PT96966B

PT96966B - Processo para a preparacao de 7-(difenilmetil)oxi-9a-metoximitosano

Info

Publication number: PT96966B
Application number: PT96966A
Authority: PT
Inventors: Daniel A Benigni; Kenton L Shultis; Henry She Lai Wong
Original assignee: Bristol Myers Squibb Co
Priority date: 1990-03-08
Filing date: 1991-03-07
Publication date: 1998-07-31
Also published as: US5075454A; US5352798A; KR910016754A; CA2037687A1; KR0152495B1; ZA911672B; ATE125811T1; EP0445813A1; IE68314B1; DK0445813T3; DE69111640T2; CA2037687C; TW219938B; AU630022B2; JP2991348B2; PT96966A; DE69111640D1; CY1885A; AU7269891A; FI911184A0

Description

DIRECÇÃO DE SERVIÇOS DE PATENTES

Data do pedido

Classificação Internacional (at)

FOLHA DO RESUMO (Continuação)

Resumo (continuação) (57) 2 inesperadamente elevados ao realizar um processo que consta de duas fases, procedendo-se na primeira à conversão no 7-[2-(2-pi ridilditio)etilamino]-9a-metoximitosano ou no 7-[2-(3-nitro-2-piridiltio)etilamino]-9a-metoximitosano.

NAO PREENCHER AS ZONAS SOMBREADAS

Q Agente Oficia| da Propriedade Industriai

' DSM-5 _________

PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO PE

7-(DIFENILMETIL)OXI-ga-METOXIMITOSANO

Campo Técnico

A presente invenção diz respeito a um novo mitosano que é útil como composto intermédio, por exemplo, na preparação de derivados de mitomicina C em que o grupo 7-amino comporta um substituinte orgânicoque contém um grupo dissulfureto e que tam bém é útil para inibir o desenvolvimento de tumores em mamíferos .

A presente invenção diz ainda respeito a processos para a preparação do novo mitosano.

Esta invenção diz ainda respeito a um processo para a conversão, do referido novo mitosano em 7-[2-(4-nitrofenilditio)-etilamino-9a-metoximitosano.

Antecedentes da Invenção

A mitomicina C é a principal mitomicina produzida por fermentação e está comercializada.

Uma via semi-sintética utilizável para a preparação de

7-amino(substituído)-9a-metoximitosanos , baseia-se na conversão da mitomicina C no produto final através da mitomicina A , como um composto intermédio, sendo a mitomicina C convertida em mitomicina A por hidrólise para formar o correspondente 7-hi droximitosano e metilação com diazometano, tal como é descrito,

por exemplo, por Vyas et al., na patente de invenção norte-ameri cana nQ 4 691 023, ou com 3-metil-l-£-totiltriazeno, tal como é descrito, por exemplo, por Vyas, D. M., et al. em J. Org. Chem., 51 , (1986) 4307-4309.

O procedimento que utiliza diazometano tem o inconvenien te de este reagente ser de manuseamento perigoso e, portanto, in conveniente para síntese de rotina em grande escala. A via de triazeno tem o inconveniente da formação de um sub-produto , a toluidina, que pode reagir com a mitomicina A obtida, e que torna necessária a remoção desta, sendo também necessária a ausência de água porque o triazeno é instável na presença de água.

Constitui um objectivo da presente invenção proporcionar um novo composto que é um composto intermédio para a produção de

7-amino(substituído)-, 7-amino e 7-oxi(substituído)-9a-metoximitosanos que é sintetizado utilizando um reagente muito mais segu ro do que o diazometano, sem formação de sub-produto, e que é facilmente preparado na presença de ãgua e ainda é útil como agente antitumoral.

Constitui ainda um objectivo proporcionar processos para a preparação desse composto.

É ainda um objectivo proporcionar um processo para a con versão do referido composto, em 7-[2-(4-nitrofenilditio)-etilami no]-9a-metoximitosano.

Sumário da Invenção novo composto proporcionado pela presente invenção é o 7-(difenilmetil)-oxi-9a-metoximitosano.

A preparação deste composto, de acordo com um aspecto

da presente invenção, processa-se através do composto conhecido

7-hidroxi-9a-metoximitosano que é facilmente sintetizado a partir da mitomicina C e da mitomicina A. Esta preparaçao consiste em fazer reagir 7-hidroxi-9a-metoximitosano com diazodifeni]. metano para se obter o referido novo composto.

Quando se efectua esta preparação a partir de mitomicina C, pode utilizar-se quer mitomicina C aquosa, proveniente da solução de fermentação que a contém quer mitomicina C sob uma forma sólida. Trata-se a mitomicina C, quer em solução sob a forma sólida, com uma solução aquosa de hidróxido de sódio para se obter uma solução aquosa 7-(sal básico de óxido)-9a-metoximi.

f tosano. 0 hidróxido preferido é o hidróxido de sódio e a reacção com este produz 7-Na⁺0 -9a-metoximitosano. Pode secar-se a solução aquosa do sal de óxido resultante para se obter um resí. duo substancialmente isento de água que se faz reagir com um ãci do ou pode fazer-se reagir com um ãcido sem secagem prévia, para deste modo se obter o 7-hidroxi-9a-metoximitosano.

Começou-se por utilizar o processo que inclui a secagem, isto é, a remoção de água. Prefere-se a liofilização efectuando a suspensão do produto liofilizado (7-Na⁺0 -9a-metoximitosano, utilizando-se uma solução aquosa de hidróxido de sódio como solu ção aquosa de hidróxido) num dissolvente moderadamente polar, por exemplo, acetona, para tratamento com ãcido. 0 ãcido pode estar sob a forma de uma resina de permuta catiónica ou sob a forma de uma solução de ãcido e é utilizada em quantidade suficiente para converter o grupo 7-(sal-de óxido) em 7-hidróxido.

De preferência utiliza-se uma resina de permuta catióni. ca ãcida forte sob a forma hidrogeniónica é o preferido. Quando se utiliza a resina de permuta catiónica, apõs realização da reacção sepa ra-se a resina e evapora-se o dissolvente se este for incompatí.4vel com o diazodifenilmetano.

Faz-se reagir 7-hidroxi-9a-metoximitosano com diazofenilmetano no seio de um dissolvente ou de uma associação de dis. solventes em que sejam ambos solúveis (por exemplo, cloreto de metileno) para formar 7-(difenilmetil)-oxi-9a-metoximitosano . Pode realizar-se a reacção, por exemplo, a uma temperatura compreendida entre 0°C e 30°C durante 1 a 10 horas utilizando um excesso de diazodifenilmetano, por exemplo, 2 a 5 equivalentes de diazodifenilmetano.

Realiza-se facilmente a purificação por cromatografia, por exemplo sobre alumina (Al₂Og) ou sobre sílica (SiO₂).

Pode obter-se material com menos pureza sem cromatografia em coluna, mediante concentração, removendo o excesso de dia zodifenilmetano por partilha com um dissolvente não polar seguido de evaporação. Tipicamente obtêm-se rendimentos de mitomicina C superiores a 60%. Este resultado é inesperado, quando se considera a descrição de Sami, S. M., et al., J. Med. Chem., 30 (1987) 168-173, que indica (pág. 169) que o procedimento de reacção entre soluções de 7-hidroximitosano com diazoalcanos apropriados... não se pode utilizar os diazoalcanos maiores e como Quadro 1, na pag. 170 (composto n° 7) que apresenta um ren dimento de 10% para a reacção do benzildiazometano com 7-hidroximitosano.

