PT92140B

PT92140B - Processo para a preparacao de novos analogos de substratos de peptidase

Info

Publication number: PT92140B
Application number: PT92140A
Authority: PT
Inventors: Daniel Schirlin
Original assignee: Merrell Dow Pharma
Priority date: 1988-10-28
Filing date: 1989-10-27
Publication date: 1996-03-29
Also published as: EP0368719A3; CN1031880C; ATE147405T1; GR3023027T3; CA2001265A1; CN1043504A; AU4386789A; CA2001265C; AU622723B2; ZA898026B; HU895473D0; DK537589A; EP0371179A1; US5114927A; IL92102A0; ES2099072T3; DK537589D0; JPH02172961A; EP0368719A2; EP0368719B1

Description

MERRELL DOW PHARMACEUTICALS, INC.

PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE NOVOS ANÁLOGOS DE

SUBSTRATOS DE PEPTIDASE

A presente invenção refere-se a novos análogos de certos substratos de peptidase em que o átomo de azoto da ligação amida cindível, foi substituído por um radical difluorometileno e em que o grupo carbonilo da ligação amida adjacente foi substituído por uma função amina terminal, tendo esses novos análogos a propriedade de inibir a renina e são aplicáveis no tratamento da hipertensão.

Em geral, a presente invenção refere-se a ini. bidores da renina de fórmula geral

R^HN

NRaRB (I) na qual,

R^ representa um —aminoácido ou um péptido, que com porta, eventualmente, um grupo protector no seu átomo de azoto terminal,

R^ representa um grupo hidrocarbilo saturado ou um resto de um -aminoácido caracteristico, respon2

sável por orientar o inibidor para o sítio activo da enzima,

R^ representa um resto de um of-aminoácido característico ou um grupo hidrocarbilo saturado,

R_a e R^ representam, cada um, um grupo indutor da actividade.

Antes de melhor definir e/ou ilustrar o âmbito dos inibidores da peptidase abrangidos pela fórmula geral I, pode ser conveniente estabelecer alguns conceitos relacionados com os peptidos, particularmente porque podem auxiliar a leitura e compreensão do presente texto e fórmulas aqui apresentadas. Por exemplo, excepto para a prolina, todos osiy-anii noácidos encontrados nas proteínas têm como um denominador comum um grupo carboxilo livre e um grupo amino livre insubstituído no átomo de carbono <=< (na prolina, dado que a prolina tem um grupo amino substituído, este é realmente de um Cf-aminoácido mas, por comodidade, é referido também como um grupo ty-amino). Além disso, cada aminoácido tem um R-grupo característico sendo o R-grupo a cadeia lateral ou resto, ligado ao átomo de carbono do ^-aminoácido. Por exemplo, para a glicina a cadeia lateral do grupo representado por R, consiste num átomo de hidrogénio, para a alanina é um grupo metilo, para a valina será um grupo isopropilo. Assim, através desta memória descritiva o grupo representado por R^ ou por R^ é um resto para cada of-aminoácido indicado. Os restos específicos dos —aminoácidos são conhecidos.

Para maior conveniência na definição do âmbi3

Ζ’ to dos compostos abrangidos pelo conceito genérico da fórmula geral I, assim como pelos conceitos subgenéricos relacionados com cada um dos aminoácidos individuais envolvidos nesta invenção, classificaram-se diversos aminoácidos numa variedade de grupos que conferem funções caracteristicas idênticas. Estes grupos (D, E, F, G e K) e as abreviaturas reconhecidas para os aminoácidos estão indicados nos Quadros I e II, respectivamente .

Quadro I

C: Ser, Thr, Gin, Asn, Cys, His, (3-pirazoli1)Ala, e (4-pirimidinil)Ala, e os seus derivados N-metílicos,

D: Pro, Ind,

E: Ala, /^-Ala, Leu, Ile, Vai, n-Val, /^-Val, Met, n-Leu e os seus derivados N-metílicos,

F: Phe, Tyr, O-Metil Tirosina, (3-pirazolil)Ala, (4-pirimidini1)Ala, Trp, Nal(l), e os seus derivados N-metílicos,

G: Gly, Sar,

K: Acetilo (Ac), Succinilo (Suc), Benzoilo (Bz) , _t-Butiloxicarbonilo (Boc), Carbobenzoxi (CBZ),

Tosilo (Ts), Dansilo (DNS), Isovalerilo (iva), Metoxisuccinilo (MeOSuc), 1-Adamantanosulfonilo (AdSO^), 1-Adamantanoacetilo (AdAc), 2-Carboxibenzoilo (2-CBZ), Fenilacetilo, t-Butilacetilo (Tba), bis/~(l-naftil)metil7acetilo (BNMA) ou -A-Rz em que A representa um grupo /

L·.·

-C-, -N-C-, -0-C-, ou -S-;

e Rz representa um grupo arilo, com 6, 10 ou 12 átomos de car bono que comporta apropriadamente 1 a 3 substituintes escolhi dos, independentemente, no grupo constituído por átomos de flúor, cloro, bromo ou iodo, ou grupos trifluorometilo, hidroxi, alquilo com 1 a 6 átomos de carbono, alcoxi com 1 a 6 átomos de carbono, carboxi, alquilcarbonilamino em que o grupo alquilo contem 1 a 6 átomos de carbono, 5-tetrazol e acilsulfonamido (isto á, acilamino-sulfonilo e sulfonilaminocarbonilo) com 1 a 15 átomos de carbono, com a condição de quando o grupo acilsul fonamido contiver um grupo arilo, este poder comportar também um substituinte escolhido entre átomos de flúor, cloro, bromo, ou iodo ou um grupo nitro; e estes outros grupos protectores do radical amino terminal que são seus equivalentes funcionais.

Quadro II

Alanina	Ala
Arginina	Arg
Asparagina	Asn
Ácido aspártico	Asp
Asn + Asp	Asx
Cisteína	Cys
Glutamina	Gin
Ácido glutâmico	Glu
Gin + Glu	Glx
Glicina	Gly
Histidina	His
Isoleucina	Ile
Leucina	Leu
Lisina	Lys /
Metionina	Met
Fenilalanina	Phe
Prolina	Pro
Serina	Ser
Tereonina	The
Triptofano	Trp
Tirosina	Tyr
Valina	Vai

Quadro II (Continuação)

Norvalina	n-Val
Norleucina	n-Leu
1-Naftilaianina	Nal(l)
Ácido 2-Indolinocarboxílico	Ind
Sarcosina	Sar

Átravés desta memória descritiva, os grupos específicos podem definir-se utilizando a expressão abreviada R^R₂/^-CFgR^NRaRb7· Nesta fórmula é totalmente óbvio que o grupo CF^R^NRaRb constitui o «^-aminoácido modificado da posição em que o seu átomo de azoto foi substituído por um grupo CF₂, o grupo carbonilo foi substituído por um grupo de fórmula geral NRaRb e R^ representa o resto ou o substituinte ligado ao átomos de carbono (não representado) do P^-aminoácido modificado deste modo. Evidentemente que Rg representa o O<-aminoácido na posição P^ e R^ representa o -aminoácido ou péptido (com até 4 &<-aminoácidos) na posição P^ ^{ou nas}posições Pg a P^, respectivamente, em que o respectivo θ' -ami. noácido terminal comporta eventualmente um grupo protector de radical amino no seu átomo de azoto.

Por exemplo, o composto representado pela fórmula

-Ί‘ /

é um composto em	que	0 grupo	amino na posição α do
α-aminoácido terminal do	radical representado	por	RX (isto
é, a histidina)	tem	um grupo	protector	do	radical
carbobenzoxi (CBZ),	0 a-	aminoácido	na posição	P4	e β-Val,

ο α-aminoácido na posição Ρ3 é Phe, o α-aminoácido na posição P2 é n-Leu, Leu é o α-aminoácido na posição Ρχ e o grupo [CF2BlyNHCH3] do α-aminoácido na posição Ρ' χ representa o caso em que o átomo de azoto foi substituido por um grupo difluorometileno, e o grupo NHCH3 é um grupo monometilamino em que Ra representa um radical metilo e Rb representa um átomo de hidrogénio que foi substituido por um grupo carbonilo do a-aminoácido na posição Ρ’χ que, neste caso, é a glicina.

