PT97276A - Processo para a preparacao de novos derivados contendo fosforo - Google Patents

Description

Fh representam, por exemplo, hidrogénio ou aiquilo; e K„ repre-senta, por exemplo, nidroqên10 ou aIguilo. D referido processo consiste na conversão de um grupo em hidrogénio por meio de clivagem de um grupo R„ de um composta de fórmula <II)s

(II) em que R.-^ representa alquilo ou benzi 1 o facultativamente substituído e R.-,^ representa hidrogénio ou alquilo ou bensilo faculta-tivamente substituído e, quando necessário, a conversão de R_^ em hidrogénio, e, facultativamente, em seguida, a conversão do composto de fórmula (I) num outro composto de fórmula íI)„

0 presente invento diz respeita a a novos derivados da fósforo, aos processos para a sua preparação e à sua utilização em medicina. Em particular, o presente invento diz respeito à nua utilização como inibidores de enzimas da família ::olagena.se de metaloproteases neutras, para o tratamento de doenças artríticas e outras. A família de enzimas colaqenase dos mamíferos compreende numerosas proteases, exemplificada pela própria, colagena.se intersticial (tipo I), as estromelisinas (também conhecidas por proteog1icanases ou transinas), fibroblasto e gelatinases leucó-citas polimorfonuc1eares (PMNL) (também conhecidas por colagen--IV-ases) e "pump-1" (meta 1 oprotease putativa. 1, metòioprotease uterina)., 0 facto da ser membro da família colaqenase de pra-teases de ntamíferos é evidente devido à posse de numerosas propriedades altamente caracteristicas e experimentalmente verificáveis. CGaldberg et a 1 . , Biochem. J., 240. 913, 1986; Breathnach et a 1., Nucleic Acids Res., 15, 1139, 1987? Mui ler et a1., Biochem. J., 253. 187, 193S; Collier et a1„, J. Biol. Chem., 263. 6579, 1988; Murphy et ah., Biochem. J., 258, 463, 1989; Quantin et al., Biochem. (N.Y.), 23, 5327, 1989; Birkedal-Hansen, J. Oral Pathol., 17, 445, 19883. A gama de aplicações terapêuticas do invento descrita anteriormente reflecte o papel fundamental do colaqénio e de outros substratos proteínicos da família colaqenase de enzimas na matriz do tecido conjuntivo por todo o corpo. As aplicações estendem-se às intervenções clínicas em muitas doenças e fenómenos que envolvem a destruição do colagénio e de outros componentes do tecida conjuntivo e também à remodelação de tecido desordenado ou normal.

Considera-se que as inibidores da família colagenase de enzimas proporcionam tratamentos úteis para: doenças artríticas, oais como artrite reumatóide e osteoartrite, reumatismo do tecido mole, policondrite e tendinite; doenças de reabsorção óssea, tais como osteoporose, doença de Paget, hiperparatiroidismo e colesteatoma; a destruição aumentada do colaqénio que ocorre em associação com a diabetes; as classes recessivas da epidermose distrófica bulhosa; doença peridenta.l e consequências relacionadas com a produção gengival de colagenase, ou ue libertação da colagenase PHNL a que se segue a infiltração celular para a gengiva inflamada, incluindo o combate á maior susceptibi1 idade dos Pacientes diabéticos à doença. peridenta.l ; ulceração da còrnea, e.q. induzida por álcalis ou outras queimaduras, por radiação, por deficiência de vitamina E ou retinóide; ulceração da pele e do tracto gastro-intestina1 e cura de ferimentos anormais; condições pós-operatórias, que incluem a anastomose do cólon, em que os níveis de colagenase são aumentados; cancro, onde os membros da família colagenase de enzimas têm sido implicados na neovascularização necessária para suportar o crescimento e sobrevivência· do tumor tP. Basset et al. . Nature, 346, 699, 199Θ1 na remodelação de tecido necessária para acomodar o crescimento de tumores primários e secundários e na penetração das células de tumor através da membrana de base das paredes vasculares durante a metástase; e as doenças da desmie1inização dos sistemas nervosos central e periférica, incluindo síndromas em que a perda de mielina é o evento patológico principal e aqueles em que a desmiel inização resulta na atrofia do a>;ónio. A degradação da mielina nestas doenças, exemplifiçada pela esclerose múltipla, é mediada por membros da família colagenase de enzimas.

Como um exemplo particular do valor terapêutico dos inibidores da família colagenase de enzimas, tais como são revelados no presente invento, as doenças artríticas crónicas que

levam à perda proteoq 1 i cari o articu 1 ações, cio 1 agenases , extensa de colagénio, componentes de elastina e da cartilagem,, osso e tendões no interior das submeter—se-iam ao tratamento com inibidores das proteog 1 ícanasss ( estrome 1 isinas) s gelatinases. tidas uorrentemente como sendo as principais encimas envolvidas.

Estas encimas têm sido detectadas em extractos do tecido sinovial e cart.ilaqíneo e têm sido também e>:tensamente estudadas em culturas de tecidos de uma larga gama de tecidos conjuntivos. À parte o controlo da biossintese, secreção e activação das encimas, a regulação natural mais importante destas enzimas nos estados normal e de doença, é considerada ser a produção endógena de inibidores tais como a família de Inibidor de Tecido de Meta 1 oprotea.ses ( TIMPS) e α-2-macroglabulina. Um desequilíbrio entre os níveis locais das encimas proteolÁticas e inibidores naturais permitirá que ocorra, a destruição de componentes do tecido conjuntivo.

Os compostos descritos no presente invento, sendo inibidores sintéticos e de baixo peso molecular desta família de encimas, oferecem um caminho terapeuticamente útil em que um mais normal ou não patológico equilíbrio entre a inibição e a activi-dade encimátíca pode ser restaurada: por conseguinte, eles actuam no sentido de complementar e suplementar os inibidores de encima endógenos. Na verdade, devido a estas encimas actuarem normalmente apenas dentrD de ambientes pericelulares restritos, antes de serem inactivadas por inibidores que circulam no sangue e se apresentarem na maioria das exsudatos inflamatórios, os inibidores de baixo peso molecular aqui reveladas podem ser mais eficazes do que os inibidores proteinicos endógenos que são excluídos pelo seu tamanho das regiões localizadas de destruição do tecido conjuntivo.

U Kt-uiuu de Patent e L _i rape i a 'jo qq 31 Ô 492.9 . te·-'. haiTi Γ Q U n ) reve 1 a um*?. c 1 3.330 C' 0 d e r i vados de fósforo q u. s· tãm ac tivi- dade como inibidores de colagenase e uti. 1 idade no tratamento da artrite r eu ma tó ide e doenças relacionadas nas quais a. ac ti vidade colagenolitica d um factar de contrijuição.

Novos compostos estruturalmente relacionados foram agora descobertos, os quais são inibidores de colagenase e, par conseguinte, de utilidade potencial no tratamento de doenças em que a actividade colagenolítica e a remodelação de tecido estão i m pl ic a d a s .

na qual R representa hidrogénio, alquilo C, , ou benzi lo facultativa- 1 o mente substitu.ido;

Rj representa hidrogénio ou alquila Cj_6; R-2 representa alquilo C~_£;

(CH.~, 5 CONH ( CH^ ) -é n q representa NR,_R , , -(LH._,) NHUQR-,, Π O ò ' η um NR_K, , - (L'H^) NRqC ( =NRq > NRc-R , ou -(Ul·!^) -RH ... onde n o & · 2 n 3 9 5 o 2 n i é inteiro desde i até 6 e cada um de e Rt representa ·-/ to independentemente hidroqénio ou alquilo, ou R,_ e R, , em - ._j o conjunto com o átomo de azoto ao qual estão ligados, formam um anel de ò ou 7 membros com um átomo facultativo de oxigénio ou de enxofre ou com um segundo azoto no anel facultativamente substituído, R7 representa alquilo ou NRc-R,, R _ representa hidroqénio ou alquilo, R0 representa hidroqénio ou alquilo ou RQ e R^, em conjunto com os átomos de azoto aos quais estão ligados, formam um anel de 5, 6 ou 7 membros facultativamente substituído, e R^ representa um anel piperidilo facultativamente substituído, m e 1 ou 2, e q é c ate 4 “f e •epresenta hidrogénio, alquilo, e -CtU - ( CH.-v) OCQR,^ ou -CH2-<cH2)n0R11 ou ‘12 l13

l14 onde n é um inteiro desde 1 até 6, R^, Rp e R^ representam hidrogénio ou alquilo C^_6, e R^ representa hidroxi ou -O-alquil Cj_^ ou -NR^R^ <onde Rg e R^ podem ser ligados para formarem um anel heterocíc1ico). A menos que especificado de outra maneira, cada grupo alquilo é, preferivelmente, um grupo C^g, mais preferivelmente, um grupo e pode ser de cadeia linear ou ramificada. 8 r e prtísen ta, pret er ive 1 men te iidrogênia, me' j. a au etilo, especialmente hidrogénio. n.- vaioreb para R incluem hidrogénio, metila. :i la, isupropilo e n—butiio. Na forma de grupo alquilo, represent preferivelmente, meti lo ou etilo. a. representa, preferivelmente, n—butilo, ou set-butiio. especialmente iso-butiio. .so-butiio

Valores para K, incluem - < CH^) NR,_R, em que Rr e R, 2 n 5 in 5 o representam hidrogénio ou metilo, - (CH? > NHCOR^, onde epre sen ta i"i i o , CH.-J NRvR, , na qual um 5 6· H,_ s Rt representam membros hidrogé- tf R, 6 em cc injuntD com T w rmam um anel de 5, ò du cr « O RÓ * Ro ·_/ e R9 represen- B 9' tam todos hidrogénio. ~(CH^) NR' C(=NR„/NR^-R, onde R,- e R_ em -i n b TOO O T conjunto com os átomos de azotci aos quais estão ligados formam um grupo 2-imidazolinilo facultativamente substituído, -<CH„) -R, .. 2 η 11> onde R1ft representa um piperidilo facultativamente substituído e n é um inteiro desde 1 até 4. n 5 6

Ma. is preferivelmente, representa - (Ct-U i NR^R^ onde n é 3 ou 4 e Rg e R^ representam ambos hidrogénio ou metilo, -(CHo).NHC0R7 onde R-, representa -CH^NH^, -CH^CDNHÍ CHn) ^NR^R, onde R,_ e R, s3o tomados coniuntamente para formar um anel

vJ O pirrolidina, -(CH-7>r)NRgC(=NRç )NRgR^ onde n é 3 ou 4 e R^j R^, Rg e representam todos hidrogénio, -ÍCHO^NRgCt^RçlNRcrR^ onde Rg e em conjunto com os átomos de azoto aos quais estão ligados formamm um grupo 2~imidazalinilo facultativamente substituído, e R6 e Rg representam ambos hidrogénio, -<CH-->)nNHC( =NH)NH.-, onde n é 3 ou 4 e -CH^-Rja onde R1Ç( representa 4-piperidi 1 o.

valores preferidos - < CH-, > -,OCH-», -CH < CH-,. > CO,CH.T e - ( CH-,) o0H. para R, incluem meti lo. etilo,

H -(CH-,)_0Η, especialmente metilo e

Os compostos de fórmula de (I) podem formar sais com bases, e.g. hidróxido de sódio. Os compostos de fórmula (I) têm um átomo de azoto básico e podem formar sais de adição de ácidos, e.g. com ácido clorídrica. Estes compostos fazem parte do presente invento»

Quando os compostos de fórmula (I), ou os seus sais, formam solvatos ou hidra.tos, estes também constituem um aspecto d o presen t e .invento»

Os compostos de fórmula (I) têm pelo menos dois, e podem ter três ou raais centras assimétricos e, por conseguinte, existem em mais do que uma forma estereisomérica. 0 invento estende-se a todos estas formas e ás suas misturas, que incluem racematos e misturas diastereoméricas.

Os isómeros preferidos são as que têm a configuração S no centro quiral que suporta R,, e a configuração S no centro quiral que suporta R-», marcados com um asterisco na fórmula (I).

Os compostos de fórmula (I), ou os seus sais, solvatos ou hidratos, estão preferivelmente numa forma farmaceuticamente aceitável. Por forma farmaceuticamente aceitável, quer dizer, inter alia, de um nível de pureza farmaceuticamente aceitável, excluindo os aditivos farmacêuticos normais, tais como diluentes e agentes de suporte, e que não incluem nenhum material considerado tóxico nos níveis normais de dosagem. 0

Os compostos de fórmula ratos, estão preferivelmente Uma forma. substancialmente 5ô %, numa base ponderai ( I ) 501.15 1, ou os numa forma ρ u r a o o n t e r á. s a. is, s o 1 v a t o s su bs t an ciaimen te yera1men te pelo preferivelmente 75 7.» ma is preferivelmen te v€» 7. e ainda ma is composto de fórmula da estrutura preferivelmente v5 % ou. v? 7. do I), ou o seu sal ou solvato.

Os compostos de fórmula de estrutura (I>, ou os seus sais, so 1 vates ou hidratas., podem ser isolados na forma de sólidos cristalinos ou na forma de espumas ou. gomas.

Uma forma. íarmaceuticamente aceitável preferida é a forma cristalina. 0 presente invento proporciona os compostos de fórmula de estrutura (I), ou os seus sais, solvatos ou hidratos farroaceu-ticamente aceitáveis, para utilização como agentes terapêuticos activos, particu1armente como agentes para o tratamento de condições sm que ocorre a degradação do tecido conjuntivo e de outros componentes proteínicos do corpo., tais como desordens do músculo do esqueleto que resultam da actividade colaqenolítica, par ticu. 1 armen te reumatismo e/ou condições artríticas e remodelação do tecido. I) têm também a prevenção da periférico; e colagenase de outros.

Os compostos de fórmula de estrutura utilidade potencial no tratamento da cancro; para degradação da mielina no sistema nervoso central e em outras condições em que os membros da família metaloproteases neutras têm um papel patológico ou □ presente invento também proporciona um processo para a preparação de um composto de fórmula de estrutura (I), processo

jaejse que compreende a conversão de um grupo R,,^ em hidrogénio por meio de clivagem de um grupo R.-^- de um composto de fórmula (II):

em que representa alquilo, fenilo facu 1 tativamente substituído ou benzi lo f acul tativamente substituído e R.~,i representa hidrogénio, alquilo, fenilo facu 1tativamente substituído ou benzi lo f acu 1 tativamente substituído e R^, R?, R-, e são definidos da mesma maneira que para a fórmula (I), &, quando necessário, a conversão de em hidrogénio, e, facultativamente, em seguida, a conversão do composto de fórmula (I) num outro composto de fórmula (I). A clivagem de R?ft e, quando necessário, a de R^, pode ser levada a cabo em ácido ou álcali aquoso ou utilizando um haleto de trimeti 1 si 1 i lo, pref er.i.velmen te hromotrimeti Isi lano, num solvente inerte, por exemplo diclorometano ou acetonitrilo. Os ésteres de benzi, lo podem alternativamente ser removidos por hidrogenól ise ou. outros processos de desbenzi laçâo padrão. Os resíduos de fenilo podem ser removidos por hidrogenação sobre ó:<ido de platina.

Quando ambos os R20 e são alquilo, a clivagem apenas de R-?^, para dar um composto de fórmula de (II) em que R0^ representa hidrogénio e alquilo, que é um composto de fórmula (I) em que R representa alquilD, pode ser levada a cabo por

tratamento com álcali em excesso exemplo com hidróxido de sódio aqu t e m ρ e r a t u r a a m b i e n t e «

De modo semelhante, quando é benzi lo mente substituído e R,-,^ é alquilo, o grupo benzilo ser clivado por hidrogenação para dar um composto de em que representa hidrogénio e alquila. A clivagem de um grupo alquila pode, em seguida, ser levada a cabo· como se descreveu anteriormente para dar um composto de fórmula (I) em que R representa, hidrogénio.

