RO127441A2 - Procedeu de obţinere a nanoimunosorbentului bioxid de siliciu-aminopropiltrietoxisilan-glutaraldehid anticorp antiacid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic, utilizat în tehnica elisa de dozare a pesticiduluiacid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic - Google Patents
Procedeu de obţinere a nanoimunosorbentului bioxid de siliciu-aminopropiltrietoxisilan-glutaraldehid anticorp antiacid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic, utilizat în tehnica elisa de dozare a pesticiduluiacid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic Download PDFInfo
- Publication number
- RO127441A2 RO127441A2 ROA201000975A RO201000975A RO127441A2 RO 127441 A2 RO127441 A2 RO 127441A2 RO A201000975 A ROA201000975 A RO A201000975A RO 201000975 A RO201000975 A RO 201000975A RO 127441 A2 RO127441 A2 RO 127441A2
- Authority
- RO
- Romania
- Prior art keywords
- dichloro
- methoxybenzoic acid
- nanoparticles
- glutaraldehyde
- followed
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 25
- IWEDIXLBFLAXBO-UHFFFAOYSA-N dicamba Chemical compound COC1=C(Cl)C=CC(Cl)=C1C(O)=O IWEDIXLBFLAXBO-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 13
- KQHYRGFMAVLBRG-UHFFFAOYSA-N dioxosilane pentanedial 3-triethoxysilylpropan-1-amine Chemical compound C(CCCC=O)=O.NCCC[Si](OCC)(OCC)OCC.[Si](=O)=O KQHYRGFMAVLBRG-UHFFFAOYSA-N 0.000 title abstract 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title abstract 2
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 title description 2
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 claims abstract description 32
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims abstract description 14
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 14
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims abstract description 13
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 13
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 10
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims abstract description 9
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 claims abstract description 8
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims abstract description 8
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 claims abstract description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims abstract description 4
- 229910004298 SiO 2 Inorganic materials 0.000 claims description 5
- WYTZZXDRDKSJID-UHFFFAOYSA-N (3-aminopropyl)triethoxysilane Chemical compound CCO[Si](OCC)(OCC)CCCN WYTZZXDRDKSJID-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 2
- JBHRGAHUHVVXQI-UHFFFAOYSA-N 1-triethoxysilylpropan-1-amine Chemical compound CCO[Si](OCC)(OCC)C(N)CC JBHRGAHUHVVXQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 3
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 abstract 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 229910018540 Si C Inorganic materials 0.000 description 4
- 230000001458 anti-acid effect Effects 0.000 description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 4
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 4
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 4
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 4
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 4
- 229910010271 silicon carbide Inorganic materials 0.000 description 4
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 description 4
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 4
- 239000005504 Dicamba Substances 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 229910052681 coesite Inorganic materials 0.000 description 3
- 229910052906 cristobalite Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- 229910052682 stishovite Inorganic materials 0.000 description 3
- 229910052905 tridymite Inorganic materials 0.000 description 3
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical class [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229940069428 antacid Drugs 0.000 description 2
- 239000003159 antacid agent Substances 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 2
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 229910003930 SiCb Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 1
- 229910052814 silicon oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- -1 triethoxysilane-glutaraldehyde Chemical compound 0.000 description 1
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Silicon Compounds (AREA)
Abstract
Invenţia se referă la un procedeu de obţinere a unui nanoimunosorbent sub formă de nanoparticulă de bioxid de siliciu-aminopropil-trietoxisilan-glutaraldehid-anticorp antiacid 3,6-diclor-2-metoxibenzoic, utilizat în tehnica ELISA. Procedeul conform invenţiei constă din tratarea timp de o oră a 2 g de nanoparticule de SiO, cu diametrul de 14 nm şi suprafaţă de 200 mp/g, cu acid azotic 10%, urmată de incubare cu α-aminopropiltrietoxisilan 10% în apă distilată, timp de 3 h la 70°C, după care se spală cu 3x30 ml apă distilată şi cu 20 ml de alcool etilic, supernatantul se îndepărtează prin centrifugare şi nanoparticulele se activează la 35°C, sub agitare, cu 50 ml de glutaraldehidă 0,1% în apă distilată, se centrifughează pentru îndepărtarea supernatantului şi nanoparticulele se suspendă în tampon fosfat 50 mM,H=8,6, urmat de adăugarea a 1 ml antiser antiacid 3,6-diclor-2-metoxibenzoic, la 35°C, cu agitare timp de 2 h, după care urmează 3 spălări cu acelaşi tampon fosfat şi îndepărtarea supernatantului prin centrifugare, pentru izolarea nanoparticulelor de imunosorbent, care se păstrează la 4°C, în vederea utilizării în tehnica ELISA.