Mais especificamente ainda, os novos compostos capazes de inibirem a resina que são abrangidos pela presente invenção são compostos de fórmula geral

RxNHCHC(0)CF₂CHNRaRb

I I ^r2 ^r3

I os seus hidratos, isoésteres ou sais aceitáveis sob ponto de vista farmacêutico, em que representa um grupo da fórmula geral P^P^P ^P^P^,

P representa um grupo protector do radical &

amino terminal representado por K, de preferen cia CBZ, Tba ou Iva;

P^ representa um c<-aminoácido dos grupos C,

E ou F ou

de preferência n-Val, N-Leu, His, (N-pirazolil)-Ala ou (4-pirimidinil)-Ala;

P^ representa um «X-aminoácido dos grupos E ou F, ou está ausente, de preferência Nal(l) Phe ou O-metiltirosina;

P^ está ausente ou representa um ^-aminoácido dos grupos D, E ou F, de preferência Pro, _Ala ou Ó^-Val;

ou esta ausente ou representa um εγ—amino ácido dos grupos C, E ou F, de preferência His;

R^ representa um resíduo de um o<-aminoácido dos grupos E ou F, ou um grupo alquilo g, Benzilo, ciclohexilmetilo, fenetilo ou 2-piridil^ metilo, de preferência Leu ou ciclohexilmetilo;

representa um resto de um -aminoácido dos grupos E, F, ou G, ou um grupo alquilo g, benzilo, ciclohexilmetilo, fenetilo ou 2-pirjl dilmetilo, de preferência restos dos grupos E e G, ainda com maior preferência Gly, Vai, n-Val ou n-Leuj

Ra representa um átomo de hidrogénio ou um resto de um o^-aminoácido dos grupos E, F ou G, alquilo g, benzilo, ciclohexilmetilo ou fene tilo, de preferência Gly, Leu, n-Val ou Ile,

Rb representa, de preferência, um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo g, sendo os referidos grupos C, D, E, F, G e K os seguintes:

C; Ser, Thr, Gin, Asn, Cys, His, (3-pirazolil)-Ala, (4-pirimidinil)-Ala e os seus derivados N-metílicos;

D: Pro e Ind;

E: Ala, /^-Ala, Leu, Ile, Vai, n-Val,

X^-Val, M et, n-Leu e os seus derivados N-metílicos;

F: Phe, Tyr, O-metiltirosina, (3-pirazolil)-Ala, (4-pirimidinil)-Ala, Trp, Nal (l), e os seus derivados N-metílicos;

G: Gly, Sar;

K: acetilo (Ac), succinilo (Suc), Benzoilo (Bz) , _t-butiloxicarbonilo (Boc), carboberi zoxi (CBZ), tosilo (Ts) , dansilo (DNS), isovalerilo (iva), metoxi-succinilo (MeOSuc), 1-adamantanossulfonilo (AdS0₂), 1-adamantanoacetilo (AdAc), 2-carboxibenzoílo (2-CBZ), fenilacetilo, ^-butilacetilo (Tba), bis/ (l-naftil)-metil7~acetilo (BNMA), os grupos de fórmulas

ou de fórmula geral -A-R z

na qual,

A representa um grupo

0

II II

-C-, -N-C-, -0-C-, ou -S-;

e R representa um grupo arilo com 6, 10 ou z átomos de carbono comportando 1 ou 3 substituintes apropriados escolhidos, independentemente, entre átomos de flúor, cloro, bromo ou iodo ou gru pos trifluorometilo, hidroxi, alquilo com la 6 átomos de carbono, alcoxi com 1 a 6 átomos de carbono, carboxi, alquilcarbonilamino em que o grupo alquilo tem 1 a 6 átomos de carbono, 5-tet^razol e acilsulfonamido com 1 a 15 átomos de carbono, com a condição de quando o grupo acilsulfonamido contiver um grupo arilo este poder comportar também um substituinte escolhido entre átomos de flúor, cloro, bromo ou iodo ou um grupo nitro.

Os isoésteres dos compostos de fórmula geral I incluem aqueles em que (a) um ou mais dos restos de ιγ-amino dos substituintes representados por e Q estão na sua configuração nâo natural (quando existe uma configuração natural) ou (b) quando a ligação carbamoílo peptídica normal está modificada tal como, por exemplo, para formar -CH₂NH(reduzido), —COCH^- (ceto), —CH(OH)CH₂— (hidroxi),

-CH(NH₂)CH₂- (amino), -CH₂CH₂~, -CH=CH-(trans) (hidrocarboneto). De preferência, um composto da presente invenção não se deve encontrar em uma forma isóstérica. Nestas condições, em que K representa um grupo de formula geral -A-R é preferível que A represente um grupo —C(=o)- e que Rz represente um grupo acilsulfonamido, particularmente quando o gru po acilsulfonamido contém um grupo arilo (de preferência fe — nilo), tendo como substituinte um átomo de halogéneo, sendo preferidos para os grupos representados por -Α-Rz os grupos

4-/ (4-clorofenil)-sulfonilaminocarbonil7-fenilcarbonilo, 4-/ (4-bromofenil)-sulfonilaminocarbonil7-fenilcarbonilo e 4-/ fenil sulfonilaminocarbonil7-fenilcarbonilo (cujas abrevia turas são -Clo-SAC—Bz-Bro-SAC-Bz e O-SAC—Bz, respectivamente) .

Um composto da presente invenção pode apresentar-se na forma livre, por exemplo na forma anfotêrica, ou sob a forma de um sal, por exemplo um sal de adição de ácido, de metanol alcalino, ou aniÓnico (por exemplo, amónio). Um composto na forma livre pode converter-se no correspondente sal por métodos convencionais ou vice-versa. Exemplos de sais são o trifluoroacetato, o cloridrato e sais de sódio, potássio e amónio. Salvo indicação em contrário, os blocos de construção do -aminoácido destes análogos do substrato de peptidase estão, de preferência, na correspondente configuração L. Evidentemente que também se entende que naquelas condições em que o grupo carbonilo na posição se apresenta na sua forma reduzida, então esses compostos não são hidratos

Quando o resto do grupo representado por R normal do (X-aminoácido contém um radical -OH (por exemplo, serina, treonina e tirosina), compreende-se que esse radical pode ser derivado. Por exemplo, em cada uma das condições citadas anteriormente, o radical -OH pode converter-se para' éter. Quando convertido deste modo, tal como, por exemplo, nos seus éteres metílicos, então, esses radicais serão referidos como O-metil-serina, O-metil-treonina ou O-metil-tirosina, respectivamente. Estas cadeias laterais que con têm, o radical éter metílico também podem ser representados ¹ I ¹ por CH^OMe, H^CHC-OMe e CH₂0-0Me (p), respectivamente. Iden ticamente, outros tipos de derivados , (por exemplo, derivados N-alquílicos) podem também ser representados de forma análoga.

Quando se utiliza a designação alquilo, esta inclui grupos de cadeia linear ramificada ou cíclica, particu larmente os grupos tais como, metilo, etilo, n-butilo, J;-butilo, ciclopropilo, n-propilo, pentilo, ciclopentilo, n-hexilo, ciclohexilo e ciclohexilmetilo. 0 termo aralquilo inclui os grupos arilo ligado a um grupo alquileno de preferência metilo ou etilo. 0 termo arilo inclui grupos carboxílicos e heterocíclicos, Os grupos aralquilo e arilo preferidos são fenilo, benzilo, naftilmetilo, fenetilo e

2-piridilmetilo.

Os compostos de fórmula geral I inibem a renina e são, portanto, utilizados como agentes anti-hipertensores, aplicáveis no tratamento da hipertensão. Para a sua aplicação final, a potência e outros parâmetros bioquímicos das características inibidoras de enzima dos compostos de fórmula geral I são facilmente determinados por aplicação de técnicas bioquímicas convencionais conhecidas. Os intervalos de dose reais, para a sua aplicação específica final serão evidentemente dependentes da natureza e gravidade da doença do doente ou animal a tratar, de acordo com o diagnóstico estabelecido. Considera-se que o intervalo de dose para a aplicação geral estará compreendido entre cerca de 0,01 e 10 mg/ /kg/dia para a obtenção do efeito terapêutico eficaz, de preferência entre 0,1 mg/kg/por dia. Os compostos preferidos são:

Cloridrato de 5-Ciclohexil-2,2-difluoro-N^-/ N-isovaleril-L-(θ-metil)-Tirosil-L-n-Valil7~3-oxo-l,4-pentano^ (diamina,

Cloridrato de 5-ciclohexil-2,2-difluoro-N^-isoainil-N^-/ N-isovaleril-L-(O-metil)-Tirosil-L-n-Valil7-3-oxo-1,4-pentanodiamina, —

Cloridrato de l-ciclohexil-4,4-difluoro-N -/ N-isovaleril-L-(O-metil)-Tirosil-L-n-Valil7-3-oxo-2,5-octanodiamina,

Cloridrato de l-Ciclohexil-4,4-difluoro-N -/~N-terc.-butilacetil-L-(θ-metil)-Tirosi1-L-n-Vaiil7-7-me til-3-oxo-2,5-octanodiamina, —

Cloridrato de l-Ciclohexil-4,4-difluoro-N -/ N-terc.-butilacetil-L- (O-metil)- tiro si 1-L-n-Vai il7-6-me til-3-oxo-2,5-heptanodiamina,

Cloridrato de 5-Ciclohexil-2,2-difluoro-N -/ N-isovaleril-L-(1-naf til)-alanina-L-n-Valil7-3-oxo-l,4-pentanodiamina,

Cloridrato de 5-ciclohexil-2,2-difluoro-N -/ N-(l-terc -butilsulfonilmetil-3-fenil-propanoil)-L-n-Valil7-3-oxo-1,4-pentanodiamina, ,Cloridrato de 5-ciclohexil-2,2-difluoro-N -/ N-— isova leril-L-(O-metil)-Tiro sil-L-(N-me til)-n-Vaii1/-3-oxo-1,4-pentanodiamina,

Cloridrato de 5—Ciclohexil-2,2—difluoro-N^-/ N-isovaleril-L-fenilalanil-L-(N-metil7-n-Vali1/-3-oxo-1,4-pen tanodiamina,

Cloridrato de 5-Ciclohexil-2,2-difluoro-N^-isoamil-N^-/~N-isovaleril-L-(O-me til)-Tirosil-L-(N-metil)-n-Valil7-3-oxo-l,4-pentanodiamina, _

Cloridrato de l-Ciclohexil-4,4-difluoro-N -/ N-terc-butilacetil-L-(O-metil)-Tirosil-L-(N-metil)-n-Valil7-6-me til-3-oxo-2,5-heptanodiamina.

