PT98341A - Processo para a preparacao de derivados de purina - Google Patents

Description

-Ν Q presente invento dis respeito a compostos com actividade antivirai ? a processos para a sua preparação e à sua utilização como medicamentos» num artigo publicado em Gol 1. 2753, 1988? descrevem derivados

Rosenberg e outros,

Czech» Chem, Commun., 55, p. fosfonilalquílicos de adenina. 0 pedida de patente europeia nS 343133 (Medi v.ir

Aktieboiag) divulga um grupo de derivados fosfonilalquílicos de purina que é descrito como possuidor de actividade antiviral» 0 pedido de patente europeia nS 404296 (Beecham Broup p.l.c.), publicado em 27.12.1990, descreve um grupo de derivadas fosfonilalcoKílicos de purina que possuem actividade antiviral»

Foi recentemente descoberta uma nova e estruturalmente distinta classe de compostos que são derivados fosfonilalquení-licos ou fosfonilalqueniloxílicos de purina e que também possuem actividade antiviral» invento diz respeito « Um farmaceuticament» - . , , «ueitâ-

Em conformidade, o presente composto da fórmula I ou a um seu sal vel,

(i) - 4

em que X representa ~CR~SU ou ~CH..5, R* representa hidroxi ou amino.

Rrepresenta hidrogénio ou aminc R^. representa hidrogénio, h i d r ο κ i me t i I o ou ac ϊ I ο κ i me tilo e

O R^ refjresenta um grupo da fórmula 0Rr \ OR. em que

Rs_ s R4 sSo seieccionsdos5 independentements um do outros entre hidrogénio, alquilo com 1 a 6 átomos de G, e fenilo facultativamente substituído»

Quando R., representei hidroKi e H._, representa amino, o composto da fórmula I é um derivado de quanina»

Quando R1 representa amimo e R,? representa hidrogénio. a composto da fórmula I é um derivado de adenina.

Quando R representa hidroxi e R„ representa hidroaé-

A nio5 o composto da fórmula 1 representa um derivado de hipoxan-tina»

Quando R^ e R„ representam ambos grupos smino, o composto da fórmula I é um derivado de 2,ó-diaminapurina« 0 composto da fórmula I ê frequentemente um derivado de guanina ou de adenina. SSo exemplos adequadas do grupo acilo, quando representa aciloximetilos acilo carfaoxílico, tal como alcanoilo com 1 a 7 átomos de carbono, e benzoilo facultativamente substituído na anel fenilo tal como atrás se definiu para R^/R « Qs ϋ Ô grupos acilo preferidos incluem acetila, propionilo, butirilo, heptanoílo e hexanoilo. São exemplos adeauados de R^ e R,s hidroqénio, metilo,

r J Q etilo, n- e iso-propílo, n-, s-, iso- e t-butilc· e fenilo facultativamente substituído com um, dois ou trás grupos ou átomos seleccionados entre halogéneo, tal como fluoro, cloro, bromo, e alquilo com 1 a 4 átomos de C ou alcoxi com 1 a 4 átomos de C em que a fracçSo alquilo é seleccionada entre as atrás indicadas para R,_ e R^» SSíd exemplos de sais farmaceuticamente aceitáveis do composto da fórmula I os sais de adição de ácido obtidos a partir de um ácido farmaceuticamente aceitável tal como ácido clorídrico, ácido ortofosfórico e ácido sulfúrico. São também sais farmaceuticamente aceitáveis os sazs obtidos a partir de bases orgânicas, ds preferencia aminas, tais como etanolaminas ou diaminas, e metais alcalinos, tais como sadio e potássio»

Dada que ° composto da fórmula X contém um grupo fosfonato, os sais adequados incluem sais metálicos, tais como sais de metal alcalino, por exempla sódio e potássio, sais de metal alcalino—terroso, tal como cálcio ou magnésio, e amónio ou '' ’' ·

sais de amónio substituídos, par exemplo aqueles com íalquil inferior/aminas tais como trietilaminas hidroxiíalquil inferior)-aminas tais como 2-bidroxietilamina, bis-í2-hidroxieti1)amina ou tris-í 2-hid roxieti1)amina,

Deve notar-se que alguns dos compostos da fórmula I, especialmente aqueles em que FU não representa hidrogénio, tsm um centro de assimetria, podendo portanto existir sob mais do que uma forma estereomérica» 0 âmbito da presente invento abrange individualmente cada uma destas formas e também misturas entre elas5 incluindo racematos» Os isómeros podem ser separados convencionalmente por métodos cromatográficos ou utilizando um agente de resolução» Alternativamente, os isómeros individuais podem ser preparados mediante um processo de síntese assimétrica com o auxilio de intermediários quirálicos. 'Deve notar-se ainda que, uma vez que os compostos da fórmula I contêm uma fracção RflHC=CH, estes compostos podem existir sob as formas E e Z (trans e c is >. O âmbito do presente invento abrange cada uma destas formas e as misturas entre elas.

Os compostos da fórmula 1 incluindo os seus sais de metal alcalino podem formar solvatos, tais como hidratos, que estarão subentendidos em qualquer referência a um composto da fórmula I ou a um sal deste composto.

Deve notas1—se que, quando representa hidroxi na forma fórmula I, o composto existe predominantemente sob a tautomérica com a estrutura IAs

(ΙΑ)

Ο presente invento dis igualmente respeita a um processa para a preparação de um composto da fórmula I5 ou de um sal farmaceuticamente aceitável deste composto,, caracterisado por se condensar um composto da fórmula II

y (II) cora um intermediário cadeia

-al da fórmula III

Ra ' HC=CHCHR, * ChuOH

(III em que. V representa QH quando X representa -CH._,0 na fórmula. I e representa H quando X representa ~CH_ na fórmula I, R1 ' 3 '' , R-^/e R^' representam R1 » R_5 R.T e respectiva-

mente, ou grupos ou átomos converti, veis em R_. , R,_., R__ s R 1 jí! * o» 4* !/ , !/ ,

rc em R-, e/ou '5 no caso de não representarem Ri, R^, e/ou R4? R, , R_, Rv e/ou R«, respectivamsnte, e/ou se converter R. ' , &·?' » X o 4 i *“ RVe/ou R, ’, no caso de representarem R,» Rn, e/ou R*? effl grupos diferentes R* , R^,, R-^ e/ou , e/ou se preparar um -a^ farmaceuticamente aceitável do composto resultante. A reacção tem lugar na presença de um catalisador desidratação, tal como dietil asodicarboxilato, na presença trifeni1fosfina. de de □

Exemplos de conversões de grupos variáveis? R_. ~R, a) Um grupo hidroxi R1 pode ser convertido em cloro Rj' mediante clorinação com o auxílio de um reagente tal como oxiclo-reto de fósforo, de preferincia na presença de cloreto de tetra--eti 1 amónio e d i mati1an x1i na. (como aceitador de ácido) em CH^CW à -J* temperatura de refluxo, de acordo com o método descrito por M»J» Robins e B. Ozanski, Can. J Checn. . 51?, p, 2&®1, 1981» b) Um grupo cloro Rj'pode ser convertido em hidroxi R ^ mediante hidrólise com o auxílio de um ácido mineral aquoso, tal como ácido clorídrico ou, de preferência, de um ácido orgânico, tal como ácido fórmico a uma temperatura elevada, adequadamente compreendida entre 7θ°0 e 1560C, de preferência aproximada de Íôô*C. c) Um grupo cloro R^'pode ser convertido em amxno mediante o tratamento com amónia num alcanol inferior, tal como etanol ou metanol, numa autoclave a durante um período de cerca de 7 horas ou, alternativamente, mediante o tratamento com 9

B.ziúa. de sódio em dimet.ilformamida Cformando-se um intermediário representando N^.) seguido pela redução com (formiato de amóniol/Cpaládio-sobre-carbono) em metanol ou com trifenilfosfina em água tal como ê descrito por Vaulter e outros em Tet.___Letts.. 24<8>, pp» 763-764, 1983.

d) Um grupo alcoxi R^', tal como metoxi, pode ser convertido em hidroxi pelos métodos de D.R. Haines, descrito em J. Hed. Chem., 30. p.943, 1.987, a de K.K. Ogilvie e H.R. Hanna, descrito em Can. J. Chem.. 62, p. 27©2 ou com o auxílio de brometo de trimetilsiiilo, tal como se descreve no Exemplo íb) apresentado adiante. e) Um grupo amino protegido R. , tal como tritilamino, pode ser convertido em amino mediante o tratamento com ácido acética aquoso, de preferência ácido acética a 80% a uma temperatura elevada (cerca de 8®°C>. R^' também pode representar ftalimido que pode ser convertido em amino mediante o tratamento com metil hidrasina ou hidrazina num solvente inerte, tal como diclorometano, à temperatura ambiente. 6¾_ζϋφ.

a) R0'pode representar amino protegido, tal como fornsi lamino, que pode ser convertido em amino mediante hidrólise? ou R._/pode representar di-t-lbutiloxicarbonilamina»

R-' -R rTyrrr.n.,.—, ou em a) Hidroximetilo pode ser convertido em aciloxi aciloxiroetilo mediante processos convencionais de acilação.

ikf - Λ. > b) Hidroximetilo protegido pode ser convertido em hidroximetilo mediante processos convencionais de desprotecção.

Exemplos adequados de grupos protectores e a sua remoção encontram-se descritos no pedido de patente europeia n9 242482. Um grupo protector particularmente adequado é o grupo t.—butildifenilsilílo que pode ser removido por métodos convencionais*

Quando R,_ e R, , em R,« não representam hidrogénio, j 4 * podem ser convertidos em hidrogénio Rg e com o auxílio de um reagente de desesterificação, tal como brometo de trimetilsililo, num solvente aprótico tal como diclorometano ou dimeti1formamida à temperatura ambiente, tal como é descrito por C.E. McKenna e outros em J.C.3 * Çhem Comffl *, 739, 1979. A conversão selectiva de um dos grupos R^ e R, para

O hidrogénio pode ser alcançada mediante o tratamento com o ião hidróxido, tal como é descrito por Rabinowitz em JACS. 82. p. 4564, 196®.

Deve notar-se que as conversões atrás referidas podem ter lugar por qualquer ordem desejada ou necessária tendo em conta o composto final da fórmula I desejado.

Os compostos da fórmula IX em que Y representa OH são preparados do modo descrito nos pedidos de patente europeia n9 313289 e nS 3Í9228 (ambos Beecham Group p.l.c.), a partir de compostos da fórmula IV em que o grupo 5-amino está formilado. Ν -

(IV)

mediante a reacção cora R^ONH.-,,, era que R7 representa um grupa pratectar.

de modo a obter-se um composto da fórmula V

que pode ser ciclisado com acetato de dietoximetílo de modo a obter-se úm composto da fórmula II em que o grupo OH está protegido. São exemplos adequados de R?s bensilo, removível mediante hidrogenaçao, e o grupo tetra—hidropiran—2-ilo, removível mediante o tratamento com ácido acético a 8Θ% á temperatura ambiente.

Qs compostos da fórmula II em que Y representa H são em geral conhecidos5 por exemplo a 2-amino—6-cloropurina pode ser preparada do modo descrito no pedido de patente europeia nS 203685 (Beecham Sroup p«i «c.).

s , V' 11 Q-~. intermediários da fórmula III (EVisómerbs) podem ser freparados do seguinte modos HO'

OH 1. NaH 2. t Butildimetil sililcloreto 'BuSi(CH3)20

OH R3 vi v *3 clorocromato de piridinio (PCC) R r4 [R/],CHLi t v 4 2 BuS í (CH3) 20

K3

Ng esquema, R„* representa R, em que, em aeral, F<_ e Ff/· H' *τ 3 -r\

VI nSo representam hidrogénio» Fí~,' representa hidrogénio ou. hidroxi-metilo protegido»

Os intermediários da fórmula III (Z-isómeros) podem ser preparados do modo descrito na Descrição 2 apresentada adiante,

Quando FX representa hidroximeti lo,, é requerida a protecção selectiva apropriada de um dos grupos hidroxi no intermediário cadeia lateral da fórmula III, por exemplo com o J- auxílio de acetato: ou então o grupo protector Uhutil dimet.ilsi-liio pode ser substituído por isopropilidina ligada a R.,' , -X'- X --

Gs intermediários da fórmula III em que ' representa P; tal coíbo foi definido em relação á "formula I são novos s constituam um objecto do presente invento»

Os sais fannaceuticamente aceitáveis podam ser preparados de um modo convencional, por exemplo no caso de sais de adição de ácido.» madiante a reacção com o ácido orgânico ou inorgânico apropriado»

Deve notar—se que o presente invento divulga um processo para a preparação de um composto da fórmula I em que FU representa hidroxxmetilo» processo esse que inclux a desprotecção de um correspondente composto da fórmula I em que R7 representa hidrox imetilo protegido»

Os métodos preferidos para a desprotecção.» tal como atrás se descreveu, incluam a remoção do grupo acetilo» 0 presente invento divulga também um processo para a preparação de um composto da fórmula I em que Rg e R& representam ambos hidrogénio, processo esse que inclui a desesterificação de um correspondente composto da fórmula I em que Rg e RA representam ambos Q mesma grupa alquila au fenila substituído»

Deve notar-se qu.e, em determinadas circunstâncias, pode ser possível a preparação de compostos da fórmula I por métodos análogos aos descritos na generalidade no pedido de patente europeia n2 4Ô4296 CBeecham Sroup p»l«c»>5 tendo em conta a cadeia lateral insaturada e a necessidade de proteger a fracção insaturada s/cu modificar as condições de reacção»

Os compostos de acordo com o presente invento são potencialmente úteis no tratamento de infecçoes causadas por 14 14

São retrovírus, em particular vírus som exemplos de vírus com DNA os vírus do herpes, tais como os vírus do herpes simpiex tipos i e 2, α vírus da varicela—zona, o vírus Epstein—Barr e os eitomegalovirus. São exemplos de retrovírus os lentivírus tais como o vírus visna, o vírus da imunodeficiência felina e o vírus da imunodeficiência humana (estirpes 1 e 2)»

Os compostos de acordo com o presente inventa também podem ser inibidores de vírus tumorogénicos e/ou potencialmente úteis no tratamento de doenças neoplásticas, isto é, do cancro*

O

Os compostos de acordo com o presente invento podem ser formulados como composições farmacêuticas. £m conformidade, um outro objecto do presente invento consiste numa composição farmacêutica constituída por um composto da fórmula I ou um seu sal farmaceuticamente aceitável em conjunto com um suporte ou excipiente farmaceuticamente aceitáveis.

Uma composição que pode ser administrada pela via oral a seres humanos pode ser formulada como um xarope, comprimido ou cápsula. Quando a composição se encontra sob a forma de um comprimido, pode usar-se qualquer suporte farmacêutico adequado à formulação deste tipo de composições sólidas, por exemplo estearato de magnésio, amido, lactose, glucose, arroz, farinha e giz» A composição também pode tomar a forma de uma cápsula ingerivels por exemplo de gelatina, contendo o composto, ou a forma de um xarope, uma solução ou uma suspensão. Aos suportes farmacêuticos líquidos adequados álcool etílico, glicerina, solução salina e água, podem ser adicionados agentes aromatizan-tes ou corantes de modo a obterem—se xaropes. Os compostos também podem apresentar-se em conjunto com um suporte líquido estéril quando destinados a injecções. 15 i-

ser aplicada topicamente aos olhos ou è. pele»

No casa da aplicação tópica à pele, a composição pode

I tomar a forma de um creme, loção ou. unguento. Estas formulações podem ser formulações convencionais bem conhecidas dos técnicos, por exemplo as descritas nos manuais de farmácia e cosmetologia, tal como "Harry’s Casffieticology” publicado por Leonard Hill Books e British Pharcnacopaeia.

