PT101010A

PT101010A - Derivados de fosforo, processo para a sua preparacao e seu uso em medicina

Info

Publication number: PT101010A
Application number: PT101010A
Authority: PT
Inventors: Roger Edward Markwell; Robert William Ward; David James Hunter
Original assignee: Smithkline Beecham Plc
Priority date: 1991-10-28
Filing date: 1992-10-27
Publication date: 1994-01-31
Also published as: MX9206191A; CA2122147A1; GB9122859D0; JPH07500600A; TW234127B; AU2783492A; ZA928258B; EP0612324A1; WO1993009136A1

Description

Ρ30181

MEMÓRIA DESCRITIVA O presente invento refere-se a novos derivados de fósforo, processos para a sua preparação e o seu uso em medicina. Em particular, o presente invento refere-se ao seu uso como inibidores dos enzimas metaloproteases neutras da família da colagenase, para tratamento de doenças artríticas e outras. A família de enzimas colagenase dos mamíferos, compreende um certo número de proteases, exemplificadas pela própria colagenase intersticial (tipo I), pelas estromelisinas (também conhecidas por proteoglicanases ou transinas), pelas gelatinases de leucócito polimorfonuclear e fibroblasto (também conhecidas por colagen-IV-ases) e pela "pump-l" ("metaloprotease putativa I, metaloprotease uterina”) [Goldberg et al, J. Biol. Chem. 2610, 6600, 1986; Whitham et al, Biochem. J. 240, 913, 1986; Breathnach et al, Nucleic Acids Res., 15, 1139, 1987; Muller et al, Biochem. J., 253, 187, 1988; Collier et al, J. Biol. Chem., 263, 6579, 1988; Murphy et al, Biochem. J., 258, 463, 1989; Quantin et al, Biochem. (N.Y.), 28, 5327, 1989; Birkedal-Hansen, J. Oral Pathol., 17, 445, 1988; P. Basset et al, Nature 348, 699, 1990]. A inclusão da família das colagenases de mamífero nas proteases é evidente pela posse de um certo número de propriedades altamente características e experimentalmente verificáveis, descritas em EPA 401963 (Beecham Group), que podem ser adoptadas como critério de alocação nesta família de enzimas.

Como exemplo particular do valor terapêutico dos inibidores da família de enzimas colagenase, tal como são descritos no presente invento, as doenças artríticas crónicas que conduzem a uma grande perda dos componentes de cartilagens, colagéneo, pro-teoglicano e elastina, dos ossos e dos tendões nas articulações, são passíveis de tratamento com os inibidores das colagenases, proteoglicanases (estromelisinas) e gelatinases que se pensa correntemente serem os principais enzimas envolvidos. Estes enzimas foram detectados em extractos de tecidos sinovial e cartilaginoso e têm sido estudados extensivamente em culturas de 74 483 Ρ30181 /" / / /

jSjN»;--· ' &¥' -2- tecidos de uma vasta gama de tecidos conjuntivos. Para além do controlo da biossíntese, secreção e activação dos enzimas, considera-se que a regulação natural mais importante destes enzimas nos estados normais e de doença é a produção endógena de inibi-dores tal como o mibidor das Metaloproteinases dos tecidos e a macroglobulina alfa-2. Um desequilíbrio entre os níveis locais dos enzimas proteolíticos e os seus inibidores naturais permitirá que ocorra a destruição dos componentes dos tecidos conjuntivos.

Os compostos descritos no presente invento, sendo inibidores sintéticos e de baixa massa molecular desta família de enzimas, oferecem um meio terapêutico útil, pelo qual um equilíbrio normal ou não patológico entre a actividade enzimática e a inibição pode ser restaurado: actuam assim como complemento e suplemento dos inibidores de enzimas endógenos. De facto, como estes enzimas normalmente actuam apenas dentro de domínios pericelulares restritos, antes de serem inactivados pelos inibidores que circulam no sangue e que estão presentes na maioria dos exsudados inflamatórios, os inibidores de baixa massa molecular aqui descritos podem ser mais eficazes do que os inibidores proteináceos endógenos que são excluídos, pelo seu tamanho, das regiões localizadas de destruição do tecido conjuntivo. Δ EPA-320118 (Grupo Beecham) descreve uma classe de derivados de fósforo com actividade como inibidores da colagenase e com utilidade no tratamento da artrite reumatoide e de doenças correlacionadas onde a actividade colagenolítica constitui um factor de contribuição.

Encontraram-se agora novos derivados de fósforo que são inibidores da colagenase e são portanto potencialmente úteis no tratamento de doenças em que esteja implicada a actividade colagenolítica e a reconformação de tecidos.

De acordo com o presente invento, proporciona-se um composto de fórmula geral (I), ou um seu sal: tr -3- -3- /. 74 483 Ρ30181

onde % é -(CH2)n-W onde n é 0-6 e W é amino, fenilo opcionalmente substituído, -CONRgRg, -NRgCORg, NR5C02CH2Rg OU NRgCONRgRg onde R5 é hidrogénio ou alquilo C1-C6 e R6 é hidrogénio, alquilo C-L-Cg, heteroarilo ou fenilo opcionalmente substituído, ou R5 e Rg, juntamente com o átomo de azoto ao qual estão ligados, formam um anel de 5, 6 ou 7 membros, com um átomo opcional de oxigénio ou de enxofre ou um segundo átomo de azoto opcionalmente substituído no anel, ou W é -S(0)p-R7 onde péO, 1 ou 2 e R7 é alquilo C^-Cg? ou W é um grupo de sub-fórmula (a), (b), (c) ou (d): O o 0 —Nv . A ' V-' W,''· V"-V 0 0 (a) (b) 0 -< / V py' - - Vy. VQ. 0 (c) (d) fórmula (a), (b) e (c), A representa α anel de arilo ou heteroarilo mono- ou bi-cíclico opcionalmente substituído e, na sub-fórmula (c) e (d), q é um número inteiro de 1 a 3; R2 é alquilo C3-Cg; 74 483 Ρ30181

R3 é hidrogénio, alquilo C^-Cg, -CH2-Z onde Z é heteroa-rilo ou fenilo opcionalmente substituído, -(CH2)rNR8R9, -(CH2)rNHCOR10, -(CH2)rNRi;LC(=NR12 )NRgRg, -(CH2)rCONH(CH2)gNRgRg ou -(CH2)r-R13, onde r é 1 a 6, sé2a4, cada Rg e R9 é, independentemente um do outro, hidrogénio ou alquilo C^-Cg, ou Rg e R9, juntamente com o átomo de azoto ao qual estão ligados, formam um anel de 5, 6 ou 7 membros com um átomo opcional de oxigénio ou de enxofre ou um segundo átomo de azoto opcionalmente substituído no anel, R10 © alquilo C^-Cg ou -(CH2)^NRgRg onde t é 1 ou 2 e R8 e R9 são como acima definidos, RX1 é hidrogénio ou alquilo C^-Cg ou R-q © Rg, juntamente com o átomo de azoto ao qual estão ligados, formam um anel de 5, 6 ou 7 membros, opcionalmente substituído, R12 é hidrogénio ou alquilo Ci-C6 e R3 é um anel piperidilo opcionalmente substituído ou R3 é um grupo: -ch-o-r14

I R15 onde R«l4 é hidrogénio, alquilo C-^-Cg ou benzilo opcionalmente substituído e R15 é hidrogénio ou alquilo Cj-C6í e R4 é hidrogénio, alquilo C^-Cg ou -(CH2)rNRgR9 onde r, Rg e R9 são definidos como para R3? ou R3 e R4 estão juntos um ao outro como _(CH2)m- onde m é um número inteiro de 4 a 12, ou R3 e R4 estão juntos como -(CH2)x-NR16-(CH2)y- onde x é um número inteiro de 1 a 9, y é um número inteiro de 2 a 10 e a porção -(CH2)x- está adjacente ao átomo de carbono que suporta R3 assinalado com um asterisco na fórmula (I), e R16 é escolhido entre hidrogénio, alquilo C-^-Cg, alcanoílo C2-Cg, alcoxicarbo-nilo C^-Cg, aroílo, aralquilo ou aralquiloxicarbonilo, onde em cada um destes a porção arilo está opcionalmente substituída.

Os grupos alquilo C-L-Cg (quer sozinhos quer como parte de um outro grupo) podem ser de cadeia linear ou ramificada.

Os substituintes opcionais para os grupos arilo e heteroa-rilo podem ser escolhidos entre OH, alquilo ci”c6/ alcoxi Cj^-Cg, halogéneo, -NHC0( alquilo C^-Cg), -NHCOPh e -CONR5R6, onde Ph é fenilo opcionalmente substituído e Rg e Rg são defini- -5- / / , 74 483 Ρ30181 dos como acima. 0 termo arilo inclui fenilo e naftilo.

Deverá entender-se que o termo heteroarilo inclui grupos heterocíclicos aromáticos contendo um ou mais heteroátomos e inclui grupos heteroarilo, de 5 ou 6 membros monociclicos e de 9 ou 10 membros bicíclicos que de preferência contêm um ou dois heteroátomos escolhidos entre azoto, oxigénio e enxofre. Quando Z for heteroarilo bicíclico de 9 ou 10 membros, os dois anéis estarão fundidos com um anel de 5 ou 6 membros de preferência contendo um único heteroátomo, por exemplo, indolilo.

Quando os grupos Rg e Rg ou Rg e Rg se combinam com o seu átomo de azoto ao qual estão ligados para formar um anel hetero-cíclico, constituem exemplos de estruturas de anel adequadas a piperidina ou a pirrolidina, piperazina e a morfolina. Quando estes grupos contiverem um segundo heteroátomo de azoto, este poderá estar opcionalmente substituído, por exemplo, por um grupo alquilo Cj^-Cg. R-l é, adequadamente, -(CH2)n-W onde n é 0, 1, 2 ou 3. W é, adequadamente, amino, fenilo, N-ftalimido ou 1,8-naf-talenodicarboxamido, podendo cada um destes estar opcionalmente substituído, NHCO2CH2R5 onde Rg é fenilo opcionalmente substituído ou S(0)pCH3 onde p é 0, l ou 2.

De preferência, é 2-hidroxifenilo, -(CH2)n-W onde n é 2 e W é amino, fenilo, 2-hidroxifenilo, NHCC^CI^Ph, N-ftalimido, 4-bromo-l,8-naftalenodicarboxamido, 7,9-dioxo-8-azaspiro[4,5]de-cilo, metilmercapto, metilsulfinilo ou metilsulfonilo, ou R·^ é -(CH2)n-W onde nél, 2 ou 3 e W é um grupo 1,8-naf talenodicarboxamido . R2 é, adequadamente, um grupo alquilo C4, como o n-butilo, iso-butilo ou sec-butilo. De preferência R2 é iso-butilo. λ / 74 483 Ρ30181 ·' /

-6- V_P- r , R3 é, adequadamente, benzilo, alquilamino Cj-Cg, 4-hidroxi-benzilo, (alcoxi C-^-Cg) benzilo como o 4-metoxibenzilo ou um heteroarilmetilo bicíclico fundido de 9 ou 10 membros como o 3-indolilmetilo. De preferência R3 é benzilo, 4-metoxibenzilo, —(CH2)4NH4 ou 3-indolilmetilo. R4 é, adequadamente, metilo, etilo ou - (CH2) rNRgRg. De preferência R4 é metilo ou -(CH2)2NRgR9 onde Rg e Rg são ambos hidrogénio ou Rg e Rg, juntamente com o átomo de azoto ao qual estão ligados, formam um anel de pirrolidina ou de N-metilpipe-razina.

Adequadamente, quando os grupos R3 e R4 estão combinados como -(CH2)m- então m=10, do que resulta uma estrutura lactâmica baseada num anel de 13 membros.

Adequadamente quando os grupos R3 e R4 se combinam como - (CH2) χ-NR^g - (CH2) y— então x e y terão valores tais que R3 e R4 formam parte de uma estrutura azalactâmica de 11 a 16 membros e Rlg será hidrogénio, metilo, benzilo, t-butoxicarbonilo ou ben-ziloxicarbonilo.

De preferência, quando os grupos R3 e R4 estão combinados, formam um grupo -(CH2)10-.

Os compostos particulares deste invento incluem: N- [N-(1—fosfono-1—(2-hidroxifenil)metil)-leucil]-N,O-dime-til-(S)-tirosinamida, N-[N-(1-fosfono-3-(1,8-naftalenodicarboximida)propil)-(S)--leucil]-N-O-dimetil-(S)-tirosinamida, N-[N-(l-fosfono-3-ftalimidopropil)-(S)-leucil]-(s)-fenila-lanina-N-metilamida, N-[N-(l-fosfono-4-(1,8-naftalenodicarboximido)butil)-(S)--leucil]-(S)-fenilalanina-N-metilamida, N-[N-(l-fosfono-2-(1,8-naftalenodicarboximido)etil-(S)-leucil ]-(S)-fenilalanina-N-metilamida, N-[N-(l-fosfono-3-(1,8-naftalenodicarboximido)propil-(S)--leucil]-(S)-fenilalanina-N-metilamida, , !>' 4* -7- 74 483 Ρ30181 Ν-[Ν- (1-fosfοηο-3-fenilpropil)-(S)-leucil]-(S)-fenilalani-na-N-metilamida, Ν-[N—(1—fosfono—3—(4—bromo—1,8-naftalenodicarboximido)pro-pil)-(S)-leucil]-(S)-fenilalanina-metilamida, N-[N-(1-fosfono-3-(benziloxicarbonilamina)propil)-(S)-leucil ]-(S)-fenilalanina-metilamida, Ν-[N-(1-fosfono-3-(2-hidroxifenil)propil)-(S)-leucil]-(S)--fenilalanina-metilamida, Ν-[N-(1-fosfono-3-(metilmercapto)propil-(s)-leucil]-(S)-fe-nilalanina-N-metilamida, N- [N-( 1-f osf ono-3-(metilsulf inil )propil-(S) -leucil] - (S) -fe-nilalanina-N-metilamida, Ν-[N-(1-fosfono-3-(metilsulfonil)propil-(S)-leucil]-(S)-fe-nilalanina-N-metilamida, Ν-[N-(1-fosfono-3-(1,8-naftalenodicarboximido)propil)-(S)--leucil]-(S)-triptofano-N-metilamida, Ν-[N-(1-fosfono-3-(1,8-naftalenodicarboximido)propil)-(S)--leucil]-(S)-lisina-N-metilamida, Ν-[N-(1-fosfono-3-(1,8-naftalenodicarboximido)propil)-(S)--leucil]-(-)-aminoazaciclotridecan-2-ona, Ν-[N-(1-fosfono-3-(1,8-naftalenodicarboximido)propil)-(S)--leucil]-(S)-lisina-N-(aminoetil)amida, Ν-[N-(1-fosfono-3-(1,8-naftalenodicarboximido)propil)-(S)--leucil]-(S)-lisina-N-(etilpirrolidina)amida, Ν-[N-(1-fosfono-3-(1,8-naftalenodicarboximido)propil)-(S)--leucil]-(S)-lisina-N-(etil-N-metilpiperazina)amida, Ν-[N-(l-fosfono-3-[8-(7,9-dioxo-8-azaspiro[4,5]decil)]propil- (S)-leucil]-(S)-fenilalanina-N-metilamida, ou Ν-[N-(1-fosfono-3-[8-(7,9-dioxo-8-azaspiro[4,5]decil)]-propil-(S)-leucil]-(S)-lisina-N-metilamida, e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis.

Os compostos de fórmula (I) podem formar sais com bases como p. ex. o hidróxido de sódio. Os compostos de fórmula (I) têm um átomo de azoto básico e podem formar sais de adição de ácidos, p. ex., hidrocloretos, hidrobrometos, sulfatos, fosfatos, acetatos, fumaratos, maleatos, citratos, lactatos, tartaratos, oxalatos e outros sais de adição de ácidos / / / 74 483

Ρ30181 -8- semelhantes. Estes compostos fazem parte do presente invento.

Os compostos de fórmula (I) têm pelo menos dois e podem ter três ou mais centros assimétricos e existir, assim, em mais de uma forma estereoisomérica. 0 invento abrange todas essas formas e suas misturas, incluindo racematos e misturas de

I diastereoisómeros.

Os isómeros preferidos são aqueles que têm a configuração (S)— ou (-)- no centro quiral que suporta R3 quando R3 for diferente de hidrogénio, e aqueles que têm a configuração (S)— rio centro quiral que suporta R2, ambos marcados com um asterisco na fórmula (I). O presente invento também proporciona um processo de preparação de um composto de fórmula (I) que compreende a clivagem de um grupo R20 d® um composto de fórmula (II):

(II) onde R2q é um alquilo c±~cQr fenilo opcionalmente substituído ou benzilo opcionalmente substituído e R21 é hidrogénio, alquilo Ci-C6 ou benzilo opcionalmente substituído e R1# R2, R3 e R4 são definidos como para a fórmula (I), e, quando necessária, a conversão de R21 em hidrogénio por uma reacção de clivagem adicional. A clivagem de R2q e, quando necessário, a de R21, podem ser conduzidas em meio aquoso ácido ou alcalino ou usando um halogeneto de trimetilsililo, de preferência o bromotrimetilsilano, num solvente inerte, p. ex., o diclorometano. Os ésteres benzilicos podem, em alternativa, ser removidos por hidrogenólise ou por outros processos comuns de desbenzilação.