Tendo-se definido o âmbito dos compostos da presente invenção no seu aspecto genérico e os grupos subgené^ ricos individuais, assim como os compostos específicos preferidos, a forma pela qual estes se podem preparar está descrita e ilustrada pelas indicações genéricas específicas seguintes:

Em geral, os compostos de fórmula geral I podem ser preparados mediante aplicação de reacções químicas convencionais também conhecidas. Os compostos intermédios-chave necessários para a aplicação das técnicas de acoplamento peptídicos correntes podem ser representados pelas fórmulas gerais Va e Vb.

Va

Vb em que,

R’ tem o significado definido antes para R^, com excepção de não apresentar um átomo de hidrogénio

X / e podem representar também uma forma protegida do resto do -aminoácido específico envolvido,

R„ tem o significado definido antes, e P e P' re² g g presentam, cada um, um grupo protector, de pref«3 rência são diferentes entre si, de forma a facilitar a eliminação selectiva dependente do sítio natureza e sequência das reacçSes necessárias para preparar os compostos finais a partir destes compostos intermédios; a escolha será de acordo com os princípios conhecidos e entendidos pelos especialistas na matéria.

Nas circunstâncias em que na fórmula geral I, representa um átomo de hidrogénio, a preparação dos compos tos intermédios necessários (Va) é ilustrada pelo Esquema Reaccional A. Naquelas situações em que na fórmula geral I R^ não representa um átomo de hidrogénio, então os compostos intermédios necessários (Vb) são preparados pelos métodos repre sentados no Esquema Reaccional A.

Eequema Reaccional A

VIII em que P representa um grupo protector do radical amino e

S e Ra têm os significados definidos antes.

Na realização das fases do Esquema Reaccional A, prefere-se iniciar com o aldeído de fórmula geral VI em que o grupo protector é um grupo carbamato, de preferência em que Pg representa um grupo benziloxicarbonilo (CBZ). Este aldeído protegido deste modo é submetido a uma reacção de condensação com um éster de ácido bromodifluoroacético, de preferência o éster etílico, na presença de zinco. ''onduz-se a reacção, de preferência, no seio de um dissolvente aprótico anidro, por exemplo, tetrahidrofurano, éter dietílico, dimetoxietano e s_i milares, sob atmosfera de azoto ou de árgon. A mistura reaccional é aquecida cuidadosamente sob refluxo, de preferência de 60°C durante cerca de 1 a 12 horas. O éster (Vil) converte-se na sua amida (VIIl) por tratamento com a amina apropriada ou com amoníaco líquida sob condições anidras, utilizando-se, de preferência, dissolventes como o éter dietílico anidro. A reac ção de amidaçâo inicia-se à temperatura de -78°C e após a saturação com amoníaco deixa—se a mistura reaccional retomar lentamente a temperatura ambiente, ou após a adição da amina de fórmula geral RaNH^ submete-se a mistura a refluxo em tetrahidrofurano. A amida formada deste modo é reduzida por via química mediante reacção da amida com um diborano, de preferência sob a forma de um complexo diborano/sulfore to de dimetilo, sob a atmosfera de azoto, no seio de um dissolvente apró tico anidro (por exemplo THF) sob condições de refluxo. A redu ção dá a amina desejada, sob a forma de um sal de ácido (por exemplo, cloridrato) que (após a transformação habitual) medi^ ,χ ante correcção do pH dá a base que pode ser protegida apropriadamente com um grupo protector do átomo de azoto, por exem pio P' representa um grupo t-butoxicarbonilo, sob condiçSes reaccionais padrão (por exemplo, (BOC/^O, tetrahidrofurano à temperatura ambiente) para protecção da amina.

Quando não representa um átomo de hidrogénio, então o processo do Esquema Reaccional A é modificado para se preparar os compostos intermédios pretendidos, de acor do com o Esquema Reaccional B.

Equema Reaccional B

VII R 'M — J .>

^R3* (1) Aminação redutora (2) Base, introdução de P ^{1 2}

NRaPg' eh, que R' representa um reagente organometálico, de preferência lítio ou magnésio ligado ao radical representado por

R'^ pretendido.

A conversão do éster (Vil) para o oorrespon19 dente grupo representado por R'^ que comporta um grupo cetona com um reagente organometálico, efectua-se mediante contacto dos reagentes sob condições anidras a uma temperatura compreendida entre cerca de 0° e -80°C, no seio de um dissolvente aprótico (por exemplo, te trahidrof urano) . Após a reacção, dei_ xa-se retomar a temperatura ambiente lentamente e hidroliza-se o complexo para se obterem as cetonas intermédias desejadas (IX), compostos estes que são submetidos a processos de aminação redutora convencionais tais como, por exemplo, o pro cesso descrito por Borch (Ver R.F. Borch, et al., J. Am. Chem. Soc. , 93. (1971) 2897. Esta aminação redutora pode realizar-se em uma ou em duas fases (com isolamento da imina ou enamina intermédia). Por exemplo, fazendo-se reagir as cetonas (iX) com acetato de amónio sob condições ligeiramente ácidas em metanol, obtém-se a enamina, que, quando reage, com cianoboro-hidreto de sódio dá o produto desejado. Alternativamente, podem tratar-se as cetonas directamente com cianoboro-hidreto de sódio, na presença de acetato de amónio, para se obterem as aminas desejadas (sob a forma dos cloridratos correspondentes) que, em qualquer caso, podem ser neutralizadas e, em seguida, o radical amino pode ser protegido com um grupo protector apro priado.

Quando os compostos desejados contêm grupos representados por Ra e Rb, dos quais nenhum representa um átc>

mo de hidrogénio, então estes compostos podem ser preparados mediante processos convencionais. Nesta sequência reaccional, o grupo protector do radical representado por (-NRaP. ') ó re&

movido selectivamente, por processos convencionais de desprotecção de amina para se obterem os compostos intermédios que / comportam o radical (-NHRa) que, quando se faz reagir com o cloreto de acilo apropriado, dá o grupo amida intermédio (-NRaCOR’b), que quando reduzido com um borano, de preferência com dimetilsulfureto de borano dá o grupo de fórmula geral (-NRaR’b) na qual R’b tem o significado definido para Rb mas não representa um átomo de hidrogénio. Esta sequência reaccional é representada pelo esquema reaccional de estrutura parcial seguinte que mostra a preparação dum composto em que Ra representa um grupo etilo (Et) e Rb representa um grupo metilo:

Et

-CF,

N-Pg—* -r.CF,

NH

-CF^x N-CH -CF₂\^ N-CH^

Após a obtenção dos compostos intermédios-chave de fórmula geral V (a e b) podem-se realizar processos convencionais de acoplamento de ^-aminoâcidos ou de péptidos para preparar os compostos individuais de fórmula geral I. Em geral esta série de reacções pode ser representada pelo Esquema

Reaccional C.

Esquema reaccional C

1) Separação de Pg

2) Acoplamento de R^OH

I em que R^ , R^, R^, Ra e Pg e R^OH é o equivalente para Pg¹ em que Rb e Pg têm o sj tem o significado definido RCO^H, e Rb” representa Rb gnificado definido antes.

ante s ou

A cisão dos grupos protectores pode ser efectuada por qualquer técnica convencional conhecida tal como as que se apresentam nos exemplos específicos a seguir descritos. Identicamente, os processos de acoplamento após cisão do grupo protector representado por Pg pode efectuar-se de acordo com métodos clássicos conhecidos.

- /

A oxidação pode efectuar-se através do processo de oxidação de Swern, bem conhecido, ou com uma modifj. cação da reacção de Jones, utilizando-se dicromato de piridí^ nio, ou um complexo de anidrido crómico-piridínio, ou ainda 1,1,1-triacetoxi-2,1-benzoxiodol. É evidente que se existem grupos protectores nos restos de o^-aminoácidos que constituem os blocos, estes grupos protectores têm que ser removidos após oxidação.

Em geral, a oxidação de Swern efectua-se mediante reacção de cerca de 2 a 10 equivalentes de dimetilsul^ fóxido (DMSO) com cerca de 1 a 6 equivalentes de anidrido trifluorometilacético / (CF^CO^O / ^ou cloreto de oxalilo /(coci)₂_7, di ssolvendo-se os referidos reagentes num dissolvente inerte, por exemplo em cloreto de metileno (Cí^Cl^,), encontrando-se o reactor referido sob atmosfera inerte (por exemplo, atmosfera de azoto ou de um gás de função equivalen te), sob condições anidras, a temperaturas compreendidas entre cerca de -80°C e -50°C para se formar um composto de adição de sulfónio in situ a que se adiciona cerca de um equivalente dos álcoois apropriados (Vi).