Description
Invenția se referă la un procedeu de obținere a nanoimunosorbentului nanoparticulă de (SiO2)-(C2H5O)3Si-C3H6-N=CH-(CH2)2-CH=N-anticorp anti acid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic utilizat în tehnica ELISA (engl.: Enzyme Linked lmmunosorbent Assay) de dozare a pesticidului acid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic (dicamba) din probe de mediu. în prezent sunt cunoscute pe plan mondial tehnici ELISA de dozare a pesticidelor ce utilizează în principal ca imunosorbent faze solide tip mase plastice ce fixează prin adsorbție fizică la suprafață antigenul sau anticorpul. Dezavantajul acestor metode este suprafața limitată și desorbția componentelor imune în procesul de dozare putând conduce la scăderea sensibilității respectiv a acurateții analizei.
Procedeul conform invenției constă în cuplajul covalent al anticorpului antipesticid la nanoparticule de bioxid de siliciu având avantajul unei suprafețe specifice mari (> 200 m2/g) comparativ cu metoda clasică (cm2/g), cuplarea covalentă elimină desorbția anticorpului din metoda clasică cât și scăderea timpului de analiză in tehnica ELISA în faza omogenă față de tehnica clasică în care reacția antigen anticorp este heterogenă (are loc la suprafața tubului de reacție).
Procedeul conform invenției constă în aceea că 2 g de nanoparticule de bioxid de siliciu de mărime Φ=14 nm (14*IO'9 m) și arie 200 m2/g sunt tratate cu HNO3 10% timp de 1 oră la temperatura de 60°C urmat de incubare cu soluție de a-aminopropiltrietoxisilan 10% în apă distilată pentru 3 ore la 70°C. Se spală cu apă distilată de 3 ori apoi cu alcool etilic și se depozitează la 4°C în vederea cuplării cu anticorpul antipesticid. Procedeul conform invenției constă în aceea că legarea covalentă a anticorpului de nanoparticulă folosește glutaraldehida ca agent de cuplaj.
Procedeul constă in 3 etape, Eb E2 si E3:
El: Obținerea nanoparticulelor Si()2-(C21ly())țfi-Cdlf-\II2: 2 g de nanoparticule de S1O2 (Φ=14 nm și arie specifica 200 m2/g) și 100 nwH^IQî 10% sunt agitate timp de 1 oră la
Director General IFIN-HH, Ni Dr. Nicolae Victor Zamfir (\~2 Ο 1 0 - Ο Ο 9 7 5 - 1 4 -10- 2010
temperatura de 60°C. După îndepărtarea supernatantului prin centrifugare la 15OOxg timp de 10 minute nanoparticulele sunt colectate și tratate cu 100 ml de a-aminopropiltrietoxisilan 10% în apă distilată sub continuă agitare, la temperatura de 70°C timp de 3 ore. Amestecul este centrifugat la 1500xg timp de 10 minute, supernatantul fiind înlăturat iar nanoparticulele de SiO2-(C2H5O)3Si-C3H6-NH2 sunt colectate și spălate de 3 ori cu apă distilată (30 ml) urmată de o spălare cu un volum de 20 ml de alcool etilic.
