PT99184A - Processo de preparacao de derivados de acido tiol-carboxilico e de composicao farmaceuticas que os contem - Google Patents

Description

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MEMÓRIA DESCRITIVA

0 presente invento refere-se aos novos derivados de ácido tiol-carboxílico aos seus processos de preparação e à sua utilização em medicina. Em particular, o presente invento refere-se à sua utilização como inibidores de enzimas da família colagenase das metaloproteases neutras, no tratamento de artrite e outras doenças. A família das enzimas colagenases de mamíferos compreende um número de proteases, que são exemplificadas pela própria colagenase intersticial (tipo I), pelas estromelisinas (também cdnhecidas por proteoglicanases ou transinas), pelas gelatinases de leucócitos polimorfonucleares e de fibroblastos (também conhecidas como colagen-IV-ases), e pela ,,pump-lH (metaloproteases putativa 1, metaloprotease uterina). Os membros da família das proteases colagenases de mamíferos reconhecem-se pelo facto de possuírem um número de propriedades experimentalmente verificáveis muito características. [Goldberg et al.. J. Biol. Chem. 2610, 6600, 1986; Whitham et al.. Biochem. J. 240, 913, 1986; Breathnach et al.. Nucleic Acids Res., 15, 1139, 1987; Muller et al.. Biochem. J., 253, 187, 1988; Collier et al.. J. Biol. Chem., 263, 6579, 1988; Murphy et al.. Biochem. J., 258, 463, 1989; Quantin et al., Biochem. (N.Y.) 28, 5327, 1989; Birkedal-Hansen, J. Oral Pathol., 17, 445, 1988]. A gama de aplicações terapêuticas do invento, descrita de seguida, reflecte o papel fundamental do colagénio e de outros substratos proteináceos da família colagenase das enzimas incluídos na matriz do tecido conjuntivo em todo o corpo. As aplicações abranjem intervenções clínicas em muitas doenças e fenómenos que envolvem a destruição do colagénio e de outros componentes do tecido conjuntivo, e também a remodelação do tecido normal ou desordenado.

Considera-se que os inibidores da família colagenase das enzimas proporcionam tratamentos úteis de; doenças artríticas, 73 147 RJS/AW/B3068 -4-

tecido mole, policondrite e tendonite; doenças de reabsorção óssea, tais como osteoporose, doença de Paget, hiperparatiroidismo e colesteatoma; a destruição aumentada do colagénio que ocorre em associação com a diabetes; as classes recessivas da epidermolise bolhosa distrófica; a doença periodontal e consequências relacionadas com a produção da colagenase gengival ou a libertação da colagenase de PMNL a seguir à infiltração celular na gengiva inflamada, incluindo o combate à maior susceptibilidade que os diabéticos apresentam às doenças periodontal; ulceração da córnea, por exemplo a induzida pelas bases e outros agentes que provocam queimaduras, pela radiação, pela vitamina E ou pela deficiência retinóide; ulceração da pele e do tracto gastrintestinal, e na cica-trização anormal de feridas; condições pós-operatórias, incluindo anastomose colónica na qual os niveis de colagenase são elevados; cancro, em que membros da família colagenase das enzimas estiveram implicados na neovascularização requerida para suportar o crescimento e sobrevivência do tumoral [P. Basset et al., Nature, 348, 699, 1990] e na remodelação do tecido necessária para acomodar os tumores primários e secundários em crescimento, e na penetração das células tumorais através da membrana basal das paredes vasculares durante a metástese; e doenças de desmielinação do sistema nervoso central e periférico, incluindo síndromas nos quais a perda de mielina é o acontecimento patológico primário e naqueles nos quais a desmielinação segue a atrofia axonal. A degradação da mielina nestas doenças, exemplificada pela esclerose múltipla, é mediada por membros da família colagenase das enzimas.

Como um exemplo particular do valor terapêutico dos inibidores da família colagenase das enzimas, tais como os descritos no presente invento, as doenças de artrite crónica que conduzem a uma perda extensiva de colagénio, componentes proteoglicano e elastina da cartilagem, osso e tendões nas articulações devem ser passíveis de tratamento com inibidores das colagenases, proteoglicanases (estromelisinas) e gelatineses, que se pensa serem as enzimas principais envolvidas.

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Estas enzimas foram detectadas em extractos de tecido carti-lagineo e sinovial, e também foram extensivamente estudadas em culturas de tecidos duma larga gama de tecidos conjuntivos. Para além do controlo da biossintese, secreção e activação das enzimas, considera-se que a regulação natural mais importante destas enzimas nos estados normal e de doença, é a produção endógena de inibidores tais como a família das Metaloproteases do Inibidor de Tecido (TIMPS), e da alfa-2 macroglobulina. Um desiquilibrio entre os níveis locais de enzimas proteoliticas e de inibidores naturais, permitirá que a destruição dos componentes do tecido conjuntivo ocorra.

Os compostos descritos no presente invento, visto serem inibidores sintécticos e de massa molecular baixa desta família de enzimas, oferecem um caminho terapêutico útil no qual pode ser reposto um equilíbrio mais normal ou não-patológico entre a acti-vidade enzimática e inibidora: assim, eles actuam para complementar e suplementar os inibidores endógenos de enzima. De facto, como estas enzimas actuam, de um modo geral unicamente no interior de ambientes pericelulares restrictos, antes de serem inactivadas pelos inibidores que circulam no sangue, e estão presentes na maioria dos exsudados inflamatórios, os inibidores de baixa massa molecular, aqui descritos, podem ser mais eficientes do que os inibidores proteinaceos endógenos que são excluídos pelo seu tamanho, das regiões localizadas da destruição do tecido conjuntivo. O Pedido de Patente Europeia 0273689 (Grupo Beecham) descreve uma classe de derivados do ácido tiol-carboxílico que têm actividade como inibidores da colagenase e que são úteis no tratamento de artrite reumatóide e doenças relacionadas, nas quais a actividade colagenolitica é um factor contributivo.

Foi agora encontrada uma classe nova de derivados do ácido tiol-carboxílico que são inibidores da colagenase e portanto de utilidade potencial no tratamento de doenças nas quais a actividade dos membros da família colagenase das metaloproteases neutras está implicada.

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De acordo com o presente invento proporciona-se um composto de fórmula geral (I), ou um seu sal, solvato ou hidrato:

(I) na qual é -OH; alcoxi; ariloxi ou aralquiloxi, onde em cada um dos quais o grupo arilo está opcionalmente substituído; -NRgRy, onde cada um de Rg e R7 é, independentemente do outro, hidrogénio ou alquilo, ou R6 e R7 formam, em conjunto com o átomo de azoto ao qual estão ligados, um anel de 5, 6 ou 7 membros com um átomo de oxigénio ou enxofre opcional ou um segundo átomo de azoto opcionalmente substituído no anel; ou um grupo 0

II -nh-ch-c-r9

I R8 onde Rg é hidrogénio; alquilo opcionalmente substituído por -OH, alcoxi, -NR6R7 como o definido para R1# guanidina, -C02H, -C0NH2, -SH, ou -S-alquilo, ou -CH2~Ar onde Ar é um arilo substituído opcionalmente, e R9 é alcoxi; OH; ou -NR6R7 como o definido para Rj_; R2 é hidrogénio; alcanoílo C2-8' ou aroílo opcionalmente substituído; R3 é alquilo C3_6; e R4 é -(CH2)p-X-(CH2)g- onde p é um número inteiro de 1 a 9, q é um número inteiro de 2 a 10 e a porção -(CH2)p- está adjacente ao átomo de carbono marcado com um asterisco na fórmula (I), e X é -NR5- onde R5 é seleccionado de entre hidrogénio, alquilo , alcanoílo C2_6, alcoxicarbonilo e aroílo, aralquilo ou arai-

73 147 RJS/AW/B3068 -7- quiloxicarbonilo em cada um dos quais a porção arilo está opcionalmente substituída.

Cada grupo alquilo ou alcoxi é um grupo C-^.g, de preferência um grupo c^.g, e pode ser de cadeia linear ou ramificada, a não ser que outra coisa seja especificada. 0 significado de grupos arilo inclui os grupos naftilo e fenilo, de preferência fenilo.

