RO115785B1

RO115785B1 - Compozitie farmaceutica pentru tratamentul bolilor neurodegenerative

Info

Publication number: RO115785B1
Application number: RO94-01015A
Authority: RO
Inventors: Kalman Magyar; Jozsef Gaal; Istvan Sziraki; Jozsef Lengyel; Z Anna Szabo; Katalin Marmarosi; Istvan Hermecz; Istvan Szatmari; Zoltan Torok; Peter Kormoczy
Original assignee: Chinoin Gyogyszer Es Vegyeszet
Priority date: 1991-12-20
Filing date: 1992-12-18
Publication date: 2000-06-30
Also published as: FI942932A0; CZ147494A3; LV10386A; HU914060D0; HUT63579A; US5589513A; ECSP930933A; ZA929883B; BR9206950A; PH31073A; CA2125776A1; EE03015B1; IL104150A; NZ246384A; AU3265293A; RU2125448C1; PL172048B1; JPH07502730A; LTIP249A; HU211478A9

Abstract

Inventia se refera la o compozitie farmaceutica pentru tratamentul bolilor neurodegenerative, care contine 5...95% inhibitor de oxidaza monoamina, 5...95% inhibitor de absorbtie si ingredienti acceptabili farmaceutic, rapoartele fiind exprimate in greutate.

Description

Invenția se referă la o compoziție farmaceutică, pentru tratamentul bolilor neurodegenerative, conținând ingrediente active, rezultând concentrații adecvate în timp și nivel, atât în sânge, cât și în creier și la un procedeu pentru prepararea acesteia.

Se cunoaște că oxidaza de monoamină (MAO) este una din enzimele principale de metabolizare (Blaschko H.Pharmacol.Rev.4, 415, (1951)) a aminelor biogenetice care apar în celulele nervoase umane. Datorită activității sale aminele biogenetice care joacă un rol esențial în neurotransmisie, sunt descompuse în metaboliți ineficienți. S-a identificat că în anumite boli nivelul aminelor biogenetice din creier era micșorat.

Agenții care inhibă enzima de metabolizare (enzimele de metabolizare) pot restabili nivelul normal al acestor amine. Acesta este motivul pentru care inhibitorii MAO au fost introduși în terapia umană. Există observații că inhibitorii MAO pot conduce la un efect secundar grav care este legat de potențarea tiraminei (structural, xl amină biogenetică (“reacția cheese”) care este derivată din alimente și poate induce o creștere a presiunii sângelui și poate fi letală. (Piackar și colaboratorii, Psychopharmacology 73, 3067, (1981)].

MAO există în două forme, denumite MAO-A și MAO-B. Inhibând în mod selectiv forma B, forma A este capabilă să descompună tiramina, care este un tip amestecat de substrat și efectul periculos secundar poate fi evitat. Acest lucru poate fi observat în cazul substanței (-)-deprenil, /(-)N-(-l-fenil-izopropil)-N-metil-propinilamin-clorhidrat) /care inhibează în mod selectiv și ireversibil enzima MAO-B (Elsworth et al., Psychopharmacology 57, 33, (1978)/. Din cauza inhibării ireversibile, recuperarea activității enzimei poate fi datorită resintezei de enzimă nouă.

Dezvoltarea inhibiției ireversibile a enzimei cuprinde două trepte. Prima este reversibilă și numai formarea a celui de-al doilea complex de inhibitor de enzimă devine ireversibil. Jumătatea timpului de regenerare a enzimei este de 7-8 zile./Oreland et al., J.Neural.Transm.Suppl.32, 55-59 (1990)/.

Caracteristicile substratului enzimelcr și selectivitatea inhibitorilor celor mai cunoscuți sunt descrise de către Dostert și colaboratorii săi (Medicinal Research Reviews, Vol.9, No.1,45-89, (1989)).

Balard/Science 219, 979-980, (1980)/ și Burns (proc.Natl.Academy Sci 80, 454&4550 (1983)/descrie că MPTP (1-metil-4-feniH ,2,3,6-tetrahidropiridină) datorită activității sale neurotoxice stârnește sindromul parkisonian la om și s-au observat simptome similare la experiențele cu animale. MPTP provoacă o deteriorare selectivă a neuronilor dopaminergetici a lui corpus striatus. Alterațiile histologice sunt similare cu cea observată la creierul parkinsonian post-mortem. Se cunoaște că acest efect al MPTP poate fi prevenit cu inhibitori MAO, mai ales cu deprenil. Rolul de prevenire a lui (-)-deprenil este datorat inhibării transformării MPTP în MPP⁺./Nature, 311, 467, (1984)/. Deteriorarea neuronală indusă de MPTP poate fi întârziată și cu inhibitori de absorbție a dopaminei (Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 82, 2175, 1985/cum ar fi mazindol, prin inhibarea absorbției active de MPP⁺ (metil-fenilpiridiniu ca ion) în neuronii dopaminergetici.

în timpul acțiunii MAO se formează peroxid de hidrogen și radicali cu oxigen liber, care pot duce la o deteriorare oxidantă a neuronilor. Prin MAO se pot forma și amoniac și izochinoline ciclice, care pot fi considerate ca neurotoxice/Maret et al.,

Drug metabolism, Reviews, 22, 291-332 (1990); P.Rienderer et al., Acta

Neurol.Scand. 126, 41, (1989); Benedetti and Dostert, Biochem. Pharm. voi.38,

555, (1989)/.

