PT93724A - Processo para a preparacao de compostos contendo fosforo - Google Patents

Description

Ν. ' Ο presente invento refere-ss a novos derivados de fósforo, aos processos para a sua preparação e ao seu uso em medicina,, Em particular, o presente invento refere-se ao seu uso como inibidores de enzimas da família da colaqsnase das metalo-proteases neutras para o tratamento de artrites a outras doenças. A família de enzimas colagenase de mamíferos compreende um número de proteases, exemplifiçado pela própria colaganease intersticial (tipo I>, as estromelisinas (também conhecidas como proteoglicanasss ou transinas), gelatinasas ds leucócitos poli-ínorfonucleares e de fibroblastos C também conhecidas como cola— gen-IV-ases) P e Hfaomba~l!! Cmetaioproteass putativa 1, metalopro-tease uterina) EBoIdherg et ajU , d. Biol. Chem. 2610, 66Θ®, 1986s Witham et ai», Biochem, J = 240913, 19Séj Breathnach et al. ,s

Nucleic Acids Res.s 15, 1139, Í987§ Muller et al_. , Biochem. d,, 253, 187s Í988? Collier st al., J. Biol. Chem., 263, é579, 1988« Murphy et §1., , Biochem, J , , 258, 463, 1989c Quantin et al,, Biochem. C-N.Y.), 28, 5327, 1989s Birkedal-Hansen, J, Oral Pa- tnoi,,, 17_, 445, 19883, A qualidade de membro da família de proteases colagenase ds mamíferos é evidente pela posse de um número de propriedades verificáveis sKperimenislmsnte e altamente características, que podem ser adoptadas como critérios para a localização desta família ds enzimas, seleccionadas a partir das seguintess (a) Actividade proteolítica óptima a pH aproKimadamen-te neutro, <b) Dependência da actividade da enzima na presença de zinco, como se torna evidente pela perda de actividade após tratamento com que1antes de iSes

metálicos divalentes, tais como 1,1Θ—fenantrolina (que1ação preferencial do zinco), ou EDTA

(propriedades ds quslaçSo menos restritasp EDTA ou EQTA cotribuem também para a inaciivaçSo da enzima via que1ação dos iSes cálcio exigida para a estabilidade da enzima)» (c) ínibiçSo por ΤΪΜΡ (Inibidor de Metaloproteases de Tecidos)s um inibibor proteináceo projeetado para desempenhar um papel significativo no controlo fisiológico da família de enzimas colagenase» Outras famílias de metaloproteases não são inibidas por TIsiP, pelo menos até ao ponto sm que estudos relevantes tfm sido levados a cabo» (d) Ausfncia de inibição significativa por inibidorss conhecidos de outras famílias de metaloproteases neutras5 contendo zincotais como tsrmolisína, enzima conversora da angiotensina e "encsfalinase" CEO 3»4»24»11)« Um dos inibidorss mais vezes utilizados é fosfamiridon,o qual inibe a termo-lisina e a encsfalinase» is) Bio-sintese e secreção de formas precursoras latentes ξzimogènios)» que requerem activação sxtracelular. A activaçSo pode ser conseguida por um número ds endoproteases? organosiercuriais e agentes caotrópicos»

Membros dai família colagenase de enzimas metaloprotease neutras tfm especificidades para substrato distintas» Deste modo, a própria colagenase tipo I é única na sua capacidade para clivar a ligação peptidica especifica nas fihrilbas nativasdos eolagé-nios intersticiais Cpor exemplo tipos Is II e XII}» As geiãtí-nases sSo só fracamente activas sobre estes colagénios *, mas são

capazes de degradar cola-génios interstuciais desnaturadas, bem coma colagénias nio fibrilares, par exemplo tipo IV, tal como foi verificado na membrana de base» Boníha-l tim sida referida coma actuando prefsrencislmente sobre colagénios desnaturados (gelatinas), apesar do seu perfil diferir da das estremeiisinas ou das colagsnasas tipo IV= Quer as estremeiisinas quer as gelatinases são também capazes de degradarem proteínas estruturais não colagenasas, tal como a proteína do núcleo de protsoglicano s elastina, As macramoléculas involvidas nas intsracções célula--substrato s cslula-célula, tais como laminina e í iforonsciina,, são também suscsptlveis de degradação por várias destas metalo-proteases» A gama de aplicações terapêuticas dos inibidore-s de enzimas da família da colagenase descrita de aqui em diante reflecte o papel fundamental destes e de outros substratos proteinácsos destas enzimas na matriz do tecido conjuntivo de todo o corpou As aplicações extendem—se a intervenções clinicas eai muitas doenças e a fenómenos não primariamente devidos a uma. destruição nítida do colagénio e de outros componentes do tecido conjuntivo, mas envolvendo remodelação de tecido normal ou por perturbações=

Enzimas da família da colagenase são produzidas por fibroblastos da pele s sinoviais, condrócitos, células mono nucleares periféricas, ceratinócitos e tecido gengival, bem como as que existem dentro das vesícula sde armazenamento granular em leucócitos polimorfonucleares CPLfILsK

Os inibidores da família tíe enzimas colagenase são considerados como proporcionando tratamentos paras « 1»

<i) as doenças artríticas tais como artrite reumafcóids e osieoartrite,, reumatismo do tecido ooIe¥ polícondrite e tendinite? íii) as doenças cie reabsorção óssea tais como osteoporose, doença de Paget? hipsrparatiraidisma s calesieaiomas (iii) a destruição aumentada do eolagénio que ocorre em associação com diabetes? (iv) as classes recessivas de epidermólise distrófica bulhosas (v) a doença peridental e as consequências emergentes da produção de colagenase gengival ou da produção de cale.gena.se PMML seguindo a infiltração celular na gengiva inflamada, incluindo para o combate à maior susceptibilidade dos pacientes com diabetes à doença peridental§ tyi) a ulceração corneai por exemplo a inducida por álcalis ou outras queimaduras, por radiaçao;; por deficiência em vitamina E ou deficiência retinóide? ívii) a ulceração da pele e do iracto gastro—intestinal, e a cura as feridas anormais (viii) as situações pós—operatóriass tais como anastomose do cólon5 nas quais são aumentados os níveis de colagenase? íík) o cancro,! onde a família colagenase tem sido implicada na neovascul-ar 1 cação requerida -para -sustentar a sobrevivência e crescimento do tumor? na remodelação de tecido requerida para acomodar o crescimento de tumores primários a

secundários, e na penetração de células do tumor através- da memhrana de base das- paredes vasculares, durante a metástasej <m) as doenças de desmislinação dos sistemas nervosos central e periférico, incluindo as síndromas em que a perda de mislina é o acontecimento patológico primário s aquelas em que a desmielinação se segue â atrofia skdhsL A degradação da mislina nestas doença, exemplifiçada pela esclerose múltipla, é mediada, por membros da família de encimas colagenase»

Como usn particular exemplo do valor terapêutico dos inibidores da família de encimas colagenase, tais como os revelados no presente invento, as doenças artríticas crónicas que levam a smtensas perdas dos componentes colagénio, proteoglicano s elasiins da cartilagem, ossos e tendões das articulações atestadas, devem ser rscsptivas ao tratamento com inibidores das co! «gerisses, proteoglicanases < es t rome 1 i s i n as > e gelatinases, correntemente tidas como sendo as principais encimas envolvidas»

Estas encimas têm sido detestadas em e=<tratos de tecido sinovial a cartilagíneo e também tfm sido s;<tensamente estudadas em culturas de tecidos de uma ampla gama de tecidos conjuntivos» ã parte o controlo da biassínfcese, secreção e activação das encimas, a mais significativa regulação natural destas encimas em estados normais e de doença, considera—ss ser a produção endógena de inibidores tais como o Inibidor de Heialoproieases de Tecidos s a s7-macroglobulina,. Uma desregulaçãa entre os níveis locais de encimas proteoliticas e de inibidores naturais poderá permitir a ocorrência da destruição dos componentes da tecido conjuntivo»

Ds compostos descritos no presente invento, os quais são inibidores sintéticos e de baixo peso molecular desta família * *>

tís enzimas-.: oferecem um meio terapeutiscamenfce útil3 no qual pode ser restaurado um equilíbrio mais normal s não patológico entre a actividade de inibição s enzímáticap elesactuams deste modo, para complementar e suplementar os inibidores de enzima sndogsnos, Na verdada, devido a estas enzimas catuarem habitualmente apenas dentro de meios ambientes pericslularss restritos, antes de serei» inactivadas por inibidores que circulam no sangue e presentes na maior parte dos BKsudstos infIamatórios3 os inididorss de baixo peso molecular aqui revelados podem ser mais eficazes do que os inibidores proteináceos endógenos que são excluídos pela sua dimensão das regiões de destruição de tecido conjuntivo localizadas,. A Patente Europeia ΘΘ54862 revela uma classe tíe dipe— ptídeos substituídos tenda actividade inibidara útil da snceía-1inase.

Foram agora descobertos novos compostos estruturalmente relacionados, os quais são inibidores de colagsnass eP deste modo,, de utilda.de potencial no tratamento de doenças nas quais está implicada a actividade colagenolitica a de remodelação de tecidos,,

De acordo com o presente invento è fornecido um composto ds fórmula geral (í) ou um seu sal, solvato ou hidratas *

V

génioLí alquilo5 -CH^-z onde Z á fsnilo du nstsraarilo 8.ΙΓϊΕ’Π C0 w f | Γ"ιϊ5 Ί" 1 T J 5 i ΓΊ f"jí!Í Γ"ιί •u»*v»· »* V» μ:. ·„(.νώίιυ«' .J w« j FU â um ^ ϊ «|»“ ·«.

onda £"*. ~y τ,ΐΓ £ ti.CÍ i uy ét !>Í Úí ij Ci X 4-|i XXli-í uLl “CH.^-Ph onde Ph é fsnilo íacul tatx\ f eXíIIVe.'! 11«wí ;í& H ί·*Ι ΐ-ϊ· UX lQXUi.f CÍ * * £3 W t Ϊ idrogénio ou alqí.iilo5 s R4 á --•CFU- { CH.«s) OFlcr du “Cf Π xJ l.-r" t C>U > OCOR, ou » j O

R,

R 10

\ Ο R^-5 s Rq são hidrogénio -O-alquil C1_A ou -WR^Fo modo a formarem um anel onde n é um número Inteirei de 1 a 6s ou alquilo C,__£Íj e R1a é hidraKi ou (onde R* e podem estar ligados de heterociclico)g au R~ s estão ligados, em conjunto, de modo a formarem ande m é um número inteiro de 4 a 12* A menos que especificado de outra maneira, cada grupo alquila é de preferencia um grupo C, __sP usais prsferivelments C1 podendo ser uma cadeia linear ou. ramificada»

Os substituintes opcionais parai os grupos ísnilo e hetero-arilo podem ser ssleccionados tie entre OH, alquilo C, .. , alcoKi C, _ Λ, halogénio, -NHCO-alquil C,_^5 -NHCQPh e -CONR^F'^ onde Ph, e são como anteriormente definidos» 0 termo benzilo faeultativamente substituído? quando aqui utilizado, significa um grupo bensilo no qual a porção feniio está fseultativamente substituída» Os substituintes facultativos incluem aqueles aqui anteriormente definidos para os grupos feniio e hetero-arilo em relação com a variável R-» Z;; quando é hetero-arilo, inclui hsteroarilo monocΙοί ico de 5 ou 6 membros ou bicíclico de 9 ou 1Θ membros.