Quando R num composto de fórmula (I) representa hidrogénio e R._,^ num composto de fórmula (II) não representa hidrogénio, então a clivagem quer quer Rç>f} - convenientemente efectuada numa única reacção. Preferivelmente, e são ambos alquilo, tal como metilo, etila ou benzilo.

Será constatado que os compostos de fórmula (II), em que representa hidrogénio, são eles próprios compostos do invento de fórmula (I).

sob condiçoes o n u m so 1 ven te suaves, por alcoólico· à facultativa-apenas pode fórmula (II)

Um composto de fórmula (I), na qual R_, representa - (CH,-,) nNRRC( =NR^) NRe-R^ em que R^, R^, Rr e Rr são como definido ant.eriormente para a fórmula (I) pode ser preparado por meio de reacção de um composto de fórmula (I), na qual R-,. representa - (CH^,) nNRgR^ em que e R^ representam ambos hidrogénio ou um representa hidrogénio e o outro representa alquila com um composto de fórmula (IIa>: 1

(I ΙΑ) ου. um seu sal na qual R,_ , R, e R„ são coma definida anteriormente para a fórmula <I) e R'1C. representa alquila A reacçãa pode ser levada a cabo na presença de uma base tal como bicarbonato de sódio num solvente adequado tal como água.

Os compostos de fórmula (II) podem ser preparados por tratamento de um composto de fórmula (III):

21 (III) em que R^„ R^, R,-,^ e R,-,^ são definidos da mesma maneira que para a fórmula (II) (com a excepção de que R,-,^ não representa hidrogénio), com um composto de fórmula (IV): o

NHR R (IV) 3 4

sti qu.e R., e R^, conjuntâmente, são definidos da mesma maneira que para a fórmula ( X ) , a qualquer grupo a mi na reactivo em R-, está na forma protegida. A reacção é preferivelmente levada a cabo na presença de um agente de acoplamento, tal como d icic 1 o-he>; i icarfaod i-imida ou hid roc 1 ore to de 1 -et i 1 - 3-C 3- ( d i me ti 1 amino) propi 1 '1 car bod i-imi-da, na presença de 1-hidrosiibenzotriazale, ou utilizando 1,1'-~carbon11 di —imidazo1e, num solvente inerte, tal como diclorome— t a π α o u a c © t. oni trilo.

Os compostos da fórmu.la (II), na qual Fu representa ~ÍCH.-, onde n e são definidos da mesma maneira que para u fórmu.la. (I), podem ser preparados a partir de compostos de fórmula (II), na qual R_. representa ~(CH„) -Z onde n é definido da mesma maneira que para a fórmula (I) e Zrepresenta um anel piridilo facultativamente substituído, por meio de hidrogenação na presença de um catalisador de metal nobre.

Dever-se-á ter em conta que, quando R-, está na forma protegida, o grupo de protecção pode ser escolhido de modo a possibilitar a concomitante clivagem com R.-,^ e/ou R^. A clivagem selectiva do grupo pode, em seguida, ser levada a cabo utilizando os processos descritos anteriormente para. a preparação de compostos de fórmula (I> para dar compostos de fórmula (II) em que R^^ representa hidrogénio.

Os compostos intermediérios de fórmula (III) podem ser preparados pelo tratamento de um composto de fórmula (V), ou um seu sal: 15

(V) em que R,, R_,_ e R' são definidos da mesma maneira que para a 1 ai. 1 fórmula (III), com um composto de fórmula (VIA) ou (VIB), ou um seu. sal:

(VIB) (VIA) em que R0 é definido da mesma maneira que para a fórmula (I), representa um grupo separável, tal como halogéneo, metanossulfo-niloxi ou trifluorometanossulfoniloxi, e R,_ representa hidrogé-nio ou um grupo de protecçSo de carboxilo e, a seguir, a remoção de um grupo de protecçSo de carboxilo R^. 0 método preferida é a reacção de (V) com (VIA).

Quando é utilizado um composto de fórmula (VIB), a aminação redutora pode ser levada a cabo por hidrogenação sobre um catalisador de metal nobre, tal como paládio sobre carbono, ou por reacção com cianoboro-hidreto de sódio a pH entre 6 e 7. Qs solventes de álcool alquílicc· inferior, tal como metanol e etanol, são adequados para ambas as reacçSes. Estas reacçSes podem ser levadas a cabo na presença de crivos moleculares. 16 A reacção de hidrogenação é preferida, mas este processo impede a utilização de compostos de fórmulas (V) e (VIB> em que qualquer dos grupos R0.^, Fu., ou R,_, representa benzilo. Preferivelmente, um grupo de protecção de cartaoxilo é um éster de met i lo ou de etilo. Os grupos de protecção éster podem ser removidos sob condições padrão de hidrólise básica utilizando base diluída tal como hidróxido de sódio aquosa 1 N em metanol ou hidróxido de potássio aquoso em 1,4-dioxano.

Quando o composto de fórmula (V) está na forma da base livre, o composto de fórmula (VI.B) é adequadamente um a-cetoéster íR17 = alquilo):

Quando o composto de fórmula de estrutura (V) é um sal, tal como o sal hidrocloreto, o composto de fórmula (VIEO é adequadamente um sal de um α-cetoácido (R^ - H), por exemplo, o sal de sódio. A preparação de compostos de fórmula (III), utilizando um composta de fórmula (VIA), pode ser levada a cabo sob condições de alquilação padrão. Um grupo separável de halogénio é, preferivelmente, bromo e um grupa separável com base em oxigénio è, preferivelmente, trifluorometanossu1foniloxi.

Qs compostos de fórmula < 111 > podem, a 1ternativamente, ser preparados pela condensação de um composto de fórmula (VII), ou um seu sal :

C02^1V (VII) em que R,-, é definida da mesma maneira que para a fórmula (I) e é um grupo de protecção de carboxilo, com um aldeído R^-CHO, em que R^ é definido da mesma maneira que para a fórmula (I) e tratamento do produto de condensação com um dialqui1 ou trial-quilfosfito apropriado, por exemplo dimet.i 1 fosfito, e remoção, depois disso, do grupo de protecção de carboxilo. 0 grupo carbo.Kilo é convenientemente protegida na forma de um éster de alquilo ou de benzilo, o qual pode ser removido utilizando condições de hidrólise ou de hidrogenação padrão.

Como se descreveu anteriormente em conexão com a aminação redutora dos compostos de fórmula (VIB), onde um grupo de protecção benzilo R^ é removido por hidrogenação, então e estão restringidos a alquilo. AIternativamente, os compostos de fórmula (II), em que R0i-j e representam alquilo ou benzilo facultativamente subs tituído, podem ser preparados pela reacção de um composto de fórmula (VIII);

(VIII)

representa hidrogénio e em que o grupo amino é facultativamente protegido, com um composto de fórmula (IV) conforme foi ante-riormente definido, na presença de um agente de acoplamento conforme foi anf.eriormente descrito para a preparação de compostos de fórmula (II) a partir de compostos de fórmulas (III) e ( IV) .

Os compostos de fórmula (IX) podem ser preparados a partir de derivados de hidroxialquilfosfonato por conversão do grupo hidroxilo no grupo separável por métodos convencionais.

Ror exemplo, quando R16 representa trifluorometanossu1foniloxi, pode ser adicionado anidrido trifluorometanossu1fónico a uma solução do hidroxialquilfosfonato num solvente inerte tal como diclorometano, sendo a reacção levada a cabo a temperatura reduzida sob uma atmosfera inerte, de acordo com o método geral de E. Vedeis efc a1., Journal of Organic Chemistry 50, 2165, < 1985 ) .

Qs compostos de h.idroxialquilofosfonato podem por sua vez ser preparados pela reacção do fosfito correspondente, por exemplo dibenz.il fosfito, com um aldeído Rj—CHO no qual Rj é definido do mesmo modo que para a fórmula (I) de acordo com o método geral de F. Texier-Boullet e A. Faucaud, Synthesis, 916 (1982). Os fosfitos de benzilo e de alquilo ou estão comercialmente disponíveis ou podem ser preparatdos a partir de materiais de partida comercialmente disponíveis por métodos padrão. 21

Os compostos intermediárias de fórmula (V> ou são compostos conhecidos ou podem ser preparados a partir de derivados de ácido aminoalquilfosfónico utilizando processos padrão para introduzir e R._,^ conforme for requerido. A protecção da função am.ina durante estas reacçSes pode ser necessária. A introdução de um grupo meti lo R,,^ e R^^ pode ser realizada pela reacção com diazometano num solvente inerte adequado. □s compostos de fórmula (V) de configuração fixa podem ser preparados pelo método geral de R. Jacquier et a 1 , Phospho- rus and Sulfur 36, 73 (1988).

Os compostos de fórmula (IV) podem ser preparados a partir de um composto de fórmula (X):

na qual Q representa -(CH^)-Z, - (CRU) ...NtU, - (Ct-U,) _NRaC (=NH )NHU, xí Π ' xi Π xL xi Π Cf xL* -(CH2)nNRgC(=MH)N0?, -(CH?)nCO^H, n, R^ e Rg são definidos da mesma maneira que para a fórmula (I), Z representa piridilo facultativamente substituído e Y representa um grupo de protecção de azoto, por meio de conversão de Q em R·^ e remoção do grupo de protecção de azoto, Y. Deve ser tomado em consideração que a conversão de Q em R^ pode ser mais facilmente efectuada numa etapa porteriar, par exemplo a conversão de -<CH^) NHC<=NH)NCU em CH^,) NHC( =NH)NH0 por meio de hidrogenação pode ser comcomitante com a hidrogenólise dos grupos benzi lo R,-,^ e R,-, ^ .

Um composto de fórmula (IV) na qual RT representa -<CH^,) NRe-R^ pode ser preparado por meio de alquilação de um composto de fórmula (X) na qual Q representa -(CH?) NH^ utili zando procedimentos padrão de alquilação.

Um composto de fórmula (IV) na qual R-, representa - (CH-, > NHCQR-, pode ser preparado por meio de reaccão de um composto de fórmula (X) na qual Q representa -ÍCH,,) NK, com um ácido carboxílicD R-ΧΟ,,Η, na presença de um agente de acoplamen- to.

Um composto de fórmula (IV) na qual R-, representa -(CH^) C0NH<CHo) pode ser preparado por meio de reacção de um composto de fórmula (X) na qual Q representa -(CH,,) C0oH com um derivado amina, NHr,(ChL,) NR^R,, na presença de um agente de

jú q O acoplamento, e em seguida, se R^· ou R^ for hidrogénio, de pro-tecção facultativa do átomo de azoto básico. qual R,. representa partir de um composta (CH^NRgCteNHÍNK, ou seguida, de protecção

Um composto de fórmula (IV) na -(CH„> NRQC (=NRQ) NRc-R, pode ser preparado a ,ώ η ο τ %j o de fórmula (X) na qual Q representa - < CH^,) Γ)ΝΗ-,, por meio de N-alquilação, e em facultativa dos átomos de azoto básicos.

Um composta de fórmula (IV) na qual R^. representa -<CH7)n-Rj0j onde Rj^ representa um grupo piperidilo pode ser preparado por meio de hidrogenação de um composto de fórmula (X) na qual R·^ representa Z, e em seguida, de protecção facultativa do átomo de azoto do piperidilo.

Os qru.Dos de protecçoQ de azoto àdsçuãcicts par»?. f e para qualquer função amina primário em incluem grupos t-butaxicar— bonilo < BOC) e benzilcxicarbonilo. Quando RT representa -(CH^ ) -R 1 onde R , r. representa 4-piperidilo, um grupo de pro-fcecção de azoto adequado inclui o grupo benziloxicarboni1c.

Qs grupo1 s de protecção de azoto podem ser removidos por métodos padrão. Um grupo t-fautoxicarbonilo (BOC) pode ser removido por meio de tratamento com ácido trifluoroacético a temperatura reduzida. Grupos benzi 1 ovíicarbonilo podem ser removidos por meio de hidrogenação catalítica.

Os compostos de fórmula (X) podem ser preparados a partir de um com pios to de fórmula (XI):

em que Q representa Q em forma protegida ou Q' representa um precursor de Q e Y e Q são definidos do mesmo modo que para a fórmula <X>. A reacção pode ser levada a cabo por meio de reacção com uma amina, IMH^R^, utilizando procedimen tos padrão para a formação de uma amida a partir de um ácido carboxílico e uma amina, por exemplo utilizando um agente de acoplamento tal como 1,1'-carboni1di-imidazole, 1,3-diciclo-hexiIcarbodi-imida ou 1-eti1-3-£3-(dimetilamino)propi1Dcarbodi-imida, ou na presença de cloraformato de· etilo. o u ο d em

Us compostos de fórmula < XI) são compostos conhecidas er preparados a partir de materiais de partida conhe cidos por meio de métodos padrão.

Por exemplo, o composto de fórmula. (XI), na qual 0' representa (CH^) ,NHC < 0)OCH^Ph e Y representa t-butoxicarbonilo é derivado de lisina e encontra-se comercialraente disponível. 0 composto de fórmula (XI), na qual Q' representa CH^C0oCH^Ph e Y representa t-butoxicarbonilo é derivada de ácido aspártico e encontra-se comercialmente disponível.

Os compostos de fórmula. (IIA) e (IIB) encontram—se comercialmente disponíveis ou podem ser preparados a partir de materiais de partida conhecidos utilizando procedimentos padrão. 0 composto de fórmula (XI) na qual Q' representa um gru.po -(CH„,> ~Z onde Z representa 4-piridilo e Y representa t-butoxicarbonilo é preparado de acordo com o método de R. L. Bixler e C. Niemann, J. Org. Chem», 23, 575 (195B).

Os compostos de fórmula (VII) são ou derivados de aminoâcidos conhecidos ou podem ser preparados a partir destes derivados por meio de métodos conhecidos. Os compostos de fórmula (VIA) e (VIB) são ou compostos conhecidos ou podem ser preparados a partir de compostos conhecidos por meio de métodos conhecidos.

Os intermediários de fórmula (II) aqui revelados são compostos novos e constituem um aspecto do presente inventa assim como o são os processos descritos para a sua preparação. por sol a

Quando obteníveis, cDmpostos de fórmula (I) reacção com o ácido ou b atos por cristalização a

os sais farmaceuticamente aceitáveis podem ser formados convencional mente ase apropriados. Podem ser formados partir do solvente apropriado. *'v.

Conforme foi anterionnerite mencionado, os compostos de rormula (I) existam em mais do qua uma forma diastereomérica. Quando os processos do invento produzem misturas deles, os isómeros individuais podem ser separadas um do outro por croma-tog rafia, e,g. HPLC. AI ternativuinente, os compostos diastereoméricos separados podem ser obtidos utilizando-se materiais de partida estereo— isomerícamente puros ou separando—se os isómeros desejados dos intermediários em qualquer passo do processo sintética global e convertendo os intermediários em compostos de fórmula de (I).

Será apreciado que quando um diastereómero isolado de um composto de fórmula de <I) é preparado por mais do que uma variante do processo conforme anteriormente descrita, cada. um dos quais permite definir um centro quiral diferente, pode ser possível deduzir a configuração num centro quiral que não á pré-determinada utilizando uma variante particular do processo.

Além disso, apreciai·—se—á que não obstante a configuração absoluta num centro quiral particular poder não ser conhecida, é possível caracterizar um dado diastereómero relativamente ao seu epímero por meio da referencia à direcção em que o plano de luz polarizada é rodado. 0 presente invento proporciona ainda uma composição farmacêutica que compreende um composta de fórmula (I), ou um seu

sal ou solvatci farmaceuticamente aceitável, e um agente de suporte farmaceuticaments aceitável.