A composição destinada a ser aplicada aos olhos pode ser uma composição convencional do tipo conta-gotas bem conhecida das técnicos ou um unguento.

De preferência, a composição de acordo com o presente invento toma a forma de unidadades de dosagem ou qualquer outra forma que possa ser administrada numa dose única. Uma unidade de dosagem pode conter 5Θ mg ai g de ingrediente activo, por exemplo 10© mg a 50© mg de ingrediente activo.

Estas doses podem ser administradas la 4 vezes por dia, ou mais, sendo-o em geral 2 ou 3 vezes por dia» A dose eficaz de um composto estará geralmente compreendida entre 1,0 e 2© mg/(kg de peso corporal>/dia ou, mais geralmente, entre 2,@ e 1© mg/(kg de peso corporal)/dia» Não se observam efeitos tóxicos inaceitáveis com os níveis de dosagem atrás indicados. 0 presente invento divulga também um método para o tratamento de infecções virais em seres humanos ou em animais, caracterizado por se administrar ao animal uma quantidade eficaz 16

s náo toxica de um composto da "fórmula I ou de um seu sal farma*·· ceuticamente aceitável» 0 presente invento diz também respeito à utilização de um composto da fórmula I ou a um sal farmaceuticamente aceitável deste composto como substância terapeuta cárneo, te activa, em particular no tratamento de infecções virais. ;ão

Pensa—se igualmente que os compostos de acordo com o presente invento exibem uma acção sinergista contra o vírus do herpes em conjunção com interferon» Os produtos de combinação destes dois componentes destinados a uma administração sequencial ou concomitante, pela mesma via ou por uma via diferente, consequentemente abrangidos pelo âmbito do presente invento,

Os exemplos que se seguem ilustram o presente invento. As descrições que se seguem ilustram a preparação dos intermediários.

Descrição 1 (Intermediários para os Exemplos 1 a 8) a.) 3- (t -Bu t i 1 d i me t i 1 s i 1 i 1 o x i) propan ~ i -o 1 A uma suspensão de hidrato de sódio (6,29 g, 262 mmol) em tetrahidrofurano seco í4ΘΘ ml) foi adicionado 1,3-prapanodiol í 20,0 g, 262 mmol) no decurso de 5 minutos e a mistura resultante foi agitada á temperatura ambiente sob uma atmosfera de azoto seco durante 1,5 noras. %r £

Adicionou-se, em porções, cloreto de t-butildimetilsi-lilo (39,5 g, 262 mmol) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1,5 horas. Adicionou-se então uma solução saturada de cloreto de sódio (3€*Θ ml) e, em seguida, éter <5ΘΘ •X .

. ívíV ml). A porção orgânica foi secada (sulfato de magnésio), filtra da e o solvente foi removido„ cromatografia através de uma éter-hsxano como eluente C i s: tilsililoxi)propan-l-ol sob a 0 resíduo foi purificado mediante coluna de gel de sílica, usando , 3s2>, obtendo-se 3-ít-fautildime-forma de um líquido incolor (41,2

Qr. ΪΟΑ ) SH <CDC1T)s 0,Í0 i6H, s, CHT), 0,93' <9H, s, C 1,80 qu, 3=6 Hz, CH._ >, 2,37 UH, s la irgo, OH), 3, 87 <4H, m, CHo0) b) 3,-(t-ButiIdimetiIsi 1 iípkí )propanal A uma suspensão de clorocromato de piridínio (8 r, 5β g, 39,4 mmol) em diclorometano <53 ml >, agitada à temperatura ambiente sob uma atmosfera de azoto seco, foi adicionado 3-í t-bu-tiIdimetiIsiIiloxi>propan-l-ol <5,0Φ g, 26,3 mmol>* Passadas 1,5 horas, adicionou-se éter seco <50 ml) e o líquido sohrenadante foi decantado deixando uma goma negra. A goma residual foi lavada com éter <3x53 ml) e as fracçSes orgânicas combinadas foram passadas através de uma coluna de Florisi1« A solução castanha resultante foi evaporada, o resíduo foi tomado em diclorometa.no e passado através de Florisil fresco, obtendo-se uma solução amarela da qual o solvente foi removido deixando um líquido castanho <2,75 g >. Este liquido tinha uma pureza de 40% como se revelou após análise por AH RHM e foi subsequentemente utilizado sem ser submetido a qualquer outro processo de purificação» (CDC1-,) ϊ 0,10 <6H, s, CH_) , Θ,93 <9H, s, CCCH-,)-»), 0,63 (2H, 3=6 dt, .3=2 Hz e 6 Hz, respectivaments, CH„), 4,03 <2H, t, 3=6 Hz, CH^O), 9,97 <1H, d, 3=2 Hz, CHO) .

a ama solução de metilenobisfosfonato de tetra—isopro-pilo (2, 5® g, 7 ,62 mrnol) em n-heptano C 5Θ ml) foi adicionado n-butil-lítio (2,7® ml ds uma solução 2,7 M em n-hexano, 7,29

mrnol) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente sob azoto seco durante 15 minutos, â solução foi adicionado 3-(t-butildi-meti1si 1iloxi)propanal (aprox, 5,85 mmol) e a mistura foi aquecida até à temperatura de refluxo, mantida a essa temperatura durante ®,5 hora e depois agitada à temperatura ambiente durante 64 horas, A mistura foi filtrada e o solvente foi removido „ 0 resíduo foi purificado mediante cromatografia através de uma coluna de gel de sílica usando diclorometano-Cacetato de etilo) <^51? 4;1)5 obtendo-se CE 3-4-C t-hutiIdimetiIsililoxi 5 but-i-enil-fosfonato sob a forma de um óleo incolor (1,1® g, 43%), nu Λ (película) rn^x cm » (CDC1_)3 ®,®3 (6H, Cf s, BiCtU), ®,9® (9H, 1 * * * s, C < CH^) Ύ> 5 1,32 (12 H, dd, J=3 Hz e 6 Hz, CH (CH-j.) 2 > , 2,43 ( 2H, m, CH?)5 3,72 <2H, t, >J -? Hz, CH^O), 4;,65 C 2H, m, CH C CH-,) „), 5,7 2 (1H, dd, 4=17 Hz e 2® Hz PCH=CH)5 ò5 75 (1H , ddt, 3~7 Hz, 17 Hz e 2® Hz, PCH=CH), EMBAR ("t-ABMS") (tioglicerol) ?, 351 (MH*-).

C 54,76s H

Encontrados C, , H_i.I_Oí,PSi requer

1. Q Οϋ *F d) (E)~4—Hidroxibut-l-enilfosfonato de di-isopropi1o eni 1 f o·

Uma fonato solução de (E) de di—isopropilo -4- < t-but i. Id ime ti 1 si 1 i 1 ακ i) bu.t-1-(€*,84 g, 2,4® mrnol) em (ácido • V 19

Λ C ' . acético)~água <2sl) (10 ml) foi agitada a 7©°Ckdurante 2 horas» 0 solvente foi removido e o resíduo foi purificado mediante croma-tografia através de uma coluna de gel de sílica usando acetona--hexano (Isi) como eluente, obtendo-se (E}-4~hidraxibut-l-enil-fosfonato de di-isopropilo sob a forma de uma goma {©,43 g, 76%). cm Ο

H 3380, 2970, 16: 25, 146Θ, i: 380, 1370, 1220 e 980 12H, dd , J=9 Hz e 6 Hz, Ci HíCH-ç),), 1 ,85 (1H, s (2H, m, □V, : 3,76 (2H, t , 3-ò Hz, CH^O) , 4,69 , 5,80 Í1H, dd, 16 Hz e 18 Hz, PCH=CH> , 6,75 17 Hz -s 22 Hz, PCH =CH> » ,SCIMS“ (isobutano): 237 (MH ).

Descrição 2 (Intermediário para os Exemplos 9, 1© e 11) a) (Z)-4-(t-ButiIdimetilsililoxi)but-l—enilfosfonato de dietilo

O A uma solução de n-butil-lítio em hexano <38,9 ml, 2,7 M, 105 mmol) agitado a ~20°C sob uma atmosfera de azoto seco foi adicionada uma solução de di-isopropilamina (11,5 g, 114 mmol) em THF seco (7© ml). A solução foi arrefecida até -70°C e, em seguida, foi-lhe adicionada, gota a gota, uma solução de metil-fosfonato de dietilo (7,6 g, 50 mmol) em THF seco (10 ml). Uma solução de clorotrimetilsilano (5,8 g, 53 mmol) em THF seca (15 mli foi então adicionada gota a gota, sendo a temperatura interna mantida em valores inferiores a -60°C« A solução resultante foi agitada a -70 °C durante 15 minutos, subsequentemente aquecida até -20°C, altura em que lhe foi adicionada, gota a gota, uma solução de 3-(t—butildimetilsililoxiJpropanal (aprox. 46 mmol) em THF seco (10 ml)„ A solução foi entlo agitada á temperatura ambiente -Ν v. durante 1,5 horas» A mistura de reacção foi neutralizada mediante a adição de ácido clorídrico 2 M e extraída com éter (25¾¾ ml)» A fase orgânica foi secada (sulfato de magnésio)5 filtrada e o solvente foi removido» 0 óleo residual foi purificado mediante cromatografia através de uma coluna de gel de sílica, usando hexano-acetona (5sl, 3s 1) como eluente, obtendo-se (Z)-4-(t—buti 1-dimetilsililoxDbut-i-enilfasfonata de distila sob a forma de um liquido incolor (1,5 g, 9%)» 9b β nu , (película)s 2940, Í625, 1390, 1245, 1095, 105= -f""· cm

CÍCH-»)-,), 1,30 Í6H

Su (CDCl-r)% θ,05 (6H, s, tíiCH-,), 0,8/ (9H, rl o ' o T. It çj *

Hz, CH-») , 2,83 \2H, m, UH0>, 3, /3 \2H, n; CHLOSi> 4,10 <4H, qu., J~7 He, 88.-,0), O, /Θ (1H, dd, 3=14 Hz e 2Θ Hz, PCH=CH), 6 „70 í 1H, ddt, 3=7 Hz, 14 Hz e 54 Hz, PCH=CH> „ MH' 323,1808, MH+ 323,1808,

Encontrados C, Ο,,Ρ'Βχ reouers 14 o> 1 4 b) (i)-4-HidroKibut~'l-sni1fosfonato de distilo

Uma solução de C Z) -4-í t-butiIdimetiIsi 1 i loxi) bu.t-1 -eni 1 -fosfonato ds distilo (1,32 g, 4,09 mnsol > em (ácido acéticoJ-água (2;1) (35 ml 5 foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas» 0 solvente foi removido e o resíduo foi purificado mediante cromatografia através ds uma coluna de gel de sílica usando diclorometano—metanol (19sl) como eluente, obtendo—se r 4—hi- droxibut-i-enilfosfonato de dietilo sob a forma ds uns liquido incolor (0,5 g, 59%),, nu x (película)s 3380, 2980, 1

SflciiK 1620, 1390, 1230 e 1Θ2Θ cm -v ,- 21

V -

CH-j.), CH^O) 20 Hz, 2,7® <2H, m , CiL,), 3,15 4,0® (4H, qu, J=7 Hz, PCH-CH), 6,- 60 <1H, ddt, t, J-7 Hz, t, J-7 Hz, >3=14 Hz e

Su (CDCl^)s 1,33 (6H, (1H, s, OH), 3?73 <2H, CH^CH^), 5570 <1H, dd, 3-7 Hz e 34 Hz, PCH=CH)

Encontrado; CqH,70^P requer HH* 209,0942» MH+ 209,0943»

DescricSo 3 (Intermediários para os Εκempios 1Ξ a 18) a) (£)-2-( 1.3-DlQxan~5--il )etenilfosfonato de di-isonropilo

Uma solução de 2-(1,3-dioKan-5-í1>etanol (2 g, 14 mmoi) em diclorometano (5 ml) foi adicionada gota a gota a cloroerornato de piridinio (4,4 g, 2© mmol) em diclorometano (30 ml)» A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas e depois tratada com éter (3® ml)» Depois de agitada durante «tais 1€J minutos, à temperatura ambiente, a mistura foi filtrada através de sílica, o resíduo foi extraído com éter <5@ ml), filtrado, e os filtrados combinados foram evaporados sob vácuo, obtendo-se um óleo (0,75 g) que mostrou conter ó©% de aldeído (23¾) após análise por RMM <9® MHz)»

Uma solução de metilenobisfosfonato de tetra-isopropilo (1 a, 3,1 mmol) em heptano (25 ml) foi tratada com n-hutil—litio 2,7 M em hexano (1,1 ml, 3,1 mmol>» Após agitação â temperatura ambiente durante 15 minutos, o aldeído atrás obtida (€5,75 g, à€s% puro, 3,1 mmol), suspenso em heptano (5 ml) foi—lhe adicionado. Após agitação à temperatura ambiente durante 15 minutos, o solvente foi removido e o resíduo foi cromatografado sobre gel de sílica, usando acetona-hexano <1;4) como eluente, obtendo-se (Εί-2-ίí,3—dioxan—5-il)etenilfosfonato tíe di-isopropilo sob a forma de um óleo (€5,88 g, 98%)«

nu , t.K.Br; s maK “A 3386, 2979, 2938, 287Θ, 174Θ, 1627« 147β e 1455 cm S,, ÍCBCU Η o )s 1,30 i6H, d, 3—6 fiji 3 2>cCH^CH>, 1, 2::-;CH_rCH), 1,42 (3H, s, CH,), í Λ Λ tj (3H, s, CH„> O 3,85 C4H, m, 2kCH.-,), 4,55 E2H, m9 2nCH( CH_r) j_, 3 , > e 1455 3=6 Hz, m. CH) , ddd, 3=1 m Vr ,.1 C. A. .t.i Hz, PCH=CH)

Encontrados V ) C14H27°5P re£luer C 55,03; H 8,94%. C 54,89; H 8,88%, b) tE) —4—8.1 droκi—5—hidγοκitnefci 1 but~ 1 -eniIfosfonato dg di—isopro~ pxxp

Uma solução de (E>—2—t1,3-dioKan—5~il)—etenilfosfoneto de di-isopropilo (0,73 q, 2,4 mmol) em HC1 metanólico a 3% foi agitada à temperatura ambiente durante 1,5 horas» 0 solvente foi removido sob vácuo e o resíduo foi cromatografado sobre gel de sílica usando inicialmente acetato de etilo como slasnte e aumentando a polaridade para (acetato de atilo)-metanol <2θϊ15, obtendo—se (E)—4—hidroxi—3—hidroximeti1but—1—eni1fosfonato de di-isopropilo sob a forma de um óleo <0,4 g, 63%)% nu (película): 3391., 2979, 2933. 1650. <CDC1„ )s 1, 32 (6H, d H ò 2kCH_CH), 2,61 C1H, m, com D._0), 3,80 <4H, m, <1H, ddd, Hz, 17 Hz , .3=6 Hz, CH>, 3,40 2KCRJ3H) , e 2Θ Hz, 17 Hz e 23 Hz, PCH=CH)» 2kCH^.CH) , 1, (2H, s largo, 4,65 L2H PCH=CH), m. 6,71 2 (6H, d, 3=6 Hz, OH's permutáveis 2xCH(CH3)?3, 5,82 (1H, ddd, 3=7 Hz, •ν'

