CN1047504A

CN1047504A - 青酶烷酸衍生物

Info

Publication number: CN1047504A
Application number: CN89108261A
Authority: CN
Inventors: 大卫·约瑟夫·巴特科维茨; 丹尼斯·多尔顿·凯茨; 罗伯特·莫克; 魏坤成
Original assignee: F Hoffmann La Roche AG
Current assignee: F Hoffmann La Roche AG
Priority date: 1988-10-31
Filing date: 1989-10-30
Publication date: 1990-12-05
Also published as: IL92139A0; JPH02191283A; EP0367124A1; ZW13589A1; TNSN89120A1; FI895162A0; AU4389289A; DK538689A; MC2069A1; HUT52102A; KR900006345A; DK538689D0; OA09142A; CA2001642A1; NO894322L; PT92156A; NO894322D0

Abstract

具有通式I结构(式中各符号如说明书定义)的化合物制备方法，以及该化合物作为杀菌剂用以预防和治疗包括人在内的哺乳动物感染。

Description

本发明涉及通式Ⅰ所示化合物：

式中R是氢，易水解酯基或保护基;R¹是氢和R²是氢或酰基，或者R¹和R²一起为基团

（n是5，6或7），X是氟，氰硫基，叠氮基或基团：R^3aCO₂-

R^3a是C₂-C₁₆烷基，芳基，杂环基，-（CH₂）m-芳基，-（CH₂）m-杂环基，杂环-低碳链烯基或芳基-低碳链烯基;R³是C₁-C₁₆烷基，芳基，杂环，-（CH₂）m-芳基，-（CH₂）m-杂环基，杂环-低碳链烯基或芳基-低碳链烯基;R⁴和R⁴′分别是氢，低碳烷基，低碳链烯基或低碳炔基;Ra是氢，卤素，氨基，氨基-低碳烷基，羧基，氨基甲酰基，羧基-低碳烷基，氨基甲酰基-低碳烷基或低碳烷酯基-低碳烷基;m数值为1-4，和p值为3，4或5，条件是当R是保护基团，X不是氟。当R是氢时，本发明还包括这些化合物的水合物，盐类及其盐水合物。

这些化合物适宜作杀菌剂用来预防和治疗包括人在内的哺乳动物的细菌感染。

在描述式Ⅰ化合物和该说明书所有化合物时，黑锥形线（

）意指β-定位取代基（即，在分子平面或纸面上方），虚线（

）意指α-定位取代基（即，在分子平面或纸面下方）。

在本申请中，术语“低碳烷基”是指含有1-8个，最好含有1-4个碳原子的直链或支链饱和烃基，例如甲基，乙基，丙基，异丙基，叔丁基等。

术语“低碳烷氧基”是指直链或支链烃氧基，其中的“低碳烷基”部分是上述定义的低碳烷基。例如，甲氧基，乙氧基，丙氧基等。

术语“卤素”除非有具体限定，代表氯，溴，碘和氟四种形式。

术语“芳基”是指取代的或未取代的芳族部分，例如苯基，萘基等，其可带有1-3个适当的取代基如卤素（氟、氯、溴等），羟基，氨基，硝基，氰基，羧基，氨基甲酰基，低碳烷酯基，羧基-低碳烷基，氨基甲酰基-低碳烷基，低碳烷酯基-低碳烷基，氨基-低碳烷基，低碳烷酰氧基等。

术语“取代苯基”是指被卤素（氯，溴，氟等），低碳烷基，＊基，硝基或三氟甲基-取代或二取代的苯基。

术语“取代烷基”是指被卤素（氯，溴，氟等），三氟甲基，氰基等取代的烷基部分。

术语“低碳链烯基”是指含有2-8个碳原子并且含有一个烯键的直链或支链烃基，例如烯丙基，乙烯基等。

术语“低碳环烷基”是指3-8元饱和碳环部分，例如环丙基，环丁基，环己基等。

术语“杂环”是指含有不只一种类型原子的环。合适的杂环基是例如在环上含有1-4个氮原子的不饱和5-8元杂环（例如吡咯，吡唑，咪唑，二氢咪唑，吡啶和四唑），在环上含有1-3个氮原子的不饱和稠杂环（如吲哚），在环上含有一个硫原子的不饱和5-8元杂环（如噻吩），在环上含有1-3个硫原子的不饱和稠杂环（如噻蒽），在环上含有一个硫原子和1-2个氮原子的不饱和5-8元杂环（如噻唑，二氢噻唑，噻二唑），环上含有一个硫原子和1-2个氮原子的不饱和稠杂环（如苯并噻唑），环上含有一个氧原子的不饱和5-8元杂环（如呋喃），环上含有一个氧原子和1-2个氮原子的不饱和稠杂环（如苯并噁唑），环上含有一个氧原子和1-2个氮原子的不饱和5-8元杂环（噁二唑）等等。

这些杂环基因可以不被取代或被低碳烷基，低碳烷酯基，低碳烷氧基，低碳烷硫基，羟基，巯基和氧一取代，二取代或三取代。

在本申请中与R²联合使用的术语“酰基”，是指从羧酸中除去羟基而衍生得到的所有有机基团。尽管R²可以是许多酰基中的一种，但优选某些酰基。

过去曾用来酰化β-内酰胺抗菌素，包括6-氨基青酶烷酸及其衍生物和7-氨基头孢菌酸及其衍生物的酰基是一些有代表性的酰基实例;例如参见，“头孢菌素和青酶素”（Flynn编辑，Academic出版社（1972）），1978年10月17日公开的比利时专利866，038号，1978年12月11日公开的比利时专利867，994号，1979年5月1日颁布的美国专利4，152，432号，1976年7月27日颁布的美国专利3，971，778号和1979年10月23日颁布的美国专利4，173，199号。这些文献中叙述各种酰基的部分引入本文作参考。现给出下列酰基进一步说明术语“酰基”，但不应认为这包括了所有酰基。酰基例子是：

（a）具有下式结构的脂族酰基：

式中R₅是氢，低碳烷基，低碳环烷基，低碳烷氧基，低碳链烯基，低碳环链烯基，环己二烯;或被一个或多个卤素，氰基，硝基，氨基，巯基烷硫基或氰基甲硫基取代的低碳烷基或低碳链烯基。

（b）具有下式结构的芳族酰基：

式中n是0，1，2或3;R₆，R₇和R₈分别是氢，卤素，羟基，硝基，氨基，三氟甲基，含1-4个碳原子的烷基，含1-4个碳原子的烷氧基或氨基甲基;R₉₀是氨基，酰氨基，羟基，羧基或磺酸盐，保护羧基如苄氧羰基，甲酰氧基或叠氮基。

优选的芳族酰基包括具有下述结构的芳族酰基：

R₉₀最好为氨基，羟基或羧基或磺酸盐。

适合本发明用途的其他芳族酰基的例子是磺苯乙酰基，羟基磺酰氧基苯乙酰基，氨磺酰基苯乙酰基，（苯氧羰基）苯乙酰基（对-甲苯氧基羰基）苯乙酰基，甲酰氧基苯乙酰基，羧基苯乙酰基，甲酰氨基苯乙酰基，苄氧羰基苯乙酰基，2-（N，N-二甲基氨磺酰基）-2-苯乙酰基等。

（c）具有下述结构的杂芳族酰基：

式中n是0，1，2，或3;R₉₀如上所述;R₁₀₁是含有1，2，3或4个（最好含1或2个）选自氮，氧和硫杂原子的取代的或未取代的5-，6-或7元杂环。杂环的例子是噻吩基，呋喃基，吡咯基，吡啶基，吡嗪基，噻唑基，嘧啶基和四唑基。取代基的例子是卤素，羟基，硝基，氨基，氰基，三氟甲基，含1-4个碳原子的烷基或含1-4个碳原子的烷氧基。

优选的杂芳族酰基包括上述结构的基团，其中R₁₀₁是2-氨基-4-噻唑基，2-氨基-5-卤基-4-噻唑基，4-氨基吡啶-2-基，2-氨基-1.3，4-噻二唑-5-基，2-噻吩基，2-呋喃基，4-吡啶基或2，6-二氯-4-吡啶基。

（d）具有下面结构的〔〔（4-取代-2，3-二氧代-1-哌嗪基）羰基〕氨基〕乙酰基：

式中R₁₁₁是低碳烷基，低碳羟基烷基或具有下面结构的芳族杂环基或碳环基：

（式中R₆，R₇和R₈如上定义或在R₁₀₁定义中所述的杂芳族基）;R₁₂₀是低碳烷基，取代低碳烷基（其中，烷基被1个或多个卤素，氰基，硝基，氨基或巯基取代）例如4-低碳烷基（最好为甲基或乙基）-2，3-二氧代-1-哌嗪羰基-D-苯基甘氨酰。

（e）具有下面结构的（取代氧亚氨基）芳基乙酰基：

式中R₁₀₁如上定义;R₁₃₀是氢，低碳烷基或C₃-C₇环烷基或取代低碳烷基〔烷基被一个或多个卤素，氰基，硝基，氨基，巯基，低碳烷硫基，芳基（如R₁₁₁定义），羧基（包括它的盐），酰氨基，氨基甲酰基，低碳烷氧羰基，苯基甲氧羰基，二苯甲氧羰基，羟基烷氧基氧膦基，二羟基氧膦基，羟基（苯基甲氧基）氧膦基或二（低碳烷氧基）氧膦基取代〕或羧基-C₃-C₇-环烷基。

具有下面结构

基团的例子是〔2-〔（氯乙酰基〕氨基〕-4-噻唑基〕（甲氧基氨基）乙酰基，（2-氨基-4-噻唑基）（1-甲基乙氧基亚氨基）-乙酰基，（2-氨基-4-噻唑基）（甲氧基亚氨基）乙酰基，（2-呋喃基）-（甲氧基亚氨基）乙酰基，（4-羟基苯基）（甲氧基亚氨基）乙酰基，（甲氧基亚氨基）（苯基）乙酰基，（羟基亚氨基）（苯基）乙酰基，（羟基亚氨基）（2-噻吩基）乙酰基，〔〔（二氯乙酰基）氧基〕亚氨基〕（2-噻吩基）乙酰基，〔5-氯-2-〔（氯乙酰基）氨基〕-4-噻唑基〕（甲氧基亚氨基）乙酰基，（2-氨基-5-氯-4-噻唑基）（甲氧基亚氨基）乙酰基，〔〔〔1-（1，1-二甲基乙氧基）羰基〕-1-甲基乙氧基〕亚氨基〕-2-磺氨基-4-噻唑基）乙酰基，〔〔〔1-（1，1-二甲基乙氧基羰基〕-1-甲基乙氧基〕亚氨基〕-〔〔2-三苯甲基）氨基〕-4-噻唑基〕乙酰基，（甲氧基亚氨基）（2-磺氨基-4-噻唑基）乙酰基，〔（1-甲基乙氧基）亚氨基〕-〔2-〔（甲基磺酰基）氨基〕-4-噻唑基〕乙酰基，〔（3-甲基磺酰基）-2〔3H〕-噻唑啉-4-基〕-〔1-（甲基乙氧基）亚氨基〕乙酰基，〔〔2-（氯乙酰基）氨基〕-4-噻唑基〕〔〔〔〔（4-硝基苯基）-甲氧基〕羰基〕甲氧基〕亚氨基〕乙酰基，（2-氨基-4-噻唑基）〔（羧基甲氧基）亚氨基〕乙酰基，（2-氨基-4-噻唑基）〔1-羧基-（1-甲基乙氧基）亚氨基）乙酰基，（2-氨基-4-噻唑基）〔〔（氨基-羰基）甲氧基〕亚氨基〕乙酰基。

（f）具有以下结构的（酰氨基）乙酰基：

式中R₁₁₁如上定义;R₁₄₀是不饱和杂环，具有下式结构的基团

（式中R₆，R₇，R₈和n如前定义），氢，低碳烷基，取代低碳烷基，氨基，低碳烷基氨基，二（低碳烷基）氨基，（氰基低碳烷基）氨基，肼基，低碳烷基-肼基，芳基-肼基或酰基-肼基。

具有上述结构的优选的（酰基氨基）乙酰基包括R₁₄₀为氨基或酰氨基的（酰基氨基）乙酰基，R₁₁₁为苯基或2-噻吩基的（酰基氨基）乙酰基也是优选的。

（g）具有下面结构的取代氧亚氨基乙酰基：

式中R₁₁₁和R₁₄₀如上定义;R₂₂和R₂₃分别选自氢和低碳烷基或者，R₂₂和R₂₃与连接它们的碳原子一起形成一个C₃-C₇碳环例如环丙基，环丁基或环戊基。

具有上述结构的优选的取代氧亚氨基乙酰基包括R₁₄₀是羟基或氨基的取代氧亚氨基乙酰基。R₁₁₁是2-氨基-4-噻唑基的取代氧亚氨基乙酰基也是优选。

（h）具有下面结构的〔〔〔3-取代-2-氧代-1-咪唑烷基〕羰基〕-氨基〕乙酰基：

式中R₁₁₁如上定义;R₁₅是氢，低碳烷磺酰基，芳亚甲基氨基（即-N＝CHR₁₁₁，其中R₁₁₁如上定义），-COR₁₆（式中R₁₆是氢，低碳烷基或被卤素取代的低碳烷基），芳基（由R₁₁₁所定义），低碳烷基或取代低碳烷基（其中低碳烷基被一个或多个卤素，氰基，硝基，氨基或巯基取代）。

具有上述结构的优选的〔〔〔3-取代-2-氧代-1-咪唑烷基〕羰基〕乙酰基包括R₁₁₁是苯基或2-噻吩基的基团。R₁₅是氢，甲磺酰基，苯基亚甲基氨基或2-呋喃基亚甲基氨基的基团也是优选的。

优选的式Ⅰ化合物是X为

R^3aCO₂-，，-SR³，-OR³.

