ml dioksana, ohladi do 0 °C i dodaje se rastvor 120^l benziloksikarbonil hiorida razređenog s 3 ml dioksana kap po kap. Nakon 1 čas mešanja na sobnoj temperaturi, izvodi se uparavanje pod vakuumom do malog volumena, nakon čega se smesa razredi sa vodom, pH se smanjuje do 1 pomoću HCI uradi se ekstrakcija s EtOAc. Nakon uparavanja rastvarača, ostatak se pročišćava filtracijom na silikagelu, ispirući sa CHCI3-MeOH (8:2). Prinos čistog dipeptida: 82 %.

0,69 mmol Fmoc-Gly-Res obrađuje se kao što je opisano u Primeru 1. Nakon Arg, dodaje se prethodno priremjeni dipeptid Fmoc-D-Phe-N(4-Cbz-NH-CH2-benzil)-G1 redosledno. Nakon uklanjanja zaštite Cbz pomoću CTH, sirovi produkt c(Arg(Pmc)-Gly-Asp(OtBu)-D-Phe-N-Amp-Gly) pročišćava se preparatornom RP-HPLC (mobilna faza: 50 % CH3CN u vodi + 0,1 % TFA; Rt = 10,5 minuta).

<1>H-NMR (DMSO-d6) 8 8,29-7,66, 7,44-6,90, 5,15, 4,72-4,18, 4,20, 4,05-3,32, 3,15, 3,06, 2,70, 2,51, 2,49, 2,01,1,80-1,35,1,49, 1,35, 1,23. Molekulska masa (Maldi-Tof): 973

Primer 6

Sinteza c( Arq( Pmc)- Glv- Asp( OtBu)- D- Phe- Amp( CO- CH7-( OCH?CH?)n- Q- CH:,- COOH))

Rastvoru od 200 mg c(Arg(Pmc)-Gly-Asp(OtBu)-D-Phe-Amp) TFA (dobijenog kao što je opisano u Primeru 1) u 4 ml smese 3:1 DCM-DMF dodaje se znatan suvišak glikol dikiseline. DIEA (3 ekv) i DCC (2 ekv) dodaju se istom rastvoru. Smesa se ostavlja uz mešanje tokom noći, nakon čega se razređuje sa DCM i opere vodom.

Sirovi produkt rekuperira se uparavanjem organske faze i pročišćava flash hromatografijom (mobilna faza: CHCI3-MeOH 7:3 + 1 % AcOH); skupljaju se frakcije koje sadrže produkt, operu vodom, dehidriraju i osuše do suhoće, i dobija se ostatak od 157 mg čistog produkta.

Analitička RP-HPLC: (stupac: Purosphere STAR<®>, Merck; mobilna faza: 50 % CH3CN 50 % u vodi + 0,1 % TFA; Rt= 10,96)

<1>H-NMR (DMSO-d6) 5 8,35-7,92, 7,20-7,00, 4,65, 4,50, 3,94, 3,60-3,45, 3,00-2,60, 2,55, 2,45, 2,30, 2,00, 1,70, 1,50, 1,30, 1,20.

Molekulska masa (Maldi-Tof): odgovara različitim upotrijebljenim glikolima različitih molekulskih masa.

Sinteza koniugiranih derivata

Primer 7

Sinteza ST2686

Kondenzacija ST1968 sa zaštićenim ST2650.

15 mg (0,016 mmol) zaštićenog ST2650 rastvara se u 1 ml bezvodnog DMF, i rastvor se dovodi do 0 °C; dodaje se 3,6 mg (0,027 mmol) HOBt i 4 mg (0,019 mmol) EDC i smesa se ostavlja da reagira 30 minuta pri 0 °C. 6 mg 2-aminoetoksiiminometilkamptotecina (0,0131 mmol) i 8 \ x\ DIEA (0,046 mmol) dodaju se i smesa sec ostavlčja da reagira na sobnoj temperaturi približno 60 sati. Reakcija se prati pomoću TLC (CH2CI2:CH3OH = 9:1).

