PT92156A - Processo para a preparacao de derivados do acido penicilanico e de composicoes farmaceuticas que os contem - Google Patents

Description

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F# HOFFMANN-LA ROCHE AG '•PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE DERIVADOS DO ACIDO PENI-CILÀNICO E DE COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS QUE OS CONTÊM" A presente invenção refere-se a compostos de fórmu la geral

(I)

na qual R representa um átomo de hidrogénio, um grupo éster facilmente hidrolisável ou um grupo protec-tor, R^ representa um átomo de hidrogénio e R2 representa um átomo de hidrogénio ou um grupo acilo, ou R^ e R^ considerados em conjunto repre sentam um grupo de fórmula geral /

na qual ou 7, n representa o número inteiro 5, 6 X representa um átomo de flúor, um grupo tiocianato, azido ou um grupo de fórmula geral R3aC02~/ ou

0 11 ^NR42 Rg—C “S — , —SR3 . —OR3 0 o S 11 ^NR4‘ 11 *-NR4' 1! ^NR4’ —OC—N ^ „ , ^NR4 ’ —SC- ^NR4 R3a representa um grupo alquilo C2~C16' aril°' um grupo heterocíclico, um grupo -CCH,J -arilo, um 2 m grupo “(CH2)m-heterocíclioo,um grupo heterocíclico -alcenilo inferior ou aril-alcenilo inferior, representa um grupo alquilo C^-C.^, arilo, um grupo heterocíclico, -(CH2)m~arilo, um grupo ^CH2^m~keteroc^c^í5'uin g^upo heterocíclico-àleenilo inferior ou aril-alcenilo inferior, R4 e R4 repre^ sentam, indepenâentemente, um átomo de hidrogénio, um grupo alquilo inferior, alcenilo inferior ou al cinilo inferior, representa um átomo de hidrogé_ nio ou de halogéneo, um grupo amino, amino-alquilo inferior, carboxi, carbamoílo, carboxi-alquilo inferior, carbamoil-alquilo inferior ou carbalcoxifin ferior)-alquilo inferior, m representa um número in teiro compreendido entre 1 e 4 e p representa o inteiro 3, 4 ou 5, com a condição de X não representar um átomo de flúor quando R representar um grupo protector. No caso de R representar um átomo de hidrogénio consideram-se também englobados os hidra-tos e os sais destes compostos e bem assim os hidra tos dos sais.

Os compostos da presente invenção são úteis como agen tes anti-bacterianos para a prevenção e para o tratamento de infecções bacterianas nos mamiferos, incluindo os seres humanos .

Na apresentação estrutural dos compostos de fórmula geral I e de outros compostos nesta memória descritiva# uma linha espessa em bisel () significa um substituinte segundo a orientação beta (isto é, sobre o plano da molécula ou da página), e uma linha interrompida () significa um substituinte segundo a orientação alfa (isto é, sob o plano da molé, cuia ou da página).

Conforme utilizado na presente memória descritiva» a designação "alquilo inferior" significa um grupo hidro-carboneto saturado de cadeia linear ou ramificada com 1 a 8» de preferência 1 a 4 átomos de carbono» por exemplo me-tilo, etilo, propilo, isopropilo» butilo terciário e semelhantes. A designação “alcoxi inferior" significa um grupo hidrocarbonoxi de cadeia linear ou ramificada no qual a por Çao "alquilo inferior" representa um grupo alquilo inferior tal como anteriormente definido, por exemplo metoxi, etoxi, propoxi e semelhantes.

Os termos "halogeno", "halogéneo" e "Hal" são utiljL zados para representar os quatro átomos de cloro, bromo, iodo e flúor, salvo quando especificado de outro modo. 0 termo "arilo" significa um radical aromático substituído ou insubstituído, por exemplo, fenilo, naftilo e semelhantes, o qual pode ter entre 1 e 3 substituintes adequados, tais como átomos de halogéneo (flúor, cloro, bromo, etc,), grupos hidroxi, amino, nitro, ciano, carboxi, carbamoílo, car balcoxi inferior, carboxi-alquilo inferior, carbamoil-alquilo inferior, carbalcoxiÇinferior)-alquilo inferior, amino-alqui-lo inferior, alcanoíloxiCinferior) e semelhantes. 0 termo "fenilo substituído" significa fenilo mono- ou di-substituído com átomos de halogéneo (cloro, bromo, flúor, etc), ou com grupos alquilo inferior, amino, nitro ou trifluoro metilo -5- A designação "alquilo substituído" significa um radi cal alquilo substituído, por exemplo, com átomos de halogéneo (cloro, flúor, bromo, etc.) ou com grupos trifluoro-metilo, amino, cianof e semelhantes. A designação "alcenilo inferior" significa um grupo hidrocarboneto de cadeia linear ou ramificada que contenha uma dupla ligação olefínica, com 2 a 8 átomos de carbono, por exemplo, um grupo alilo, vinilo e semelhantes. A designação "cicloalquilo inferior" significa um ra, dical carbocíclico saturado trigonal ou ' octogonal, por exem pio, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclo-hexilo e semelhantes. O termo "heterocíc3icò"significa anéis que contenham mais do que um tipo de átomos. Os grupos heterocíclicos adequados são, por exemplo, os heterocíclicos insaturados pentago nais ou octogonais com 1 a 4 átomos de azoto no anel (por exem pio, pirrol, pirazol, imidazol, di-hidro-imidazol, piridina e tetrazol), heterocíclicce condensados insaturados com 1 a 3 átomos de azoto no anel (por exemplo o indol), heterocíclicosinsaturados pentagonais ou octogonais com ua átomo de enxofre no anel (por exemplo, o tiofeno), heterocíclicos insaturados conden sados com 1 a 3 átomos de enxofre no anel (por exemplo, o tian treno), heterocíerhoos insaturados pentagonais ou octogonais com um átomo de enxofre e 1 ou 2 átomos de azoto no anel (oor exem pio, tiazol, di-hidrotiazol, tiadiazol), heterooiclros insatura dos condensados com um átomo de enxofre e 1 ou 2 átomos de azo to no anel (por exemplo, benzotiazol), heteroclcliccB insaturados pentagonais ou octogonais com um átomo de oxigénio no anel

(por exemplo, o furano), heteroclclioos insaturados condensados com um átomo de oxigénio e 1 ou 2 átomos de azoto no anel (por exemplo, benzoxazol), heterocielioas insaturados pentagonais ou octogonais com um átomo de oxigénio e 1 ou 2 átomos de azoto no anel (por exemplo oxadiazol) e semelhan tes.

Estes grupos heterocíclicos podem ser insubstitui-dos ou mono-, di- ou tri-substituídos com grupos alcruilo in ferior, carbalcoxi inferior, alcoxi inferior, alquilfinferi or)-tio, hidroxi, mercapto e oxo. O termo "acilo" utilizado em conjunto com nesta descrição significa e engloba todos os radicais orgânicos de rivados de um ácido carboxílico por remoção do grupo hidroxi lo. Embora o grupo R2 possa ser seleccionado entre diversos radicais acilo, alguns grupos acilo são preferenciais.

Constituem exemplos os grupos acilo que foram utilizados no passado para acilar antibióticos do tipo p-lactama, incluindo o ácido 6-amino-penicilânico e seus derivados e o acido 7-amino-cefalosporanico e seus derivados; ver r>or exem Pio Çephalosporins and Penicillins. obra editada por Flynn, Academic Press, 1972, patente de invenção belga ns 866038, publi cada a 17 de Outubro de 1978, a patente de invenção belga ne 867994, publicada a 11 de Dezembro de 1978, a patente de inven Ção norte-americana ns 4152432,depositada a 1 de Maio de 1979, a patente de invenção norte-americana ns 3971778,depositada a 27 de Julho de 1976,e a patente de invenção norte-americana ns 4173199, depositada a 23 de Outubro de 1979. Indica-se aqui a título de referência as partes destas publicaçóes que des- crevem diversos grupos acilo. A lista seguinte de grupos aci lo é apresentada Para ilustrar melhor o termo "acilo", mas nao se lhe deve atribuir carácter limitativo. Os exemplos de grupos acilo são: (a) Grupos acilo alifáticos de fórmula geral

na qual representa um átomo de hidrogénio, um grupo alqui^ lo inferior, cicloalquilo inferior, alcoxi inferior, alceni-lo inferior, cicloalcenilo inferior, ciclo-hexadienilo; ou um grupo alquilo inferior ou alcenilo inferior substituído com um ou mais átomos de halogéneo, grupos ciano, nitro, amino, mercapto, alquil-tio ou cianoraetil-tio. Çb) Grupos acilo aromáticos de fórmulas gerais

-8- R

R. ο

R. ο

6

7 R I R 6

o

\ X /

t

e

R S

0 +

M em que n representa zero, 1, 2 ou 3; Rg, e Rg representam, ·» cada um, independentemente, um átomo de hidrogénio ou de ha-logéneo ou um grupo hidroxi, nitro, amino, ciano, trifluoro-metilo, alquilo com 1 a 4 átomos de carbono, alcoxi com 1 a 4 átomos de carbono ou um grupo aminometilo; e Rg0 represen- •9-

ta um grupo amino, acilamino, hidroxi, ou um sal carboxi ou sulfo, um grupo carboxi protegido tal como benziloxicarbonjl lo, formiloxi ou azido.

Os grupos acilo aromáticos preferidos englobam os que possuem as fórmulas gerais

em que Rg0 representa de preferência ura grupo araino ou hidroxi ou um sal carboxi ou sulfo. 0-

Os exemplos de outros grupos acilo aromáticos adequa dos Para os objectivos da presente invenção são sulfo-fenil-*’acetilo/ hidroxi-sulfonil-oxi-fenil-acetilo, sulfamoil-fe-nil-acetilo, (fenoxi-carbonil)-fenil-acetilo, (£-tolil-oxi--carbonil)-fenil-acetilo, formil-oxi-fenil-acetilo, carboxi-“fenil-acetilo, formil-amino-fenil-acetilo, benzil-oxi-carbo nil-fenil-acetilo, 2-(N,N-dimetil-sulfamoil)-2-fenil-acetilo, etc. (c)

Grupos acilo heteroaromáticos de fórmulas gerais

R

R10l' R

101

—0—-CH

R 101 l

-s-ch2-0 0 R

101 era que n representa zero, 1, 2 ou 3; RgQ tem o significado anteriormente definido e representa um anel heteroci- clico penta-, hexa-/ ou heptagonal substituído ou insubstiL tuído contendo 1, 2, 3 ou 4 (de preferência 1 ou 2) hetero átomos seleccionados no grupo constituído por azoto, oxigé nio e enxofre. Os exemplos de anéis heterocíclicos são o tienilo, furilo, pirrolilo, piridinilo, pirazinilo, tiazoM lo, pirimidinilo e tetrazolilo. Os exemplos de substituin-tes são os átomos de halogéneo, os grupos hidroxi, nitro, amino, ciano, trifluorometilo, alquilo com 1 a 4 átomos de carbono ou alcoxi com 1 a 4 átomos de carbono.

Os grupos acilo heteroaromáticos preferidos englobam os grupos das fórmulas anteriores em que represen ta um grupo 2-amino-4-tiazolilo, 2-amino-5-halogeno-4-tiazo lilo, 4-amino-piridin-2-ilo, 2-amino-l,3,4-tiadiazol~5-ilo, 2-tienilo, 2-furanilo, 4-piridinilo ou 2,õ-dicloro^-piridi^ nilo.

Cd) Grupos /2fC4-substituído-2,3-dioxo-l-piperazinil) -carbonil_^-amino_J7-acetilo de fórmula geral

120

na qual κ^ΐΐ rePresenta um grupo alquilo inferior, hidroxi--alquilo inferior ou um grupo carbocíclico ou heterocíclico aromático, tais como os de fórmula geral R 7

R 8 na qual R^, e Rg têm o significado anteriormente definido ou representam os grupos heteroaromáticos referidos para a definição de Rl01? e r12q t®?27®3®^3 um grupo alquilo inferi or, alquilo inferior substituído Cem que o grupo alquilo é substituído com 1 ou mais átomos de halogéneo, grupos ciano, nitro, amino ou mercapto), por exemplo, 4-alquilo inferior, de preferência etil- ou metil-2,3-dioxo~l-piperazina- carbo-nil-D-fenil-glicilo.

Ce) Grupos (oxi-imino substituído)-aril-acetilo de fórmula geral -13-

130 na qual Rim tem o significado anteriormente definido e R,_ representa um átomo de hidrogénio, um grupo alquilo inferior ou cicloalquilo ou alquilo inferior substituído /Tem que o grupo alquilo é substituído com um ou mais átomos de halogéneo, grupos ciano, nitro, amino, mercapto, alquil(infe rior)-tio, grupos aromáticos (conforme definidos para R11X)/ carboxi (incluindo os seus sais)# amido, carbamoílo, alcoxi-(inferior)-carbonilo, fenil-metoxi-carbonilo, difenil-metoxi--carbonilo, hidroxi-alcoxi-fosfinilo, di-hidroxi-fosfinilo, hidroxi(fenil-metoxi)-fosfinilo ou dialcoxi(inferior)-fosfi-niloJ7# °u carboxi-ciclo-alquilo C^-C^.

Os exemplos do agrupamento de fórmula geral

:--=n- 101 130 14

-acetilo, (2-amino-4-tiazolil)-(1-metil-etoxi-imino)-acetilo, C 2-amino-4-tiazolil)-Cmetoxi—imino)-acetilo, (2-furil)-(meto xi-imino)-acetilo, (4-hidroxi-fenil)-Çmetoxi-imino)-acetilo, Cmetoxi-imino)-(fenil)-acetilo, (hidroxi-imino)-(fenil)-acetji lo, (hidroxi-imino)-C2-tienil)-acetilo, //Tdicloro-acetil)--oxi /-imino /-(2-tienil)-acetilo, £ 5-cloro-2-/Ccloro-acetil)--amino /-4~tiazolil /-Cmetoxi-imino) -acetilo, (2-amino-5-clo-ro-4-tiazolil)-Cmetoxi-imino)-acetilo, £££ l-Cl,l-dimetil--etoxi) -carbonil /-1-meti 1-etoxi /-imino /-2-sulf o-araino-4--tiazolil)-acetilo, £££ l-(l,l-dimetil-etoxi-carbonil/-1-me-til-etoxi /-imino J-££ 2-(trifenil-metil) -amino /-4-tiazolil /--acetilo, Cmetoxi-imino)-Ç 2-sulfo-amino-4-tiazolil)-acetilo, £{ 1-metil-etoxi) -imino J-£ 2-/*Cmetil-sulf onil) -amino /-4-tia-zolil /-acetilo, /(3-metil-sulf onil)-2/* 3ff/-tiazolimin-4-il /--£ l-Cmetil-etoxi)-imino/-acetilo, ££ 2-(cloro-acetil)-amino/--4-tiazolil £-££££{4:-n±tro-f enil) -metoxi /-carbonil /-metoxi /--imino ./-acetilo, C2-amino-4-tiazolil)-/tcarboxi-metoxi)-imino ./-acetilo, (2-amino-4-tiazolil)-£ l-carboxi-(1-metil-etoxi)--imino ./-acetilo, C2-amino-4—tiazolil)—££ amino-carbonil)-meto xi/-imino_/-acetilo. Çf) Grupos (acil-amino)-acetilo de fórmula geral

na qual tem ° significado anteriormente definido e R representa um grupo heterocíclico insaturado, um grupo da fórmula geral R 7 R6

«7

(em que Rg, R?/ Rg e n têm o significado anteriormente defini, do) um átomo de hidrogénio, um grupo alquilo inferior, alqui. lo inferior substituído, amino, alquil(inferior)-amino, dial-quilCinferior)-amino, ciano-alquil(inferior)-amino, hidrazino, alquil(inferior)-hidrazino, aril-hidrazino ou acil-hidrazino.

Os grupos (acil-amino)-acetilo preferidos da fórmula anterior englobam os grupos em que Rj.40 rePresenta um grupo amino ou acil-amino. represen- São também preferidos os grupos em que R1]L1 ta um grupo fenilo ou 2-tienilo.

Cg) Grupos oxi-imino-acetilo substituídos de fórmula geral

na qual R-qi e rx4q ° significado anteriormente definido e R22 e R23 representam, cada um, independentemente, um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo inferior, ou R e R , 4-i £* £ considerados em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão ligados, formam um anel carbocíelico C^-C^, por exemplo, ciclo propilo, ciclobutilo ou ciclopentilo.

Os grupos oxi-imino-acetilo substituídos preferidos da fórmula geral anterior englobam os grupos em que R-140 representa um grupo hidroxi ou amino. São também preferidos os grupos em que R-^χ representa um grupo 2-amino-4-tiazolilo.

Ch) Grupos £££ 3-substituído-2-oxo-l-imidazolidinilJ- -carbonil y-amino_7~acetilo de fórmula geral

tem o significado anteriormente definido e R na qual K^ll tem ° significado anteriormente definido e R^,. representa um átomo de hidrogénio, um grupo alquiK inferior)--sulfonilo, aril-metileno-amino (isto é, -N=CHR1i;l em que Rlll tem ° dignificado anteriormente definido), -C0R16 (em que R^g representa um átomo de hidrogénio, um grupo alquilo inferior ou alquilo inferior substituído por átomos de halo-géneo), um grupo aromático (conforme definido para ante riormente), alquilo inferior ou alquilo inferior substituído (em que o grupo alquilo inferior está substituído com um ou mais átomos de halogéneo, grupos ciano, nitro, amino ou mer-capto).

Os grupos £££ 3-substituído-2-oxo-l-imidazolidinil J7--carbonil^7-amino_/-acetilo preferidos, da fórmula geral anterior englobam aqueles em que R-qi representa um grupo feni-lo ou 2-tienilo. São também preferidos os grupos em que R^ representa um átomo de hidrogénio ou um grupo metil-sulfonilo, fenil-metileno-amino ou 2-furil-metileno-amino.

Os compostos preferidos de fórmula geral I são aqueles era que X tem a fórmula geral 0 li R_ CO -, R-—C—S —, -SR- e -0R„ . ô 3 2 «j «3 São especialmente preferidos os compostos em que R_ o e e R3 representam, cada um, independentemente, um grupo arilo ou um grupo heterocíclico.

Como ésteres dos compostos de fórmula geral I facilmente hidrolisáveis deve subentender-se os compostos de fórmula geral I cujo(s) grupo(s) carboxi (isto é, o grupo 2-car boxi) está/estão presentes sob a forma de grupos éster facil mente hidrolisáveis. Os exemplos desses ésteres, os quais po dem ser do tipo convencional, são os ésteres alcanoil-oxi-al. quílicos inferiores (por exemplo, o éster acetoxi-metilico, pivaloil-oxi-metílico, 1-acetoxi-metilico e 1-pivaloil-oxi--etílico), os ésteres alcoxi-carbonil-oxi-alquílicos inferiores (por exemplo, o éster metoxi-carbonil-oximetílico, 1--etoxi-carbonil-oxi-etilico e l-isopropoxi-carbonil-oxi-eti-lico), os ésteres lactonílicos (por exemplo, o éster ftalidi lico e tioftalidilico), os ésteres alcoxi(inferior)-metílicos (por exemplo, o éster metoxi-metilico) e os ésteres alcanoil-(inferior)-amino-metilicos (por exemplo, o éster acetamido-me tilico). Também se pode utilizar outros ésteres (por exemplo, os ésteres benzilico e ciano-metílico).

Os exemplos de sais dos compostos de fórmula geral I são os sais de metais alcalinos tais como o sal de sódio e de potássio, o sal de amónio, sais de metais alcalino-terrosos tais como o sal de cálcio, sais com bases orgânicas tais como os sais com aminas (por exemplo, sais com N-etil-piperidina, procaína, dibenzil-amina, N,N*-dibenzil-etileno-diamina, al-quil-aminas ou dialquil-aminas) e bem assim os sais com amino-ácidos tais como, por exemplo, os sais com arginina ou com li-sina. Os sais podem ser mono-sais, di-sais ou tri-sais.

Os compostos de fórmula geral I também formam sais de adição com ácidos orgânicos ou inorgânicos. São exemplos ilus- trativos desses sais os halidratos (por exemplo, cloridra-tos, bromidratos e iodidratos)/ e bem assim outros sais de ácidos inorgânicos tais como os sulfatos, nitratos, fosfatos e semelhantes, alquil-sulfonatos e mono-aril-sul£onatos tais como etano-sulfonatos, tolueno-sulfonatos, benzeno-sulfona-tos e semelhantes, e também outros sais de ácidos orgânicos tais como acetatos, tartaratos, maleatos, citratos, benzoa-tos, salicilatos, ascorbatos e semelhantes.

Os compostos de fórmula geral I, os seus sais e ésteres e os hidratos desses compostos são úteis como agentes para combater infecçóes bacterianas (incluindo infecções uri nárias e das vias respiratórias) nos mamíferos, por exemplo, nos cães, gatos, cavalos e seres humanos. Estes compostos apresentam actividade contra uma ampla variedade de bactérias Gram-negativas.

Determinou-se a actividade in vitro dos compostos da presente invenção medindo a Concentração Inibidora Mínima (CIM) em microgramas por mililitro (jig/ml), utilizando o Méto do de Difusão em Cavidades de Agar, contra uma diversidade de microrganismos Gram-negativos, apresentando-se no Quadro que se segue os dados correspondentes, tendo sido ensaiados os compostos seguintes:

Composto A: Sesquidrato do sal mono-sódico do ácido /"2S-/T2c«, 3 5 <x , 6^(RX) 7/-6-.Z272f(4-etil-2,3-dioxo-l-px- peraziniD-carbonil 7-amino J-tenil-acetil 7-ami-noy-3-metil-3-^2U-.metil-lH-tetrazol-5-il)-tio 7. -metil7-7-oxo-4-tia-l-azabiciclo/· 3.2.0 Theptano--2-carboxílico.

Composto B:

Sal mono-sódico do ácido £ 2S-(2oo,3 oc ^ 5 ^ , 6P)y-3-metil-3-/7U-metil-lH~tetrazol-5-il)--tio J7-metil-7-oxo-6-/'(fenil-acetÍl)-amino J- -4-tia-l-azabiciclo/' 3,2.0 _7heptano—2—carboxili co.

Composto c : Sal mono-sódico do ácido £ 2S-£ 2 ac ,3 oc ,5<* , 6^(Z) 77 ~&—££( 2—amino-4-tiazolil)-(metoxi-imino) — -acetily-amino7-3-metil-3-££{1-metil-1H-tetra-zol-5-il) -tio y-metil _7-7-oxo-4-tia-l-azabiciclo-£ 3.2,0 *7heptano-2-carboxílico.

Composto D : Sal mono-sódico do ácido £ 2S-{2 « ,3 -3 -(azido-metil) -3-metil-7-oxo-6-/'(fenil-acetil) --amino ./-4-tia-l-azabiciclo,^ 3.2.0 _7heptano-2-car boxilico.

Composto E : Sal interno do hidróxido de 2S-(2oc ,3 oc ,5oc , 2-earboxi-3-metil-7-oxo-6-/’(fenil-ace- til)-amino .7-4-tia-l-azabiciclo/·' 3.2.0 ./hept-3--il.7-metil-piriãxnio.