的化合物。

特别优选的化合物是R^3a和R³分别是芳基或杂环基的化合物。作为式Ⅰ化合物的易水解的酯类应理解为其羧基（2-羧基）以易水解酯基形式存在的式Ⅰ化合物。这种酯（可以是普通类型）的例子是低碳烷酰氧基烷基酯（例如乙酰氧基甲基酯，新戊酰氧基甲基酯，1-乙酰氧基甲酯和1-新戊酰氧基乙基酯），低碳烷氧羰基氧基烷基酯（例如甲氧羰基氧基甲基酯，1-乙氧基羰基氧基乙基酯和1-异丙氧基羰基氧基乙基酯），内酯（例如2-苯并〔c〕呋喃酮酯和硫代2-苯并〔c〕呋喃酮酯），低碳烷氧基甲酯（例如甲氧基甲基酯）和低碳烷酰氨基甲基酯（例如，乙酰氨基甲基酯）。也可以使用其他酯（例如苄基酯和氰基甲基酯）。

式Ⅰ化合物盐的例子是碱金属盐如钠盐和钾盐，铵盐，碱土金属盐如钙盐，与有机碱如胺生成的盐（例如与N-乙基-哌啶，普鲁卡因碱，二苄基胺，N，N′-二苄基亚乙基二胺，烷基胺或二烷基胺生成的盐）以及与氨基酸生成的盐，例如与精氨酸或赖氨酸生成的盐。盐可以是一盐，二盐或三盐。

式Ⅰ化合物也可与有机酸或无机酸生成加成盐。这种盐的例子有氢卤化物（例如盐酸化物，溴酸化物和碘酸化物）以及其他无机酸盐如硫酸盐，硝酸盐，磷酸盐等，烷基磺酸盐和一芳基磺酸盐如乙基磺酸盐，甲苯磺酸盐，苯磺酸盐等，和其他有机酸盐如乙酸盐，酒石酸盐，硬脂酸盐，柠檬酸盐，苯甲酸盐，水扬酸盐，抗坏血酸盐等。

式Ⅰ化合物和这些化合物的盐类，酯类和水合物适宜作抗哺乳动物（例如狗，猫，马和人）细菌感染制剂。这些化合物对宽范围的革兰氏阴性细菌具有活性。下表说明了采用琼脂充分扩散法（Agar Well Diffusion Method），以最低抑制浓度（MIC）（每毫升微克数，mg/ml）为量度的本发明化合物对多种革兰氏阴性微生物的体外活性，评定的化合物如下：

化合物A：

〔2S-〔2α，3α，5α，6β（R^＊）〕〕-6-〔〔〔〔（4-乙基-2，3-二氧代-1-哌嗪基）羰基〕苯基-乙酰基〕氨基〕-3-〔〔（1-甲基-1H-四唑-5-基）硫代〕甲基〕-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3，2，0〕-庚烷-2-羧酸-钠盐倍半水合物

化合物B：

〔2S（2α，3α，5α，6β〕-3-甲基-3-〔〔（1-甲基-1H-四唑-5-基）-硫代〕甲基-7-氧代-6-〔（苯基乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸-钠盐。

化合物C：

〔2S-〔2α，3α，5α，6β（Z）〕〕-6-〔〔（2-氨基-4-噻唑基）-（甲氧基亚氨基）-乙酰基〕氨基〕-3-甲基-3-〔〔（1-甲基-1H-四唑-5-基）硫代〕甲基〕-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸-钠盐。

化合物D：

〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-（叠氮甲基）-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯基乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环-〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸-钠盐。

化合物E：

〔2S-（2α，3α，5α，6β〕-1-〔〔2-羧基-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-3-基〕甲基吡啶鎓氢氧化物内盐。

化合物F：

〔2S-（2α，3α，5α，6β〕-3-〔〔（2，5-二氢-6-羟基-2-甲基-5-氧代-1，2，4-三嗪-3-基）硫代〕-甲基〕-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸二钠盐。

化合物G：

〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-〔（乙酰基硫）-甲基〕-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸-钠盐。

化合物H：

〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-〔〔〔3，4-双（乙酰氧基）苯甲酰基〕氧基〕甲基〕-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸-钠盐。

为抗哺乳动物细菌感染，本发明化合物以约每天每千克体重5毫克（mg/kg/天）至约100mg/kg/天的用量，最好以约10mg/kg/天-约55mg/kg/天的用量对哺乳动物给药。

可采用过去常用的将青霉素抗菌素和头孢菌素抗菌素给到感染部位的任何给药方式使用本发明化合物。这些给药方式包括静脉注射，肌内注射，皮下注射和肠内给药例如以栓剂给药。

可以理解，包括式Ⅰ化合物的药物组合物含有药用载体，如本领域已知的载体。

下面的反应示意图说明了本发明式Ⅰ化合物的制备方法和中间体。

在这些反应步骤中，如果分子中的取代基在反应过程中可起化学反应，那么该取代基应采用保护基以被保护的形式存在。适合该用途的保护基可选自本领域技术人员已知的普通基团。例如，氨基可用在肽化学中采用的易脱除保护基团进行保护，保护基团例如烷羰基如甲酰基，乙酰基，丙酰基等;烷氧羰基如叔丁氧羰基等;烷氧基烷羰基如甲氧基乙酰基，甲氧基丙酰基等;取代烷氧羰基如三氯乙氧羰基等;取代烷羰基如一氯甲基羰基，一氯乙基羰基，二氯甲基羰基，二氯乙基羰基，三氯甲基羰基，三氯乙基羰基，三氯丙基羰基等;芳烷氧基羰基如苄氧羰基等;取代芳烷氧羰基如对硝基苄氧羰基等;或者用蛋白质保护氨基。

本发明优选的氨基保护基团是苄氧羰基，叔丁氧羰基，或甲硅烷保护基如三甲基硅基。

可用普通方法脱除氨基保护基，例如在叔丁氧羰基情况下利用酸处理;在对硝基苄氧羰基情况下利用催化剂还原;或在三氯乙氧基羰基情况下用锌和酸处理。

可采用酯基作为分子中羧酸基团的保护基，这些酯基后来用酸或碱处理或还原易转化成羧酸基团。这些羧酸保护基的例子是β-甲磺酰乙基，三甲基硅基，叔丁基二甲硅基，二苯甲基，β-β-β-三氯乙基，苯甲酰甲基，对甲氧苄基，对硝基苄基，甲氧甲基等。

在这些反应示意图中，R′表示羧酸保护基团（如上例举），Ph表示苯基，M表示金属阳离子（例如钠离子或钾离子），而R¹，R²，X和Hal如前定义。

示意图1

Ⅲ→Ⅳ

式Ⅲ化合物（已知化合物并可用已叙述的方法制备）与精选亲核试剂的盐反应。反应在任何合适溶剂下进行。合适的亲核试剂的盐是例如钠盐，钾盐，铯盐，银盐或四丁基铵盐。优选的卤素是溴。反应在约-10℃-80℃温度下进行，以室温（如23-25℃）为佳。

Ⅳ→Ⅴ

使用与酯保护基团相匹配的试剂，将式Ⅳ化合物脱除保护基得到所需式Ⅴ产物。可采用以下试剂和相应匹配酯：用钯/碳进行氢解脱除对硝基苄基或在硫化钠存在下，在约或低于0℃-室温下，以及在溶剂如二甲基甲酰胺（水溶液）存在下进行水解脱除对硝基苄基;在苯甲醚存在下，在约0℃-室温温度下，存在或不存在共溶剂如二氯甲烷，用三氟乙酸反应脱除叔丁基酯或二苯基甲基酯;在2-乙基己酸钠盐或钾盐存在下，通过钯催化的烯丙基转移反应脱除烯丙基酯。参见，J.Org.Chem.47，587（1982）。

Ⅴ→Ⅰ

用碱金属氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐将式Ⅴ化合物转化成式Ⅰ化合物盐。优选的试剂是碳酸氢钠或碳酸氢钾。该转化反应可在溶剂如水或水和有机溶剂的混合物中进行。

示意图2

Ⅲ→Ⅳ

采用“反应示意图1”所述相同条件，将式Ⅲ化合物转化成式Ⅳ化合物。

Ⅳ→Ⅵ

在-20℃-40℃，最好在-10℃温度下，式Ⅳ化合物与Pcl₅或PBr₅和吡啶或二甲基吡啶反应生成式Ⅵ化合物。采用氯代溶剂如CH₂Cl₂，CHCl₃或CH₂ClCH₂Cl。然后与醇（最好是正丙醇或异丙醇）和水反应，碱化后得到式Ⅵ化合物。

Ⅵ→Ⅶ

按本领域已知方法，通过与活泼羧酸反应，将式Ⅵ化合物中的氨基酰化，引入R²（R¹＝H），从而得式Ⅶ化合物。例如，采用例如二氯甲烷，乙酸乙酯或二甲基甲酰作溶剂，式Ⅵ化合物与式酰化剂反应，式中Z为酰基活性基。优选的活性基Z是氢，

反应在约0℃-约30℃下进行约2-24小时。如果R²本身是是以含被护官能度的形式引入的，那么接下以本领域已知方法脱除保护基团。

在氯代烃如二氯甲烷中，在约-20℃-40℃温度下，通过与具有下面结构的化合物反应，

得式Ⅶ化合物，其中R¹和R²一起为

Ⅶ→Ⅻ→Ⅰ

采用“反应示意图1”中Ⅳ至Ⅴ和Ⅴ至Ⅰ转化的相同反应条件，将式Ⅶ化合物转化成Ⅷ化合物和将式Ⅷ转化成式Ⅰ化合物。

示意图3

Ⅲ→Ⅸ

反应条件与“反应示意图2”所述式Ⅳ至Ⅵ转化的反应条件相同。

Ⅸ→Ⅵ

反应条件与“反应示意图1”所述式Ⅲ至式Ⅳ转化条件相同。

Ⅵ→Ⅶ

反应条件与“示意图2”所述式Ⅵ至式Ⅶ转化条件相同。

Ⅶ→Ⅷ→Ⅰ

反应条件与“示意图2”所述式Ⅶ至式Ⅷ和式Ⅷ至式Ⅰ转化条件相同。

示意图4

Ⅲ→Ⅸ

反应条件与“反应示意图2”所述式Ⅳ至式Ⅵ转化条件相同。

Ⅸ→Ⅹ

反应条件与“反应示意图2”所述式Ⅵ至式Ⅶ转化条件相同。

Ⅹ→Ⅶ

反应条件与“反应示意图1”所述式Ⅲ至式Ⅳ转化条件相同。

Ⅶ→Ⅷ→Ⅰ

反应条件与“反应示意图1”所述式Ⅶ至式Ⅷ和式Ⅷ至式Ⅰ转化条件相同。

为了制备式Ⅰ羧酸化合物的易水解酯，该羧酸化合物最好与适当的含酯基卤化物（最好是碘化物）反应。利用碱例如碱金属氢氧化物或碱金属碳酸盐或有机胺如三乙胺，可加速反应。酯化反应通常在惰性有机溶剂例如二甲基乙酰胺，六甲基磷酸溴化物，二甲亚砜或二甲基甲酰胺（最好是后者）下进行。反应温度最好为约0°-40℃。

可利用本领域已知方法制备式Ⅰ化合物的盐和水合物或这些盐的水合物，例如式Ⅰ羧酸与当量所需碱在适当的含水溶剂或无水溶剂如水，乙醇，甲醇或乙酮中进行反应。成盐反应温度通常为室温（例如约23℃），但也可高于或低于室温，例如反应温度为0℃-50℃。

水合物在制备过程中可自动形成，或由于初始无水产物的吸湿性能而形成。关于可控的制备水合物的方法，可在约10℃-40℃将完全或部分无水产物（式Ⅰ的羧酸、酯或其盐）置于潮湿气氛中。

在以下实施例中，化合物名称以“α”或“β”表示化合物的立体化学构型。

实例1、

〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-甲基-3-〔〔（1-甲基-1H-四唑-5-基）-硫代〕-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝苯基）甲酯

将〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-（溴甲基-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝苯基）-甲酯（201.1mg，0.367mmol）和5-巯基-1-甲基四唑，钠盐（79.1mg，0.573mmol）溶解于乙腈（2.5ml）中并在环境温度下搅拌2.5小时。然后浓缩混合物并用快速色谱提纯，用40%和50%乙酸乙酯（在己烷中）洗脱，得到非晶形固体产物（87.8mg，0.15mmol，41.0%产率）。

实例2

〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-甲基-3-〔〔（1-甲基-1H-四唑-5-基）-硫代〕甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸单钠盐

将〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-甲基-3-〔〔（1-甲基-1H-四唑-5-基）硫代〕甲基〕-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝苯基）甲酯（131.8mg，0.226mmol）溶解在含乙醇（0.25ml）的四氢呋喃（11.1ml）中。加入10%P_d/c催化剂（268.9mg）并在环境温度下氢气中搅拌3小时。通过硅藻土过滤反应混合物并浓缩滤液。将粗残余物（131.8mg）溶解在四氢呋喃（0.7ml）和乙酸乙酯（2ml）中。将碳酸氢钠（38.1mg，0.453mmol）和水（4ml）加到该溶液中。利用高效液相色谱（HPLC）提纯水层用乙腈（在水中）洗脱。冻干后得到白色非晶形固体，重26.9mg（0.0572mmol，产率22.7%）。

实例3

〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-〔乙酰氧基）甲基〕-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝苯基）甲酯

将乙酸钾（337mg，3.434mmol）溶解在乙醇（9.5ml）中并加到〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-（溴甲基）-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝苯基）甲酯（500.4mg，0.912mmol）。在环境温度下搅拌反应混合物。2小时25分钟后，仍存在大量橙黄色固体。用吸移管移出上层清液，用乙酸乙酯（90ml）稀释并用饱和碳酸氢钠（100ml）和盐水（100ml）萃取。用N_a2So₄干燥乙酸乙酯。将固体溶解在含乙酸钾（337mg，3.434mmol）的二氯甲烷（1ml）和乙醇（9.5ml）中。1小时25分钟后，蒸发掉乙醇并将残余物溶解在乙酸乙酯（100ml）中，并用饱和NaHCO₃和盐水（100ml）洗涤。乙酸乙酯在N_a2SO₄中干燥。过滤和浓缩两份乙酸乙酯萃取液。第一份得80mg产物，第二份得360mg产物。合并产物并用快速色谱提纯，得到总重117mg产物（0.222mmol，产率24.3%）。

实例4

〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-〔〔2，5-二氢-6-羟基-2-甲基-5-氧代-1，2，4-三嗪-3-基）硫代〕甲基〕-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基〕氨基-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝苯基）甲酯单钠盐

在室温下，向〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-（溴甲基）-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环-〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝苯基）甲酯（0.255g，0.47mmol）在丙酮（15ml）和水（3ml）中的溶液加入四氢-6-羟基-2-甲基-5-氧代-3-硫代-1，2，4-三嗪（0.106g，0.52mmol）二钠盐，过夜。真空下除去丙酮并冻干水层。用水吸收残余物并将其加到反相C18 Sep-Pak（Waters联合公司）中，并用CH₃CN/H₂O洗脱（0-40%，产品用10%CH₃CN/H₂O洗脱，Rf（SiO₂）＝0.3，60∶3∶1＝乙酸乙酯/乙酸/水）。合并有效馏分，真空下除去乙腈，冻干水相得到浅黄色絮凝状粉末（0.065g，21%）。

实例5

〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-〔〔（2，5-二氢-6-羟基-2-甲基-5-氧代-1，2，4-三嗪-3-基）硫代〕-甲基〕-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸二钠盐

向〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-〔〔2，5-二氢-6-羟基-2-甲基-5-氧代-1，2，4-三嗪-3-基）-硫代〕-甲基〕-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环-〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝苯基）甲酯单钠盐（0.057g，0.088mmol）在乙酸乙酯（2ml）和碳酸氢钠水溶液（0.1M，0.88ml）的溶液中，加入10%Pd/C（0.06g）。抽空多相悬浮液并充5次氢气，在氢气氛下搅拌4小时。通过硅藻土过滤反应混合物并用水洗涤硅藻土。真空下除去有机溶液，并冻干所得水溶液。在反相C18 Sep-Pak（Waters联合公司）上层析分离残余物，用CH₃CN/H₂O（0-40%）洗脱。合并有效馏分，真空下除去乙腈并冻干水溶液。残余物进一步用反相高压液相色谱（Whatman M9-Partisil 10-ODS-2，线性梯度0-100%CH₃CN/H₂O）提纯，得到〔2S-2α，3α，5α，6β）〕-3-〔〔（2，5-二氢-6-羟基-2-甲基-5-氧代-1，2，4-三嗪-3-基）硫代〕-甲基〕-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸二钠盐，为白色絮凝状粉末。

