PT99096A - Processo para a preparacao de antagonistas de receptores de fibrinogenio, por exemplo derivados de alanina - Google Patents

Description

REFERÊNCIA CRUZADA

Este é um requerimento Continuação-Em-Parte da Série dos E.U.A. No. 07/650.389, registado em 1 de Fevereiro, 1991, que é um requerimento Continuação-Em-Parte da Série dos E.U.A. No. 07/589.175 registado em 27 de Setembro, 1990.

CAMPO DO INVENTO

Este invento relaciona-se com a descoberta de antagonistas do receptor de fibrinogénio da Fórmula I para utilização na inibição da ligação do fibrinogénio às plaquetas sanguíneas e inibição da agregação das plaquetas sanguíneas quando administrados a mamíferos, de preferência humanos.

FUNDAMENTOS DO INVENTO A interacção de plaquetas com os sistemas de coagulação e fibrinolítico na manutenção da hemostase pode tornar-se patogé-nica, requerendo prevenção e tratamento. Os antagonistas do receptor de fibrinogénio da Fórmula I são úteis no tratamento de várias doenças relacionadas com a agregação das plaquetas e com a formação de fibrina. O interesse pelos inibidores plaquetários ressurgiu como resultado de uma melhor compreensão do papel desempenhado pelas plaquetas e trombose na patogénese da doença vascular, incluindo angina instável, enfarto agudo do miocãrdio e acidente vascular cerebral.

As plaquetas são fragmentos sem núcleo semelhantes a células, que se encontram no sangue de todos os mamíferos, que participam na coagulação sanguínea. 0 fibrinogénio é uma 4 glicoproteina presente como um componente normal do plasma sanguíneo. O fibrinogénio participa na agregação plaquetária e na formação de fibrina no mecanismo da coagulação sanguínea. As plaquetas depositam-se no local da lesão vascular onde múltiplos agonistas fisiológicos actuam para iniciar a agregação das plaquetas que culmina na formação de um rolhão de plaquetas a fim de minimizar a perda sanguínea. Se o rolhão de plaquetas ocorrer no lume de um vaso sanguíneo, o fluxo sanguíneo normal é comprometido.

Os receptores nas membranas das plaquetas são essenciais no processo da adesão e agregação das plaquetas. É sabido que a interacção do fibrinogénio com um receptor no complexo Ilb/IIIa da membrana da plaqueta é essencial para a função normal das plaquetas.

Zimmerman et al., Patente dos E.U.A. No. 4.683.291, descreve peptídeos tendo utilidade no estudo das interacções fibrinogénio-plaquetas, plaquetas-plaquetas, e células-células. Os peptídeos são descritos como tendo utilidade quando é desejável retardar ou evitar a formação de um trombo ou de um coágulo no sangue. A fórmula geral dos peptídeos é:

H2N-(Ch)-Arg-Gly-Asp-(Cx)-H onde Ch e Cx são sequências de amino ácidos.

Pierschbacher et al., Patente dos E.U.A. No. 4.589.881, descreve a sequência de um fragmento polipeptídeo 11,5 kDal de fibronectina que representa a actividade promotora da ligação celular da fibronectina. Um fragmento descrito específicamente é: 5

H-Tyr-Ala-Val-Thr-Gly-Arg-Gly-Asp-Ser-pro-Ala-Ser-Ser-Lys-Pro-Ile-Ser-Ile-Asn-Tyr-Arg-Thr-Glu-Ile-Asp-Lys-Pro^Ser-Gln-Met-OH

Ruoslahti et al., Patente dos E.U.A. No. 4.614.517, descreve tetrapeptídeos que alteram a actividade de ligação celular das células a vários substratos. É referido que os peptideos "consistem essencialmente em" a sequência que se segue:

X-Arg-Gly-Asp-Ser-Y em que X é H ou um ou mais amino ácidos e Y é OH ou um ou mais amino ácidos. A Figura 1 indica os polipeptídeos que foram sintetizados por Ruoslahti et al., na "determinação do peptídeo mais pequeno que apresenta actividade de ligação celular". Ruoslahti et al., Patente dos E.U.A. No. 4.578.079, descreve tetrapeptídeos semelhantes que têm Ser substituído por Thr ou Cys.

Pierschbacher et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA. Vol. 81, pp. 5985-5988, October, 1984, descrevem variantes do sítio de reconhecimento celular da fibronectina que retêm actividade promotora da ligação. Pierschbacher et. al. ensaiaram ainda as actividades promotoras de ligação celular de um certo número de estruturas assemelhando-se intimamente ao peptídeo Arg-Gly-Asp--Ser, e verificaram "que a arginina, glicina, e resíduos de aspartato não podem ser substituídos mesmo com amino ácidos íntimamente relacionados, mas que vários amino ácidos podem substituir a serina sem perda da actividade." ιγ.<;

Ruoslahti et al., Science. Vol. 238, pp. 491-497, October 23, 1987, discutem as proteínas de adesão celular. Os autores indicam especificamente que "a elucidação da sequência de amino ácidos no campo da ligação celular na fibronectina e a sua duplicação com peptldeos sintéticos estabelece a sequência Arg-Gly-Asp (RGD) como a estrutura essencial.reconhecida pelas células na fibronectina".

Cheresh, Proc. Natl. Acad. Sei. USA. Vol. 84, pp. 6471-6475, September 1987, descreve o receptor da adesão dirigida a Arg-Gly-Asp envolvido na ligação ao fibrinogénio e o Factor von Willebrand.

Adams et al., Patente dos E.U.A. No. 4.857.508, descreve tetrapeptídeos que inibem a agregação plaquetária e a formação de um trombo. Os tetrapeptídeos têm a fórmula: X-Gly-Asp-Y em que X pode ser

0 II H2NC(=NH)NH(CH2)nCH(Z)C Ou Ac—Arg, em que Z = H, NH2, ou NH-Acilo e n=l-4, e em que Y pode ser Tyr-NH2, Phe-NH2 ou um grupo de uma fórmula específicamente definida.

Constitui assim, um objectivo do presente invento proporcionar antagonistas do receptor de fibrinogénio para 7

ib-· r·· utilização na inibição ' da ligação do fibrinogénio às plaquetas sanguíneas e na inibição da agregação das plaquetas sanguíneas. Um outro aspecto do presente invento consiste em proporcionar novos compostos antagonistas do receptor do fibrinogénio. Outros objectivos do presente invento consistem em proporcionar métodos para inibir a ligação de fibrinogénio âs plaquetas sanguíneas e para inibir a agregação das plaquetas sanguíneas, através da administração de novos compostos antagonistas do receptor de fibrinogénio. Os objectivos anteriores e outros são realizados pelo presente invento do modo descrito mais abaixo.

RESUMO DO INVENTO O presente invento proporciona compostos antagonistas do receptor do fibrinogénio da fórmula:

0 0 R II II I

X-(CH2)m-I-(CH2)n-C-N-CH2-C-NH-CH-CH-C02H

RJ para utilizar na inibição da ligação do fibrinogénio âs plaquetas sanguíneas e para inibir a agregação das plaquetas sanguíneas. Os compostos anteriormente referidos podem ser utilizados num método de actuação sobre um receptor do fibrinogénio que compreende a administração de uma quantidade terapêuticamente eficaz mas não tóxica desse composto a um mamífero, de preferência um ser humano. Uma composição farmacêutica compreendendo um veículo farmacêuticamente aceitável e, nele disperso, uma quantidade eficaz mas não tóxica desse composto constitui um outro aspecto deste invento.

DESCRICÃO DETALHADA DO INVENTO

Os compostos antagonistas do receptor do fibrinogénio... da Fórmula I são úteis num método para inibir a ligação do fibrinogénio às plaquetas sanguíneas e para inibir a agregação das plaquetas sanguíneas. Os antagonistas do.receptor de fibrinogénio deste invento são ilustrados por compostos tendo a fórmula:

em que: X é

NH NH -NR2R3, -NH-C-NR2R3, -C-NR2R3, 9

Y é ir -c- , | -C-NH- , 0, k O II -c- , N-R6, -S(0)q-CH2-, w , —=— -so2nh-. NHR6 1 -c- , 1 <0^ , —^r. -HNC1- R5 -.NHSPa-, 1 R e R sao mdependentemente hidrogénio, arilo, em que arilo é definido como um sistema de anel aromático mono ou policíclico com cinco ou seis membros contendo 0, 1, 2, 3 ou 4 heteróátomos seleccionados de entre azoto, oxigénio e enxofre, não substituído ou substituído, com um ou mais grupos seleccionados de entre hidroxilo, halogénio, ciano, trifluorome-tilo, c 3 alcoxi, C^_,_ alquilcarboniloxi, alcoxicarbonilo, 01-5 alquilo, amino C1-5 alquilo, hidroxicarbonil Cq_,_ alquilo, ou hidroxicarbonil alcoxi, C0_g alquilo, não substituído ou substituído, com um ou mais grupos seleccionados de entre halogénio, hidroxilo, alquilcarbonilamino, arilC1<_5 alquilcarbo- nilamino, ariloxi, C. ,. alcoxi, C. _ alcoxicarbonilo, Cn _ 1-10 ' 1-5 ' 0-5 alquiolaminocarbonilo, alquilcarboniloxi, C3_g cicloalquilo, arilo, oxo, amino, C^g alquilo, C1_3 alquilamino, amino C.^ alquilo, arilo CQ_5 alquilaminocarbonilo, etileno, fenil C£_3 alquilamino, aminocarbonil Cn . alquilo, ou hidroxicarbonil C. _ U“4 - 0-5 alquilo; contanto que o átomo de carbono ao qual R e R1 estão ligados tenha apenas um heteroátomo; 2 3 4 R , R e R são mdependentemente hidrogénio,

Cl-12 nao substituído ou substituído, com um ou mais grupos C1__g alquilo, ou aril CQ_4 alquilo, ou ciano, 2 3 contanto que quando R e R são mdependentemente ciano, X é

NH NH

» H -M-C-NR2R3 or -C-NR2R3; hidrogénio, alquilo, não substituído ou substituído, com um ou mais grupos seleccionados de entre c1_6 alquilo, Ci_5 alcoxi, c^_5 alcoxicarbonilo, hidroxicarbonil CQ_4 alquilo, arilo, amino C1_4 alquilo, arilaminocarbonil CQ_4 alquilo, c^_4 alquilsulfonilo, fenil Cq_4 alquilsulfonilo, hidroxilo, ou amino, hidroxicarbonilo, hidroxi ou . 5 5 amino, contanto que quando R é hidroxi ou amino, R nao esta ligado a um carbono tendo um heteroátomo; hidrogénio,

Cl-12 a-*-c2uil°/ não substituído ou substituído, com um ou mais grupos C1_g alquilo, aril alquilo, C1-4 alquiloxicarbonilo, aril C^_4 alquiloxicarbonilo, C1_4 alquilaminocarbonilo, aril C1-4 alquilaminocarbonilo, C2_5 alcoxi, oxicarbonil C2_5 alquilo, aminocarbonil C2_5 alquilo; R7 é hidrogénio; C1-12 alquilo, não substituído ou substituído, com um ou mais grupos C1_g alquilo, C3_7 cicloalquil hidroxilo, hidroxicarboni- lo, aminocarbonilo, oxo, arilo; arilo; ou C3_7 cicloalquilo; m é 1-10; n é 0-9; q é 0-2; p é 1-6; Zé O, N, S; ou os seus sais farmacêuticamente aceitáveis, ou seu isómero óptico.

Numa apresentação do presente invento, o antagonista do receptor de fibrinogénio tem a fórmula que se segue: 13I:

em que: x é -NR2R3 f NH II ~C-Nr2r3

I Y é

14

R®

Ο , -SCO)q-CH2- ,

1 R e R são mdependentemente escolhidos de entre fenilo, tiofeno, imidazole, naftilo, indole, indazole, tionafteno, não substituído ou substituído, com hidroxi, halogénio, hidroxicarbonil CQ_g alquilo, C.^ alquilo, ou não substituído ou substituído com um ou mais grupos seleccionados de entre arilo, ariloxi, alcoxi, CQ_5 alquilaminocarbonilo, aril CQ_5 alquilamino carboni-lo, hidrogénio, C^_g alquilo, não substituído ou substituído, com um ou mais grupos seleccionados de entre fenilo, tiofeno, imidazole, naftilo, indole, imidazole, tionafteno; 2 3 4 R , R e R são mdependentemente hidrogénio, C1_3 alquilo, não substituído ou substituído, com um ou mais grupos C1_6 alquilo;

15 Φ;

; · hidrogénio ou alquilo, ou não substituído ou substituído, com um ou mais grupos seleccionados de entre amino, amino C1-4 alquilo, hidroxi-lo, arilaminocarbonil CQ_4 alquilo, hidrogénio ou hidroxicarbonil C2_4 alquilo; R7 é hidrogénio; Cl-12 ' pão substituído ou substituído

grupos C^g alquilo lo, aminocarbonilo, arilo; ou C3-7 cicloalquilo; m é 1-5; n é 0-4; q é 0-2; P é 1-3; Z é s; ou os seus sais fa óptico. com um ou mais hidroxicarboni- ou o seu isómero

Numa segunda apresentação do presente invento, o antagonista do receptor de fibrinogénio tem a formula que se segue: & tó: X é ο ιι

Ο R II I X- ( CH2 )m-Y- ( CH2) n-C-N-CH2-C-NH-CH-CH-C02H R? Ri R*-N -f—R* CCH2)p ’

R Λ r2-n n or -NR2^3; Y é

17 R I?

Ra ou

.-0·· 1 R e R são independentemente escolhidos de entre fenilo, imidazo-le, indole, indazole, não substituído ou substituído, com metilo, oxicarbonil CQ_2 alquilo, hidrogénio, c1_6 alquilo, não substituído ou substituído, com um ou mais grupos seleçcionados de entre fenilo, imidazole, indole, indazole;

R e R são hidrogénio ou C1-3 alquilo;

5 „ , „ , R e, hidrogénio; g R é, hidrogénio; hidrogénio; CL - alquilo, não substituído ou substituído, com um ou mais grupos C^s alcJu^--Lo ou aril°; m é 1-5; v:. *

n é 0-3; pé 3; isómero ou os seus sais farmacêuticamente aceitáveis, ou o seu óptico.

Os compostos mais preferidos deste invento incluem os compostos que se seguem tal como é indicado mais abaixo: O) PÍb-Gly-3(R)-(2- fenetil ) β_ alanln*a

C2) Pib-Gly-3-[2-(±ndol-3-yl)et'i 1] β-

o2h ,

C3D Pib-Gly-3(R)-[ 2-(indol-3~yl)etii ] β-alanin J H

20

(4) Pib-Gly-3(S)-[2-(indol-3-yl)etÃl"] β- Μ alanint

lo

(5) Pib-Sar-3(5)-[ 2-( indol-3-yl) etj! ι ] β- alanina

(6) [,2(R)-Prc?pyl-4-(piperidin-4-i 1] butanoil -Sar-3(R)-(2-' f enetil β- alanina i V e

j.·' K

Este invento inclui as designações em aberviatura que se seguem: Sar, sarcosina; Bn, benzilo; NMM, N-metilmorfolino; HOBt, 1-hidroxibenzotriazole; EDC, clorohidreto de 1-(3-dimetil-aminopropil)-3-etilcarbodiimida; DMF, dimetilformamida; Pib, 4-(4-piperidil)butanoilo; BOC-Asp(Bn), éster N-BOC-Asp-B-benzí-lico, pTSA, ácido paratoluenessulfónico; DMS, dimetilsulfureto; todos os α-amino ácidos quirais têm a configuração S a não ser que indicado de um modo diferente.

