PT86785B

PT86785B - Processo para a preparacao de derivados de naftaleno e de composicoes farmaceuticas que os contem

Info

Publication number: PT86785B
Application number: PT86785A
Authority: PT
Inventors: David Thomas Connor; Paul Charles Unangst; Robert James Weikert
Original assignee: Warner Lambert Co
Priority date: 1987-02-20
Filing date: 1988-02-18
Publication date: 1992-05-29
Also published as: ATE89556T1; IE880125L; DK84088A; IE61482B1; DE3881073D1; EP0279466A3; EP0279466A2; NO880731L; NZ223477A; FI880748A; JPS63222161A; ZA88385B; AU596054B2; NO880731D0; EP0279466B1; FI880748A0; AU1111988A; KR880009948A; US4767776A; DE3881073T2

Description

Estão descritas diversas N— lH-tetrazol-5-ϋ— -carboxamidas utilizadas como agentes anti-alêrgicos. Particularmente, a Patente dos Estados Unidos nómero 4 432 986 pu de Fevereiro de 1984 descreve carboxamidas poli blicada em 21 cíclicas que possuem a fórmula

Ar

I hidrogénio ou alquilo inferior (C_rC₄) ---fQ » °

N--N em que Ar engloba o policiclo!

N.

Contràriamente à descrição da Patente dos Estados Unidos com o número 4 432 906, a presente invenção refe re—se a um composto que possui um radical alcoxi ou alquil-tio na posição 1 da 2-naftaleno-carboxamida· Isto ê, o con** . junto dos substituintes dos compostos da presente invenção e diferente daquele que se descreve na Patente dos Estados Unidos número 4 432 966.

De facto, a Patente dos Estados Unidos número 4 432 986 refere-se a substituintes particulares para compostos anti-alérgicos especialmente poderosos. Assim, aquela Memória Descritiva ê completamente distinta do objectivo dos compostos da presente invenção. Além disso, descobriu-se agora que os compostos da presente invenção sao inibidores parti cularmente poderosos de libertação de histamina de basúfilos humanos o que constitui uma situaçao contrária à esperada por um especialista na matéria para os compostos descritos na Patente dos Estados Unidos número 4 432 986. De facto, os policiclos de 3-metoxi-naftaleno descritos anteriormente na Paten te 4 432 986 nao inibem a libertação de histaminas dos basúfi los humanos.

De menor interesse sao os conhecimentos sobre os compostos descritos nas Patentes dos Estados Unidos números 3 887 574, as quais sao amidas de amino-tetrazol e cromonas substituídas por ácido, xantonas e antraquinonasj 414535Q os quais sao compostos triciclicos seleccionados que possuem grupos tetrazolilo entre os substituintes; 4 147 694, os quais sao 8-(lH-tetrazol-5-il-carbamoil)quinolinas opcionalmente substituidas} e 4 232 024, os quais sao também compostos que englobam uma parte COX em que X pode ser tetrazoli1-5-amino.

Aí Aí

Tais compostos sao anti-alérgicos mas nao acrescentam qual2

quer conhecimento ao nível de especialidade pertinente à presente invenção.

De modo semelhante, os pedidos de Patente (atribuídos ao inventor da presente invenção) que descrevem uma parte tetrazolil-5-amino-carbonilo sao os dos Estados Uni dos com os números de Série 790664 e 7θθϋ1· Contudo, os compostos de tais pedidos de Patente sao derivados de benzofurano ou benzo-tiofeno e de sistemas de anel indol respectivamen

A, te. Entre as utilizações para os compostos destas Patentes en contra-se a anti-alergia.

RESUMO DA INVENÇÃO

A presente invenção constitui um novo composto da fórmula (I)

em que X é oxigénio ou enxofrei R^ ê alquilo de um a doze âto mos de carbono e R, e R_ sao independentemente hidrogénio, al

X â — quilo inferior, alcoxi inferior, mercapto, halogéneo, trifluoro-metilo, (alquil inferior)-tio, (alquil inferior)-sulfinilo, (alquil inferior)-sulfonilo, hidroxi, nitro, amino, mono-alquilo inferior ou di-(alquil inferior)-amino, ou R^ e R^ considerados em conjunto sao dioxi-metileno, com a condição «W A# de nao estarem presentes os estados de oxidaçao mista do enxo frej ou os seus sais farmaceuticamente aceitáveis.

A presente invenção também descreve composiçoes farmacêuticas que incorporam os compostos de fórmula I e os métodos para o tratamento de alergia nos mamíferos, particularmente no homem, que deles precisem.

ί

DESCRIÇÃO PORMENORIZADA

Alquilo de 1 a 12 átomos de carbono significa metilo, etilo, propilo» butilo» pentilo» hexilo» heptilo, octilo» nonilo, decilo» undecilo, dodecilo e os seus isómeros.

Alquilo inferior ê uma cadeia de hidrocarbone to de um a seis átomos de carbono englobando metilo» etilo» propilo» butilo» pentilo ou hexilo e os seus isómeros.

Alcoxi inferior ê um radical de um a seis áto mos de carbono englobando metoxi» etoxi, propoxi, butoxi, pen toxi ou hexoxy e os seus isómeros.

Halogéneo significa flfior, cloro, bromo ou io do· anel tetrazol nos compostos da presente invenção existe numa forma tautomêrica tal que o hidrogénio es1 2 tá quer no átomo N qur no N do anel, isto ê,

Η H

Todavia» por conveniência, apresenta-se aqui o átomo de hidrogénio aparecendo unicamente no átomo N ·

Designam-se os novos compostos de fórmula I por derivados de naftaleno devido aos anéis benzo fundidos. Os anéis fundidos numeram-se no sentido dos ponteiros do . relógio a partir do átomo de carbono que possui XR^ ligado conforme se indica a seguirí

Alguns dos compostos abrangidos pela fórmula

I sao preferidos» uma vez que possuem um efeito farmacológico mais vantajoso.

Os grupos R^ e Rg estão ligados de preferencia as posiçoes 5~ e 6- ou 7- e o-.

Mais preferencialmente os grupos R e R estao ligados a posição 6- ou 7- e representam independentemente quer o hidrogénio quer o metoxi respectivamente e em que ê isopropilo.

composto mais preferido é 7“’»etoxi-l-( 1-metil-etoxi)-N-lH-tetrazol-5-il-2-naftaleno-carboxamida·

Em geral» o procedimento para a preparaÇao dos novos compostos da presente invenção é o que se mostra no seguinte Esquema

_ 5-

KHCO₃ ou

MeOCOgMgOMe

COOMe

MeOH <-----BF^.EtgO

1. OH

2. H⁺

^h2ⁿX\ II

N—N

N^\ /=-N ¹ [=7-pJ

Aquece-se um composto de tetralona de fórmula 3 em que e Rg possuem as significações anteriores (comercialmente disponível ou preparado segundo a síntese de Haworthj por exemplo, ver L. F. Fieser e A.M. Seligam, J» Amer» Chem Soc.170 (1938)) com enxofre no sentido de aromatizar a tetralona e de produzir naftol de fórmula 4, possuindo R^ e Rg conforme definidos antes. Por exemplo, ver A. J. Shand e R. H. Thom son, Tetrahedron, 19 1919 51963)· Faz-se a carboxilaçao do na ftol da fórmula 4. para produzir Acido naftoico de fórmula 5 possuindo R^ e Rg conforme definidos antes através da utiliza

Λ, M çao deí 1) procedimentos de utilização de bicarbonato de potássio análogos à reacçao de Kolbe-Schmittj ver A.S. Lindsey e H.Jeskey, Chem* Rev. 57, 5θ3 (1957) ou, 2) procedimento de utilização de metil-carbonato de magnésio (conhecido como rea gente de Stiles) análogo ao de ”L. A. Cate, Synthesis, 3θ5 (1983). Esterifica-se o ácido naftoico da fórmula 5 para proporcionar o ester do ácido enol naftóico de fórmula 6 possuin do R^ e Rg conforme definidos antes, e depois faz-se a alquilaÇao do grupo OH enólico da fórmula 6 para proporcionar o es ter alcoxi de fórmula £ ^em Q^{ue R}2 ^e possuem as signifi caçoes anteriores. Os reagentes para alquilaçao englobam os halogenetos de alquilo, sulfonatos de alquilo e iso-ureias.