实例6

〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-〔叠氮甲基）-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝苯基）甲酯

在室温下，向〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-（溴甲基）-3-甲基-7-氧代-6〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕-庚烷-2-羧酸（4-硝苯基）甲酯（2.13g，3.89mmol）在丙酮（40ml）和水（18ml）的溶液中加入叠氮化钠（0.78g，11.66mmole）。4小时后，真空下除去丙酮，用乙酸乙酯（100ml）分配所得混合物。乙酸乙酯层用水（2×50ml）然后用盐水（1×25ml）洗涤，干燥（Na₂SO₄），过滤，并在真空下浓缩。经硅胶色谱分离（乙酸乙酯/石油醚2∶3）得到1.03g〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-（叠氮甲基）-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝苯基）甲酯。

实例7

〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-（叠氮甲基）-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸单钠盐

在氩气下，向〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-（叠氮甲基）-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环-〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝苯基）甲酯（0.198g，0.39mmol）在乙酸乙酯（4ml）的溶液中加10%Pd/C（0.175g）。抽空多相悬浮液并充5次氢气并在氢气氛（通过气球输送）下搅拌5小时。通过硅藻土过滤反应混合物并用四氢呋喃洗涤硅藻土。向滤液中加入碳酸氢钠（0.049g，0.58mmol）和水（2ml）并在真空下除去有机溶剂。冻干所得水溶液并用反相液相色谱提纯（Whatman M9-Partisil 10-ODS-2，线性梯度CH₃CN/H₂O），得到〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-（叠氮甲基）-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸单钠盐，为白色絮状粉末。

实例8

〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-〔（乙酰硫基）甲基〕-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝苯基）甲酯

向由〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-（溴甲基）-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-1-氮杂-4-硫杂-二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝苯基）甲酯（0.79g，1.44mmol），丙酮（12ml）和水（2ml）组成的溶液中加入硫代乙酸钾（0.33g，2.9mmol）。在室温下搅拌2小时后，真空下除去丙酮而残余溶液在乙酸乙酯和水之间分配。用乙酸乙酯洗涤水层，合并乙酸乙酯层，在硫酸钠中干燥，过滤并在真空下浓缩。残余物经硅胶色谱提纯（乙酸乙酯/石油醚（30-40%））得到〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-〔（乙酰硫基）甲基〕-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝苯基）甲酯，产率35%。

实例9

〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-〔（乙酰硫基）甲基〕-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸单钠盐

向〔2S（2α，3α，5α，6β）〕-3-〔（乙酰硫基）甲基〕-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝苯基）甲酯（0.164g，0.3mmol）在乙酸乙酯（1ml）中的溶液中加入10%Pd/C（0.154g）。抽空溶液并充5次氢气并在氢气氛（通过气球输送）下搅拌4小时。通过硅藻土过滤反应混合物并用THF洗涤硅藻土。真空下浓缩溶液并向残余物中加入碳酸氢钠（0.025g，0.3mmol），四氢呋喃（0.5ml）和水（1ml）。真空下除去四氢呋喃，剩余水层冻干。在反相C18Sep-Pak（Waters联合公司）上做色谱分离（CH₃CN/H₂O，0-20%）得到53mg（41%）〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-〔乙酰硫基）甲基〕-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸单钠盐，为白色絮状粉末。

实例10

〔2S（2α，3α，5α，6β）〕-3-〔〔（2，5-二氢-3-巯基-2-甲基-5-氧代-1，2，4-三嗪-6-基）氧基〕-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸单钠盐

将〔2S（2α，3α，5α，6β）〕-3-（溴甲基）-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-1-氮杂-4-硫杂-二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝苯基）甲酯溶解在DMF（6.55ml）中，加入四氢-2-甲基-3-硫代-1，2，4-三嗪-5，6-二酮（378.5mg，1.191mmol）并在室温下搅拌16小时50分钟。用水（3×55ml）和盐水（55ml）洗涤乙酸乙酯层，然后在Na₂SO₄中干燥，过滤并浓缩残余物利用快速色谱提纯（7%THF在二氯甲烷中）得到所需产物（301.8mg，0.482mmol，产率25.1）和另外纯度较低产物（148.1mg，0.236mmol，产率12.3%）。

将该对硝基苄基酯产物（289mg，0.461mmol）溶解在乙酸乙酯（9.58ml）中并加入0.1NNaHCO₃（4.61mmol），接着加10%Pd/C催化剂（292.4mg）。在氢气、环境温度下搅拌混合物。2小时45分钟后，通过硅藻土过滤反应混合物并用水和乙酸乙酯洗涤硅藻土。分离后，使水层通过0.5mm微孔注射管过滤器并冻干成粗产物（106.4mg）。使用乙腈/H₂O经HPLC提纯该产物，得到相对纯产物（53.9mg）和较不纯部分（13.2mg）。在HPLC柱上进一步提纯得到更好产品（15.7mg）。

实例11

〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-〔〔（2-呋喃羰基）硫代〕甲基〕-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝苯基）甲酯

由82mg（0.641mmol）2-硫代糠酸，30ml丙酮，54mg（0.643mmol）碳酸氢钠，351mg（0.641mmol）〔2S-2α，3α，5α，6β）〕-3-（溴甲基）〕-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕-庚烷-2-羧酸（4-硝苯基）甲酯和水（10ml）组成的混合物在室温下搅拌1小时。减压下浓缩反应混合物直至形成两相，残余物在乙酸乙酯和盐水中分配。分离有机相并用盐水萃取两次并在无水硫酸钠中干燥。滤除干燥剂并在减压下蒸除溶剂后，残余物进行硅胶色谱分离（用1∶1己烷∶乙酸乙酯洗脱）得到248mg产物。

实例12

〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-〔〔（2-呋喃羰基）硫代〕甲基〕-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕-庚烷-2-羧酸单钠盐

由250mg10%Pd/C，40ml去离子水，40mg（0.476mmol）碳酸氢钠，248mg（0.417mmol）〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-〔〔（2-呋喃羰基）硫代〕甲基〕-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝苯基）甲酯和40ml乙酸乙酯组成的混合物在氢气氛（初始压力55.5Psi）、环境温度下，在帕尔仪器上振摇2小时。通过多孔玻璃过滤器上的硅藻土滤板过滤除去催化剂并用冷水洗涤滤并。将固体氯化钠加到合并在一起的滤液和洗液中并洗涤。分离水相并用乙酸乙酯（2X）萃取并冻干。将残余物溶解在45ml去离子水中并加到3个串联的C18Sep-Paks中。接着用水和乙腈溶剂梯度（100%水至33%乙腈）洗脱并冻干，得到36mg产物。

实例13

〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-（氟甲基）-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基）甲酯

室温下将46mg（0.362mmol）氟化银于3ml去离子水溶液滴加到200mg（0.365mmol）〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-（溴甲基）-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基）甲酯于30ml丙酮的搅拌溶液中（烧瓶用铝箔罩住避光）。室温下搅拌反应5.5小时，过滤，滤液在减压下浓缩至形成两相，并在乙酸乙酯和盐水间分配。将有机相分离，用盐水洗涤三次，用无水硫酸钠干燥。滤除干燥剂并于减压下蒸除溶剂后，残余物用硅胶色谱提纯。用1∶1己烷/乙酸乙酯洗脱，得到47mg产物。

实例14

〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-（氟甲基）-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸钠盐

120mg钯碳（10%）、40ml去离子水、25mg（0.298mmol）碳酸氢钠、120mg（0.246mmol）〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-（氟甲基）-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环-〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基）甲酯和40ml乙酸乙酯组成的混合物在环境温度下于氢气氛中（初始氢压55.5Psi，383KPa）在帕尔（Parr）装置上振摇2小时。经多孔圆盘玻璃漏斗上的硅藻土过滤除去催化剂，滤饼用冷水冲洗。向合并的滤液和洗液中加入固体氯化钠（2.0g），分离水相，用乙酸乙酯提取两次，然后冻干。残余物溶于45ml去离子水，置于三个串连在一起的C18SeP-Paks上，经水和乙腈（100%水至33%乙腈）溶剂梯度洗脱和冻干后，得到36mg产物。

实例15

〔2S-（2α，3α，5α，6β）-3-〔〔〔3，4-双（乙酰氧基）苯甲酰基〕硫代〕-甲基〕-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环-〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸钠盐

将3，4-双（乙酰氧基）硫代羧酸（113.6mg，0.447mmol）溶于0.1N KHCO₃（4.24ml，0.424mmol）和10.6ml丙酮。加入〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-（溴甲基-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基）甲酯（231mg，0.421mmol），环境温度下于氮气中搅拌反应，50分钟后加入乙酸乙酯（100ml）和碳酸氢钠（100ml）。分出乙酸乙酯层后，用盐水（100ml）洗涤，然后用硫酸钠干燥，过滤并浓缩为粗残余物（248mg）。将该产物（156mg，纯态时为0.216mmol）溶于含有乙醇（0.5ml）的四氢呋喃（10ml）中。加入催化剂（200mg，10%Pd/C），环境温度下于氢气中搅拌反应混合物。2小时25分钟后，反应混合物用硅藻土过滤，浓缩为残余物，然后立即再溶于四氢呋喃（2-3ml），加入足量的水（2ml）使溶液变清。此后，加入0.1N NaHCO₃（1.5ml，0.15mmol），并伴随加入足量四氢呋喃使溶液变清（注：加入1-2ml乙腈）。除去四氢呋喃和乙腈后得到黄色浆体，用水（3ml）稀释该浆体，经硅藻土过滤（缓慢进行）。滤液经HPLC用乙腈/水提纯。产物重22.8mg（0.0375mmol，产率17.34%）。

实例16

〔2S-2α，3α，5α，6β）〕-3-〔〔3，4-二羟基苯甲酰基）氧基〕-甲基〕-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环-〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸单钠盐

200mg（0.365mmol）〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-（溴甲基）-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基）甲酯、60mg（0.39mmol）3，4-二羟基苯甲酸、42mg（0.39mmol）碳酸氢钠、40ml丙酮和10ml去离子水组成的混合物在室温下搅拌24小时，减压下浓缩至形成两相。混合物在乙酸乙酯和盐水间分配。分离有机相，用盐水洗涤三次，用无水硫酸钠干燥。滤除干燥剂和减压蒸发出溶剂后，将残余物加到180mg钯碳（10%）、40ml去离子水、30mg（0.357mmol）碳酸氢钠和40ml乙酸乙酯组成的混合物中。混合物在室温下氢化（57.5Psi，396Kpa）2小时。经多孔玻璃盘漏斗上的硅藻土滤除催化剂，用水洗涤过滤器硅藻土。向合并的滤液和洗液中加入固体氯化钠，分离水相，用乙酸乙酯提纯两次，并冷冻干燥过夜。将残余物溶于21ml去离子水，置于3个串连的C18Sep Paks上，用水和乙腈溶剂梯度（100水至33%乙腈）洗脱和冻干后，得到21mg产物。

实例17

〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-〔〔3-（1H-咪唑-4-基）-1-氧代-丙氧基）〕甲基〕-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸钠盐

200mg（0.365mmol）〔2S-2α，3α，5α，6β）〕-3-（溴甲基）-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基甲酯、70mg（0.5mmol）3-（4-咪唑基）丙酸、42mg（0.5mmol）碳酸氢钠、20ml丙酮和7ml水组成的混合物在室温下搅拌20小时，减压下浓缩至形成两相，并在乙酸乙酯和盐水间分配。分离有机相用盐水提取三次，用无水硫酸钠干燥。过滤除去燥剂和减压下蒸除溶剂后，将残余物加到210mg钯碳（10%）、50ml去离子水、30mg（0.45mmol）碳酸氢钠和50ml乙酸乙酯组成的混合物中。混合物在帕尔（Parr）装置上常温下氢化（55.0Psi，379Kpa）1.5小时。经多孔玻璃盘漏斗上硅藻土滤出催化剂，硅藻土用冷水冲洗，向合并的滤液和洗液中加入固体氯化钠，水相用乙酸乙酯提取两次，冷冻干燥过夜。残余物溶于23ml去离子水，置于串连的三个Sep Paks上。用水和乙腈（10%水至50%乙腈）溶剂梯度洗脱和冻干后，得到17mg产物。

实例18

〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-1-〔〔2-羧基-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-氮杂二环〔3.2.0〕庚-3-基〕-甲基吡啶鎓氢气化物内盐

向内含氩气的配衡瓶中加入AgBF₄（0.0453g，0，243mmol）。向另一含氩气的圆底烧瓶中加入〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-（溴甲基）-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基）甲酯（0.16g，0.21mmol）、干CH₂Cl₂（3ml），和无水吡啶（50mg，0.64mmol），并放入磁性搅拌棒。溶液在室温下快速搅拌，通过玻璃纸漏斗快速加入AgBF₄，反应混合物变成暗白色，烧瓶用铝箔包裹。3.5小时后，经硅藻土过滤反应混合物，硅藻土用CH₂Cl₂浸洗，真空浓缩得到白色固体。该固体用H₂O浸洗，然后用5%、10%、20%CH₃CN/H₂O溶液（白色悬浮液）冲洗，将每一份冲洗液（约10ml）置于C18SeP PaK，用CH₃CN/H₂O洗脱。用10-40%CH₃CN/H₂O由柱上洗脱出所需化合物。将适当的馏分合并，真空除去有机溶剂，冻干水层得到白色荧光固体〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-1-〔〔3-甲基-2-〔〔（4-硝基苯基）-甲氧基〕羰基〕-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环-〔3.2.0〕庚-3-基〕甲基〕吡啶鎓四氟硼酸盐，（Rfsio₂）＝0.5〔（EtOAc/AcOH/H₂O）6∶2∶1）〕。当将上述所得物质于水中储存24-48时，在TLC（SiO₂）上较低处Rf（＝0.2）有色班生成。所需产物在EtOAc、CH₂Cl₂、CDCl₃、CH₃COCH₃中是可溶的（＞1mg/ml），在水中微溶。

向四氢呋喃（10ml）和水（100ml）中的〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-1-〔〔3-甲基-2-〔〔（4-硝基苯基）甲氧基〕-羰基〕-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）-氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环-〔3.2.0〕庚-1-基〕甲基〕吡啶鎓四氟硼酸盐（0.200g，0.32mmol）加入0.2g 10%Pd/C和NaHCO₃（0.1mM，3.2ml），同时放入磁性搅拌棒。将含有快速搅拌悬浮液的烧瓶抽真空，然后充氢气三次。2小时后，将烧瓶抽空并充氩气，悬浮液经硅藻土过滤。真空除去滤液中的四氢呋喃，剩余水层通过三个串连的C18Sep Paks，乙腈/水溶液（0%、2%、5%、10%、20%、100%，每次20ml）流经C18柱。收集适当的馏分（5-10%CH₃CN/H₂O），真空除去CH₃CN，冷冻干燥水相得到25mg白色粉末状所需产物。