Voltando agora ao caso em que não se realizou a secagem, isto é, a remoção de ãgua, em que se tratou a solução aquosa de

7-(sal básico de -óxido)-9a-metoximitosano dírectamente com ãcido. Prefere-se o ãcido fosfórico aquoso misturado de forma a pro porcionar um pH compreendido entre 4,7 e 6,5, com maior preferen cia entre 5 e 6, para se obter uma solução aquosa de 7-hidroxi-9a-metoximitosano. A reacção deste composto com diazodifenilme

tano processa-se do modo descrito a seguir. Mistura-se o diazo dif eni Ime tano. 0 dissolvente em que se dissolve o diazodif enil^ metano e/ou em que este é misturado é um dissolvente ou uma associação de dissolventes em que são solúveis o 7-hidroxi-9a-metoximitosano e o diazodifenilmetano e, de preferência, é uma associação de cloreto de metileno e de metanol, numa relação em volume de cloreto de metileno para o metanol que varia, por exemplo, entre 0,5:1 e 3:1.

A reacção com o 7-hidroxi-9a-metoximitosano processa-se, apesar da presença de ãgua, aparentemente como uma alquilação extractiva em que o dissolvente orgânico extrai o 7-hidroxi-9a-metoximitosano da fase aquosa para reacção na fase de dissolven te orgânico (de preferência cloreto de metileno). A reacção de alquilação para produzir 7-(difenilmetil)-oxi-9a-metoximitosano processa-se, por exemplo, a uma temperatura compreendida entre 0°C e 30°C durante 1 a 10 horas, utilizando-se um excesso de dia zodifenilmetano, por exemplo, 2 a 5 equivalentes de diazodifeni^ metano. Durante a reacção de alquilação, é vantajoso fazer-se a adição periódica do ácido, de preferência ãcido fosfórico aquo so, que for necessário para manter o pH compreendido entre 4,7 e 6,5, com maior preferência entre 5 e 6. Quando se completa a reacção de alquilação, separa-se a fase orgânica e recolhe-se o

7-(difenilmetil)-oxi-9a-metoximitosano substancialmente puro , por exemplo por secagem para eliminar a ãgua e evaporação para eliminar o dissolvente orgânico e recolha do produto existente no resíduo por cromatografia sobre alumina (Ai^O^) ou sílica (SiC^). Pode obter-se mais produto por agitação forte da fase aquosa com diazodifenilmetano num dissolvente para este e para

7-hidroxi-9a-metoximitosano, de preferência cloreto de metileno,

-6' e reacção, vantajosamente a uma temperatura compreendida entre 15°C e 25°C durante 10 a 20 horas, e separação do produto adicional, por exemplo por cromatografia.

Obtiveram-se rendimentos de mitomicina C, incluindo o produto obtido a partir da fase aquosa, compreendidos entre 40% e 60%. Estes rendimentos são inesperados considerando o artigo de Sami et al, referido anteriormente.

Pode fazer-se reagir o 7- (difenildimetil) -oxi-9a-metoxi. mitosano purificado resultante com aminas cujo grupo amino even tualmente substituído desloca o grupo 7-(difenilmetil)-oxi para dar os compostos correspondentes 7-amino eventualmente substitují dos que sao agentes antitumorais conhecidos.

Por outras palavras, faz-se reagir o 7-(difenilmetil)-oxi-9a-metoximitosano com uma amina de fórmula geral RNH ou RNH₂para se obter um composto de fórmula geral 7-RN- ou 7-RNH-9a-metoximitosano, respectivamente, em que R, representa um grupo al.i fático, cicloalifático ou aromático, eventualmente substituído, ou em que R forma conjuntamente com o ãtomo de azoto um grupo he terocíclico. Por exemplo, faz-se reagir o 7-(difenilmetil)-oxi-9a-metoximitosano com £-nitrofenilditioetilamina, por exemplo sob forma de um sal de. adição de ácido clorídrico, em trietilamina/metanol a uma temperatura compreendida entre 0° e 30°C pa. ra se obter 7-[2-(4-nitrofenilditio)-etilamino]-9a-metoximitosano que é considerado como um agente antitumoral por Vyas et al., na patente de invenção norte-americana nQ 4 691 023.

Pode ainda fazer-se reagir o 7-(difenilmetil)-oxi-9a-meto ximitosano purificado resultante, com um álcool basifiçado, verificando-se que, o grupo orgânico do álcool desloca o grupo 7-(di-7-

fenilmetilo). Assim, quando se utiliza hidróxido de potássio/ /metanol, o produto é a mitomicina A.

Quando se substitui o grupo 7-(difenilmetoxi)-oxi por um grupo ditioetilamino substituído é preferível efectuar a reacção utilizando 7-[2-(2-piridilditio)-etilamino]-9a-metoximitosano ou 7-[2-(3-nitro-2-piridilditio)-etilamino]-9a-metoxi mitosano como composto intermédio. Assim, no caso da preparação de 7-[2-(4-nitrofenilditio)-etilamino]-9a-metoximitosano , converte-se o 7-(difenilmetil)-oxi-9a-metoximitosano em 7—[2—

-(2-piridilditio)-etilamino]-9a-metoximitosano ou em 7-(2-(3-nitro-2-piridiltio)-etilamino]-9a-metoximitosano que, num segun do passo se converte no produto por deslocamento do grupo 2-tiopiridilo ou 3-nitro-2-tiopiridilo com 4-nitrotiofenol. Realiza-se facilmente o primeiro passo mediante reacção de 7-(difenilmetil) -oxi-9a-metoximitosano com 2-piridilditioetilamina ou com 2-(3-nitro-2-piridilditio)-etilamina, no seio de metanol e a uma temperatura de reacção compreendida entre 15° e 25°C.

Pode adicionar-se a 2-piridilditioetilamina ou a 2—(3— -nitro-2-piridilditio)-etilamina·sob a forma de um sal de adição do ãcido clorídrico, conjuntamente com trietilamina ou outro agente de neutralização para converter o sal de adição de ãcido na base livre que intervém na reacção.

Embora a reacção de 7-(difenilmetil)-oxi-9a-metoximitosano com 2-piridilditioetilamina ou com 2-(3-nitro-2-piridilditio)-etilamina seja similar às reacções destes com a mitomicina A para formar os mesmos produtos, o rendimento, no caso da preparação de 7-[2-(4-nitrofenilditio)-etilamino]-9a-metoximitosano, é substancialmente superior ao da via directa, do que o'que seria de esperar considerando a diminuição ou a menor percentagem de aumento obtido por um procedimento através do mesmo com-

-8posto intermédio comparado com a via directa para a mitomicina

A.

Na presente descrição utiliza-se um sistema trivial de nomenclatura que tem encontrado grande aplicação na bibliografia sobre mitomicina, para identificar os sistemas de aneis re feridos antes e que incluem diversos dos substituintes caracte risticos das mitomicinas, como o mitosano.

Relativamente à configuração estereoquímica dos produtos da presente invenção, quando se identificam estes pelo nome de origem mitosano ou pela fórmula estrutural para identificar a sua configuração estereoquímica considera-se que ê a mesma da mitomicina C.

Descrição Pormenorizada novo composto da presente invenção, isto é, o 7-(dife nilmetil)-oxi-9a-metoximitosano, apresenta a fórmula

na qual Ph representa um grupo fenilo. Este composto apresenta-se sob a forma de um pó vermelho escuro ou castanho. Tem um ponto de fusão de 96°-97°C e é caracterizado da seguinte forma:

1 RMN- H (pyr-d5) sinais	para	6 .	1,85	(3H, s), 2,04	(1H, t) ,
2,68 (1H, s largo), 3,08	(1H,	d) ,	3,11	(3H, s), 3,43	(lH,d),
3,96 (1H, dd), 4,08 (1H,	d),	5,02	(1H,	t), 5,43 (1H,	dd), 7,19
to 7,38 (10H, m) e 7,42	(1H,	s) ;	UV X	máx (metanol)	206, 325,

528 nm; IV KBr bandas principais 3427, 1730, 1632, 1578, 1450, 1404 e 1330 cm¹.