E2: Obținerea nanoparticulelor activate de SiOț-(C2Hs)3Si-C3Hf,-N=HC-(CH2) i-CHO: La 1,5 g nanoparticule rezultate din etapa El se adăugă un volum de 50 ml soluție de glutaraldehidă 0,1 % în apă distilată sub continuă agitare la temperatura de 35 °C timp de 15 minute urmată de centrifugare la 1500xg timp de 15 minute și îndepărtarea supernatantului. Nanoparticulele activate cu glutaraldehidă sunt folosite imediat pentru cuplarea cu anticorpul antiacid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic.
E3: Obținerea nanoimunosorbentului SiO2-(C2Hs)3Si-C3H6-N=HC-(CH2)3-CH=Nanticorp anti 3,6-dicloro-2-metoxi benzoic: Nanoparticulele activate rezultate din etapa E2 se suspendă în 50 ml tampon fosfat 50 mM pH 8,6 apoi se adaugă 1 ml antiseranti acid 3,6-dicloro2-metoxibenzoic la temperatura de 35 °C sub agitare continuă timp de 2 ore urmat de centrifugare la 1500xg timp de 15 minute și îndepărtarea supernatantului apoi spălate de 3 ori cu tampon fosfat 50 mM pH 8,6, nanoparticulele de imunosorbent SiO2-(C2H5)3Si-C3H6-N=HC(CH2)3-CH=N-anticorp anti 3,6-dicloro-2-metoxi benzoic obținute în urma centrifugării se depozitează la 4 °C în vederea utilizării în tehnica ELISA de dozare a acidului 3,6-dicloro-2metoxibenzoic.
Reacții chimice de obținere a nanoimunosorbentului nanoparticulă de (SiO2)(C2H5O)3Si-C3H6-N=CH-(CH2)2-CH=N-anticorp anti acid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic:
CV2010-00975-1 4 -10- 2010
+(C2H5O)3Si-C3H6-NH2 (Faza solida) nanoparticula de SiO2 d=14nm S=200m2/g
( țy-aminopropiltri -etoxisilan)
i-OH /O-C2H5
Si-O-Si-C3H6-NH2 o-c2h5
SiO2 (d=14nm) (nanoparticula de SiO2 grefata cu (f-amin opropiltri -etoxisilan)
(d=l4ntn) i-OH +OHC-(CH2)î-CHO (glutaraldehida)
i-OH ^O-C2H5
Si-O-&C3H6-N=CH-(CHf)3-CHO
O-C,lls nanoparticula de SiO2 (ictivpța glutaraldehida
Director General IFIN-HH, Dr. Nicolae Vie ir
7VI * V/'
CV2010-00975-1 4 -10- 2010
i-OH (d=I4nm) ,O-C2H5 fiffiSi-O-SfC3lI6-N=CH-(CH2)3-CHO
O-C2H5 +H2N-Anticorp anti Dicamba ^o-c2H5
Si-O-Si-C3H6-N=CH-(CH2)3-CH^N-Anticorp anti Dicamba \>-c2h5
(d=14nm)
Nanoimunosorbent -bioxid de siliciu-aminopropil trietoxisilan-glutaraldehidanticorp anti acid 3,6-dicloro-
2-metoxi benzoic
Procedeul conform invenției prezintă avantajul că, prin utilizarea nanoparticulelor de oxid de siliciu de mărime 14 nm și suprafață specifică de 200 m2/g rezultă nanoimunosorbenți ce pot fi utilizați în tehnica EL1SA în fază omogenă, reacția antigen anticorp fiind mai rapidă decât în tehnica ELISA clasică (fază heterogenă), ceea ce conduce la reducerea timpului de analiză, iar separarea complexului imun se face simplu, prin centrifugarea nanoimunosorbentului cuplat cu antigenul iar cantitatea de nanoimunosorbent utilizat la o imunoanaliză este extrem de mică datorită suprafeței specifice mari.