De preferência, dissolvem-se os álcoois num dissolvente inerte, por exemplo cloreto de metileno ou em quantidades mínimas de dimetilsulfoxido e deixa-se a mistura reaccional retomar a temperatura de cerca de -50°C (durante 10 a 20 minutos) e em seguida, completa-se a reacção mediante a adição de 3 a 10 equivalentes de uma amina terciária, por exemplo, trietilamina, N-metilmorfolina, etc.

Em geral, o processo de oxidação de Jones ( ” modificado pode efectuar-se de um modo conveniente mediante reacção dos álcoois (Vi) com dicromato de piridínio em dicljo rometano fazendo-se contactar os reagentes entre si num pó de peneiros moleculares que abosrva as moléculas de água por exemplo um peneiro molecular de 3 Angstrõm, em que o referido contacto se faz na presença de ácido acético glacial a uma temperatura compreendida entre cerca de 0°C e 50°C, de preferência à temperatura ambiente, seguido de isolamento e eventualmente da remoção dos grupos protectores do radical amino.

Alternativamente, adiciona-se 1 a 5 equivalentes de um complexo de anidrido crómico-piridínio, isto é, um reagente de Sarett preparado in situ / ver Fieser e Fieser Reagents for Organic Syntbesio, Vol. 1, pp. 145 e Sarett, et al., J.A.C.S. 25, (1953), 4227, preparando-se o referido complexo in situ no seio de um dissolvente inerte, por exemplo cloreto de metileno sob atmosfera inerte e condições ani dras a uma temperatura compreendida entre 0°C e 50°C, a um equivalente dos álcoois (Vi) deixando-se os reagentes interactuarem durante cerca de 1 a 15 horas, seguido de isolamento e eventual remoção dos grupos protectores do radical amino.

Outro processo alternativo para a conversão dos álcoois (Vi) nas cetonas pretendidas consiste numa reacção de oxidação que utiliza periodano (isto é 1,1,1-triacetoxi-2,1-benzoxiodol). /ver Dess Martin, J. Org. Chem., 48, (ΐ9θ3), 41557. Esta oxidação efectua-se mediante contacto de cerca de 1 equivalente dos álcoois (Vi) com 1 a 5 equivalentes de periodano (de preferência 1,5 equivalentes), estan

- 24 do os reagentes referidos sob a forma de suspensão num dissolvente inerte (por exemplo em cloreto de metileno) sob atmosfera inerte (de preferência azoto) e condições anidras, a uma temperatura compreendida entre 0°C e 50°C (de preferên cia à temperatura ambiente) edeixando que os reagentes actuem entre si durante cerca de 1 a 48 horas. Pode efectuar-se a eventual desprotecção dos grupos protectores do radical amina, se apropriado, após o isolamento das cetonas.

Os exemplos específicos que se seguem são for necidos para ilustrar a preparação dos compostos da presente invenção.

Exemplo 1

Éster etílico do ácido 4-benziloxicarbonilamino-2,2-difluoro-3-hidroxi-6-metil-heptanóico

Adicionou-se, gota a gota, uma mistura de 2,080 g (8,3 mmoles) de L-N-benziloxicarbonilo Leucinal e 2,230 g (ll mmoles) de bromodifluoroacetato de etilo em 15 ml de tetrahidrofurano anidro, a uma suspensão sob refluxo de 0,710 g de lã de zinco activada em 10 ml de tetrahidrofurano anidro, sob atmosfera de azoto. A velocidade da adição foi controlada para se manter um refluxo moderado da mistura.

Após terminar a adição, agitou-se a solução durante 3 horas, à temperatura ambiente. A mistura foi diluída pela adição de 20 ml de acetato de etilo, e solução concentrada de cloreto de sódio e de 20 ml de hidrogeno-sulfato de potássio IM. Secou-se a fase aquosa com sulfato de magnésio, evaporou-se e purificou-se por cromatografia rápida (gel de sílica; ace25

tato de etilo/ciclohexano a 1:9). Isolou-se 1,130 g do éster pretendido com um rendimento de 36 sob a forma de um óleo incolor.

Rf: 0,57 (acetato de etilo/ciclohexano a

1:1) .

Exemplo 2

4-Benziloxicarbonilamino-2,2-difluoro-3-hidroxi-6-me til-heptanamida

Fez-se borbulhar uma corrente de amoníaco à temperatura de -78°C através de uma solução de 0,820 g (2,2 mmoles) de éster etílico do ácido 4-benziloxicarbonilamino-2,2-difluoro-3-hidroxi-6-metil-heptanóico, em 10 ml de éter dietílico anidro. Após saturação deixou-se retomar a tempera tura ambiente sob agitação. Retirou-se o excesso de amoníaco e evaporou-se o dissolvente sob vazio. Retomou-se o resíduo com pentano para se obter a amida esperada com um rendimento quantitativo sob uma forma sólida.

MS(Cl/NH₃): 345 (MH⁺).

Exemplo 3

1

N -Benziloxicarbonil-N -terc.-butoxicarbonil-2,2-difluoro-3-hidroxi-6-me til-1,4-heptanodiamina

Adicionou-se uma solução de EH^ ÍM/ÍCH^J^S (l ml) em diclorometano, sob atmosfera de azoto, a uma mistura de 0,185 g (0,53 mmole) de 4-benziloxicarbonil-amino-2,2-difluoro-3-hidroxi-6-metil-heptanamida em 10 ml de tetra hidrofurano anidro. Aqueceu-se a mistura sob refluxo durante /

/ horas. Após arrefecimento à temperatura ambiente, adicionaram-se 3 ml de metanol e 6 ml de ácido clorídrico IN em éter dietílico. Eliminou-se o dissolvente sob vazio. Retomou-se o resíduo com água e lavou-se a fase aquosa com éter dietílico, ajustando-se o pH para 10. A extracção do éter dietílico deu a amina intermédia que se transformou directamente na sua forma N-BOC protegida / (BOC^O 1,5 eq, tetrahidrofurano, temperatura ambiente/. Purificou-se o terc.-butilcarbonato esperado por cromatografia / gel de sílica, acetato de etilo/ciclohexano, (ljl)/, (0,l80 g, rendimento

Rf: 0,63, acetato de etilo/ciclohexano (lsl).

Exemplo 4

Ester etílico do ácido 4—benziloxicarbonilamino-2,2-difluoro-3-hidroxi-5-f enilpentanói co

Preparou—se o composto em título pelo processo descrito no Exemplo 1, a partir de L-N-benziloxicarbonilfenil-alaninal e de bromodifluoroaceta to de etilo (Rendimento 75 %).

Rf : 0,5 (acetato de etilo/ciclohexano a

1:1).

Análise calculada para	^C21^H23^N°	5^F2
C % :	61,91;	H$: 5,69;	N$:	3,44
Determ.:C%:	62,19;	5,75;	N$:	3,55

Exemplo 5

4-Benzi1oxicarbonilamino-2,2-fluoro-3-hidroxi-5-fenilpentanamida

Preparou-se o composto em título, a partir do éster obtido no Exemplo 4 pelo processo descrito no Exem pio 2. (Rendimento 98 %) .

Exemplo 6

1

N -benziloxicarbonil-N -tere.-butoxicarbonil-2,2-difluoro-3-hidroxi-5-fenil-l,4-pentanodiamina

Preparou-se o composto em título de acordo com o método descrito no Exemplo 3, a partir da amida obtida no Exemplo 5· (Rendimento 64 %) .

Exemplo 7

N^-terc.-Butoxicarbonil-2,2-difluoro-3-hidroxi-5-feni1-1,4-pentanodiamina

Agitou-se uma solução de N -benziloxicarbonil-N^-terc.-butoxicarbonil-2,2-difluoro-3-hidroxi-5-f^enil-1,4-pentanodiamina (0,464 g; 1 mmole) em 20 ml de etanol, à temperatura ambiente, na presença de Paládio a 10 % sobre carvão (0,020 g) sob atmosfera de hidrogénio, durante 5 horas. Substituiu-se a atmosfera de hidrogénio por atmosfera de azoto e filtrou-se o catalisador. Eliminou-se o dissolvente sob vazio, obtendo-se 0,030 g do produto esperado. (Rendimento 98 %) ·

Exemplo 8

Éster etílico do ácido 4-benziloxicarbonilamino-2,2-difluoro-3-hidroxi-5-metilhexanóico

Preparou-se o composto em título pelo proces^ so descrito no Exemplo 1, a partir de L-N-benziloxicarbonilvalinal e de bromodifluoroacetato de etilo. (Rendimento 40$) .

Exemplo 9

4-Benziloxicarbonilamino-2,2-difluoro-3-h idroxi-5-me til-hexanamida

Preparou-se o composto em título pelo proces so descrito no Exemplo 2, com um rendimento quantitativo, a partir do éster preparado no Exemplo 8.

Exemplo 10

1

N -benziloxicarbonil-N -tere.-butoxicarbonil-2,2-difluoro-3-hidroxi-5-me ti1-1,4-hexanodiamina

Preparou-se o composto em título pelo processo descrito no Exemplo 3, a partir da amida obtida no Exemplo 9· (Rendimento 40 $).