Ver L.J.Mathias. Synthesis, 561, (1979)· Frequentemente os es teres alcoxi de fórmula 7 sao óleos e o produto bruto é sapo nificado para proporcionar ácidos alcoxi de fórmula 8 em que R^, Rg e R^ possuem as significações anteriores. Converte-se o ácido da fórmula 8 no carbamoil-tetrazol de fórmula I con forme definido antes, fazendo o acoplamento com 5“amino-tetra zol. Os reagentes de acopulamento podem englobar l,l’-carbo nil-di-imidazol, DCC(l,3-diciclo-hexil-carbo-di-imida), ou ou tros reagentes de acopulamento de péptidos.

Os sais dos compostos da fórmula I podem prew Λ Λ parar-se por reacçao com bases inorgânicas ou organicas conforme de descreve a seguir.

No esquema II apresenta-se uma via de síntese alternativa para os intermediários de fórmula 6·

- 7 Esquema II

(Sequência observada

V idêntica à no esquema

I)

Faz-se a conversão da tetralona da fórmula 3 definida para o Esquema I, em cetoéster enÓlico de fórmula 9 em que R^ e Rg possuem as significações anteriores, por carbo xilaçao com carbonato de dimetilo e com hidreto de sódio. Este procedimento ê análogo ao de D. W. Johnson e L. N. Mander, Aust.J.Chem. 27 > 1277 (1974). Para uma via análoga adicional para proporcionar um composto de fórmula j), ver W.E. Bachmann e D. G. Thomas, J_. Amer. Chem. Soc. , 64, 94 (1942). Faz-se a bromaçao do ester da fórmula 9 com N-bromo-succinimida na pre •y sença de um iniciador de radical livre. Os catalisadores que se podem utilizar para este objectivo englobam peróxido de benzolilo ,ός,^ί-azo-isobutiro-nitrilo (·ΆΙΒΝ^Μ), e outros. Trata -se o intermediário bromo-ester de fórmula 10 em que R^ e R_gpossuem significações anteriores, com uma base para efectuar a desidro-halogenaçao e para proporcionar o ester de naftaleno enol da fórmula 6· Entre as bases que se podem utilizar considera-se a piridina, Ν,Ν-dietil-anilina, 1,8-diaza-biciclo/5·4.07undec-7-eno (DBU”), e outras.

Os materiais de partida necessários para os processos descritos na presente invenção ou existem comercial mente disponíveis ou podem sintetizar-se por métodos conhecidos na especialidade.

Os compostos de fórmula I sao úteis na forma de Ócido livre, na forma de sais de bases, e na forma de sais de adiçao de acido. As tres formas estão englobadas no âmbito da presente invenção. Na prática, a utilização da forma de sal & melhor do que a utilização da forma de base.

Os sais farmaceuticamente aceitáveis apropria dos do âmbito da presente invenção sao os que derivam de ácidos minerais tais como o ácido clorídrico e o ácido sulfúrico» e de ácidos orgânicos tais como o ácido metano-sulfónico, ácido benzeno-sulfónico, ácido p-tolueno-sulf6nico e semelhantes, que proporcionam o cloridrato, sulfamato, metano-sulfonato, benzeno-sulfonato, p-tolueno-sulfonato e semelhantes, respec-

tivamente, ou os que derivem de bases tais como as bases orgâ nicas e inorgânicas adequadas. Os exemplos de bases inorgânicas adequadas para a formaçao de sais de compostos da presente invenção englobam os hidróxidos, carbonatos, e bicarbonatos de amónia, sódio, lítio, potássio, cálcio, magnésio, alumínio, zinco e semelhantes·

Os sais também se podem formar com bases orgá nicas adequadas· As bases adequadas para a formaçao de sais de adiçao de bases farmaceuticamente aceitáveis, com compos4W A ** tos da presente invenção, englobam as bases organicas que nao sejam tóxicas e que sejam suficientemente fortes para formar tais sais· Estas bases orgânicas constituem uma classe cujos limites sao facilmente apreendidos pelos especialistas na matéria. Apenaspara objectivos de ilustração, pode dizer-se que essa engloba as mono-, di-, e tri-alquil-aminas, tais como metil-amina, dimeti1-amina, e trietil-aminaj mono-, di- ou tri-hidroxi-alquil-aminas tais como mono-, di-, e tri-etanol-aminaí aminoácidos tais como arginina e lisina} guanidinaj N-metil-glucosamina} N-metil-piperazinaJ morfolinaj etileno-diamina5 N-benzil-fenetil-aminaj tris-(hidroxi-metil)-amino-metanoj e semelhantes. (Ver por exemplo, Pharmaceutical SábtsP J. Pharm. Sei. , 66(1), 1-19 (1977)·)

Os sais de adiçao de ácido dos referidos compostos alcalinos preparam-se dissolvendo a base livre do composto I numa solução aquosa ou alcoólica aquosa ou outros sol ventes adequados que contenham a base ou o ácido apropriado,

Μ «V e isolando o sal por evaporaÇao da solução, ou fazendo reagir a base livre do composto I com um ácido, e também fazendo reagir o composto I que possua um grupo ácido com uma base de tal modo que as reações se efectuem num solvente orgânico, o que origina que neste caso o sal se separa directamente ou se possa obter por concentração da solução.

Os sais de bases de compostos de fórmula I descritos antes preparam-se fazendo reagir a base apropriada »

c?~ >

com um equivalente estequiométrico de compostos ácidos de fór mula I para proporcionar os respectivos sais de base farmacologicamente aceitáveis·

Os sais de soluçoes ácidas dos referidos compostos alcalinos preparam-se dissolvendo a base livre numa so luçao aquosa ou alcoólica aquosa ou noutros solventes adequados que contenham o ácido apropriado e isolando o sal por eva poraçao da solução, ou fazendo reagir o ácido e a base livres num solvente orgânico, sendo possível neste caso a separaçao directa do sal ou a sua obtenção por concentração da solução.

Os compostos da presente invenção também podem existir nas formas de hidrato ou de solvato.

Os produtos das reacções aqui descritas isoextracçao, destila lam-se por meios convencionais tais como a çao, cromatografia e semelhantes· nao abrangida pea fórmula I da pre de

A actividade anti-alêrgica las expectativas dos compostos que possuam sente invenção demonstra-se por um ensaio de determinação inibição de libertação de histamina de basófilos humanos (HHEÍ): Apresenta-se adiante uma descrição do registo para o ensaio HHB.

** A

Deste modo, preparam-se composiçoes farmacêuticas a partir dos compostos da fórmula I e dos seus sais con A# forme descritos na presente invenção, em formas de dosagem unitária que incorporem o composto isolado ou em mistura com um veículo farmaceuticamente aceitável adequadamente seleccio nado entre os conhecidos.

Qualquer módico ou veterinário de especialida de normal determina facilmente um paciente que apresente sintomas alérgicos ou inflamatórios. Independentemente da via de administraçao seleccionada, os compostos da presente invenção

sao formulados em formas de dosagem farmaceuticamente aceitável segundo métodos convencionais conhecidos na especialidade farmacêutica.