Os sais farmacêuticamente aceitáveis dos compostos da Fórmula I incluem os sais convencionais não tóxicos ou os sais de amónio quaternário da Fórmula I formados, por exemplo, a partir de ácidos inorgânicos ou orgânicos não tóxicos. Por exemplo, esses sais convencionais não tóxicos incluem os derivados de ácidos inorgânicos tais como ácido clorídrico, bromídrico, sulfúrico, sulfãmico, fosfórico, azótico, etc.; e os sais preparados a partir de ácidos orgânicos tais como ácido acético, propiónico, succínico, glicólico, esteárico, láctico, málico, tartárico, cítrico, ascórbico, pamoico, maleico, hidroximaleico, fenilacético, glutâmico, benzoico, salicílico, sulfanílico, 2-acetoxibenzoico, fumãrico, toluenessulfónico, metanessulfónico, etane dissulfónico, oxãlico, isetiónico, etc.

Os sais farmacêuticamente aceitáveis do presente invento podem ser sintetizados a partir de compostos da Fórmula I que contêm uma porção básica ou acídica por métodos químicos convencionais. Geralmente, os sais são preparados por reacção da base ou do ácido livre com quantidades estoiquiométricas ou com um excesso do ácido ou base inorgânico ou orgânico formador de sal desejado num solvente apropriado ou em várias combinações de solventes. 22

Ir L

Os sais farmacêuticamente aceitáveis dos ácidos da Fórmula I são também rãpidamente preparados por processos convencionais tais como tratamento de um ácido da Fórmula I com uma quantidade apropriada de uma base, tal como um hidróxido de metal alcalino ou de um metal alcalino terroso por exemplo sódio, potássio, litio, cálcio, ou magnésio, ou uma base orgânica tal como uma amina, por exemplo, dibenziletilenediamina, trimetil-amina, piperidina, pirrolidina, benzilamina, etc., ou um hidróxido de amónio quaternário tal como hidróxido de tetrametilamónio, etc.

Os compostos da Fórmula I são úteis para inibir a ligação de fibrinogénio às plaquetas sanguíneas, inibir a agregação das plaquetas sanguíneas, tratar a formação de trombos ou a formação de êmbolos, e para a prevenção da formação de trombos ou da formação de êmbolos. Estes compostos são úteis como agentes farmacêuticos para mamíferos, especialmente para seres humanos. Os compostos deste invento podem ser administrados a doentes em que se deseja realizar a prevenção da trombose por inibição da ligação do fibrinogénio ao receptor do complexo Ilb/IIIa glico-proteico da membrana das plaquetas. Os compostos deste invento podem também ser usados para evitar ou modular a evolução do enfarto do miocárdio, da angina instável e do acidente vascular cerebral trombótico, quando possa ser desejável um tratamento mais prolongado. Além disso, esses compostos podem ser úteis na cirurgia de artérias periféricas (enxertos arteriais, endarterec-tomia da carótida) e na cirurgia cardiovascular onde a manipulação de artérias e orgãos, e/ou a interacção das plaquetas com superfícies artificiais, leva à agregação e destruição das plaquetas. As plaquetas agregadas podem formar trombos e trombo-êmbolos. Compostos deste invento podem ser administrados a doentes cirúrgicos para evitar a formação de trombos e de trom-boembolos. A circulação extracorpórea é usada correntemente para cirurgia cardiovascular a fim de oxigenar o sangue. As plaquetas aderem às superfícies do circuito extracorpórea. A adesão depende da interacção entre GPIIb/IIIa nas membranas das plaquetas e fibrinogénio adsorvido na superfície do circuito. (Gluszko et al., Amer. J. Physiol. 1987, 252:H, pp 615-621). As plaquetas libertadas a partir das superfícies artificiais revelam uma função hemostática comprometida. Os compostos deste invento podem ser administrados para evitar a adesão.

Outras aplicações destes compostos incluem a prevenção da trombose das plaquetas, tromboembolia, reoclusão, e reestenose durante e após terapêutica trombolítica e prevenção da trombose das plaquetas, tromboembolia, reoclusão e reestenose após angio-plastia das coronárias e de outras artérias e após processos de bypass das artérias coronárias.

Os compostos da Fórmula I podem ser administrados a mamíferos, de preferência em combinação com veículos ou diluentes farmacêuticamente aceitáveis, facultativamente com adjuvantes conhecidos tais como alúmen numa composição farmacêutica que é não tóxica e numa quantidade terapêuticamente eficaz, de acordo com a técnica farmacêutica padronizada. Os compostos podem ser administrados oralmente ou parentericamente, incluindo a administração intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, trans-dermi-ca, subcutânea e tópica.

Para utilização oral de um antagonista do receptor do fibrinogénio de acordo com este invento, os compostos selecciona-dos podem ser administrados, por exemplo, sob a forma de comprimidos ou cápsulas, ou sob a forma de uma solução ou suspensão aquosa. No caso de comprimidos para utilização oral, os veículos que são habitualmente utilizados incluem lactose e amido de milho, e são habitualmente utilizados agentes de lubrificação, tais como estearato de magnésio. Para administração oral sob a forma de cápsula, diluentes úteis incluem lactose e amido de milho seco. Quando são requeridas suspensões aquosas para utilização oral, o ingrediente activo é combinado com agentes de emulsificação e de suspensão. Se desejado, podem ser adicionados certos agentes edulcorantes e/ou aromatizantes.

Para utilização intramuscular, intraperitoneal, subcutânea e intravenosa, são usualmente preparadas soluções estéreis do ingrediente activo, e o pH das soluções deve ser ajustado e tamponado apropriadamente. Para utilização intravenosa, a concentração total dos solutos deve ser controlada a fim de tornar a preparação isotõnica. 0 presente invento também abrange uma composição farmacêutica útil no tratamento e prevenção de doenças relacionadas com a agregação plaquetária, formação de fibrina, e formação de trombos e de êmbolos, compreendendo a administração de uma quantidade terapêuticamente eficaz mas não tóxica de compostos da Fórmula I, com ou sem veículos ou diluentes farmacêuticamente aceitáveis.

Composições deste invento incluem compostos antagonistas do receptor do fibrinogénio deste invento em combinação com veículos farmacológicamente aceitáveis, por exemplo solução salina, a um nível de pH por exemplo 7,4, apropriado para se conseguir a inibição da agregação plaquetária. As composições podem também ser combinadas com anticoagulantes tais como hepa-rina ou warfarina. As composições podem também ser combinadas com agentes trombolíticos tais como activadores do plasminogénio ou estreptoquinase a fim de inibir a agregação plaquetária em quadros mais agudos. A composição pode ainda ser combinada com 25

agentes antiplaguetãrios tais como aspirina. A administração oral é presentemente contemplada como a via de administração preferida. As composições são solúveis em meio aquoso, e podem assim ser administradas eficazmente em solução.

Quando um composto de acordo com a Fórmula I é usado como antagonista do receptor do fibrinogénio num ser humano, a , dose diária será normalmente determinada pelo médico assistente variando geralmente a dose de acordo com a idade, peso, e resposta de um determinado indivíduo, assim como com a gravidade dos sintomas dos doentes. •

Num requerimento exemplificativo, uma quantidade apropriada do composto é administrada oralmente a uma vítima de ataque cardíaco subsequente a angioplastia. A administração ocorre subsequentemente a angioplastia, e numa quantidade suficiente para inibir a agregação plaquetária, por exemplo uma quantidade que consegue obter uma concentração plasmática constante variando entre cerca de 0,01-30 μΜ de preferência entre cerca de 1-10 μΜ. O presente invento também inclui uma composição farmacêutica compreendendo compostos do presente invento em combinação com activador do plasminogénio do tipo tissular ou estreptoqui-nase. 0 invento também inclui um método para promover a trombo-lise e para a prevenção da reoclusão num doente que compreende a administração ao doente de uma quantidade eficaz de composições do invento. 0 presente invento porporciona um método para inibir a ligação de fibrinogénio âs plaquetas sanguíneas, para inibir a agregação das plaquetas sanguíneas, para tratar a formação dos trombos ou a formação dos êmbolos, e para a prevenção da formação de trombos ou da formação de êmbolos num mamífero, compreendendo a administração de uma quantidade terapêuticamente eficaz mas não tóxica dos compostos deste invento, com ou sem veículos ou diluentes farmacêuticamente aceitáveis. O presente invento proporciona ainda um método para inibir a ligação do fibrinogénio às plaquetas sanguíneas, para inibir a agregação das plaquetas sanguíneas, para o tratamento da formação de trombos ou da formação de êmbolos num mamífero, compreendendo a administração de uma quantidade terapêuticamente eficaz mas não tóxica dos compostos deste invento em combinação com agentes trombolíticos, tais como activadores do plasminogénio tissular ou estreptoquinase, anticoagulantes tais como heparina ou warfarina, ou agentes antiplaquetãrios tais como aspirina, com ou sem veículos ou diluentes farmacêuticamente aceitáveis.

Os compostos da Fórmula I são preparados de acordo . com os esquemas de reacção indicados mais abaixo. 0 composto 1 foi preparado de acordo com a metodologia indicado em Buli. Soc. Chim. Fr. 1970, l, 219-230, Fraisse-Jullien, Renee; Frejazille, Claudine, que é aqui incorporado como referência.

Ph CHa COjEt

Esquema I

BnNH2, etanol Ac OH, 75°C

1 0% Pd/C, CH3OH, p-TSA. H2

B0CNHCCH2)eC02H 4 p-TSA · H2N' £cloroformato de isobutilo _· CH2C12, 0°C,em se^lyCCH3) «HC1 guida

Esquema I (Cont. ) II 1N NaOH, CH3OH II w

BOCNHCCH2)eCNH^ C02CH3 -- ΒΧΗΗζΟΗ2)0εΝΗ^ CO^H 5 6

Ph

BocN^;cH2)aCNH^^|^'^i:OjEt cloroformato de iso- nmm, CHjCia, 0 o°c, em 3 butilo n _ seguida

1N NaOH, CH3OH ' O li BOCNHCCH2)eC:

COjH

Ph , O TFA/CH2Cl2 II -—-- Η2Ν(ΟΗ2)βΟΝΗ

Ph

OjH 8

Esquema II BOCjO, DMF, NEt3

BOCN ry^on cloreto de oxalilo díbo

CH2C13, NEC3, -78°C ;b) PhaPrCKCOjEt,

-7B° to 0°C

10% Pd/C, Hj J—V ^

----BOCN^^V^í^cJjEC acetato de '—f etilo 12 IN Na oh, etanol éter( socij, piridina

OjCH3 1 N NaOH, CHjOH

b) ether, CfLN,, 0°C

--— BOCN

C) RgOjCPb, NEtj, CH3OH 1 4

Esquema III

Ph A a a a BOCNHT^COjH 17 . NMH CH2C12i 0°C Ί cloroformato de a} isobutilo gm.gl-CH.N,_ b) CH3OH; NEt3. Ag02CPh

Ph

Ph ΙΠΓΑ.Η,μ'5'^0’™’ .CF3C0^H/CH;C1z bocnhA^CQ3CH3 19

OuC 18

EDC, HDBT, NMH BOCNH-^COjH DMF, 0o to 25°C

acetato de etilo HC1, -10°C

Ph

BOCNH^\-^ΠT^§VNχC02CH:3 O

Ph A 9 a HCl»H2 NXX|pNH-^s>^C02CH3 0 21

EDC, HDBT, DMF, NMM 22 14 20

Esquema III (Cont.)

:BOCN

J

ΝΗ'^γρNH"^^002 CÍÍ3 O 22

CF3C02H/CH2C12

HN

^p-ΝΗ'^ρ-m-^-^C02H O O 24 32 Ί, ν

V, -

Esquema IV

Ph

J 0 21 cloroformato de iso- nmm butilo * acetato de ’ “15°c etilo

Ph

J

Acido trifluoroacético ./CH3cia í fc:

Ph

OaH O 27

Esquema V

fXVs^Vt)SiM&2eBu H 29

AcaO, 4_dimetilamino-piridina , CH2C12I 1,8-diazabiciclo — [ 5. 4. 0] undec-7-aro

©çP^H

1 I ^ Ac 31..... 30 cloreto de aj oxalilo , DM50, CH2C12, NEta -78° a o°c b) Ph3P=CHC02Et 32 #ι 34 fc; ·

Esquema V (Cont.)

h 35

Esquema V (Cont.) acetato de etilo, cloroformato de isobutilo

NMM -15°C éster etílico glicina · HZ. k

36

Esquema V (Cont.)

1 N Na OH, CH3OH

•Λ*. 37 wt·.'

Esquema VI Àc 32

L·. 20% Pd(OíT)2/C Et OH, H2

34a

- 38 - V

BOCN 14

Esquema VI (Cont.) acetato de etilo, cloroformato de isobutilo :o2H ™-15°c ester glicina etil . 34a

H,N''A''~'-C02Et + BOCN

•nh^>co2h EDC, HOBT, NMM, DMF 0°C to 25°C 37a * 39 Λ

2Ν NaOH, CH3OH

- 40 -

«

- Esqueroa VII |^j--j^^-C02EC Ác ;: · 32

BOCN 1 4

Esquema VII (Cont.)

:o2H

acetato de-etilo^ cloroformato deisobutilo NMH -1 5°C ester glicina etil ·

acetato de etilo, cloroformato de isobutilo NMH -10°C 37c 42

r*-

Esquema VII (Cont.)

1 N Na OH, CH3OH

O

Esquema VIII

acetato de etilo, cloroformato de isòbutilõ nmm , -15°C, em seguida éster etilico sarcosina.HC1

CH3 O EC 40 IN Na oh , etanol

acetato de etilo, cloroformato de isobutilo NMM, -15°C, em seguida

BOCN

O 34a

* 44

Esquema VIII (Cont.)

I

1 N NaOH, etanol

t 45

Esquema IX B0C\_y c°2lí 14 0

45

LlNCTM3)2, ΤΗΓ, -7B°C brometo de alilo, 0 C

LiOOH, THF, H20

- 46 - F3 ::

Esquema IX (Cont.)

.t:.

EDC, HOBT, NEC 3, DMF, 19

Ph

h

47 % >;S*

Esquema IX (Cont.)