Reakcijka smesa razređuje se sa H20 (približno 10 ml) i obavljaju se se tri ekstrakcije sa CH2CI2; organska faza pere slanim rastvorom, dehidrira sa Na2S04, filtrira i osuši do suhoće. Dobija se 40 mg sirovog produkta.

Kromatografija: eluens CH2CI2:CH3OH = 94:6 -» 92:8. Dobije se 11 mg produkta.

Prinos = 61 %

Otpuštanje projektivnih grupa

9 mg zaštićenog produkta se otopi u 4 ml otopine CH2CI2:CF3COOH 1:1 i ostavi da reagira na sobnoj temperaturi 24 sata.

Reakcija se prati pomoću TLC (CH2CI2:CH3OH = 94:6).

Reakcijski rastvor se osuši do suhoće, dobije se čvrsti deo koji se pere 3 puta sa Et20 da se eliminiraju nusprodukti reakcije otpuštanja.

Dobije se 5 mg produkta u obliku trifluoracetata.

Prinos = 66 %.

Analitički podaci:

Rf 0,24 u CH3OH:H20 = 7:3 (TLC RP).

HPLC analiza: stub: Dynamax<®>RP C18, uzorak je rastvoren u metanolu; brzina protoka: 1 ml/minuta; smesa eluensa: acetonitril:voda (0,1 % TFA) = 55:45; gradijent: 10 minuta do 55 % vode (TFA 0,1 %): 45 % acetonitrila, 10 minuta do 10 % vode (TFA 0,1 %), 10 minuta 10 % voda (TFA 0,1 %), 5 minuta do početnih uslova.X= 360 nm 8,323 (25,8 %); 10,969 (74,2 %)X= 254 nm 8,325 (29,4 %); 10,975 (70,6 %).

Primer 8

Sinteza ST2724

[0073]

Kondenzacija ST1968 sa zaštićenim ST2649

25 mg (0,023 mmol) zaštićenog ST2649 rastvara se u 2 ml bezvodni DMF i rastvor se dovede do 0 °C, nakon čega se doda 5 mg (0,039 mmol) HOBt i 5 mg (0,027 mmol) EDC i smesa ostavi da reagira 30 minuta pri 0 °C.

Dodaju se 8 mg ST1968 (0,019 mmol) i 12 ul DIEA (0,070 mmol) i smesa ostavi da reagira na sobnoj temperaturi približno 39 sati. Reakcija se prati pomoću TLC (CH2CI2:CH3OH = 9:1 kako bi se proverio početak).

DMF se upari, smjesa se razreeđuje sa H20 (približno 10 ml) i načini se ekstrakcija 3 puta sa CH2CI2. Organska faza se pere sa slanim rastvorom, dehidrira sa Na2S04, filtrira i osuši do suhoće. Dobije se 29 mg sirovog produkta.

Hromatografija: eluens CH2CI2:CH3OH = 94:6- >9:1. Dobija se 22 mg produkta (lom184) koji se sastoji od dva sin i anti izomera CH=NO grupe vezane na položaju 7.