Os compostos podem administrar-se em formas orais de dosagem unitária» tais como as pastilhas» cápsulas» pílulas» pôs» ou grânulos. Também se podem administrar rectal ou vaginalmente em formas tais como os supositórios ou velas. Também se podem introduzir parenteralmente (por exemplo subcutânea» intravenosa» ou intra-muscularmente) utilizando formas conhecidas na especialidade farmacêutica. Também de podem introduzir directamente na área afectada (por exemplo» na for* ma de gotas para os olhos ou por inalaçao). Para o tratamento de estados alérgicos ou inflamatórios tais como eritema» os compostos da presente invenção também se podem administrar to picamente na forma de unguento» creme» gels ou semelhantes. Em geral» prefere-se a via de administração oral.

Aí

No tratamento utiliza-se uma quantidade nao tóxica e eficaz de composto I. 0 especialista médico ou veterinário determinará facilmente e prescreverá a quantidade efi caz do agente anti-alérgico ou anti-inflamatório necessária

A» para evitar ou interromper a progressão do estado de saúde. 0 regime de dosagem selecciona-se de acordo com uma diversidade de factores que englobam o tipo, idade, peso, sexo e estado médico do mamífero» a gravidade dos sintomas da doença que se

Aí pretende tratar, a via de administraçao e o composto particular de fórmula I utilizado. Nos seus procedimentos, o médico ou o veterinário poderá utilizar inicialmente dosagens relativamente baixas, aumentando posteriormente a dose até que se obtenha uma resposta máxima. Por conveniência, a dosagem diáAí ria total pode dividir-se e administrar-se em porçoes ao longo do dia» se desejado.

As dosagens iniciais dos compostos da presente invenção que possuem a fórmula I estão normalmente compreendidas entre 10 mg e 2 g por dia oralmente., de preferên12

cia entre 10 mg e 5θθ mg por dose oral, administrando-se uma a quatro vezes por dia ou conforme necessArio. Quando se utiA* lizam outras formas de administraçao utilizam-se doses equiva lentes.

Deve subentender-se que as composiçoes e méto dos de tratamento da presente invenção, conforme descrito antes, também englobam o Acido livre, os sais de adiçao de Acido e sais de base farmacològicamente aceitAveis dos compostos de fórmula I.

Os exemplos seguintes ilustram melhor a inven w AT A* *W çao mas nao lhe impõem qualquer limitação.

EXEMPLO I

6-metoxi-l-naftalenol

Agitou-se uma mistura de 50,0 g (0,28 mol) de 6-metoxi-l-tetralona e de 9,2 g (0,29 mol) de enxofre elementar e aqueceu-se a 25O-26O°C durante 3 horas (até cessar a li bertação de Acido sulfidrico na forma de gAs). Arrefeceu-se a mistura e depois submeteu-se a destilação de balao para balaa Dissolveu—se o destilado em 300 ml de diclorometano e extraiu -se a solução com uma solução de hidróxido de potAssio 1,0 N (3 x 150 ml) combinaram-se os extractos, arrefeceu-se em gelo e acidificou-se com Acido clorídrico a 10% para precipitar o

A, produto naftol bruto na forma de uma goma. A trituração da go ma com éter terc-butil-metílico proporcionou 16,8 g (34% de rendimento) de naftol analiticamente puro, pf 84-86°C (foi apresentado um pf 83—84°C por M.P. Sibi, J. W. Dankxardt, e V Snieckus, J· Org. Chem. 51, 271 (1986)).

Calculado para C H 0 :

C, 75,84} H, 5-79 Encontrado C, 75,66} H,5,59·

A partir da tetralona apropriada, segundo um procedimento analogo ao anterior, também se preparou:

EXEMPLO 2

5-metoxi—l-naftalenol pf 13Ó-138°C (foi apresentado um pf de -138^oC por Μ.P. Sibi e outros, obra citada antes). Calculado para θιχ^Ηιο°2’

C, 75,84} H, 5,79

Encontrado C, 75,88} H, 5,84,

I36EXEMPLO 3

7-metoxi-l-naftalenol pf 1O5-1O7°C (foi apresentado um pf de 103-105°C por A.J. Shand e R. H. Thomson, Tetrahedron, 19, 1919 (1963))

Calculado para ^ch^hio°2^!

C, 75,84} H, 5,79

Encontrado C, 75,49» H, 5,85, e

EXEMPLO 4

7-(l-metil-etoxi)-l-naftalenol

Mp 127-129°.

Calculado para

C, 77,20} H, 6,98

Encontrado C, 77,48} H, 6,87·

EXEMPLO 5

3,4-di-hidro-7-hidroxi-l(2H)-naftaleno

Agitou-se um balão contando 164 g (1,42 mol) de cloridrato de piridina numa atmosfera de azoto e aqueceu-se a 190°C. Decorridos 3θ minutos adicionou-se 5θ,0 g (0,28

mol) de 7-metoxi-l-tetralona numa sÓ porção e manteve-se o aquecimento a 190°C durante duas horas· Arrefeceu-se a mistura e verteu-se sobre 2^0 Kg de gelo/Agia· Filtrou-se o preci pitado sólido e lavou-se com Agua para proporcionar 37,7 g (97% de rendimento do produto fenol analiticamente puro, pf 154-156°C (foi apresentado um pf de 159θΟ por J.V. Braun., Ann., 451, 1 (1927))))· Calculado para Η^θΟ,^ί

C, 74,06; H, 6,21 Encontrado C, 74^06; H, 6,22.

EXEMPLO 6

3,4-di-hidro-7- (1-metil-etoxi )-l( 2H)-naftalenona

Agitou-se uma suspensão de 24,3 g (0,22 mol) de terc-butóxido de potAssio em 240 ml de dimetil-sulfóxido sob uma atmosfera de azoto e arrefeceu-se em banho de Agua fria enquanto se adicionava gota a gota uma solução de 29,2 g (0,18 mol) de 3,4-di-hidro-7-hidroxi-l(2H)-naftalenona em 400 ml de dimetil-sulfóxido, durante 45 minutos. Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante mais 45 minutos e depois adicionou-se uma só porção de 23,7 ml (31,0 g} 0,25 mol) de 2-bromo-propano. Depois de se agitar durante mais 30 horas, adicionou-se a mistura a 2,0 kg de gelo/Agua e extraiu-se com dicloro-metano (4 x 300 ml). As camadas orgânicas combinadas lavaram-se com Agua (2 x 150 ml), secaram-se (sulfato de magnésio anidro) e evaporoii-se (vAcuo) para proporcionar um _ *** óleo residual. A purificação por cromatografia intermitente (gel de sílica, eluiçao com dicloro-metano) do resíduo propor cionou 24,0 g (65% de rendimento) do produto êter analiticamente puro na forma de um óleo, adequado para conversão do na ftol descrito no Exemplo 4.

Calculado para C H ^0 :

C, 76,44} H, 7,90

Encontrado C, 76,44; H, 7,86.

EXEMPLO 7

Acido l-hidroxi-6-metoxi-2-naftaleno-carboxilico

Colocou-se uma mistura de 14,0 g (0,080 mol) de 6-metoxi-l-naftalenol e de 100 ml (0,25 mol) de uma solução 2,5 M de metil-carbonato de magnésio em Ν,Ν-dimetil-forma mida num reactor de 300 cc vedado e pressurizou-se a 55θ psi (55O x 6,9 x 10^ Pa) com azoto· Aqueceu-se o reactor a 180° C durante seis horas sem agitaÇao* arrefeceu-se e depois adicio nou-se a mistura de reacçao a 1,75 kg de gelo/Agua· Acidificou—se a mistura com Acido clorídrico aquoso 6,0 N. Filtrou-ee o produto bruto precipitado, agitou-se com 35θ ml de Agua fresca? e filtrou-se novamente· Dissolveu-se o sólido com aquecimento numa solução de 600 ml de bicarbonato de sódio ** ** aquoso a 5% ® descorou-se a solução com carvao activado. Arre feceu-se o filtrado depois do tratamento com carvao, lavou-se com acetato de etilo (2 x 400 ml), arrefeceu-se com gelo e acidificou—se novamente com Acido clorídrico aquoso 6,0 N.Fil trou-se o produto precipitado e lavou-se com Agua para propor cionar 14^0 g (80% de rendimento) de hidroxi Acido analiticamente puro, pf 188°C (decomposição)· Calculado para ^^2^10^4’

C, 66,05) H, 4,62 Encontrado C, 66,36) H, 4,74.