Voltando de novo ao processo para a preparação do compojs to citado que consiste em fazer reagir 7-hidroxi-9a-metoximitosa no com diazodifenilmetano, 7-hidroxi-9a-metoximitosano apresenta a fórmula:

O

- As preparações deste composto a partir de mitomicina

C e de mitomicina A estão descritas por Matsui, M., et al., The Journal of Antibiotics, XXI (_3) , 189-198 (Março de 1968) .

diazofenilmetano tem a fórmula seguinte:

Pode preparar-se como descrito por Adamson, R. J. et al., J. Chem. Soc. PerkinI, (1975) 2030-2033. Fazem-se reagir estes compostos eventualmente na presença de água no seio de um dissolvente ou de uma associação de dissolventes que não prejudiquem a reacção e em que sejam ambos solúveis, a uma temperatu ra compreendida entre 0° e 30°C durante 1 a 10 horas utilizando um excesso de diazodifenilmetano relativamente ao 7-hidroxi-9a-metoximetano, por exemplo 2 a 5 equivalentes de diazodifenilme tano.

Os dissolventes preferidos são o cloreto de metileno ou o cloreto de metileno e metanol numa relação em volume de 0,5:1 a 3:1 de cloreto de metileno para o metanol.

Outros dissolventes apropriados incluem, por exemplo, acetato de etilo, acetato de iscpropilo, outros ésteres, tetra-hidrofurano, éter dietíiico, outros éteres, hidrocarbonetos ha logenados, tais como , por exemplo, clorofórmio e 1,2-dicloroetano, álcoois como o etanol e os propanóis, e misturas destes.

O processo preferido para a preparação do composto in-11-

termédio citado anteriormente, compreende um passo em que se faz reagir 7-hidroxi-9a-metoximitosano com diazodifenilmetano e que se inicia com mitomicina C como fonte de 7-hidroxi-9a-metoximitosano.

Nestes processos preferidos, tal como se indicou anterior mente, o primeiro passo preferido é a reacção de mitomicina C em solução aquosa de hidróxido para se formar uma solução aquosa de 7-(sal básico de óxido)-9a-metoximitosano que se converte em

7-hidroxi-9a-metoximitosano para a reacção com o diazodifenilmetano. A solução de hidróxido preferida é a solução de hidróxido de sódio. Incluem-se outros hidróxidos apropriados como, por exemplo, solução aquosa de hidróxido de potássio e solução aquosa de hidróxido de litio. Este primeiro passo realiza-se facilmente utilizando uma quantidade de hidróxido superior ã quantida de estequiométrica, por exemplo 1 a 1,5 equivalentes, e fazendo reagir a uma temperatura compreendida entre 30° e 40°C durante 1 hora e meia a 4 horas. Quando se utiliza como hidróxido e hi. dróxido de sódio, o produto é uma solução aquosa de 7-(óxido de sódio)-9a-metoximitosano, isto é, 7-Na⁺0 -9a-metoximitosano, que apresenta a seguinte fórmula:

O

Pode secar-se a solução aquosa para efectuar a reacção substancialmente na ausência de água ou apenas com a presença de uma pequena quantidade de água (por exemplo, uma relação mo

-J- WB lar de H₂O:7-Na 0 -9a-metoximitosano inferior a 10 para se ob ter 7-(difenilmetil)-oxi-9a-metoximitosano (referido a seguir como via seca) ou pode ser processada para se obter 7-(difenilmetil) -oxi-9a-metoximitosano mesmo quando estã presente uma quantidade substancial de ãgua (por exemplo uma solução aquosa 0,1 molar de 7-Na⁺O -9a-metoximitosano) (referido a seguir como via húmida).

Consideremos primeiro a via seca. Na via seca seca-se a solução aquosa básica do sal de óxido para formar um sólido essencialmente seco (uma relação molar de H₂O:7-Na⁺O -9a-meto ximitosano inferior a 10, o 7-(sal de óxido>-9a-metoximitosano (quando o reagente é o hidróxido de sódio, o produto sólido essencialmente anidro é o 7-(óxido)-9a-metoximitosano). A secagem é feita de preferência por liofilização, embora existam outros métodos de secagem, por exemplo evaporação ou secagem por pulve rização, que também podem ser utilizadas. Quando se faz a liofilização, um ciclo apropriado compreende o arrefecimento a uma temperatura compreendida entre -50° e -80°C e secagem sob vazio de aproximadamente 0,1 mm Hg durante 10 a 30 horas. Tal como se referiu anteriormente, efectua-se uma suspensão do produto sólido essencialmente anidro, num dissolvente moderadamente polar. Como se referiu anteriormente, a acetona é o dissolvente moderadamente polar preferido. Outros dissolventes apropriados para a suspensão do produto anidro incluem, por exemplo, outras cetonas, tetra-hidrofurano, ésteres tais como o acetato de etilo, e hidrocarbonetos halogenados tais como o clorofórmio e o 1,2-dicloroetano. Como se indicou anteriormente, faz-se reagir o

7-(sal de óxido) com um ácido quer em solução quer numa resina de permuta catiónica ácido forte sob a forma hidrogénica para preparar o reagente-7-hidrõxi-9a-metoximitosano. De preferência utiliza-se a resina permutadora de catiões, uma vez que pode ser utilizada na ausência de água. As soluções ácidas apropriadas incluem, por exemplo, soluções aquosas de ãcido fosfórico, ãcido sulfúrico, ãcido clorídrico e de outros ácidos minerais. Utiliza-se uma quantidade de ãcido suficiente para protonar o sal de óxido para 7-hidroxi-9a-metoximitosano, a reacção com o ácido realiza-se facilmente a uma temperatura compreendida entre 0° e 30°C desde 5 minutos ou menos até cerca de 3 horas ou mais. Quando se utiliza uma resina de permuta ca tiónica ácido forte, prefere-se uma temperatura de reacção compre endida entre 20° e 25°C e um tempo de reacção de 1 a 2 horas. Após se obter o 7-hidroxi-9a-metoximitosano, separa-se a resina de permutacatióniça e, como se referiu anteriormente, elimina-se o dissolvente se este for incompatível com o passo de reac ção do 7-hidroxi-9a-metoximitosano com o diazodifenilmetano. Na via anidra, o passo de reacção de 7-hidroxi-9a-metoximitosano com o diazodifenilmetilmetano realiza-se, de preferência, utiljL zando cloreto de metileno como dissolvente único e sem aquecimen to ou arrefecimento durante 3 a 5 horas. Consideremos de novo a via húmida, em que, para se obter o 7-(difenilmetil)-oxi-9a-metoximitosano, está presente uma quantidade substancial de água (por exemplo uma solução aquosa 0,1 M de 7-Na⁺O -9a-metoxi mitosano). Isto é muito vantajoso porque pode obter-se a mito micina C para utilização nesta via sem purificação total da mis tura que se obtém a partir da fermentação da mitomicina C, por exemplo, pode utilizar-se uma solução derivada da fermentação,

-ⁱ⁴<C *

reduzindo-se, ou eliminando-se assim a perda de mitomicina C que se verifica quando se efectua a sua separação do caldo de fermentação e a purificação. Esta via permite a conversão de outros 7-oxo-9a-metoximitosanos e 7-amino-9a-metoximitosanos, que estejam presentes no caldo de fermentação, em 7-hidroxi-9a-metoximitosano, aumentando, deste modo, os rendimentos.