Os substituintes opcionais para os grupos arilo podem ser seleccionados de entre -OH, alquilo C^-g/ alcoxi C-^-g e halo-géneo.

Os significados para R-l incluem hidróxi, alcoxi C-^g, tal como metoxi, etoxi, iso-propoxi ou t-butiloxi; benziloxi; e -NRqR7 no qual Rg é hidrogénio, e R7 é hidrogénio ou alquilo C-^.g tal como o metilo ou etilo, ou -NRgR7- é Ν'-metil-N-piperazinilo ou N-mor- folinilo. R]_ é de preferência hidroxi, alcoxi ou alquilamino C-j^g. Mais preferivelmente, R-l é um hidroxi, metoxi, iso-pro-poxi ou metilamino. 0

II R2 é de preferência hidrogénio, acetilo ou Ph-C- no qual Ph é um grupo fenilo opcionalmente substituído. Mais preferivelmente, R2 é hidrogénio ou acetilo. R3 é de preferência, um grupo alquilo C4 tal como o n-butilo iso-butilo ou sec-butilo. Mais preferivelmente, R3 é iso--butilo. R4 é de preferência -(CH2)p-X-(CH2)q- onde p e q têm significados tais que R4 faz parte de uma estrutura lactâmica com 11 a 16 membros, e X é um grupo -NR5- onde R5 é hidrogénio, metilo, benzilo, t-butoxicarbonilo ou benziloxicarbonilo. Mais .....'JteÍidlgg^l

73 147 RJS/AW/B3068 -8-preferivelmente, R4 é -(CH2)p-X-(CH2)g- onde pé4eqé5oupé 4 e q é 6, eXéum grupo -NR5- onde R5 é hidrogénio.

Os compostos de fórmula (1) podem formar sais com bases, por exemplo com hidróxido de sódio. Quando está presente um átomo de azoto básico, os compostos de fórmula (I) podem formar sais de adição de ácido, como por exemplo, com o ácido clorídrico. Tais compostos fazem parte do presente invento.

Os compostos de fórmula (I) têm pelo menos três centros assimétricos e existem portanto em mais do que uma forma estereoisomérica. O presente invento estende-se a todas estas formas e às suas misturas, incluindo racematos e misturas diastereo-isoméricas.

Quando os compostos de fórmula (I), ou seus sais farmaceuti-camente aceitáveis, formam solvatos, tais como hidratos, estes também formam um aspecto do invento.

Os isómeros preferidos são os que possuem a configuração (S) no centro quiral marcado com um asterisco na fórmula (I).

Os compostos de fórmula (I) e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis são preferidos quando em forma substancialmente pura.

Uma forma substancialmente pura conterá, de um modo geral, pelo menos 50% em peso, de preferência 75%, mais preferivelmente 90%, e ainda mais preferivelmente 95% ou 99%, ou mais do composto de fórmula (I) ou dos seus sais farmaceuticamente aceitáveis. O presente invento proporciona os compostos de fórmula (I) ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis para utilização como agentes terapêuticos activos, particularmente, como agentes para o tratamento de desordens musculo-esqueléticas resultantes da actividade colagenolítica, particularmente, doenças artríticas, e remodelação tissular.

Os compostos de fórmula (I) têm também utilidade potencial

73 147 RJS/AW/B3068 -9- no tratamento do cancro; na prevenção da degradação da mielina no sistema nervoso central e periférico; e noutras condições em que os membros da família colagenase das metaloproteases neutras desempenham papeis patológicos e outros. 0 presente invento proporciona também um processo para a preparação de um composto de fórmula (I), tal processo compreende a reacção de um composto de fórmula (II);

onde , R3 e R4 são definidos como na fórmula (I), com um tiol de fórmula (III):

L - SH (III) onde L é um grupo convencional de protecção de enxofre, para dar o composto de fórmula (IV):

H (IV) onde R-l, R3 e R4 são definidos como na fórmula (I) e L é definido como na fórmula (III); e subsequentemente se necessário. ° clivagem do grupo L e/ou R5 para dar o composto de fórmula (I) no qual R2 e/ou R5 são hidrogénios; ° conversão do grupo R2 num composto de fórmula (I) noutro grupo R2; ° conversão quando apropriado do grupo R5 num composto de fórmula (I) noutro grupo R5.

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Tipicamente o grupo L de protecção de enxofre, é um grupo benzilo substituído como o alcoxibenzilo, por exemplo 4-metoxibenzilo, ou um grupo alifático ou arilacilo tal como o acetilo ou benzoílo. Quando L é um grupo acilo que é alcanoílo C2_g ou aroílo opcionalmente substituído é concerteza idêntico a R2, de tal modo que os compostos de fórmula (IV) onde L=R2, são compostos do invento.

Quando L é um grupo benzilo substituído de protecção de enxofre, tal como o 4-metoxibenzilo, então L pode ser removido por tratamento com acetato de mercúrio em ácido trifluoroacético contendo anisolo, seguido por reacção com sulfureto de hidrogénio em dimetilformamida, num procedimento análogo ao descrito em Chem. Pharm. Buli 1576, 26., (1978).

Quando L é um grupo acilo, pode ser removido por tratamento com uma base, por exemplo, amoníaco aquosa ou hidróxido de sódio aquoso diluído ou por tratamento com um ácido, por exemplo, ácido clorídrico metanólico.

Também se podem usar outros métodos convencionais para remoção dos grupos de protecção de enxofre.

Os compostos de fórmula (I) nos quais R2 é hidrogénio, podem ser convertidos em compostos de fórmula (I) nos quais R2 é alcanoílo C2_8, através dos procedimentos comuns de acilação.

Os compostos de fórmula (XV) podem ser convertidos noutros compostos de fórmula (IV) desde que mantenham o mesmo grupo L, este pode por sua vez ser clivado para formar os compostos, do invento, nos quais R2 é hidrogénio.

Por exemplo, aqueles compostos de fórmula (IV) cujo R-l é -OH, podem ser preparados sob condições ácidas, por hidrólise dos compostos nos quais R-l é alcoxi, ariloxi ou aralquiloxi ou por hidrogenólise dos compostos nos quais R]_ é benziloxi ou é benziloxi substituído em presença de um catalisador tal como o negro de paládio.

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Os compostos de fórmula (IV) nos quais é -NRgR7 podem ser preparados a partir de compostos nos quais R^ é -OH tratando estes últimos compostos com uma amina de fórmula NHRgR7 na presença de um agente de acoplamento tal como a N,N-di-ci-clo-hexilcarbodiimida ou N-etil-N,-dimetilaminopropilcarbodi-imida.

Os compostos de fórmula (IV) nos quais R^ é -NH-CH(R8)-COR9 podem ser preparados, similarmente, a partir de compostos em que R-L é OH, por tratamento com derivados de amina de fórmula NH2CH(R8)C0Rq onde Rg é um grupo alcoxi ou amina, seguido de hidrólise para dar um grupo hidroxi R9, se desejado.

Alternativamente, compostos de fórmula (IV) nos quais R-^ é -NR6R7, podem ser preparados a partir de compostos de fórmula (IV) nos quais R^ é alcoxi, por aminólise destes últimos compostos com uma amina de fórmula NHR6R7, na presença de uma quantidade catalítica de cianeto. Os procedimentos da aminólise são descritos por Hogber, T. et al. . J. Org. Chem. 1987, 52., 2033-2036; De Ferand, R.J. et al. J. Org. Chem. 1963, 28., 2915-2917.

Adicionalmente, compostos de fórmula (IV) nos quais L é um grupo acilo, podem ser convertidos em compostos do invento com interconversão de R^^ e clivagem concomitante do grupo acilo, para dar compostos de fórmula (I) nos quais R2 é hidrogénio.

Será evidente que as transformações acima mencionadas para os compostos de fórmula (IV) serão também aplicáveis nos compostos de fórmula (IV) cujo L=R2, i.e. compostos de fórmula (I). Por exemplo, aqueles compostos de fórmula (I) nos quais R-l é -OH e R2 é hidrogénio, podem ser preparados por hidrólise dos compostos de fórmula (IV) nos quais R«l é alcoxi, ariloxi ou aralquiloxi e L é acilo, sob condições básicas tais como o tratamento com hidróxido de sódio diluído.