RO 115785 Bl

Se cunoaște că DSP-4 /N-(2-cloretil)-N-etil-2-brom-benzilamina/, un agent neurotoxic, induce selectivitatea evacuării noradrenalainei (NA) din neuronii nora- 50 drenergici periferici și centrali /Grzanna et al. J.Histochem, Cytochem, 1435-1442, (1989)/.

Se mai cunoaște că inhibitorii de reabsorbție, cum ar fi, desipramina/10,11dihidro-N-metil-5-H-dibenz(6,7) azepin-5-propanamina) inhibă efectul de evacuare a NA al DSP-4 (Johnsson et al., Neuroscience, 7, 2895, (1982); Ross Br.J.Pharmacol., 55 58 521, (1976)/ - MDL 72974A/(E)-4-fluor-beta-fluor-etilen benzen butamină/, un inhibitor foarte selectiv de MAO-B nu are proprietăți de blocare a reabsorbției catecholaminergice și dă greș în prevenirea toxicității induse de DSP-4 (Finnegen et al. Eru. J. Of Pharmacol., 184, 119-126 (1990)/.

A devenit clar, că (-)-deprenil nu poate fi considerat numai ca un inhibitor simplu 60 selectiv, ireversibil al lui MAO-B. S-a constatat că el inhibează absorbția dopaminei, noradrenalinei și tiraminei în terminalele nervilor și în ganglionii periferici, dar numai în doze extrem de ridicate/Knoll, Advances in Biochem. Psychopharmacology,vol.5, 393, (1972)/. Trebuie să se păstreze în minte că, în plus față de efectul inhibitor asupra MAO deprenilul posedă o activitate inhibitoare a absorbției. 65

Scopul nostru a fost să preparăm o compoziție farmaceutică cu proprietăți optime pentru tratarea bolilor neurodegerative.

Invenția se referă la o compoziție farmaceutică pentru tratamentul bolilor neurodegenerative constituită din 5-95% inhibitor de oxidază monoamină; 5-95% inhibitor de absorbție și ingrediente acceptabile farmaceutic, rapoartele fiind exprimate 70 în greutate; inhibitorul de oxidază monoamină este un inhibitor de oxidază monoamină reversibil sau ireversibil cu activitate susținută; inhibitorul de absorbție este un inhibitor de absorbție cu activitate susținută; inhibitorul de oxidază monoamină și inhibitorul de absorbție sunt în raport de greutate de 1-19:1-19; inhibitorul de absorbție este o formă retard; inhibitorul dei oxidază monoamină este clorhidratul de 75 N-(1-fenil-izopropil)-N-metil-propinilamină sau un izomer optic activ al acestuia; inhibitorul de oxidază monoamină este N-(4-fluor'fenil]-izoprop-1-il-N-metil-propinilamină sau un izomer optic activ al acestuia; inhibitorul de absorbție retard este clorhidrat de N(l-fenil-izopropil)-N-metil-propinilamină sau metabolitul acestuia sau izomerii optic activi sau metaboliții acestuia; inhibitorul de absorbție retard este N-(4-fluorfenil)-izoprop-1-il- 80

N-metil-propinilamină sau metabolitul acestuia sau izomerii optic activi sau metaboliții acestuia; inhibitorul de absorbție este un compus, cu formula generală I:

ch₂- ch-nh în care: R¹ este o grupare alchil lineară sau ramificată, o grupă C7-C10 fenilalchil sau o grupă fenil sau o grupă C3-CgCicloalchil;R² este o grupă alchil lineară sau ramificată sau o grupă alchil substituită cu un atom de halogen, hidroxi, o 90 grupă C-j-C^ alcoxi sau cu una sau două grupe fenil, o grupă fenil sau o grupă C3-C₀cicloalchil cu condiția ca, R¹ și R² să aibă împreună cel puțin 3 atomi de carbon sau unele săruri de adiție acidă sau metaboiiți ai acestuia; în compusul cu formula generală I ,R² este o grupă etil, propil, butii, hexil, fenil sau fenilmetil; compusul cu formula generală I este N-propil-1-fenil-2-pentilamina sau sarea de adiție acidă a 95 acestuia, N-propil-1 -fenil-2-butilamina sau sarea de adiție acidă a acestuia sau N-propil1-fenil-2-hexilamina sau sarea de adiție acidă a acestuia; este formulată sub formă de

RO 115785 Bl peleți, tablete sau compoziții transdermice în două faze.

Compoziția este adminstrată în funcție de starea pacientului, de gravitatea imaginii clinice și de sensibilitatea individuală a pacientului într-o doză de 5-20, în mod avantajos, de 10 mg/zi.

în măsura în care inhibitorul de absorbție nu este cu activitate prelungită, se utilizează în mod avantajos inhibitorul într-o formă retard.

Ca inhibitor de MAO se pot folosi în mod avantajos deprenil, p-fluor-deprenil, sărurile lor, respectiv, izomerii activi ai acestora.