X

Além dissas as anéis hetero-arilo inonocic 1 icos de 5 ou 6 membros e bíciclicos de 9 ou 16 membros contêm preferivelmente uai ou dais hetero-átomos escolhidos de entre azoto, oxigénio a enxofre. Quando Z é um hetero-arilo, bicíclieo, de 9 ou 16 flisrtibras. os dois anéis estão, de preferência, condensados de modo a um deles ser um anel de 5 ou b membros contendo, de preferência um Qnico bstero-àtomo, por exemplo indolila= R é de preferência hidrogénio, metilo ou etilo, em especial hidrogénio.

Os valores para R, incluem hidrogénio, metilo, etilo, isopropilo e n-butilo» Quando é um grupo alquilo, R1 é, de preferência, metilo ou etilo» R.~; é, de preferência, um grupo alquilo tal como [r-butilo, iso-butilo ou sec-butilo, especialmsnte iso-huttlo, R-, é, de preferência, benzi Xo, 4~hidrobenz.il o,, alca- o xi C»_^-benzilo tal como 4-metoxibenzilo ou betero-ariImetilo bic.ic.lico condensado de 9 ou 1Θ membros como por exemplo 3—indo— 1iImetila.

Us valores de R„ incluem -(CH^)^UCH^., ~uH<CH-^)CO,-*CH~=·, e 4 x. £. o · o o -

De preferência os grupos Ru. e Râ slo combinados de modo a formarem -ÍCH?) , Uma forma especialmente favorável é quando íTí ™ 10, o que resulta numa estrutura lactSmica baseada num anel da 13 membros»

Os compostos de fórmula (I) podem formar sais com bases, por exemplo com o hidróxido de sódio» Os compostos de

fármula <Σ> têm um átomo de azota básico e podem formar sais por adição ds ácidos,; por sKSiíipíQ com ácido clorídrico» Tais compostos fazem parte do presente invento»

Quando os compostos de fórmula CI), ou os seus sais, formam solvatos ou hidratos, estes também constituem um aspecto do invento»

Os compostos de fórmula (!) têm pelo menos um» s podem ter dois» três ou mais centros assimétricos e por esta razão SKXstem em mais do que uma forma astereoisomérica» 0 invento compreende todas estas formas e as suas misturas, incluindo racematos, s misturas diastereoméricas»

Os isómeroB preferidos são os que têm a configuração S no centro quiral marcado com um asterisco na fórmula CD» quando Ft é diferente de hidrogénio»

Os compostos de fórmula C J.) ou os seus seis, solva tos ou hidratas estão preferivelmente na forma farmaceuticaments aceitável ou substancialmente pura» Por forma farmaceuticaments aceitável quer—se dizer» infcsr alia com um nível ds pureza farmacsuticamente aceitável SKCluindo aditivos fsrmacêuticos normais tais como diluentes e veículos, e não incluindo material considerado tóKico em níveis de dosagem normal»

Os compostos da fórmula <I) ou seus sais, solva tos ou. hidrates estão, da preferência, numa forma substancialmente pura» Uma forma substancialmente pura conterá gsralmsnte pelo menos 5Θ% sm peso, preferivelmente 75%, mais preferivelmente 9#% e ainda mais preferivelmente 95% ou 99% ou mais do composto de fórmula I ou um seu sal ou solvato»

Os compostas de fórmula <I) ou os seus sais-;i solvatos ou hidratos podem ser isolados como sólidos cristalinos ou na fornia de espumas ou gomas.

Uma forma farmaceuticamente aceitável preferida é a forma cristalina. 0 presente invento fornece os compostos de fórmula (!) ou os seus sais farmaceuticamente aceitáveis para uso como agentes terapfuticos activos. particularments como agentes para d tratamento de estadoss nos quais ocorre a degradação do tecido conjuntivo e de outros componentes proteináceos do corpo5 tais como perturbações musculo-esquelêticas resultantes da actividade co 1 ageno 1 i i i c a s particularments reumatismo e/ou doenças artríticas remodelação de tecido.

Os compostos de fórmula Cl) possuem também actividade potencial no tratamento do cancro;; para impedir a degradação da mieiina no sistema nervoso central e periféricog e em outros estados? nos quais membros da família colagenase de mstalapro-tsases neutras desempenham papeis patológicos ou outros. 0 presente invento também proporciona um processo para a preparação de um composto de fórmula (I) d qual compreende a conversão de um grupo R.-,^ em hidrogénio, por clivagem de um grupo a partir de um composto de fórmula (II)s

em que R.-Sp, rep-resenta alquilo ou bens 1 lo f acu 1 ta ti vamen te substituído e R71 representa hidrogénio ou alquilo ou bsnsilo facultativamente substituído s R15 Fu» e são definidos do mesmo modo que para a fórmula (D, s quando necessário, a conversão de R-s., em hidrogénio * J. A clivagem de R.7A e, se necessário de R,?, , pode ser levada a cabo em ácido ou álcali aquoso ou usando um haleto de trimetilsiliio, preferivelmente bromotrimetilsilano, num solvente inerte, por exemplo diclorometano» Os ésteres de bensilo podem ser removidos ai ternativamente por hidrogenóliss ou por outros procedimentos de desbencilaçáo padrão»

Quando quer quer R01 sSo alquilo» pode ser levada a cabo a clivagem de somente, para se obter um composto de fórmula (II) 5 na qual R.-^ é hidrogénio e ROÍ é alquilo, que é um composto da fórmula <I) na qual R ê alquilo, por tratamento com álcali em excesso sob condições suaves, por exemplo com hidróxido de sódio aquoso num solvente alcoólico» à temperatura ambiente»

Siffiilarment®, quando R.-.^ ê benHilo facultai ti vamen te substituído e Fí.-,, é alquilo, o grupo bensilo pode ser clivado por hidrogenaçSo de modo a obter-se um composto de fórmula (II) na qual R70 é hidrogénio e R.-s1 á alquilo» A clivagens de um grupo alquilo R01 pode em seguida ser levada a cabo como anteriormente descrito para se obter um composto de fórmula Cl) na qual R é hidrogénio,.

Quando R* num composto de fórmula CI)s é hidrogénio e R.-n .. num composto de fórmula í 11 >, nSo é hidrogénio* entSo a clivagem quer de R.-j_; quer de R?p. pode ser convsnisntemsnts sfsctuada numa única regcçlo» De preferencia,. R7ft e R.-^,. sãlo ambos alquiloj tal como meti lo ou etiloj ou benzilo.

Dever-se-á notar que os compostos de fórmula C11) ,, na qual é hidrogénio são eles próprios comoostos do invento ds •d. .1 fórmula CI > *

Ds compostos de fórmula CII) podem ser preparados por tratamento de um composto de fórmula CHDs

(III) em que R13 R2? e Rpj s'lo definidos do mesmo modo que para a fórmula (II) íencepto que nSo é H)3 com um composto de fórmula CIV)s (IV) ο

em que R.T e sSa definidos do mesmo modo que para a. fórmula CI >. A reacção © de preferencia levada a cabo na presença as um agente de acoplamento3 tal como diciclo-hexilcarbodi—imida ou hidroloreto de l-etiÍ-"3~E3-Cdimetilamina)prDpi!I!carbodi--imAda na presença de l-hidroxihenzotriazoles ou usando 131''-carbonxldi~ -imidasolsj num solvente inerte tal como α diclorornstano ou o ac e t on i t r i 1 o = A clivagem selectiva do grupo Rr>1 pode ser em seguida levada a cabo utilizando os procedomentos descritos anteriormsnte para a preparação de compostos de fórmula íl) de modo a obterem---se compostos de fórmula ill)5 na qual R?1 é hidrogénio»

Os compostos intermediários de fórmula 111ϊ > podam ser preparados pelo tratamento de um composto de fórmula (V) ou um seu sal § (V)

k,1 sáo dsnniQos do mesmo moa o que para a. em que s fórmula (III) 3 com um composto ds fórmula (VIA) ou CVIB) ou um seu sals R2

0

CO2R12 (VIA) (VIB) em que R._.; é definido do mesmo modo que para a fórmula (!>,, R.. 1 representa um grupo separável tal como halogénio5 metano-sulfq-ηΐΐοκχ ou trifluorometano-sulfonilaxi a R1._, representa hidrogénio ou um grupo protector do carboKilo,, e? depois disto» remoção de um grupo R.,protector do csrboxilo.

Quando é utilisado um composto de fórmula CVIB)5 a aminação redutora pode ser levada a cabo por hidrogenação sobre um catalisador de metal nobre tal como paládio sobre carbono ou por reacçlfcj com cianoboro-hidreto de sódio a pH 6 a 7» Os alcoóis alquilicos inferiores usados como solventess tal como o metanol a o stanolP são adequados para ambas as reacçSes. Estas reacções podam ser levadas a cabo na presença de crivos moleculares» É preferida a raacçSo ds hidragenaçSo mas esis processo exclui o uso ds um composto ds fórmula CVIB) no qual qualquer ds R^s Roi gu seja benziIo* 0 grupo protsctor do carbcsxila é preferivelmente um êstsr ds metilo ou ds etilo,. Os grupas protsc-torss ésteres podem ser removidos sob condições padrão ds hidró-· lise básica utilizando uma bass diluida tal como hidróxido ds sódio aquoso 1 Normal em metanol.,

Quando o composto de fórmula \V) está na forma ds base livre,, o composto de fórmula <VIB> é aprapriadamenfce um <a--ceto~ éster CR^ ~ alquilo)»

Quando o composto ds fórmula (V) for um sal ? tal como o sal hidrocloreto,, o composto de fórmula (vIB5 á apropriadamente um sal ds um α-cstoácido CR,s0 = H>5. por exemplo um sal de sódio* ft preparação de compostos de fórmula í 111> usando um composto ds fórmula (VIA> pode ser levada a cabo sob condições padrão de alquilaçao* Um grupo separável ds halogénio é de preferencia o bromo s um grupo separável com bass em oxigénio ê de preferfncia o trifluorometano-sulfoniloxi»