Composto F : Sal di-sódico do ácido £ 2S-(,2oc ,3 <x- ,5ec f6p)7~3--££ 2,5-di-hidro-6-hidroxi-2-metil-5-oxo-l,2,4-triazina-3-il)-tio _7-metil7-3-metil-7-oxo-6--£{íenil-acetil) -amino _/-4-tia-l-azabiciclo/"'3.2. 0 _7heptano-2-carboxílico. -21-/ »

Composto G; Sal mono-sódico do ácido £ 2S-(2 <*-,3 ,5<* , 6jEJ )./-3-/*( acetil-tio) -metil ,/-3-metil-7-oxo--e-r/Cfenil-acetil) -amino_7-4 -tia-l-azabici-clo£ 3.2.0 ,/heptano-2-carboxílico»

Composto H: Sal mono-sódico do ácido £ 2S-(2 oc , 3 oc ,5 oe , 6ρ)£-3-£££ 3,4-bisCacetil)-oxi)-benzoilJ--oxi J-metil .7-3 -metil-7-oxo-6-/”(f enil-ace-til) -amino _/-4-tia-l-azabiciclo/* 3.2.0/-heptano-2-carboxilico. CIM in vitro (jia/ml)

Compostos

Cultura A B C 0 E F 0 T H Pseudomonas aeruginosa 56 ATCC «079 15*6 62,5 62,5 >125 125 31,5 125 31,5 Pseudomonas aeruginosa 56H 0,49 0,98 0,98 3,9 3,9 0,49 0,98 1,95 Pseudomonas maltophilia 28978 ATCC 17445 250 >125 >500 >125 >500 · 31,5 Proteus vulgaris 101N ATCC 6380 0,98 15,6 31,3 15,6 125 7,8 31,3 62,5 Proteus vulgaris 100 , 7,8 >125 250 >125 >500 250 >500 >500 Escherichia coli 1269B 62,5 >125 >500 >125 500 500 Escherichia coli 2721B 3,9 62,5 31,3 62,5 31,3 31,3 62,5 500 Escherichia coli 27228 0,12 31,3 1,95 15,6 31,3 3,9 7,8 62,5 Escherichia coli 308ΊΒ 15,6 >125 >125 125 125 125 500 >500 Escherichia coli 3082B 0,24 31,3 1,95 7,8 31,3 0,98 1,95 15,6 -23 CIM in vitro tyq/ml) (continuação)

Compostos

Cultura A B Ç D E F α H Streptococcus faecium 31,3 7,8 125 7,8 125 '62,5 0,98 Λ8 ATCp 8043 Siaphylococcus aureus 82 0,98 0,03 0,49 0,03 0,49 0,24 0,03 0,12 ATCC 6538P Siaphylococcus aureus 1059B 7,8 3,9 3,9 7,8 15,6 0,24 .NJ* 00 7,8 Staphylococcus aureus 3037B 500 125 250 125 62,5 500 250 125 Siaphylococcus aureus 3647B ♦ 500 125 250 125 500 500 250 500 Micrococcus luteus PCI 0,49 0,03 0,24 0,03 1,95 0,24 0,06 0,12 ATCC 9341 Bacillus megaterium 164 0,12 0,015 0,12 0,12 0,49 0,12 ATCC 8011 Bacillus subtilus 558 0,98 0,03 0,49 0,06 0,24 0,12 3,03 0,12 NRRL 558

Para o combate das infecçóes bacterianas nos mamíferos pode administrar-se um composto da presente invenção a um mamífero numa quantidade compreendida aproximadamente entre 5 miligramas por quilograma de peso do corpo por dia Cmg/kg/dia5 e 100 mg/kg/dia* e mais preferencialmente entre 10 mg/kg/dia e 55 mg/kg/dia.

Virtualmente consideram-se também contemplados quais, quer modos de administração convencionalmente utilizados pela técnica anterior para administrar antibióticos de penicilina e de cefalosporina ao local da infecção* para utilização com os compostos da presente invenção. Essas vias de administração incluem a via intravenosa* intramuscular* subcutânea e a via entérica* por exemplo* sob a forma de supositórios.

Deve subentender-se que uma composição farmacêutica que incorpore um composto de fórmula geral X contém um veículo farmaceuticamente aceitável* tal como os veículos conhecidos na especialidade.

Os Esquemas de Reacçlo seguintes especificam métodos e compostos intermédios úteis para a produção do produto final constituído pelos compostos de fórmula geral I da presente invenção.

Nessas sequências de reacções* quando um substituinte estiver presente numa molécula que possa ser quimicamente ata, cada durante a reacção, deverá estar presente numa forma protegida utilizando um grupo protector. Os grupos protectores adequados para este objectivo podem ser seleccionados entre produtos convencionais bem conhecidos pelos especialistas na matéria. A título de ilustração, é possível proteger grupos amino mediante grupos protectores facilmente removíveis utilizados na química dos péptidos, tais como os grupos al-quil-carbonilo, por exemplo, formilo, acetilo, propionilo e semelhantes, grupos alcoxi-carbonilo, por exemplo, t-butoxi--carbonilo, etc., grupos alcoxi-alquil-carbonilo, por exemplo metoxi-acetilo, metoxi-propionilo etc., grupos alcoxi--carbonilo substituídos, por exemplo, tricloro-etoxi-carboni^ lo e semelhantes, grupos alquil-carbonilo substituídos, por exemplo, monocloro-metil-carbonilo, monocloro-etil-carbonilo, dicloro-metil-carbonilo, dicloro-etil-carbonilo, tricloro-me til-carbonilo, tricloro-etil-carbonilo, tricloro-propil-carbo nilo etc., grupos aralquiloxi-carbonilo, por exemplo, benzil-oxi-carbonilo e semelhantes, grupos aralquiloxi-carbonilo subs. tituídos, por exemplo, p-nitro-benziloxi-carbonilo e semelhan tes, ou um grupo amino protegido com uma proteína.

Os grupos protectores do radical amino preferidos para os objectivos da presente invenção são benziloxi-carbonilo, t-butiloxi-carbonilo ou um grupo protector sililo tal como o trimeti1-sililo. A remoção do grupo protector do radical amino efectua--se convencionalmente, por exemplo, por tratamento com ácido no caso do grupo t-butoxi-carbonilo, por redução catalítica no caso do grupo £-nitro-benziloxi-carbonilo ou por tratamento com zinco e com ácido no caso do grupo tricloro-etoxi-carboni-lo.

Como grupos protectores para grupos ácido carboxílico na molécula é possível utilizar um grupo éster que seja depois facilmente convertível no grupo ácido carboxílico por tratamento suave com um ácido ou com um álcali ou por redução. Os exemplos ilustrativos desses grupos protectores do radical ácido carboxílico são os grupos beta-metil-sulfonil-etilo, trimetil-sililo, t-butil-dimetil-sililo, benzidrilo, p-p-p--tricloro-etilo, fenacilo, £-metoxi-benzilo, £-nitro-benzilo, metoxi-metilo, etc.

Nesses Esquemas de Reacção o símbolo R* representa um grupo protector do radical ácido carboxílico (tal como exemplificado anteriormente), Ph representa um grupo fenilo, M representa um catilo metálico (por exemplo, um ião de sódio ou de potássio), e R·^, R2' x e Ha^ t^m o significado anterior mente definido.

Esquema 1

0 PhCH

0

V

Esquema 1

III .......-> IV

Faz-se reagir o composto de fórmula geral III, o qual é conhecido e pode ser preparado por métodos descritos, com um sal do nucleófilo escolhido, Efectua-se a reacção no seio de qualquer dissolvente adequado. Os sais adequados do nucleó filo são, por exemplo, os sais de sódio, potássio, césio, pra ta ou tetrabutil-amónio, 0 átomo de halogéneo preferido é o bromo, A reacção efectua-se a uma temperatura compreendida apro ximadamente entre -102C e 80ec, sendo preferível a temperatura ambiente (isto é, 23°-25°C). IV -------> v A seguir procede-se à desprotecção do composto de fór mula geral IV para se obter o produto desejado de fórmula geral V utilizando reagentes compatíveis com o grupo protector do radical éster utilizado, 32 possível utilizar os seguintes reagentes e os correspondentes ésteres compatíveis: faz-se a remoção do grupo para-nitrobenzilo por hidrogenólise com palá dio sobre carvão ou por hidrólise na presença de sulfureto de sódio a uma temperatura compreendida entre cerca de 0°C ou in ferior e a temperatura ambiente, no seio de um dissolvente tal como a dimetilformamida (aquosa); faz-se a remoção do grupo éster t-butílico ou difenil-butílico por reacção com ácido tri fluoroacético, na presença de anisol, a uma temperatura compre endida entre cerca de 0°C e a temperatura ambiente, com ou sem

/ -29-utilização de um co-dissolvente tal como cloreto de metile-no; ou faz-se a remoção dos grupos ésteres alílicos através de uma reacção de transalilação catalisada por paládio, na presença do sal de sódio ou de potássio do ácido 2-etil-he-xanóico; Ver por exemplo J. Org. Chem., 47 (1982), 587. y --------> i

Converte-se o composto de fórmula geral V no sal de fórmula geral I com um hidróxido, carbonato ou hidrogeno car bonato de metal alcalino. Os reagentes preferidos são o hidro geno carbonato de sódio ou de potássio. Pode efectuar-se a conversão no seio de um dissolvente tal como a água ou uma mistura de água e de um dissolvente orgânico.

Esquema 2 X ζ

'Ν<_*dS ,CH3J-ίΛ ch2x cc2h

Esquema 2

III--------> IV

Efectua-se a conversão do composto de fórmula geral III no composto de fórmula geral IV utilizando as mesmas condiçSes descritas para o Esquema de Reacção 1.

IV _—------> VI

Converte-se o composto de fórmula geral IV no composto de fórmula geral VI por reacção com PCl^. ou PBr^ e com piridina ou lutidina a uma temperatura compreendida entre cerca de -20 C e 4Q°c, de preferência a —10°C. Utiliza-se um dissolvente clorado tal como CH0C10, CHC1, ou CH„C1CH„C1. a reacção subsequente com um álcool, de preferência n-propanol ou isopropanol, e com água proporciona após alcalinização o composto de fórmula geral VI.

Vi -----—-> VII

Faz-se a acilação do grupo amino no composto de fórmula geral VI por reacção com um ácido carboxílico activado, de acordo com métodos conhecidos na especialidade, para se introduzir o grupo R2 (R^=H) e para se obter o composto de fórmula geral VII. Por exemplo, utilizando um dissolvente tal como o cloreto de metileno, o acetato de etilo ou a dimetil-formamida, faz-se reagir o composto VI com um agente de acila ção da fórmula geral -32· Ο

II R5-C-Z, na qual Z representa um grupo de activação acilo. Os grupos de activação preferidos Para Z são os átomos de halogéneo/

As reacçóes são efectuadas a uma temperatura compreendida entre cerca de 0°C e cerca de 30°C, durante cerca de 2 a 24 horas. Se o próprio grupo R2 for introduzido numa for ma que contenha funcionalidades protegidas# faz-se subsequen temente a remoção dos grupos protectores mediante métodos apropriados conhecidos na especialidade. O composto de fórmula geral VII na qual R^ e R2 c°n'“ siderados em conjunto representam >

é obtido por reacção com:

no seio de um hidrocarboneto clorado tal como o cloreto de metileno, a uma temperatura compreendida entre cerca de -20°C e 40°C.

VII ---------> VIII ---------> I

Efectua-se a conversão do composto de fórmula geral VII no composto de fórmula geral VIII e a do composto de fór ·> f mula geral VIII no composto de fórmula geral I utilizando as mesmas condiçóes descritas no Esquema de Reacção I para a conversão do composto de fórmula geral IV no composto de fórmula geral V e na do composto de fórmula geral V no com posto de fórmula geral I.

Esquema 3

Esquema 3

III --------g> XX

As condições de reacção são idênticas às descritas no Esquema de Reacção 2 para a conversão do composto IV no composto VI. IX -------> vi

As condições de reacção são idênticas às descritas no Esquema de Reacção 1 para a conversão do composto III no composto IV. VX --------> vix

As condições de reacção são idênticas às descritas no Esquema 2 para a conversão do composto VI no comoosto VII.

--------·> VIII --------·$> I

As condiçOes de reacção são idênticas às descritas no Esquema 2 para as convers8es do composto VII no composto VIII e do composto VIII no composto I. •3 7

Esquema 4 Ο

Esquema 4

III--------> IX reacção são idênticas às descritas Para a conversão do composto IV no

As condições de no Esquema de Reacç%0 2 composto VI.

IX --------> X

As condições de reacção são idênticas às descritas no Esquema de Reacção 2 para a conversão do comoosto VI no composto VII. X --------> vi x

As condições de reacção são idênticas às descritas no Esquema de Reacção 1 para a conversão do composto III no composto IV. VII --------> viu ---------> x

As cond.ições de reacção são idênticas às descritas no Esquema 2 para as conversões do composto VII no corrroosto VIII e do composto VIII no composto I.

No sentido de se fazer a preparação dos ésteres facil_ * mente hidrolisáveis dos ácidos carboxilicos do composto de fórmula geral 1/ faz-se reagir o ácido carboxílico com um halogeneto que contenha um grupo éster, e especialmente com um iodeto. Pode acelerar-se a reacção com o auxilio de uma base tal como um hidróxido ou carbonato de um metal alcalino, ou com uma amina orgânica, por exemplo, trietilamina. Normalmentfe efectua-se a reacção de esterificação no seio de um dissolvente orgânico inerte tal como a dimetilacetamida, brometo de ácido hexametil-fosfórico, dimetilsulfóxido ou di, metilformamida, sendo preferível esta última. De preferência, a temperatura está compreendida entre cerca de 0°C e 40°C.

Os sais e hidratos dos compostos de fórmula geral I ou os hidratos destes sais podem ser preparados por um processo conhecido, por exemplo, fazendo reagir um ácido carbo-xilico de fórmula geral I com uma quantidade equivalente da base desejada, adequadamente no seio de um dissolvente aquoso ou não aquoso, tal como a água, etanol, metanol ou acetona. A temperatura para a formação do sal é geralmente a temperatura ambiente fpor exemplo, cerca de 23°c) mas também se pode utilizar uma temperatura superior ou inferior a essa, por exemplo, no intervalo compreendido entre 0°C e 50°C. A formação dos hidratos ocorre normalmente e de forma automática no decurso do processo de preparação ou, em qualquer dos casos, como resultado das propriedades higroscópicas de um produto inicialmente anidro. Para a preparação controla, da de um hidrato pode súbmeter-se um composto completo ou par cialmente anidro (um ácido carboxílico de fórmula geral I, ou um seu éster ou sal) a uma atmosfera húmida, a uma temperatura compreendida entre cerca de 10°C e 40°C. 40-

Nos exemplos que se seguem as configurações estereo-químicas estão representadas pelas designações alfa C" <*· H ) ou beta C’^") nos nomes químicos dos compostos.

Exemplo 1

Ester (4-nitrofenil) -metilico do ácido £ 2S-(2 ,3 oc , 5 oc , 6|B) J -S-metil-S-Z^Cl-metil-lH-tetrazol-S-il)-tio _7-metil 7-7 -oxo-6--/•(fenil-acetil)-amino Jr-4-tia-l-azabiciclo/’ 3.2.0 -7heptano-2--carboxilico

Dissolveu-se éster (4-nitrofenil)-metilico do ácido /" 2S-( 2 <x ,3 <x, 5 e< , 6|3 „/-3-(bromometil) -3-metil-7-oxo-6-/’(fenil--acetil)-amino^7-4-tia-l-azabiciclo/"3,2,0 _7heptano-2-carboxí-lico (201,1 mg; 0,367 mmole) e sal de sódio de 5-mercapto-l--metil-tetrazol, (79,1 mg; 0,573 mmole) em acetonitrilo (2,5 ml) e agitou-se à temperatura ambiente durante 2,5 horas. Depois concentrou-se a mistura e purificou-se por cromatografia rápida, eluindo com 40% e 50% de acetato de etilo em hexano, para se obter um produto sólido amorfo (87,8 mg; 0,150 mmole; rendimento de 41,0%).

Exemplo 2

Sal mono-sódico do ácido Z~ 2S-(2 <=<,3 c<,5oc ,6p) _7-3-metil-3-—l-metil-lH-tetrazol-^— il) —tio ^7-metil-7—oxo-6-i/(fenil--acetil)-amino J^-tia-l-azabiciclo/* 3.2.0 _7heptano-2-carbo-xílico

Dissolveu-se éster (4-nitrofenil)-metilico do ácido £ 2S-( 2 <x ,3 t>c , 5 , 6p) J7-3-metil-3-/2rCl-metil-lH-tetrazol-5- -il) -tio ./-metil _7-7-oxo-6-/'(fenil-acetil) -amino _/-4-tia-l--azabiciclo/" 3.2.0 _7heptano-2-carboxílico (131,8 mg; 0,226 mmole em tetra-hidrofurano (11,1 ml) contendo etanol (0,25 ml). Adicionou-se o catalisador, Pd/C a 10% (268,9 mg), e agitou-se a mistura durante 3 horas à temperatura ambiente sob atmosfera de hidrogénio. Filtrou-se a mistura reaccio-nal através de celite e concentrou-se o filtrado. Dissolveu--se o resíduo bruto (131,8 mg) em tetra-hidrofurano (0,7 ml) e acetato de etilo (2 ml). A esta solução adicionou-se hi-drogeno carbonato de sódio (38,1 mg; 0,453 mmole) e água (4 ml). Purificou-se a fase aquosa por HPLC, eluindo com aceto-nitrilo em água. Após a liofilização obteve-se um sólido amorfo branco o qual pesava 26,9 mg (0,0572 mmole; rendimento de 22,7%).

Exemplo 3

Ester (4-nitrofenil) -metilico do ácido/" 2S-(2 òc .3 ¢¢,5 ,6p) _7- -3-ΖΪ acetiloxi) -metil _7-3-metil-7-oxo-6-Z'(fenil-acetil) -ami-no ^7-4-tia-l-azabiciclo/' 3.2.0_7heptano-2-carboxilico

Dissolveu-se acetato de potássio (337 mg; 3,434 mmoles) em etanol (9,5 ml) e adicionou-se rio éster (4-nitrofenil)-meti lico do ácido C 23-(2 oc,3 oc,5í* ,6p) _7-3-(bromometil)-3-metil--7-oxo-6-/(fenilacetil)-amino 7-4-tia-l-azabiciclo/"3.2.0 J-heptano—2—carboxílico (500,4 mg; 0,912 mmole). Agitou—se a mis. tura reaccional à temperatura ambiente. Decorridas 2 horas e 25 minutos, ainda se encontrava presente uma grande quan tidade de sólido amarelo-alaranjado. Removeu-se o sobrena-dante com uma pipeta, diluiu-se com acetato de etilo (90 ml) e extraiu-se com uma solução saturada de hidrogeno car bonato de sódio (100 ml) e depois com uma solução de cloreto de sódio (100 ml). Secou-se o acetato de etilo sobre Na2S0^. Dissolveu-se o sólido em cloreto de metileno (1 ml) e etanol (9,5 ml) contendo acetato de potássio (337 mg; 3,434 mmoles) Decorrida 1 hora e 15 minutos evaporou-se o etanol e dissolveu-se o resíduo em acetato de etilo (100 ml) e lavou-se com uma solução saturada de NaHCO^ e depois com uma solução de cloreto de sódio (100 ml). Secou-se o acetato de etilo sobre Procedeu-se à filtração dos dois extractos de acetato de etilo e concentrou-se. 0 primeiro pesou 80 mg e o segundo pesou 360 mg. Reuniram-se os dois produtos e purificou -se por cromatografia rápida obtendo-se o produto total com o peso de 117 mg (0,222 mmole; rendimento de 24,3%).

Exemplo 4

Sal mono-sódico do éster (4-nitrofenil)-metilico do ácido £ 2S-( 2 £<, 3 oc, 5 «=<, 6p) _7-3 -££\'2,5-di-hidro-6-hidroxi-2-metil- -5-oxo-l,2,4-triazina-3-il)-tio _7-metil_7-3-metil-7-oxo-6- -/tfenil-acetil) -amino_7-4-tia-l-azabicicloZ‘‘ 3.2.0 _7heptano--2-carboxllico A uma solução de éster(4-nitrofenil)-metílico do ácido /" 2S-(2 «*.,3^,5o<, ,6p)/7-3-(bromometil)-3-metil-7-οχο--6-/"(f enilacetil) -araino ^/^-tia-l-azabiciclo-/! , 2 »Q7heptano--2-carboxílico (0,255 g; 0,47 mmole) em acetona (15 ml)e em água (3 ml) adicionou-se o sal di— sódico de tetra-líidro-6--hidroxi-2-metil-5-oxo-3-tioxo-1,2,4-triazina (0,106 g; 0,52 mmole), à temperatura ambiente, durante uma noite. Eliminou--se a acetona sob vazio e liofilizou-se a camada aquosa. Retomou-se o resíduo com água e aplicou-se a uma coluna de cro matografia de fase inversa C1S Sep-Pak (Waters Assoe.) e eluiu--se com CH^CN/í-^O (0-40%, eluição do produto com 10% de CH^CN/H^O; Rf(Sio2)=0,3; acetato de etilo/ácido acético/água a 60:3;1). Reuniram-se as fracçbes apropriadas, eliminou-se o acetonitrilo sob vazio e liofili^ou-se a fase aquosa para obter um pó floculento amarelo-claro (0,065 g; 21%).

Exemplo 5 g_al di-sódico do ácido /-23-(2^.300.5^,6^)-7-3-/7(2,5^1-rhidro-6-hidroxi-2-metil-5-oxo-l,2#4-triazina~3-il)-tio_7-~metil_7-3-metil-7-oxo-6~/'(fenil-acetil) -amino _7-4-tia-l--azabiciclo/3. 2 .O./heptano-2-carboxilico A uma solução de sal mono-sódico do éster (4-nitrofenil) -metílico do ácido ^23-(2^,3^,5^,6^)^7-3-/7(2,5--di-hidro-6-hidroxi-2-metil-5-oxo-l,2,4-triazina-3-il)-tio J7--metil _/-3-metil-7-oxo-6-/'(fenil-acetil) -amino/7-4-tia-l-“azabiciclo-2T3.2.0 yheptano-2-carboxílico (0,057 g; 0,088 44- mmole) em acetato de etilo (2 ml) e em hidrogenocarbonato de sódio aquoso (0,1 M; 0,88 ml) adicionou-se Pd/C a 10% (0,06 g), A suspensão heterogénea foi submetida è acção do vazio e carregada com hidrogénio cinco vezes e deixou—se em agitaçao sob atmosfera de hidrogénio durante 4 horas. Filtrou-se a mistura reaccional através de celite e depois lavou-se a celite com água. Procedeu-se à eliminação dos dissolventes orgânicos sob vazio e liofilizou-se a solução aquosa resultante. Fez-se a cromatografia do resíduo numa coluna de fase inversa C18 Sep-Pak (Waters Assoe.),eluindo com CH^CN/HgO (0-40%), Reuniram-se as fraeções apropriadas, eliminou-se o acetonitrilo sob vazio e liofilizou-se a solu Ção aquosa resultante. Purificou-se ainda o resíduo por cro matografia de fase inversa, por cromatografia de alta pressão (Whatman M9-Partisil 10-0DS-2, gradiente linear 0-100%, âe CH3CH/H20) para proporcionar o sal di-sódico do ácido ^28-(2^,30^,5^,6^) _7-3-/2“ 2,5-di-hidro-6-hidroxi-2-metil--oxo-1,2,4-triazina-3-il)-tio_7-metil J^-3-metil-7-oxo-6--Δfenil-acetil)-amino ./-4-tia-l-azabiciclo^f 3.2.0 _7heptano-“2-carboxílico, sob a forma de um pó floculento branco.