Uma composição deste invento é útil no tratamento de desordens músculo-esqueléticas, particuiarmente doenças artríticas, e para a modulação do remodelação de tecido.

Uma composição do invento também tem utilidade potencial no tratamento do cancro; para a prevenção da degradação da mielina no sistema nervoso central e periférico; e noutras condições em que os membros da família colagenase de metalopro-teases neutras têm papéis patológicos ou outras.

Uma composição tío invento, que pode ser preparada por meio de mistura, pode conter um diluente, agente liqante, agente de enchimento, agente de desintegração, agente de aromatização, agente corante, lubrificante ou conservante de um modo convencional. Estes excipientes convencionais podem ser empregues de uma maneira convencional, por exemplo como na preparação de composições de inibidores de enzimas relacionados com peptídeos, tais como d inibidor de ACE enalapril.

Uma composição do invento pode ser adaptada para administração oral, tópica, rectal ou parentérica, mas é preferida a administração oral. As composições parentéricas podem ser administradas intravenosamente, intramuscularmente, intra—articu— larmente, intrader/nicamente, subcutaneamente ou no fluido cere-bro-espinal.

Preferivelmente, uma composição farmacêutica do invento está em forma de dosagem unitária e numa forma adaptada para utilização em campos médicos ou veterinários. Por exemplo, tais preparações podem estar numa embalagem acompanhadas por

instruções escritas ou impressas· para utilização ldido agentes no tratamento ou. profilaxia de qualquer das desordens anteriormente miencionadas . A gama de dosagem adequada para os compostos do invento pode variar de composto para composto e pode depender da condição a ser tratada. Dependerá também, inter alia., da relação da potência para a absorbabi1 idade e do modo de administração escolhido. 0 composto ou composição do invento pode ser formulado para administração por qualquer via, dependendo a via preferida da desordem para a qual se requer o tratamento e está preferivelmente em forma de dosagem unitária ou numa forma, que u.m paciente humano pode administrar a ele próprio numa única dosagem.

As composições podem, por exemplo, estar na forma de comprimidos, cápsulas, saquetas, frascos, pós, grânulos, pastilhas, pós reconstituíveis, ou preparações líquidas, por exempla soluções ou suspensões ou supositórios.

As composições, por exemplo as adequadas para adminis-t:ração oral, podem conter excipientes convencionais tais como agentes ligantes, por exemplo xarope, acácia, gelatina, sorbitol, tragacanto, ou polivinilpirrolidona; agentes de enchimento, por exemplo lactose, açúcar, amido de milho, fosfato de cálcio, sorbitol ou glicina; lubrificantes para comprimidos, por exempla sstearata de magnésio; desintegrantes, por exemplo amido, polivi-ni1pirrolidona, glicolata de amido sódico ou celulose microcris-talina; ou agentes molhantes farmaceu.ticamente aceitáveis tais como lauril-sulfato de sódio. 28 - \

As composições sólidas podem ser obtidas por métodos convencionais de mistura, de enchimento, de fazer comprimidos ou semelhantes. Podem ser utilzadas operaçSes repetidas de mistura para distribuir comp 1 etament.e o agente activo nas composiçSes que empregam grandes quantidades de agentes de enchimento. Quando a composição se encontra na forma de u.m comprimido, pó ou pastilha, pode ser utilizada qualquer agente de suporte adequado para formulação de composiçSes farmacêuticas sólidas, sendo exemplos o estearato de magnésio, amido, glicose, lactose, sacarose, farinha de arroz e giz. Os comprimidos podem ser revestidos de acordo com métodos bem conhecidos na prática farmacêutica normal, em particular com um revestimento entérico. A composição pode também estar na forma de uma cápsula ingerível, por exemplo de gelatina contendo o composto, se desejado com um agente de suporte ou outros excipientes. Por exemplo, numa cápsula de gelatina dura que contém a quantidade requerida de um composta do invento na forma de um pó ou granulado em intima mistura com um lubrificante, tal como estearato de magnésio, um agente de enchimento, tal como celulose microcristalina e um desintegrante, tal como glicolato de amido sódico.

As composiçSes para administração oral na forma de líquidos podem estar na forma de, por exemplo, emulsões, xaropes ou elixires, ou podem ser apresentadas como um produto seco para reconstituição com água ou outro veículo adequado antes da utilização. Estas composiçSes líquidas podem conter aditivos convencionais tais como agentes de suspensão, por exemplo sorbi-tol, xarope, metilcelulose, gelatina, hidroxietiIcelulose, carboximetilcelulose, gel de estearato de alumínio, gorduras comestíveis hidrogenadas; agentes de emulsificação, por exemplo lecitina, mono—oleato de sorbitano, ou acácia; veículos aquosos ou não aquosas, as quais incluem óleos comestíveis, por exemplo óleo de amêndoa, óleo de coco fraccionado, ésteres oleosos, por 29 exemplo ésteres de glicerina ou prop.i1eno-g1icol ou álcool etílico, glicerina, água ou solução salina normal? conservantes, por exemplo p-h.idroxiben2oato de metila ou de propila ou ácido sórbico? e, se desejada, agentes aromaticantes ou corantes convencionais, □s compostos deste invento podem também ser administrados por uma via não oral. De acordo com o processa farmacêutico de rotina, as composiçSss podem ser formuladas, por exemplo para administração rectal, na forma de um supositório, ou. para administração parentérica numa forma injectável. Para injecção, por exemplo por injecção intra—articular ou por injecç:3o no fluido •cérebro-espinal ou por outras vias que darão acesso aos locais de desmielinização, tais como por injecção intramuscular, intradér-iriica ou subcutânea, na forma de soluçSes livremente solúveis ou na forma de armazenamento de depósitos pobremente dispersos, os compostos do invento podem ser apresentados numa solução aquosa ou não aquosa, suspensão ou emulsão num líquido farmaceuticamente aceitável, e.g. água estéril livre de piroqénios ou um óleo parentericamente aceitável ou uma mistura de líquidos, que podem conter agentes bacteriostáticDS, anti-oxidantes ou outros conser— vantes, agentes de tamponização ou solutos para tornar a solução isotónica com o sangue, agentes espessantes, agentes de suspensão ou outros aditivos farmaceuticamente aceitáveis. Estas formas serão apresentadas em forma de dose unitária estéril tal como ampolas ou dispositivos de injecção disponível ou e/π formas de multi-dose tais como uma garrafa a partir da qual a dose apropriada pode ser drenada ou uma forma sólida ou concentrada que pode ser utilizada para preparar uma formulação injectável. para administração tópica e percutânea, as preparações podem também ser apresentadas na forma de uma pomada, creme.

loção, gel, pulverização, aerossol, lavagem, tintura para a pele ou emp1 astro.

Uma dose unitária para o tratamento de doenças em que estão envolvidas enzimas da família colagenase conterá geralmente desde 10 até 1000 mg a preferivelmente conterá desde 10 até 5O0 mg, em particular 10, 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450 ou 5O0 mg. A composição pode ser administrada uma ou mais vezes ao dia, por exemplo 2, 3 ou 4 vezes por dia, de maneira a que a dose diária total para um adulto de 79 kg se venha normal-mente a situar numa gama desde 10 até 3000 mg. Uma tal dosagem corresponde a aproximadamente 0,15 até 50 mq/kg por dia. Alternativamente, em particular para injecção, a dose unitária conterá rJesds 2 até 200 mg de um composto do invento e será administrada em múltiplos, se desejado, para dar a dose diária desejada. 0 presente invento proporciona adicionalmente um método de tratamento de condições em que ocorre a degradação do tecida conjuntivo e de outros componentes proteínicos do CDrpo, tais como reumatismo e/ou. condições artríticas em mamíferos, tais como humanos, que compreende a administração ao mamífero em necessidade de tal tratamento de uma quantidade eficaz de um composto de fórmula (I) ou de um seu sal íarmaceuticamente aceitável. 0 presente invento também proporciona, a utilização de um composto de fórmula (I), ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável, para o fabrico de um medicamento para utilização no tratamento de condiçoes em que ocorre a degradação do tecido conjuntivo e de outros componentes proteínicos do corpo, tais como reumatismo e/ou condiçoes artríticas.

As seguintes Descrições e Exemplos ilustram a preparação de compostos do invento. Todas as temperaturas estão expressas em °C. ij Hf

í_> 1

( 1 -Hidrox ipropi 1 > f osf cne.to ae diben 11 c (SI

O ^OH C2H5

(PhCH20)2P

Faí empregue a métotío geral de F . Texier—õou 11 e t e A Fouc aud [Synthesis, 1982, 9163. Uma mistura de fosfito de diben:iÍQ (31,13 ml; 0,14 mal) e propionaldeída <10,21 ml; 1 eq) foi agitada à temperatura ambiente e foi adicionado numa única porção alumina básica (70 g). Após repouso de um dia para o outro à temperatura ambiente foi adicionado clorofórmio e a alumina foi recolhida e lavada com clorofórmio, 0 filtrado foi evaporado até à secura e o óleo transparente resultante foi oromatoqrafado sobre gel de sílica (600 g) com eluição gradiente (éter - metanol a 5 7/éter), 0 composto mencionado em título foi obtida na forma de um óleo transparente que solidificou ao repousar (27,82 g; 64 7,). Uma amostra foi rec rista 1 i zada a partir de éter/pentano para dar um sólido cristalino branco; n.f. 81.-62 °C .

Encontrado: C, Ó4,Ô9; H, 6,71 . C^H^jD^F' t requer C, 63,74; H, 6,617.. S ÍCDCl-j·) : 1 .04 Í3W, t. J = 7Hz), 1,6- 1,95 < 2H, m), 2,27 < 1H, s 1), 3,8 (1H, 2 tripletos sobrepostos, J = 5 e 10Hz), <4H, m>, 7,34 <1ΘΗ, s). 4,97-5,18

Descrição 2 (l-TrifluarpmetanossulfoniipxDpropil )fasfonato de aibenzilo (D2)

O (PhCH20)2P y°'s: c2h5 o

CF 3 Q composta mencionado em epigrafe foi preparado pelo método geral de E. Vede j s et al .. LJ. Orq. Chem. 1985, 50 (12), 21653. Uma solução de <1-hidroxipropil)fosfonato de dibenzilo ‘Dl) <24,97 g; 0,078 mal) em diclorofnetano < 180 ml) foi arrefecida até -50 *C sob azoto. Foi adicionada 2,6—lutidina <11,12 ml; 0,095 mol) seguida por anidrido trifluorometanossulfónico (15,1 ml; 0,0893 mol) mantendo a temperatura a -50 -Ό. A mistura foi deixada aquecer lentamente até 0 ‘:,C e, em seguida., recebida em éter frio. A solução foi sujeita a uma rápida manipulação aquosa lavando-se a camada orgânica com água arrefecida com gelo, ácido clorídrico diluído < x2> e, finalmente, com água salgada. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de magnésio anidro e foi evaporada até à secura para dar o composto mencionado em epigrafe na forma de um óleo laranja-cor de rosa (33,77 g; 96 7.) , o qual foi utilizado sem purificação posterior. S (CDC1 ) ; 1.08 <3H, t, J -·= 7Hz > , 1,88 (2H, m), tripletos sobrepostos, J = 5,5 e 7Hz), 4,88-5,22 (10H, m). 4,94 <1H, (4H, m) e f

Ν— i! 1 — C R ) — 1 ~'Q j ban ’·' i 1 —ο κ i fost in i 1 proei I j — (S) ·~ 1 euc ma _(D3A) N-Ϊ 1 - ( S ) - 1 -dlbenzi 1 -ar· ifosf inil prooil 3-(S) -leucina ( 07R j ch3

iv!ét o do A

Seguindo o método geral da US Pat. 4 808 741 para a preparação de éster de trimetilsi1ilo de leucina, uma mistura de (S)-leucina (1,15 g; 0,0088 mol), hexametiIdissi1azano (1,75 ml) e trietilamina (1,38 ml) em acetonitrilo (13,5 ml) foi aquecida ao refluxo durante um total cie 4 h.

Em seguida, foi adicionado C(l-trifluorometanossulfoni-Io:;:í. > propi 1 If osf onato de dibenzilo <D2) (4,5 g; 0,01 mol) e a mistura foi mantida a 40-42 ':'C durante 48 horas. A reacção pode também ser levada a cabo à temperatura ambiente. Após arrefecimento, a mistura foi filtrada, lavada com metanol e o filtrado foi evaporado até à secura. 0 resíduo foi recebido em clorofór— mio e lavado com ácido clorídrico diluído (;;2) e, finalmente, água. A camada de clorofórmio foi seca sobre sulfato de sódio anidro, filtrada e foi evaporada até à. secura para dar um sólido gomoso laranja (3,67 q>. 0 produto bruto foi triturada com um volume mínimo de éter/pentano para dar um sólido cristalino que, após ser recolhido, lavado com um pouco de éter/pentano frio e

seco deu o composto mencionado em t í t u. lo, i s ó ιτι e r o R,S (D3A) (0,47 g ; 11 %>, p.f. 112-115 °C. Observado: Cl de desadsorção Cl > <M+H>+ 434. c2^h.,2no5p requer jj 433. £«3^= -23,09° íc = 0,97 MeOH).

Encontrado: c, 63,73; *4 » 7,42; N, 3,23. requer C, 6o <1 / *-· 5 H, 7,44; N, 3,23 7.. S i CDC1 ) 0,89 ' , t) ; 1 , 03 (3H , t); 1 ,25- 2,0 í 5H, m>; 2,74 í1H, m) ; 3,28 (2H, s 1>; τ *7*t ·_*« η / í 1H, 1 t 1 ) ; 4,9-5,15 (4H, m); ,35 (ÍOH, 5). 0 outro isómero, 14-C 1-(S) -dibensi 1-axif asi ini 1 prapi 1 3 — -(S)-leucina (D3B), pode ser obtida por HF’LC preparativa utili-2ando uma coluna Hamilton PRP-1, 300 x 7,0 mm, 264R com mistura eluente de acetonitrilo:água 40:60 e um caudal de 4,0 ml/min. Sob estas condiçSes, o isómero R,S (D3A) elui em primeiro lugar com um tempo de retenção de 34,6 min e o isómero S,S (D3B) é satisfatoriaments separado a 42,7 min.