实例19

〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-〔〔〔3，4-双（乙酰氧基）苯甲酰基〕氧基〕-甲基〕-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环-〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基）-甲酯

在0℃下，将250mg（0.73mmol）二乙酰氧苯甲酸银于20ml无水乙腈中的悬浮液在二十分钟内滴加到0.4g（0.73mmol）〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-（溴甲基）-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基）甲酯于20ml无水丙酮的搅拌溶液中，烧瓶用铝箔包裹，置于冰水浴中。反应混合物在0℃左右搅拌5小时，用硅胶短柱（用丙酮润湿）过滤，用100ml丙酮洗涤柱，减压下从合并的滤液中蒸除溶剂，洗涤，残余物经硅胶色谱提纯（230-400目，用1∶1己烷/乙酸乙酯洗脱），得到242mg产物。

实例20

〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-〔〔〔3，4-双（乙酰氧基）苯甲酰基〕氧基〕-甲基〕-3-甲基〕-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸单钠盐

100mg钯碳（10%）、50ml去离子水、12mg（0.143mmol）碳酸氢钠、100mg（0.142mmol）〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-〔〔〔3，4-双（乙酰氧基）苯甲酰基〕氧基〕甲基〕-3-甲基〕-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基）甲酯和50ml乙酸乙酯在室温下于氢气中（初始压力55Psi，379KPa）在帕尔装置上振摇3小时。经多孔玻璃盘漏斗上的硅藻土滤除催化剂，用少量冷水洗涤滤饼。合并的滤液和洗液置于分离漏斗，脱除水相并冻干。残余物用C18 Sep-PaKs提纯（100%H₂O至40%乙腈/水），得到38mg产物。

实例21

〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）-氨基〕-3-〔（氰硫基）甲基-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕-庚烷-2-羧酸单钠盐

向含有〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-（溴甲基）氨基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基）甲酯（0.541g，1.06mmol）、丙酮（10ml）和水（10ml）的溶液中加入KSCN（0.113g，1.17mmol）。室温下搅拌7小时后，真空下除去丙酮，所得悬浮液中再加入EtOAc（50ml）。EtOAc层用水（30ml）、盐水（30ml）洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤后真空浓缩。将残余物溶于最小量的CH₂Cl₂中，置于快速分离柱（40g SiO₂，40%EtOAc/石油醚，20ml部分），洗脱得到0.28g〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-3-〔（氰硫基）甲基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基）甲酯，为米色非晶型固体。

向含有〔2S-（2α，3α，5α，6β）-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-3-〔（氰硫基）甲基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基）-甲酯（0.167g，0.32mmol）、EtOAc（2ml）水（3ml）和NaHCO₃（0.04g）的溶液中加入0.17g 10%pd/C和磁性搅拌棒。将含有快速搅拌悬浮液的烧瓶抽真空然后三次充氢气。室温下于氢气氛（用气球提供）中搅拌反应混合物3.5小时后，将烧瓶抽空并充氩气，用硅藻土过滤。滤液中的EtOAc经真空脱除，剩余含水悬浮液冻干。将得到的固体施于由串连在一起的三个Sep Paks组成的C18柱。柱用0-100%CH₃CN/H₂O梯度洗脱，收集适当馏分，真空浓缩除掉CH₃CN，冻干后得到白色荧光粉末状所需产物（Rf＝0.3（SiO₂，60∶3∶1EtOAc/AcOH/H₂O）。

HPLC二次提纯，使用C18-Mg Whatman柱，CH₃CN/H₂O洗脱，得到用于试验的纯产物。

实例22

〔2S-（2α，3α（E），5α，6β）〕-3-〔〔〔3-（1H-咪唑-4-基）-1-氧代-2-丙烯基〕氧基〕-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸单钠盐

含有200mg（0.365mmol）〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-（溴甲基）-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基）甲酯、76mg（0.475mmol）尿刊酸钠、20ml丙酮和7ml水的溶液于室温下搅拌24小时，减压下浓缩反应混合物至形成两相，其在乙酸乙酯和盐水间分配。有机相用盐水洗涤两次，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压下蒸除溶剂。残余物和200mg10%Pd/C、40ml去离子水、40ml乙酸乙酯及24mg（0.286mmol）碳酸氢钠于室温下氢气氛（42Psi，290KPa）中在帕尔装置上振摇2小时。用多孔圆盘玻璃漏斗上硅藻土滤除催化剂，滤饼用冷水冲洗。将固体氯化钠加到合并的滤液和洗液中。分离水相，用乙酸乙酯提取两次，冻干。将残余物溶于19ml去离子水，置于三个串连的C18 Sep Paks，用水和乙腈溶剂梯度洗脱（100%水至50%乙腈）和冻干后，得到55mg产物。

实例23

〔2S-〔2α，3α，5α，6β（Z）〕〕-6-〔〔2-（2-氨基-4-噻唑基）-2-（甲氧亚氨基）-乙酰基〕氨基〕-3-甲基-3-〔〔（1-甲基-1H-四唑-5-基）硫代〕甲基〕-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕-庚烷-2-羧酸单钠盐

向溶于CHCl₃（9ml）的〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-甲基-3-〔〔（1-甲基-1H-四唑-5-基）硫代〕甲基〕-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕-庚烷-2-羧酸（4-硝苯基）甲基（0.741g，1.27mmol）和吡啶（0.126g，1.59mmol）溶液（在冷浴（-15～-10℃）中冷却）中一次加入固体PCl₅（0.291g，1.40mmol）。在-15～-10℃搅拌1小时后，加入正丙醇（0.76g，12.7mmol），40分钟后加入盐水（5ml）。所得混合物在大约0℃搅拌15分钟，然后转入分离漏斗。加入EtOAc（50ml），用NaHCO₃（饱和），水和盐水洗涤混合物，用NaHCO₃干燥，过滤，真空浓缩。将残余物溶于CH₂Cl₂（10ml），向所得溶液中加入S-〔2-苯并噻唑基〕-2-氨基-4-噻唑并二羟乙酸盐（E）-0-甲基肟。TLC（SiO₂，EtOAc）测定反应完成约3-4小时后，真空浓缩反应混合物，快速色谱提纯（SiO₂，EtOAc），得到〔2S-〔2α，3α，5α，6β（Z）〕〕-6-〔〔2-（2-氨基-4-噻唑基）-2-（甲氧亚氨基）乙酰基〕氨基〕-3-甲基-3-〔〔（1-甲基-1H-四唑-5-基）硫代〕甲基〕-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕-庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基）甲酯，为白色非晶型固体。

向含有〔2S-〔2α，3α，5α，6β（Z）〕〕-6-〔〔2-（2-氨基-4-噻唑基）-2-（甲氧亚氨基）乙酰基〕氨基〕-3-甲基-3-〔〔（1-甲基-1H-四唑-5-基）硫代〕甲基〕-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基）甲酯（0.058g，0.09mmol）EtOAc（2ml）和NaHCO₃水溶液（0.1M，0.89ml）的溶液中加入0.06g10%Pd/C和磁性搅拌棒。将含有快速搅拌溶液的烧瓶抽空，三次通入氢气，内容物在室温下于氢气氛（由气球提供）中搅拌。2.5小时后，经硅藻土过滤反应混合物，真空除去EtOAc，冷冻干燥除去水。得到的固体溶于水，经三个串连的Sep Paks C18色谱提纯和CH₃CN/H₂O梯度洗脱。合并适当的馏分后，真空除去CH₂CN，冻干所得溶液得到〔2S-〔2α，3α，5α，6β（Z）〕〕-6-〔〔2-（2-氨基-4-噻唑基）-2-（甲氧亚氨基）乙酰基〕氨基〕-3-甲基-3-〔〔（1-甲基-1H-四唑-5-基）硫代〕甲基〕-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕-庚烷-2-羧酸单钠盐，为白色荧光粉末。

实例24

〔2S-〔2α，3α，5α，6β（Z）〕〕-6-〔〔2-（2-氨基-4-噻唑基）-2-甲基氧亚氨基）乙酰基〕氨基〕-3-（叠氮甲基）-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸单钠盐

将五氯化磷（320.4mg，1.539mmol）溶于二氯甲烷（5.8ml），加入吡啶（141.8ml，1.753mmol），于氩气中搅拌。将该溶液冷却至-10～-15℃（冷却开始即形成白色沉淀）。5-10分钟后，与二氯甲烷（4.3ml）一起加入〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-（叠氮甲基）-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基）甲酯（716mg，1.402mmol）。1.5小时后，加入异丁醇（1.29ml，14.02mmol），45分钟后，加入盐水（15ml），然后搅拌混合物10分钟。将饱和碳酸氢钠（15ml）加到混合物中，分离后，有机层用另一份饱和碳酸氢钠（15ml）洗涤，然后用盐水（15ml）洗涤。有机层用硫酸钠干燥后，将溶液转到含有S-〔2-苯并噻唑基〕-2-氨基-4-噻唑并二羟乙酸盐（E）-0-甲基肟（444.5mg，1.396mmol），在环境温度下于氩气中搅拌1.5小时。然后经硅藻土过滤，用乙酸乙酯和石油醚（3/1）和乙酸乙酯、甲醇、和二氯甲烷（9/0.25/6，V/V/V）进行快速色谱提纯。对硝基苯基酯产物重200mg（0.348mmol，产率24.9%）。

将上述产物（164mg，0.285mmol）溶于四氢呋喃（10.8ml），加入10%Pd/C（165mg）。混合物在环境温度下于氢气中搅拌2小时。然后用硅藻土过滤，伴有四氢呋喃洗涤。将碳酸氢钠（26.6mg，0.317mmol）溶于水后加到四氢呋喃溶液中。加入足量的水和四氢呋喃以使溶液保持清彻。真空除去四氢呋喃后得到黄色浆体，过滤（有些泡沫），使滤液通过微孔注射过滤器（0.45mm），冷冻干燥（26.4mg）。然后用乙腈和水经HPLC提纯，得到17.6mg产物（0.0381mmol，产率13.3%）。

实例25

〔2S-〔2α，3α，5α，6β（Z）〕〕-3-〔〔〔3 4-双（乙酰氧基）苯甲酰基〕-氧基〕甲基〕-6-〔〔2-（2-氨基-4-噻唑基）-2-（甲氧亚氨基）-乙酰基〕氨基-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基）甲酯

在干燥氩气氛中，将4ml无水二氯甲烷中含有61.2mg（0.294mmol）五氯化磷的搅拌混合物用冰-盐浴冷却至-12℃，加入0.06ml（0.75mmol）无水吡啶。加入187mg（0.265mmol）〔2S-〔2α，3α，5α，6β〕〕-3-〔〔〔3，4-双（乙酰氧基）-苯甲酰基〕氧基〕甲基〕-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基）甲酯和2ml无水二氯甲烷后，用冰-盐浴使反应混合物的温度于-12℃左右保持3.5小时。滴加无水异丁醇（0.15ml，1.63mmol），搅拌1小时15分钟，温度保持在-11℃左右（冰-盐浴）。滴加0.5ml饱和盐水后，搅拌反应混合物，温度于-10℃左右保持0.5小时，然后用6ml二氯甲烷，3ml饱和盐水和0.6ml饱和碳酸氢钠稀释反应混合物，分离有机相，用饱和盐水提取洗涤三次，用无水硫酸钠干燥。过滤除去干燥剂后，将〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-〔〔〔3，4-双-（乙酰氧基）-苯甲酰基〕氧基〕甲基〕-7-氧代-6-氨基-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕-庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基）甲酯的二氯甲烷溶液于环境温度下滴加到70mg（0.2mmol）S-〔2-苯并噻唑基〕-2-氨基-4-噻唑并二羟乙酸盐（E）-0-甲基肟于30ml无水二氯甲烷的搅拌溶液中。反应混合物在室温下搅拌5.5小时，用饱和碳酸氢钠提取洗涤，接着用饱和盐水洗涤三次，用无水硫酸钠干燥。过滤除去干燥剂和减压蒸出溶剂后，残余物用硅胶柱色谱提纯，1∶4己烷/乙酸乙酯洗脱，得到47mg产物。

实例26

〔2S-〔2α，3α，5α，6β（Z）〕〕-3-〔〔〔3，4-双（乙酰氧基）苯甲酰基〕-氧基〕甲基〕-6-〔〔2-（2-氨基-4-噻唑基）-2-（甲氧亚氨基）-乙酰基〕-氨基-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环-〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸单钠盐

70mg10%Pd/C、20ml去离子水、10mg（0.12mmol）碳酸氢钠、70mg（0.091mmol）〔2S-〔2α，3α，5α，6β（Z）〕〕-3-〔〔〔3，4-双（乙酰氧基）苯甲酰基〕氧基〕甲基〕-6-〔〔2-（2-氨基-4-噻唑基）-2-（甲氧亚氨基）乙酰基〕氨基〕-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.20〕庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基）甲酯和30ml乙酸乙酯组成的混合物在室温下氢气氛中（初始压力56Psi，386KPa）在帕尔装置上振摇2.5小时。用玻璃漏斗上硅藻土滤板过滤除去催化剂，滤饼用冷水冲洗。将固体氯化钠加到合并的滤液和洗液中，分离有机相，水相用乙酸乙酯提取三次，冷冻干燥过夜。残余物溶于水（15ml），置于两个串连的C18Sep Paks上。用水和乙腈梯度洗脱（100%水至33%乙腈/水）后，冷冻干燥得到14mg产物。

实例27

〔2S-〔2α，3α，5α，6β（Z）〕〕-6-〔〔2-氨基-4-噻唑基）-2-（甲基亚氨基）乙酰基〕氨基〕-3-〔〔（2，5-二氢-6-羟基-2-甲基-5-氧代-1，2，4-三嗪-3-基）硫代〕-甲基〕-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环-〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基）甲酯单钠盐

将五氯化磷（205.6mg，0.987mmol）溶于氯仿（3.93ml，经铝干燥）。加入吡啶（90.7ml，1.121mmol）（立即形成沉淀），悬浮液在干氮气下于-10～-15℃冷却。5-10分钟后，加入〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-（溴甲基）-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基）甲酯（492.4mg，0.898mmol）。45分钟后，加入正丙醇（0.67ml，8.963mmol）。1小时后，加入盐水（10ml）并搅拌5分钟，然后加入饱和碳酸氢钠（10ml）和氯仿（2ml），再搅拌5分钟。氯仿层用盐水（10ml）洗涤，用Na₂SO₄干燥，用硅藻土过滤。随几毫升氯仿一起将S-〔2-苯并噻唑基〕-2-氨基-4-噻唑并二羟乙酸盐（E）-O-甲基肟（285.8mg，0.898mmol）加到滤液中。然后在环境温度下于氮气中搅拌滤液。2小时后，除去溶剂，残余物（686.4mg）溶于二氯甲烷，用快速色谱提纯，使用1/1和2/1乙酸乙酯/石油醚。所得产物重121mg。