Quando ambos R20 e R2i f°rem alquilo C^-Cg, a clivagem de 74 483 / Ρ30181

-9- apenas R20 para dar um composto de fórmula (II) onde R2q seja hidrogénio e R21 seja alquilo C^Cg, pode ser realizada por tratamento com base em excesso, em condições suaves, por exemplo, com hidróxido de sódio aquoso num solvente alcoólico à temperatura ambiente.

Analogamente, quando R20 for benzilo opcionalmente substituído e R2i for alquilo C^-Cg, o grupo benzilo só poderá ser clivado por hidrogenólise para se obter um composto de fórmula (II) onde R20 seja hidrogénio e R21 seja alquilo C^-Cg. A clivagem de um R21/ como grupo alquilo C1-Cg, pode depois ser realizada como acima se descreveu para se obter o composto de fórmula (I).

Quando R21 não for hidrogénio, então a clivagem tanto de R2i como de R20 realiza-se convenientemente numa única reacção. De preferência R20 e R2i são ambos alquilo C^-Cg, tais como metilo ou etilo, ou r2q e R2i/ são ambos benzilo.

Crê-se que os compostos de fórmula (II) são novos e constituem um outro aspecto do invento.

Os compostos de fórmula (II) podem ser preparados tratando um composto de fórmula (III):

(III) onde R1# R2, r20 e R21 são definidos como para a fórmula (II) (com a excepção de R21 não ser H), com um composto de fórmula

O

(IV) (IV) -10- 74 483 Ρ30181 ΟΦ*’’' onde R3 e R4 são definidos como para a fórmula (I) A reacção realiza-se de preferência na presença de um agente de acoplamento, como a diciclo-hexilcarbodiimida ou o hidrocloreto de l-etil-3-[3-(dimetilamino)propil]carbodiimida, na presença de 1-hidroxibenzotriazolo ou usando 1,1'-carbonildi-imidazolo, num solvente inerte como o diclorometano ou o acetonitrilo. A clivagem selectiva do grupo R21 pode realizar-se ulteriormente usando os processos àçima descritos para a preparação dos compostos de fórmula (I) para se obterem compostos de fórmula (II) onde R21 é hidrogénio.

Em alternativa, os compostos de fórmula (II) onde R2q e R21 são alquilo C^-Cg ou benzilo opcionálmente substituído, podem ser preparados por reacção de um composto de fórmula (V):

(V) onde R2, R3 e R4 são definidos como para a fórmula (I), com um composto de fórmula (VI):

onde Rx é definido como para a fórmula (I), R20 e R21 são alquilo C^-Cg ou benzilo opcionalmente substituído e R17 é um grupo que se despede, como halogéneo, metanossulfoniloxi ou tri-fluorometanossulfoniloxi, na presença de uma base como a trie-tilamina ou uma Esponja de Protões (1,8-bis(dime-tilamino)naftaleno), ou usando carbonato de potássio anidro num solvente alcoólico. 74 483 Ρ30181 -11

Quando R17 for um grupo que se despede com base em oxigénio, p. ex. o trifluorometanossulfoniloxi, o qual é preferido, o deslocamento do grupo que se despede é convenientemente realizado na presença da Esponja de Protões num solvente inerte, como o acetonitrilo ou o diclorometano, ao longo de um período de vários dias, na ausência de luz.

Numa outra alternativa, os compostos de fórmula (II) onde R2q e R2^ são alquilo C-^-Cg, arilo opcionalmente substituído ou benzilo opcionalmente substituído, podem ser preparados por reacção de um composto de fórmula VII:

(VII) O r3 onde R·^, R2, R3 e R4 são definidos como para a fórmula (I) com um composto de fórmula (VIII): OSí(R18)3

(VIII) onde R«Lg é alquilo C-^-Cg e R20 e R21 são definidos como para a fórmula (II), com a condição de que R21 não seja hidrogénio, e removendo depois o grupo protector do ácido fosfónico. A reacção é adequadamente realizada num solvente orgânico como o diclorometano, a temperatura reduzida, p. ex., -10 a 5°C.

Os compostos intermediários de fórmula (III) podem ser preparados tratando um composto de fórmula (IX) ou um seu sal:

R

/

(IX)

74 483 Ρ30181 -12- onde Rlf R2q e R21 s^° definidos como para a fórmula (III), com um composto de fórmula (XA) ou (XB) ou um seu sal:

O CO2R19 (XB) onde R2 é definido como para a fórmula (I), R17 é definido como para a fórmula (VI) e R19 é hidrogénio ou um grupo protector de carboxilo, e removendo depois o grupo protector de carboxilo R19 *

Quando se usa um composto de fórmula (XB), a aminação redu-tiva pode realizar-se por hidrogenação com um catalisador de metal nobre, tal como o paládio sobre carbono, ou por reacção com cianoboro-hidreto de sódio a pH 6-7. Para ambas as reacções são adequados os solventes de álcoois de alquilos inferiores, como o metanol e o etanol. Estas reacções podem realizar-se na presença de peneiros moleculares.

Prefere-se uma reacção de hidrogenação mas este processo exclui o uso dos compostos de fórmulas (IX) e (XB) onde qualquer dos grupos R20, R21 ou R19 ® benzilo. De preferência o grupo protector de carboxilo é um éster metílico ou etílico. Os grupos protectores ésteres podem ser removidos sob condições comuns de hidrólise básica, usando uma base diluída como o hidróxido de sódio aquoso IN em metanol.

Quando o composto de fórmula (IX) se encontra sob a forma de base livre, o composto de fórmula (XB) é adequadamente um a--cetoéster (R19 = alquilo C^-Cg).

Quando o composto de fórmula (IX) é um sal, p. ex. como o sal hidrocloreto, o composto de fórmula (XB) será adequadamente um sal de um α-ceto-ácido (R19=H), p. ex. o sal de sódio. A preparação de compostos de fórmula (III), usando um com- 74 483 Ρ30181 posto de fórmula (XA), pode realizar-se nas condições clássicas da alquilação. Um grupo que se despede halogéneo é de preferência o bromo e um grupo de substituição baseado em oxigénio é de preferência o trifluorometanossulfoniloxi.

Os compostos de fórmula (III) podem, em alternativa, ser preparados condensando um composto dê fórmula (XI) ou um seu sal:

onde R2 é definido como para a fórmula (I) e Rig é um grupo pro-tector de carboxilo com um aldeído R^^-CHO, onde R-l é definido como para a fórmula (I) e tratando o produto da condensação com um fosfito apropriado, p. ex. o dimetilfosfito, difenilfosfito ou dibenzilfosfito, removendo depois o grupo protector de carboxilo. 0 grupo carboxilo está convenientemente protegido sob a forma de um éster alquílico ou benzílico que pode ser removido usando condições comuns de hidrólise ou hidrogenação.

Tal como acima se descreveu em relação à aminação redutiva de compostos de fórmula (XB) onde o grupo protector benzilo R19 é removido por hidrogenação, também R20 e R2-j_ estão restritos a serem alquilo C^-Cq.

Numa outra alternativa, os compostos de fórmula (III) podem ser preparados tratando um composto de fórmula (XII):

Ro (XII)

RtCH=N X02R19 onde R-l e R2 são definidos como para a fórmula (I) e R^g é um grupo protector de carboxilo definido como para a fórmula (XI) com um composto de fórmula (VIII), como atrás se definiu, usando as condições descritas para a reacção dos compostos de fórmulas Ρ30181 -14-

(VII) e (VIII).

Uma outra preparação alternativa de compostos de fórmula (III) pode ser realizada fazendo reagir um composto de fórmula (VI), como atrás se definiu, com um composto de fórmula (XI), como atrás se definiu, usando as condições descritas para a reacção dos compostos de fórmula (V) com compostos de fórmula (VI), e removendo depois o grupo protector Rig.

Os grupos adequados de protecção de carboxilo incluem grupos alquilo, benzilo e trialquilsililo. Um grupo protector tri-alquilsililo, p. ex. trimetilsililo, é especialmente útil pois pode ser facilmente incorporado "in situ", p. ex., por adição de hexametildissilazano aos reagentes em acetonitrilo, na presença de trietilamina, e pode ser removido selectivamente em metanol aquoso, sem impor quaisquer limitações aos valores de R20 e 1*21* Outros agentes de sililação incluem o cloreto de trimetilsililo e a N,N-dietiltrimetilsililamina.

Um grupo alquilo R19, protector de carboxilo, pode ser removido por hidrólise básica, por exemplo usando hidróxido de sódio em metanol aquoso.

Note-se que quando o grupo protector de carboxilo Rig for alquilo, R2q e R21 podem ser derivados de alquilo ou benzilo, mas quando Rig for um grupo benzilo, R20 e R21 estarão limitados a ser alquilo.

Quando se preparam por esta via compostos de fórmula (III), prefere-se que R2q e R21 seÍam benzilo e R17 seja trifluorometanossulfoniloxi no composto de fórmula (VI) e R19 seja trimetilsililo ou metilo no composto de fórmula (XI).

Os compostos de fórmula (V) podem ser preparados tratando um composto de fórmula (XIII);

(XIII) -15- 74 483 Ρ30181 onde R2 é definido como para a fórmula (I) e onde o grupo amino está opcionalmente protegido, com um composto de fórmula (IV), como atrás se definiu, na presença de um agente de acoplamento, como atrás se descreveu para a preparação de compostos de fórmula (II) a partir de compostos de fórmulas (III) e (IV).

Os compostos de fórmula (VII) podem ser preparados por reacção de um aldeído ^-CHO, onde é definido como para a fórmula (I), com uma amina de fórmula (V), como atrás se definiu, num solvente orgânico como o diclorometano, a temperatura reduzida (p. ex. -io a 5°C), na presença de sulfato de magnésio.

Os compostos de fórmula (VIII) podem ser preparados por reacção do fosfito correspondente, p. ex. o dimetilfosfito ou o dibenzilfosfito com um halogeneto de trialquilsililo, p. ex. o cloreto de trimetilsililo, num solvente inerte como o diclorometano, a pressão reduzida (p. ex. -10 a 5eC) na presença de uma base como uma trialquilamina.

Os compostos de fórmula (VI) podem ser preparados a partir de derivados de hidroxialquilfosfonatos por conversão do grupo hidroxilo no grupo que se despede R17 pelos métodos convencionais. Por exemplo, quando R17 é trifluorometanossulfoniloxi, pode juntar-se anidrido trifluorometanossulfónico a uma solução do hidroxialquilfosfonato, num solvente inerte como o diclorometano, realizando-se a reacção a temperatura reduzida, sob atmosfera inerte, de acordo com o método geral de E. Vedejs et al., Journal of Organic Chemistry 50, 2165 (1985).

Os compostos hidroxialquilfosfonato podem por seu turno ser preparados por reacção do fosfito correspondente, p. ex. o dibenzilfosfito, com um aldeído R^^-CHO onde R-l é definido como para a fórmula (I), de acordo com o método geral de F. Texier--Boullet e A. Foucaud, Synthesis, 916 (1982). Os benzil- e al-quil-fosfitos estão ambos disponíveis no comércio ou podem ser preparados a partir de materiais iniciais disponíveis, por métodos comuns. -16- -16- rv_- ?V/ 74 483 Ρ30181

Os compostos intermediários de fórmula (IX) ou são já conhecidos ou podem ser preparados a partir de derivados de ácidos aminoalquilfosfónicos, usando procedimentos comuns para introduzir R2o e R2i» conforme pretendido. Pode ser necessária a protecção da função amina durante estas reacções. A introdução de um grupo metilo R20 ou R2l Pode efectuar-se por reacção com diazoraetano num solvente inerte adequado.

Os compostos de fórmula (IX) de uma configuração fixa podem ser preparados pelo método geral de R. Jacquier et al., Phopho-rus and Sulfur 36, 73, 1983.

Os compostos de fórmulas (IV) e (XIII) são derivados de aminoácidos já conhecidos ou podem ser preparados a partir destes derivados por métodos já conhecidos. Os compostos de fórmula (XA) e (XB) são compostos já conhecidos ou podem ser preparados a partir de compostos conhecidos por métodos também conhecidos.

Os compostos de fórmula (XII) podem ser preparados a partir de um aldeído Rj^-CHO, atrás definido, e de um composto de fórmula (XI), atrás definido, por um processo análogo ao descrito para a preparação de compostos de fórmula (VII).

Os intermediários de fórmulas (II), (III) e certos intermediários de fórmula (IX) aqui descritos, são compostos novos e constituem um aspecto do presente invento bem como os processos descritos para a sua preparação.

Quando se devam obter, os sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos de fórmula (I) podem ser preparados do modo convencional, por reacção com o ácido ou base adequados.

Como anteriormente se mencionou, os compostos de fórmula (I) existem em mais do que uma forma diastereoisomérica. Quando os processos do invento produzirem as suas misturas, os isómeros individuais podem ser separados uns dos outros por cromatogra-fia, p. ex. cromatografia em coluna ou HPLC. 74 483

P30181 c Τ·-

17 C'

Em alternativa, os compostos diastereoisoméricos de fórmula (I) separados, podem ser obtidos utilizando materiais de partida estereoisomericamente puros ou por separação dos isómeros pretendidos dos compostos intermediários em qualquer fase do processo sintético global, e convertendo esses intermediários em compostos de fórmula (I).

Note-se que quando se prepara um único distereoisómero de um composto de fórmula (I) por mais de uma das variantes do processo atrás descritas, onde cada uma das quais permite que seja definido um centro quiral diferente, pode ser possível deduzir a configuração num centro quiral que não seja o predeterminado usando uma variante em particular do processo.

Além disso, note-se que ainda que a configuração com vim dado centro quiral possa não ser conhecida, é possível caracteri-zar um dado diastereoisómero em relação ao seu epímero ou em relação a outro diastereoisómero, recorrendo à espectroscopia de RMN ou à rotação óptica.

Num outro aspecto, o presente invento proporciona compostos de fórmula (I) ou os seus sais farmaceuticamente aceitáveis para uso como agentes terapêuticos activos, particularmente como agentes para tratamento de estados em que ocorra degradação do tecido conjuntivo e de outros componentes proteicos do corpo, tais como distúrbios músculo-esqueléticos resultantes da actividade colagenolítica, particularmente o reumatismo e/ou estados artríticos, e a remodelação de tecidos.

Os compostos de fórmula (I) têm também utilidade potencial no tratamento do cancro; na prevenção da degradação da mielina no sistema nervoso central e periférico; no tratamento ou prevenção de danos no cólon p. ex. a doença do intestino irritável; e noutros estados em que os membros da família da colagenase das metaloproteases neutras desempenhem papéis patológicos ou outros. 0 presente invento proporciona ainda uma composição -18- -18- V" 'Wi 74 483 Ρ30181 farmacêutica que compreende um composto de fórmula (I), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, e um transportador farmaceuticamente aceitável.

Uma composição deste invento é útil no tratamento de distúrbios músculo-esqueléticos, em particular doenças artríticas e para a modulação da remodelação de tecidos, tendo também utilidade potencial no tratamento das doenças acima descritas.

Uma composição do invento, que pode ser preparada por mistura, poderá conter um diluente, ligante, carga, desintegrante, agente saborizante, agente corante, lubrificante ou conservante, do modo habitual. Estes excipientes convencionais podem ser utilizados de modo convencional, p. ex. na preparação de composições de inibidores relacionados com enzimas peptídicos, como o inibidor de ACE enalapril.

Uma composição do invento pode ser adaptada à administração oral, tópica, rectal ou parentérica, mas prefere-se a administração oral. As composições parentéricas podem ser administradas por via intravenosa, intramuscular, intra-articular, intradérmi-ca, subcutânea ou no fluido cérebro-espinal.

De preferência, uma composição farmacêutica do invento encontra-se na forma de dosagem unitária e sob uma forma adaptada ao uso nos campos da medicina ou da veterinária. Por exemplo, estas preparações podem estar em embalagem acompanhada por instruções escritas ou impressas para uso como agentes no tratamento ou profilaxia de qualquer dos distúrbios acima mencionados . A gama de dosagem adequada dos compostos do invento pode variar de composto para composto e pode depender do estado a ser tratado. Dependerá também, inter alia, da relação entre a sua potência e o seu grau de absorção e do modo de administração escolhido. 0 composto ou composição do invento pode ser formulado para / / Δ. 74 483 Ρ30181 .....r, -:— 1¾¾ -19- ser administrado por qualquer via, estando a via preferida dependente do distúrbio para o qual é necessário tratamento, e en-contra-se de preferência sob a forma de dosagem unitária ou sob uma forma que um paciente humano possa administrar a si próprio numa única dosagem.

As composições podem, por exemplo, encontrar-se sob a forma de comprimidos, cápsulas, saquetas, pequenos frascos, pós, grânulos, trociscos, pós reconstituíveis ou preparações líquidas, por exemplo soluções ou suspensões, ou supositórios.

As composições, por exemplo aquelas que sejam adequadas a administração oral, podem conter excipientes convencionais como agentes de ligação, p. ex. xarope, acácia, gelatina, sorbitol, tragacanto ou polivinilpirrolidona; cargas, p. ex. lactose, açúcar, amido de milho, fosfato de cálcio, sorbitol ou glicina; lubrificantes de comprimidos, p. ex. estearato de magnésio; de-sintegrantes, p. ex. amido, polivinilpirrolidona, amido--glicolato de sódio ou celulose microcristalina? ou agentes molhantes farmaceuticamente aceitáveis como o laurilsulfato de sódio.