Prinos = 78 %

HPLC-MS analiza: stub: Simetrija C18(3,5 pm, 4,6 * 75 mm); mobilna faza: acetonitril (TFA 0,1 %): voda (TFA 0,1 %) = 55:45; gradijent: 10 minuta 55 % voda (TFA 0,1 %): 45 % acetonitril, 10 minuta do 10 % vode (TFA 0,1 %), 10 minuta 10 % voda (TFA 0,1 %), 5 minuta do početnih uslova.X= 254 nm: tr= 5,20 (42 %); tr= 5,97 (52 %). ;MS: (ESI) m/z = 1492 što odgovara [MH]<+.>;Uklanjanje zaštitnih grupa ;22 mg zaštićenog ST2724 rastvara se u 4 ml rastvora CH2CI2:CF3COOH 1:1 i ostavi da reagira na sobnoj temperaturi 26 sati. Reakcija se prati pomoću TLC (eluens: CH2CI2:CH3OH = 95:5 kako bi se proverio početak; H20: CH3OH = 3:7 za produkt). ;Nestajanje zaštićenog ST2724 takođe se prati pomoću HPLC, injiciranjem uzoraka uzetih u t = 0, t = 2 sata, t = 26 sati u sledećim uslovima gradijenta: 10 minuta 55 % voda (TFA 0,1 %): 45 % CH3CN, 10 minuta do 10 % vode (TFA 0,1 %), 10 minuta 10 % voda (TFA 0,1 %), 5 minuta do početnih uslova; Trzaštićeni ST2724 = 17,3; 18,1. ;Stub: Alltima RP C18(150 mm, Dl 4,6 mm, 5 u). Uzorak je rastvoren u smesi eluensa. ;Reakciski rastvor se osuši do suhoće i opere 3 puta; dobijeni čvrsti deo opere se 3 puta sa Et20. ;Dobija se 10 mg trifluoracetatnog produkta. ;Prinos = 53 % ;Rf= 0,52 u CH3OH:H20 = 7:3 (TLC RP). ;Talište: rasp. T > 160 °C. ;HPLC analiza: stube: Alltima RP C18(150 mm, Dl 4,6 mm, 5 u). Uzorak je rastvoren u smesi eluensa; mobilna faza: acetonitril (0,1 % TFA): voda (TFA 0,1 %) = 35:65; brzina protoka = 1 ml/minuta. Izokratska analiza.X= 254 nm 3,204 (15,0 %); 3,982 (79,1 %).X= 360 nm 3,204 (12,8%); 3,984 (83,9%). ;Primjer 9 ;Sinteza ST2742 ;[0085] ;Kondenzacija ST1968 sa zaštićenim ST2661 ;110 mg (0,093 mmol) zaštićenog ST2661 rastvara se u 4 ml bezvodnog DMF, rastvor se dovedi do 0 °C, nakon čega se dodaje 21 mg (0,158 mmol) HOBt i 22 mg (0,112 mmol) EDC, i smesa se ostavlja da reagira 30 minuta pri 0 °C. ;Dodaje se 33 mg ST1578 (0,077 mmol), 47 ul DIEA (0,270 mmol) i smesa se ostavlja da reagira na sobnoj temperaturi 24 sata. Reakcija se prati pomoću TLC (CH2CI2:CH3OH = 9:1 kako bi se proverio početak). ;Obrada: DMF se upari, smesa se razređuje sa H20 (približno 15 ml) i sprovode se tri ekstrakcije s CH2CI2. Obrađuje se organska faza sa slanom rastvorom, dehidrira sa Na2S04, filtrira i osuši do suhoće. Dobija se 166 mg sirovog produkta. ;Hromatografija: eluens CH2CI2:CH3OH = 95:5 -> 8:2. Dobija se 63 mg produkta (zaštićeni ST2742). ;Prinos = 52 %. ;HPLC analiza: stub: Alltima RP C18(150 mm, Di 4,6 mm, 5 u), uzorak je rastvoren u smesi eluensa; mobilna faza: acetonitril (TFA 0,1 %): voda (TFA 0,1 %) = 35:65; brzina protoka = 1 ml/minuta; gradijent: 10 minuta do 55 % vode (TFA 0,1 %) : 45 % acetonitrila, 10 minuta do 10 % vode (TFA 0,1 %), 10 minuta 10 % voda (TFA 0,1 %), 5 minuta do početnih uslova. ;X= 254 nm 15,17 (12,7 %); 15,88 (80,2 %).X= 360 nm 15,17 (17,5 %); 15,88 (79,0 %). ;Uklanjanje zaštitnih grupa ;30 mg zaštićenog ST2742 rastvara u 4 ml rastvora CH2CI2:CF3COOH 1:1 i ostavi da reagira na sobnoj temperaturi 25 sati. Nestajanje zaštićenog produkta prati se pomoću HPLC, injiciranjem uzoraka uzetih u t = 0, t = 1 sat, t = 2 sata, i t = 24 sata u gore opisanim analitičkim uslovima. Dobija se 19 mg produkta koji se sastoji od dva sin i anti izomera CH=NOgrupa vezane na položaju 7. ;Prinos = 73 %; talište 160 °C (raspad); MS (MALDI) m/z: 1272,4. ;Rr= 0,44 u CH3OH:H20 = 7:3 (TLC RP-18). ;HPLC analiza: stub: Alltima RP C18(150 mm, Dl 4,6 mm, 5 u), uzorak rastvoren u smesi eluensa; mobilna faza: acetonitril (TFA 0,1 %): voda (TFA 0,1 %) = 35:65; brzina protoka = 1 ml/minuta; gradijent: 85 % voda (TFA 0,1 %): 15 % acetonitril, u 20 minuta do 10 % vode (TFA 0,1 %), 10 minuta 10 % voda (TFA 0,1 %), u 5 minuta do početnih uslova. ;k- 254 nm 9,65 (28,4 %); 10,24 (62,4 %). ;Primer 10 ;Biološki rezultati ;Vezivanje za <x &* receptore integrina