Rf: 0,50 (acetato de etilo/ciclohexano a

1:1).

Exemplo 11

N^-terc. -Butoxi carbonil-2 , 2-dif luoro-3-hidroxi-5-nietil-1,4-hexanodlamina

Preparou-se o composto em título, com um reri dimento quantitativo, pelo processo descrito no Exemplo 7, f

I a partir do dicarbamato obtido no Exemplo 10.

Exemplo 12

4-Benziloxicarbonilamino-2,2-difluoro-3-hidroxi-butanoato de etilo

Preparou—se o composto em título, com um ren dimento de 33 $>, de acordo com o processo descrito no Exemplo

1, a partir de benziloxicarbonilglicinal, e de bromodifluoroacetato de etilo e de zinco.

Rf: 0,45 (gel de sílica; acetato de etilo/ /ciclo-hexano a lsl).

Exemplo 13

4-Benziloxicarbonilamino-2,2-difluoro-3-hidroxi-butanamida

Preparou-se o composto do título, com um rendimento de 95 %, de acordo com o processo descrito no Exemplo

2, a partir do éster obtido no Exemplo 12.

Rf: 0,49 (gel de sílica; acetato de etilo/ /ciclohexano a l:l).

Exemplo l4

1 z \

N -Benziloxicarbonil-N -(ter.-butoxicarbonil)-2,2-difluoro-3-hidroxi-l,4-butanodiamina

Preparou-se o composto do título, com um ren dimento de 48 pelo processo descrito no Exemplo 3, a partir da amida obtida no Exemplo 13.

Rf: 0,42 (gel de sílica; acetato de etilo/ /ciclohexano a l:l).

ms(dci/ci+/nh₃): 392(mnh⁺^, 59); 375 (MH⁺,

20); 258(15); 241(100).

Exemplo 15

4-Benziloxicarbonilamino-2,2-difluoro-3-bidroxi-pentanoato de etilo

Preparou-se o composto em título, com um ren dimento de 50 %, pelo processo descrito no Exemplo 1, a partir de N-benziloxicarbonilalaninal, bromodifluoroacetato de etilo e de zinco.

Rf: 0,49 (gel de sílica; acetato de etilo/ /ciclohexano a l:l).

Exemplo l6

4-Benziloxicarbonilamino-2,2-difluoro-3-hidroxipentanamida

Preparou-se o composto em título, com um ren dimento de 90 de acordo com o procsso descrito no Exemplo 2, a partir do éster obtido no Exemplo 15·

Rf: 0,50 (gel de sílica; acetato de etilo/ciclohexano a l:l).

MS(DCl/CI+/NH₃): 392(MNH⁺^,100); 3O3(MH⁺,

13); 212(19); 169(100).

Exemplo 17

1 / \

N -Benziloxicarbonil-N -(terc.-butoxicarbonil)-2,2-difluoro-3-hidroxi-l,4-pentanodiamina

Preparou—se o composto em título, com um reri dimento de 53 %, pelo processo descrito no Exemplo 3, a partir da amida obtida no Exemplo l6.

Rf: 0,47 (gel de sílica; acetato de etilo/ /ciclohexano a lsl)

MS(DCI/CI+/NH₃) : 4θ6(ΜΝΗ⁺Ζ|, 94); 389(MH⁺,

23), 298(20); 255(100).

Exemplo 18

N-Benziloxicarbonil-3-ciclohexilamina

A uma solução de 4,75 g (22,8 mmoles) de cloridrato de 3-ciclohexilalanina em 11,4 ml de hidróxido de sódio 2N, adicionaram-se simultaneamente, à temperatura de 0°C, uma solução de cloroformato de benzilo (3,2 ml, 36 mmoles) em 10 ml de tetrahidrofurano e 11,4 ml de hidróxido de sódio 2N. Manteve-se o pH da mistura cerca de 9-10 mediante adição de hidróxido de sódio 2N. Agitou-se a mistura durante 1,5 horas. Lavou-se a solução com éter dietílico, (3 x 20 ml). Acidificou-se a fase aquosa até pH 2 com ácido clorídrico aquoso 3N e extraiu-se com 3 x 50 ml de acetato de etilo. As fases orgânicas reunidas foram secas com sulfato de magnésio anidro.

Por filtração e eliminação do dissolvente sob vazio obtiveram-se 4,8O g do produto esperado, sob a forma de um óleo ama relo com um rendimento de 69 %·

Rf: 0,75 (gel de sílica; Ac0H/Bu0H/H₂0 a 2:6:2).

Exemplo 19

Propano-hidroxamato de 2-benzlloxicarbonilainino-3-ciclohexil-N,0-dimetilo

A uma solução de 4,60 g (l5 mmoles) de N-benziloxicarbonil-3-ciclohexilalanina em 6θ ml de cloreto de metileno anidro, adicionaram-se, à temperatura de 0°C, 3,09 (15 mmoles) de diciclohexilcarbodiimida e 2,29 g (l5 mmoles) de hidrato de 1-hidroxibenzotiazol. Após agitação durante 15 minutos à temperatura de 0°C, adicionaram-se à mistura 1,46 g (l5 mmoles) de cloridrato de N,O-dimetilhidroxilamina e 1,51 g (l5 mmoles) de N-metilmorfolina. Agitou-se a mistura durante 20 horas deixando-se retomar a temperatura ambiente. Separou— -se o precipitado por filtração e eliminou-se o dissolvente sob vazio e purificou-se a mistura por cromatografia (gel de sílica; acetato de etilo/ciclohexano 2/8), obtendo-se 3,60 g do hidroxanato esperado, com um rendimento de 69 %.

Rf: 0,38 (gel de sílica; acetato de etilo/ciclo hexano a 1:1, UV, Ig).

Exemplo 20

N-Benziloxicarbonil-3-ciclohexilalanina

Agitou-se à temperatura de 0°C durante 1 hora uma mistura de 3,58 g (10,3 mmoles) de propanohidroxamato de 2-benziloxicarbonilamino-3-ciclohexil-N,0-dimetilo e 0,44 g(ll,6 mmoles) de hidreto de alumínio e lítio em 100 ml de éter dietílico anidro. Adicionaram-se 25 ml de hidrogeno-sulfonato de potássio 1M. Agitou-se a mistura durante 30 minutos e extraiu-se por 2 vezes com 25 ml de éter dietílico. Reuniram-se as fases orgânicas e lavaram-se 3 vezes com 20 ml de ácido clorídrico 2 N, 1 vez com 20 ml de água, e 1 vez com solução saturada de hidrogenocarbonato de sódio, 1 vez com 20 ml de solução saturada de cloreto de sódio e secou-se com sulfato de magnésio anidro. Após filtração e eliminação do dissolvente sob vazio, obtiveram-se 2,52 g do aldeído esperado sob a forma de um óleo amarelo com um rendimento de 85 % que se utilizou na fase seguinte sem purificação posterior.

Exemplo 21

Éster etílico do ácido 4-benzlloxicarbonilamino-5-ciclohexil-2,2-difluoro-3-hidroxipentanoico

Preparou-se o composto em título, com um rendi^ mento de 37 de acordo com o processo descrito no Exemplo 1, a partir de N-benziloxicarbonil-3-ciclohexilalaninal, bromodifluoroacetato de etilo e de zinco.

Rf: 0,57 (gel de sílica; acetato de etilo/ /ciclohexano a l:l).

Exemplo 22

4-Benziloxicarbonilamino-5-ciclohexil-2,2-difluoro-3-hidroxipentanamida

Preparou-se o composto em título, com um rendimento de 97 pelo processo descrito no Exemplo 2, a partir do éster obtido no Exemplo 21.

Rf: 0,53 (gel de sílica; acetato de etilo).

MS(DCl/CI+/NH₃) : 4O2(MNH⁺Z+, 86); 385(MH⁺, le); 294(23); l69(4o); 126(100).

Exemplo 23

1 / \

N -Benzjloxicarbonil-N -(terc-butoxicarbonil)-5-ciclohexil-2,2-difluoro-3-hidroxi-l,4-pentanodiamina

Preparou-se o composto em título pelo processo descrito no Exemplo 3, com um rendimento de 51 $>, a partir da amida obtida no Exemplo 22.

Rf: 0,59 (gel de sílica;acetato de etilo/cicl£ hexano a 1:1).

- 34 Exemplo 24

N^-terc.-butoxicarbonll)-5-ciclohexii-2, 2-difluoro-3-hidroxi-1,4-pentanodiamina

Preparou-se o composto em título, com um rendimento de 86 %, pelo processo descrito no Exemplo 7, a partir do dicarbamato obtido no Exemplo 23.