Exemplo 6 gster (4-nitrofenil)-metilico do ácido £ 2S-(2oc,3 <x ,5o<, -7~3-(azido-metil)-3-metil-7-oxo-6-/(fenil-acetil)-amino_7-aá-tia-1 - az abi c.ic,lo/"3.2.0 -7heptano-2-carboxilico A uma solução de éster (4-nitrifenil)-metilico do -45- ácido £ 2S-(2 oc , 3 <x , 5ot , 6p) _7-3-(bromometil) -3-metil-7-oxo--6-/*(fenil-acetil) -amino „7-4-tia-1-azabiciclo/" 3.2.0 J7hepta no-2-carboxílico (2,13 g; 3,89 mmoles) em acetona (40 ml) e agua (18 ml), à temperatura ambiente, adicionou-se azida de sódio (0,78 g; 11,66 mmoles). Decorridas 4 horas, eliminou-se a acetona sob vazio partilhou-se a mistura resultante com ace tato de etilo (100 ml). Lavou-se a camada de acetato de etilo com água (2 x 50 ml) e depois com uma solução de cloreto de sódio (1 x 25 ml), secou-se sobre Na2S04, filtrou-se e concen trou-se sob vazio. A cromatografia sobre gel de sílica (aceta to de etilo/éter do petróleo a 2:3) proporcionou 1,03 g de és ter (4-nitrofenil)-metílico do ácido /^23-(2^,3^,50(: ,6p) J--3-(azidometil) -3-metil-r7~oxo-6-/Tfenil·—acetil) -aminoJ/-4-tia--1-azabiciclo/T3.2 .C7-heptano-2-carboxílico,

Exemplo 7

Sal mono-sódico do ácido £ 2S-(2o< ,3 « ,5 oc ,6jB) _7-3-(azido-me-til)-3-metil-7-oxo-6-/(fenil-acetil)-amino _7-4-tia-l-azabici-çlo/~ 3.3.0 .7heptano-2-carboxílico A uma solução de éster (4-nitrofenil)-metílico do ácido £ 2S-(2ítc ,3 oc,5*< ,6p) .7-3-( azido-metil) -3-metil-7-oxo--6-/(fenil-acetil) -amino ,7-4-tia-l~azabiciclo/~ 3.2.0<í7hepta-no-2-carboxílico (0,198 g; 0,39 mmole) em acetato de etilo (4 ml), Sob atmosfera de árgon, adicionou-se Pd/C a 10% (0,175 g). A suspensão heterogénea foi submetida à acção do vazio carregada com hidrogénio 5 vezes, e deixou-se com agitação durante 5 horas sob atmosfera de hidrogénio (proporcionada 46 através de um balão). Filtrou-se a mistura através de celite e lavou-se a celite com tetra-hidrofurano. Adicionou-se ao filtrado hidrogenocarbonato de sódio (0,049 g; 0,58 mmole) e água (2 ml) e depois eliminaram-se os dissolventes orgânicos sob Vazio. Liofilizou-se a solução aquosa resultante e purificou-se por cromatografia líquida de fase inversa (VJhatmen M9-Partisil 10-0DS-2, gradiente linear de CH^CN/H^O) para proporcionar o sal mono-sódico do ácido ^23-(2^ ,3oe,5« , 6p) ,/-3-( azido-metil) -3-metil-7-oxo-6~/tfenil-acetil) -amino J--é-tia-l-azabiciclo/*3,2.0_7heptano-2-carboxílico, sob a forma de um pó floculento branco.

Exemplo 8 Éster (4-nitrofenil) -metilico do ácido , ' Z2S~(2g< ,3<x,5 oc , 6p) _7-3-/Tacetil-tio)-metil _7-3-metil-7-oxo-6-/Tfenil-acetil)--amino _7-4-tia-l-azabiciclo/" 3.2,0 _7heptano-2-carboxilico A uma solução de éster (4-nitro-fenil)-metilico do ácido /" 2S-(2í?<.,3c< ,boc ,6p) J^-3-(bromo-metil) -3-metil-7-oxo--6-/Tf enil-acetil)-amino ^/-l-aza-4-tia-biciclo/" 3,2.0 _J-heptano-2-carboxílico (0,79 g; 1,44 mmole) em acetona (12 ml) e agua (2 ml) adicionou-se tioacetato de potássio (0,33 g; 2,9 mmoles). Depois de se agitar à temperatura ambiente durante 2 horas, eliminou-se a acetona sob vazio e partilhou-se a solução restante entre acetato de etilo e água. Lavou-se a fase aquosa com acetato de etilo e reuniram-se as camadas de acetato de etilo, secou-se sobre sulfato de sódio, filtrou-se e concentrou-se sob vazio. Fez-se a cromatografia do resíduo sobre gel de sílica utilizando acetato de etilo/éter do petróleo (30-40%) para proporcionar o éster (4-nitrofenil)--metílico do ácido £ 2S~( 2 <xi, 3 <x ,5 , 6|3) ./-3-/( acetil-tio) - -metil ./-S-metil-V-oxo-ô-^fenil-acetil) -amino _/-4-tia-1--azabiciclo/*3.2,0_7heptano-2-carboxílico, com um rendimento de 3 5%.

Exemplo 9

Sal mono-sódico do ácido 2S-(2-°c ,3 c<-,5 <x,6p) ,7-3-/(acetil--tio) -metil .7-3-metil-7-oxo-6--/(fenil-acetil) -amino J?-4-tia--l-azabiciclo/* 3.2.0 -7-heptano-2-carboxilico A uma solução de éster (4-nitrofenil)-metilico do ácido £ 2S-( 2oc, 3 , 5 6j3) .7-3-/( acetil-tio) -metil _7-3-me til-7-oxo-6-/Tf enil-ace til) -amino ./-4-tia-l-azabiciclo/· 3,2. O J7heptano-2-carboxílico (0,164 g; 0,3 mmole) em acetato de etilo (1 ml) adicionou-se Pd/C a 10% (0,154 g). Submeteu-se a solução à aeçlo do vazio e carregou-se com hidrogénio cinco vezes e deixou-se com agitação sob atmosfera de hidrogénio, proporcionada por meio de um balão, durante 4 horas. Filtrou--se a mistura reaccional através de celite e lavou-se a celite com tetra-hidrofurano. Concentrou-se a solução sob vazio e adi cionou-se ao resíduo hidrogenocarbonato de sódio (0,025 g; 0,3 mmole), tetra-hidrofurano (0,5 ml) e água (1 ml). Elimi-nou-se o tetra-hidrofurano sob vazio e liofilizou-se a camada aquosa remanescente. A cromatografia em coluna de fase inversa

C18 Sep-Pak (Waters Assoe.) com CHgCN/H^O (0-20%) proporcionou 53 mg (41%) de sal mono-sódico do ácido ^2S~(2«<, 3 <x,5<?c,6p) ^-3-/( acetil-tio) -metil _/-3-metil-7-oxo-6--/(fenil-acetil)-amino .7-4-tia“l-azabiciclo/“ 3.2.0 _7hepta~ no-2-carboxílico sob a forma de um pó floculento branco.

Exemplo 10

Sal mono-sódico do ácido Γ 2S-(2« ,3<χ ,5<χ ,6p) ,7-3-/^(2,5--di-hidro-3-mercaPto-2-metil-5-oxo-l,2,4-triazina-6-il)-oxi J--metil JP-S-metil^-oxo-ô-ZTfenil-acetil) -amino J^-tia-l-aza-bicido/* 3.2.0 J'heptano-2-carboxilico

Dissolveu-se éster (4-nitrofenil)-metilico do ácido £ 2S-(2«,3oc,5 <x ,6p) .7-3-(bromo-metil)-3-metil-7-oxo-6--/Vfenil-acetil)-amino ./-l-aza-^-tia-biciclo/” 3.2.0 JTheptano--2-carboxílico em dimetilformamida (6,55 ml) e adicionou-se tetra-hidro-2-metil-3-tioxo-l,2,4-triazina-5,6-diona (378,5 mg; 1,191 mmole) e agitou-se à temperatura ambiente durante 16 horas e 50 minutos. Lavou-se a camada de acetato de etilo com água (3 x 55 ml) e com uma solução de cloreto de sódio Ç55 ml), depois secou-se sobre Na2S04, filtrou-se e concentrou--se para proporcionar um resíduo que se purificou por cromato-grafia rápida utilizando tetra-hidrofurano a 7% em cloreto de metileno. Obteve-se o produto desejado (301,8 mg; 0,482 mmole; 25,1% de rendimento) e um produto adicional menos puro (148,1 mg; 0,236 mmole; 12,3% de rendimento).

Dissolveu-se este produto éster £-nitrobenzílico (289

mg; 0,461 mmole) em acetato de etilo (9,58 ml) e adicionou--se NaHCO- 0,1N (4,61 ml; 0,461 mmole), seguindo-se a adi-

J çio de catalisador Pd/C a 10% (292,4 mg). Agitou-se a mistu ra à temperatura ambiente sob atmosfera de hidrogénio. Decorridas 2 horas e 45 minutos filtrou-se a mistura reaccio-nal através de celite e lavou-se a celite com água e acetato de etilo. Após a separação das fases, fez-se passar a fase aquosa através de um filtro em seringa de múltiplos poros ("milipore") de 0,5 mm e liofilizou-se para se obter um oro duto bruto (106,4 mg). Purificou-se este produto por HPLC utilizando acetonitrilo/H^O. Obteve-se um produto relativamente puro (53,9 mg) e fracçóes menos ouras (13,2 mg), Fez--se ainda uma purificação adicional em coluna HPLC, obtendo--se um produto melhor (15,7 mg).

Exemplo 11

Ester (4-nitrofenil)-metilico do ácido £ 2S-(2« ,3«,5, ép) /-3-//( 2-furanil-carbonil)-tio /-metil_7-3-metil-7-oxo--6-/(fenil-acetil)-amino_7-4-tia-l-azabiciclo/3.2,0 .Thenta-no-2-carboxilico

Durante 1 hora agitou-se à temperatura ambiente uma mistura de 82 mg (0,641 mmole) de ácido tiofuróico, 30 ml de acetona, 54 mg (0,643 mmole) hidrogenocarbonato de sódio, 351 mg (0,641 mmole) de éster (4-nitrofenil)-metilico do ácido / 2S-(2 o<l,3g< ,5<x ,6jB) /-3-(bromo-metil)-3-metil-7-oxo-6--/(fenil-acetil) -amino /^-tia-l-azabiciclo/ 3.2.0 /heptano- .7 /

/-5.0- -2-carboxílico e água (10 ml). Concentrou-se a mistura reac-cional sob pressão reduzida até se formarem duas fases e depois partilhou-se entre acetato de etilo e urna solução de cloreto de sódio. Separou-se a fase orgânica, extraiu-se com uma solução de cloreto de sódio (2x) e secou—se sobre sulfato de sódi ahidrcvApós a filtração do dessecante e a evaporação do dissol_ vente sob pressão reduzida fez-se a cromatografia do resíduo em gel de silica CeluiçSo com hexano: acetato de etilo a 1:1) Para proporcionar 248 mg de produto.

Exemplo 12

Sal mono-sódico do ácido Γ 2S-f 2 <*.3 . 5 . 6p 17-3-/Z(2-fura- nll-carbonil)-tio .Z-metil .Z^-oxo-e-ZEfenil-acetil)-amino J7--4-tia-l-azabiciclo/“3.2.0 _7heptano-2-carboxllico

Agitou-se uma mistura de 250 mg de catalisador de paládio sobre carvão a 10%, 40 ml de água desionizada, 40 mg (0,476 mmole) de hidrogenocarbonato de sódio, 248 mg (0,41.7 mmole) de éster (4-nitrofenil)-metílico do ácido £2S-(2<* , 3 t< ,5 °< ,6p) -7-32-furanil-carbonil)-tio _/-metil _7-3 -metil--7-oxo-6-/’(fenil-acetil) -amino _/-4-tia-l-azabiciclo/" 3.2.0 J-heptano-2-carboxílico e 40 ml de acetato de etilo, sob atmosfera de hidrogénio (pressão inicial de 55,5 psi ou 383 kPa) à temperatura ambiente, num aparelho de Parr durante 2 horas. Removeu-se o catalisador por filtração através de uma almofada de celite sobre um funil de disco de vidro sinterizado e lavou-se o produto sólido da filtração com água fria. Adicionou-se cloreto de sódio aos filtrados e produtos de lavagem reunidos. Separou-se a fase aquosa/ extraiu-se com acetato de etilo (2 x) e liofilizou-se. Dissolveu-se o resíduo em 45 ml de água desionizada e colocou-se em 3 colunas C18 Sep-Paks ligadas em série. Após a eluição com um gradiente dissolvente de água e acetonitrilo (100% de água até 33% de acetonitrilo)e liofilização, obteve-se 3 6 mg de produto.

Exemplo 13

Ester (4-nitrofenil)-metllico do ácido 2S-(2 *c,3 oc,5e< , 6ψ) -7-3-(f luoro-metil) -3-metil-7-oxo-6—Z~(f enil—acetil) -*mi-no „7-4-tia-l-azabiciclo/" 3,2.0 7heptano-2-carboxilico

Adicionou-se/ gota a gota, à temperatura ambiente, uma solução de 46 mg (0,362 mmole) de fluoreto de prata em 3 ml de água desionizada a uma solução agitada de 200 mg (0,365 mmole) de éster (4-nitrofenil)-metllico do ácido /"2S-(2cv, 3 °4., 5c*c#6|3) _7— 3 — (bromo—metil) — 3 —metil—7— oxo—6-T"(fenil— acetil) --amino _7-4—tia-1—azabiciclo^- 3.2.0 _7heptano-2—carboxílico em 30 ml de acetona (protegeu-se o balão da luz cobrindo-o com uma folha de alumínio). Agitou-se a mistura reaccional à tem peratura ambiente durante 5,5 horas e filtrou-se. Concentrou--se o filtrado sob pressão reduzida até se formarem duas fases e partilhou-se entre acetato de etilo e uma solução de cloreto de sódio. Separou-se a fase orgânica, lavou-se com uma solução de cloreto de sódio (3 x) e secou-se sobre sulfato de sódio anidro. Após a remoção do dessecante por filtração e após eva-poraçao do dissolvente sob pressão reduzida, fez-se a cromato- grafia do resíduo sobre gel de silica. A eluição com hexano/ /acetato de etilo a 1:1 proporcionou 4 7 mg de oroduto.

Exemplo 14

Sal de sódio do ácido Z* 2S-( 2 <*. 3 , 5 «x~, 6j^) ,/-3 -»(f luoro-me- til) -3~metil-7~oxo-6-/‘(fenil-acetil) -amino _7-4-tia-l-azabi-ciclo/"3.2.0 _7heptano-2-carboxilico

Agitou-se à temperatura ambiente uma mistura de 120 mg de catalisador paládio sobre carvão a 10%, 40 ml de água de-sionizada/ 25 mg (0,298 mirtole) hidrogenocarbonato de sódio, 120 mg (0,246 mmole) de éster (4-nitrofenil)-metílico do áci do £ 2S-(2 << ,3 oc , 5oc,6p) ,/-3-(fluoro-metil)-3-metil-7-oxo-6--/Tfenil-acetil)-amino _/-4-tia-l-azabiciclo/' 3.2.0 JTheptano--2-carboxilico, e 40 ml de acetato de etilo, sob atmosfera de hidrogénio (pressão inicial de 55,5 psi ou 383 kPa), num equipamento de Parr, durante 2 horas. Reraoveu-se o catalisador por filtração através de uma almofada de celite num funil de disco de vidro sinterizado e lavou-se o bolo da filtração com água fria. Adicionou-se cloreto de sódio sólido aos filtrados e produtos de lavagem reunidos. Separou-se a fase aquosa, extraiu-se com acetato de etilo (2 x) e liofilizou-se. DissoJL veu-se o resíduo em 45 ml de água desionizada e colocou-se em três colunas C18 Sep Paks ligadas em série. Após a eluição com um gradiente dissolvente constituído por água e por acefo nitrilo (100% de água até 33% de acetonitrilo) e mediante lio filizaçao obteve-se 36 mg de produto. 53 —

Exemplo 15

Sal de sódio do ácido £ 2S-(2 °^.3 <*: ,5&<r .6^) ,7-3-/7^3.4--bis(acetiloxi)-benzoil,7-tio,7-metil J^-metil-V-oxo-e--^fenil-acetil)-amino /-é-tia-l-azabiciclo/’3,2,0.7hep-tano—2-carboxilico

Dissolveu-se o ácido 3,4-bis(acetil-oxi)-benzeno--carbotióico (113#6 mg; 0,447 mmole) em KHC03 0,1N (4,24 ml; 0,424 mmole) e 10,6 ml de acetona. Adicionou-se éster (4-nitrofenil) -metílico do ácido 2S-(2«< ,3«c ,5 <>c,6p) -3-(bromometil)-3-meti1-7-oxo-õ-ZXfenil-acetil)-amino J--4-tia-l-azabiciclo/"3.2.0-/heptano-2-carboxilico (231 mg; 0,421 mmole) e agitou-se a mistura reaccional à temperatu ra ambiente sob atmosfera de azoto. Decorridos 50 minutos, adicionou-se acetato de etilo (100 ml) e hidrogenocarbona-to de sódio (100 ml). Após a separação da camada de acetato de etilo, lavou-se esta com uma solução saturada de cio reto de sódio (100 ml) e depois secou-se com sulfato de só dio, filtrou-se e concentrou-se para proporcionar um resi-duo bruto (248 mg). Dissolveu-se este produto (156 mg; 0,216 mmole no caso de se considerar puro) em tetra-hidrofurano (10 ml) contendo etanol (0,5 ml). Adicionou-se o catalisador de Pd/C a 10% (200 mg) e agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente sob atmosfera de hidrogénio, Decorri^ das 2 horas e 25 minutos, filtrou-se a mistura reaccional através de celite e concentrou-se para proporcionar um resi. duo que se dissolveu imediatamente em tetra-hidrofurano (2-3 ml) e adicionou-se água em quantidade suficiente (2 ml) Para Λ54- tornar a solução límpida. A seguir, adicionou-se NaHCO^ 0,1 N (1,5 ml; 0,15 mmole) com tetra-hidrofurano suficiente para proporcionar novamente uma solução límpida (Nota: adicionou-se acetonitrilo, 1 a 2 ml). Depois eliminou-se o tetra-hidrofurano e o acetonitrilo para proporcionar uma massa amarela, que se diluiu com água (3 ml) e depois filtrou-se através de celite (muito lentamente). Purificou-se o filtrado por HPLC utilizando aceto nitrilo/água. 0 produto pesava 22,8 mg (0,0375 mmole; 17,34% de rendimento).

Exemplo 16

Sal, mono-sôdico do ácido Γ 2S-(2«=<.3 <=<-,5 <x.6j^ ,7-3-/713.4--di-hidroxi-benzoil) -oxil_7-metil _7-3-metil-7-oxo-6-/-f fe-nil-acetil)-amino JM-tia-l-azabiciclo/’ 3.2.0 .Theptano-?--carboxilico

Durante 24 horas, agitou-se à temperatura ambiente uma mistura de 200 mg (0,365 mmole) de éster (4-nitrofenil)— -metilico do ácido 4f2S-(2-<,3^/5«x,6Ç)J7-3-(bromometil)-3- -metil-7-oxo-6-/Tfenil-acetil)-amino_7-4-tia-l-azabiciclo- 4Γ3.2.0 Jheptano-2-carboxílico, 60 mg (0,39 mmole) de ácido 3,4-di-hidroxi-benzóico, 42 mg (0,39 mmole) de hidrogenocar-bonato de sódio, 40 ml de acetona e 10 ml de água desionizada e concentrou-se sob pressão reduzida até se formarem duas fases. Partilhou-se a mistura entre acetato de etilo e uma solução de cloreto de sódio. Separou-se a fase orgânica, la- vou-se com uma solução de cloreto de sódio (3 x) e secou-se sobre sulfato de sódio anidro. Após a filtração do dessecan te e evaporação do dissolvente sob pressão reduzida# adicio nou-se o resíduo a uma mistura de 180 mg de catalisador de Paládio sobre carvão a 10%# 40 ml de água desionizada# 30 mg (0,357 mmole) de hidrogenocarbonato de sódio e 40 ml de acetato de etilo. Hidrogenou-se a mistura (57#5 psi; 396 kPa) à temperatura ambiente durante 2 horas. Filtrou-se o catalisador através de uma almofada de celite sobre um funil de disco de vidro moído e lavou-se com água a almofada de filtração. Adicionou-se cloreto de sódio sólido ao filtrado e aos produtos de lavagem reunidos. Separou-se a fase aquosa# extraiu-se cora acetato de etilo (2 x) e liofilizou--se durante a noite. Dissolveu-se o resíduo em 21 ml de água desionizada e colocou-se em três colunas C18 Sep paks ligadas em série. Após a eluição com um gradiente dissolvente constituído por água e acetonitrilo (100% de água até 33% de acetonitrilo) e após liofilização obteve-se 21 mg do nroduto.

Exemplo 17

Sal de sódio do ácido Z*2S-(2 ^.3 pc. 5 . 6jB) 7-3-/Τ’ 3 - (1H- -imidazol-4-il) -l-oxo-propoxi)_7-metil ^-3-meti 1-7-oxo-6--Ztfenjl-acetil)-amino -7-4-tia-l-azablciclo/“ 3.2.0 7hePta-no-2-carboxilico

Durante 20 horas# agitou-se à temperatura ambiente uma mistura de 200 mg (O#365 mmole) de éster (4-nitrofenil) '' -56- / -raetílico do ácido 2S-(2 ,3 ~ , 5*c , 60) .7-3-(bromometil) - -3-metil-7-oxo-6-/’Cfenil-acetil) -amino .T^-tia-l-aZabici-clo/~3.2.0_7heptano-2-carboxilico, 70 mg (0,5 mmole) de ácido 3-(4-imidazolil)-propanóico, 42 mg (0,5 mmole) de hi, drogenocarbonato de sódio, 20 ml de acetona e 7 ml de água, concentrou-se sob pressão reduzida até se formarem duas fa ses e partilhou-se entre acetato de etilo e uma solução de cloreto de sódio. Separou-se a fase orgânica, extraiu-se com uma solução de cloreto de sódio (3 x) e secou—se sobre sulfato de sódio anidro. Após a remoção do excicante nor filtração e depois da evaporação do dissolvente sob pressão reduzida adicionou-se o residuo a uma mistura de 210 mg de catalisador de paládio sobre carvão a 10%,50 ml de água de-sionizada, 30 mg (0,45 mmole) hidrogenocarbonato de sódio e 50 ml de acetato de etilo. Hidrogenou-se a mistura (55,0 psi/ ou 379 KPa) num aparelho de Parr à temperatura ambiente durante 1,5 horas. Filtrou-se o catalisador através de uma almofada de celite sobre um funil de disco de vidro moído e lai vou-se a almofada com água fria. Adicionou-se cloreto de sódio sólido ao filtrado e às soluçóes de lavagem reunidos, Ex traiu-se a fase aquosa com acetato de etilo (2 x) e liofili-zou-se durante a noite. Dissolveu-se o residuo em 23 ml de água desionizada e colocou-se em três colunas Sep Paks ligadas em série. Após a eluição com um gradiente dissolvente constituído por água e por acetonitrilo (100% de água até 50% de acetonitrilo) e depois da liofilização obteve-se 17 mg de produto. ..,-57- /

Exemplo 18

Sal interno do hidróxido de Γ 2S-( 2 °c . 3 , 5 ^ ,6B) _7-l-/Z" 2- -carboxi-3-metil-7-oxo-6-/'(fenil-acetil) -amino ./-4-tia-l-azabiciclo/* 3,2.0 _7heptano-3 —il ./-metil-piridlnio A um frasco seco, de tara conhecida/ contendo uma atmosfera de árgon adicionou-se AgBF^ (0#0453 g; 0,234 mmole). A um balão de fundo redondo seco separado contendo uma atmosfera de árgon adicionou-se éster (4-nitrofenil)--metilico do ácido Z~2S-(2<*-#3<»S5<x,6p)-7-3-(bromometil)- -3-metil-7-oxo-6-,/Cf enil-acetil) -amino _T-4-tia-l-biciclo-/*3.2.0 _/heptano-2-carboxílico (0,16 g; 0,21 mmole), CH2C12 anidro (3 ml) e piridina anidra (50 mg; 0,64 mmole) enquan to se mantinha a agitação com uma vareta magnética. Enquan to se agitava rapidamente a solução à temperatura ambiente, adicionou-se rapidamente o AgBF^ através de um funil de papel transparente. A mistura reaccional assumiu um asoecto branco turvo. Envolveu-se o balão com uma folha de alumínio. Decorridas 3,5 horas, filtrou-se a mistura reaccional através de uma almofada de celite e lavou-se a celite com CH9C1_ e a seguir concentrou-se sob vazio para proporcionar um sólido branco. Lavou-se esse sólido com água e depois com soluções a 5%, a 10% e a 20% de CH3CN/H20 (obteve-se uma suspensão branca), aplicando-se cada solução de lavagem (cer ca de 10 ml) a uma coluna C18 Sep Pak e £ez-se a eluição com CH-jCN/H^O, Eluiu-se da coluna o composto desejado utilizando 10-40% de CH3CN/H20. Reuniram-se as fracções adequadas e eli a minou-se o dissolvente orgânico sob vazio e liofilizou-se fase aquosa para proporcionar tetrafluoroborato de £2S--(2^,3^,5^ ,6p) 3-metil-2-/2f(4-nitro£enil)-meto- xi ./-carbonil .7-7-oxo-6-/'(fenil-acetil) -amino .7-4-tia-l-aza biciclo/'3.2,0 7hept-3-il_7-metil_7-piridinio sob a forma de um sólido floculento branco; (RfSi02) =0,5/*(Et0Ac/lA.c0H/H20) 6:2:1).7, Apareceu uma mancha Para os valores menores de Rf =0,2 na TLC (Si02) quando se armazenou em água o produto anteriormente obtido, à tempera tura ambiente, durante 24 a 48 horas. 0 produto desejado é solúvel ( > 1 mg/ml) em EtOAc, CH Ci CDC13, CH3COCH3, e ligeiramente solúvel em água. A uma mistura de tetraf luoroborato de £ 2S-(2«< ,3« , 5 c<,6|S) £-!-££ 3-metil-2-%7"(4-nitrofenil) -metoxi ./-carbonil J -7-oxo-6-7Tfenil-acetil)-amino_7-4-tia-l-azabicicloZ"3.2.0 J-hept-3-il_/-metil J7-piridinio (0,200 g; 0,32 mmole), tetra--hidrofurano (10 ml) e água (100 ml), adicionou-se 0,2 g de catalisador de Pd/C a 10% e adicionou-se também NaHC03 (0,1 m!-l; 3,2 ml) e agitou-se com uma vareta magnética. Fez-se o vazio no balao que continha a suspensão em agitação rápida e logo se seguida carregou-se com hidrogénio, três vezes. Decorridas 2 horas fez-se o vazio e carregou-se o balão com érgon e filtrou-se a suspensão através de uma almofada de ce lite. Eliminou-se o tetra-hidrofurano do filtrado sob vazio e fez-se passar a camada aquosa remanescente através de 3 co lunas C18 Sep Paks ligadas em série. Fizeram-se passar soluções de acetonitrilo/água (0, 2, 5, 10, 20, 100%, 20 ml de cada uma delas) através de uma coluna C18. Procedeu-se à recolha das fracções apropriadas (5-10% de CH3CN/H20), eliminou

-se o CH3CN sob vazio e liofilizou-se a camada aquosa para proporcionar 25 mg do produto desejado sob a forma de um pó branco.