Ca inhibitori de absorbție se pot folosi în mod avantajos deprenil, p-fluor-deprenil sau un compus cu formula generală I:

în care: R¹ este o grupare de alchil C1fl cu lanț drept sau ramificat, o grupare fenilalchil-C7.10, sau o grupare fenil, o grupare cicloalchil-C^; R² este o grupare alchil C143 cu lanț drept sau ramificat sau o grupare alchil C^ substituită cu un atom de halogen, o grupare alcoxi C₁₄ sau cu una sau două grupări de fenil, o grupare fenil sau o grupare cicloalchil C_M cu condiția ca, R¹ și R² conțin împreună cel puțin 3 atomi de carbon - sau săruri de adiție cu acid sau metaboliți ai acestora.

Drept compus, cu formula generală I, se pot utiliza în mod avantajos N-propil-1 fenil-2-pentilamina sau sarea ei de adiție cu acid, N-propil-1 -fenil-2-butilamina sau sarea ei de adiție cu acid sau N-propil-1 -fenil-2-hexilamina sau sarea sa de adiție cu acid.

Compozițiile în două faze, conform invenției, pot fi preparate prin metode cunoscute în sine sub formă, de pelete, tablete, tablete cu înveliș acoperitor, compoziții transdermale, drageuri, microcapsule conținând suspensie, capsule, capsule acoperite cu un înveliș, suspensii per os, injecții de suspensii utilizând materiale auxiliare cunoscute.

Ca materiale auxiliare se pot utiliza în mod avantajos următoarele materiale:

a] Ca materiale de umplere: zaharoză, lactoză, manitol, amidon, amidon-talczaharoză, fosfat de calciuc, soluție hidroalcoolică de polividonă (polivinilpirolidonă], etc.

b] Materiale auxiliare de producere a efectului retard:

- bază liofilică (acid stearic, palmitat de acid stearic, ditripalmit-stearat de gliceril, etc.];

- alte materiale auxiliare cunoscute în tehnologia farmaceutică: derivați de eudragit, etc.

- Derivați de celuloză: HPMC, CMC, EC și sărurile lor.

c] lichid de granulare: apă, etanol, etanol-apă, izopropanol, izopropanol-apă.

d] Lianți: PVP/VA, derivați de eudragit, derivați de celuloză și sărurile acestora. Se mai poate proceda într-un mod în care compoziția farmaceutică este preparată in situ, adică pacientul este tratat simultan cu doza potrivită de inhibitori de MAC necesară pentru a atinge în mod continuu o inhibare a MAO de 98% și o doză potrivită de inhibitor de absorbție necesară pentru a atinge o inhibiție continuă a absorbției.

Prepararea deprenilului, p-fluor-deprenilului, compuși cu formula generală I este descrisă în specificația de brevet US 4564706; specificația de brevet european

186680 și specificația de brevet portughez 85769.

RO 115785 Bl

Se dă, mai jos, exemplul de realizare al invenției:

□ tabletă din două faze este preparată printr-o metodă cunoscută în sine:

Compoziție

Faza internă: preparată din granulare dublă

a) Deprenil	5 mg	150
Methocel k 4 M premium	50 mg
Lactoză	20 mg
Quantum satis de izopropanol pentru	prepararea de granule
b) Deprenil	10 mg
Amylum maydis	40 mg	155
Avicel PH-101	20 mg
PVP K-25	10 mg

____Quantum satis de izopropanol pentru prepararea de granule (se poate utiliza și apă distilată) 160

Faza externă:

Stearină de Mg

Talc

Aerosil-200 mg mg mg

165

2. Prepararea de tablete retard cu un conținut de 15 mg deprenil

Componenta
Deprenil	15 mg
Acid stearic	30 mg
Eudragit RSPM	45 mg
Collindon VA 64	47 mg
Carbopol 940	35 mg
Sterotex	25 mg
Stearat de magneziu	3 mq
(diametrul tabletelor 8 mm)	220 mg

1. Modul de preparare este următorul:

1. Prepararea de granule prin granulare uscată, metodă bine cunoscută per 180 se.

Ordinea de succesiune în amestecarea pulberii: Collidon VA 64, Carbopol 940, acid stearic, terotex (atomizat) (ulei din sămânță de bumbac hidrogenat), Eudragit RSPM (copolimer de ester de acid acrilometacrilic), deprenil.

2. Tabletarea amestecului de pulbere cu mașina de tabletare excentrică la 185 turație redusă.

Rezultatele testului de dizolvare. S-au efectuat trei măsurători paralele. O celulă a conținut 15 tablete.

a) 316,5 cg/15 buc.

b) 316,0 cg/15 buc. 190

c) 319,0 cg/15 buc.

Mediul utilizat pentru dizolvare a fost fluid gastric artificial fără pepsină (Ph.Hg.VII)

RO 115785 Bl

Diluția este zero d = 1 cm λ = 256 mm

Rezultate:

Timp (minute)	Substanță activă dizolvată %
10	4,5
15	9,0
30	21,0
60	31,2
90	47,7
120	39,3
150	41,1
180	48,6
240	51,9
300	63,3
360	69,0
420 (7 h]	75,6

3. Prepararea de pelete în două faze - fast (rapide) și “slow (încete) cu următoarea compoziție x PELETE FAST

- pelete neutre (sfere din zahăr)		61,1 mg
- deprenil		16,3 mg
- lactoză		16,6 mg
- polividonă (K30)		6,3 mg
PELETE SLOW
- pelete neutre (sfere de zahăr)		44,6 mg
- deprenil		11,9 mg
- lactoză		11,9 mg
- polividonă (K30)		4,6 mg
- etilceluloză	cca	8,4 mg
- talc	cca	16,9 mg
- ulei de ricin	cca	1.7 mg

Procesul de preparare:

Cristalele de zaharoză sunt acoperite cu un înveliș dintr-un amestec de amidonzaharoză și o soluție de apă și alcool care cuprindea polividona și zaharoza (sfera de zahăr].