Pročišćeni <xvB3receptor (Chemicon, kat. CC1020) razređuje se u puferu (20 mM Tris, pH 7,4, 150 mM NaCI, 2 mM CaCI2, 1 mM MgCI2, 1 mM MnCI2) u koncentraciji od 0,5 ug/ml. Alikvot od 100 ul dodaj se u ploče sa 96 otvora i inkubira preko noći pri +4 °C. Ploče se jednom operu sa puferom (50 mM Tris, pH 7,4, 100 mM NaCI, 2 mM CaCI2, 1 mM MgCI2, 1 mM MnCI2, 1 % goveđi serumski albumin) i zatim inkubira još 2 sata na sobnoj temperaturi. Ploče se dvapit operu sa istim puferom i inkubiraju 3 sata na sobnoj temperaturi sa radioaktivnim ligandom [<125>l]ehistatinom (Amersham Pharmacia Biotech) koncentracije 0,05 nM u prisutnosti kompetitivnih liganda. Na kraju inkubacije, ploče se operu i određuje se radioaktivnost upotrebom gama brojača (Packard). Određuje se nespecifično vezivanje liganda u prisutnosti viška hladnog ehistatina (1 uM).

Vezivanje zaajfi ireceptore integrina

Pročišćeni avS5receptor (Chemicon, kat. CC1020) razređuje se u puferu (20 mM Tris, pH 7,4, 150 mM NaCI, 2 mM CaCI2, 1 mM MgCI2, 1 mM MnCI2) u koncentraciji od 1 ug/ml. Alikvot od 100 ul dodaje se u ploče sa 96 otvora i inkubira preko noći pri +4 °C. Ploče se jednom operu sa puferom (50 mM Tris, pH 7,4, 100 mM NaCI, 2 mM CaCI2, 1 mM MgCI2, 1 mM MnCI2, 1 % goveđi serumski albumin) i zatim inkubira još 2 sata na sobnoj temperaturi. Ploče se dvaput operu sa istim puferom i inkubiraju 3 sata na sobnoj temperaturi sa radioaktivnim ligandom [<125>l]ehistatinom (Amersham Pharmacia Biotech) koncentracije 0,15 nM u prisutnosti kompetitivnih liganda. Na kraju inkubacije, ploče se operu i određuje se radioaktivnost upotrebom gama brojača (Packard). Određuje se nespecifično vezivanje liganda u prisutnosti viška hladnog ehistatina (1 uM).

Procena ICsnparametara

Afinitet produkata za receptore vitronektina izražen je kao IC50vrednost ± SD, tj. kao koncentracija sposobna za inhibiranje 50 % specifičnog vezivanja radioligand-receptora. Parametar IC50 je elaboriran upotrebom "ALLFIT" kompjuterskog programa.