Se prezintă mai jos un exemplu de aplicare a procedeului conform invenției pentru obținerea nanoimunosorbentului nanoparticulă de bioxid de siliciu-aminopropil-trietoxisilanglutaraldehid-anticorp anti acid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic ce conține obiectul acestei invenții.
CX.-2 O 1 0 - O O 9 7 5 - 1 4 -10- 2010
Potrivit invenției 2 g de nanoparticule de SiCb de mărime Φ=14 nm și arie 200 m2/g se tratează cu o soluție de HNO3 10% timp de o oră urmată de incubare cu a aminopropiltrietoxisilan 10% în apă distilată pentru 3 ore la 70°C urmată de spălarea cu 30 ml apă distilată de 3 ori și 20 ml alcool etilic o dată, iar supernatantul este îndepărtat prin centrifugare la 1500xg timp de 10 minute urmată de tratarea nanoparticulelor în vederea activării cu 50 ml soluție de glutaraldehidă 0,1 % în apă distilată, sub agitare continuă la temperatura de 35°C, supernatantul este îndepărtat prin centrifugare la 1500xg timp de 15 minute iar nanoparticulele activate rezultate se suspendă în tampon fosfat 50 mM pH 8,6 urmat de adăugarea de 1 ml antiser antiacid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic la temperatura de 35°C timp de 2 ore sub continuă agitare urmată de 3 spălări cu tampon fosfat 50 mM pH 8,6 și îndepărtarea supernatantului prin centrifugare la 1500xg timp de 15 minute iar nanoparticulele de imunosorbent bioxid de siliciu-aminopropil-trietoxisilan-glutaraldehid-anticorp anti acid 3,6dicloro-2-metoxibenzoic se depozitează la 4°C în vederea utilizării în tehnica ELISA de dozare a acid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic.
Claims (1)
- Procedeul de obținere a nanoimunosorbentului nanoparticulă de bioxid de siliciuaminopropil-trietoxisilan-glutaraldehid-anticorp anti acid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic este caracterizat prin aceea că 2 g de nanoparticule de SiO2 de mărime Φ=14 nm și arie 200 m’/g se tratează cu o soluție de HNO3 10% timp de o oră urmată de incubare cu a aminopropiltrietoxisilan 10% în apă distilată pentru 3 ore la 70°C urmată de spălarea cu 30 ml apă distilată de 3 ori și 20 ml alcool etilic o dată, iar supernatantul este îndepărtat prin centrifugare la 1500xg timp de 10 minute urmată de tratarea nanoparticulelor în vederea activării cu 50 ml soluție de glutaraldehidă 0,1 % în apă distilată, sub agitare continuă la temperatura de 35°C supernatantul este îndepărtat prin centrifugare la 1500xg timp de 15 minute iar nanoparticulele activate rezultate se suspendă în tampon fosfat 50 mM pH 8,6 urmat de adăugarea de 1 ml antiser antiacid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic la temperatura de 35°C timp de 2 ore sub continuă agitare urmată de 3 spălări cu tampon fosfat 50 mM pH 8,6 și îndepărtarea supernatantului prin centrifugare la 1500xg timp de 15 minute iar nanoparticulele de imunosorbent bioxid de siliciu-aminopropil-trietoxisilan-glutaraldehid-anticorp anti acid 3,6dicloro-2-metoxibenzoic se depozitează la 4°C în vederea utilizării în tehnica EL1SA de dozare a acid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ROA201000975A RO127441B1 (ro) | 2010-10-14 | 2010-10-14 | Procedeu de obţinere a nanoimunosorbentului bioxid de siliciu-aminopropiltrietoxisilan-glutaraldehid anticorp antiacid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ROA201000975A RO127441B1 (ro) | 2010-10-14 | 2010-10-14 | Procedeu de obţinere a nanoimunosorbentului bioxid de siliciu-aminopropiltrietoxisilan-glutaraldehid anticorp antiacid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RO127441A2 true RO127441A2 (ro) | 2012-05-30 |