Encontrado s C11 Η^-5-Oj-.P requer s

Λ <L Am’»* tJ C 49,52? H 9,04%» C 49,625 H 8„7í%* c) ζ E)~3—ftce tοκ img t i1—4-hid rοκ ibut—1—en i1fosfonato de d i-isopro— aila

Uma solução do <E)-4-hIdroKÍ-3-hidroKÍmetilbut~i~enil-fosfonato de di-isopropilo <5 g, 19 mmol), ortoacetato de t. ri meti lo (7 ml5 56 mmol) e ácido £-toluenossulfónico (o,36 q, 1,9 vj mmol) em THF anidro (56 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante 1,5 horas» A solução foi tratada com água (5 ml), agitada durante mais 36 minutos e depois tratada com trietilmaina <6,1 ml). 0 solvente foi removido sob vácuo s o resíduo foi cromatografado sobre sílica usando clorofórmio-metanol (30sl) como eluente, obtendo-se <E)-3-acetoximetil*-4-hidroMibut-l-eriil-fosfonato de di-isopropilo sob a forma de um óleo (4,94 g, 85¾). 3382, 2986, 2934, 2877, 2361 1741, 1631,1 nu , (pe1ícu1a)s ma h __ 1460 e 1455 cm x * «H (CDC1 \ .. ~r / a O 1,36 (6H, d, J~ó,3 Hz, 2kCH^CH), 1,34 (6H, d, 3—tí Hz, 2xCH_,), ,^1 xL , 06 (3H, s, CH^CO), 2,40 íiH, s largo, OH permutável com Dj-jU } « ò tj 68 Í2H, m, CH^OH), 4,24 i 2H , m, L'H„) , 4, &4 L 2H, m, 2mCH<CH, > .-,3 9 5,83 : (1H, ddd, «3=1 Hz , 17 Hz e 19 Hz, PCH-CH), 6,67 (1H.1 d d d, J=S Hh, 17 Hz e 22 Hz, PCH=CH> U 5o , 10 ? H 8,4ô% ? MH 369,1406, C 49,95? H 8,22%? MH* 369,1467,

Encontrados C1tíH170aP - 0,25H,0 requers d > (E)-3-AcetDKimstil-4-t-butildifenilsililoKibut-l-enilfosfonato de di-isopropilo

A uma solução de 24 -

Ο <Ε>-3-aceto>íimeti 1 -4-hidroxibut-í-eniIfosfonato de di-isopropilo (3 g, 9,7 mmol) e imidazole (1,7 q, 25 mmol) em THF anidro (66 ml) a 0°C foi adicionado cloreto de t-butiIdifeniIsililo <3,2 ml, 12,7 mmol > „ Após agitação ã temperatura ambiente durante 3 horas, o solvente foi removido e o resíduo foi partilhado entre clorofórmio CΙθβ ml) e solução salina (30 ml)« A fase orgânica foi secada (Hg30., >, evaporada sob vácuo e cromatografada sobre gel de sílica, usando clorofórmio com uma polaridade crescente até clorofórmio-metanol (ΙΘΦϊΙ), obtendo-se <E)-3 acetoximetil-4-•-t-hutildifsnilsiiiloKibut-I-enilfosfonato de di-isopropilo- sob a forma de um óleo (5 g, 94%)=, nu y (película)s 3071, 3Θ5Θ, 2977, 2931, 2858, 1743, 1630, 1582, max 1472 e 1425 cm ”, (CDCl^)s 1,05(9H, s, CÍCH^.)^), 1,26 <3H, d, 3= ò Hz, CH„CH) H O ' O 0> · · —o 1,27 Í3H, d, 0=6 Hz, CH_CH), Λ rrr? i c; ·_*α- (61 H, d , çj—o, 3 Hz, <CH7)) , 1 , 98 (3H, s, CH.J.C0) , 2,74 Í1H, m 3 CH) , "T * ·-* 5 72 (2H, m, CH,), 4,22 <24 i. líí ? CH0) , 4,65 C2H, m, 2; <CH( CH^.) 0), 5 ,76 ( 1H, ddd. 0=1 Hz, 17 Hz e 18 *^r n «w»"

Hz, PCH=CH>, 6,99 <1H, ddd, 3=7 Hz, 17 Hz e 22 Hz, PCH=CH) 7,3-7,7 (10H, ffl, 2xC,H_)

Í5 D

Encontrado; requer s I ‘ A"? á'T‘ > U O oov W -21 β Ϊ rfn tj Π U ϊ| |UAn ;ni C 63,71, H 7,93%, e) (E)-3-(t-Bu t i1d ifen i1si1iloxi)meti1-4-hi d roxi bu t—1-en i1fosfo- nato de di-isoprooilo

Uma solução de <E)-3~acetOKimetil~4~t-butildifenilsili-loxibut-i-enilfosfonato de di-isopropilo (5 g, 9,2 mmol) em metanol <5© ml) foi agitada com carbonato de potássio (63 g, 0,45 miTiol) durante 5 horas ã temperatura ambiente, 0 solvente foi removido sob vácuo e o resíduo foi cromatografado sobre qel de

S x 1 X C a , {1) usando como eluente, inicialmente, clorofórmio-metanol com uma polaridade crescente até à final de \33s 1 >, obtendo—se CE) --3-t—butiItíifeniIsi 1 iloximetii—4—hidroxibut-i-ení 1 · fosfonato de di-isopropilo sob a forma de um óleo <3,4 g, 73%)« i nu Λ C ρε 1 icu. 1 a > s 3381. 3Θ /1ma;·; 1631, 1585, 1471 e 1428 cm 3025, 294Θ, 2931 50 = v“-t 5 > íCDCl-j. )s M 35 C9H, s , C C CH.T) -j.) 5 1,25 C 3H, d, 3=6 Hz, CHCH-) 1,2 7 <3H, d, 3= =6, 1 Hz, CHCH^), 1 ,31 C6H, d, •3=6 Hz , Cl- -fíCH^.),) r> 1 o» S} *i» 5 < ÍH, t, J* =5, 9 Hz, OH permutá vel com D .-,0 > v’- 3 ai. 3 65 CIH, m, CH) 3,8 Θ C4H, 7'! <CH =·,), 4, 65 C 2H, ro, CH < CH_, ? *J3 76 í ÍH. ddd, 3= H iL y 17 Hz Q 19 Hz , PCH= CH) , 6,64 C1H , ddd, J— Θ Hz í 5 Λ 7 Hz e 23 Hz PCH l=cH), 7 $ 4 —7. ,7 < 10H, ífi 5 2:hC, Hc 5 & D - 5 1

Encontrados -'07^41 OgPSi * 9 ? 25Ho0 requer § / tf £cr * Cd 5 LJcJ y H 8,16%p vf' 5Θ4,2444, -j- /7Γ iOa Wvf jy / y H 8,22%ρ M 504,2461.

\

Exemplos

| Prepararam- -se u s seguiπ tes compostoss ...... B \ d Ll tc Γ*1 í Π c?. 0 X B = guanina. || (R 0) f *3 D -· 2 5 é= diaminopurina O Exemplo ntí B R R-n- X 1 sésiero 1 G ct H H ch2o E 2 A ipr H ch2o E 3 A H H ch2o E 4 A iPr H ch2 E 5 A H H CM o E 6 G H H gh2 E 7 D iPr H ch2 E 8 D H H ch2 E > io A Et H ch2o Z A H H ch2o Z 11 G H H ch2o Z 12 G ipr ch2oh ch2o E 13 G H ch2oh ch2o E — 14 A ipr ch2oh ch2o E 15 A H ch2oh ch2o E 16 A ^-Pr ch2oh ch2 E 17 A H ch2oh ch2 E 18 G H ch2oh ch2 E \ faxemplo i (E)-9-(4-Fosfonobut-S-eni1ohi)quan ina a) A uma mistura de 2—Cdi—í t—buioxicarbonil > 3amino--9-hi-droxi-6-metoKipurina (154 mg, 4Θ μ moí > , (E}-4~hidrQxibut-í-enil~-fosfonato (89 mg, 4Θ4 pmoi) e trifenilfosfina (159 mg, 6&6 pmol) foi adicionada em tetrahidrofurano seco (4 ml) agitada

O azadicarbaxilato de distila (105 mg, 6Θ6 pmol), A mistura foi deixada aquecer até â temperatura ambiente e foi agitada durante 2,3 horas. 0 solvente foi removido e o resíduo foi purificado mediante cromatografia através de uma coluna de gel de sílica usando (acetato de etilo)-metanol í2&;1> como eluente, obtendo-se (E>-2-di-( t~butoxicarbon.il) 3amino-9-C4-di-isopropoxif osforil) bu-t—3-eniloxi3-o-mstoxipurina sob a forma de uma qoma incolor (150 mq, lambda , (EtOH) s 255 (12 300) nm. max

H

VI tj 2975, 1790, 16Θ0, 1370, I280 e 1100 cm : (12H , dd, 3=6 Hz e / h z, CH(CH^>7>, 1,4-0 (18H, (2H, i m, CH.-,), 4,08 í 3'ri, 5, CHJ3), 4,5 3 (4H, m, -si * .J» ' 5,90 Í1H, dd, >3=17 Hz e 19 Hz, PCH= CH), 6,25 i — LJ., d. / Πώ e 22 Hz, PCH=CH), 8,71 CiH, s. 8-H ) M * v7v:ã I < W / / l| í t

Encontrado?. 599,2720 C0, H - .-,14,-.0 _P requer i ji.C3 Η’έ. -_J ? b) A uma solução de (E)-2-di ít-butoxicarboni1)Damino-9-C4-di-iso-propoxifosfori1)but—3-eni1oxi3-ó-metoxipurina (106 mg, 177 pmol) em d i c1orornetano (5 ml) foi adicionado bromotrimetilsilano í0,,54g, 353 pmol) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente sob azoto seco durante 18 horas* A solução foi evaporada até à secura e o resíduo foi removido, sob a forma, de azeotropo, com metanol vezes)» o resíduo foi recristalizado a partir de metanol—água \4;i 1 > Cí® ml) dando origem a (L)-9-(4-fosfonohut~3--ersiloKi)guanina sob a forma de cristais de cor creme (45 mg. 84¾), p.f *>33®*C„ 1 amfada , (EtQH) \ 2o5, 266 nm» fTi 1160 nu , (KBr) 32®®, 3120, 247®, 176®, 1690, 1635, 147®, 125 fflf ;·- ....... cm e.,CÍCD,)^)SQ3s 2,60 Í2H, m, CH„> , 4,4® <2H, t, 3=7 Hz, CH„Q>, ís O jC ' * * ' Jl 5592 (1H, dd, J”17 Hz e 19 Hz, PCH=CH), 6,50 C1H, ddt, 3=ò Hz e 22 Hz, PCH=CH), 6,60 í2H, s largo, 7,9® CiH, s, Η-Θ), 1&,65 Í1H, s larqo, H~l). fcHBAR (tioqlicerol)5 3®2 (MH )

Encontrados C M J\U3^P . 0,2Hn.O requer s 7 i. Z ϋ -J JÚ C 3-o, 37 s H 4, ® 1 ; M 2:3,2®%» C 35,46i H 4,10? N 22,985

Exemplo 2 (E) 4- < Di—isopropi i f osf or i 1) bu t-3-en i 1 qk i Jaden tna a) A uma mistura de 9-hidroKÍ--ò~ftalimidopurina (141 mg, 5Φ® p.mol 1, (E)~4—hidroxibut— í—enilfosfonato (110 q, 5Θ® pmol) e trifenilfosfina (197 mg, 75® μmo1> em tetrahidrofurano <5 ml), agitada a ®°C foi adicionado azodicarboxilato de dietílo (131 mg, 75® μιτιοί) „ A mistura foi então agitada à temperatura ambiente durante 2 horas» 0 solvente foi removido e o res-íduo foi purificado mediante cromatografia através de uma coluna qel de sílica, o usando dxt-lurosuetanu metanul ί4νϊ1, íòsi) comu »ltíente3 ub Lendo··· -se (E)-?-L4— <di—isopropoxifosforiI )but-3-eniloxi3--6-ftalicnldopu-rina sob a forma de uma goma Í2&& mg, 80%)»

Lambda , (EtOH)s 273 (14 386) nm. max nu ,u (película)s 2970, 17-50, 1 o9@, 15/Θ, 1-555, 1240 a 975 cm' Us{Â Λ ’ — 1 *;T,iv ϊ CD..0.^803 1,24 112H, pseudo t, J—6 Hz , CH ç0Η„ )), 2,77 Í2H, fTt jr CH.-j) 5 4, 6 (d (2H, fii r, CH C UH_) *,), 4,66 í 2H, t , J=6 Hz, CH._,0) ;i 6,-07 (IHj, d d, J=17 Hz e 20 Hz, PCH=CH)K 6,75 <1H, ddt, d-6 Hz, 17 Hz e 22 Hz, PCH-CH) , 8,0Θ-8,25 (4H, ffi„ Ph) ,, 9,ΦΦ ( iH, s, H-2/H-8) , 9,08 (1H» 5,

Encontrados , Nc-Q ,· P requer s M 499,16201 M+ 499,1621 b) A mistura de (E>-9-C4~ídi-isopropoííifosforil >but-3--enilQHi3-6-"f talimidopurina (186 mg, 37Θ pmoi > e metilhidrazina SIS mg, 390 μπιοί) e metilhidrazina (18 mg) 390 pmol) em etanol (4 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante 1,5 horas» 0 solvente foi removido e o resíduo foi purificado mediante croma-toqrafia através de uma coluna de qel de sílica, usando dicloro- metano-metanol C4sl> como eluente, ítendo-se (E)-v-E4-(di-isopra- poxifosforil )but-3-enilaxi)adenina sob a forma de uma goma < 12€> mg, 88%)„ lambda , (EtOH)s 260 <12 860) nm= max nu j (película) 3310, -5l /Θ, 29/0, 1640, 159@, 1290, 1230 e v8®m^x ... ... cm " »

E(CDT)o)S03 1,26 (12 H, pseudo t, J=6 Hz, CHÍCHL -X -

Encontrado; C-^.H._l4Nl_.Q-r requer; X ’—J ·&· ΛΥ ’—J c

Exemplo 3

O 2,0/ C2i H, m, CH._t), 4,5© < 4H, m, CH^O e CHCCH-j.),-) , 4,05- il'H, dd, >3 = 17 Hz e 22 Hz, PCH=CH), 6,7 0 <1H, ddt, 3=6 Hz, 17 Hz e 22 Hz , PCH=CH) , 7,3B (2Ή, s largo. NH0), 8,14 (ÍH, s, H-2/H- -8) , 8,36 ÍÍH, s, H-2/H-S) ii‘ 369,1568 = Í S 6fef , 1066 , (E) -9- (4—Fosf onobu t-3—en i 1 ox i) aden ina A uma. solução de ÍE>—9-C4—di—isopropoxifasforil) but-3--eniloxiladenina (1Θ5 mg, 284 pmol) em diclorometano foi adicionado bromotrirnetilsilano ίθ,37 q, 5,68 mmoi), A suspensão branca resultante foi agitada à temperatura ambiente sob uma atmosfera de asoto seco durante 18 horas» A solução foi evaporada até â secura e o resíduo foi removido, sob a forma de um azeotropo, com metanol (3 vezes). 0 resíduo foi purificado mediante croraatagra-fia através de uma coluna de gel de sílica em fase reversa, usando água como eluente, obtendo-se (E > -9- (4-fosf onobu. t-3---eni 1 o-xi>adenina sob a forma de um sólido branco (68 mg, 48%), ρf„ 249-251 *C» lambda , (MeOH); 260 (11 9tí5) nm» mâx nu máx