Os compostos de fórmula (III) podem ser altsrnativamen— is preparados por condensação ds um composto ds fórmula (vil) ou um seu. sais

H2N C02r12 (VII) *2

em que R~ é definido do mesmo modo que para a fórmula (De R,^ representa um grupo protector de carbonilo com ura aldeído R,“CHG era que R* é definido do mesmo modo que para a fórmula (I) e tratamento do produto de condensação com um fosfito de dialquilo ou trialquilo apropriado» por exempla fosfito de dimstilo, & depois disso remoção do grupo protector do carbonilo,, 0 grupo carbonilo è convenientemente protegido como um éster de alquilo ou de benzilo o qual pode ser removido utiliçando condições padrão de hidrólise ou de hidrogenação=

Como anteriormente descrito relativamente è. aminação redutora dos compostos ds fórmula CVIB),, onde um grupo ds protec-· ção benzi lo R1? é removido por hidrogenação5 então e Roí são restritos a alquilo» A1 tsrnstivanisnte5 compostos de fórmula <II) na qual R,~^ e R->., são alquilo ou bsnzilo facultativamente substituído» podem ser preparados pela reacção de um composto de fórmula (VIII)d

(VIII) na qual R~? Kx e são como definido na fórmula CI)» com um composta ds fórmula (IX)s

(IX) na qual R1 é como definido na fórmula Ca)? R,-,^ e R^i sSg alquila ou hsnsilafacultativsraente substituído e R»1 è um grupo separável como definido para a fórmula íVIA)? na presença ds uma base tal como irietilamina ou "Proton Bponge" C1 s8·-·taisídIcnetiIaínInQ>·~na·“ ftalsπα)5 ou utilizando carbonato ds potássio anidra num solvente slcoél ico.

Quando é um grupo separável baseado sm oxigénio,: par exemplo trifluorometano-sulfoniIokí„ o qual ê preferido» o deslocamento do grupo separável é conveniantsmente lavado a cabo na presença de “Proton Sponge" num solvente inerte tal conito metanol5 durante um período de vários dias na ausência de luz*

Uma outra preparação alternativa de compostos da fórmula (III) pode ser levada a cabo por reacçlo de um composto de fórmula (IX) como aqui anteriormsnte definido com um cosiposto de fórmula <VII) na qual RV- é umgruoo da protecção de carhoxilo» utiliçando condições como descrito para a reacçlo de compostos de fórmula CvIII) com compostos de fórmula (IX)5. e em seguida remoção do grupo de protecçlo =

Grupos de protecçlo de carooxilo adequados incluam grupos alquilo» bensilo s trialquilsiIilo» Um grupo ds protecçlo tralquilsililo» por exemplo triínetilsilila. é especialmente útil devido a poder ser facilmente incorporado» in situ» por exemplo

:arooκι n te ír?{|| ιδΠϋ! alo r da K-v.ç-, © trim 01 i 1 s x í ^ po por adição da hexametildissilazano aos reagentes em acetonitrila; na presença ds trietilamina, e removido selectiv* aquosa, sem ioposição de quaisquer limitações nc P;_. , „ Outros aosntes da si3.il-acSo incluem cloretc I i 1 o s N, N-~d i s t i 1 c r i me t i 1 s i 111 am i n a«

Um grupo alquila protestar do removido por hidrólise básica* utilizando sor exemolo hidróxido

Dsver ter em conta que quanoo o grupo protscta da carhoxi ío è alquilo, R0s>( e R01 podem ser derivada alquilo ou ds benzi1 o 5 sisas quando R1é ura grupo benzilo? R, R_,.5 estão 1 imitados a alquila,.

Quanoo compc ss de tôrmuia Mli) sSd preparados por esta via, ê preferido que e K .. sejam benzi lo e R.,seis ‘ 1 "* 1 ~ *" ’ 4χ 'χ «* — ~ trifluorometano-sulfoniloxi no compostop de fórmula (IX) e R*._: seja. trimetilsililo ou meti lo no composto de fórmula. (VIU* :-Sr p r èd p S r -:¾ d O ir- pL/s iu» w*?» t-í w .a- uw«- -ui ss- i wsi íííw.à-c?. \ ϋ i. á j. s trat.afiíento de um composto do fórmuiâ ÍVII)~

(VII) to qual R.-? é como definido n o grupo amino esta τacu i d fórmula (IV) como aqui tstivamente pr an t sr iarsten t rs mu < I > e Hidrogénio s em regioo, com um compos-definido? na presença na

ds um agente da acoplamento como aqui anteriormente descrito para a preparação de compostos de fórmula (II) a partir de compostos ds fórmulas (III) s <IV>»

Os compostos de fórmula <IX> podem ser preparados a partir ds derivados hidroxialquilfosfonato por conversão do grupo hidroKilo no grupo separável R11 ρα métodos convencionais» Por exemplo., quando , é trif luarometano-sulfoniloxi5 pode ssr adicionado anidrido trifluorometano-suifónico á solução do hidroxialquilfosfonato num solvente inerte tal como dicloroms--· tanoj, sendo a reacção levada a cabo a temperatura reduzida sob uma atmosfera inerte,, de acordo com o método geral de E= Vadsjs et ai«5 Journal of Organic Chemistry 5|b 2!ò55 (19B5)=

Os compostos hidroxialquilfosfonato podem por sua vez ser preparados por reacção do fosfito correspondente,, por exemplo dibenzilfosfito, com um aldeído R.,-CHOs no qual R, é como definido na fórmula Cl) de acordo com o método geral de F» Texier--Boullet s A» Foucaud,, Synthesis5 916 <1982)« Os fosfitos de alquilo e benzilo são ou compostos comercialmenfce disponíveis ou podem ser preparados a partir ds materiais de partida comercial-mente disponíveis por métodos padrão»

Os compostos intermediários de fórmula <V) são ou. compostos conhecidos ou podem ser” preparados a partir de conhecidos derivados de ácidos aminoslquil—í osf ónicos,, utilizando processos padrão para introduzir, conforme requerido,, os grupas H20 s R2r

Pode sser necessária a protecção da função amina durante -estas reacções,

A introdução de um grupo instilo &n.7. ou R.-,., pode ser efectuada por rsacçio com diazometano num solvente inerte adequado. A introdução de um grupo estilo hUA ou K21 pode ser efectuada por reacção com diazometano num solvente inerte adequado .

Os compostos de fórmula (v) de configuração fixada podem ser preprados pelo método geral de R. Jacquisr et a 1. „ Phasphorus and Sulfur 36 s 73s (1988).

Os compostos de fórmulas (IV) e (VII) são ou conhecidos derivados de aminoácidos ou podem ser feitos a partir destes derivados por métodos conhecidos. Os compostos de fórmulas (VIA) e <V'íB) são ou compostos conhecidos ou podem ser preparados- a partir de compostos de compostos conhecidos por métodos conhecidos.

Os intermediários de fórmula 111> P e alguns intermediários de fórmula ív) aqui revelados são compostos novos s constituem um aspecto do presente invento hem como os processos descritos para a sua preparação*

Quando obteníveis, os sais dos compostos de fórmula (I) farmaceuticamenie aceitáveis podem ser convencionalmente formados pela rsaeção com o ácido ou base apropriados. Os solvatos podem ser formados por cristalização a partir do solvente apropriado.

Como foi previamente mencionada. os compostos de fórmula (1) existem em mais de? que uma forma tíiastersomêrica. Sempre que os processos do invento produzem misturas destas

t Qi1” jj O I. Ir-OlsíSr w por cromatogrsfia? i\ 1 .L· ___ JL. r-i i. Ubri* 1 ia t_ dos d 0 f ò r m u 1 a {I) w ds partida esterso ros dí3£>fôj selos dos S 5.Π tess na sua qIq individuais pu0 fc? fíl ser sSjjarcsQus um do outra por exemplo HPLu s xvamsn cs „ os compostos aiastersoniêricas separa-podem ser obtidos pela utilização de ma.ter.ia.i-i mericamente puros ou peia sep.araçlo dos isóme-intermediários em qualquer passo do processo de balidadeq s conversão destes intermediários· em compostos de fórmula (I)=

Dever-se-á ter em conta que, quando um diastereómero individual de um composto de fórmula (I) é preparado por mais de uma variante de processo como aqui anteriormente descrito, cada uma das quais permita que seja definido um centro quiral diferente, pode ser possível deduzir a configuração num centro quiral que não é pré-determinado, utilizando uma variante de processo particular„

Para além disso, dever-se-á. ter em que emoor lUsI f 1 guraç 3a absoluta : num c. ΒΠ t ro quiral pai rtxcular |j:sj-55S conhecida, si? possível car ac ter izar um di ne reômero dado relati- vamen lr.br ao S- eu. sp£iTis ί por rs t erdncxa a d 3L recçâo na qual o plan da 1 u z po 1 J a risada é rodado

Além disso. O pr“ esente i nvento pruporciuna uma. L-ΟΓπ pOS X çSo farmacêutic :a, que inc 1 U Í U.ff! C offíows"iio os “f orrnu. i a (Ί ) = OU UlTs seu sa1 ou so i va to farras .ceuticâsTi sn to ac s i távs 1 n 0 um veicula τarr?íaceut,it.smente aceicavel.

Ai !Vtíl t t.u P© !"· rij j*- p $£ mu.sc u 1 o—esque 1 é t i c -as , pa r t i c u 1 a rmen te as s para a moaulacso

r SiTiOu 01 aC -ãO no tratamento tíe doenças

Uma composição deste invsnto tem também utilidade potencial no tratamento do cancros para evitar a degradação da mialina no sistema nervosa central e periférico? e em outros estados nos quais membros da. família colagsnase de ntetaloprotsa— sss neutras desempenham papeis patológicos e outros.

Uma composição do invento, que pode ser preparada per mistura, pode conter um diiuents, ligante, agente de enchimento,! desintegrante, agente aromatisante, agente corante, luhrificante ou conservante, de maneira convencional. Estes exciρlentes convencionais podem ser empregados de maneira convencional, por exemplo como na preparação da composições de inibidores de enzimas peptídicos relacionados, tal como o inibidor de ACE enalapril =, lima composição do invento, pode ser adaptada para administração oral, tópica, rectal ou parentérica, mas é preferida a administração oral* As composições parentéricas podem ser administradas intrsvsnosamente, iniraauscu1armsnts ou intra—arti— cularmente.