As composições sólidas podem ser obtidas pelos métodos convencionais de mistura, enchimento, produção de comprimidos ou semelhantes. Podem usar-se operações repetidas de mistura para distribuir o princípio activo pelas composições que utilizam grande quantidade de cargas. Quando a composição se encontra sob a forma de comprimido, pó ou trocisco, pode usar-se qualquer veículo adequado para formular composições farmacêuticas sólidas, sendo disso exemplo o estearato de magnésio, amido, glucose, lactose, sacarose, farinha de arroz e cré. Os comprimidos podem ser revestidos de acordo com métodos já bem conhecidos na prática normal farmacêutica, em particular com um revestimento entérico. A composição pode também encontrar-se sob a forma de uma cápsula ingestível, por exemplo, de gelatina contendo o composto e, se tal for pretendido, com um veículo ou outros excipientes. Por exemplo, numa cápsula de gelatina dura, contendo a quantidade pretendida de um composto do invento sob a 74 483 Ρ30181

Ψ -20- forma de pó ou de granulado em mistura íntima com um lubrificante, como o estearato de magnésio, uma carga, como a celulose microcristalina, e um desintegrante, como o amido-glicolato de sódio.

As composições para administração oral como líquidos podem encontrar-se sob a forma de , p. ex., emulsões, xaropes ou elixires, ou podem apresentar-se como um produto seco para ser reconstituído com água ou com outro veículo adequado, antes de ser usado. Estas composições líquidas podem conter aditivos convencionais como os agentes de suspensão, p. ex. sorbitol, xarope, metilcelulose, gelatina, hidroxietilcelulose, carboximetilcelulose, gel de estearato de alumínio, gorduras edíveis hidrogenadas; agentes emulsionantes, p. ex. lecitina, monooleato de sorbitano ou acácia; veículos aquosos ou não aquosos que incluem óleos edíveis, p. ex. óleo de amêndoas, óleo de coco fraccionado, ésteres oleosos, p. ex. ésteres de glicerina, ou propilenoglicol, ou álcool etílico, glicerina, água ou solução salina normal; conservantes p. ex. p-hidroxibenzoato de metilo ou de propilo ou ácido sórbico e, se tal for pretendido, agentes saborizantes ou corantes, convencionais.

Os compostos deste invento podem também ser administrados por via não oral. De acordo com a rotina farmacêutica, as composições podem ser formuladas p. ex. para administração rectal como supositório, ou para administração parentérica sob forma injectável. Para injecção, p. ex. por injecção intra-articular ou por injecção no fluido cérebro-espinal ou por outras vias que deem acesso aos locais de desmielinação, como a injecção intramuscular, intradérmica ou subcutânea, como soluções livremente solúveis ou como depósitos fracamente dispersos, os compostos do invento podem apresentar-se em solução aquosa ou não aquosa, suspensão ou emulsão num líquido farmaceuticamente aceitável, p. ex. em água estéril isenta de pirogéneos ou num óleo parentericamente aceitável ou numa mistura de líquidos, que pode conter agentes bacteriostáticos, anti-oxidantes ou outros conservantes, tampões ou solutos para tornarem a solução -21- 74 483 Ρ30181

(W

U isotónica com o sangue, agentes espessantes, agentes de suspensão ou outros aditivos farmaceuticamente aceitáveis. Estas formas deverão apresentar-se sob a forma de dose unitária estéril, como as ampolas ou dispositivos de injecção descartáveis ou em formas de doses múltiplas como num frasco a partir do qual se retira a dose apropriada ou em forma sólida ou em concentrado que possa ser usada na preparação de uma formulação injectável.

Para administração tópica e percutânea, as preparações podem também apresentar-se como unguento, creme, loção, gel, pulverização, aerossol, lavagem, pintura da pele ou penso.

Uma dose unitária para tratar doenças em que estejam envolvidos enzimas da família das colagenases, conterá geralmente de 10 a 1000 mg e de preferência conterá de 10 a 500 mg, em particular 10, 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450 OU 500 mg. A composição pode ser administrada uma ou mais vezes por dia, por exemplo 2, 3 ou 4 vezes por dia, de modo a que a dose total diária para um adulto de 70 kg esteja normalmente na gama de 10 a 3000 mg. Esta dosagem corresponde a aproximadamente 0,15 a 50 mg/kg por dia. Em alternativa, em particular para o caso da injecção, a dose unitária conterá 2 a 200 mg de um composto do invento e, se tal for desejado, poderá ser administrada em múltiplos para se obter a dose diária pretendida. 0 presente invento proporciona ainda um método para tratar casos em que ocorre degradação do tecido conjuntivo e de outros componentes proteicos do corpo, que compreende a administração ao mamífero necessitado de tal tratamento, de uma quantidade eficaz de um composto de fórmula (I) ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável. 0 presente invento proporciona também a utilização de um composto de fórmula (I) ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável, para o fabrico de um medicamento para uso no tratamento de casos em que ocorre a degradação do tecido conjuntivo e de outros componentes proteicos do corpo. /ψ '' ' / 74 483 , Ρ30181 .'V "· f·-/// -22- ^

As seguintes Descrições e Exemplos ilustram a preparação dos compostos do invento. Todas as temperaturas se expressam em °C.

Descrição 1 N-ri-(dietoxifosfinil)-l-(2-hidroxifenil)metil1-leucina. éster benzilico (Dl)

Aqueceram-se em refluxo durante 2 h num aparelho de Dean-Stark salicilaldeído (1,83 g), sal p-toluenossulfonato de éster benzilico de leucina (5,9 g) e trietilamina (2,1 ml) em tolueno (100 ml). Arrefeceu-se a solução e removeu-se o solvente no vácuo. Juntou-se dietilfosfito (3,2 g) e aqueceu-se a solução a 120°C durante 24 h. Arrefeceu-se a mistura reaccional e a cromatografia em coluna em silica-gel, eluindo com acetato de etilo, originou o composto do título como um óleo amarelo (2,8 g) ·

Descrição 2 N-ri-fdietoxifosfinil)-1-(2-hidroxifenilimetil1-leucina (D2)

Preparou-se o composto do título (1,0 g) a partir de (Dl) (1,4 g) por hidrogenação à pressão atmosférica sobre 10% de paládio em carvão vegetal, em etanol.

Descrição 3 N-ΓΝ-(1-dietoxifosfinil-1-(2-hidroxifenil^metil)leucil1-N.0-di-metil-L-tirosinamida (D3)

Uma solução de N-[l-(dietoxifosfinil)-1-(2-hidroxifenil)me-til]-leucina (D2) (0,5 g) em acetonitrilo seco, foi arrefecido a 0eC em banho de gelo e juntou-se l,l#-carbonildiimidazolo. Manteve-se a mistura a 0°C durante lhe depois juntou-se gota a gota, com agitação, 0-metil-(S)-tirosina-N-metilamida, no volume mínimo de acetonitrilo. Deixou-se a mistura aquecer até temperatura ambiente, agitou-se por mais 2 dias e depois evaporou-se até à secura. Retomou-se o resíduo em clorofórmio e lavou-se com ácido cítrico diluído e com água. Secou-se a camada orgânica com sulfato de sódio anidro, filtrou-se e evaporou-se até à secura, obtendo-se o produto em bruto. Por purificação por cromatografia em coluna em sílica-gel, inicialmente com clorofórmio e subindo / /

74 483 Ρ30181 -23 até 10% de metanol/clorofórmio como eluente, obteve-se o composto do título (0,43 g).

Observou-se EI M+563.

Descrição 4 3-(1.8-naftalenodicarboximido)propanol (D4)

Dissolveu-se 3-amino-l-propanol (3,75 g) em diclorometano (500 ml) e dimetilformamida (50 ml) e juntou-se anidrido naftá-lico (9,9 g) seguido de trietilamina (6,9 ml). Agitou-se a solução à temperatura ambiente durante 2 h, juntou-se 1-hidroxi-benzotriazolo (8,75 g) e hidrocloreto de l-etil-3-(3-dimetil-aminopropil)carbodiimida (13,4 g) e agitou-se a solução à temperatura ambiente durante 24 h. Filtrou-se a solução, lavou-se com água, ácido clorídrico IN, solução saturada de bicarbonato de sódio e secou-se sobre sulfato de sódio anidro. Filtrou-se a solução e evaporou-se o solvente no vácuo, obtendo-se o composto do título como um sólido, amarelo-claro (7,5 g).

Descrição 5 3-(1r 8-naftalenodicarboximido)propanal (D5)

Uma solução de cloreto de oxalilo (3,5 ml) em diclorometano (100 ml) foi arrefecida até -60°C e juntou-se lentamente, ao longo de 15 min, dimetilsulfóxido (5,95 ml) em diclorometano (10 ml). Juntou-se gota a gota, ao longo de 30 min, o álcool (D4) (9 g) em diclorometano (100 ml) e agitou-se a solução a -60°C durante 15 min. Deixou-se a mistura reaccional aquecer até -15°C, arrefeceu-se até -60°C e juntou-se trietilamina (24,5 ml). Deixou-se a solução aquecer até à temperatura ambiente, lavou-se com água, ácido clorídrico diluído, solução de carbonato de sódio a 10% e secou-se com sulfato de sódio anidro. Filtrou-se a solução e evaporou-se o solvente no vácuo, obtendo-se o composto do título como um sólido branco (8,3 g). δ (CDC13): 2,86 (2H, dt), 4,53 (2H, t), 7,75 (2H, t), 8,22 (2H, d), 8,56 (2H, d), 9,90 (1H, s). 0 74 483 Ρ30181 -24-

r «V fàr y

Descricão 6 N-ΓΝ-f1-dibenziloxifosfinil)-3-f 1.8-naftalenodicarboximido^pro-pil-(S)-leucil1-N.O-dimetil-(S)-tirosinamida (D6)

Juntou-se 3-(1,8-naftalenodicarboximidoJpropanal (3,2 g) (D5) em diclorometano (50 ml) a uma solução de N-((S)-leucil)-N,0-dimetil-(S)-tirosinamida (4,04 g) em diclorometano (50 ml) a 0o C. Juntou-se sulfato de magnésio e agitou-se a mistura reaccional a 0°C durante 15 min e depois à temperatura ambiente durante 15 min.

Por meio de uma seringa juntou-se trimetilsililfosfito de dibenzilo (4,25 g), preparado pelo método J.I.6. Cadogan et al [Tetrahedron 1990, 46, 7175], à mistura reaccional acima referida, sob atmosfera de azoto a 0eC. Deixou-se a solução aquecer até temperatura ambiente e agitou-se durante 18 h, lavou-se com água, com solução a 10% de ácido cítrico e com solução saturada de cloreto de sódio. Secou-se a solução com sulfato de sódio anidro, filtrou-se e evaporou-se o solvente no vácuo, obtendo-se um óleo cor de laranja.

Por purificação por coluna cromatográfica, eluindo com acetato de etilo, obteve-se um único diastereoisómero.

Isómero D6A (0,9 g) S (CDC13): 0,81 (6H, dd), 0,90-2,35 (6H, m), 2,77 (3H, d), 2,87 (2H, rn), 3,22 (2H, m), 3,67 (3H, S), 4,12 (2H, t), 4,74 (1H, m), 4,95 (4H, m), 6,78 (2H, d), 7,10 (2H, d), 7,31 (10H, S), 7,60 (1H, d), 7,74 (3H, t), 8,22 (2H, d), 8,58 (2H, d).

Observou-se FAB (M+H)+ 819. C4gH51N40gP exige M 818.

Nova eluição fez correr um só diastereoisómero mais lento.

Isómero D6B (1,8 g). δ (CDC13): 0,82 (6H, dd), 1,12-2,24 (6H, m), 2,69 (3H, d), 2,83 (1H, m), 3,13 (2H, m), 3,62 (1H, m), 3,68 (3H, S), 4,15 (1H, m), 4,27 (1H, m), 4,60 (1H, t), 4,95 (4H, m), 6,59 (1H, d), c

7,62 (1H, d), 7,76 74 483 Ρ30181 -25- 6,76 (2Η, d), 7 # 15 (2H, d), 7,30 (10H, m) , (2H, t), 8,23 (2H, d), 8,60 (2H, d).

Observou-se FAB (M+H)+ 819. C46H51N4°8P exige M 818.

Descrição 7 3 - í Ftalimido)propanol (D7\

Dissolveu-se 3-amino-l-propanol (7,5 g) em etanol (200 ml), juntou-se N-carbetoxiftalimida (21,9 g) e agitou-se a solução à temperatura ambiente durante 24 h. Evaporou-se o solvente no vácuo, dissolveu-se o resíduo em clorofórmio e lavou-se com água (2x). Secou-se a solução de clorofórmio com sulfato de sódio, filtrou-se e evaporou-se o solvente no vácuo, obtendo-se o composto do título (12,7 g).

Descrição 8 3-ftalimido)propanal (D8)

Preparou-se o composto do título (11,5 g) a partir de 3--(ftalimido)propanol (D7) (12,7 g) pelo processo descrito na Descrição 5. S (CDC13): 2.89 (2H, dt), 4,05 (2H, t), 7,74 (2H, m), 7,86 (2H, m), 9,83 (1H, S).

Descrição 9 N-ΓΝ-(1-dimetoxi-fosfinil1-3-ftalimidooropil)-(S)-leucill-(S\--fenilalanina-N-metilamida (D9)

Juntou-se 3-(ftalimido)propanal (4,06 g) (D8) em diclorome-tano (50 ml) a uma solução de (S)-leucil-(S)-fenilalanina-N-metilamida (5,82 g) em diclorometano (50 ml) a 0eC. Juntou-se sulfato de magnésio, agitou-se a mistura reaccional a 0°c diirante 15 min e depois à temperatura ambiente durante 15 min.

Juntou-se trimetilsililfosfito de dimetilo (3,3 g), preparado pelo método de J.I.G. Cadogan et al [Tetrahedron 1990, 46, 7175], por meio de uma seringa, à mistura reaccional acima citada, sob azoto a 0eC. Deixou-se a solução aquecer até à temperatura ambiente e agitou-se durante 18 h, lavou-se com -26- Ρ30181 água, com solução a 10% de ácido cítrico e com solução saturada de cloreto de sódio. Secou-se a solução com sulfato de sódio anidro, filtrou-se e evaporou-se o solvente no vácuo, obtendo-se um óleo cor de laranja.

Por purificação por cromatografia em coluna com sílica-gel, eluindo com acetato de etilo seguido de 10% metano1/acetato de etilo, obteve-se o composto do título como mistura de 2 diastereoisómeros (8 g) (D9). δ (CDC13): 0,85 (6H, m), 0,95-2,18 (5H, m), 2,67 (l^H, d), 2.75 (1%H, d), 2,80-3,32 (3H, m), 3,55 (kE, t), 3,72 (8H, m) , 3,84 {kE, m) , 4,60 (kE, q) , 4,75 {kE, m) , 6,22 ^H, d), 7,22 (5kE, m), 7,53 (1H, t), 7,74 (3H, m), 7,85 (2H, m).

Observou-se FAB (M+H)+ 587 C2gH39N407P exige M 586 O composto do título foi também preparado como um só dias-tereoisómero (D9A) (0,09 g) a partir do ácido (D24A) (0,1 g) e da (S)-fenilalanina-N-metilamida (0,05 g) pelo processo referido na Descrição 19. 5 (CDC13): 0,88 (6H, d), 1,28 (2H, m), 1,60 (2H, m) , 1,84 (1H, m), 2,08 (1H, m), 2,67 (3H, d), 3,14 (2H, m), 3,55 (1H, t), 3.75 (8H, m), 3,84 (1H, m), 4,60 (1H, q), 6,26 (1H, d), 7,23 (5H, m), 7,51 (1H, d), 7,73 (2H, m), 7,85 (2H, m).

Descrição 10 4—f1.8-naftalenodicarboximido)butanol (D10) O composto do título (4,5 g) foi preparado a partir do 4--amino-l-butanol (4,45 g) pelo processo referido na Descrição 4.

Descricão 11 4-(1.8-naftalenodicarboximido)butanal (Dll) O composto do título (3,96 g) foi preparado a partir de 4--(1,8-naftalenodicarboximido)butanol (D10) (4,38 g) pelo processo referido na Descrição 5. 74 483 Ρ30181

-27- δ (CDCI3): 2,10 (2Η, 2 t sobrepostos), 2,60 (2H, t) , 4,20 (2H, t), 7,70 (2H, t), 8,17 (2H, d), 8,58 (2H, d), 9,83(1H, s).

Descrição 12 N-rN-(l-dibenziloxifosfinil)-4-fl.8-naftalenodicarboximido^bu-til^-fS^-leucin-fS^-fenilalanina-N-metilamida (D12) 0 composto do título (3,33 g) foi preparado como uma mistura de 2 diastereoisómeros, a partir de 4-(1,8-naftalenodicarboximido ) butanal (Dll) (3,96 g), da (S)-leucil-(S)--fenilalanina-N-metilamida (4,32 g) e do trimetilsililfosfito de dibenzilo (4,99 g) pelo processo referido na Descrição 6. δ (CDC13): 0,67 (3H, dd), 0,79 (3H, dd), 0,99-2,03 (8H, m), 2,56 (1%H, d), 2,74 (1%H, d), 2,70-3,69 (4H, m), 4,12 (2%H, m), 4,50 (%H, q), 4,93 (4H, m), 6,23 (kK, d), 7,23 (15H, m), 7,74 (3H, m), 8,22 (2H, m), 8,61 (2H, d).

