PT100557A

PT100557A - Derivados de peptidilo, composicoes farmaceuticas que os contem e processo para a preparacao desses derivados

Info

Publication number: PT100557A
Application number: PT10055792A
Authority: PT
Inventors: John Robert Porter; Thomas Andrew Millican; John Richard Morphy; Nigel Robert Arnold Beeley
Original assignee: Celltech Ltd
Priority date: 1992-05-29
Filing date: 1992-05-29
Publication date: 1994-01-31

Description

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Descrição da patente de invenção de CELLTECH LIMITED, britânica, industrial e comer ciai, com sede em 216 Bath Road, Slough, Berkshire SL1 4ΞΜ, Reino Uhido, (inventores: John Robert Porter, Thomas Andrew Millican, John Richard Morphy e Nigel Robert Arnold Beeley, residentes no Reino Unido), para "DERIVADOS DE PEPTIDILO, COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS QUE OS CONTEM E PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DESSES DERIVADOS"

Desoricão

Campo da Invenção A presente invenção refere-se a uma nova classe de derivados de peptidilo, aos processos para a sua preparação e à sua utilização em medicina.

Antecedentes da invenção gsp :

Em tecidos normais a síntese do tecido conjuntivo celular é contrabalançada pela degradação da matriz extracelular, existindo os dois efeitos opostos num - 1 -

equilíbrio dinâmico. A degradação da matriz é ocasionada pela acção de proteinases libertadas de células de tecido conjuntivo residentes e por células inflamatórias invasoras, e é devida em parte á actividade de pelo menos três grupos de metaloproteinases. Estes são as colagenases, as gelatinase3 (ou colagenases tipo IV) e as estromelisinas. Normalmente estes enzimas catabólicos são estreitamente regulados ao nível da sua síntese e secreção e também ao nível da sua actividade extracelular, esta ultima através da acção de ini-bidores específicos, tais como c^-macroglobulinas e TIMP (tecido inibidor de metaloproteinase), que formam complexos inactivos com as metaloproteinases, A rotura acelerada, descontrolada, de tecidos conjuntivos pela ressorção, catalitisada pelas metaloproteinases, da matriz celular é uma característica de muitos estados patológicos, tais como artrite reumatoide, ulceração da córnea, da epiderme ou gástrica; metástases ou invasão de tumores; doenças periodontais e doenças ósseas. Ê de esperar que a patogénese destas doenças seja susceptf-vel de ser modificada de forma benéfica pela administração de inibidores de mataloproteinases e foram já sugeridos numerosos compostos para esta finalidade /"para uma revisão geral veja-se Wahl, R. C* et al, Ann. Rep. Med. Ghem. 25, 175-184, Academic Press Inc., San Diego (1990)_7.

Foram descritos como inibidores de cola-genase e/ou de estromelislna certos derivados de peptidilo de ácido hidroxâmico £ ver por exemplo Especificações de Patentes Europeias nfis. 214 639, 231 081, 236 872 e 274 453, e Especificações de Patente Internacional n2s. WO90/05716 e W090/05719_?·

Sumário da invenção

Descobrimos agora uma nova classe de derivados de peptidilo, cujos membros são inibidores de me - 2 -

taloproteinase e que, em particular, possuem vantajosamente uma acção inibitória potente e selectiva contra gelatinases. Há agora uma forte evidência de que as metaloproteinases são importantes na invasão de tumores e nas metástases. A gelatinase da célula de tumores, em particular, tem sido associada ao potencial das células de tumores para invadir e formar metástases. A invasão de tumores e a formação de metástases são a principal causa da falha dos tratamentos de pacientes com cancro, e a utilização de um inibidor selectivo de gelatinase, tal como um composto da presente invenção, que e capaz de inibir a invasão por células de tumor, pode vir a revelar-se como melhorando o tratamento desta doença.

Assim, de acordo com um aspecto da presente invenção revelamos um composto de fórmula (I)

na qual R representa um grupo -CQNHOH, carboxilo (-00^) ou carboxilo esterifiçado; R^· representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alqui lo, alcenilo, arilo, aralquilo, heteroaralquilo ou heteroariltioalquilo, eventualmente substituídos? 2 R representa um grupo alquilo, alcenilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, arilo, aralquilo, aralcoxi ou aralquiltio eventualmente substituídos, ou um grupo amino (-NH2) · amino substituído, carboxilo (-002H) ou carboxilo esterificado; 3

3 é R representa um átomo de hidrogénio ou um grupo al quilo; R representa um átomo de hidrogénio ou um grupo al quilo; R representa um grupo de formula - /"AlK._7nR em que Alk representa um grupo alquilo ou alcenilo eventualmente interrompido por um ou mais átomos de -O- ou -S- ou grupos -N(R ) £em que R representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo com 1 a 6 átomos de carbono^ n é O ou um número inteiro 1, e 6 r representa um grupo cicloalquilo ou cicloalcenilo eventualmente substituído; X representa um grupo amino (-NH2), ou amino substi tuído, hidroxilo ou hidroxilo substituído; e os seus sais, solvatos e hidratos.

Note-se que os compostos de acordo com a invenção podem conter um ou mais átomos de carbono substituidos assimetricamente, por exemplo os que são marcados com um asterisco na fórmula (I). A presença de um ou mais destes centros assimétricos num compostos de fórmula (l) podem dar origem a estereoisómeros, e em cada caso a invenção deve ser tomada como estendendo-se a todos estes estereoisómeros, incluindo enantiómeros e diastereoisómeros, e as suas misturas, incluindo as misturas racémicas.

Nas fórmulas aqui indicadas a linha ~ é usada num centro potencialmente assimétrico para representar a possibilidade das configurações R e S, e as linhas e------ representam uma única configuração num centro assimétrico.

Nos compostos de acordo com a invenção, quando o grupo R representa um grupo carboxilo esteri-

ficado, este pode ser por exemplo um grupo de fórmula -G02R 4 8

3 na qual R representa um grupo alquilo de cadeia linear ou ramificada com 1 a 8 átomos de carbono, eventualmente substituído, tal como um grupo metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, 5-butilo ou t-butilo? um grupo aril-alquilo com 6 a 12 átomos de carbono na parte arilo e 1 a 8 átomos de carbono na parte alquilo, tal como um grupo eventualmente substituído escolhido de benzilo, feniletilo, fenilpropilo, α-naftilmetilo ou p-naftilmeti-lo? um grupo arilo com 6 a 12 átomos de carbono tal como um grupo fenilo, a-na£tilo ou β-naftilo eventualmente substituídos? um grupo ariloxi-alquilo com 6 a 12 átomos de carbono na parte arilo e 1 a 8 átomos de carbono na parte alquilo, tal como um grupo eventualmente substituido escolhido de feniloximetilo, feniloxietilo, a-naftiloximetilo ou p-naftiloximetilo? um grupo alcanoiloxi-alquilo com 1 a 8 átomos de carbono em cada uma das partes alquilo, eventualmente substituido, tal como um grupo pivaloiloxime-tilo, propioniloxietilo ou propioniloxipropiloí ou um grupo aroiloxi-alqullo com 6 a 12 átomos de carbono na parte arilo e 1 a 8 átomos de carbono na parte alquilo, tal como um grupo eventualmente substituido escolhido de benzoiloxi-etilo ou benzoiloxipropilo. Os eventuais substituintes

Q presentes nos grupos R° incluem por exemplo um;r>u mais átomos de halogéneo, tais como átomos de fluor, de cloro, de bromo ou de iodo, ou grupos alquilo com 1 a 4 átomos de carbono, por exemplo grupos metilo ou etilo, ou grupos alco-xi com 1 a 4 átomos de carbono, por exemplo grupos metoxi ou etoxi.

Em geral quando o grupo R representa um grupo carboxilo esterificado, pode tratar-se de um éster metabolicamente dissociavel de um ácido carboxílico. 1 . _2

Quando os grupos R e/ou R nos compostos de fórmula (l) representam cada um um grupo alquilo ou um grupo alcenilo eventualmente substituidos, pode tratar--se por exemplo de um grupo alquilo com 1 a 6 átomos de car- - 5 -

bono ou de um grupo aleenilo com 2 a 6 átomos de carbono, de cadeias lineares ou ramificadas, tais como um grupo metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, s-butilo, t-butilo, n-pentilo, isopentilo, n-hexilo, eteni-lo, 1-propenilo, 1-butenilo ou 2-butenilo eventualmente substituídos por um ou mais grupos aleoxi com 1 a 6 átomos de carbono, por exemplo grupos metoxi, etoxi, propoxi, alquiltio com 1 a 6 átomos de carbono, como por exemplo metiltio, etiltio, propiltio, grupos aril-alcoxi com 6 a 12 átomos de carbono na parte arilo e 1 a 6 átomos de carbono na parte aleoxi, por exemplo fenil-alooxi com 1 a 6 átomos de carbono na parte aleoxi, tais como benziloxi, aralquiltio, por exemplo fenil-alquiltio com 1 a 6 átomos de carbono na parte alquilo, tais como benziltio, grupos amino (-IHr>), amino substituído /“tais como -UHR^, 9 c em que R representa um grupo alquilo com 1 a 6 átomos de carbono, por exemplo metilo ou etilo, aril-alquilo com 6 a 12 átomos de carbono na parte arilo e 1 a 6 átomos de carbono na parte alquilo, por exemplo fenil-alquilo com 1 a 6 átomos de carbono na parte alquilo, tais como benzilo, arilo com 6 a 12 átomos de earbono como por exemplo feni-lo, cicloalquilo com 3 a 8 átomos de carbono como por exemplo ciclohexilo, ou cioloalquil-alquilo com 3 a 8 átomos de carbono na parte cicloalquilo e 1 a 6 átomos de carbono na parte alquilo, como por exemplo o grupo eielo-bexilmetilo_J, carboxilo )-G02H) ou -G02R8 /“em que R8 é definido como anteriormenteJ. 1 p

Os grupos arilo representados por R e/ou R nos compostos de fórmula (I) incluem grupos arilo com 6 a 12 átomos de carbono, tais como os grupos fenilo ou^p- ou/^ -naf-tilo.

Os grupos aralquilo representados por 1 2 R e/ou R incluem grupos aril-alquilo com 6 a 12 átomos de carbono na parte arilo e 1 a 6 átomos de carbono na parte alquilo, tais como fenil-alquilo com 1 a 6 átomos de oar- - 6 -

bona na parte alquilo, ou grupos - ou β -naftil--alquilo com 1 a 6 átomos de carbono na parte alquilo, por exemplo benzilo, feniletilo, fenilpropilo, fenilbutilo, fenilpentilo, ô" - ou β -naftil-metilo, naftiletilo, naftil-propilo, naftilbutilo ou naftilpentilo.

Quando o grupo R nos compostos de fórmula (I) é um grupo heteroaralquilo, pode ser por exemplo um grupo heteroaril-alquilo com 3 a 6 átomos de carbono na parte arilo e 1 a 6 átomos de carbono na parte alquilo, tais como um grupo eventualmente substituido escolhido de pirrolilmetilo, furanilmetilo, tienilmetilo, imidazo-lilmetilo, oxazolilmetilo, tiazolilmetilo, pirazolilmetilo pirrolidinilmetilo, piridinilmetilo, pirimidinilmetilo, morfolinilmetilo, ou piperazinilmetilo.

Os grupos heteroariltioalquilo representados por R"*· incluem grupos heteroariltio-alquilo com 3 a 6 átomos de carbono na parte heteroarilo e 1 a 6 átomos de oarbono na parte alquilo, tais como grupos eventualmente substituidos escolhidos de pirroliltiometilo, furaniltiometilo, oxazoliltiometilo, tiazoliltiometilo, pirazoliltiometilo, pirrolidiniltiometilo, piridiniltiome-tilo, pirimidiniltiometilo, morfoliniltiometilo, ou pipe-raziniltiometilo·

Os eventuais substituintes que podem estar presentes nos grupos heteroalquilo ou heteroariltioalquilo representados por R1 incluem os que serão 1 2 indieados adiante relativamente a R e/ou R quando estes grupos forem por exemplo grupos aralquilo ou aralquiltio-alquilo.

Os grupos cicloalquilo representados 2 pelo grupo R em compostos de acordo com a invenção incluem grupos cicloalquilo com 3 a 8 átomos de carbono, tais como ciclopentilo ou oiolohexilo. - 7 -

alq.uil-alg.uilo pode tratar-se por exemplo de um grupo ci-oloalq.uil-alq.uilo oom 3 a 8 átomos de oarbono na parte oioloalquilo e 1 a 6 átomos de carbono na parte alquilo, tais oomo um grupo oiclopentil-alquilo oom 1 a 6 átomos de carbono na parte alquilo ou ciolohexil-alquilo oom 1 a 6 átomos de oarbono na parte alquilo, por exemplo um grupo oiolopentilmetilo, oiolopentiletilo, oiclopentilpropilo, oiclopentilbutilo, eiclohexilmetilo, oiolohexiletilo, oiclohexilpropilo ou oiolohexilbutilo. 2

Quando R representa um grupo aralooxi ou um grupo aralquiltio pode tratar-se de, por exemplo, um grupo aril-alcoxi ou um grupo aril-alquiltio tendo em oada caso 6 a 12 átomos de oarbono na parte arilo e 1 a 6 átomos de oarbono em oada uma das partes alquilo, tais como um grupo fenil-alcoxi ou fenil-alquiltio tendo em cada oaso 1 a 6 átomos de carbono na parte alquilo, por exemplo um grupo benziloxi, feniletoxi, fenilpropoxi, fenilbutoxi, benziltio, feniletiltio, fenilpropiltio ou fenilbutiltio.