Os compostos intermediários de fórmula (II) podem ser preparados por tratamento de um composto de fórmula (V): 73 147 RJS/AW/B3068

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(V) com um composto onde R<l e R2 são como definidos na fórmula (I), de fórmula (VI): o

onde R4 é como definido na fórmula (I), A reacçáo é conduzida adequadamente na presença de um aqente de acoplamento, tal como o 1,1'-carbonildiimidazol. Quando R5 em R4 é um átomo de hidrogénio, a amina secundária é adequada, desde que numa forma protectora, por exemplo como um derivado benziloxicarbonilo.

Compostos de fórmula (VI) podem ser preparados pela oxidação da função álcool primária presente no composto de fórmula (VII):

(VII)

H I Z-N-(CH2)p em que, p e q são definidos como para R4 na fórmula (I), Y é um grupo de protecção de azoto, e Z é Rg, para dar o aldeído correspondente, seguido da remoção de Z quando R5 é um grupo acilo? ciclização e redução; e subsequentemente, se necessário, remoção do grupo Y de protecção de azoto e interconversão de Rg. -13- 73 147 RJS/AW/B3068

Significados adequados para Y incluem os grupos t-butoxicar-bonilo (BOC) e benziloxicarbonilo, de preferência o t-butoxicar-bonilo. A oxidação pode ser realizada usando o clorocromato de piri-dínio ou sob condições de oxidação de Swern, por exemplo: tratamento com dimetilsulfóxido e um halogeneto de acilo, seguido por trietilamina, tal como foi descrito por D. Swern et al.. J. Org. Chem., £3., 2480 (1978). O passo de aminação redutiva e de ciclização pode ser efectuado por hidrogenação catalítica sobre um catalisador adequado de metal nobre, por exemplo paládio em carbono, ou por reacção com cianoboro-hidreto de sódio ou boro-hidreto de sódio.

Os grupos de protecção de azoto podem ser removidos por métodos comuns. Quando Y ou Z são grupos t-butoxicarbonilo, estes podem ser removidos por tratamento com ácido trifluoroacético a temperatura reduzida. Quando Y e Z são grupos benziloxicarbonilo, estes podem ser removidos por hidrogenação convencional sobre paládio em carbono, ou por tratamento tanto com ácido fórmico-metanol e negro de paládio como com HBr e ácido acético glacial. 0 grupo Z pode ser seleccionado para dar o composto no qual Rg é hidrogénio quando submetido a clivagem concomitante durante a reacção de ciclização. Por exemplo, quando Z é um grupo benziloxicarbonilo, ele será imediatamente removido pela hidrogenação catalítica.

Um R5 hidrogénio em compostos de fórmula (I), (II), (IV), (VI) e (VII) pode ser interconvertido num grupo R5 alquilo C1-6, aralquilo ou acilo. 0 átomo de azoto em R4 pode ser alquilado, por exemplo, metilado para formar um grupo R5 metilo, ou acilado para formar um grupo R5 alcoxicarbonilo ou aralcoxicarbonilo.

Os procedimentos de metilação são descritos por E. Askitoglu et al. . Helv. Chim. Acta., 68i, 750, (1985); E. Engler et al..

Helv. Chim. Acta., 68., 789, (1985); e M. Lennon et al. . J. Chem.

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Soc. (PerkinI), 622, (1975).

Os compostos de fórmula (VII) podem ser preparados fazendo reagir um composto de fórmula (VIII): γ

O (VIII) onde pf Y e Z são definidos como para a fórmula (VII), com um composto de fórmula (IX): (IX)

H2N- (CH2)q-OH onde q é definido como para a fórmula (VII). A reacção pode ser realizada usando procedimentos comuns para a formação de uma amida a partir de um ácido carboxílico e de uma amina, por exemplo usando um agente de acoplamento tal como o 1,1#-carbonildiimidazol, 1,3-diciclo-hexilcarbodiimida ou N-etil-N'-dimetilaminopropilcarbodiimida.

Os compostos de fórmula (VIII) são derivados do ácido di--aminoalcanóico. Estes são compostos conhecidos ou podem ser preparados a partir de materiais correntes por processos comuns. Por exemplo, o composto de fórmula (VI) no qual R4 é -(CH2)p-X--(CH2)g- onde p é 3, qé6eXé -NH-, é preparado a partir de um composto de fórmula (VIII) que deriva da ornitina, a qual se encontra disponível no mercado. O composto de fórmula (VI) onde R4 é -(CH2)p”x~(CH2)q“ onde pé 4, q é 5 e X é -NH-, é preparado a partir de um composto de fórmula (VIII) que deriva de (S)-lisina. 0 composto de fórmula (VIII), derivado de (S)-lisina, onde Y é t-butoxicarbonilo e Z é benziloxicarbonilo, encontra-se disponível no mercado.

Similarmente, o composto de fórmula (VI) onde R4 é -(CH2)p- 73 147 RJS/AW/B3068 -15-

-X-(CH2)q- onde p é 1, q é 8 e X é -NH- pode ser preparado a partir do ácido 2,3-diaminopropiónico.

Os tióis de fórmula (III) e os aminoalcóois de fórmula (IX) são compostos conhecidos, ou podem ser preparados a partir de compostos conhecidos e empregando métodos conhecidos

Os compostos intermédios de fórmula (II) e (IV) aqui divulgados são compostos novos e formam um aspecto do presente invento. A preparação de certos compostos de fórmula (V) é descrita na EP-A-0273689.

Quando são possíveis de obter, os sais dos compostos de fórmula (I), farmaceuticamente aceitáveis, podem ser formados por reacção convencional com o ácido ou base apropriado. Os solvatos podem ser formados por cristalização com o solvente adequado.

Como foi mencionado previamente, os compostos de fórmula (I) existem em mais de uma forma diastereoisomérica, onde, os processos do invento produzem misturas dos mesmos. Os isómeros individuais podem ser separados uns dos outros por cromatografia, como por exemplo, por cromatografia em coluna ou HPLC.

Alternativamente, podem ser obtidos em separado compostos diastereoisoméricos de fórmula (I), usando materiais de partida estereoisomericamente puros, ou separando os isómeros desejados dos intermediários em qualquer fase do processo de síntese global, e convertendo esses intermediários em compostos de fórmula (I).

Será evidente que apesar da configuração absoluta num centro quiral particular poder não ser conhecida, é possível caracteri-zar um dado diastereoisómero relativamente ao seu epímero ou a outro diastereoisómero usando a espectroscopia de RMN ou a rotação óptica. 73 147 Μ RJS/AW/B3068 -16-

Adicionalmente, o presente invento proporciona ainda uma composição farmacêutica, que compreende um composto de fórmula (I), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, e um portador, farmaceuticamente aceitável.

Uma composição deste invento é útil no tratamento de desordens musculo-esqueléticas particularmente em doenças artríticas e para modulação da remodelação tissular.

Uma composição do invento que pode ser preparada por mistura pode conter um diluente, ligador, carga, desintegrante, agente aromatizante, agente corante, lubrificante ou conservante, de modo convencional. Estes excipientes convencionais podem ser empregues de modo convencional, por exemplo, como na preparação de inibidores de enzima peptídicos relacionados, tal como o inibidor de ACE captopril.

As composições do invento podem ser adaptadas para administração oral, tópica, rectal ou parenteral, mas a administração oral é a preferida. As composições parenterais podem ser administradas por exemplo por via intravenosa, intramuscular ou intra-articular. As composições preferidas são as apresentadas na forma de dosagem unitária ou numa forma tal que permita ao paciente administrar a si próprio uma dose única.

Preferivelmente uma composição farmacêutica do invento está na forma de dosagem unitária e numa forma adaptada para uso nos campos da medicina humana ou veterinária. Por exemplo, tais preparações podem estar na forma de uma embalagem acompanhada de instruções impressas ou escritas para uso como agente no tratamento ou profilaxia de qualquer das desordens acima referidas.