Preferivelmente, uma composição farmacêutica do invento está em forma de dosagem unitária e numa forma adaptada paira utilização nos campos médico ou veterinário. Por exemplo, tais preparações podem existir numa forma de embalagem acompanhada por instruções escritas ou impressas para utilização como um agente no tratamento ou profilaxia de qualquer das doenças anteriormente mencionadas, A gama de dosagens adequadas para os compostos do invsnto pode variar de composto para composto s pode depender do estado a ser tratado. Ela também dependerá, inter alia, da relação da capacidade de absorção e do modo ds administração escolhido» 0 composto ou. composição do invento pode ser formulado para administração por qualquer via, dependendo a via preferida da doença para a qual o tratamento for requerido, e está preferivelmente em forma de dosagem unitária ou numa forma que um paciente humano possa administrar a si próprio numa dosagem única»

As composiçSes podem, por exemplo, estar na forma de comprimidos, cápsulas, saque tas, frascos pequenos» pós, grânulos, pastilhas, pós rsconstituíveis, ou preparações liquidas, por exemplo soluções ou suspensões» ou supositórios»

As composições, por exemplo as adequadas para administração oral, podem conter eKcipient.es convencionais tais como agentes ligantss, por exemplo xarope, acácia, gelatina, sorbitol, tragacanto ou polivinilpirrolidona§ agentes de enchimento, por exemplo lactose, açúcar, amido de milho, fosfato de cálcio, sorbitol ou glicinap lubrificantes para comprimidos, por exemplo sstearato de magnésio5 desintegrantes, por exemplo amido, poli-vinilpirroliáona, glicolato de amido sádico ou celulose micro-cristalinap ou agentes molhanies farmaceuticamenis aceitáveis tais como lauril-sulfato sódio»

As composições sólidas pode® ser obtidas por métodos convencionais de mistura, de enchimento, de fazer comprimidos ou semelhantes» Podem ser usadas repetidas operações de mistura para distribuir o agente activo camplstamente por aquelas composições que empregam grandes quantidades de agentes de enchimento» Quando a composição existe na forma ds um comprimido» pó ou pastilha, qualquer veiculo adequado pode ser usado para as composições

f armacluticas sólidas, sendo sxsínplos esteara to de magnésio amido3 glicose,, lactose,, sacarose., farinha de arroz e giz. Os comprimidos podem ser revestidos de acordo com métodos bem conhecidos na prática farmacêutica normal, em particular com um revestimento autárica„ A composição pode também ser na forma de uma cápsula inqarivel, por exemplo de gelatina contendo o composto 3 se desejado com uns veículo ou outros excipientes. Por exemplo,, numa cápsula de gelatina dura contendo a quantidade requerida de um composto do invento na forma de um pó ou granulada em intima mistura com um lubrificanie, tal como sstearato de magnésio, um agente de enchimento, tal como celulose microcris-talína, e um desintegrants, tal como ylícolato de amido sádico,.

As composiçoss para administração oral na forma de líquidos podem estar na forma de, por exemplo, emulsões, xaropes, ou elixires, ou podem ser apresentados como um produto seco para reconstituição, antes de ser usado, com água ou outro veiculo adequado, Tais composições líquidas podem conter aditivas convencionais tais como agentes de suspensão, por exemplo sorbitol, xarope, metilceluloss,, gelatina,, hidroximetilcelulose, carhoxi-metilcalulose, gel de sstearato de alumínio,, gorduras hidrogana-das alimentaresf agentes emulsionantes, por exemplo lecitina, ϊποηα-olsaio de sorbitano, ou acácia?, veículos aquosos e não aquosos, os quais incluem óleos alimentares, por exemplo óleo de amêndoa, óleo de coco fraccíonado, ésteres oleosos, por exemplo ésteres de glicerina, ou propileno-g1icol, ou álcool etílico, glicerina, água ou solução salina normalj conservantes, por exemplo ρ-hidroxibenzoato de metila ou de propilo ou ácido sórtaica£ e, se desejado, agentes aromai!santas e corantes, convencionais» oral „

Os compostos deste trados por uma via não invento podem também ser oral. De acordo com adminis- processos farmaefuticos de rotinas as composições podem ser formuladas,! par exempla para administração rectal como um supositório ou por administração parentérica numa forma injeciávsl» Para injscção, por exemplo por injseção intra-artieular ou por injseção na fluido cérebro.sspinal or por meio de outras vias que poderão ganhar acesso aos sitias de dssmielinaçãos como soluções livre-mente solúveis ou como reservas de depósito fracaments dispersas, os compostos do invento podem ser apresentados numa solução aquosa ou não aquosas suspensão ou emulsão num liquido farmaceu-ticaments aceitável, por exemplo água livre de piroqénios s estéril ou um óleo parentericaments aceitável ou uma mistura de líquidos,, que podem conter agentes hacteriostáticos, anti—oxidan-tes s outros conservantsss tampões ou solutos para tornar a solução isotónica com o sangue,, agentes espessantes, agentes de suspensão ou outros aditivos farmaceuticamente aceitáveis. Tais formas serão apresentadas em dose unitária estéril tal como ampolas ou dispositivos para injaeçãa descartáveis ou em formas multi-dose tais como um frasco a partir do qual a dose apropriada .pode ser retirada os.i uma forma sólida ou concentrada que pode ser usada para preparar uma formulação injsctàvel„

Para administração tópica e psrcutansã,, as preparações podem também ser apresentadas como posada, creme, loção, gel, “spray", aerossol 5 lavagem, tintura para a pele ou emplastro»

Pi dose unitária para doenças inflamatórias conterá geral mente de 10 a 1000 mg e conterá preferivelmente de :ΙΘ a 50¾ mg ,f em particular 1®, 5®s ΙΦΘ, 15Θ, 2ΘΦ» 25ô? 300, 35®, 40®, 450 ou 500 mg, A composição pode ser administrada uma ou mais veces por dia, por exemplo 2, 3 ou 4 veees por dia,, de tal modo em que a dose diária total para adulta de 70 kg se situará normal-mente no intervalo de 10 a 30Θ0 mg» Esta dosagem corresponde a aproximadamente ©, 15 a 5© mg/kg por dia» Ai ternativamente.

particular para injecção, a doss unitária conterá de 2 a 2©θ mg de um composto do invento s será administrada d® forma múltipla, se desejado, para dar a dose diária desejada= 0 presente invento fornece adicionalmsnts um método para o tratamento de estadas nas quais a degradação dc> tecido conjuntivo s da outros componentes proteináceos do corpo ocorres tais como reumatismo e/ou estados artríticos em mamíferos, tais como seres humanos, o qual compreende a administração a um mamífero com necessidade de tal tratamento, de uma quantidade eficaz de um composto de fórmula (I) ou ds um seu sal farmacsuticaments aceitável« 0 presente invento fornece revela também a utilização de um composta ds fórmula (I) ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável, para a preparação ds um medicamento para utilização no tratamento de estados nas quais a degradaçlo do tecido conjuntivo s de outros componentes proteináceos do corpo ocorre, tais como reumatismo e/ou estados artríticos»

As seguintes Descriçóes e Exemplos ilustram a preparação ds compostos do invento e os subsequentes dados biológicos ilustram a sua actividade farmacológica» Todas as temperaturas são expressas em C!C =

Ν-α-fasfonoetil>~ieucina,,.. éstertrietilico (DL)

CH

3

CH 3

CH 3 \ P

H 0 v' \ C02C2H5

0 ácido í i-C (fsnilmetil Jaminoietil 3fosfónico„ éster dietiiico (2,,76 g) [preparado pelo processo de FR„ Atherton et al. J * Hed* Chenu 29 ? 29 3 19861= foi dissolvido em etanoi (1Θ0 ml) s hidrogsnado sobre paládio a 1©% sobre carvão vegetal à pressão atmosférica·, Foram adicionados C4~metil-2~QKo) pentanoato de stilo (1,.58 q) e crivos moleculares e a hídrogsnaçKo continuou durante 48 h= 0 catalisador foi removido por filtração e o filtrado foi evaporado in vacuo obtendo-se um óleo incolor» que foi cransatografado sobre gel de siilca5 eludindo co«n acetato de stilo? para dar o composto indicado no titulo como uma mistura de isórneros (£ ,, 83 g ) =,

-X -

Ses£j;Í£lO^. N- i 1-DiatQK.if osf ini I st i 1 ),,-1 gucina_ÍD2) 3

CH

Método A N-Cfosfonoetilí-leucinsp éster trietilieo (Dl) (0?SÍ g)? foi dissolvida em metanol (3Θ ml) e tratado com hidróxido ds sódio (052 g) em água (15 ml)» Após 24 h* a solução foi acidificada com HC1 4N e extraída com tíiclorometano» Os ext.ra.ctas orglnicos foram secos sobre sulfato ds sódio anidro s o solvente foi removido In vácuo para se obter α composto indicado na titula < Θ ? 66 g 5 „

Método B

Uma solução do sal hidrocloreto ds ácido Cl~(fenilme-til)amino3etilIfosfónico, éster dietílico <15 g)3 dissolvida em stanol (400 ml)., foi hidrogenada sobrs paládio a ίθ% sobre carvão vegetal à pressão atmosférica até que a conversão na a mi. na primária estivasse completa» 0 sal ds sódio do ácido 4-snetiI-2--oxo pentanóica num volume mínimo de água foi então adicionado e a hidrogenaçlo continuou durante 3 dias., 0 catalisador foi

removido par filtração e α filtrado foi evaporado in vácuo para se obter uni óleo incolor que foi então retomado em clorofórmio e lavado com água Í3© ml) sequida por ácido cítrico diluído (2 κ 30 ml) s por mais uma lavagem aquosa* Depois de secagem (Na^SOJ a camada de clorofórmio foi evaporada até à secura para dar a composto indicado no titulo como um sólido branco e pegajoso tendo as mesmas propriedades espectroscópicas que α material obtido no método A»

Descrido 3 i 1,) ~leuç il_3~· (S) - trAatofil. 3.“· (Jàijralãllir na* éster metílico <D5)

A U-(i-dietoKifosfiniletil>-leueina CD2) {1J g) em dicloromstano CoD ml) foi arrefecida até ©°C= Foram adicionados :i.-hidroKÍbensotriacols <©*6 g) s hidrocloreto de i—eti 1—3— C3--dirnstilaniinopropil )-carbodi-“imida <®588 g) e a solução foi agitada a Θ°C durante 1/2 h= Foram adicionados sal de ácido trifluaroacético de H-Trp-Ala-OMe (i5S g) e di-isapropiletilamina (2 ml) s a solução foi agitada a ©°C durante 1 h* Depois ds agitação à temperatura ambiente durante 24 h3 a solução foi

fiitrada5 lavada com água5 solução saturada de bicarbonato de sódio e solução de ácido cítrico a i#% e seca com sulfato de sódio anidro. A solução foi filtrada s o solvente evaporado in vácuo de modo a obter-se um óleo amarelo» A purificação por cromatografia de coluna sobre gel de sílica== sluindo com jnetanol a 3%/acetato de etiio? originou o composto indicado no título C®„45 g) sob a forma de um óleo incolor»

Observado EI H* 546 =,

Descrido 4 N~ W~XN- (1-DietPKif osf ini leti 1 )-letici 1 l-O-msti 1- (S)--tirosi 13- (S) - alapina».......éster .ffl.eti.lico... <D4)

O \ CH 3 H5C2°

0 composto indicado no titulo <®?45 q> foi preparado a partir da N-C l--dietcsxifosf inilétil ;* lsucina CD2) (#^5 a) e sal de ácido trifluoroacético de H-Tir(Me)-A1a-OMe (β==84 q) por meio do procedimento descrito na Descrição 3»

Observado EI tT" 557== M-c CS).....1-PietoHifosf iniletil )-Q<)-lmicine, éster__£ M~< íS) — (1-DistoKifosf inilatil )--(S)--lsucina (05) CH.