Os grupos oioloalquilo, oieloalquilal-quilo, arilo, aralquilo, aralooxi ou aralquiltio represen-tados por R e/ou R nos compostos de fórmula (I) podem estar, oada um, eventualmente substituído na parte cíclica do grupo por 1, 2 ou mais substituintes /“R10_7 escolhidos de átomos de halogéneo, por exemplo átomos de fluor, cloro, bromo ou iodo, ou grupos alquilo com 1 a 6 átomos de oarbono, por exemplo metilo ou etilo, alooxi oom 1 a 6 átomos de oarbono, por exemplo metoxi ou etoxi, alquil-enodioxi com 2 a 6 átomos de oarbono, por exemplo eti-lenodioxi, halogenoalquilo com 1 a 6 átomos de oarbono, por exemplo trifluormetilo, alquilamino com 1 a 6 átomos de carbono, por exemplo metilamino ou etilamino, dialqui-lamino oom 1 a 6 átomos de oarbono em oada uma das partes alquilo, por exemplo dimetilamino ou dietilamino, amino 8 r

(-NH2), nitro, oiano, hidroxilo (-0H), carboxilo (-002R8), -OOgH), em que R8 é definido oomo anteriormentè, alquil-carbonilo com 1 a 6 átomos de Garbono na parte alquilo, por exemplo acetilo, sulfonilo (-S02H), alquilsulfonilo com 1 a 6 átomos de carbono na parte alquilo, por exemplo metilsulfonilo, aminosulfonilo (-S02KH2), alquilaminossulfonilo com 1 a 6 átomos de carbono na parte alquilo, por exemplo metilaminossulfonilo ou etilaminossulfonilo, dialquilaminossulfonilo com 1 a 6 átomos de carbono em cada uma das partes alquilo, por exemplo dimetilaminossul-fonilo ou dietilaminossulfonilo, oarboxamido (-G0IH2), alquilaminocarbonilo com 1 a 6 átomos de earbono na parte alquilo, por exemplo metilaminoearbonilo ou etilaminooar-bonilo, dialquilaminooarbonilo com 1 a 6 átomos de carbono em cada uma das partes alquilo, por exemplo dimetilami-nooarbonilo ou dietilaminocarbonilo, sulfonilamino (-MS02H), alquilsulfonilamino com 1 a 6 átomos de earbono na parte alquilo, por exemplo metilsulfonilo ou etil-sulfonilamino, ou dialquilsulfonilamino com 1 a 6 átomos de carbono em eada uma das partes alquilo, por exemplo di-metilsulfonilamino ou dietilsulfonilamino. Note-se que sempre que estejam presentes dois ou mais substituintes R^, e estes não tem necessàriamente que ser átomos iguais e/ou grupos iguais. Os substituintes R10 podem estar presentes em qualquer átomos de carbono do anel, distinto daquele que se liga ao radical da molécula de fórmula (I). Assim, por exemplo, em grupos fenilo qualquer dos substituintes pode estar presente nas posiçães 2, 3, ou 4, 5, ou 6, relativamente ao átomo de carbono do anel ligado à restante molécula· 2

Quando o grupo R nos compostos de fórmula (I) é um grupo amino substituído, estè pode ser q q por exemplo um grupo -NHR em que R é definido como an-teriormente. - 9 -

Os grupos carboxilo esterificados re- 2 8 presentados por R incluem grupos de fórmula -C0oR na 8 qual R é definido como anteriormente. 5 4-

Quando os grupos E e R em compostos de fdrmula (I) sao grupos alquilo, podem ser por exemplo grupos alquilo com 1 a 6 átomos de carbono, tais oomo grupos metilo ou etilo.

Quando o grupo Alk está presente em compostos dé fdrmula (I) pode ser um grupo alquilo de cadeia linear ou ramificada com 1 a 6 átomos de carbono, por exemplo um grupo metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, n-pentilo ou n-hexilo, ou um grupo alcenilo com 2 a 6 átomos de carbono, por exemplo ete-nilo ou 1-propenilo, eventualmente interrompidos por um ou mais átomos -0- ou -S- ou grupos -E(R') em que R representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo com 1 a 6 átomos de carbono, tal oomo um grupo metilo. g 0 grupo R nos compostos de fórmula (I) pode representar um grupo cioloalquilo com 3 a 8 átomos de oarbono, por exemplo um grupo eiclopentilo ou oiolohexilo, ou um grupo eieloalcenilo com 3 a 8 átomos de oarbono, por exemplo ciclopentenilo ou oiclohexenilo, eventualmente substituídos por 1, ou 2 ou mais grupos alquilo oom 1 a 6 átomos de oarbono, por exemplo metilo ou etilo, alcoxi com 1 a 6 átomos de carbono, por exemplo metoxi ou etoxi, ou alquiltio com 1 a 6 átomos de carbono, por exemplo metiltio, ou hidroxilo.

Quando X nos compostos de fdrmula (I) representa um grupo amino substituído, este pode ser 11 12 11 por exemplo um grupo de fdrmula -UR R em que R e 12 R , que podem ser iguais ou diferentes, representam, cada um, um átomo de hidrogénio (com a condição de que quan-do um dos substituintes R ou R é um átomo de hidrogé- - 10

nio, o outro não é) ou um grupo alquilo de cadeia linear ou ramificada e eventualmente substituido, eventualmente interrompido por ou ou mais átomos -0- ou -S- ou grupos -R(R^) ou grupos aminooarbonilcxi /""-MO(0)0-__7, ou R11 12 e R em conjunto com o átomo de azoto ao qual estão ligados podem formar um grupo amino cíclico com 3 a 6 átomos de carbono, eventualmente substituido, possuindo eventualmen-te um ou mais de outros heteroátomos escolhidos de grupos -0- ou -S-, ou grupos -R(R‘). XI 12

Quando R e/ou R representam um grupo alquilo, este pode ser por exemplo um grupo alquilo com 1 e 6 átomos de carbono, tal como um grupo metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, s-buti-lo ou t-butilo, eventualmente interrompido por um ou mais átomos -0- ou -S-, ou grupos -H(R^)- ou aminooarboniloxi e pode ser por exemplo um grupo metoximetilo, etoximetilo, etoxietilo ou etilaminooarboniloximetilo. Qs substituin-tes eventuais que podem estar presentes nestes grupos in cluem hidroxflo (-0H), oarboxilo (-G09H), carboxilo esteri-ficado (-OOgR ), carboxamido, (-CORHo), carboxamido substituido, por exemplo um grupo -C0IR"1· R^2 em que RR^R12 é definido como acima, amino (-RH9), amino substituido, c 11 12 por exemplo um grupo de fórmula -RR R , ou arilo, por exemplo arilo com 6 a 12 átomos de carbono, tal como fenilo, eventualmente substituido por 1, 2 ou mais substituintes R10 escolhidos dos que já foram enumerados acima em rela- 2 ção com o grupo R .

Os exemplos particulares de grupos amino cíclicos representados por -RR^^^2 incluem os grupos morfolinilo, imidazolilo, piperazinilo, pirrolilo, oxazolilo, tiazolilo, pirazolilo, pirrolidinilo, pirldini-lo e pirimidinilo.

Quando o grupo X ê um grupo hidro xilo substituido pode ser por exemplo um grupo -0R11 em - 11 -

11 em que R ê definido como anteriormente, mas diferentes de utn átomo de hidrogénio.

Os sais dos compostos de fórmula (I) ineluem sais farmaceuticamente aceitáveis, por exemplo sais de adição de áeido derivados de ácidos orgânicos ou inorgânicos, tais como os cloridratos, bromidratos, iodi-dratos, p-toluenossulfonatos, fosfatos, sulfatos, perclo-ratos, acetatos, trifluoracetatos, propionatos, citratos, malonatos, succinados, lactatos, oxalatos, tartaratos e benzoatos.

Também se podem formar sais com bases. Estes sais incluem sais derivados de bases orgânicas ou inorgânicas, por exemplo sais ode metais alcalinos como sais de sédio ou de potássio, sais de metais alcalino-terrosos, tais como sais de magnésio ou cálcio, e sais de aminas orgânicas, tais como sais de morfolina, piperidina, dimetilamina ou dietilamina.

Quando o grupo R nos compostos da presente invenção é um grupo carboxilo esterificado, pode tratar-se de um éster metabolicamente dissociável de fér-8 8 mula -OO2R em que R pode ser um grupo etilo, benzilo, feniletilo, finilpropilo,& - ou β -naftilo, 2,4-di--metilfenilo, 4-t-butilfenilo, 2,2,2-trifluoroetilo, 1--(bônziloxi)-benzilo, l-(benziloxi)-etilo, 2-metil-l--propioniloxipropilo, 2,4,6-trimetilbenzoiloximetilo ou pivaloiloximetilo·

Hbs compostos de férmula (I) 0 grupo R·** pode ser em particular um grupo alquilo com 1 a 6 átomos de carbono, tal como um grupo metilo, um grupo aralqui-lo tal como 0 grupo benzilo, um grupo aril-tioalquilo tal como um grupo feniltiometilo, ou um grupo heteroariltioal-quilo tal como um grupo tieniltiometilo, piridinil-tiome-tilo ou pirimidiniltio-metilo, ou é em particular um átomo - 12 -

de hidrogénio. 2 O grupo R pode em particular ser um grupo eventualmentè substituído escolhido de alquilo com 1 a 6 átomos de carbono, eicloalquilo com 3 a 8 átomos de carbono, cieloalquil-alquilo com 3 a 8 átomos de carbono na parte eicloalquilo e 1 a 6 átomos de carbono na parte alquilo, arilo com 6 a 12 átomos de carbono, aril-alooxi com 6 a 12 átomos de carbono na parte arilo e 1 a 6 átomos de carbono na parte aleoxi, ou aralquiltio com 6 a 12 átomos de carbono na parte arilo e, especialmente um grupo aril-alquilo com 6 a 12 átomos de oarbono na parte arilo e 1 a 6 átomos àe carbono na parte alquilo. Os tipos particulares destes grupos são grupos alquilo com 3 a 6 átomos de carbono eventualmente substituídos, tais como os grupos n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, s-butilo, t-butilo, n-pentilo eu isopentilo, ciolopentilo, ciolohexiloj oiclopentil-alquilo com 1 a 6 átomos de oarbono na parte alquilo, tal como oiolopentil-alquilo com 3 a 6 átomos de carbono na parte alquilo, por exemplo oiclopentilpropilo, ciclopentilbutilo ou ciclopentilpen-tiloj feniloj 2P ou β -naftilo; fenil-alcoxi com 1 a 6 átomos de carbono na parte aleoxi, por exemplo feniletoxi, fenilpropoxi ou fenil-butoxi; fenil-alquiltio com 1 a 6 átomos de oarbono na parte alquilo, por exemplo feniletil-tio, fenilpropiltio ou fenilbutiltio; e espeoialmente um grupo fenil-alquilo com 1 a 6 átomos de carbono na parte alquilo, tal como um grupo fenil-alquilo com 3 a 6 átomos de carbono na parte alquilo, por exemplo fenilpropilo, fenilbutilo ou fenilpentilo, ou ou β -naftil--alquilo com 1 a 6 átomos de carbono na parte alquilo, tal como áT ou Q -naftil-alquilo com 3 a 6 átomos de carbono na parte alquilo, por exemplo ou β -naftilpropilo, naftilbutilo ou naftilpentilo. Oaâa um destes grupos ci-closlquilo ou arilo podem estar substituídos por um ou mais substituintes R^ tal como foram descritos acima. ” 13 -

Os grupos R^ e R^ nos compostos de fór· mula (I) podem ser, oada um, em particular um grupo metilo, ou especialmente um átomo de hidrogénio. ç 0 grupo R^ nos compostos de fórmula (I) pode ser em particular um grupo AlkR , no qual R° representa um grupo cicloalquilo ou cicloalcenilo eventualmente substituido. 15

Assim, o grupo R nos compostos de fórmula (I) pode ser um grupo eventualmente substituido escolhido de oicloalquil-alquilo eom 3 a 8 átomos de earbono na parte oioloalquilo e 1 a 6 átomos de carbono na parte alquilo /""por exemplo, um ciolopentil-alquilo eom 1 a 6 átomos de oarbono na parte alquilo, tal como ciclopentil--metilo ou ciclopentil-etilo, ou um ciclohexil-alquilo com 1 a 6 átomos de earbono na parte alquilo, tal oomo oiolohexilmetilo ou oiclohexiletiloJ% cicloalcenil--alquilo com 3 a 8 átomos de carbono na parte cicloalcenilo e 1 a 6 átomos de oarbono na parte alquilo /“por exemplo um oiclopentenil-alquilo eom 1 a 6 átomos de carbono na parte alquilo, tal oomo ciclopentenilmetilo ou oiclo-hexenil-alquilo com 1 a 6 átomos de carbono na parte alquile tal oomo ciclohexenilmetilo^/, oioloalquil-alcoxi- alquilo com 1 a 3 átomos de earbono e 3 a 8 átomos de carbono na parte cicloalquilo em cada uma das partes alquilo /“por exemplo ciclopentil-metoximetilo, ciclohexil-metoximeti-lo_7, cicloalcenil-alcoxi-alquilo com 3 a 8 átomos de carbono na parte cicloalcenilo e 1 a 3 átomos de Garbono na em cada uma das partes alquilo /“por exemplo oiclopente-nil-metoximetilo ou ciolohexenil-metoximetilo__7, ciclo-alquil-alquiltio-alquilo com 3 a 8 átomos de oarbono na parte oioloalquilo e 1 a 3 átomos de oarbono em cada uma das partes alquilo /“por exemplo, eiclopentil-metiltio- metilo ou ciclohexil-metiltiometilo_7’ ou cicloalcenil-alquill-tio-alquilo com 3 a 8 átomos de carbono na parte oicloalce-nilo e 1 a 3 átomos de carbono em cada uma das partes alqui - 14 -

lo por exemplo cielopentenil-metiometilo ou ciclohexe-nil-metiltiometilocioloalqull-alquil-amino-alquilo com 3 a 8 átomos de carbono na parte cioloalquilo e 1 a 3 átomos de carbono em cada uma das partes alquilo /"por exemplo ciclopentil-metilaminometilo, ou eiclohexil-me-tilaminometllo^/ ou cioloaloenil-alquilamino-alquilo com 3 a 8 átomos de carbono na parte cicloalcenilo e 1 a 3 átomos de carbono em cada uma das partes alquilo /“ por exemplo ciclopentenil-metilaminometilo ou oiclohexenil--metilaminometilo^. 0 grupo X nos compostos de fórmula (I) pode em particular ser um grupo amino (-IHJ ou um grupo li 12 11 12 c -UR R . Oa grupos -UR R particulares são grupos

12 12 -UHR * Os grupos deste tipo incluem aqueles em que R representa um grupo alquilo com 1 a 6 átomos de carbono, por exemplo um grupo metilo, etilo ou n-propilo, eventual-mentè interrompido por um ou mais átomos de -0- ou -S-, ou grupos -U(R') /"por exemplo -UH- ou -U(CH^ ou grupos aminocarboniloxi e eventualmentè substituidos por um grupo hidroxilo, carboxilo, carboxialquilo, por exemplo carboximetilo, carboxamido, amino, -UR R /""por exemplo dialquilamino com 1 a 6 átomos de carbono em cada uma das partes alquilo, tal como dimetilamino, alquilamino com 1 a 6 átomos de carbono tal como metilamino, ou grupos amino cíclicos com 3 a 6 átomos de carbono tais como morfolinilo, pirrolidinilo ou piridiniloou fenilo eventualmente substituido por 1, 2 ou mais substituintes R^.

