PT99057B

PT99057B - Processo para a preparacao de composicoes farmaceuticas contendo uma mistura sinergica de glicoproteina cd4 da superficie das ceelulas ou de um seu analogo com um agente polianionico anti-hiv, nomeadamente um polissacarido sulfatado

Info

Publication number: PT99057B
Application number: PT99057A
Authority: PT
Inventors: Donald Selwyn Davies
Original assignee: Ml Lab Plc
Priority date: 1990-09-25
Filing date: 1991-09-25
Publication date: 1999-02-26
Also published as: ATE165005T1; US6015799A; US5439892A; EP0550532A1; GB9020861D0; JP3281373B2; JPH06503305A; CA2092094C; WO1992004904A1; AU8614591A; CA2092094A1; ES2113888T3; ZA917597B; PT99057A; NZ239908A; DE69129272T2; DK0550532T3; IE913340A1; AU649731B2; EP0550532B1

Description

DESCRIÇÃO

DA

PATENTE DE INVENÇÃO.

N.° 99 057

REQUERENTE: ML LABORATORIES PLC., inglesa, industrial e comercial, com sede em Rutherford Close, Wavertree Technology Park, LIVERPOOL L13 1EJ, Inglaterra

EPÍGRAFE: PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS

CONTENDO UMA MISTURA SINÉRGICA DE GLICOPROTEÍNA DC4 DA SUPERFÍCIE DAS CÉLULAS OU DE UM SEU ANÁLOGO COM UM AGENTE POLIANIÓNICO ΑΝΤΙ-HIV NOMEADAMENTE UM POLISSACARIDO SULFATADO

INVENTORES: Prof. DONALD SELWYN DAVIES

Reivindicação do direito de prioridade ao abrigo do artigo 4.° da Convenção de Paris de 20 de Março de 1883.

na Inglaterra em 25 de Setembro de 1990, sob o N² 9020861.2

INPI MOD 113 RF 1(732

RESUMO *====s₌=₌₌B=e

A invenção refere-se a um processo para a preparação duma composição farmacêutica contendo uma mistura sinérgica da glicoproteína CD4 da superfície das células ou um seu análogo com um agente polianiónico anti-HIV nomeadamente um polissacárido sulfatado. As referidas misturas sinérgicas compreendem de preferência entre cerca de 50 a 55 partes em peso de glicoproteína por 1 parte em peso de polissacárido sulfatado. Essas composições sinérgicas permitem diminuir mui to as doses de CD4 ou análogo e de polissacárido sulfatado necessários para o tratamento de infecções por vírus HIV, nomeadamente, HIV-1 e correlacionados.

A presente invenção refere-se a um processo para a preparação de composições farmaceuticamente efectivas e ao seu uso como agentes contra o virus da imunodeficiência humano e outros virus correlacionados.

A presente invenção refere-se, mais particularmente a um processo para a preparação de composições farmacêu ticas contendo uma mistura sinérgica de glicoproteína CD4 da superfície das células ou de um seu análogo com um agente polianiónico anti-HIV, nomeadamente um polissacárido sulfatado .

ciclo de infecção pelo HIV inclui várias fases, sendo cada uma delas um alvo possível para a utilização da quimioterapia para evitar a infecção. A primeira fase no ciclo da infecção consiste na ligação do virus HIV à célula do hospedeiro. Crê-se que o principal receptor'para o virus è a glicoproteína da superfície das células, designada por CD4, que se encontra presente nalguns linfócitos J e nalguns macrofages. Por conseguinte, foi prestado uma especial atenção

para identificar agentes que sejam capazes de bloquear a ligação do virus ao CD4.

Crê-se que o próprio virus HIV se liga ao CD4 por meio da interacção entre o CD4 e a glicoproteina da super fície, gpl20, do virus. Descobriu-se que o CD4, recombinante solúvel (srCD4), feito pela engenharia genética, pode bloquear a ligação do virus HIV ao CD4 celular, inibindo deste modo a infecção do HIV in vitro. Consequentemente, pareceu que a infecção do HIV poderia ser impedida administrando-se srCD4. Foram igualmente propostos como agentes anti-HIV, outros materiais semelhantes à CD4, capazes de se ligarem à gpl20, tais como imunoadesinas CD4-IgFc, CD4 dos domínios V1-V2 e péptidos derivados da CD4. Contudo, o desempenho da CD4 e dos materiais semelhantes à CD4 na prevenção da ligação do virus HIV às células tem sido decepcionante até ao momento, sendo necessário uma concentração muito mais elevada de agente do que aquela que se esperava.