0 éstsr distilico do ácido (S}“Í"--i(ÍSs2S = 5S)-2-hidrD"-KÍ-"25 6»6-trimstilbicicloC3P 1 1 3hep~3~il ideno-amino3propil f osf cSni— co (Í2 q) [preparado pelo método de R= Jacquier ai aJU Phosphcrus and Sulphur 36? 73;i 1.9883 foi agitado à tsiRpsratura ambiente durante 72 h numa solução de ácido citrico aquoso a 15% <21© ml) s? tetra-hidrofurano (245 mlK A solução foi concentrada s lavada com foenxsno <15© ml) 5 basif içada com carbonato de sódio s extráda com clorofórmio (4 x 2Θ© ml)= Os extractos orgânicos combinadas foram secos com sulfato de sódio anidro e o solvente foi removido in vacuo de modo a obfcer-se ácido íSJ-i-aminopropilfosfónico, éstsr distílico <55é3 g) sob a forma de um óleo lábil* 0 Acido <S)~l“aminopropilfQsfóriicos éster dietilico <5Pò3 g) e <4-mstxl~2-“Oxo>psntanoato de metilo <12n47 g) foram dissolvidos em etanol (2Θ© ml) e hidrogenados sobre paládio a i©% sobre carvão vegetal à pressão atmosférica durante 72 h= 0 catalisador foi removido por filtração e α filtrado evaporado in vacuo para producir-ss um óleo incolorg o qual foi dissolvido em diclorometano (5© m 1) lavado com solução saturada de bicarbonato

sódio (5Θ ml) e ácida cítrico a quoso a 5% (50 ml) e s •€?l.o com Ifato de sódio θ.π xc! ro« H rSríHOÇ -~ÍO do solvente oriqinou o C Ofíl DOS·"" indicado no t e r.. . *J X uiA i. O 3 sob a forma de uma íBisturs de '2 d x as to*"- í-OiíS reáfiierosj que foi eromatografada sobre gel de sílica, eluindc áqua„ cara ariqinar um diasfcereóíBera individual» ia sm metano1)

Isòfflero DOí4 I i. 5 /k: qJ ua. 8 (CDCI..r)s θ»94 <6H, t) , I 06 (5H, m>, 2,68 (iH, m; . -? _/ J VJJ ^ íj -¾. ·? K í n , i. / .. *+ » í ·~· i “.-ri ·.·.

Uma elu.iç.ão posterior deu origem a um diastereómef individual de eluicSo ma is lenta»

Vi·'!

Isoinev --- }.) —ϋ 1 ;ik5 o / luj_. — ·ν* 1-ι-:7 \o — j.i mstajíOi 5 (CDCI> s ô„90 C6H, d d) 5 l,®o Í3H, t), 1,4¾ C6H, dt>, 1,4®-· 1, Vo C5H, m>, 2,76 Cl!4, m>, 3,48 CIH, t>, 3,72 C3H, s>, 4,12 C4H, m)« finilet.il) — í3)-·]. sueins ÍD6) CH. H5C2°

Xp" 0 ^ \ C2H5 CH.

Ν' H co2h OC2H5 (D6)

Q éster metílico da N-í (S)-l-dietoxifosfiniIpropi 1)-<R ou S>-lsucina (Isómero D5A) (1,71 g> foi dissolvido esi etanoi (30 ml) e tratada com hidróxido de sédia <θ,23 g) em égua (2Θ mi)» Depois de 24 h, a solução foi acidifãcadacom HC1 5N e extraída com tíiclorometano» Os sxtracios orgânicos foram secos sobre sulfato de sódio anidro e o solvente removido in vácuo de modo a obter-se o composto indicada no titulo sob a forma de um diastereómero individual CD6A) CL,94 g>»

Calír~" = 4-23,/° (c = 1% em metanol) $ (CDCl-)s 0,97 <6H, d>, 1»Θ8 (3H, t), 1,36 Í6H, dt>, 1,44-1,99 (5H, m), 2,8® íIH, m>, 3,78 \1H, t), 4,17 C4H, m>„

Observado M ’ 309= C., ^H^NCCF' requer M 309»

Similarmente, o éster metilico da N~( (S)-l--dietoxifos-finiipropi!>-(R ou S)-isucina (Isómero D5B> (1,24 g) deu origem ao composto indicado no título sob a forma de um diastereóinero individual (D6B) (1,05 g)= Εαΐίρ'-^ = 4-4,07° (c - 0,984% em metanol) « (CDCl^)s 0,96 C6H, dd), 1,Θ5 (3H, t), 1,34 (6H, dt), 1,43-1,98 Í5H, m), 2,78 (1H, dt), 3,42 UH, dd), 4,16 (4H, m) =

Observado M* 309= C.s ^hC^NOP requer M 309» ío vo · —

5-lN--1IN--< (S)-l-FosfonopropiI )--(R)~ieueil 3 j-C-)-aminoasacicIptri-dacan-2~ona, éster dietílicon e 3-CN-CN-(íS?-Í"FosfQnaprapiI)~ — < S )-~leucil 3 3-(-) -aiiiinoagac ic I str idecan—5-onaéster d xetá. I ico ifiZi

o (D7) A W-<1-díetoKifosfinilpropil>-(R ou S)-leucina CD6A) <Θ,,έ>8 g) em diclorometano (25 ml ) foi arrefecida até Θ°C » Foram adicionados i-hidroKibensotriaeoIe <0,41 g> e hidrocloreto de 1—etil—3—(3—diffletilaminopropil>—carbodi—imida (Θ?88 g) s a solução foi agitada a 0°C durante 1/2 h» Foram adicionados, gota a gota? í -)-ό-aoinoacaciclotridecan~2--ona (Θ352 g) ( = -—63?6° (c — 1% em metanol) em diclorometano (25 ml)= A solução foi agitada è temperatura ambiente durante 24 h9 lavada com água, solução saturada de bicarbonato tíe sódio s solução de ácido cítrico a 5%. A solução foi seca com sulfato de sódio anidro e evaporada in_ vácuo de modo a. obter-se um óleo incolor» A purificação por cromatografia de coluna sobre gel de sílica, aluindo com um gradiente de metanol a 2~i@%/éter= originou um diastereó-itisra individual»

Isómero D7A (8,83 g) Εα3= -6,23° í c = 1¾ em metanol), p.f. Í46--Í47C‘C« 8 CCDC1 ) í ©594 <6H, t), 1,12 í 3H, t), 1,26-1:,97 Í3©H, m>, 2,68 ·«* CÍH, m), 2,87 Í1H, m), 3,68 Í2H, m>, 4,13 <4H, m), 4,4® (1H, m>, 6,47 (1H, 3 largo),· 7,62 CÍH, d),

Análises C^H^N^QjJP requer C, 59,62§ H, l©,®lj! W, 8,34%,

Encontrado C, 59,78íj H, 10,24-5 M, 8,38%,

Uma eluição posterior deu origem a um diastereámero individual de eluição mais lenta sob a forma de uma impureza secundária, ísómero D7B C®,2© g) = -82,11° (c = 1% em metanol), p.f. 142-144°C. 8 (CDC 1 ) s ®, 88 <6H, dd), 1,®4 C3H, t), 1,14-1,91 C3®H, m) , 2,68 (2H, m), 3,55 Í1H, m>, 3,7© UH, m), 4,©3 \4H, n) , 4,43 (1H, m) , 6,97 <iH, s largo), 7,69 C1H, dd).

Análises ^?5H50^3Q5P reclusr Cs 59,62? H, N, 8,34%.

Encontrado C, 59,61s H, i ®,©6 ? N, 8,1©%«

Siffii 1 armente, a H- ( (S> -1 —d ietosíi f osf ini 1 propi 1 - (R ou S)~leucina (D6B) (®,64 g) deu origem ao composto indicado no título sob a forma de um diastereámero individual ÍD7C) (©,39 g), -33,99o (c = 1% em metanol), p.f, 142-144°ϋ,

δ (CDCI^)s β,96 <ÒH, d), 1503 (3H, t>, 1,20-1,92 (3ΘΗ, m>, 2,75 < 1.H? dt) , 2,93 Í1H, m) , 3,32 (1H, m) , 3,54 (1H, m) , 4,17 C4H, m> , 4,47 Í1H, dt), 7,74 (1H, s largo), 8,11 <1H, d).

Observado rf 503 = requer Μ 5Φ3„

Descrição 8 (1-HidroMipropil)fosfonato da dibenzilo (Do)

0II (PhCH20)2P

OH C2B5 (D8)

Foi empregado o método geral de F,,Terrier-BoulIst e A» Foucaud ESynthesie, 1982, 9163,= Uma mistura de fosfito de idibenzi lo (31,13 ml, Θ?14 mole) s propionaldeido (10,21 ml,, 1 equiv»> foi agitada à temperatura ambiente e adicionou-se alumina básica (7® g) numa única porção» Depois ds repousar de um dia para o outro á temperatura ambiente, foi adicionado clorofórmio s a alumina oi recolhida s lavada com clorofórmio» Q filtrado foi evaporado até à secura e o óleo transparente resultante foi cromatografado sobre gel de sílica (6&Θ g) com eluiçSi gradiente (éter-metanol a 5%/étsr)» 0 composto indicado no título foi obtido sob a forma de um óleo transparente que solidificou ao repousar (27,82 g, 64%)» lima amostra foi cristalizada a partir de étsr/pentano de modo a obter-se um sólido cristalino branco, p.f» 81-82*0,,

)[>! SC Γ XÇ«AG V (:i - í r -salfPnilPKiprppll)fosfonato de dibenzilo (D9)

0 il (PhCH20)2P

c2h5 0 0 - S - CF. II 0 (D9) 0 . COíBpOSiZQ Í.ndÍC-3.do no tltu.Io foi prepa rado pelo método de E„ vSd0j 9> ST -5.X s Lu „ Oro» Chem» 1985, 50 (12) s. 21653., solução ds íi-hidroxio ropi1> fosfonato de dibenzil o (D8) 24 3 V/byp íy j 0 / tí mo Xe/ em cloreto de meti 1eηo í180 m19 foi arre T fcf ida até —50°C sob f Foi adicionada 2,6—lutidina C11,12 ml H095 mol e) seguida por anidrido tri f1uorometano—su1f6n ΐ f” (15, í ffilp Θ p 0898 mole), mantendo a temperatura a A mistura foi deixada aquecer lentamente até €>0C e em sequida foi retomada em éter irao.