10% Pd/C, etanol , H2

48

0 presente invento pode ser apresentado sob outras formas específicas sem afastamento do seu espírito ou atributos essenciais. Os Exemplos porporcionados pretendem ajudar a compreender o invento. 0 material, espécies e condições particulares utilizados, pretendem ser ainda ilustrativos do invento e não limitativos do seu âmbito razoável. Todas as análises por croma- tografia de coluna luminosa e de cromatografia de placa delgada

. . 1 foram realizadas sobre gel de sílica. Todos os espectros H RMN foram obtidos num instrumento Varian 300 MHz a não ser que indicado de um modo diferente nos exemplos que se seguem.

t?'·

EXEMPLO 1

Preparação de 2-fN-benzilaminometil^-4-fenillbutirato de etilo 121

Uma mistura de olefina 1 (2,7 g, 13,2 mmol), etanol (20 ml), benzilamina (1,9 ml, 18,5 mmol) e AcOH (1,4 ml) foi agitada durante 60 horas a 75°C. A mistura da reacção arrefecida foi então diluida com H20 e acidificada até pH=3 com HC1 IN seguindo--se lavagem com éter (2 vezes). A fase aquosa foi então basifiçada com NaOH IN até pH=10 seguindo-se extracção com éter (2 vezes). A porção de éter foi seca (MgS04) e concentrada. Cromato-grafia luminosa (sílica, 22% acetato de etilo/hexanos) deu origem â amina 2 (1,3 g) sob a forma de um óleo incolor.

Cromatografia placa delgada Rf= 0,46 (50% acetato de etilo/hexanos) ; 1H RMN (CDC13) S 7,35-7,10 (m, 10H), 4,17 (q, J=7HZ, 2H), 3,78 (m, 2H), 2,90 (m, H), 2,72 (m, 1H), 2,61 (m, 3H), 1,96 (m, 1H), 1,80 (m, 1H), 1,29 (t, J=7HZ, 3H). EXEMPLO 2

Preparação de r2-íaminometil)-4-fenillbutirato de etilo sal de ácido p-toluenessulfónico Γ3)

Uma mistura de benzilamina 2 (1,3 g, 3,3 mmol), 10%

Pd/C (200 mg), ácido p-toluenessulfónico (0,8 g, 3,3 mmol), e etanol (50 ml) foi agitada sob uma atmosfera de hidrogénio (1 atm) â temperatura ambiente durante 3 dias. A reacção foi purificada com argão, o catalisador foi removido por filtração, e o filtrado foi concentrado para dar origem ao sal 3. (1,6 g) sob a forma de um óleo incolor. 50 Ψ *t- <' ν· ·

»ι.1· ·

Cromatografia de placa delgada Rf= 0,42 (10% metanol/CH Cl ) EXEMPLO 3

Preparação de N-BOC-Aha-Glv de metilo f5) A uma solução agitada de 4. (2,0 g, 9,9 mmol) , NMM (1,3 ml, 11,9 mmol), e CH2C12 (50 ml) a 0°C adicionou-se cloroformato de isobutilo (1,6 ml, 11,9 mmol). Após 15 minutos, adicionou-se éster metil glicina*HCl (1,9 g, 15 mmol) seguindo-se NMM (19/8 mmol, 2,2 ml). Após 2 horas a mistura da reacção foi diluída com acetato de etilo sendo então lavada com 50% de solução salina, seca (MgS04), e concentrada.A cromatografia luminosa (sílica, 25% acetato de etilo/hexanos para acetato de etilo) forneceu o dipeptideo 5 (2,6 g) sob a forma de um sólido branco.

Cromatografia de placa delgada Rf= 0,61 (acetato de etilo). EXEMPLO 4

Preparação de N-BOC-AhA-Glv (6)

Uma solução de éster 5 (2,6 g, 8,2 mmol), NaOH IN (12,3 ml, 12,3 mmol), e CH3OH (130 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante 20 horas. A mistura da reacção foi concentrada para remover o CH3OH então diluido com H20 e acidificado com 5% KHSO^. A fase aquosa foi então extraída com acetato de etilo e a porção de acetato de etilo foi concentrada para fornecer o ácido carboxílico 6. (2,1 g) sob a forma de um óleo incolor. Cromatografia de placa delgada Rf= 0,70 (CH2Cl2/AcOH/CH3OH 9:1:1).

EXEMPLO 5

Preparação de éster etílico de N-BOC-AhA-Glv-2-(,2-fenetil) β-ala-nina (7) A uma solução agitada de ácido carboxílico 6 (0,41 g, 1,32 mmol), NMM (0,18 ml, 1,63 mmol), e CH2C12 (5 ml) 1 0°C foi adicionado cloroformato de isobutilo (0,21 ml, 1,63 mmol). Após 20 minutos o sal de amina 3. (0,20 g, 0,54 mmol) foi adicionado seguindo-se NMM (0,36 ml, 3,2 mmol). Após 20 horas a reacção foi diluída com acetato de etilo sendo então lavada com ^0 e solução salina, seca (MgSC>4), e concentrada. Cromatografia luminosa (sílica, 65% a 85% de acetato de etilo/hexanos) deu origem ao tripeptídeo 7 (90 mg) sob a forma de um óleo incolor. Cromatografia de placa delgada Rf= 0,42 (acetato de etilo). 1H KMN (CDC13) δ 7,30-7,15 (m, 5H), 6,88 (t, J=6HZ, 1H), 6,69 (t, J=5Hz, 1H), 4,68 (bs, 1H), 4,14 (q, J=7Hz, 2H), 3,88 (d, J=4Hz, 2H), 3,46 (m, 2H), 3,08 (m, 2H), 2,62 (m, 3H), 2,23 (t, J=7Hz, 2H), 1,96 (m, 1H), 1,80 (m, 1H), 1,63 (m, 2H), 1,43 (s, 9H), 1,28 (t, J=7HZ, 3H). EXEMPLO 6

Preparação de N-BOC-Aha-Glv-2-í2-fenetiH-B-alanina) f8)

Uma solução de éster 7 (90 mg, 0,18 mmol), NaOH IN (2,0 ml, 2,0 mmol), e CH30H (4 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante 1,5 horas. A mistura da reacção foi então acidificada com 5% de KHSC>4 seguindo-se extracção com acetato de etilo (3 vezes) . Os extractos foram então combinados, secos (MgS04), e concentrados para dar origem ao ácido carboxílico £ (70 mg) sob a forma de um óleo incolor. 52

Cromatografia de placa delgada Rf= 0,84 (etanol/NH^OH/í^O 9,5:2,5:2,5); ΧΗ RMN (CD3OD) S 7,21 (m, 5H), 4,80 (s, 2H), 3,42 (m, 2H), 2,99 (t, J=7Hz, 2H) , 2,63 (m, 3H) , 2,24 (t, J=7Hz, 2H) , 1,82 (m, 2H) , 1,61 (m, 2H), 1,50-1,30 (m, 6H), 1,43 (s, 9H). EXEMPLO 7

Preparação de Aha-Glv-2-f2-fenetil)β-alanina (9) A uma solução agitada de 8 (70 mg, 0,15 mmol) em CH2C12 (2,0 ml) a 0°C adicionou-se ácido trifluoroacético (TFA; 200 μΐ) seguindo-se remoção do banho de arrefecimento. Apôs 1,5 horas o solvente foi evaporado e o óleo amarelo resultante foi submetido a cromatografia luminosa (sílica, etanol/H20/NH40H 94:3:3) para proporcionar o amino ácido 9 (30 mg) sob a forma de um põ branco. Cromatografia de placa delgada Rf= 0,22 (etanol/H20/NH40H 9,5:2,5:2,5); 1H RMN (D20) S 7,32 (m, 5H), 3,85 (s, 2H), 3,33 (m, 2H) , 2,82 (t, J=7HZ, 2H), 2,61 (m, 2H), 2,45 (m, 1H), 2,30 (t, J=7Hz, 2H), 1,77 (m, 2H), 1,60 (m, 4H), 1,33 (m, 4H). EXEMPLO 8

Preparação de N-BOC-4-piperidineetanol (111 A uma solução agitada de 4-piperidine-etanol 10 (18,7 g, 0,14 mol) e DMF (200 ml) a 0°C foi adicionado anidrido de N-terc-butoxicarbonilo (31 g, 0,14 mol). Apôs 1,0 hora o banho de arrefecimento foi removido e a mistura da reacção foi agitada durante 20 horas. A mistura da reacção foi diluida com éter e em ?- r-

53

seguida lavada com H20 (2 vezes) e solução salina, seca (MgS04) , e concentrada para fornecer 11 (26 g) sob a forma de um óleo incolor.

Cromatografia de placa delgada Rf= 0,25 (40% acetato de etilo/he-xanos); XH RMN (CDC13) 5 4.09 (bs, 2H), 3,72 (t, J=7Hz, 2H) , 2,70 (m, 2H), 1,75-1,10 (m, 7H), 1,46 (s, 9H). EXEMPLO 9

Preparação de 4-(N-BOC-4-piperidil)trans-crotonato de etilo (12Ϊ A uma solução agitada de cloreto de oxalilo (0,43 ml, 5.0 mmol) em CH2C12 (20 ml) a -78°c foi adicionado DMSO (0,52 ml, 7.0 mmol) gota a gota. Depois da libertação de gás cessar (~ 5 minutos) o álcool 11 (0,8 g, 3,5 mmol) em CH2C12 (20 ml) foi adicionado numa corrente. Após 20 minutos trietilamina (1,7 ml, 12 mmol) foi adicionada gota a gota e em seguida foi removido o banho de arrefecimento. Após 20 minutos foi adicionado (carbeto-ximetileno) trifenilfosforano (1,4 g, 4,0 mmol). Após 2,0 horas a mistura da reacção foi diluida com éter de petróleo sendo então lavada sequencialmente com H20, 5% KHSO^, e solução salina, seca (MgS04), e concentrada. Cromatografia luminosa (sílica, 15% acetato de etilo/hexanos) deu origem ao éster 12. (0,57 g) sob a forma de um óleo incolor.

Cromatografia de placa delgada Rf=0,79 (50% acetato de etilo/hexanos) ; ΧΗ RMN (CDC13) δ 6,91 (dt, J=16 e 7Hz, 1H) , 5,81 (bd, J=17Hz, 1H), 4,18 (q, J=7Hz, 2H), 4.08 (m, 2H), 2,67 (m, 2H), 2,14 (t, J=7Hz, 2H), 1,70-1,05 (m, 5H), 1,44 (S, 9H) , 1,28 (t, J=7H, 3H). *λ·;

EXEMPLO 10

Preparação de 4-(N-BOC-4-piperidil)butirato de etilo f!3) A olefina 12. (26 g, 87 mmol) em acetato de etilo (500 ml) foi hidrogenada, â temperatura ambiente, sob atmosfera de hidrogénio (1 atm) na presença de 10% de Pd/C (5,0) durante a noite. A mistura da reacção foi então purificada com argão seguindo-se filtração através de camada de celite. A concentração do filtrado seguida por cromatografia luminosa (sílica, 10% de acetato de etilo/hexanos) deu origem ao éster 13. (24 g) sob a forma de um sólido cristalino. Cromatografia de placa delgada Rf= 0,52 (20% acetato de etilo/hexanos); XH RMN (CDC13) S 4,16 (q, J= 7Hz, 2H) , 4,10 (m, 2H), 2,69 (m, 2H), 2,31 (t, J=7Hz, 2H), 1,69 (m, 4H) , 1,38 (s, 9H), 1,40 (m, 1H), 1,11 (m, 2H). EXEMPLO 11

Preparação de ácido 4-(N-B0C-4-pÍperidil^butanoico (14)

Uma solução de éster 13 (19 g, 63 mmol), etanol (300 ml) e NaOH IN (100 ml, 100 mmol) foi agitada à temperatura ambiente durante 2,5 horas seguindo-se concentração. 0 resíduo foi diluido com 5% de KHS04 e acetato de etilo e foi transferido para um funil separador. As fases foram agitadas e em seguida separadas e a porção orgânica foi lavada com solução salina, seca (MgS04), e concentrada para dar origem ao ácido 14. (18 g) sob a forma de um óleo incolor que cristalizou após repouso. Cromatografia de placa delgada Rf= 0,68 (acetato de etilo). EXEMPLO 12

Preparação de 5-(4-piperidil)pentanoato de metilo (15Ί A. uma solução agitada de ácido carboxílico 14. (600 mg, 2,2 mmol) , éter (4,0 ml) e piridina (2 gotas) à temperatura ambiente foi adicionado cloreto de tionilo numa porção para efectuar exotermia. Após 25 minutos o éter, piridina e cloreto de tionilo foram evaporados. O cloreto ácido intermediário foi dissolvido em éter (5 ml), arrefecido até 0°C, e em seguida tratado com uma solução etérea de diazometano (15 ml, ~10 mmol). Após 2,0 horas o excesso de diazometano foi removido por purificação com argão. A evaporação in situ deu origem a um sólido que foi dissolvido em CH^OH (10 ml) e em seguida tratado sequencialmente com NEt3 (0,5 ml) e benzoato de prata (20 mg). Após 15 minutos a mistura da reacção preta foi concentrada e o resíduo foi submetido a cromatografia luminosa (sílica, 10% de acetato de etilo/hexanos) para dar origem a 15 (300 mg) sob a forma de um óleo.

Cromatografia de placa delgada Rf=0,73 (30% acetato de etilo/hexanos) ; 1H RMN (CDC13) <5 4,09 (m, 2H), 3,69 (s, 3H), 2,68 (m, 2H), 2,33 (t, J=7HZ, 2H), 1,80-1,00 (m, 11H), 1,47 (s, 9H) . EXEMPLO 13

Preparação de ácido N-BOC-5-(4-PÍperidillpentanoico (16)

Uma mistura de éster 15 (200 mg, 0,7 mmol), em NaOH (1,0 ml, 1,0 mmol) e CH3OH (4,0 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante 20 horas. A mistura da reacção foi então diluída sequencialmente com 5% KHSO^ e acetato de etilo. A porção de 56

ΐνν.

acetato de etilo foi lavada com solução salina, seca (MgSC>4), e concentrada para dar origem a ácido carboxílico 16 (190 mg) sob a forma de um óleo incolor.

Cromatografia de placa delgada Rf= 0,70 (acetato de etilo). EXEMPLO 14

Preparação de éster metilico de N-BOC-3fR)-(2-fenetiHβ-alanina

-OH A uma solução agitada de N-BOC-D-homofenilalanina 17 (15 g, 53,7 mmol), NMM (7,1 ml, 64,4 mmol) e CH2C12 (270 ml) a 0°C foi adicionado um cloroformato de isobutilo (8,4 ml, 64,4 mmol). Após 15 minutos uma solução etérea de diazometano (120 ml, 75 mmol) foi adicionada fraccionadamente. O banho de arrefecimento foi então removido e a reacção foi agitada durante 1,5 horas. A mistura da reacção foi então purificada com argão durante 15 minutos a fim de remover o excesso de diazometano. Diluição com acetato de etilo seguida por lavagem com NaHCC>3 sat., H20 e solução salina, secagem (MgS04) e concentração para dar origem a diazocetona crua. A diazocetona foi dissolvida em CH30H (300 ml) e em seguida tratada sequencialmente com Ag02CPh (4,3 g, 19 mmol) e NEt3 (24 ml, 172 mmol). Após 20 horas a reacção foi concentrada e em seguida submetida a cromatografia luminosa (sílica, 10% de acetato de etilo/hexanos) para proporcionar o éster metilico 18 (5,0 g) sob a forma de um sólido branco. Cromatografia de placa delgada Rf= 0,38 (20% acetato de etilo/hexanos).

EXEMPLO 15

Preparação de éster metílico de 3 ÍR)-(2-fenetil)B-alanina-sal TFA (19).