Observou-se FAB (M+H)+ 803. C46H51N407P exige M 802.

Descricão 13 2-{lr8-naftalenodicarboximido)etanol (D13) O composto do título (7 g) foi preparado a partir da etano-lamina (3,05 g) pelo processo referido na Descrição 4.

Descricão 14 2-(1,8-naftalenodicarboximido)etanol (D14) 0 composto do título (3,15 g) foi preparado a partir do 2--(1,8-naftalenodicarboximido)etanol (D13) (3,21 g) pelo processo referido na Descrição 5. δ (CDC13): 5,05 (2H, s), 7,73 (2H, t), 8,24 (2H, d), 8,60 (2H, d), 9,74 (1H, s).

Descrição 15 N-ΓΝ-(l-dibenziloxifosfinil)-2-(1.8-naftalenodicarboximido)-etil)-(S)-leucill-(S)-fenilalanina-N-metilamida (D15) 0 composto do título (3,0 g) foi preparado como uma mistura de 2 diastereoisómeros, a partir do 2-(l,8-naftalenodicar- 74 483 c P30181 //.,---------', o' (Λ u -28- boximido)etanal (D14) (3,13 g), da (S)-leucil-(S)-fenilala- nina-N-metilamida (3,81 g) e do trimetilsililfosfito de dibenzilo (4,4 g) pelo processo referido na Descrição 6. δ (CDC13): 0,19 (ihU, d), 0,39 (^H, d), 0,70 (3H, dd), 0,70-1,48 (3H, m), 2,22 (hH, dd), 2,68 (^H, d), 2,74 (lha, d), 2,74-3,65 (3%H, m) , 4,30 (1H, m), 4,49 (ikH, m), 4,74 (%H, m) , 4,98 (4H, m), 6,20 (%H, m) , 6,78 (1H, dd), 6,86 (%H, d), 7,22 (15H, m), 7,76 (2H, t), 8,22 (2H, d), 8,57 (2H, d).

Observou-se FAB (M+H)+ 775. C44H47N407P exige M 774.

Descrição 16 N— ΓΝ—(1—(dibenziloxifosfinil)-3-(1.8-naftalenodicarboximidoloro-pil)-(S)-leucil1-(S\-fenilalanina-N-metilamida (D16) 0 composto do título (2,5 g) foi preparado a partir do 3--(l,8-naftalenodicarboximido)propanal (D5) (3,5 g), da (S)-leu-cil-(S)-fenilalanino-N-metilamida (4,03 g) e do trimetilsilil-fosfito de dibenzilo (4,65 g) pelo processo referido na Descrição 6.

Por purificação por cromatografia em coluna com sílica-gel, eluindo com um gradiente de 0-5% metanol/acetato de etilo, obteve-se um só diastereoisómero.

Isómero D16A δ (CDC13): 0,77 (6H, dd), 0,83-2,03 (5H, Itt), 2,17 (1H, m), 2,77 (3H, d), 2,77-3,37 (3H, m), 4,21 (2H, t), 4,78 (1H, Itt), 4,96 (4H, m), 7,24 (15H, m), 7,62 (1H, d), 7,76 (2H, t), 8,23 (2H, d), 8,57 (2H, d).

Observou-se FAB (M+H)+ 789. C45H49N407P exige M 788.

Análise: C45H49N407P exige C, 68,51; H, 6,26; N, 7,10%. Obteve-se C, 68,44; H, 6,17; N, 7,55%.

Nova eluição deu um diastereoisómero mais lento. /· /· /

74 483 Ρ30181

Isómero D16B δ (CDC13): 0,79 (6H, dd)f 1,05-2,28 (5H, m), 2,66 (3H, d), 2,78 (1H, m), 3,17 (2H, m), 3,58 (1H, t), 4,20 (2H, m), 4,63 (1H, m), 4,93 (4H, m), 6,63 (1H, d), 7,21 (15H, m), 7,65 (1H, d), 7,75 (2H, t), 8,21 (2H, d), 8,58 (2H, d).

Observou-se FAB (M+H)+ 789. C45H49N407P exige M 788.

Análise: C45H49N407P exige C, 68,51; H, 6,26; N, 7,10%. Obteve-se C, 68,83; H, 6,18; N, 7,40%.

Descricão 17 éster metílico da Ν-ΓΙ-fdibenziloxifosfinil)-3-fenilpropin-(S)--leucina fD17^

Juntou-se hidrocinamaldeído (4,62 g) em diclorometano (50 ml) a uma solução de éster metílico da (S)-leucina (5,0 g) em diclorometano (50 ml) a 0°C. Juntou-se sulfato de magnésio e agitou-se a mistura reaccional a 0°C durante 15 min e depois à temperatura ambiente durante 15 min.

Com uma seringa juntou-se trimetilsililfosfito de dibenzilo (11,6 g), preparado pelo método J.I.G Cadogan et al (Tetrahedron 1990, 46, 7175] à referida mistura reaccional, sob atmosfera de azoto, a 0°c. Deixou-se a solução aquecer até temperatura ambiente, agitou-se durante 18 h, lavou-se com água, com solução a 10% de ácido cítrico e com solução saturada de cloreto de sódio. Secou-se a solução com sulfato de sódio anidro, filtrou-se e evaporou-se o solvente no vácuo, obtendo-se um óleo amarelo.

Por purificação por cromatografia em coluna de sílica-gel eluindo com uma mistura de pentano/éter/acetona (10:9:1), obteve-se um só diastereoisómero.

Isómero D17A (1,47 g) S (CDCI3): 0,88 (6H, dd), 1,40 (1H, m), 1,61-1,90 (2H, m), 2,10 (1H, m), 2,56-2,92 (5H, m), 3,63 (3H, s), 3,75 (1H, t),

74 483 Ρ30181 -30- 4/97 (4Η, m)f 7,25 (15H, m).

Observou-se EI M+ 524.

Nova eluição deu um só diastereoisómero mais lento.

Isómero D17B (0,61 g) δ (CDC13): 0,87 (6H, dd), 1,40 (2H, m), 1,75 (2H, m), 2,05 (1H, m), 2,66 (1H, m), 2,84 (2H, m), 3,42 (1H, t), 3,58 (3H, s), 4,93 (4H, m), 7,26 (15H, m).

Observou-se EI M+ 524.

Análise: C30H38NO5p exige C, 68,82; H, 7,73; N, 2,68%. Obteve-se C, 68,87; H, 7,23; N, 2,37%.

Descricão 18 N-fl-(dibenziloxifosfinil)-3-fenilpropill-(S)-leucina (D18) O éster metílico (D17A) (1,35 g) foi dissolvido em dioxano (30 ml) e água (15 ml). Juntou-se hidróxido de sódio (0,12 g) e agitou-se a solução à temperatura ambiente durante 24 h. Evaporou-se o dioxano no vácuo, lavou-se a solução aquosa com éter, acidificou-se com ácido clorídrico 2N e extractou-se com acetato de etilo (2x). Os extractos orgânicos foram secos com sulfato de sódio e evaporou-se o solvente no vácuo, obtendo-se o composto do título como um sólido branco, (0,65 g), como um só diastereoisómero (D18A). δ (CDC13)í 0,87 (6H, dd), 1,48 (2H, m) , 1,77 (2H, m) , 2,13 (1H, m), 2,86 (2H, m), 3,76 (1H, t), 5,02 (4H, m), 7,16 (5H, m), 7,33 (10H, s).

Observou-se EI M"*· 510 [a]d22 = -12,08° (c=l% em metanol)

Análise: C29H36N05P.1/2H20 exige C, 67,17; H, 7,19; N, Λ \ Λ \

74 483 Ρ30181 -31- 2,70%. Obteve-se C, 67,13; Η, 6,93; Ν, 2,79%.

Preparou-se analogamente ο composto do título, como um óleo amarelo claro (0,22 g), como um diastereoisómero único (D18B), a partir do éster metílico (D17B) (0,52 g). 8 (CDd3): 0,88 (6H, t), 1,38 (1H, m), 1,62 (2H, m) , 1,85 (1H, m), 2,10 (1H, m), 2,75 (3H, m), 3,37 (1H, t), 5,03 (4H, m), 7,16 (5H, m), 7,33 (10H, s).

Observou-se EI M+ 510 Descricão 19 Ν- ΓΝ- (1-dibenziloxif osf inil) -3-f enilprooil) - (S) -leucil ~) - (S) --fenilalanina-N-metilamida lD19)

Dissolveu-se o ácido (D18A) (0,6 g) em diclorometano (20 ml), arrefeceu-se até 0°C e juntou-se 1-hidroxibenzotriazolo (0,23 g) e hidrocloreto de l-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbo-diimida (0,33 g). Agitou-se a solução a 0°C durante 15 min e depois à temperatura ambiente durante 15 min, arrefeceu-se a 0°C e juntou-se (S)-fenilalanina-N-metilamida (0,24 g) em diclorometano (20 ml). Agitou-se a solução à temperatura ambiente durante 24 h, lavou-se com água, com solução a 10% de ácido cítrico e com solução saturada de cloreto de sódio. Secou-se a solução orgânica com sulfato de sódio anidro e evaporou-se o solvente no vácuo, obtendo-se um sólido "beige" (0,69 g).

Por purificação por cromatografia em coluna de sílica-gel, eluindo com acetato de etilo, obteve-se o composto do título, como um sólido branco (0,52 g) como um diastereoisómero único (D19A). δ (CDC13): 0,80 (6H, d), 1,20 (2H, m), 1,50 (1H, m), 1,73 (2H, m), 2,00 (1H, m), 2,54 (1H, m), 2,65 (3H, d), 2,73 (2H, m), 3,02 (2H, m), 3,57 (1H, t), 4,54 (1H, q), 4,97 (4H, m), 6,05 (1H, s largo), 7,19 (10H, m), 7,33 (10H, s).

Observou-se FAB (M+H)+ 670. C39H48N305P exige M 669. 74 483 < Ρ30181 - -32- . . " i/ t [α]ρ22 = -30,85° (c=0,98% em metanol)

Análise: C39H48N305P exige C, 69,94; H, 7,22; N, 6,27%. Obteve-se C, 70,05; H, 7,28; N, 6,38%.

Preparou-se de modo análogo o composto do título a partir do ácido (D18B) (0,20 g), como um óleo amarelo claro (0,23 g), como um diastereoisómero único (D19B). 6 (CDC13): 0,78 (6H, dd), 1,02-1,32 (3H, m), 1,65-2,14 (3H, m), 2,60 (3H, m), 2,76 (3H, d), 2,92 (1H, dd), 3,14 (1H, dd), 3,32 (1H, dd), 4,80 (1H, m), 5,00 (4H, m) , 7,00 (1H, d), 7,20 (10H, m), 7,33 (10H, m), 7,63 (1H, d largo).

Observou-se FAB (M+H)+ 670. C3gH4gN30jjP exige M 669. Descricão 20

Ester benzilico da N-Γ1-(dimetoxifosfinil)-3-(1.8-naftalenodi-carboximido)propil1-(S)-leucina (D20)

Juntou-se 3-(l,8-naftalenodicarboximido)propanal (D5) (9,5 g) a uma solução de éster benzilico da (S)-leucina (sal p-tolue-nossulfonato) (14,75 g) e de trietilamina (5,8 ml) em diclorome-tano (100 ml). Juntaram-se peneiros moleculares e sulfato de magnésio e agitou-se a mistura durante 18 h sob azoto. Filtrou-se a solução e juntou-se gota a gota a trimetilsi-lilfosfito de dimetilo (7,5 g), preparado pelo método de J.I.G. Cadogan et al [Tetrahedron 1990, 46, 7175], sob azoto, a 0°C. Deixou-se a solução aquecer até à temperatura ambiente e agitou-se durante 18 h, lavou-se com água, com solução a 10% de ácido cítrico, com solução saturada de bicarbonato de sódio e com solução saturada de cloreto de sódio. Secou-se a solução com sulfato de sódio anidro, filtrou-se e evaporou-se o solvente no vácuo, obtendo-se um óleo amarelo.

Por purificação por cromatografia em coluna de sílica-gel, eluindo com uma mistura de éter/acetato de etilo (1:1), obteve--se um diastereoisómero único (D20A) (5,51 g). /

r.-. ;· / · 74 483 Ρ30181 -33- δ (CDC13): 0,95 (6Η, dd), 1#53 (2Η, t) , 1,75-2,00 (3Η, m), 2,27 (1Η, m), 2,98 (1H, m) , 3,72 (3H, d), 3,80 (3H, d), 3,90 (1H, t), 4,20 (1H, m), 4,46 (1H, m), 5,65 (2H, m) , 7,35 (5H, m) , 7,77 (2H, t), 8,23 (2H, d), 8,62 (2H, d). 31P: δ (CDC13): 28,73

Observou-se CX (M+H)+ 567, c3oH35N2°7p exige M 566 [a]D22 = -14,94 (c=0,38, MeOH)

Análise: C3oH35N207P exige C, 63,60; H, 6,23; N, 4,94%. Obteve-se C, 63,28; H, 6,20; N, 4,83%

Nova eluição deu um diastereoisómero único, mais lento. Isómero D20B (5,23 g) 5 (CDC13): 0,93 (6H, dd), 1,53 (2H, t), 1,80 (2H, m), 2,17 (1H, m), 3,10 (1H, m), 3,63 (1H, t), 3,71 (3H, d), 3,77 (3H, d), 4,29 (1H, m), 4,44 (1H, m), 5,15 (2H, m), 7,36 (5H, m), 7,75 (2H, t), 8,21 (2H, d), 8,59 (2H, d). 31P: 6 (CDC13); 29,65

Observou-se Cl (M+H)+ 567 C30H35N2O7P exige M 566.

[a]D22 = -13,20 (c=0,44, MeOH)

Análise: C30H35N207P.H20 exige C, 61,64; H, 6,38; N, 4,79%. Obteve-se C, 61,56; H, 6,35; N, 4,62%.

Descrição 21 Ν-ΓΙ-fdimetoxifosfinil)-3-(1,8-naftalenodicarboximido)oropil1--fS^-leucina ΓΡ21) 0 éster benzílico (D20A) (3,7 g) foi dissolvido em metanol (100 ml) e hidrogenado sobre 10% de paládio sobre carvão, à pressão atmosférica, durante 3 h. Filtrou-se a solução e evapo- 74 483 c' P30181 ·ί'\ -34- rou-se o solvente no vácuo, obtendo-se o composto do título como um só diastereoisómero (2,7 g) (D21). δ (CDC13): 0,96 (6H, t), 1,58 (2H, m), 1,89 (2H, m), 2,26 (1H, m), 3,12 (1H, m), 3,76 (3H, d), 3,83 (3H, d), 4,29 (1H, m) , 4,47 (1H, m), 7,67 (2H, t), 8,14 (2H, d), 8,49 (2H, d). 31P: δ (CDC13)í 29,22.

Observou-se FAB (M+H)+ 477 C23H29N207P ex;i-9e M 476.

[a]D22 = -1,50 (c = 1,00, MeOH).

Análise: exige C, 55,87; H, 6,31; N, 5,66%.

Obteve-se C, 55,67; H, 5,84; N, 5,66%.

Descrição 22 N-ΓΝ-(1-(dimetoxifosfinil)-3-(1.8-naftalenodicarboximido)propila -(S^-leucin-(S)-fenilalanina-N-metilamida (Ό22)

Preparou-se o composto do título (1,2 g) a partir do ácido (D21) (0,95 g) e da (S)-fenilalanina-N-metilamida (0,24 g) pelo processo referido na Descrição 19. δ (CDC13): 0,89 (6H, dd), 1,26 (2H, m), 1,62 (1H, m), 1,84 (2H, m), 2,11 (1H, s largo), 2,60 (3H, d), 2,85 (1H, m), 3,20 (2H, m), 3,55 (1H, t), 3,71 (3H, d), 3,78 (3H, d), 4,19 (1H, Itt), 4,33 (1H, m), 4,65 (1H, q), 6,56 (1H, d), 7,23 (5H, m), 7,71 (1H, d), 7,76 (2H, t), 8,23 (2H, d), 8,60 (2H, d).

Descricão 23

Ester benzílico da N-ΓΙ-fdimetoxifosfinil)-3-ftalimidopropill--fSWeucina ΓΡ23Ϊ

Preparou-se o composto do título a partir do 3-(ftalimido-propil)propanal (3,36 g) e do éster benzílico da (S)-leucina (sal p-toluenossulfonato) (6,51 g) pelo processo referido na Descrição 20.

Por purificação por cromatografia em coluna de sílica-gel, 74 483 Ρ30181 a#'

-35- eluindo com uma mistura de éter/acetato de etilo (1:1), obteve--se um só diastereoisómero.

Isómero D23A (1,62 g) δ (CDC13): 0,92 (6H, m), 1,38-1,92 (5H, m), 2,13 (1H, m), 2,93 (1H, m), 3,47-4,06 (3H, m) , 3,73 (3H, d), 3,79 (3H, d), 5,13 (2H, m), 7,33 (5H, m), 7,70 (2H, m), 7,83 (2H, m).

Nova eluição deu um só diastereoisómero mais lento.

