RO127441B1 - Procedeu de obţinere a nanoimunosorbentului bioxid de siliciu-aminopropiltrietoxisilan-glutaraldehid anticorp antiacid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic - Google Patents

Procedeu de obţinere a nanoimunosorbentului bioxid de siliciu-aminopropiltrietoxisilan-glutaraldehid anticorp antiacid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic Download PDF

Info

Publication number
RO127441B1
RO127441B1 ROA201000975A RO201000975A RO127441B1 RO 127441 B1 RO127441 B1 RO 127441B1 RO A201000975 A ROA201000975 A RO A201000975A RO 201000975 A RO201000975 A RO 201000975A RO 127441 B1 RO127441 B1 RO 127441B1
Authority
RO
Romania
Prior art keywords
dichloro
nanoparticles
glutaraldehyde
centrifugation
supernatant
Prior art date
Application number
ROA201000975A
Other languages
English (en)
Other versions
RO127441A2 (ro
Inventor
Ioan Dorobanţu
Livia Neagu
Original Assignee
Institutul Naţional De Cercetare Şi Dezvoltare Pentru Fizică Şi Inginerie Nucleară "Horia Hulubei" Ifin-Hh
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Institutul Naţional De Cercetare Şi Dezvoltare Pentru Fizică Şi Inginerie Nucleară "Horia Hulubei" Ifin-Hh filed Critical Institutul Naţional De Cercetare Şi Dezvoltare Pentru Fizică Şi Inginerie Nucleară "Horia Hulubei" Ifin-Hh
Priority to ROA201000975A priority Critical patent/RO127441B1/ro
Publication of RO127441A2 publication Critical patent/RO127441A2/ro
Publication of RO127441B1 publication Critical patent/RO127441B1/ro

Links

Landscapes

  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Silicon Compounds (AREA)