As composições podem, por exemplo, estar na forma de comprimidos, cápsulas, saquetas, frascos, pós, grânulos, pastilhas, pós reconstituíveis, ou preparações líquidas, por exemplo, soluções os suspensões ou supositórios.

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As composições, por exemplo, as que são adequadas para administração oral, podem conter excipientes convencionais tais como agentes ligantes, por exemplo, xarope, acácia, gelatina, sorbitol, traganto, ou polivinilpirrolidona; cargas, por exemplo lactose, açúcar, amido de milho, fosfato de cálcio, sorbitol ou glicinas; lubrificantes da compressão, por exemplo estearato de magnésio; desintegrantes, por exemplo amido, polivinilpirrolidona, amido-glicolato de sódio ou celulose microcristalina; ou agentes molhantes farmaceuticamente aceitáveis, tal como o lauril-sulfato de sódio.

As composições sólidas podem ser obtidas por processos convencionais de mistura, enchimento, compressão ou semelhantes. Nas composições que utilizam grandes quantidades de diluente podem-se usar operações de mistura repetidas de modo a se distribuir o agente activo nessas composições. Quando a composição está na forma de comprimido, pó ou pastilha pode-se utilizar qualquer transportador adequado para formulação de composições farmacêuticas sólidas, os exemplos são o estearato de magnésio, amido, glucose, lactose, sacarose, farinha de arroz e cré. Os comprimidos podem ser revestidos de acordo com processos bem conhecidos na prática farmacêutica normal, em particular com um revestimento entérico. A composição pode também estar na forma de uma cápsula ingerível, por exemplo de gelatina, contendo o composto, se desejado com um transportador ou outros excipientes. Por exemplo, uma cápsula de gelatina dura contendo a quantidade requerida de composto do invento na forma de pó ou granulado em mistura intima com um lubrificante, como estearato de magnésio, uma carga, tal como a celulose microcristalina e um desintegrante, tal como o amidoglicolato de sódio.

As composições para administração oral líquidas, podem-se apresentar na forma de, por exemplo, emulsões, xaropes, ou elixires ou podem-se apresentar sob a forma de produto seco para reconstituição com água ou outro veículo adequado, antes da sua utilização. Tais composições líquidas podem conter aditivos convencionais, tais como: agentes de suspensão, por exemplo sorbitol, xarope, metilcelulose, gelatina, hidroxietilcelulose, carbo- -18- 73 147 RJS/AW/B3068 ximetilcelulose, gel estearato de alumínio, gorduras edlveis hi-drogenadas; agentes emulsionantes, por exemplo lecitina, mono-oleato de sorbitano, ou acácia; veículos aquosos ou não aquosos, que incluem óleos edlveis, tal como o óleo de amêndoa e o óleo de coco fraccionado, ésteres oleosos, por exemplo ésteres da glicerina, propilenoglicol, álcool etílico, glicerina, água ou solução salina normal; conservantes, por exemplo p-hidroxibenzoato de metilo ou de propilo ou ácido sórbico; e se desejado agentes aromatizantes ou corantes convencionais.

Os compostos deste invento também podem ser administrados por via não oral. De acordo com os procedimentos farmacêuticos de rotina, as composições podem ser formuladas, por exemplo, para administração rectal, como um supositório, ou para administração parenteral numa forma injectável. Para injecção, por exemplo injecção intra-articular ou para injecção no fluído cérebro--espinal, ou através de outras vias que permitam o acesso aos sítios de desmielinação, como soluções livremente solúveis ou como depósitos fracamente dispersos, os compostos do invento podem ser apresentados em solução, suspensão ou emulsão, aquosa ou não aquosa, num líquido farmaceuticamente aceitável, e.g. água estéril isenta de pirogénios, ou um óleo parentericamente aceitável, ou uma mistura de líquidos, que pode conter agentes bacteriostáticos, antioxidantes ou outros conservantes, tampões ou solutos para torrfarem a solução isotónica com o sangue, agentes espessantes, agentes de suspensão ou outros aditivos farmaceuticamente aceitáveis. Tais formas serão apresentadas em forma de dose unitária estéril, tal como âmpolas ou dispositivos para injecção descartáveis ou em formas muiti-dose, tal como um frasco, de onde se pode retirar a dose apropriada, ou uma forma sólida ou concentrado que pode ser usado para preparar uma formulação injectável.

Para administração percutânea e tópica, as preparações podem também ser apresentadas como uma pomada, creme, loção, gel, pulverização, aerossol, lavagem, tinta para a pele ou emplastro. A gama de dosagem adequada para os compostos do invento pode

73 147 RJS/AW/B3 068 -19 variar de compostos para/composto e podem depender da condição a ser tratada. Dependerá ainda, inter alia. da relação da potência com a capacidade de absorção e do modo de administração escolhido. A dose unitária para o tratamento de doenças e de fenómenos fisiológicos, nos quais estão envolvidos enzimas da família colagenase conterá geralmente 10 a 1 000 mg, e de preferência conterá 10 a 500 mg, em particular 10, 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450 ou 500 mg. A composição pode ser administrada uma ou mais vezes por dia, por exemplo 2, 3 ou 4 vezes por dia, de modo a que a dose diária total para um adulto de 70 kg esteja normalmente na gama de 10 a 3 000 mg. Tal dose corresponde a aproximadamente 0,15 a 50 mg/kg dia. Alternativamente, em particular para injecção, a dose unitária conterá adequadamente 2 a 20 mg de um composto do invento e será, se desejado, administrada em múltiplos, de modo a se obter a dose diária pretendida. O presente invento proporciona um método para tratamento de condições nas quais ocorre degradação do tecido conjuntivo, e de outros componentes proteináceos do corpo, tal como reumatismo e/ou condições artríticas em mamíferos, tal como o Homem, que compromete a administração de um composto de fórmula (I) ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável numa quantidade eficaz aos mamíferos com necessidade desse tratamento. 0 presente invento proporciona ainda a utilização de um composto de fórmula (I) ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável, para o fabrico de um medicamento para utilização no tratamento de condições nas quais ocorre degradação do tecido conjuntivo e de outros componentes proteináceos do corpo tal como reumatismo e/ou condições artríticas. A Descrição e Exemplos que se seguem ilustram a preparação dos compostos do invento.

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Descricão 1 Ácido 4-isopropoxicarbonil-2-(2-metilpropil)-but-2-enóico (DlΪ

A solução de anidrido 2-(2-metilpropil)-pent-2-enodicarboxí-lico (preparada como descrito na EP-A-273689) em 2-propanol (100 ml) foi aquecida em refluxo durante 18 h. O solvente foi evaporado in vacuo para dar o composto do título na forma de um óleo castanho (31,7 g, 98%). δ (CDC13): 0,88 (6H,d, J=7Hz), 1,25 (6H,d,J=7Hz), 1,80 (1H, septeto, J=7HZ), 2,18 (2H,d,J=7Hz), 3,60 (2H, d, J=7Hz), 5,05 (1H, septeto, J=7Hz) e 6,30 (lH,t,J=7Hz).

Descricão 2 Νε-benz iloxicarboni1-N^-terc-butoxicarboni1~ CS)-lisina-(5-hidro-xi)-pentilamida (D2)

A uma solução de Ne-benziloxicarbonil-Na-terc-butoxicar-bonil-(S)-lisina (7,8 g; 21 mmol) em diclorometano anidro (150 ml), mantida a 0°C, adicionou-se hidrocloreto de l-(3-dimetil-aminopropil)-3-etilcarbodimida (4,3 g; 22,5 mmol) e 1-hi-droxibenzotriazolo (3,6 g? 26,5 mmol). Agitou-se a mistura durante 0,5 h a 0°C, adicionou-se 5-aminopentan-l-ol (2,3 g; 22,5 mmol) e continuou-se a agitação à temperatura ambiente. Após 3 h, a mistura foi lavada com NaHC03 aquoso saturado (60 ml), seca sobre sulfato de magnésio anidro e evaporada in vacuo para dar um óleo viscoso. Obteve-se, por purificação por cromatografia "flash" [(CHCl3:MeOH) (20:1) v/v], o composto do título (D2) sob

(M+H+ observado 466. C24H3906N3 requer 73 147 RJS/AW/B3068 a forma de um óleo límpido Encontrado: C, 61,54; H, 61,91; H, 8,44; N, 9,02%). M 465.