Rezultati

Konjugat ST2686 pokazao je najzanimljiviji afinitet za receptore integrina u poređenju sa ST2724 i ST2742, sa obzirom na to, da je vezivanje izračunato kao IC50vrednost bilo nisko (vidi tablicu 1). Sposobnost ST2686 za takmičenje sa radioligandom za avp3receptore integrina je bila veća nego što je pokazao slobodni RGD peptid ST2650 i u poređenju sa onom ST2650 zaavp5receptore (tablica 2). Takođe, ST2724 otkrio je veliki afinitet za receptore integrina u poređenju sa slobodnim peptidom ST2649 (tablica 2), dok je ST2742 pokazao manji afinitet u poređenju sa RGD slobodnim peptidom ST2661, iako je to bio snažan afinitet za oba receptora integrina.

Takođe, drugi RGD peptidi (ST2581, ST2700, ST2701) pokazali su snažnu interakciju sa receptorima integrina (tablica 2).

Citotoksičnost koniugata na različite tumorske stanične linije

Za procenu dejstva jedinjenja na preživljavanje stanica, koristi se test sa sulforodaminom B. Korišćene su stanice PC3 ljudskog raka prostate, A498 ljudskog raka bubrega, A2780 ljudskog raka jajnika. A2780 i PC3 tumorske stanice su razvijene u RPMI 1640 koji sadrži 10 % fetalnog goveđeg seruma (GIBCO), dok su A498 tumorske stanice razvijene u EMEM koji sadrži 10 % fetalnog goveđeg seruma (GIBCO).

Tumorske stanice seju se u ploče za kulturu sa 96 otvora (Corning) uz približno 10 % prekrivanja i ostave se da se vežu i oporavljaju najmanje 24 sata. Dejstvo osam koncentracija testiranih lekova analizira se kako bi se izračunala njihova IC50vrednost (koncentracija koja inhibira 50 % preživljavanja stanica). Ploče se inkubiraju 72 sata pri 37 °C. Na kraju obrade, ploče se operu uklanjanjem supernatanta i dodavanjem PBS 3 puta. Dodaje se 200 ul PBS i 50 ul hladne 80 %-tne TCA. Ploče se inkubiraju na ledu najmanje 1 sat. TCA se ukloni, ploče se 3 puta operu uranjanjem u destiliranu vodu i osuše na papiru i pri 40 °C 5 minuta. Zatim, dodaje se 200 ul 0,4 % sulforodamina B u 1 % octenoj kiselini. Ploče se inkubiraju na sobnoj temperaturi još 30 minuta. Uklanja se Sulforodamin B, ploče se 3 puta operu uranjanjem u 1 %-tnu ocetnu kiselinu, zatim se suše na papiru i pri 40 °C 5 minuta. Nakon toga, dodaje se 200 ul Tris-a 10 mM, ploče se održavaju 20 minuta uz mešanje. Preživljavanje stanica određuje se kao optička gustoća pomoću Multiskan spektrofluorimetra pri 540 nm. Količina ubijenih stanica se izračuna kao procenat smanjenja vezivanja sulforodamina B, u poređenju sa kontrolnim kulturama. IC50vrednosti izračunaju se pomoću "ALLFIT" programa.

Kako je obavešteno, konjugati su pokazali najsnažnije citotoksično dejstvo na A2780 tumorske stanice jajnika, sa IC50vrednostima između 0,16 i 0,4 uM. Na A498 tumorskim stanicama, delotvorniji je bio ST2742, s IC50vrijednošću od 0,74 uM, zatim ST2686 i ST2724 (IC50=3,2 i 4,3 uM, pojedinačno) (tablica 3).