Um grupo partioularmente dtil de compostos de acordo com a invenção é o dos compostos de (Γ c fórmula (I) na qual ír representa um grupo AlfcR , em que Alk representa um grupo alquilo com 1 a 6 átomos de carbono e R^ representa um grupo cioloalquilo ou cicloaloe-nilo.

Outro grupo partioularmente dtil de compostos de acordo com a invenção é o de compostos de - 15 - 2 fdrmula (I) na qual R representa um grupo eventualmente substituido escolhido de alquilo, cicloalquilo, oicloalqui-lalquilo, arilo, aralcoxi ou aralquiltio.

Um outro grupo particularmente dtil de compostos de fdrmula (i) inclui aqueles nos quais X representa um grupo amino ou amino substituido.

Em geral nos compostos de fdrmula (I) 13 4 os grupos E , E e ST representam cada um, de preferência, um átomo de hidrogénio.

Numa outra preferência o grupo R nos compostos de acordo com a invenção é um grupo -CONHOH ou um grupo -COgH ou um éster dos mesmos, dissociável metaboli-camente, Numa preferência particular, no entanto, 1 represen ta um grupo -CONHOH ou -OOgH.

Um grupo especialmente útil de compostos de acordo com a invenção tem a fdrmula (la)

2 ç na qual E, E , E? e I são definidoskoomo na fdrmula (I); e os seus sais, solvatos e hidratos.

Um grupo particularmente dtil de compostos de fdrmula (Ia) são aqueles nos quais R reprssen- 2 ta um grupo -00NH0H ou -GOgHj R representa um grupo eventualmente substituido escolhido de alquilo, aloenilo, oi-cloalquilo, cicloalquilalquilo, arilo, aralcoxi ou aral-quiltio; — 16 —

5 6 R representa um grupo -AlkR , em que Alk representa um grupo alquilo com 1 a 6 átomos de c carbono e R representa um grupo cicloalquilo ou ciclo-aloenilo; X representa um grupo amino (-RHg) ou um grupo amino substituído; e os seus sais, solvatos e hidratos do mesmo.

Os compostos de fórmula (Ia) particularmente úteis são aqueles nos quais R^ representa 6 6 um grupo -AlkR , e R representa um grupo ciclohexilo eventualmente substituído. Os compostos deste tipo nos 5 quais R representa um grupo o iclob.exil-alq.uilo com 1 a 6 átomos de carbono na parte alquilo, particularmente um grupo oiclohexilmetilo, são particularmente úteis.

Outros compostos úteis de fórmula (Ia) incluem aqueles nos quais R representa um grupo alquilo com 5a 6 átomos de carbono, particularmente um grupo isobutilo ou n-pentilo, ou um grupo oieloalquil-alquilo com 5 a 6 átomos de carbono na parte alquilo, particularmente um grupo ciolobexilpropilo, ciclobexilbutilo ou ciolohexilpentilo, ou espeeialmente um grupo fenil-al-quilo com 2 a 6 átomos de carbono na parte alquilo, eventualmente substituído, particularmente um grupo eventualmente substituído escolhido de feniletilo, fenilpropilo, fenilbutilo ou fenilpentilo. Os eventuais substituintes no grupo podem ser 1, 2 ou mais grupos R10 tal como foram definidos para os compostos de fórmula (I).

Ros compostos de fórmula (Ia) X pode 11 12 representar um grupo -RIL, ou um grupo -E T como foi definido para os compostos de fórmula (I).

Um grupo particularmente útil de compostos de acordo com a invenção tem a fórmula (Ia) na qual - 17 - 1- a®as®SÍfessa8^

2 R representa um grupo fenil-alquilo oom 3 a 6 átomos de oarbono na parte alquilo, eventualmente substituido, espeoia mente um grupo fenilpropilo ou fenilbutilo eventualmente c substituido, R^ representa um grupo oiolohexilmetilo$ e X representa um grupo amino (-ΙΠ9) ou Os compos ^ 12 tos deste tipo nos quais X representa —ou são partioularmente áteis. los oompostos de fórmula (I) e (la), quando o grupo R é um grupo oioloalquil-alquilo com 1 a 6 átomos de oarbono na parte alquilo, então o oentro quirálioo ao qual este grupo está ligado tem de preferência uma oonfiguração S.

Os oompostos partioularmente preferidos de aoordo com a invenção incluem; /~4-(N-h.idroxiamino)-2(R)-oiclohexilmetil-suooinilJ-β --cicloh.exilalanina«I*-(2-feniletil)-amida; (/~4-H-(Mdroxiamino)-2R-isobutil-suooinil_7-L- β -oiclo-b.exilamina-H-(2-feniletil)-amida; £4-(R-Mdroxiamino)-2R-fenilpropil-suoGinil_/-Ii- β -oiolo- hexilalanina-lí-(2-f eniletil)-amida$ /“4-(R-bidroxiamino)-2R-fenilpropil-suooinil-7-I-β -oi-clob.exilalanina-U-(2-aminoetil)-]!ií,lí-dimetilamino J7-amida; £4-(R-b.idroxiamino)-2R-fenilpropil-suociniliiiii7-l- β -ci-oloh.exilalanina-I-/"’2-(p-sulfonamiàofenil)-etil_7-amida, //“'4-(R-b-idroxiamino)-2R-fenilpropil-succinili_/-L- β -oi-oloh.exilalanina-N-(2-(p-sulfonilfenil)-etil)-amidaj (/~4-(N-Mdroxiamino)-2R-fenilpropil-suocinil_7-Ii-/3 -oiolo-hexilalanina-I-/"” 2-(2-aminoetil)-piridina>_7-amidaj - 18

£ 4- (N-hidroxiamino) -2R-pentil-succinil_7-b-f3-ciclohexila-mina-N-(2-feniletil)-amida? £*- (N-hidroxiamino) -2R-isoamil-suceinil-7-L- {3- ciclohexila-lanina-N-{2-feniletil)-amida? £ 4- (N-hidroxiamino)-2R-fenilbutil-succinil__7-L-fà-ciclo-hexilaianina-N-(2-feniletil)-amida? £*- (N-h idroxiamino) - 2R-fenilpropil-succinil__7-L-p-ciclo-hexilalanina-N- (4- (3-aminopropil) -mor foi ina/T-amida? / 4- (N-h idrox iamino) - 2R- fenilpropil- δαοσΙηϋ,,^-^-ρ,- ci clo-hexilalanina-N-(2-feniletil)-amida? £ 4-(N-hidroxiamino)-2R-fenilpropil-succinil_.7-L-f3-ciclo-hexilalanina-N-/" p-alaninaJ?Lamida? £ 4- (N-hidroxiamino)-2R-isobutil-succinil_7-I»-{3-*ciclohexi-lalanina-amida? £ 4-(N-h idroxiamino-2R-(3-fenilpropil)-succinil_7-h-p-ciclo-hexilalanina-amida? £*- (N-hidroxiamino)-2R- (S-fenilbutilí-succinilJT-Ir-p-ci-clohexilalanina-amida? £ 4-hidroxi- 2 (R) - (3-£enilpropil)-succinil__7-L-p-ciclohexi-lalanina-(N-2-feniletil)-amida? éster metílico de /“4-hidroxi-2 (R)- (3-fenilpropil) -succinil_7--lr*p-ciclohexilalánina-p-alanina? £4-hidroxi-2(R)-(3-fenil-propil)-succinil-7-L-^-ciclohe-xilalanina-p-alanina? - 19 -

£ 4-hidroxi-2(R)-(3-fenilpropil) -succinil_7-Ir-p-ciclohexi-lalanina-p-alanina-amida; £ 4-hidroxi-2 (RÍ-isobutil-succinilJ^-Ir-p-ciclohexilala-nina-(N-2-£eniXetil)-amida? £ 4-hidroxi-2(R)-isoamil-succinil>i_7-L-p-ciclohexilalanina_7--(N-2-feniletil)-amida; £ 4-hidroxi- 2 (R) -£ 3- (4-metil£enil)-propil_7-succinil_7-L--fJ-ciclohexil-alanina-N- (2-£eniletil) -amida; £ 4-h idroxi-2R-£enilpropil-succinil__7“L-p-ciclobexilalanina--N-(2-(O-benzilcarbonil)-etii J^-amida; /"4-.hidroxi-2R-£eniipropii-succiniX-7,-L-p-ciciohexiiaianina--l\-£ 2- (p-sulfonamidofenil)-etil_7-amida; éster metilico de £4-hidroxi- 2R-£enilpropil-suecinil__7-L--p-ciclohexilalanil-glicina; e seus sais, soivatos e hidratos dos mesmos.

Os compostos de fórmula geraX (i) podem ser preparados por quaisquer método apropriado conhecido na técnica e/ou peio seguinte processo. N0te-se que sempre que se pretenda um estereoisómero particuiar de fórmuia (I), o processo de síntese descrito adiante pode ser utiiizado com o conposto de partida homoquiráiico apropriado, e/ou os isómeros podem ser resolvidos a partir das misturas utilizadas técnicas de separaçlo convencionais, por exemplo HPLC.

Assim, por exemplo, um composto de fórmula (I) com estereoquimica S no centro quirálico adja- 5 cente ao substituinte R pode ser preparado utilizando um 20 - composto de partida homoquirálico apropriado e as técnicas descritas nos exemplos.

Num seu segundo aspecto a invençSo revela um processo para a preparação de um composto de fórmula (I) na qual -CO^R é -CQgH, que pode ser preparado a partir de um correspondente éster de fórmula (i) utilizando processos convencionais, consoante a natureza do grupo éster. Assim, por exemplo, pode ser preparado um composto de fórmula (I) por hidrólise do correspondente éster, utilizando por exemplo um ácido ou uma base eventualmente num dissolvente.

Os compostos de acordo com a invençSo podem ser preparados pelos seguintes processos. Na descriçSo e fórmulas adiante os grupos R, R1, R2, R3, R4, R5 e X são definidos como anteriormente, excepto quando for expressamente indicado o contrário. Note-se que os grupos funcionais tais como amlno. hidroxilo ou carboxilo, presentes nos vários compostos descritos adiante e que se pretende que se mantenham na molécula, podem necessitar de ser protegidos antes de qualquer reacção ser iniciada. Nestas circunstâncias a remoção dos grupos de bloqueio pode ser o passo final numa reacção particular. Os grupos de bloqueio de amino ou hidroxilo apropriados incluem os grupos benzilo, benziloxi-carbonilo ou t-butiloxicarbonilo. Estes podem ser removidos de um derivado bloqueado por hidrogenaçSo catalítica, utilizando por exemplo hidrogénio na presença de um catalisador metálico, por exemplo paládio sob um subporte, tal como carvão, num dissolvnte tal como um álcool, por exemplo metanol, ou por tratamento com iodeto de trimetilsililo ou ácido trifluoracético num dissolvente aquoso. Os grupos de bloqueio de carboxilo apropriados incluem grupos benzilo, que podem ser removidos de um derivado bloqueado pelos métodos abordados acima, ou grupos alquilo, tais como o grupo t--butilo, que podem ser removidos de um derivado bloqueado por tratamento com ácido trifluoracético num dissolvente aquoso. 21 - s

Podem revelar-se evidentes outros grupos de bloqueio apropriados, bem como os métodos para a sua utilização, A formação de um grupo amino, hidroxilo ou carboxilo bloqueados pode ser obtida utilizando processos de alquilaçâo ou este-rificação convencionais, por exemplo os que são descritos adiante.

Assim, de acordo com um outro aspecto da presente invenção, um composto de fórmula (I) pode ser preparado por acoplamento de um ácido de fórmula (II) R2

R í OH

(II) ou de um seu derivado activo, com uma amina de fórmula (III) R3

* O

HN II

X (III) seguida pela remoção de qualquer grupo de bloqueio presente.

Os derivados activos de ácidos de fórmula (II) incluem por exemplo anidridos de ácido ou halogene-tcs de ácido, tais como cloreto de acilo. A reacção de acoplamento pode ser realizada utilizando condições correntes para uma reacção de aminação deste tipo. Assim, por exemplo, a reacção pode ser realizada num dissolvente, por exemplo um dissolvente orgânico inerte tal como um éter, por exemplo um éter cíclico tal como tetrabidrofurano, uma amida por exemplo uma amida subs- - 22 -

tituida, tal como dimetilformamida, ou um hidrocarboneto halogenado tal como dilorometano, a uma temperatura baixa, por exemplo desde -30°C ate à temperatura ambiente, tal como de ~20°C até 0°C, eventualmente na presença de uma base, por exemplo uma base orgânica tal como uma amina, por exemplo trietilamina ou uma amina cíclica, tal como N--metilmorfolina. Quando se utiliza um ácido de fórmula (II) a reacção pode ser adicionalmente realizada na presença de um agente de condensação, por exemplo uma diamida tal como N,N'-diciclohexil-carbodiimida, preferivelmente na presença de um triazol tal como 1-fcidroxibenzotriazol. Como alternativa o ácido pode ser levado a reagir com um cloroformiato, por exemplo cloroformiato de etilo, antes da reacção com a amina de fórmula (III).

Os grupos hidroxilo ou carboxilo livres nos compostos de partida de fórmulas (II) /"na qual R representa -CONHOH ou QOj*J e (III) podem necessitar de ser protegidos durante a reacção de acoplamento. Os grupos de bloqueio apropriados, bem como os métodos para a sua remoção, podem ser os que já foram descritos acima.

Note-se que sempre que se pretenda um estereoisómero particular de fórmula (I), este pode ser obtido por resolução de uma mistura de isómeros, depois da reacção de acoplamento de um ácido de fórmula (II) e de uma amina de fórmula (III). Podem ser usadas as técnicas de resolução convencionais, por exemplo a separação dos isómeros por cromatografia, por exemplo por utilização de cromato-grafia líquida de alta resolução. Sempre que desejado, no entanto, podem ser utilizados na reacção de acoplamento produtos de partida homoquirálicos apropriados para conduzir a um estereoisómero particular de fórmula (I). Assim, num processo particular pode ser preparado um composto de fórmula (la) por reacção de ura composto de fórmula (lia) 23 -

Ε 2

OH com uma amina de fórmula (Illa)

t

Hl

X (illa) oomo foi descrito acima.