Segundo um procedimento anAlogo ao descrito no Exemplo 7, utilizando o naftol apropriado, também se prepa rou:

EXEMPLO 8

Acido 1-hidroxi-5-metoxi-2-nafta leno-carboxi li co

Pf 197°C-decomposiçao (foi apresentado um pf de 212,5“213°C por P. Hill. W. F. Short, e H. Stromberg, J· Chem. Soc., 937 (1937))·

Calculado para θ^2^1Ο^Ο4*θ’²5^Η2^Οί

C, 64,71} H, 4,75

Encontrado C, 64,38} H, 4,75»

EXEMPLO 9

Acido l-hidroxi-7-metoxi-2-naftaleno-carboxilico

Pf 196°-dec.

Calculado para θ₁2^1Οθ4*θ’^5^0: C, 64,71} H, 4,75

Encontrado C, 65,06} H, 4,62, e

EXEMPLO 10

Acido l-hidroxi-7-(1-metil-etoxi)-2-naftaleno-carbox£lico

Pf 189° dec.

Calculado para

C, 68,28} H, 5,73

Encontrado C, 68,29} H, 5,76.

EXEMPLO 11

Ester metílico do Acido l-hidroxi-7-metoxi—2-naftaleno-carboxílico

Tratou-se uma suspensão de 6,2 g (0.028 mol) de ácido l-hidroxi-7—metoxi-2-naftaleno-carboxllico em 75 ml de metanol, sob uma atmosfera de azoto, durante 15 minutos com 15,0 ml (17,3 g} 0,12 mol) de eterato de trifluoreto de boro. Agitou-se a mistura ao refluxo durante 45 horas, arrefe ceu-se e adicionou-se lentamente a 50θ ml de uma solução de bicarbonato de sódio aquosa a 5% arrefecida com gelo. Filtrou -se o produto precipitado, lavou-se com água para proporcionar 6,0 g (92% de rendimento) do ester, pf 8O-83°C, adequado * para posterior utilizaÇao de síntese. Uma amostra purificada por cromatografia (gel de sílica, eluição com dicloro-metano)

demonstrou ser analiticamente pura, pf 79-81°C (foi apresenta do um pf de 81-82°Cpor Μ. E. Alonso, A.W. Chitty, S. Pekerar, e M. de L. Borgo, J. Chem. Soc. Chem. Cotnm. 1542 (1984)).

Calculado para C,

5,21

Encontrado C, 67,335 H, 5,18.

Segundo um procedimento análogo ao descrito no Exemplo 11, utilizando o ácido carboxílico apropriado, tam bám se preparouí

EXEMPLO 12

Ester metílico do ácido 1—hidroxi—2—naftaleno—carboxilico

Pf 74-76°C (foi apresentado um pf de 76-77°C

J. Ch^em· Soc. Perk. , 465

por N. J.P.	Broom e P. G.	Sammes,
(1981))
Calculado	para	^C12^H10°3^:
	c,	71,28} H,	4,98
Encontrado	c,	71,06; H,	5,03,

EXEMPLO 13

Ester metílico do ácido 1—hidroxi-5—nietoxi-2—naftaleno-carboxílico

Pf 114-116°C (foi apresentado um pf de 118-119°C por P. Hill, e outros, obra citada anteriormente).

Calculado para ^ci^^Hi2°4^:C, 67,23; H,

5,21

5,14,

Encontrado C, 67,37» H,

EXEMPLO 14

Ester metílico do ácido 1—hidroxi-6-metoxi-2-naftaleno—carboxí li co

Pf 108-110°.

Calculado para

C, 67,23} H, 5,21

Encontrado C, 67,275 H, 5,1J, e

EXEMPLO 15

Ester metílico do ácido l-hidroxi-7~(l~metil-etoxi)-2-naftn leno-carboxílico

Pf 77-79°.

Calculado para C^gO^:

C, 69,225 H,

Encontrado C, 69,175 H,

6,20

6,45.

EXEMPLO 16

Acido 6-metoxi-l-(l-metil-etoxi)-2-naftaleno-carboxílico

Tratou-se uma suspensão de 5»2 g (0,046 mol) de terc-butóxido de potássio em 45 ml de dimetil-sulfóxido, sob uma atmosfera de azoto durante 20 minutos com uma solução de 7,5 g (0,032 mol) de ester metílico do ácido l-hidroxi-6-metoxi-2-naftaleno-carboxílico em 80 ml de dimetil-sulfóxido Agitou-se a mistura durante 45 minutos e depois tratou-se uma porção com 4,6 ml (6,0 gj 0,049 mol) de 2-bromo—propano. Agitou—se a mistura à temperatura ambiente durante 72 horas e de pois adicionou-se·a 750 g de gelo/água· Separou-se o interme«M diário alcoxi-ester por extracçao com dicloro—metano (3 ^x 150 ml). Os extractos orgânicos combinados lavaram-se com água (1 x 200 ml), com uma solução de hidróxido de potássio aquosa a 0,5 N (2 x 200 ml), e novamente com água· Secou-se a camada orgânica (sulfato de magnésio anidro) e evaporou-se (vácuo) para proporcionar 7,9 g (90% de rendimento) do intermediário bruto ester metílico do ácido 6-metoxi-l-(1-metil-etoxi)-2-na ftaleno-carboxilico na forma de um óleo amarelo.

Dissolveu-se o residuo bruto total anteriormente descrito em 5θ ml de metanol e tratou-se com uma solução de 4,2 g (0,075 mol) de hidróxido de potássio em 50 ml de égua· Agitou-se a mistura ao refluxo durante duas horas, arre feceu-se e adicionou-se a 5θθ g de gelo/água. A acidificaçao com ácido clorídrico 6,0 N proporcionou o produto ácido carbo xilico bruto na forma de uma goma· Extraiu-se a goma com dicloro-metanô (3x75 ml), e os extractos combinados lavaram-se com água (1 x I50 ml), secaram-se (sulfato de magnésio anidro) e evaporou-se. A trituração do resíduo com éter/hexano proporcionou 5,7 g (68% de rendimento) do produto ácido carboxilico analiticamente puro, pf 138-141°C.

Calculado para

C, 69,21J H,

6,20

Encontrado C, 69,54} H, 6,16.

Degundo um procedimento análogo ao descrito no Exemplo 16, utilizando o ester hidroxi apropriado, também se preparou!

EXEMPLO 17

Acido l-(l-metil-etoxi)-2-naftaleno-carboxílico

Pf 109-111°.

Calculado para ί

C, 73*02} H, 6,13

Encontrado C, 73,135 H, 6,38,

EXEMPLO 18

Aci do 5-me t oxi-1- (1-met i 1- etoxi )- 2-na f t a leno- carboxi li co

Pf 129-131°.

Calculado para

C, 69,21} H,

6,20

Encontrado C, 68,91} H, 5,96,

EXEMPLO 19

Acido 7-metoxi-1- (1-met i 1- et oxi )-2-na f ta leno- carboxi li co

Pf 106-109°

Calculado para

C, 69)21} H, 6,20 Encontrado C, 68)98} H) 6)32) e

EXEMPLO 20

Acido l,7-bis(1-metil-etoxi)-2—naftaleno-carboxilico

Pf 90-92°.