Isómero D23B (1,52 g) δ (CDC13): 0,90 (6H, dd), 1,50 (2H, t), 1,70-2,20 (4H, m) , 2,95 (1H, m), 3,53 (1H, t), 3,70 (3H, d), 3,75 (3H, d), 3,75--4,03 (3H, m), 5,14 (2H, m), 7,35 (5H, m), 7,70 (2H, m) , 7,83 (2H, m).

Descricão 24 N-ri-rdimetoxifosfinil)-3-ftalimidoprooil1-(S)-leucina (D24)

Preparou-se o composto do título, como um diastereoisómero único (D24A) (0,97 g) a partir do éster benzílico (D23A) (1/52 g) pelo processo referido na Descrição 21. δ (CDC13): 0,96 (6H, dd), 1,55 (2H, m), 1,85 (2H, m), 2,20 (1H, m), 3,03 (1H, dt), 3,78 (8H, m), 3,98 (1H, m), 7,70 (2H, m), 7,83 (2H, m). 0 composto do título foi preparado de modo análogo como um diastereoisómero único (D24B) (0,83 g) a partir do éster benzílico (D23B) (1,4 g). δ (CDC13): 0,96 (6H, d), 1,55 (2H, m), 1,85 (2H, m), 2,15 (1H, m), 2,98 (1H, m), 3,44 (1H, m), 3,78 (8H, m), 7,73 (2H, m), 7,85 (2H, m). P: δ (CDC13): 29,01 31 -36- 74 483 Ρ30181

Descrição 25 3-f4-bromo-1.8-naftalenodicarboximido)propanol (D25)

Aqueceu-se em refluxo, durante 30 min, uma mistura de ani-drido 4-bromoftálico e 3-amino-l-propanol (12 g) em etanol (200 ml). Deixou-se a solução arrefecer até à temperatura ambiente e evaporou-se o solvente no vácuo, obtendo-se um sólido que foi lavado com éster de que resultou o composto do titulo (12,2 g) (D25). S (CDC13): 2,00 (2H, dt), 3,60 (2H, t), 4,35 (2H, t), 7,88 (1H, t), 8,07 (1H, d), 8,44 (1H, d), 8,60 (1H, d), 8,70 (1H, dj.

Descricão 26 3-f4-bromo-l.8-naftalenodicarboximidoloropanal (D26)

Preparou-se o composto do título (10,3 g) (D26) a partir do álcool (12,2 g) (D25), pelo processo referido na Descrição 5. Ô (CDC13): 2,90 (2H, dt), 4,54 (2H, t), 7,85 (1H, t), 8,04 (1H, d), 8,40 (1H, d), 8,59 (1H, dd), 8,66 (1H, dd), 9,90 (1H, s).

Descricão 27 Éster trimetilsililetílico da N-ri-(dimetoxifosfinil)-3-(4--hromo-1.8-naftalenodicarboximido)nronil1-f S )-leucina (D27)

Preparou-se o composto do título (D27) a partir do 3-(4--bromo-1,8-naftalenodicarboximido)propanal (D26) (3,0 g) e do éster trimetilsililetílico da (S)-leucina (2,17 g), pelo processo referido na Descrição 20.

Por purificação por cromatografia em coluna de sílica-gel, eluindo com éter de petróleo 40-600, aumentando até 20% acetato de etilo/éter de petróleo 40-60°, obteve-se um diastereoisómero único.

Isómero D27A (1,0 g) δ (CDC13): 0,96 (8H, m), 1,48 (2H, t), 1,82 (2H, m), 2,25 (1H, m), 2,94 (1H, m), 3,75 (8H, m), 4,15 (2H, m), 4,24 (1H, m), } }

74 483 Ρ30181 -37- 4,52 (1Η, dt), 7,81 (1H, t), 8,02 (1H, d), 8,39 (1H, d), 8,56 (1H, d), 8,63 (1H, d).

Nova eluição deu um único diastereoisómero mais lento. Isómero D27B (0,95 g) δ (CDC13): 0,91 (8H, rn), 1,47 (2H, t), 1,8 (2H, m), 2,13 (1H, m), 3,06 (1H, m), 3,51 (1H, t), 3,73 (3H, d), 3,79 (3H, d), 4,12 (3H, m), 4,26 (1H, m), 4,41 (1H, m), 7,80 (1H, t), 8,00 (1H, d), 8,38 (1H, d), 8,54 (1H, d), 8,62 (1H, d).

Descrição 28 N-fl-fdimetoxifosfinil)-3-í4-bromo-l.8-naftalenodicarboximido)-propilWS^-leucina fD28) O éster trimetilsililetílico (1,0 g) (D27A) foi dissolvido em tetra-hidrofurano (50 ml) e arrefeceu-se a solução até 0°C. Juntou-se gota a gota, sob azoto, uma solução 1M de fluoreto de tetrabutilamónio (1,5 ml) em tetra-hidrofurano (10 ml) e agitou--se a solução à temperatura ambiente durante 24 h. Juntou-se água (20 ml), arrefeceu-se a solução até 0eC e acidificou-se com ácido clorídrico 2N. Extractou-se a solução com acetato de etilo (3x) e lavaram-se os extractos orgânicos juntos com água, secaram-se com sulfato de sódio anidro e evaporou-se o solvente no vácuo, obtendo-se o composto do título como um só diastereoisómero (0,8 g) (D28A). δ (CDC13): 1,04 (6H, m), 1,73 (2H, m), 2,00-2,60 (3H, m) , 3,88 (7H, m), 4,21 (2H, m), 4,40 (2H, m), 7,55 (1H, t), 7,82 (1H, t), 8,05 (1H, d), 8,32 (2H, t).

Preparou-se de modo análogo o composto do título, como um só diastereoisómero, (0,28 g) (D28B) a partir do éster trimetilsililetílico (0,33 g) (D27B). δ (CDC13): 0,98 (6H, d), 1,20-2,20 (5H, m), 3,07 (1H, m), 3,34 (1H, m), 3,50 (1H, t), 3,82 (6H, t), 4,34 (2H, t), 7,87 (1H, t), 8,06 (1H, t), 8,40 (1H, d), 8,60 (1H, d), 8,66 (1H, d). 74 483 Ρ30181 -38-

$*·'_' ...à

7M

Descricão 29 N- (N-f1-dimetoxifosfinil)-3-(4-bromo-l,8-naftalenodicarboximi-do)propil1-(S Ϊ-leucil1-(S)-fenilalanina-N-metilamida (D29)

Preparou-se o composto do título a partir do ácido (1,0 g) (D28A) e da (S)-fenilalanina-N-metilamida (0,65 g) pelo método referido na Descrição 19.

Por purificação por cromatografia em coluna de sílica-gel, eluindo com 5% metanol/acetato de etilo, obteve-se o composto do título como um só diastereoisómero (0,3 g) (D29A). δ (CDC13): 0,89 (6H, d), 1,27 (2H, m), 1,62 (1H, m), 1,69 (2H, m), 2,26 (1H, m), 2,70 (3H, d), 2,84 (1H, m), 2,93-3,25 (1H, m), 3,56 (1H, t), 3,72 (3H, t), 3,79 (3H, d), 4,17 (1H, m), 4,31 (1H, m), 4,58 (1H, m), 6,48 (1H, d), 7,23 (5H, m), 7,68 (1H, d), 7,87 (1H, t), 8,06 (1H, d), 8,42 (1H, d), 8,60 (1H, d), 8,68 (1H, d).

Preparou-se de modo análogo o composto do título, como um só diastereoisómero, (0,1 g) (D29B) a partir do ácido (0,28 g) (D28B) e da (S)-fenilalanina-N-metilamida (0,18 g). δ (CDC13); 0,85 (6H, dd), 1,13 (2H, m), 1,57 (2H, m), 1,90--2,24 (2H, m), 2,80 (3H, d), 3,00 (2H, m), 3,28 (2H, m), 3,70 (3H, d), 3,75 (3H, d), 4,27 (2H, t), 4,77 (1H, m), 7,23 (5H, m), 7,50 (1H, d), 7,62 (1H, d), 7,87 (1H, t), 8,05 (1H, d), 8,40 (1H, d), 8,60 (1H, d), 8,65 (1H, d).

Descricão 30 N-ΓΝ-(1-dibenziloxifosfinil1-3-f2-benziloxifenil)pronil1-(S)--leucil1-fS)-fenilalanina-N-metilamida (D30 Ϊ

Preparou-se o composto do título (4,0 g) a partir de 3-(2--benziloxifenil)propanol (4,8 g), da (S)-leucil-(S)-fenilalani-no-N-metilamida (5,82 g) e do fosfito de dibenziltrimetilsililo (6,7 g) pelo processo referido na Descrição 6.

Observou-se FAB (M+H)+ 776 C46H54N306P exige M 775.

74 483 Ρ30181

Descricão 31 N-ΓΝ-(1-dimetoxifosfinil)-3-(metilmercapto)propil)-(S)-leucil1--ÍS)-fenilalanina-N-metilamida (D31) O composto do título (4fl g) (D31) foi preparado a partir do 3-(metilmercapto)propanal (2f08 g), da (S)-leucil-(S)-fenila-lanina-N-metilamida (5,82 g) e do fosfito de dimetiltrimetilsi-lilo (3,3 g) pelo processo referido na Descrição 9.

Por purificação por cromatografia em coluna de sílica-gel, eluindo com 3% metanol/acetato de etilo, obteve-se o composto do título como mistura de 2 diastereoisómeros (4,1 g) (D31). δ (CDC13): 0,90 (6H, m), 0,90-1,95 (6H, m), 2,08 (ikH, s), 2,10 (1 kE, s), 2,60 (2H, t), 2,73 (1^, d), 2,76 (l^H, d), 2,82--3,12 (2H, m), 3,26 (1%H, m), 3,57 (%H, m), 3,74 (3H, d), 3,78 (3H, d), 4,55 (%H, q), 4,76 (%H, m), 6,14 (kK, s largo), 7,22 (5H, m), 7,38 (%H, s largo), 7,53 (%H, d), 7,64 (kK, d).

Observou-se FAB (M+H)+ 488 C22H38N305PS exige M 487

Descricão 32 N-rN-(l-rdimetoxifosfinil)-3-fmetilsulfinil^prooil^-(,S^-leucin--(S)-fenilalanina-N-metilamida (D32)

Juntou-se periodato de sódio (0,86 g) em água (5 ml) a uma solução de N-[N-(l-dimetoxifosfinil)-3-(metilmercapto)propil)--(S)-leucil]-(S)-fenilalanina-N-metilamida (0,98 g) (D31) em metanol (50 ml). Agitou-se a solução à temperatura ambiente durante 2 h e evaporou-se o solvente no vácuo. Dissolveu-se o resíduo em clorofórmio , lavou-se com água, com solução saturada de cloreto de sódio e secou-se com sulfato de sódio anidro. Filtrou-se a solução e evaporou-se o solvente no vácuo, obtendo-se o composto do título.

Por purificação por cromatografia em coluna de sílica-gel, eluindo com 5% metanol/clorofórmio, obteve-se o composto do título, como uma mistura de 2 diastereoisómeros (0,63 g) (D32). δ (CDC13): 0,87 (6H, m), 1,03-2,35 (6H, m), 2,60 (l^H, d), 2,66 (1%H, d), 2,70 (l^H, d), 2,73 (li;H, d), 2,77-3,10 (4 kH, m), 74 483 Ρ30181

íw/. - -

-40- 3/22 (1H, dd), 3760 (¾H/ m) , 3,77 (3H, d), 3,80 (3H, d), 4,53-4,77 (1H/ m), 6/14 (hE, s largo), 7,10 (hE, s largo), 7,22 (5H, m), 7,50 (hE, d), 7,57 ^H, d).

Observou-se FAB (M+H)+ 504 C^HggNgOgPS exige M 503. Descrição 33 N-ΓΝ—(1—f dimetoxifosfinil)-3-(metilsulfonil)propil)-(SΪ-leucil1--(S)-fenilalanina-N-metilamida (D3 3)

Juntou-se uma solução de periodato de sódio (4,26 g) em água (20 ml) a N-[N-(l-dimetoxifosfinil)-3-(metilmercapto)pró-pil)-(S)-leucil]-(S)-fenilalanina-N-metilamida (0,98 g) (D31) em metanol (50 ml). Agitou-se a solução à temperatura ambiente durante 72 h e evaporou-se o solvente no vácuo. Dissolveu-se o resíduo em clorofórmio, lavou-se com água e com solução saturada de cloreto de sódio e secou-se com sulfato de sódio anidro. Fil-trou-se a solução e evaporou-se o solvente no vácuo, obtendo-se o composto do título.

Por purificação por cromatografia em coluna de sílica-gel, eluindo com 10% metanol/acetato de etilo, obteve-se o composto do título como mistura de 2 diastereoisómeros (0,52 g) (D33). 5 (CDC13): 0,84 (6H, m), 1,02-2,40 (7H, m), 2,70 (l^H, d), 2,74 (1%H, d), 2,93 (lhE, s), 3,01 {l\E, s), 3,03 (2H, m), 3,20 (2H, m), 3,40 (hE, m), 3,58 (\E, m), 3,78 (6H, m), 4,56 (%H, q), 4,66 (%H, m), 5,73 (hE, d), 6,80 (hE, d), 7,23 (5H, m), 7,44 (1H, t).

Observou-se FAB (M+H)+ 520 C22H38N307PS exige M 519.

Descricão 34 N-fN-f1-dimetoxifosfinil)-3-(1.8-naftalenodicarboximido)propil)--(S)-leucil1-fS)-fenilalanina-N-metilamida (D34)

Preparou-se o composto do título (0,53 g), como um só dias-tereoisómero (D34), a partir do ácido (0,6 g) (D21) e da (S)--triptofano-N-metilamida (0,31 g) pelo processo descrito na Descrição 19. 74 483 Ρ30181 -41- /

δ (CDC13): 0,89 (6Η, dd), 1,35 (2H, m), 1,72 (3H, m), 1,96 (1H, m), 2,71 (3H, d), 2,78 (1H, m) , 3,27 (1H, dd), 3,44 (1H, dd), 3,55 (1H, m), 3,62 (3H, d), 3,75 (3H, d), 3,94 (1H, m) , 4,17 (1H, m), 4,74 (1H, q), 6,42 (1H, d), 6,97 (2H, m), 7,14 (1H, d), 7,27 (1H, s), 7,62 (2H, dd), 7,77 (2H, t), 8,24 (2H, d), 8,43 (1H, s largo), 8,59 (2H, d).

Descrição 35 N-fN-f1-fdimetoxifosfinil)-3-(1.S-naftalenodicarboximido^oro-pil )-(S)-Nc-benziloxicarbonil-lisina-N-metilamida fD35 ^

Preparou-se o composto do título (1,4 g) como um só diaste-reoisómero (D35), a partir do ácido (0,95 g) (D21) e da S-N-e--benziloxicarbonil-lisina-N-metilamida (0,42 g) pelo processo referido na Descrição 19. 6 (CDC13): 0,99 (6H, t), 1,32-2,04 (11H, m), 2,23 (1H, m), 2,74 (3H, d), 3,00 (1H, m), 3,73 (3H, d), 4,22-4,55 (3H, m) , 5,09 (2H, s), 5,18 (1H, m), 6,50 (1H, d), 7,33 (5H, m), 7,57 (1H, d), 7,75 (2H, t), 8,23 (2H, d), 8,60 (2H, d).

31P 8 (CDCI3): 29,96 p.f. 128-132 °C

Observou-se FAB (M+H)+ 742 C38H50N509P exige M 751 [ce]d22 = “22,49 (c=0,98%, MeOH).

Análise: C38H50N5°9P exige C, 60,71; H, 6,70; N, 9,32%. Ob-teve-se C, 60,37; H, 6,47; N, 9,12%.

Descrição 36 Ν-ΓΝ-fl-fdimetoxifosfinilΊ-3-(1.8-naftalenodicarboximido)-propila - f s ^ -leucil1-(-^-aminoazaciclo-tridecan-2-ona fD36) 0 composto do título (0,75 g) foi preparado como um só di-astereoisómero (D36) a partir do ácido (0,6 g) (D21) e da (-)-3--aminoazaciclotridecan-2-ona (0,3 g) ([a]D20 = -63,6 (c=l% em metanol)) pelo processo referido na Descrição 19. -42- 74 483 Ρ30181 δ (CDCI3): Ο ,95 (6Η, dd) , 1,28 (16Η, m), 1,52 (2Η, m) , 1,65-2,11 (5Η, m), 2,25 (1Η, m), 2,85 (1H, m), 3,04 (1H, s largo), 3,62 (2H, m), 3,71 (3H, d), 3,79 (3H, d), 4,36 (2H, Hl) , 4,54 (1H, m), 6,43 (1H, m), 7,63 (1H, d), 7,76 (2H, t), 8,22 (2H, d), 8,60 (2H, d).

Observou-se FAB (M+H)+ 671 035Η51Ν407Ρ exige M 670.

Descricão 37 (S) -NQ.-t-butiloxicarbonil-Nc-benziloxicarbonil-lisina-N-f benzilo-xicarbonil-aminoetil Mantida (D37)

Preparou-se o composto do título (7,2 g) a partir da Na-t--butiloxicarbonil-Ne-benziloxicarbonil-lisina (5,3 g) e da 2--(benziloxicarbonilamino)etilamina (2,72 g) pelo processo referido na Descrição 19. S (CDCl3): 0,90 (15H, m), 1,75 (1H, m), 3,17 (2H, q), 3,32 (4H, s largo), 4,00 (1H, q), 5,10 (4H, s), 5,39 (1H, d), 5,56 (1H, t), 6,76 (1H, S largo), 7,33 (10H, s).