Os ácidos intermediários de fórmula (li) na qual E representa um grupo earboxilo ou um grupo earboxilo esterifioado, podem ser preparados hidrolisando um correspondente éster de fórmula (IV) - 24 -

2 Ε

(IV) 13 na qual E representa um grupo alquilo, por exemplo um grupo metilo ou t-butilo, utilizando por exemplo ácido tri-

utilizando a hidrólise enzimática, tal como por exemplo com Q -quimotripsina, num dissolvente aquoso. Eesta reaoção a hidrólise enzimática (por exemplo oomo será descrita mais partioularizadamente por exemplo adiante) proporciona de forma particularmente útil um método de seleeção dos isómeros. O éster de fórmula (IV) pode ser preparado por esterifieaçáo do correspondente ácido de fórmula (V) E 2

1 E 0 (V) - 25 -

utilizando um halogeneto de acilo apropriado, por exemplo um cloreto de acilo num dissolvente tal como um álcool, por exemplo metanol, a uma temperatura baixa, por exemplo da ordem de 0°C

Os ácidos de fórmula (Y) podem sec preparados por alquilaçSo de um composto de fórmula (YI)

(VI) com um halogeneto apropriado, por exemplo um composto 2 de fórmula R Hal, na qual Hal representa um átomo de halogéneo tal como um átomo de cloro ou bromo, na presença de uma base, por exemplo um alcóxido, tal como etóxido de sódio, num dissolvente tal como um álcool, por exemplo etanol, à temperatura ambiente, seguida pela descarboxilação utilizando por exemplo ácido clorí· drico conoentrado, a uma temperatura elevada, por exemplo à temperatura de refluxo. - 26 -

Os compostos intermediários de fórmula (VI) ou são compostos conhecidos, ou podem ser preparados por métodos análogos aos que são aqui utilizados para a preparação dos compostos conhecidos.

Os ácidos intermediários de fórmula (IV) na qual R representa um grupo -CONHOH ou um seu derivado bloqueado, podem ser preparados por reacção de um ani-drido de fórmula (VTI)

com uma hidroxilamina tal como O-benzil-hidroxilamina, num dissolvente tal como tetrahidrofurano, a uma temperatura baixa, por exemplo da ordem de -20°C, seguida, sempre que pretendido, pela remoção do grupo de bloqueio, como já foi descrito acima.

Os anidridos intermediários de fórmula (vil) podem ser preparados por exemplo aquecendo, por exemplo â temperatura de refluxo, um diácido de fórmula (V) na qual R representa -ΟΟ,,Η, com um cloreto de acilo tal como cloreto de acetilo.

Os.; ácidos homoquirálicos de fórmula (lia) podem ser preparados, de acordo com outra caracterís-tica da invenção, por oxidação de uma oxazolidinona de fórmula (VIII) 27 -

Ο - -— Ph (VIII) (na qual Ph representa um grupo fenilo) utilizando um agente oxidante tal como um peróxidp, por exemplo peróxido de hidrogénio, num dissolvente tal como um éter, por exemplo um éter cíclico, tal como tetrahidrofu-rano, a uma temperatura baixa, por exemplo da ordem de 0°C, seguida pelo tratamento com uma base, tal como hidróxido de lítio, a uma temperatura elevada·

Os compostos de fórmula (VIIi) são novos, são compostos intermediários particularmente uteis para a preparação de estereoisómeros de fórmula (Ia) e formam um outro aspecto da invenção.

Os coppostos de fórmula (VIII) podem ser preparados por reacção de um halogeneto de acilo de fórmula RCH^CH (R )COHal (na qual Hal representa um átomo de halogéneo, tal como um átomo de cloro, bromo ou iodo) com uma solução de (s)-4-(fenilmetil)-2-oxazolidinona na presença de uma base, tal como n-butil-lítio, num dissolvente tal como tetrahidrofurano, a uma temperatura baixa, por exemplo dé cerca de -78°C·

Os halogenetos de acilo de fórmula 2 RCH2ch(r )OOHal podem ser preparados por tratamento dos correspondentes ácidos conhecidos de fórmula RCH2CH(r )002H com agentes de halogenação convencionais, por exemplo halogenetos de tionilo, em condições de reacção correntes* 28 -

Num outro processo de acordo com a invenção pode ser preparado um composto de fórmula (I) na qual R represeàta um grupo carboxilo, pela descarboxilação de um correspondente compostos de fórmula (IX).

(IX)

Esta reaoção pode ser realizada utilizando condições correntes, por exemplo por aquecimento de um composto de fórmula (IX) num dissolvente inerte, tal como um hidrocarboneto aromático, por exemplo xileno, à temperatura de refluxo.

Os ι-jácidos intermediários de fórmula (IX) podem ser preparados por reacçSo de um ácido bloqueado de fórmula (X)

na qual R representa um grupo carboxilo bloqueado, tal como um grupo benziloxicarbonilo, e 2^ representa um grupo de bloqueio tal como um grupo benzilo, com uma amina de fórmula (III) utilizando reagentes e condições como foram descritas acima para o acoplamento dos compostos de fórmulas (II) e (III), seguida pela remoção dos grupos de bloqueio.

Os compostos intermediários de fórmula (X) podem ser preparados pelo tratamento de um éster maló- 29 com um halogeneto de nico apropriado de fórmula RCE^COgZ1 fórmula (XI) R2

(xi) (na qual Hal representa um átomo de halogéneo, por exemplo ura átomo de cloro ou de bromo) na presença de uma base, tal como t-butóxido de potássio, num dissolvente tal como dimetilformamida, à temperatura ambiente.

Os halogenetos de fórmula (XI) podem ser preparados por halogenaçSo e subsequente descarboxila-ç3o de um diácido de fórmula (XII)

utilizando por exemplo um agente de halogenaçSo, tal como bromo, num dissolvente, tal como o áter dietílico, à temperatura ambiente, seguido pelo aquecimento do composto intermediário halogenado resultante num dissolvente, tal como um hidrocarboneto aromático, por exemplo xileno, à temperatura de refluxo.

Os compostos intermediários de fórmula (XII) podem ser preparados por hidrólise do correspondente éster dialquilico (por exemplo o éster dimetílico ou dietílico) utilizando uma base, tal como hidróxido de sódio ou hidróxido de potássio, num dissolvente tal como um álcool por exemplo metanol, â temperatura de refluxo. Os compostos de partida, ésteres dialquilicos, ou slo compostos já 30 - * >

conhecidos ou podem ser preparados por métodos análogos aos que são utilizados para a preparação dos compostos conhecidos, por exemplo como são aqui descritos nos exemplos*

Os compostos de fórmula (I) também podem ser preparados por interconversão de outros compostos de fórmula (I). Assim, por exemplo, um composto de fórmula (i) na qual R representa um grupo -CONHOH pode ser preparado por reacção de um correspondente ácido de fórmula (I) na qual R representa um grupo -002H, ou um seu derivado activo (por exemplo um cloreto de ácido ou um anidrido de ácido) com hidroxilamina ou um derivado ο-bloqueado de um seu sal. A reacção pode ser realizada utilizando os reagentes e condições descritas anteriormente na preparação dos compostos de fórmula (I) a partir dos compostos de partida de fórmulas (II) e (III).

Num outro processo de interconversão os compostos de fórmula (i) na qual R representa -002H e/ou X contem um grupo -COgH, podem ser preparados por hidrólise do correspondente composto esterificado (por exemplo, quando R representa um grupo -CO^R e/ou X contém um grupo análogo) utilizando processos convencionais, por exemplo por tratamento com uma base, por exemplo com um hidróxido de metal alcalino, tal como hidróxido de lítio, num dissolvente tal que como um álcool aquoso, por exemplo metanol aquoso, ou por tratamento com um ácido tal como um ácido mineral, por exemplo ácidò clorídrico, na presença de um dissolvente, por exemplo dioxano.

Analogamente, os ésteres de fórmula (l), por exemplo quando R representa um grupo -C02R e/ou X contem um grupo -C02R8, podem ser preparados por reacção dos correspondentes ácidos nos quais R representa um grupo -002^ e/ou X contém um grupo -002H ou um seu derivado activo, com um álcool de fórmula R80H, utilizando condições convencionais* 31 -

Os compostos de acordo com a invenção são potentes e selectivos inibidores de gelatinase. A afetividade e a selectividade dos compostos pode ser determinada pela utilização de testes de inibição enzimáticos apropriados, por exemplo tal como são descritos no exemplo A adiante. Nos nossos ensaios utilizando esta marcha de trabalho os compostos de acordo com a invenção provaram inibir a gelatinase cora valores na gama picomolar-nanomo-lar, e ter uma selectividade para gelatinase em relação à estromelisina de cerca de 40 vezes superior, ou ainda maior, e terem uma selectividade para gelatinase em relação à colagenase de cerca de 20 vezes,,ou maior. A capacidade dos compostos da invenção para impedirem a invasão de células de tumores pode ser demonstrada no modelo de ensaio no rato, convencional.

Assim, resumidamente, ratos nus podem ser inoculados com uma linha de células de tumor apresentando invasão dependente de gelatinase e pode avaliar-se a capacidade dos compostos de acordo cora a invenção para reduzir a subsequente colonisação de tumor pulmunar de acordo com um processo convencional. Nos nossos ensaios os compostos de acordo com a invenção, quando administrados por via intravenosa à razão de 1 mg / kg a ratos no modelo de ensaio descrito acima, reduziram a colonisação de tumor pulmunar a níveis desprezíveis.

Os compostos de acordo com a invenção podem, por isso, demonstrar serem úteis para a prevenção de metástases de células de tumores e a invasão. Os compostos podem, por conseguinte, ter utilização no tratamento do cancro, particularmente em combinação com a radioterapia, a quimioterapia ou a cirurgia, ou em pacientes que se apresentem com tumores primários, para controlar o desenvolvimento das metásteses do tumor. Assim, de acordo com um outro aspecto da invenção, revelamos um composto de - 32 -

formula (l) para utilização no tratamento do cancro, para controlar o desenvolvimento das metástases do tumor. Os cancros podem incluir, em particular, o cancro do peito, melanoma pulmunar, da cabeça, do pescoço ou da bexiga.

Para uso de acordo com este aspecto da invenção os compostos de fórmula (I) podem ser formulados de forma convencional, eventualmente com uma ou mais substâncias veiculares, diluentes ou excipientes fisiologicamente aceitáveis.

Assim, de acordo com um outro aspecto da invenção revelamos uma composição farmacêutica compreendendo um composto de fórmula (I) e um diluente, aubstância veicular ou excipiente farmaceuticamente aceitável.

Ainda um outro aspecto da invenção revelamos um processo para a preparação de uma composição farmacêutica compreendendo pôr-se em contacto um composto de fórmula (I) com uma substância veicular, diluente ou excipiente farmaceuticamente aceitável.

Os compostos para utilização de acordo com a presente invenção podem ser formulados para administração oral, bocal, parentérica ou rectal, ou numa forma apropriada para administração nasal, ou administração por inalação ou insuflação.

Para administração oral as composições farmacêuticas podem tomar a forma por exemplo, de comprimidos oujcápsulas preparados por meios convencionais, com substâncias excipientes farmaceuticamente aceitáveis, tais como aglutinantes (por exemplo amido de milho pre-gelatini-sado, polivinilpirrolidona ou hidroxipropil-metilcelulose)? cargas (por exemplo lactose, celulose micro-cristalina ou hidrogenofosfato de cálcio); lubrificantes (por exemplo estearato de magnésio, talco ou sílica); desintegrantes (por - 33 -

exemplo amido de batata ou glicolato de sédio)j ou agentes humectantes (por exemplo laurilsulfato de sódio). Os comprimidos podem ser revestidos por processos conhecidos na técnica. As composições líquidas para administração oral podem tomar a forma por exemplo de soluções, xaropes ou suspensões, ou podem ser apresentadas na forma de um produto seco para constituição com água ou outros veículos apropriados antes da utilização. Estas composições líquidas podem ser preparadas por meios convencionais com aditivos farmaceuti-camente aceitáveis, tais como agentes auxiliares de suspensão, emulsionantes, substâncias veiculares não aquosas/ e conservantes. As composições também podem conter sais tampões, aromatizantes, corantes e edulcorantes, conforme fôr apropriado.

As composições para administração oral podem ser convenientemente formuladas de modo a proporcionar uma libertação controlada do composto activo.

As composições para administração bucal podem tomar a forma de comprimidos ou pastilhas formuladas de modo convencional.

Os compostos de fórmula (l) podem ser formulados para administração parentérica por injecção, por exemplo por injecção global ou infusão contínua. As formulações para injecção podem apresentar-se numa forma de dosagem unitária, as composições para injecção podem tomar formas tais como suspensões, soluções ou emulsões, em substâncias veiculares tanto oleosas como aquosas e podem conter agentes de formulação tais como agentes auxiliares de suspensão, estabilisadores e/ou agentes dispersantes. Como alternativa o ingrediente activo pode tomar a forma de pó para constituição com um veiculo apropriado# por exemplo água esterilizada isenta de pirogénios, antes da utilização.

Os compostos de fórmula (I) também podem ser formulados em composições rectais, tais como suposi- - 34 -

tórios ou enemas de retenção, por exemplo contendo bases de supositórios convencionais, tais como manteiga de cacau ou outras gliceridos.

Adicionalmente às formulações descritas acima, os compostos de fórmula (I) também podem ser formulados em composições de depósito, Estas formulações de acçSo prolongada podem ser administradas por implantação ou por injecção intramuscular.

Para administração nasal ou administração por inalação os compostos para utilização de acordo com a presente invenção são convenientemente fornecidos na forma de uma composição de aerosol para embalagens pressurizadas ou por nebulisador, com utilização de um agente propulsante apropriado, por exemplo diclorodifluor-raetano, triclorofluormetano, diclorotetrafluoretano, dióxido de carbono ou outros gases apropriados.

As composições, se desejado, podem ser apresentadas numa embalagem ou dispositivo de libertação que pode conter uma ou mais formas de dosagem unitária contendo o ingrediente activo. A embalagem ou dispositivo de fornecimento pode ser acompanhada por instruções para administração.

As doses dos compostos de fórmula (i) usadas para controlar o desenvolvimento de metástases de tumores variam consoante o estado do paciente a tratar, mas em geral podem situar-se num intervalo de cerca de O a 5 mg até 50 mg / kg de peso corporal, em particular de cerca de 1 mg a 40 mg/kg de peso corporal. As unidades de dosagem podem variar consoante a via de administração do composto, de acordo com a prática convencional. - 35 -

Descrição de formas de realização específicas A invenção e posteriormente ilustrada nos seguintes exemplos não limitativos.

Nos exemplos são utilizadas as seguintes abreviaturas: TA - temperatura ambiente DCGI - N,N*-diciclohexil-carbodiimida DMF - dimetilformamida THF - tetrahidrofurano TPA - ácido trifluoroacético RPHPLC - cromatografia líquida de alta resolução, de fase inversa HOBT - N-hidroxibenzotriazol.