Exemplo 19

Ester, (4-nitrofenil) -metilico do ácido f 2S-(2 ,3 ,5<* , 6p) .7-3~£££ 3 ,4-bis(acetiloxi) -benzoil 7-oxi 7-metil 7-3--metil-T-oxo-e-ZCfenil-acetil)-amino _7-4-tia-l-azabiciclo-£ 3.2.0-7heptano-2-carboxilico

Durante 20 minutos adicionou-se, gota a gota, uma suspensão de 250 mg (0,73 mmole) de diacetiloxi-benzoato de prata em 20 ml de acetonitrilo anidro a uma solução agi tada, à temperatura de 0°C, de 0,4 g (0,73 mmole) de éster (4-nitrofenil)-metilico do ácido /“2S-(2ec. ,3 cc,5%6p) J7-3--(bromometil) -3-metil-7-oxo-6-/Ifenil-acetil) -amino _/-4 — -tia-l-azabiciclo/T3.2.0_/heptano-2-carboxílico em 20 ml de acetona anidra, num balão envolvido com uma folha de alumínio e colocado em um banho de gelo/água. Agitou-se a mistura reaccional a uma temperatura próximo de· 0°C durante 5 ho ras e filtrou-se através de uma. coluna, curta de gel de síli caCraolhada com acetona). Lavou-se a coluna com 100 ml de ace. tona e eliminou-se o dissolvente dos filtrados e das soluções de lavagem reunidos, por evaporação sob pressão reduzida. Fez--se a cromatografia do resíduo em gel de sílica (malha 230--400, eluição com hexano/acetato de etilo a 1:1), para oropor cionar 242 mg de produto. -60-

Exemplo 20

Sal mono-sódico do ácido Γ 2S-(2«.3.5°* 6B) 7-3-£££ 3.4--bis (acetil-oxi)-benzoil ,7-oxi _7-metilJ;ÍÍ~3-metil-7-oxo-6--/'(fenil-acetil) -amino _7-4-tia-l-azabiciclo/' 3.2.0 _7heptano--2-carboxllico

Durante 3 horas agitou-se à temperatura ambiente uma mistura de 100 mg de catalisador de paládio sobre carvão a 10%, 50 ml de água desionizada, 12 mg (0,143 mmole), de hi-drogenocarbonato de sódio, 100 mg (0,142 mmole) de éster (4--nitrofenil) -metílico do ácido /“2S-(2^,3 ,5«c ,6$) J-3- -/Z/" 3,4-bis( acetiloxi)-benzoil .7-oxi ,7-metil y-3-metil-7--oxo-6-/"(f enil-acetil) -amino J7-4-tia-l-azabiciclo/' 3.2.0 J-heptano-2-carboxílico e 50 ml de acetato de etilo, sob atmos^ fera de hidrogénio (pressão inicial de 55 psi, ou 379 kPa)/ num aparelho de Parr. Removeu-se o catalisador por filtração através de uma, almofada de celite sobre um funil de disco de vidro moído e lavou-se o bolo da filtração com uma pequena quantidade de agua fria.. 0 filtrado e as soluções de lavagem reunidos foram colocados num funil separador. Removeu—se a camada aquosa e liofilizou-se. Purificou-se o resíduo numa coluna C18 Sep-Paks (100% de água até 40% de acetonitrilo/ /água), para se obter 38 mg de produto.

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Exemplo 7.1

Sg.1 mono-sódico do ácido £ 2S-(2<*= ,3^.5^ ,6p) J^-3-metil-_7-oxo-6-^Tffenil-acetil) -amino ,7-3-/1 tiocianato) -metil J-Zirtia-l-azablciclo/: 3.2.0 7hPptano-?--rarboxilico A uma solução de éster (4-nitrofenil)-metílico do ácido £ 23-(2~,3«*,5ο<,6ρ) ,/-3-(bromometil)-3-metil-7--oxo-6-/( fenil-acetil) -amino_/-4-tia-l-azabiciclo,/~3.2.0 J-heptano-2-carboxílico (0,541 g; 1,06 mmole), acetona (10 ml) e água (10 ml), adicionou-se KSCN (0,113 g; 1,17 mmole). De Pois de se agitar à temperatura ambiente durante 7 horas, eliminou-se a acetona sob vazio e adicionou-se EtOAc (50 ml) a suspensão resultante. Lavou-se a camada de EtOAc com água (30 ml), com uma solução de cloreto de sódio (30 ml), secou--se sobre ^a^SO^, filtrou-se e concentrou-se sob vazio. Bis-solveu-se o resíduo numa quantidade mínima de CH2C12, aplicou-se a uma. coluna de cromatografia rápida (40 gramas de S^°2' âe EtGAc/éter de petróleo, fracçbes de 20 ml) e fez-se a eluição para se obter 0,28 g de éster (4-nitrofenil)--metílico do ácido £ 2S-(2oc,3o<,5<=<,6J3) .7-3-metil-7-oxo-6-—/Xfenil-acetil) - ami no _7-3—/"(tiocianato) -metil ,/-4-tia-1-az©-biciclo/"3.2.0_/-heptano-2-carboxílico sob a forma de um sóli do amorfo de cor branco sujo. A uma solução de éster (4-nitro£enil)-metílico do ácido /" 2S-(2o«. , 3 ck_, 5 c<., 6p) _7-3-metiÍ-7-oxo-6-/*(f enil-acetil) --amino ./-3-/7tiocianato)-metil_7-4-tia-l-azabiciclo/” 3.2.0 J-heptano-2-carboxílico (0,167 g; 0,32 mmole), EtOAc (2 ml),

água (3 ml), e NaHCO^ (0,04 g), adicionou-se 0,17 g de cata lisador de Pd/C a 10% e agitou-se com uma vareta magnética. Pez-se o vazio no foalao que continha a suspensão em agitação rápida e logo a. seguir carregou-se com hidrogénio gasoso três vezes. Depois de se agitar a mistura reaccional à temperatura ambiente, sob atmosfera de hidrogénio (fornecida por balao) durante 3,5 horas, fez-se o vazio e encheu-se o balão com árgon e depois filtrou-se através de uma almofada de celite. Eliminou-se o EtOAc do filtrado sob vazio e liofi-lizou-se a suspensão aquosa resultante. Aplicou-se o sólido resultante a três colunas C18 3 Sep Paks ligadas em série.

Pez-se a eluição da coluna com um gradiente desde 0 a 100% óe GH^CN/H^O, recolhendo-se as fracçóes apropriadas que foram depois concentradas sob vazio para eliminar o CH3CN e de pois liofilizou-se para se obter o produto desejado sob a forma de um pó floculento branco? (Rf =0,3 (Si02); Et0Ac/Ac0H/H20 a 60:3:1).

Uma segunda purificação por HPLC, utilizando uma coluna C18-í-íg Whatman, eluindo com CH^CH/H20, oronorcionou o produto desejado numa forma pura para ensaio.

Exemplo 22

Sal mono-sódico do ácido Γ 2S-(2c*~, 2o<- (E) . , 6p) 7-3-///3- -(lH-imidazol-4-il)-l-oxo-2-propenil J7-oxi 7-metil _7-3-metil--V-oxo-e-^fenil-acetil) -amino _7-4-tia-l-azabiciclo/" 3.2.0 _/-heptano-2-carboxllico 63-

Durante 24 horas agitou-se à temperatura ambiente uma solução de 200 mg (0,365 mmole) de éster (4-nitrofe-nil) —meti lico do acido £" 2S-(2o£,3íx ,5oc , 6]3) JT-3 — (bromomes til)-3-metil-7-oxo-6-/(fenil-acetil)-amino _/-4-tia-l-aza-biciclo/3.2.0 _7heptano-2-carboxilico, de 76 mg (0,475 mmo le) de urocanato de sódio, 20 ml de acetona e 7 ml de água. Concentrou-se a mistura reaccional sob pressão reduzida até se formarem duas fases e depois partilhou-se entre ace tato de etilo e uma solução de cloreto de sódio. Extraiu--se a fase orgânica com uma solução de cloreto de sódio (2 x), secou-se sobre sulfato de sódio anidro, filtrou-se e evaporou-se o dissolvente sob pressão reduzida. Preparou--se uma mistura com o resíduo, 200 mg de catalisador de paládio sobre carvão a 10%, 40 ml de água desionizada, 40 ml de acetato de etilo e 24 mg (0,286 mmole) de hidrogenocarbçD nato de sódio e agitou-se à temperatura ambiente sob atmosfera de hidrogénio (42 psi, ou 290 kPa) num aparelho de Perr, durante 2 horas. Removeu-se o catalisador por filtração atra vés de uma almofada de celite num funil de disco de vidro sinterizado e lavou-se com água fria o produto da filtração. Adicionou-se cloreto de sódio sólido aos filtrados e soluções de lavagem reunidos. Separou-se a fase aquosa, extraiu-se com acetato de etilo (2 x) e liofilizou-se. Dissolveu-se o resíduo em 19 ml de água desionizada e colocou-se em 3 colunas C18 Sep Paks ligadas em série. Após a eluição com um gradiente dissolvente constituído por água e por acetonitrilo (100% de água até 50% de acetonitrilo) e depois da liofilização obteve-se 55 mg de produto. 64-

Exemplo 23

Sal mono-s6dico do ácido £ 2S f ^,3^.5^,6?(Z)JJ-6-// 2-(2--amino-4-tiazolil)-2-(metoxi-imino)-acetil_7amino 7-3--metil-3-/‘/,(l-metil-lH-tetrazòl-5-il) tio _7metil _7-7-oxo--4-tia-l-azabiciclo/3.2.Q7heptano-2-carboxílico A uma solução de éster (4-nitrofenil)-metílico do ácido 2S~( 2 <x , 3 oc, 5 c< , 6|ϊ) ^-S-metil-S-Z^l-metil-lH-te-trazol-5-il) -tio _7-metil ./^-oxo-ô-^fenil-acetil) -amino J--4-tia-l-azabiciclo/”3.2.0 _7heptano-2-carboxflico (0,741 g; 1,27 mmole), piridina (0,126 g; 1,59 mmole) em CHC13 (9 ml), arrefecida num banho frio (-15°C a-10°C), adicionou-se PC15 (0,291 g; 1,40 mmole) de uma sô vez e no estado sólido. Após a agitação a -15°C uma temperatura compreendida entre 10°C durante 1 hora adicionou-se n-propanol (0,76 g; 12,7 mmole), tendo-se adicionado 40 minutos mais tarde uma solução de cio reto de sódio (5 ml). Deixou—se a mistura resultante em agitação à temperatura de cerca de 0°C durante 15 minutos após o que se transferiu a mistura para um funil separador. Adicionou-se EtOAc (50 ml) e lavou-se a mistura com NaHC03 (solução saturada), com água e com uma solução de cloreto de só dio, secou-se sobre NaHC03, filtrou-se e concentrou-se sob vazio. Dissolveu-se o resíduo em CH2C12 (10 ml) e â solução resultante adicionou-se S-/” 2-benzotiazolil_/-2-amino-4-tia-zolo-glioxilato de (E)-O-metiloxima. Depois de se ter comple tado a reacçao conforme determinado por TLC (Si09, EtOAc), num intervalo compreendido aproximadamente entre 3 e 4 horas, concentrou-se a mistura reaccional sob vazio e purificou-se

por cromatografia rápida (Si02, EtOAc) para se obter o éster (4-nitrofenil) -metílico do ácido £ 2S-£ 2cc , 3 ,5 c* # 6f(z) _Z/-6-f£ 2-(2-amino-4-tiazolil)-2-(metoxi~imino)-ace-til _7-amino_7-3-metil-3-/]/,(l-metil-lH-tetrazol-5-il) -tio J--metil J7-7-oxo-4-tia-l-azabiciclo/' 3.2*0 ,/heptano-2-carbo-xílico no estado sólido amorfo e de cor branca. A uma solução de éster (4-nitrofenil)-metílico do ácido Γ 2S-£ 2 oí ,3 <x ,5<χ ,6p(z) 77-€>-/~£ 2-(2-amino-4-tiazolil) -2-(metoxi-imino)-acetil J*-amino _7-3-metil-3-/2f( l-metil-lH--tetrazol-5-il) -tio J-metil ./-7-oxo-4-tia-l-azabiciclo/“ 3.2, 0-/heptano-2-carboxllico (0.058 g; 0,09 mmole), StOAc (2 ml) e de uma solução aquosa de NaHC03 (0,1 M; 0,89 ml), adicionou-se 0,06 g de catalisador de Pd/C a 10% e a,gitou-se com uma vareta magnética. Fez-se o vazio no balão contendo a solução em agitação rápida e encheu-se com hidrogénio gasoso 3 vezes, e deixou-se o seu conteúdo em agitação à temperatura ambiente sob atmosfera de hidrogénio (fornecida por balão) Decorridas 2,5 horas, filtrou-se a mistura reaccional através de uma almofada de celite, removeu-se o EtOAc sob vazio e removeu-se a água por liofilização. Dissolveu-se o sólido resultante em água e purificou-se por cromatografia C18 com 3 colunas Sep Paks ligadas em série e fez-se a eluição com um gradiente CH^CN/H^O. Depois de reunir as fracçóes apropriadas, eliminou-se o CHgCN sob vazio e liofilizou-se a solução resultante para proporcionar o sal mono-sódico do ácido /~2S-~ί- 2 oc, 3 cxz., 5 oc , (z) 7J-6-/Z" 2-( 2-amino-4-tiazolil)-2-(metoxi -imino) -acetil J^-amino J-3 -metil-3 1-metil-iH-tetrazol-5--il)-tio J-metil .7-7-oxo-4~tia-l-azabiciclo/' 3.2.0_7heptano--2-carboxílico sob a forma de um pó floculento branco.

Exemplo 24

Sal mono-sódico do ácido Γ 2S-Γ 2oc ,Zoc . 5<x . epfzj _Z7-6- -Ζ/Γ 2-(2-amino-4-tiazolil)-2-(metoxi-imino)-acetil J--amino7--3-(azidometil)-3-metil-7-oxo-4-tia-l-ag:abiciclo^3.2.Q7- heptano-2-carboxillco

Dissolveu-se pentacloreto de fósforo (320,4 mg; 1,539 mmole) em cloreto de metileno (5,8 ml) e adicionou— -se piridina (141,8 ml? 1,753 mmole) e agitou-se sob uma atmosfera de argon. Arrefeceu—se a solução até uma temperatura compreendida entre -10°C e 15°C (formou-se um precipitado branco logo que se iniciou o arrefecimento). Decorridos 5 a 10 minutos adicionou—se éster(4—nitrofenil)— —metilico do acido ^"2S-(2*<.,3 /x.,5<5< ,6|3) 7~3-(azido—metil)— -3-metil-7-oxo-6-/tfenil-acetil)-amino _7-4-tia-l-azabici-clo/"3.2.o7heptano-2-carboxílico (716 mg; 1,402 mmole) conjuntamente com cloreto de metileno (4,3 ml). Decorridas 1,5 horas, adicionou-se isobutanol (1,29 ml? 14,02 mmoles) e 45 minutos mais tarde adicionou-se uma solução de cloreto de sódio (15 ml) e agitou-se a mistura durante 10 minutos. A esta mistura adicionou—se uma solução saturada de hidrogenocarbonato de sódio (15 ml). Após a separação la-® camada organica com outra porção de solução saturada de hidrogenocarbonato de sódio (15 ml) seguindo-se a lavagem com uma solução de cloreto de sódio (15 ml). Depois secou—se a fase organica sobre sulfato de sódio. Transferiu— -se a solução para um balão contendo S-/“2-benzo-tiazolil Jf-—2—amino-4-tiazolo-glioxilato de (E)-O-metil-oxima (444,5

-67- i mg; 1,396 mmole) e agitou-se sob atmosfera de árgon à tem peratura ambiente durante 1,5 horas. A seguir filtrou-se através de celite e purificou-se por cromatografia rápida, utilizando acetato de etilo e éter de petróleo (3:1) e acetato de etilo, metanol e cloreto de metileno (9:0,25:6 v/v/v). O éster ja-nitrobenzilico obtido pesava 200 mg (0,348 mmole; rendimento de 24,9%).

Dissolveu-se este produto (164 mg; 0,285 mmole) em tetra-hidrofurano (10,8 ml) e adicionou-se catalisador de Pd/C a 10% (165 mg). Agitou-se a mistura à temperatura ambiente sob atmosfera de hidrogénio durante 2 horas. A seguir filtrou-se através de celite ao mesmo tempo que se lavava com tetra-hidrofurano. Dissolveu-se com hidrogeno-carbonato de sódio (26,6 mg; 0,317 mmole) em água e adicio nou-se à solução de tetra-hidrofurano. Depois adicionou-se quantidade suficiente de água e de THF para se manter a so lução límpida. A seguir removeu-se o THF sob vazio Para se obter uma massa amarela que se filtrou (com formação de aJL guma espuma). Seguidamente, fez-se passar o filtrado através de um filtro do tipo seringa com poros múltiplos ("mil-lipore") de 0,45 mm e liofilizou-se (26,4 mg). A seguir pu-rificou-se por HPLC utilizando acetonitrilo e água para se obter 17,6 mg (0,0381 mmole; 13,3% de rendimento).

Exemplo 25

Ester (4-nitrofenil) -metilico do ácido £ 2S-£ 2 ,3 oc . 5 e< . 6p(Z) JJ-Z-rt/: 3 ,4-bis(acetil-oxi) -benzoil_7-oxil ,7-metil 7--6-/ÍT 2-amino-4-tiazolil)-2~(metoxi-imino)-acetil _7-amino J--3-metil-7-oxo-4-tia-l-azabiciclo/'* 3,2.0 -7heptano-2-carboxi-lico

Sob atmosfera de árgon seco arrefeceu-se à temoeratu ra de -12°C com um banho de gelo/sal uma mistura agitada de 61,2 mg ¢0,294 mmole) de pentacloreto de fósforo em 4 ml de cloreto de metileno seco e adicionou-se 0,06 ml (0,75 mmole) de piridina anidra. Depois adicionou-se 1S7 mg (0,265 mmole) de éster (4-nitrofenil)-metilico do ácido /^2S-/" 2^,3^,5^ , 6jp) J-?>-£££ 3,4-bis(acetil-oxi)-benzoil J^-oxiJ^-metil _/-3--metil-7-oxo-6-/'(fenil-acetil) -amino J^-tia-l-azabiciclo-/-3.2,0_7heptano-2-carboxílico e 2 ml de cloreto de metileno anidro, tendo-se mantido a temperatura da mistura de reacção agitada próximo de -12°C com um banho de gelo/sal durante 3,5 horas. Adicionou-se, gota a gota, álcool isobutílico ani dro (0,15 ml; 1,63 mmole) e manteve-se a agitação durante 1 hora e 15 minutos, tendo-se mantido a temperatura próximo de —11°C (banho de gelo/sal). Após a adição, gota a gota, de 0,5 ml de uma solução salina saturada manteve-se a temperatu ra da mistura reaccional agitada próximo de -10°C durante 30 minutos e diluiu-se a mistura reaccional com 6 ml de cloreto de metileno, mais 3 ml de solução saturada de cloreto de sódio e 0,6 ml de uma solução saturada de hidrogenocarbonato de sódio. Separou-se a fase orgânica/ levou-se por extracção com uma solução de cloreto de sódio saturada (3 x) e secou--se sobre sulfato de sódio anidro. Após a remoção do desse-cante por filtração adicionou-se, gota a gota, a solução de éster (4-nitrofenil) -metílico do ácido £ 2S~( 2 cx , 3 <x , 5oc , 6p) -7-3-f££ 3,4-bis(acetil-oxi)-benzoil J^-oxi_7-metilJ-l--oxo-6-amino-4-tia-l-aZabiciclo73 .2.0/heptano-2-carboxílico em cloreto de metileno, à temperatura ambiente, a uma solução agitada de 70 mg (0,2 mmole) de S-jT 2-benzotiazolil_7-—2-amino-4-tiazolo-glioxilato de (E)-O-metil-oxima em 30 ml de cloreto de metileno anidro. Agitou-se a mistura reaccio-nal à temperatura ambiente durante 5,5 horas, lavou-se por extracção com uma solução saturada de hidrogenocarbonato de sódio Çl x) seguindo-se a lavagem com uma solução de cloreto de sódio saturada (3 x) e depois secou-se sobre sulfato de sódio anidro. Após a remoção do dessecante por filtração e após a evaporação do dissolvente sob pressão reduzida, submeteu-se o resíduo a cromatografia sobre gel de sílica e fez-se a eluição com hexano/acetato de etilo a 1:4 para prc> porcionar 47 mg de produto.

Exemplo 26

Sal mono-sódico do ácido f 2S-Z* 2<x-.?>o< ,6p(z) JT-3- -/2T 3 .4-bis(acetil-oxi)-benzoil 7-oxi _7metil 7-6-/^0, r(2-amino-4—tiazolil)-2-(metoxi-imino)-acetil_7-amino|7— -3-metil-7-oxo-4-tia-l-azabiciclo/', 3.2.0 _7heptano-2-r!ar--boxílico

Durante 2,5 horas, à temperatura ambiente, agitou--se uma mistura de 70 mg de catalisador de paládio sobre carvão a 10%, 20 ml de água desionizada, 10 mg (0,12 mraole) de hidrogenocarbonato de sódio, 70 mg (0,091 mmole) de éster (4-nitro-fenil) -metílico do ácido £ 2S-/" 2<x- ,3c« ,5oc ,6p(Z) JJ--3-/2T 3,4-bis(acetiloxi)-benzoil 7-oxi _/-metil J-6-/£ 2--(2-amino-4-tiazolil)-2-(metoxi-imino)-acetil_7-amino_/-3--metil-7-oxo-4-tia-l-azabiciclo/~ 3.2.0_Theptano-2-carboxíli-co e 30 ml de acetato de etilo, sob atmosfera de hidrogénio (à pressão inicial de 56 psi, de 386 kPa), num aparelho de' Parr. Removeu-se o catalisador por filtração através de uma almofada de celite num funil de vidro sinterizado e depois lavou-se o bolo da filtração com água fria. Adicionou-se cloreto de sólido ao filtrado e às soluções de lavagem reuni dos. Separou-se a fase orgânica. Extraiu-se a fase aquosa com acetato de etilo (3 x) e liofilizou-se durante a noite. Dissolveu-se o residuo em água (15 ml) e colocou-se em duas colunas C18 Sep Paks ligadas em série. Após a eluição com um gradiente dissolvente de água e acetonitrilo (desde 100% de água. até 33% de acetonitrilo/água), liof ilizou-se o produto Para proporcionar 14 mg de produto.