Fi SOlUÇi toi sujeita a uns pro<-es»amentu auUD'=o rápido por lavagem da camada orgânica com água arrefecida com gelo, ácido clorídrico diluído ia 2) e finalmente salmoura» A camada orgânica foi seca (MgSO» anidro) e evaporada até à secura de modo a obter—se o composto indicado no titulo sob a forma de

$ <CDCI^> 15Θ8 (3Hs t, J = pletos que se sobrepoems

H, 2 tri-(4H ? m) e- ( i ã!i, s).

Descrição (S)~1eucϊ113~)-3-aminoa£scic iotridecan-2-ona (Dí&)

(D10) A N-fosnaiocarbon11-<S)-1eucina ( i bano (130 ml) foi arrefecida -ate © °C » For-a o m i Lien z α t r i a z ο I e <1,25 g) e aminopropi1)—carbod i—imida hidroc1oreto de < 1»88 ç) e a soluç

8/ g) em diclorame-dicionados 1 —hidro~ 1 ~e ti 1— 3~ (3~d xmetx 1 ~· ão foi aqitada a ©°C durante 1/2 h. Foram adicionadc gota a guta. ) -3--aminuazau. i~ clotridecan-2-ana <15o g dxclorometano íow ml) „ ambiente durante 24 h,

bicarbonato de sódio e solução foi filltrada e 5 (L α 1 ~ = --63 5 6 ° íc = 1% em metanol) em A solução foi agitada á temperatura lavada com água5 solução saturada de foi seca com sulfata de sódio anidro» A o solvente evaporado jjx vácuo de modo a. obter-sa um sólido branco que foi hidrogenado sobre paládio a 10% atmosférica normal» A solução foi dissolvido em etanol :-obre carvão vegetal filtrada e o solvente 1Θ@ m1) e evaporado 42 ^ „ * * Τ' ",

• áâo· 1π vacuo de modo a obter-se o composto indicado no título (D1Θ5 (1,1 g). 8 (CDC 1-^.5 s ©,95 í 6H, t>, 1,20-2,10 Í23H, m), 2,83 C1H, m) , 3,40 (1H, Η·), 3,/t· (1H, n§) , 4,4o ííH, m) , 6, òtí (IH, s largo) e 7,96 <iH„ d largo)= *4* __ Observado (1 325 = C. reousr M 325.·

Descrição 11 5„ j- h\~~ r Kj— f 1—Fosf onopropi 1) — (S) -1 suei 113— ( —)— aminoagacic lotridecan--2-ona (Dll)

(Dll) 0 Í--<t r i f1uoromeiano-su1f on i1ο κ í)propi1fosfonato de dibensilo (D9) (1,4 g) ε (S)—leuci1-<-)-3-aminaazaeielatridecan--2--00¾ ÍD10) (1,Θ g) foram dissolvidos em mtanol (ô ml). Foi adicionado 158~bis(dimetilamino)-naftaleno (Θ,6é q) e a mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 1Θ dias com exclusão de luz* 0 solvente foi evaporado in vacuo s o resíduo dissolvido em clorofórmio <50 ml), lavado com com água, solução diluída de ácido cítrico s foi seco sobre sulfata de sódio anidro» A remoção do solvente deu origem a um óleo laranja que foi cromatografado sobre- gel de sílica, eluindo com acetato de etilo5 rie modo a obtsr~ss o. forma de uma mistura de dois

Λ Ν composto indicado no titulo, sob d iastereómeros (Dll) (0S73 q). a

Observado BAR { M+H) ' 6Ξ8 » CTErH5_í5N-7.QE-P requer M 62/

Des-uric-Su 12 N~(1 — (R) — Dibensí lo;<ifosf inilgpropil )*~(S)~~leucina (Dí2A) g M~(t· - (S) -D i ben silo;; i fos- f i n i 1 e-p ro ρ i 1) - < S) -1 suc in a < D12B)

Método A

Seguindo o método ção Hcí ,é^ ter trimst il si1ICO Utlilcã iTí x s tu. ra de \ i -1 eucina si 1 •a sano f 1 7S m 1 '} e trii (13 ;i 5 m 1 ) durante um per iodi 0 ííl-tri f 1 uoronte (4, 5 g, & , fej 1 mo1e) T w X δτίΠΙΞ-δ/1 4t>- 42°C durante 48 h... A reaj à tempera tura ambient .e» Dei fil tra.da;! lavada com metano 0 r esiduo foi retoos -~cd o em i ( H 2) e f inalmente c om águ· geral -í \ IO O CÍ w·-/ 4808-/41A parai a prspara~ de 1 eucina. foi aquecida ao refluxo ,0088 iTíQ 1 trf i 1 ie ά ame t x 1 d x < 1,38 ml) em acetonitrilo total d 0 ·Η· h = mistura ΐϋώΠι-ΐυί

TsciiTisntD» a mistura foi

- cCtivlN (ím5._,SQ„ ) , filtrada e evaporada até à secura de modo a obter-se um sólido gomoso laranja (3,67 g). 0 produto bruto foi triturado com o volume mínimo de éter/pentano de modo a obter-se um sólido cristalino branco, o qual após recolha, lavagem com uma pequena quantidade de éter/pentano frios e secagem deu origem ao composto indicado no título, isómero R,S ÍD12A) (0,47 g, 11%), p.f* 112-— 115 °C»

Observado por M 433.

Desabsorç-lo Cl ÍNH-^Í SiH 434» C.-5._H^._5NOi_P requer

La.l — “23,09° íc = 0,97 MeOH) ! p N , ó , v.5 a C^-rH-rrtNOp-jiò .j P π i3 C3H, ’r \ ·\ θ!~=—v Ca í- s sj J. tj jíL. $ v* <5H, * κ 1H, •f* "1 j Js. O—i ^ i 4H n í— ( í — C S) —dxbensoi1oxxf csf in. obtido por HPLC prep ara ti PRP-1, 3ΘΘ x 7,0 mm, 2fe4R los éaua e um caudal de 4 63, /-3 § H, / , 44 ρ N, 3,23% =, (10H, s) sanao uma

Sob estas condições o isómero K,S elui em primeiro lugar com um tempo de retenção de 34,6 í«in e o isómero S,S' <D12B) è bem separado a 42,7 min»

Para o isómero (D12B5 s

Observado por BAR (M+H) ' 434» 0^_,Η^^Ν0_.Ρ requer M 433» \ .- \ .- ί 8 (0001-, .) 0,85 <6H, t), 0,92 (3H, t) , 2,62 (1H _ m), 3,26 (1H , m), 4,8-5,1 <4H, iTí) , 7,28 (Í0H, s) » Existem para além disso sinais na regiãi D d™' 1,5 S que estio ocultos por um sinal de água que se sobrep; Se« Ο isómsro S;sS iDl2B> depois do acoplamento com com derivados (S > —aminoâcidos conduz à série S, S , S »

Método B

Uma mistura, de hidrocloreto do éster metílico da i f 1 uo ronte tan o-su 1 f on i - < S)-1euc ina < @,o4á q| Θ,®@3 mo1 e), loxi ) propil >--f osf onato de dihenzilo ÍD9) <1,35 g; €*,003 mole) e carbonato de potássio anidra <1,@ q) em metanol (2 ml) foi aquecida C?4 50°C, com agitação, -durante 4 horas e em SOCJiJ íqs deixada, de um dia par a o outro, à temperatu ra ambiente» h mistura reacciona.i tdj BV8.pu{‘ soe. è r:- r ~ L·. U- í a. m vacuo8 e dissolvida em clorofórmio <5 ml) e filtrada» 0 filtrado, e os líquidos das lavagens, foram combinados e crornatografados sobre gel de sílica 60 (5Θbg) utilizando acetato de etilo—pentano <lsl) como eiuente, para se produzir uma mistura de éster meti li— ca de W-íi-<R)-dibenziloxifosfinilpropil>—(S)-leucina e éster metílico de N—(i~(S)—dibenziloxifosfinilpropil)—íS)—leucins sob a forma de um óleo (®,55 q)„ êSÍOfBS anterior Cl 3 Q j. 0; mole) em .ratada com uma sol u.ção de hidr 'óx xdo de mole) em água (1 ,5 ml > ; e β. 0-0 Ϊ ução foi ambien te de um di pH Γ a α ou l.trO a Foi A mistura de metanol <4?Ô ml) foi sód i o (0,11 g r; 0,00272 agitada à temperatura

em água e a com ácido orofórmio. A evaporada até um terçodo volume, in vácuo» retomada extraída com éterç A fracçSo aquosa foi acidificad cítrico até pH 3-4 e em seguida extraída (5 x> com cl fracção clorofórmio foi seca vácuo de modo a obter-se uma título CD12A) e (D12B),, sob lentamente» ••C·' até à secura mistura dos compostas indicados , forma ds um óleo que solidific (Na^SQ,) e svaporad 2 4 in no ou origem à N- f 1- (R) --(Θ3 34 g > j sob a ao produto obtido A trituração do produto com éter deu —d iben z i 1 o>? i f osf in i 1 propi 1 > — ΐ S > — 1 euc ina (Dl2A) forma de um sólido cristalino branco, idêntico pelo Método A»

Descrição 13 N— L N—(1—(K)~Fosfonopropi1) —(S) — leucil3—D—metil — (5)~tirosina—N~(2— ílico (D13) -hidroKietil)amida, éster diben (PhCH20)

OH

Utna solução agitada de N— Ϊ1—(R>— dibenziloxifosfinilpro— pil-íS)~leucina (D12A) (0,89 gs θ5ΘΘ21 mole) em acetonitrilo <9 ml) foi arrefecida até £t0C num banho de gelo sob azoto e adicionou-se 151"-cárbonildi-imidazole (@,73 g, 1,1 equiv.) numa única porção» Depois de 15 min a mistura foi deixada aquecer até à temperatura ambiente durante 30 min e sm seguida rearrefecida até 0°C» Depois de um período de tempo adicional de 15 min foi

acoplamento padrão e desprotecçSo com iFA/CH0Cl03 (0,49 g, Á, À- ;Í.V c } s a mi stur ra t ura. ambiei n te c 6. té s. secura e o iâds o r gSnica foi quiv.) e a mistura foi agitada de um dia para o outro á temperatura ambiente. A mistura rsaccional foi em seguida, evapo- resíduo foi partilhado entre EtOAc e água. h camaaa organica tqi lavada sucessivamente com MaHCD_ saturado,, ácida cítrico, água e salmoura. A camada orgânica foi seca ír4a.._B0^ anidro) e evaporada até- â secura de modo a obter-se uma goma amarelo-pálida (1,16 g). Cromatografia sobre gel de sílica com eluiçlo gradiente íEtOAc subindo até MeOH a 10%/EtOAc) deu. origem a uma goma incolor <0,43 g, 32%).