Para o isómero (D3B): Observado: BAR (M+H)+ 434. Οο-^Ηττ^ΝΟ^Ρ requer M 433. * (CDCIt) 0,88 (ÓH, dd) ; 0,98 (3H, t); 1,4 (1H, m); 1,52-1,9 (4H, m); (10H, s). 4. i / 4. ( 1H, m) ; 3,38 UH, m); 4,9-5,15 (4H, m>; 7,32 0 isómero aminoácido-(S) leva

S,S (D3B) ao à série S,S,S ser acoplado com derivados de

ο

Ufna mistura de hidrocloreto do éster de meti lo de eucina-(S) ( 0,543 g; 0, 0Θ3 mo15, Ci ·· 1 _ 4- i nf 1 u o r o meta η o sslíí foni lo- i ) propi1Dfos fon.eto de dibenzilo (D2) (1,35 g* '0, 003 mo1) e arbanato de p O l. Á 3 3· λ O anidro (1,0 g > em metanol «2 ml) foi aquecida a uO '"'C,, loui agitação, durante 4 horas e, em seguida, deixada à temperatura ambiente ds um dia para. o outra. A mistura de reacção foi evaporada até à secura in vacuo e foi dissolvida em clorofórntio (5 mL) e filtrada. 0 filtrado e as lavagens foram combinadas e cromatografadas sobre gel de si 1ica 60 (50 g), utilizando acetato de etilo - pentano í 1 s 1 > como elu.ente, para se produzir uma mistura de éster de meti lo de N~ Γ. 1 - (R ) -dibenzi 1-oxif osf ini 1 propi 1 3-(S) -leucina e éster de metilo de Ν-Γ. 1-(S)-dibenzi 1-oxifosfini 1 propi 1 3-{S)-leucina na forma de um óleo (0,55 g). Os ésteres podem ser separados dando os seus diastereómeros individuais por cromatografia em coluna sobre gel de sílica inicialmente com éter dietílico a 5ô X/pentano como eluente, crescendo para éter dietílico a 100 7,. A mistura anterior dos ésteres (1,1 g; 0,0025 mol) em metanol (4,0 mol) foi tratada com uma solução de hidróxido de sódio (0,11 g; 0,00275 mol) em água (1,5 mL) e a solução foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi evaporada para um terço do seu. volume, io vácuo, recebida em água e extraída com éter. A fracção aquosa foi acidificada com ácido cítrico até pH = 3-4 e, em seguida, foi extraída com clorofórmio (5 A fracção de clorofórmio foi seca sobre sulfato de sódio anidro e foi evaporada até à secura in vácuo para dar uma mistura dos compostos mencionados em titulo (D3A> e (D3B) na forma de um óleo que so1idificou 1entamente.

N

A trituração do produto com éter deu Γ 1 ._ fé Li. (R > -d i ben z il~ —oxi fosf iniIpropil3 — (S) — 1eucina (D3A) (0,34 g > na forma de um sólido cristalino branco, idêntico ao produto OutxdO por meio do Método A. do separadamente, benzi1-oxitostini método anterior. tivsiTients, o isómero isolado pode ser hidrolisa-Por exemplo, o éster de met.ilo de N—Cl—(3)~di— Ipropil]-(S)-leucina por hidrólise, por meio do deu origem à N—C1 — (S)—dibenzi1 —oxifosfini1pro— leuci? i)e s c i c ·5ο A :1e ti 1 a mi de 3 a N — terc ~'Plí to;·: icarbon i. 1 —M ben z i. 1 o>; icarbon i 1 sina. ( D 4 ) 1 i- H3V°V^ nhch3

H,C CH3

O

H N OCH2Ph Ti O

Uma solução agitada de N'2-terc-butoxicarboni 1 -Ne-benzi··· 1 oxicarboni1 — \S) —1isina (1,5 g, 3,95 mino 1 ! em diclorometano anidro (30 ml) mantida a 0,:’C foi sequencialmente tratada com h.i.droc 1 oretD de 1 — (3—d i me ti 1 aminopropi 1) — 3—eti 1 c ar bodi—i mi da (0,91 g, 4,7 mmol> e 1—hidroxibenzotriazole (0,ó4 g, 4,7 mmol). Depois de 0,5 h, a mistura foi aquecida até à temperatura ambiente, fez-se borbulhar meti lamina através dela, e a solução resultante foi deixada em agitação durante 13 h. A solução foi em seguida filtrada, lavada com NaHCG-. aquoso saturado, seca sobre sulfato de magnésio anidro e concentrada, sob pressão reduzida, de

·- A purificaçSo por meia de crontatogra mado 5 obter—se um s-ól2·'-’"’ __v eff| Licrofórmio! deu origem ao composta fia ''flash” (metanol * um solido branco *1,18 g). em eoiqrafe s-ab a for r ·. u ~T f H JL 1 O -1 , Γ> cv UJw (òH, m}” 1 ’' 12 ( VH, s ) |i u bcl \3H, d), 3,19 ·-· 4 83 1 H» m) , 5,08 < cr N * *.1 1 Π t f 5,1b \1H, m), H, q > , 4,05 ( 1H , ,Ti) 2 Í1H, m) , 7 ,35 (5H , m > * Oescr icãc vr, i 1 - ( S > - Ί i s ina, sal t ri fT uoroace- tl 1 :=i ffl i c la da M hen C ií-e—-- . 4- .· r··. cr L. !_j i /. í p.C \ iid .»

O H2N NHCH3 TF A.

H ,N OCIÍiPh

II

O

Usna -r,luc4,-. srre‘f®cida amida (D4) (0,3 g, 0,76 minol ) em diclorometano <5 ml) foi tratada com ácido trif1uoroacético <2 ml). Depois de 0,5 h, o solvente foi evaporado sob pressão reduzida, o resíduo diluído com diclorometano í15 ml) e lavado com NaCl aquoso saturado (10 ml). A fracção orgânica foi seca sobre sulfata de magnésio anidro e evaporada ifi vácuo de modo a obter-se o composto em epígrafe bruto CB5> (0,29 g). Este foi utilizado tal e qual sem purificação adicional.

(S>-1eu- . . u. .-.η i 1 ο κ i f cs finilpropil Meti lamida da N LN- < (R) — ------ £ , ..jrtí í D6) c λ I J-N ~-ben;ilo;<icai-bcn11 — <5)—

ch3 ch3Ν^χ^ΝΗΟΗ3 o

H,N OCH2Ph ΓΤ O

Uma solução de N- < 1 - < R > -dibenzi loxif os-f ini 1 propi 1 ) <S)--leucina (D3A) (0,33 g, 0,76 mmol) em diclorometano anidro (10 ml) arrefecida a 0’:'C foi sequencial mente tratada com hidro-cloreto de 1 - ( 3-d imeti 1 aminopropi 1 )--->-eti lcarbodi—imida (0,176 g, 0,92 mmol) e 1-hidroxitaenzotriasole (0,124 g, u,92 mmol). Depois de agitação durante 0,5 h, a mistura reaccional foi tratada com o sal (D5) (0,29 g) seguido por iM,N-di-isopropiletilamina (0,216 g, 1,42 mmol). A mistura foi agitada durante 1B h à temperatura ambiente, em seguida lavada com NaHC0.7 aquoso saturado (2 v 20 ml) e NaCl aquoso saturado (2 >; 20 ml). As lavagens aquosas foram extraídas com dic lorometano e as fracções orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de magnésio anidro e evaporadas in vacuo de modo a obter se um óleo. Após purificação por meio de croma tograf ia "flash" C (MeDHzCH^Cl--,) (1:20) v/v em seguida (1:9) v/vlmetanol a 57. em clorofórmio) , o composta em epígrafe foi isolado sob a forma de um sólido branco (0,20 g). requer M 677.

Observado BAR (M+H)+ 678. C^H^G^N •-•u 7 4

"le ti Iam ida cia r·f"~· terc-buto 5ί_!Π 1 -N' -bensilo i i 1 — — ' V } — ~f ' “ i n .q ( Tj i

H,C

O

LJ

N OCH2Ph H ij ;nH so I Uí,Su aqi 'tl 3 d 3 de N-benzi i u;; i c a rbonil-qlicina O g 5 5 S2 mmo 1 ) em d i c 1 orometano anidro (6Θ ml ) foi tratada hi drocior 0t D de 1 ’·. ÍJ imeti1 amincpropi1) -3-eti 1car bodi-i m ida - T q - 6,4 mmol ) se q n i d □ por 1-nidroxi ben z o t. r i a z o 1 e ( Θ , 9 0 q , mmo 1 ) , A -aq i tacão cont mu ou durante 0,5 h, e m seguida foi tad a c om iTl0 111 am Ϊ. d 3 da N a- terc-buto;·; icarbcn 11 - (S ) - .1 isina 51 q, 5,82 mmo 1 ) d i. luida em d i c1 arometano (5 ml) , e deixada em agitação. Depois de 18 h a mistura foi lavada com NaHCO_ aquoso saturado, seca sobre sulfato de magnésio anidro e evaporada in yjcuo de modo a obter-se um óleo amarelo pálido. A purificação por meio de cromatografia "flash" deu origem ao composto em epígrafe sota a forma de um óleo viscoso transparente o qual solidificou ao repousar. , 26 m) , <5 (CDC1 ^) : 1,26-1,82 (6H, m) , 1,42 <9H, s) , 2,79 <3H, d), (2H, m>, 3,87 (2H, d), 4,05 <1H, m), 5,12 <2H, s), 5,28 (1H, 5,72 ílH, sl), Ó,4Ó (1H, sl), 7,32-7,4 (5H, m).

Metilamida da d a INzMnziloxicarhnni InUcil)

- -> X \"i -Tt I sal t r i f 1 u o r o a c e fc a t.o (D 3) tfa.h2n^u. nhch3 h o ^ Li

N OCH2Ph O H

Uma solução arrefecida (y0C) da amida (D7) (t 0,22 mmol) em diclorometano (5 ml) fai tratada com ácido fluoroacético >2 ml)» Depois de agitação a 0° durante 1 solução foi deixada aquecer até à temperatura ambiente» 0 vente foi evaporado sob pressão reduzida de modo a obter-composto em epígrafe bruto (D3) o qual foi utilizada sem f icaçSo adicional.

Descrição 9 rlet.ilamida da Nq-EN-< (R>-1-fasfonoprppil )-(S)-leuciη-Ν*"-!!} z i lo>; icar boni 1 α 1 ici 1 )-(5)-1 i sxna_j—rt^ter—de_di foen ~ 4· ÍÇ)— ),i g, tri- i- » U so 1 --se o puri- !-ben-

•χ

J 41

Uma solução de N— < i-< R) —dibenzilosif osf ini 1 propi 1) — (S) — -leucina (D3A) < 0f 43 q, i mmol ) em diclorometa.no anidro (20 ml) fo.i tratada com hidroc 1 ore to de 1 - (3-dimetilaminopropi 1 > -3-e ti Ιο srbodi—imida (0,21 q, 1,1 mmol) e 1-hidrox ibencotriasole (0,162 q, 1,2 mmol). Depois de agitação durante 1 h, o sal <D8) (0,25 q) diluído em diclorometano (10 ml), foi adicionado seguido par di-iscprapilet.i lamina (1 equivi e a agitação continuou durante mais 18 h. A mistura foi em seguida lavada com NaHCO-, aquoso saturado (2 x 20 ml), seca sobre sulfato de magnésio anidro e evaporada xn vacuo de modo a obter-se um óleo amarelo pálido, A purificação por meio de cromatografia "flash" [(MeOHsCHC1) (1:15) v/v)3 deu origem ao composto em epígrafe sob a forma, de um sólido branco (0,4 g>„ o (CDC1 -r> : 0,96 (6H, t) , 1 , ô5 í 3H , t.) , 1 ^ ,4 (13H, m) , 2,73 (3H, d) , 3,1B (2H, m), 3 ,69 ( 1H, m), 3,82 (2H, d), 4,38 (1H, q> > 4,88-5, Θ3 <4H, m), 5,08 <2H, s), 6,35 (1H, t) , 6,95 <1H, t) , 7,08 (1H, q) , 7,22-7,4 (15H, m), 7,51 ( 1H , d ) .

Descrição 10 Hetilamida do ácido IM-terc-butoxicarboni 1 -S-aspártico (D10) hh2cx°vnva h3c ch3 o i nhch3 co2h A uma solução de éster de β—benzilo do ácido N—terc — -butoxicarboni1-(S)-aspárticQ (66 g> em tetra-hidrofurano seco (100 ml) a —10VC foi adicionada di —.tsopropi leti lamina (38 ml) seguida por cloroformato de etilo (23 ml) e foi adicionada uma 42 solução de meti lamina ¢10 g) sin tetra-hid rof uranc seco (30 ml). Depois de 0,5 h a mistura reccional 'foi evaporada até à secura in vácuo e o resíduo, em acetato de etilo, foi lavado com carbonata de sódio, ácido cítrico e água, e seco i Na._,SQ^) , A evaporação até à secura in vacuo. seguida por trituração com acetato de etilo--éter >1:1) deu origem a um sólido (45 g) que foi hidrogenado em etanol (6©ô ml) sobre paládio a 10% sobre carvão (8 g) até a absorção de hidrogénio ter cessado. A mistura reaccional foi filtrada, e o filtrado foi evaporado até à secura de modo a obter-se o composto em epígrafe (D10) sob a forma de um sólido branco (33,5 g), p.f. 16d-lá>2°C (dec). lo con trado 10H 18l'"i205 requer C, 48,69; H, C , 48,77 |j H ,

11,12%. 11,38%.

Descrição 11 ídetilamida do ácido N-terc-buto>:icarboni Ι-β-Ç ( 2-pirrol idinoeti 1 ?- arnide3-(S)-aspártico (Dl 1 ) H*c CH3 o oΎ^νηοη3

A uma solução de metilamida da ácida N-terc-butoxicai— bonil-(S)-aspártico (Dl©) (5 g) em diclorometano anidro (5© ml) a ©°C foi adicionado hidrocloreto de l-(3-dimetilaminopropil)-3--etilcarbodi-imida (4,74 g) e 1-hidroxibensotriazole (3,34 g). Depois de 1© min, foi adicionada gota a gota N-(2-aminoeti1)pir-rolidina (2,82 g), e a solução foi agitada a ©°C durante 2 h e

em seguida à temperatura ambiente e seca (Na^SO,), e em seguida evapor* modo s. obter-se o composto em epigra' S (CDC1,>; 1,42 (9B, s>, 1,9 '4H, m>» d, J = 5Hz>„ 3,33 \2H, q, J = 5Hc > , 6,73 (1H, m> e 7,02 (1H, m). IJ ;Ts d i a p iZ>. r d o outro» A bicarbonato de sódio, âç u a., a até à secura in vacuo de <pi1> (1,0 g). 2,5-2,9 . 8H, m) ,2,32 ( 3H, ^5 ( 1H , m > , 6, 21 C1H, m) , D esc r ic ao ^ 2 ί 1 o x i f os f i n i 1 p ro p i 1 ) hetilamida do ácido N - lN- ( i R) -1 -dxj3§^ " _ , ς > - a s pá. r 11 c o ( u 12 -1 eucjL 11-fí— l < 2-pirroi idinoeti 1 > ami <S>~

c2h5 λ (PhCH20)2P" NÒ H

N^^NHCH3

Este composto foi preparada a partir da N <1 iF. )~di-~ ben2i 1 ο;·;ιf osf ini 1 propi 1) — < S /-leucina ( D3A ) ε meti 1 amida do ácido B-C (2-pirrolidinoetil ) amida3 - 3 )-aspár t.ico (preparada a partir (Dll> por meio de reacçáo com ácido trifluoroacético através do procedimento descrito para <D5)> seguindo o método da Descrição 11, p.f. 11Θ-118C,C (48% de rendimento). $ ( CDC1 -T) : O, 85 (óH, t, J = 5Hz), 1,05 (3H, t, J = 7Hz) , 1,4 Í3H, ffl > , 1 , i> (oH, m) , 1,35 < apro x. 6H, m), 2,ò- 2,35 (aprox. 1 OH, m) , n 3 ( 1H, m > , 45 (1H, m) , 3,65 (1H, m), 4 , 35 ( 1H, m), 5,0 (4H, iTi ) , 7,45 (10H m), 7,5 (1H, m) e 3,2 (1H, d , J = 7Hz) . 44

Des 44 He ti 1 a/nid . .a . . _ .-Hrini l-NJL~nit.ro- < S > -arai a da N -1grc- du to;·; icgi-1··'------^ inina (D13)

H3C .O H3C CH3 0

nhch3NH

‘N H nhno2

Ua-terc-Eutoxicarbonx 1 -ΝΩ“Γ!itro-<S) -arqinirta (3 g, 9,4 mraoi), 1-hidroxibenzotriazole <2,88 g, 18,3 mmol) e hidro-cloreto (de meti lamin--, ( 1,,26 g? 18, / fiimol ) foram dissolvidas em dimeti1fcrmamida seca (Ξ0 ml) e arrefecidas num banho de gelo-sal até -10°C. Foi adicionada di-isopropiletilamina (3,3 ml, 18,7 mmol) seguida por hidrocloreto de 1-(3-dimetilaminopropi1)--3-etilcarbodi-imida (2,76 g, 14,4 mmol). Depois de 1 h a 0*C a mistura reaccional foi agitada durante 18 h à temperatura ambiente, tempo ao fim do qual a t.l.c. C (CHCl^.: MeOH: AcQH) (10:2:1) v/v] mostrou que a. reacção estava completa. Depois de evaporação até à secura o sólida foi dissolvido em água e aplicado a uma coluna de Dowex 50W-XS (forma, amónio). Esta. foi eluida com água e o eluente contendo material de absorção por UV foi recolhido, concentrado e em seguida chocalhado com Amberlite IRA-401 íforma acetato) durante 1 h« A resina foi recolhida e lavada com água. 0 filtrado e as lavagens foram combinadas e liofilisadas de modo a obter-se o produto (D13) sob a forma de um sólido branco croma-tograficamente puro (2,6 g, 84/C).