Exemplo 27

Sal mono-sódico do éster (4-nitrofenil)-metílico do ácido C 2S-Z"_2 cx-,3 g<L,5c< ,6B(Z) JJ-6-%Z" 2-(2-amino-4-tiazolil)- -2-(metoxi-imino)-acetil 7-amino ,7-3-Ζ2Γ 2,5-di-hidro-6- -hidroxi-2-metil-5-oxo~l.2.4-triazina-3-il)-tio _7-metil /--3-metil-7-oxo-4-tia-l-azabicicloZ~ 3.2.0 _7heDtano-2-carbo- *1.1 jco

Dissolveu-se pentacloreto de fósforo (205,6 mg; 0,987 ramole) em clorofórmio (3,93 ml; recentemente seco através de alumínio). Adicionou-se piridina (90,7 ml; 1,121 mmole) (formou-se imediatamente um precipitado) e arrefeceu-se a suspensão para uma temperatura compreendida entre -10°C e -15°c sob uma atmosfera, de azoto (seco). Decorridos 10 minutos adicionou-se éster (4-nitrofenil)--metílico do ácido £ 2S-(2 3^, 5 , 6p) ./-3-(bromometil) - -3-metil-7-oxo-6-/lfenil-acetil)-amino .^-4—tia-1—azabici-clo/"3.2.0 JTheptano-2-carboxilico (492,4 mg; 0,898 mmole). Decorridos 45 minutos adicionou-se n-propanol (0,67 ml; 8,963 mmoles). Decorrida 1 hora adicionou-se uma solução de cloreto de sódio (10 ml) e agitou-se durante 5 minutos e depois adicionou-se uma solução saturada de hidrogeno-carbonato de sódio (10 ml) e clorofórmio (2 ml) e agitou--se durante mais 5 minutos. Lavou-se a camada de clorofór mio com uma solução de cloreto de sódio (10 ml) e secou-se sobre Na2S04 e a seguir filtrou-se através de celite. Adi-cionou-se S-£ 2-benzotiazolil J7-2-amino-4-tia.zolo-glioxila, to de (E)-O-metil-oxima (285,8 mg; 0,898 mmole) ao filtrado juntamente com alguns mililitros de clorofórmio. A seguir ajustou-se o filtrado à temperatura ambiente sob atmos. fera de azoto (seco). Decorridas 2 horas eliminou-se o dissolvente e dissolveu-se o resíduo (686,4 mg) em cloreto de metileno e purificou-se por cromatografia rápida utilizando acetato de etilo/éter de petróleo na,s proporçóes de 1:1 e 2:1. Obteve-se 121 mg de produto resultante.

Dissolveu-se o produto anterior (119 mg; 0,194 mmole) em acetona (2 ml) e em água (1,25 ml). Adicionou— -se o sal dissódico de tetra~hidro-2-metil-3-tioxi-1,2,4--triazina-5,6-diona (39,4 mg; 0,194 mmole) com acetona {à-,7.1 ml) e agitou-se sob atmosfera de azoto (seco) durante 15 horas. A seguir removeu-se ("stripped ofu) a acetona (ocorreu a formação de espuma). Dissolveu—se nova mente o resíduo em acetato de etilo e água e filtrou-se através de celite. Purificou—se uma parte da camada acruo— sa numa coluna C18 Sep Pak para proporcionar 2,8 mg de produto.

Exemplo 28

Sal di-sódico do ácido /Γ 2S-/~ 2 cx , 3c*·, 5 c* . 6p (2) _Z7-6-/Z~2--(2-aming-4-tiazolil)-2-(metoxi-imino)-acetil .T-amino,7-3--/Γ 2,5-di-hidro-6—hidroxi-2-metil-5-oxo—1,2,4-triazina—3 — 1 -metil-7-οχo-4-tia-1-azabiciclo/T3,2,0_7- heptano-2-carboxilico

Dissolveu-se o sal mono-sódico do éster (4-nitrofe-nil) -metilico do ácido ^25-^2^:,3^,5^:,6^(2) JJ-6-/^2--(2-amino-4-tiazolil)-2-(metoxi-imino)-acetil_/-amino3-2,5-di-hidroxi-2-metil-5-oxo-1,2,4-triasina-3 —il) -tio _J— -metil -7-3-metil-7-oxo-4-tia-l-asabiciclo/'3.2.0^heptano-2- -carboxílico (20,4 mg; 0,0286 mmole) em acetato de etilo (0,6 ml) e adicionou-se NaHG03 0,1 N (0,28 ml; 0,028 mmole) seguindo-se a adição do catalisador de Pd/C a 10% (21,2 mg). Agitou-se a mistura à temperatura ambiente sob atmosfera de hidrogénio. Decorridas 2 horas e 45 minutos, adicionou-se acetato de etilo (1 ml) e NaHC03 0,1N (1 ml) e depois fil trou-se a mistura reaccional através de celite e procedeu--se à separação das fases. Fez-se passar a fase aquosa através de duas colunas C18 Sep Paks para proporcionar 13,4 mg de produto após liofilizaçao. Purificou—se ainda este produto por HPLC utilizando acetonitrilo/água.

Exemplo 29 Éster (4-nitrofenil) -metilico do ácido 2723-/^2^.3(^,5^. -Ζ7-6-/0Γ -2-/2Γ(4-etil·-2,3-dioxo-l-piperazinil·)-carbo-nll,7-amino J-2 -f enil-acetil _7-amino _7-3 -metil-3 -/Z( 1-metil--lH-tetrazol-5-il)-tio _7-metil_7-7-oxo-4-tla-l-azabiciclo-£ 3.2.0 _7heptano-2-carboxilico

Dissolveu-se ácido (R)--/Z(4-etil-2,3-dioxo-pipe-razinil)-carbonil_7~amino./-benzeno-acético (157,9 mg; 0,495 mmole) e 2-mercapto~benzotiazol (84,1 mg; 0,504 mmole) em clorofórmio (3,15 ml). Dissolveu-se 1,3-diciclo-hexil-cerbo-diimida (101,5 mg ;; 0,493 mmole) em clorofórmio (1,88 ml) e adicionou-se à primeira solução. Agitou-se à temperatura ambiente durante 1 hora e 45 minutos. Simultaneamente preparou--se a amina livre do éster (4-nitrofenil)-metilico do ácido £ 2S-(2oc ,3 e< ,5<X , 6jB) £-3 -metil-3 —££{ 1-metil-lH-tetrazol-5--il)-tio _7-metil _7-7-oxo-6-amino-4-tia-l-azabiciclo/" 3.2.0 heptano-2-carboxílico,do modo seguinte: dissolveu-se pentaclo reto de fósforo (90 mg; 0,432 mmole) em 2 ml de clorofórmio «

(filtrado através de alumina) e adicionou-se piridina (39/7 ml; 0,491 mmole) (formou-se imediatamente um precipitado) . Arrefeceu-se a mistura até uma temperatura compreendida entre —15 C e —20 C durante um período compreendido entre 5 e 10 minutos e depois adicionou-se o éster (4-nitrofenil) -metílico do ácido 2S-(2oc,3oc,5A: ,6(3) J--3-metil-3 -/7( l-metil-lH-tetrazol-3-il) -tio J^-metil J-Ί--oxo-6-/*(f enil-acetil) -amino^7-4-tia-l-azabicicloZ~ 3,2,0..7-heptano-2-carboxílico. Decorrida 1 hora e 15 minutos adi-cionou-se n-propanol (305 ml; 4,080 mmoles). Decorrida 1 hora e 40 minutos adicionou-se uma solução de cloreto de sódio (3 ml) e agitou-se durante 10 minutos e depois proce, deu-se à separação das fases e adicionou-se uma solução sjl turada hidrogenocarbonato de sódio (4 ml) e clorofórmio (2 ml). Procedeu-se à extracção das fases aquosas com clorofórmio (2 ml). Reuniram-se as camadas de clorofórmio e se_ cou—se sobre Na2S0^ e a seguir filtrou—se e adicionou—se o filtrado à mistura reaccional preparada na primeira parte. Decorridas 2 horas extraiu-se a mistura reaccional com uma solução saturada de hidrogenocarbonato de sódio e secou-se a fase orgânica sobre e depois filtrou-se e purifi- co^“s® por cromatografia rápida utilizando como eluente uma mistura de acetato de etilo/metanol/cloreto de metileno a 9:0,25:6, 0 produto parcialmente purificado (103 mg) foi pu rificado novamente por HPLC utilizando acetato de etilo/clo reto de metileno, obtendo-se 61,6 mg de produto (0,0803 mmo le; 20,3% de rendimento).

Exemplo 30

Sesguidrato do sal mono-sódico do ácido Γ 23-Γ ,2> * ts o< M 6p(R ) -€>—££_ ~2—££ 4-etil-2,3-dioxo-l-piperazinil) -carbo- nil 7-amino ,Ζ-2-fenil-acetil _/-amino .7-3-metil-3-/Z(l-metil--lH-tetrazol-5-il) -t-io ./-rnetil J—7-oxo-4 -tia-l-azabiciclo-£ 3.2.0. J7heptano-2-carboxílico

Dissolveu-se éster (4-nitrofenil)-metílico do ácido £ 2S-£ 2<X ,3<x ,50« ,6p(RX) JJ-6-££ -2-/2'‘C4-etil-2#3-dioxo-l--piperazinil)-carbonil ./'-amino.J^-fenil-acetil _/-amino _/-3 --metil-3-££{ l-metil-lH-tetrazol-5-il)-tio ./-metil ^/-7-oxo-4--tia-l-azabiciclo/’3#2,0 J7heptano-2-carboxílico (38,5 mg ; 0,0502 mmole) em acetato de etilo (1,74 ml) e adicionou-se o catalisador de Pd/C a 10% (39,2 mg). Depois adicionou-se água (2,6 ml) seguindo-se a adição de NaHC03 0,1N (0,6 ml; 0,06 mmole). Agitou-se a mistura è temperatura ambiente sob atmosfera de hidrogénio. Decorrida 1 hora e 55 minutos filtrou-se a mistura através de celite e lavou-se essa celite com acetato de etilo e água» Depois filtrou-se através de um filtro do tipo seringa de poros múltiplos ("millipore") de 0,22 mm e deixou-se fazer a separação durante 1 hora. Purificou-se a fase aquosa por HPLC utilizando uma mistura de acetonitrilo/ /água e a seguir recuperou-se o produto por arrastamento ("stripping off") do acetonitrilo e por liofilização da camada aquosa (15,0 mg; 0,0229 mmole; 45,7% de rendimento).

Exemplo 31

Ester (4-nitrofenil)-metllico do ácido /“ 2S-/* 2 <*: .3 <*= .5<*· f R*) .27-3-£££ 3,4-bis(acetil-oxi)-benzoil J^-oxi_7-metil f--6-/2Γ -2-//(4-etil-2, 3-dioxo-l-piperazinil)-carbonil J^-ami-no -7-2-f enil-acetil ,7-amino _7-3-metil-7—οχο-4-tia-l-azabici 010/3.2.0 7heptano-2-carboxilico

Arrefeceu-se à temperatura de -13°C por meio de um banho de gelo/sal, uma mistura agitada de 91,0 mg (0,437 mmole) de pentacloreto de fósforo em 5 ml de cloreto de me tileno anidro e adicionou-se-lhe 0,07 ml (0,87 mmole) de piridina anidra. Depois adicionou-se 280 mg (0,4 mmole) de éster (4-nitrofenil)-metllico do ácido /23-/2^,3^,5^, 6{3 ./7-3-/7/ 3,4-bis(acetil-oxi)-benzoil_7-oxi /-metil J-6--/Tfenil-acetil)-amino J-3-metil-7-oxo-4-tia-l-azabiciclo-/ 3.2.0 .Theptano-2-carboxílico, agitou-se a mistura reaccio nal a uma temperatura próxima de -15°C durante 3 horas e adicionou-se, gota a gota, 0,2 ml (2,18 mmoles) de álcool isobutílico anidro. Agitou-se a mistura reaccional durante mais 1 hora com a temperatura próximo de -12°C e adicionou--se 0,6 ml de uma solução de cloreto de sódio saturada. Man teve-se a agitação durante 15 minutos após a última adição e diluiu-se a mistura agitada com 20 ml de cloreto de meti-leno. Separou-se a fase orgânica e extraiu-se com uma solução saturada de hidrogenocarbonato de sódio (1 x), e depois com uma solução de cloreto de sódio (3 x). Após a secagem sobre sulfato de sódio anidro filtrou-se o dessecante e adi_ cionou-se o filtrado a uma solução agitada, em tetra-hidro- furano de 109,5 mg (0,251 mmoles) de (R)-N/“ 2-( IH-benzo-triazol-l-il-oxi) -2-oxo-l-fenil-etll ./-é-etil^S-dioxo-—1-piperazina carboxamida previamente preparada Z*agitou--se uma mistura de 80 mg (0,251 mmole) de écido (R)-alfa--f£ 4-etil-2,3-dioxo-piperazinil)-carbonil J7-amino_7-fenil--acético, 34 mg (0,25 mmole) de 1-hidroxi-benzotriazol, 52 mg (0,25 mmole) de N,N-diciclo-hexil-carbodiimida e 10 ml de tetra-hidrofurano anidro seco, à temperatura ambiente, durante 2 horas Agitou-se a mistura reaccional durante a noite à temperatura ambiente e concentrou-se até à secura sob pressão reduzida. Triturou-se o resíduo com acetato de etilo (4 x) e filtrou-se. Extraiu-se o filtrado com uma solução diluída de hidrogenocarbonato de sódio (1 x), com uma solução de cloreto de sódio (3 x) e depois secou-se sobre sulfato de sódio anidro. Após a filtração do dessecante e após a evaporação do dissolvente, submeteu-se o resíduo a cromatografia sobre gel de sílica (eluição com acetato de etilo puro) para se obter 41 mg de produto.

Exemplo 32

Sal mono-sódlco do ácido £ 2$-f 2oc ,3 o^. 5 o< , 6p(R*) 77-3-“ΖΖΖ 3,4-bis(acetil-oxi)-benzoil .7-oxi _7-metil _7-6-/2Γ 2-4-etil-2.3-dioxo-1-pioerazinil)-carbonil J^-amino 7-2-—fenil-acetil _/-amlno _7-3—metil-7-oxo-4—tia-1—azabiciclo- £ 3.2.0 ./heptano—2—carboxilico 78-

Durante 2 horas agitou-se à temperatura ambiente# sob atmosfera de hidrogénio (à pressão inicial de 53#5 psi ou 369 kPa) num aparelho de Parr# uma mistura de 60 mg de catalisador de paládio sobre carvão a 10%# 30 ml de água desionizada# 14 mg (17 mmoles) de hidrogenocarbonato de sódio# 56 mg (0#063 mmole) de éster (4-nitrofenil)-me-tilico do ácido /'2S-^f2<<#3oc#5o</6p(RX)J77-3-/^r3,4--bis(acetil-oxi)-benzoil y-oxi y-metil J-6-/2" -2-//14--etil-2# 3-dioxo-l-piperazinil)-carbonil_7-amino./-2-fenil-acetil y-aminoy-3-metil-7-oxo-4-tia-l-azabiciclo/'3.2.0 heptano—2—carboxílico e 30 ml de acetato de etilo, Removeu— -se o catalisador por filtração através de uma almofada de celite num funil de disco de vidro sinterizado e lavou-se o bolo da filtração com água fria. Adicionou-se cloreto de sódio sólido ao filtrado e soluçSes de lavagem reunidos. Extraiu-se a fase aquosa com acetato de etilo (3 x) e liofili-zou-se durante a noite. Dissolveu-se o resíduo em 35 ml de água desionizada, colocou-se em duas colunas C18 Sep Paks ligadas em série. Após a eluição com um gradiente dissolven te de água e acetonitrilo (desde 100% de água até 50% de acetonitrilo/água)# obteve-se 16 mg de produto.

Exemplo 33

Sal mono-sódico do ácido £ 2S-2T 2oc ,3 g>c # 5o« # 6|? fRX) 77-6-2-/,/~(4-etil-2#3-dioxo-l-piperazinil)-carbonil _7-ami--fenil-acetil_7-amino_7-3-/Z* 3.4-di-hidroxi-benzo-il)-oxi _7-metil -7-3-metil-7-oxo-4-tia-l-azabicicloZ" 3,2.0 7-heptano-2-carboxílico r*79-

Durante 19 horas armazenou-se à temperatura ambiente uma solução de 250 mg (0,34 mmole) de éster (4—nitrofe-nil) -metílico do acido £ 2S —(2oc ,3«^ , 5 ^ ,6p) _/—3—(foromome — til)-3-metil-6-/2f -2-/2" 4-etil-2,3-dioxo-l-piperazinil)--carbonil ./-amino_7—2—fenil-acetil-amino_/-7~oxo-4-tia-1— -azabiciclo/’ 3,2,0 J/heptano-2-carboxilico, 60 mg (0,39 mmo— le) de ácido 3,4-di-hidroxi-benzóico, 42 mg <!0,5 mmole) de hidrogenocarbonato de sódio, 40 ml de acetona e 10 ml de agna desionizada. Concentrou—se a mistura reaccional sob pressão reduzida até se formarem duas fases e depois parti— lhou-se entre acetato de etilo e uma solução de cloreto de sódio. Separou-se a fase orgânica, lavou-se por extracção com uma solução de cloreto de sódio (3 x) e secou—se sobre sulfato de sódio anidro. Após a remoção do dessecante oor filtração e após a evaporação do dissolvente sob pressão re^ duzida adicionou—se o residuo a uma suspensão de 200 mg de catalisador de paládio sobre carvão a 10%, 40% de água desionizada, de 25 mg (0,298 mmole) de hidrogenocarbonato de sódio e 40 ml de acetato de etilo, Hidrogenou-se a mistura (55,0 psi; ou 379 kPa) num aparelho de Parr durante 2 horas. Removeu-se o catalisador por filtração através de uma almofada de celite num funil de disco de vidro sinterizado e lâ vou—se a almofada de filtração com água fria. Adicionou-se cloreto de sódio sólido (2,0 g) ao filtrado e à solução de lavagem reunidos. Separou-se a fase aquosa, extraiu-se com acetato de etilo (2 x) e liofilizou-se durante a noite, Dis solveu-se o resíduo em 18 ml de água desionizada, colocou-se em 3 colunas C18 Sep Paks ligadas em série. Após a eluição com um gradiente dissolvente de água e acetonitrilo (desde 100% de água até 50% de acetonitrilo/água) obteve-se 21,3

mg de produto.

Exemplo 34

Sal de sódio do ácido £ 2S-Z" 2<x,3 c<.5oc ,6p(R*i7_7-6-/r 2--/7 4-etil-2.3-dioxo-l-piperaziniL) -carbonil ,7-amino 7-2--fenil-acetil _7-amino 7-3-/Z(2-furanil-carbonil) -tio _7--metil-7-3-metil-7-oxo-4-tia-l-azabiciclo/’ 3.2.0 7heptano--2-carboxilico

Durante 1 hora agitou-se à temperatura ambiente ume solução de 50 mg (0,39 mmole) de ácido 2-tiofuróico, 60 ml de acetona, 34 mg (0,41 mmole) de hidrogenocarbonato de só dio, 197 mg (0,27 mmole) de éster (4-nitrofenil)-metílico do ácido 7" 2S-7 2 ,3o< , 5 , 6f5 (R36) 77— 3-(bromometil) -6-77 2- **/7(4-etil-2,3-dioxo-l-piperazinil)-carbonil j7-amino 7-2-—f enil-acetil amino _7—3-metil—7-oxo~4—tia—1—azabiciclo- 7 3.2.0 Theptano—2-carboxílico e 20 ml de água desionizada. Concentrou-se a mistura reaccional sob pressão reduzida até se formarem duas fases e depois partilhou-se entre acetato de etilo e uma solução de cloreto de sódio. Separou-se a fase orgânica, lavou-se por extracção com uma solução de clore to de sódio (3 x) e secou-se sobre sulfato de sódio anidro. Após a remoção do dessecante por filtração e após a evapora ção do dissolvente sob pressão reduzida adicionou-se o resíduo a uma mistura de 170 mg de catalisador de paládio sobre carvão a 10%, 21 mg (0,25 mmole) de hidrogenocarbonato de só dio, 50 ml de água desionizada e 50 ml de acetato de etilo.

Agitou-se a mistura sob atmosfera de hidrogénio (à pressão inicial de 56 psi, ou 386 kPa), à temperatura ambiente num aparelho de Parr durante 1,5 horas. Filtrou-se o catalisador através de uma almofada de celite num funil de disco de vidro sinterizado e lavou-se o bolo da filtração com água fria. Adicionou-se cloreto de sódio sólido ao filtrado e à solução de lavagem reunidos. Separou-se a fase aquosa, extraiu-se com acetato de etilo (2 x) e liofilizou-se. Dissolveu-se o resíduo em 25 ml de água desionizada e colocou-se em 3 colunas C18 Sep Paks ligadas era série. Após a eluição com um gradien te dissolvente de água e acetonitrilo (desde 100% de água até 50% de acetonitrilo/água) e após a liofilização obteve-se 23 mg de produto.

Exemplo 35

Sal mono-sódico do éster (4-nitrofenil)-metilico do ácido r,2S-(2~,3 t*,5 <x,6p(R*))J-6_-/T 2-££ 4-etil-2.3-dioxo-1--piperazinil)-carbonil J^-amino7-2-fenil-acetil JT-amino 7-~3-/7(2.5-di-hidro-6-hidroxi-2-metil-5-oxo—1,2,4-triazina-3--il) -tio_?-metil J^-3-metil-T-oxo^-tia-l-aZabicicloZ" 3.2.0 _Z-heptano-2-carboxllico

Dissolveu-se ácido (r)-p< -/2"(4-etil-2,3-dioxo-pi-perazinil)-carbonilJ^-aminoJ^-fenil-acético (263,5 mg; 0,826 mmole) e 2-mercapto-benzotiazol (138,3 mg; 0,827 mmole) em cloreto de metileno (11,7 ml). Dissolveu-se 1,3-diciclo-he xil-carbodiimida (171,3 mg; 0,830 mmole) em cloreto de meti- leno (2,5 ml) e adicionou-se à primeira solução, agitando--se depois à temperatura ambiente sob atmosfera de azoto (seca). Simultaneamente preparou-se a amina livre do éster (4-nitrofenil) -metílico do ácido £ 2S-( 2 «c ,3 ^ #5 * , 6£) J--3-(bromometil)-3-metil-7-oxo-6-amino-4-tia-l-azabiciclo-£ 3.2.0 J'heptano-2-carboxilico de acordo com o procedimen to seguinte:

Dissolveu-se pentacloreto de fósforo (192,7 mg; 0,925 mmole) em clorefcode metileno (3,3 ml). Depois adicio nou-se piridina (83,5 ml; 1,032 mmole) (formou-se imediata mente um precipitado) e agitou-se a suspensão e arrefeceu--se até à temperatura de -15°c. Decorridos 5 a 10 minutos, adicionou-se o éster (4-nitrofenil)-metílico do ácido £?.S-(2«l,3oc,5<x ,6p) ./-3-Cbromometil) -3-metil-7-oxo-6-/"(f enil--acetil)-amino Jr-4-tia-l-azabicicloZ' 3.2.0 _Theptano-2-car-boxílico (452,3 mg; 0,825 mmole) e agitou-se sob atmosfera de azoto (seco). Decorridas 2 horas, a mistura reaccional foi transferida com uma pipeta para uma porção saturada de hidrogenocarbonato de sódio (12 ml). Depois lavou-se a camada de cloreto de metileno com mais solução saturada de hidrogenocarbonato de sódio (7 ml) e finalmente lavou-se com uma solução de cloreto de sódio (15 ml), a seguir secou-se sobre Na^SO^num tubo de ensaio.