Description

Invenția se referă la un procedeu de obținere a nanoimunosorbentului bioxid de siliciu-aminopropil-trietoxisilan-glutaraldehid-anticorp antiacid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic, utilizat în tehnica ELISA (în engleză: Enzyme Linked Immunosorbent Assay) de dozare a pesticidului acid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic (dicamba) din probe de mediu.
în prezent, sunt cunoscute, pe plan mondial, tehnici ELISA de dozare a pesticidelor, ce utilizează, în principal, ca imunosorbent, faze solide, tip mase plastice, ce fixează, prin adsorbție fizică la suprafață, antigenul sau anticorpul. Dezavantajul acestor metode este suprafața limitată și desorbția componentelor imune în procesul de dozare putând conduce la scăderea sensibilității, respectiv, a acurateței analizei.
în RO 125452 B1, este prezentată o metodă de dozare a pesticidului acidul
3.6- diclor-2-metoxi benzoic din probe de mediu, care constă din aceea că un amestec format dintr-o suspensie de microsfere de bioxid de siliciu, acoperite cu anticorp antiacid
3.6- diclor-2-metoxi-benzoic, în diluție de 1:10 în tampon fosfat, o soluție standard de pesticid acid 3,6-diclor-2-metoxi-benzoic, având o concentrație cunoscută sau o probă necunoscută în tampon fosfat și o soluție de marker enzimatic acid 3,6-diclor-2-metoxi benzoic-fosfatază alcalină, având o concentrație de 10 pg/ml, se menține timp de 2 h la temperatura camerei, apoi se supune centrifugării și se îndepărtează supernatantul, după care se adăugă o soluție de p-nitrofenilfosfat în carbonat de sodiu, iar după stoparea reacției cu substratul enzimatic, se măsoară absorbanța optică a supernatantului rezultatîn urma centrifugării, la un spectrofotometru cu o lungime de undă de 400 nm.
Clegg, B. S. G. R. Stephenson, J. C. Hali, “Developement of an Enzyme-Linked Immunosorbent Assay for the Detection of Dicamba”, J. Agric. Food Chem., 2001, May, 49(5), 2168-2174, se referă la markeri enzimatici pentru detectarea cantitativă a erbicidelor dicamba (acid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic) în probele de apă. Antiserul policlonal dicamba nu reacționează încrucișat cu un număr de alte erbicide testate, dar reacționează direct cu metabolitul dicamba, 5-hidroxidicamba, și asociate structural cu acizii clorobenzoici. Testul este utilizat pentru a estima concentrațiile cantitative de dicamba în probele de apă.
Problema pe care o rezolvă invenția constă în obținerea nanoimunosorbentului bioxid de siliciu-aminopropil-trietoxisilan-glutaraldehid-anticorp antiacid 3,6-dicloro-2-metoxi benzoic, utilizat în tehnici ELISA, în dozarea pesticidului acid 3,6-dicloro-2-metoxi benzoic, din probe de mediu.
Procedeul conform invenției înlătură dezavantajele menționate mai sus, prin aceea că 2 părți, în greutate, de nanoparticule de SiO2 de mărime φ =14 nm și arie de 200 m2/g, se tratează cu o soluție de HNO3 10%, timp de o oră, se incubează cu aminopropiltrietoxisilan 10% în apă distilată, timp de 3 h, la 70°C, se spală de 3 ori cu 30 părți, în volum, de apă distilată, și o dată cu 20 părți, în volum, de alcool etilic, iar supernatantul se îndepărtează prin centrifugare la 1500xg, timp de 10 min, nanoparticulele se tratează, în vederea activării, cu 50 părți, în volum, soluție de glutaraldehidă 0,1% în apă distilată, sub agitare continuă, la temperatura de 35°C, se îndepărtează supernatantul prin centrifugare la 1500xg, timp de 15 min, iar nanoparticulele activate rezultate se suspendă în tampon fosfat 50 mM, pH 8,6, se adaugă o parte în volum antiacid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic la temperatura de 35°C, timp de 2 h, sub agitare continuă, urmată de 3 spălări cu tampon fosfat 50 mM, pH 8,6 și se îndepărtează supernatantului prin centrifugare la 1500xg, timp de 15 min, iar nanoparticulele de imunosorbent bioxid de siliciu-aminopropil-trietoxisilanglutaraldehid-anticorp antiacid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic se depozitează la 4°C, în vederea utilizării în tehnica ELISA de dozare a acidului 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic.
Prin aplicarea invenției, se obțin următoarele avantaje:
- suprafață specifică mai mare, ceea ce determină o cantitate mai mare de anticorp antipesticid;
RO 127441 Β1
- coeficient de sedimentare mai mic al nanoparticulelor comparativ cu cel al 1 microparticulelor, ceea ce necesită operații de centrifugare la o accelerație crescută pentru nanoparticule și timpi de centrifugare mai mari; 3
- posibilitatea de depozitare a nanoimunosorbentului în fază lichidă, datorită filtrării prin filtru ce permite trecerea particulelor cu demensiuni mici, în vederea sterilizării 5 particulelor.
Procedeul conform invenției constă în cuplajul covalent al anticorpului antipesticid la 7 nanoparticule de bioxid de siliciu, având avantajul unei suprafețe specifice mari (>200 m2/g) comparativ cu metoda clasică (cm2/g), cuplarea covalentă elimină desorbția anticorpului din 9 metoda clasică, cât și scăderea timpului de analiză în tehnica ELISA în fază omogenă, față de tehnica clasică în care reacția antigen anticorp este heterogenă (are loc la suprafața 11 tubului de reacție).