将上述产物（119mg，0.194mmol）溶于丙酮（2ml）和水（1.25ml）。加入四氢-2-甲基-3-硫代-1，2，4三嗪-5，6-二酮的二钠盐（39.4mg，0.194mmol）并加入丙酮（4.27ml），在氮气下搅拌15小时。然后脱掉丙酮（产生泡沫）。将残余物再溶于乙酸乙酯和水经硅藻土过滤。一部分水层在C18Sep Pak上提纯，得到2.8mg产物。

实例28

〔2S-〔2α，3α，5α，6β（Z）〕〕-6-〔〔2-（2-氨基-4-噻唑基）-2-（甲氧亚氨基）乙酰基〕氨基〕-3-〔〔2，5-二氢-6-羟基-2-甲基-5-氧代-1，2，4-三嗪-3-基）硫代〕-甲基〕-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸二钠盐

将〔2S-〔2α，3α，5α，6β（Z）〕〕-6-〔〔2-（2-氨基-4-噻唑基-（甲氧亚氨基）-乙酰基〕氨基〕-3-〔〔（2，5-二氢-6-羟基-2-甲基-5-氧代-1.2.4-三嗪-3-基）硫代〕甲基〕-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基）甲酯单钠盐（20.4mg，0.0286mmol）溶于乙酸乙酯（0.6ml），加入0.1N NaHCO₃（0.28ml，0.028mmol），接着加催化剂10%pd/C（21.2mg）。在环境温度下于氢气中搅拌混合物。2小时45分钟后，加乙酸乙酯（1ml）和0.1N NaHCO₃（1ml），经硅藻土滤板过滤反应混合物，分离各层。水层通过两个C₁₈SeP PaK，冻干后得到13.4mg产物。该产物用HpLC（使用乙腈/水）进一步提纯。

实例29

〔2S-〔2α，3α，5α，6β（R^＊）〕〕-6-〔〔2-〔〔（4-乙基-2，3-二氧代-1-哌嗪基）羰基〕氨基〕-2-苯乙酰基〕氨基〕-3-甲基-3-〔〔（1-甲基-1H-四唑-5-基）硫代〕甲基〕-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝苯基）甲酯

将（R）-a-〔〔（4-乙基-2，3-二氧代哌嗪基）羰基〕氨基〕-苯乙酸（157.9mg，0.495mmol）和2-巯基苯并噻唑（84.1mg，0.504mmol）溶于氯仿（3.15ml）。将1，3-二环己基碳酰亚胺（101.6mg，0.493mmol）溶于氯仿（1.88ml），并将其加到第一份溶液中，环境温度下搅拌1小时45分钟。同时按下述步骤制备〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-甲基-3-〔〔（1-甲基-1H-四唑-5-基）硫代〕甲基〕-7-氧代-6-氨基-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基）甲酯的游离胺：将五氯化磷（90mg，0.432mmol）溶于2ml氯仿（氧化铝干燥），加入吡啶（39.7ml，0.491mmol）（立即形成沉淀）。混合物冷却至-15～-20℃，保持5-10分钟，然后加入〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-甲基-3-〔〔（1-甲基-1H-四唑-3-基）硫代〕甲基〕-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基）甲酯，1小时15分钟后加入正丙醇（305ml，4.080mmol），1小时40分钟后，搅拌下10分钟内加入盐水（3ml），然后分离各层，加入饱和碳酸氢钠（4ml）和氯仿（2ml），水相用氯仿（2ml）提取。将所有氯仿层合并，Na₂SO₄干燥、过滤，将滤液加至上一部分所制备的溶液中。

2小时后，用饱和碳酸氢钠提取反应混合物，有机相用Na₂SO₄干燥，然后过滤，用快速色谱提纯，用9/0.25/6乙酸乙酯/甲醇/二氯甲烷作洗脱剂。部分纯化的产物（103mg）用HpLC进一步提纯（乙酸乙酯/二氯甲烷），得到61.6mg产物（0.0803mmol，20.3%产率）。

实例30

〔2S-〔2α，3α，5α，6β（R^＊）〕〕-6-〔〔2-〔〔（4-乙基-2，2，-二氧代-1-哌嗪基）羰基〕氨基〕-2-苯乙酰基〕氨基〕-3-甲基-3-〔〔（1-甲基-1H-四唑-5-基）硫代〕甲基〕-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸单钠盐倍半水合物

将〔2S-〔2α，3α，5α，6β（R^＊）〕〕-6-〔〔2-〔〔（4-乙基-2，3-二氧代-1-哌嗪基）羰基〕氨基〕-2-苯乙酰基〕氨基〕-3-甲基-3-〔〔（1-甲基-1H-四唑-5-基）硫代〕甲基〕-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基甲酯（38.5mg，0.0502mmol）溶于乙酸乙酯（1.74ml），加入10%pd/C（39.2mg）。然后加水（2.6ml），接着加0.1N NaHCO₃（0.6ml，0.06mmol）。反应混合物在环境温度下于氢气中搅拌。1小时55分钟后，混合物经硅藻土滤板过滤，滤板用乙酸乙酯和水冲洗。然后用0.22mm微孔注射过滤器过滤，使其分离1小时。水层用HpLC（乙腈/水）提纯，脱除乙腈冻干水层回收15.0mg（0.0299mmol）产物。

实例31

〔2S-〔2α，3α，5α，6β（R^＊）〕〕-3-〔〔〔3，4-双（乙酰氧基）苯甲酰基〕-氧基〕甲基〕-6-〔〔（4-乙基-2，3-二氧代-1-哌嗪基）羰基〕氨基〕-2-苯乙酰基〕氨基〕-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基）-甲酯

用冰-盐浴将91mg（0.437mmol）五氯化磷与5ml无水二氯甲烷的搅拌混合物冷却至-13℃，加入0.07ml（0.87mmol）无水吡啶。加入280mg（0.4mmol）〔2S-〔2α，3α，5α，6β〕〕-3-〔〔〔3.4-双（乙酰氧基）-苯甲酰基〕氧基〕甲基〕-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基）甲酯后，在-15℃左右搅拌反应混合物3小时，滴加0.2ml（2.18mmol）无水异丁醇。在约-12℃再搅拌反应混合物1小时，加入0.6ml饱和盐水。加完后持续搅拌15分钟，搅拌混合物，用20ml二氯甲烷稀释。分离有机相，用饱和碳酸氢钠提取，然后用盐水提取三次。用无水硫酸钠干燥后，滤除干燥剂，将滤液加到先前制备的四氢呋喃搅拌溶液中〔109.5mg（0.251mmol）（R）-N〔2-（1H-苯并三唑-1-基-氧基）-2-氧代-1-苯乙基〕-4-乙基-2.3-二氧代-1-哌嗪羧基酰胺，一种由80mg（0.251mmol）（R）-α-〔〔（4-乙基-2.3-二氧代哌嗪基）羰基〕氨基〕-苯乙酸、34mg（0.25mmol）1-羟基苯并三唑、52mg（0.25mmol）N，N-二环己基碳化二亚胺和10ml无水四氢呋喃组成的混合物在室温下搅拌2小时〕。反应混合物在室温下搅拌过夜，减压下浓缩至干。残余物与乙酸乙酯研磨4次，过滤，滤液用稀碳酸氢钠提取一次，用盐水提取三次，然后用无水硫酸钠干燥。滤除干燥剂和蒸出溶剂后，残余物用硅胶色谱层析（乙酸乙酯洗脱），得到41mg产物。

实例32

〔2S-〔2α，3α，5α，6β（R^＊）〕〕-3-〔〔〔3，4-双（乙酰氧基）苯甲酰基〕氧基〕甲基〕-6-〔〔2-〔〔（4-乙基-2，3-二氧代-1-哌嗪基）羰基〕氨基〕-2-苯乙酰基〕氨基〕-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸单钠盐

60mg10%pd/C、30ml去离子水和14mg（17mmol）碳酸氢钠、56mg（0.063mmol）〔2S-〔2α，3α，5α，6β（R^＊）〕〕-3-〔〔〔3，4-双（乙酰氧基）苯甲酰基〕氧基〕甲基〕-6-〔〔2-〔〔（4-乙基-2.3-二氧代-1-哌嗪基）羰基〕氨基〕-2-苯乙酰基〕氨基〕-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基）甲酯和30ml乙酸乙酯组成的混合物在室温下于氢气氛中（初始压力53.5psi，369KPa）在帕尔装置上振摇2小时。经多孔盘玻璃漏斗上硅藻土滤板滤除催化剂，滤饼用冷水冲洗。将固体氯化钠加到合并的滤液和洗液中。水相用乙酸乙酯提取三次，冻干过夜。残余物溶于35ml去离子水，置于两个串连的C₁₈SeP pak。用水和乙腈梯度洗脱（100%水至50%乙腈/水）后，得到16mg产物。

实例33

〔2S-〔2α，3α，5α，6β（R^＊）〕〕-6-〔〔2-〔〔（4-乙基-2.3-二氧代-1-哌嗪基）-羰基〕氨基〕-2-苯乙酰基〕氨基〕-3-〔〔（3.4-二羟基苯甲酰基）氧基〕甲基〕-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸单钠盐

将250mg（0.34mmol）〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-（溴甲基）-3-甲基-6-〔〔2-〔〔（4-乙基-2.3-二氧代-1-哌嗪基）-羰基〕氨基〕-2-苯乙酰基-氨基〕-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环-〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基）甲酯、60mg（0.39mmol）3，4-二羟基苯甲酸、42mg（0.5mmol）碳酸氢钠、40ml丙酮和10ml去离子水的溶液在室温下储存19小时。反应混合物在减压下浓缩至两相形成，由乙酸乙酯和盐水分配。分离有机相，用盐水提取洗涤三次，用无水硫酸钠干燥。滤除干燥剂和减压蒸除溶剂后，将残余物加到200mg10%pd/C、40ml去离子水、25mg（0.298mmol）碳酸氢钠和40ml乙酸乙酯的悬浮液中。在帕尔装置上将混合物氢化（55.0psi，379KPa）2小时。经多孔盘玻璃漏斗上的硅藻土滤板滤除催化剂，滤板用冷水冲洗，将固体氯化钠（2.0g）加到合并的滤液和洗液中。分离水相，用乙酸乙酯提取两次，冻干过夜。残余物溶于18ml去离子水，置于三个串连的C₁₈Sep pak上。用水和乙酸乙酯梯度洗脱（100%水至50%乙腈/水）后，得到21.3mg产物。

实例34

〔2S〔2α，3α，5α，6β（R^＊）〕〕-6-〔〔2-〔〔（4-乙基-2，3-二氧代-1-哌嗪基）-羰基〕氨基〕-2-苯乙酰基〕氨基〕-3-〔〔（2-呋喃基羰基）硫代〕甲基〕-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸钠盐

50mg（0.39mmol）2-硫糠酸，60ml丙酮、34mg（0.41mmol）碳酸氢钠、197mg（0.27mmol）〔2S〔2α，3α，5α，6β（R^＊）〕〕-3-（溴甲基）-6-〔〔2-〔〔（4-乙基-2，3-二氧代-1-哌嗪基）-羰基〕氨基〕-2-苯乙酰基〕氨基〕-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基）甲酯和20ml去离子水的溶液在室温下搅拌1小时。减压浓缩反应混合物至两相形成，在乙酸乙酯和盐水分配。分离有机相，用盐水提取洗涤三次，用无水硫酸钠干燥。滤除干燥剂和减压蒸出溶剂后，将残余物加到170mg10%pd/C.21mg（0.25mmol）碳酸氢钠、50ml去离子水和50ml乙酸乙酯的混和物中。混合物在室温下于氢气氛中（初压56psi，386Kpa）在帕尔装置上振摇1.5小时，经多孔盘玻璃漏斗上的硅藻土滤板滤除催化剂，滤饼用冷水洗涤。将固体氯化钠加到合并的滤液和洗液中。分离水相，用乙酸乙酯提取两次，冻干，残余物溶于25ml去离子水，置于串连的三个C₁₈Sep pak上。用水和乙腈梯度洗脱（100%水至50%乙腈/水）后，冻干，得到23mg产物。

实例35

〔2S-（2α，3α，5α，6β（R^＊）〕〕-6-〔〔2-〔〔（4-乙基-2，3-二氧代-1-哌嗪基）羰基〕氨基〕-2-苯乙酰基〕氨基〕-3-〔〔（2，5-二氢-6-羟基-2-甲基-5-氧代-1，2，4-三嗪-3-基）硫代〕-甲基〕-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基）甲酯单钠盐

将（R）-α-〔〔（4-乙基-2，3-二氧代哌嗪基）羰基〕氨基〕苯乙酸（263.5mg，0.826mmol）和2-巯基苯并噻唑（138.3mg，0.827mmol）溶于二氯甲烷（11.7ml）。将1，3-二环己基碳化二亚胺（171.3mg，0.830mmol）溶于二氯甲烷（2.5ml）并将其加到第一份溶液中，然后在室温下于氮气中搅拌。根据下述步骤同时制备〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-（溴甲基）-3-甲基-7-氧代-6-氨基-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基）甲酯的游离胺：

将五氯化磷（192.7mg，0.925mmol）溶于二氯甲烷（3.3ml）。然后加入吡啶（83.5ml，1.032mmol）（立即形成沉淀），在-15℃搅拌冷却该悬浮液。5-10分钟后，加入〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-（溴甲基）-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基）甲酯（452.3mg，0.825mmol），在氮气下搅拌。2小时后，用移液管将反应混合物转到饱和碳酸氢钠溶液（12ml）中。二氯甲烷层再用饱和碳酸氢钠（7ml）洗涤，最后用盐水（15ml）洗涤。然后在试管中用Na₂SO₄干燥。

将溶液转到上述制备的活化酯中。加入前将活化酯溶液的体积降至5-10ml。在室温下于氮气中搅拌溶液，2小时25分钟后，将体积降至5-10ml，经硅藻土过滤，用快速色谱提纯（乙酸乙酯/石油醚）。得到两部分（84mg纯度约80%，115mg纯度约33%，NMR）〔2S-〔2α，3α，5α，6β（R^＊）〕〕-3-（溴甲基）-6-〔〔2-〔〔（4-乙基-2，3-二氧代-1-哌嗪基）羰基〕氨基〕-2-苯乙酰基〕氨基〕-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基）甲酯。

上述中间体（80mg，0.109mmol）溶于丙酮（1.3ml），然后加水（0.63ml）。向这一乳状溶液中加入四氢-2-甲基-3-硫代-1，2，4-三嗪-5，6-二酮二钠盐，然后加丙酮（1.74ml）。室温下于氮气中搅拌清彻黄色溶液，3小时30分钟后，加水（5ml），蒸除丙酮（出现泡沫）。产物用C₁₈Sep pak部分提纯，然后使用乙腈/水和C₁₈柱进行HpLC提纯。收集两个部分，分别重26.9mg和3.9mg

实例36

〔2S-（2α，3α，5α，6β（R^＊））〕-6-〔〔2-〔〔（4-乙基-2，3-二氧代-1-哌嗪基）羰基〕氨基〕-2-苯乙酰基〕氨基〕-3-〔〔（2，5-二氢-6-羟基-2-甲基-5-氧代-1，2，4-三嗪-3-基）硫代〕-甲基〕-3-甲基〕-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸二钠盐