Observada BAR (M+H) C18H24N6°5 requer M 332,

letilamida da__i£lilj±iiiEli±zd i ben y < i r.vjfOSf inilpronil ) ~(S) -leu-i1j-N^-n i tro-(S)-arqinina (D14)

c2h3

^ NH N NHNO, H

(PhCH20)2P "“'^N

Ò H í-t m e til a m ide. d a i'4 — terc—bu to:< icar bon i 1—N“'-n itro- (S )- arginina (Dia) (o,142 g, O, 43 mmol ) foi tratada com ácido trif luoroacético a 957, em âqua (5 ml) durante 0,5 h a 0°C. O ácido em excesso foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi evaporado duas vezes com tolueno seco. O resíduo foi dissolvido em dimeti 1 formamxda seca (2 ml) e o pH ajustado até 8-9 por meio da adição de di — isopropi let i 1 amina.. Isto foi adicionado a uma solução de N-í1-(R)-dibenziloxifosfini1propi1)-(S)-1eucina (D3A) (0,15 g, 0,35 mmol) e l-hidroxibenzotriazole (0,095 g, 0,ó2 mmol) em dimeti1formamida (5 ml). A mistura foi arrefecida até —10 a —15°C e adicionou—se hidrocloreto de l—(3—dimetilami— nopropi 1 )-3-eti Icarbodi-imida (0,08 g, «3,42 mmol). A mistura reaccional foi deixada aquecer até à temperatura ambiente e agitada durante 18 h. A mistura foi em seguida evaporada até à secura e purificada por meio de cromatografia sobre gel de sílica C (MeOH:CHC1 ) (1:9) v/vl. 0 produto (D14) foi obtido sob a forma de uma espuma amarelo pálida <0,16 g> 71%).

Observado BAR <M+H>+ 648. C^ÔH46N707P requer ΰ ά47- 46

JcsL Γ ii :3α 1! e Nu- terc- Ν' -tgrç-Βαtol·; icarboni 1 - (R) -(!- < 4-oiridi 1 )aianina ( Dl5A ? Hbutoxicarboni1 — (5) — β—(4—pir id iI)a1anina (D15B)

0 di-hidroc loreto da íl-( 4-piridil )alanina racémico bruto(1) <0,88 g, 3,66 mmol> foi dissolvido em água (30 ml) e adicionou-se NaHCO^ sólido (1,51 g). Quando ficou dissolvido, foi adicionado dioxano (30 ml) e a mistura foi arrefecida num banho de gelo-sal até õ°C. Foi adiconado dicarbonato de di-terc-butilo (1,5 g, 6,9 mmol) sob a forma de uma solução em dioxano (20 ml) e depois de 1 h a 0-4':’C, a mistura foi agitada durante 18 h è. temperatura ambiente. A mistura reaccional foi evaporada até à secura e adicionou-se uma mistura de acetato de etilo, água e ácido acético (5:1:1, v/v). 0 precipitado sólido foi separado por filtração e o filtrado foi evaporada até à secura. Este processa foi repetido até o resíduo sólido se redissolver facilmente em etanol. A evaporação desta solução deu origem ao composto em epígrafe (D15) sob a forma de uma mistura racémica, contaminada com acetato de sódio. Este foi utilizado sem purificação adicional. (1) R. L. Bixler e C. Niemann, J. Org. Cbem.,

575 (1958).

.esc ; 3 ι_ι lò id i 1 ) a .1 an ina (4-pirlai1)- net i 1 atnida_____d a H'J' — t s r ~ — b li 'to:·; i c ar bon i 1 — ( R ) — β— ( 4— ç 3 Dl òA > s meti 1 aro ida da zlOrrc—butoxicarbon i 1 - (9) - a Ianina (Di άΒ >

ú derivado racémico bruto (Dlb) í3,66 mmo1> foi dissolvido em dimeti 1 formamitía seca. (30 ml) e adicionou—se 1 —hidro— xibeirzotnasole (1,13 g, 7,38 mmol > e hidrocloreto de meti lamina (ti, 5 q, 7,40 mmol). A mistura foi arrefecida num banho de gel o--sal até -ÍO'-’C e adicionou-se di-isopropi leti lamina (1,3 ml, ',3 mmol). Depois de ‘3 minutos, foi adicionado hidrocloreta de i~ i 3-dimetí lammopropi 1 )-3-eti 1 carbod i-im.ida (1,7 g, 3,9 mmol) e depois de agitação durante lha ~5‘:‘C, a mistura foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. Depois de evaporação até á secura, foi adicionado diclorometano (50 ml) e em seguido extraiu-se com várias porçoes (3 x 15 ml) de WaHCO., aquoso saturado. A fase orgânica foi. seca sobre sulfato de magnésio anidro, filtrada e o solvente removido i_n vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia sobre gel de sílica (MeOHcCHC1τ) <1í9) v/vl de modo a obter—se o produto racémico em epígrafe (D16) sob a forma de um sólido branco (0,91 g).

Observado BAR (M+H) 280. C14H21N3°3 requer M 279. 46

Descri c|o_17 ri e t i I a 1T1 ida d a N"Α — t e r c — b u t o (D17A ) e me t i I atnida d a hl'3 di 1 ) a 1 an ma ( D1 7B) icarbon i1-<R)-β-< 4-pi per idi1)alanina terc-buto;·;icarboni 1 — ( S ) — jl— ( 4--piperi- v

A mistura de isómeros da amida (D16) (0,5 q, 1 ,79 mmol ) foi dissolvida em ácida acética glacial (45 ml) e desgaseificada sob pressão reduzida. Foi adicionada uma suspensão de catalisador de Adam C 0,2 g) em ácido acética glacial (5 ml) e a mistura foi hidrogenada durante 22 h à pressão atmosférica. A mistura reac-cional foi filtrada através de Kieselguhr e o solvente foi removido i_n vácuo de modo a obter—se o produto racémico (D17) sob a forma de um álea cramatograf icamen te puro (€5,51 g).

49

Descrição 18

Mg ti iam ida da_M"4 - terc-bu to;< icar tacn i 1- < R > —fí— < 4- < N-ben ?.ilo;< xcarbo- ni 1 ? piperidi 1 ) a 1 anina__(SISA) e meti lamina da Na-terc~butp;:icar— bon 11 - (S) -β- ( 4- (N-benz i 1 oxicarbcnil) piperidil) ai a.n ina ( Dl BB)

OCH2Ph A mistura de isómeros (D17) (0,51 g, 1,79 mmol) foi dissolvida numa mistura de dioxano/água (2:1, 30 ml ) e o pH foi ajustado para 7 por meio da adição de NaHCO-, sólido. A mistura foi arrefecida até 0':‘C, foi adicionada uma segunda porção de NaHCD.. (0,17 g, 2 mmol), seguido pela adição em porçSes de clorofDrmato de benzilo (0,3 ml, 2,1 mmol). Depois de lha 0°C, a mistura foi agitada de um dia para o outro á temperatura ambiente. Depois da evaporação até à secura, o resíduo foi tomado em acetato de etilo e extraído com ácido cítrico aquoso a 10% (2x > , NaHCO.. aquoso saturado (2x) e NaCl aquoso saturado. A fase orgânica foi seca (MgSG^ anidro), filtrada e o solvente removido in vacuo 0 óleo resultante foi purificado por meio de cromato-grafia sobre gel de sílica C (CH~,C 1 : MeGH) (19:1) v/vJ de modo a obter-se o composto racémico em epígrafe (D18) sob a forma de um óleo, o qual cristalizou ao repousar sob petróleo leve 60-80 (0,68 g, 91%), p.f. 130—131 C'C.

Observado BAR (M+H>+ 420. requer M 419.

Descrição 1

Metilamida da N"-CN-( < H) - 1-d iben z i lo;< i f osf in i 1 propi I /-(S)-leu-- i 1 3 - ( R) -β- ( 4 - (IM-ben z i 1 o>; icarbon i 1 ) pi per id i 1 ) a 1 anina ( D19A) e

r:i 1 3- ( S) -β~ ( 4- < N—benzi loxicarboni 1 ? oiperidi 1 ? a 1 anina ( D19B )

O A mistura de isómeros da amida protegida (0,19 g. 0,45 ntmcl) foi tratada com ácido trif luoroacético a 957. em água (5 ml) durante 0,5 h a 0,:'C. 0 ácido em excesso foi removido sob pressão reduzida e o resíduo oleoso foi evaporado duas vezes com tolueno seco. D resíduo foi dissolvido em dimeti1formamida seca (2 ml) e o pH ajustado até 8-9 por meio da adição de di-isopro-pi1etilamina. Isto foi adicionado a uma solução de N-(l-(R)-di-benzi loxi fosfini 1 propi 1 )-(S) -leucina (D3A) (O, 15 g, 0,35 mmol ) e 1-hidroxibenzotriazole (0,11 g, 0,35 mmol) em dimetilformamida (5 ml). A mistura foi arrefecida até -10C’C e adicionou-se hidro-cloreto de 1-(3-dimeti1aminopropi1>-3-etilcarbodi-imida (0,1 g, 0,52 mmol). A mistura reaccional foi deixada aquecer até à temperatura ambiente e agitada durante 18 h. A mistura reaccional foi evaporada até à secura in. vacuo e o resíduo foi redissolvido em diclorometano. Este foi extraído com ácido cítrico aquoso a 107., NaHCO^ aquoso saturado (2x) e NaCl aquoso saturado e em

(D19) sob a forma de um óleo a qual toi ourifiçada por meio de seguida saco sobre s vácuo deu. origem à m rcumatograf ia sobre gel de sílica C CH^Cl^ ; MeOH) <9:1)1 D e seriçá□ 20

H

boni 1 - < S > -crnitina (1,5 g, ¢),,004 mol ) em dic 1 orometano anidro (60 ml) mantida a 0':'C foi sequencialmente tratada com hidroclo-reto de 1-(3-dimetilaminopropi1)-3-etilcarbodi-imida (0,94 g) e l~hidroxibenzotriazole (0,66 g) e em seguida deitada em agitação durante 0,5 h. Fez-se borbulhar· meti lamina (em excesso) através dela, encheu-se com azoto e a solução foi extraída com ácido cítrico diluído (40 ml> e solução salina (40 ml>. A fase orgânica foi seca e evaporada de modo a obter-se um óleo viscoso. A purificação por meio de cromatografia "flash" (metanol a 27. em acetato de etilo) deu origem ao composto em epígrafe (D20) sob a forma de um sólido branco (1,2 g)»

Observado BAR (M+H> 80. C19H29N3Q5 requer M 379.

1 ornitinasal trifluoro-

Meti 1amida 3a N'u-benz i i o?< acetato ¢021) *

N H OCH2Ph

Uma solução da amida <D20) (0,14 g) em diclorometano (5 ml) mantida a. o*c foi tratada com ácido trif 1 u.oroacético (2 ml). A solução foi deixada em agitação à temperatura ambiente, e em seguida o solvente foi evaporado ,i.a yacuo de modo a obter-se o composto em s-pígrafs bruto (D.2l) sob a forma de um óleo. Este foi utilizado tal e qual sem purificação adicional.

Desse, r içj

Meti 1 amida da Ma-CM-( < R)-1-dlo&ifosf iniJ.prop.il..>-(3)-1 eur ci 11 —N ~— benz ilox icarbonil — (S)~— rirniti_12^—-^*-·*-- ch3

ch3 H ° N NHCH3 q

0CH2Ph

Uma solução agitada de N~ <l-(R)-dibenziloxifosfinil- propil-<S)-leucina (D3A) (0,142 9* em diclorometano anidro

(15 ml > mantida a 0':‘C foi tratada com hidroc lorota de l--(3~dime~ ti1aminopropi1>-3-etilcarbodi-imida (9,07) e 1-hidroxibenzotri-azole (0,949 g} . Depois de 0,5 h, a. mistura foi sequencia 1 mente tratada com o sal bruto ( D 21 ) e N, IM-d i-i sopropi 1 et i 1 amina (0,095 q) e foi deixada em agitação durante 18 h. A solução foi em seguida lavada com NaHC0T aquoso saturado (10 ml) e NaCl aquoso saturado í10 ml). A fase orgânica foi seca e evaporada in vácua de modo a obter-se um óleo. A purificação por meio de cromatografia "flash" (metanol a 57. em clorofórmio) deu origem ao composto em epígrafe (.022) sob a forma de uma espuma branca (0,095 g).

jssrvado SAR 1+H) ' 695 H,_, M ,0_,P r equsr M 694. 514 7 —

Descrição 25

Meti1 amida da

Na-ter c.—bu toxicar bon i I-N^-dimet i 1— ( S) — lisina (D23) H ^ ÇHj H3c CH, °

Uma solução da amida <D4> (0,8 g) em metanol (100 ml) foi tratada com paládio a 57. sobre carvão vegetal (1 g). A suspensão foi diluída com solução aquosa de formaldeído a 38% (6 ml) e hidroaenada à pressão atmosférica e à temperatura ambiente durante 48 h. Foi adicicionada uma outra parte aliquota de catalisador (0,5 g) e formaldeído (3 ml) e a hidrogenação continuou durante mais 24 h. A solução foi filtrada através de Kieselquhr, o solvente foi evaporado in vácuo e o resíduo foi purificado por meio de cromatograf ia "flash" [ (CHCl^.: MeOH: NH^) 54

(12:.4:1) v/vD de modo a obter ~se α composto em epíqrafe (D23)

í4H-.9W-t°3 rBquer

Descrição 24

O TF A. H2N NHCH3 ÇH3

Uma solução agitada da amida (D23) (€»,11 g) mantida a €»°C em diclorometano (5 ml) foi tratada com ácido trifluoroacético (2 ml). A solução foi agitada durante 1 h, e em seguida o solvente foi evaporado sob pressão reduzida de modo a obter—se o composto em epígrafe bruto (D24) sob a forma de um óleo transparente. Este foi utilizado tal e qual sem purificação adicional.