Procedeul conform invenției constă în aceea că 2 g de nanoparticule de bioxid de 13 siliciu de mărime φ =14 nm (14-109 m) și arie 200 m2/g sunt tratate cu HNO310%, timp de o oră, la temperatura de 60°C, urmată de incubare cu soluție de a-aminopropiltrietoxisilan 15 10% în apă distilată, pentru 3 h, la 70°C. Se spală cu apă distilată de 3 ori, apoi cu alcool etilic și se depozitează la 4°C, în vederea cuplării cu anticorpul antipesticid. Procedeul 17 conform invenției constă în aceea că legarea covalentă a anticorpului de nanoparticulă folosește glutaraldehida ca agent de cuplaj. 19
Procedeul constă în 3 etape, E1, E2 și E3:
E1: Obținerea nanoparticulelor (SiO2)-(C2H5O)3Si-C3H6-NH2 21 g de nanoparticule de SiO2 (φ = 14 nm și arie specifică 200 m2/g) și 100 ml HNO3 10% sunt agitate timp de o oră, la temperatura de 60°C. După îndepărtarea supernatantului 23 prin centrifugare la 1500xg, timp de 10 min, nanoparticulele sunt colectate și tratate cu 100 ml de a-aminopropiltrietoxisilan 10% în apă distilată, sub continuă agitare, la temperatura 25 de 70°C, timp de 3 h. Amestecul este centrifugat la 1500xg, timp de 10 min, supernatantul fiind înlăturat, iar nanoparticulele de (SiO2)-(C2H5O)3Si-C3H6-NH2 sunt colectate și spălate de 27 ori cu apă distilată (30 ml), urmată de o spălare cu un volum de 20 ml de alcool etilic.
E2: Obținerea nanoparticuleloractivate de (SiO2)-(C2H5)3Si-C3H6-N=HC-(CH2)3-CHO 29
La 1,5 g nanoparticule rezultate din etapa E1, se adaugă un volum de 50 ml soluție de glutaraldehidă 0,1% în apă distilată, sub continuă agitare, la temperatura de 35°C, timp 31 de 15 min, urmată de centrifugare la 1500xg, timp de 15 min și îndepărtarea supernatantului. Nanoparticulele activate cu glutaraldehidă sunt folosite imediat, pentru cuplarea cu anticorpul 33 antiacid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic.
E3: Obținerea nanoimunosorbentului (SiO2)-(C2H5)3Si-C3H6-N=HC-(CH2)3-CH=N- 35 anticorp anti 3,6-dicloro-2-metoxi benzoic
Nanoparticulele activate, rezultate din etapa E2, se suspendă în 50 ml tampon fosfat 37 50 mM, pH 8,6, apoi se adaugă 1 ml antiser antiacid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic, la temperatura de 35°C, sub agitare continuă, timp de 2 h, urmată de centrifugare la 1500xg, 39 timp de 15 min și îndepărtarea supernatantului, apoi spălate de 3 ori cu tampon fosfat 50 mM, pH 8,6, nanoparticulele de imunosorbent (SiO2)-(C2H5)3Si-C3H6-N=HC-(CH2)3-CH=N- 41 anticorp anti- 3,6-dicloro-2-metoxi benzoic, obținute în urma centrifugării, se depozitează la 4°C, în vederea utilizării în tehnica ELISA de dozare a acidului 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic. 43
Reacții chimice de obținere a nanoimunosorbentului nanoparticulă de (SiO2)(C2H5O)3Si-C3H6-N=CH-(CH2)2-CH=N-anticorp antiacid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic: 45
RO 127441 Β1
(Faza solida) nanoparticula de SÎO2 d-I4nm S-20(lnd/g +(€2Η5Ο)^ί-€3Η6-ΝΗ2 (TL-aminopropiliri -etoxisilan)
O-C2Hs
Λ-νη2
OăfiHs (nanoparticula de SiO2 grefata cu
CL-amlnopropiltri -etoxisilan)
OH (d-l4nnt) 'Ă^Si-O-Sl-C3H6-NH2 \f-c3ns +OHC-(CHfirCHO
SiO2
-OH (d=14nmi ,o ^O-C2Hs ^SiO-Si-CjH^CH-țCH^j-CHO ^O-C2H5 nanoparticula de SiO2 activata cu glutaraldehida
RO 127441 Β1 +H2N-Anticorp anti
Dicamba
^rSi-O-SÎ-C3H^N=CHflCH2)rCHO \fC2Hs
If
(d=l4nm) ^O-C2HS
Sî~O-Si-C3H6-N=:C/l-(CH2)3-FH=N-Antîcorp anti Dicamba '<>-C2lls
O^Si-OH
Nanoimunosorbent -bioxid de siiiciu-aminoproptt trietoxisiian-glutaraldehid-23 anticorp anti acid 3,6-dicloro2-metoxi benzoic25
Se prezintă mai jos un exemplu de realizare a procedeului conform invenției, pentru 27 obținerea nanoimunosorbentului de bioxid de siliciu-aminopropil-trietoxisilan-glutaraldehidanticorp antiacid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic.29
Exemplu. 2 g de nanoparticule de SiO2 de mărime φ =14 nm și arie 200 m2/g se tratează cu o soluție de HNO3 10%, timp de o oră, urmată de incubare cu a-amino-31 propiltrietoxisilan 10% în apă distilată, pentru 3 h, la 70°C, urmată de spălarea cu 30 ml apă distilată de 3 ori și 20 ml alcool etilic o dată, iar supernatantul este îndepărtat prin 33 centrifugare la 1500xg, timp de 10 min, urmată de tratarea nanoparticulelor, în vederea activării, cu 50 ml soluție de glutaraldehidă 0,1% în apă distilată, sub agitare continuă, la 35 temperatura de 35°C, supernatantul este îndepărtat prin centrifugare la 1500xg, timp de 15 min, iar nanoparticulele activate rezultate se suspendă în tampon fosfat 50 mM, pH 8,6, 37 urmat de adăugarea de 1 ml antiser antiacid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic, la temperatura de 35°C, timp de 2 h, sub continuă agitare, urmată de 3 spălări cu tampon fosfat 50 mM, pH 8,6 39 și îndepărtarea supernatantului prin centrifugare la 1500xg, timp de 15 min, iar nanoparticulele de imunosorbent bioxid de siliciu-aminopropil-trietoxisilan-glutaraldehid-anticorp 41 antiacid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic se depozitează la 4°C, în vederea utilizării în tehnica ELISA de dozare a acid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic. 43