| RO127441B1 RO127441B1 (ro) | 2013-04-30 |
Family
ID=46160491
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ROA201000975A RO127441B1 (ro) | 2010-10-14 | 2010-10-14 | Procedeu de obţinere a nanoimunosorbentului bioxid de siliciu-aminopropiltrietoxisilan-glutaraldehid anticorp antiacid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RO (1) | RO127441B1 (ro) |
-
2010
- 2010-10-14 RO ROA201000975A patent/RO127441B1/ro unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RO127441B1 (ro) | 2013-04-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Shahdeo et al. | Label free detection of SARS CoV-2 Receptor Binding Domain (RBD) protein by fabrication of gold nanorods deposited on electrochemical immunosensor (GDEI) | |
| CN105651999B (zh) | 一种基于二硫化钼的传感器及其制备方法和应用 | |
| CN102967706B (zh) | 检测肿瘤标志物流动注射化学发光免疫传感器的制备及应用 | |
| CN106066324B (zh) | 一种电致化学发光生物传感器标记物的制备方法 | |
| CN103411948A (zh) | 基于探针标记免疫金-磁性复合材料检测甲胎蛋白的sers方法 | |
| CN106093438B (zh) | 一种利用杂交链反应便携式检测血管内皮生长因子的方法以及该方法所用的核酸序列 | |
| CN103773856A (zh) | 一种汞离子的超灵敏检测方法及检测试剂盒 | |
| CN104764784B (zh) | 基于核酸适配体检测汞离子的生物传感器及其制备方法 | |
| CN106018805B (zh) | 一种非诊断目的的hiv抗体免疫检测方法及试剂盒 | |
| CN103983769B (zh) | 一种纳米金免疫层析毛细管的制备方法 | |
| CN107121415A (zh) | 一步式免标记荧光快速检测汞离子的方法 | |
| CN109254063A (zh) | 一种负载型普鲁士蓝电化学生物传感器标记物的制备方法 | |
| CN103940808B (zh) | 一种双信号放大电化学发光生物传感器的制备方法及应用 | |
| CN105567808A (zh) | 滚环扩增产物为模板的铜纳米颗粒合成方法及其在电化学检测中的应用 | |
| RO127441A2 (ro) | Procedeu de obţinere a nanoimunosorbentului bioxid de siliciu-aminopropiltrietoxisilan-glutaraldehid anticorp antiacid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic, utilizat în tehnica elisa de dozare a pesticiduluiacid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic | |
| WO2011023909A1 (fr) | Proteines utilisees pour le diagnostic d'une borreliose de lyme | |
| CN102914520B (zh) | 检测结核的表面等离子共振生物传感器,制备方法及其应用 | |
| CN101768217A (zh) | 铜离子抗原及其制备方法与应用 | |
| CN113049831B (zh) | 检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒及其制备方法和应用 | |
| CN110887829B (zh) | 纳米酶-表面增强拉曼基底、氟离子检测试剂盒及其应用 | |
| RO127570B1 (ro) | Procedeu de obţinere a nanoimunosorbentului bioxid de siliciu-aminopropiltrietoxisilan-glutaraldehid-albumină serică de bovină-acid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic | |
| CN102180967A (zh) | 一种非损伤性提取普氏野马免疫球蛋白IgA的方法 | |
| RO128870A2 (ro) | Procedeu de obţinere a nanoimunosorbentului nanoparticulă de bioxid de siliciu-aminopropiltrietoxisilan-glutaraldehid-ovalbumină-trenbolonă utilizat în tehnica elisa de dozare a trenbolonei | |
| CN107064505A (zh) | 一种基于核酸适体自催化作用的癌胚抗原检测试剂盒及其制备方法 | |
| US9201070B2 (en) | Antigenic structure and uses thereof for screening trypanosomiases in humans and animals |