Descrição AA

Hetilamida da Ν°-ΓΝ-* (SP-l-Hihgn?;-lPi<ifo5finilProPil)~<S)~leu-

ch3

Uma solução agitada de N-<1-< R >-dibenzi1DKifosfini1-propi1>-(S>-leucina (D3A) '0,132 g) em dic1orametano anidro (20 ml) foi sequenciaimente tratada com hidrocloreto de t 1 aminopropi 1 )-3-eti.lcarbodi-imida ¢0,066 g) e l-hidroxiben- Λ ictriasole (0,42 g). A mistura foi d e i x a d a e m a g i t a ç ã n durante 0, b 11, 1' c 1 tratada com 1 :o sal de anu na (D24) e N,N-di-i sopropi1- etilamina ( 0,148 q > e a agitação continuou durante 4 h à tempe- ratura ambiente, A mistura foi la vada com água (2 x 10 ml). NaHuG-, aquoso saturado (20 ml), s^c a -obre sulfato de magnésio 3. n .1 d r 0 s 0 v aporada in vácuo de modo a obter-se um óleo amarelo pé. i ido . A purificação por meio d e c romat0grafia " f 3. as h11 L í CHC1 : MeOH;; 0p ic'< r a. f e ( D23 NH_) < ) sob .13:2:0,3) v/vj deu origem ao composto em a forma de uma espuma branca (0,11 q). UD':"tv!' V β ti O b'Hh. (M+H) 1 ’ 603, Γ:_Η^, N _D,_P requer M 602 . 0 X ij Descrição 26 Meti 1amida da 'fQ-terc-buto>;icarboni 1 -w‘"-dimeti 1- (S) -orn 1 tina (D26)

H H3C ch3 0 NHCH,

0 composto em epígrafe <D26) foi preparado seguindo o procedimento descrito para a síntese da Na-terc-butoxicarbonil--Nt-dimetil-(S>-lisina (D23) (rendimento: 697.).

Observado BAR (M+H) + 274 C^H^yN-rO^ requer M 273.

7

Descric T l'- 1 1 i t f* t—< "f· .¾ Γ"·

.amida N orni tina Λ

O

TFA. H2N NHCHi

O composto era epígrafe (D27) foi preparado seguindo o procedimento descrito para a síntese da metilamida da íi'~-dime-ti1 — (S) — 1isina, sal tri fluoroacetato (D54 ) . 0 composto em epígrafe C D27) foi utilizado sem qualquer purificação formal.

Het 11 am ida da ti'-1-· í N— i ( R ) - 1 - d i benzi 1 ox if osf imlpropil )-(3)-1 eu-c: 11 3 -N d 1 meti 1 - i S) —orn itina ( D28 ) ch3

57 0 composto em epígrafe procedimento descrito para a sint < rendimen to: 56/·) . g) foi preparado seguindo o do éster de dibenzilo (D25).

Ubservada EAR (M+H) 5SV,

L31H49N4°5F requer

M 90

De sc r

Ac ido ( R > — 2—hidra;; i—4—meti i pen tanoico ( D29 ) ch3 ch3

HO^C02H 0 composto em epígrafe foi preparado por meia de modificação do método de G. Iwasaki et a_L-, Chem. Pharm. Buli. 1989, 37(2), 28β. Uma solução de nitrito de sódio (33,8 g) em água (100 ml) foi adicionada gota a gota durante 1,75 h a uma solução agitada de D-leucina (2Θ g, 0,15 mmol) em ácido sulfú-rico 3N (700 ml e ácido acético aquoso a 50/C (500 ml) a 92-98c,C. A mistura foi aquecida durante mais 3 h a 98-99°C, em seguida arrefecida e extraída com éter dietílico (4 κ 25Θ ml). As camadas orgânicas combinadas foram secas com sulfato de magnésio anidro, filtradas e evaporadas até á secura de modo a obter-se o composto em epígrafe (D29) sob a forma de um óleo amarelo pálido <18,91 g, 947.). Uma amostra foi recristalizada a partir de CHCl^/pentano sob a forma de agulhas brancas, p.f. 77,5-79*0. C«]jjp= 26,41 <c = 0,98 NaOH IN)

Descricão 50 (R ) — 2—Hidrox j—4—meti i ppnt^noato de metilo < D3Q ) ch3 HO ^002^3

Uma mistura de ácida (D29) <3,97 g, 0,03 mol) em metanol (100 ml; e HC1 etéreo IN (10 ml) foi mantida à temperatura ambiente durante 5 dias. Depois de evaporação até à secura e de purif icaçâto por meio de cromatografia sobre gel de sílica com éter dietí1ico como eluente foi obtido o composto em epígrafe <3,51 g, 80%) e foi utilizado mais adiante sem purificaçaS adiconal. D&scriçgto 51 Éster de metilo da N-< 1-(S)-dieta?;if osf iní 1 propi 1 ) - (S)-leucina < D31 )

0 álcoc-l <D31) (0,696 g (10 ml) foi arrefecida até -60°C 2,6-lutidina (0,68 ml) a qual , 0,0048 mol) em e em seguida foi seguida d ic1orometano foi adicionada por anidrido por

1τ. r i f I uo roiTie t at :* ‘.-1 c·.> j. f dí * .í. <_ lj !· O , '/2 íTí 1 .. utz? po i. — o ^ st d s x x -3 r ç u.o l. o r até 0°C foi adicionada uma solução de ácido (S>-aminoprepi1fcs-rénico, éster dieti 1 icof. 2) <0,93 g , 0,$048 mol ) em diclorometano í 1.0 ml), seguido por Proton Sponqe (1,β2 g). A mistura foi agitada durante 4 di.as no escuro sob N_, e em seguida filtrada, o sólido foi lavada com clorofórmio e a filtrada lavada com ácido cítrico a 10% < ;<2> seguido por água. A camada orgânica foi seca com sulfato de magnésio anidro, filtrada e evaporada de modo a obter—se o produto bruto sob a forma de um óleo vermelho. A purificação por meio de cromatografia de coluna (primeiro gel de sílica com eluição gradiente de MeOH O—óV./CHCl , em seguida gel de sílica com eluiçSo gradiente de MeOH 0—2%/EtOAc) deu origem ao composto em e^pígrafe (D31) sob a forma deum óleo amarelo pálido (0,48 g, 33%).

Ob ervado

M , 1B62. C, -H^-NOcrF' requer

ncão --V etilamida da r-r . r n_ ; o ) _ 1 -a i etoi;if osf ini 1 propi 1 ) -(5)-1 suei 11-

-N ben: i n"ío : i 1 oicarbon i 1 ~ (S) -1 is

ch3 ch3 N NHCH3 Y o OCH2Ph (2) EP-A-0 401 963

:osf ini 1 ρroρχ 1 ) ~( \ i-i i ! ( 1 ( í) d ‘rj t!_J preparada a partir do éster meti li hidrólise básica padrao. Uma solução deste ácido (0,25 g, 0,00081 mol) em dic lo rometa.no (9 ml) foi arrefecida, até 0°C sob azoto foi adicionado hidrocloreto de 1~(3-dimetilaminopropi1)--3~etiIcarbodi-imida (0,17 g > e l-hidroxibenzotriasole <0,12 g) e a mistura foi. agitada durante 1 h, a esta temperatura. Foi . eucinaíõ) ται correspondente (D31) por adicionado o trif luoroacetato da. meti 1 amida da N'"-benziloxicar-boni 1 - ( S) — 1 isina. (D5) (a partir de 0,0097 mol do correspondente derivado N°'- te r c - bu. toxicar bon i 1 o (D4) ) em dic lorometano (5 ml) seguida por di-isopropiletilamina <0,35 ml) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. Depois de diluição com clorofórmio < 2Θ ml) a mistura foi lavada com ácido cítrico a 10*/. í k2 ) e água. A camada orgânica foi seca (sulfato de magnésio anidro) e o material volátil foi evaporado in -/acuo de modo a obter-se uma goma incolor. A purificação por meio de cromatografia sobre gel de sílica (eluição gradiente de MeOH 0-5“C/EtOAc) deu origem ao produto (D32) sob a forma de uma goma incolor (0,3ó g, 76'/).

Observado M+ 584,3346. C^gH^N^D^P requer 584,3339. «*S (3) EP-A-0 4Θ1 963 61 DESCfiÇ! ::(Q 33 ri e t i 1 a m i d a d a_N"* —CN—( < S) — 1—dietoxi fosf ini1 prooi 1) — (S) —leuci 1 1 — - S ) - 1 isina ( D35 )

A metilamida da Na-CN-<(S)-1-dietoxifosfini1propi1)- _ i— - i 6 ; -1 euc: i 1 ]-N'-benz 11 cixicarbcn 11 - ( S) ~1 isina (D32) (0,18 g , 0,0003 moí ) em metanol (25 ml) com paládio a 107. sobre carvão vegetal (0,2 q) foi hidrogenada à pressão atmosférica de um dia para o outro. Depois de filtração através de Kieselquhr e de evaporação até à secura, obteve-se o composto em epígrafe CD33) sob a forma de uma goma transparente.

Observado M+ 450,2982. C H N.O^P requer 450,2972.

jL. - ) ·.* uJ

Descrição 34 2-Hidroxietilamida da Nc~hensilg n 11 - ·' S ) -1 i s i n a ( D 3 4 )

arboni1-M · tíerc-bu to;·; icarbo-

H,C. h3C CH3 0

Uma soluç3o de M "-benzi loxicarboni l-IMa-terc-butol·: icar~ bon i 1 - ( S ) -1 isina (5 g , 0,01.32 mol '/ em d ic 1 orometano (50 ml) foi arrefecida até 0°C e foi adicionada 1-hidroxibenzotriazole (1,78 g) seguido por hidrocloreto de l-(3-dimetilaminopropil)— ~3-etilcarbadi-imida (2,52 g). A mistura foi agitada a 0°C durante 1 h, e em seguida foi adicionada etanolamina (0,88 g, 0,0144 mol) numa porção. A solução foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente, lavada com água (2 x 30 ml), bicarbonato de sódio saturado <30 ml) e finalmente água (30 ml). A camada orgânica foi seca sobre sulfato de magnésio anidro, filtrada e evaporada até à secura de modo a obter—se o produto <D34) sob a forma de uma goma transparente (5,44 g, 977.) , o qual foi utilizado sem purificação adicional.

Observado M+ 423,2365. C21H.33N3°6 requer 42: 69.

'—•c\ .

^-Hidroxieti 1 amiaa da H '-benzi lo;·; icarboni 1 - ( S

f Γ 1 f 1 U. Q Γ Ο β c. ‘“f fc t C

TFA. H2N Ácido trifluoroacétiCD {30 ml) foi adicionado a uma solução agitada do derivado lisina. < D34 > (2,64 g, 0,0062 mol ) em :Jic lorometano (50 mi ) a w°C. Depois de 3 h de agitação à temperatura de um banho de gelo, o material volátil foi removidosob pressão reduzida de modo a obter-se o produto bruto (D35) com um rendimento quantitativo. Este foi utilizado em passos subsequentes sem purificação adicional. observado BAR (M+H)+ 324. C1 requer 11 323. 6

Lese r i ç ã.o 2-HidroKieti 1 amida da N^— CN— ( (R) — 1 — dibenzi 1 oí<ifosf iniipropil ) — ·- ( S ) -· 1 eu.c i 1 3 - S-N ben ?. i 1 o ;< i c a r bon il-lisina (D36 )

0CH2Ph

O 64

Uma ct Dl u.cSo de N- ( ( R ) ~ 1 -d i. ben z -1 S ucm & \ D3A } : 1 - v ã g , v, 0Θ37 mo1) em di a r r '£> f 8C ida a f* íi> õ ‘"'C e f oi adicionado (y, ~7 •’Λ ... / ...» „ 05 8 mo 1) seguid o por hidrcclor nop :roríi 1 \ — 3--·£· ti lo arbadi-im ida (1,0? g, õ, w. C U b U βΠ S ο ί — no ιϊη mi} foi 1-hidroxibenzotriazoi e :a de 1-( 3-dimeti lami- em temperatura de um banho de gelo, seguida foi adicionada unia saluça.S do sal trif luoroacetato <D35) (1,2 equivalentes) em diclorometano (15 ml), seguido por di-iso-p r o p i 1 e t i lanti n a (3,3 6 q ) a t é a s s eg u r a r a n e u t. r a 1 i z a c '3α d o e >t cesso de ácido trifluoroacética. Depois ds agitação de um dia para a outro ã temperatura ambiente, a mistura reaccional foi lavada com ácido cítrico a 10% (2 ;; 2Θ ml > , água (2 x 20 ml), bicarbonato de sódio saturado (2 x 20 ml) e finalmente água. A camada orgânica foi seca í su1 fato de magnésio anidro), filtrada e evaporada até à secura. 0 resíduo foi cromatografado sobre gel de sílica com uma pareentagea crescente 1:1 de metanol (até 10%)„ A purificação adicional sobre gel de sílica com um gradiente de MeOH 0-4y./CHCl-, deu origem ao composto (em epígrafe (D 36) sob a forma de uma goma transparente (0,83 q, 30%).

Observado M 738. C—Η,-,-Ν ,CUP requer M 738.

êesc riçiac k~H i d r c >i i e ti lsmida d t N— ( ( S ? — 1 —d i ben z i 1 ox i fosfiri ± I propi 1 ) — - 06 > ~ 1 euc i 1 ] ~S~N "-benzi lo>: icarboni 1- li si na ( D37 >

OCH2Ph

O i f osf in i 1 propi 1)-06) - leucina C D3B> tri f 1 uoroacetato ( D35 > por' meio do 0 produto am spigra partir da N-((S)-1-dibenzilo · Θ, 67 g , 0,0Θ15 mal) e do sal método dado na Descrição 36. ηι-

set v?.dc hAR ( bl +- H + C7 HqcN QqP requer M ii‘ *7 w -~i •‘t d

Descrição 3B

Metilamida da_Ν'^-C ( 5 ) - terc-bu toxicarbon i 1 -leuc i 11 -N^-ben z i lo;·;ί ο a r bon i1 — (5) — 11s i n a (D3B)

CH, O ch3ύ-λ nhch3 o

H N 0CH2Ph li O

A N-terc-but.i lo;·: ícarbon :i. I - < S) - leuc ina (25 g, 0,11 mol) foi dissolvida em diclorcmetano (25© ml) s arrefecida até 0':'C.. Foi adicionado 1,1' -carbonildi-imidazole (13 g, 0,113 mol) e a. mistura foi deixada em agitação a 0‘-C durante 0,5 h. A solução foi deixada aquecer até à temperatura ambiente durante 15 min e em -seguida rs—arrefecida até 0*C.

Foi adicionado o sal trifluoroacetato da metilamida da N ben silo κ i c a r bon il — (S) — lisina (D5) (47 g, 0,118 mol) em diclo-rometano <150 ml), seguido pela adição imediata de di-isopropi1-eti lamina (30,5 q, €»,236 mol), A mistura reaccional foi deixada em agitação de um dia para o outro à temperatura ambiente e em seguida foi tratada com água e extraída com clorofórmio. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com ácido clorídrico diluído (2 x 2Θ0 ml), água (2 κ 100 ml), carbonato de sódio aquoso (3 x 100 ml) e solução salina. A camada orgânica foi seca com sulfato de magnésio anidro e evaporada até à secura de mdo a obter-se o composto em epígrafe (D38) (50 g, 937.) o qual foi utilizado sem purificação adicional.

Observado (M+H) 507 . C26H42N4D6 requer Μ 5Θ6. Ί& t i 1 anu da ria ί\ΓΛ-Γ íxicarDoni x - (a > -1 isina. ch3

o

H.N.^ OCH2Ph Tf O uoão arrefeci d'3 da amida < D3B > (50 g , Ο, 099 mol) em diclarometano (150 ml). Depois r a d u 2 i d a . 0 ά 1 e o ficado com ácido ( 150 ml) foi. tratada com áci.uu tri f l'>-.\oroa.eef ico de 3 h o solvente foi evaporado sob pressão resultante foi dissolvido em metanol e acidi.-cloridrico diluído até se obter o sal hidrocΙο reto- Foi adie ionada água e o material orgân xc.j não básica foi separado por e;< traeç-áo com acetato de etilo (2 κ 200 ml). A camada aguosa foi basi.ficada até pH 8-9 com hidró ;:ido de sódio a ί 07. e em seguida e;-;traída com acetato de etilo (3 :< 150 ml).