Exemplo 1 Γ 4- (N-hidroxiamino) - 2 (R) ~ciclohexilmetilsuccinil_J7-L-p--eiclohexilalanina-N-(2-feniletil)-amida (I)

Ácido (R. S)-ciclohexilmetil-succinico

O

I

C 36 -

Preparou-se etdxido de sddio por adição de sddio metálico (2,5 g, 108 mmol·) e etanol anidro (150 ml) sob atmosfera de azoto. Adicionou-se 1,1,2-eta-notrioarboxilato de trietilo (26,6 g, 25 ml, 108 mol) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 20 min. Adicionou-se depois gota a gota durante 1 hora brometo de ciolohexilmetilo (19,12 g, 15 ml, 108 mmol) e a solução foi aquecida ao refluxo durante a noite* 0 brometo de sddio que precipitou foi removido por filtração e o filtrado foi concentrado em vácuo. 0 resíduo foi tratado com água fria (200 ml) e foi extraído com éter dietílico (3 x 100 ml). A fase orgânica foi seca com sulfato de sddio e concentrada, obtendo-se um dleo límpido (32,2 g). Adicionou--se ácido clorídrico concentrado (200 ml) ao triearbo-xilato bruto (32,2 g) e aqueceu-se a mistura ao refluxo Passadas 92 horas a mistura reactiva foi arrefecida e vertida em diclorometano (200 ml) e foi extraída. A fase orgânioa foi seea eom sulfato de sddio. obtendo-se o diáoido de fdrmula 0 na forma de um sólido branco (16,0 g). lR ΉΜ (0DC15) 5 0.85 (m, 2H), 1,2 (m, 5H), 1,65 (m, 6H), 2,5 (dd, 1H, J=4 e 16 HZ) 2.70 (dd, 1H, J=9 e 16 HZ), 2.95 (m, 1H). (R.S)-clclohexilmetil-sucoinãto de dimetilo 3)

Adieionou-se cloreto de scetilo (4,33 g, 3,9 ml, 55,2 mmol) a metanol anidro (50 ml) a 0°C e agitou-se a mistura reactiva durante 15 minutos. Deixou- - 37 -

-se a mistura reactiva aquecer naturalmente até à temperatura ambiente e adicionou-se o diácido 0 (5,0 g, 23,3 mmol). Depois de 3 Horas de aquecimento ao refluxo a mistura reactiva foi arrefeoida e concentrada em vácuo, obtendo-se um <5leo límpido que foi tomado em aoetato de etilo (200 ml), foi lavado com solução saturada de bicarbona to de sódio e solução de cloreto de sódio, e foi seco com sulfato de sódio. A soluç3o foi evaporada à secura, obtendo--se o diéster D na forma de um óleo (5,45 g). ½ EM (CDC15) % 0.85 (m, 2H), 1,2 (m, 6H), 1,65 (m, 5H), 2,42 (dd, 1H, J=6,0 Hz e 16 HZ) 2,70 (dd, 1H, J=10.0 e 16 HZ), 2,95 (m, 1H), 3,68 (s, 3H), 2.7 (s, 3H).

(R)-2-oiolohexilmetil-suocinato de metilo E

Uma solução de 2P -quimotripsina (635 mg) em água (20 ml) foi tratada com o composto D (5,23 g, 21,6 mmol) em água (75 ml). Poi mantido um valor constante de pH de 7.8 por trituração da mistura reactiva com soda cáustica 0.1 M, utilizando um dispositivo automático de pH.

Passadas 24 Horas a solução foi lavada com éter dietílieo e a fase aquosa foi acidificada até pH =2,0 com ácido clorídrico 1,0 Μ. A solução resultante foi - 38 -

concentrada em vácuo atá à secura. 0 resíduo foi submetido a agitação por ultrassons na presença de éter dietílioo e foi filtrado. A fase em éter foi lavada com solução saturada de cloreto de sódio, foi seca com sulfato de sódio e concentrada, obtendo-se o ácido E na forma de um óleo límpido (2,0 g). lE ΉΜ (CDC15) 5 0.9 (m, 2H), 1,25 (m, 6H), 1,65 (m, 5H), 2,42 (dd, 1H, 5,5 e 17 HZ), 2,70 (dd, 1H, J=8 e 17 HZ), 2.95 (m, 1H), 3,7 (s, 3H).

Metil-(R)"2-oiolohexilmetil-suooinil-Ii~ *3 -oiclohexilala-nina-H-(2-feniletil)-amida E

A uma solução do áoiâo E (338 mg, 1,48 mmol) em diclorometano anidro (20 ml) adieionou-se 4-nitrofenol (227 mg, 1,63 mmol) e DCCI (336 mg, 1,63 mmol) Depois de 1 hora a mistura reactiva foi filtrada, concentrada e dissolvida em dimetilformamida anidra (5 ml). Adicionou-se L- β -GÍclohexilalanina-U-(2-feniletil)--amida J (359 mg, 1,63 mmol) em dimetilformamida anidra (5 ml) e a mistura reactiva foi deixada uma noite a 60°0. Removeu-se a dimetilformamida em vácuo e o resíduo foi - 39 -

dissolvido em dielorometano e vertido em solução aquosa de hidrogenocarbonato de sddio, A fase orgânica foi lavada com áçido clorídrico 0,1 I e foi seca com sulfato de sddio. 0 resíduo foi concentrado em vácuo e foi purificado através de sílica-gel (Merck 9385) utilizando diclo-rometano/metanol 95:5» obtendo-se 500 mg do composto í1. XH EM (CDC13) % 0.9 (m, 41), 1,2 (m, 12 H), 1,65 (m, 10H), 2.65 (m, 5H), 3.5 (m, 21), 5,7 (s, 3H), 4,4 (m, 1H), 6,15 (d, 1H), 6.35 (m, 1H), 7.25 (m, 51). / 4“-h.idrQxi-2R-GÍGloh.exilmetllsucoinil 7-1- /3 -oioloiiexi-lalanina-l-(2-feniletil)-amida &

0 éster E (250 mg, 0,5 mmol) em 1,4-dioxano (3 ml) foi adicionado a ácido clorídrico 1,5 I (3 ml). Adicionou-se uma nova porção de 2 ml de 1,4-dio-xano para se obter uma solução. A solução reactiva foi deixada uma noite a 50°C. Adicionou-se uma nova porção de 1,0 ml de ácido clorídrico 1,5 M, seguida por 1,0 ml de l,4?dioxano, e deixou-se a mistura reactiva por mais 6 hi a 50°0. 0 dissolvente foi removido em vácuo, o resíduo foi dissolvido em dielorometano e purificado através de sílèoa- 40 -

-gel (Merck 9385) utilizando diclorometano/metanol 9:1, ohtendo-se o composto G na forma de um <5leo límpido (117 mg). ΧΗ EM (ODOlj) % 0.95 (m, 4H), 1,2 (m, 12H), 1,8 (m, 10H), 2.5 (m, 2H), 2,85 (m, 2H), 3,1 (2H, m), 3.5 (m, 1H), 4,45 (m, 1H).

/"^-(l-henziloxiaminol-GE-oiclohexiltnetilsuocinil 7-1- Θ --ciolohexilalanina-I-( 2-f eniletiD-amida H

0 ácido G (117 mg, 0,25 mmol) foi dissolvido em tetrahidrofurano anidro (10 ml) e arrefecido a -20 C. Adicionu-se cloroformiato de etilo (27 mg, 0.25 mmol) e E-metilmorfolina (25 mg, 0.25 mmol) e a mistura foi agitada a -20°0 durante 1 hora. Adicionou-se O-henzil--hidroxilamina (30,25 mg, 0,25 mmol) e deixou-se a mistura reactiva vir até à temperatura amhiente. Depois de se deixar reagir durante uma noite removeram-se os voláteis a pressão reduzida e 0 resíduo foi misturado com éter dietílico. Eor-mou-se um precipitado, 0 éter foi decantado e 0 resíduo foi dissolvido em metanol. 0 produto (100 mg) provou ser homo- - 41 -

géneo por HPLC (DYNAMAX 018) eluição com TPA/H20/GH30U (partindo de 0,1:80:20 e terminando com 0.1:0:100 durante 20 minutos)*

/‘‘‘4-(l-hidroxiamino)-2R-oiQlohexilmetil-eucoinil 7-l·--6 -oiolohexilalanina-Iir-(2-feniletil)-amida I 0 composto H (100 mg) foi dissolvido em metanol (20 ml) e foi substituido e submetido a hidro-genólise, utilizando paládio/carvão a 5$ e hidrogénio gasoso. Depois de 1 hora à temperatura ambiente o catalisador foi removido por filtração e o produto foi purificado por RPHPIC, utilizando TPA/HgO/OH^OR (partindo com 0,1:80:20 e terminando com 0,1:0:100 durante 20 min.) obtendo-se o oomposto de título I (60 mg). 1H RM (CDjOD) Í 8.1-8.2 (lH, m), 7,1-7,4 (5H, m) 4.3- -4.45 (1H, m), 3,4-3.5 (2H, m), 2.7-2.9 (3H, m), 2.40 (1H, dd), 2,30 (1H, dd), 0,8-2.0 (26H, m) L- /3 -ciolohexilalanina-M'-(2-feniletil)-amida (J)

Dissolveu-se tBoc- β -ciclohexil-L--alanina (1,35 g, 5 mmol) em diclorometano anidro. Adicio-nou-se 4-nitrofenol (695 mg, 5 mmol) seguido por DOOX - 42 -

(1,03 g, 5 mmol). Depois de 1 hora à temperatura ambiente a mistura reaotiva foi concentrada em vácuo, adicionou-se éter e filtrou-se o resíduo. Este resíduo foi concentrado em vácuo, foi dissolvidokem diclorometano (10 ml) e adioionou-se fenetilamina (690 ^1, 5.5 mmol). A mistura reaotiva foi vertida em solução de hidrogenocarbonato de sódio e foi extraída com diclorometano (3 x 20 ml), foi seca com sulfato de sódio e concentrada em váeuo. A purificação através de sílioa-gel (Merck 9385) utilizando CH2

Cl2-> CHgClg/MeOH 85:15) originou um óleo límpido (900 mg) que foi dissolvido em CH2G12/5)EA (9:1) e foi deixado à temperatura ambiente durante 30 minutos. A mistura reaotiva foi concentrada em vácuo, foi dissolvida em diclo-rometano (50 ml) e foi vertida em solução aquosa de carbonato de sódio. A fase orgânica foi separada, foi seca com sulfato de sódio e eoncentrada em váeuo, obtendo-se um óleo que foi purificado através de sílica-gel (Merck 9385) utilizando dielorometano/metanol/trietilamina 96:3:1, obtendo-se o eomposto de título J na forma de um óleo (500 mg). ΧΗ W (0DC15) é 0.95 (m, 2H), 1,25 (m, 6H), 1.55 (bs, 2H) 1.65 (m, 5H), 2.8 (t, 2H, J=6HZ), 3.4 (dd, 1H, J=3 e 10HZ), 3.5 (dd, 2H, J=6 e 12HZ), 7.2 (m, 5H).

Exemplo 2 ^""4-I-(hidroxiamino)-2R-isobutil-suocinilJJ-L- β -oiclo-hexilalanina-U-(2-feniletil)-amida

Acido B..S-isobutil-suocÍnico K - 43 -

ο κ

Preparou-se etóxido de sódio por adição de sódio metálico (2,5 g, 108 mmol) e etanol anidro (150 ml) sob atmosfera èe azoto. Adicionou-se 1,1,2-etano-tricarboxilato de trietilo (26,6 g, 25 ml, 108 mmol) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente (TA) durante 20 minutos* Aâieionou-se gota a gota brometo de isobutilo (19,12 g, 15 ml, 108 mmol) durante 1 hora e a solução foi fervida ao refluxo durante uma noite. 0 brometo de sódio que precipitou foi removido por filtração e o filtrado foi concentrado em vácuo, 0 resíduo foi tratado com água fria (200 ml) e foi extraído com óter dietílico (3 x 100 ml). A fase orgânica foi seca com sulfato de sódio e concentrou-se, obtendo-se um óleo límpido (32,2 g) que foi aquecido ao refluxo com ácido clorídrico concentrado durante 96 horas. 96 horas. Por arrefecimento precipitou um sólido cristalino branco que foi isolado por filtração, lavado com água gelada e seco em vácuo, obtendo-se 0 composto de título K (11,0 g). hiEM (0D013) $ 0.85 (3H, d, J = 6Hz), 0,90 (3H, d, J=6Hz), 1.3-1.45 (1H, m), 1.55-1.75 (2H, m), 2.50 (1H, dd, J=6 e 18 Hz), 2,70 (1H, dd, J=9 e 18 Hz), 2.85-2.95 (1H, m).

Anldrido 5-(R.S)-isobutil-suocÍnioo 1 - 44 -

0 diáoido Κ (10,21 g, 59 mmol) foi tratado cora oloreto de aoetilo (27 ml, 376 mmol) sob refluxo, durante 2 1/2 horas. Os voláteis foram removidos a pressão reduzida, obtendo-se 0 anidrido L (9,37 g, 100$) na forma de um áleo aoastanhaáo. mm (0DC15) 0.95 (3H, d, J = 6Hz), 1.05 (3H, d, J=6Hz), 1.48-1.90 (3H, m), 2.65 (1H, dd, J~7 e 18 Hz), 3.10 (1H, dd, J = 9 e 18 Hz), 3.15-3.25 (1H, m).

Acido /‘"4-(H-benziloxiamino)-2-R.S-isobutil 7-suocinioo M

Adieionou-se gota a gota (durante 1 hora) 0-benzil-hidroxilamina (7,8 g, 63,4 mmol) em tetra-hidrofurano anidro (50 ml) a uma solução do anidrido 1 (9,37 g, 60,0 mmol) em tetrahidrofurano anidro (100 ml) - 45 -

a -20°C. Depois de agitação por mais 1 hora os voláteis foram removidos em váouo e o resíduo foi tomado em acetato de etilo. Depois da lavagem oom ácido clorídrico 1,0 M (3 vezes) a fase orgânica foi seca com sulfato de magnésio e evaporado, obtendo-se um sólido branco. 0 sólido bruto foi dissolvido em áter dietílico fervente e filtrado. Obtiveram-se cristais incolores do ácido M que se depositaram por repouso (6,7 g, 41$). 1HM (0D015) 5 0.8-1,0 (6H, m), 1.2-1.4 (3H, m), 2.1- -2.4 (2H, m), 2.8-3.0 (1H, m), 4,85 (2H, s), 7.3 (5H, bs), 8.6 (1H, bs).