Uma mistura de .18 (3,2 g, 10,9 mmol) , ácido trifluoro-acético (55 ml), e CH2C12 (55 ml) foi agitada a 0°C durante 1 hora. Concentração seguida por remoção azeotrópica de ácido trifluoroacético residual com tolueno (2 vezes) deu origem a TFA·sal 19 (4,3 g) sob a forma de um óleo amarelo.

Cromatografia de placa delgada Rf= 0,40 (CH2Cl2/CH3OH/AcOH 9:1:1). EXEMPLO 16

Preparação de éster metilico de BOC-Glv-3fR)-(2-fenetil)B-alanina (20) A uma solução agitada de BOC-Gly (2,1 g, 12,0 mmol), amina JL9 (3,3 g, 10,9 mmol), HOBT (2,2 g, 16,3 mmol), NMM (3,9 ml, 36 mmol) e DMF seca (55 ml) a 0°C foi adicionado EDO (2,9 g, 15,2 mmol) seguindo-se remoção do banho de arrefecimento. Após 20 horas, a mistura da reacção foi diluída com acetato de etilo sendo então lavada sequencialmente com H20, NaHCC>3 sat, 5% KHS04, H20 e solução salina, seca (MgSC>4), e concentrada. Cromatograf ia luminosa (sílica, 35% de acetato de etilo/hexanos) deu origem ao dipeptideo 20. (2,1 g) sob a forma de um óleo incolor.

Cromatografia de placa delgada Rf= 0,37 (50% de acetato de etilo/hexanos). EXEMPLO 17

Preparação de éster metílico de Glv-3 -f2-fenetil)fí-alanina«sal de HC1 (21^ Gás HC1 foi feito borbulhar através de uma solução de dipeptídeo 20 (2,0 g, 5,7 mmol) em acetato de etilo (200 ml) a -10°C durante 15 minutos. A mistura da reacção foi então purificada com argão durante 15 minutos a fim de remover o excesso de HC1. A concentração deu origem a um sólido branco que foi triturado com éter para dar origem ao HCl^sal 21 (1,7 g) . 2Η RMN (CDC13) δ 8,31 (bs, 1H), 8,10 (bs, 3H), 7,15 (m, 5H), 4,25 (bs, 1H), 4,04 (m, 2H9, 3,57 (s, 3H9, 2,65 (m, 1H9, 2,50 (m, 4H), 1,78 (m, 2H) . EXEMPLO 18

Preparação de éster metílico de N-BOC-Pib-Glv-3-(2-fenetill-β--alanina Γ22) A uma solução agitada do ácido carboxílico 14 (205 mg, 0,76 mmol), 21 (200 mg, 0,67 mmol) HOBT (140 mg, 1,0 mmol), NMM (0,25 ml, 2,3 mmol), e DMF (3,5 ml) a 0°C foi adicionado EDC (185 mg, 0,97 mmol) seguindo-se a remoção do banho de arrefecimento. Após 20 horas a mistura da reacção foi diluida com acetato de etilo sendo então lavada com H20 (2 vezes) e solução salina, seca (MgSO^), e concentrada. Cromatografia luminosa (sílica, 85% acetato de etilo/hexanos) deu origem a 22 (150 mg) sob a forma de um óleo incolor.

Cromatografia da placa delgada Rf= 0,99 (80% acetato de etilo/hexanos) . EXEMPLO 19

Preparação de N-BOC-Pib-Glv-3(RI -(2-fenetil)-β-alanina (23)

Uma mistura de éster metílico 22. (150 mg, 0,30 mmol), CH^OH (3 ml), e NaOH IN (1,0 ml, 1,0 mmol) foi agitada à temperatura ambiente durante 1,5 horas. A mistura da reacção foi diluída seguencialmente com 5% de KHSO^ e acetato de etilo. A porção de acetato de etilo foi lavada com solução salina, seca (MgS04), e concentrada para dar origem a ácido carboxilico 23. (150 mg) sob a forma de um óleo incolor.

Cromatografia de placa delgada Rf= 0,41 (CH2Cl2/CH3OH/AcOH 9:0,5:0,5); ΧΗ RMN (CDC13) δ 7,40-7,07 (m, 6H) , 6,71 (t, J=4Hz, 1H), 4,30 (m, 1H), 4,05 (rn, 2H), 3,90 (m, 2H), 3,66 (s, 3H), 2,65 (m, 3H), 2,55 (d, J=6Hz, 2H), 2,23 (t, J=7Hz, 2H), 1,88 (m, 1H), 1,65 (m, 4H), 1,46 (s, 9H), 1,30 (m, 1H), 1,06 (m, 2H=. EXEMPLO 20

Preparação de Pib-Glv-3 - ('2-fenetil) β-alanina (24)

Uma solução de 23 (150 mg, 0,30 mmol), ácido trifluoro-acético (1,0 ml), e CH2C12 (1,0 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante 45 minutos seguindo-se evaporação. Cromatografia luminosa (sílica, etanol/H20/NH40H 10:8:0,8) deu origem a amino ácido 24 (35 mg) sob a forma de um sólido branco.

Cromatografia de placa delgada Rf= 0,17 (etanol/NH40H/H20 10:1:1); 1H RMN (CDC13) $ 7,40 1H), 4,01 (d, J=17Hz, 2,61 (m, 2H), 2,52 (t, (m, 5H) , 4,42 (m, 1H) , 4,10 (d, J=17Hz, 1H), 3,15 (m, 2H), 2,86 (t, J=8Hz, 2H), J=7Hz, 2H), 2,15-1,55 (m, 9H). EXEMPLO 21

Preparação de éster metílico de N-BOC-f5-f4-piperidil)pentanoil)--Glv-3 fR)-(2-fenetil)fí-alanina (25) A uma solução agitada do ácido carboxílico 16 (100 mg, 0,35 mmol), NMM (40 μΐ, 0,35 mmol), e acetato de etilo a -15°C foi adicionado cloroformato de isobutilo (45 μΐ, 0,35 mmol). Após 15 minutos a amina*HCl 21 (100 mg, 0,34 mmol) e NMM (40 μΐ, 0,35 mmol) foi adicionado e a agitação foi mantida durante 1,5 horas adicionais. A mistura da reacção foi lavada com H20, NaHC03 sat., 5% KHSO., e solução salina, seca (MgSO.), e concentrada. A cromatografia luminosa (sílica, 70% de acetato de etilo/hexanos) deu origem a 25 (110 mg) sob a forma de um óleo.

Cromatografia de placa delgada Rf= 0,26 (acetato de etilo). EXEMPLO 22

Preparação de N-BOC-f 5-(4-piperidilí penatnoil)-Glv-3(R)-(2-fene-til) β-alanina (26)

Uma mistura de éster 25 (110 mg, 0,21 mmol), NaOH IN (0,4 ml, 0,42 mmol), e CH3OH (5 ml) a temperatura ambiente foi agitada durante 20 horas. A mistura da reacção foi concentrada até à secura, séndo então dissolvida em H20 e acidificada com 5% KHSO^ (pH ~3,0), seguindo-se extracção com acetato de etilo. A porção acetato de etilo foi então lavada com solução salina, seca 61

(MgSC>4), e concentrada para dar origem a ácido carboxílico 26 (107 mg) sob a forma de um óleo incolor. 0 Rf= 0,40 (CH2C12/CH3OH/AcOH 9:0,5:0,5); u- r

XH RMN (CD3OD) S 7,20 (m, 5H), 4,22 (m, 1H), 4,01 (m, 2H), 3,80 (m, 2H9, 2,65 (m, 3H), 2,50 (d, J=6Hz, 2H), 2,26 (t, J=7Hz, 2H), 1,84 (m, 2H) , 1,63 (m, 4H) , 1,37 (m, 2H) , 1,27 (m, 2H) , 1,42 (s, 9H), 1,00 (m, 2H). EXEMPLO 23

Preparação de 5-(4-PÍperidil)pentanoiH-Glv-3(R)-(2-fenetil)B--alanina (27^

Uma solução de 26 (100 mg, 0,20 mmol), ácido trifluoro-acético (4,5 ml), e CH2C12 (4,5 ml) foi agitada a 0°C durante 1,0 hora. A mistura da reacção foi então concentrada. Cromatografia luminosa (sílica, etanol/NH40H/H20 10:1:1) deu origem ao amino ácido 27. (30 mg) sob a forma de um sólido branco. ' 1H RMN (D20) δ 7,20 (m, 5H) , 4,17 (m, 1H9, 4,81 (m, 2H) , 3,28 (m, fe 2H9, 2,86 (m, 2H), 2,63 (t, J=7Hz, 2H), 2,36 (m, 2H) , 2,29 (t, W'- J=7Hz, 2H), 1,90-1,28 (m, 11). EXEMPLO 24 i

Preparação de éter 3-(indol-3-il)propanol-terc-butildimetilsilí-lico (29^ ί A uma solução agitada de 3-indolepropanol 28. (15 g, 86 mmol), DMF (200 ml), e imidazole (12,8 g, 0,19 mol) a 0°C adicionou-se cloreto de terc-butildimetilsililo (14,2 g, 95 mmol) seguindo-se a remoção do banho de arrefecimento. Após 20 horas a S" 1 t.- í'

62 -

mistura da reacção foi diluída com éter sendo então lavada com H20 (2 vezes) e solução salina, seca (Mgso4), e concentrada até proporcionar o éter silílico 29 (29 g) sob a forma de um óleo âmbar.

Cromatografia de placa delgada RF= 0,54 (20% acetato de etilo/he-xanos);

ΧΗ RMN (CDC13) 5 8,07 (bs, 1H), 7,77 (d, J=7Hz, 1H), 7,49 (d, J=7HZ, 1H), 7,33 (t, J=7Hz, 1H) 7,26 (t, J=7Hz, 1H), 7,12 (S, 1H), 3,84 (t, J=6Hz, 2H), 2,95 (t, J=7Hz, 2H), 2,08 (m, 2H), 1,08 (S, 9H), 0,25 (S, 3H), 0,22 (s, 3H). EXEMPLO 25

Preparação de éter N-acetil-3-(indol-3-il^propanol-terc-butildi-metilsilílico (30)

Uma solução do indole 29. (29 g, 86 mmol), CH2C12 (450 ml), l,8-diazobiciclo[5.4.0]undec-7-ene (38 ml, 0,26 mol), 4-dimetilaminopiridina (1,0 g, 8,5 mmol), e anidrido acético (32 ml, 0,34 mol) foi agitada durante 1 semana à temperatura ambiente. A mistura da reacção foi concentrada sendo em seguida diluída com éter. 0 éter foi então lavado com H20, 5% de KHS04 e solução salina, seca (MgS04), e concentrada.

Cromatografia luminosa (sílica, 5% de acetato de etilo/hexanos) deu origem ao produto acilado 3j0 (27 g) sob a forma de um óleo amarelo.

Cromatografia de placa delgada Rf= (20% acetato de etilo/hexanos) . EXEMPLO 26

Preparação de N-Acetil-3-findol-3-il^propanol (31) A uma solução agitada do éter silílico 30 (27 g, 81 mmol) em THF (270 ml) à temperatura ambiente foi adicionada uma solução prémisturada de n-Bu^NF (1M em THF: 244 ml, 0,24 mol) e AcOH (14 ml, 0,24 mmol) (1:1). Apôs 20 horas a mistura da reacção foi diluída com éter sendo então lavada com H20 (2 vezes) e solução salina, seca (MgSO^), e concentrada para dar origem ao álcool 31 (19 g) sob a forma de um sólido cristalino amarelo. Cromatografia de placa delgada Rf= 0,35 (60% acetato de etilo/he-xanos); 4l RMN (CDC13) 5 8,42 (m, 1H), 7,55 (d, J=7Hz, 1H), 7,36 (t, J=7Hz, 1H), 7,29 (t, J=7Hz, 1H), 7,27 (7d, J=7Hz, 1H), 7,22 (s, 1H), 3,76 (t, J=7Hz, 2H), 2,82 (t, J=7Hz, 2H), 2,61 (s, 3H), 2,00 (m, 2H). EXEMPLO 27

Preparação de éster etílico de ácido 5-fN-Acetilindol-3-il)pent--2-enoico f23) A uma solução agitada de cloreto de oxalilo (11,4 ml, 0,13 mol) em CH2C12 (440 ml) a -78°C foi adicionado DMSO seco (2,4 ml, 0,17 mol) gota a gota. Após 5 minutos, cessou a libertação de gás e o álcool 31 (19 g, 87 mmol) em CH2C12 (40 ml) foi adicionado. Após 30 minutos, NEt3 (73 ml, 0,52 mol) foi adicionado para produzir uma pasta espessa. O banho de arrefecimento foi removido e a reacção foi agitada durante 15 minutos adicionais antes da adição de (carbetoximetilene)trifenil fosforano (33,5 g, 96 mmol). Após 2,0 horas, a mistura da reacção foi diluida com éter sendo então lavada com H20 (2 vezes) , 5% KHSC>4 e solução salina, seca (MgS04), e concentrada. Cromatografia luminosa (20% de acetato de etilo/hexanos) deu origem a olefina 32_ (14 g) sob a forma de um sólido branco.

Cromatografia de placa delgada Rf= 0,54 (60% de acetato de etilo/hexanos); ΧΗ RMN (CDC13) 8,42 (bd, 1H), 7,50 (d, J=7Hz, 1H), 7,34 (t, J=7Hz, 1H), 7,28 (t, J=7Hz, 1H), 7,19 (bs, 1H), 7,03 (dt, J=18 e 7Hz, 1H), 5,88 (d, J=18Hz, 1H), 4,19 (q, J=7Hz, 2H), 2,87 (t, J=7Hz, 2H), 2,63 (m, 2H), 2,61 (s, 3H), 1,28 (t, J=7Hz, 3H). EXEMPLO 28

Preparação de éster etílico de N-benzil-3-Γ2-(indol-3-il)etillB--alanina (33)

Uma mistura de olefina 32_ (5,0 g, 17,5 rnmol) e benzil-amina (7,7 ml, 70 rnmol) foi aquecida a 80°C durante 20 horas. A mistura da reacção arrefecida foi aplicada directamente a um coluna de cromatografia luminosa (sílica, 30% de acetato de etilo/Hexanos) para dar origem ao aducto de Michael J33. (4,9 g) sob a forma de um óleo amarelo viscoso.

Cromatografia de placa delgada Rf=0,43 (40% de acetato de etilo-/hexanos). EXEMPLO 29

Preparação de éster 3-r2-(indol-3-il)etillfi-alanina etílico ♦ sal pTSA (34)

Uma mistura de benzilamina 33. (4,6 g, 11,7 rnmol), 10%

Pd/C (2,3 g), e ácido p-toluenessulfónico (pTSA) (2,2 g, 11/7 mmol) foi agitada à temperatura ambiente sob uma atmosfera de hidrogénio (1 atm) durante 4 horas. A reacção foi então purificada com argão, filtrada através de uma camada de celite e concentrada. A espuma resultante foi triturada com 50% de éter/éter de pet. para dar origem ao sal 14 (4,8 g) sob a forma de um sólido branco.