Se atașează pe microgranule un amestec de Deprenil clorhidrat și lactoză folosind o soluție alcoolică de polividona.

RO 115785 Bl în cazul peletei slow”, pe microgranulele obținute se aplică un la alcoolic de etilceluloză (plastifiată cu ulei de ricin) și talc.

Pentru a obține peleta “fast and slow”, cerută cantitățile dorite de pelete “fast” și “slow sunt amestecate într-o capsulă printr-o metodă cunoscută în sine.

4. Prepararea compoziției transdermale În două faze (UG-191)

235

240

Componente

Carbowax 35000	1,0
Carbowax 4000	16,0
Carbowax 400	53,0
1,2-propilen-glicol	2,0
Xanthan gum	15,0
Deprenil	7,0
Cremophor EL	6,0 100,0

245

Componentele de Carbowax au fost topite și amestecul a fost turnat în vasul de amestecare de tip Erweka la 5O°C și a fost amestecat la treapta 6. Deprenilul s-a dizolvat și s-a suspendat într-un amestec de propilen-glicol și Cremophor EL, la 5O°C și amestecul a fost adăugat în porțiuni (de câte 50 g) în vasul de amestecare. După fiecare porțiune amestecul a fost amestecat, timp de 1 min. în final, la viteză mărită (treapta 9) Xanthan gum a fost adăugat în porțiuni de câte 5 g fiecare. După fiecare porțiune adăugată, amestecul a fost amestecul, timp de 1 min. Apoi, viteza de amestecare a fost micșorată la treapta 3,5 și amestecul a fost continuat până la răcire (aproximativ 1,5 h). Conținutul în substanță activă este de 6,84 % și stabilitatea este corespunzătoare.

în cursul experimentărilor noastre am constatat că:

1) O inhibare pe termen lung a MAO poate fi realizată numai când concentrația inhibitorului în creier și în sânge ajunge destul de ridicată (15-40 pmol/mg țesut). Când concentrația inhibitorului este prea ridicată (30 mg/zi) concentrația metaboliților va fi, de asemenea, destul de ridicată pentru a produce un efect psihostimulant nedorit și/sau selectivitatea inhibitorului va fi, de asemenea, pierdută (MAO-A este, de asemenea .inhibat).

2) Deprenilul și p-fluor-deprenil/N-(4-fluor-fenil)-izopropil-1-il)-N-metil-propinilamina exercită activitatea lor, atât ca sursă, compus nemodificat, cât și ca și metaboliții.

Rezultatele sunt ilustrate în fig. 1 și 2.

După administrarea orală a deprenilului și p-fluor-deprenilului marcați în mod alternativ și pozițional (inel-³H și propargil-¹⁴C (1, 5, 10 mg/kg, respectiv) distribuția compușilor a fost testată în 15 regiuni ale creierului (părțile perechi ale creierului au fost studiate separat toate împreună în 25 regiuni ale creierului și în plasmă, timp de 96 h, ca funcție de timp la șobolani). S-a constatat că, compusul nemodificat a fost absorbit repede (15 min), și a pătruns în sistemul nervos central. Molecula de deprenil nemodificată are o durată în timp scurtă în creier, dar metaboliții pot fi găsiți într-o perioadă mai lungă, în țesuturi.

Prezența simultană și cantitățile egale din cele două marcaje indică molecula neschimbată (datele se referă la concentrațiile molare calculate pe baza celor două marcaje). Din cauza schimbării rapide observate în raportul injectat de ³H/¹⁴C în țesuturi, experimentele ale noastre indică o formare importantă de metabolit (amfetamină, metilamfetamină, p-fluor-metilamfetamină și p-fluor-amfetamină) și prezența lor în creier.

250

255

260

265

270

275

280

RO 115785 Bl

3) Metaboliții potențiali de deprenil și p-fluor-deprenil (metilamfetamină, amfetamină și p-fluor-metilamfetamină,respectiv, p-fluor-amfetamină] au o potență inhibatoare de absorbție importantă; ei pot preveni in vivo neurotoxicitatea MPTP fără dezvoltarea unui grad important de inhibare MA0. Rezultatele sunt arătate în tabelele 1, 2 și 3. Testele au fost efectuate în conformitate cu metoda lui Heikilla/Nature, 311, 467-469 (1984)/.

4) Metaboliții potențiali de deprenil și p-fluor-deprenil (metilamfetamină, amfetamină și p-fluor-metilamfetamină,respectiv, p-fluor-amfetamină) sunt capabili să prevină in vivo într-o doză de 1-5 mg/kg (i.p ) Neurotoxicitatea indusă DSP-4 fără dezvoltarea unei inhibări MAO.

Rezultatele sunt arătate în tabelul 8.

Testele au fost realizate în conformitate cu metoda lui Finnegan/Finnegan et al., Eur.J.Pharmacol., 184, 119-126, (1990)/.