Descricão 3

Ne-benziloxicarbonil-NQÍ-terc-butoxicarbonil-f s) -lisina-( 4-for-mil)-butilamida (D3)

A uma solução agitada de cloreto de oxalilo (1,47 g; 12 mmol) em diclorometano anidro (40 ml) mantida sob uma atmosfera de azoto a -60°C, adicionou-se, gota-a-gota dimetilsulfóxido (1,21 g, 15 mmol), de forma a que a temperatura permanecesse abaixo de -50°C. A mistura foi deixada em agitação a -60eC durante 15 minutos, adicionou-se álcool (D2) (3,6 g; 7,7 mmol) diluído em diclorometano anidro (10 ml) e deixou-se aquecer a mistura até -25eC durante 1 h. A mistura foi então arrefecida até -60°C e adicionou-se lentamente trietilamina (4,7 g; 46 mmol) de forma a que a temperatura interna permanecesse abaixo de -50“C. Quando se completou a adição, a mistura foi gradualmente aquecida até à temperatura ambiente, lavada com água (30 ml) e NaCl aquoso saturado (30 ml). As lavagens aquosas sofreram extracção de retorno com diclorometano (2 x 30 ml) e as fracções orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de magnésio anidro e evaporadas in vacuo originando um óleo viscoso límpido. A purificação por cromatografia "flash" [(EtOAc:MeOH) (20:1) v/v], originou o composto do título (D3) com o óleo (2,8 g). (M+H)+ observado 464. C24H3706N3 requer M 463. 73 147

RJS/AW/B3068 -22-

Descrição 4 (S)-3-fN-terc-butoxicarbonil)-amino-8-fN-benziloxicarbonil)-1.8--diazaciclotridecan-2-ona (D4)

Processo A O aldeído (D3) (1#8 g; 3,88 mmol) foi dissolvido em etanol (180 ml) e hidrogenado sobre paládio a 10% em carvão vegetal (200 mg) à pressão atmosférica e a 35"C, durante 72 h. A suspensão foi filtrada através de Keiselguhr e evaporada in vacuo para dar (S)-3-(N-terc-butoxicarbonil)-amino-1,8-diazaciclotridecan-2--ona. A amina bruta foi dissolvida num sistema misto de solventes tetra-hidrofurano/água, (6:20 ml) v/v, arrefecida até 0eC e tratada com cloroformato de benzilo (0,66 g; 3,88 mmol) e com um excesso de carbonato de sódio para manter o pH entre 10 e 11. Deixou-se a mistura em agitação à temperatura ambiente durante a noite, lavou-se com acetato de etilo (3 x 25 ml) e as fracções orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de magnésio anidro e evaporadas in vacuo originando um óleo límpido. A purificação por cromatografia "flash" [(EtOAc:MeOH) (20:1) v/v] originou o composto do título (D4) como um sólido branco (0,2 g). M+ observado 447. C24H37O5N3 requer M 447.

Processo B O aldeído (D3) foi hidrogenado a uma pressão de cerca de 689 kPa sobre paládio a 10% em carvão vegetal em metanol, e depois em metanol ácido obtendo-se (S)-3-(N-terc-butoxicarbonil)--amino-1,8-diazaciclotridecan-2-ona bruta. A amina foi tratada com cloroformato de benzilo e purificada como descrito no Processo A, originando o composto do título idêntico. -23 73 147 RJS/AW/B3068

Descricão 5 ( S) -3-antino-8- (N-benziloxicarbonil) -1.8-diazaciclotridecan-2-ona. sal trifluoroacetato fD5\

Tratou-se uma solução arrefecida (0o) de lactama (D4) (0,59 g; 1,28 mmol) em diclorometano (10 ml), com ácido trifluoro-acético (5 ml). Agitou-se a mistura durante 1 h a 0°C, aqueceu--se até à temperatura ambiente e deixou-se em agitação durante a noite. 0 solvente foi evaporado sob pressão reduzida, originando o composto do título (D5) bruto como o sal trifluoroacetato. 0 produto foi usado tal qual, sem purificação adicional.

Descricão 6 Ácidos 6-metil-4-r Γ8-f N-benziloxicarbonil\-1.8-diazaciclotride-can-2-ona-3-il')-aminocarbonil)-hent-2 (e 3)enóicos. ésteres isonropílicos ÍD6^

Arrefeceu-se até 0°C num banho de gelo, uma solução de ácido 4-isopropoxicarbonil-2-(2-metilpropil)-but-2-enóico (Dl) (3,7 g;16,l mmol) em diclorometano anidro (10 ml) sob azoto e depois tratou-se com 1,1-carbonildimidazolo (3,03 g; 18,7 mmol) em uma porção. Após l h a 0°C a mistura foi sequencialmente tratada com N,N-diisopropiletilamina (2,59 g; 20,1 mmol) e a diazalactama bruta (D5). A solução foi agitada a 0°C durante 1 h, aquecida

73 147 RJS/AW/B3068 -24-hf aquecida até a temperatura ambiente e a agitação continuou durante a noite. A solução foi sucessivamente lavada com água, ácido cítrico a 10%, NaHC03 a 10%, salmoura, seca sobre sulfato de magnésio anidro e finalmente evaporada in vacuo para remoção do solvente. Depois submeteu-se o produto a uma cromatografia "flash" em coluna de sílica gel, eluindo com acetato de etilo-pentano (1:1) v/v, originando o composto do título (D6) como um sólido branco (3,04 g) p.f. 112-117°C. (Encontrado: C, 66,56; H, 8,32; N, 7,52. c3iH47°6N3 requer C, 66,76; H, 8,49; N, 7,53%).

Descrição 7

Na-terc-butoxicarbonil-N6-benziloxicarbonil-f S)-lisina-f6-hidro-xi)-hexilamida (D7)

Η O

O

Uma solução de Na-terc-butoxicarbonil-Ne-benziloxicarbonil--(S)-lisina (15,8 g; 0,042 mol) em diclorometano anidro (200 ml) mantida a 0°C, foi sequencialmente tratada com hidrocloreto de l-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (9,96 g; 0,051 mol) e 1-hidroxibenzotiazolo (7,0 g; 0,051 mol). Agitou-se a solução a 0°C durante 1 h, tratou-se com 6-amino-hexan-l-ol (4,7 g; 0,046 mol), e deixou-se em agitação durante a noite, à temperatura ambiente. A mistura foi então lavada com NaHC03 aquoso saturado, seca sobre sulfato de magnésio anidro e evaporada in vacuo originando um óleo viscoso. A purificação por cromatografia "flash" [(CHC13:MeOH) (20:1 v/v)] originou o composto do título (D7) como um óleo claro (16 g), que, por repouso, solidificou num sólido branco. (M+H)+ observado 480. C25H41N306 requer M 479. 73 147 RJS/AW/B3068 -25-

Descricão 8 Na-terc-butoxicarbonil-Ne-benziloxicarbonil-(S)-lisina-(5-for mil)-pentilamida (D8)

O

Tratou-se uma solução agitada de dimetilsulfóxido (3,63 g? 0,046 mol) em diclorometano anidro (100 ml), mantida a -60°C, com cloreto de oxalilo (2,58 g; 0,0198 mol) diluído em dicloro-metano (10 ml) a um caudal tal que assegurasse que a temperatura permanecesse abaixo de -50°C. Após agitação durante 20 minutos, o álcool (D7) (6,35 g; 0,013 mol) dissolvido em diclorometano (50 ml) foi adicionado gota a gota, durante 5 minutos. A mistura foi agitada a -60°C durante 15 minutos, aquecida até -35°C, agitada durante mais 10 minutos e depois arrefecida até -60°C. Tratou-se a solução obtida com trietilamina (8 g; 0,08 mole), aqueceu-se até à temperatura ambiente, lavou-se com água (2 x 100 ml), secou-se sobre sulfato de magnésio anidro e evaporou-se o solvente sob pressão reduzida obtendo-se um óleo viscoso. A purificação por cromatografia "flash" [(EtOAc:MeOH) (30:1) v/v] originou o composto do título (D8) como um óleo (5 g), que por repouso solidificou num sólido branco. (M+H+) observado 478. C25H39N306 requer M 477.