Cromatograf ia de placa delgada Rf= 0,22 (CH2Cl2/CH3OH/AcOH 9:1:1); XH RMN (CD30D) 5 7,70 (d, J=8Hz, 2H) , 7,53 (d, J=7Hz, 1H), 7,32 (d, J=7HZ, 1H), 7,20 (d, J=8HZ, 2H), 7,06 (t, J=7Hz, 1H), 7,05 (s, 1H), 6,99 (t, J=7Hz, 1H), 4,15 (q, J=7Hz, 1H), 3,56 (m, 1H), 2,85 (m, 3H), 2,65 (m, 1H), 2,33 (s, 3H) , 2,05 (m, 2H), 1,22 (t, 7Hz, 3H). EXEMPLO 30

Preparação de éster etílico de N-BOC-Pib-Glv (35) A uma solução agitada de ácido carboxílico 14 (4,0 g, 14,7 mmol), NMM (1,6 ml, 14,7 mmol), e acetato de etilo (200 ml) a -15°C foi adicionado cloroformato de isobutilo (1,9 ml, 14,7 mmol). Após 15 minutos foram adicionados éster glicine etíli-co*HCl (4,1 g, 29 mmol) e NMM (4,8 ml, 45 mmol). Após 45 minutos a mistura da reacção foi lavada com H20, NaHCC>3 sat. e solução salina, seca (MgSC>4) e concentrada. Cromatograf ia luminosa (sílica, 60% acetato de etilo/hexanos) para proporcionar o dipeptídeo 35 (5,0 g) sob a forma de um óleo incolor.

Cromatografia de placa delgada Rf= 0,60 (acetato de etilo); -½ RMN (CDC13) δ 5,98 (m, 1H) , 4,22 (q, J=7Hz, 2Ή), 4,08 (m, 2H), 4,05 (d, J=5Hz, 2H), 2,68 (m, 2H) , 2,68 (m, 2H), 2,24 (t, J=7Hz, 2H9, 1,70 (m, 4H), 1,47 (s, 9H) , 1,30 (t, J=7Hz, 3H) 1,10 (m, 2H) . EXEMPLO 31

Preparação de N-BOC-Pib-Glv (36)

Uma mistura de éster 35 (5,0 g, 14 mmol), NaOH IN (21 ml, 21 mmol), e CH3OH (100 ml) foi agitada â temperatura ambiente durante 3 horas. A mistura da reacção foi então concentrada até à secura, dissolvida em H20, e acidificada com 5% KHSC>4 (pH~3,0). Extracção com acetato de etilo seguindo-se lavagem do acetato de etilo com solução salina, secagem (MgS04), e concentração deram, origem ao ácido carboxilico 36. (4,2 g) sob a forma de um sólido incolor.

Cromatograf ia de placa delgada Rf= 0,50 (C^C^/CH^OH/AcOH 9:0,5:0,5). EXEMPLO 32

Preparação de éster etílico de N-BOC-Pib-Glv-3-r2-(indol-3-il)-etillfí-alanlna (37) A uma solução agitada de ácido carboxilico .36 (415 mg, 1,5 mmol), a amina 34. (600 mg, 1,4 mmol), HOBT (280 mg, 2,1 mmol), NMM (0,5 ml, 4,6 mmol), e DMF seca (7 ml) à temperatura ambiente adicionou-se EDC (370 mg, 2,0 mmol). Após 20 horas a mistura da reacção foi diluida com acetato de etilo sendo então lavada com H20, NaHC03 sat., KHS04 a 5% e solução salina, seca (MgSC>4) , e concentrada. Cromatograf ia luminosa (sílica, 95% 67 67

acetato de etilo/hexanos) deu origem ao tripeptídeo 12 (135 mg) sob a forma de um sólido.

Cromatografia de placa delgada Rf=0,17 (acetato de etilo); XH RMN (cdci3) S 8, 20 (bs, 1H) , 7 ,57 (d , J= :7Hz, 1H), 7,36 (d, J=7HZ, 1H) , 7, 28 (t, J=7Hz, 1H), 7 (t , J= =7HZ, 1H), 7,01 (s, 1H), 6, 67 (d, J=8Hz, 1H), 6, 20 (t, J=4HZ, 1H), 4,35 (m, 1H), 4,14 (q, J=7Hz, 2H) , 4 ,10 (m, 2H), 3,83 (m 1 2H) , 2,80 (m, 2H), 2,65 (m, 2H) , 2 ,54 (d, J= 6Hz, 2H) , 2,20 (t, J= 7Hz, 2H) , 1,95 (m, 2H), 1,80-1, 00 (m, 9H) , i ,48 (s, 9H), 1, 24 (t, J=7Hz, 3H). EXEMPLO 33

Preparação de N-Boc-Pib-Glv-3-r2-(indol-3~il^etil1ft-alanina (38)

Uma mistura do éster 32 (135 mg, 0,24 mmol), NaOH IN (0,5 ml, 0,5 mmol), e CH3OH (5 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante 20 horas. A mistura da reacção foi então concentrada até à secura, dissolvida em H20, sendo então acidificada até pH~3,0 com 5% KHS04· A solução aquosa foi extraída com acetato de etilo e a porção orgânica foi lavada com solução salina, seca (MgS04), e concentrada para dar origem a ácido carboxílico 38. (110 mg) sob a forma de um sólido branco. Cromatografia de placa delgada Rf= 0,55 (CH2Cl2/CH3OH/AcOH 9:1:1). EXEMPLO 34

Preparação de Pib-Glv-3-r2-Cindol-3-il^etillB-alanina (391 A uma solução agitada de 38 (110 mg, 0,20 mmol) CH2C12 (5 ml), e anisole (45 μΐ, 0,40 mmol) a 0°C foi adicionado ácido 68 r

F't

trifluoroacético (5 ml) . Após 1 hora a mistura da reacção foi concentrada. Cromatografia luminosa (sílica, etanol/NH40H/H20 10:1:1) deu origem a amino ácido. 39. (61 mg) sob a forma de espuma.

Cromatografia de placa delgada Rf= 0,15 (etanol/NH40H/H20 10:1:1); XH RMN (D20) δ 7,52 (d, J=8Hz, 1H) , 7,34 (d, J=8Hz, 1H) , 7,08 (t, J=8Hz, 1H), 7,03 (s, 9H), 7,00 (t, J=8Hz, 1H), 4,05 (m, 1H), 3,62 (s, 2H), 3,10 (m, 2H), 2,60 (m, 4H) , 2,25 (d, J=5Hz, 2H), 2,13 (t, J=7Hz, 2H), 1,90-1,00 (m, 11H). EXEMPLO 35

Preparação de éster etílico de N-fR)-a-metilbenzil-3 (R)- Γ2- fin-dol-3-il)etillfí-alanina (33a) e éster etílico de N-ÍRl-a-metil-benzil-3-(S)-r2-(indol-3-il^etill5-alanina (33b^

Uma mistura de olefina 32. (2,77 g, 9,7 mmol) e R-(+)-a--metilbenzilamina (5,03 ml, 39 mmol) foi aquecida sob um indicador de frio a 110°C durante 40 horas. A mistura da reacção arrefecida foi aplicada directamente a uma coluna de cromatografia luminosa (sílica, hexanos:acetato de etilo:2-propanol 40:2:1). 0 isómero (R,R) 33a .eluido em primeiro lugar (1,19 g) sob a forma de um óleo amarelo viscoso solidificou ao repousar. A recristalização a partir de hexanos/acetato de etilo proporcionou material cristalino. O isómero (R,S) 33b foi eluido a seguir (1,55 g), sob a forma de um óleo amarelo viscoso contendo ca 10% do isómero (R,R). 33a: Rf=0,52 (60% EtOAc/hexanos); ν' fv <j*' Λ

69

1H RMN (400 ΜΗζ, CDC13) δ 7,84 (br s, 1Η), 7,52 (dd, J=7,9, 0,7 HZ, 1H), 7,20-7,35 (m, 6H), 7,16 (tm, J=7,l, 1,3 Hz, 1H), 7,08 (tm, J=7,3, 1,1 Hz, 1H), 6,70 (br, d, J=2,4 Hz, 1H), 4,10 (q, J=7,l Hz, 2H), 3,90 (q, J=6,6 Hz, 1H), 2,80-2,90 (m, 2H), 2,68 (ABX dt, J=16, 7,9 HZ, 1H), 2,53 (ABX dd, J=14,5, 5,9 Hz, 1H) , 2,42 (ABX dd, J=14,6, 5,3 Hz, 1H) , 1,79 (q, J=7,5 Hz, 2H), 1,33 (d, J=6,4 Hz, 3Η), 1,22 (t, J=7,l Hz, 3H). 33b: Rf=0,42 (60% EtOAc/hexanos); •bí RMN (400 MHz, CDC13) 5 7,95 (br s, 1H), 7,57 (dd, J=7,5, 0,7 HZ, 1H), 7,34 (dm, J= 8,1, 0,7 Hz, 1H) , 7,17-7,30 (m), 7,11 (tm, J=7,9, 0,9 Hz, 1H) , 6,89 (br d, J=2,2 Hz, 1H) , 4,02-4,15 (ABX Itt, 2H), 3,89 (q, J=6,6Hz, 1H), 2,95 (m, 1H), 2,82 (ÍBXddd, J=15, 9,7, 5,9 Hz, 1H), 2,69 (ABX ddd, J=15, 9,7, 6,0 Hz, 1H), 2,47 (ABX dd, J=15,0, 5,1 Hz, 1H), 2,40 (ABX dd, J=15,0, 7,7 Hz, 1H), 1,96 (m, 1H), 1,83 (m, 1H), 1,30 (d, J=6,6 Hz, 3H, 1,21 (td, J=7,l, 0,7 Hz, 3H). EXEMPLO 36

Preparação de éster etílico de 3 - Γ 2-(indol-3-il) eti 1.1 B-alanina .(34a.)

Amina 33a (996 mg, 2,74 mmol) foi dissolvida em 10 ml de EtOH. Apõs adição de catalisador de Pearlman (20% Pd(OH)2/C, 128 mg) o frasco foi carregado com hidrogénio e mantido sob pressão de balão. Apõs 16 horas uma porção adicional de catalisador foi adicionada (122 mg) juntamente com recente. Quatro horas mais tarde a amostra foi filtrada através de celite e concentrada para proporcionar amina 34a (707 mg, 99%, ca 95% pura): Rf=0,22 (CHC13 sat. NH3:EtOAc 10:1); Λ

70

H RMN (400 MHz, CDCl3) S 8,01 (br s, 1H) , 7 ,60 (dt, J= *8,9, 0,4 Hz, 1H), 7,35 (dt, J=3,1 , 0,9 Hz, 1H), 7, 19 (td, J=7 /1, - 1,3 Hz, 1H), 7,11 (td, J= 7,1, 1 ,2 HZ, 1H), 6, 99 (br d, J=2 /2 Hz, 1H), 4,15 (q, J=7,1 HZ , 2H), 3,72 (q, J=7, 0 Hz, 1H) / 3, 29 (m, 1H), 2,92 -2,78 (m, 2H), 2,53 (ABX dd , J=15, 6, 4,0 Hz, 1H) , 2,33 (ABX dd, J=15,6, 8, ,8 Hz , 1H) , 1,92- 1,73 (m, 2H9, 1,25 (q , J—7,1 Hz, 3Η) . EXEMPLO 37

Preparação de éster etílico de N-Boc-Pib-Glv-3fR)-Γ2-(ΐηάο1-3--il)etillfi-alanina (37a)

A uma solução agitada de ácido carboxílico ,36 (280 mg, 0,85 mmol), amina 34a (214 mg, 0,82 mmol), HOBT (150 mg, 1,11 mmol), e Et3N (0,36 ml, 2,59 mmol) em 3 ml de DMF seca a 0°C foi adicionado EDO (215 mg, 1,12 mmol). Após aquecimento lento até à temperatura ambiente durante 16 horas a mistura da reacção foi diluida com acetato de etilo, lavada com água, e a fase aquosa foi re-extraida com acetato de etilo recente. As porções orgânicas combinadas foram lavadas com água, 5% KHS04, NaHC03 sat., e solução salina, secas (MgSO^), e concentradas. Cromatografia luminosa (sílica, acetato de etilo) deu origem a tripeptídeo protegido 37a (354 mg, 67%) sob a forma de um sólido branco.; Rf=0,19 (acetato de etilo);

ítt. XH RMN (300 ΜΗζ,. CDCl3) S 8,07 (br, s, 1H) , 7,57 (d, J=7,8 Hz, 1H), 7,36 (d, J=8,0 Hz, 1H), 7,19 (td, J=7,l, 1,0 Hz, 1H), 7,11 (td, J=7,9, 1,2 Hz, 1H) , 7,03 (br d, J=2,2 Hz, 1H) , 6,47 (d, J=9,3 Hz, 1H), 6,00 (br t, J=7 Hz, 1H), 4,35 (m> 1H), 4,12 (g, J=7,2 Hz, 2H), 4,15-4,0 (br m, 2H), 3,87 (ABX dd, J=15, 5,2 Hz, 1H), 3,79 (ABX dd, J=15, 4,9 Hz, 1H), 2,80 (td, J=7,3, 2,6 Hz, 2H) , 2,64 (br t, J=12 Hz, 2H), 2,55 (d, J=4,9 Hz, 2H), 2,19 (t, J=7,5 Hz, 2H), 1,98 (m, 2H), 1,7-1,6 (m, 4H), 1,45 (s, 9H), 1,35 (m) , 1,24 (t, J=7,0 Hz, 3H), 1,05 (qd, J=12,2, 4,1 Hz, 2H). EXEMPLO 38

Preparação de N-Boc-Pib-Glv-3-Γ2-(indol-3-il^etilIB-alanina (38a) Éster 37a (494 mg, 0,87 mmol) foi dissolvido em 10 ml de MeOH e adicionou-se NaOH aq. (2N, 0,87 ml, 1,64 mmol). Após agitação durante 16 horas acrescentou-se NaOH adicional (2 N, 0,43 ml, 0,86 mmol) e deixou-se a reacção continuar durante mais 24 horas. A seguir à evaporação do solvente, o residuo foi tratado com água e 5% KHS04 até pH <2, extraído duas vezes com acetato de etilo, e os extractos orgânicos combinados foram lavados com solução salina, secos (MgSO^) e concentrados para proporcionar ácido 38a (463 mg, 98%).:

Rf=0,30 (CH2Cl2:MeOH:HOAc 19:1:1); 1H RMN (400 ΜΗζ, CDC13) δ 8,04 (br s, 1Η) , 7,57 (dd, J=7,l, 0,4

HZ, 1H), 7,35 (d, J=8,1 Hz, 1H) , 7,19 (t, J=6,8 Hz, 1H), 7,10 (t, J=7,3 Hz, 1H), 6,99 (br d, J=2,2 Hz, 1H) , 6,81 (br d, J=9,0 Hz, 1H) , 6,39 (br s, 1H) , 4,37 (m, 1H) , 4,05 (br ε, 2H) , 3,91 (ABX dd, J=16,7, 5,1 HZ, 1H), 3,84 (ABX dd, J=16,5, 5,5 Hz, 1H), 2,81 (br, q, J=6 Hz, 2H) , 2,68-2,58 (m, 2H) , 2,62 (ABX dd, J=16, 4,6

Hz, 1H), 2,53 (ABX dd, J=15,9, 6,0 Hz, 1H) , 2,19 (br t, J=7,l Hz, 2H) , 2,06-1,92 (Iti, 2H) , 1,68-1,56 (m, 4H) , 1,45 (S, 9H) , 1,38 (m) , 1,29-1,21 (m, 4H) , 1,08 (qd, J=12,4, 4,0 Hz, 2H) . EXEMPLO 39

Preparação de sal cloreto de hidrogénio de Pib-Glv-3(IO -2-rindol--3-il)etillfi-alanina C39a) Gás HCl (garrafa de conferência) foi feito borbulhar vigorosamente através de uma solução agitada mecanicamente de 38a (3,7 g, 6,8 mmol), anisole (1,0 ml), e acetato de etilo (200 ml) a -20°C. Inicialmente (aproximadamente 2 minutos) formou-se um precipitado branco. Contudo, o precipitado transformou-se de um sólido numa goma após 2 minutos adicionais. Fez-se passar gás HCl através da solução durante mais 10 minutos fazendo subir a temperatura interna para 5°C, e contudo, a goma permaneceu, mesmo após a adição de CH2C12 (100 ml) . A análise por cromatografia de placa delgada da solução indicou que não restava qualquer porção de 38a. Fez-se então passar argão através da mistura da reacção durante 1,0 hora sem arrefecimento. Após 1,0 hora permanecia uma suspensão branca contendo algumas porções grandes de goma endurecida. Os sólidos foram filtrados e lavados com EtOAc (3 x 100 ml) . 0 sólido foi moido e em seguida triturado com acetonitrilo (50 ml) e então recolhido por filtração a fim de remover uma pequena quantidade de 38a juntamente com outras impurezas 73

proporcionando 39a (3.1 g, 6,5 mmol, 95%) sob a forma de um sólido côr de marfim.