Utilizând metaboliții în concentrație ridicată in vivo [ 10_ mg/kg; i.p.). Ei au potențat efectul toxic al DSP-4, care a fost indicat prin moartea animalelor.

5) Pentru a preveni neurotoxicitatea sunt necesare prezențele pe termen lung a metaboliților, fie printr-o concentrație destul de ridicată a compusului neschimbat în timpul unei perioade mai scurte, (o concentrație necesară pentru a completa inhibarea ireversibilă a MAO-B] sau din cauza reversibilității inhibiției absorbției.

S-a găsit că efectul maxim poate fi atins când ambele condiții sunt îndeplinite.

Stadiul cristalin lichid: 100% cu cristale solide de transludens de 8-10 μ. (Cramophor EL: poli-etilenglicol-ricinoleat de glicerină. Xanthan gum: polizaharidă).

Date farmacologice

Sistematizând condițiile experimetnale, trebuie să se ia în considerație următoarele date:

Măsurătoarea directă in vivo a potenței inhibitorului de absorbție a metaboliților nu a fost posibilă, datorită caracterul lor reversibil.

Potența inhibitorului MAO-B - utilizând activitatea plăcuței MAO-B ca indicator este măsurabilă periferic la porci (plăcuțele provenind de la alte specii nu conțin o activitate a enzimei MAO-B care se poate măsura bine.

Măsurarea dependenței de timp a DSP-4, în ceea ce privește neurotoxicitatea la șobolani (utilizând conținutul de noradrenalina a hippocampus-ului ca indicator) după pretratare cu diferite doze, respectiv .forme de dozare ale deprenilului, corelarea dintre lipsa neurotoxicității DSP-4 și nivelul adecuat, dar nu extrem de ridicat în sânge a metaboliților de deprenil, poate fi demonstrată.

într-o serie de experimentări s-a determinat, de asemenea, nivelul permanent al metaboliților de deprenil în sânge la porci domestici, măsurătorile fiind făcute cu tehnici analitice, determinându-se și activitatea în plăcuțe, creier și ficat a MAO.

Experimentările au fost efectuate pe femele (albe) de porci domestici, cântărind 20-25 kg. Porcii au fost închiși în cuști, în mod separat în timpul experimentărilor și a fost dată aceeași hrană, care a fost utilizată mai înainte.

Animalele au fost tratate oral, cu 5; 7,5 10; 15 mg de (-)-deprenil într-o paletă și cu 10 mg iv. S-au luat probe de sânge (5 ml), la O; 0,08;, 0,25; 0,5; 0,75; 1; 1,5;

2; 3; 4; 6; 12; 24 și 48 h, în tuburi de centrifuge conținând 500 IU heparină pentru măsurătoare analitică. Probele au fost centrifugate la 1500 rot/min, timp de 10 min pentru a separa plasma. Metaboliții au fost determinați prin metoda GC, utilizând cromatograful în gaz Hp-5890, timpul de eluare pentru metilamfetamină: 21,4 min.

Rezultatele sunt arătate în fig.3.

RO 115785 Bl

Inhibiția neurotoxicității DSP-4 a fost măsurată la șobolani. Pentru tratarea șobolanilor s-a utilizat schema lui Finnegan (Finnegan et al., Eur.J.Pharmacol., 184, 119-126, (1990)/.

S-au utilizat șobolani masculi, Wistar, cântărind 170-200 g. Animalele au fost adăpostite câte șase într-o cușcă la temperatură constantă (22°C), într-o încăpere iluminată 12 h/zi. Li s-a dat din plin nutreț si apă. Șobolanii au fost pretratați oral cu mg/kg din combinația exemplului 3 (1 mg/kg fast” (F) + 2 mg/kg “slow” (S), 1,2, și 8 h, înainte de tratamentul cu DSP-4 (50 mg/kg; intraperitoneal).

înainte de pretratamentul cu (-)-deprenil, animalele au fost lăsate să flămânzească, timp de 24 h. Hippocampus-ul șobolanilor a fost disecat și conținutul de noradrenalină a fost măsurat prin tehnica HPLC.

Rezultatele sunt arătate în fig.4.

Așa cum se poate vedea din fig. 4, 3 mg/kg deprenil p.o. poate preveni neurotoxicitatea a 50 mg/kg DSP-4 ip. la șobolani. în cazul formulării de control (“fast”) această prevenire este ridicată în prima perioadă (86,1%), dar descrește exponențial și după 8 h ajunge la nivelul controlului tratat cu DSP-4 (19,6%). Formularea revendicată produce o inhibare de 58,8%, inhibarea este practic identică (54,5) cu cea a formulării de control (51,5%) după două ore, dar este în mod semnificativ mai ridicată (43,31%) decât cea a aceleia (16%) și practic, nu se schimbă timp de opt ore. în cazul tratamentului cu 4 mg/kg deprenil, am găsit că formularea de control (fast”) a ușurat neurotoxicitatea DSP-4 într-un timp dependent de contrastul față de formularea revendicată (“fast and slow”). (Vezi fig.5). Aceasta înseamnă că doza de component “fast” nu poate fi crescută în mod nelimitat, fără să apară efecte secundare nedorite.