Estes extractos orgânicos combinados foram secos <Na^SO^) e evaporados até à secura, de modo a obter—se o composto em epígrafe < D39) (20 g, 507.) sob a forma de u.m sólido branco.

Observado (M+H) 407. ^21^34^4^4 requer M 406.

áo _iâ L/SSÇrjj. 1*1 eti 1 amida da (R)-i--djj3gD^l-PKÍfosfinilProRÍllzlS) "ieu- c: i 1 ] - N£ - ben z i 1 d i c abcn j 1) - S) -1 "dibenziioxifosfinil premi 1 ) - (^ ——t kgJ-L·.---.1 * υ'~ A.g.aÇ.bp- i i 1 ? -1 is ma < D40:

ch3 ch3 0 NHCH,

H .N

V* O OCH,Ph D (C1-trifluorometancssulfoniloxi)propil>fosfonato de dibenzilo (D2) <4,4 g, β,€>θ98 mol) f°i dissolvido em diclorome-tano seco <20 ml). Foram adicionados metilamida da Na-C<S)-leu~ c x 1 ]-:M '-ben z i 1 ox icar bon i I - (S) -1 suc ina < D39) <4,0 g, 0,0098 mol) e Proton SportQe (Ξ,® q, 0,0098 mol) à solução e a mistura reaccio-nal foi agitada no escuro è temperatura ambiente durante 1Θ dias. A solução foi diluída a seguir com clorofórmio, lavada com ácido cítrico a 10% (2 x 50 ml) e água <3 x 50 ml), seca (MgSO^ anidro) e evaporada até è. secura de modo a obter-se um óleo laranja. Este foi purificado por meio de cromatografia de coluna <gel de sílica, rieOH a 2%/EtOAc) de modo a obter-se a mistura dos compostos em epígrafe (D40) (2,55 g, 35%) sob a forma de um óleo transparente. ubservado <M+H)+ 709. _,P requer Μ 7Θ3.

Heti 1amida ri a igni I oxifcsfin i 1 a.rop.: 69 i a u - í P, t ci 1 3-N -niti .nina (D4:l) Λ

nhno2 0 composta em epígrafe (D41) (0,72 q, 74%··)· foi prepa-rada a partir da metilamida da N -terc-butoxicarboni1-N“-nitro--(S)-arginina (D13) (0,6 g, 0,0018 mol) e N-í(S>-l-dibenziloxi-fosfini1propi1)-(S)-leucina (D3B) (O,633 g, 0,0014 mol) por meio do método descrito na Descrição 14 com a excepção de que o diclorometanofci utilizado como solvente de reacção com dimetil-formamida suficiente para efsctuar a solução.

Descrição 42 N- ( (R )-l-diben ai lo;<if osf ini leti 1) — (S )-leuc ina (D42ft) e N-((S>—1--d i ben z i 1 o y, i f osf ini 1 e ti 1 ) - ( S) -1 euc ina (D42B)

ch3 ch3

OH 70 A mistura de ^1Λ,-+· = Γθόιτΐ3Γθ5 em epíqrafe (D42) fai preparada analogamente 3,-., :T!fi4-,-,do da Descrição 3, Método B, sob a forma de um sólido branco Observado BAR (M+H)"*’ 420, q requer M 419. >escr :aa

Metilamida da N^-CN-( (R·) - 1 —,-41 pen V-ÍSia -(S)-N^-benailoxicarbon ί i ·:, _ 3) —τ_ίsina Ha-ZH-( (S)-1-diben?. iio:<i -f0s 1 o:; icarbon i 1 ) -1 isina ( D4?p > f os f i n i1e t i1)-(5)-1euci13 — i_D42'A) e metilamida da •3 f — 1 euci 1 3 — < S 1 — N^—bensi—

CH? rj ^ NHCH, H ,N OCHjPhΓΓ o 0 composto em epígrafe (B4u,‘ foi obtido sob a forma de um óleo transparente Π. , O g, ó37.) a partir do ácido (D42) ( 1,0 g, 0,002 mol) seguindo o método geral da Descrição &.

Observado BAR <M+H)+ 695. C-^HgjN^P requer M 694

•zl:tr i. ·_; r_-f CN- . auc

NH, u éster de dibenzi lo {D6) (0,105 g, 0,16 mmol) foi dissolvido em etanol (40 ml) e hidrogenado sobre paládio a 10% sobre carvão veqetal à pressão atmosférica» A solução foi filtrada através de Kieselquhr e o solvente foi evaporado in_ vácuo

ci e m o d o a obter-se o composto em e p i g r afe (El) (0,01 q). G b s e r v a d o BA R \ !Ί+H >+ 395» Ο.,Η-.^ lò j5 ;°5N4P requer M 394., S ( CBC1 -τ/CD-rOD ) : Θ ,95 Í6H, dd), 1,08 (3H, t), 1,4-2,9 (9H, m) ' - ) —'.1 ri» li) i) , / _ í3H, s), 2,92 (2H, \ ~r .1 c m > q --G t, ~tU i 2H, m), 4,1a ( 1H m), 4,4 (1H, m) .

6;rSmcIo 2 ^ati I aíiiida da__M’1' — L N — ( (K ) -1 - f osf onopropi 1 ) ~ (a ) - 1 euc i 1 11 -Ν'" -q 1 ic :L i - (S)-lisina (62)

o 0 éster de dibenzilo (D?) (€>,43 g) foi dissolvido em etanal í 6Θ mi) e hidrogenada sobre paládio a 107. sobra carvão vegetal à pressão atmosférica. A solução foi filtrada através de Kieselguhr e o solvente foi evaporado in_ vacuo de modo a obter-se o composto em epígrafe (E2) (Θ,059 g) «

Ubservado BAR ( M+H) 4 452. C * οΗ__,0 , N,_P requer !i 451. j. cl ôS 6 o Λ (C-D^DD) : 0,78-0,95 Í9H, m>, 1,19-1,9 (11Η, m), 2,31 (1H, m), 2,62 < 3H, s), 3,05-3,25 (2H, m), 3,30-3,65 (2H, m), 3,83-3,92 í1H, t 1) , 4, 15-4,3 < ÍH, t).

t.g;iiu i O

Het i 1 amida do 4c ido N— E n- ( (R) -l-fosfonopropi 1 )~ ( S )·~ isuci 1 ]~Β·~[ ( m— -pi. rro Iidinoeti 1 ) ami.da3-< S ) -asparti.-ο (E3 )

Este composto foi preparado a partir da meti 1amida do ácido M-EN-E ( R ) -d i benzi lo;·: i f osf ini 1 propi 1 ]-( S )-leucina-f5-E ( 2-pir-rolidinoeti1)amidaj1—(S)-aspártico (D12) por meio de hidrogenação sobre paládio a 1Θ% sobre carvão vegetal à pressão atmosférica. p . f . i 30-135 °C (95% de rendimento). S < CD-, OD) : 1 ,0 (6H, t, J = 6Hz> , 1 , 1 (3H, t, J = 7Hz), 1,55-1,8 Í4H, m ) , 2,0 ( 1H, m ) , 2,15 Í4H, m>, 2,6-2,35 (6H, m>, 3,3-3,75 (a.pro.··; . 8H, rn ) , 4,1 ( 1 -!, t, ,J = ÓHz) e 4,75 (1H, t, J = 5Hz ) .

Me t i 1 amid e da N' — Ϊ N~ ( (R) — 1 — f osf onopropi 1 ) — ( b) — 1 eu.c i i 1 — ( b ) ~arq j — n ma ( E4 )

A

NH nh2 O derivado totalmente protegido· (D14) foi dissolvido numa mistura de ácido acético glacial (40 ml) e água (1Θ ml) e hidrogenado sobre catalisador paládio a 10% sobre carvão vegetal durante 18 h à pressão atmosférica. A solução foi filtrada através de Kieselguhr e o solvente foi evaporado i_n vacuo de modo a obter-se o composto em epígrafe (E4) (0*085 g).

Observado BAR (M+H) 423. C^H^N^C^P requer M 422. 2,56 t) . m) , ( 1H, £ í CD-r-OD) : 0,95 < ÓH, dd ) , 1,03 ( 3H, t), 1,5-1,94 ( 9H, (1H, m), 2,72 (3H, s), 3,17 (2H, m>, 4,02 (1H, t), 4,37 -r>

Ο derivado total mente protegido (Dl 9) 0,24 g) foi dissolvido em etanol (5© ml) e hidrogenado sobre carvão vegetal à pressão atmosférica» trada através de Kieselguhr e o solvente foi 0 resíduo foi triturado com éter de modo a 1 ;Ti pu. r e i-ι a s de modo a obter—se o produto (E5) solido esbranquiçado 0,13 g). sobre paládio a 107. A so 1 u ç ão foi f i. 1 -e v a p o r a d o .in vácuo . remover as ligeiras sob a forma de um **\

+

Ubservado BAR (M+H) 421 C18H37N4°:

-P equer 4 2Θ. 6' ( CD-^OD) ; 0,95 i 6H, dd ) , 1,02—1,05 ( 3H, tripletos que se sobrepõem), 1,4-2.0 (12H, m>, 2,4-2,55 ílH, 2 m que se sobrepõem), 2,71 <3H, d), 2,81-3,03 <2H, m), 3,34 (4H, m 1), 3,03-3,SI (1H, t 1), 4,40 (1H, m).

1' i! I p i. U

MetiÀamida da tina i £36) •onoprop: O > . 0U.C 1 .

Uma sd metanoi (20 ml) tal. A suspensão 24 h, filtrada a .modo a obter—se sólido branco (õ foi tratada com paládio a iiV. sobre \0,07 g) em carvão vegeto! hidroqenada à pressão atmosférica durante través de Kieselguhr e o solvente foi evaporado duo foi triturado com éter dietilico (5 ml) de a composto em epígrafe (E6> sob a forma, de um , ô3 q > ,, p . f . Í65-169°C. _ Observado BAR (M+H)4 331. S ( CDC1 -,/CD-dOD ) ; 1 ,0 í 6H, 2,05 ( 1H, m>, 2,7 (1H, m),

C15H3 3W4°5P requer M 380. a d) , 1,12 ' :3H, t), -* !· 6-1,9 ' í 8H, m) *- 4 / w' (3H, 0 i> , 2,9 < :2H, t) , 4. 42 ( 1H

I ο 7 fleti lamida da Ν'"1' — ΓΝ— ( ( R) —1 — f osfonoprop: U51 n a

Uma solução do diéster fosfónico < D25 > (0,75 q) em metanol (2Θ ml) foi tratada com paládio a 57. sobre carvão vegetal (0,05 g) e foi hidrogenada á pressão atmosférica durante 24 h. A solução foi filtrada através de K.ieselguhr e o solvente foi evaporado ijn vácuo. D resíduo foi triturado com éter dietílico (10 ml) de modo a obter-se o composto em epígrafe (E7) sob a forma de um sói ido branco (0,045 g >.

Observado BAR í.M+H) 423,

C1SH39N4°5P requer M 42: ( 3H ,, t) , 1 s), 2,B <6H,

5 (CB-dJD>; 1,0 (6H, dd>, 1 iTi ) , 2 , ó ( 1H , m) , 2,75 ( 3H Í2H, m). 1,85 (10H, m), 2,0 C1H, s) , 3,05 (2H, t), 4,35

Metilamida da N'"'(-CN--(S)-orni ti πa í EB> 1

Exemplo 8 if oncpropi 1 ;) - I suc i i .1 -N1*- meti1- CH,

CH,Η O NHCH,

‘N CH, CH, • 0 composto em epígrafe (EB) foi preparado a partir do éster de dibenzilo (D2S> seguindo o procedimento descrito para a síntese da metilamida da Nu-CN-((R)-l-fosfonopropil)-(S)-leu-ci13-N^-dimetil-(S)-lisina (E7). (Rendimento: 747). p.f. 88,5--90 C’C.

Observado BAR (M+H)*" 409. C^requer Μ 408.

Exemplo 9

Meti lamida da Μ'3 - Γ.Ν- ( (S) -1 -f osf onopropi 1 ) — (S) -1 euc il3-(S)-lisina. sal hidrobroinetx; <E8)

NH2. HBr π brof?!nt j_ φίϋ -jj £ 1 c; i a n c

(θ h 48 dietilo 1 em acetoni tri1c seco í10 m1) s agitadL durante 3 dias. equiv ) f oi adicio- ( ç\ 14 • *..· n ± ~f 0,0024 mol> pnipera tur a ambiente A solução amarela resultante foi evaporada até· à securas tratada com metano 1/água,, Depois de evaporação e tratamento repetida com metanol/água foi obtido o produto (E9) num rendimento quantitativo sob a forma de uma espuma cor de laranja r A1.1 d a . servado BAR (M+H) 395. C Η N 0 P 16 35 4 5 requer M 394. (s;m ,0D) η 1 , í·; >1 (6H, dd) , 1 , 1B C3H, t), 1,3-2,15 ( 11H, m), 2,74 -i, s), 2,96 (2H„ t), 3,19 (1H, m), 4,3 ( 1H, m) , 4,42 : 1H, t) . E;·; emolo 10 2-Hidra;·; íeti lamida da Ρ·Γ'' -CN~ ( < R)-1 -f osf onopropi 1 )-(S)-leuciI]- - (5 ) -1 isina < E10 )

Uma solução do éster de dibenzilo (D36) <0,3 g, 0,0011 mmol) em metanol < 1€>© ml) com paiádio a IO*/, sobre carvão vegetal foi hidrogenada a pressão atmosférica de um dia para o outro. Depois de filtração através de Kieselguhr e de evaporação

rsíi1 trado :r, saco por - np gelação ds ííiOlÍD a opt isr “S C7j ····. omposto sm SDígrafe (E i 0 > sab 3 form a de um a ^ s pu ma branc a. (0 , 39 q , 85%). Observado B AR C11+H) 425. C. _H, 7n4o c , j requer M 424. i / .· / 4 5 f ( CD-^OD ) : O, OS (6H, dd) , 1,05 (3H, t ) , 1,3---2 H 05 ( 1 1H , m que se sobrepõem), 2 ,54 (1H, m 1 ), 2,92 (2H 5 m) If ·_! μ -21 (2H ? m, Ξ obrepõe -SP sinal do so 1 , X V ente CHC _,0D) T .i. s' Η -l '—f ’·· 2H, 4_ ‘ 4,10 C ÍH, Ι m) , 4,38 ( lH, U composto em epígrafe (Eli) foi obtido por meio de hidrogenaç3o à pressão atmosférica do éster de dibenzi lo <D37) por meio do método dado no E;;emplo 10.

Observado BAR (M+H)h 425. C, „0, F‘ requer M 424. i / o / 4 o — 2 ~ H i d r o ···: i e t i lamida da Ν'^-ΕΝ—(( -(S)-1isina (Eli) 1-fosfonc-propil) - (S)-leuciI 3-

31 $ ÍLO_QD): θ,97 f 6H, dd 5 , 1 , 12 (3H, t) ,, 1,35-2,10 < 11H, m que se sobrepõem), 2,46 (1H, m), 2,95 í 2H, m>, 3,32 <2H, m, sobrepõe-se sinal do solvente CHD.-.OD), 3,53 < 1H, m) , 3,65 (2H, m) , 4,49 (1H,

Sviet i l-amida da Ma- [SM- <. (R)-1-fosfonopropi1 )-(6)-1 auci 1 1- \ 6) -1 i sina s metilamida da N'"- 1N~ ( ( S ) - í-f osfonopropi 1 ) - ( S ) -1 auci 1 3- ( S ) -1 i-sina (E12) NH, m

A mistura dos ésteres de dibenzilo (D40) (2,55 g, 0,004 mmol ) em etanal (100 ml) foi hidrogenada sobre paládio a 107. sobre carvão vegetal à pressão atmosférica. A solução foi filtrada através de Kieselguhr e e o solvente evaporado in. vácuo de modo a obter-se o composto em epígrafe (E12) sob a forma de um sólido branco (1,0 g, 717).