H *0 * ? >, 1410, 1330 e 103 0 cm 1« 50 Í2H, t, 3=7 Hz, CRJJ), 5,94 6,50 (1 H, ddt, 3=6 Hz, 17 Hz e H-2/H-S) 22 He, PCH=CH), 7,39 <2H, 8,35 ÍÍH„ s, H-2/H-8). largo, MH.-,}, 8,1 b (1H, .% EMBAR ítioqlicerol)s 286 ÍMH ) C 35, 75 3 H 4,©0s N 23,14§ Br 5,41% C 35,86; Η 4,08; N 23,24; Br 5,302

Exemplo 4 <E)-9-C4~Di-isppropaκ i fosf ori1)but-5-eni1Jadsnina

O

Encontradas C0H1 „P·0,2HBr requer a) A uma mistura de 6-cloropurina Í414 mg, 2,67 mmol) (E)-4-hidroxibut“l-enilfo3fonato (63Θ mg, 2,67 mmol) de di-isopro-pilo (2,67 mmol) e trifenil fosfina i1,«5 g, 4,00 mmol) em tetrahidrofurano seco 830 ml), agitada a 0°C, foi adicionado azodicarhoxilato ds distile? (0,7Θ g, 4.02 mmol). A mistura foi deixada aquecer até à temperatura ambiente s agitada durante 27.,5 horas-, 0 solvente foi removido e o resíduo foi purificado mediante cromatografia sobre coluna de gel de sílica, usando d icl crome tarso-metanol como eluents (24s i, 13si>, obtendo-se (E)-6-cloro“‘?”C4-di-isDpropo)íifosforil) but-3—eni 13purina sob a forma de um sélido branco (©,37 o, lambda , (EtOH); 266, (9 260) nm, max nu ... (KBr) 3435, 2980, 159©, 1560, 1330, 123© e 1210 csn-1. ΙΓίβλ * *H (CDC1?:> s 1,25 (12H, dd, -3=6 Hz e 21 Hz, CHÍCH^),), 2,88 (2H, ta, CH,), 4,45 (2H, t, 3=7 Hz, CH?N), 4,55 (2H, m, CH < CH.T) _) 5 5,68 í1H, t, 3=7 Hz e 2© Hz, PCH=CH), 6,70 ííH, ddt, 3=7 Hz, 17 Hz e 22 Hz, PCH=CH), 8,10 Í1H, s, H-2/H-S), 8,77 <1H, s, H-2/H-8). EMBAR C tioq1icerol)s 373 < HH+)„ ν)

Encontrados C-. ε-Η,-,.-ΠΙΜ requer ; ivi jLjC *4 o

C 48 5 4¾ 5 H h , 03 5 λ |ΆΧ 14 j 8 i "i. -C 48,33? H 5 5 95 ? N 15,,Θ3%. (E) —6-c 1 oro--?” L 4-cl i-1 sopropo x i fosfo— 829 mfflai) em amónia etanélica :'C numa autoclave em aço 0 solvente foi removido s o resíduo foi purificado mediante cromatografia sobre coluna de gel de sílica, usando como eiuente (acetato de etilol-metanol Í3si), obtendo-se <E)~9—C4—di-isopropoKifosforil> but~3-en.il 3 aden ina sob a forma de um sólida branco (205 mg, 70%), p, f» i2í~122°C, b) Uma solução de »·*“·» Ldi “6—c 1 -3-eni 13 pur ina (309 íiiy 5 w .· (35 iti 1 / foi aquecida até el durante 5 horas. 0 s ol ven

lambda , CEtOH)s 262 (11 855) nm, máM nu i, <KBr) 3320, 31/5, 2935, 1650, 16*00, 15/5, 1475 e 1240 cm ffldX ...... 5' (CDCl^)s H Ϊ ς »£. w (1 ,2H; . ^ id, ϋ-"6 Hz © 17 H*j£ , CHCCH^)^), 2,84 (2 B, m, CH r> 3 4 ? 35 (2H r. JL* L· n J = -7 Hz, CH^M) , 4,55 (2H, m, CH C CH-j.) _ ) , 5, 69 í i H =i d d ? J- Í7 HZ e 19 Ηϊ “ 9 PCH= =CH> , 5,/6 ( 2H, s, MH,,) , 6,70 (1 H, ddt, •3—7 Hz 5 17 H V? ,t... Jbm Hz 5 PCI -N-oH) , / , / 9 (1H, s, H-2/H-S), 8, 37 CiH, s, H—2 /H -8) „

Encontrado; MH' 354,1695= C, ι_Η3, H^Q-rP requer -354 =, 1695 = J. *-J j!*? ·_> Exemplo 5 iE)-9-C4-Fosf onobut-3-ani13aden ina A uma solução de (E)-9-C4-di --eni 1 3 aden ina (111 mg, 314 μοαΐ) em adicionado bromotrimetilsilano (0,9 q, agitada à temperatura ambiente sob uma -isopropoxifosforil) bu.t-3-diclorometano (6 ml) foi 6,28 mmol) e a mistura foi atmosfera de azoto durante

X 18 haras” A soluÇSo foi evaporada até à secura; #£b resíduo foi i-emovidoj sob a forma de um azeotr0pOj COlTí metanol (3 vezes). 0 * e=»iduo foi purificado mediante c rosna iogra fia através de uma coluna de gel de sxlics em fase r©yersa? usando água como eluen-te, obtendo-se <E)-9-{4-fosfonobut-3-snil)adenina sob a forma de um sólido branco (69 mg, 81%), p.f„ 263-266°C. lambda , <MeOH)s 261 <10 810) nm, má. κ nUmáK‘:kBr) 5 3360 5 3095 , 1685, 1605, 1520, 1415 e 1228 cm êH (D2° * U£ns 90ta de soluçã‘o de NH^OH) s 2,63 <2H, m, CH2>, 4,31 (2H5 t, J=7 Hz, CH2M), 5,72 UH, pseudo-t, J-I7 Hz, PCH*CH), 6,14 (1H5 pseudo-tt, ã--7 Hz e 17 Hz, PCH=CH), 8,13 QH, s, H-2/H-8) , 8519 UH, s, H-2/H-8). EMBAR <tioqlicerol)s 270 <MH )

Encontrados CPH1„N,-0,P«0,25HBr requer 1 C 37,29§ H 4,38; N 24,09¾. C 37,355 H 4,275 N 24,20%:

Eaemoio 6 (E)-9"(4-Fosfonobut-ô-enil)gaanina a) A uma mistura de 2-amxna~6~clorapurina (0,6 g, 3,81 ffifflol), (E>—4—hidroxibut—í-eniIfosfonato de di-isopropilo (0,90 g, 3,81 fflmol) e trifenil fosfina <2,00 g, 7,62 miTial) ©m N,N-dimetil~ formamida seca <30 ml), agitada a 0oC sob azoto seco foi adicionado azodicarboMilato de dietilo (1,33 g, 7,62 mmol). A mistura foi deiKada aquecer até â temperatura ambiente e agitada durante 1,3 horas» 0 solvente foi removido e o resíduo foi purificado mediante cromatografia através de uma coluna de gel de sílica,

usando diclorometano-metanol (9si) como eluente, obtendo-se í E) -2-amino-ó-c 1 oro-9-C4- < di-isopropoxifosfori 1 but-3-eni 1J purina

Iara (tí,52 q 3 35%) tr puf (5 42®) e 224 (24 329 > ; 635, 1615, 156Θ, 1520, 'má>; nu , (KBr)s 3-itío „

Hitf.K 1240 cm * .

C( CD.,) ?SD3: 1,08 (6H, d, Ί—ά. w w Hz, CH u-.· { !.·£. , c H(CH 2,77 C2H, m. CH7 5 Δ 07 ç »* ç j», / ET 69 (1H, dd, J«17 H z e 21 hz, P CH=CH>p Hz e 22 H z, PCH—CH), 6,89 í 2H, s largo, 8, 11 CiH, s, H-8). CH^>.y> , 1,16 £6H, d, J=6 t Λ t I \ a-H p Hf p CH.-S e CH £ CH^.) ,-j) Ò B vJjW CIH, ddt, J=6 Hz p 1 NH..J permutável com D,,G) ,

Encontrados

C1CH ,-C 1 N.-0,P requer .*·» Ti **. ‘ MH+ 388,128; 4- MH 388,13Θ:

b) A uma suspensão de <E)-2-amino-6-cloro-9-C4-{di-iso-propoxifasforil)-hut-3-enil 3 purina (168 mg, 433 pmol) em dicloro-metano <8 ml), agitada à temperatura ambiente sob uma atmosfera de azoto seca, foi adicionada bromotrimetilsilana (1,33 g, 8,66 mmol>* A mistura foi agitada durante 18 horas e depois foi evaporada até à secura. 0 residuo foi suspendido em água (2Θ ml), à suspensão resultante- foi adicionado ácido clorídrico concentrado <3 ml) e a mistura resultante foi aquecida até 1$0°C e mantida a essa temperatura durante 1,7 horas. A solução foi neutralizada mediante a adição de solução de hidróxido de sódio 2,5 M e depois evaporada até à secura. 0 resíduo foi purificado mediante cromatografia através de uma coluna de gel de sílica em fase reversa, usando água como eluente, obtendo-se <E>-9-E4-fos-fonobut-3-enilIguanina sob a forma de um sólido branco (66 mg, 53%), ρ.f. 290-294°C (decomp.)= s

Su (D_0 + uma. gota de solução de NH„OH)s 2,62 (2H, m, CH^)? 4,15 Π ,i ** ** * y*. (2H,, t, J--7 hz 5 CH,N), 5,78 (1H? pseudo-t, d=17 Hz, PCH=CH), 6,15 (1H, pseudo-tt, .15--=7 Hz e 18 Hz, PCH-CH), 7,80 1H, s, H-8) »

O EMBAR {tioglicerol) 2bé (MH')„ Encontrados C^-,Η j » Θ, 2H.-S0 requer s C 37525, H 4, lãs N 24,07” C 37,42; H 4,32? N 24,257,, -KeiTiplo 7 (E)-2,6~Dlamino—9-C4-(di-isopropo f osf orl 1 > but-5—en i 1 3 Purina.

Uma solução de (E)-2-amino~6“cloro~9-C4-ídi-i fosforii >but”3"-enii 3purina í 37© mg, 954 μπιοί) em amónia saturada (60 ml) foi aquecida até 1€>0°C numa autocla inoKidâvel e mantida a essa temperatura durante 7 horas —se arrefecer a. solução e o solvente foi removido» sopropoxi-etanólica ve em aço . deiκou-0 resíduo

foi purificado mediante cromatografia através de uma coluna de gel de sílica, usando diclorometano-metanol í í9;1, 9s1) como eluente), obtendo-se CE)-2,6-diamino-9-L4—ídi-isooropoxifosfo-ril)but-3-eniIIpurina sob a forma de um sólido branco (175 mg, 5β%), p.f. 211-213-°C» lambda , (MeOH); 256, (/ 860) e 283 (9 67Θ) nm. m ò. κ nu . (KBr) 346Θ, 332; max 31/4, 16130= 1 09©, 14/0, 1410 e 1250 cm -\ - «Η c ccd3); ,S03s 1,11 Í6H, J'~6 Hz, CH ( CH_,) _) • 0 ^ 17 í6H« d, d~ 6Hz, CH(CH-,), 2,,50 <2H, m, CH0) , 4,12 <2H, t, J=7 Hz, CH^N) , 4,33 (2H. permutável com D^Q), m, CHíCH.,5,73 <2H, s, NH^ _____ dd, J*17 Hz e 2© Hz, PCH=€H), 6,55 UH, ddt, J=7 Hz e 20 Hz, PH-CH), 6,60 (2H, s, permutável com 0^0, NH^), 7,68(1H, 5, H-8). 5,73 <ÍH, MH+ 369,1803, MH+ 369,1804,

Encon trado s C, c-H^c-N, 0-j.P reauer s 1 jíio o *5

Exemplo 8 (E)-2«6-Diamino"-9-(4-fasfonQbut~5-enil) Purina como A uma solução de íE)-2,6-diaiTiina-9~E4~(di-isaprapoKÍ-fosforil)but”3-enil—purina (144 mg, 391 pmol) em diclorometano (10 ml) foi adicionada bromotrimetilsilano (1,2Θ g» 7,82 mmol) e a mistura foi agitada, à temperatura ambiente, sob uma atmosfera de azoto seco, durante 18 horas. A suspensão branca resultante foi evaporada até à secura e o resíduo foi removido, sob a forma de um azeotropo, com metanol (6 vezes). Q resídua foi purificado mediante cromatografia através de uma coluna de gel de sílica em fase reversa, usando água como eluenie, obtendo-se um produto que a análise do espectro de RMM revelou ser o monoéster. A uma suspensão do monoéster íaproximadamente 306 pmol) em N,M dimeti1-formamids seca (í €? ml) foi adicionado bromotrimetilsilano <1,16 g, 7,58 mmol) e a solução resultante foi agitada ã temperatura ambiente e sob uma atmosfera de azoto seco durante 18 horas, A solução foi evaporada até á secura e α resíduo foi removida, sob a forma de um azeotropo, com metanol (3 vezes) e depois com acetona-água (isi) (3 vezes). 0 resíduo foi purifivado mediante cromatografia através de uma coluna de gel de sílica em fase reversa, usando áoua como eluente, obtendo-se - ‘ ^ í í'υ ;N - (E) -2 3ó-diamino-9- C4-fosfonobut-3-eniI) purina sob a forma de um sói ido branco ( 3© mg, 27¾ 5« p.f.>325°C. lambda * (MeQH)s 256 (6 57® > e 285 (6 490) nm„ max nu , (KBr) 341®, i 7 í ®, 167®, 163®, 1590. 142®, 122® s 1135 cm”1» max ...... ο *H CÍCD3) 2so + uma gota de solução de NHOH2 i 2,5® <2H, m, CH^) , 4,05 Í2H, t, J=7 Hz . , CH.-r ,N) , 5576 (1H, pseudo-t, 0=17 Hz, PCH=CH), 5,81 (2H, s, nh2>, 6,1© í 1H, pseudo-tt J~7 Hz e 2® Hz, PCH=CH1 , 6,69 (2H, S, nh2> , 7,76 (1H, s, H-8). EMBAR (tioglicerol)s 285 (MH+)»

Exemplo 9 (Z )-9-1-4- ( Dietoxif asfori 1) but-3—eni loxi Dadsnina a) A uma mistura de 9-hidroxi-ó-ftalimidopurina (32® mg, 1514 moo!>, {Z>-4-hidroxibut-l-enilfosfonato de distilo (25® mg , 1, 2© mmol) e trifenil fasfins (448 mg, 1., 71 mrool 5 em tetrahi-drofurano ssco (11 ml), agitada a ®°C sob uma atmosfera, de azoto seco, foi adicionado azodicarboxilato de distilo (296 mg, 17® mmal)* Deixou-se aquecer a mistura até à temperatura ambiente a agitou-se durante 2,3 horas, 0 solvente foi removido e o resíduo foi purificado mediante cromatografia através de uma coluna de gel de sílica, usando acetona~hexa.no como sluente C1 s 1, 4s3), obtendo-se (Z.) —9— C4-dietoxifosfori 1)but-3—eniloxi3—6—ftalimidopu— rina sob a forma de uma goma de cor castanha clara (32© mg, 60%). lamada ffiáx (EtOH) vy Ο