将〔2S-（2α，3α，5α，6β（R^＊））〕-6-〔〔2-〔〔（4-乙基-2，3-二氧代-1-哌嗪基）羰基〕氨基〕-2-苯乙酰基〕氨基〕-3-〔〔（2，5-二氢-6-羟基-2-甲基-5-氧代-1，2，4-三嗪-3-基）硫代〕-甲基〕-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基）甲酯单钠盐（40mg，0.0481mmol）溶于0.1N NaHCO₃（0.46ml，0.046mmol），加水（0.46ml），然后加乙酸乙酯（1ml）和10%Pd/C（40mg）。混合物在室温下于氢气中搅拌。2小时后，加水（1ml）和乙酸乙酯（1ml），悬浮液经硅藻土滤板过滤。脱除水层，简单萃取，冻干得到粗产物（30.9mg），通过HPLC提纯（乙腈/水），得到两个部分（18.9mg和6.5mg）。

实例37

〔2S-〔2α，3α，5α，6β（R^＊）〕〕-3-〔（乙酰基）硫代〕甲基〕-3-甲基-6-〔〔2-〔〔4-乙基-2，3-二氧代-1-哌嗪基〕羰基〕氨基〕-2-苯乙酰基〕氨基〕-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸单钠盐

向含有氩气的干燥烧瓶中加入〔2S（2α，3α，5α，6β）〕-3-（溴甲基）-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基）甲酯（6.73g，12.27mmol）、CH₂Cl₂（41ml），将混合物冷却至-5～-10℃。向冷却溶液中加入吡啶（1.21g，15.35mmol，1.24ml），5分钟后一次加入固体PCl₅（2.808g，13.5mmol）。在此温度下搅拌30分钟后，将反应混合物冷却至-15～-20℃，以5分钟沿烧瓶内壁缓慢加入异丁醇（5.45g，73.69mmol，6.78ml）。再搅拌15分钟后，加入0℃的饱和NaBr溶液（20ml），将反应烧瓶置于0℃冰浴。5分钟后，缓慢加入Et₂O（41ml），使所需化合物从溶液中沉淀出。将反应混合物再快速搅拌5分钟，然后在布赫内尔（Buchner）漏斗中过滤反应混合物，固体用Et₂O洗涤直至产物的外观为粒状并且不再有卤化磷的味道为止。将固体转移到表面玻璃上，真空下在含有CaSO₄的干燥器中干燥。得到的固体（4.77g）含有约50%所需的6-胺氢溴酸衍生物，主要杂质是NaBr。

向含有〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-6-氨基-3-（溴甲基）-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕-庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基）甲酯（用NaHCO₃处理，由胺氢溴酸衍生物得到的）、丙酮（12ml）和水（4ml）的烧瓶中加入硫代乙酸钾（0.34g，2.98mmol）。室温下搅拌反应混合物7.5小时，然后加入EtOAc（100ml），将混合物转到分离漏斗，用H₂O（50ml），NaHCO₃（50ml），H₂O（30ml）和盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，并将其浓缩至1-2ml的体积。将这一溶液加到下述反应混合物中。

向含有氩气的干燥烧瓶中加入（R）-α-〔〔（4-乙基-2，3-二氧代哌嗪基）羰基〕氨基〕苯乙酸（0.475g，1.49mmol）、DMF（5ml）和1-羟基-苯并三唑（0.201g，1.49mmol），溶液在0℃冰浴中冷却。5分钟后，加入二环己基羰化二亚胺（0.337g，1.64mmol），再搅拌反应10分钟。这时，将上段所述溶液与CH₂Cl₂（2-3ml）一起加入。所得溶液室温下搅拌过夜。加入EtOAc（100ml）并在分离漏斗中用H₂O（3×100ml）、NaHCO₃（50ml）和盐水（50ml）洗涤，然后用Na₂SO₄干燥，过滤和真空浓缩，残余物用快速色谱提纯（SiO₂（51g），EtOAc），得到0.375g（35%）〔2S-〔2α，3α，5α，6β（R^＊）〕〕-3-〔（乙酰基）硫代〕甲基〕-3-甲基-6-〔〔2-〔〔4-乙基-2，3-二氧代-1-哌嗪基）羰基〕氨基〕-2-苯乙酰基〕氨基〕-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基）甲酯，为米色非晶型固体。

向〔2S-〔2α，3α，5α，6β（R^＊）〕〕-3-〔（乙酰基）硫代〕-甲基〕-3-甲基-6-〔〔2-〔〔4-乙基-2，3-二氧代-1-哌嗪基）-羰基〕氨基〕-2-苯乙酰基〕氨基〕-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基）甲酯（0.202g，0.278mmol）。EtOAc（6ml）和NaHCO₃水溶液（0.1M，5.56ml）的溶液中加入0.20g10%Pd/C和磁性搅拌棒。将含有快速搅拌悬浮液的烧瓶抽空，三次通入氢气。室温下于氢气氛中（由气球提供）搅拌反应混合物2小时后，反应混合物经硅藻土滤板过滤，真空下除去EtOAc，将所得水悬浮液冻干。冻干后所得固体用三个串连Sep PaK C₁₈色谱提纯，用CH₃CN/H₂O梯度洗脱（0-100%）。合并有用的馏分（10-20%CH₃CN/H₂O），真空除去CH₃CN，冻干含水溶液得到0.063g所需产物，为白色莹光粉末。这一固体用WHATMAN-M9 C18柱HPLC提纯，CH₃CN/H₂O（15%至50%梯度）洗脱后除去CH₃CN和水，得到0.034g〔2S-〔2α，3α，5α，6β（R^＊）〕〕-3-〔（乙酰基）硫代）甲基〕-3-甲基-6-〔〔2-〔〔4-乙基-2，3-二氧代-1-哌嗪基）羰基〕-氨基〕-2-苯乙酰基〕氨基〕-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕-庚烷-2-羧酸单钠盐。

实例38

〔2S-〔2α，3α，5α，6β（R^＊）〕〕-3-（氟甲基）-6-〔〔2-〔〔（4-乙基-2，3-二氧代-1-哌嗪基）羰基〕氨基〕-2-苯乙酰基〕氨基〕-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸单钠盐

137mg（0.19mmol）〔2S-〔2α，3α，5α，6β（R^＊）〕〕-3-（溴甲基）-6-〔〔2-〔〔（4-乙基-2，3-二氧代-1-哌嗪基）羰基〕氨基〕-2-苯乙酰基〕氨基〕-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基）甲酯（反应烧瓶用铅箔覆盖）、30ml丙酮和24mg（0.19mmol）氟化银于3ml去离子水组成的混合物在室温下搅拌5.5小时。经微孔过滤器过滤后，减压下从滤液中蒸除大部分丙酮，残余物在乙酸乙酯和盐水中分配。分离有机相，用盐水洗涤三次，用硫酸钠干燥。滤除干燥剂和减压蒸除乙酸乙酯后，将残余物加到40mg10%Pd/C、30ml去离子水、10mg（0.12mmol）碳酸氢钠和20ml乙酸乙酯的混合物中。混合物在环境温度下于氢气氛（初压56Psi，386KPa）中在帕尔装置上振摇3小时。经多孔盘玻璃漏斗上硅藻土滤板滤出催化剂，滤饼用冷水冲洗。将固体氯化钠（521.7mg）加到合并的滤液和洗液中。分离水相，用乙酸乙酯提取，冻干，将残余物溶于15ml去离子水，置于串连的三个C18 Sep PaK上，用水和乙腈溶剂梯度洗脱（100%水至50%乙腈/水）和冻干后，得到10mg产物。

实例39

〔2S-〔2α，3α，5α，6β（R^＊）〕〕-3-〔〔〔3，4-双（乙酰氧基）苯甲酰基〕硫代〕甲基〕-6-〔〔2-〔〔4-乙基-2，3-二氧代-1-哌嗪基）羰基〕氨基〕-2-苯乙酰基〕氨基〕-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸单钠盐

将五氯化磷（423.2mg，2.032mmol）溶于二氯甲烷（5.73ml），然后加入吡啶（187ml，2.312mmol）（形成白色沉淀）。混合物在氩气下于丙酮/冰浴（-10℃～-15℃）冷却，5分钟后加入〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-（溴甲基）-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-1-氮杂-4-噻二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基）甲酯（1.0156g，1.852mmol）。45分钟后，加异丁醇（1.70ml，18.42mmol），继续在丙酮/冰浴中搅拌。40分钟后，加溴化钠溶液（13ml，70g NaBr溶于100ml H₂O制得的溶液），在环境温度下搅拌。5分钟后加入二乙醚（6ml），剧烈搅拌几分钟。混合物通过粗糙玻璃漏斗过滤，用溴化钠溶液洗涤，然后用二乙醚洗涤四次，每次用12.5ml。固体于漏斗上空气干燥，再溶于二氯甲烷（5ml）和饱和碳酸氢钠（5ml）。二氯甲烷层用硫酸钠干燥，然后将其加到如下述同时制备的活化酯中

将2-巯基苯并噻唑（311.5mg，1.862mmol）和（R）-α-〔〔4-乙基-2，3-二氧代哌嗪基）羰基〕氨基〕苯乙酸（580.4mg，1.819mmol）溶于二氯甲烷（24ml）。将1，3-二环己基碳化二亚胺（385.6mg，1.869mmol）溶于二氯甲烷（7ml）并将其加到前一溶液中。溶液在环境温度下于氩气中搅拌2小时20分钟。将体积减到原来的四分之一，加入前述制备的游离胺溶液，在环境温度下于氩气中搅拌。2小时10分钟后，溶液经硅藻土过滤，用快速色谱提纯（乙酸乙酯/石油醚）。得到两个部分（72mg和11mg）。

将基于〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-（溴甲基）-3-甲基-7-氧代-6-〔〔2-〔〔（4-乙基-2，3-二氧代-1-哌嗪基）羰基〕氨基〕-2-苯乙酰基〕氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基）甲酯的较纯部分（72mg，0.098mmol，5.3%产率）和3，4-双（乙酰氧基）苯硫代羧酸（26.7mg，0.105mmol）溶于丙酮和0.1N碳酸氢钾（1ml，0.1mmol）中，环境温度下于氩气中搅拌混合物。30分钟后，加入乙酸乙酯（20ml）和饱和碳酸氢钠（20ml）。乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥，然后过滤并浓缩为残余物。

将残余物溶于四氢呋喃（5ml），加入10%Pd/C（72.1mg）。反应混合于常温常压下于氢气中搅拌。2小时后，经硅藻土过滤，加入0.1N碳酸氢钠（0.93ml，0.093mmol）和水（2ml），同时加入足量四氢呋喃次得到清彻溶液。脱掉四氢呋喃，含水部分经硅藻土过滤。滤液通过串连的两个C18 Sep Pak柱，用水和5%、10%、20%和40%乙腈/水洗脱（每次10ml，但20%时为15ml，收集5ml馏分）。回收两个馏分（4.1mg和2.2mg，共0.0080mmol，由〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-（溴甲基）-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-1-氮杂-4-噻-二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝苯基）甲酯计，产率为0.43%）。产物经HPLC进一步提纯（乙腈/水）。

实例40

〔2S-〔2α，3α，5α，6β（R^＊）〕〕-3-（溴甲基）-6-〔〔2-〔〔（4-乙基-2，3-二氧代-1-哌嗪基）氨基〕-2-苯乙酰基〕氨基〕-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基）甲酯

158mg（0.496mmol）（R）-2-〔〔（4-乙基-2，3-二氧代哌嗪基）羰基〕氨基〕苯乙酸、83mg（0.496mmol）2-巯基苯并噻唑、103mg（0.5mmol）N，N′-二环己基碳化二亚胺和25ml无水四氢呋喃组成的溶液在室温下搅拌2小时。室温下滴加入175mg（0.41mmol）〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-6-氨基-3-（溴甲基）-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基）甲酯在16ml无水二氯甲烷中的溶液。将反应混合物在室温下再搅拌2小时，减压下浓缩至干。残余物用乙酸乙酯和稀碳酸氢钠分配。分离有机相，用水提取两次，用盐水提取一次，然后用无水硫酸钠干燥。滤除干燥剂和减压蒸除溶剂后，残余物用硅胶色谱层析（乙酸乙酯洗脱），得到250mg产物。

实例41

〔2S（2α，3α，5α，6β）〕-6-〔〔〔3，4-双（乙酰氧基）苯甲酰基-氨基〕苯乙酰基〕氨基〕-3-〔〔3，4-双（乙酰氧基）苯甲酰氧基〕甲基〕-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸单钠盐

将（3，4-双乙酰氧基苯甲酰基氨基）-苯乙酸（0.055g，0.15mmol）、1-羟基苯并三唑（0.025g，0.16mmol）和N，N-二环己基碳化二亚胺（0.034g，0.16mmol）在无水二氯甲烷（5ml）中的混合物搅拌30分钟。向该溶液中加入实例31制备的〔2S〔2α，3α，5α，6β〕〕-3-〔〔〔3，4-双（乙酰氧基）苯甲酰基〕氧基-甲基〕-6-氨基-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基）甲酯（0.112g，0.18mmol），室温下搅拌反应3小时。按实例31所述进行相似的处理和提纯，得到〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-6-〔〔〔3，4-双（乙酰氧基）苯甲酰基-氧〕甲基〕-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝苯基）甲酯（33mg，26.6%）。

将上述酯（33mg，0.04mmol）和Pd/C（10%）（35mg）加到四氢呋喃-水（1∶1，24ml）中，用氢气（45Psi，310Kpa）在室温下氢化2小时。用碳酸氢钠将其转化为钠盐后，粗产物用C18柱提纯，合并有用的馏分，冻干后得到标题化合物（18.4mg，5.6%）。

实例42

〔2S-〔2α，3α，5α，6β（R^＊）〕〕-4-〔〔〔2-羧基-6-〔〔2-〔〔（4-乙基-2，3-二氧代-1-哌嗪基）羰基〕氨基〕-2-苯乙酰基〕氨基〕-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚-3-基〕硫羟〕-甲基〕-1-乙基吡啶鎓氢氧化物内盐

室温下向〔2S-〔2α，3α，5α，6β（R^＊）〕〕-3-溴甲基-6-〔〔2-〔〔（4-乙基-2，3-二氧代-1-哌嗪基）羰基〕氨基〕-2-苯乙酰基〕氨基〕-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基）甲酯（0.26g，0.35mmol，实例40）的DMF（13ml）溶液中加入N-乙基-4-硫代吡啶酮（0.064g，0.46mmol），混合物在45℃搅拌8小时。脱除溶剂，残余物与乙酸乙酯研磨。沉淀物用硅胶柱提纯，用二氯甲烷，然后用含有2%乙酸的二氯甲烷/甲醇（9∶1）洗脱，得到〔2S-〔2α，3α，5α，6β（R^＊）〕〕-4-〔〔〔6-〔〔2-〔〔（4-乙基-2，3-二氧代-1-哌嗪基）羰基〕氨基〕-2-苯乙酰基〕氨基〕-3-甲基-2-〔〔（4-硝苯基）甲氧基〕-羰基〕-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚-3-基〕-甲基〕硫代〕-1-乙基吡啶鎓溴化物（49mg，17%）。