Observado por BAR (H+H) 654 CTS_H requer 653. 4o‘ /

ê (CDCl^.) 0,8 oM g 2 €3 que se sobrepõem), 0,96 Ϊ3Η, t) , 1,@5-1 <2H, m) , 1,35· — 1,65 í 2H, m 3 , 1,65-1,9 (1H, m>, 2,4 ( 1H, s 1 > , 2 5 68 < 1 h , m 3 , 2,9 <1H, 2 d que se sobrepõem), 3,07 (1H , 2 d que se sobrepõem ) 3 ,2-3,45 (2H, m) ,r ò - 5—= 8 {total òH, mg incluindo singeleto a 3 ,2 (3H3, 4,72 (íH, dd 3, 4,83-5,1 <4H, m), Ò t| t ul ( 2H, d), 7,0B (2H, d), 7,2 <1H, t 1), 7,2 CÍ0H, s), 7,5 (1H 5 dK (1)· Pat- dos E.U.A. 2 833 764

Ο i| (PhCH20)

OH (D14 )

' 3 1982 9163. Uma 35 mole) e vali |Í t-SOS à temper atura amb g) numa ún ica po rçSo. De; tempera tur a ambi ente 5 f O roi empregado α método geral de F= Te;·; ier-Boullet s A., Foucauld CSynthesis, i982s 9163. Uma mistura de fosfito de dibensilo <7,73 ml. ©s®35 mole) e valeraldeído (Ιι,ϊο mi itada -à temperaturaambiente de repousar de um Lcione.dD c lorofór— raio e a alumina foi recolhida e lavada com clorofórmio. 0 filtrado foi evaporado até á secura e o óleo resultante foi cromato— grafada sabre gel de sílica com eluição gradiente (pentano a 5©%/sceta to de etilo-acstato de etilo) de modo a obtee—se o composto indicada no título sob a forma da um óleo incolor <9, r / ό Λ ! H 5 t > j. 1?2Θ-1?8Ô C &H ,, m) ? 2 i 1H 5 S 1 ) s 3 3 que se sobrepõem) w ϋ ς Hf 6 (4H 3 Ífí } r; / n 3-4 C1ΘΗ s 5 ) Ϊ57 ΛDascricla 15

Trifluorometano-sulfoniloxi ) pentil) fosfonato dibenzilo (D i 5) (PhCH20)2P. n- C4H9 0 II S — CF. ii : (D15) O composto indicado (í-h i d rox ipentil)fosfonato ds crito na Descrição 9» no título foi prsprado a partir de dibenzi Io C D14) pelo flíátodo des- 8 (CDC1T) Θ 5 8tí (3H ? t > ? (iΘΗ3 m). 1,18- í 6H => sn) =

Descrição 16 5-- C N~ í N- (1—fosf onopen til) — (S) — 1 euc i 13 2 - <—) — aí» i noa z ac ic I o t r idec an— -2-ona, éster dibsnzilico (Dia)

\ Ο (< 1-trif luorometano-sulfoniloxi 5 péntil) fosfonato de ditaenzilo <D15) í@?96 q e a (S)-1 eu.ci1-3-<-) — aminoazacicIotride-ean~2~ona ÍD10) (S,65 g) foram dissolvidos em metanol (2,5 ml). Foi adicionado i,S--bi5(dicnetilamino>naftaleno <©,426 g) e a mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante dez dias com exclusão de luz» 0 solvente foi evaporado in vácuo e o resíduo dissolvido em clorofórmio (5® ml) , lavado com água5 solução diluída de ácido cítrico s seca sobre sulfato de sódio anidro» A remoção do solvente originou um óleo laranja que foi cromatografado sobre gel de sílica, aluindo com acetato de etilo, de modo a obter-se o composto indicado no título sob a forma de uma. mistura de dois diastereómeros CDíè) {0,4 g, 30%).

Observada por BAR ( pH-H ) 656= CH^_N_Q~P O / »JC5 »~s requer |vf I I s.Jw*J u -- i-- - \y v

-3 DO EXEMPLO i

NriÇJM—CN—C1 r±gsf onoe t i 1) -1 euci 13-,<Sjrtriptgfilj -tS)-alanina, éster metijico (Ei?

CH

3

Dissolveu—se o éster dietílico (D3) (0?2 c) em diclo-rometano (10 ml> e tratou-se· com bromotrimetilsilano (@,5 ml). A solução foi agitada à temperatura ambiente durante 4 dias^ foi adicionado metanol (2© ml) e o solvente foi evaporado in vácuo piara dar origem ao composto bruto. A cromatografia em coluna sobre sílica de fase reversa, eluindo com um gradiente de 5% a 30% de metanol em águas deu origem ao composto indicado no título ÍÔ,1 g) como uma mistura de diastereómeros.

Observado por BAR CfH-H> ‘ 511= C^H^p-N^O^P requer Μ 510.

(Ε2) 0 composto indicado no titulo (0.1 g) partir d-e D4 (0,25 g) pelo método doserito no £x S (CD-.OD 5 s 0,83 C 6H, m > , I 5 tíD“ i -5 Ò0 C RH ITi } ,l£. t£ μΓ cf μ·: 3 ;i 65--3 ,,78 (6H, m ><2H„ m>. Λ Λι~ί (IHj m>» 4?ô0 UH, m)5 6,83 (2H5 m},, /„ ia

Ob~-ervadu por BAR (M-Hi) 5Θ2« C„^H-r, Ν-,Ο-Ρ reouer M 501« .2*0 .S H * —

EXEMPLO 5—CN—-CM— < (S)--1 -FosfonopropiI )- ζR) — 1 euc 113 3- (—) —am 1 noazaciclotri--decan-2-ona e 5-"CN--lM"( (S)-i-Fosfonppropil )-(5)-1 euci11! j-ξ--)~am i·· noa.;·:acic 1 otridecs.n-2-ona (E5)

(E3)

Má tudo A 0 Éster dietilico dicloromefcano <30 ml) e foi dissolvido em b ramo t rimet i1s i1aηo í U7 A) (0 ? 7 U g ) tratado com <2,04 ml). A solução foi agitada à temperatura ambiente durante 72 h, foram adicionados metanol <20 ml) e água <10 ml) e a solução evaporada in vácuo de modo a obter—se um -sólido branco <E3A).

Observado por BAR < M+H) *** 448. C-,s H, _j\|_0._F requer M 447 = .iiX w

Similarmente, o éster dietilico ÍD7C) <0,23 g) deu origem ao composto indicado no título sob a forma de diastereó-mero individual (ESC)= tal^v ϋ •08,75° <c í% em metanol), p.f. 1 tí0— 18-5°C = t ) s 1 j - á b Λ \ JL.W1 t ? m), 2 579 4*22 (1H;, m > ? Jl. (1Η? dd)»

Método B 0 ξέ*Ή»1ΐε?Γ* dib-enzilico (Dll) í %? 519 y ) foi dissol vido em etanol (100 ml) e hidrogenado sobre ; pa 1 á.d io a 10% sobre carvão vegetal á pr '^555,0 a tmos f êr i c a durante •—S Λ U. Λ n» s-i soluç ão Tox filtra- da e o solvente evaporado in vácuo de modo a obter-se uma mistura de dois diastereómeros os quais- foram separados por HPLC [coluna Hamilton PRP-i <300 7 mm)? fase móvel, acetonitrilo/água (17 ,,5/825) + 0?i% de TF A í caudal,, 6 ml /min J de modo a obter—se um diastereómero individual (E3C) com tempo de retenção de 32 minutos» A partir dos dois métodos de preparação A e B deve parecer óbvio que α isómero E3C é 3-EN-CN-íÍS)-l-fosfonopropil)- — (S) — leuci13—(— 5—aminoazacic1otridecan—2—ona» Por conseguinte o isómero E3A deve ser 3-CN-CN-í (Sl-i-fosfonopropii )-(R)~-leuci.l j~ — (·-) -aminoazaciclotridecan—2-ona = -amxnua^auxo la t r x d e· 0 acoplamento de <D12B) com can-2-ona,, seguido por hidrogenaçSEo à pressão atmosférica com paládio a 10% sobre carvão vegetal9 fornece uma via alternativa para a 3—EN—Ehí—((5> — i — fosfonopropil) — CS> — leucil 3 — < — )—aminoasaci-c1o tridecan-2-ona í E3C)»

Observado por BAR ÍM+H) 448, O,.. H/j _N-,0_P requer M 447, 'w'' -5··-[N~[N— ((R)-l-hosfonopro decan-2-ona < E4)

EXEMPLO

.>;! I ^ \

1» i uzi. 1 J -am i n pa z ac i c I o t r i -

(E4 D éster dihenzilico foi dissolvido em a 1ΘΧ sobre carvão C D11) (0 , 19 g > etanol ClΘΦ ml) s hidrogenado sobre paládio vegetal à pressão atmosférica durante 24 h„ A solução foi filtrada e o solvente evaporado in. vácuo de modo a obter—se urna mistura

Hamilton PkP-1 .meros os quais foram separados por HPLC [coluna (3Φ0 κ 7 mm>, fase <nó ve 1, acetonitr χ 1 o/águ.a % de TFA 1 caudal, 6 ml /mm 3 de mou o a obter—se um diastereómero individual (E4) com tempo de retenção de minutos„ 6' (Cd -,Οϋ) s i 3 ΘΘ i& H, t), 1,11 C3H, t) .J ’ ' * * (2H, m) , --.,64 <ÍH, m) , 4,32 UH, m), 4,53 UH .A, Observada oor BAR ÍM+H)‘ 443= 24-2,13 (23H, mí t ) „ C01 H^._iN_rO!-P requer M 447,. 0 isómero E4 difere do isómero E3C no facto de ter uma configuração oposta no centro quiral adjacente ao fósforo» Deve por conseguinte parecer óbvio que α isómero E4 ê 3-CN-CN-C (R)-— í ·-- f os f onopr opi 1) — (S) — 1 suc i 1 J — t — 1 — aminoazac ic 1 ot r idecan—2—ona«

(HO)