Calculado para

C) 70,81} H, 6,99 Encontrado C, 70,72} H, 7)11·

EXEMPLO 21

Acido l,7-dimetoxi-2-naftaleno-carboxilico

Tratou-se uma mistura de 3)7 g (0,016 mol) de ester metllico do Acido l-hidroxi-7-metoxi-2-naftaleno-carboxilico e de 2,9 g (0,021 mol) de carbonato de potássio anidro em 20 ml de Ν,Ν-dimetil-formamida, sob uma atmosfera de azoto, com 3,0 ml (6,8 g} 0,048 mol) de iodo-metano. Agitou-se a mis tura â temperatura ambiente durante 24 horas e depois adicionou-se a 150 g de gelo/água* 0 ester intermediário bruto sepa rou-se por extracçao com dicloro-metano (3 x 5θ ml). As camadas orgânicas combinadas lavaram-se com água (2 x 50 ml), secaram-se (sulfato de magnésio anidro) e evaporou-se (vácuo).

Saponificou-se o resíduo bruto total obtido anteriormente, conforme descrito no Exemplo 16. A produção de ácido carboxilico analiticamente puro foi de 2,7 g (73% de rendimento)· pf 13O-132°C.

- 21 Calculado para ^c ₁₃ ^Hi2°4^J

C, 67,23» H,

Encontrado C, 67,32} H,

5,21

5,23

EXEMPLO 22

6-metoxi—1-(1—metil-etoxi)—N-lH-tetrazo1-5-11-2—naftaleno-car boxamida

Agitou-se ao refluxo durante uma hora uma mis tura de 4,5 gramas (0,017 mol) de ácido 6-metoxi-l~(l-metil-etoxi)-2-naftaleno-carboxílico e de 3,2 g (0,020 mol) de 1,1’-carbonil-di-imidazol em 40 ml de acetonitrilo, sob uma atmosfera de azoto. Arrefeceu-se a mistura com 1,7 g (0,020 mol) de 5-»®ino-tetrazol anidro e com 5,6 ml (4,1 gj 0,040 mol) de trietil-amina e agitou-se novamente ao refluxo durante 5 horas. Arrefeceu-se a mistura de reacçao, adicionou-se a 500 g de gelo/água e acidificou-se com ácido acético glacial. Filtrou-se o precipitado sólido e lavou-se com água para proporcionar 5,4 g (97% de rendimento) do produto carbamoil-tetrazol analiticamente puro, pf 265°C—decomposição.

Calculado

Encontrado C, 58,89i H, 5,30}

N, 21,40

N, 21,00.

Segundo um procedimento análogo ao descrito no Exemplo 22, utilizando o ácido carboxílico apropriado, tam bóm se preparou:

EXEMPLO 23 l-(l-metil-etoxi)-N-lH-tetrazol-5-il-2-naftaleno-carboxamida

Pf 267° dec.

Calculado para C__H__N_0_:

15 5 2

C, 60,59} H, 5,09} N, 23,56

Encontrado C, 60,795 H, 5,335 N, 23,55,

EXEMPL024

1,7- dimet oxi-N-1H—t etra zo1-5-i1-2-na f taleno-carboxamida

Pf 242° dec.

Calculado para C^M^N^O S

C, 56,18; H, 4,38} N, 23,4o

Encontrado C, 56,22} H, 4,25} N, 23,13,

EXEMPLO 25

5-metoxi-l-(l-metil-etoxi)-N-lH-tetrazol-5-il-2-naftaleno-carboxamida

Pf 278° dec.

Calculado para C^gH^^N^O^í

C, 58,725 H, 5,24} N, 21,40

Encontrado C, 58,43} H, 5,18} N, 21,54,

EXEMPLO 26

7-metoxi-l-(1-metil-etoxi)-N-IH-tetrazol-5-i1-2-naftaleno-carboxamida

Pf 252° dec.

Calculado para C_, Η N 0 !

lo 17 5 3 C, 58,72} H, 5*24} N, 21,40

Encontrado C, 58,32} H, 5,04} N, 21,49, e

EXEMPLO 27

1,7-bi s(1-meti1-etoxi)-N-1H-1etrazo1-5-i1-2-na ftaleno-carboxamida

Pf 235° dec.

Calculado para ^13^21^5^3'

C, 60,83} H, 5,96} N, 19,71

Encontrado C, 60,44} H, 5*82} N, 19,78.

vr

J _„χ·

EXEMPLO 28

Sal de sódio de 6—metoxi—1-(1-metil—etoxi )-N-lH—tetrazol-5· -il-2-naftaleno-carboxamida

Tratou-se uma suspensão de 3,27 g (0,010 mol) de 6-metoxi-l-(1-metil-etoxi)-N-lH-tetrazol—5-il-2-naftaleno-carboxamida em 30 ml de metanol com 5,0 ml de uma solução de hidróxido de sódio aquosa 2,00 N. Submeteu-se a mistura a um banho de vapor durante vêrios minutos e filtrou-se quente. Evaporou—se o filtrado arrefecido (vácuo) até metade do seu volume original. Arrefeceu-se a solução em banho de gelo e filtrou-se o precipitado sólido e lavou-se diversas vezes com metanol frio para proporcionar 3,0 g (87% de rendimento) de sal de sódio analiticamente puro, pf 190°C (decomposição). Calculado para ^C16^H16^N5°3^Na!

C, 55ϊθΐ; H, 4,62} N, 20,05 Encontrado C, 55,03} H, 4,81} N, 20,09EXEMPLO 29

Sal de sódio de 7-metoxi-l-(1-metil-etoxi)-N-lH—tetrazo1-5-i1-2-na ftaleno-carbaxamida

Tratou-se uma suspensão de 5)5 g (0,017 mol) de 7-metoxi-l-(1-metil-etoxi)-N-lH—tetrazol-5-il-2-naftaleno-carboxamida em 200 ml de metanol com 8,5 ml de uma solução de hidróxido de sódio aquosa 2,00 N. Submeteu-se a mistura a um banho de vapor durante 10 minutos e filtrou-se quente. Eva porou-se o filtrado arrefecido (vScuo) até à secura e dissolveu—se novamente o resíduo diversas vezes em 2—propanol e vol tou a evaporar-se. A trituraÇao do resíduo final com acetonitrilo proporcionou 5,1 g (86% de rendimento) do sal de sódio analiticamente puro contendo 0,25 equivalentes de égua de hidrataçao, pf 193“197°C.

Calculado para C^^H^^N^O^Na·0. 2511^0:

C, 54,31} H, 4,70} N, 19,80

Encontrado C, 54,06} H, 4,53» N, 19,66

EXEMPLO 30

Ester metálico do ácido

1,2,3,4-tetra-hidro-6-metoxi-l-oxo-2

-naftaleno-carboxi11co

Agitou-se e aqueceu-se ao refluxo uma suspensão de 24,0 g (0,60 mol) de hidreto de sódio (dispersão a 60% em óleo mineral) e de 49,5 ml (52,9 gí 0,59 mol) de carbonato de dimetilo (recentemente destilado a partir de hidreto de só dio) em 240 ml de tetra-hidrofurano, sob uma atmosfera de azo to. Manteve-se o refluxo enquanto se adicionava gota a gota, durante duas horas, uma solução de 29,7 g (0,17 mol) de 6-metoxi-l-tetralona em 105 ml de tetra-hidrofurano. Depois de se completar a adiçao, agitou-se a mistura ao refluxo durante mais 90 minutos, arrefeceu-se com gelo e tratou—se gota a gota com 36 ml de ácido acético glacial, seguindo-se 450 ml de gelo/água· A mistura de reacçao de duas fases extraiu-se com acetato de etilo (4 χ 25O ml) e as camadas orgânicas combinadas lavaram-se com água (1 x 600 ml), com uma solução de bicarbonato de sódio aquosa a 5% (3 x 600 ml) e novamente com água. Secou-se o extrato de acetato de etilo (sulfato de sódio anidro) e evaporou-se (vácuo). Pulverizou-se o resíduo e agitou-se em 500 ml de hexano. A filtraçao proporcionou 37,9 g (96% de rendimento) do produto ester, pf. 79-81°C, adequado para posterior síntese. Uma amostra purificada por destilação de balao para balao, seguida por recristalizaçao a partir de hexano/acetato de etilo apresentou-se analiticamente pura, pf. 82-84°C (foi apresentado um pf. de 88-89°C por J. Jacques e A. Horeau, Buli. Soc. Chem. France, 512 (1950))·

Calculado para C^Oji

C, 66,65; H,

6,02

Encontrado C, 66,69} H, 6,00.