Dimpotrivă, aplicând competițiile revendicate cu o cantitate crescută de parte “slow”, inhibiția MAO-A va crește, ceea ce înseamnă că, selectivitatea deprenilului va fi pierdută.

Rezultatele sunt date în tabelul 4.

335

340

345

350

355

360

Tabelul 4

Inhibiția procentuală a MA0 prin preparate de deprenil

Preparat	Creier
MAO-B	MAO-A
1 mg/kg (tablete)	88,02 ± 1,49	2,55 ± 0,56
O,5±O,25 mg/kg (“fast” și slow”)	85,84 ±4,16	14,83 ± 3,37
0,5±1,0 mg/kg (fast” și “slow”)	90,50 ±3,10	27,28 ± 3,93

365

370

375 în cazul preparatelor transdermale grupul de control a fost tratat oral cu 10 mg de (-)-deprenil într-o capsulă gelatinoasă.

S-au luat probe de sânge pentru determinarea activității MAO-B la : O, 3, 6,

24, 48, 72 și 96 h. La 96 h, după luarea probelor de sânge porcii au fost omorâți și s-a determinat activitatea MAO-B și MAO-A în creierul lor disecat.

Cel de-al doilea grup a fost tratat drept control cu preparatul transdermal UG111 conținând 10 mg (-)-deprenil. Timpii de luare a probelor de sânge au fost la: O,

3, 6, 24 și 48 h. Preparatele transdermale au fost scoase la 24 h. Pentru determinarea conținutului de (-)-deprenil rezidual al preparatului s-au utilizat peticul și

RO 115785 Bl acoperământul lui de nylon. Pielea a fost spălată cu bumbac-lână etanolică, care a fost, de asemenea, utilizată pentru determinarea HPLC. Porcii au fost omorâți la 48 h și s-a determinat activitatea MAO-A și MAO-B a creierului.

Cel de-al treile agrup de porci a fost tratat drept control cu UC-167 conținând 20 mg de (-)-deprenil. Probe de sânge au fost luate la: O, 3, 6, 24, 48 și 72 h. Peticile au fost scoase la 48 h și întreaga procedură a fost efectuată așa cum s-a descris la grupul 2.

Cele patru grupuri de porci au fost tratați cu US-101 conținând 30 mg de (-)deprenil. Probe de sânge au fost luate la: O, 3, 6, 24, 48, 72 și 96 h. Peticile au fost luate la 48 h și s-a efectuat întreaga procedură descrisă la grupul 2.

Sângele a fost luat din v.cava cranialis cu o seringă de plastic 20 ml conținând 1,5 ml citrat de Na 7,6% în soluție. Volumul de sânge luat a fost de 18,5 ml, la fiecare preluare de probă de sânge.

Activitatea MAO a fost măsurată radiometric conform metodelor lui Wurtman și Axelrod (Biochem. Pharmacol. 12.1414-19; (1963)/ cu o ușoară modificare (E.Magyar în : Monoamine Oxidases and their Selective lnhibition.Ed.:K. Magyar, Pergamon Press, Akademiai Kiado, Budapest 11-21; (1980)/.

Pentru prepararea plăcuțelor s-a urmat metoda descrisă de Willberg și Oreland (Med.Biol., 54: 137-44); 1976).

Tabelul 5

Absorbția preparatelor transdermale de [-)-deprenil, ca funcție de timp la porci [Conținutul rezidual al (-}-deprenil al peticilor a fost determinat cu tehnica HPLC9

Preparat transdermal	Durata experimentului (ore)	Deprenil remanent % ± S.D.
UG-111 (control) 10 mg	24	14,2 ± 5,5
UG-167	24	36,5 ± 9,3
(control) 20 mg)		6,1 ± 5,1
UG-191	24	58,5 ± 14,1
30 mg	48	28,3 ± 12,1
	72	8,4 ± 2,4

Rezultatele inhibiției activității MAO-B a plăcuței după aplicarea transdermală și p.os sunt arătate în tabelul 6.

I ο CU sf

Ul	o	Ul
CU	CO	CD
sj	St	St

CD St |X in sj m co’ o 00 CD CD

rx o uo [X CD O ui ui ui in cd cd

CD S- VCU S- 00 oi cu' ui cu rx cd

CVI CO sf

Ul -r-_ CO co' co’ CU

CD CD CD fx τui CD

CVI rx’ +i cu oo co

Ul 00 o +1 CD το CD sf |X sf CD cu

T +1 sf cu cu rx ω co ui +1 sf rx ci ui

|X CVI O 00 CVI ui iii sf CD CD Ol

CU CD s— o cd_ ui sf sf ui CD CD CD oo ro in s— [X fx oo’ ui ix’ CD CD CD

Ul cu

co co

^.oo O Ul CD f-j oo rx ^u

cu rx cf) E O CD

CD O ui

CD sf o +1 00 |X_ sf CD

CD rx cd’ +1 cu cu rx’ ω

St CD

CD

O ω cu 00

RO 115785 Bl

Rezultatele determinării ale activității MAO în creier sunt arătate în tabelul 7.