Descrição 9 f S)-3-(N-terc-butoxicarbonil)-amino-8-(N-benziloxicarbonil)-1.8--diazaciclotetradecan-2-ona (D9)

Η O

0^QCH2Ph

Processo A

Tratou-se o aldeído (D8) (5,0 g) em metanol (450 ml) com

73 147 RJS/AW/B3068 -26-paládlo a 5% em carvão vegetal (5,5 g). A suspensão foi hidrogenada a 965 kPa e à temperatura ambiente, durante 48 h, tratada com ácido clorídrico aquoso 2,5M (3 ml) e a hidrogenação continuou à pressão referida durante mais 24 h. A suspensão foi filtrada através de Kieselguhr e evaporada in vacuo originando (S)-3-(N-terc-butoxicarbonil)-amino-1,8-diazaciclotetradecan-2--ona. A amina bruta foi dissolvida num sistema misto de solventes tetra-hidrofurano/água, (10:40 ml) (v/v), arrefecida até 0°C e tratada com cloroformato de benzilo (2,85 g) e excesso de carbonato de sódio para manter o pH entre 10 e 11. Deixou-se a mistura em agitação à temperatura ambiente, durante 4 h, evaporou-se parcialmente o solvente in vacuo e extractou-se o resíduo com diclorometano (3 x 100 ml). A fracção orgânica foi seca sobre sulfato de magnésio anidro e evaporada in vácuo originando um óleo claro. A purificação por cromatografia ,,flash,, [(EtOAc:MeOH) (50:1) v/v] originou o composto do título (D9) como um sólido branco (2,0 g) p.f. 131,5-134,0°C. M+ observado 461. C25H39N3O5 requer M 461.

Processo B

Tratou-se o aldeído (D8) (5,8 g) em metanol (600 ml) com paládio a 5% em carvão vegetal (6 g) e hidrogenou-se a 345 KPa durante 18 h. A suspensão foi filtrada através de Kieselguhr e o solvente parcialmente evaporado in vacuo. A solução concentrada (~ 200 ml) foi tratada com peneiros moleculares de 4Ã e NaBH3CN (1,5 g). O pH foi ajustado a 6 por adição de HC1 concentrado, depois deixado em agitação durante a noite. Filtrou-se a suspensão através de Kieselguhr e acidificou-se até pH3. Evaporou-se o solvente in vacuo. retomou-se o resíduo em diclorometano (100 ml) e lavou-se com NaOH 1M aq. (2 x 60 ml). A fracção orgânica foi seca e o solvente removido sob pressão reduzida originando um sólido branco, 0 sólido foi dissolvido em THF/H20 (100:30 ml), tratado com cloroformato de benzilo (1,37 g) e excesso de Na2C03. Agitou-se a mistura durante 4 h, depois evaporou-se parcialmente o solvente in vacuo. o resíduo foi extractado com diclorometano (3 x 80 ml), seco e evaporado sob pressão reduzida para dar um sólido branco. A trituração com éter dietílico e pentano deu o composto do título (D9) como um

-27- 73 147 RJS/AW/B3068 sólido branco;

Descricão 10 (S) -3-amino-8- (N-benziloxicarbonj;] ^ -i ^ 8-diazaciclotetradecan-2--ona. sal trifluoroacetato (m n ) Η o

O OCH2Ph

Tratou-se uma solução da lactama (D9) (9 g) em diclorometano (150 ml), arrefecida (0°C), com ácido trifluoroacético (50 ml). Após lho solvente foi evaporado sob pressão reduzida, originando o composto do título (D10) bruto como um óleo. Este foi usado tal qual, sem purificação adicional.

Descrição 11 Ácidos 6-metil-4-r Γ 8- (N-benziloxicarbonil)-1.8-diazaciclotetrade-can-2-ona-3-in-aminocarbonill-hept-2(e 3)-enóico. ésteres metílicos (Dll)

A solução de ácido 4-metoxicarbonil-2-(2-metilpropi1)but-2--enóico (preparado como descrito na EP-A-273689) (5,08 g) em diclorometano anidro (200 ml) mantida a 0°C, foi tratada com 1,1-carbonildiimidazolo (4,12 g) numa porção. Após 1 h a 0°C, a mistura foi sequencialmente tratada com N,N-di-isopropiletilamina (5 g) e a diazalactama bruta (D10) (0,019 mol)

73 147 RJS/AW/B3068 -28- dissolvida era diclorometano (20 ml). A solução foi agi durante l h, aquecida até à temperatura ambiente, e continuamente agitada durante a noite. Lavou-se a solução sucessivaraente com água, ácido cítrico a 10%, NaHC03 a 10% e salmoura, secou-se sobre sulfato de magnésio anidro e evaporou-se in vacuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia "flash" em coluna de sílica-gel, eluída com acetato de etilo-pentano (1:1 v/v) originando o composto do título (Dll) como um sólido branco (5,1 g)· M+ observado 543,3307. C30H4gOgN3 requer M 543,3305.

Descrição 12 Ácido 3-acetilmercapto-6-metil-4-Γf8-N-benziloxicarbonil)-1,8-diazaciclotetradecan-2-ona-3-il1-aminocarbonil)-heptanóico. éster metilico (D12)

A solução de ésteres (Dll) (5 g) em ácido tiolacético (35 ml) foi posta em repouso à temperatura ambiente durante 18 dias e depois evaporada até à secura in vacuo. 0 produto foi submetido a cromatografia "flash" em coluna de sílica-gel usando éter dietílico, seguido de éter dietílico-acetato de etilo (4:1 v/v) como eluente. Combinaram-se as primeiras fracções a conterem sólidos por evaporação do solvente, e trituraram-se com éter dietílico-pentano originando o composto do título (D12) na forma de um diastereo-isómero único (Isómero A). As fracções posteriores continham misturas de diastereo-isómeros. M+ observado 619. C32H49N3°7S requer M 619.

73 147 RJS/AW/B3068 -29-

Descrição 13 Ácido 3-mercaPto-6-metil-4-r r8-fN-benziloxicarbonil^-l.8-diazaci-clotetradecan-2-ona-3-il1-aminocarbonil1-heptanóico. éster me-tilico (D13 ^

Tratou-se uma solução gelada da mistura diastereo-isomérica de ésteres (D12) (0,215 g) em metanol purgado com azoto (20 ml), com amoníaco aquoso a 35% (5 ml), agitou-se a mistura reaccional sob azoto durante 2 h e depois evaporou-se até à secura in vacuo obtendo-se um sólido branco. o produto bruto foi usado sem purificação adicional na preparação dos exemplos 5 e 6. M+ observado 577. C3oH4706N3S requer M 577. O procedimento anterior pode ser repetido com o Isómero A (D12) originando o único diastereo-isómero (D13). Este pode ser depois convertido nos diastereoisómeros singulares (E5) e (E6).

Descrição 14 Ácido 3-mercapto-6-metil-4-[\8-(N-benziloxicarbonil)-1,8-diaza-ciclotetradecan-2-ona-3-il]-aminocarbonil1-heptanóico. metilamida

Aqueceu-se uma solução do éster metílico (D13) (0,04 g) em metanol purgado com azoto (3 ml), contendo um excesso de N-metil-amina e cianeto de sódio (0,013 g) a 65"C durante 42 h num recipiente selado. A mistura reaccional foi evaporada até à secura in vacuo e cromatografada em sílica gel. A eluição com 5% de 73 147 RJS/AW/B3068 -30-

metanol em CHC13 deu o composto do título (0,025 g) como um sólido branco. (M+H)+ observado 577. C30H48°5N4S requer M 576.