Além disso, pode eliminar-se, a secagem na preparação do 7-hi droxi-9a-metoximitosano, dado que se faz reagir 7-hidroxi-metoximi tosano aquoso com diazodifenilmetano. A reacção de diazodifenilmetano com 7-hidroxi-9a-metoximitosano na presença de ãgua para dar o 7-(difenilmetil)-oxi-9a-metoximitosano com um rend_i mento substancial constitui um resultado que não é óbvio, uma vez que a técnica não descreve a reacção dos diazometanos com o 7-hidroxi-9a-metoximitosano na presença de ãgua.

Acerca das condições preferidas para a via húmida, faz-se reagir a solução aquosa de (sal de óxido)-9a-metoximitosano (faz-se reagir com mitomicina C o 7-Na⁺0 -9a-metoximitosano , quando a solução de hidróxido é uma solução aquosa de hidroxi. do de sódio directamente com o ácido. Quando se pode utilizar como agente acidificante soluções aquosas ácidas ou uma resina de permuta catiónica ãcido forte sob a forma hidrogénica, neste caso, ao contrário da via seca, a solução aquosa ácida é preferida relativamente ã resina de permuta catiónica, uma vez que a utilização desta exige um passo de separação da resina enquanto a água introduzida com a solução aquosa de ãcido não necessita de ser eliminada na reacção do diazodifenilmetano com o 7-hidroxi-9a-metoximitosano. Realiza-se facilmente esta reac ção, por exemplo, juntando uma solução de difenildiazometano a uma solução de 7-(sal de óxido)-9a-metoximitosano, ajustando-se

-15Λ ο ρΗ para ο valor apropriado compreendido entre 4 a 7, aproxima damente, com uma solução ácida, de preferência ácido fosfórico 5% a 15%, mantendo-se o pH dentro do referido intervalo adequa do pela adição periódica da solução de ãcido e mantendo a temperatura num valor compreendido entre 0° e 30°C e adicionando-se mais solução de difenildiazometano quando necessário. Como se indicou anteriormente, prefere-se a utilização de metanol em associação com o cloreto de metileno como dissolvente da reacção. 0 metanol auxilia a extracção do 7-hidroxi-9a-metoximitosano formado a partir da fase aquosa para a reacção na fase orgânica com o diazofenilmetano.

Voltemos agora à reacção do 7-(difenilmetil)-oxi-9a-metoximitosano com aminas primárias ou secundárias em que o grupo amino eventualmente substituído do reagente amina desloca o gru po 7-(difenilmetil)-oxi para se obterem os correspondentes 7-ami no-9a-metoximitosanos ou 7-amino(substituído)-9a-metoximitosanos.

As aminas primárias ou secundárias reagentes apropriadas incluem, por exemplo, as referidas por Schroeder, da coluna 3, na linha 38 até à coluna 4 da linha 6 e da linha 38 da coluna 4 até à linha 6, na patente de invenção norte-americana n° 3 306 821, citada a título de referência. A larga aplicação de' 7-(difenilmetoxi)-oxi-9a-metoximitosano para a reacção com aminas primárias e secundárias é demonstrada através dos exem pios específicos subsequentes, da reacção deste £-anisidina , morfolina e etanolamina, assim como com ditioetilaminas, para se obterem aminodissulfuretos (tais como os aminodissulfuretos descritos por Vyas et al., na patente de invenção norte-americana nQ 4 691 023 e por Shirahata et al. na patente de invenção norte-americana nQ 4 691 024).

*

Uma reacçao muito importante que é seguidamente exemplificada é a reacção do 7-(difenilmetil)-oxi-metoximitosano com 2-(p-nitrofenilditio)-etilamina, por exemplo sob a forma de um sal de adição de ácido clorídrico para se obter o composto com grande actividade antitumoral, 7-[2-(4-nitrofenilditio)-etilamino]-9a-metoximitosano; o reagente p-nitrofenil. ditioetilamina ê facilmente preparado a partir do

H^COOCSSCí^Cí^NH^.HCL, um dissulfureto conhecido, que se faz reagir com p-nitrotiofenol, de acordo com o procedimento de_s crito por Brois, S. F. et al., J. Am. Chem. Soc., 92 (1970) ,

7629-7631.

Posteriormente são descritas outras reacções importantes de 7-(difenilmetil)-oxi-9a-metoximitosano com aminas para se obterem os compostos intermédios muito estáveis, 7-[2-(3-nitro-2-piridilditio)-etilamino]-9a-metoximitosano e 7—[2—

-(2-piridilditio)-etilamino]-9a-metoximitosano. Em geral, a reacção de 7-(difenilmetil)-oxi-9a-metoximitosano com as aminas primárias ou secundárias para se obterem 7-amino- e 7-ami no(substituído)-9a-metoximitosanos realiza-se facilmente no seio de metanol a uma temperatura compreendida entre 0° e 30°C durante 1 a 50 horas.

Quando se utiliza a amina sob a forma de um sal de adição de ãcido, converte-se facilmente na base livre por adição à mistura reaccional de trietilamina ou outro agente de neutralização apropriado.

Considerando agora a reacção do 7-(difenilmetil)-oxi-9a-metoximitosano com um álcool basificado em que o grupo orgânico do álcool desloca o grupo 7-(difenilmetilo). Entre os álcoois apropriados incluem-se, por exemplo, o metanol, o etanol, os pro panóis, os butanóis e outros álcoois inferiores. Os agentes pa_17>

ra basificação apropriados incluem, por exemplo, o hidróxido âe potássio, o hidróxido de sódio e o hidróxido de lítio. Rea liza-se facilmente esta reacção a uma temperatura compreendida entre 0° e 30°C durante 1 a 10 horas. Consideremos agora a reacção de substituição do grupo 7-(difenilmetil)-oxi pelo grupo ditiloetilamino substituído que consiste em converter pri. meiro o 7-(difenilmetil)-oxi-9a-metoximitosano em 7[2-(2-piridilditio ) -etilamino] -9a-metoximitosano ou em 7-[2-(3-nitro-2-piridilditio)-etilamino]-9a-metoximitosano intermédio e, em seguida, converter este composto em 7-ditioetilamino(substituí do)-9a-metoximitosano.

O processo para a conversão em 7-[2-(2-piridilditio)-etilamino]-9a-metoximitosano consiste em fazer reagir 7-(dife nilmetil)-oxi-9a-metoximitosano com 2-piridilditioetilamina , por exemplo, sob a forma de cloridrato. Realiza-se facilmente esta reacção a uma temperatura compreendida entre 0° e 30°C durante 1 a 20 horas, num meio reaccional inerte apropriado, tal como metanol, etanol, outros álcoois inferiores, ésteres inferiores, hidrocarbonetos halogenados e misturas destes. As condições reaccionais preferidas são uma temperatura compreendida entre 15° e 25°C e um período de 2 a 10 horas, em metanol.

Pode utilizar-se trietilamina ou outras aminas terciárias para converter o sal da amina na base livre. Forma-se, facilmente, o cloridrato de 2-piridilditioetilamina a partir de H₃COOCSSCH₂CH₂NH₂.HCL, um dissulfureto conhecido, fazendo reagir este com 3-nitro-2-mercaptopiridina, de acordo com o pro cedimento descrito por Brois, S. J. et al., J. Am. Chem. Soc., 92, (1970) 7629-7631. De acordo com a patente de invenção europeia nQ 116208, o dicloridrato de 2-piridilditioetilamina ess tá descrito no pedido de patente de invenção japonesa aberto à

inspecção pública, Kokai Koho 136 261/80.