Descrição 38 Ν-ΓΝ-fl-f dimetoxifosfinil^-3-(l.S-naftalenodicarboximidolpro-piD-f Sl-leucill-f S)-(Nc-benziloxicarbonil)lisina-N-(benziloxi carbonilaminoetil)amida (D38)

Dissolveu-se Na-t-butiloxicarbonil-Ne-benziloxicarbonil-li-sina-N-(benziloxicarbonil-aminoetil)amida (1,22 g) (D37) em di-clorometano (20 ml) e juntou-se ácido trifluoroacético (15 ml). Agitou-se a solução à temperatura ambiente durante 2 h e evaporou-se o solvente no vácuo. Dissolveu-se o resíduo em clorofórmio (25 ml) e juntou-se trietilamina até pH 10, obtendo-se a N£--benziloxicarbonil-lisina-N- (benziloxicarbonil-aminoetil) amida.

Preparou-se o composto do título a partir da referida amina (1,0 g) e do ácido (0,95 g) (D21) pelo processo referido na Descrição 19. s

74 483 Ρ30181 -43-

Por purificação por cromatografia em coluna de sílica-gel, eluindo com 5% metanol/acetato de etilo, obteve-se o composto do título, como um só diastereoisómero (1,0 g) (D38). S (CDCI3): 0,93 (3H, d), 0,97 (3H, d), 1,30-2,10 (11H, m), 2,20 (1H, m), 3,15 (2H, m), 3,30 (4H, s largo), 3,64 (3H, d), 3,74 (3H, d), 4,32 (4H, m), 5,04 (4H, s), 5,15 (1H, s largo), 5,78 (1H, s largo), 7,08 (1H, s largo), 7,28 (10H, m), 7,65 (1H, d), 7,74 (2H, t), 8,22 (2H, d), 8,59 (2H, d).

Observou-se FAB (M+H)+ 915 C46H59N6Oi:lP exige M 914. Descrição 39 N-ΓΝ-(l-(dimetoxifosfinil)-3-(l.8-naftalenodicarboximido)propila -(Sl-leucill-f S^-fNc-benziloxicarbonil)lisina-N-(etilpirro lidinalamida fD39^

Preparou-se o composto do título a partir da (S)-(Ne-ben-ziloxicarbonil)lisina-N-(etilpirrolidina)amida (0,73 g) e do ácido (0,83 g) (D21), pelo processo referido na Descrição 19.

Por purificação por cromatografia em coluna de sílica-gel, eluindo com 10% metanol/clorofórmio, obteve-se o composto do título como um só diastereoisómero (1,2 g) (D39). S (CDCI3): 0,97 (6H, t), 1,34-1,66 (6H, m), 1,66-2,08 (9H, m), 2,25 (1H, m), 2,58 (6H, m), 3,03 (1H, m), 3,20 (2H, q), 3,30 (2H, q), 3,69 (1H, m), 3,72 (3H, d), 3,80 (3H, d), 4,21-4,44 (2H, m), 4,50 (1H, m), 5,09 (2H, s), 5,31 (1H, t), 6,78 (1H, S largo), 7,32 (5H, m), 7,54 (1H, d), 7,74 (2H, t), 8,22 (2H, d), 8,60 (2H, d). 31P S (CDCI3): 30,05

Observou-se FAB (M+H)+ 835 C43H59N60gP exige M 834 [a]D22 = -17,21 (c=l,00, MeOH) 74 483 Ρ30181

-44-

Descricão 40 (S) -NQ.-t-butiloxicarbonil-Nc-benziloxicarbonil-lisina-N-fetil-N--metilpiperazina Mantida ÍD401

Preparou-se o composto do título (.4,2 g) a partir da Na-t--butiloxicarbonil-Ne-benziloxicarbonil-lisina (3,8 g) e da l-aminoetil-4-metilpiperazina (1,43 g) pelo processo referido na Descrição 19. δ (CDC13): 1,42 (9H, S), 1,50 (7H, m), 1,80 (1H, m) , 2,30 (3H, S), 2,50 (10H, m), 3,19 (2H, q), 3,23 (2H, q), 4,05 (1H, m), 4,95 (1H, m), 5,08 (2H, s), 5,17 (1H, m), 6,55 (1H, m), 7,36 (5H, s). 0bservou-se FAB (M+H)+ 506 C26H43N5°5 ex;*-9e M 505.

Descrição 41 N-fN-fl-(dimetoxifosfinil>-3-(1,8-naftalenodicarboximido)propila -(S\-leucill-(S)-(Nc-benziloxicarbonil^lisina-N-(etil-N--metilpjperazina)amida (D41)

Preparou-se o composto do título a partir de (D40) (1,1 g) e do ácido (D21) (0,92 g), pelo processo referido na Descrição 38.

Por purificação por cromatografia em coluna de sílica-gel, eluindo com 10% metanol/acetato de etilo, obteve-se o composto do título como um só diastereoisómero (D41) (1,2 g). s (cdci3) : 0,93 (6H, t), 1,30- -2,05 (12H, m), 2,26 ( 3H, r s), 2,40 (10H, m), , 3,00 (1H, m), 3,22 (4H, m), 3 ,67 (1H, m), 3,73 (3H, d), 3,80 (3H, d), 4 ,20- -4,42 (2H, m), 4 j ,50 (1H, m), 5,06 (2H, S), 5,25 (1H, m), 6 ,52 (1H, t largo), 7 ,30 (5H, S) / 7,50 (1H, d), 7,70 (2H, t), 8,20 (: 2H, d) , 8,58 (2H, d). 31P δ (CDC13): 29,99

Observou-se FAB (M+H)+ 864 C44H62N709P exige M 863 [a]D22 = -18,80 (c=0,74, MeOH) -45- 74 483 Ρ30181

Descricão 42 3— Γ 8— (7.9—dioxo—8—azaspiro Γ 4.51decil)]propanol (D42)

Dissolveu-se anidrido 3,3-tetrametileno-glutárico (8,4 g) em tolueno (200 ml) e juntou-se, ao longo de 5 min, 3-aminopro-pan-l-ol (4,5 g) em tolueno (50 ml). Agitou-se a solução à temperatura ambiente durante 2 h e depois aqueceu-se em refluxo durante 3 h. Deixou-se a solução arrefecer e evaporou-se o solvente no vácuo, obtendo-se o composto do título como óleo amarelo-claro (13,8 g) (D42). 8 (CDCI3): 1,53 (4H, m), 1,72 (6H, m), 2,65 (4H, s), 3,51 (2H, t), 3,92 (2H, t).

Descrição 43 3-r8-f7.9-dioxo-8-azaspiror4.51decil)lpropanal (D431

Preparou-se o composto do título (3,3 g) (D43) a partir do álcool (3,4 g) (D42) pelo processo referido na Descrição 5. 8 (CDCI3): 1,50 (4H, m), 1,71 (4H, m), 2,60 (4H, s), 2,64 (2H, dt), 4,12 (2H, t), 9,75 (1H, s).

Observou-se Cl M+H 224

Descrição 44

Ester benzílico da N-ri-(dimetoxifosfinil1-3-r8-(7.9-dioxo-8--azaspiror4.51decillpropill-fS)-leucina (D44)

Preparou-se o composto do título a partir do aldeído (3,2 g) (D43), do sal p-toluenossulfonato do éster benzílico da (S)--leucina (5,7 g) e do trimetilsililfosfito de dimetilo (2,6 g), pelo processo descrito na Descrição 20.

Por purificação por cromatografia em coluna de sílica-gel, eluindo com uma mistura (2:1) de éter/acetato de etilo e aumentando para (1:1) de éter/acetato de etilo, obteve-se um só dias-tereoisómero.

Isómero D44A (2,14 g) -46 -46 ,.·-1*'1 74 483 Ρ30181 δ (CDC13): 0,92 (6Η, t), 1,37-1,87 (13H, m), 1,96 (1H, m), 2,57 (4H, s), 2,82 (1H, m), 3,71 (3H, d), 3,78 (3H, d), 3,83 (2H, m), 4,00 (1H, m), 5,13 (2H, m), 7,34 (5H, m). 31Ρ δ (CDC13)ϊ 28,74

Observou-se EI MH+ 537 [a]D22 = -13,33 (C=1,00, MeOH)

Análise: C27H41N207P.%H20 exige C, 59,44; H, 7,76; N, 5,13%. Obteve-se C, 59,42; H, 7,65; N, 4,99%.

Nova eluição deu uma mistura de 2 diastereoisómeros (3,12 g). Nova eluição deu um único diastereoisómero mais lento.

Isómero D44B (0,70 g) δ (CDC13): 0,91 (6H, dd), 1,50 (6H, t largo), 1,70 (7H, m), 1,94 (1H, m), 2,59 (4H, s), 2,93 (1H, m), 3,53 (1H, t), 3,74 (6H, d), 3,84 (1H, m), 4,00 (1H, m), 5,16 (2H, s), 7,34 (5H, m). 31P δ (CDC13): 29,55 Observou-se EI MH+ 537 [a]D22 = -11,47 (C=0,78, MeOH)

Análise: C27H41N20yP.%H20 exige C, 59,44; H, 7,76; N, 5,13%. Obteve-se C, 59,27; H, 7,58; N, 4,87%.

Descrição 45 N-ri-(dimetoxifosfinil)-3-r8-(7,9-dioxo-8-azaspiror4.51decill1-propilT-(S^-leucina (D45)

Preparou-se o composto do título como um só diastereoisómero (D45A) (1,7 g) a partir do éster benzílico (D44A) (2,1 g) pelo processo descrito na Descrição 21. δ (CDC13): 0,96 (6H, dd), 1,50 (6H, m), 1,70 (6H, m), 1,74

74 483 J C ' P30181 < .> y ____5 -47- (1H, m) , 2,06 (1H, s largo), 2,60 (4H, s), 2,98 (1H, m), 3,76 (3H, d), 3,81 (3H, d), 3,90 (2H, m), 4,03 (1H, m). 31P δ (CDC13): 29,13

Observou-se FAB (M+H)+ 447 C2oH35N207P exige M 446 [a]D22 = -9,11 (c=0,48, MeOH)

Preparou-se de modo análogo o composto do título, como um só diastereoisómero (D45B) (0,5 g) a partir do éster benzílico (D44B) (0,7 g). δ (CDC13): 0,96 (6H, dd), 1,50 (6H, s largo), 1,60-1,90 (7H, m), 2,00 (1H, m), 2,59 (4H, s), 2,92 (1H, m), 3,41 (1H, t) , 3,73 (1H, m), 3,80 (3H, d), 3,84 (3H, d), 3,92 (1H, m).

Descrição 46 N-ri-(dimetoxifosfinil)-3-r8-(7.9-dioxo-8-azaspiror4.5]decil)]-orooil)-(S)-leucil-(S)-fenilalanina-N-metilamida (D46)

Preparou-se o composto do titulo como um só diastereoisóme-ro (0,43 g) (D46A) a partir do ácido (D45A) e da (S)-fenilalanina-N-metilamida (0,2 g) pelo processo referido na Descrição 19. δ (CDC13): 0,87 (6H, dd), 1,20 (2H, m), 1,51 (5H, m), 1,73 (6H, S largo), 1,90 (1H, m), 2,61 (4H, s), 2,73 (3H, d), 3,12 (2H, m), 3,49 (1H, m), 3,72 (3H, d), 3,77 (3H, d), 3,74 (2H, m), 3,90 (1H, m), 4,57 (1H, q), 6,32 (1H, d largo), 7,25 (5H, m), 7,48 (1H, d). 31P δ (CDC13): 30,10

Observou-se FAB (M+H)+ 607 C30H47N4O7P exige M 606 [a]D22 = -25,38 (c=0,76, MeOH)

Análise: C30H47N4O7P%H2O exige C, 58,52; H, 7,86; N, 9,10%. Obteve-se C, 58,67; H, 7,50; N, 9,17%. -48- 74 483 Ρ30181 -ijt Ο composto do título foi preparado de modo análogo, como um só diastereoisómero (D46B) (0,46 g) a partir do ácido (0,5 g) (D45B) e da (S)-fenilalanina-N-metilamida (0,22 g). S (CDCI3): 0,82 (6H, t), 1,00 (1H, m), 1,16 (1H, m), 1,50 (5H, m), 1,70 (6H, m), 1,95 (1H, m), 2,60 (4H, s), 2,70 (3H, d), 2,98 (1H, dd), 3,10 (1H, m), 3,30 (1H,. dd), 3,73 (3H, d), 3,78 (3H, d), 3,85 (3H, m), 4,77 (1H, m), 7,22 (5H, m), 7,34 (1H, d largo), 7,47 (1H, d).

Descricão 47 N-rN-(l-dimetoxifosfinil)-3-r8-(7.9-dioxo-8-azaspiroΓ4,51de-011)1propil)-(S)-leucil]-(S)-benziloxicarbonil-lisina-N-me-tilamida CD471

Preparou-se o composto do título como um só diastereoisómero (0,5 g) (D47) a partir do ácido (0,45 g) (D45A) e da (S)-Ne--benziloxicarbonil-lisina-N-metilamida (0,29 g) pelo processo referido na Descrição 19. S (CDC13): 0,96 (6H, dd), 1,47 (8H, m), 1,75 (11H, m), 1,98 (1H, m), 2,59 (4H, S), 2,75 (3H, d), 2,80 (1H, m), 3,20 (2H, m), 3,60 (1H, t), 3,72 (3H, d), 3,79 (3H, d), 3,85 (1H, m), 4,00 (1H, m), 4,30 (1H, q), 5,09 (2H, s), 5,17 (1H, s largo), 6,40 (1H, d largo), 7,34 (5H, s), 7,44 (1H, d). 31P δ (CDC13): 30,01

Observou-se FAB (M+H)+ 722 C35H56N509P exige M 721 [a]D22 _ -28,87 (c=0,95, MeOH)

Análise: C35H56N509P%H20 exige C, 57,72; H, 7,86; N, 9,58%. 0bteve-se C, 57,22; H, 7,37; N, 9,54

Descricão 48 N-ΓΝ-(1-(dimetoxifosfinil1-3-aminopronil)-(S)-leucilW S)-fenilalanina-N-metilamida (D48) -49- -49- Γ: 74 483 Ρ30181

Dissolveu-se Ν-[Ν-(1-dimetoxifosfinil)-3-ftalimidopropil)--(S)-leucil]-(S)-fenilalanina-N-metilamida (1 g) (D9) em solução metanólica 0,2M de hidrazina (50 ml) e agitou-se a solução à temperatura ambiente durante 24 h. Evaporou-se o solvente no vácuo, tratou-se a mistura com metanol, filtrou-se e evaporou-se o solvente no vácuo, obtendo-se o composto do título, como mistura de 2 diastereoisómeros (0,7 g) (D48) que foi usada na fase seguinte sem purificação adicional.

Descrição 49 Ν- ΓΝ- (1-dimetoxif osf inil) -3-f benziloxicarbonilaminolpropil WSV--leucill-(S)-fenilalanina-N-metilamida (D49)

Dissolveu-se Ν-[N-(1-(dimetoxifosfinil)-3-aminopropil)—(S)— -leucil]-(S)-fenilalanina-N-metilamida (4,5 g) (D48) em água (20 ml) e dioxano (20 ml). Juntou-se cloroformato de benzilo (1,8 ml) e manteve-se o pH a 9-9,5 pela adição de solução a 10% de hidróxido de sódio. Depois de agitar à temperatura ambiente durante a noite, extractou-se a solução com clorofórmio. Lavaram-se os extractos orgânicos com água, secaram-se com sulfato de sódio anidro, filtraram-se e evaporou-se o solvente no vácuo, obtendo- -se um óleo incolor.

Por purificação por cromatografia em coluna de sílica-gel, eluindo com 10% metanol/acetato de etilo, obteve-se o composto do título como uma mistura de 2 diastereoisómeros (4,7 g) (D49). δ (CDC13): 0,87 (6H, m), 0,96-2,17 (6H, m), 2,59 (l^H, d), 2,62 (1%H, d), 2,62 (1%H, d), 2,80 (1H, m), 3,00 (2H, m), 3,24 (2H, m), 3,44 (1H, m), 3,70 (6H, t), 4,66 (1H, m), 5,07 (2H, m), 5,36 (%H, t largo), 6,12 (hE, d), 6,41 (hE, t largo), 7,24 (11H, m), 7,60 (%H, d).

Observou-se FAB (M+H)+ 591 C29H43N4°7P exige M 590

Exemplo 1 Ν-ΓΝ-(1-fosfono-1-(2-hidroxifenil)metil)leuclll-N.O-dimetil-(S) --tirosinamida fEl)

Dissolveu-se o éster dietílico (D3) (0,2 g) em diclorometa-

3

74 483 Ρ30181 -50-no (10 ml) e tratou-se com bromotrimetilsilano (0,5 ml). Agitou--se a solução à temperatura ambiente durante 4 dias, juntou-se metanol (20 ml) e evaporou-se o solvente no vácuo, obtendo-se o produto em bruto. Por cromatografia em coluna com sílica de fase inversa, eluindo com um gradiente de 5% até 30% de metanol em água, obteve-se o composto do título (0,16 g) como mistura de diastereoisómeros.