将上述酯（15mg，0.019mmol）和Pd/C（%）（15mg）加到四氢呋喃/水（1∶1，10ml）中，用氢气（45Psi，310Kpa）在室温下氢化2小时。经C₁₈柱提纯和冻干有用部分，得到标题化合物（6.7mg，55.8%）。

实例43

〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-4-〔〔〔2-羧基-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚-3-基〕甲基〕硫代〕-1-乙基吡啶鎓氢氧化物内盐

室温下向〔2S-〔2α，3α，5α6β）〕-3-（溴甲基）-3-甲基-7-氧代-6-〔苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基）甲酯（0.274g，0.5mmol）的DMF（4.8ml）溶液中加入N-乙基-4-硫代吡啶（0.082g，0.58mmol），混合物搅拌过夜。真空除去溶剂，残余物用制备硅胶盘提纯，二氯甲烷/甲醇（92∶8）洗脱，得到〔2S-〔2α，3α，5α，6β〕〕-4-〔〔〔2-〔〔4-硝基苯基甲氧基〕羰基〕-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚-3-基〕甲基〕硫代〕-1-乙基吡啶鎓溴化物（0.108g，31%）。

将上述酯（0.144g，0.20mmol）和10%Pd/活性炭（160mg）加到THF-H₂O（1∶1，10ml）中，室温下用氢气（45Psi，310KPa）氢化2小时。经C₁₈柱提纯和冻干有用部分后，得到标题化合物（36.7mg，37.5%）。

实例44

〔2S-〔2α，3α，5α，6β）〕-3-〔〔〔3，4-双（乙酰氧基）苯甲酰基〕氧基〕甲基〕-6-〔〔（六氢-1H-氮杂＊-1-基）亚甲基〕氨基〕-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸

向对甲苯磺酸（48.2mg，0.25mmol）和N，N-二异丁基-乙胺（0.044ml，0.25mmol）与二氯甲烷（5.7ml）的混合物中加入〔2S-〔2α，3α，5α，6β〕〕-3-〔〔〔3，4-双（乙酰氧基）苯甲酰基〕氧基〕甲基〕-6-氨基-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基）甲酯（284mg，0.465mmol实例37制备），室温下于氩气中搅拌。然后向该混合物中加入N-甲酰亚己基二甲基乙缩醛（0.32ml，1.83mmol），搅拌反应1小时。将反应混合物倾入乙酸乙酯，用水、饱和碳酸氢钠和盐水洗涤。脱除溶剂，残余物溶于THF/H₂O（5.7ml∶5.7ml），用10%Pd/活性炭（560mg）和H₂（1大气压）氢化2小时，滤除催化剂，粗产物用C₁₈柱提纯，得到标题化合物（33mg，13.5%）。

实例45

〔2S-〔2α，3α，5α，6β〕〕-3-〔〔〔3，4-双（乙酰氧基）苯甲酰基〕氧基〕甲基〕-6-〔〔〔（二氟甲基）硫代〕乙酰基〕氨基〕-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸单钠盐

向〔2S-〔2α，3α，5α，6β〕〕-3-〔〔〔3，4-双（乙酰氧基）苯甲酰基〕氧基〕-甲基〕-6-氨基-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基）甲酯（360mg，0.59mmol，实例31制备）和吡啶（0.066ml，0.823mmol）的二氯甲烷（10ml）溶液中加入二氟甲基硫代乙酰氯（117.3mg，0.73mmol），得到的混合物在室温下搅拌5小时。反应后，用稀HCl，稀NaHCO₃溶液和盐水洗涤。粗产物用硅胶柱提纯，乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到〔2S-〔2α，3α，5α，6β〕〕-3-〔〔〔3，4-双（乙酰氢基）-苯甲酰基〕氧基〕甲基〕-6-〔〔〔（二氟甲基）-硫代〕乙酰基〕氨基〕-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基）甲酯（103mg，25.5%）。

将上述酯（87.3mg，0.128mmol）用10%Pc/活性炭（92mg）在THF/H₂O（3.2ml∶2.2ml）中1大气压氢气下氢化。产物经C₁₈柱提纯，得到标题化合物（39mg，51%）。

实例46

〔2S-〔2α，3α，5α，6β（R^＊）〕〕-3-〔〔〔3，4-双（乙酰氧基）苯甲酰基〕氧基〕甲基-6-〔氨基-（苯乙酰基）氨基〕-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸单钠盐

将无水二氯甲烷（5ml）中的（R）-N-（4-硝基苯甲酰氧基）羰基-苯基甘氨酸（147mg，0.445mmol）、1-羟基苯并三唑（60mg，0.44mmol）和N，N-二环己基碳化二亚胺（98.5mg，0.478mmol）在室温下搅拌2.5小时。向该溶液中加入〔2S-〔2α，3α，5α，6β〕〕-3-〔〔〔3，4-双（乙酰氧基）苯甲酰基〕氧基〕甲基〕-6-氨基-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基）甲酯（262mg，0.46mmol，实例31制备），室温下搅拌反应2小时，经如实例31所述相似处理和提纯，得到〔2S-〔2α，3α，5α，6β（R^＊）〕〕-3-〔〔〔3，4-双（乙酰氧基）苯甲酰基〕氧基〕甲基〕-6-〔〔（4-硝基苯甲酰氧基）羰基〕氨基-（苯乙酰基）氨基〕-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝苯基）甲酯（146mg，37.6%）。

将上述酯（107.7mg，0.122mmol）和10%Pd/活性炭（100mg）加到THF/H₂O（3ml∶3ml）中，在1大气压氢气下氢化3小时。用NaHCO₃将其转化为钠盐后，粗产物用C₁₈柱提纯，将有用部分冻干，得到标题化合物（25.6mg，33.6%）。

实例47

〔2S-〔2S-〔2α，3α，5α，6β（Z）〕〕-1-〔6-〔〔〔（2-氨基-4-噻唑基）（甲氧亚氨基）乙酰基〕-氨基〕-2-羧基-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚-3-基〕甲基〕-吡啶鎓氢氧化物内盐

向〔2S-〔2α，3α，5α，6β（Z）〕〕-6-〔〔（2-氨基-4-噻唑基）（甲氧基-亚氨基）乙酰基〕氨基〕-3-溴甲基-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基）甲酯（300mg，0.49mmol，实例27制备）和吡啶（0.115ml，1.42mmol）的溶液中加入AgBF₄（119mg，0.61mmol），室温下搅拌反应4小时。过滤反应混合物，滤液经真空浓缩后，用C₁₈柱提纯。将有用的馏分冻干，得到〔2S-〔2α，3α，5α，6β（Z）〕〕-1-〔6-〔〔〔（2-氨基-4-噻唑基）-（甲氧亚氨基）乙酰基〕氨基〕-2-（4-硝基苯甲酰氧基羰基）-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚-3-基〕甲基〕吡啶鎓四氟硼酸盐（87mg，25.4%）。

将上述四氟硼酸盐（87mg，0.124mmol）溶于乙腈/水（4ml∶5ml），加入NaHCO₃（0.1N，2.48ml，0.248mmol）。混合物用10%Pd/活性炭在1大气压氢气下氢化2小时，C₁₈柱提纯后，得到标题化合物（11.2mg，19.2%）。

实例48

〔2S-〔2α，3α，5α，6β（R^＊）〕〕-1-〔〔2-羧基-6-〔〔〔〔（4-乙基-2，3-二氧代-1-哌嗪基）-羰基〕氨基〕苯乙酰基〕氨基〕-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕-庚-3-基〕甲基〕吡啶鎓氢氧化物内盐

向〔2S-〔2α，3α，5α，6β（R^＊）〕〕-3-溴甲基-6-〔〔〔〔（4-乙基-2，3-二氧代-1-哌嗪基）羰基〕氨基〕苯乙酰基〕氨基〕-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸（4-硝基苯基）甲酯（443mg，0.60mmol，实例40）和吡啶（0.149ml，1.84mmol）的二氯甲烷（8.7ml）溶液中加入AgBF₄（144mg，0.74mmol），搅拌反应3小时。脱除溶剂，残余物用C₁₈柱提纯，CH₃CN/H₂O梯度洗脱，得到〔2S-〔2α，3α，5α，6β（R）〕〕-1-〔〔2-（4-硝基苯甲酰氧基羰基）-6-〔〔〔〔（4-乙基-2，3-二氧代-1-哌嗪基）羰基〕氨基〕苯乙酰基〕氨基〕-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚-3-基〕甲基〕吡啶鎓四氟硼酸盐（113.6mg，23%）。

将上述四氟硼酸盐（80mg，0.098mmol）溶于乙腈/水（3ml∶8.7ml）、加入NaHCO₃（0.1N，0.98ml，0.098mmol）。混合物用10%Pd/活性炭在1大气压氢气氢化3小时，经C₁₈柱提纯后，得到标题化合物（21.3mg，36.7%）。

采用与实例31和32相似的步骤，不同的是取代适当的苯乙酸，制备了实例49-53所述的化合物。

实例49

〔2S-〔2α，3α，5α，6β（S^＊）〕〕-3-〔〔〔3，4-双（乙酰氧基）苯甲酰基〕氧基〕甲基〕-6-〔〔〔〔（4-羟基-6-甲基-3-吡啶基）羰基〕氨基〕（4-羟基-苯基）乙酰基〕氨基-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸单钠盐

实例50

〔2S-〔2α，3α，5α，6β（R^＊）〕〕-3-〔〔〔3，4-双（乙酰氧基）苯甲酰基〕氧基〕甲基〕-6-〔〔〔〔（4-羟基-6-甲基-3-吡啶基）羰基〕氨基〕（4-羟苯基）乙酰基〕氨基〕-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸单钠盐

实例51

〔2S-〔2α，3α，5α，6β（R^＊）〕〕-3-〔〔〔3，4-双（乙酰氧基）苯甲酰基〕氧基〕甲基〕-6-〔〔〔〔（4-乙基-2，3-二氧代-1-哌嗪基）羰基〕氨基〕（4-羟苯基）乙酰基〕氨基-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸单钠盐

实例52

〔2S-〔2α，3α，5α，6β（S^＊）〕〕-3-〔〔〔3，4-双（乙酰氧基）苯甲酰基〕氧基〕甲基〕-6-〔〔〔〔（4-乙基-2，3-二氧代-1-哌嗪基）羰基〕氨基〕（4-羟苯基）乙酰基〕氨基-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸单钠盐

实例53

〔2S-〔2α，3α，5α，6β（R，S）〕〕-3-〔〔〔3，4-双（乙酰氧基）苯甲酰基〕氧基〕甲基〕-6-〔〔〔3，4-双（乙酰氧基）苯基〕〔〔（4-乙基-2，3-二氧代-1-哌嗪基）羰基〕氨基〕乙酰基〕-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕-庚烷-2-羧酸单钠盐

Claims

1、通式I所示化合物的制备方法：

式中R是氢，易水解酯基或保护基；R¹是氢，R²是氢或酰基；或者R¹和R²一起为基：

(式中n是5，6或7)；

X是氟，氰硫基，叠氮基或基R³aCO₂-

式中R³a是C₂-C₁₆烷基，芳基，杂环，-(CH₂)_m-芳基，-(CH₂)_m-杂环，杂环-低碳链烯基或芳基-低碳链烯基；R³是C₁-C₁₆烷基，芳基，杂环，(CH₂)_m-芳基，-(CH₂)_m-杂环，杂环-低碳链烯基或芳基-低碳链烯基；R⁴和R^4′分别是氢，低碳烷基，低碳链烯基或低碳炔基；R_a是氢，卤素，氨基，氨基-低碳烷基，羧基，氨基甲酰基，羧基-低碳烷基，氨基甲酰基-低碳烷基或低碳烷酯基-低碳烷基；m数值为1-4和P数值为3，4或5，条件是当R是保护基时，X不是氟，当R是氢时，该方法还包括式I化合物水合物，易水解酯类或其盐，或这些酯或盐的水合物的制备方法，该方法包括：

(a)通式X所示化合物

(式中Hal是卤素；R′是保护基，R¹和R²如上定义)与通式HX(X如上定义)化合物的盐反应；或

(b)通式Ⅳ化合物

(式中R′如上定义；X如上定义)与PCl₅或PBr₅和吡啶或二甲基吡啶反应；或

(c)通式Ⅵ化合物

(式中R′如上定义：X如上定义)，与下式化合物反应；

(式中n如上定义；Rb是低碳烷基)；或

(d)用羧酸或其反应性衍生物酰化通式Ⅵ化合物；和(如果需要的话)

(e)脱除所得化合物的酯保护基(若R是酯保护基)，将所得化合物转化成易水解酯类或盐(若R是氢)和/或将所得化合物(若R是氢)或易水解酯类或盐转化成水合物。

2、权利要求1的方法，其中R是氢。

3、权利要求1的方法，其中R¹和R²是氢。

4、权利要求1的方法，其中R¹是氢和R²是酰基。

5、权利要求1的方法，其中R¹和R²一起为基团：

式中n是5，6或7。

6、权利要求4的方法，其中酰基R²是具有下式结构的脂族酰基：

式中R₅是氢，低碳烷基，低碳环烷基，低碳烷氧基，低碳链烯基，低碳环链烯基，环己二烯基或被一个或多个卤素，氰基，硝基，氨基，巯基，烷硫基或氰基甲硫基取代的低碳烷基或低碳链烯基。

7、权利要求4的方法，其中酰基R²是选自以下结构的芳族酰基：

式中n是0，1，2或3;R₆，R₇和R₈分别是氢，卤素，羟基，硝基，氨基，氰基，三氟甲基，含1-4个碳原子的烷基，含1-4个碳原子的烷氧基或氨基甲基;R₉₀是氨基，酰氨基，羟基，羧基或磺酸盐，保护羧基，甲酰氧基或叠氮基。

8、权利要求4的方法，其中酰基R²是选自以下结构的杂芳族酰基：

式中n是0，1，2或3;R₉₀如权利要求7定义;R¹⁰¹是含有1，2，3或4个杂原子的取代的或未取代的5-，6-或7-元杂环;杂原子选自氮，氧和硫。

9、权利要求4的方法，其中酰基R²是具有下式结构的〔〔（4-取代-2，3-二氧代-1-哌嗪基）羰基〕氨基〕乙酰基：

式中R₁₁₁是低碳烷基，低碳羟基烷基，具有下式结构的芳基：

（式中R₆，R₇和R₈如权利要求7定义），或是含有1，2，3或4个杂原子的取代的或未取代的5-，6-或7-元杂环，杂原子选自氮，氧和硫;R₁₂₀是低碳烷基或取代低碳烷基（其中低碳烷基被一个或多个卤素，氰基，硝基，氨基或巯基取代）。