O processo para a conversão de 7- [2-(3-nitro-2-piridil. ditio)-etilamino]-9a-metoximitosano consiste em fazer reagir 7-(difenilmetil)-oxi-9a-metoximitosano com 2(3-nitro-2-piridil_ ditio)-etilamina, por exemplo sob a forma de cloridrato. Esta reacção realiza-se facilmente a uma temperatura compreendida entre 0° e 30°C durante 1 a 20 horas, num meio reaccional iner te apropriado, tal como metanol, etanol, álcoois inferiores , hidrocarbonetos halogenados e misturas destes. As condições preferidas para a reacção são uma temperatura compreendida entre 0° e 30°C durante 2 a 10 horas, em metanol. A trietilamina e outras aminas terciárias podem ser utilizadas para conver ter o sal de amina na base livre a utilizar na reacção. Forma-se facilmente o cloridrato de 2- (3-nitro-2-piridilditio) -etil, amina a partir do dissulfureto conhecido H^COOCSSCE^C^N^ .HCL, que se faz reagir com 3-nitro-2-mercaptopiridina, de acordo com o procedimento descrito por Brois, S. J. et al., J. Am. Chem. Soc., 92 (1970) 7629-7631.

A preparação de 3-nitro-2-mercaptopiridina estã descri ta por Surrey, A. R., et al., J. Am. Chem. Soc., 62 (1940) 1967-1968.

O composto intermédio 7-[2-(2-piridilditio)-etilamino]-9a-metoximitosano ê conhecido e estã descrito por Shirahata et al na patente de invenção norte-americana nQ 4 691 024, na colu na 4 e por Kono et al., na patente de invenção europeia nQ 116208, na pág. 5. Faz-se reagir facilmente em um processo de permuta de tiol com um reagente tiol. Os reagentes tiol apropriados incluem os referidos na patente de invenção europeia nQ 116208 e por Shirahata na patente de invenção norte-america na nQ 4 691 024. Realiza-se facilmente a reacção utilizando

19\C ·* uma quantidade de reagente tiol superior à quantidade estequio métrica (por exemplo até 2 equivalentes ou mais) durante um pe ríodo compreendido entre 2 minutos e 10 horas, a uma temperatu ra compreendida entre 0° e 30°C, num meio reaccional inerte co mo, por exemplo, o metanol, ou outro dissolvente compatível com a reacção.

Numa variante muito importante desta reacção, faz-se rea gir 7-[2-(2-piridilditio)-etilamino]-9a-metoximitosano com p-nitrofenol, de preferência no seio de metanol, a uma temperatura compreendida entre 0° e 30°C, durante 10 a 20 minutos, para se obter um agente com grande eficácia antitumoral, o 7-[2-(4-nitro fenilditio)-etilamino]-9a-metoximitosano.

O composto intermédio 7-[2-(3-nitro-2-piridilditio)-etil amino]-9a-metoximitosano é conhecido e está designado como Composto 30 (Procedimento 30) em Vyas et al., patente de invenção norte-americana n° 4 691 023.

A reacção deste composto intermédio num processo de per muta de tiol dissulfurado estã descrita por Vyas et al., na patente de invenção norte-americana Série nQ 4 866 180, sendo os tióis ali indicados como reagindo com o referido composto inter médio são aqui incorporados como referência. A reacção deste composto intermédio com tióis, num processo de permuta de tiol, realiza-se facilmente a uma temperatura compreendida entre 0° e 60°C durante um período compreendido entre 2 minutos e 10 horas num meio reaccional inerte, de preferência um meio em que os reagentes sejam solúveis. Com os reagentes tióis solúveis em água o meio reaccional apropriado é a ãgua. Com reagentes tiolados insolúveis em água prefere-se um dissolvente orgânico. Os meios reaccionais orgânicos apropriados incluem, por exemplo, alcanóis inferiores, tais como metanol, etanol e isopropanol, és

teres de alquilo inferior de ácidos alcanóicos inferiores, tais como o acetato de etilo, propionato de metilo e acetato de butilo, cetonas alifáticas inferiores, tais como a acetona e a metiletilcetona, ésteres alifãticos cíclicos, tais como o tetra-hidrofurano, e hidocarbonetos alifãticos poli-halogenados inferiores, tais como o cloreto de metileno, o dicloreto de etileno e o clorofórmio. Num aspecto muito importante desta reacção , faz-se reagir 7-[2-(3-nitro-2-piridilditio)-etilamino]-9a-metoximitosano com £-nitrotiofenol, de preferência em metanol, durante 2 a 20 minutos e a uma temperatura compreendida entre 0° e 30°C, para se produzir o agente antitumoral 7-[2-(4-nitrofenilditio)-etilamino]-9a-metoximitosano.

A presente invenção é, em seguida, ilustrada através de exemplos específicos. Nos Exemplos MeOH significa metanol e EtOAc significa acetato de etilo.

Exemplo I

Introduziram-se 817 mg de mitomicina C com uma pureza aproximada de 95% (2,45 mmoles) num balão de fundo redondo. Jun taram-se 1,1 equivalentes de uma solução aquosa de hidróxido de sódio 0,lM. Agitou-se durante 2,5 horas à temperatura de 35°C. Arrefeceu-se a solução azul resultante à temperatura de -78°C e liofilizou-se sob um vazio de 0,1 mm Hg. Após 18 horas obteve-se um sólido escuro essencialmente seco a que se adicionaram 12,2 ml de acetona. Agitou-se esta suspensão durante 15 minutos depois do que se adicionaram 3,65 g de Dowex AGX8, uma resina de permuta catiónica ãcido forte. Agitou-se a associação resultante cuidadosamente durante 90 minutos ã temperatura de 22°C. Em seguida, filtrou-se o material e lavou-se a resina

com 10 ml de acetona. Evaporou-se o filtrado e adicionou-se ao resíduo escuro 25 ml de cloreto de metileno. Em seguida, adicio nou-se uma solução de diazodifenilmetano 0,7M em cloreto de meti_ leno (6,6 ml; 2 equivalentes, aproximadamente). Após 1 hora , adicionaram-se mais 6,6 ml da solução de diazodifenilmetano .

Após um total de 4 horas, a cromatografia em camada fina sobre gel de sílica, com MeOH a 7% / CHgClg indicou o desaparecimento dos compostos iniciais e a presença de uma mancha vermelha menos polar. Em seguida, verteu-se a mistura reaccional no topo de uma coluna de alumina e eluíu-se com cloreto de metileno, seguin do-se um gradiente de metanol a cerca de 4% de cloreto de metileno. Reuniram-se as fracçoes pretendidas e evaporaram-se para se obterem 775 mg de 7-(difenilmetil)-oxi-9a-metoximitosano sob a forma de um sólido castanho escuro (1,55 mM) com um rendimento de 66%). Cristalizou-se uma amostra em uma mistura de acetona/ /cloreto de metileno/éter dietílico/hexano. A análise deu os re sultados seguintes: RMN (pyr-dg), signais a $ . 1,85 (3H, s), 2,04 (1H, t), 2,68 (1H, s largo); 3,08 (1H, d), 3,11 (3H, s), 3,43 (1H, d), 3,96 (1H, dd), 4,08 (1H, d), 5,02 (1H, t) , 5,43 (1H, dd) , 7,19 a 7,38 (10H, m) e 7,42 (1H, s) ; UV/Lmáx (metanol) 206, 325, 528 nm; IV, KBr bandas principais 3427, 1730,