Tabelul 7

Efectul f-J-Deprenilului asupra inhibiției activității MAO{%] ,în comparație cu proba de control. Măsurătorile au fost făcute În homogenați nucleici liberi ale creierului de porc domestic și în ficat cu ^C-PEA; substrat ¹⁴C-5-HT.+ S.D. (n=3)

Modul de aplicație	creier	ficat
¹⁴C-PEA	¹⁴C-5-HT	¹⁴C-PEA	¹⁴C-5-HT
p. os UG-114 trans-dermal	(96 h) (48 h] (24 h)	73,28±8,13 56,31±10,03	20,14±6,0 16,39+8,77	41,04+7,62 28,80±5,15	10,45+6,4 13,7 □ □
UG-191 trans-dermal	(72 h) (48 h)	86,76±6,67 86,76±6,67	18,50±3,81 18,50±3,81	30,30±10,23 30,30±10,23	19,4 19,4 0 □
UG-191 trans-dermal	(96 h] (72 h]	88,82±1,21	15,22±3,35	16,92±10,59	0

Compoziția, mărimea particulelor, procentajul stării cristaline lichide ale diferitelor preparate de control au fost următoarele:

UG-111

PEG 4000	16,0g
PEG 400	60,0 g
Propilenglicol	8,0 g
Cremophor EL	2,0 g
Deprenil HOL	5,0 g
PEG 400 ad	100,0 g

Mărimea medie a particuleleor: 72,7 p; starea cristalină lichidă: 20% UG-167

PEG 4000	19,0g
PEG 400	55,0 g
Propilenglicol	8,0 g
Xanthan gum	10,0 g
Deprenil HCL	5,0 g
PEG 400 ad	100,0 g

Mărimea medie a particulelor: 91-109 μ; starea cristalină lichidă : 70-80%.

RO 115785 Bl

Valori IC_5O ale Deprenilului și metabolicilor PFD asupra absorbției MPP⁺ 480 la synaptosor/es striați

Compus	Ι(-*50 M	Compus	M
(-)-deprenil	-	(-)-F-deprenil	-
(-)-desmetil-deprenil	-	(-)-p-F-desmetil-deprenil	-
(+)-desmetil-deprenil	0,1 χ 1O⁶
(-)-metamfetamină	4,9 χ 10’⁷	(-)-p-F-metamfetamină	1,3 χ 1O⁶
[+)-metamfetamină	9,1 x 10*	(+]-p F-metamfetamină	1,3 χ 10'⁷
		(-)-p-F-amfetamină	7,2 x 1CT⁷
		(+)-p F-amfetamină	1,0 χ ισ⁷

Humifensin 3,1 x 1 CT⁷

Mazindol 1,7x1CT⁷

495

Tabelul 2

Inhibiția de absorbție in vitro la creierul de șobolan synaptosomas

Compus	NU HIPOTALAMUS	DA STRIAT	5-HT HIPOCAMPUS
(-]-deprenil	5,1 x 1CT⁵	1,0x 1Ο⁴	5,0 x 1CT³
(+)-deprenil	1,7 χ 1O⁵	2,4 x 1Q⁵	3,6 x 10’²
(-)-p-fluoro-D	1,3 χ 1O⁵	2,9 x 10-⁵	1,4 χ 10^-3
(+)-p-fluoro-D	6,1 x 1CT⁶	1,6 χ 1O⁵	6,0 χ 1O⁴
(-)-methylamf	3,5 χ 10⁶	4,2 x ισ⁵	-
(+]-methylamf	3,5 x 1O⁷	6,0 χ IO⁷	1,9 χ ισ²
(-)-p-fluoro-MA	7,5 χ 1O⁶	3,0 χ 10⁴	-
(+]-p-fluoro-MA	7,7 χ 1O⁶	2,3 χ 10⁵	1,7 x 10-³

510 σι ω ο σι ΓΌ σι σι ΓΌ ο σι σι

π	7*	Ο	CT	ω
ο 0 > ο	ω	ω	ω	ω
□ Π)	Φ 3	ro 3	(D 3
(β	η	□	□
-ω	(Π
	3	ο	ο	η
I		0)	ω	03
<		CT	στ	Γ»^-
>	ο’	<	<	<
3 Π)	0} στ <'	3 0)	3 ω	3 ω
8		8	8	8
CT		03	ω	Ο
ο		“3	“3
		Φ	Φ	. Ο-
-στ		£Χ	Q.	φ
ω		0)	Φ	ω>
—		Ο	Ο
Ο_		ω>	ω>
Ο		στ	στ	TD
Ό ω		CO “3	CQ “3	“3 Ο
3		<_ Ό	C Ό	ω
D Φ		L__	c_	3
	q.„ 03	-...cȚ.__ Φ	ω 3
		ST	fiî	ω “3
		στ	CT
		Ο	Ο
		C	C

		TJ	Τ3
		—1	—1
		U	Τ)
		/—,	,—,
		υ	υ
		ο	ο
		υι	—i

dldlAI	Pargilină	MPTP	MPTP	MPTP	sare fiziologică	1. Tratament Timpul dintre tratamente 30'
Mazindol	Ό —1 TJ	TI ω 3 CD 5'	O CD TD ~3 CD □	sare fiziolo-gică	sare fiziolo-gică	2. Tratament
4^ □ 1+ □ b CT	—i ω O 1+ O σι CT	xj _i 1+ O cn ω	σι ω 1+ □ σ	□ b 1+ p bi 0)	σι 1+ O 4^	o o TD CD 3 D
90	CD	P xj	□	σι ω	O □	χο
1+ O □ O σ	—Λ O 1+ O b cn CT	O σι 1+ O o -P z C0	o CD 1+ O O 4^ σ	o Xj 1+ O b CD	O CD 1+ O O ΓΌ	□ o CJ > C3
ΓΌ ΓΌ		σι σι	o o	xl XJ	O C3	x° cr
Xl 1+ p O σ	4^ 1+ O O CD CT	p co 1+ □ Ο CD z O	ω 1+ O O cn o	ω 1+ O b xj ω	1+ O s	T §
ΓΌ	8	cn 4^	CD ω	xl CD	8	cr*