Claims (5)

1 Revendicare
3 Procedeu de obținere a nanoimunosorbentului bioxid de siliciu-aminopropiltrietoxisilan-glutaraldehid-anticorp antiacid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic, caracterizat prin
5 aceea că 2 părți, în greutate, de nanoparticule de SiO2 de mărime φ = 14 nm și ariede
200 m2/g, se tratează cu o soluție de HNO3 10%, timp de o oră, se incubeazăcu
7 aminopropiltrietoxisilan 10% în apă distilată, timp de 3 h, la 70°C, se spală de 3 ori cu30 părți, în volum, de apă distilată, și o dată cu 20 părți, în volum, de alcool etilic, iar
9 supernatantul se îndepărtează prin centrifugare la 1500xg, timp de 10 min, nanoparticulele se tratează, în vederea activării, cu 50 părți, în volum, soluție de glutaraldehidă 0,1 % în apă 11 distilată, sub agitare continuă, la temperatura de 35°C, se îndepărtează supernatantul prin centrifugare la 1500xg, timp de 15 min, iar nanoparticulele activate rezultate se suspendă 13 în tampon fosfat 50 mM, pH 8,6, se adaugă o parte, în volum, antiacid 3,6-dicloro-2metoxibenzoic la temperatura de 35°C, timp de 2 h, sub agitare continuă, urmată de 3 spălări 15 cu tampon fosfat 50 mM, pH 8,6, și se îndepărtează supernatantului prin centrifugare la 1500xg, timp de 15 min, iar nanoparticulele de imunosorbent bioxid de siliciu-aminopropil17 trietoxisilan-glutaraldehid-anticorp antiacid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic se depozitează la 4°C, în vederea utilizării în tehnica ELISA de dozare a acidului 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic.
ROA201000975A 2010-10-14 2010-10-14 Procedeu de obţinere a nanoimunosorbentului bioxid de siliciu-aminopropiltrietoxisilan-glutaraldehid anticorp antiacid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic RO127441B1 (ro)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
ROA201000975A RO127441B1 (ro) 2010-10-14 2010-10-14 Procedeu de obţinere a nanoimunosorbentului bioxid de siliciu-aminopropiltrietoxisilan-glutaraldehid anticorp antiacid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
ROA201000975A RO127441B1 (ro) 2010-10-14 2010-10-14 Procedeu de obţinere a nanoimunosorbentului bioxid de siliciu-aminopropiltrietoxisilan-glutaraldehid anticorp antiacid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RO127441A2 RO127441A2 (ro) 2012-05-30
RO127441B1 true RO127441B1 (ro) 2013-04-30