Claims

1. Jedinjenja iz formule (I) u kojima: i je 0 ili 1; R1je grupa -CH=N-(0)m-R2-Z-X-Y; gde m je 0 ili 1; R2je odabran iz grupe koju sačinjavaju linearni ili razgranjeni C1-C7alkilen, linearni ili razgranjeni C2-C7alkenilen, C3-C10cikloalkilen, C3-C10cikloalkenilen, C6-C14arilen, arilen (C6-Ci4)-alkilen (d-Ce), alkilen (C-,-C6)-arilen (C6-C14), aromatski ili nearomatski heterocikl (C3-C14), koji sadrži najmanje jedan heteroatom odabran iz grupe koju sačinjavaju O, N, S; heterocikloalkilen (C3-C10) alkilen (Ci-C6) koji sadrži najmanje jedan heteroatom odabran iz grupe koju sačinjavaju O, N, S; alkilen (d-C6)-heterocikloalkilen (C3-C10) koji sadrži najmanje jedan heteroatom odabran iz grupe koju sačinjavaju O, N, S); poliaminoalkil grupa formule -(CH2)m1-NR8-(CH2)n1-NR9-(CH2-CH2-CH2-NR9)p1-H, gdje mii n^ koji mogu biti jednaki ili različiti, su celi broj od 2 do 6 i p!je celi broj od 0 do 3; R8i R9, koji mogu biti jednaki ili različiti, odabrani su iz grupe koju sačinjavaju H, linearni ili razgranjeni Ci-C6alkil, Boe, Cbz; monosaharidi, kao što je 6-D-galaktozil, ili 6-D-glukozil; svaka od gore navedenih grupa može po potrebi biti supstituirana sa jednom ili više grupa odabranih iz grupe koju sačinjavaju CN, N02, NH2, OH, SH, COOH, COO-(alkil)(d-C5), CONH-(alkil)(d-C5), S03H, S03-(alkil)(C1-C5), pri čemu je alkil grupa linearna ili razgranuta, atom halogena; Z je ili odsutan, ili odabran od -NH-, -CO-, -O-; X je ili odsutan, ili je odabran iz grupe koju sačinjavaju -COCHR3NH-, -COCHR6(CH2)n2R4-, - R4-CH2(OCH2CH2)n3OCH2R4-, -R^OJR,-, -R5[Ar<g->NH(CH2)n1CO]n4R5-, -R5-[N-gvanidinopropil-Gly]n3Rs-, -CON [CH2)n4NHR7]CH2-, u kojoj n, je celi broj od 2 do 6, n2je celi broj od 0 do 5, n3je celi broj od 0 do 50, n4je celi broj od 2 do 7; R3 je H ili linearni ili razgranjeni CrC4alkil, po potrebi supstituiran sa -COOH, - CONH2, -NH2ili -OH; C6-C14 aril; Pm je odabran iz grupe koju sačinjavaju: -NH-, -CO-, -CONH-, -NHCO-; R5je ili odsutan ili je -R4(Q)R4-; R6 je ili atom vodonika, -NH2; R7 je atom vodonik ili linearni ili razgranjeni (C^C) alkil; Q je odabran iz grupe koju sačinjavaju: linearni ili razgranjeni d-Ce alkilen; linearni ili razgranjeni C3-C10cikloalkilen; linearni ili razgranjeni C2-C6alkenilen; linearni ili razgranjeni C3-Ciocikloalkenilen; C6-C14arilen; arilen (C6-C14)-alkilen; (Ci-C6), alkilen (Ci-CfO-arilen (C6-CM); aromatski ili nearomatski heterociklil (C3-C14), koji sadrži najmanje jedan heteroatom izabran iz grupe koju sačinjavaju O, N, S; Y je formula c(Arg-Gly-Asp-AA1-AA2), u kojoj: c znači ciklički; AAije odabran iz grupe koju sačinjavaju: (D)-Phe, (D)-Trp, (D)-Tyr, (D)-2-naftilAla, (D)-4-terbutil-Phe, (D)-4,4'-bifenil-Ala, (D)-4-CF3-Phe, (D)-4-acetilamin-Phe; AA2je odabran iz grupe koju sačinjavaju: NW-CH[(CH2)n7-CO]-CO, NW-CH[(CH2)n5-NH]-CO, NW-[4-(CH2)n5-CO]-Phe, NW-[4-(CH2)n5-NH]-Phe, [NW]-Gly, NVV-Val, u kojoj W je odabran od H, linearnog ili razgranatog C^- C6 alkila, -(CH2)n5-COOH pritom n7je celi broj od 0 do 5, 4-karboksibenzil, 4-aminometilbenzil; Nroksidi, racemične smese, njihovi pojedinačni enantiomeri, njihovi pojedinačni dijastereomeri, oblici E i Z, njihove smese, farmaceutski prihvatljive soli.