Cromatografia de placa delgada Rf= 0,19 (etanol/NH4OH conc./1^0 10:1:1); RMN (300 MHz, D20) 5 7,66 (d, J=7Hz, 1H), 7,50 (d, J=7Hz, 1H), 7,23 (t, J=7Hz, 1H), 7,17 (s, 1H) , 7,15 (t, J=7Hz, 1H) , 4,23 (m, 1H), 2,78 (S, 2H), 3,29 (m, 2H) , 2,78 (m, 4H), 2,58 (m, 2H), 2,29 (t, J=6Hz, 2H), 2,05-1,17 (m, 11H). EXEMPLO 40

Preparação de éster etílico de N-(S) -a-metilbenzil-3(S)-Γ2-fin-dol-3-il^etillfi-alanina f33c^ e éster etílico de N-(SI-g-metil-benzil-3 ÍR^-Γ2-Cindol-3-il^ etillB-alanina Í33d^

Preparado tal como para 33a e 33b por aquecimento da olefina 32. (1,00 g, 3,5 mmol) e S-(-) -a-metilbenzilamina (1,8 ml, 14 mmol) a 100°C durante 64 horas, proporcionando 33c (396 mg, 28%) e 33d (484 mg, 34%). 33ç: [cc)D -30,3° (c=0,0148 g/ml, CHC13). 33d:[a]D -53,7° (c=0,01185 g/ml, CHCl3). EXEMPLO 41

Preparação de éster etílico de 3-Γ2-(indol-3-iDetillB-alanina ♦ sal PTSA (34c^

Preparado tal como para 34. a partir de 33c (257 mg, 0,63 mmol), p-TSA (122 mg, 0,63 mmol) e 10% Pd/C (70 mg) em 5 ml de MeOH. Isto produziu 34c (290 mg) sob a forma de um sólido escuro. EXEMPLO 42

Preparação de éster etílico de N-Boc-Pib-Glv-3fS)-r2-(indol-3-—ilΊetillβ-alanina (37c)

Uma suspensão de ácido .36. (207 mg, 0,63 mmol) em 2 ml de acetato de etilo foi arrefecida até -10°C. Depois da adição de NMM (69 μΐ, 0,63 mmol) e de cloroformato de isobutilo (82 jul, 0,63 mmol) a reacção continuou durante 20 minutos. Num segundo frasco também a -10°C sal amina 34c (290 mg, 0,63 mmol) e NMM (207 μΐ, 1,89 mmol) foram suspensos em 4 ml de acetato de etilo e em seguida adicionados ao anidrido mixto. Após 2,5 horas a mistura foi,arrefecida bruscamente com água, extraída duas vezes com acetato de etilo, as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 5% KHS04, NaHCO^ sat., e solução salina, secas (MgS04), concentradas. Cromatografia luminosa (sílica, 90% acetato de etilo : hexanos) deu origem ao tripeptídeo protegido 37c (163 mg, 45%) sob a forma de um sólido espumoso. EXEMPLO' 43

Preparação de N-Boc-Pib-Glv-3 (,SWr2-(,indol-3-il)etillfí-alanina (38c^ Éster 37c (163 mg, 0,29 mmol) foi dissolvido em 5 ml MeOH e adicionou-se NaOH aq. (1 N, 0,58 ml, 0,58 mmol). Após agitação durante 16 horas o solvente foi evaporado e o resíduo foi tratado com água e 5% de KHS04 até pH <2, extraído com CHC13 e a camada orgânica foi lavada com solução salina, seca (MgS04) e concentrada proporcionando ácido 38c (168 mg).

i

} i

Preparação de Pib-Glv-3 (S)-r2-(indol-3-il)etinJ3-alanina (39c^ A uma solução agitada de 38c (168 mg, 0,31 mmol) em 5 ml de CH^Cl^, anisole (67 μΐ, 0,62 mmol), e sulfureto de dimetilo (114 μΐ, 1,55 mmol) a 0°C adicionou-se TFA (5 ml). Após 1 hora os solventes foram removidos e o residuo foi cromatografado sobre silica (Et0H:H20:NH40H 10:1:1). Purificação por HPLC preparativa (DeltaPak C18, H20/CH3CN/TFA) proporcionou 39c sob a forma de um sal TFA.

Rf=0,16 (Et0H:NH40H conc.:H20 10:1:1): 1H RMN (400 MHz, D20) δ 7,57 (d, J=7,8 Hz, 1H), 7,40 (d, J=8,0 HZ, 1H), 7,14 (t, J=7,1 HZ, 1H), 7,08 (s, 1H), 7,05 (t, J=7,1 HZ, 1H), 4,11 (brs, 1H), 3,68 (s, 2H), 3,18 (br d, J=12,8 Hz, 2H), 2,74-2,62 (m, 4H), 2,44 (br S, 2H), 2,19 (t, J=7,l HZ, 2H), 1,91 (m, 1H), 1,78 (m, 1H), 1,72-1,63 (m, 2H), 1,49 (m, 2H), 1,30 (m, 1H), 1,18-1,06 (m, 4H). EXEMPLO 45

Preparação de éster etílico N-Boc-Pib-Sar (40)

Utilizando o processo para conversão de 14 em 3.5, JL4 (500 mg, 1,8 mmol) obteve-se 40. (610 mg, 1,6 mmol) sob a forma de um óleo incolor.

Cromatografia de placa delgada Rf= 0,65 (acetato de etilo); XH RMN (300 MHz, CDCl3) δ 4,23 (m, 2H9, 4,14 (s, 1,5H), 4,10 (m, 2H9, 4,05 (s, 0,5H), 3,11 (s, 2H9, 3,01 (S, 1H), 2,70 (m, 2H), 2,40 (t, J=6Hz, 1,5 H), 1,70 (m, 4H), 1,49 (s, 9H), 1,50-1,00 (m, 5H), 1,32 (m, 3H). EXEMPLO 46

Preparação de N-Boc-Pib-Sar (41)

Utilizando o processo para a conversão de 32 em 38., 40. (600 mg, 1,6 mmol) obteve-se 41 (570 mg, 1,6 mmol) sob a forma de um óleo incolor.

Cromatografia de placa delgada Rf= 0,72 (CH2C12/CH3OH/AcOH 9:1:1) . EXEMPLO 47

Preparação de éster etílico de N-Boc-Pib-Sar-3fR)-Γ2-findol-3--il)etillfí-alanina (42)

Utilizando o processo para a conversão de 14 em 3j5, 41. (150 mg, 0,44 mmol) foi feito reagir com 34a (140 mg, 0,53 mmol) para dar origem a 42. (80 mg, 0,18 mmol) após cromatograf ia luminosa (sílica, 80% de acetato de etilo/hexanos e em seguida acetato de etilo).

Cromatografia de placa delgada Rf= 0,25 (acetato de etilo); XH RMN (300 MHz, CDCl3) δ 8,20 (m, 1H9, 7,67 (m, 1H), 7,38 (d, J=7Hz, 1H), 7,20 (t, J=7Hz, 1H), 7,12 (t, J=7Hz, 1H), 7,05 (s, 1H), 6,76 (d, J=10Hz, 0,75H), 6,66 (d, J=10Hz, 0,25H), 4,30 (m, 1H), 4,12 (m, 2H), 4,05 (m, 2H), 4,02 (s, 2H), 3,10 (s, 2,25H), 2,97 (s, 0,75H), 2,85-2,50 (m, 6H) . 2,38 (t, J=7Hz, 1,5H), 2,25 (t, J=7Hz, 0,5H) , 2,00-1,00 (m, 11H) , 1,48 (s, 9H) , 1,28 (m, 3H) . 77

EXEMPLO 48 ί;·

Preparaçao de N-Boc-Pib-Sar-3fR)-Γ2-findol-3-iHetilIB-alanina iili

Utilizando o processo para converter 37 em 38, 42 (80 mg, 0,14 mmol) deu origem a 43 (80 mg, 0,14 mmol) sob a forma de uma espuma incolor.

Cromatografia de placa delgada Rf= 0,41 (CH2C12/CH30H/Ac0H 9:0,5:0,5). EXEMPLO 49

Preparação de Pib-Sar-3fR)-Γ2-findol-S-il^-etillβ-alanina C44^ ►'«**· K;;

A uma solução agitada de £3 (80 mg, 0,14 mmol) em CH2C12 (2 ml) a -15°C adicionou-se TFA (2 ml). Após 1 hora a mistura da reacção foi concentrada e o TFA residual foi removido azeotrópicamente com tolueno. Cromatografia luminosa (silica, CH30H/NH40H/H20 10:0,5:0,5) deu origem a 44 (10 mg, 22 Mmol) sob a forma de um produto vítreo incolor.

Rf= 0,29 (CH30H/NH40H/H20 10:1:1);

1H RMN (300MHZ, CD30D) δ 7,52 (m, 1H), 7,28 (m, 1H), 7,08-6,90 (m, 3H), 4,30 (m, 1H), 4,02 (m, 2H), 3,21 (m, 2H), 3,11 (s, 1,8H), 2,95 (s, 1,2H), 3,00-2,70 (m, 4H), 2,43 (m, 3H) , 2,30 (m, 1H), 2,00-1,20 (m, 11H).

EXEMPLO 50

Preparação de N-Boc-Pib-4ÍR)-benzil-2-oxazolidinona C45^ A uma solução agitada de 11 {2(0 g, 7j4 mol), NBt3 (1,2 ml, 8,9 mmol) e THF seco (40 ml) a -78°C adicionou-se cloreto de trimetilacetilo (0,96 ml, 7,8 mmol). Após 10 minutos a suspensão branca resultante foi aquecida até 0°C e agitada durante 30 minutos. A mistura da reacção foi então rearrefecida até -78°C e tratada com (R)-(+)-4-benzil-2-oxazolidinona de lítio (45 ml, 6,8 mmol, 0,15 M em THF); preparada pela adição de n-BuLi (4,4 ml, 6,8 mmol, hexanos/1,6 M) à solução de (R)-(+)-4-benzil--2-oxazolidinona (1,2 g, 6,8 mmol) em THF (40 ml) a -78°C. Depois da adição ficar completa a mistura da reacção foi aquecida até 0°C durante 1,0 hora, seguindo-se arrefecimento brusco com NH^Cl sat. (25 ml) , e em seguida concentração. 0 resíduo foi diluido com EtOAc sendo em seguida lavado com H20, NaOH IN, KHSO^ a 5% e solução salina, seco (MgSO^) e concentrado. Cromatografia luminosa (sílica, 15% EtOAc/hexanos) deu origem a 45 (3,0 g, 94%) sob a forma de um óleo incolor.

Cromatografia de placa delgada Rf= 0,42 (30% EtOAc/hexanos); RMN (CDC13) δ 7,5-7,2 (m, 5H) , 4,70 (m, 1H), 4,22 (m, 2H), 4,12 (m, 2H), 3,34 (dd, J=13 e 3Hz, 1H), 2,97 (m, 2H) , 2,82 (m, 1H) , 2,73 (m, 2H) , 1,75 (m, 4H), 1,49 (s, 9H), 1,40 (m, 2H), 1,15 (m, 2H). EXEMPLO 51

Preparação de Γ 2 fS) - fpropen-2-il) -4- fN-Boc-pjperidin-4-il^ 1-bu-tanoil-4(R)-benzil-2-oxazolidínona (46) A uma solução agitada de 45 (2,5 g, 5,8 nmol) em THF (50 ml) a -78°C ádicionou-se bis(trimetilsilil)amida de lítio (7,0 ml, 7,0 mmol, hexanos/lM) seguindo-se brometo de alilo (2,5 ml, 29 mmol). O banho de arrefecimento foi então removido e a reacção foi agitada a 0°C durante 1,5 horas. A reacção foi arrefecida bruscamente com NH4C1 sat., sendo então diluída com EtOAc seguindo-se lavagem com NaHC03 sat., 5% KHS04, e solução salina, secagem (MgS04) e concentração. Cromatografia luminosa (sílica, 15% EtOAc/hexanos) proporcionou 46 (1,8 g, 66%) sob a forma de um óleo incolor.