Family

ID=46160491

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ROA201000975A RO127441B1 (ro) 2010-10-14 2010-10-14 Procedeu de obţinere a nanoimunosorbentului bioxid de siliciu-aminopropiltrietoxisilan-glutaraldehid anticorp antiacid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic

Country Status (1)

Country Link
RO (1) RO127441B1 (ro)

Also Published As

Publication number Publication date
RO127441A2 (ro) 2012-05-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105652018A (zh) 一种c-肽定量测定试剂盒
US20090111091A1 (en) Specimen pretreatment liquid, kit for measuring virus, and method for detecting virus
CN106546748A (zh) 一种以量子点荧光微球为竞争抗原载体的黄曲霉毒素b1检测方法
CN107121415A (zh) 一步式免标记荧光快速检测汞离子的方法
CN105759028A (zh) 一种诺如病毒拉曼探针标记的免疫层析检测方法
CN109061189A (zh) 一种肌钙蛋白i检测试剂盒及其制备方法
CN105092559B (zh) 一种基于sers的新城疫病毒检测试剂盒及其检测方法
CN104049087B (zh) 一种检测l-组氨酸的生物传感器的制备方法及其应用
WO2017211314A1 (en) Method for detecting presence of mycobacterial material in sample using immobilised mannosyl phosphoketide antigen
CN101382540A (zh) 血小板抗原抗体检测和交叉配型的固相抗人球蛋白试剂盒
CN202583209U (zh) 一种胃蛋白酶原ⅰ光激发化学发光检测试剂盒
CN104515855A (zh) 检测Galectin-3的纳米磁珠分选-时间分辨免疫荧光试剂盒
RO127441B1 (ro) Procedeu de obţinere a nanoimunosorbentului bioxid de siliciu-aminopropiltrietoxisilan-glutaraldehid anticorp antiacid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic
CN109690313A (zh) 使用至少两种抗原检测样品中分枝杆菌物质存在的方法
CN103424551B (zh) 人附睾上皮分泌蛋白4定量测定试剂盒及其检测方法
CN102643917A (zh) 一种铅离子检测试纸条及其制备方法
CN113588942A (zh) 一种检测抗原肌球蛋白1-IgG抗体的试剂盒
CN102654499A (zh) 一种胃蛋白酶原ⅰ的光激发化学发光检测方法及试剂盒
CN104142406A (zh) 一种稳定的肌钙蛋白i检测试剂盒
CN102206269A (zh) 邻苯二甲酸二庚酯完全抗原、制备方法及用途
CN102180967B (zh) 一种非损伤性提取普氏野马免疫球蛋白IgA的方法
RO127570B1 (ro) Procedeu de obţinere a nanoimunosorbentului bioxid de siliciu-aminopropiltrietoxisilan-glutaraldehid-albumină serică de bovină-acid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic
CN105652006A (zh) 梅毒螺旋体总抗体Dot-ELISA检测方法
NL2016301B1 (en) Method for detecting a marker for active tuberculosis.
CN103675283A (zh) 中肋骨条藻的酶联免疫反应检测方法