/"4-(I-benziloxiamino)-2B..S-isobutil-siÍccinil 7-D- β --oiclohexilalanina-N-(2-feniletil)-atnida U

0 ácido M (502 mg, 1,8 mmol) foi dissolvido em tetrahidrofurano anidro (20 ml) e a solução foi arrefecida a -20°0. Adioionou-se cloroformiato de etilo (245 mg, 233 jul, 1,8 mmol) e N-metilmorfolina e a suspensão foi deixada 1 hora a -20°0. Adieionou-se então gota a gota uma solução em dimetilformamida (10 ml) de L- -ci-olohexil-alanina-U-(2-feniletil)-amida J (500 mg, 1,8 mmol) - 46 -

Logo que se completou esta adição o banho de arrefecimento foi removido e deixou-se aquecer a mistura reactiva naturalmente até à temperatura ambiente durante uma noite. A solução orgânica foi vertida em ácido clorídrico a 10$ e foi extraída com acetato de etilo (3 vezes). A fase orgânica foi seca com sulfato de magnésio e concentrada em vácuo, obtendo-se um sólido. A purificação deste sólido através de sílica-gel (Merck 9385) utilizando diclorometa-no/metanol 98s2 deu origem ao composto de título H na forma de uma mistura de diastereoisómeros (200 mg). XH HM (ODOlj) 0.7-2.0 (22H, m), 2.1-2,5 (1H, m), 2.6- -2.9 (4H, m) 3.3-3.55 (2R, m), 4.35-4.55 (1H, m), 4.7-4.9 (2H, m), 6.1-6.4 (1H, m), 6.65-6.9 (1H, m) 7.05-7.4 (10H, m), 9.05-9.30 (1H, m). /~4-(N-hidroxiamino')-2.R.S-isobutil-sucoinil 7-L-β -ci-clohexilalanina-R-(2-fenlletil)-amida A mistura dos diastereisómeros de I foi dissolvida em metanol isento de gases (20 ml) e foi sujeita a hidrogenólise utilizando paládio-carvão a 5$ e hidrogénio gasoso. Depois de 1 hora à temperatura ambiente removeu-se o catalisador por filtração e o produto foi purificado por RPHPLC utilizando 0,1$ TPA/H20-> 0.1$TPA/CH3CN (43:57) em oondiçães isoorítioas. Recolheram-se o pico 1 (tempo de eluição 11.2 minutos) e o pico 2 (tempo de eluição 14 minutos) que se secaram, obtendo-se 64 mg e 56 mg dos isómeros do composto de título, respectivamente.

Pico 1 XH RM (CD50D) 0.8-1.0 (8H, m), 1.05-1.75 (14H, m), 2.1-2.4 (2H, m), 2.7-2.85 (3H, m), 3.35-3.50 (2H, m), 4.30 (1H, t, J=6Hz), 7.05-7.3 (5H, m)

Pico 2 -½ RM (CD^OD) 0.8-1.8 (22H, m), 2.05-2.20 (1H, m), 2.35-2.5 (1H, m), 2.7-2.9 (3H, m) 3.35-3.5 (2H, m), 4.30--4.40 (1H, m), 7.1-7.35 (5H, m) - 47 -

Os compostos abaixo, dos exemplos 3 a 14» foram preparados de modo análogo aos compostos dos exemplos 1 e 2, utilizando os compostos de partida análogos apropriados.

Exemplo 3 (^"'4-(hidroxiamino)-2R-feniletil-sucoinil_/-L- β -ciolo-hexilalanina-U-í 2-feniletil)-amida G composto de título foi preparado seguindo a metodologia geral do exemplo 1. λΕ EM (GD30D 7.1-7.3 (10H, mult, Ar)} 4,35 (Hí, mult, ETOHCO)} 3.35 (2H, mult, CH2H)} 2.20-280 (7H, mult. OHOO+CH2Ar); 0.70-1.80 (15H, mult. 0H0)

Exemplo 4 /“4-(E-Mdroxiamino)-2E-fenilpropil-sucoinil_/-!>- β -ciclo-b.exilalanina-I-( 2-f eniletil) -amida 0 composto de título foi preparado seguindo o método geral do exemplo 2. -½ EM CD30D 7.05-7.30 (10H, mult, Ar); 4.30 (1H, t, H0H00) 3.30-3.50 (2H, mult. 0H2I); 2.70 (2H, t, 0H2Ar)j 2.10-2.60 (5H, mult, 0H00 + CHgAr); 0.80-1.70 (17H, mult. OHC)

Exemplo 5 £~4-(3J-liidroxiamino)-2E-fenilpropil-succinil_7-I<-ô -ci-eloliexilalanina-E'-(2-aminoetil)-I,I-dimetilalanina^-amida 48 -

0 composto de título foi preparado seguindo o prooesso geral do exemplo 2. EMN (CD^OD) 3 0.75-1.85 (17H, m), 2.28 (1H, dd, HZ), 2.48-2.75 (4H, m), 2.9 (6H, s), 3.21--3.40 (2H, m), 3.55-3.70 (2H, m), 4.15 (1H, dd, HWCHGO) 7.10-7.30 (5H, m, Ar)

Exemplo 6 /“4-(H-liidroxiamino)-2iÍ-fenilpropil-suGoinil·J-h- β -eielo-liexilalanina-]!I-^“2-(p-sulfonamidofenil)-etil_7~amida. 0 oomposto de título foi preparado seguindo o prooesso geral do exemplo 2. 1HRMN (CDjOD) 5 0.7-1.75 (17H, m), 2.1-2.2 (1H, m), 2,3-2,4 (1H, m), 2.45-2.85 (5H, m) 3.2--3,4 (2H, m), 4,2-4,35 (1H, m), 7,05-7.20 (5H, m), 7.35 (2H, d, J=7H), 7.85 (2H, d, J=7HZ).

Exemplo 7 /™4-(H-Mdroxiamino)-2E-fenilpropil-succÍHil_7-L- β -ciolo-hexilalanina-U-/- 2- (p-sulf o nilf enil) -etil_7-amida 0 composto de título foi preparado seguindo o prooesso geral do exemplo 2. hws (CD30D) 3 0.75-1.8 (17H, m), 2.15-2,95 (TH, m), 3.20- -3.60 (2H, m), 4.25-4.7 (1H, m), 7.05-7.35 (7H, m), 7.75 (2H, d, J=7HZ).

Exemplo 8 £4-(H-hidroxiamino)-2E-fenilpropil-suocinili_7-L- β -oiolo-hexilalanina-N-/”2-(2-aminoetil)-piridina^-amida - 49 -

0 composto de título foi preparado seguindo o prooesso geral do exemplo 2. sal de TM 1HRM (OD^OD) 5 8.7 (1H, d), 8.40 (1H, t), 7.90 (1H, d), 7.80 (1H, t), 4.10 (1H, dd), 3.65 (2H, t), 3.15-3.40 (2H, mult), 2.70 (1H. mult), 2^30-2.50 (2H, 2dd), 0.80-1.80 (22H, mult)

Exemplo 9 ^“4-(N-Mdroxiamino)-2R-I-pentilsueoinilβ -oicloliexil· -alanina-R-(2-feniletil)-amida 0 composto de título foi preparado seguindo o processo geral do exemplo 2. 1HROT' (CD30D) 6 7.15-7.35 (5H, mult), 4,35 (1H, t), 3.30-3,50 (2H, mult), 2.80 (2H, t), 2.70 (1H, mult), 2.15-2.40 (2H, 2dd), 0.90--1.80 (24H, mult).

Exemplo 10 /”4-(I-Mdroxiamino)-2R-isoamil-succinil_7-L- Q -ciclohe-xilalanina-N-(2-feniletil)-amida 0 composto de título foi preparado seguindo o processo geral do exemplo 2, - 50 1 ΗΗΜΝ (CD30D) δ 7.15-7.35 (5H, mult), 4.30 (1H, t), 3.30- -3.50 (2H, mult), 2.80 (2H, t), 2.70 (1H, mult), 2.15-2.40 (2H, 2dd), 0.90--1.80 (24H, mult).

Exemplo 11 / 4-(N-hidroxiamino)-2R-fenirbutilsuccinil_7-L-β -oielo-hexilalanina-I-(2-feniletil)-amlda 0 oomposto de título foi preparado seguindo o processo geral do exemplo 2 1HM (CD50D) 5 7.2-7.4 (10H, mult,Ár), 4.35 (1H, mult, NCHCO), 3.30-3.45 (2H, mult, Ciyj), 2.20-2.90 (7H, mult, CHgAr+CHgCO), 0.85--1.80 (19H, mult, GH20)

Exemplo 12 /*“4-(Sf-hidroxiamino)-2-R-feailpropilsucoinil-ciclo-!hexilalanina-lI-/~4-(3-aminopropil)-morfolina __7-amida 0 composto de título foi preparado seguindo o processo geral do exemplo 2 1HSMN (0D50D) 6 7.15-7.35 (5H, mult), Ar), 4.15 (1H, t, RCHCO), 3.70-4.10 (4H, mult, GH20), 3.0--3.50 (8H, mult, 0H2I), 2.20-2.80 (5H, mult, 0H200+0H2Ar+0H0O), 0.90-2.0 (19H, mult, CHr>0) ·

Exemplo 13 ^~4-(U_hidroxiamino)-2R-fenilpropil-suecinil__7-Ii- /3 -ciolo-liexilalanina-U-/-^ -alaninato de metilo__7-amida 0 composto de título foi preparado seguindo o prooesso geral do exemplo2. 1HS!SS (CD30D) £ 0.9-1.9 (mult,17H), 2.2-2.4 (2dd, 2H), 2.5-2.9 (mult. 5H), 3.3 (mult, 2H), 3.6 (s, 3H), 4.3 (m, 1H), 7.2 (mult, 5H) - 51 -

Exemplo 14 4-(N-hidroxiamino)-2R-fenilpropil-sucoinil_7-Ιι- β -ciclohexilalanina-IT-/~/3 -alaninaamida 0 composto de titulo foi preparado a partir do éster metílioo (329 mg, 0,67 mmol) do exemplo 13 por dissolução em metanol (10 ml) e adição de hidróxido de lítio (74 mg, 1,76 mmol) em água (5 ml) gota a gota, soh agitação. Deixou-se a mistura reaotiva ainda sob agitação por uma noite. 1 mistura reaotiva foi depois concentrada em vácuo até cerca de um quarto do volume inicial. Realizou-se uma partição entre ácido cítrico a 10$ e clorofórmio. A fase orgânica foi separada e evaporada, ohtendo-se um sólido branco (314 mg). 0 produto foi purificado por RPHPLC utilizando TPA/HgO/CH^C! (partindo de 0,1:80:20 e terminando com 0,1:20:80, durante 20 minutos), obtendo-se o composto de título (150 mg). XH RM (CD50D) S 0.9-2.8 (mult, 17H), 2.15-2.4 (2dd, 2H), 2,5-2.8 (mult, 5H), 3.35 (mult, 3H), 4.35 (dd, 1H), 7.2 (mult, 5H).

Exemplo 15 (2-metoxicarbonil)-5-fenilpentanoato de metilo (I) - 52 -

Preparou-se metdxido de sddio por adição de sddio metálico (3,66 g, 159 mmol) a metanol anidro (200 ml) sob atmosfera de azoto. Depois da dissolução adioionou-se gota a gota taalonato de dimetilo (20 g, 17,3 ml, 151 mmol) seguido por adição gota a gota de 1--bromo-3-fenilpropano (30,1 g, 23 ml, 151 mmol). a mistura foi aquecida ao refluxo durante 18 horas, foi arrefecida e repartida entre um tampão de fosfato (pH=6,5) e dter die-tílico. A fase orgânica foi separada, foi seoa com sulfato de magndsio e concentrada em vácuo. A purificação por sílica-gel (Merck 9385) eluindo-se com dter etílico/hexa-no (25:75) deu origem ao eomposto (I) na forma de um dleo incolor (23,26 g, 62$). “HEM (CDC13) £ 7.2-7.45 (5H, m), 3.78 (6H, s), 3.45 (IS, t), 2.70 (2H, t), 1.95-2.15 (2H, m), 1.65-1.85 (2H, m). 2-(R.S)-bromo-5-fenilpentanoato de t-butilo (II) - 53 -

Br

Ο (II)

Dissolveu-se (2-metoxicarbonil)-5-fe nil-pentanoato de metilo (I) (8,43 g, 33,7 tamol) em metanol (40 tnl) e adioionou-se soda cáustica (3,37 g, 84,25 mmol) dissolvida em água (10 ml). A mistura foi aquecida ao refluxo durante 18 horas, foi arrefecida, foi ooncentra-da em vácuo e acidificada até pH = 1, utilizando ácido clorídrico concentrado. A solução aquosa foi extraída com éter dietílico (3 x 50 ml), foi seca com sulfato de magnésio e oonoentrada em vácuo, oftendo-se um sólido branco (6,3 g). Este sólido branco foi dissolvido em éter dietílico e adioionou-se gota a gota bromo (1,5 ml, 28,2 mmol). Ocorreu a descoloração passados 10 minutos e a mistura reactiva foi agitada à temperatura ambiente durante mais duas horas* Adicionou-se água cuidadosamente e o produto foi extraído em éter dietílico (3x100 ml), foi seco com sulfato de magnésio e concentrado em vácuo. 0 resíduo foi dissolvido em xileno e aquecido ao refluxo durante 24 horas. 0 dissolvente foi removido a pressão reduzida e o resíduo foi tomado em diclorometano (50 ml), e esta solução foi arrefecida a -40°0. Condensou-se isobuteno até que o volume da mistura reactiva duplaoasse e adicionou-se depois gota a gota ácido sulfárioo concentrado (1 ml). Deixou-se a mistura reactiva aquecer naturalmente até à temperatura ambiente durante a noite e a mistura foi vertida em solução aquosa de hidrogenocarbonato de sódio (10^). A fase orgânica foi - 54 -

ir separada e seca eom sulfato de magnésio. A purificação através de sílioa-gel (Merok 9385) eluindo-se oom éter dietilico/hexano (2,5:97,5) âem origem ao composto II (4,0 g) na forma de um sólido. 1H RMH (CDG15) $ 7.1-7.3 (5H, ta)» 4.10 (1H, t), 2.65 (2H, t), 1.9-2.15 (2H, m), 1.55-1.90 (2H, m), 1.45 (9H, s). £ 2-.benziloxiearbonil-3(R,S)-t-butoxioarbonil_/-6-fenil]ie-xanoato de benzilo (III)