1632, 1578, 1450, 1404 e 1330 cm ponto de fusão 96°-97°C.

produto apresentou o

Exemplo II

Num balão de fundo redondo de três tubuladuras, coloca ram-se 353 mg (1,06 mmoles) de mitomicina C com pureza aproximada de 95%. Adicionaram-se 11,6 ml de hidróxido de sódio

-220,1 M. Agitou-se ã temperatura de 35°C durante 2 horas, após o que a reacção de hidrólise ficou essencialmente completa . Após arrefecimento até uma temperatura de aproximadamente 0°C, ajustou-se o pH da mistura reaccional para cerca de 6, median te a adição de solução aquosa de ãcido fosfórico a 10%. Em se guida, adicionaram-se ã mistura reaccional 3 ml (2,1 mmoles) aproximadamente) de uma solução 0,7 M de diazodifenilmetano (DDM) em cloreto de metileno. Adicionou-se, em seguida, 3 ml de metanol e agitou-se rapidamente durante 1 hora. Ajustou-se o pH para um valor de cerca de 5 pela adição de ãcido fosfórico a 10% e manteve-se a agitação. Após 2 horas, com a adição periódica de ãcido fosfórico a 10% para manter o pH num valor compreendido entre 5 e 6, adicionaram-se mais 3 ml de solução 0,7 M de diazodifenilmetano em cloreto de metileno. Deixou-se aquecer gradualmente até ã temperatura de 22°C. Após um total de 6 horas desde a adição inicial da solução de diazodifenilme tano, partilhou-se a mistura reaccional entre 100 ml de cloreto de metileno e 20 ml de água. Secou-se a fase orgânica sobre sulfato de sódio e evaporou-se. Cromatografou-se o resíduo numa coluna de alumina neutra anidra com um gradiente desde clore to de metileno até metanol a 4%/cloreto de metileno, para eluir o composto pretendido. Reuniram-se as fracçoes puras e evaporaram-se para se obterem 209 mg de 7-(difenilmetil)-oxi-9a-metoximitosano (rendimento de aproximadamente 42%). Após a distribuição, tratou-se a fase aquosa com 6 ml de solução 0,6 M de diazofenilmetano em cloreto de metileno e agitou-se rapidamente a mistura à temperatura de 22°C. Após 16 horas, processou-se a mistura reaccional como anteriormente e, em seguida, submeteu-se a uma eromatografia similar para se obterem mais 49 mg (um rendimento adicional aproximado de 10%) de 7-(difenil^

metil)-oxi-9a-metoximitosano. Rendimento total de 52%.

Exemplo III

Num balão de fundo redondo introduziram-se 100 mg (0,2 mmole) de 7-(difenilmetil)-oxi-9a-metoximitosano. Dissolveu-se em 8 ml de metanol a que se adicionaram 123 mg (5 equivalentes) de £-anisidina. A cor da mistura reaccional mudou gra dualmente de castanha para verde. Seguiu-se a reacção por cro matografia em camada fina de gel de sílica, utilizando metanol a 5%/cloreto de metileno. Após um total de 2,75 horas, evaporou-se a mistura reaccional e dissolveu-se o resíduo em cloreto de metileno. Cromatografou-se numa coluna com enchimento de gel de sílica e eluíu-se com MeOH a 5%/CH₂Cl₂· Recolheu-se a banda verde pura e evaporou-se para se obterem 76 mg (rendimen to de 86%) de 7-(4-anisino)-9a-metoximitosano. A análise por ressonância magnética nuclear protónica foi coerente com a presença deste composto.

Exemplo IV

Num balão de fundo redondo introduziram-se 42 mg de 7-(difenilmetil)-oxi-9a-metoximitosano. Adicionaram-se a este 2 ml de metanol e 100 microlitros de morfolina. Agitou-se a mistura resultante à temperatura de 23°C durante 48 horas, tem po ao fim do qual a reacção ficou essencialmente completa. Eva porou-se a mistura reaccional e submeteu-se a cromatografia nu ma coluna com enchimento de gel de sílica que se eluíu com metanol a 7%/cloreto de metileno para se obterem 22 mg (rendimen to de 65%) de 7-(N-morfolino)-9a-metoximitosano. A análise por

ressonância magnética nuclear protónica foi consistente com a presença deste composto.

Exemplo V

Dissolveram-se 71 mg (0,14 mmole) de 7-(difenilmetil)-oxi-9a-metoximitosano em 6 ml de metanol e agitou-se a solução resultante, adicionando-se-lhe 100 microlitros de etanolamina . Agitou-se a mistura reaccional à temperatura de 22 °C e seguiu-se a reacção por cromatografia em camada fina de gel de sílica utilizando metanol a 15%/cloreto de metileno. Após 2 horas, a reacçao ficou completa e, em seguida, diluíu-se a mistura reac cional com 20 ml de cloreto de metileno. Cromatografou-se a so lução resultante numa coluna de enchimento de gel de sílica que se eluíu com metanol a 10%/cloreto de metileno com um gradiente até 20% de metanol/cloreto de metileno. Recolheu-se a banda azul e evaporou-se para se obterem 45 mg (rendimento de 83%) de 7-(2-hidroxietil)-amino-9a-metoximitosano. O espectro de ressonância magnética nuclear protónica foi consistente com a presença deste composto.

Exemplo VI

Introduziram-se 178 mg (0,355 mole) de 7-(difenilmetil)-oxi-9a-metoximitosano num balão de fundo redondo e, em seguida, adicionaram-se 15 ml de metanol anidro. Adicionou-se a solução resultante e adicionou-se-lhe, mantendo a agitação, hidróxido de potássio a 1,62% em solução metanólica (301 microlitros). Seguiu-se a reacção por cromatografia em camada fina de gel de sílica, utilizando metanol a 10%/cloreto de metileno. Após 5 ho

ras e 30 minutos, a reacção estava mais de 90% completa. Em se guida, interrompeu-se a reacção por adição de neve carbónica (cerca de 0,5 g). Em seguida, evaporou-se a mistura reaccional e cromatografou-se o resíduo numa coluna de gel de sílica que se eluíu com um gradiente de 7% de metanol/cloreto de metileno até 10% de metanol/cloreto de metileno. Recolheram-se as frac ções e reuniram-se as fracções similares para se obterem 88 mg de mitomicina A (0,252 mmole) correspondentes a um rendimento de 71%. A ressonância magnética nuclear protónica foi idêntica à de uma amostra autêntica.

Exemplo VII

Num balão de fundo redondo introduziram-se 209 mg de 7-(difenilmetil)-oxi-9a-metoximitosano (0,417 mmole). Dissolveu-se em 7,3 ml de metanol e arrefeceu-se a solução resultante até à temperatura de 0°C adicionando-se, em seguida, 116 nd. crolitros de trietiiamina (2 equivalentes). Adicionaram-se depois 122 mg de cloridrato de 2-(£-nitrofenilditio)-etilamina e deixou-se a mistura aquecer até ã temperatura de 22°C. Após 1 hora e 30 minutos, arrefeceu-se novamente a mistura reaccional até 0°C e adicionaram-se 232 microlitros de trietiiamina segui dos por 244 mg de cloridrato de 2-(£-nitrofenilditio)-etilamina. Deixou-se a mistura aquecer até à temperatura de 22°C. Decorridas 6 horas, a reacção ficou completa, o que foi indica do por uma cromatografia em camada fina de gel de sílica utilizando metanol a 10%/cloreto de metileno. Evaporou-se a mistura reaccional, dissolveu-se o resíduo em cloreto de metileno e cro matografou-se a solução resultante numa coluna com enchimento

de gel de sílica que se eluiu com um gradiente de metileno a 5%/cloreto de metileno até 10% de metanol/cloreto de metileno. Recolheram-se as fracções que continham a banda azul pretendi da e analisaram-se por cromatografia em camada fina. Reuniram-se as fracções puras e evaporaram-se para se obterem 120 mg de 7-[2-(4-nitrofenilditio)-etilamino]-9a-metoximitosano, com um rendimento de 53%. A ressonância magnética nuclear protónica pôs em evidência o produto , era consistente com o referido com posto.