Exemplo 23

N^-fterc.-butoxicarbonil)-5-ciclohexil-2,2-difluoro-3-hidroxi-N^-/~N-isovaieril-L-(O-metil)-tirosil-L-n-valil7-l,4-pentanodiamina

A uma solução agitada de 0,325 g (0,86 mmole) de N-isovaleril-L-(O-metil)-tirosil-L-n-valina em 8 ml de acetonitrilo anidro, sob atmosfera de azoto adicionaram-se 0,090 g de N-metilmorfolina. Arrefeceu-se a solução resultante à temperatura de -20°C. Adicionaram-se â mistura reaccional arrefecida, gota a gota, 0,117 g (0,86 mmole) de cloroformato de isobutilo. Após 10 minutos, adicionou-se à mistura arrefecida uma solução de 0,300 g (0,89 mmole) de N'*~-(terc. -butoxicarbonil)-5-ciclohexil-2,2-difluoro-3-hidroxi-l,4-pentanodiamina em 3 ml de acetonitrilo seco. Após agitação durante 4 horas à temperatura de -20°C, deixou-se a mistura retomar a temperatura ambiente. Agitou-se continuamente durante 15 horas à tem peratura ambiente, depois do que se eliminou o dissolvente sob vazio e se submeteu o resíduo resultante a cromatografia em gel de sílica com acetato de etilo/ciclohexano a 1:1, para se obter o composto em título com um rendimento de 6l $>.

/

L·^

Rf:

0,16, gel de sílica, acetato de etilo/ /ciclohexano 1:1

Análise calculada para ^C36^H58^N4°7^F2

C$: 62,05; H^: 8,39; N%: 8,04

Determinada C%: 62,06; H%: 8,30; N$>: 8,00

Exemplo 26

Nfl-( terc.-butoxi car boni 1) -5-ciclohexil— 2,2-di fluoro—N^-/^-N-isovaleri1-L-(θ-me til)-tirosi1-L-n-valil7-3-oxo-l,4-pentanodiamina

Adicionou-se uma solução de 0,330 g (0,47 mmole) de álcool obtido no Exemplo 25, em 5 ml de cloreto de metileno, a uma mistura de 0,314 g de dicromato de piridínio, 0,573 g de peneiros moleculares 3A e 0,010 ml de ácido acético glacial em 10 ml de cloreto de metileno. Continuou-se a agitação duran te 15 horas á temperatura ambiente, depois do que se purificou a mistura impura por cromatografia em gel de sílica utilizando acetato de etilo/ciclohexano a 1:1 como eluente para se obter o composto em título, com um rendimento de 76 %, sob a forma de um sólido branco.

Af: 0,67 (gel de sílica; acetato de etilo).

Análise calculada para ^36^56^4^7^2

C%: 62,23; H%: 8,12; N$: 8,06

Determinada C%: 62,31; H%: 8,06; N%: 8,l6

Exemplo 27

Cloridrato de 5-ciclohexil-2,2-difluoro-N^-/ -isovaleril-L36

-(O-metil)-tirosil-L-n-valil7~3-oxo-l,4-pentanodiamina

Agitou-se à temperatura ambiente durante 15 horas uma mistura de 0,207 S (θ,3 mmole) da acetona obtida no Exemplo 26, em uma solução saturada de cloreto de hidrogjé nio em 10 ml de éter dietíiico e 1 ml de tetrahidrofurano. Formou-se um precipitado branco durante esse período,depois do que se eliminou o dissolvente sob vazio. Retomou-se o resíduo com éter dietíiico e evaporou-se até à secura por três vezes. Recristalizou-se o resíduo com etanol/éter dietíiico para se obter 0,128 g do composto em título, com um rendimento de 68 %.

Rf: 0,65 (gel de sílica; AcOH/BuOH/H^O a

2:6:2) .

Análise calculada para C^^H^gN^O^F^, HC1, (1,25 h₂o)

C%: 56,96; H%: 7,94; N%: 8,57

Determinada C%: 56,89; H%: 7,99; 8,51

Exemplo 28

4-Benziloxicarbonilamino-5-clclohexil-2,2-difluoro-3-hidroxi-N-isoamilpentanamida

Uma mistura de 0,207 g (θ,5 mmole) do ester etílico do ácido 4-benziloxicarbonilamino-5-ciclohexil-2,2-difluoro-3-hidroxipentanóico e 0,087 g (l mmole) de isoamil— amina em 5 ml de tetrahidrofurano foi aquecida sob refluxo durante 15 horas sob atmosfera de azoto. Adicionou-se éter dietíiico, lavou-se a solução orgânica com ácido clorídrico 0,IN e secou-se com sulfato de magnésio anidro. Por filtração e eliminação do dissolvente sob vazio, obteve-se um resíduo que se purificou por cromatografia em gel de sílica eluindo com acetato de etilo/ciclohexano a 1:1, obtendo-se 0,17θ g da amida esperada, com um rendimento de 75 %·

Exemplo 29

1 _f \

N -Benziloxicarbonil-N -(terc.-butoxicarbonil)-5-ciclohexil—2,2-difluoro-D-hidroxi-N^-isoamil-l,4-pentanodiamina

Preparou-se o composto em título de acordo com o processo descrito no Exemplo 3» a partir da amida obtida no Exemplo 28.

Exemplo 30

N^-(terc.-butoxicarbonil)-5-ciclohexil-2,2-difluoro-3-hidroxl-N^-isoamil-1,4-pentanodiamina

Preparou—se o composto em título, com um ren dimento quantitativo, de acordo com o processo descrito no

Exemplo 7 a partir do dicarbamato obtido no Exemplo 29.

Exemplo 31

N~*~-( terc. -bu toxi carbonil )-5-ciclohexil-2,2-difluoro-3-hidroxi-N^-isoamil-N^-/ N-isovaleril-L-(0-metil)-tirosil-L-n-valil/-l,4-pentanodiamina

Preparou-se o composto em título, com um ren dimento de 60 %>, de acordo com o processo descrito no Exemplo 25, a partir de N-isovaleril-L-(θ-metil)-tiosil-L-n-valina e da amina obtida no Exemplo 30.

Exemplo 32

N(terc. -butoxicarbonil) -5-ciclohexil-2,2-dif luoro

-isoamil-N^-/ N-isovaleri1-L-(θ-metil)-tiro sil-L-n-vaiil/-3-oxo-1,4-pentanodiamina

Preparou-se o composto em título de acordo com o processo descrito no Exemplo 26, a partir do álcool obtido no Exemplo 31.

Exemplo 33

4 /Cloridrato de 5-ciclohexil-2,2-difluoro-N -isoamil-N -/ N-isovaleri1-L-(0-metil)-tiro sil-L-n-valil/-3-oxo-1,4-pentanodiamina

Preparou-se o composto em título de acordo com o processo descrito no Exemplo 27, a partir do carbamat obtido no Exemplo 32.

Exemplo 34

Ácido 4-Benziloxicarbonilamino-5-ciclohexil-2,2-difluoro-3-hidroxipentanoico

Adicionou-se uma solução de 0,023 g (0,55 mmole) de LiOH, 1^0 em 1 ml de água, à temperatura de 0°C, a uma mistura de 0,206 g (0,5 mmole) do éster etílico do ác do 4-benziloxicarbonilamino-5-ciclohexil-2,2-difluoro-3-hidroxi-pentanóico em 3 ml de dimetoxietano (DME). Deixou-se retomar lentamente a temperatura ambiente e agitou-se a mistura a essa temperatura durante 15 horas. Em seguida, diluiu-se a mistura com 5 ml de água e lavou-se com

ml de éter dietílico. Acidificou-se a fase aquosa até pH cerca de 2 com ácido clorídrico 0,1 N e extraiu-se com 2 x 10 ml de éter dietílico. Lavou-se as fases orgânicas reunidas com solução saturada de cloreto de sódio, secou-se com sulfato de magnésio anidro e, após filtração e eliminação do dissolvente sob vazio, obteve-se o ácido esperado recristalizado com éter dietílico/pentano.

Exemplo 35

7-Benziloxicarbonilamino-8-ciclohexil-5,5-difluoro-6-hidroxi-4-octanona

A uma solução agitada rapidamente de 9 mmoles de brometo de n-propil-magnésio em 20 ml de éter dietílico anidro adicionou-se, gota a gota, uma solução de O,64l g (2,25 mmoles) do ácido 4-benziloxicarbonilamino-5-ciclohexil-2,2-difluoro-3-hidroxipentanóico em 10 ml de éter dietílico anidro. Submeteu-se a mistura a refluxo sob atmosfera de azoto durante 2 horas após a adição de todo o acido. A mistura impura foi, em seguida, vertida numa mistura de gelo e de 5θ ml de ácido clorídrico 0,2N. Separaram-se as fases e extraiu-se a fase aquosa com 3 ^x 20 ml de éter dietílico. Reuniram-se as fases orgânicas e lavou-se com solução saturada de hidrogenocarbonato de sódio e solução saturada de cloreto de sódio. Secou-se a fase orgânica com sulfato de magnésio anidro e, após filtração e eliminação do dissolvente sob vazio, obteve-se um óleo que, purificado por cromatografia em gel de sílica eluindo com acetato de etilo/ciclohexano a 1:1 deu a cetona e s perada.