Outros agentes anti-HIV que bloqueiam a ligação do virus às células, são vários outros compostos polianiónicos que incluem o Azul de Evans, o ácido aurintricarboxílico (ATA), suramina, e certos polissacaridios sulfatados. Poder-se-ia ter pensado que se a CD4 e esses agentes polianión cos anti-HIV fossem usados simultaneamente, a actividade ant HIV total seria, na melhor das hipóteses, a soma das suas actí vidades separadas.

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Contudo, descobrimos agora que quando são usados conjuntamente a CD4 (que aqui é usada, salvo especificação em contrário, para incluir o CD4 e os matefiais semelhantes à CD4) e um agente polianiónico anti-HIV, tal como um polissacárido sulgatado, eles são muito mais eficazes contra a

infecção do HIV do que seria no caso de o efeito anti-v irai ser simplesmente aditivo.

Deste modo, a presente invenção proporciona um agente contra o virus HIV e outros virus correlacionados numa forma de unidade de dosagem, que compreende uma mistura sinér gica de glicoproteína CD4 ou um seu análogo e um agente polianiónico anti-HIV, sendo o teor de proteína CD4 e do seu análo go no agente inferior à dose anti-virus effectiva da CD4 ou do seu análogo sozinhos.

agente, de acordo com a presente invenção pode conter substanciaimente menos glicoproteína CD4 do que a dose anti-virus eficaz de CD4 simples, i.e. na ausência de um agente polianiónico anti-HIV. A redução na quantidade de CD4 requerido para se atingir o mesmo efeito anti-virus que o do CD4 simples, pode ser tal que seja apenas necessário uma quan tidade inferior a um décimo de quantidade de CD4 (ou, em casos favoráveis, menos do que um centésimo). Deste modo, a presente invenção oferece a possibilidade de usar CD4 como componen te de um agente anti-virus, numa quantidade reduzida, e por conseguinte mais segura e económica, do que era possivel ante riormente. 0 agente, de acordo com a presente invenção pode também conter uma dose inferior à dose normalmente eficaz do composto polianiónico. Este facto é vantajoso, uma vez-que muj_ tos dos agentes polianiónicos anti-HIV conhecidos são significativamente tóxicos. Por exemplo, os polissacáridos sulfatados possuem actividade anti-coagulante. Quando o agente polianiónico anti-HIV é um polissacárido sulfatado, pode encontrai' -se nas composições da invenção numa quantidade inferior à que seria necessária num agente anti-HIV contendo apenas o polisse, caridio sulfatado.

Consequentemente, as composições da invenção que contêm polissacáridos sulfatados podem ter um nivel de actividade anti-coagulante inferior, atribuível ao teor de polissacárido sulfatado, do que os anteriormente conhecidos.

Os agentes polianiónicos anti-HIV usados na pre sente invenção são, de preferência, polissacáridos sulfatados Incluem, por exemplo, sulfato de dextrano, polissulfato de pentosano, fucoidano, e sulfato de dextrina. Podem também ser usados outros polissacáridos sulfatados com actividade antiHIV (veja-se, por exemplo, as patentes Europeias E.P. NSs 240.098 e 293.826). De preferência, o polissacárido sulfatadc contem, pelo menos, um grupo sulfato por unidade de sacárido

Na aplocação terapêutica, o agente anti-HIV da Invenção pode ser administrado por via entérica (incluindo por via oral), ou por via parentérica (incluindo por via intravenosa). Contudo, à administração através do peritoneu po de ser mais eficaz no sentido de que resulta na entrada de, pelo menos, parte do agente anti-HIV, directamente no sistema linfático, dentro do qual a réplica do virus pode ser extensiva .

A invenção proporciona também o uso do agente acima descrito contra o virus HIV-1 e outros virus correlacionados, sendo o agente administrado de preferência, por via peritonal.

Além disso, a invenção proporciona uma composi^ ção farmacêutica contendo o agente anti-HIV da invenção, juntamente com um agente veicular inerte ou diluente e o agente da invenção para utilização na preparação de uma composição farmacêutica contra o virus HIV-1 e outros virus correlacionados .

A invenção proporciona, adicionalmente, um método de tratamento de um ser humano ou animal que transporte o virus HIV-1 ou um virus correlacionado, que compreende a administração ao paciente de uma quantidade farmaceuticamente efectiva do agente da invenção.

material CD4 ou o seu análogo e o agente poli aniónico anti-HIV pode ser administrados a um paciente, um a seguir ao outro, em qualquer ordem, embora de preferência o material CD4 ou o seu análogo seja administrado antes do agen te polianiónico quando usado contra o virus HIV-1 ou um virus correlacionado.