Exemplo VIII

Num balão de fundo redondo, introduziram-se 2,50 g de cloridrato de H^COOCSSCH^CHzNí^. Dissolveu-se em 100 ml de me tanol e, em seguida, arrefeceu-se atê à temperatura de -10°C. Adicionou-se a solução resultante, ao mesmo tempo que se adicionaram, gota a gota, 1,37 g (1 equivalente) de 2-tiopiridina em 40 ml de metanol . Obteve-se uma solução amarela que se agi_ tou à temperatura de -10°C durante 1 hora e 30 minutos e, em se guida, se evaporou num evaporador rotativo ã temperatura de 20°C. Triturou-se o resíduo com éter dietílico e acetato de etilo e, em seguida, evaporou-se. Desta vez, obteve-se um sóld. do amarelo pálido que se triturou com 2 x 50 ml de éter dietili co e, em seguida, se evaporou para se obterem 2,49 g de um sóli do amarelo. Cristalizou-se com metanol/acetato de etilo, obten do-se 2,22 g de cloridrato de 2-piridilditioetilamina (rendimen to de 82%).

Num balão de fundo redondo introduziram-se 770 mg (1,537 mmoles) de 7-(difenilmetil)-oxi-9a-metoximitosano que se dissol-27

veram em 6 ml de metanol. Adicionou-se esta solução a uma solu ção de 631 mg (2,84 mmoles) de cloridrato de piridilditioetilamina e 435 microlitros de trietilamina (3,13 mmoles; 1,1 equi valentes baseados no cloridrato) em 10 ml de metanol. Agitou-se a solução resultante à temperatura de 22°C e seguiu-se a reacção por cromatografia em camada fina de gel de sílica uti lizando metanol a 7%/cloreto de metileno. Após 8 horas, a reacção estava completada em cerca de 90%. Processou-se a mistura reaccional diluindo-a com 120 ml de cloreto de metileno e lavando-se, em seguida, com 2 x 30 ml de ãgua. Secou-se a fase orgânica sobre sulfato de sódio, evaporou-se e cromatografou-se o resíduo em gel de sílica utilizando metanol a 7%/clo reto de metileno, obtendo-se, deste modo, 495 mg de 7-[2-(2-piridilditio)-etilamino]-9a-metoximitosano, com um rendimento de 64% (0,98 mmole).

Introduziu-se o produto proveniente da síntese descrita anteriormente num balão de fundo redondo e dissolveu-se em 8 ml de metanol. Em seguida, adicionaram-se, em duas porções, 190 mg (1,23 mmoles; 1,25 equivalentes) de p-nitrotiofenol em 16 ml de metanol. Agitou-se a solução resultante durante 15 minutos, tempo ao fim do qual a reacção indicava estar mais de 95% completa. Diluiu-se a mistura reaccional com 120 ml de cloreto de metileno e, em seguida, lavou-se com 1 x 30 ml de solução saturada de cloreto de sõdio, secou-se sobre sulfato de sódio, evaporou-se e cromatografou-se em gel de sílica utilizando como eluente metanol a 7%/cloreto de metileno. Esta cromatografia deu 480 mg de 7-[2-(4-nitrofenilditio)-etilamino]-9a-metoximitosano puro, seguidamente designado algumas vezes por BMY 25067 (0,91 mmole); rendimento de 88%.

-γ, ’ *

Ο rendimento em BMY 25067 a partir de 7-(difenilmetil)-oxi-9a-metoximitosano foi cerca de 56% e a partir de mitomicina C foi cerca de 31%. 0 rendimento de BMY 25067 a partir de uma amostra de 880 mg de 7-(difenilmetil)-oxi-9a-metoximitosano, num procedimento de um só passo, como se descreveu no Exem pio VII, foi cerca de 23%, baseados em mitomicina C.

Exemplo IX

Alquilou-se 7-hidroxi-9a-metoximitosano com 3-metil-l-£-toliltriazeno para se obter mitomicina A ou com diazodifenilmetano para se obter 7-(difenilmetil)-oxi-9a-metoximitosano, designado daqui em diante por 7-ODPM mitomicina.

Ensaiou-se cada um dos compostos intermédios, mitomici na A e 7-ODPM mitomicina, para conversão em 7-[2-(4-nitrofenil^ ditio)-etilamino]-9a-metoximitosano, BMY 25067, através de um processo em um só passo que consiste em fazer reagir os compos. tos intermédios com cloridrato de 2-(£-nitrofenilditio)-etilamina, Vias A e D respectivamente; e num processo em dois pas. sos cujo primeiro passo consiste em converter os compostos intermédios em 7-[2-(2-piridilditio)-etilamino]-9a-metoximitosano que por sua vez no segundo passo, se convertem em BMY 25067,

Vias B e E respectivamente; e num processo em dois passos cujo primeiro passo consiste em converter os compostos intermédios em 7-[2-(3-nitro-2-piridilditio)-etilamino-9a-metoximitosano que, por sua vez, no segundo passo, se converte em BMY-25067,

Vias C e F, respectivamente. Os resultados são apresentados no Quadro I seguinte em que a designação POT significa potên cia.

RENDIMENTO	EM ACTIVI-	DADE	62,3(a)	35,9	cn cn 00	29,0	39,6	69,8
<!
Η
Ο			sp		σ\	r-		00
Í3			*.			K		K
<Η			00	CN	LD	CO	P-	LD
Η			00	00	00		00	00
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a	CN		Γ'	cn	SP	LO	CN	CN
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W
Ω	st!
<!	Ω
Ω		O
H	N	ω	m	CN	CN	rd	O	O
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a	Pl	PM	h.	h.	K	fc»		*»
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Χ3 •Η

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Φ

Ρ

Φ

-Ρ ω

Μ

Exemplo X

A uma solução saturada de amoníaco em metanol, à tempe ratura de 20°C, adicionaram-se 171 mg (0,355 mmole) de 7-(dife nilmetil)-oxi-9a-metoximitosano. Agitou-se a solução resultan te durante 16 horas à temperatura de 20°C. Depois, evaporou-se o dissolvente e submeteu-se o resíduo a uma cromatografia rápida em coluna com enchimento de gel de sílica que se eluíu com metanol a 10%/cloreto de metileno. Desenvolveu-se um gradiente até 15% de metanol/cloreto de metileno. Analisaram-se as fracções por cromatografia em camada fina e reuniram-se as fracções de pureza similar e evaporadas para se obterem 101 mg de mitomicina C (rendimento de 85%). O espectro de ressonância magnética nuclear protõnica deste produto foi idêntico ao de uma amostra autêntica.