. \ » A V nu , íti^ „ ÍK Λ Br5 ϊ 2980, 1735, 15 95, 15 75, 136® , 133®, 1 245 e 1 ®25 cm u *H C (C Όύ ) »,803 s 1, z3 {6B, t, 3 =7 H £ 3 CH»,. ? , .-1¾ ®5 (2H, m, ch2>. ~T *—* ,98 (4H, dq, 3-7 Hz e 8 Hz, CH», CH 3)? 4 "-r 3 63 (2H, t , 3=6 Hz CH.-.O) , 5 ,9® UH, dd, •3=14 Hz e 2® Hz., P CH =CH) 3 6,75 (1H, ddt, 3= ~7 Hz, 14 H 2 0 52 H Zr, P CH=CH), 8,«5 Í4H, iTi 5 C6H 4> , 9,®5 {1 H, s 3 H- f—: J Λ./ H-8), 9 , 1® ί 1H, S 3 H-2/H-8). Encontrados \~r 0.5 77 « H 4,87? N 14,52¾} MH Γ 472, 13 84 .·. C21H 22W5 0,P requer: i O ‘ 1—· 53 ,5®} u 1 i 4,7®p N 14,86%? MH l+ 472, 86 „ b) Uma mistura ú& ÍZ>- 9_ C4-Cdisto xifosfor -il > but-3 ~hH j.— loxi 1 “*6** fta 1 imidopurina < 30 5 mq, 64 7 mmol) s meti1hl dr az ina (3 1 3 O mg, e £3/ *7 p.mol) em etanoi < 7 ml ) f o i „ ; i. „ „ϊ x w-M X L Ca D d -~i tempera ;tura amb iente durante í , o horas» 0 solvente foi removido e o resíduo foi purificado mediante cromatografia através de uma coluna de qel de sílica, usando diclorometano-metanol Í19si, 9; Ί) , CZ)"9~C4“(dietoKÍfosforii )but-3-snilo;<i Jadenina sob tuna goma incolor Í177 mqH 8®%)* lambda , \fc.tuH) ?> '26® íi3 ®45> nm« íiiâ>: \ obtendo-se forma de 1325, 1295 e 124® -1 cm C2H, m, CH7), 3,9' :H, t, CH„0>, 5,85 (1H ddt, 3 =7 Hz, 14 Hz e 5; má;·; «u E(CDT).,SQ3: 1,22 íèH, t, 3=7 Hz, CH„) ! 1 ·—5 jfil .¾

Hz, rCH~CH), 7,38 (2H, s largo, NH,), 8,15 <1H, s, H-2/H-S), 8,41 <1H, s, H-2/H-8). I -1— ÍJ N 2®,i/%» M+ 341, 1 <1> X» ^*a|l 961 N 2®,2®%» -Ϊ- 341, JL •ώίηΤ’ή*

Encontrado!

-CA '

Exemplo 10 (Z)-9-(4—Fosfonobut-3—eni1ο κi)adenina o A uma solução de C Σ ) -9--11 4- (dietoxifosfori 1) ~bui~-3-eni~ lox i ladenina (145 mg, 425 μπιοί} em dielorometano ( 1Θ ml) foi adicionado bromotrimetilsilano í 1,29 g , S, 48 mmol) e a solução resultante foi agitada à temperatura ambiente sob uma atmosfera de azoto seco durante 18 horas. 0 solvente foi removido e o resíduo foi removido sob a forma de um azeotropo com metanol (5 vezes). 0 resíduo foi purificado mediante cromatografia através de uma coluna de gel de sílica em fase reversa, usando água como eluente, obtendo-se íZ.>--9-(4-fosfonobut-3-eniloxiladenina sob a forma de um sólido branco í98 mg, 8i%> , p„f„ 238°C, lambda , (MeOH)s 26 Θ (1.5 515) nm = máx 1335 cm nu . (KBr)s 342Θ, 32ββ, 3Θ85 max · 5 2970, 170Θ, 1610, 1485, 1415 E(CD,)^S03s 2,94 Í2H, Π O JU. íTi t DH„), 4,43 (2H, t, J=/ Hz, CH„) 77 (1H, dd, J=Í4 Hz e 17 Hz, PCH==CH), è,4€s <ÍH, ddt, J=7 Hz, 14 Hz e 47 Hz, PCH-CH), 7,4< 8,42 (IH, s, H-2/H-S. C 36,715 H 4,16; N 23,96%. C 36,96? H 4,41? N 23,95%, EMBAR (tioglicerol)s 286 (NH') Encontrados C„H„-N^O„p»0,4H_0 requers *f i A D 4* 2 1 v ~ 40 Εκemolo il (Z)-9(4-Fobfonobut sni1oxi)quanlna

a) A uma mistura de 2-Edi-(t—butoxicarbonil 3amino~9 , 1 hidroxi-ó—metoxipurina (487 mg, 1,2S snmo 1) , (Z.Í—4—hidroxibut— 1 — -eniIfosfonato de distilo (266 mg, 1,28 mmol) e trifen.il fosfina (504 mg, 1,92 mmol) em tetrahidrofurano seco (15 ml), agitada a ®*C sob uma atmosfera de azoto seco, foi adicionado azodicarboxi-lato de distilo (332 mg, 1,9'i mmol)» Deixou—se aquecer a mistura até à temperatura ambiente e agitou-se durante 1,5 horas» 0 solvente foi removido e o resíduo foi purificado mediante croma-tografia através de uma coluna de gel de sílica, usando acetona-—hexano (Isi) como eluente, obtendo-se (Z >-2-Cdi--·t-butouicarbo··· n i 1 3amino-9-C4-(dieioxifosfori1)-but-3-eni1ox i 3-6-metoxi purina sob a forma de uma goma incolor (443 mg, 61%)»

lambda_ .. (EtOH) s 256 (10 920) nm, HfâX nu. _ , (KBr) 298*3 > cm 236Θ, Í790, 1760, 1590, 1475, 137Θ, 128® e 125? EC si Clí7í ,-.SO 3 s 1, 21 í 6H, t, 3=7 Hz, CH0CHT), 1,4® (18 H, S ΐ C(CH, 2,97 (2H, m, CH^Í. ' ·«** jC. 3,95 í 4 H, pseudo qu, 3-14 Hz e 7 Hz, C :H?CH^), 4,5® (2H, t, 3=7 Hz, CH.^0 ), 5,83 (1H, dd, 3=14z e 19 Hz, PCH=CH), 6,68 C1H, ddt, 3= =7 Hz, 14 Hz e 52 Hz, PCH=CH), 8, / w C1H, s, H-S)» 'CIWS" (amónia)s 572 (MH ).

Encontrados μ '24 35 ο ν- Ο 3W· , í6? H 6,63 5 N requer C 50,43? H 6,7®? N 12,55%, 41

b) A uma solução de í Z.)—2—Cdi—í t—butoxicarbonil) Jaminc— -9~C4-(dietDxif osfori 1) but-3-eni 1 ov·..13-6-metox ipurina (27® mg, 472 μιηοΐ) sm diclorometano í!,5 ml) foi adicionado bromotrimetilsila-no < 1 j,44 g, 9,44 mmol) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente, sob uma atmosfera de azoto seco, durante 18 horas» A solução foi evaporada até à secura s o resíduo foi removido., sob a forma de um azeotropo* com metanol (1 vez) e depois com acetona-égua C1 'í 1 ) (3 vezes)» 0 resíduo foi suspendido em água s aquecido num banho de vapor» A mistura foi arrefecida, e purificada mediante cromatografia através de uma coluna de gel de sílica, em fase reversa, usando água. como eluente, obtendo—se (Z)-9-4~fosfonobut-3-en.iloKÍ)guanina sob a forma de um sólido branco C6© mg, 42%)., p»f» 24®-242*C» lambda . (MeOH)s 255 (13 &&Φ) nm, mají

O nu , má ÍK u , Λ Br)i 339®, 314®» í 690, 165®, 161®, 1475, 1385 e 1165 cm " S, . L H CD^> .-SOJ ϊ 2,91 C 2H„ m, r*U \ 4 το W* l.~5 / q * b ’».:Λ. (2H, T, 3=7 Hz, CR-,0), 5,75 (1H j ud , *J —lo Hz e 17 Hz» PCH-CH), 6, 3® (1H, ddt, 3= 7Hz, 13Hz s 47Hz , PCH-CH> , 6,61 <2H, s largo, NH._s permut ável com EUO), 7,95 (ÍH, S *» H-S), 10,63 (1H, s largo, H-l per mu tá. vel com 0.-,0} . EMBAR í tioglicero: 3®2 (MH'>

Encontradas Cr-,H» Θ, 4 R-,ϋ requers Γ: A / κ f~f ·: / Q« !\f *79 ; *-· / tj Π -J H f r i; f -i i C 35»®

•-O» UO| M N 22,71%,

\ .

Exemplo 12 (E) - 9 - [ 4 - D i—i s ο ρ r d p c> x .1 f o s f o r ,11 > -2- (hldroximst.il ) bat-5-eniloxi 3qu-anina a) Uma mistura de 2-Cdi-<t-butoxicarbonil>Hamino—9-hi-droxi-ò-meioxipurina <©,62 g, 1,6 mmol), Irifenilfosfina (©,43 g, 1,6 mmol) e {E)-3-Ct-butildifsnilsililaxi}melíI-4-hidroxibut-í-enilfosfonato de di~isopropilo <©,6 g, 1,2 mmol) em THF anidro <15 ml> a 0°C foi tratado, gota a gota e lentamente, com azodi-carboxilato de distilo <©,25 g, 1,6 mmol). Após agitação de um dia para o outro à temperatura ambiente, o solvente foi removido sob vácuo e o resíduo foi cromatografado através de gel de sílica, usando acetona-hexano <1s2> como eluente, obtendo-se (E)-9-C2-Í t-butiIdifenilsililoxi)meti1-4-< di-isopropoxifasforil)-but-3-eniloxi 3-2-Edi-ít-butoxicarfaoni1)lamino-á-metoxipurina sob a. forma de uma goma <0,7 g, 66%), nu , \ KBr') s 297:máx , 1427 cm » 1734, 147; e < CDC1.

4,15 <3H 1,06 E9H c: £ 3 r* Uí (CH^> ~ J li 1,3= , 2xC < UHi-- ^ *?· ·» ρ O* 2 ,92 < 1H, m, i OCH-ç.) » 4 „ 4—4 r j ‘ 5 í f w C4H, m, CH2 17 f-jr? s 19 Hz, PCH=C H > , ς . !=H>, 7 ,3- 7,80 < 1 1H, m 5 ·£..* <CM 2xCH(CH_,.)1, 5,91 <1H, ddd, 3=8 Hz, , H-8), 1_- _/- 2xCH<CH,)„3,

3,35 <2H m, ch.7>, < ÍH, 17 Hz

Encontrados; H JM.-.0 J 4-j. òz 5 1© C ,, __.N,_0.. PSi requer s U 59,0© H 7,525 N 7,79%, u 7,205 N 3,07%: n b) Uma, solução de <E)-9-C2-<t-butildifenilsililoxi)me-ti1-4-{di-isopropoKi fosfori1)but-3-sniloxi3-2-tdi™< t-butox icarbo-nil5 lamino—6—metoxipurina (0,45 g, 0,5 mmol) em etanol <1© ml) e ácido clorídrico 5 M <1 ml, 5 irimol) foi aquecftiâ até à temperatura de refluxo e mantida a essa temperatura durante 4,5 horas» 0 solvente foi removido sob vácuo ε o resíduo foi cromatografado sobre gel de sílica* usando clorofórmio-metanol (l€isl) como eiuente, obtendo-se α composto em epígrafe sob a forma de um sólido (0,16 g, 74%). nu cm méx" i s 3331 3160, 2901 >935, "515 í6055 1632, 1596 e 147: CCCD^SOl 1,22 SE12H, m, 2x(CH,)0CH3, 2,82 C1H, m, CH>, 3,57 (2H, m, CR-,), 4,3-4,6 E4H, m, 2^(814^).-,08 e CH^ONl, 4,91, (1H, t, J-5 He, OH permutável com Do0), 6,ΘΘ (1H, ddd, J=1 He, 17 He e 18 Hs, PCH-CH), 6,65 Í3H, m, D_,0>, 6,00 (1Η, ddd, J=1 He, 17 He e 13 hz, PCHpCH), 6,65 (3Η, m, NH?0 permutável com D^O, e PCH=CH>, 7,87 <1H, S, Η-8) , 10,69 (1Η, s, permutável com 0.-.,0, Η— 1)»

Exemplo 13 (E) —9— (2-HidroK imet i 1 —4—f osf onobu t-5—en i 1 ok i ?auanina

Uma solução de <E)“9~C4-(E)-di-isoprapoxifosforil)-2~ -(hidroximeti1)but—3-eniloxi Dguanina (Θ,ΐό g, 0,38 mmol) em N,N—dimetilformamida anidra (4 ml> sob uma atmosfera de azoto a 0°C foi tratada com trimetilsililbrometo <0,76 ml, 5,8 mmol) e agitada à temperatura ambiente durante 18 h« 0 solvente foi removido sob vácuo mediante diversas co—evaporações com metanol e misturas mefcanol-tolueno. ft goma resultante foi purificada por duas vezes mediante cromatografia sobre gel de sílica C1B em fase reversa, obtendo-se < E)-9—hidrox imeti1-4-fosfonobut-3—en ilox i) — guanina sob a forma de um sólido <22 mg, 17%). lambda máx <H„Q> 53 nm <12 Π) 'w''

UH, iTív CH), CT ET SH C (CD.,. > .-,30 3 s 5,3Θ (>3H, s largo, 0H's permu— CH^=CH), 4,35 (2H, m, CH^ON) , 5,95 (iH, dd, ^=3.-,= 17,9 Hz, PCH=CH) , 6,45 UH, m, F‘CH=CH), è,6€í £2H, s largo, NH._, permutável com D.-s0>, 7,85 (ΓΗ, s, .í. à! H—8), 10,63 UH, s largo, H-l >, táveis com 0,,0, s H-0), -5,55 (2H, m

Encontrados C. ,.H, , N^O, »48.-,0 requer s

X v A Ξ5 O JL

Exempla 14 C 35,50? H 4,2/ 5 C 35,49? H 4,4 í ? M 20,96%» H 20,69%» eruna a) limai mistura de 9—hidroxi—6—ftalimidopurina <0,94 g, 3,4 mmol), di-isopropil íE>~3—i—{butildifenilsililoxi)metil-4—hi— droxifaut-1—enilfosfonato (1,3 q, 2,6 imnol> e trifenilfosfina (€i,88 q, 3,4 mmol) 0°C em THF anidro (2Φ ml) foi tratada, qota a qota e lentamente., com acodicarboxilato de distilo (Θ

B «J*»» Lí S 3,4 mmol) em THF anidro (5 ml). Após agitação à temperatura ambiente de um dia para o outro, o solvente foi removido e o resíduo foi cromatografado sobre gel da sílica, usando como eluente (acetato de etiloJ-hexano Usl>, no início, e aumentando a polaridade até usar acetato de etilo, no fim, obtendo—se CE)-9—(di-isopropoxi-fosforil )-hut~3-eniiQXÍ3—6—·f talimidopurina sob a forma de um vidro j OO n A2V1 ' 1 , ϋ y , uíí. / » nu mâx s 3447, ya/ í, 2978. Í58, />/ 1FT77 JL W / / 15 1468, 1455, 1428 e 14Θ6 cm