(III)

Dissolve-se malonato de dibenzilo (3,53 g, 12,5 mmol) em dimetilformamida (20 ml) e arrefeceu -se até 0°C. Adicionou-se t-butdxido de potássio (1,39 g, 12,5 mmol) na forma de sólido e depois da sua dissolução adioionou-se gota a gota 2-(R,S)-bromo-5-fenilpentanonoato de t-butilo (II) (3,9®· g, 12,5 mmol) dissolvido em dimetilformamida anidra (10 ml), durante 30 minutos. Deixou-se - 55 - a mistura reaetiva aquecer até à temperatura ambiente durante uma noite e foi depois repartida entre EtOAO e solução aquosa saturada de oloreto de aménio. A fase orgânica foi separada, foi seca com sulfato de magnésio e concentrada em vácuo. 0 resíduo foi purifioado através de sílica-gel (Merck 9385) eluindo-se com éter etílico em he-xano, começando com 10% e acabando com 15%, obtendo-se o composto (III) (4,9 g). ΉΜ (CDC15) $ 7.05-7.55 (15H, m), 5,1-5.2 (4H, m), 3.8 (1H, d), 3.05-3.15 (1H, m), 2.40-2.70 (2H, m), 1.45-1.80 (4H, m), 1.35 (9H, s). /“2-benzlloxioarbonil-5(R.S)-(3-fenilioronil 7-suooinato fls benzilo (IV)

r - 56 -

Dissolve-se /”2-benziloxicarbonil-3 -(R,S)-t~butoxioarbonil_7-6-£enil-hexanoato de benzilo (III) (4,9 g, 9,5 tninol) em !M/H20 (10 tal, 9,5:0,5 v/v) e deixou-se em repouso a 4°0 durante 2 dias. 0 TIA foi removido a pressão reduzida e o resíduo foi repartido entre diclorometano e água. A fase orgânica foi separada, foi seca com sulfato de magnésio e concentrada em vácuo, obtendo-se o composto (IV) (4,36 g) na forma de um sólido branco. 1HRM (CDC13) S 7.0-7.35 (15H, m), 5.05-5.20 (4H, m), 3,82 (1H, d), 3.15-3,28 (1H, m), 2,38--2,58 (2H, m), 1,48-1,80 (4H, m). /“"4-benziloxi-3-benziloxicarbonil-2 (R, S) -(3-f enilpropil/--succinilJT-Ii- $ -ciclohexilalanina-(U-2-feniletil)-ami-da (V)

- 57 -

Dissolveu-se /~2-benziloxicarbonil--3(R,S)-(3-fenilpropil)__7-succinato de benzilo (IV) (2,3 g, 5 mmol) em dimetilformamida anidra (20 ml). A esta solução adicionou-se HOBT (0,75 g, 5 mmol), H-metilmorfolina (55 ul, 5 mmol) e I- β -cieloliexilalanina-(l-2-feniletil)-amida (J) (1,37 g, 5 mmol). A solução foi arrefecida a 0°C e adicionou-se DCCI (1,03 g, 5 mmol) em dimetilformamida aniéra (10 ml) durante um período de 10 minutos. Deixou-se a mistura reaotiva aquecer naturalmente até à temperatura ambiente durante uma noite, verteu-se em BtOAc e lavou-se com solução a 10$ p/v de ácido cítrico. A fase orgânica foi separada, foi lavada com solução aquosa de hidrogeno-carbonato de sédio (10$ p/v) e foi seca com sulfato de magnésio. 0 dissolvente foi removido em vácuo, obtendo-se um sélido oleoso (3»4 g) que foi purificado através de sílica-gel (Merck 9385) utilizando metanol/diolorometano (0,5 -^ 1$ de metanol) obtendo-se o composto (V) numa forma vítrea. 1HBMN (ODOlj) J 7.0-7.55 (20H, m), 6.2 (1H, t), 6,0 (1H, d), 5.0-5.2 (4H, m), 4,3-4,55 (1H, m), 3.8-3.94 (1H, m), 3.2-3.6 (2H, m), 2.7--2.9 (3H, m), 2.4-2.55 (2H, m), 0.7-2.0 (17H, m). /"4-bidroxi-2(E)-(3-fenilpropil)-succinil_7-L- ^-ciclo-lxexilalanina-(I-2-feniletil)-aiaida (VI) - 58 -

Dissolveu-se £"4-benziloxi-3-benzoil-oxioarbonil-2(R,S)-(3-f®nilprQpil)succinil__7-L-β -ciclohexi-lamina-(N-2-feniletil)-amida (?) (340 mg) etn metanol e tratou-se com hidrogénio na presença de paládio sobre carvão, durante 18 horas. 0 catalisador foi removido por filtraçSo e o dissolventè foi eliminado sob vácuo. 0 resíduo foi tomado em xileno puro e foi tratado ao refluxo durante 15 minutos. O xileno foi removido sob vácuo, obtendo-se uma goma amarela que foi purificada por RPHPLO utilizando TM/^O/CH^CI (partin do de 0,1;50;50 e terminando com 0,1:0;100 durante 20 minutos) obtendo-se o composto (?I) pico 1 43,5 mg, e o outro diastereoisdmero pico 2 (47 mg)· 1H RM de pico 1 (CD30D) 5 7.1-7.3 (10H, m), 4.32 (1H, dd), 3.25-3.45 (2Π, m); 2.25--280 (7H, m), 0.8-1.8 (17H, m). 1HKMF de pico 2 (GD^OD) § 7.1-7.25 (10H, m), 4,25-4.3 (1H, m), 3.25-3.50 (2H, m), 2.25-2.95 (& H, m), 0.7-1.85 (17, m). - 59 - c

Os compostos adiante, dos exemplos 16 a 20, foram preparados seguindo o processo do exemplo 15 e utilizando os compostos de partida análogos apropriados.

Exemplo 16

Ester metílioo de /™4-Mdroxi-2(R)--(3-fenilpropil)-succinil_7-l-/3 -cicloliexilalanina-/3 --alanina

1BMS (0D50D) 5 7.05-7.30 (5H, m), 4.35 (1H, t), 3.60 (3H, s), 3.20-3,45 (2H, m), 2.40-2.85 (7H, m), 0.85-1.95 (17, m).

Exemplo 17 ^“4-Mdroxi-2(R)-3-fenilpropil)-sucoinil_7-I-/3 -eiololie xilalanina- # -alanina - 60 -

1EEM (OD3OD) 7.10-7.30 (5Η, m), 4.35 (1H, dd), 3.35- -3.50 (2H, m), 2.32-2.85 (7H, ta), 0„75--1.85 (17H, m)

Exemplo 18/ /~4-iiidroxi-2(E)-(3-fefiilpropil)-suocinilJ-li- /3 -oiolo-hexilalanina- ty -alanina-amida

WEr \eh

61 - (CD5OD) 5 7.10-7.30 (5H, ta), 4.35 (1H, dá), 3.35--3.45 (2H, tn), 2.55-2.85 (4H, tn), 2.45--2.55 (3H, tn), 0.78-1.8 (17H, ta)

Exemplo 19 /~4-Mdroxi-2(S)-isobutilsueGinilJ7-I- β -ciclohexilala-nina_J7-(íT-2-feniletil)-amida

(ODjOD) é 7.10-7.60 (5H, ta), 4.45 (1H, dd), 3.30-3.80 (2H, ta), 2.55-3.10 (5H, ta), 0.75-1.95 (22H, ta).

Exemplo 20 /~4-Mdroxi-2(R)-isoamilsuccinil_/-l- 0-ciololiexilala nina_7-(E-2-feniletil)-amida - 62 -

hms (cd3od) % 7.15-7.45 (5H, m), 4.60 (ih, dd), 3.50-5.80 (2H, m), 2.90 (2H, t), 2,80 (1H, dd), 2.55 (1H, dd), 0.90-1.90 (24 H, ta).

Exemplo 21 (a) (S)-3-/""l-oxo-5-(4-metilf enil)-pentilJ7-4-(fenil- metil)-2-oxazolidinona (1)

Adicionou-se gota a gota butil-lítio (solução 1,6 molar em hexano, 4,4 mmol, 2,75 ml, 1,2 equivalentes) a uma solução de (S)-4-(fenilmetil)-2-axazolidinona (3,64 mmol, 0,64 g) em tetrahidrofurano (15 ml) a -78°C, sob atmosfera de azoto. A solução alaranjada foi agitada 30 minutos a -78°0 e em seguida adicionou-se gota a gota uma solução de cloreto de p-toluilvelerilo (4,06 mmol, 0,86 g) em tetrahidrofurano (5 ml). A mistura reaetiva foi -78 0 com uma solução de oloreto de sódio a 105¾ em ácido clorídrico aquoso (1:1, 10 ml). Por aquecimento até à temperatura ambiente a mistura reaotiva foi xe partida entre acetato de etilo e água. A fase aquosa foi separada e extraída duas vezes com acetato de etilo. As fass - 63 - agitada a -78°C durante 2 horas antes de ser abafada a ,0

orgânicas depois de combinadas foram lavadas uma vez com solução de cloreto de sódio, uma vez com solução de bicarbonato de sódio, e foram seoas oom sulfato de magnésio. 0 dissolvente foi removido sob vácuo, obtendo-se um óleo castanho que foi purificado através de sílica-gel (Merck 9385) eluindo-se com acetato de etilo a 20$ hexano, obtendo-se o composto (i) na forma de um óleo levemente amarelado (0,65 g, 51$). 1HROT (CDC13) S 1.63 (m, 4H), 2.31 (s, 3H), 2.62 (m, 2H) 2.75 (dd, 1H), 2.89-2.98 (m, 2H), 3.26 (dd, 1H), 4.12-4.18 (m, 2H), 4.61-4.67 (m, 1H), 7.17-7.36 (m, 9H). (b) 3-/""l-oxo-2(R)-(t-butilacetil)-5-(4-metil]§Bnil)-pentil_7-4-(S)-fenilíaetil-2-oxazolidinona (2)

Uma solução da oxazolidinona (1) (0,65 g, 1.85 mmol) em tetrahidrofurano (10 ml) foi adicionada a uma solução de bis-trimetilsilil-azida de sódio (solução 1 molar em tetrahidrofurano, 2,6 mmol, 2,6 ml, 1,4 equivalentes) em tetrahidrofurano (10 ml) a -78°0, sob atmosfera de azoto. Á mistura reactiva foi agitada a esta temperatura durante uma hora e em seguida adicionou-se gota a gota bromoacetato de butilo (5,6 mmol, 1.08 g, 0,90 ml, 3 equivalentes). Deixou-se a mistura reactiva agueoer até -20°0 e agitou-se a esta temperatura durante 4 horas. A mistura reactiva foi abafada a -78°C com uma solução de cloreto de sódio e ácido clorídrico a 10$ (1:1, 10 ml). A mistura foi repartida entre acetato de etilo e água. A fase aquosa foi separada e extraída duas vezes oom acetato de etilo. As fases em acetato de etilo depois de combinadas foram lavadas uma vez com solução de cloreto de sódio e uma vez com solução de hidrogenoearbonato de sódio, secou-se com sulfato de magnésio e removeu-se o dissolvente, obtendo-se um óleo amarelo que foi purificado através de sílica-gel (Merck 9385), eluindo-se com acetato de eti- - 64

66$. lo a 20$/hexano, obtendo-se o composto (2) 0,57 g, 1HEM (CDC13) S 1.42 (s, 9H), 1.57-1.62 (m, 2H), g (s, 5H), 2.41-2.85 (m, 5H), 5.33 1H), 4.10-4.25 (m, 1H), 7.OI-7.O9 ^ 4H), 7.22-7.37 (m, 5H), * (o) monoéster de 4-t-butilo do ácido 2-(R) -metilfenil)-propil __7-succínio (3)

Uma solução de oxazolidinona (2) (0,57 g, 1,23 mmol) em tetrahidrofurano/água (4:1, 25 ml) foi arrefecida em banho de gelo e tratada oom solução de perdxido de hidrogénio (27,5$ p/d, 4,9 mmol, 0,56 ml, 4 equivalentes). A mistura foi agitada durante alguns minutos e em seguida foi aqueoida e misturada gota a gota com uma solução de hidróxido de lítio mono-hidrato (1,23 mmol, 52 mg, 1.0 equivalentes) em água (5 ml). A mistura reactiva foi agitada durante 1,5 horas e depois foi tratada com uma solução aquosa a 10$ de sulfito de sódio (5 ml). A mistura reactiva foi ajustada a pH » 12-13 oom soda caustiea 1 M e depois foi repartida entre diclorometano e água. A fase aquosa foi separada e acidificada com ácido clorídrico a 10$. A fase aquosa foi extraída três vezes com acetato de etilo. As fases orgânicas depois de combinadas foram lavadas uma vez oom solução de cloreto de sódio, uma vez com solução de hidro-genocarbonato de sódio e secaram-se eomsulfato de magnésio, e em seguida 0 dissolvente foi removido, obtendo-se 0 composto (3) na forma de um óleo amarelado (0,18 g» 48$) que foi utilizado sem outra purificação. - 65 dMM-eiar.tEsaKtts

(d) ^”4-t-butoxi-2(:R)-^'"3-(4-metilfenil~propil J^-suc- cinil^/-!- β -ciclohexilalanina-!-(2-feniletil)--amida (4)

Uma solução do áoido (3) (0,18 g, 0,59 mmol, 1,05 equivalentes) em tetraMdrofurano (10 ml) foi tratada com N-metil-morfolina (0,62 mmol, 62,2 mg, 67,7 yul) e foi arrefecida a -20°0 sob atmosfera de azoto. A mistura foi depois tratada com cloroformiato de etilo (0,59 mmol, 64,1 mg, 56.5 ul) e foi agitada a -20°C durante 1 hora formando-se durante este período de tempo um precipitado branco. Passado este tempo foi adicionada uma solução de 1-/3 -oicloliexilalanina-N-(2-fenile-til)-amida (154 mg, 0,56 mmol) em tetraMdrofurano (5 ml) gota a gota, e deixou-se a mistura reaotiva aquecer até à temperatura ambiente durante uma noite, A mistura reaotiva foi repartida entre acetato de etilo e água. A fase aquosa foi separada e extraída duas vezes eom aoeta-to de etilo. As fases em acetato de etilo depois de combinadas foram lavadas uma vez com ácido clorídrico a 10$, uma vez com solução de Mdrogenocarbonato de sódio e ainda uma vez com solução de cloreto de sódio, secaram-se com sulfato de magnésio e o dissolvente foi removido sob vácuo, obtendo-se um óleo amarelo que foi purificado atravás de sílica-gel (Merck 9385) eluindo-se com metanol a 1$; diclorometano, obtendo-se 0,16 g do éster (4) na forma de um óleo levemente amarelado. 1HRM1T (CDClj) ^ 0.77-1.67 (m, 18H), 1.42 (s, 9H), 2.26 (s, 3K), 2.32 (d, 1H), 2.76 (t, 2H), 3.23--3.56 (m, 2H), 4.37 (m, 1H), 6,17 (d, 1H) 6,41 (t, 1H), 6.98-7.37 (m, 9H).