Exemplo 1 Ácido 3-acetilmercapto-6-metil-4-f Γβ-fN-benziloxicarbonil^-l.8-diazaciclotridecan-2-ona-3-il1-aminocarbonill-heptanóico. éster isopropílico fEl)

Ph

Uma solução dos ésteres (D6) (3 g; 5,38 mmol) em ácido tiolacético (35 ml) foi posta em repouso à temperatura ambiente durante 18 dias e depois evaporada até à secura in vacuo. O produto foi submetido a cromatografia "flash" em coluna de sílica-gel usando éter dietílico, seguido por éter dietílico--acetato de etilo (4:1) v/v como eluente. Combinaram-se as primeiras fracções que continham sólidos da evaporação do solvente e recristalizaram-se em éter dietílico-pentano originando o composto do título (El) (0,32 g), p.f. 135-138°C. (Encontrado: C, 62,29; H, 8,03; N, 6,59; C33H5107N3S requer C, 62,53; H, 8,11; N, 6,63%).

Exemplo 2 Ácido 3-acetilmercapto-6-metil-4-Γl1.8-diazaciclotridecan-2-ona--3-il)-aminocarbonill-heptanóico. éster isopropílico (E2)

H

Adicionou-se uma solução da lactama (El) (0,15 g; 0,24 mmol) do ácido fórmico a 4,5%/metanol (4 ml) sob atmosfera de azoto, a 73 147 RJS/AW/B3068 -31-

uma suspensão agitada de negro de paládio (160 mg) em metanol (10 ml). Após 2 h a mistura foi filtrada através de Kieselguhr e evaporada in vacuo para dar um óleo que por repouso sobre pentano-éter dietílico originou o composto do título (E2) (0,11 g). Este foi usado tal qual sem purificação adicional. M+ observado 499. C25H45°5N3S requer M 499.

Exemplo 3 Ácido 3-mercapto-6-metil-4-1~ (1.8-diazaciclotridecan-2-ona-3-il) --aminocarbonil1-heptanóico. sal hidrocloreto do éster isooropílico (E3)

H

Tratou-se uma solução gelada de amina (E2) (0fl g) em metanol purgado com azoto (20 ml), com amoníaco aquoso a 35% (5 ml), agitou-se a mistura reaccional sob uma atmosfera de azoto durante 2 h e depois evaporou-se até à secura in vacuo. o produto foi cromatografado em sílica-gel usando clorofórmio-acetato de etilo (1:1) v/v e depois com metanol-clorofórmio (1:5) v/v como eluente originando a base livre do composto do título na forma de um óleo límpido. 0 produto foi dissolvido em etanol e tratado com algumas gotas de HC1 etéreo 1M obtendo-se, depois da remoção do solvente, o composto sal hidrocloreto do título (E3) como um sólido branco (0,08 g), p.f. 110-115eC. δ (CD3OD) 0,89 (3H, d, J=6Hz), 0,91, (3H, d, J=6Hz), 1,23 (6H, d, J=6Hz), 1,3-1,9 (15H, m), 2,42 (1H, dd, J=10, 16Hz), 2,52 (1H, m), 2,71 (1H, dd, J=16, 3Hz), 2,93 (1H, m), 2,99-3,3 (3H, m), 3,1-3,23 (2H, m), 3,65 (1H, m), 4,35 (1H, m), 5,0 (1H, m). FAB (M+H)+ observado 458 (base livre). C23H43N304S requer M 457.

73 147 RJS/AW/B3068 -32-

Exemplo 4 ** Ácido-3-mercaPto-6-metil-4-Γ(1.8-diazaciclotetradecan-2-ona-3--il)-aminocarbonill-heptanóico. sal hidrocloreto do éster metílico (E4)

Uma solução da lactama (D12) (Isómero A; 0,22 g) em ácido acético glacial (3 ml) foi tratada com HBr a 45% em ácido acético glacial (3 ml) e deixou-se em agitação durante 45 minutos à temperatura ambiente. 0 solvente foi removido por evaporação in vacuo. e o resíduo foi dissolvido em metanol (20 ml). A solução foi purgada com azoto durante 10 minutos, arrefecida num banho de gelo, depois tratada com amoníaco aquoso a 35% (5 ml). A mistura foi deixada em agitação a 0°C, durante 0,5 h, depois à temperatura ambiente durante 3 h. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida originando um óleo viscoso, o resíduo foi diluído com metanol anidro (1 ml) e tratado gota a gota com um excesso de HC1 etéreo 1M originando o composto do título como um sólido branco (0,12 g). M+ observado 443 (base livre). C22H41N304S requer M 443. δ (CD3OD):0,6-0,85 (6H, m), 1,2-1,8 (17H, m), 2,32-3,18 (9H, m), 3,5-3,62 (4H, m), 4,25 (1H, m).

Exemplo 5 Ácido mercapto-6-metil-4-Γ f1.8-diazaciclotetradecan-2-ona-3-il)--aminocarbonil1-heptanóico, sal hidrocloreto (Ε5Ϊ

H

Adicionou-se a uma suspensão do éster metílico (D13) (0,1 g) 73 147 RJS/AW/B3068 -33-

em isopropanol (5 ml), previamente purgada com azoto, uma solução de hidróxido de sódio (0,02 g) em água (l ml) e a solução resultante foi agitada à temperatura ambiente, sob uma atmosfera de azoto durante 18 h. A solução foi acidificada com um excesso de HCl etéreo e depois evaporada até à secura in vacuo. 0 resíduo obtido foi diluído com HCl aquoso IN (4 ml) e extractado com CHCI3 (3 x 5 ml). As fracções orgânicas combinadas foram secas e evaporadas obtendo-se um óleo viscoso que por trituração com éter deu um sólido branco. Dissolveu-se o sólido em ácido acético glacial (5 ml) e tratou-se com brometo de hidrogénio a 45% em ácido acético glacial (2 ml). A mistura foi agitada durante 1 h e depois tratada com éter precipitando um óleo. 0 solvente foi decantado e o resíduo dissolvido em metanol anidro (20 ml) e tratado com um excesso de HCl etéreo 1M para formar um sal. O sal de HCl foi triturado com éter obtendo-se o composto do título como um sólido branco. (M)+-H2S observado 395 (base livre). C21H39N3°4S requer ϋ 429. δ (CD30D): 0,9 (6H, m), 1,2-2,0 (17H, m), 2,45-3,3 (9H, m), 3,65 (1H, m), 4,35 (1H, m).

Exemplo 6 Ácido 3-mercapto-6-metil-4-Γ(1.8-diazaciclotetradecan-2-ona-3--il)-aminocarbonin-heptanóico. sal hidrocloreto da metilamida

H

ÍMX

Tratou-se uma solução da amida (D14) (0,02 g) em ácido acético glacial (3 ml), com brometo de hidrogénio a 45% em ácido acético glacial (1 ml). A mistura foi agitada durante lhe depois tratada com éter precipitando um sólido. O solvente foi decantado, e o resíduo dissolvido em metanol anidro (2 ml) e tratado com um excesso de HCl etéreo 1M. O sal de HCl formado foi triturado com éter para dar o composto do título como um sólido amarelo. (MH)+-H2S observado 409 (base livre). C22H42N4°3S requer M 442.

73 147 RJS/AW/B3068 -34 δ (CD3OD): 0,85 (6Η, m), 1,25-2,0 (17H, m) , 2,4-3,3 (12H, m), 3,65 (1H, m), 4,35 (1H, m).

Exemplo 7

As composições farmacêuticas para administração oral são preparadas por combinação do elemento seguintes: 1) Formulação de dosagem sólida % p/p

Composto do Exemplo 1 10 %

Estearato de Magnésio 0,5 %

Amido 2,0 % HPM Celulose 1,0 %

Celulose Microcristalina 86,5 % A mistura pode ser comprimida em comprimidos, ou servir para encher cápsulas de gelatina dura. 0 comprimido pode ser revestido aplicando uma suspensão de formador de película (e.g. HPM celulose) pigmento (e.g. dióxido de titânio) e plastificante (e.g. ftalato de dietilo), e secagem da película por evaporação do solvente. A película de revestimento pode compreender 2,0% a 6,0% do peso do comprimido, de preferência cerca de 3,0%. 2) Cápsula

% P/P

Composto do Exemplo l 20 %

Polietilenoglicol 80 % 0 composto medicinal é disperso ou dissolvido no transportador líquido, com adição do agente espessante, se presente. A formulação é então colocada numa cápsula de gelatina mole através de tecnologia adequada.