Cromatografia de placa delgada Rf= 0,53 (30% EtOAc/hexanos); 1H RMN (CDC13) S 7,40-7,20 (m, 5H), 5,82 (m, 1H), 5,10 (m, 2H) , 4,80 (rn, 1H) , 4,20 (m, 2H), 4,07 (m, 2H), 3,90 (m, 1H9, 3,31 (dd, J=13 e 3Hz, 1H), 2,68 (m, 2H) , 2,48 (m, 1H), 2,35 (m, 1H), 1,90-1,20 (m, 7H), 1,47 (s, 9H), 1,10 (m, 2H). EXEMPLO 52

Preparação de ácido Γ2fS)-fpropen-2-il)-4-fN-Boc-pjperidin-4--iin-butanoico (47) A uma solução agitada de 46 (1,8 g, 3,8 mmol), 30% H00_

A A (8,5 ml, 83 mmol), THF (41 ml) e H20 (12 ml) à temperatura ambiente adicionou-se LiOH (14 ml, 14 mmol, IN). Após 2 horas o excesso de LiOH foi arrefecido bruscamente com 10% NaHS04 gota a gota a 0°C. A reacção foi então acidificada com 5% KHS04 e extraída com EtOAc. A porção EtOAc foi então lavada com solução 80 ÍV- salina, seca (MgSO^), e concentrada para dar origem a 47 (0,37 g) sob a forma de um óleo incolor. Cromatografia de placa delgada Rf= 0,79 (10% CH3OH/EtOAc). EXEMPLO 53

Preparação de r2(Sl-fpropen-2-il)-4-fN-Boc-piperidin-4-iH1-buta-noil-Sar (éster etílico1 (48)

A uma suspensão agitada de 47 (350 mg, 1,1 mmol), éster etílico de sarcosina · HCl (870 mg, 5,6 mmol), HOBT (180 mg, 1,3 mmol), NEt3 (0,47 ml, 3,3 mmol) e DMF (10 ml) a -15°C foi adicionado EDC (260 mg, 1,3 mmol) seguindo-se remoção do banho de arrefecimento. Após 3,5 horas a mistura da reacção foi diluída com EtOAc sendo então lavada com H20, NaHC03 sat., 5% KHSO^ e solução salina, seca (MgSO^) e concentrada. Cromatografia luminosa (sílica, 30% EtOAc/hexanos) para dar origem a 48. (210 mg, 47%) sob a forma de um óleo. Cromatografia de placa delgada Rf= 0,83 (EtOAc); » 1H RMN (CDC13) δ 5,82 (ο, 1H), 5,10 (ffl, 2H), 4,20 (m, 4H) , 4,10 (m, 2H), 3,15 (S, 0,9H), 3,05 (s, 0,1H), 2,78 (m, 1H), 2,70 (m, 2H), 2,45 (m, 1H), 2,22 (m, 2H), 1,80-1,00 (m, 9H), 1,48 (s, 9H), 1,31 (t, J=7Hz, 3H). EXEMPLO 54

Preparação de Γ2 (S)-fpropen-2-il)-4-fN-Boc-pjperidin-4-il)1-buta-noil-Sar (49) A uma solução agitada de 48. (200 mg, 0,49 mmol) THF (5 ml), etanol (io ml), e H20 (0,5 ml) adicionou-se LiOH (60 mg, 1,5

mmol). Após 2,5 horas a mistura da reacção foi concentrada, sendo em seguida acidificada com 5% KHS04. A solução aquosa foi extraída com EtOAc sendo então a porção orgânica lavada com solução salina, seca (MgS04) , e concentrada para dar origem a 49 (190 mg, quantitativa).

Cromatografia de placa delgada Rf= 0,40 (CIL^C^/HOAc/CHgOH 9:0,5:0,5) EXEMPLO 55

Preparação de áster metílico de Γ2(S) -(propen-2-il)-4-(N-Boc-pi-peridin-4-il)1-butanoil-Sar-3(R)-f2-fenetil)β-alanina Γ50) 0 composto 49 (190 mg, 0,50 mmol) foi convertido em 50 (260 mg, 91%) após cromatografia luminosa (sílica, 60% EtOAc/he-xanos) usando o mesmo processo para a conversão de 47 em 48. Cromatografia de placa delgada Rf= 0,69 (EtOAc); ΧΗ RMN (CDClg) δ 7,35-7,10 (m, 5H) , 6,70 (m, 1H), 5,78 (m, 1H), 5,05 (m, 2H), 4,30 (m, 1H), 4,17 (d, J=16HZ, 1H), 4,05 (m, 2H), 3,90 (d, J=16H, 1H), 3,68 (S, 3H) , 3,17 (S, 0,8H), 3,01 (S, 0,2H), 2,80-2,40 (m, 8H), 2,23 (m, 1H) , 1,90-1,00 (m, 11H), 1,48 (s, 9H). EXEMPLO 56

Preparação de éster metílico de Γ2-(R^-propil-4-(N-Boc-piperidin--4-il))-butanoil-Sar-3 fR)-(2-fenetil)B-alanina (51)

Uma mistura de 5j) (130 mg, 0,23 mmol), 10% Pd/C (65 mg), e etanol (2,5 ml) foi agitada sob uma atmosfera de hidrogénio durante 24 horas. A mistura da reacção foi então filtrada através de uma camada de celite e o filtrado foi concentrado para dar origem a 51 (130 mg, quantitativo) sob a forma de um óleo.

Cromatografia de placa delgada Rf= 0,69 (EtOAc); 1H RMN (CDClg) δ 7,30 (m, 2H), 7,20 (m, 3H), 6,80 (d, J=10Hz, 1H), 4,32 (m, 1H), 4,13 (d, J=16Hz, 1H), 4,07 (m, 1H) , 3,95 (d, J=16HZ, 1H), 3,70 (S, 3H), 3,19 (s, 0,9H), 3,02 (s, 0,1H), 1,75-2,55 (m, 5H), 1,85 (m, 1H), 1,70-1,00 (m, 1H), 1,48 (s, 9H), 0,94 (t, J=7Hz, 3H). EXEMPLO 57

Preparação de Γ 2 (R^ -propil-4- CN-Boc-piperidin-4-il^ ~| -butanoil- -Sar-3 (R^ -f2-fenetil^β-alanina (52) A uma solução agitada de 51 (130 mg, 0,23 mmol), THF (1 ml), CH3OH (2 ml) e H20 (1 ml) foi adicionado LiOH IN (0,7 ml, 0,7 mmol). Apôs 2,0 horas a mistura da reacção foi concentrada. Acidificação com 5% KHS04 foi seguida por extracção com EtOAc. A porção EtOAc foi lavada com solução salina, seca (MgS04), e concentrada para proporcionar 52 (125 mg, 97%).

Cromatografia de placa delgada Rf= 0,50 (CH Cl /CH OH/HOAc Z Z j 9:0,5:0,5). EXEMPLO 58

Preparação de Γ2(R^-propil-4-(piperidin-4-il^1-butanoil-Sar-3 fR)--(2-fenetil^β-alanina 853^ A uma solução agitada de 52 (125 mg, 0,22 mmol) e CH^Cl^ (2,5 ml) à temperatura ambiente adicionou-se TFA (2,5 ml). 83

Após 1,5 horas a mistura da reacção foi concentrada e o resíduo foi purificado por cromatografia luminosa (sílica, CH^OH/NH^OH/I^O 10:0,4:0,4) para dar origem a 53. (110 mg, 92%) sob a forma de um sólido branco.

Cromatografia de placa delgada Rf= 0,48 (CH30H/NH40H/H20 l0:l:l); 1H RMN (CD30D) S 7,30-7,10 (m, 5H), 4,45 (m, 1H), 4,27 (m, 0,4H), 4,18 (m, 0,6H), 3,83 (d, J=16Hz, 0,4H), 3,64 (d, J=16Hz, 0,6H), 3,30 (m, 2H), 3,19 (s, 1,8H), 3,00 (s, 1,2H), 2,88 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,35 (m, 2H), 2,35 (m, 2H), 2,00-1,20 (m, 15H), 0,90 (t, J=7Hz, 3H).

Os requerentes incorporam aqui como referência processos para preparar compostos do presente invento em que guanidinas são preparadas a partir de aminas e em que amidinas são preparadas a partir dos nitrilos correspondentes. As guanidinas podem ser preparadas a partir de aminas pelos especialistas nesta técnica após reacção com nitrato de 3,5-dimetilpirazole-l-carbo-xamidina fMethods Enzvmol.. 25b, 558, 1972). As amidinas podem ser preparadas a partir do nitrilo correspondente pelos especialistas na técnica de utilização de processos demonstrados por Boere, R.T., et. al. J. Organomet. Chem.. 331(2), 161-7, 1987; e Fucks, R., Tetrahedron. 29 (14), 2147-51, 1973.

Os requerentes também incorporaram como referência o processo descrito em Repke et. al., Tetrahedron Letters (1979) pp. 4183-4184 para preparar glicinas N-alquiladas a partir de éster etílico de glicina · HCl e o correspondente aldeido ou cetona na presença de 10% Pd/C e hidrogénio.

Utilizando a metodologia demonstrada neste invento, os compostos que se seguem, incluidos no Quadro I mais abaixo, são

P i 84

exemplificativos dos compostos que podem ser preparados de acordo com este invento.

» i.

85

& w: . lit-

Quadro I R3

O

R 2

O R1 R2 H3 & «··. t'· L·. ii^^—cn3- _nh^^co2h -H Cch3)2ncchs)4- -ΝΗ^γΟ,Η -H Ν'' N·-/ ^ \ ™CX> -NH-^^COjH -ch3 ι%κ-ςα%)4- -NH—γΟΟζΗ HDjC ] -CCH2)2Ph § Ph PhCHj NHÇ CH2) 6~ -NH—v-OOjH -Cch2)2oh

86

Quadro I (Cont.)

R3 “CCCH3)3

NH

S: r„ h~'

i S HjNCCHj),- -nh-^C^co2h Ph °<. <p -NH'Xj^C02H H0v>C02H -NH-A^C02H “^TU -NH*^s^co2H H2N(CH2)5- ^OPh -nh>sx:o2h

H

H -Cch2)3co2h

H

H

Claims (13)

1. 87

   REIVINDICAÇÕES: lã. - Processo para a preparação de um antagonista do receptor do fibrinogénio da fórmula I: 0 0 R !! Η I (I) X-(CH2)m-Y-(CH2)n-C-N-CH2-C-NH-CH-CH-C02H R 7 R 1

   em que: X é NH II -NR2R3, -NH-C-NR2R3, NH tl 0 3 C-NR R , $í· U-

   Onde A = N e B = -CH ou A = -CH- e B = N-R2; íií- Srv

   88 lf ' !$:'

   M·· tr ' L·:

   y é

   ο II -C-NH-, Ο, Ο

   fr. Ν-Η6, -C- , -SCO)q-CH2-,

   I Ο 11 HNC-, - ΝΗ302“ ι S Γγ: R e R1 são independentemente hidrogénio, » arilo, em que arilo é definido como um sistema de anel aromático mono ou policíclico com cinco ou seis membros contendo 0,1, 2, 3 ou 4 heteroátomos seleccionados de entre azoto, oxigénio e enxofre, não substituído ou substituído, com um ou mais grupos seleccionados de entre hidroxilo, halogé-nio, ciano, trifluorometilo, c^_3 alcoxi, c.^ alquilcarboniloxi, alcoxicarbonilo, ci_5 i>

   alquilo, amino-C1_5 alquilo, hidroxicarbonil-C0_5 alquilo, ou hidroxicarbonil-C1_5 alcoxi, 89

   CQ_6 alquilo,não substituído ou substituído, com um ou mais grupos seleccionados de entre halogénio, hidroxi-lo, C1-5 alquilcarbonilamino, aril-C1_5 alquilcar-bonilamino, ariloxi, C1_1Q alcoxi, alcoxicar- bonilo, alquilaminocarbonilo, C^_5 alquilcar- boniloxi, CL 0 cicloalquilo, arilo, oxo, amino, CL .. alquilo, CL _ alquilamino, amino-CL _ alqui- X—ο X—j ±~ó

   lo, aril-C0_5 alquilaminocarbonilo, etileno, fenil-C1_3 alquilamino, aminocarbonil-CQ_4 alquilo, ou hidroxicarbonil-C0_5 alquilo; contanto que o átomo de carbono ao qual R e R1 estão ligados tenha apenas um heteroátomo; 2 3 4 R , R e R são mdependentemente hidrogénio, C1_12 alquilo, não substituído ou substituído, com um ou mais grupos alquilo, ou aril-CQ_4 alquilo, ou ciano, 2 3 contanto que quando R e R são independentemente ciano, X é 90 90

   R4

   , rh ϊγ-ν n "Y O , -S(0)q-CH2- ,

   OU -0- R5 é NH -nh-c-nr2r3 ou NH -C-NR2R3; hidrogénio, C1_6 alquilo, não substituído ou substituído, com um ou mais grupos seleccionados de entre C^_g alquilo, c. c alcoxi, C. c alcoxicarbonilo, hidroxicarbo-nil-CQ_4 alquilo, arilo, amino-C1_4 alquilo, arilaminocarbonil-C0_4 alquilo, C1-4 alquilsulfo-nilo, fenil-CQ_4 alquilsulfonilo, hidroxilo, ou amino, hidroxicarbonilo, V 91

   hidroxi ou . 5.. .5 amino, contanto que quando R e hidroxi ou amino, R não está ligado a um carbono que suporta um heteroátomo; R hidrogénio, Cl-12 nao substituído ou substituído, com um ou i mais grupos alquilo, aril-CQ_3 alquilo, C1-4 alquiloxicarbonilo, aril-C1_4 alquiloxicarbonilo, C^_4 alquilaminocarbonilo, aril-C1_4 alquilaminocarbonilo, C„ _ alcoxi, Z~D oxicarbonil-C2_5 alquilo, aminocarbonil-C2_5 alquilo; hidrogénio; Cl-12 a^-<3u^l°/ nao substituído ou substituído, com um ou mais grupos alquilo, c3_7 cicloalquilo, hidroxilo, hidroxicarbonilo, aminocarbonilo, oxo, arilo; arilo; ou C3_7 cicloalquilo; m é 1-10; n é 0-9; q é 0-2; p é 1-6; Zé 0, N, S; isómero ou dos seus sais farmaceuticamente aceitáveis, ou do seu óptico; caracterizado por se fazer reagir um composto de fórmula:

   em que BOC é t-butoxicarbonilo, a) com um composto de fórmula: Ph hci*h2 n^Y-nh/^°2cH3 o ou b) com hidrocloreto de éster de etilo de glicina; ou c) com hidrocloreto de éster de etilo de sarcosina. 2a. - Processo de acordo com a Reivindicação 1, carac-terizado por se preparar um antagonista do receptor do fibrinogé-nio da fórmula I: em que: X é NH II 2 3 2 3 -NR R , -C-NR R ,

   CCH2)p

   -NR2!?3; Y é 94 R 2 __·

   r2-n (ch2)p Vv/ N -NR2R3; Y 1 R e R são mdependentemente escolhidos de entre femlo, tiofe-no, imidazole, naftilo, indole, indazole, tionafteno, não substituídos ou substituídos, com hidroxi, halogénio, hidroxicarbonil-C0_5 alquilo, alquilo, ou não substi tuído ou substituído com um ou mais grupos seleccionados de entre arilo, ariloxi, alcoxi, CQ>_g-alquilaminocarboni- lo, aril-c0_s alquilaminocarbonilo, hidrogénio, C_ _ alquilo, não substituído ou substituído, com um ou mais J.—o

   grupos seleccionados de entre fenilo, tiofeno, imidazole, naftilo, índole, imidazole, tionafteno; 2 3 4 R , R e R ,são independentemente hidrogénio, c1-3 alquilo, não substituído ou substituído, com um ou mais grupos c^g alquilo; R é, 5 hidrogénio ou C1_3 alquilo, ou não substituído ou substituído, com um ou mais grupos seleccionados de entre amino, amino-C1<_4 alquilo, hidroxilo, arilaminocarbonil-C0_4 alquilo, é, hidrogénio ou hidroxicarbonil C2_4 alquilo; é hidrogénio; Cl-12 alc2uil°/ não substituído ou substituído, com um ou mais grupos c alquilo, c3_7 cicloalquilo, hidroxilo, hidroxicarbonilo, aminocarbonilo, oxo, arilo; arilo; ou cicloalquilo; s; n é 0-4; q é 0-2; p é 1-3; Z é ou .os seus sais farmaceuticamente aceitáveis, ou o seu isómero óptico. 3s. - Processo de acordo com a Reivindicação 1, carac-terizado por se preparar um antagonista do receptor do fibrinogé-nio da fórmúla I: em que X é Y è