Exemplo 22 /”4-Mdroxi-2(R)-/“3-(4-metilfenil)-propil __7-suocinil)--L- /3 -ciclob.exilalanina-Isr-(2-feniletil)-amida - 66 -

0 éster t-butílieo do exemplo 21 (0,16 g, 0,28 mmol) foi tratado com água (0,5 ml) ee SEA (2,5 ml) e deixou-se em repouso uma Boite (18 horas)* Os voláteis foram removidos sob vácuo, obtendo-se um éleo amarelo que solidificou por repouso. A trituração deste dleo com éter diisopropílico deu origem ao composto de título na forma de um sélido em pé, 122 mg, 86$. 1UMN (0D30D) ^ 0.77-1.78 (16H, m), 2,19 (3H, s), 2.33- -2.80 (7H, m), 3.26-3.39 (3H, m), 4*34 (1H, dd), 6.94-7.32 (9H, m).

Os compostos dos exemplos 23 a 25 fo· ram preparados de forma análoga ao ácido do exemplo 22, a partir de compostos de partida análogos.

Exemplo 23 /~4-hidroxi-2E-fenilpropilsuccinil J-li-/3 -ciclohexilala-nina-N-/“2-(0-benzilcarbonil)-etil_7-amida 1HEM (CD^OD) ^ 7.37 (s), 7.36 (5H, s), 7.07-7*34 (m, 5H) 5.13 (s, 2H), 4.33 (1H, dd) 3.25 (4H, br, d), 2.75 (2H, m), 2.60 (2H, t) 2.44 (m, 1H), 0.8-1.9 (17H, m)

Exemplo 24 /~4-hidroxi-2R-fenilpropilsuccinilβ -ciclohexilala-nina-U-/"’ 2-(p-sulf onamido-f enil)-etil _7-amida 1HKMT, (GD^OD) S 7.7 (2H, d), 7.35 (2H, d), 7.05-7.35 (7H, m), 4.35 (1H, dd), 3.35-3.45 (2H, m), 2.70-2.85 (2H, m), 2.50-2.70 (2H, m) 2.38 (1H, dd), 0.75-1.85 (17H, m) - 67 -

Exemplo 25 éster metílioo de /”4-liidroxi-2R-f enilpropil-sucoinilJf--Ii« éò -ciclobexilalanil-glioina 1EEMN (CD^OD) £ 7.1-7.4 (5H, m), 4.45 (1H, dd), 3.95 (1H, d), 3.80 (1H, d) 3.70 (3H, s), 2*70-2.85 (1H, m), 2.55-2*70 (3H, m), 2.38 (1H, dd), 0.85-1.85 (17H, m).

Exemplo A A actividade e seleotividade dos compostos da presente invenção podem ser determinados do modo que se descreve a seguir.

Todos os ensaios com enzimas para determinar valores foram realizados utilizando o substrato peptídeo Dnp-Pro-Leu-G-ly-Leu-Trp-Ala-D-Arg-Mgo fVL. Sharon Stock e Robert D. Gray, JBO 264« 4277-81, 1989). Os enzimas realizam a clivagem do peptídeo na ligação G-ly-leu, o que pode ser seguido fluorimetricamente medindo o aumento da emissão de fluorescência de Trp associada à remoção do grupo de bloqueio dinitrofenol (Dnp).

Essencialmente o enzima (por exemplo gelatinase, estromelisina ou colagenase) a 0,08-2 nM; uma gama de oonoentraçSes de inibidor (0,1 - 50 x Ki) e o substrato (aproximadamente 20 um) são incubados uma noite em tampão 0,1 M Tris/HCl, pH 7,5, contendo 0,1 M laCl, 10 mM 03012 e 0,05$ Brij 35 ou à temperatura ambiente, ou a 37°0, consoante o enzima. A reacção e parada ajustando o pH ao valor 4 utilizando um tampão de aoetato de sódio 0,1 M e a fluorescência é lida a um comprimento de onda de excitação de 280 nm e a um comprimento de onda de emissão de 346 nm. - 68

Os valores podem ser estabelecidos utilizando a equação para a inibição final: — /^(Kl(app)+/fX_72+2(El(app)-^-l7)<fBj'+^B_7: 2/fEjn (KKappíVlJ-Z^J7 na qual 1Q ê a velocidade inioial da reacção na ausência de inibidor, ?i é a velocidade inioial na presença de ini-bidor, J é a concentração total do enzima e /”1_/ é a concentração total do inibidor na mistura reaotiva.

Para a estromelisina e a colagenase considerou-se que (app) se aproximava do valor real E^ à medida que se tinha _/ Zffl para o substrato de hidrólise. Para a gelatinase o valor E^ foi determinado realizando a análise a várias concentrações de substrato. Um gráfico de E^(app) em relação a /“SJ permitiu então obter o valor E^ real como o valor da intersecção dos Y, do eixo*

Os resultados do quadro seguinte fora obtidos com os compostos de acordo com a invenção.

Ei (nM)

Composto do exemplo ns Colagenase estremolisina-1 G-elatinase -72KD 6 150 5,92 0.025 12 210 24.8 0.14 15 45 JuM 842 21 16 57 juM 1.47 uM 6 - 69 -

Claims

REIVINDICAÇÕES

na qual R representa um grupo -CONHOH, carboxilo (-CC^H) ou carboxilo esterificado; R^ representa um grupo alquilo, alcenilo. arilo, arai- quilo, heteroaralquilo ou heteroariltioalquilo, eventualmente substituídos; 2 R representa um grupo alquilo, alcenilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, arilo, aralqullo, aralcoxi ou aralquiltio eventualmente substituídos, ou um grupo amino (-NHg), amino substituído, carboxilo (-00 jH) ou carboxilo esterificado; r representa um átomo de hidrogénio ou um grupo al quilo; R4 representa um átomo de hidrogénio ou um grupo al quilo; 5 ,6 R representa um grupo de formula -£Alk_7nR em que Alk representa um grupo alquilo ou alcenilo eventualmente interrompido por um ou mais átomos de -0-ou -S« ou grupos -N(R ) Z~em que R representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo com 1 a 6 - 70

átomos de carbono^?# n á O ou um numero inteiro X# e 6 R representa um grupo cicloalquilo ou cicloalcenilo eventualmente substituído? X representa um grupo amino (-NH2)# ou amino substituído, hidroxilo ou hidroxilo substituído? e os seus sais, solvatos e hidratos. - 2â Composto de acordo com a reivindicação 1 caracterizado por R representar um grupo -CONHOH ou carboxilo (-COgEí). - 3â - Composto de acordo com as reivindicações X ou 2 caracterizado por R1, R3 e R4 representarem cada ura, um átorao de hidrogénio. - 4· - Composto de acordo com qualquer das 2 reivindicações 1 a 3 caracterizado por R representar um grupo alquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, arilo, aralcoxi ou aralquiltio eventualmente substituídos. - 5a - Composto de acordo com qualquer das 5 reivindicações anteriores caracterizado por R representar 6 um grupo AlkR em que Alk representa um grupo alquilo com - 71 - 6 1 a 6 átomos de carbono e R representa um grupo cicloalqui· lo ou cicloalcenilo. - 6â - Composto de acordo com qualquer das reiviádicaçSes anteriores caracterizado por X representar um grupo amino ou um grupo amino substituido. •Mp 7¾ mm Composto de fórmula (Ia):

na qual R representa um grupo -GONHOH, carboxilo (-G02H) ou carboxilo esterificado; 2 r representa um grupo alquilo, alcenilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, arilo, araiquilo, aralcoxi ou aralquiltio eventualmente substituídos, ou um grupo amino amino substituido, carboxilo (-CC^H) ou carboxilo esterificado? H representa um grupo de fórmula -£Alk__7nR em que Alk representa um grupo alquilo ou alcenilo eventual mente interrompido por um ou mais átomos -O- ou -3-ou -N(R ) /"em que R representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo com 1 a 6 átomos de car- - 72 -

ns«nrj7

bono_7, η e 0 ou ura numero inteiro 1, e R^ representa um grupo cicloalquilo ou cicloalcenilo eventualmente substituído; X representa um grupo amino (-NE^) ou amino substitui- do, hidroxilo ou hidroxilo substituído; e os seus sais, solvatos e hidratos. - 8â - Composto de acordo com a reivindicação 7 caracterizado por R representar um grupo -CONHOH ou 2 -C0gH, R representar um grupo alquilo, alcenilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, arilo, aralcoxi ou aralquiltio eventualmente substituído; 5 6 R representa um grupo -AlkR , em que Alk representa > 6 um grupo alquilo com 1 a 6 átomos de carbono e R representa um grupo cicloalquilo ou cicloalcenilo; X representa um grupo amino -(CH2) ou amino substituí do; e os seus sais, solvatos e hidratos do mesmo. - 9B - Composto de acordo com a reivindicação 8 caracterizado por R5 representar um grupo ciclohexii--alquilo com 1 a 6 átomos de carbono na parte alquilo. - 10· - Cpraposto de acordo com a reivindicação 9 caracterizado por R5 representar um grupo ciclohexilmetilo. 73 - - 11 - -

Composto de acordo com as reivindica-2 ções 9 ou 10 caracterizado por R representar um grupo fenil-alquilo com 2 a 6 átomos de carbono na parte alquilo, eventualmente substituido. - 12® - Composto de acordo com a reivindica-2 ção 11 caracterizado por R representar um grupo fenilpro-pilo eventualmente substituido. - 13® - -(N-bidroxiamino)-2(R)-ciclohexilme-til-succinil_7’-I*-fà-eiclohexilalanina-N- (2-feniletil) -amida? £ 4-N- (hidroxiarrd.no) - 2R-isobutil-succinil_7-b-p-ciclohe-xilalanina-N-(2-£eniletil)-amida? £ 4- (N-hidroxiamino) -2R-£enilpropil-3Uccinil_7-h-f^ciclo-hexilalanina-N-(2-feniletil)-amida? £ 4- (N-hidroxiamino)-2R-fenilpropil-succinil__7-b-p-ciclo-hexilalanina-N-(2-aminoetil)-N, N-dimetilamino_7-amlda? £ 4- (N-h idrox iamino) - 2R- f enilpropi 1-succinil__7- b-ίβ- ci clo-hexilalanina-N-/“ 2- (p-sul fonamidof enil) -etil__7-amida? £ 4- (N-hidroxiamino)-2R-fenilpropil-succinil_7-L-p-ciclo-bexilalanina-N-(2-(p-sulf onilífen il)-etil)-amida? /"-· - (N-h idrox iamino) -2R-fenilpropil-succinil_7-L-p-ciclo-hexilalanina-N-Z* 2- (2-aminoetil) -piridina_7-amida? - 74 -

£ 4- (N-hidroxiamino)-2R-pentil-succinil_7-L~p-ciclohexila-Ianina-N-(2-feniletil)-amida; £ 4- (N-hidroxiamino)-2R-isoamil-suecinil—7-L-p-ciclohexila-lanina-N-(2-feniletil)-amida; £ 4- (N-hidroxiamino)-2R-fenilbutil-succinil_7-L-p-ciclo-hexilalanina-N-(2-feniletil)-amida; £ 4-(N-hidroxiamino)-2R-fenilpropil-3Uceinil_7-L-p-ciclo-hexilalanina-N- (4- (3-aminopropil) -morfolina^JT-amida; £ 4-(N-h idrox iamino)-2R-fen ilpropil-succlnil^T- L-β-ciclo-hexilalanina-N-(2-feniletil)-amida; (N-hidroxiamino) - 2R- f enilpropil- succini 1^7-L- <3- ciclo-hexilalanina-N-/~ β-alanina_7-amida ? £ 4- (N-h idrox iamino) - 2R- isobut il- saccini 1__7-Ij- β- ciclohex i-lalanina-amida; £4- (N-hidroxiamino-2R- (3-fenilpropil)-succinil__7-I—β-oiclo-hexilalanina-amida; £ 4- (N-hidroxiamino)-2R- O-fenilbutilJ-succinil^-L-p-ciclo-hexilalanina-amida; £ 4-hidrDxi-2 (R>- (S-fenilpropilJ-succinil^-L-p-ciclohexi-lalanina-(N-2-feniletil)-amida? éster metilico de /“4-hidroxi-2(R)-(3-£enilpropil)-succi-nil_7-L-P“CÍclohexilalanina-p-alanina? £ 4-hidroxi-2(R)- (3-fenil-propil)-succinil__7-Ir-p-ciclohexi-lalanina-p-alanina; | £4-hidroxi-2(R)-(3-fenilpropil)-succinil_7-L-β-ciclohexi- lalanina-p-alanina-amida? - 75 -

£ 4-hidroxi- 2R-£enilpropil-succinil_7-L-p-ciclohexilalanina -N-(2-(O-benzilcarbonil)-etil 7-amida? £4-hidroxi-2R-fenilpropil-succinil_7-i·—f3-ciclohexilalanina--U-£ 2- (p- sul f onamido fen il) -etil__7- amida; éster metílico de ^4-hidroxi-2R-fenilpropil-succinil_7-b- -p-ciclohexilalanlii^glicinaf e os sais, solvatos e hidratos dos mesmos. - 14· - Composição farmacêutica caracterizada por compreender um composto de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 13 em combinação cora um diluente, substância veicular ou excipiente farmaceuticamente aceitável. - 15® - Processo para a preparação de um composto de fórmula (I), tal como foi definido na reivindicação 1, processo caracterizado por compreenderí (a) o acoplamento de um ácido de fórmula (II)% - 76 -

ou um seu derivado activo e/ou um seu derivado bloqueado, com uma amina de fórmula (ili)t

ou um seu derivado bloqueado, seguido pela adição de qualquer grupo de bloqueio; ou (b) a descarboxilação de um composto de fórmula (IX):

0 R‘ (IX) de modo a obter-se um composto de fórmula (I) na qual R representa um grupo -C02H? e/ou - 77 - (c) a interconversão de um composto de formula (i)* Lisboa, 29 de Maio de 1992

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