Exemplo 8

Uma composição farmacêutica para administração parenteral é preparada por combinação do seguinte:

73 147 RJS/AW/B3068 -35-

Composto do Exemplo 1 1,0%

Solução Salina 99,0% A solução é esterilizada e selada em recipientes estéreis.

Análise do inibidor de colagenase O teste realizou-se essencialmente como em Cawston and Burret, "Anal. Biochem." ââ., 340-345, (1979). Os compostos a serem testados são dissolvidos em metanol por sonicação e adicionados à colagenase (purificada a partir de sobrenadantes de culturas da linha de células de fibroblastos do pulmão humano, WI-38) em tampão. Para assegurar que os inibidores da tiol-colagenase permanecem não oxidados, pode-se incorporar j8-mercaptoetanol no solvente metanol e/ou nos tampões diluentes, para se obter uma concentração final de 9,6 x 10”5M. O mínimo efeito directo do jS-mercapto-etanol na degradação do colagénio pela colagenase humana é controlado. Após uma pré-incubação de 5 minutos a 37°C, os tubos de ensaio são arrefecidos até 4°C e adiciona-se colagénio tipo I de pele de ratazana 3H-acetilado. Os tubos de ensaio são incubados a 37°C durante a noite. O 3H-colagénio forma fibrilas insolúveis, que são o substrato para a enzima.

Para terminar o ensaio, os tubos de ensaio são centrifugados a 12 000 rpm durante 15 minutos. O 3II-colagénio não digerido é transformado numa pelota, ao passo que o 3H-colagénio digerido é éncontrado como péptidos solúveis no sobrenadante. Retirou-se uma amostra do sobrenadante para contagem da cintilição do líquido. A actividade dos inibidores de colagenase (IC50: concentração inibidora a 50%) é expressa como a concentração de composto que inibe uma concentração conhecida (padrão) de enzima em 50%.

Os compostos dos Exemplos E1-E6 possuíam valores de IC50 na gama 4,7 x 10-6 - 9,7 x 10”8M.

Claims (9)

1. 73 147 RJS/AW/B3068 -36- REIVINDICACÕES 1 - Processo de preparação de um composto de fórmula (I) ou de um seu sal, solvato ou hidrato:

   (I) na qual © -OH; alcoxi; ariloxi ou aralquiloxi em cada um dos quais o grupo arilo está opcionalmente substituído; -NRgRy, onde cada um de Rg e R7 é, independentemente do outro, hidrogénio ou alquilo, ou Rg e R7 juntos com o átomo de azoto ao qual estão ligados formam um anel de 5, 6 ou 7 membros com um átomo de oxigénio ou enxofre opcional ou um segundo átomo de azoto opcionalmente substituído no anel; ou um grupo 0 II -nh-ch-c-rq I 9 R8 onde R8 é hidrogénio; alquilo opcionalmente substituído por -OH, alcoxi, -NRgRy como definido para R1# guanidina, -C02H, -CONH2, -SH ou -S-alquilo; ou -CH2-Ar onde Ar é arilo opcionalmente subs-tituído; e R9 é alcoxi; OH; ou -NRgRy como definido para R·^; R2 é hidrogénio; alcanoílo C2_8; ou aroílo opcionalmente substituído; R2 é alquilo Cg.g; e R4 é -(CH2)p-X-(CH2)g- onde p é um número inteiro de 1 a 9, q é um número inteiro de 2 a 10, e a porção -(CH2)p- está adjacente ao átomo de carbono marcado com um asterisco na fórmula (I), e X é -NRg- onde R5 é seleccionado de entre hidrogénio, alquilo alcanoílo C2_g, alcoxicarbonilo C^_g, e aroílo, aralquilo ou aralquiloxicarbonilo em cada um dos quais a porção arilo está opcionalmente substituída, processo caracterizado por compreender a reacção de um composto de fórmula (II): Segue fórmula

   73 147 RJS/AW/B3068 -37-

   onde Rlf R3 e R4 são definidos como na fórmula (I), com um tiol de fórmula (III): L-SH (III) onde L é um grupo protector de enxofre convencional, para dar um composto de fórmula (IV):

   (IV) onde R1# R3 @ R4 são definidos como na fórmula (I), e L é definido como na fórmula (III); e subsequentemente quando necessário - clivar o grupo L e/ou R5 para dar um composto de fórmula (I) no qual R2 e/ou R5 são hidrogénio; - converter o grupo R2 de um composto de fórmula (I) num outro grupo R2; - quando apropriado, converter o grupo R5 de um composto de fórmula (I) num outro grupo R5.
2. 2 - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por R*l ser hidroxi, alcoxi C1-4 ou alquilamino C^_g.
3. 3 - Processo de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracte- jj> rizado por R2 ser hidrogénio, acetilo ou Ph-C- onde Ph é um grupo fenilo opcionalmente substituído.
4. 4 - Processo de acordo com qualquer das reivindicações de 1

   73 147 RJS/AW/B3068 -38- 3, caracterizado por R3 ser n-butilo,
5. 5 - Processo de acordo com qualquer das reivindicações de 1 a 4, caracterizado por R4 ser um grupo -(CH2)p-X-(CH2)q onde p e q têm valores tais que R4 forma parte de uma estrutura azalactama com 11 a 16 membros e X é -NR5- onde R5 é hidrogénio, metilo, benzilo, t-butoxicarbonilo ou benziloxicarbonilo.
6. 6 - Processo de acordo com qualquer das reivindicações de 1 a 5, caracterizado por R2 ser hidroxi, metoxi, iso-propiloxi ou metilamino, R2 ser hidrogénio ou acetilo, R3 ser iso-butilo e R4 ser -(CH2)p-X-(CH2)g- onde pé4eqé5oupé4eqé6eXé um grupo -NR5- onde R5 é hidrogénio.
7. 7 - Processo de acordo com qualquer das reivindicações de 1 a 6, caracterizado por o centro marcado com um asterisco na fórmula (I) ter a configuração (S).
8. 8 - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por se preparar: ácido 3-acetilmercapto-6-metil-4-[[8-(N-benziloxicarbonil)-1,8--diazaciclotridecan-2-ona-3-il]aminocarbonil]heptanóico, éster de isopropilo, ácido 3-acetilmercapto-6-metil-4-[(1,8-diazaciclotridecan-2-ona--3-il)aminocarbonil]heptanóico, éster de isopropilo, ácido 3-mercapto-6-metil-4-[(1,8-diazaciclotridecan-2-ona-3-il)-aminocarbonil]heptanóico, sal hidrocloreto de éster de isopropilo, ácido 3-mercapto-6-metil-4-[(1,8-diazaciclotetradecan-2-ona-3--il)-aminocarbonil]heptanóico, sal hidrocloreto de éster de metilo, ácido 3-mercapto-6-metil-4-[(l,8-diazaciclotetradecan-2-ona-3--il)-aminocarbonil]heptanóico, sal hidrocloreto, ácido 3-mercapto-6-metil-4-[(1,8-diazaciclotetradecan-2-ona-3--il)-aminocarbonil]heptanóico, sal hidrocloreto de metil amida, ácido 3-acetilmercapto-6-metil-4-[[8-(N-benziloxicarbonil)-l,8-diazaciclotetradecan-2-ona-3-il)-aminocarbonil]heptanóico, éster de metilo, —39— 73 147 RJS/AW/B3068 ácido 3-mercapto-6-metil-4-[[8-(N-benziloxicarbonil)-l,8-diazaci-clotetradecan-2-ona-3-il)-aminocarbonil]heptanóico, éster de metilo, ou ácido 3-mercapto-6-raetil-4-[[8-(N-benziloxicarbonil)-1,8-diazaci-clotetradecan-2-ona-3-il)-aminocarboniljheptanóico, metilamida.
9. 9 - Processo de preparação de uma composição farmacêutica caracterizado por se associar um composto de fórmula (I), definido como em qualquer das reivindicações de 1 a 8, ou um seu sal, solvato ou hidrato, farmaceuticamente aceitável, com um transportador farmaceuticamente aceitável. Lisboa ÚUl. 1991 Por BEECHAM GROUP p.l.C. =0 AGENTE 0FICIAL=