RO 115785 Bl

Tabelul 8

535

Interacțiunea {-)-deprenilului și metaboliților de [-)-p-fluor-deprenil cu neurotoxicitatea DSP-4 la șobolani

Pretratament mg/kg;	i.p.	Tratament DSP-4	Conținut de Na al hippocampu-sului	Supraviețuire %
(-J-MA	1	50	61 ± 3,5	100
H-MA	5	50	116 ± 2,1	63
(-)-MA	10	50	nd^x	0
(-J-p-F-MA	10	50	nd^x	0

540

545 *nd: nedeterminat. Din cauza interacțiunii toxice, animalele au murit în cadrul primei zile MA = metilamfetamină p-F-MA=p-fluor-metilamfetamină

Claims

1. Compoziție farmaceutică, pentru tratamentul bolilor neurodegenerative, caracterizată prin aceea că, conține 5-95% inhibitor de oxidază monoamină; 5-95% inhibitor de absorbție și ingrediente acceptabile farmaceutic, rapoartele fiind exprimate în greutate.

2. Compoziție farmaceutică, pentru tratamentul bolilor neurodegenerative, conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că, inhibitorul de oxidază monoamină este un inhibitor de oxidază monoamină reversibil sau ireversibil cu activitate susținută.

3. Compoziție farmaceutică, pentru tratamentul bolilor neurodegenerative, conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că, inhibitorul de absorbție este un inhibitor de absorbție cu activitate susținută.

4. Compoziție farmaceutică, pentru tratamentul bolilor neurodegenerative, conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că, inhibitorul de oxidază monoamină și inhibitorul de absorbție sunt în raport de greutate de 1-19:1-19.

5. Compoziție farmaceutică, pentru tratamentul bolilor neurodegenerative, conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că, inhibitorul de absorbție este o formă retard.

6. Compoziție farmaceutică, pentru tratamentul bolilor neurodegenerative, conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că, inhibitorul de oxidază monoamină este clorhidratul de N-{1-fenil-izopropil)-N-metil-propinilamină sau un izomer optic activ al acestuia.

7. Compoziție farmaceutică, pentru tratamentul bolilor neurodegenerative, conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că, inhibitorul de oxidază monoamină este N-(4-fluor-fenil)-izoprop-1-il-N-metil-propinilamină sau un izomer optic activ al acestuia.

8. Compoziție farmaceutică .pentru tratamentul bolilor neurodegenerative, conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că, inhibitorul de absorbție retard este clorhidrat de N-(1-fenil-izopropil)-N-metil-propinilamină sau metabolitul acestuia sau izomerii optic activi sau metaboliții acestuia.

550

555

560

565

570

575

RO 115785 Bl

9. Compoziție farmaceutică, pentru tratamentul bolilor neurodegenerative, conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că, inhibitorul de absorbție retard este N-(4-fluor-fenil)-izoprop-1-il-N-metil-propinilamină sau metabolitul acestuia sau izomerii optic activi sau metaboliții acestuia.

10. Compoziție farmaceutică, pentru tratamentul bolilor neurodegenerative, conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că, inhibitorul de absorbție este un compus cu formula generală I:

(O în care: R¹ este o grupă ^Ό1Θ alchil lineară sau ramificată, o grupă Cy-C^ fenil-alchil sau o grupă fenil sau o grupă C3-Cg cicloalchil, R² este o grupă C-t-Cg alchil lineară sau ramificată sau o grupă C.|-C8 alchil substituită cu un atom de halogen, hidroxi, o grupă C-i-Qa alcoxi sau cu una sau două grupe fenil, o grupă fenil sau o grupă Cg-Cg cicloalchil cu condiția ca R¹ și R² să aibe împreună cel puțin 3 atomi de carbon sau unele săruri de adiție acidă sau metaboliți ai acestuia.

11. Compoziție farmaceuticăpentru tratamentul bolilor neurodegenerative, conform revendicării 10, caracterizată prin aceea că, în compusul cu formula generală I, R² este o grupă etil, propil, butii, hexil, fenil sau fenilmetil.

12. Compoziție farmaceutică pentru tratamentul bolilor neurodegenerative, conform revendicării 11, caracterizată prin aceea că, compusul cu formula generală I este N-propil-1-fenil-2-pentilamina sau sarea de adiție acidă a acestuia, N-propil-1fenil-2-butilamina sau sarea de adiție acidă a acestuia sau N-propil-1-fenil-2-hexilamina sau sarea de adiție acidă a acestuia.

13. Compoziție farmaceutică pentru tratamentul bolilor neurodegenerative, conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că este formulată sub formă de peleți, tablete sau compoziții transdermice în două faze.