EXEMPLO 31

Ester metílico do ácido l,2,3,4-tetra-hidro-2-bromo-6-metoxi-1-oxo-2-naftaleno-carboxili co

Tratou-se uma solução de 5»2 g (0,022 mol) de ester metílico do ácido l,2,3,4-tetra-hidro-6-metoxi-l-oxo-2—naftaleno—carboxilico em 40 ml de clorofórmio» sob uma atmos fera de azoto» com 4,4 g (0,025 mol), em diversas porçoes, de N-bromo-succinimida, seguindo-se 0,025 g (0,00015 mol) de pí, ¢(-azo-bis-isobutira-nitrilo. Agitou-se a mistura ao refluxo durante uma hora, arrefeceu-se com gelo e diluiu-se com 3° ml de hexano. Filtrou-se e eliminou—se o subproduto de succinimi da precipitado. A evaporaçao (vácuo) do filtrado e a recrista lizaçao do resíduo a partir de êter/êter do petróleo proporcionou 5»T g (73% d® rendimento) de bromo-ester analiticamente puro, pf. 99-101°C.

Calculado para ^Cj3^Hi3^BrO4^:

C, 49,86} H, 4,18; Br, 25,52 Encontrado C, 49,79} H, 4,16; Br, 25,40.

EXEMPLO 32

Ester metílico do ácido 1—hidroxi—6-metoxi-2-naftaleno-carboxílico

Durante 15 minutos tratou-se uma solução de 10, 2 g (0,033 mol) de ester m tllico do ácido 1,2,3,4-tetra~hidro-2-bromo-6-metoxi-l-oxo-2-naftaleno—carboxilico em 100 ml de tetra-hidrofurano, sob uma atmosfera de azoto, com uma solução de 10,0 ml (10,2 g; 0,067 mol) de 1,8cdiaza-biciclo/5.4.07undec-7-eno em 20 ml de tetra-hidrofurano. Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 16 horas, depois adicionou-se a 450 g de gelo/água· A acidificaçao com ácido clorídrico 6,0 N precipitou o produto ester de naftaleno bruto. Filtrou-se o sólido, lavou-se com água e recristalizou-se a partir de metanol aquoso para proporcionar 5,1 g (67% de rendimento) do produto final, pf. 109-lll°C. Este material apresentou-se idêntico ao que se preparou pelo procedimento des- 26 -

crito no Exemplo 11.

A utilidade dos compostos da presente invena* ** çao como inibidores de libertação de histamina demonstra-se pelos ensaios seguintes, particularmente o ensaio para a libertação de histamina a partir de basófilos humanos ou HHB. Conforme geralmente aceire entre os especialistas na matéria, o ensaio HHB destina-se essencialmente a demonstrar actividade que possua a utilidade única de tratar as doenças ou estaΜ «V dos conforme referido na presente invenção. Em adiçao, o ensaio de anafilaxia do pulmão fragmentado, ou FLAT é geralmente aceite entre os especialistas na matéria para demonstrar actividade que possua a utilidade de tratar as doenças ou estados aqui referidos^ Segue-se uma descrição de cada pro cedimento.

LIBERTAÇÃO DE HISTAMINA A PARTIR DE BASÓFILOS HUMANOS (a seguir designado por HHB) ensaio HHB quantifica a libertaÇao de hista mina activa e sua inibição pelos fármacos, a partir de basófi los do sangue humano. Assim, o ensaio proporciona uma avaliaçao dos compostos de férmula I para o tratamento de estados ou doenças conforme referido na presente invenção. Conforme aqui descrito, o ensaio engloba as modificações do método des crito por R. P. Siraganian em ”An Automated Continuous-Flow System for the Exctraction and Fluorometric Analysis of Hista mine, Anal. Biochem., ££, 303-394 (1974).

MÉTODOS

Preparaçao de Leucécitos

Extrairam-se 70 ml de sangue de doadores alér gicos (escolhidos com base em adequada histamina induzida por um estímulo), utilizando métodos normalizados de venipunctura» e colocaram-se em Vacutainers de 10 ml com 0,08 ml/tubo com

15% de EDTA em água como anti-coagulante. Colocaram-se as amos tras de sangue num misturador rotativo durante um curto perío do de tempo· Toda a superfície do vidro em contacto com o san gue ê tratada com silício· Estabelecem-se aliquotas de sangue em très tubos centrífugos de plástico de 5θ ml e anota-se o volume· Adiciona-se ”Hespan” (amido de hidroxi-etilo), 0,5 ml por 1,0 ml de sangue. Faz-se a inversão dos tubos diversas ve zes para conseguir a mistura e deixam-se em repouso à tempera tura ambiente até se observar jjona separaçao brusca entre as células vermelhas precipitadas e o plasma rico em plaquetas e leucócitos. Isto ocorre normalmente decorridos 35-45 minutos.

Pipeta-se a fracçao de plasma e coloca-se em dois tubos centrífugos de plástico de 5° ml limpos. Faz-se a centrifugação dos tubos durante 12 minutos a 4°C numa centrifugador Sorvai Rc-3” com um rotor HL-8 a 1050 r.p.m. (100 g). As plaquetas permanecem no plasma e sao eliminadas. Agita—se suavemente a massa de leucócitos para fazer a disrupçao do agregado de células e lava-se duas vezes conforme descritos

Primeira lavagem. Adicionam-se cinco ml de tampao HA com 0,005 M de EDTA às células dispersas em cada tu bo e centrifuga-se suavemente. Depois adiciona-se 25 ml de tampao e centrifuga-se suavemente. De novo se faz a centrifugação das amostras conforme descrito antes. Elimina-se o sobrenadante e faz-se a dispersão suave do agregado de células de cada tubo.

Segunda lavagem. Adiciona-se a cada tubo 5 ml

A. A* de tampao HA com EDTA, para novamente fazer a suspensão das células. Depois, os leucócitos sao agregados num tubo e ajusta—se o volume para 40 ml com tampao HA com EDTA e centrífuga -se suavemente· A amostra agregada é centrifugada a 1050 r.p. m. durante 12 minutos. Elimina-se o sobrenadante fluido e faz -se a dispersão do agregado de células. Adicionam-se dezasseis ml de tampao HACM às células lavadas e centrifuga-se suavemente. Prepara-se uma amostra para hematologia, onde se

efectua uma contagem total das células brancas do sangue e das plaquetas utilizando um Coulter Counter”.

Adicionam-se aliquotas (0,1 ml) de células aos tubos de ensaio contendo 0,4 ml quer de Acido perclérico a 6% (para o teor de histamina total), veículo de controlo (para li bertaçao espontânea) quer o fArmaco. Faz-se a incubação dos tubos à temperatura ambiente durante 8 minutos e depois colocam-se* em banho de Agua a 37°C durante mais dois minutos. Adi cionam-se ao tubo os agentes tampao ou estimulador (a 37 CJ e faz-se a incubaÇao durante mais 45 minutos a 37°C. Seguidamen te centrifugam-se os tubos a 2000 r.p.m. (1200 g) durante trâs minutos para agregar as células e vertem-se os sobrenadantes em copos de ensaio.