10、权利要求4的方法，其中酰基R²是具有下式的（酰氨基）乙酰基：

式中R₁₁₁如权利要求9定义;R₁₄₀是不饱和杂环或是具有下式结构的基团：

（式中R₆，R₇和R₈如权利要求7定义;n是0，1，2或3）;氢，低碳烷基，取代低碳烷基，氨基，低碳烷氨基，二（低碳烷基）氨基，（低碳氰基烷基）氨基，肼基，低碳烷基肼基，芳基肼基或酰基肼基。

11、权利要求4的方法，其中酰基R²是具有下式结构的（取代氧亚氨基）乙酰基：

式中R₁₁₁如权利要求9定义;R₁₄₀如权利要求10定义;R₂₂和R₂₃分别是选自氢和低碳烷基的基团，或者R₂₂和R₂₃与同它们相连的碳原子一超形成C₃-C₇碳环。

12、权利要求4的方法，其中酰基R²是具有下式结构的〔〔〔3-取代-2-氧代-1-咪唑烷基〕-羰基〕氨基〕乙酰基：

式中R₁₁₁如权利要求9定义;R₁₅是氢，低碳烷磺酰基，芳亚甲基氨基（即：-N＝CHR₁₁₁，其中R₁₁₁如权利要求9定义），-COR₁₆（其中R₁₆是氢，低碳烷基或被卤素取代低碳烷基），芳基（如在权利要求9中由R₁₁₁定义），低碳烷基或取代低碳烷基（其中低碳烷基被一个或多个卤素，氰基，硝基，氨基或巯基取代）。

13、权利要求4的方法，其中酰基R²是具有下式结构的酰基：

式中R₁₀₁如权利要求8定义;R₁₃₀是氢，低碳烷基，C₃-C₇环烷基或取代低碳烷基〔其中低碳烷基被一个或多个卤素，氰基，硝基，氨基，巯基，低碳烷硫基，芳基（如在权利要求9中由R₁₁₁定义），羧基（包括它的盐），酰氨基，氨基甲酰基，低碳烷氧羰基，苯甲氧基羰基，二苯甲氧基羰基，羟基烷氧基氧膦基，二羟基氧膦基，羟基（苯甲氧基）氧膦基或二（低碳烷氧基）氧膦取代〕或羧基-C₃-C₇环烷基。

14、权利要求1-13中任何一项所述的方法，其中X是R^3aCO₂-R³-COS-，-SR³或-OR³，而R^3a和R³分别是芳基或杂环。

15、权利要求1的方法，其中包括制备以下化合物：〔2S-（2α-3α，5α，6β）〕-3-甲基-3-〔〔（1-甲基-1H-四唑-5-基）硫代〕甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸单钠盐。

16、权利要求1的方法，其中包括制备以下化合物：〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-〔〔（2，5-二氢-6-羟基-2-甲基-5-氧代-1，2，4-三嗪-3-基）硫代〕-甲基〕-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸二钠盐。

17、权利要求1的方法，其中包括制备以下化合物：〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-〔（乙酰硫基）甲基〕-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-氮杂二环〔3.2.0〕-庚烷-2-羧酸单钠盐。

18、权利要求1的方法，其中包括制备以下化合物：〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-〔〔（2，5-二氢-3-巯基-2-甲基-5-氧代-1，2，4-三嗪-6-基）氧基〕甲基〕-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸单钠盐。

19、权利要求1的方法，其中包括制备以下化合物：〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-〔〔2-呋喃羰基）硫代〕-甲基〕-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸单钠盐。

20、权利要求1的方法，其中包括制备以下化合物：〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-（氟甲基）-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸钠盐。

21、权利要求1的方法，其中包括制备以下化合物：〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-〔〔〔3，4-双（乙酰氧基）苯甲酰基〕硫代〕甲基〕-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸钠盐。

22、权利要求1的方法，其中包括制备以下化合物：〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-〔〔3，4-二羟基苯甲酰基）氧基〕-甲基〕-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸单钠盐。

23、权利要求1的方法，其中包括制备以下化合物：〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-〔〔3-（1H-咪唑-4-基）-1-氧代丙氧基）〕-甲基〕-3-甲基-7-氧代-庚烷-2-羧酸钠盐。

24、权利要求1的方法，其中包括制备以下化合物：〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-1-〔〔2-羧基-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚-3-基〕-甲基吡啶鎓氢氧代物内盐。

25、权利要求1的方法，其中包括制备以下化合物：〔2S-（2α，3α，5α，6β）〕-3-〔〔〔3，4-双（乙酰氧基）苯甲酰基〕-氧基〕甲基〕-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸单钠盐。

26、权利要求1的方法，其中包括制备以下化合物：〔2S-（2α，3α（E），5α，6β）〕-3-〔〔〔3-（1H-咪唑-4-基）-1-氧代-2-丙烯基）氧基〕甲基〕-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸单钠盐。

27、权利要求1的方法，其中包括制备以下化合物：〔2S-〔2α，3α，5α，6β（Z）〕〕-6-〔〔（2-氨基-4-噻唑基）-甲氧亚氨基）-乙酰基〕氨基〕-3-甲基-3-〔〔（1-甲基-1H-四唑-5-基）硫代〕甲基〕-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕-庚烷-2-羧酸单钠盐。

28、权利要求1的方法，其中包括制备以下化合物：〔2S-〔2α，3α，5α，6β（Z）〕〕-6-〔〔（2-氨基-4-噻唑基）-甲氧亚氨基）乙酰基〕氨基〕-3-（叠氮甲基）-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸单钠盐。

29、权利要求1的方法，其中包括制备以下化合物：〔2S-〔2α，3α，5α，6β（Z）〕〕-3-〔〔〔3，4-双（乙酰氧基）-苯甲酰基〕氧基〕甲基〕-6-〔〔（2-氨基-4-噻唑基）（甲基亚氨基）乙酰基〕氨基〕-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸单钠盐。

30、权利要求1的方法，其中包括制备以下化合物：〔2S-〔2α，3α，5α，6β（Z）〕〕-6-〔〔（2-氨基-4-噻唑基）-甲氧亚氨基）乙酰基〕氨基〕-3-〔〔（2，5-二氢-6-羟基-2-甲基-5-氧代-1，2，4-三嗪-3-基）硫代〕甲基-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸二钠盐。

31、权利要求1的方法，其中包括制备以下化合物：〔2S-〔2α，3α，5α，6β（R^＊）〕〕-6-〔〔〔〔（4-乙基-2，3-二氧代-1-哌嗪基）羰基〕氨基〕苯乙酰基〕氨基〕-3-甲基-3-〔〔（1-甲基-1H-四唑-5-基）硫代〕甲基〕-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸单钠盐倍半水合物。

32、权利要求1的方法，其中包括制备以下化合物：〔2S-〔2α，3α，5α，6β（R^＊）〕〕-3-〔〔〔3，4-双（乙酰氧基）-苯甲酰基〕氧基〕甲基〕-6-〔〔〔〔（4-乙基-2，3-二氧代-1-哌嗪基）-羰基〕氨基〕苯乙酰基〕氨基〕-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸单钠盐。

33、权利要求1的方法，其中包括制备以下化合物：〔2S-〔2α，3α，5α，6β（R^＊）〕〕-6-〔〔〔〔（4-乙基-2，3-二氧代-1-哌嗪基）-羰基〕氨基〕-苯乙酰基〕氨基〕-3-〔〔（3，4-二羟苯甲酰基）氧基〕甲基〕-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸单钠盐。

34、权利要求1的方法，其中包括制备以下化合物：〔2S-〔2α，3α，5α，6β（R^＊）〕〕-6-〔〔〔〔（4-乙基-2，3-二氧代-1-哌嗪基）-羰基〕氨基〕苯乙酰氨基〕-3-〔〔（2-呋喃羰基）-硫代〕甲基〕-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸钠盐。

35、权利要求1的方法，其中包括制备以下化合物：〔2S-（2α，3α，5α，6β（R^＊））〕-6-〔〔〔〔（4-乙基-2，3-二氧代-1-哌嗪基）羰基〕氨基〕苯乙酰基〔氨基〕-3-〔〔（2，5-二氢-6-羟基-2-甲基-5-氧代-1，2，4-三嗪-3-基）硫代〕-甲基〕-3-甲基-7-氧代-1-氮杂-4-硫杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸二钠盐。

36、权利要求1的方法，其中包括制备以下化合物：〔2S-〔2α，3α，5α，6β（R^＊）〕〕-3-〔（乙酰基）硫代）甲基〕-3-甲基-6-〔〔〔〔4-乙基-2，3-二氧代-1-哌嗪基）羰基〕氨基〕-苯乙酰基〕氨基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸单钠盐。

37、权利要求1的方法，其中包括制备以下化合物：〔2S-〔2α，3α，5α，6β（R^＊）〕〕-3-（氟甲基）-6-〔〔〔〔（4-乙基-2，3-二氧代-1-哌嗪基）羰基〕氨基〕苯乙酰基〕-氨基〕-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸单钠盐。

38、权利要求1的方法，其中包括制备以下化合物：〔2S-〔2α，3α，5α，6β（R^＊）〕〕-3-〔〔〔3，4-双（乙酰氧基）苯甲酰基〕硫代〕甲基〕-6-〔〔〔〔（4-乙基-2，3-二氧代-1-哌嗪基）-羰基〕-氨基〕苯乙酰基〕氨基〕-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸单钠盐。

39、权利要求1的方法，其中包括制备以下化合物：〔2S-〔2α，3α，5α，6β（R^＊）〕〕-3-〔〔〔3，4-双（乙酰氧基）-苯甲酰基〕氧基〕甲基-6-〔氨基（苯乙酰基）氨基〕-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸单钠盐。

40、权利要求1的方法，其中包括制备以下化合物：〔2S-〔2α，3α，5α，6β（R^＊）〕〕-4-〔〔〔2-羧基-6-〔〔〔〔（4-乙基-2，3-二氧代-1-哌嗪基）羰基〕氨基〕苯乙酰基〕氨基〕-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚-3-基〕-硫代〕甲基〕-1-乙基吡啶鎓氢氧化物内盐。

41、权利要求1的方法，其中包括制备以下化合物：〔2S-〔2α，3α，5α，6β）〕-4-〔〔〔2-羧基-3-甲基-7-氧代-6-〔（苯乙酰基）氨基〕-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕-庚-3-基〕甲基〕硫代〕-1-乙基吡啶鎓氢氧化物内盐。

42、权利要求1的方法，其中包括制备以下化合物：〔2S-〔2α，3α，5α，6β〕〕-3-〔〔〔3，4-双（乙酰氧基）苯甲酰基〕氧基〕甲基〕-6-〔〔（六氢-1H-氮杂＊-1-基）-亚甲基〕氨基〕-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸。

43、权利要求1的方法，其中包括制备以下化合物：〔2S-〔2α，3α，5α，6β〕-3-〔〔〔3，4-双（乙酰氧基）苯甲酰基〕氧基〕-甲基〕-6-〔〔〔二氟甲基）硫代〕乙酰基〕氨基〕-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸单钠盐。

44、权利要求1的方法，其中包括制备以下化合物：〔2S- 2α，3α，5α，6β）〕-6-〔〔〔3，4-双（乙酰氧基）苯甲酰基氨基〕苯乙酰基〕氨基〕-3-〔〔3，4-双（乙酰氧基）苯甲酰氧基〕-甲基〕-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸单钠盐。

45、权利要求1的方法，其中包括制备以下化合物：〔2S-〔2α，3α，5α，6β（Z）〕〕-1-〔6-〔〔〔（2-氨基-4-噻唑基）-（甲氧亚氨基）乙酰基〕-氨基〕-2-羧基-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚-3-基〕甲基〕-吡啶鎓氢氧化物内盐。

46、权利要求1的方法，其中包括制备以下化合物：〔2S-〔2α，3α，5α，6β（R^＊）〕〕-1-〔〔2-羧基-6-〔〔〔〔（4-乙基-2，3-二氧代-1-哌嗪基）-羰基〕氨基〕苯乙酰基〕氨基-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕-庚-3-基〕甲基〕-吡啶鎓氢氧化物内盐。

47、权利要求1的方法，其中包括制备以下化合物：〔2S-〔2α，3α，5α，6β（S^＊）〕〕-3-〔〔〔3，4-双（乙酰氧基）苯甲酰基〕氧基〕甲基〕-6-〔〔〔〔（4-羟基-6-甲基-3-吡啶基）-羰基〕-氨基〕（4-羟基-苯基）乙酰基〕氨基-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸单钠盐。

48、权利要求1的方法，其中包括制备以下化合物：〔2S-〔2α，3α，5α，6β（R^＊）〕〕-3-〔〔〔3，4-双（乙酰氧基）-苯甲酰基〕氧基〕甲基〕-6-〔〔〔〔（4-羟基-6-甲基-3-吡啶基）-羰基〕氨基〕（4-羟基苯基）乙酰基〕氨基-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸单钠盐。

49、权利要求1的方法，其中包括制备以下化合物：〔2S-〔2α，3α，5α，6β（R^＊）〕〕-3-〔〔〔3，4-双（乙酰氧基）-苯甲酰基〕氧基〕甲基〕-6-〔〔〔〔（4-乙基-2，3-二氧代-1-哌嗪基）羰基〕氨基〕（4-羟基苯基）乙酰基〕氨基-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕-庚烷-2-羧酸单钠盐。

50、权利要求1的方法，其中包括制备以下化合物：〔2S-〔2α，3α，5α，6β（S^＊）〕〕-3-〔〔〔3，4-双（乙酰氧基）苯甲酰基〕氧基〕甲基〕-6-〔〔〔〔（4-乙基-2，3-二氧代-1-哌嗪基）羰基〕氨基〕（4-羟基苯基）乙酰基〕氨基-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸单钠盐。

51、权利要求1的方法，其中包括制备以下化合物：〔2S-〔2α，3α，5α，6β（R，S）〕〕-3-〔〔〔3，4-双（乙酰氧基）-苯甲酰基〕氧基〕甲基〕-6-〔〔〔3，4-双（乙酰氧基）苯基〕〔〔（4-乙基-2，3-二氧代-1-哌嗪基）羰基〕氨基〕乙酰基〕氨基〕-3-甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸单钠盐。

52、药物组合物的制备方法，该药物组合物尤其适用于控制或预防感染疾病，该方法包括将权利要求1所述式Ⅰ化合物，或水合物，易水解酯类或它的盐，或者它的酯或盐的水合物（当R是氢时）与药用惰性载体物质一起制成服用形式制剂。

53、一种药物组合物，其中含有权利要求1所述式Ⅰ化合物，水合物，易水解酯类或它的盐，或者它的酯或盐的水合物（当R是氢时）以及药用惰性载体物质。

54、一种杀菌活性的药物组合物，其中含有权利要求1所述式Ⅰ化合物，水合物，易水解酯或其盐，或者酯或盐的水合物（当R是氢时）以及药用惰性载体物质。

55、应用权利要求1所述式Ⅰ化合物，水合物，易水解酯或其盐，或者酯或盐的水合物（当R是氢时）制备杀菌活性的药物组合物的方法。

56、根据权利要求1所述方法或者明显相同的化学方法制备的权利要求1所述式Ⅰ化合物，水合物，易水解酯或其盐，或者酯或盐的水合物（当R是氢时）。