4θ

Exemplo 36 , \ 2

Ν -(terc.-butoxicarbonil)-Ν -benziloxicarbonil-1-ciclohexil-4,4-difluoro-3-hidroxi-2,5-octanodiamina

Agitou-se á temperatura ambiente sob atmosfera de azoto, durante 20 horas, uma mistura de 0,235 g (θ,46 mmole) de 7-benziloxicarbonilamino-8-ciclohexil-5,5-difluoro-6-hidroxi-4-octanona, 0,354 g (4,6 mmoles) de acetato de amónio e 0,020 g (0,32 mmoles) de cianoboro-hidreto de sódio em 7 ml de metanol. Acidificou-se a mistura com 4 ml de ácido clorídrico IN e eliminou-se o dissolvente sob vazio, retomando-se o resíduo com água. Lavou-se a fase aquosa com éter dietílico e ajustou-se o pH da fase aquosa para 10. A extracç3o com éter dietílico deu a amina livre que se conver teu directamente na sua fornia N-BOC protegida. / (BOC)gO,

1,5 eq; tetrahidrofurano, temperatura ambiente/. Purificou-se o dicarbamato esperado por cromatografia em gel de sílica eluindo com acetato de etilo/ciclohexano a 1:1.

Exemplo 37

N^-(terc,—butoxicarbonil)—1-ciclohexil —4,4-di fluoro-3-hidroxi-2,5-octanodiamina

Preparou-se o composto em título, com um rendimento quantitativo, pelo processo descrito no Exemplo 7, a partir do dicarbamato obtido no Exemplo 36.

Exemplo 38

N^-(terc.-butoxicarbonil)-l-ciclohexil-4,4-difluoro-3-hidroxi-N -/~N-isovaleril-L-(θ-metil)-tirosil-L-n-valil/—2,5-octanodiamina

Pelo processo descrito no Exemplo 25, prepa/

4l rou-se o composto em título a partir de N-isovaleril-L-(0-metil)-tirosil-L-n-valina e da amina obtida no Exemplo 37.

Exemplo 39 e 2

N - (terc,-butoxicarbonil)-l-ciclohexil-4,4-difluoro-N -/~N-isovaieril-L-(O-me til)-tiro sil-L-n-valil7-3-oxo-2,5-octanodiamina

Preparou-se o composto em título pelo processo descrito no Exemplo 26, a partir do álcool obtido no Exemplo 38.

Exemplo 40

Cloridrato de l-ciclohexil-4,4-difluoro-N -/ N-isovaleril-L-(O-metil)—tiro sil-L—n-vaiÍ1/-3-OXO-2,5-oc tanodiamina

Preparou-se o composto em título de acordo com o processo descrito no Exemplo 27, a partir do carbamato obtido no Exemplo 39·

Seguindo as técnicas referidas anteriormente, assim como utilizando—se outras técnicas ou ainda por comparação com compostos conhecidos utilizáveis no tratamento das doenças mencionadas anteriormente, considera-se que é possível a um especialista na matéria pôr em prática a presente invenção. Evidentemente que na aplicação prática desta inven ção os compostos são de preferência formulados sob a forma de preparações farmacêuticas apropriadas, tais como comprimidos, cápsulas ou elixires para administração oral ou sob a forma de soluções estéreis ou suspensões para administra42 ção parenteral. Podem-se administrar os compostos da presente invenção a doentes (animais e seres humanos) que necessitem desse tratamento em doses repartidas, várias vezes por dia. Como se referiu anteriormente a dose variará dependente da gravidade da doença, do peso do doente e de outros factores reconhecidos por um técnico.

Os compostos descritos anteriormente são habi tualmente incorporados sob a forma de composições farmacêuticas como se descreve em seguida.

A quantidade necessária de um composto ou de uma mistura de compostos de fórmula geral I ou de um sal acei tável sob o ponto de vista fisiológico é misturada com um veí culo fisiologicamente compatível, excipiente, agente ligante, agente conservante, agente estabilizante ou agente apaladante, etc., sob a forma de uma unidade de dosagem como exige a prática farmacêutica aceite. A quantidade de substância activa nestas composições ou preparações é tal que permite a obtenção de uma dose apropriada no intervalo indicado.

Representativos de agentes adjuvantes que se podem incorporar em comprimidos e cápsulas e noutros, são os seguintes: um agente ligante tal como goma tragacanto, acácia, amido de milho ou gelatina; um excipiente tal como celulose microcristalina; um agente de desagregação, tal como amido de milho, amido pré-gelatinizado, ácido algínico, etc.; um agente lubrificante como o estearato de magnésio; um agen te edulcorante como a sacarose, lactose ou sacarina; um agente apaladante como a essência de hortelã-pimenta, a es- L3 - f /

sência de gaultéria ou de cereja. Quando a unidade de dosagem é constituída por uma cápsula esta pode conter além das substâncias do tipo citado anteriormente, um veículo líquido tal como um óleo gordo. Podem estar presentes outras substân cias diversas como agentes de revestimento ou para, de outro modo, modificarem a forma física da unidade de dosagem. Por exemplo, podem revestir-se os comprimidos com goma-laca, com açúcar ou com ambos. Um xarope ou um elixir pode conter o composto activo, sacarose como agente edulcorante, metilpara beno ou propilparabeno como agentes conservantes, um corante e um apaladante como a essência de cereja ou de laranja.

Às composições estéreis para injectáveis podem preparar-se de acordo com a prática farmacêutica convencional, mediante dissolução ou suspensão da substância activa em um veículo tal como água para injectáveis, um óleo vege tal de ocorrência natural, tal como o óleo de résamo, o óleo de cacau, o óleo de amendoim ou o óleo de semente de algodão etc., ou um veículo gordo sintético como, por exemplo, o ole ato de etilo, ou semelhante. Podem-se incorporar, se apropriado, agentes-tampão, agentes conservantes, agentes anti-oxidantes e outros.

Embora a presente invenção tenha sido descrita em relação aos seus aspectos específicos, entende-se que poderão existir outras modificações e este pedido de patente de invenção entende-se abranger quaisquer variações, aplicações ou adaptações desta invenção seguindo, em geral, os princípios da presente invenção e incluindo certos dis- 44 tanciamentos da presente descrição resultantes da prática conhecida ou habitual na técnica a que esta invenção pertence e como pode ser aplicada aos aspectos essenciais indicados anteriormente e de acordo com o âmbito das reivindicações apensas.

L

Claims

?_5_í_Y_í_N_Ç_í_Ç_è_S_2_5_s

1 / p^ representa His comportando facultativamente grupos de protecção CBZ, Tba ou Iva;

Ra representa um resto de aminoácidos do grupo representado por R escolhidos entre Gly, Vai, n-Val ou n-Leu;

Rb representa um átomo de hidrogénio;

Rz representa Leu ou ciclohexametilo;

R^ representa o resto do grupo representado por R escolhido entre Gly, Vai, n-Val ou n-Leu;

caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.

1.- Processo para a preparação de compostos de fórmula geral

RjNHCHC(0)CF₂CHNRaRb

R.

na qual,

R^ representa um grupo de fórmula geral ^P2^P3^P4 ^P5 ^{ou Ρ}2^Ρ3^Ρ4^Ρ5^ na qual

P representa um grupo de protecção amino terminal repre9 sentado por K, de preferência CBZ, Tba ou Iva;

P^ representa um -aminoãcido dos grupos C, E ou F ou de fórmula de preferência n-Val, n-Leu, His, (3-pirazolil)-Ala ou (4-pirimidinil)-Ala;

P3 representa um -aminoãcido dos grupos E ou F, ou está ausente, de preferência Nal(l), Phe ou O-metil-tirosina ;

P4 ou está ausente ou representa um -aminoãcido dos grupos D, E ou F, de preferência Pro, ^)-Ala ou ^-Val;

Ρ^ ou está ausente ou representa um -aminoãcido dos grupos C, E ou F, de preferência His;

R₂ representa um resto de um C\_-aminoãcido dos grupos E ou F, ou um grupo alquilo 0·^_θ, benzilo, ciclohexilmetilo, fenetilo ou 2-piridilmetilo, de preferência Leu ou ciclohexilmetilo ;

R^ representa um resto de um -aminoãcido dos grupos E, F ou G, ou um grupo alquilo C^_g, benzilo, ciclohexilmetilo, fenetilo ou 2-piridilmetilo, de preferência restos dos grupos E e G, ainda de maior preferência Gly, Vai, n-Val ou n-Leu;

Ra representa um ãtomo de hidrogénio ou um resto de um ciclohexilmetilo ou fenetilo, de preferência Gly, Leu, n-Val ou Ile;

Rb representa de preferência um átomo de hidrogénio, ou representa um grupo alquilo C^_g,· sendo os grupos C, D, E, F, G e K citados os seguintes: C: Ser, Thr, Gin, Asn, Cys, His, (3-pirazolil)-Ala, (4-pirimidinil)-Ala e os seus derivados N-metílicos;

D: Pro e Ind;

E: Ala, ^-Ala, Leu, Ile, Vai, n-Val, ^>-Val, Met, n-Leu ι 1 e os seus derivados N-metílicos;

F: Phe, Tyr, O-metiltirosina, (3-pirazolil)-Ala, (4-piri.

midinil)-Ala, Trp, Nal(l), e os seus derivados meti li.

cos ;

G: Gly, Sar;

K: acetilo (Ac), succinilo (Suc), Benzoílo (Bz), t-butiloxicarbonilo (Boc), carbobenzoxi (CBZ), tosilo (Ts), dansilo (DNS), isovalerilo (Iva), metoxi-succinilo (MeOSuc), 1-adamantanossulfonilo (AdSC^), 1-adamantanoacetilo (AdAc), 2- carboxibenzoílo (2-CBZ), fenilacetilo, t-butilacetilo (Tba), bis-/ (1-naftil)-metib/-acetilo (BNMA), os grupos de fórmulas ou de fórmula geral ~A-R na qual,

A representa um grupo

0 0 0 0 ll II II il

-C-, -N-C-, -0-C-, ou -S-;

I II

H 0

R_z representa um grupo arilo comportando 6, 10 ou 12 ãtomos de carbono comportando 1 ou 3 substituintes apropriados escolhidos, independentemente, entre ãtomos de flúor, cio ro, bromo ou iodo ou grupos trifluorometilo, hidroxi, alquilo contendo 1 a 6 ãtomos de carbono, alcoxi com 1 a 6 ãtomos de carbono, carboxi, alquilcarbonilamino em que o grupo alquilo comporta 1 a 6 ãtomos de carbono, 5-tetrazo lo, e acilsulfonamido comportando 1 a 15 ãtomos de carbono, com a condição de quando o grupo acilsulfonamido con-49- tituinte escolhido entre átomos de flúor, cloro, bromo ou iodo ou um grupo nitro;

e dos seus hidratos ou isoésteres ou sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto de se oxidar um composto de fórmula geral II

R.