Preparaçao do FArmaco

A*

Prepara-se uma solução para armazenamento de

300 ;uM de cada composto de ensaio do modo seguinteí pesa-se uma quantidade apropriada de composto (peso molecular/33,33) ® coloca-se num balao de 100 ml e adiciona-se 0,5 ml de DMSO. Se o composto nao se dissolver facilmente aquece-se com suavi dade sobre uma placa quente e adiciona—se aproximadamente 30 ml de Agua destilada. Se o composto estiver em solução, utili za-se Agua destilada para ajustar o volume até ao total de 100 ml. Se o fArmaco nao estiver em solução, adiciona-se 0,2 ml de NaOH 1 N (ou HC1) e depois adiciona-se Agua destilada para proporcionar 100 ml de solução total· Dilui-se 5 ml da solução (lí2) com 5 ml de tampao HACM (Hepes Albumin Calcium Magnesium) concentrado duas vezes, para proporcionar a concen traçao de trabalho 150 juM. Ao adicionar-se as células e ao fa ctor estimulante, resulta um fArmaco com uma concentração de ensaio final de 100 ^ιΜ (400 μΐ de fArmaco, 100 μΐ de células e 100 ^μΐ de agente estimulante ou v ículo). Fazem-se diluições adicionais com tampao HACM para 33, 10, 3,3, 1,0 pM, etc.

Preparaçao do Agente Estimulante

de

Foram fornecidos extractos de tasneira e p6 doméstico (Greer Laboratories, Inc.) como extractos aquosos em concentrações em 40.000 e 10.000 unidades de azoto pro teico por mililitro (PNU/ml)^ respectivamente. As soluções aquosas de anti-IgE anti-soro (anticorpo desenvolvido no coelho) a4quirem-se em Dako na Accurate Chemicals. Utiliza-se o tripeptido f-met-leu-phe (fmlp) da Vega Biochemicals. As solu çoes aquosas de tasneira, pé doméstico e anti-IgE diluem-se na proporção de 1J2 com HACM concentrado duas vezes e diluem-se depois com HACM para proporcionar concentrações finais de 6000 PNU/ml para a tasneira e pé doméstico e uma diluição na proporção de 1ί5θ para o anti-IgE anti-soro. Para o fmlp dissolve-se 28,5 mg do tripeptido em 1 ml de DMSO ou em 1 ml de ácido acético glacial, depois adiciona-se 49 ml de água desti lada e 5θ «ni de HACM concentrado duas vezes, para proporcionar uma concentração final de 600 em HACM. Ajusta-se o pH para 7,4. Preparam-se mais diluições para as soluçoes de trabalho em jtampao HACM. Todas as soluçoes de reserva e de traba lho sao armazenadas a 4 C. As soluçoes de trabalho sao constituidas por 1/6 do volume final na reacçao celular, pelo que as soluçoes de trabalho dos agentes estimuladores se ajustam seis vezes à concentração final necessária (isto é 600 /iM de f-met-leu-phe proporcionam uma concentração final de 100 pM. na reacçao celular).

Pro.jecto de Registo

Com as amostras fizeram-se experiências em triplicado, utilizando quer tubos de reacçao de 1,5 ml tapados com polipropileno, quer tubos de plástico de 5,0 ml desta pados. Os compostos de ensaio e os agentes estimuladores pre— param-se em tampao HACM, conforme descrito anteriormente. Uti lizam-se pipetas de volume fixo.

Adiciona-se o composto de ensaio ou o veículo

Λ ** ** de controlo aos tres tubos de reacçao a 1,5 x a concentração final desejada (isto ê, 400 ^.1 de composto de ensaio por 600

pl de volume total de reacçao). Adiciona-se uma centena de /11 i de células a cada tubo e faz-se a incubaÇao da mistura durante oito minutos à temperatura ambiente e durante oito minutos a 37°C antes do antigeno ou outro agente estimulador. Depois adiciona-se uma centena de pl de agente estimulador a 6x a con centraçao final e faz-se a incubação da mistura final a 37° ^cdurante 45 minutos em banho de água com agitaÇao. Isto garante que a preparaçao celular está constantemente em suspensão.

Λ» Λ»

Interrompe-se a reacçao por centrifugação a 2000 r.p.m. duran te três minutos a 4 C. Verte-se o sobrenadante (aproximadamen te 500 pl) em provetas de 2,0 ml de auto-analizador e determi na—se a histamina pelo método fluorométrico.

Em cada experiência, as células de um doador sao estimuladas com um ou vários agentes estimuladores, de acordo com o registo projectado e de acordo com a sensibilida de prèviamente determinada aos agentes estimuladores particulares* As concentrações de tasneira e de pé doméstico expressam-se em PNU/ml, os estimuladores fmlp indicam-se em concentração micromolar (pM), e o anti-IgE anti-soro e os estimulaλ, dores C5a indicam-se na forma de diluições, por exemplo, IE-5 (1:100.000), 3E-5 (1:30.000), e 1E-4 (1:10.000).

Cálculo e Interpretação dos Resultados

A concentração total de histamina nas amostras totais” (tratadas com ácido) devem ser de 15 ng/ml para ser aceitável. A libertação expontânea de histamina a partir das células nao deve exceder 15% do total de histamina e frequentemente é menor 5%· A percentagem máxima de histamina liberta da varia com o doador. A quantidade líquida libertada pelo agente estimulador deve exceder 25% da histamina celular to4M tal para se avaliar com confiança a inibição feita pelos comA postos ensaiados. A libertação de histamina expontânea subtrai-se dos totais” e das células estimuladas para se calcu lar a libertação percentual líquida· A inibição percentual cal cula-se utilizando a férmula seguinte:

libertação percentual(%)líquida média das amostras tratadas./ libertaÇao percentual(%)líquida média para os grupos de j controlo estimulados | x 100 = % de inibição

Utilizando o ensaio HHB demonstra—se geralmen te pelos exemplos ensaiados que os compostos de fórmula I ini ί ** _ I bem a libertação de histaminas dos basófilos humanos estimula dos com antigeno, pelo que possuem actividade diferente da que é esperada por um vulgar especialista na matéria.

Os resultados apresentam-se na tabela seguinte!

Ensaio HHB

TABELA

Exemplo NO	% de inibição de libertaÇao de hista mina com o estímulo anti—IgE (ensaia· da a /*33 pM_7 )
23	16
24	57
25	11
22	71
26	91
27	0 para as doses mais elevadas ensaiadas.
	Em consequência, a presente invenção também

engloba uma das doenças composição farmacêutica para o tratamento de uma ou estados referidos anteriormente, constituida por uma quantidade eficaz, anti-doença ou anti-estado, de um composto de fórmula I conforme definido antes, em conjunto com um veículo farmaceuticamente aceitável.

A presente invenção ainda engloba um método para o tratamento de uma das já referidas doenças ou estados dos mamíferos, incluindo o homem, que delas sofram, o qual

consiste em administrar a tais mamíferos oral ou parenteralmente, de preferência oralmente, uma correspondente composição farmacêutica que contenha um composto de fórmula I confor me definido anteriormente, numa forma de dosagem uniíária apro priada·

Para a preparaçao de composiçoes farmacêuticas a partir dos compostos descritos na presente invenção, os veículos inertes farmaceuticamente aceitáveis podem ser sólidos ou líquidos. As preparações na forma sólida englobam os pôs, pastilhas, grânulos dispersíveis, cápsulas, comprimidos e supositórios. 0 veículo sólido pode ser constituido por uma ou várias substâncias que também actuam como diluentes, agentes aromatizantes, solubilizadores, lubrificantes, agentes de suspensão, ligantes ou agentes de desintegração das pastilhas. Também pode ser um material para encapsular. Nos pós, o veícu lo é um composto activo finamente dividido, nas pastilhas mis tura-se o composto activo com um veículo que possua as necessérias propriedades ligantes em proporçoes adequadas e compac ta-se na forma e dimensões desejados. Os pós e pastilhas contêm de preferência desde 5 ou 10 até aproximadamente 70 por cento de ingrediente activo. Os véículos sólidos adequados sao o carbonato de magnésio, estearato de magnésio, talco,açó. car, lactose, pectina, dextrina, amido, gelatina, goma alcantira, metil-celulose, carboxi-metil-celulose de sódio, uma ce ra de baixo ponto de fusão, manteiga de cacau e semelhantes. 0 termo «preparaçao” pretende englobar a formulação de compos to activo com o material de encapsular como veículo que proporciona uma cápsula na qual o componente activo (com ou sem outros veículos) fica rodeado pelo veículo, estando assim em associaçao com ele. Do mesmo modo se englobam os comprimidos. As pastilhas, pós, comprimidos e cápsulas podem utilizar-se como formas de dosagens sólidas adequadas para administraçao oral.