•I

SH í CDCl-ç ): 1,07 E9H, s, C (CH-, o , 1, 29 ( 3H, d , J ”6 Hz CR, 1, 3Θ C3H, d, 3=6 Hz, CH.,CH.), 1,3 4 E 6H, d , 3~ 6 H CH CH), 1,30 (3 H, d, 3 =6 Hz, CH^CH), 1,34 L 6H, d, 3-6 Hz, ( GH_. )^CH3 , 3,0 UH, s, Cl •1), 3 5 90 <2H, m, CH._, >, 4, 70 (4H, ifR xt CH 3 O < | H , s, CH) , O 3 9Φ C2H, ffl, CH,) , 4,70 (4H, m ;, CH,-, , 2xCHíCH _,) .^í 21 6, 00 < 1H, ddd, J« 1,4 Hz, 17 ,3 Hz e 19, *3 Hz, PCH =L-H) 3 C-* o 81 í 1 H, ddd J =7 H z, 17 Hs: teí oo u yp PCH- €H>, 7,3-8,2 (15 H, III , C,H ϋ 4? “i. t jL* Λ C, H Í3 2T Q H—2 /H—8), a * 9 ®4 (1H, s, H—2/ H—8) o

Encontrado; C,λΗ„, i'4-.0-,PSi requers 4!-;í '70 O / ^ C 61,58¾ H 6,©9p N 8,56%, C 61,84¾ H 6,1Θ § M 9,Θ1% s fa> Uma solução de (E>-9-l2-{ t-butildifenilsililoxi )me-ti 1 ~4~· (d i-isopropax x fosfori1) hut-3-en i 1 o>:i 3 -6~í ta 1 imidopu.rina ,5 mmol) em diclorometano <25 ml) a ¢5°C foi tratada. (1,17 q. gota a. gota com meti 1 hidrazii na <0,12 ml, 2,2 mma agitação à temperatura ambiente durante 1 no-ra, O 5D11 removido sob vácuo e o resíduo foi d isso1vi do em acsb (1s1) (30 ml>. Após f11 tração do sólido branco «L ? 1 ss··

Vi J solvente foi removida sob vácuo e o resíduo foi cromatografado sobre gel de sílica, usando coíiíq slusnte acetona-hexano (Isl), no início, e aumentando a polaridade até í2's 1} , no fim, obtendo—se (E>-9~E2-C t-butildifenilsi1iloxi)meti 1-4-(di-isopropoxifosforil)-but-3-eniloxi3adenina sob a forma de uma goma (0,72 g, 74%)« nu j. \K.Br)s 3325, ·: máx 1471, 1427 e 1.415 cm" 2<57q , 2931 vqí;o *><·?“ 1641, 1593 «H< CDCl^)s 1,04 C9H, s, CÍCH^)^3, 1,27 (3H, d, J»6 Hz, CH CH), 1,28 < 3H, d, 3=6 Hz, CK,CH> , 1,33 LòH, d, 3=6 Hs, (CR-l^CHl, 2,92 <1H, m, CH), 3,85 <2H, m, CH^), 4,47-4,75 E4H, m, 2kCH(CH-.) , CH?0H3, 5,69 <2H, m, WH? permutável com 0.-.,0), 5,96 <1H, ddd, J“-l, 4 Hz, 17,3 Hz, PCH-CH), 6,78 (1H, ddd, 3=7 Hz, 17 Hz e 22 Hz, 17 Hz e

O

PCH=CH>, 7,3-7,75 (11H, <n, 2x0,H_, H-2/H-8), 8,34 í1H,

tnccntrados C-,-Η. -Ν,-Or-PSi requer 5 •3z 44 o D MH 63o,2909, MH+ 638,2928= H-2/H-8) c> Uma solução de (Eí—9-E2—(t—butildifenilsililoxilme— til-4-<di-isopropoxifosforiI )but-3-eniloKÍ3adenxna (Θ,27 q., θ?4 filmei) em cloreto de hidrogénio metanólico a 3% (5- ml) foi aquecida até 6Θ°C a mantida a essa temperatura durante 5 = 5 horas. 0 solvente foi removido sob vácuo e o resíduo foi cromatografado sobre gel de sílica, usando como eluente clorofórmio-metanol {20sl), inicialmente, e aumentando a polaridade até C1 'òsi), no fim, obtendo-se o composto em epígrafe sob a forma de um vidro (0,14 g, 837.),. fiSSX cm 1 ç η 2880 r- 2 934, 16tpi , 1642, 1599 8, , CCD-r) Η o .-,8-03 ι 3«6Θ jsí. <>3H, m, CrU , OH permucãvel E4H, m, 2xGH(CH,)„, CH„0N3 6,07 í i H , ddd, J-l Hz, O 44 PCH—CH) £j tt £53 C .1H g ddd, J-7 Hz, 17 Hz e 23 Hz, PCH 1468 s 1400 com D_Q>, 4,53 í 7 Hz e 18 Hz, H £5j s, NH-, permutável com u^O) H-2/H-8H).

Encontrado; P ã.Çt 97« ‘V?*-' « H 5,62 ρ N 14,37%= J~- u- && Ai « n 5 *r i *t H 5»40 í N 14,00%=

Exemplo 15 < E) -9- (2-Hiri rox imeti l.-4-f osf onobut-3-eni 1 ox i) adenina

Uma solução de (E)~¥-í4-di-isopropaxifosfari1)-2-(hi- droximetil)but—3—eniloxi3adenina (0, 0,63 mmol) era ν\ Μ , N-d i me t i1for mamida an i dra foi tratada com brometo de <5 ml) , s-ota Us«a atmosfera de dzuta, trimetilsililo <1,24 ml, 9,4 mmol? a 0°C e a solução foi agitada durante .18 horas à temperatura ambiente» 0 solvente foi removido sob vácuo mediante diversas coevaporaçSes com metanol e tolueno e o resídua foi cromatografado sobre gel de sílica em fase reversa, usando como eluente água, obtendo-se < E)-9™(2-hidrox imeti1-4-fosfonobut-3-eniloxi)adenina sob a forma de um sólido 83© g, 17%)» lambda , (H^O)s 2é& nm (13/11)» máx 2 nu , ÍKBr) 3434, 1717, 169®, 1653, 164©, 1472 e 1414 cm {ficíK ‘ ... 5U C(CD^) Π õ .-.SOI 2,78 <1H, m. CH>, 3,38 <3H, s largo. 3xOH, H.-.D) , 3,6© < 2H, m, CH-OH),, 4,48 < 82H, m, CH.-jOH), 5,99 <ÍH, m, PCHpCH), ó,48 <1H, m. PCH=CH), 7,37 {2H, s largo, NH._S permutá vel com D_0>, 8,14 <1H, -·? H-2/H-8), 8,34 (IH, s, H--2/H-8)> w "r f vw tj w ς H 4,4bjj κι o A Si n»; nl ív * '4 / /« k requers C “Zí n/i , -_=£> , ít· § H 4»771 N .ti 1 u 1 O Sn a

Encontrados C„ ,>L ,fULU.f íb i 4 5 z> fc.xemplo 16 (E)-9-14—Di-i sopropQK i fosf or i1)-2-(hidroximeti1)but-3-enil3adeni-na e trifenil fosfina < 54© mg , <22 ml), agitada a © *C sob uma icionado asodicarbo: xilato de vente foi removido e o resíduo a) A uma soluçSo de è-cloropurina <213 mg, 1,37 rnmol') di-isopropi1 < E>-3-< t-buti1difeni1si 1iIokí)meti 1-4—hidroxibut-i --eni1fos fonato < 694 mg, 1,37 moo1) e tri 2,©ó mmol) em N,N~dimetilformamida <22 ml) atmosfera de azoto seco, foi dietilo <358 mg, 2,©à mmol). 0 ; foi purificado mediante cromatografia através de uma coluna de

gel de sílica, usando como eluente depois (acetato de etilo)—metanol {9* -C2-butiIdi fsni1si1ilox i 5 meti1-4-i d i-—3—eni 13—6—c loropur ina sob a forma, dí 2tí% lambda A (EtOH)s 265 C9 21O) nm. máx ac e t cn a - he x a η o í 1 s 4 , í s 2) e 'si s 9sí), obtendo-se (E)—9— •isopropox if osf ori 1) but-' uma goma incolor (244 mg, nu má (película) 2980, 2930, 1590, 1560, 1425, 1385, 1335 s Í245 cm

O *H (C DCl-j. O 1» 1 .•a a» ,10 í 9H, s - CH^ ) , 1,2 © (1 2H, m. CH C C :H-r)0> *1 3,Θ7 (1H, m. CH ) ς 3 , 69 Í2H, d, d “ò Hz, CR_0 ) 4 • , 50 (4H, , m, m.-tn & CH<CH **, - ), 5, ΐΞς**7 C1H, pseudo- t, J = 17 hz, PCH=C H) jí 6, 66 í (1H, ddd, J =8 Hz, 17 Hz e 26 H 2, P 'CH=U H), 7,30 '-7, 3¾¾ ( | {"1 H, iTi r-5 » r h), 8, €50 ; (IHj s, H-2 /H-8 5 8, 73 <1H, s. H—2/ H-8) M+ 641,2459, 1 64i^2479.

Encontrados „,._N „010 „PSi requer s 4/ *4- 4 b) Uma mistura de CE)~6—cloro—9—Ε2—(t—hutildifenilsili— loxi)mefciI-4-di-isoprapoxifasfariI)but-3-enil3purina (244 mg, 381 μοοί) e acida de sódio (25 mg, 381 pmo1) em Ν,Ν-dimetilformamida (7 ml) foi aquecida a 7®°C durante 2,8 horas» 0 solvente foi removido e o resíduo foi purificado mediante cromatografia sobre gel de sílica, usando como eluente acetona-hexano (ls4, isl), obtendo-se (E)—6—a2ido—9-L2- (t-bu.ti Itíif enilsi 1 i loxi )meti 1-4-- (dl-—isopropoxifosforil)but—3—enil3purina sob a forma de uma goma (186 mq, 75%). lambda , (EtOH)5 282 (10 363) nm. ma κ nu máx (película) 298©, 2935, 2155, 1640, 1375, 1250 e 1110 cm , Λ \ , Λ \ <C DC1 5 1,0© „ -í J. ς 40 <2 . rf i 1 ih, ffl 5 0 :t-Ç ), 3, ©5 ( 1H, Hf, CH) , 3,7© ί 2Η, CH 20) 5 ^ 3 3©—4 ,8© í 4H, Iti 5 CH?N ! e CH (03 ) ) cr cro í$ w q wU < 1Η, m, PCH= CH) 6 5 7© < 1H , m, PCH “CH y 4 3©~ 7,7© (1 ©H, ín, L· λΗ_γ) , 1 6 Ο %86 ί ©, 3*5Η, S »ί H- 2/H -8) 3 8, <0, 65H, S 5 H~2/ H—8), 8,6 4 / Λ. "Ρ·2ΤΓ 1 Φ ? o»%jr 1 , S , Η-2/Η- .Ο 1 5-« / jf Q * 3 44 < ©, 65H, -· η H-2 /H-8) t EMBAR (TDE/Wa). 67© (MNa ), 648 í MH") =

Mistura de tautómeros acido s ί-e traço Io» c) Uma solução de (E)-6-acido~9~C2~ít-butiIdifeniIsi1i~ Iokí ) meti 1-4- (di-isopropawifosfori 1) but—3-ersi 11 purina (320 mg, 494 μπ)ο1) e trifeni 1 f osf ina í Í94 mg3 741 umol) em tetr&hidrofura— no (15 ml) foi agitada à temperatu ra ambiente durante 21 horas» A solução foi aqueci da até 7© °C e f cã -lhe adicionado ácido ciorxdríco (259 μΐ, 1 ,29 mmol). Passadas ’ 2 horas, o solvente foi removido e o resíduo foi dissolvido em cloreto de hidrogénio metanélico a % cí© mi) b a solução foi -3.Q Í. ‘L S.d 3. ct temperatura te 2 hc iras. 0 so 1 ven te foi removi d 0, 0 resíduo foi água e a solução foi nei .1 c r” a ã içada mediar vte a adição de solução aquosa de bicarbonato de sódio. A solução foi evaporada até à secura e o resíduo foi purificado mediante eromatogra-fia através de uma coluna de gel de sílica, usando diclorometano--metanol C 9 s 1 , 6 s 1 > como eluente, obtendo-se o composto em epígrafe sob a forma de um sólido branco <124 mg, 63%), p.f. 13©*C»

lambda t (EtQH)s 261 (13 ©74) nm= ma.K Π'-ί^,, (KBr) s 3325., 298©, 1645, 16©©, 14/5, 142©, 124© e 99© cm ©7 C1H, ffi, CH) , , 3,5© (2H, -,.)), 4,27 (31 1, m, ch._;n Í1H, fft. I ( t. \ Lí LS_ww -? b μ. Cf J, v is *-? 4. J“5 Hz, CtLO>, 4,1© \ .- CHiCH_,.>) , 4599 íll-i, t, J~o Hz, OH permutável dom* -Ο-,,Ο) , 5,59 <1H, dd, J=í7 Hz e 2Í Hz, PCH=CH), 6,52 Í1H, ddd, J=8 Hz, i7 Hz e 22 Hz, PCH-CH), 7,16 <2H, s largo, NH^ permutável com D._,0), 8,07 ( 1H, s, H-2/H-8), 8,12 (1H. s, H-2/H-8). *CIMS,ls 384 <MH ’ ) vi

Encontrados C^ ®, 5H„G requer Exemplo 17 C 48,92? H 6,90s N 17,58% = C 48,97ρ H 6,94? N 17,85%, < E) -9- (2-“HidroKÍinet i 1-4-f osf onobut-5-eni 1) adenlna·

Uma solução de <E)-9-C2—hidroximetil—4—di-isopropoxifos-foril) but-3-enil iadenina (1€*7 mg, 280 pmol; e bromo t rime ti lsila.no (0,86 g, 5,61 mmol) em N,N-dimeti1formamida <5 ml) foi agitada à temperatura ambiente, sob uma atmosfera de azoto seco, durante 18 horas, 0 solvente foi removido a o resíduo foi removido com metanol (3 vezes) sob a forma de um azeotropo, 0 resíduo foi purificado mediante cromatografia através ds uma coluna de gel de o b ten d o—se sílica em fase reversa usanoo agua como eluente, \i <E)-9-<2-hidro>;imetil“4-fosfQnobut-3~enil >adenlna sob a forma de um s61ido branco (34 mq, 40%), p.f. >300°C» lambda * (MeOH); 262 (10 /04) nm, ma κ nu (KBr)s 3425, 1695, 1640, 1415, 1263, 1229 e 1030 cm" SM l (CD„),_S0/D„0J s 2,73 (1H, m, CH), 3,37 (2H„ d, d=è hz, CH.O) , 4,13 (1H, dd, 0=7 hz e 14 Hz, CH^N), 4,30 (1H, dd, J=7 Hz e 14

Hz, CH._,N), 5,65 Í1H, pseudo-1) , d = 17 hz, PCH-CH) , 65Θ6 (1H, ddd,

- X

- X i 1H H-2/H~8')V· 8,17 C1H, H-2/H-8)= C 37,83 = H 4,83g N 21,75%, C 37,86; H 5,08; N 22,07%. EMBAR ítioglicerol)ϊ 3Θ0 (MH') Encontrado; C, ,>i( „Ne.0„P':'H.-,0 requer; X Vy jl *r w i

Exemplo ib‘

O f C * mm,Ο—. * 2-HidroKlmati l-4~fosf onobut-.5-eni 1) quanina 1 a) A uma solução de 2~-aeetamido--6-ciorapurins‘ rr*~í/ .__ íTlU n