R₁HN

CF.

NRaR_b

II na qual,

R_b representa um grupo alquilo C^_g ou P'^, representando P' um grupo protector, e de a referida oxidação se efectuar de acordo com os processos de oxidação (a), (b), (c) ou (d) seguintes:

(a) preparação in situ de um aducto de sulfõnio mediante reacção de cerca de 2 a 6 equivalentes de dimetilsulfóxido com cerca de 1 a 3 equivalentes de (CF^GO)₂0 ou de (COCl)?, no seio de um dissolvente inerte sob condições anidras a uma tempera tura compreendida entre -80°C e -50°C, contacto do referido aducto de sulfõnio com cerca de 1 equivalente de um álcool de fórmula geral II dissolvido num dissolvente inerte ou em quantidades mínimas de dimetilsulfóxido, que permitam a reac ção entre os reagentes a cerca de -50°C durante 10 a 30 minutos, e posterior adição de cerca de 3 a 10 equivalentes

-50(b) fazendo-se reagir um álcool de fórmula geral II com dicromato de piridínio por contacto dos reagentes entre si num peneiro molecular pulverizado absorvido em água na presença de ãcido acético glacial a uma temperatura compreendida entre cerca de O°C e 50°C;

(c) fazendo-se reagir um álcool de fórmula geral II com cerca de 1 a 5 equivalentes de um complexo de piridina-anidrido crõmico, formado in situ, no seio de um dissolvente inerte sob atmosfera inerte e condições anidras, sendo a reacção referida do álcool efectuada no seio da mistura reaccional de complexo de piridina-anidrido crõmico durante cerca de 1 a 15 horas;

(d) fazendo-se reagir um álcool de fórmula geral II com 1,1,1-triacetoxi-2,l-benzoxiodol-3(3H)-ona, no seio de um dissolvente inerte sob atmosfera inerte e condições anidras durante cerca de 1 a 48 horas; e de, após as reacções (a), (b), (c) ou (d), se efectuar, eventualmente, a desprotecção de qualquer amina protegida e cisão ulterior do grupo representado por P' .

2.- Processo de acordo com a reivindicação 1, para a prepara ção de compostos de fórmula geral I na qual representa um grupo de fórmula geral ^P2^P3^P4^P5' ^na '

P^ representa um aminoácido escolhido entre n-Val, n-Leu,

-51L· derivados N-metílicos;

representa um aminoácido escolhido entre, Nal(l), Phe ou um grupo de fórmula (p) H^CO-JÍ-C^-;

P4 representa um aminoãcido escolhido entre Pro, -Ala ou β -Ala ou β-Vai;

3. - Processo de acordo com a reivindicação 2, para a prepara ção de compostos de fórmula geral I, na qual

R_z representa um grupo ciclohexilmetilo, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.

4. - Processo de acordo com a reivindicação 2, para a prepara ção de compostos de fórmula geral I, na qual

-52r caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.

5.- Frocesso de acordo com a reivindicação 3, para a preparação de:

Cloridrato de 5-ciclohexil-2,2-difluoro-N, -/”N-isovaleril-L-(O-me4 — til)-tirosil-L-n-valil/-3-oxo-l,4-pentanodiamina;

Cloridrato de 5-ciclohexil-2,2-difluoro-N^-isoamil-N^-/ N-isovaleril-L-(O-metil)-tirosil-L-n-valil7-3-oxo-l,4-pentanodiamina; Cloridrato de l-ciclohexil-4,4-difluoro-N₂-/^—N-isovaleril-L-(O-metil) -tirosil-L-n-valil7~3-oxo-2,5-octanodiamina;

Cloridrato de l-ciclohexil-4,4-difluoro-N2~/~N-terc.-butilacetil-L-(O-metil)-tirosil-L-n-valil-7-metil-3-oxo-2,5-octanodiamina; Cloridrato de l-ciclohexil-4,4-difluoro-^-/^-N-terc.-butilacetil-L-(O-metil)-tirosil-L-n-valil/-6-metil-3-oxo-2,5-heptanodiamina; Cloridrato de 5-ciclohexil-2,2-difluoro-N^-/ N-isovaleril-L-(1-naftil)-alanina-L-n-valil/-3-oxo-l,4-pentanodiamina;

Cloridrato de 5-ciclohexil-2,2-difluoro-N^-/^-N-(1-terc.-butilsulfo niImetil-3-fenil-propanoí1)-L-n-valil/-3-oxo-l,4-pentanodiamina;

Cloridrato de 5-ciclohexil-2,2-difluoro-N^-/ N-isovaleril-L-(0-metil)-tirosil-L-(N-metil)-n-valil/-3-oxo-l,4-pentanodiamina; Cloridrato de 5-ciclohexil-2,2-difluoro-N^-/ N-isovaleril-L-fenila lanil-L-(N-metil)-n-valil/-3-oxo-l,4-pentanodiamina;

Cloridrato de 5-ciclohexil-2,2-difluoro-N^-isoamil-N^-/ N-isovale-53L mina;

Cloridrato de l-ciclohexil-4,4-difluoro-N^-/ N-terc.-butilacetil-L-(O-metil)tirosil-L-(N-metil)-n-valil/-6-metil-3-oxo-2,5-heptano diamina;

Lisboa, 27 de Outubro de 1989 O Ajoríc Ohoal da Prcprcdcdc .r.cLjsírial

RESUMO

PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE NOVOS ANÁLOGOS DE SUBSTRATOS DE PEPTIDASE

Descreve-se um processo para a preparação de novos análogos de certos compostos de fórmula geral

R,NHCHC(0)CF,CHNRaRb ¹ I ²I

Ro Ro em que o átomo de azoto da ligação amida cindível foi substituído por um radical difluorometileno em que o grupo carbonilo da ligação amida adjacente está substituído por uma função amina terminal, que consiste na oxidação de um composto de fórmula geral II

NRaR

II por um processo escolhido entre os processos descritos em (a) , (b), (c) ou (d) seguintes (a) preparação in situ de um aducto de sulfõnio mediante reacção de cerca de 2 a 6 equivalentes de dimetilsulfõxido com cerca de 1 a 3 equivalentes de (CF^CO) 2<3 ou de (COCl^/ uo seio de um dissolvente inerte sob condições anidras a uma temperatura compreendida entre -80°C e -50°C, contacto do referido aducto de sulfõnio com cerca de 1 equivalente de um álcool

-55ί de fórmula geral II dissolvido num dissolvente inerte ou em quantidades mínimas de dimetilsulfóxido, que permitam a reac ção entre os reagentes a cerca de -50°C durante 10 a 30 minutos, e posterior adição de cerca de 3 a 10 equivalentes de uma amina terciária para determinar a reacção referida;

(b) fazendo-se reagir um álcool de fórmula geral II com dicromato de piridínio por contacto dos reagentes entre si num peneiro molecular pulverizado absorvido em água na presença de ãcido acético glacial a uma temperatura compreendida entre cerca de O°C e 50°C;

(c) fazendo-se reagir um álcool de fórmula geral II com cerca de 1 a 5 equivalentes de um complexo de piridina-anidrido crõnvi co, formado in situ, no seio de um dissolvente inerte sob atmosfera inerte e condições anidras, sendo a reacção referi da do álcool efectuada no seio da mistura reaccional de com plexo de piridina-anidrido crómico durante cerca de 1 a 15 horas;

(d) fazendo-se reagir um álcool de fórmula geral II com 1,1,1-triacetoxi-2,1—benzoxiodol-3(3H)-ona, no seio de um dissolvente inerte sob atmosfera inerte e condições anidras durante cerca de 1 a 48 horas; e de, após as reacções (a), (b), (c) ou (d), se efectuar, eventualmente, a desprotecção de qualquer amina protegida e cisão ulterior do grupo representado por P'g·

Os novos compostos são análogos de substratos de peptidase e