A invenção proporciona assim, uma glicoproteina CD4 ou um material semelhante à CD4, numa quantidade inferior à sua dose usual efectiva do ponto de vista anti-virus e um agente polianiónico anti-HIV, para ser usado num método de tratamento de um ser humano ou animal, que transporte consigo o virus HIV-1 ou um virus correlacionado, em que a CD4 ou o material semelhante à CD4 são administrados ao paciente, um a seguir ao outro.

exemplo seguinte ilustra a acção sinérgica do sulfato de dextrina com o recombinante solúvel CD4 (srCD4).

sulfato de dextrina foi produzido por sulfatação de uma dex trina com um peso molecular médio em peso de cerca de 20.000 daltons, usando um complexo trióxido de enxofre trimetilamina sendo o grau de substituição de aproximadamente um grupo de sulfato por unidade de glucose. 0 srCD4 foi produzido num sistema de virus com a forma de bastão e comprado à American Biote Chnology Inc.

EXEMPLO 1

Numa experiência em duplicado, incubaram-se diluições de 1 para 2 vezes da recombinante CD4 solúvel, para originar concentrações finais de 6 ml até um valor menor de 0,02 ug/ml./ com 2,5 X 103 TCID (uma dose de infecção de cultura de tecidos) do sobrenadante do virus HIV-1 (estirpe HTLV-IIIb), Gallo, 1984, 937°C, durante 1 hora.

Adicionaram-se, em seguida, diluições de 1 para vezes de sulfato de dextrina, para originar concentrações finais desde 10 ug/ml até um valor menor de 0,625 ug/ml, à linha de células J, M8166, num densidade de 2,5 X 10⁵/ ml e incubadas a 37θΟ, durante 1 hora. O srCD4/HIV - 1 foi então adicionado às células M8166 pré-tratadas com sulfato de dextrina, tendo as placas sido lidas a 48-72 horas relativamente à preseça de sincitia, mostrada na tabela abaixo pelo simbç lo +.

Na ausência de sulfato de dextrina, a srCD4 ini biu a infecção do HIV-1 das células M8166 a 6 ug/ml (concentração final). Na ausência de srCD4 o sulfato de dextrina inibiu a infecção do HIV-1 das células M8166 a 5-lo ug/ml. Quando ambos os fármacos se encontravam presentes, 2,5 - 5,0 ug/ml de sulfato de dextrina inibiram a infecção do HIV -1 ηε presença de srCD4, numa concentração de 0,05-0,09 ug/ml. Isto representa uma redução de 102 na quantidade de srCD4 requerida para impedir a infecção provocada pelo HIV-1/ e mostra que o efeito dos dois fármacos conjuntamente é sinergistico e não simplesmente aditivo.

Método

A - srCD4 diluído num tabuleiro de 96 reentrâncias.

Adiciona-se 2,5 X 10^ de TCID Illb. Incuba-se a 370c, durante 1 hora.

B - Sulfato de dextrina diluido num outro tabuleiro de reentrâncias. Adiciona-se M8166 (2,5 X 10⁵ / ml).

Incuba-se a 37θΰ durante 1 hora. Depois adiciona-se A a B Leitura nos dias 2-3 , quando os controlos positivos mostra uma sincita menor que 95%.

Claims

la. Processo para a preparação de composições farmacêuticas contendo uma mistura sinérgica de glicoproteína CD4 da superfície das células ou de um seu análogo com um agente polianiónico anti-HIV, nomeadamente um polissacárido sulfatado, para o tratamento de infecções provocadas HIV, especialmente HIV-1, e vírus correlacionados, sob a forma de unidade de dosagem para administração por via peritoneal ou intraperitonal, caracterizado pelo facto de se misturar glicoproteína CD4 da superfície das células ou um seu análogo com um agente polianiónico anti-HIV, nomeadamente um polissacárido sulfatado numa proporção de preferência compreendida entre cerca de 50 a 55 partes em peso de glicoproteína por 1 parte em peso de agente polianiónico anti-HIV e seguidamente se adicionar um veículo ou diluente farmacologicamente aceitável numa proporção preferivelmente compreendida entre cerca de 2,5 a 5 partes em peso de mistura sinérgico por 1 milhão de partes em volume de ingrediente veicular.
2a. Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo facto de o polissacárido sulfatado ser preferivelmente sulfato de dextrina.
3a. Processo de acordo com qualquer das reivindicações 1 ou 2, caracterizado pelo facto de o referido polissacárido sulfatado conter pelo menos um grupo sulfato por unidade de sacárido.