Depois transferiu-se a solução para o éster activa-do que se preparou na primeira parte. Antes da adição, redu siu-se para um valor compreendido entre 5 e lo ml o volume da solução do éster activado. Agitou-se a solução à tempera, tura ambiente sob atmosfera de azoto. Decorridas 2 horas e

Υ -83 - 25 minutos, reduziu-se o volume para um valor compreendido entre 5 e 10 ml e filtrou-se através de celite e purificou--se por cromatografia rápida utilizando acetato de etilo em éter do petróleo. Foram obtidas duas fracçbes (84 mg com uma pureza próxima de 80% e 115 mg com uma pureza próxima de 33% conforme determinado por RílN) de éster (4-nitrofenil)--metílico do ácido £ 2S-£ 2*c ,3«* ,5* ,6p-(R*) J?7-3-Cbromome-til) -6-££ -2-/Z* 4-etil-2/3-dioxo-l-piperazinil) -carbonil J--amino _/-2~fenil-acetil _7-a.mino _/-3 -metil-7-oxo-4-tia-l-aza-biciclo/' 3,2.0 _7heptano-2-carboxilico.

Dissolveu-se o composto intermédio anterior (80 mg; 0,109 mmole) em acetona (1,3 ml) e depois adicionou-se água (0,63 ml). A esta solução leitosa adicionou-se sal dissódico de tetra-hidro-2-metil-3-tioxo-l,2,4-triazina-5,6-diona, e depois acetona (1,74 ml). Agitou-se a solução amarela liquida à temperatura ambiente sob atmosfera de azoto. Decorridas 3 horas e 30 minutos adicionou-se água (5ml) e evaporou-se a acetona (ocorreu a formação de espuma). Purificou-se o pro^ duto parcialmente numa coluna C18 Sep Paks seguindo-se a purificação por HPLC utilizando acetonitrilo/água e uma coluna C18. Procedeu-se à recolha das fracçdes, as quais pesavam 26,9 mg e 3,9 mg, respectivamente,

Exemplo 36 S*1 dissódico do ácido £ 2S-(2^,3<k ,5<K.,6P(R5E)).7-6-/lr 7-/y d» -etil-2,3-dioxo-1-Piperazinil) -carbonil ,7-amino 7-2-f enil-acc- til .7-amino -7-3-Z2X2,5-di-hidro-6-hidroxi-2-metil.-5-oxo~lr 9 r4--triazina-3-il)-tio J^-metil_7-3-metil-7-oxo-4-tia-l-azabicl-

cio/* 3,2.0 Jfoeptano-2-carboxílico

Dissolveu-se sal mono-sódico do éster (4-nitrofenil)--metílico do ácido £ 2S-(2c< ,3 ©< ,5<x , 6p(R*))_7-6-// 2-//(4--etil-2,3-dioxo-l-piperazinil) -carbonil _7-a.mino _/-2-fenil--acetil ./-amino _/-3~££{ 2,5-di-hidro-6-hidroxi-2-metil-5-oxo--1,2,4-triazina-3-il)-tio _?-metilJ-3-metil-7-oxo-4-tia-1--azabiciclo/3.2.07heptano-2-carboxílico (40 mg; 0,0481 mmole) em NaHCOg 0,1 N (0,46 ml; 0,046 mmole), adicionou-se água (0,46 ml), e depois adicionou-se acetato de etilo (1 ml) e catalisador de Pd/C a 10% (40 mg). Agitou-se a mistura a tem peratura ambiente sob atmosfera de hidrogénio. Decorridas du as horas, adicionou-se água (1 ml) e acetato de etilo (1 ml) e filtrou-se a suspensão através de celite. Removeu-se a fase aquosa e tratou-se por arrastamento ("stripped") rapidamente e a seguir liofilizou-se para proporcionar um produto bruto (30,9 mg), o qual foi purificado por HPLC utilizando acetonitrilo/água Para se obter duas fracções (18,9 mg e 6,5 mg).

Exemplo 37

Sal mono-sódico do ácido £ 2S-/" 2 , 3 <x., 5 (x , 6ψ (R*) J7-3-/( ace- til)-tio)-metil_7-3-metil-6-//~2-ff 4-etil-2,3-dioxo-l-pipera-zinil)-carbonil J^-amino /-2-fenil-acetil _7-amino ^7-7-oxo-4--tia-l-azabicicloZ* 3.2.0 -7heptano-2-carboxílico / A um balão seco contendo uma atmosfera de árgon adi-cionou-se éster (4-nitrofenil)-metílico do ácido Z"2S-f2e< ,5c* ,60) _7-3-(bromometil) -3-metil-7-oxo-6-/"(f enil-ace-til) -amino__7-4-tia-l-a.zabiciclo/" 3,2.0 ./heptano^-carboxí lico (6,13 g; 12,27 ramoles) e CH2C12 (41 ml) e depois arrefeceu-se a mistura a uma temperatura compreendida entre -5°C e -10°C. A esta solução arrefecida adicionou-se piri^ dina ^1,21 g; 15,35 mmoles; 1,24 ml) e 5 minutos mais tar de adicionou-se PC15 (2,808 g; 13,5 mmoles) no estado sóli do e numa só porção, Depois de se agitar a esta temperatura durante 30 minutos, arrefeceu-se a mistura reaccional a uma temperatura compreendida entre -15°C e -20°C e adicio-nou-se-lhe isobutanol (5,45 g; 73,69 mmoles; 6,78 ml) len-uamente ao longo da parede interior do balão durante 5 minutos. Depois de se ter agitado durante mais 15 minutos adicionou-se uma solução saturada de NaBr (20 ml) à temperatura de 0 C e colocou-se o balão de reacção em um banho de gelo a temperatura de 0 c. Decorridos 5 minutos, adicio nou-se lentamente Et20 (41 ml) provocando a precipitação do composto desejado na solução. Deixou-se a mistura reaccional em agitaçao rapida durante mais 5 minutos e decorri_ do esse tempo filtrou—se a mistura reaccional num funil de Buchner e lavou-se o sólido com St2Q até o produto assumir um aspecto granular e até já não se detectar o odor dos ha logenetos de fósforo. Transferiu-se o sólido para um vidro de relógio e secou-se num e X cicador contendo CaSO^ sob vazio. O sólido obtido (4,77 g) continha, cerca de 50% do derivado bromidrato de 6-amina desejado, sendo a impureza principal NaBr. A um balão contendo éster (4-nitrofenil)-metílico do ácido £ 2S-(2o^ ,3oc ,5^6^) _7-6-amino-3-(bromometil) -3--metil-T-oxo-é-tia-l-azabiciclo/" 3,2.0 ^heptano-2-carboxi> lico, obtido a partir do derivado bromidrato de amina por tratamento com HaHC03, acetona (12 ml) e água (4 ml) adicionou-se tioacetato de potássio (0,34 g; 2,98 mmoles). Deixou-se a mistura reaccional em agitação durante 7,5 ho ras à temperatura ambiente, após o que se adicionou EtOAc (100 ml) e se transferiu a mistura para um funil de separa, ção e se lavou com água (50 ml), NaHCOg (50 ml), água (30 ml) e com uma solução de cloreto de sódio; secou-se com Na2S04 e concentrou~se para obter um volume compreendido entre 1 e 2 ml. Adicionou-se esta solução à mistura reaccional descrita a seguir. A um balão seco contendo uma atmosfera de érgon adicionou-se ácido (R) - oc. —^2T(4-etil-2,3-dioxo-piperazi-nil)-carbonil J^-amino_7-£enil-acético (0,475 g; 1,49 mmol), DMF (5 ml) e 1-hidroxi-benzotriazol (0,201 g; 1,49 mmole) e depois arrefeceu-se a solução à temperatura de 0°C em banho de gelo. Decorridos 5 minutos, adicionou-se diciclo-hexil-carbodiimida (0,337 g; 1,64 mmole) e deixou-se a mistura reaccional em agitação durante mais 10 minutos. Após esta operação, adicionou-se a solução descrita no parágrafo anterior juntamente com CH2Cl2 (2 a 3 ml). Deixou-se a solução resultante em agitação durante a noite à temperatura ambiente. Adicionou-se EtOAc (100 ml) e lavou-se num funil separador com água (3 x 100 ml), NaHC03 (50 ml) e uma solução de cloreto de sódio (50 ml) e depois secou-se sobre Ne-S0., fil /L fe

trou-se e concentrou-se sob Vazio. Purificou-se o resíduo por croraatografia rapida (SiO^ (51 g), EtOAc) para propor cionar 0,375 g (35%) de éster (4-nitrofenil)-metilico do acido £ 2S-/~ 2ex , 3 c*, 5 °<, 6^(R*) ./^/-3-/"(acetil) -tio) -metil J— -3-meti 1-6-/2*" 2-/2Γ 4-etil-2,3-dioxo-l-piperazinil) -carbo-nil 7-aminoy-2-fenil-acetil ./-amino 7-7-oxo-4-tia-l-aza-biciclo^T 3.2,0 J7heptano-2-carboxilico no estado sólido amorfo e de cor branco sujo. A uma solução de éster (4-nitrofenil)-metilico do ácido £ 2S-/~ 2<x,3o<,5<?<,6|J (R55) _Z/-3 -/"(acetil) -tio) -metil J --3-metil-6-/2T 2-/Z" 4-etil-2,3-dioxo-l-piperazinil)-carbo-nil_7-amino J7-2-fenil-acetil_/-amino_/-7-oxo-4—tia-l-aza-biciclo/'3.2.0_7heptano-2-carboxílico (0,202 g; 0,278 mmole), EtOAc (6 ml) e NaHCQ3 aguoso (0,1 M; 5,56 ml) adicionou—se 0,20 g de catalisador de Pd/C a 10% e agitou-se com uma vareta. magnética. Fez-se o vazio no balão que continha a suspensão, com rapida agitação, e carregou-se com hidrogénio gasoso três vezes. Depois de se agitar a mistura reaccional durante 2 horas a temperatura ambiente sob atmosfera de hidrogénio (fornecida por balao) filtrou-se a mistura reaccio^ nal através de uma almofada de celite, removeu-se o StOAc sob vazio e liofilizou-se a suspensão aquosa resultante. 0 sólido obtido após a liofilizaçlo foi purificado por croma-tografia em três colunas C18 Sep Pafcs ligadas em série e fez-se a eluição com um gradiente de CH3CN/H20 (0-100%). Reu niram-se as fracçóes apropriadas (10-20% de CPLCN/HO), eli-minou-se o CH3CH sob vazio e liofilizou-se a solução aquosa resultante para se obter 0,063 g do produto desejado sob a forma de um pó floculento branco. Purificou-se este sólido por HPLC numa coluna WHATMAN-M9 C18 tendo-se feito a eluição com CH3CN/H20 (gradiente variável desde 15% a 50%) tendo-se obtido ap6s a remoção do CH3CN e da água, 0,034 g de sal mono dico do ácido /~2S-/* 2<x ,3 pc ,5 <x,6p(R*) //-3 -/( acetil) -tio) --metil J-3-metil-6-// 2-/7 4-etil-2,3-dioxo-l-piperazinil)--carbonil J-amino _7-2-fenil-acetil _7-amino 7-7-oxo-4-tia-l--azabiciclo/" 3,2,0 _/heptano—2—carboxílico,

Exemplo 38

Sal mono-sádico do ácido Z"2S-/~ 7c< .3 oc .5 dc JJ-2- -ffluoro-metil)-6-// 2-//(4-etil-2,3-dioxo-l-piperazinil)--carbonil _/-amino_7-2-fenil-acetil.7-amino 7-3-meti1-7--oxo-4-tia-l-azabiciclo/*3.2.0 J^heptano-2-carboxilico

Durante 5,5 horas agitou-se à temperatura ambiente uma mistura de 137 mg (0,19 mmole) de éster (4-nitrofenil)--metílico do ácido /^S-/* 2 c* ,3 ,5 <K,6p {R*) /7-3-Cbromome- til)-6-/7 2“/Z(4-etil-2,3-dioxo-l-piperazinil)-carbonil J7--amino y-2-fenil-acetil ./-amino _7-3-metil-7-oxo-4-tia-l--azabiciclo/“ 3.2.0 J^heptano-2-carboxilico (balão de reacção coberto com folha de alumínio), 30 ml de acetona e 24 mg (0,19 mmole) de fluoreto de prata em 3 ml de água desioni-zada. Após a filtração através de um filtro de poros múltiplos ("millipore'*) removeu-se a maior parte da acetona do filtrado, sob pressão reduzida. Partilhou-se o resíduo entre acetato de etilo e uma solução de cloreto de sódio. Se parou-se a fase orgânica, lavou-se com uma solução de cloreto de sódio (3 x) e secou-se sobre sulfato de sódio. Após

a remoção do dessecante por filtração e após evaporação do acetato de etilo sob pressão reduzida# adicionou-se o resi. duo a uma mistura de 40 mg de catalisador de paládio sobre carvão a 10%# 30 ml de água desionizada# 10 mg (0,12 mmole), hidrogenocarbonato de sódio 20 ml de acetato de etilo. Agi-tou-se a mistura sob atmosfera de hidrogénio (à pressão ini. ciai de 56 psi# ou 386 kPa)# à temperatura ambiente num aPji relho de Parr, durante 3 horas. Filtrou-se o catalisador através de uma almofada de celite num funil de disco de vidro sinterizado e lavou-se o bolo da filtração com água fria. Adicionou-se cloreto de sódio sólido (521#7 mg) ao fil_ trado e solução de lavagem reunidos. Separou-se a fase aquosa# extraiu-se com acetato de etilo e liofilizou-se. Dissolveu-se o resíduo em 15 ml de água desionizada e colocou-se em três colunas C18 Sep Paks ligadas em série. Após a elui-ção com um gradiente dissolvente constituído por água e ace tonitrilo (desde 100% de água até 50% de acetonitrilo/água) e após a liofilização obteve-se 10 mg de produto.

Exemplo 3Q

Sal mono-sódico do ácido £ 2S-^~ , 3oc, 5 . 6p (R*) 77-3- ~ΓΓ£ 3#4-bis(acetil-oxi)-benzoil J^-tio JT-metil_7-*6—ZZ*2--Ζ2Γ 4-etil-2#3-dioxo-l-piperazinil)-carbonil 7-aminoJ7--2~fenil-acetil^?,-amino_7-3-meUil-7-oxo-4-tia-l-aZabici-clo/"3.2.0,7heptano-2-carboxfl im

Dissolveu—se pentacloreto de fósforo (423#2 mg; -90- 2,032 mmoles) em cloreto de metileno (5,73 ml) e depois adicionou-se piridina (187 ml; 2,312 mmoles) (formou-se um precipitado branco). Arrefeceu-se a mistura em banho de acetona/ /gelo (a uma temperatura compreendida entre -10°C e -15°C) sob atmosfera de árgon e, decorridos 5 minutos, adicionou-se éster (4-nitrofenil) -metilico do ácido £ 2S-(2c>c ,3 oc., 5 <x , sp L7--3 -(bromometil) -3 -metil-7-oxo-6-/*(f enil-acetil) -amino/-l-aza-^-tia-biciclo/' 3,2.0 ,7heptano-2-carboxílico (1,0156 g; 1,852 mmole), Decorridos 45 minutos, adicionou-se isobutanol (1,70 ml; 18,42 mmoles) e manteve-se a agitação em banho de aceto-na/gelo. Decorridos 40 minutos, adicionou-se uma solução de brometo de sódio (13 ml de solução de 70 g de NaBr em 100 ml âe água) e agitou-se à temperatura ambiente. Decorridos 5 mi. nutos, adicionou-se éter dietílico (6 ml) e agitou-se vigoro samente durante alguns minutos. Filtrou-se a mistura resultante num funil de vidro grosso sinterizado e lavou-se com uma solução de brometo de sódio (uma Parte fria e uma parte à temperatura ambiente). Seguiu-se depois a lavagem 4 vezes com éter dietílico tendo-se utilizado 12,5 ml de cada vez. Se cou-se o sólido ao ar no funil e dissolveu-se novamente em cloreto de metileno (5 ml) e numa solução saturada de hidroge. nocarbonato de sódio (5 ml). Secou-se a camada de cloreto de metileno sobre sulfato de sódio e depois adicionou-se ao éster activado que havia sido simultaneamente preparado do modo seguinte:

Dissolveu-se 2-mercaPto-benzotiazol (311,5 mg; 1,862 mmole) e ácido (R)-o< -/7 4-etil-2,3-âioxo-piperazinil)-car-bonil J7-amino ./-fenil-acético (580,4 mg; 1,819 mmole) em cio reto de metileno (24 ml). Dissolveu-se 1,3-diciclo-hexil--carbodiimida (385,6 mg; 1,869 mmole) em cloreto de metileno (7 ml) e adicionou-se à primeira solução. Agitou-se a solução sob atmosfera de árgon à temperatura ambiente durante 2 1/3 horas. Reduziu-se o volume para a quarta pa£ te do inicial e adicionou-se a. solução de amine livre preparada, conforme anteriormente descrito e depois agitou-se à temperatura ambiente sob atmosfera de árgon. Decorridas 2 horas e 10 minutos, filtrou-se a solução através de celi te e purificou-se por cromatografia rápida utilizando acetato de etilo e éter de petróleo. Foram obtidas duas fracções (72 mg e 11 mg).

Dissolveu-se em acetona e em hidrogenocarbonato de potássio Ο,ΙΝ (1 ml; 0,1 mmole) a fracção mais pura (72 mg; 0,098 mmole; 5,3% de rendimento) com base em éster (4-nitro-fenil) -metílico do ácido £ 2S-(2<*. ,3c< ,5oc , 6p) _/-3~(bromome-til)-3-meti1-7-οχo-6-// 2-//(4-etil-2,3-dioxo-l-piperazinil)--carbonil_7-amino _/-2-fenil-acetil J^-amino .7-4-tia-l-azabici-clo/" 3.2.0_Theptano-2-carboxílico e o ácido 3,4-bis(acetilo-xi)—benzenocarbotióico (26,7 mg; 0,105 mmole). Agitou-se a mistura à temperatura ambiente sob atmosfera de árgon. Decorridos 30 minutos adicionou-se acetato de etilo (20 ml) e uma solução saturada de hidrogenocarbonato de sódio (20 ml). Se-cou-se a camada de acetato de etilo sobre sulfato de sódio (anidro) e depois filtrou-se e concentrou-se para se obter um resíduo.

Dissolveu-se este resíduo em tetra-hidrofurano (5 ml) e adicionou-se o catalisador de Pd sobre carvão a 10% (72,1 mg). Agitou-se a mistura reaccional a temperatura e pressão ambiente sob atmosfera de hidrogénio. Decorridas duas horas filtrou-se através de celite e adicionou-se hidrogenocarbo-nato de sódio 0,1 N (0,93 ml; 0,093 mmole) e depois adicio-nou-se água (2 ml) em conjunto com tetra-hidrofurano sufic^ ente para proporcionar uma solução límpida. Removeu-se o te_ tra-hidrofurano e filtrou-se a porção aquosa através de celi. te. Fez-se passar o filtrado através de duas colunas C18 Sep Pab (ligadas em série) e fez-se a eluição com água e com mis turas de 5%, 10%, 20% e 40% de acetonitrilo em água (10 ml de cada uma/ à excepção da mistura a 20% da qua.1 se recolheram fracçdes de 15 ml e de 5 ml). Recuperaram-se dois conjun tos de fracções (4,1 mg e 2,2 mg; total de 0,0080 mmole; 0,43% de rendimento a partir de éster (4-nitrofenil)-metílico do ácido £ 2S-(2oc ,3 oc ,5©c ,6|3) _/-3-(bromometil)-3-metil-7-οχο--6-/T£enil-acetil) -amino ./-l-aza-é-tia-biciclo/' 3.2.0 ,/hepts-no-2-carboxilico. Purificou-se ainda o produto por HPLC utili zando acetonitrilo em água.

Exemplo 40

Sster (4-nitrofenil)-metilico do ácido ,Γ 2S-/* 2 o<t, 3c*r , 5,»ç 6p-JT.%-3—(bromometil) -6-/T 2-Zffié-eti 1-2.3 -dioxo-l-piperazi-nil)-Carbonil^7-amino.7-2-fenil-aCetil 7-amino_7-3-metil-7--oxo-4-ti.a-l-azabiciclo/’3<2.0j?heptano-2-carboxilico -93-

/5»

Durante 2 horas agitou-se à temoeratura ambiente uma solução de 158 mg (0,496 mmole) de ácido (R)- -/TU-etil--2,3-dioxo-piperazinil)-carbonil .7-amino _7-fenil-acético, 83 mg (0,496 mmole) de 2-mercapto-benzotiazol, 103 mg (0,5 mmole) de N,Ν'-diciclo—hexil-carbodiimida e 25 ml de tetra-hi-drofurano anidro. Adicionou-se, gota a gota/ à temperatura ambiente, uma solução de 175 mg (0,41 mmole) de éster (4—ni— trofenil) -metilico do ácido ^23-(2^-,304,5^,6^) ,7-6-amino--3-(bromometil)-3-metil-7-oxo-4-tia-l-azabiciclo/r 3,2,0 J7-heptano-2-carboxilico em 16 ml de cloreto de metileno anidro. Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante mais 2 horas e concentrou-se até à secura sob pressão redu zida# Partilhou-se o residuo entre acetato de etilo e uma solução diluida de hidrogenocarbonato de sódio. Separou-se a fa. se orgânica, a qual, por sua vez, foi extraída com água (2 x) e com uma solução de cloreto de sódio (1 x) e depois secou-se sobre sulfato de sódio anidro. Após a remoção do dessecante por filtração e após evaporação do dissolvente sob pressão re duzida submeteu-se o residuo a cromatografia sobre gel de sílica (fez-se a eluição com acetato de etilo puro), para proporcionar 250 mg de produto.

Exemplo 41

Sal mono-sódico do ácido £ 2S-(2<X ,3 tK,5o< ,6^) ^-β-/77~ 3 .4-. -bis(acetil-oxi)-benzoil-amino _7-fenil-acetil 7-amino,7-3--£/" 3.4-bis(acetil-oxi) -benzoil-oxi /-metiij-S-metil-7-oyn.. -é-tia-l-azabiciclo/' 3,2,0 7heptano-2-carboxilj.r.o -94-

Durante 30 minutos agitou-se uma mistura de ácido £ 3,4-bis(acetoxi)-benzoil-amino_7-fenil-acético (0,055 g; 0,15 mmole), de 1-hidroxi-benzotriazol (0,025 g; 0,16 mmo-le) e de N,N-âiciclo-hexil-carbodiimida (0,034 g; 0,16 mmo le) em cloreto de metileno anidro (5 ml) . Ã solução anteri or adicionou-se éster (4-nitrofenil)-metílico do ácido £ 2S-2oc ,3£Χ,5ο<,6ρ 3,4-bis(acetiloxi)-benzoil _7oxi- -metil_7-6-amino-3-metxl-7-oxo_7-4-tia-l-azabiciclo/" 3.2.0 J7-heptano-2-carboxilico (0,112 g; 0,18 mmoles), preparado no Exemplo 31, e agitou-se a mistura reaccional à tenroeratura ambiente durante 3 horas. Um processamento idêntico e uma pu rificaçao conforme descrito no Exemplo 31 proporcionaram o éster (4-nitrof enil)-meti lico do ácido £ 2S-(2c< ,3 c<,5 c< , 6β7--&-£££ 3,4-bis(acetiloxi)-benzoil-aminoy-fenil-acetil y-ami-no_/-3-/2T 3,4-bis(acetiloxi)-benzoil-oxi_7-metil j7-3-metil-7--oxo-4-tia-l-azabiciclo^/" 3.2.0 _7heptano-2-carboxílico (33 mg; 26,6%). 0 éster anterior (33 mg; 0,04 mmole) e catalisador de Paládio sobre carvão a 10% (35 mg) em THF/H20 (1:1; 24 ml) foram submetidos a hidrogenação com H (à pressão de 45 psi, 4Ct ou 310 fcpa) à temperatura ambiente durante 2 horas, Deoois de se converter no sal de sódio com hidrogenocarbonato de só dio purificou-se o produto bruto numa coluna C18 e procedeu--se a liofilização das fracções apropriadas para proporcionar o composto em epígrafe (18,4 mg; 5,6%).