VI Í54 mmol), di-isopropil <E)-3-(t“butildifenilsililoKÍ)-inetil“4“hi-droKÍbut-1-enilfosfonato (775 mg5 1,54 mmal) e trifenil fosfina (606 mg,, 2,,31 mmol) em Ν,Ν-dimetilformamida, agitada a 6°C sob uma atmosfera de azato seco, foi adicionado azodicarboxilato de dietilo (0,40 g, 2,31 mmol). A solução foi agitada â temperatura ambiente durante 16 horas, 0 solvente foi removido e o resíduo foi purificado mediante cromatografia através de uma coluna de gel de sílica, usando acetato de etilo e depois (acetato de etilol—metanol C19s1) como eluentes, obtendo-se CE)—2-aceiamido— —9- C 2- (t--bu ti 1 d i f en i 1 s 11 i 1 o x i ) ma t i 1 -4-d i - i so p rα ρο κ i f os f o r i 1) bu t-—3-enill—6—cloropurina sob a forma de uma goma incolor (390 mq, 36%) . lambda (EtOH)s 224 (29 735), 26Θ (8 593) e 289 (9 915) nm-

HtUX nu (Ktír)s 298β, máx _.f 1235 cm . 293Θ, 1695, 1610, 1575, 1515, 1375, 1285 3 (3H, s, NCOCH. 60 (4H, m, CH,N < 3, Θ0 <CDC1-/)5 1,09 (9H, s, CÍCH_>_>, 2,53 <3 rt ·~· · o á ' ? (1H, ffi, CH >, 3,67 (2H, m, CH._,0), 4,25-

Encontrado; Ο C_.Η -,-Ν^,Ο,-ΟIPSi requer; ο4 4ο Ο 5 1 W=A„ Bowles e outros, 3. Hed. Chem.9 6, p, 4715 1963, Ο ί ; ν es eso J r. ϋθ (1H, ps eudo-t, 3=18 hz, PCH=CH), 6,6/ ( 1 H j Ciud j :_í ~":Cj Π ál 5 X f Hz e 22 Hz PCH=CH) , 7,5Θ C10 H, m, L-, H—) *7 PA ΠΗ i 5 wO ·. i i 5 5 23· 5 H—8) , 8,29 i 1H, s largo, MH permutável com & -uJ Do0). Μ' 698,2697 = Η+ 698,2695; b) Uma solução de íE)-2*-acetamido-9—C2-Ít-butildifanil-si 1iioxi)metiI~4-di~isopropoKifosforiI)hut-3-eni13-è~cloropurina (330 mg, 473 pmol) em cloreto de hidrogénio metanolico a 77, foi agitada è temperatura ambiente durante 7 horas, 0 volume da solução foi reduzido para 1/3 e, em seguida, a solução foi neutralizada mediante a adição de solução saturada de bicarbonato dí=? Sud lo < 0 solvente foi -emovido s o resíduo foi purificado mediante cromatografia através de uma coluna de gel de sílica, usando d icl arome tarso-metanol <Í9sí, 6sí) como alusnta, obtendo-se < E) ~2-amino~9·- C 4- < di-isopropoK i f osf ori 1) -2- (hidrox imeti1) but-3-e-nil3-é-metoxipurins sob a forma de uma goma incolor i Í4® mg, 79"/ j / i. fu I u t_y lambda , (EtOH)s 249 (8 632) a 283 (9 '086) nm<> ma>í nu , C t mâx — I âár); 3335 , 2980, 1610, 1585, 1475, 1410, 140® £V 125Θ cm * . *H C (CD^j^.SUJ ; 1,1© U2H, m, CH(CH^)^), 3,02 UH, m, CH) 5 •5 » <2H, t. 3—5 Hz, CH,0), 3,94 (3H, », CH.,0) , 4,10—4,40 \4H, m? CH^N e CH(CH_ 4,97 (1H, t, J=5H z, OH permutável com D^0> B 5 ç 61 (1H, dd5 Ί—17 Hz e 2¾ Hz, PCH—CH), 6,43 (2H, s largo, NH0 permutável cora D,,Q), 6,50 < 1H, ddd, J=8 hz, 17 Hz s 22 Hz, PCH=CH), 4. * /,80 (1H, Sj H”8)« V- ν'

Encontrados MH ‘ 414,19®® rsquers MH 414,1906 c) Uma solução de CE) ri1)-2-ChidroK imeti1)but-3-eníI μιτιοί) e bromotrimetilsilano íi, -2~aminG--9--C4- (d i ~ i so ρ r ο ρο κ i f os f o~ 3-é-me toííi purína 8135 mg, 327 ® g, 6,53 miTiO 1) em Ν,Ν-dimetilfor- mamida (5 ml) foi agitada à ra de azoto seco durante 18 temperatura ambiente sob uma. atmosfe— horas. O solvente foi removido e o

resíduo foi removido sob a forma de um azeotropo com metanol (3 vezes). D resíduo foi purificado mediante cromatografia sobre gel de sílica em fase reversa, usando água como eluente, obtendo--se o composto em epígrafe sob a forma de um sólido branco (42 mg, 4-¼)%), p«f«.? 3w®'~'C , lambda Λ mã (MeOH): 256 (7 4®2> nm. nu , ÍKBr) m|oí c m 3425, 1715, 164®, 161®, 14S€?, 141®, 138® e 116® ΠΜ Oi u 1- *. « -&· 9 wv Ui 9 Vi i / 5 vj-rv 4.Π b tí * — w f,/i? vnnu / 3 ‘TjV-í Γ1 -J* 4Í j£. (2H, íti? CH^N) , 5,73 <1H, pseudo-1, J = 18 hz, PCH-CH) , 6,35 (1H, ddd, -3=7 Hz, 17 Hz e 22 Hz, PCH=CH), 6,35 (1H, ddd, 3=7 hz, 17 Hz PCB=CH>, 6,5® í2H, s largo, NH0 permutável com D.,,0) , 6® CíH, -s, H-S), 1®,56 Í1H, s largo, H-l permutável com D._s0) „ ;+ , EHBftR (tioq1 icerol)s 316 (MH 5,

Li v’0 n sj j' 1 4,82; N 21,58% C 38,19; ! •Ϊ 4,77; N 21,84%

Encontrado; C, ,.H, lw 14 5 5

Ac ti vi d ade an t. i v i ra I , Teste ds redução das placas para vírus Herpes Simolex i «

Cultivaram-se células MRC-5 de modo a confluírem em muitipratos com 24 cavidades ídiâmetro das cavidades = 1,5 cm), fts camadas monoceiulares drenadas foram infectadas, cada uma, com aproxirnadamente 5© partículas infecciosas de vírus Herpes SimpleK 1 (HSV-i, estirpe SC 16) ou de vírus Herpes Simple.x 2 íHSV-2„ estirpe MS) em 1 0*3 μΐ de solução salina tamportada com fosfato. 0 vírus foi adsorvido durante 1 hora à temperatura ambiente. Após adsorção, o inoculado residual foi removido de cada cavidade e substituído por © 55 ml de MEM de Eaçsle contendo 5¾ ds sorD de Vitelo recém-nascido e de agarose (A37). Uma vez depositada V> a agarose, adicionaram-se diluições do composto do teste, preparado em HEM de Eagle (contendo 5% de soro de vitelo recém nascido), recebendo cada cavidade 0,5 ml de cobertura líquida. 0 composto do teste foi diluído de modo a obter-se a seguinte série de concentraçõess 23Θ, 60, 2ô, 6, ... , β,θό pg/ml. As concentrações finais utilizadas no teste estavam, por conseguinte, compreendidas entre 10Θ p.g/ml e €*,Θ3 pg/ml. As culturas infectadas foram incubadas a 37°C numa atmosfera humidifiçada de 00^ a 5¾ até serem nitidamente visíveis as placas formadas (geralmente 1 dia). leste de-redução das placas para vírus da varicela—zona

Cultivaram-se células MRC-5 de modo a confluírem em muiti-pratos com 24 cavidades- (diâmetro das cavidades =1,5 cm). As camadas monocelulares drenadas foram infectadas, cada uma, com apro:·;imadamente 5Õ partículas infecciosas de vírus da varicela--zona (VZV, estirpe Eilen) em 1ΘΘ μΐ de solução salina tamponada com fosfato» 0 vírus foi adsorvido durante 1 hora à temperatura

S V ambiente. Após adsorçSo, o inoculado residual foi removido de cada uma das cavidades e substituído por 0,5 ml de MEM de Eagle contendo soro inactivatío por acção do calor ds vitelo no estado de feto e ®,9X de agarose (A37>. Uma vez depositada a agarose, adicionaram-se diluições do composto do teste, que tinha sido preparada em MEM da Eagle (contendo 5% de soro inactivado por acçSo do calor de vitelo no estado de feto), recebendo cada cavidade 0,5 ml de cobertura líquida. 0 composto a testar foi diluído de modo a obter-se a seguinte série de concentraçõess 200, 60, 20, 6, «»», 0,06 pg/ml. As concentrações finais utilizadas no teste estavam, par conseguinte, compreendidas entre 100 pçj/ml e 0,03 pg/ml» As culturas infectadas foram incubadas a 37°C numa atmosfera humidificada de CO^ a 57. até serem nitidamente visíveis as placas (5 ou & dias).

As culturas de 1 e 2 foram fixadas em (solução salina)--formal, as coberturas de agarose foram cuidadosamente removidas por lavagem e, em seguida, as camadas monocelulares foram tingidas com carbol fucsina. Utilizou-se um estereomicroscépio para cantar as placas. A IC^ (concentracão do medicamento que inibe o número de placas formadas em 50%, relativamente ao número de placas observadas em camadas monocelulares de vírus que servem de controlos) do composto a testar foi determinada. As camadas monocelulares foram também examinadas quanto è presença de citotoxicidade induzida pelo medicamento. A concentração mínimas causadora de citotoxicidade foi registada» 3c Teste de redução de placas para citomeaalovírus

Cultivaram-se células MRC-5 de modo a confluírem em multi-pratos com 24 cavidades (diâmetro das cavidades = 1,5 cm). As camadas monocelulares drenadas foram infectadas, cada uma, com aproximadamente 5Θ partículas infecciosas de citomegalovírus

ÍCÍiV, estirpe AD-169) em 1W μΐ de solução salina tamponada com fosfato» O vírus foi adsorvido durante í hora à temperatura ambiente» Após adsorção, o inoculada residual foi removido de cada uma das cavidades e substituído por 0,5 ml de HEM de Eagle contendo soro inactivado por acção do calor de vitelo no estado de feto e &,9% de agarose (A37)» Uma vez depositada a agarose, adicionaram-se diluições do composto do teste, que tinha sido preparado em ΜΕΓ1 de Eagle (contendo 10% de soro inactivado por acção do calor de vitelo no estado de feto), recebendo cada Q> cavidade 1 ml de cobertura líquida» 0 composto a testar foi diiluído de modo a obter-se a seguinte séria de concentrações? 200, 60, 20, 6, .0,06 pg/ml» As concentrações finais utilizadas no teste estavam, por conseguinte, compreendidas entre 1ΘΘ pg/ml e 0,€*3 pg/ml. As culturas infectadas foram incubadas a 37°C numa atmosfera humidificada de C0o a 5% até serem nitidamen- jL, te visíveis as placas (cerca de 12 dias)»

As culturas de 1 e 2 foram ficadas em (solução salina)— —formal, as coberturas de agarose foram cuidadosamente removidas por lavagem e, em seguida, as camadas monocelulares foram tingidas com carbol fucsina» Utilizou-se um estareomicroscópio para contar as placas. A (concentracão do medicamento que inibe o número de placas formadas em 50%, relativamente ao número de placas observadas em camadas monocelulares de vírus que servem de controlos) do composto a testar foi determinada. As camadas monocelulares foram também examinadas quanta è presença de citotoxicida.de induzida pelo medicamento. A concentração mínima causadora de citotoxicidade foi registada. 4. Teste de inibição de CPE (camada monoceluiar estabelecida) para lentivírus

Caloca ram-se 4 10 células de plexo coroidal de

. ,s Λ \

carneiro (SCP = “sheep choroid plexos") em cavidades individuais de uma placa de roicrotitulação com 96 cavidades em 1ΘΘ μΐ de "Eagle's MEH" com sais de Hsnks contendo 10% de soro inactivado por acção do calor de vitelo no estado de feto (FCS = "foetal calf seruin"). Uma vss estabelecidas \o que sucede após 1 ou 2 dias de crescimento) as camadas monocelulares foram lavadas com 2€j0 μΐ de meio de manutenção <MEH de Eagla MEH com sais de Bank contendo €*>,5% FCS) e infectadas com 1©Θ μΐ de vírus Visna (estirpe Kl84) em meio de manutenção <30 TCID^/ml)» As amostras do •JEv“í teste foram diluídas com meio de manutenção noutras placas de microtitulação com 96 cavidades até se obterem concentrações compreendidas entre 200 μ-g/ml e ?§ s Θ6 pg/ml mediante etapas de diluição triplas. Transferiram-se então 1@@ yl das amostras diluídas directamente para as camadas monocelulares infectadas com vírus (concentrações finais compreendidas entre 1ΘΘ e @,03 μα/ml) e incubadas numa atmosfera humidificada contendo 5% de QOj até o CPE induzido pelo vírus ser máximo nos controlos infectados pelo vírus e não tratados (geralmente 12 a 14 dias). As placas foram fixadas com (solução salina)-formal e tingidas com violeta cristal. O CPE induzido pelo vírus foi então avaliado microscopicamente e foi determinada a concentração mínima da amostra que proporcionava uma completa protecção das camadas monocelulares (MIC).

5. Teste para o vírus da imunodefici'ê~ncia humana (HIV? aí Teste da citotoxicidade cejjjlar

Isolaram-se lintácitos humanos periféricos mediante centrifugação de gradiente de densidade a partir de doações de sangue de voluntários saudáveis. As fracções "coágulo branco" destas doações foram fornecidas por centros de doação de sangue. -X ~ Ο coágulo branco foi diluído com solução salina tampo-nada com fosfato estéril ÍPBS5 fosfato de sódio 5Θ mH, pH 7,4, cloreto de sódio a θ,9%) e subsequentemente colocado em camadas sobre Ficoll» Após centrifugação (30 minutos a x g), o sobrenadante foi eliminado e a interfase contendo os lintácitas foi recuperada. Os linfócitos foram lavados por duas vezes em PBS e foram novamente suspendidos em meio de cultura de células»

Realizou-se um tingimento de viabilidade mediante o método de exclusão do corante azul tripano» A concentração de células na suspensão e a percentagem de células viáveis foram calculadas» Subsequentementer, a concentração da suspensão de 7 células foi ajustada para 1x10 células/mi = Esta suspensão de células foi transferida para recipientes de cultura de tecidos» Dois terças da suspensão de células foram policlonalmente activa-tios mediante a adição de fito-hemaglutinina (concentração final 5 pg/ml)» Um terço da suspensão de células não foi estimulado»

Os linfócitos foram cultivados num incubador numa atmosfera humidificada com C-„ a 5% durante 48 a 84 horas a 37°C»

Após este periodo de incubação as células foram colhidas mediante centrifugação,, novamente suspendidas num meio de cultura de células e contadas» As células estimuladas e não estimuladas foram combinadas na proporção de 2í! s a sua concentração foi 6 ajustada para 2x10 céiulas/ml com meio de cultura de células que continha ainda 10 unidades/ml da interleucina-2 recombinante humana.