Observou-se FAB (M+H)+ 508. 024Η34Ν307Ρ exige M 507.

Exemolo 2 N-rN-(l-fosfono-3-(1.8-naftalenodicarboximida)propil)-f S)-leu-cil1-N.0-dimetil-(S)-tirosinamida (E2)

Dissolveu-se o éster dibenzílico (D6A) (0,5 g) em etanol (100 ml) e hidrogenou-se com 10% de paládio sobre carvão, à pressão atmosférica, durante 24 h. Filtrou-se a solução e evaporou-se o solvente no vácuo, obtendo-se o composto do título como um só diastereoisómero (E2A) (0,38 g).

Observou-se FAB (M+H)+ 639. 032Η39Ν408Ρ exige M 638.

Analogamente, o éster dibenzílico (D6B) deu o composto do título como um só diastereoisómero (E2B).

Observou-se FAB (M+H)+ 639. C32H39N408P exige M 638.

Exemplo 3 N-ΓΝ-f1-fosfono-3-ftalimidopropil)-(S)-leucill-(S)-fenilalanina--N-metilamida

Dissolveu-se o éster dimetílico (D9) (1 g) em diclorometano (10 ml) e juntou-se bromotrimetilsilano (1,56 g) sob azoto à temperatura ambiente. Agitou-se a solução à temperatura ambiente durante 3 h e depois sob refluxo durante 1,5 h. Deixou-se a solução arrefecer, evaporou-se o solvente no vácuo, obtendo-se um óleo incolor que se dissolveu em dioxano (5 ml) e água (0,5 ml) e se submeteu a refluxo durante 1 h. Evaporou-se o solvente no vácuo, obtendo-se o composto do título como um produto cristalino, branco, (0,7 g) , como mistura de 2 diastereoi- 74 483 Ρ30181 / -51- r t"

sómeros. δ (CD3OD): 0,98 (6H, m), 1,55-2,40 (5H, m), 2,65 (3H, s), 2,80-3,25 (3H, m), 3,68 (l^H, m) , 3,84 (%H, m), 4,21 (%H, m) , 4,43 (hK, t), 4,67 (1H, m), 7,27 (5H, m), 7,84 (4H, m).

Observou-se FAB (M+H)+ 559 C27H35N4O7P exige M 558

Dissolveu-se o éster dimetilico (D9A) (0,06 g) em dicloro-metano (10 ml) e arrefeceu-se a solução até -20°C. Juntou-se io-dotrimetilsilano (0,1 ml) sob azoto, a -20°C, e agitou-se a solução durante 30 min- Deixou-se a solução aquecer até temperatura ambiente e agitou-se durante 3 h. Evaporou-se o solvente no vácuo, dissolveu-se o resíduo em metanol (20 ml) e agitou-se durante 2 h. Evaporou-se o solvente no vácuo, obtendo--se o composto do título (0,05 g) como um só diastereoisómero. δ (CD30D): 1,00 (6H, t), 1,70 (3H, m), 2,06 (1H, m), 2,42 (1H, m), 2,69 (3H, S), 2,83-3,20 (3H, m), 3,70 (1H, m), 3,86 (1H, m), 4,42 (1H, t), 4,68 (1H, dd), 7,30 (5H, m), 7,85 (4H, m).

Observou-se FAB (M+H)+ 559 C27H35N4°7P exige M 558 Exemolo 4 N-ΓΝ-C1-fosfono-4-(1,8-naftalenodicarboximido)butil)-(S)-leu-cil1-(S)-fenilalanina-N-metilamida (E4) 0 composto do título (2,7 g) foi preparado a partir do éster dibenzílico (D12) (3,23 g) pelo processo referido no Exemplo 2. 6 (CD30D): 0,68 (3H, dd), 0,83 (3H, dd), 1,06-1,90 (7H, m), 2,25-3,15 (4H, m), 2,53 (1%H, s), 2,60 (lhH, s), 3,94 (1%H, m) , 4,24 (%H, t), 4,50 (1H, m), 7,06 (5H, m), 7,51 (2H, t), 8,14 (2H, d), 8,22 (2H, d).

Observou-se FAB (M+Na)+ 645. C^I^gN^^P exige M 622 74 483 Ρ30181 / Λ '7 -52- ( 1

ÍJI

Exemplo 5 Ν-ΓΝ-f1-fosfono-2-(1,8-naftalenodicarboximido)etil)-f S)-leucil1--(S)-fenilalanina-N-metilamida (E5) O composto do título (0,69 g) foi preparado a partir do éster dibenzílico (D15) (1,14 g) pelo processo descrito no Exemplo 2. δ (CD30D): 0,27 (l^iH, d), 0,42 (lhE, d), 0,96 (3H, d), 0,96-1,80 (3H, m), 2,46 (1^, s), 2,74 (1^, S), 2,50-3,30 (3H, m), 4,14 (%H, t), 4,50 (2H, m), 4,66 (1H, m), 4,81 (%H, m), 7,17 (5H, m), 7,76 (2H, t), 8,32 (2H, t), 8,50 (2H, d).

Observou-se FAB (M+H)+ 595. C3oH35N407P exige M 594.

Exemplo 6 N -ΓΝ-f1-fosfono-3-(1.8-naftalenodicarboximido)propil)-(S)-leu-cill-(S)-fenilalanina-N-metilamida (E6) 0 composto do título (0,63 g) foi preparado, como um só di-astereoisómero (E6A), a partir do éster dibenzílico (D16A) pelo processo descrito no Exemplo 2. 0 composto do título (0,4 g) foi também preparado, como um só diastereoisómero (E6A) a partir do éster dimetílico (D22) por tratamento com bromotrimetilsilano (1 ml) em diclorometano (50 ml), à temperatura ambiente, sob azoto, durante 48 h. Evaporou-se o solvente no vácuo, dissolveu-se o resíduo em metanol (25 ml) e água (5 ml) e agitou-se durante 2 h. Evaporou--se o solvente no vácuo, obtendo-se o composto do título (E6A) (0,4 g) como um sólido branco. δ (CD3OD): 1,02 (6H, dd), 1,78 (4H, m), 2,14 (1H, m), 2,70 (3H, s), 2,96 (1H, dd), 3,12 (1H, dd), 3,99 (1H, m), 4,10 (1H, m), 4,34 (1H, m), 4,78 (1H, dd), 7,22 (5H, m), 7,78 (2H, t) , 8,34 (2H, d), 8,53 (2H, d). P: 5 (CD30D): 18,47 31 74 483 ,,/ P30181 -53-

Observou-se FAB (M+H)+ 609. ^3-^3 7N4O7P exige M 608 [α]022 = -25,39 (0=0,81, MeOH)

Analogamente, o éster dibenzílico (D16B) deu o composto do titulo como um só diastereoisómero (E6B). δ (CD30D): 1,00 (6H, m), 1,76 (3H, m), 2,03 (1H, m) , 2,41 (1H, m), 2,68 (3H, S), 2,95 (2H, m) , 3,14 (1H, dd) , 4,16 (2H, m), 4,46 (1H, t), 4,69 (1H, dd), 7,30 (5H, m), 7,75 (2H, t), 8,30 (2H, d), 8,46 (2H, d).

Observou-se FAB (M+H)+ 609. Cg-jHgyN^OyP exige M 608 Exemplo 7 Ν-ΓΝ-f1-fosfοηο-3-fenilorooil)-(S)-leucil1-(S)-fenilalanina-N--metilamida fE7)

Dissolveu-se o éster dibenzílico (D19A) (0,46 g) em etanol (100 ml) e hidrogenou-se com 10% de paládio sobre carvão vegetal, à pressão atmosférica, durante 24 h. Filtrou-se a solução e evaporou-se o solvente no vácuo, obtendo-se o composto do título como um sólido branco como um só diastereoisómero (E7A) (0,35 g). S (CD3OD): 0,95 (6H, dd), 1,66 (3H, m), 1,85 (1H, m), 2,14 (1H, m), 2,36 (1H, m), 2,50-2,84 (2H, m), 2,70 (3H, s), 2,92 (1H, dd), 3,07 (1H, dd), 4,40 (1H, t), 4,63 (1H, dd), 7,23 (10H, m).

[a]D22 = -26,24° (c=l% em metanol) p.f. = 147-150 °C.

Observou-se FAB (M+H)+ 490. C25H36N3°5P exige M 489.

Análise: C25H36N305P.%H20 exige C, 60,23; H, 7,48; N, 8,43%. obteve-se C, 59,84; H, 7,29; N, 8,43%.

Analogamente, preparou-se o composto do título a partir do -54- -54- f*r/ J' 74 483 Ρ30181 éster dibenzílico (D19B) (0,14 g) como um sólido branco, como um só diastereoisómero (E7B) (0,10 g). δ (CD30D): 0,81 (6H, dd), 1,52 (3H, m), 1,78 (1H, m), 2,07 (1H, m), 2,52 (3H, s), 2,60 (1H, m), 2,65-3,04 (4H, m), 3,91 (1H, s largo), 4,49 (1H, t), 7,13 (10H, m).

[a]D22 = -13,71° (c=l% em metanol).

Observou-se FAB (M+H)+ 490. C25H36N305P exige M 489.

Exemplo 8 Ν-ΓΝ-fl-fosfono-3-f 4-bromo-l.8-naftalenodicarboximido)propilΪ--fS)-leucill-fS)-fenilalanina-N-metilamida fE8)

Preparou-se o composto do título, como um só diastereoisómero (0,08 g), (E8A), a partir do éster dimetílico (0,2 g) (D29A), pelo processo descrito no Exemplo 6. 5(CD3OD): 1,02 (6H, dd), 1,76 (3H, d largo), 2,02 (1H, s largo), 2,40 (1H, m), 2,68 (3H, s), 2,84 (1H, m), 2,94 (1H, dd), 3,11 (1H, dd), 4,04 (1H, m), 4,16 (1H, m), 4,47 (1H, t), 4,67 (1H, dd), 7,30 (5H, m), 7,79 (1H, t), 7,98 (1H, d), 8,20 (1H, d), 8,45 (2H, t).

Analogamente, preparou-se o composto do título, como um só diastereoisómero (E8B) a partir do éster dimetílico (D29B). δ (CD3OD): 0,97 (6H, dd), 1,78 (4H, m), 2,16 (1H, m), 2,94 (1H, dd), 3,08 (1H, dd), 3,20 (1H, m), 3,93 (1H, S largo), 4,05 (1H, s largo), 4,47 (1H, m), 4,70 (1H, t), 7,77 (1H, t), 7,95 (1H, d), 8,20 (1H, d), 8,42 (2H, t).

Exemplo 9 Ν-ΓΝ-f 1-f osfono-3-f benziloxicarbonilamino)propil)-(S)-leucil'|--(S)-fenilalanina-N-metilamida f E9)

Preparou-se o composto do título a partir do éster dimetílico (D49) por tratamento com bromotrimetilsilano durante 3 h como se descreve no Exemplo 6. -55- 74 483 Ρ30181 δ (CD3OD): 0,96 (6Η, m), 1,55-2,30 (5H, m), 2,70 (3H, m), 2,88-3,21 (5H, m), 3,65 (1H, m), 4,05-4,45 (1H, m), 5,10 (2H, m), 7,30 (10H, m).

Observou-se FAB (M+H)+ 563. C27H39N407P exige M 562

Exemplo 10 N-ΓΝ-(l-fosfono-3-f 2-hidroxifenil)propil)-f S)-leucil1 - (S) --fenilalanina-N-metilamida (E1Q)

Preparou-se o composto do título, como mistura de 2 diastereoisómeros (2,5 g) E10), a partir do éster dibenzílico (D30) (4 g), pelo processo descrito no Exemplo 2.

Observou-se FAB (M+H)+ 506. C25H36N30gP exige M 505

Exemplo 11 N-fN-(1-fosfono-3-(metilmercapto)prooil)-(S)-leucil]-(S)-fenilalanina-N-metilamida (Eli)

Preparou-se o composto do título, como mistura de 2 diastereoisómeros (0,15 g) (Eli), a partir do éster dimetílico (0,19 g) (D31), por tratamento com bromotrimetilsilano durante 24 h, como se descreveu no Exemplo 6.

Observou-se FAB (M+H)+ 460. C20H34N3O5PS exige M 459

Exemplo 12 N- ΓΝ-f 1-f osf ono-3-(metilsulf inil)propil )-(S) -leucil-) - (S) -fenilalanina-N-metilamida (E12)

Preparou-se o composto do título, como mistura de 2 diastereoisómeros (0,42 g) (E12), a partir do éster dimetílico (D32) (0,52 g), por tratamento com bromotrimetilsilano durante 24 h, como se descreveu no Exemplo 6. δ (CD3OD): 0,99 (6H, m), 1,60-2,47 (5H, m), 2,70 (3H, m) , 2,77-3,53 (8H, m), 4,36 (hK, m), 4,45 (¾ m), 4,70 (1H, m), 7,31 (5H, m).

74 483 Ρ30181 -56-

Exemplo 13 Ν-ΓΝ-f1-fosfono-3-(metilsulfonil)propil)-(S)-leucil ~|-(S)-fenil-alanina-N-metilamida fEl3)

Preparou-se o composto do título , como mistura de 2 diaste-reoisómeros (0,4 g), (E13), a partir do éster dimetílico (D33) (0,5 g), por tratamento com bromotrimetilsilano, durante 48 h, como se descreveu no Exemplo 6. δ (DMS0): 9,80 (6H, m), 1,22-1,54 (5H, m), 2,43 (1H, m), 2,50 (^H, d), 2,57 (1^, d), 2,84 (1H, m), 2,90 (lkE, s), 2,94 (IkR , s), 2,94-3,40 (4H, m), 4,50 (1H, m), 7,22 (5H, m), 8,06 (^H, d), 8,14 (%H, d), 8,33 (%H, d), 8,49 (kE, d).

Observou-se FAB (M+H)+ 492. C20H34N3°7I>S exige M 491

Exemplo 14 N-fN-fl-fosfono-3-(l.8-naftalenodicarboximido )propil)-(S)-leucil 1 — (S)-triptofano-N-metilamida (E14)

Preparou-se o composto do título, como um só diastereoisó-mero (0,4 g) (E14), a partir do éster dimetílico (D34) (0,52 g) por tratamento com iodotrimetilsilano, como se descreveu no Exemplo 3. S (CD30D): 0,65 (3H, d), 0,73 (3H, d), 1,20 (3H, m), 1,52 (1H, m), 1,72 (1H, m), 2,00 (1H, m), 2,45 (1H, m), 2,50 (3H, s), 2,58 (1H, m), 3,45 (1H, t), 4,06 (2H, m), 4,50 (1H, dd), 6,77 (2H, m), 7,07 (1H, S), 7,10 (1H, t), 7,45 (1H, d), 7,70 (2H, t), 8,23 (2H, d), 8,42 (2H, d). 31P: 6 (CD30D): 24,58

Observou-se FAB (M+Na)+ 670. C33H3gN50yP exige M 647 [a]D22 = -20,41 (c=0,8%, MeOH)

Exemplo 15

Hidrocloreto de N-ΓΝ-fl-fosfono-3-f1,8-naftalenodicarboximido )propil)-(S)-leucil1-(S)-lisina-N-metilamida (E15)

Preparou-se o composto do título como um só diastereoisóme- -57- Õ //// / 74 483 Ρ30181 ro (0,62 g) (E15) a partir do éster dimetílico (1,0 g) (D35) por tratamento com bromotrimetilsilano durante 48 h como se descreveu no Exemplo 6. Dissolveu-se o produto em metanol e tratou-se com éter/HCl, obtendo-se o sal hidrocloreto. S (CD30D): 0,90 (6H, t), 1,44 (2H, m), 1,54-1,80 (7H, m), 2,08 (1H, m), 2,40 (1H, m), 2,60 (3H, S), 2,92 (2H, m), 3,26 (1H, m), 4,24 (2H, m), 4,34 (1H, Itt), 4,45 (1H, t), 7,73 (2H, t), 8,27 (2H, d), 8,45 (2H, d). 31P δ (CD30D): 17,00 [a]D22 = -9,03 (c=0,89, MeOH)

Observou-se FAB (M+H)+ 590. C28H40N5°7P exige M 589

Exemolo 16

Sal dissódico da N-rN-(l-fosfono-3-(1.8-naftalenodicarboximido)-propil WS^-leucin-(-^-aminoazaciclotridecan-2-ona (E16)

Preparou-se o composto do título como um só diastereoisóme-ro (0,6 g) (E16) a partir do éster dimetílico (0,7 g) (D36) por tratamento com bromotrimetilsilano durante 48 h como se descreveu no Exemplo 6. Dissolveu-se o produto em metanol/água e converteu-se no sal dissódico pela adição de dois equivalentes de hidróxido de sódio. δ (CD3OD): 0.98 (6H, m), 1,10-1,98 (22H, m), 2,18 (1H, s largo), 2,68 (2H, m), 3,63 (1H, q), 4,30 (3H, m), 7,75 (2H, q), 8,24 (2H, t), 8,46 (2H, t).