Observado BAR (M+H) ' 395. C^H^J^OgP requer M 394.

Ezemplο 13

Hetilamida da N^-CIM- ( (S)-l-f osf onopropil ) - ( S) -1 suei 13-(b)-argi-n z n a. ( E13 ?

0 composto em epígrafe (E13> a. partir do éster de dibenzilo (D41) meio do método do Exemplo 4. 0,5 g, νθ'ί) foi preparada í 0,633 g, 0,014 mo1) por

Observado BAR <ΙΊ+Η> 423. C, ,Η-.β-Ν.Ο^.Ρ requer M 422. A (CD^rOD) : 0,97 i 6H, t>, l,lô <3H, t), 1,49-1,95 (9H, m> ílH, m), 3,21 (2H, m), 3,60 (1H, m), 4,94 (1H, m>. .1 2,50 \ ί 4 tst ι 1 amua da N" — i. ti— ( i R ) — 1 ~ * ~;s~f onopropi 1 ) — {?,) — lauc i 1 3 — v S ) — homo- irqinina. sal dissódico (E14A?__e metilamida da Na-CN-<(S)-l-fos- 'onopropi 1) - (B <-1 euc 11 j-< S >-homoarq in ina . sal ri i cgodico (E14B)

ch3 ch3 NHCH-i

H.N

NH NH2 h mi-.atura ds is6(D0r os R, S, S e 8,3,3 (E12) \ 34, 3 mg , 0,Θ87 mmol ) em água <0,5 ml) foi tratada com bicarbonato de sódio (44 mg, ò equiv.) seguido por sulfato de 2—meti 1-2—tio-pseudo— -ureia (24,3 mg, 1 equiv.) e agitada à temperatura ambiente durante 3 h. Foram adicionadas porções suplementares de bicarbonato de sódio (8,5 mg) e de 2-meti1—2-tio-pseudo-ureia (15 mg) e a mistura foi em seguida aquecida a 70C‘C durante 1,5 h. A purificação por meio de cromatografia de fase reversa deu origem à mistura de isómeros do composto em epígrafe <E14) sob a forma de um s6lido branco. requer Μ 48Φ.

Ubservado BAR (M+H)1- 481. C, -,Η-,,-Ν, O^PNa^

Exemolo 15 iínida da N'" — C hl- ( C K ) -1 -fosfonogropi 1 ) - ( B ) - 3. euc i 1 j \ :~· } — l' J \— -imida zo1i n i1-1is i n a, sa1 dissódicD (EISA) e meti 1 a mi d,a da fí ^ ~ ÍN-! ( B) - 1 — f osf onoprcpi 1 ) — ( ) — 1 rra f t — - "3 1 — ( Q 'f — {\j £ — ( *' i-imidazolini1 -1- •i. J-l 1 -:ri. n :r:· c\ I CÍ X to- "Ξ> otí X C O ’ -2. 1 hj & ) ch3

Η HΝΐ> A mistura de diastereómeros em epígrafe (E15) foi preparada a partir da mistura de isómeros de ácido fosfónico (E12) (36,9 g, 0,0935 mmol), hidroiodeto de 2-meti1tio-2-imida-zolina í 45, ò mg e, depois de 3 h, 13,9 mg) e bicarbonato de sódio (47 mq e, depois de 3 h, 7,8 mg) por meio do método geral do E;-;emplo 14. * ibiervadu BAR í M+H) 5tí, C, Η_.7Ν , Gt-PNa, 19 o 7 o 5 requer M 50ó. 85

85 ?MU nl 1 i s i n a 3 - < S) -

Meti _i a rnida d -a__Ν'-* — Γ jsj — ( ( R ) — 1 — f os f on oe t i I ) ~ ( S ) — 1 euc E16 A ) e me t i lam i d a d a Ν'"1—Γ.Ν—( < 5 ) —1 —f oef onceti 1 ) —(S -1isina (EíáB)

(HO)2P o 0 éster de dibenailo (D43) <1,0 g, 0,0014 mol) foi hidrogenado à. pressão atmosférica por meio do método do Exemplo 1 de modo a pbter-se o composto em epígrafe num rendimento quantitativo sob a forma de um sólido cristalino branca.

Observado BAR (M+H)+ 381. C,requer M 380.

Claims (2)

1. ENSAIO }£ vIBIDOR DE COLAGENASE O teste é essencia 1mente realizado conforme se encontra descrita em Cawston e Barrett, Anal· Biochim. 99, 340-345 (1979). Os compostos para o teste são dissolvidos em metanol submetendo— -os a ultra-sons e são adicionados a colagenase (purificada a partir dos sobrenadamtes de culturas da linha de células do fi.broblasto do pulmão humana, WI-38) em tampão. Após uns 5 minutos de pré-incubação a 37 °C, os tubos de ensaio são arrefecidos até 4 °C e é adicionado colagénio do tipo I de pele de ratazana H "'-aceti lado. Os tubos de ensaio são incubados a 37 °C durante a noite. 0 '"‘H-colagénio forma fibrilas insolúveis, que são a substrato para a enzima. Para terminar o ensaio, os tubos de ensaio são girados a 12 O00 rpm durante 15 minutos. 0 'H-colagénio não digerida forma peletes, enquanto o colagénio-_‘H digerido se encontra na forma de peptídecis solúveis no sobrenadante. Uma amostra do sobrenadante é retirada para contagem de cintilação líquida. A actividade dos inibidores de colagenase (Cl 50’ concentração inibidora em 50 7.) ê expressa como a concentração de composto que inibe uma concentração conhecida (padrão) de enzima em 50 V.. 50 Os compostos dos Exemplos E1-E9 tinham valores de Cl entre 1,8 10 até Π O·, x 10 M

   REIVINDICAÇ3ES

   na qual R representa hidrogénio, alquilD C, , ou benzilo facultativa- 1 ~~£' mente substituído; Rj representa hidrogénio ou alquilo C^_^; R-, representa alquilo L'-,^; R-t representa - (CH^) NR^-R, , -(CH^) NHCOR-,, -(CH-J CQNH(CH^) - -* i π ja1 π / · -í. π C] IMR^R, , -<CH^) NRaC(=NRCJ)NRcrR, ou u α ^ π a V u o -(CH2)n-F '10 onde n é um inteiro desde 1 até 6 e cada um de Rcr J e R, representa 6 independentemente hidrogénio ou alquilo, ou e R^, em conjunto com o átomo de azoto ao qual estão ligados, formam um anel de 5, 6 ou 7 membros com um átomo facultativo de oxigénio ou de enxofre ou com um segundo azoto no anel facul tativamente substituído, R-j, representa alquilo ou - ‘"'*'*2 VWR5R6 ·' ^8 representa hidrogénio ou alquilo, RCJ

   representa, hidroqénio ou alquilo ou Rn e R_, em conjunto com os átomos de azoto aos quais estão ligados, formam um anel de b, 6 ou 7 membros facultativamente substituído, e R, 1 tf representa um anel piperidilo facultativamente substituído, m é 1 ou 2, e q é 2 até 4; e hh representa hidrogénio, alquila, e -CH„- (CH^,! OR,, ou -CH^-(CH^) OCOR' ou ^ n 1^; r13

   • 0 R14 onde n é um inteiro desde 1 até 6, Rjj, e representam hidrogénio ou alquilo Cj_6, e representa hidroxi ou -□-alqu.il C, , ou -NR^R, (onde R,_ e R, podem ser ligados para formarem um anel heterocíc1ico>5 caracterizado por compreender a conversão de um grupo Rv,^ em hidroqénio por meio de clivagem de um grupo R-,φ de um composto de íérmula (II):

   (II) Λ

   89 -m Que representa, alquilo, fenilo f acul tativamente substituído ou benzilo facultativamente substituído e R,-^ representa hidrogénio, alquilo, fenilo facultativamente substituído ou. benzilo facultativamente substituído e R't , R.-,, R-, e R4 são definidos da mesma maneira que para a fórmula (I), e, quando necessário, a conversão de R^ em hidrogénio, e, f acul tativamente, em seguida, a conversão do composto de fórmula (I) num outro composto de fórmula (I)„ 2§.. - Processo de acordo com a reivindicação 1, carac-terizado por se preparar um composto no qual R representa hidrogénio, metilo ou etilo. 3§. - Processo de acordo com as reivindicações 1 ou 2, caracterizado por se preparar um composto no qual representa hidrogénio, metilo, etilo, .isopropilo ou n-butilo. 4§. - Processo de acordo com qualquer u.ma das reivindicações 1 a 3, caracterizado por se preparar um composto no qual R0 representa n_-but.ilo, iso-butilo ou sec-butilo. 5êí. - Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado por se preparar um composto no qual representa NR_R. em que R,- e R. representam hidroqénio •1' Z. Γ1 o ò «_) O ou metilo, -(CH0> NHCORy onde Ry representa - (CH,> > , na qual m é 1 e Re e R, representam hidrogénio, -<0Ho> CONHfCH,-,) NR,-RA, onde q é 2 e Rg e em conjunto com o átomo de azotD ao qual estão ligados, formam um anel de 5, ó ou 7 membros, -(CH2>nNRg-C( =NR^)NRgR<jj onde R^, R^, Rg e R<^ representam todos hidrogénio, -(CH7 >nNRgC< =NR^)|\|RC-R^ onde R=j e R,^ em conjunto com os átomos de azoto aos quais estão ligados formam um anel 2-imidazolinilo facultativamente substituído, -(CH0)n~Rj^ onde Rj^ representa um 90 anel piperidilo facultativamente substituído e n é um inteira desde 1 até 4. 6:3. - Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado por se preparar um composto no qual P'4 represen tam metilo, etilo, - ( CH._,) ^OCH^ , -CH ( CH_,) CO^CH-, e -(CHo)o0H. 7é„ - Processo ds acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracteriçado por se preparar um composto no qual R representa hidrogénio, representa metilo ou etilo, R._, representa iso-buti lo. R-. representa -ÍCH^,) NR^Fc, onde n é 3 ou 4 e Rc e Fd representam ambos hidrogénio ou metilo, - (CH,-, > ^NHCOR-^ onde R-, representa -CH^CONH (CH^,) ^NR^R, onde Rc e R, são *i ‘ ai ai ai J ΰ U O tomados conjuntamente para formar um anel pirrolidina, -(CH?) - NRqC (=NR9) NR5R'6 onde n é 3 ou 4 e R^., R^, F\‘g e R^ representam todos hidrogénio, - (CH.-,) ^NRgC ( -NR^lNRgR^ onde R^ e Rr em conjunta com os átomos de azoto aos quais estão ligados formamm um anel 2-imidazolini1 o facu 1 tativamente substituído, e R, e R_ represen- ò α tam ambos hidrogénio, -<CH^) NHC(~NH>NH^ onde n é 3 ou 4 e n 2. -CH^-Rjq onde Rj^ representa 4-piperidi lo; e R'4 representa metilo ou. -(O-UJ^OH. acordo com qualquer uma. das reivindi-por se preparar um composto no qual o um asterisco na. fórmula (I) têm a Bè.. caçoes 1 a 7, centro quiral configuração - Processo de caracterizado marcado com terizado 9é. - Processo de por se preparar: acordo com a reivindicação 1, carac- Metilamida da Na-CN- ( (R) -1 -f cisf onopropi 1) -(S) - leuci 11 - (S) --1isina; Metilamida da U'A- l N - í (R > - í-f osf onopropi -qIici1-< S)-Iisina; Metilamida do ácido N—HN—<<R>—1—fosfonopropi1>—(S)—leuci13-— f>— L < 2-pirrol idinoeti 1 ) amidal-< S) -aspârtico; Metilamida da Na-CN-( (R) -1 - f osf onopropi 1 )-(3)-1 euc: 11 3 - ( S) ~ arqinina; I Meti lamida da Na-tN-~< (R)-l-fosfonopropil) - (S) - leuc i 1 '1-(R)-(?>--4-piperidil 'alanina; Meti .1 amida da Na- CM- ( < R)-1-fosfonopropi 1 ) - ( S ) -leuci 1 3- ( S > -β--< 4-piperidil)alanina; Metilamida da Na-CN-((R>-1-fosfonopropi1>-(3 >-leuci1 3-(3)--orni tina; Metilamida da M'"a-CM-< (R)-l-fosfonopropil)-(S)-leucilD-N'_-di-meti1-í S)~1isina; 3ΦΛ, (S)—Ieuc il3—N Metilamida da N^-CN-( <R>-1-fosfonopropi 1) - (S) - leuci 1 D-N^-di--meti1-(S >-ornitina; Meti 1amida da N^-CN—(< S >-1-fosfonopropi1>-(S)-leuci13-(3)--lisina, sal hidrobrometo;

   2-Hidroxietilamida da N,;a-CN-( (R)-1 -fosfonopropi 1)-(S)-leu-cil3-(S)-lisina;
2. 2-Hi.dro;<ieti lamida da N^-CN- ( < S) -1-f osf onopropi 1 ) - í S) -leu-cil3-(S>-lisina; Me 1.11 am i d a ..1 _ U d NJ~EN- i í F:)-1-fosf onopropi 1 >- < S)-1euci13 - (S) - -1 i s i n a ; Metilamida da NU-CN- <. (5) -1-fosf onopropi 3. ) - (S)-leuci13-íS)- -1isina; Meti 1amida d ct iM'^- E U- i {S ) -1 - f osf onopropi 1 ) - < S) — 1 euc. ii 3 — <S> — -arginina; Metilamida da Na--CN--< < R )-1-f osf onopropi 1 )- <S > —1euci 1 3 ™ ( S) — -homoarginin ia , sal dissódico; Meti 1amida da N^-EM-<(S)-l-fosfonopropi!)- (S)-leucil3-(S>- -homoargin ina, sal dissódico; Metilamida da N'a-C N- ( (R) -1 -f osf onopropi 1) - (S)—1euc i13-(S)- -N(2~imidazolini1)-lisina, sal dissódico; Meti Iamida da Nw—CN—((S)-1-fosfonopropi1)~(S)-leuci13-< S) — -Ní_-(2-imidazolini 1 ) —1 isina , sal dissódico; Meti 1amida da N^-CN-(<R)-1-fosfonoeti1) — (S)-leuci13-(S)-li-sina; Metilamida da Na-CN-((S)-l-fosfonoetil)-(S)-leucil3-(S)-li-sina; com 1Θ§„ - Processo para a preparação de uma composição farmacêutica, caracterizado por compreender a associação de um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, ou um seu sal, solva to ou. hidrato farmaceuticamente aceitável, um agente de suporte farmaceuticamente aceitável. - 93 - 1 lâ- Mé t· ocorre a degradação jd^ dê? prateinâceos da carpo. para □ tratamento de condições em que tecido conjuntivo e doutros componentes ;a.racter.izado por jiTipreender a adminis- tracSo, a um ha^pedeiro com necessidade desse tratamento, de uma Ά

   quantidade eficaz de um composto de acorda cam qualquer uma das reivindicações 1 até· S, sendo a gama de dosagem de composto* activo de apraximadamente 0,15 até 50 mg por quilograma de peso corporal por dia. Lisboa, 8 de Abril de 199]_

   J. PEREIRA DA CRUZ Agente Oficial da Propriedade Industrial RUA VICTOR CORDON. 10 A 3.· 1200 US80A