Uma solução do N—CN-(R>—fosfonopropi1)—ÍS> —leucil3—0— -metil-<S>-tirosina-N-í2-hidraxietil)ara ida9 éster dibensílico (D13) (2Θ6 mg5 ®5®ΘΘ32 mole) em metanol com paládio a 1sobre carvão vegetal (5Θ mg) foi hidrogenada á pressão atmosférica» 0 catalisador foi recolhido e lavado com metanol e o filtrado foi evaporado até à secura» 0 resíduo foi dissolvido em água, filtrado e seco por congelação de modo a obter-se um sólido branco <Í2€i g >

Observado por BAR dinâmico iM+H5 M 473» O,, N-.0- y í Λ5 i requer

Pico único no tempo de retenção 18,57 min por HPLC ERP Select Bs 125 x 4 mm5 394R com fase móvel de acetonitri 1 os fosfato aquoso ®?Θ5Μ 5s95 (pH 2,5), caudal 2 ml/min3»

X V ' hX.EMh'LQ ο 5— £ j\j— r j\f-- ( ( S ) .· decan—2—ona, 1 -Fosfonopropi I )- (S) -· 1 euc1111-(-) -aminoazac sal de sódio do éster raonometí1ico <E6> iclotri-

0 éster dietílicD (D7U) g) foi dissolvido em metanol (3 ml) e tratado cosi um excesso de hidróxido de sódio em água durante 5 dias á temperatura ambiente» 0 solvente foi evaporado in_ vácuo de modo a obter—se um sólido branco que foi purificado por cromatografia de coluna utilizando sílica de fase reversa? eluindo com um gradiente de metanol de 5% a i@% em água de modo a obter-se o composto indicado no título q>* "vado por BAR <1 M 475. (M+NaT)

SH46N3U5H requer * c Di-J-UD) ® ? 88 i òH 5 tí, 03 96 (3 ÍVr ! ? m) ? 2 3 98 \ IHp m)3 3,43 (2H, EXEMPLO 7

O composto indicado no título foi preparado a partir da mistura de dois diastereómeros produzidos no Exemplo 4 <antes da com aqitac ão por HPLC)* em áqua (150 ml) t; tr=!t-=;dci com 50 equi L Vã 1 0Π Tf-') e A í mistura de isómeros (709 mq, OID iltrada e no hidróxido de

Ui secai por congelação de modo a obter-se o composto indica título sob a forma de um sólido branco (/46 mq, 96%). Λί >

EXEMPLO

f —) — δ® inoa ? se i c 1 o t r i d se an~~ 5- CN-ilN- i-Fosf onopen t i i ) - < 5) -1 sue i 12 3 -2-ona (ES)

0 {SSB-iKSf" dibensílico (Ulo) < fs ;i 4 g > foi d i ss-o1 ’ vi do em etanoi <L 00 mi) e hidrogenado sobre paládio a 10% sobra carvão vegetal pr essSo atmosfêr ic a duran t e 24 h A solução foi filtra- da e o solvente evaporada in vacuo de modo a obter—se o composto indicado no título sob a forma de uma mistura de dois diastereó-msros.

Observado por tíAH íM-H-f> 476. Ο,-,,Η, tN,Q_P requer Z:':< 4fe O ~j M 475

0 teste é realizado essencialmente como em Cawston and

Barrei Anal» Biochem«99» 34®—345 (1979)» Os compostos para os testes de ensaio foram dissolvidos em metanol e adicionados a. colagenase de osso de coelho purificada ou a colagenase humana purificada a partir de culturas sobrenadartes de linhas celulares de fibroblasto do pulmão humano, W1-38, diluídas num tampão aquoso adequado» Depois de uns 5 minutos de pré-incubação a 37*0, os tubos de ensaia foram arrefecidos até 4*0 e foi adicionada 14 calaqénio iipo I de pele de rato C-acetilado» Os tubos de ensaio foram incubados a 3/°C de um dia para o outro» 0 Ό— -colagénio forma fibrilhas insolúveis que são o substrato para a enzima»

Para terminar o ensaio, os tubos de ensaio são feitos 14 girar a 12 ®®Θ rpm durante 25 minutos» 0 C-colagénio não digerido persiste sob a forma de fibrilhas insolúveis e é peietizado, 14· — *_ enquanto o u-colagénio digenao fica na parte sobrsnadante na forma de peptíderos solúveis» Foi recolhida uma amostra do sobrenadante para contagem por cintilação líquida» A actividade dos inifaidorss de colaaena.se (01.-,¾ s 5®% de concentração inibidora) é expressa como a concentração de compostos que inibe uma concentração conhecida de enzimas (padrão) em 5©%, ou como a % de inibição da degradação de colagénio causada pela concentração conhecida (padrão) de enzima, numa concentração estabelecida do composto» a

As actividades dos compostos representativos do invento, nos procedimentos de teste, estão ilustradas nas tabelas seguir apresentadas»

txsinplo No I só/nera

Ui, í μΜ> hl

Mistura de diastereémeros .4 M i s tu ra d s d i as ts rsórns ros

INIBIÇÃO DA UOLAUENASL Dc .ASTO DO PULMÃO HUMANO )

Uxsiííj-íluí i'Hj C.3Í fc.4 5— W Π. i_í , í - > R,S.

1 A A

e 9,49

Claims (3)

1 :¾ = - Processo para a preparação de um composto de fórmula <I) ou de um seu sal, solvato ou hidrato a

N H R, I) na qual =, '1—6 tuído; .1 Cl ' Ru é hidroqénio ou alquilo C R.-, é alquilo R^. é hidrogénio, alquilo, -CH„-Z onde Z é fenilo ou heteroaríls facultativamente substituídos, ou R_ é um grupo -CH-O-R-7 Taci onde RT é hidrogénio, alquilo ou -CH.-.-Ph onde Ph é fenilo tativamente substituído e Ra é hidroqénio ou alquilo? e R.a è ~CH-~ (CH.-) _OH=r ou -l,'H^-<CH^)_uCORí· ou ·- ··_ i: . j .·· . · η α -V - Λ/”11 S-X onde n e um número in te iro de í a 6? == R, e R.~s são hidn * *_i * Ò *7 □génio ou. alq: U.Í. lo C, q e R X 10 é hidramí ou —0—alquil C„ , ou i_o -NRc-Rj- •_J O (onde i FU e podem estar 1igados de modo a formarem um anel hete rociclicd)§ ou e estão ligados, em conjunto, de modo a. formarem — ξCH.-.)m onde m é um número inteiro de 4 a 12js caractericado por compreender a conversão de um grupo ROÈ,t em hidrogénio por clivagem de um grupo de um composto de fórmula í ϊ I) s

(II) na qual Ré alquilo ou bensilo facultativamente substituído, R.-,j é hidrogénio, alquilo ou hensilo facultativamente substituí do i , e R.| , F;.-,, 1 reivindicação 1 hidrogénio» (!) na R^i Çãjzi e R„ - são como definido oara a fórmula (I) £i · e quando necessário, a conversão dc

caracter i zadt n ~but.il o.. Processo de acordo com a reivindicação i ou.

2, jopropilo du por R. ser hidrogénios metilos etilo5 42·„ — Processo de acordo com qualquer uma. ds.s reivindi— cações 1 a 3? caracterizada par R? ser n-butila» iso—butilo ou sec-butila. 5a fI *~* p* f~ Oi_ G€? acuí· do com qualquer uma das reivindi- CSÇoSS 1 â 4y c 3. r a c t© r i z ad o par se r ben z x 1 o ? 4—hidro xi ben zilo. 4-metoxibenzila ou 4-indolilmetilo e R. é — (CH,., ) OH, - (CH»-,) ,-,CO-L. ou -CH í CH--) L'0 ou R_r e são combinados de modo a farmarem — (UH„) onde ui é ifcj = £. fíí èâ— Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações i a 5 =, caracterizada por R ser hidrogénio ou etilop R1 ser metilOj etilo ou n—butilo5 R.~, ser iso—butilo; R-, ser 4—metoxiben— zilo ou 3-indolilmetilo e ser ~(CHo)^0H ou -CH(CH-j.)CO^CH^ ? au R-r e R,, em conjunta, representarem ~íCH.-,> onde m é 1Θ» o 4 · .z m /s. Processo de acordo com qualquer uma das reivindi _ „_rcac;DS CDm S quando RT é cações i a òn carsctenzariu por os centros quxra, um asterisco na fórmula (I) terem a configuração diferente de hidrogénio» 82» - Processo de acordo com a reivindicação i5 carac— terizado por se preparar? N-CN-CN-í. 1 —fosfonoetil í—leucil 3-<S>—triptof i 1 3-íB>— alanina, éster me ti1ico %

. P;-C λ... ’ Ν- L Ν- ΕΝ—ί 1—f 05 f onoe t i 1) -1 euc i 13 -O-me t i 1 - í S > -t i r as i13-< S >-a1 an i n a és te r me t i1ico 5

3-CW-CN-(£S>-1-fosfonopropi1 3 — ( R > -1suei133 — < — >-amino-azacic1otri-decan-2-onaρ 3-1 N~ t N-£ £ 3 3 ~1-f osfonoprοpiI3- £ S 3-1euc i13 3-£- 3-ami ηo-azac i c i otri- decan-2-onas

3-E N™ CN- C £ R 3 i-f osf onopropi 13— £33-1 euci I 3 3 - £ - 3 -amino-azacic I otr i-d ec an -2 -an a ρ N·-Γ.N ·- £ i — (R) — 1 -fosfonopropi 1 3-·íS> — 1 aucí13-0—metil—(S>—tirosin— £ 2— -hidroxietil3amidas 3— L W— C W—£(33-fosfonopropi13™(3>-leuciI3 3-(-3-amino-azaciclotride- can- -oni íal de sódio do éster monoetílicop

3-C N - EN-C l-íosf ono p r ο ρ i I > - £ S 3 -1 euc i 13 3 ·· £ - > -amino-azaciclotri de-can-2-Dna, sal dissódicop 3-C N” C N~ £ 1 - f osf on o pen t i 1 > — < S > — 1 euc i 13 3 - í - > -am i n o—a z ac ic 1 o t r i de— can—2—ona. Processo de acordo com qualquer uma das reivindi cações 1 a 8. um sal3 solvato ou composto de fórmula caractenzado por se preparar hidrata farmaceuticamente aceitávels de um £13» 10S» - Processo para a preparação de uma composição ?armac'§u.ticã» caracíerizado por se incluir na referida composição n\ um composto de fórmula um seu sal5 soivato CI) 3 de acordo com a reivindicação 1,, ou ou hidrato f armaceuticamente aceitável,; juntamente com um veiculo farmaceuticamente aceitável» Lisboa.,

i. PEREIRA DA CRUZ Agente Oficiei da Propriedade industrial «ÍUA VICTOR CORB©N, 10-A, 1.· 1200 LieSQA