Apenas se utilizaram no teste de rastreio aquelas preparações em que mais de 7€*% dos linfócitos estimulados manifestavam o antigénio CD 4» ir

_ · λ \ a

Adicionaram-se ί€>β ug desta suspensão de linfócitas cada cavidade da placa de microtitulação contendo os compostos do teste serialmente diluídos5 com concentrações compreendidas entre 10€í μΜ e 1 μΜ, Bubsequentemente, as placas de microtitulaçlo- faram cultivadas durante 4 dias a 37'-'Ca

A sobrevivência e a proliferação dos linfócitos cultivados na presença do composto foram medidos através de um ensaio colorimétrico quantitativo» As células viáveis cultivadas na presença do corante MTT (3(4,5 dimetiltiazol-2-il)-3,5-difenilte-trazólio) reduzem este substrato amarelo pálido para formazano púrpura mediante a actividade das suas desidrogenases mitocSndri— cas= A quantidade de produto que é uma função do número de células e da actividade celular metabólica foi quantificado fotometricamente. Através deste teste tietectaram-se com precisão os efeitos citotóxicos e cito-estáticas sabre os linfócitos.

As placas de m i c r o t itu1ação foram centrifugadas durante 5 minutos a 90® x g. 0 sobrenadante foi eliminado e as células de cada cavidade foram novamente suspendidas em 5® μΐ de meio de cultura celular contando 2 mg/ml de MTT. Passadas quatro horas de incubação a 37C'C, adicionaram—se a cada cavidade 1ΘΘ μΐ de solvente íisopropanol com HC1 Θ5®4 N e 1®% ív/v) Triton 1®®). A agitação das placas de microtitulação permitiu que o formazano se so1ubilizasse.

Subsequentemente=, as placas foram avaliadas num fotóme-tro ELISA no modo de comprimento de onda dual (comprimento de onda de mediçãos 55® nm, comprimento de onda de referências 69® nm) = absorçSes

Para cada cavidade, calculou—se a diferença entre as <abs« 55>® nm - abs 69® nm). Estes dados proporcionaram - v * \ Z' a base para uma avaliação de» Calculou-se s. CE* 50 para cada composto» complementar do fcesteíde- citotoxicida-(dose citotóxica semimâxima) aproximada

b) ieste de supressão rin HTU

Prepararam-se, cultivaram—se e colheram—se linfócitos humanos periféricos de modo semelhante ao atrás descrito» Seguindo a determinação dos marcadores de superfície dos linfócitos, combinaram-se as células não estimuladas e estimuladas com mitogénios na proporção ís2*

Sob condiçSeg de segurança estas células foram infectadas com uma preparação padrão de HIV» As células foram sedimentadas mediante centrifugação» D sobranadante foi eliminada e as células foram novamente suspendidas no inoculado de HIV»

Este inoculado é uma suspensão líquida do vírus da estirpe HIV-1? previamente testada e com um titulo ajustado para um valor tal que se verifique uma síntese da proteína do núcleo virai p24 numa concentração >100 ng/ml no dia 4 após a infecção dos linfócitos humanos de acordo com o protocolo do teste. p

Suspenderam-se novamente 3x10” linfócitos em 1 ml de inoculado HIV e incubaram-se a 37°C durante 60 minutos» Subsequentemente, as células foram lavadas por duas vezes com 50 ml de meio de cultura contendo 10 unidades de interieucins-2 recombi- 6 nante humana, obtendo-se u.ma concentração de células de 2x10' células/ml» Adicionaram-se 1ΘΘ μΐ desta suspensão celular a cada cavidade das placas de microtitulação contendo as soluções diluídas dos compostos» As placas de microtitulação foram cultivadas num incubador numa atmosfera humidificada com CO^ a 5% a 37 °C»

Em conformidade 1 infócitos com a mesma pr vada por acção do calor (

O

Em cada um dos dias 2?3 e 4 após a infseção5 preparou--se uma das placas de microtitulação que tinham sido estabelecidas em triplicado de modo a poder avaliar-se a replicação virai» 0 RNA virai foi determinado no interior das células enquanto que a proteína do núcleo virai p24 foi detectsda no sobrenadante da. cultura de 1infócitos» eram-se Í5ô μιΐ de s- o b r e n a d a n t e de para a cavida de de uma placa ds? vidade de SDS Cd ode cilsulfato C30 sódio,, v?®o%) „ Estas placas foram armazenadas sob congelação. .onaram— se 5€> |i 1 ds soluç So de paragem <u Stop* 1} \ SDS — 4 s/ tó j. U jf ito de s odio 2 kr mM ? pH fS „ 0 e μια/ml de he parin a) às âS que permanec :iam em cada cavidade» As Pl is r* pi cr f oram armazenadas sob congelação, A concentração de p24 sintetizada pelas células infectadas com HIV foi determinada mediante um ELISA sanduíche,

-enquanto que a concentração de KMA Ί VXf di 1 e t e r minada quanti - tativamente mediante hibridizaçâo de ácidos nuclsicos com o auxxlio de uma sonda de DMA marcada com "“‘“P para a regi3o qag/pol do genoma virai„ Os níveis absolutos do antigsnio virai e de RNA nas amostras tratadas com medicamento foram comparadas com os controlos não tratados» infectados com o vírus a a percentagem de inibição foi calculada» V. V * *:/ν.

- Λ ^ 6, Testa para ο vírus da imunodeficigncia felina (FIV) Ο

y

Biluiram-ss “stocks'1 de medicamento num meio até se obter a concentração apropriada (por exemplo í© mg/ml a 2©© mg/ml). Dispersaram-se em triplicado Í5ô μΐ de cada medicamento pela fila superior de uma placa de microtiiulação <15€> μΐ de meio para o vírus e o controlo celular, ve e cc>« Dispersaram-se 1©© μΐ de meio em todas as outras cavidades, As cavidades foram serialmente diluídas movendo para baixo a placa, removendo 3© μΐ de cada cavidade e transferindo esse volume para a fila seguinte, Eliminaram-se 5© μΐ das cavidades inferiores»

Efectuou-se a tripsinizsção a partir de uma camada monocelular confluente de células de rim felino Crandell, em tripsina a i©%, a que se seguiu uma nova suspensão em meio com uma concentração de 1x1Θ~ por ml, assegurando a obtenção de uma suspensão unicelular, (Meios IxRPMI a 9©%, tampão hepes 25 mH, soro de vitelo no estado de feto a !©%, glutamina a 2%, penicili-na/estreptomicina a 2%),

Diluiu-se o vírus F.IV Blasgow 8 para 4 vezes o desafio virai requerida num meia (4© TCID^/ml) < 0 meio infectado pelo vírus foi misturado com um volume igual de suspensão celular © dividido em partes aliquotas de 1©© μΐ por cada uma das cavidades da placa contendo medicamento excepto pelas que continham controlo celular. Adicionaram—se 1©© μΐ de suspensão de células com uma concentração de 5kí©4 por ml a estas últimas, Obteve-se uma concentração de células final de 2,5xl©4 por ml e uma concentra ção de medicamento compreendida entre l©©pq/ml e ©,©3 ug/ml - As placas foram incubadas a 37°C, numa atmosfera de C0„. a 57 num incubador de ar humidificado durante 11 a 14 dias. As células foram fixadas mediante imersão em (solução salina)-formal íl©% de formaldeído, 10% de NaCl 1,5 M, 8©% de água) durante um míninia de

1 hora» As células foram tingidas com violeta cristal a 1Θ% durante 15 minutos 0 teste consistiu na procura, da. presença de sincícios e efeitos citopáticos nas camadas monocslulares sob um microscópio. Os resultados sSo apresentados como as concentrações mínimas de medicamento susceptiveis de inibir a produção de sincícios ou concentracSo inibitória mínima MIC.

Os resultadas dos testes 1 a 6 sSo os seauintes;

do herpes hc t ividade an t i v i ral c an traviru’ 1 Cu... (UQ/fTsl) ---==—--

Exemplo nS HbV-1 HSV-2 VZV Cf -IV i .-•7 **V ‘••.O 0 5 16 L· 100 26 55 15 11 10Θ >100 >100 55 13 100 60 5 1 w 17 20 29 <3 11 Nao se observou. citotcxicidade nas camadas monocelula— res com concentrações dos compostos até 1ΘΘ pg/ml nos testes do HBV- -13 HSV-2 e VZV. No teste do CMV observi □Li-se c i totoK ic idade para concentrações de 1Θ pg/ml, no Exemplo 1 = irus Viso a

Actividade antivira1 contra

Exemplo nS MIC <ug/mí) 1 < 0-, 00! „ 10 cr 4 X €3 0,1 s 0 = 3 10 1Θ0 11

Para 03 p ct Γ* -5 Θ. tóxi concentrações até W& ptg/ml os compostos camadas monocelulares SCP utilizadas nos nSo eram testes a »

Inibição percentual no dia 4 aaás a infeccSo

Exemplo ny

Cone( pM) ftntiqénio virai

RW 1

aí 1 0,1 93 Q7 3 10 44 r\ LJ 10 37 62 11 10 3 Obse rvou-ss uma ligeira toxicidade CxnxbXÇãD £ííTí 18%) 0,1 μΜ na caso do composto do Exemplo 1, apesar da CEw 1 5« ser 1 μΗ =

•IV ftetividade antivirai cani

Exemplo nS MIC (ua/ml) 1 ® ,01 3 10 4 "P* XO 0,10 15 3Φ * 17 0 » 0 -i': Não se observou, citotoxicidade para as camadas monoce· lulares com cones n trações de 100 pg/mi nos Exemplos 17 e de pg/ml no Exemplo 13» Ό

Claims (4)

1. L L — Reivindicações n r rparaw3□ lã — Processo par de um composto da

   fórmula I pf

   (I) em que X representa —CH^G ou ~CH-, representa hidroxi ou. a mino, R.-s representa hidrogénio ou araino, -Ο R_ representa hidrogénio, hidroximetilo ou aeiloximetilo e Ra representa um grupo da fórmula 0 OR, / P \ OR.. Õ em que do C um Rr_ e R.. são se-lecc tonados, independentemente outro, entre hidrogénio, alquilo com 1 a 6 átomos de e fenilo facultativamente substituído. ou de um sal farmaceuticamente aceitável de um composto da- fórmula I, caracterisado por se condensar um composto da fórmula II, Cl

   (II) com um intermediário BA cadeia lateral da fórmuli R-'HC-CHCHR^'CH„OH (III) SÍTS D LX\B 5 11 i - ο ) Y representa OH quando X representa — UH.-^U na fórmula I e representa H quando X representa -ΟΗ.^ na fórmula I, R, ' , K_ ' , FU'' b Rrepresentam R 15 R..T e Ka , respectiva- mente, ou. grupos ou átomos convertíveis em RJ K«, R- r4* e em seguida, se desejado ou necessário, se converter R , R._ " , no caso de não representarem R„ , R^, R_ e/ou. R,, em j. ' j-' -· 4 ' R. e/ou R4 O 3 ji Η-?. ' e/ou 1 R,' 'upos dif e Rh , R„ κ K_ e/ou R,, respectivamente, e/ou se converter R ' ? ’ y ' /·. il * 1 » i R ? ll: um em sa 1 farmaceuticamente aceitável do composto resultante. - £ J, V ' 21 — Processo para 'a preparação dè uns composto de acordo com a reivindicação 13 caracterizado por Rj representar hidra;; i s R^ representar a mi no» 31 ~ Processo para a preparação - de um composto de acorda com a reivindicação i, caracterizado por R., representar amino e representar hidrogénio» D
2. 41 - Processo para a preparação de um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações í a 3, caract eriçado por R^. representar hidroximetilo. hã ·- Processo para a preparação de um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4» caracterizado por Rg e representarem ambos hidroqénio» &ã - Processo de acordo com a reivindicação i3 caracterizado por se preparar a (E)~9-C4·—fosfonobut-3—eniloxDguanina. 7ê - Processo de acordo com a reivindicação j cara;— terizado por se preparar a (E)-9~C4-Cdi-isaprQpoMxfosforiilbMt-3-—eniloxiUadenina.
3. 81 - Processo de acordo com a reivindicação 1? caracterizado por se preparar a ÍE)-9-(4-fosfonobut;_3-^riilaxijadeninai Processo rfs acorda com &. rsivindi caÇãa l? csrae- terizado por se preparar a <EÍ-9-C4-(di-isopropoxif0sfciriljbut-.3--enil3adenina. terizado por se preparar a <E) -9- (4-fasfanabut-3-eniI) aden j jya - processo de acordo com a reivindicação i? carac ina,

   — 0Ύ líã - Processo de acordo com a reivindicação I, carac terizado por se preparar a CE) —9—C4-fosfonobut—3—enil)guanina« i2-§ - Processo de acordo coo a reivindicação i ? carac·· terizado por se preparar a CE)~23è-diamino--9-C4—di-isopropoxifos-foril) but-3~en.il 3purina, acordo com a reivindicação 1, carac-a < E) -2 = éj-diamina-9- í 4-f osf onobut-3- Ç* 13i - Processo de terizado por se preparar -enil)purina =. r > 14§ — Processo de acordo com a reivindicação 1, carac- terizado por · se preparar a íZ)—9—C4- ídietoKifcssforil) but o enz 1dmi 3 aden ina» 15â — Processo de acordo com a reivindicação 1, carac— terizado por se preparar a (Z5-9-(4-fo· sfonobut~3-en iIoh i)adenina« 1 é>ã - f-* r nr 0S3O de acordo com a reivindicação 1, carac” terizado por · preparar a < z )-9-(4-fa sfonobut-3—eniIok x ) guan ina„ 17§ “ Processo de acordo com a reivindicação 1, carac- terizado por se preparar a íE)-9-C4-di —isopropoxi fosfor il) -2-( hi- droximeti 1) bu. 3-en i1ox i Jguan ina. 18ã — Processo de acordo com a reivindicação i , ΙπάΓ -SC! terizado por se preparar a (E)-V—C2—hidroKimeti1-4-fosfonobut-3· -eniloxi )guanina« Í9ê — Processo de acordo com a reivindicação i, carac terizado por se preparar a <E)-9“-C4-ídi~isopropoxifosforil )-5 — ( h i d r o x i me til) bu t—3—en i 1 o x i 3 aden ina* X. V % -X V 20à - F* rXíi-SS —*CI de acordo com a reivindicação 1, carac--· terizado por se preparar 3. CE )-9--C 2- h i d r ο κ i me t í 1 -4- f os f on o bu t -.5- -••en i 1 o x i) a d en i n *5 « 21 a - Processo uS acordo LUíU â reivindicação 1, carac- terizado por se preparar a (E}-9-C4~<di-- isDpropoMÍfosfariI )--2---(hidroximstii)but-3—sni1ladenina. 22ã - Processo de acorda com a reivindicação í carac~ terizado por se preparar a (E>-9-C2~hidro;< imet íI-4~fosfonobut-3--enilJadenina,
4. 232 - Processo de acordo com a reivindicação í ,, carac-terizado por se preparar a íE}~9~C2~hidroxiffietil-4-fosfonobut~3--en 11) puam na « 24 é Método para o tratamento de inf ecc-Ses virais de doenças neoplásticas em mamíferos, caracterizado por o Li administrar uma quantidade eficaz de um composto da fórmula I, tal como foi definida na reivindicação I, ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável a esses mamíferos, sendo a gama de dosagem de composto activo de desde ί,θ até 2Θ mg por quilograma de peso corporal por dia= Lisboa, Í7 de Julho de 1V91

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