Exemplo 42

Sal interno do hidróxido de £ 2S-£ 2<x ,3<* ,S*< ,βρΟΓ* LZZ-*~ -£££ 2-carboxi-6-/iT 2-/Z(4-etil-2,3-aioxo-l-piperazinil)--carbonil _/-amino _7-2-fenil-acetil _7-amino _7-3-metil-7-oxo-. ~4~tia~.l-»az:abiclclo/,' 3, 2,0.7hept-3-il ,7-tiol _7-metil J-l--etil-piridinio A uma solução de éster (4-nitrofenil)-metílico do ácido £ 2S-/ 2<x , 3 oc , 5 ©<r, 6p(R*) _Z7--3-bromometil-6-// 2-//4--etil-2,3-dioxo-l-piperazinil)-carbonil J^-amino _7-2-£enil--acetil /-amino J/-3 -metil-7-oxo-4-tia-l*-azabiciclo^’ 3 # 2.0J7-neptano-2-carboxílico (0,26 g; 0,35 mmole; Exemplo 40) em D;-IF (13 ml) adicionou-se N-etil-4-tio-piridona (0,064 g; 0,46 mmole) à temperatura ambiente e agitou-se a mistura a 45°C durante 3 horas» Eliminou—se o d.issolvente e triturou—se o residuo com acetato de etilo. Purificou—se o produto precipi tado sobre uma coluna de gel de sílica e fez-se a eluição com cloreto de metileno e depois com cloreto de metileno/metanol (9:1) contendo 2%. de ácido acético Paba proporcionar brometo de £ 2S-£ 2^,3^,5^,6^(^) JJ-4-///- 6-// 2-//4-etil-2,3--dioxo-1-piperazinil)-carbonil amino 2—fenil—acetil -amino./-3-metil~2-//4-nitrofenil)-metoxi ./-carbonil J-Ί-—oxo—4—tia—l—azabiciclo/" 3,2,0 /heptano— 3— ii/— metil /tio_7— -1-etil-piridínio (49 mg; 17%).

Hidrogenou-se o éster anterior (15 ml; 0,019 mmole) utilizando o catalisador de paládio sobre carvão a 10% (15 mg) em THF/H20 (1:1; lo ml), com hidrogénio (à pressão de 45 psi, ou 310 &Pa) à temperatura ambiente durante 2 horas. A e a liofilização das purificação através de uma coluna fracçSes apropriadas proporcionaram o composto em epígrafe (6,7 mg; 55,8%),

Exemplo 43 s.a.1- interno do hidróxido de /•2S-/:2,*,3«tf,5*-,6p) .7-4--ΓΓ£ 2-carbox.i -3-metil-7-oxo-6-/Cfenil-acetil) -amino J--4-tia-1—azabiciclo/* 3.2.0_7hept-3-il _7-metil„7-tio 3-1--etil-Piridínio A uma solução de éster (4-nitrofenil)-metílico do ácido / 25-(2 c< , 3 f 5 oc , 6ψ) ^/-S-tbromoinetil)-3«metil-7--oxo-6-/"(fenil-acetil)-amino _7-4-tia-l-azabiciclo/· 3.2.0 heptano-2~carboxílico (0,274 g; 0,5 mmole) em dimetilforma-mida (4,8 ml) adicionou-se N-etil-4-tio-piridina (0,082 g; 0,58 mmole), à temperatura, ambiente, e depois agitou-se a mistura durante a noite. Eliminou-se o dissolvente sob vazio e purificou-se o resíduo preliminarmente sobre placas de sílica preparativas tendo-se feito a eluição com cloreto de metileno/metanol (92:8) Para proporcionar brometo de £" 2S-(2e<,3pc,5oc,6p) „7-4-£f£ 2-// 4-nitrofenil-metoxi „/-carbo-nil .7-6-/(fenil-acetil)-amino _/-3-metil-7-oxo-4-tia-l~aza-biciclo/~ 3.2.0 .Thept-3-il _7-metil ^/tio _7-l-etil-piriãínio (0,108 g; 31%).

Hidrogenou-se o éster anterior (0,144 g; 0,20 mmole) utilizando o catalisador de Paládio sobre carvão a 10% (160 mg) em THF/H^O (1:1; 10 ml) com (à pressão de 45 psi ou -97- /

310 KPa), à temperatura ambiente durante 2 horas, a ouri-ficação através de uma coluna C18 e a liofilização das fracçóes apropriadas proporcionaram o comoosto em epígrafe (36,7 mg? 37,5%),

Exemplo 44

Acido /~ 2S— /~ 2 c< , 3 c< , 5^, 6p) J—3 —/// 3,4 —bis (acetil— oxi) — -benzoil _7-oxi _7-metil· _7-6-Z/(hexa -hidro-lH-azepin-l--il)-metileno _7-amino 7-7-oxo-4-tia-l-azabiciclo/~ 3.2.0J-heptano-2-carboxllico A uma mistura de ácido o-tolueno-sulfónico (48,2 mg; 0,25 mmole) e de N,N-diisopropil-etilamina (0,044 ml; 0,25 mmole) em cloreto de metileno (5,7 ml) adicionou-se éster (4-nitrofenil)-metílico do ácido /^23-(2^,3^,5^,6(3).7-3--/27* 3,4-bis(acetil-oxi)-benzoil ./-oxi_7-metil_/-6-amino-3--metil-7-oxo-4-tia-l-azabiciclo/· 3.2.0 ./heptano-2-carboxíli. co (284 mg; 0,465 mmole, conforme preparado no Exemplo 37) e agitou-se à temperatura ambiente sob uma atmosfera de ár-gon. Posteriormente, adicionou-se acetal dimetílico de N--formil-hexametileno-imina (0,32 ml? 1,83 mmole) à mistura anterior e agitou-se a mistura reaccional a mesma temperatu ra durante uma hora. Verteu-se a mistura reaccional em aceta to de etilo e lavou-se com água, com uma solução saturada de hidrogenocarbonato de sódio e uma solução de cloreto de sódio. Eliminou-se o dissolvente, dissolveu-se o resíduo em THF/H^O (5,7 ml; 5,7 ml) e hidrogenou-se utilizando o Catali. /

sador de paládio sobre carvão a 10% (560 mg) com à pressão atmosférica durante duas horas. Removeu-se o catalisador por filtração e purificou-se o produto bruto numa coluna C18 para se obter o composto em epígrafe (33 mg; 13,5%).

Exemplo 45

Sal mono-sódico do ácido /^23-(2^,3^,5^(:,6^)/7-3-///3,4--bis(acetil-oxi)-benzoil J^-oxi _7-metil .7-6-///(dif luoro-me-til)-tio_7-acetil .7-amino_7-3-metil-7-oxo-4-tia-l~azabici-clo£ 3.2.0_7Íheptano-2-carboxílico A uma solução de éster (4-nitrofenil)-metílico cio ácido 2S-( 2<x ,3®c,5cx ,6β) .7-3-///- 3,4-bis (acetiloxi) -benzoil _7-oxi _7-metil_7-6-amino-3-metil-7-oxo-4-tia-l-azabici-cloZ" 3.2.0_7heptano-2-carboxílico (360 mg; 0^59 mmole preparado de acordo com o exemplo 31) e piridina (0,066 ml; 0,823 mmole) em cloreto de metileno (10 ml) adicionou-se cloreto de difluorometil-tio-acetilo (117,3 mg; 0,73 mmole) e agitou-se a mistura resultante durante 5 horas à temperatu ra ambiente. Após a reacção lavou-se a solução com HC1 diluí do com uma solução diluída de NaHCO^ e uma solução de cloreto de sódio. Purificou-se o produto bruto numa coluna de gel de sílica e fez-se a eluição com acetato de etilo/éter de pei trôleo (1:1) Para se obter £ 2S-( 2^, 3o^ , 5oc , 6p) .7-3-///3,4--bis(acetil-oxi)-benzoilJ-oxi J^-metil/7-6-///( difluorometil) -tio ./-acetil _/-amino _7-3-metil-7-oxo-4-tia-l-azabiciclo/ 3.2

0 .7heptano-2-carboxilico (103 mg; 25,1%).

Hidrogenou-se o éster anterior (87,3 mg; 0,128 mmo- le) utilizando catalisador de paládio sobre Carvão a 10¾ foo e; Λ20 t3.2 1, 2,2 .1) à pressão dei atS aThí- 9 drogénio. Purificou-se o produto numa coluna C18 para propor cionar o composto em epígrafe (39 mg; 51%)

Exemplo 46

Sal_mpno-a6dico do ácido t 2S-Z" 2*c .3 <x,5<x .SjafR*') ,7,7-.3--CtE 3#4-bis(acetil-oxi)-benzoil_7-oxi ,7-metil -7-6-amino--(fenil-acetil) -arrtino J-3 -metil-7-oxo-4-tia-l-azabicicloZ3.2.0? heOtano-2-carboxilico

Durante 2,5 horas agitou-se à temperatura ambiente uma. mistura de (R)-N-(4-nitrobenzil-oxi)-carbonil-fenil--glicina (147 mg; 0,445 mmole), l-hidroxi-benzotriasol (50 mg; 0,44 mmole) e N,U-diciclo-hexil-carbodiiraida (98,5 mg; 0,478 mmole) em cloreto de metileno anidro (5 ml). À solução anterior adicionou-se éster (4-nitrofenil)-metíli-co do ácido 2S-(2*c,3<**,5oc,6p) J-3 -£££ 3,4-bis (acetil--oxi)-benzoil„7-oxi _7-metil w7-5-amino-3-metil-7-oxo-4-tia--l-azabiciclo/· 3.2.0_/heptano-2-carboxílico (262 mg; 0,46 mmole, preparado de acordo com o exemplo 31) e agitou-se a mistura reaccional a temperatura ambiente durante 2 horas. Um processamento idêntico e uma purificação conforme descrito no Exemplo 31 proporcionaram o éster (4-nitrofenil)--metílico do ácido £ 23-/“ 2 oc,3 ©c , 5 oc , õp (R56) JJ-o -£££ 3,4- -bis(acetil-oxi)-benzoil y-oxi y-metil J-6~££ 4-nitro-ben-zil-oxi)-carbonily-amino-(fenil-acetil)-amino J-3-metil--7-oxo-4-tia-l-azabicicloZ· 3.2.0 yheptano-2-carboxílico (146 mg; 37,6%),

Hidrogenou-se o éster anterior (107,7 mg; 0122 mole) utilizando o catalisador de paládio sobre carvão a 10% (100 mg) em THF/H^O (3 ml; 3 ml) à pressão de 1 atm. de hidrogénio durante 3 horas. Depois de se converter o sal de sódio com NaKC03, purificou-se o produto bruto numa colu na 018 e procedeu-se à liofilização das fracçbes apropriadas para proporcionar o composto em epígrafe (25,6 mg; 33,6%)

Exemplo 47

Sal interno do hidróxido de Γ 2S-/2S-/" 2. 3 *>< , , 6{B (Z) J7- -Ι-νΓ 6-/2Z 2-amino-4-tiazolil)-(metoxi-imino)-acetily-aminpy -2-carboxi-3-metil-7-oxo-4-tia-l-azabiciclo^ 3.2.0 7hept-3- -ily-metil,7-Piridinio A uma solução de éster (4-nitrofenil)—metílico do écido £ 2S-£2 &<, 3 oc., 5 c< , 6j9 (Z) J2~6~££{ 2-amino-4-tiazolil) --(metoxi-imino) -acetil y-amino y-3-bromometi.l-3-metil-7-oxo--4-tia-l-azabiciclo/"3.2.0 yheptano-2-carboxílico (300 mg; 0,49 mmole, preparado de acordo com o exemplo 27) e piridi-na (0,115 ml; 1,42 mmole), adicionou-se AgBI?4 (119 mg; 0,61 mmole) e agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambien te durante 4 horas. Filtrou—se a mistura reaccional e após a concentração sob vazio purificou-se o filtrado numa coluna 101-

f, C18. Procedeu-se à liofilização das fracçSes apropriadas Para proporcionar tetraf luoro-borato de £ 2S-/* 2^,3^,5^ , 6j3(Z) JJ-l-f β-ΖΤΖ’ί 2-amino-4~tiasolil)-(metoxi-imino)-ace-til_/-amino_7-2-(4-nitro-benziloxi-carbonil)-3-metil-7-oxo--4-tia-l-azabiciclo/' 3.2. Oj7hept-3-il J^-metil ./-piridínio (87 mg? 25,4%).

Dissolveu-se o tetrafluoro-borato anterior (87 mg; 0,124 mmole) em acetonitrilo/H^O (4 ml:5 ml) e adicionou--se NaHC03 (0,1 N; 2,48 ml; 0,248 mmole). A hidrogenação da mistura resultante utilizando catalisador de paládio sobre carvão a 10% (96 mg) à pressão de 1 atfru de hidrogénio durante 2 horas, proporcionou, apôs ourificação numa coluna C13, o composto em epígrafe (11,2 mg; 19,2%)

Exemplo 48

Sal interno do hidróxido de ZT2S-Z" 2 oc, 3 gc, 5 oc , 6jg (R36) =£L· 2-carboxi-6-%TyZ'(4-etil-2,3-dioxo-l-piperazinil) -carbo-xil ,7-amino _7-f enll-acetil ,7-amino^7-3-meti1-7-oxo-4-tia-1--azabicicloZ"3,2.0 ,7hept-3-il _7-metil ,7-Piridínio A uma solução de éster (4-nitrofenil)-metílico do ácido £ 2S-/" 2 <?<., 3c< , 5c< , 6p(Rx) ^7-3-bromometil-6-/222f(4--etil-2,3-dioxo-l-piperazinil)-carbonil ,7-amino J-íenil-^ce-til ,7-amino ,7-3-metil-7-oxo-4-tia-l-azabiciclo4T 3.2,0 J7henta no-2-carboxílico (443 mg; 0,60 mmole, Exemplo 40) e piridina (0,149 ml; 1,84 mmole) em cloreto de metileno (8,7 ml), adicionou-se AgBF4 (χ44 mg; 0,74 mmole) e agitou-se a mistura

£l«2- reaccional durante 3 horas. Eliminou-se o dissolvente e pu-^ificou-se o resíduo numa coluna C18 tendo-se feito a elui-Çao com um gradiente de CH^CN/H^O para se obter tetrafluoro--borato de £ 2S-/* 2(x ,2<x , (R) 2-(4-nitro-ben- ziloxi-carbonil)-6-££££{.4-eti1-2,3-dioxo-l-piperazinil)-car-bonil ./-amino _7-fenil J^-acetil ./amino _/-3-metil-7-oxo-4-tia-"‘^-'"azabiciclo/'3.2,0 ./hept-3-il)-metil ./-piridinio (113,6 mg; 23%) .

Dissolveu-se o tetrafluoro-borato anterior (8C mg; 0,098 mmole) em acetonitrilo/H20 (3 ml; 8,7 ml) e adicionou--se NaHCO^ (0,1 N; 0,98 ml; 0,098 mmole). A hidrogenação da mistura resultante utilizando catalisador de paládio sobre carvao a 10% (80 mg) à pressão de 1 atro* de hidrogénio, durante 3 horas proporcionou, após purificação numa coluna C18, o composto em epígrafe (21,3 mg; 36,7%). utilizando procedimentos idênticos aos descritos nos Exemplos 31 e 32 anteriores, mas substituindo o ácido fenil--acético apropriado, fez-se a preparação dos compostos cujos nomes se indicam a seguir nos Exemplos 49-53.

Exemplo 49

Sal mono-sódico do ácido £ 2S-%~ 2«. 3^,5* _Z7-3-/Γ/~ 3,4 (açetilpxi) -be nz oi 1 -7-oxl 7-metil 7-6-ΖΖίΓ/~( 4-hidroxi-6-me-fil.-3-piridinil) -carbonil ,7-amino ^-(A-hidroxi-feniP-acetil·^· Zãainoι/-3.zaetil-7-σχo,4-tia-l·-.a2abiciclo/,3.2.0 7hePtano-2-carboxilico

Exemplo 50 .......... .................

Sal mono-sôdico do ácido £ 25-/" 2 ec . 3 , 5 , 6jB (R36^ ff-'*- -m 3,4-bi s( aoetiloxj)-benzoil J7-.QXÍ _7-met.il /^-6-/77774_ ~^1^^..ox.4'-.~'^~mg't:i-l-~3~pirldinil) -carbonll 7-amino -7~(4~hidro-xi-fenil) -acetil ,7-amlno _7-3 -metil-7~oxo-4-tia-l~azabici-010/* 3.2.0 Jheptano-2~carboxlllnn

Exemplo 51

Sal mono-sôdico do ácido £ 2S-Ç 2 <*- ,3 ,5^ ,6)8(¾36) J7-3 _ -/2T 3/4-bis(acetiloxx} -benzoil _7-oxj J^-metil _7-6-/77/'(4--etil-2/3-dioxo-l-pxperazinil)-carbonil_7-amino _/-(4-hidro- xi-fenil)-acetll 7-amino .7-3-metil-7-oxo-4-tia-l-azabiciclo- /* 3.2,0 J7heptano-2-carboxílico

Exemplo 52

Sal mono-sôdico do ácido 77-2- -ÍT£ 3,4-bis(acetiloxi) -benzoil .7~oxi _7-metil ,7-6-//-/-/- 4_ -etil-2,3-dloxo~l-piperazinil)-carbonilJ-amino_/~(4-hidroxi -fenil)-acetil_/-amino.7-3-metil-7-oxo-4-tia-l-azabiciclo- /"3,2.0 .Theptano~2-carboxílico

Exemplo 53

Sal mono-sôdico do ácido Z~2S-Z~2 <X , 3 oc, 5 , 6|? (R, S L2Z=3- -/223,4-bis (acetiloxi) -bensoil_7-oxi j7-metil _7-6-/22^3,4--bis (acetiloxi)-fenil/Z-Z^T^-eti1-2,3-dioxo-l-piperazinil)--carbonil 7-amino '7-acetll ,.7-amino -metil-7-oxo-4-tia--l-azabiciclo/'"3.2.0 ~7heptano-2-carboxilico

Claims (52)

1. .05-

   REIVINDICAÇ õ E S 1,- Processo para a preparação de compostos de fórmula geral

   I

   na qual R representa um átomo de hidrogénio, um grupo éster facilmente hidrolisãvel ou um grupo protector, R^ representa um átomo de hidrogénio e R2 representa um átomo de hidrogénio ou um grupo acilo, ou e R2 considerados em conjunto representam um grupo de fórmula geral

   na qual n representa um número inteiro 5, 6 ou 7, X representa um átcmo de flúor, um grupo tio-cianato ou azido ou um - 3a grupoQde formula geral R CC^-/ H R,— C —S —, —S —C NR4.^ 2 ^NR SR3, OR3 JU .NR4, NR4t V , -SC—N. ^NR, ^ NR, nr4I —SC—N. -» R_ 'V^· a - N W ou -R· (CH ) 2p 3 3. R representa um grupo alquilo C2~C16' ari^°^ ^ grupo heterocíclico, -(CH~) -arilo, -(CH_) -heterocíclico, um 2 m 2 m grupo heterocíclico-alcenilo inferior ou aril-alcenilo inferior, R3 representa um grupo alquilo C^-C.^, arilo, um grupo heterocíclico, -(CHn) -arilo, um grupo -(CH0) --heterocíclico, um grupo heterocíclico-alcenilo inferior ou aril-alcenilo inferior, R4 e R4, representam, cada um, independentemente, um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo inferior, alcenilo inferior ou alcinilo inferior, R representa um átomo de hidrogénio ou de halogéneo ou um. grupo amino, amino-alquilo inferior, carboxi, carba-moílo, carboxi-alquilo inferior, carbamoíl-alquilo inferior ou carbalcoxi-alquilo inferior, m representa um 1 uúmero inteiro compreendida entre 1 e 4 e p representa um número inteiro 3,4 ou 5, com a condição de X não re- 107- presentar um átomo de flúor quando R representa um grupo protector, um hidrato, um éster facilmente hidrolisãvel ou um seu sal, ou um hidrato do éster ou do sal, quando R representar um átomo de hidrogénio, caracterizado pelo facto; a) de se fazer reagir um composto de fórmula geral

   na qual Hal representa um átomo de halogéneo, R* representa um grupo protector e R^ e R2 têm os significados definidos antes com um sal de um composto da fórmula geral HX na qual X tem os significados definidos antes, ou b) de se fazer reagir um composto de fórmula geral

   IV na qual R' e X têm os significados definidos antes, com PCl^ ou PBr5 e com piridina ou lutidina, ou -108-

   c) de se fazer reagir um composto de fõrmula geral o H2N

   COgR ' VI na qual R* e X têm os significados definidos antes, com um composto de fõrmula geral

   em que n tem os significados definidos antes e Rb representa um radical alquilo inferior, ou d) de se acilar um composto de fõrmula geral VI anterior com um ácido carboxílico ou com um seu derivado reactivo, e eventualmente , e) de se eliminar o grupo protector éster num composto obtido, em que R representa um grupo protector éster, de se converter um composto obtido, em que R representa um átomo de hidrogénio, num sal ou éster facilmente hidrolisável e/ou de se converter um composto obtido, em que R representa um átomo de hidrogénio, ou um seu sal ou éster facilmente hidrolisável, num hidrato. 2.- -109- /
2. 2. - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracte-rizado pelo facto de R representar um grupo protector.
3. 3. - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracte-rizado pelo facto de R^ e R2 representarem, cada um, um átomo de hidrogénio.
4. 4.- Processo de acordo com a reivindicação 1, carac- terizado pelo facto de R^ representar um átomo de hidrogénio e R2 representar um grupo acilo.
5. 5.- Processo de acordo com a reivindicação 1, caracte-rizado pelo facto de R^ e R2 considerados em conjunto representarem um grupo de fórmula geral

   na qual n representa um numero inteiro 5, 6 ou 7.
6. 6.- Processo de acordo com a reivindicação 4, caracte-rizado pelo facto de o grupo acilo representado pelo símbolo R2 ser um grupo acilo alifãtico de fórmula geral

   O

   -110 ί .* na qual R^ representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo inferior, ciclo-a-lquilo inferior, alcoxi inferior, alcenilo inferior, ciclo-alcenilo inferior, ciclo-hexadienilo ou alquilo inferior ou alcenilo infe-' rior substituídos com um ou vários átomos de halogeneo ou grupos ciano, nitro, amino, mercapto, alquil-tio ou ciano-metil-tio.
7. 7.- Processo de acordo .com a reivindicação 4, caracteri- zado pelo facto de o grupo acilo representado pelo símbolo ser um grupo acilo aromático seleccionado entre o grupo constituído por R. '7

   R. 7

   90

   R. Ί

   111-

   em gue n representa um número inteiro 0, 1, 2 ou 3, R6' R7 e R8 representara/ cada um, independentemente, um átomo de hidrogénio ou de halogineo ou um grupo hidroxi, nitro, amino, ciano, trifluorometilo, alquilo com 1 a 4 átomos de carbono, alcoxi com 1 a 4 átomos de carbono ou amino-metilo e Rg0 representa um grupo amino, acil-amino, hidroxi, uin sal sulfo ou carboxi, um grupo carboxi protegido, um grupo formiloxi ou azido.
8. 8.- Processo de acordo com a reivindicação 4, caracte-rizado pelo facto de o grupo acilo representado pelo símbolo ser um grupo acilo heteroaromãtico seleccionado entre o grupo constituído por ο li R,«-(CHJ <1 c-f 0 II Riet-CH-C-f Rqo O