Exemplo XI

Trataram-se murganhos fêmeas CDF^, em que se implantou por via intraperitoneal um inoculo tumoral de 106 células ascí ticas de leucemia murina P-388, com as doses, seguidamente indicadas de 7-(difenilmetil)-oxi-9a-metoximitosano. O composto de tratamento foi administrado por injecção intraperitoneal. Utilizaram-se grupos de 4 murganhos para cada uma das doses e tratou-se cada um dos murganhos com uma dose única do composto de tratamento, no dia da inoculação. Considerou-se como controlo um grupo de 10 murganhos tratado com solução de cloreto de sódio. Pesaram-se os murganhos antes do tratamento e no 6Q dia a seguir ao tratamento. Considerou-se a variação do peso como uma medida da toxicidade do fãrmaco. Utilizaram-se murganhos

com 20 g de peso e a perda de peso até aproximadamente 2 g não foi considerado como excessiva. Os resultados são expressos sob a forma de tempo de sobrevivência médio (MED S.T.), % T/C (percentagem da relação entre o tempo de sobrevivência médio do grupo tratado com o composto e o tempo de sobrevivência médio do grupo controlo tratado com cloreto de sódio), variação de peso médio no 6Q dia (AWC) e número de murganhos vivos no 59 dia/numero total de murganhos tratados (A/T). Os murganhos tratados com cloreto de sódio morreram, normalmente, em 9 dias. 0 efeito mínimo em termos de percentagem de T/C foi considerado como 125.

Dose (mg/kg)	MED. S.T.	% T/C	AWC	A/T
300	TÓXICO	TÓXICO	-0,7	2/4
150	13,5	150	0,0	4/4

Os resultados anteriores indicam efeito inibidor ant_i tumoral para uma dose de 150 mg/kg.

Considerando a actividade antitumoral observada nos ani mais de experiência, a presente invenção abrange o uso dos novos compostos desta invenção como inibidores de tumores de mamí feros. Com esta finalidade administra-se sistemicamente a um mamífero com um tumor uma quantidade antitumoral eficaz substan cialmente não tóxica. O composto é destinado principalmente ã administração sob a forma injectável, pela mesma via e com o mes mo objectivo para que se utiliza a mitomicina C. Podem utilizar-se doses um pouco maiores ou um pouco menores dependentes da sensibilidade do tumor em causa. O novo composto é distribuído facilmente sob a forma de composições farmacêuticas anidras con tendo agentes diluentes, agentes tampão, agentes estabilizantes, agentes soLubilizantes e outros ingredientes que contribuem para a apresentação da forma farmacêutica. Estas composições são re constituídas com um meio líquido injectável, extemporaneamente, exactamente antes da sua utilização. Os liquidos injectãveis apropriados incluem a ãgua, as soluções isotónicas de cloreto de sõdio e outras.

As variações destes aspectos são evidentes para os têcni^ cos. Deste modo, a presente invenção é definida pelas reivindicações apensas.

Claims

R Ε I V INDICAÇÕE

1. - Processo para a preparação de 7-(difenilmetil)oxi-9a-metoximitosano caracterizado pelo facto de se fazer reagir o 7-hidroxi-9a-metoximitosano com diazodifenilmetano para se obter o 7-(difenilmetil)oxi-9a-metoximitosano.
2. - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo facto de se utilizar como dissolvente reaccional o cloreto de metileno.
3. - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo facto de se realizar a reacção na presença de ãgua.
4. - Processo de acordo com a reivindicação 3, carac terizado pelo facto de se utilizar como dissolvente reaccional o cloreto de metileno e o metanol em uma proporção, em volume, compreendida entre 0,5:1 e 3:1, respectivamente e de se realizar a reacção a uma temperatura compreendida entre 0 e 30°C e a um pH compreendido entre, aproximadamente, 4,7 e 6,5.
5. - Processo de acordo com a reivindicação 5, carac terizado pelo facto de se realizar a reacção a um pH compreendido entre cerca de 5 e cerca de 6.
6. - Processo para a preparação de 7-(difenilmetil) oxi-9a-metoximitosano, caracterizado pelo facto (a) de se fazer reagir mitomicina C com uma solução aquosa de um hidróxido para se obter uma solução aquosa de um 7-sal-õxido-9a-metoximitosano alcalino?

(b) de se misturar a solução aquosa de um 7-sal-óxido-9a-metoximitosano alcalino com um ácido, diazodifenilmetano e um dissolvente em que o 7-hidroxi-9a-metoximitosano e o diazodifenilmetano são, pelo menos, ligeiramente solúveis e de se proceder â reacção para se obter o 7-(difenilmetil)oxi-9a-metoximitosano.
7. - Processo de acordo com a reivindicação 6, carac terizado pelo facto de se utilizar como solução aquosa de um hidróxido na fase (a) uma solução aquosa de hidróxido de sódio, de se utilizar como ácido na fase (b) o ãcido fosfórico e de se realizar a fase (b) a uma temperatura compreendida entre 0° e 30°C no seio de um dissolvente reaccional constituído por uma associação de cloreto de metileno e de metanol em uma proporção, em volume, compreendida entre 0,5:1 e 3:1 respectivamente.
8. - Processo para a preparação de 7-(difenilmetil)oxi-9a-metoximitosano, caracterizado pelo facto (a) de se fazer reagir um 7-sal-óxido-9a-metoximitosano com uma resina trocadora de catiões ácida forte sob a forma hidrogeniónica em quantidade suficiente para converter o grupo 7-sal-õxido no grupo 7-hidroxi por meio do qual se obtém o 7-hidroxi-9a-metoximitosano, (b) de se fazer reagir o 7-hidroxi-9a-metoximitosano resultante com diazodifenilmetano para se obter o 7-(difenilmetil)oxi-9a-metoximitosano.
9. - Processo para a preparação de 7-[2-(4-nitrofenilditio)-etilamino]-9a-metoximitosano a partir do 7-(difenilmetil) oxi-9a-metoximitosano, caracterizado pelo facto (a) de se converter o 7-(difenilmetil)oxi-9a-metoximitosano em 7- [2- (3-nitro-2-piridilditio)etilamino]-9a-metoximitosano ou 7- [2- (2-piridilditio) etilamino]-9a-metoximitosano, e (b) de se converter o produto preparado na fase (a) no r-367-[2-(4-nitrofenilditio)etilamino]-9a-metoximitosano.
10.- Processo de acordo com a reivindicação 9, carac terizado pelo facto de se fazer reagir na fase (a) o 7-(difenilmetil) oxi-9a-metoximitosano com a 2-piridilditioetilamina pa ra se obter o 7-[2-(2-piridilditio)etilamino]-9a-metoximitosano.
11. - Processo de acordo com a reivindicação 10, carac terizado pelo facto de se dissolver na fase (a) o 7-(difenilmetil)oxi-9a-metoximitosano em metanol e de se adicionar ã solução resultante uma outra de cloridrato de 2-piridiltioetilamina em metanol e trietiiamina em quantidade suficiente para converter o cloridrato na base livre e de realizar a reacção a uma temperatu ra compreendida entre 15°C e 25°C.
12. - Processo de acordo com a reivindicação 9, carac terizado pelo facto de se fazer reagir na fase (a) o 7-(difenilmetil) oxi-9a-metoximitosano com a 2-(3-nitro-2-pirilditio)etilamina para se obter o 7-[2-(3-nitro-2-piridilditio)etilamino] -9a-metoximitoxano.
13. - Processo de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo facto de se dissolver, na fase (a), o

7-(difenilmetil)oxi-9a-metoximitosano e metanol e de se adicionar à solução resultante uma outra de cloridrato de 2-(3-nitro-2-piridilditio)etilamina em metanol e trietilamina em quantida de suficiente para converter o cloridrato na base livre e de realizar a reacção a uma temperatura compreendida entre 0° e 30°C.