Observou-se FAB (M+H)+ 687. c33H47N4°7PNa2 exige M 686

Exemplo 17

Di-hidrocloreto de Ν-ΓΝ-f1-fosfοηο-3-f1.8-naftalenodicarboxi-mido)propil-(S)-leucil1-(S)-lisina-N-f aminoetil)amida (E17)

Dissolveu-se o éster dimetílico (D38) (0,4 g) em diclorome-tano (40 ml) e juntou-se uma solução etérea 1,0M de cloreto de hidrogénio (1,2 ml). Juntou-se bromotrimetilsilano (4 ml), agitou-se a solução à temperatura ambiente durante 48 h e evaporou- -58- -58- / e" 74 483 Ρ30181 -se o solvente no vácuo. Dissolveu-se o resíduo em metanol (20 ml) e agitou-se a solução durante 2 h. Pela adição de acetona obteve-se o composto do título (0,75 g) como um só diastereoisó-mero (E17). δ (CD30D): 1,02 (3H, d), 1,05 (3H, d), 1,47-2,03 (ioh, m), 2,20 (1H, m), 2,54 (1H, m), 3,08 (4H, m), 3,37-3,63 (3H, m), 4,40 (2H, m), 4,58 (1H, t), 7,88 (2H, t), 8,41 (2H, d), 8,62 (2H, d). Observou-se FAB (M+H)+ 619. C29H43 n6o7 P exige M 618

Exemplo 18

Di-hidrocloreto de Ν-ΓΝ-ίl-fosfono-3-(l,8-naftalenodicarboxi-mido)propil)-(S)-leucil) -(S)-lisina-N-(etilpirrolidina)amida f E18 ^

Preparou-se o composto do título como um só diastereoisóme-ro (0,4 g) (E18) a partir do éster dimetílico (D39) (0,6 g) pelo processo descrito no Exemplo 17. δ (CD30D): 1,03 (3H, d), 1,06 (3H, d), 1,50-2,22 (13H, m), 2,55 (1H, m), 3,03 (2H, q), 3,12 (2H, m) , 3,32 (4H, m), 3,54 (1H, m), 3,66 (1H, m), 3,75 (2H, m), 4,34 (2H, m), 4,62 (1H, t), 7,87 (2H, t), 8,40 (2H, d), 8,50 (2H, d). 31P δ (CD30D): 15,71

Observou-se FAB (M+H)+ 673. C33H49N6°9P exige M 672

Exemplo 19

Tri-hidrocloreto de N-ΓΝ-f1-fosfono-3-(1,8-naftalenodicar-boximido)prooil)-(S)-leucil]-(S)-lisina-N-(etil-N-metilpjpera-zina^amida fE19^

Preparou-se o composto do título como um só diastereoisóme-ro (E19) (0,9 g) a partir do éster dimetílico (D41) (1,1 g) pelo processo descrito no Exemplo 17. δ (CD30D): 1,03 (6H, dd), 1,55 (2H, m), 1,69-2,03 (7H, m), 2,25 (1H, Hl), 2,53 (1H, m), 3,01 (1H, t), 3,05 (3H, S), 3,50 74 483 / Ρ30181 -59- (4H, m), 3,65 (1H, m), 3,74 (1H, m), 3,81 (8H, s largo), 4,31-4,47 (4H, m), 4,55 (1H, t), 7,82 (2H, t), 8,35 (1H, d), 8,54 (1H, d). 31P S (CD3OD): 17,45

Observou-se FAB (M+H)+ 702. C34H52N7°7P exige M 701 [a]D22 = +1,79 (C=0,78, MeOH)

Exemplo 20 N— ÇN-(1—fosfono-3-f 8-f 7.9-dioxo-8-azaspiro[4,51decil)Ipropil)--(S)-leucil1-(S)-fenilalanina-N-metilamida (E20)

Preparou-se o composto do título como um só diastereoisóme-ro (E20A) (0,37 g) a partir do éster dimetílico (D46A) (0,4 g) por tratamento com bromotrimetilsilano durante 48 h como se descreve no Exemplo 6. S (CD3OD): 0,97 (6H, d), 1,50 (4H, m), 1,72 (8H, m), 2,17 (1H, m), 2,65 (4H, s), 2,69 (3H, s), 2,75 (1H, m), 2,98 (1H, m), 3,12 (1H, m), 3,77 (2H, m), 4,39 (1H, q), 4,68 (1H, q), 7,28 (5H, m). 31P S (CD3OD): 18,54

Observou-se FAB (M+H)+ 579. C28H43N4°7P 14 578 [a]D22 = -23,45 (c=0,64, MeOH)

Analogamente, preparou-se o composto do título como um só diastereoisómero (E20B) (0,41 g) a partir do éster dimetílico (D46B) (0,46 g).

Exemplo 21

Hidrocloreto de N-ΓΝ-(1-fosfono-3-Γ 8-(7.9-dioxo-8-azaspiro Γ4.51-decil)lpropil)-fS)-leucil1-fS)-lisina-N-metilamida (Ε21Ϊ

Preparou-se o composto do título como um só diastereoisómero (E21) (0,3 g) a partir do éster dimetílico (D47) (0,5 g) pelo processo descrito no Exemplo 17. -60- & 74 483 P30181 -- η. δ (CD3OD): 1,02 (6Η, t), 1,55 (6H, m), 1,66-1,87 (11H, m) , 1,95 (1H, m), 2,28 (1H, m), 2,72 (4H, s), 2,74 (3H, s), 3,00 (2H, t), 3,23 (1H, m), 3,90 (1H, m), 4,09 (1H, m), 4,42 (1H, q), 4,49 (1H, t) 31P δ (CD3OD): 18,04

Observou-se FAB (M+H)+ 560. C25H46N507P exige M 559 [a]D22 = -16,72 (C=0,66, MeOH)

Exemplo 22

Prepararam-se composições para administração oral combinando o seguinte: 1) Formulação de Dosaaem Sólida

Composto de Fórmula 1 10

Estearato de magnésio 0,5

Amido 2,0

Celulose HPM 1,0

Celulose microcristalina 86,5 A mistura pode ser sujeita a pressão para dar comprimidos ou pode encher cápsulas de gelatina dura. 0 comprimido pode ser revestido pela aplicação de uma suspensão de um formador de película (p. ex. celulose HPM), pigmentos (p. ex. dióxido de titânio) e plastificante (p. ex. fta-lato de dietilo), secando a película por evaporação do solvente. A película de revestimento pode constituir 2,0% a 6,0% do peso do comprimido, dé preferência cerca de 3,0%. 2) Cápsula %-P/fí. 20

Composto de Fórmula 1 Polietilenoglicol 80 Ρ30181 -βί ο composto é disperso ou dissolvido no veículo líquido, adicionando, se necessário, um agente espessante. A formulação é depois fechada numa cápsula de gelatina mole por tecnologia adequada.

Exemplo 23

Pode-se preparar uma composição farmacêutica para administração parentérica combinando o seguinte: Nível Preferido

Composto de Fórmula 1 Solução salina A solução é esterilizada e selada em recipientes estéreis.

Ensaio dos Inibidores da Colaoenase 0 ensaio é essencialmente conduzido como em Cawston e Bar-rett, Anal. Biochem. 99, 340-345 (1979). Os compostos de ensaio são dissolvidos em metanol por sonicação e adicionados à cola-genase (purificada a partir de sobrenadantes de culturas de linhas de células de fibroblastos do pulmão humano, WI-38) em tampão. Após 5 min de pré-incubação a 37“C, os tubos de ensaio são arrefecidos até 4°C e junta-se-lhe colagéneo tipo I de pele de ratazana 3H-acetilado. Incubam-se os tubos de ensaio a 37°C durante a noite. 0 3H-colagéneo forma fibrilas insolúveis que são o substrato para o enzima.

Para terminar o ensaio, os tubos de ensaio são centrifu-gados a 12 000 rpm durante 15 min. O 3H-colagéneo não digerido é pelotizado, enquanto que o 3H-colagéneo digerido é obtido sob a forma de péptidos solúveis no sobrenadante. Retira-se uma amostra do sobrenadante para contagem por cintilação líquida. A actividade dos inibidores da colagenase (IC50: 50% da concentração inibitória) é expressa como a concentração do composto que inibe uma concentração conhecida (padrão) do enzima, em 50%.

Os compostos dos Exemplos 2-12 tinham valores IC50 na gama -62- 74 483 Ρ30181 2,3 X ΙΟ"6 Lisboa, - 1,3 χ ΙΟ”8 Μ. ,j‘ UUT Por SMITHKLINE BEECHAM plc =0 AGENTE OFICIAL=

Claims

74 483 Ρ30181 -1-

*íj£. REIVINDICAÇÕES 1 - Composto caracterizado por ter a fórmula (I) ou um seu sal:

na qual, é -(CH2)n-W onde n é 0-6 e W é amino, fenilo opcionalmente substituído, -CONRgRg, -NR5C0Rg, NR5C02CH2Rg ou NRgCONR5Rg onde R5 é hidrogénio ou alquilo C-^g e Rg é hidrogénio, alquilo C1_6, fenilo ou heteroarilo opcionalmente substituído, ou R5 e Rg em conjunto com o átomo de azoto ao qual estão ligados formam um anel com 5, 6 ou 7 membros, com um átomo opcional de oxigénio ou enxofre ou um segundo átomo de azoto opcionalmente substituído no anel; ou W é -S(0)p-R7 onde péO, 1 ou 2 e R7 é alquilo cl-6; ou W é um grupo de sub-fórmula (a), (b), (c) ou (d):

(a) (b) O 0

onde, na sub-fórmula (a), (b) e (c) A representa um anel arilo ou heteroarilo, mono ou bicíclico, opcionalmente substituído, e na sub-fórmula (c) e (d) q é um número inteiro entre 1 e 3; R2 é alquilo C3_6 ; -CH2-Z onde Z é fenilo ou R3 é hidrogénio, alquilo 01-6, 74 483 Ρ30181

-2- heteroarilo opcionalmente substituído, -(CH2)rNR8Rg, “(CH2)rNHCOR10, -(CH2)rNR11C(=NR12)NR8R9, -(CH2)rCONH(CH2)gNRgRg ou (CH2)r-R13 onde r é 1 a 6, sé2a4, sendo cada ui de Rg e Rg, independentemente um do outro, hidrogénio ou alquilo C-^-g, ou R8 e Rg em conjunto com o átomo de azoto ao qual estão ligados formam um anel com 5, 6 ou 7 membros, com um átomo opcional de oxigénio ou enxofre ou um segundo átomo de azoto opcionalmente substituído no anel, R10 é alquilo ou -(CH2)tNR8R9f onde t é 1 ou 2 e Rg e Rg são definidos como anteriormente, Ri:l é hidrogénio ou alquilo C-^g ou Ri:l e R8 em conjunto com os átomos de azoto aos quais estão ligados formam um anel com 5, 6 ou 7 membros opcionalmente substituído, R12 é hidrogénio ou alquilo C-^_g e R^3 é um anel piperidilo opcionalmente substituído ou R3 é um grupo: -ch-o-r14 I R15 onde R*l4 é hidrogénio, alquilo C^_g ou benzilo opcionalmente substituído e R15 é hidrogénio ou alquilo 01-6; e R4 é hidrogénio, alquilo 01-6 ou -(CH2)rNRgR9 na qual r, Rg e Rg são definidos tal como para R3; ou R3 e R4 são ligados conjuntamente como -(CH2)m- onde m é um número inteiro entre 4 e 12, ou R3 e R^ são ligados como -(CH2)x-NR1g-(CH2)y- onde x é um número inteiro entre 1 e 9, y é um número inteiro entre 2 e 10, e a porção -(CH2)X- está adjacente ao átomo de carbono que suporta R3 assinalado com um asterisco na fórmula (I), e R16 é seleccionado de entre hidrogénio, alquilo C-^g, alcanoílo C2_g, alcoxicarbonilo C-^.g, aroílo, aralquilo ou aralquiloxicarbonilo, estando em cada um deles a porção arilo opcionalmente substituída.
2 - Composto de acordo com a reivindicação 1 caracterizado por R<l ser 2-hidroxifenilo, -(CH2)n-W, onde n é 2 e W é amino, fenilo, 2-hidroxifenilo, NHC02CH2Ph, N-ftalimido, 4-bromo-l,8--naftalenodicarboxamido, 7,9-dioxo-8-azaspiro[4,5]decilo, metil-mercapto, metilsulfinilo ou metilsulfonilo, ou R-l ser -(CH2)n-W,

74 483 Ρ30181 -3- -v onde nél# 2 ou 3 e W é um grupo 1,8-naftalenodicarboxamido.
3 - Composto de acordo com as reivindicaçães 1 ou 2, caracterizado por R2 ser n-butilo, iso-butilo ou sec-butilo.
4 - Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado por R3 ser benzilo, alquilamino C^_5, 4-metoxibenzilo, -(CH2)4NH2 ou 3-indolilmetilo e R4 ser metilo ou -(CH2)2NR8R9 onde R8 e R9 são ambos hidrogénio ou em conjunto com o átomo de azoto ao qual estão ligados, formam um grupo pirrolidina ou N-metilpiperazina, ou R3 e R4 serem combinados para formarem um grupo -(CH2)iq-.
5 - Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado por os centros quirais marcados com um asterisco na fórmula (I) terem a configuração (S) quando R3 não é hidrogénio.
6 - Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por ser: N-[N-(1-fosfono-1-(2-hidroxifenil)metil)-leucil]-N,0-dime-til-(S)-tirosinamida, N-[N-(1-fosfono-3-(1,8-naftalenodicarboximida)propil) - (S ) --leucil]-N,O-dimetil-(S)-tirosinamida, N-[N-(1-fosfοηο-3-ftalimidopropil)-(S)-leucil]-(S)-fenilala-nina-N-metilamida, N-[N-(1-fosfono-4-(1,8-naftalenodicarboximido)butil)-(S)--leucil]-(S)-fenilalanina-N-metilamida, N- [N-(1-fosfono-2-(1,8-naftalenodicarboximido)etil) — (S) — -leucil]-(S)-fenilalanina-N-metilamida, N-[N-(1-fosfono-3-(1,8-naftalenodicarboximido Jpropil) — (S) — -leucil]-(S)-fenilalanina-N-metilamida, N-[N-(1-fosfοηο-3-fenilpropil)-(S)-leucil]-(S)-fenilalanina--N-metilamida, N-[N-(1-fosfono-3-(4-bromo-l,8-naftalenodicarboximido)pro-pil)-(S)-leucil]-(S)-fenilalanina-metilamida, N-[N-(1-fosfono-3-(benziloxicarbonilamino)propil)-(S)-leucil]--(S)-fenilalanina-metilamida, -4- Ρ30181 Ν-[Ν-(1-fosfοηο-3-(2-hidroxifenil)propil)-(S)-leucil]-(S)-feni-lalanina-metilamida, Ν-[N-(l-fosfono-3-(metilmercapto)propil)-(S)-leucil]-(S)-feni-lalanina-N-metilamida, N-[N-(l-fosfono-3-(metilsulfinil)propil)—(S)-leucil]-(S)-feni-lalanina-N-metilamida, Ν-[N-(l-fosfono-3-(metilsulfonil)propil)-(S)-leucil]-(S)-feni-lalanina-N-metilamida, Ν-[N-(l-fosfono-3-(1,8-naftalenodicarboximido)propil)-(S)--leucil]-(S) triptofan-N-metilamida, Ν-[N-(l-fosfono-3-(1,8-naftalenodicarboximido)propil)-(S)--leucil]-(S)-lisina-N-metilamida, Ν-[N-(l-fosfono-3-(1,8-naftalenodicarboximido)propil)—(S)— -leucil]-(-)-aminoazaciclotridecan-2-ona, Ν-[N-(l-fosfono-3-(1,8-naftalenodicarboximido)propil)—(S)— -leucil]-(S)-lisina-N-(aminoetil)-amida, Ν-[N-(l-fosfono-3-(1,8-naftalenodicarboximido)propil)-(S)--leucil]-(S)-lisina-N-(etilpirrolidina)-amida, Ν-[N-(l-fosfono-3-(1,8-naftalenodicarboximido)propil)-(S)--leucil]-(S)-lisina-N-(etil-N-metilpiperazina)-amida, N-[N-(l-fosfono-3-[8-(7,9-dioxo-8-azaspiro[4,5]decil)]propil )-(S)-leucil}-(S)-fenilalanina-N-metilamida, ou N-[N-(l-fosfono-3-[8-(7/9-dioxo-8-azaspiro[4,5]decil)]pro-pil)-(S)-leucil]-(S)-lisina-N-metilamida, e seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
7 - Processo para a preparação de um composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o processo compreender a clivagem de um grupo R20 de um composto de fórmula (II):

(II) na qual, R2q é alquilo fenilo opcionalmente substituído ou -5- 74 483 Ρ30181 benzilo opcionalmente substituído e R21 © hidrogénio ou alquilo cl-6 ou benzilo opcionalmente substituído e Rlr R2, R3 e R4 são como definidos na fórmula (I) e, quando necessário, a conversão de R2i em hidrogénio através de uma reacção de clivagem adicional.
8 - Composição farmacêutica caracterizada por compreender um composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, e um transportador farmaceuticamente aceitável.
9 - Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, caracterizado por o composto ser utilizado como substância terapêutica activa.
10 - Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, caracterizado por o composto ser utilizado no tratamento de condições nas quais ocorre a degradação de tecido conjuntivo e de outros componentes proteicos do corpo. Lisboa, 27 QUT Por SMITHKLINE BEECHAM plc =0 AGENTE 0FICIAL=