   O

   O O

   em que n representa um número inteiro 0, 1, 2 ou 3, RQ/* yu tem os significados definidos antes na reivindicação 7 e R;j.oi representa um anel heterocíclico penta-, hexa-ou heptagonal substituído ou insubstituído contendo 1, 2, 3 ou 4, heteroãtomos seleccionados entre o grupo constituído 'pòr azoto, oxigénio e enxofre.
9. 9.- Processo de acordo com a reivindicação 4, caracteri- zado pelo facto de o grupo acilo representado pelo símbolo ser um grupo ££ (4-substituído-2, 3-dioxo-l-piperazinil) -carbonil J7--amino /-acetilo de formula geral 0 0

   na qual R.^ representa um grupo alquilo inferior, um grupo hidroxi-alquilo inferior ou um grupo aromático de formula geral R, R, R( 7 6

   8 na qual R^, R^ e Rg têm os significados definidos antes na reivindicação 7, ou um anel penta-, hexa- ou heptagonal heterocíclico substituído ou insubstituído contendo 1, 2, 3 ou 4 heteroãtomos seleccionados entre o grupo constituído por.azoto, oxigénio e enxofre, e R12o representa um grupo alquilo inferior ou alquilo inferior substituído (em que o grupo alquilo inferior é substituído com um ou vários átomos de halogéneo ou grupos ciano, nitro, amino ou mer-
10. 10.- Processo de acordo com a reivindicação 4, caracte-rizado pelo facto de o grupo acilo representado pelo símbolo R£ ser um grupo (acil-amino)-acetilo de fórmula geral

    na qual tem 05 si9nifiçados definidos antes na. reivindicação 9, e R^0 representa um heterociclo insaturado ou um grupo de fórmula geral -114 “7

    (em que Rg, R^ e Rg têm os significados definidos antes na reivindicação 7 e n representa um número inteiro 0, 1, 2 ou 3), um átomo de hidrogénio, ou um grupo alquilo inferior, alquilo inferior substituído, amino, (alquil inferior)--amino, (dialquil inferior)-amino, ciano-(alquil inferior) -amino, hidrazino, (alquil inferior)-hidrazino, aril-hidrazino ou acil-hidrazino.
11. 11.- Processo de acordo com a reivindicação 4, caracte rizado pelo facto de o grupo acilo representado pelo símbolo R2 ser um grupo (oxi-imino substituído)-acetilo de fórmula geral

    —O- 111

    ‘23 140 na qual tem os sÍ9nífícados definidos antes na reivindicação 9, R-j.40 *·€ίη os significados definidos antes na reivindicação 10 e R22 e R23 s^° seieccio“ nados independentemente entre o grupo constituído por um átomo de hidrogénio e por um grupo alquilo inferior, ou R22 e considerados em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão ligados formam um anel carboxílico C^-C^.
12. 12.- Processo de acordo com a reivindicação 4, caracte rizado pelo facto de o grupo acilo representado pelo símbolo R2 ser um grupo £££ 3-substituido-2-oxo-l-imidazolidinil_7-carbo-nilJ7-amino_7-acetilo de fõrmula geral ✓ V

    7-1—CH--MH- 111 na qual tern os significados definidos antes na reivindicação 9 e R^,. representa um átomo de hidrogénio, um grupo (alquil inferior)-sulfonilo, aril-metileno-amino (isto é, -N=CHR^^ na qual R^.^ tem os significados definidos antes na reivindicação 9 , -COR^g (na qual R^6 representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo inferior ou alquilo -116

    inferior substituído por halogéneo), um grupo aromático (conforme definido por R^li na reivindicação 9), alquilo inferior ou alquilo inferior substituído (em que o grupo alquilo inferior é substituído com um ou vários átomos de halogéneo ou grupos ciano, nitro, amino ou mercapto).
13. 13.- Processo de acordo com a reivindicação .4, caracterá. zado pelo facto de o grupo acilo representado pelo símbolo R2 ser um grupo acilo de^fõrmula geral -5-í - (f = N - 0 - R130 R101 na qual R^oi tem os si9nificaãos definidos antes na reivindicação 8 e rePresenta 11111 átomo de hidrogénio ou um grupo al quilo inferior, cicloalquilo C^-C^ ou alquilo inferior substituído JTem que o grupo alquilo inferior é substituído com um ou mais átomos de halogéneo ou grupos ciano, nitro, amino, mercapto alquil(inferior)-tio, grupos aromáticos (conforme definido por Rlll na reivindicação 9) , carboxi (incluindo os seus sais) , amido, carbamoílo, alcoxi (inferior)-carbonilo, fenil-metoxi-carbonilo, difenil-metoxi-carbonilo, hidroxi-alcoxi-fosfinilo, di-hidroxi- -fosfinilo, hidroxi-(fenil-metoxi)-fosfinilo ou dialcoxi(inferior) -fosfinilo_7 ou carboxi-ciclo-alquilo C^-Cy.
14. 14.- Processo de acordo com uma qualquer das reivindi- -117

    cações anteriores, caracterizado .pelo facto de X representar R3aC02-, R3-COS-, -SR3 ou -0R3 e R3a e R3 representarem, cada um, independentemente, um grupo arilo ou um grupo heterociclo.
15. 15.- Processo de acordo com a reivindicação 1, caracte-rizado pelo facto de se preparar o composto seguinte: sal monos-sõdio do ácido 2S-(2a, 3a,5a,6 ^ )_7-3-metil-3-/7.' (1-metil-lH--tetrazol-5-il)-tio__7-metil_7-7-oxo-6-/“ (fenil-acetil) -amino J7-4--tia-l-azabiciclo C3.2.0_7heptano-2-carboxllico.
16. 16.- Processo de acordo com a reivindicação 1, caracte-rizado pelo facto de se preparar o composto seguinte: sal dissõ-dico do ácido /~2S-(2a,3a,5a, 6p ) _7-3-/2T (2,5-di-hidro-6-hidroxi--2-metil-5-oxo-l, 2,4-triazina-3-il) -tio_7-metil._7-3-metil-7-oxo--6-/7 (fenil-acetil)-amino„7-4-tia-l-azabiciclo 3,2,0_7heptano--2-carbox£lico.
17. 17. - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracte-rizado pelo facto de se preparar o composto seguinte: sal monos-sõdico do ácido £2S-(2ct, 3Qí , 5CY, 6 ^_7“3-^f (acetil-tio)-me-tilJ7-3-meti 1-7-oxo-6-/" (fenil-acetil) -amino_7-4-tia-l-azabiciclo /"3..2.0_7 heptano-2-carboxílico.
18. 18. - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracte-rizado pelo facto de se preparar o composto seguinte: sal monossõ- -118- dico do ácido £2S- {20c ,3^. ,5^ ,6 ^ J/-3-££ (2,5-di-hidro-3-mer-capto-2-metil-5-oxo-l,2,4-triazina-6-il) -oxi_/-3-metil-7-oxo-6--£(fenil-acetil)-ãmino/7-4-tia-l-azabiciclo /”3.2.0£ heptano-2--carboxílico.
19. 19. - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracte-rizado pelo facto de se preparar o composto seguinte: sal monos-sõdico do ácido/”2S-(2¾ ,3& ,5¾ ,6 p) ./-3-/27 (2-furanil-carbonil)--tio_7-metil_7-7-oxo-6-/T (fenil-acetil) -amino_7-4-tia-l-azabiciclo ΖΓ3.2.OJ7beptano-2-carboxílico.
20. 20. - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracte- rizado pelo facto de se preparar o composto seguinte: sal de sódio do ãcido /28-(2¾ , 3 Qf ,5¾ ,6 ) _7-3-fluoro-metil)-3-metil-7-oxo- -6-£ (fenil-acetil)-amino_7-4-tia-l-azabiciclo £3.2.O/Hieptano- -2-carboxílico.
21. 21. - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracteri zado pelo facto de se preparar o composto seguinte: sal de sódio do ácido £2S- (2V ,3¾ , 5¾ , 6 p )JJ-3-£££ 3,4-bis (acetil-oxi)-ben-zoíl_/-tio_/-metil-7-3-metil-7-oxo-6-/" (fenil-acetil)-amino_7-4- -tia-l-azabiciclo £3.2-0J heptano-2-carboxílico.
22. 22. - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracte-rizado pelo facto de se preparar o composto seguinte: sal monos- -119-

    sõdico do ácido /f2S-(2oL ,3o<; ,5¾ ,6 |b ) .7-3-/-^ (3,4-di-hidroxi--benzoíl) -oxi_7-metil^7-3-metil-7-oxo-6-7T (fenil-acetil) -amino_7--4-tia-l-azabicicÍo/-2.2.0_7heptano-2-carboxílico.
23. 23. - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracte-rizado pelo facto de se preparar o composto seguinte: sal de sõ-dio do ácido./T2S-(2!i6,3^ ,50<í ,6p )._7-3-ZΓ3-(lH-imiâazol-4-il)--l-oxopropoxiJ7“iI‘etil_7-3-metil-7-oxo-6-/Γ (fenil-acetil)-amino_7--4-tia-l-azabiciclo/T 3.2.0_7heptano-2-carboxIlico.
24. 24. - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracte-rizado pelo facto de Se preparar o composto seguinte: sal interno do hidróxido de 7~2S- (20/,3¾,50/ ,6^ ) 'J-1-/7"2-carboxi-3-metil--7-ΟΧΟ-6-/Γ(fenil-acetil)-amino_y-4-tia-l-azabiciclo/" 3.2.0J hept-3-il_7-metil J7-piridínio.
25. 25. - Processo de acordo -com a reivindicação 1, caracte-rizado pelo facto de se preparar o composto seguinte: sal monos-sódico do ácido /"2S-(2íy,3&,50/,6p)_7-3-/77"3,4-bis(acetiloxi)--benzoíl_7-oxi_7~metil,J7-3-meti 1-7-oxo-6-/Γ (fenil-acetil) -amino_7--4-tia-l-azabiciclo £3.2.Oj7bePtano“2“carboxílico.
26. 26. - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracte- rizado pelo facto de se preparar o composto seguinte: sal monos-sódico do ácido /T2S-(2¾ ,3¾ (E) ,5¾ ,6 ) J-^>~£££ 3- (IH-imidazol- 20-

    -4-il)-l-oxo-2-propenil_7-oxi_7-metil_7-3-metil-7-oxo-6-/~ (fenil--acetil) -amino_7-4-tia-Í-azabiciclo/~ 3.2,0._7heptano-2-carboxílico.
27. 27. - Processo âe acordo com a reivindicação 1, caracte- rizado pelo facto de se preparar o.composto seguinte: sal monossõ-dico do ácido /*~2S-/~2C/,30<i ,5C/ ,6 |3> (2-amino-4-tiazo- lil)-(metoxi-imino)-acetil J7-amino J7-3-metil-3-,/2r (1-metil-lH--tetrazol-5-il)-tio_7-metil_7-7-oxo-4-tia-l-azabiciclo/T 3.2.0_7- -heptano-2-carboxIlico.
28. 28. - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracteri-zado pelo facto de se preparar o composto seguinte: sal monossõ-dico do ácido /T2S-/"2Q<: ,30^ ,5C7,6 p (Z) ,77-6-/7- (2-amino-4-tiazo-lil) - (metoxi-imino) -acetil_7~aminoi_7“3- (azido-metil) -3-metil-7--oxo-4-tia-l-azabiciclo/“3.2.0_7heptano-2-carboxílico.
29. 29. - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracte- * ’ rizado pelo facto de se preparar o composto seguinte: sal monossõ-dico do ácido £2S-7*2oí,3^ ,5# ,6 p(Z)_J?7“3-/7/~3,4-bis(acetil--oxi)-benzoíl^-oxi^-metil(2-amino-4-tiazolil) - (metoxi--imino)acetil J7-amino J7-3-metil-7-oxo-4-tia-l-azabiciclo/73.2.0_7 heptano-2-carboxílico.
30. 30. - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracte-rizado pelo facto de se preparar o composto seguinte: sal dissõdi-

    co do ácido £2S-£2bL ,3¾ ,5¾. ,6 (Z) 7 7-6-/7~2-amino-4-tiazo- lil) - (metoxi-imino) -acetil_7“amino_7-3-/77 (2,5-di-hidro-6-hidroxi--2-metil-5-oxo-l, 2,4-triazina-3-il) -tio^7-metil _7-3-metil-7-oxo--4-tia-l-azabiciclo/' 3.2.0_7-heptano-2-carboxílico.
31. 31. - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracte-rizado pelo facto de se preparar o composto seguinte: sesqui-hidra to do sal monossõdico do ácido £2S-£2<*6 ,3oÇ ,50/.,6 j5 (R*) _Z7-6~ /7277 (4-etil-2,3-dioxo-l-piperazinil) -carbonil J7-amino.,7-fenil--acetilJ7-amino_7-3-metil-3-/Z“ (l-metil-lH-tetrazol-5-il)-tioJ7--metilJ7-7-oxo-4-tia-l-azabiciclo-/~ 3.2.0_7heptano-2-carboxílico.
32. 32. - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracteri-zado pelo facto de se preparar o composto seguinte: sal monossõ-dico do ácido £ 2S-£2<X ,3bí ,5& ,6 |3 {B*) _7J-3-{££ 3,4-bis(aceti-loxi) -benzoíl _7-oxi_J/-metil /7-6-/7727 (4-etil-2,3-dioxo-l-pipera-zinil)-carbonil J7“amino_7-f enil-acetil_7-aminoJ7“3-metil-7-oxo- -4-tia-l-azabiciclo £3.2.0J heptano-2-carboxílico.
33. 33. - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracteri-zado pelo facto de se preparar o composto seguinte: sal monossõdico do ácido £2S-£2oL ,3¾ ,5¾ ,6p (R*) £J-6-£f££ (4-etil-2,3- -dioxo-l-piperazinil) -carbonil_7-amino_7-fenil-acetil_7-amino_7- -3-/77 3 > 4-di-hidroxi-benzoIl) -oxi_77-metil _7-3-metil-7-oxo-4-tia--1-azabiciclo/" 3.2.0_7heptano-2-carboxílico. « -122- ( : fS>
34. 34. - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracte- rizado pelo facto de se preparar o composto seguinte: sal de sódio do ácido £2S-£2V ,3*6 ,506,6 (R*) £7j-6-££££ (4-etil-2,3-dio xo-l-piperazinil) -carbonil J7-aminoJ7"fenil-acetil_7-amino-7-3--££ 2-furanil-carbonil) -tio_7-metil_7-3-metil-7-oxo-4-tia-l-aza- biciclo/T 3.2.0 _7heptano-2-carboxílico.
35. 35. - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracteri-zado pelo facto de se preparar o composto seguinte: sal dissódico do ácido £2S-£20i ,3*6 ,5V ,6 jà (R*) J J-5-££££ (4-etil-2,3-dioxo--1-piperazinil) -carbonil^-aminoj^-fenil-acetil^-aminoJ7“3- -££ (2,5-dihidro-6-hidroxi-2-metil-5-oxo-l,2,4-triazina-3-il)--tio J7-metil.J7-3-metil-7-oxo-l-aza-4-tiabiciclo/~ 3.2.0 j7heptano--2-carboxílico.
36. 36.- Processo de acordo com a reivindicação 1, caracte-rizado pelo facto de se preparar o composto seguinte: sal monossÕ-dico do ácido _/~2S-/~ 2<xr ,30^ ,507/6 p (R*) JJ-3~£ (acetiltio)-metilL/--3-meti 1-6-/7727(4-- etil-2,3-dioxo-l-piperazinil) -carbonil J7-amino_7- -fenil-acetil_7-amino J7-7-oxo-4-tia-l-azabiciclo £ 3.2.0/7hepta-no-2-carboxílico.
37. 37.-. Processo de acordo com a reivindicação 1, caracteri zado pelo facto de se preparar o composto seguinte: sal monossõ-dico do ácido £2S-£ 206 ,306 ,5t>T ,6 β (R*) J7-3- (fluoro-metil)-6- -££££ (4-etil-2,3-dioxo-l-piperazinil)-carbonilJ7-amino_7-fenil--acetil^^and-no J7-3-metil-7-oxo-4-tia-l-azabiciclo £3.2.0^hepta-no-2-carboxílico.
38. 38. Processo de acordo com a reivindicação 1, caracte-rizado pelo facto de se preparar o composto seguinte: sal monos-sõdico do ácido £2S-/- 2¾^ ,3a^ ,5V ,6 ^ (R*) 31-3-£££ 3,4-bis (ace- tiloxi) -benzoílJ-vt&tíXJ-&-££££ (4-etil-2,3-dioxo-l-pipe-r az ini 1) carboni 1J-amino f eni 1- ace t i \J- amino J- 3 -me ti 1- 7-oxo- -4-tia-l-azabiciclo £3.2.0J7heptano-2-carboxílico.
39. 39. - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracte-rizado pelo facto de se preparar o composto seguinte: sal monos-sõdico do ácido £2S-£2^- ,30/ ,5<ac,6p(R*) J _7-3-///f 3,4-bis(ace-tiloxi)-benzoílJ7-oxiJ7-metilJ7-6-^C amino- (fenil-acetil) -amino J--3-metil-7-oxo-4-tia-l-azabicicloZT3.2.0._7 heptano-2-carboxílico.
40. 40. - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracte-rizado pelo facto de se preparar o composto seguinte: sal interno do hidróxido de £2S-£2<^ ,3<^ ,5c^ ,6 ^ (R*) _7_7-4-/7ZT 2-carboxi--&££££ (4-etil-2,3-dioxo-l-piperazinil)-carbonil_7-amino_7-fenila-cetil_7-amino _7-3-metil-7-oxo-4-tia-l-azabiciclo</’ 3.2.0_7hept-3--il J^-tioJ^metil^-l-etil-piridínio.
41. 41.- Processo de acordo com a reivindicação 1, caracteri- -124 / zado pelo facto de se preparar o.composto seguinte: sal interno do hidróxido de £ 2S- (20d f 3o£ ,50^ ,6 ^ ) J-k-£££ 2-carboxi-3-metil--7-ΟΧΟ-6-/Γ (fenilacetil)-amino J7-4-tia-l-azabiciclo/"3.2.0..7--hept-3-il J7-metil_7-tioJ7“l"etil--piridínio ^
42. 42,- Processo de acordo com a reivindicação 1, caracte-rizado pelo facto de se preparar o composto seguinte: ácido Z 2S-(2(y ,3£* ,6 p ) £?-3~[££ 3,4-bis (acetiloxi)-benzoíl_7-oxi£f- - metil?-6-££ hexahidro-lK-azepin-l-il) -metileno_7-amino_7“7-oxo-4--tia-l-azabiciclo/T 3.2.OJ7“heptano-2-carboxílico.
43. 43,- Processo de acordo com a reivindicação 1, caracte-rizado pelo facto de se preparar o composto seguinte: sal monossõ-dico do ácido /2S- (20^ ,3^ ,5^ , 6 jS> ) J-?>-£££ 3,4-bis (acetiloxi) --benzoíl,7-oxi_7-metil £7-6-£££ (difluoro-metil) -tio^7-acetil_7-ami no_/-3-metil-7-oxo-4-tia-l-azabiciclo /3,2.0j7heptano-2-carboxí-lico.
44. 44.- Processo de acordo com a reivindicação 1, caracte-rizado pelo facto de se preparar o composto seguinte: sal monossõ· dico do ácido £2S-(2t>l r30í ,5^,6^ ) _7*-6-/Z2T 3,4-bis (acetiloxi) - -benzoíl-aminoJ7-fenil-acetilJ7-amino_7-3-/" /23,4-bis (acetiloxi)- -benzoíl_7oxi._7-metilZ7“3-metil-7-oxo-4-tia-l-azabiciclo/73.2. o_7 heptano-2-carboxílico. 45.- * -125-
45. 45. - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracte-rizado pelo facto de se preparar o composto seguinte: sal interno do hidróxido de /^28-//207,3^1,5¾^ ,6 jS (Z)/7/7-1-/"6-££C (2-amino--4-tiazolil) - (metoxiimino) -acetil_7-amino „7'-2-carboxi-3-metil-7--oxo-4-tia-l-azabiciclo/T 3.2.0/7hept-3-il/7-metil._7-piridínio.
46. 46. - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracte-rizado pelo facto de se preparar o composto seguinte: sal interno do hidróxido de /T2S-/~2C^,30<,5D/,6 ^ (R*)/7J-l-//~2-carboxi-6--////"(4-etil-2,3-dioxo-l-piperazinil)-çarbonil /^amino/^-fenil-ace-til/7-amino/7-3-metil-7-oxo-4-tia-l-azabiciclo/’’ 3.2.0_7hept-3-il7 metil/7-piridínio.
47. 47. - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracte-rizado pelo facto de se preparar o composto seguinte: sal monos-sõdico do ácido /72S-/~2Q7. ,3 0/ ,507 ,6 j^>(S*) /7/-3-/// 3,4-bis (ace- ti loxi) -benzoí l/7oxi ./-meti1 /7-6-777/ (4-hidroxi-6-meti 1-3-piridi-nil) -carbonil J7-amino J- (4-hidroxi-fenil)-acetil/7-amino/7-3-metil--7-oxo-4-tia-l-azabiciclo /"3.2.0/7 heptano-2-carboxílico.
48. 48.- Processo de acordo com a reivindicação 1, caracte-rizado pelo facto de se preparar o composto seguinte: sal monossõ-dico do ácido /2S-/2Q7,307,507 ,6 ^ (R*) _/7-3-/7/3,4-bis(acetil-oxi) benzoí l/7-oxi_7-metil/7-6-/7//’(4-hidroxi-6-metil-3-piridinil) --carbonil/7-amino/7- (4-hidroxi-fenil) -acetil/7-amino_7-3-metil-7- -126-

    -oxo-4-tia-l-azabiciclo /3.2.0J heptano-2-carboxílico.
49. 49.- Processo de acordo com a reivindicação 1, caracteri-zado pelo facto de se preparar o composto seguinte: sal monossô-dico do ácido £ 2S-£ 2&L , 3 0d , 5C/ ,6j3 CR*) JJ-3-£££ 3,4-bis (acetil-oxi) -benzoíl_7-oxiJ7-metil £f-Ç>-£[££ (4~etil-2,3-dioxo-l-piperazi-nil) -carbonil_7-amino (4-hidroxi-fenil) -acetil_J7“aniino J7-3-me-til-7-oxo-4-tia-l-azabiciclo-/T 3.2.0 J7beptano-2-carboxí lico.
50. 50, - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracteri- zado pelo facto de se preparar o composto seguinte: sal monossÕ-dico do ácido £ 2S-/ 2δ** , 3 c*1 , ,6 p (S*)JÇ/~3-£££ 3,4-bis (acetilo- xi) -benzoll-_7”Oxi._7metil J7-6-/72Z-” (4-etil-2,3-dioxo-l-piperazinil) --carbonil_7-amino J- (4-hidroxi-fenil)-acetil_7-aminoJ7-3-metil--7-oxo-4-tia-l-azabiciclo/T 3,2,0 J7heptano-2-carboxílico.
51. 51. - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracteri-zado pelo facto de se preparar o composto seguinte: sal monossõ-dico do ácido £2S-/' 2 Qé ,3<V , 5<Y ,6 p (R, SjJ^-3-///- 3,4-bis (acetil-oxi)-benzoíl J?-oxiJ7inetil£/-&-£££ 4,4-bis (acetiloxi) -fenil J-££{A--etil-2,3-dioxo-l-piperazinil-carbonil _7-amino_7-acetil _7-amino.J7--3-metil-7-oxo-4-tia-l-azabiciclo/~3,2,0_7heptano-2-carboxílico.
52. 52.- Processo para a preparação de uma composição farmacêutica, destinada particularmente à utilização no controlo ou na -127

    prevenção de doenças infecciosas, caracterizado por se converter um composto de fórmula geral I conforme definido na reivindicação 1, um seu hidrato, um seu sal ou éster facilmente hidrolisã-vel, ou um hidrato do éster ou do sal, no caso de R representar um átomo de hidrogénio, numa forma de administração galênica em conjunto com um veículo terapeuticamente inerte, Lisboa, 30 de Outubro de 1989 O Agente Oficie;! da Propriedade Indusrríal