Para a preparaçao de supositórios funde-se pri ‘ meiro uma cera de baixo ponto de fusão tal como uma mistura de glicéridos de ácidos gordos ou manteiga de cacau, e nela

se faz a dispersão homogénea do ingrediente activo por agitaçao. Depois verte-se a mistura homogénea fundida em moldes de dimensões convenientes, deixando-se arrefecer e solidificar.

As preparações na forma líquida englobam as

A* A* soluçoes, suspensões e emulsões. Como exemplo pode referir-se as soluçoes em água ou em água/propileno-glicol para injecção parenteral. As preparações líquidas também se podem formular

AZ «v numa solução aquosa de polietileno-glicol. As soluçoes aquoAZ sas adequadas para utilização oral podem preparar-se dissolvendo o componente activo em água e adicionando corantes, aro matizantes, estabilizadores e agentes espessadores adequados, conforme desejado. As suspensões aquosas adequadas para utili zaçao oral podem preparar-se dispersando o componente activo finamente dividido em água, com material viscoso, isto 6, gomas naturais ou sintéticas, resinas, metil-celulose, carboxi-metil-celulose de sódio, e outros agentes de suspensão bem conhecidos.

Também se englobam as preparações na forma só lida que se pretendem converter imediatamente antes de se uti lizarem, em preparações na forma líquida para administraçao oral ou parenteral. Tais formas líquidas englobam soluçoes e emulsões. Estas preparações de forma sólida particular sao mais convenientemente proporcionadas em forma de dose unitária e deste modo utilizam-se para propiciar uma unidade de do sagem líquida simples. Em alternativa, pode proporcionar-se sólido suficiente de modo que após a conversão para a forma líquida se possam obter doses líquidas individuais múltiplas > ** por medição de volumes pre-determinados da preparaçao na forma líquida, com uma seringa, uma colher de chá, ou com outro recipiente volumétrico. Quando se preparam deste modo doses líquidas múltiplas é preferível manter a porção nao utilizada de tais doses líquidas a baixas temperaturas (isto é sob refrigeração) no sentido de atrasar a possível decomposição.

As preparações na forma sólida que se pretende converter na forma líquida, podem conter para além do material activo, aro

matizantes, corantes, estabilizadores, tampões, edulcorantes i artificiais e naturais, dispersantes, espessadores, agentes [ de solubilizaçao e semelhantes. 0 líquido utilizado para a pre ] paraÇao da forma líquida pode ser Agua, Agua isotónica, eta- | i nol, glicerina, propileno-glicol, e semelhantes, e também as ( suas respectivas misturas. Naturalmente, o líquido utilizado será escolhido em função da via de administração, por exemplo, as preparações líquidas que contenham grandes quantidades de etanol nao sao adequadas para utilização parenteral· | ί

I

De preferência a preparaçao farmacêutica en- j contra-se na forma de dosagem unitária» Nessa forma, a preparaçao subdivide-se em doses unitárias que contenham quantidades apropriadas do componente activo. A forma de dosagem unitária pode ser uma preparaçao ambalada, contendo a embalagem quantidades descretas de preparaçao, por exemplo, pastilhas embaladas, cápsulas, e pós em frascos ou ampolas. A forma de dosagem unitária também pode ser uma cápsula, comprimido ou a própria pastilha ou pode ser o número apropriado de quaisquer destas formas embaladas.

A quantidade de composto activo numa dose uni tária de preparaçao pode variar ou ajustar-se desde 10 mg até 2.000 mg, de preferência desde 10 até 5θ0 mg, de acordo com a aplicaçao particular e a potência do ingrediente activo. Se desejado, as composiçoes também podem conter outros agentes terapêuticos compatíveis.

Claims

REIVINDICAÇÕES ia a preparaçao de um composto da fórmula geral que X é oxigénio ou enxofre} é alquilo de um a doze átomos de carbono} sao independentemente hidrogénio, alquilo inferior, alcoxi inferior, mercapto, halogéneo, trifluorometilo, alqiil—tio inferior, alquil—sulfinilo inferior, alquil—sulfonilo in ferior, hidroxi, nitro, amino, mono alquilo inferior ou di al quil-amino inferior, ou considerados em conjunto sao metileno -dioxi, com a condição de S nao peder estar simultaneamente em estados de oxidaÇao diferentes} e sais farmaceuticamente aceitáveis correspondentes, posto da fórmula gearl caracterizado por se tratar um com

COOH sao como em que R^, R posto da fórmula anteriormente com um com — 36 — racterizado por

Ν--Ν

Processo de acordo com ser isopropilo reivindicação

1, ca3^a racterizado por

Processo de acordo

X ser oxigénio.

com reivindicação

1» ca4a -

Processo de acordo com reivindi caçao

1, racterizado por a

R_n e R_o estarem nas posiçoes 5 e 6 ou 7 e X A ca—

8.

Processo de acordo com a reivindicação 3, caracterizado por se obter 6-metoxi-l-(1—metiletoxi)-N-lH-tetra zo1-5-i1-2-na ftaleno carboxami da·

- 6a

Processo de acordo com a reivindicaÇao 5, ca37 - racterizado por se obter um sal de sódio

- 7a Processo racterizado por se obter -2—na ftaleno-carboxami da de acordo com a reivindicação 3,

1- ( 1—metil—etoxi )—N-1H— tetrazol-5-ϋ ca—

Processo de acordo com a reivindicação 3, caracterizado por se obter 1,7-dimetoxi—N-lH-tetrazol-5-il-2-na ftaleno-carboxamida·

- 9* -

Processo de acordo com a reivindicação 3» caracterizado por se obter 5-metoxi-l-(1-metil-etoxi)-N-lH-tet ra zo 1- 5-i 1- 2-na f t a leno carboxami da .

- 10ô -

Processo de acordo com a reivindicação 3, caracterizado por se obter 7—metoxi-1-(1-metiletoxi)—N-lH-tetra zol—5-i1-2-naftalenocarboxamida·

- lia Processo de acordo com a reivindicação 10, ca_

- 38 racterizado por se obter um «al de «ódio*

- 12« ar

Processo de acordo com a reivindicação 3, caracterizado por «e obter l,7~bis(l-metil-etoxi)-N-lH-tetrazol

-5-il—2-naftalenocarboxamida.

- 13« Processo para a preparaçao de uma composição farmacêutica para tratar doenças ou condições que tem um efei to benéfico na inibição da libertação de histamina a partir de basúfilos caracterizado por «e incorporar como ingrediente activo uma quantidade eficaz de um composto quando preparado de acordo com a reivindicação 1 em associaÇao com um veíeulo farmaceuticamente aceitável.

A requerente declara que o primeiro pedido desta patente foi apresentado nos Estados Unidos da América em 20 de Fevereiro de 19θ7s sob o número de série 016,811.