   CCH2)p

   -NR2R3; R

   4

   o» -nr2r3; Cch2)P W R e R2 são independentemente escolhidos de entre fenilo, iinida-zole, indole, indazole, não substituído ou substituído, com metilo, oxicarbonil-CQ_2 alquilo, hidrogénio, C^_g alquilo, não substituído ou substituído, com um ou mais grupos seleccionados de entre fenilo, imidazole, indole, indazole; 2 3 4. R , R e R são hidrogénio ou c alquilo; 5 R é, hidrogénio; R é, hidrogénio; R7 é hidrogénio; C1_s alquilo, não substituído ou substituído, com um ou mais grupos alquilo ou arilo; m é 1-5; n é 0-3; pé 3; ou os seus sais farmaceuticamente aceitáveis, ou seu isómero óptico. 4&. - Processo de acordo com a Reivindicação 1, carac-terizado por se preparar um composto que é o Pib-Gly-3(R)-(2-fe-netil)B-alanina. acordo com a Reivindicação 1, carac-composto que é o Pib-Gly-3-[2-(indol-
2. 53. - Processo de terizado por se preparar um -3-il)etil]B-alanina. 98

   6â. - Processo de acordo com a Reivindicação 1, carac-terizado por se preparar um composto que é o Pib-Gly-3(R)-[2-(in-dol-3-il)etil]B-alanina. 72. _ processo de acordo com a Reivindicação 1, carac-terizado por se preparar um composto que é o Pib-Gly-3(S)-[2-(in-dol-3-il)etil]fí-alanina. 8â. - Processo de acordo com a Reivindicação 1, carac-terizado por se preparar um composto que é o Pib-Sar-3(R)-[2-(in-dol-3-il)etil]3-alanina. 9a. - Processo de acordo com a Reivindicação 1, carac-terizado por se preparar um composto que é o [2(R)-Propil-4-(pi-peridin-4-il)]butanoil-Sar-3(R)-(2-fenetil)β-alanina. 10®. - Método para a inibição da ligação do fibrinogé-nio às plaquetas sanguíneas, para a inibição da agregação das plaquetas sanguíneas, para o tratamento da formação de trombos ou formação de êmbolos, ou para evitar a formação de trombos ou êmbolos num mamífero, caracterizado por compreender a administração ao referido mamífero de uma quantidade farmacologicamente eficaz de ura composto de acordo com a Reivindicação 4; sendo a gama de dosagem tal que permita obter uma concentração no plasma, em estado estável, de entre cerca de 0,01 e 30 μΜ, de preferência de entre cerca de 1 e 10 μΜ. lis. - Método para a inibição da ligação do fibrinogé-nio às plaquetas sanguíneas, para a inibição da agregação das plaquetas sanguíneas, para o tratamento da formação de trombos ou formação de êmbolos, ou para evitar a formação de trombos ou êmbolos num mamífero, caracterizado por compreender a administração ao referido mamífero de uma quantidade farmacologicamente t'· eficaz de um composto de acordo com a Reivindicação 5; sendo a gama de dosagem tal que permita obter uma concentração no plasma, em estado estável, de entre cerca de 0,01 e 30 μΜ, de preferência de entre cerca de 1 e 10 μΜ. 12a. - Método para a inibição da ligação do fibrinogé-nio às plaquetas sanguíneas, para a inibição da agregação das plaquetas sanguíneas, para o tratamento da formação de trombos ou formação de êmbolos, ou para evitar a formação de trombos ou êmbolos num mamífero, caracterizado por compreender a administração ao referido mamífero de uma quantidade farmacologicamente eficaz de um composto de acordo com a Reivindicação 6; sendo a gama de dosagem tal que permita obter uma concentração no plasma, em estado estável, de entre cerca de 0,01 e 30 μΜ, de preferência de entre cerca de 1 e 10 μΜ. 13a. - Método para a inibição da ligação do fibrinogé-nio às plaquetas sanguíneas, para a inibição da agregação das plaquetas sanguíneas, para o tratamento da formação de trombos ou formação de êmbolos, ou para evitar a formação de trombos ou êmbolos num mamífero, caracterizado por compreender a administração ao referido mamífero de uma quantidade farmacologicamente eficaz de um composto de acordo com a Reivindicação 7; sendo a gama de dosagem tal que permita obter uma concentração no plasma, em estado estável, de entre cerca de 0,01 e 30 μΜ, de preferência de entre cerca de 1 e 10 μΜ. 14ã. - Método para a inibição da ligação do fibrinogé-nio às plaquetas sanguíneas, para a inibição da agregação das plaquetas sanguíneas, para o tratamento da formação de trombos ou formação de êmbolos, ou para evitar a formação de trombos ou êmbolos num mamífero, caracterizado por compreender a administração ao referido mamífero de uma quantidade farmacologicamente eficaz de um composto de acordo com a Reivindicação 8; sendo a gama de dosagem tal que permita obter uma concentração no plasma, em estado estável, de entre cerca de 0,01 e 30 μΜ, de preferência de entre cerca de 1 e 10 μΜ. 15». - Método para a inibição da ligação do fibrinogé-nio às plaquetas sanguíneas, para a inibição da agregação das plaquetas sanguíneas, para o tratamento da formação de trombos ou formação de êmbolos, ou para evitar a formação de trombos ou êmbolos num mamífero, caracterizado por compreender a administração ao referido mamífero de uma quantidade farmacologicamente eficaz de um composto de acordo com a Reivindicação 9; sendo a gama de dosagem tal que permita obter uma concentração no plasma, em estado estável, de entre cerca de 0,01 e 30 μΜ, de preferência de entre cerca de 1 e 10 μΜ. 16a. - Processo para a preparação de uma composição para inibir a ligação do fibrinogénio às plaquetas sanguíneas num mamífero, caracterizado por se incluir na referida composição um composto da Reivindicação 1 e um veículo farmaceuticamente aceitável. 17». - Processo para a preparação de uma composição para inibir a agregação das plaquetas sanguíneas num mamífero, caracterizado por se incluir na referida composição um composto da Reivindicação 1 e um veículo farmaceuticamente aceitável. 18». - Processo para a preparação de uma composição para inibir a agregação das plaquetas sanguíneas num mamífero, caracterizado por se incluir na referida composição um composto da Reivindicação 1 em combinação com um agente trombolítico e um veículo farmaceuticamente aceitável. 101 101

   19a. - Processo de acordo com a Reivindicação 18, caracterizado por o agente trombolítico ser um activador do plasminogénio ou estreptoguinase. 2 0 §. - Processo para a preparação de uma composição para inibir a agregação das plaquetas sanguíneas num mamífero, caracterizado por se incluir na referida composição um composto da Reivindicação 1 em combinação com um anticoagulante e um veículo farmaceuticamente aceitável. 2ia. - Processo de acordo com a Reivindicação 20, caracterizado por o anticoagulante ser heparina ou warfarina. 22ã. - Processo para a preparação de uma composição para evitar a formação de trombos ou de êmbolos num mamífero, caracterizado por se incluir na referida composição um composto da Reivindicação 1 e um veículo farmaceuticamente aceitável. 23a. - Processo para a preparação de uma composição para evitar a formação de trombos ou de êmbolos num mamífero, caracterizado por se incluir na referida composição um composto da Reivindicação 1 em combinação com um agente trombolítico e um veículo farmaceuticamente aceitável. 24ã. - Processo de acordo com a Reivindicação 23, caracterizado por o agente trombolítico ser activador do plasminogénio ou estreptoquinase. 25®. - Processo para a preparação de uma composição para evitar a formação de trombos ou de êmbolos num mamífero, caracterizado por se incluir na referida composição um composto da Reivindicação 1 em combinação com um anticoagulante e um veículo farmaceuticamente aceitável. 102 26â. - Processo de acordo com a Reivindicação 25, caracterizado por o anticoagulante ser heparina ou warfarina. 27â. - Processo para a preparação de uma composição para tratar a formação de trombos ou de êmbolos num mamífero, caracterizado por se incluir na referida composição um composto da Reivindicação 1 e um veículo farmaceuticamente aceitável. 28s. - Processo para a preparação de uma composição para tratar a formação de trombos ou de êmbolos num mamífero, caracterizado por se incluir na referida composição um composto da Reivindicação 1 em combinação com um agente trombolítico e um veículo farmaceuticamente aceitável. 29ã. - Processo de acordo com a Reivindicação 28, caracterizado por o agente trombolítico ser activador do plasmi-nogénio ou estreptoquinase. 3 0 £. - Processo para a preparação de uma composição para tratar a formação de trombos ou de êmbolos num mamífero, caracterizado por se incluir na referida composição um composto da Reivindicação 1 em combinação com um anticoagulante e um veículo farmaceuticamente aceitável. 31â. - Processo de acordo com a Reivindicação 30, caracterizado por o anticoagulante ser heparina ou warfarina. 32â. - Processo para a preparação de uma composição para tratar a formação de trombos ou de êmbolos num mamífero, caracterizado por se incluir na referida composição um composto da Reivindicação 1 em combinação com um agente antiplaquetas e um veículo farmaceuticamente aceitável.

   103 ι -

   »
3. 332. - Processo de acordo com a Reivindicação 32, caracterizado por o agente antiplaquetas ser aspirina.
4. 342. - Método para inibir a ligação do fibrinogénio às plaquetas sanguíneas num mamífero, caracterizado por compreender a administração ao mamífero de uma composição da Reivindicação 17; sendo a gama de dosagem tal que permita obter uma concentração no plasma, em estado estável, de entre cerca de 0,01 e 30 μΜ, de preferência de entre cerca de 1 e 10 μΜ.
5. 352. - Método para inibir a agregação das plaquetas sanguíneas num mamífero, caracterizado por compreender a administração ao mamífero de uma composição da Reivindicação 17; sendo a gama de dosagem tal que permita obter uma concentração no plasma, em estado estável, de entre cerca de 0,01 e 30 μΜ, de preferência de entre cerca de 1 e 10 μΜ.
6. 362. - Método para inibir a agregação das plaquetas sanguíneas num mamífero, caracterizado por compreender a administração ao mamífero de uma composição da Reivindicação 18; sendo a gama de dosagem tal que permita obter uma concentração no plasma, em estado estável, de entre cerca de 0,01 e 30 μΜ, de preferência de entre cerca de 1 e 10 μΜ.
7. 372. - Método para inibir a agregação das plaquetas sanguíneas num mamífero, caracterizado por compreender a administração ao mamífero de uma composição da Reivindicação 20; sendo a gama de dosagem tal que permita obter uma concentração no plasma, em estado estável, de entre cerca de 0,01 e 30 μΜ, de preferência de entre cerca de 1 e 10 μΜ.

   104

   38a. - Método para evitar a formação de trombos ou êmbolos num mamífero, caracterizado por compreender a administração ao mamífero de uma composição da Reivindicação 22; sendo a gama de dosagem tal que permita obter uma concentração no plasma, em estado estável, de entre cerca de 0,01 e 30 μΜ, de preferência de entre cerca de 1 e 10 μΜ. 39â. - Método para evitar a formação de trombos ou êmbolos num mamífero, caracterizado por compreender a administração ao mamífero de uma composição da Reivindicação 23; sendo a gama de dosagem tal que permita obter uma concentração no plasma, em estado estável, de entre cerca de 0,01 e 30 μΜ, de preferência de entre cerca de 1 e 10 μΜ.
8. 403. - Método para evitar a formação de trombos ou êmbolos num mamífero, caracterizado por compreender a administração ao mamífero de uma composição da Reivindicação 25; sendo a gama de dosagem tal que permita obter uma concentração no plasma, em estado estável, de entre cerca de 0,01 e 30 μΜ, de preferência de entre cerca de 1 e 10 μΜ.
9. 413. - Método para tratar a formação de trombos ou êmbolos num mamífero, caracterizado por compreender a administrais ção ao mamífero de uma composição da Reivindicação 27; - sendo a gama de dosagem tal que permita obter uma concentração no plasma, em estado estável, de entre cerca de 0,01 e 30 μΜ, de preferência de entre cerca de l e 10 μΜ. 42§. - Método para tratar a formação de trombos ou êmbolos num mamífero, caracterizado por compreender a administração ao mamífero de uma composição da Reivindicação 28; sendo a gama de dosagem tal que permita obter uma concentração no plasma, em estado estável, de entre cerca de 0,01 e 30 μΜ, de preferência de entre cerca de 1 e 10 μΜ. 43a. - Método para tratar a formação de trombos ou êmbolos num mamífero, caracterizado por compreender a administração ao mamífero de uma composição da Reivindicação 30; sendo a gama de dosagem tal que permita obter uma concentração no plasma, em estado estável, de entre cerca de 0,01 e 30 μΜ, de preferência de entre cerca de 1 e 10 μΜ.
10. 443. - Método para tratar a formação de trombos ou êmbolos num mamífero, caracterizado por compreender a administração ao mamífero de uma composição da Reivindicação 33; sendo a gama de dosagem tal que permita obter uma concentração no plasma, em estado estável, de entre cerca de 0,01 e 30 μΜ, de preferência de entre cerca de 1 e 10 μΜ.
11. 453. - Processo para a preparação de uma composição para inibir a agregação de plaquetas sanguíneas num mamífero, caracterizado por se incluir na referida composição um composto da Reivindicação 1 em combinação com dois ou mais agentes selec-cionados de entre um agente trombolítico, um agente anticoagulan-te, e um agente antiplaquetas e um veículo farmaceuticamente aceitável.
12. 463. - Processo de acordo com a Reivindicação 45, caracterizado por o agente trombolítico ser um activador do plasminogénio ou estreptoquinase, o agente anticoagulante ser heparina ou warfarina, e o agente antiplaquetas ser aspirina.
13. 473. - Processo para a preparação de uma composição para evitar ou tratar a formação de trombos ou êmbolos num 106 mamífero, caracterizado por se incluir na referida composição um composto da Reivindicação 1 em combinação com dois ou mais agentes seleccionados de entre um agente trombolítico, e um agente antiplaquetas e um veículo farmaceuticamente aceitável. 48ã. - Processo de acordo com a Reivindicação 47, caracterizado por o agente trombolítico ser um activador do plasminogénio ou estreptoquinase, o agente anticoagulante ser heparina ou warfarina, e o agente antiplaquetas ser aspirina. 49â. - Método para inibir a agregação de plaquetas sanguíneas num mamífero, caracterizado por compreender a administração ao mamífero da composição da Reivindicação 45; sendo a gama de dosagem tal que permita obter uma concentração no plasma, em estado estável, de entre cerca de 0,01 e 30 μΜ, de preferência de entre cerca de 1 e 10 μΜ. 50a. - Método para evitar ou tratar a formação de trombos ou êmbolos num mamífero, caracterizado por compreender a administração ao mamífero da composição da Reivindicação 47; sendo a gama de dosagem tal que permita obter uma concentração no plasma, em estado estável, de entre cerca de 0,01 e 30 μΜ, de preferência de entre cerca de 1 e 10 μΜ. Lisboa, 26 de Setembro de 1991

    RUA VICTOR CORDON. 10-A 3« 1200 LISBOA