2. Jedinjenja u saglasnosti sa patentnim zahtevom 1, u kojima m je jednak na 1.

3. Jedinjenja u saglasnosti sa patentnim zahtevom 2, u kojima R2 je alkilen, a Z i X su odsutni.

4. Jedinjenja u saglasnosti sa patentnim zahtevom 2, u kojima X =

5. Jedinjenja u saglasnosti sa patentnim zahtevom 3, sa formulom Nroksidi, racemične smese, njihovi pojedinačni enantiomeri, njihovi pojedinačni dijastereomeri, oblici E i Z, njihove smese, farmaceutski prihvatljive soli.

6. Jedinjenja u saglasnosti sa patentnim zahtevom 3, sa formulom Nroksidi, racemične smjese, njihovi pojedinačni enantiomeri, njihovi pojedinačni dijastereomeri, oblici E i Z, njihove smese, farmaceutski prihvatljive soli.

7. Jedinjenje u saglasnosti sa patentnim zahtevom 4, sa formulom Ni-oksidi, racemične smese, njihovi pojedinačni enantiomeri, njihovi pojedinačni dijastereomeri, oblici E i Z, njihove smjese, farmaceutski prihvatljive soli.

8. Postupak dobijanja jedinjenja u saglasnosti sa patentnim zahtevima 1-7, koji se izvodi kako sledi: pritom 7-CP predstavlja policikličku strukturu 7-supstituiranog kamptotecina i Z1p ^ i Y, predstavljaju pojedinačno grupe Z, X i Y kao što je definirano u formuli I, eventualno prikladno funkcionalizirane i/ili zaštićene.

9. Farmacevtski proizvod koji sadrži najmanje jedno jedinjenja u saglasnosti sa patentnim zahtevima 1-7 kao aktivni sastojak u smjsi sa najmanje jednim farmaceutski prihvatljivim pomoćnim sredstvom i/ili nosačem.

10. Upotreba jedinjenja u saglasnosti sa patentnim zahtevima 1-7 za dobijanje lekova.

11. Upotreba jedinjenja u saglasnosti sa patentnim zahtevima 1-7 za dobijanje leka sa aktivnošću inhibiranja topoizomeraze 1.

12. Upotreba u saglasnosti sa patentnim zahtevom 11 za dobijanje leka sa antikanceroznim dejstvom.

13. Upotreba u saglasnosti sa patentnim zahtevom 12, u kojoj je pomenuti lek koristan za lečenje ne-mikrocitoma i raka pluća sa malim stanicama, kolorektalnih tumora, raka prostate, glioblastoma i neuroblastoma, raka grlića maternice, karcinoma jajnika, karcinoma probavnog sustava, karcinoma jetre, Kaposi-jevog sarkoma, karcinoma bubrega, sarkoma i osteosarkoma, karcinoma testisa, karcinoma dojke, karcinoma gušterače, melanoma, karcinoma mokraćnog mehura i glave i vrata.

14. Upotreba jedinjenja u saglasnosti sa patentnim zahtevom 1-7 za dobijanje leka korisnog za sprečavanje ili lečenje metastatskih oblika.

15. Upotreba u saglasnosti sa patentnim zahtevom 11 za dobijanje leka sa antiparazitskim dejstvom.

16. Upotreba u saglasnosti sa patentnim zahtevom 11 za dobijanje leka sa antivirusnim dejstvom.