PT799239E

PT799239E - Derivados diastereomericamente puros de 3-oxo e 3-tioxo-4-aza-androstano e a sua utilizacao como anti-androgenos

Info

Publication number: PT799239E
Application number: PT95942689T
Authority: PT
Inventors: Ambrogio Magni; Vincenzo Olgiati; Stefano Poli; Pierangelo Girardello; Paride Grisenti
Original assignee: Polichem Sa
Priority date: 1994-12-23
Filing date: 1995-12-18
Publication date: 2002-02-28
Also published as: US6147213A; DE69523622D1; ATE207929T1; EP0799239B1; DE69523622T2; ITMI942626A0; EP0799239A2; IT1271325B; WO1996020210A2; ITMI942626A1; AU4387296A; ES2163538T3; DK0799239T3; WO1996020210A3

Description

DESCRIÇÃO

DERIVADOS DIASTEREOMERICAMENTE PUROS DE 3-OXO E 3-TIOXO-4-AZA-ANDROSTANO E A SUA UTILIZAÇÃO COMO ΑΝΤΙ -ANDRÓGENOS A presente invenção tem por objecto derivados de aza-esteroides, em particular derivados diastereomericamente puros de 3-oxo e 3-tioxo-4-aza-androstano possuindo, na posição 17β, um grupo carboxilico ligado, por meio de uma ligação amido, a uma amida quirálica primária com o átomo de carbono assimétrico na posição oí e a sua utilização como agentes anti-andrógenos e ainda as composições farmacêuticas que os contêm.

Antecedentes da invenção A testoesterona, o principal agente andrógeno presente na corrente sanguínea, actua directamente em muitos tecidos alvo, como um metabolito reduzido, isto é, como di-hidrotestoesterona. A conversão em di-hidrotestoesterona é mediada pelo enzima 5-a-reductase, que está presente em alguns dos tecidos alvo. A di-hidrotestoesterona tem uma elevada afinidade com os receptores de andrógenos como a própria testoesterona, além de que o complexo hormona-receptor é mais estável (Kaufman M., Pinsky L.; J. Steroid Biochem. 1983, 18, 121-5; Wilbert D. M., Griffin J. E., Wilson J. D.; J. Clin. Endocrinol. Metab. 1983, 56, 113-20).Os inibidores do enzima 5-a-reductase ligam-se fortemente ao enzima, interferindo assim no processo de transformação da testoesterona em di-hidrotestoesterona .

Até agora, são conhecidos da literatura um certo número de exemplos de inibidores do enzima 5-a-reductase; alguns deles têm 1 uma estrutura esteroidal (Rasmusson, G.H.; Reynolds, G. F.; Steimberg, N. G.; Walton, E.; Patel G. F.; Liang T.; Cacsieri M. A.; Cheung A. H.; Broocks J.R.; Berman C; Azasteroids; Structure-Activity Relationship for Inhibition of 5-a-reductase and of Androgen Receptor Binding; J. Med. Chem.; 1986, 29, 2298-2315. Holt D. A.; Levy Μ. A.; Oh H. J.; Erb J. M.; Heaslip J. I.; Brandt M.; Lan-Hargest Η. Y.; Metcalf B. W.; Inhibition of Steroid 5-a-reductase by Unsaturated 3-Carboxysteroids; J. Med. Chem. 1990, 33, 943-950) e outros são não esteroidais (patente de invenção EP 0 291 245 A2).

As patologias ligadas a questões de hiperandrogenicidade, nas quais se podem utilizar estas moléculas (hiperplasia prostática benigna, acne vulgar, seborreia, calvície, hirsutismo feminino)são muito frequentes. Embora a terapia com este tipo de medicamentos tenha provado ser efectiva, no entanto, no que respeita à qualidade de vida oferecida aos que sofrem destes problemas, não está isenta de efeitos secundários, e é por isso que há necessidade de novos desenvolvimentos de inibidores mais potentes que sejam mais selectivos e melhor tolerados (Charles D. J. e outros; Nonsteroidal Inhibitors of Human Type 1 Steroid 5-a-reductase; J. Med. Chem.; 1993; 36; 421-423).

Um 4-aza-esteroide cunjugado, na posição 17β, com um ácido y-amino (ácido γ-aminobutírico) é conhecido da patente de invenção 0 271 220. Na patente de invenção citada antes, reivindica-se um processo para a preparação de um certo número de compostos oxidados na ramificação carbamoílo na posição 17.

Agora, verificou-se, surpreendentemente, que entre todos os derivados dos aminoácidos ensaiados, aqueles que suportam um átomo 2

de carbono assimétrico na posição α relativamente ao grupo carboxilo do aminoácido, têm uma actividade inibidora marcante sobre o enzima 5-a-reductase. De facto, por exemplo, enquanto o derivado contendo o aminoácido glicina na posição 17 (composto Vd) provou ser um inibidor médio do enzima antes referido, todos os aminoácidos com um centro assimétrico na posição α relativamente ao grupo carboxilico, provaram ter uma acção inibidora relevante.

Descrição da invenção A presente invenção tem por objecto compostos diastereomericamente puros de fórmula geral (A): y

R (A)

I H 1 na qual: a ligação carbono-carbono na posição 1-2 pode ser simples ou dupla, o símbolo X representa iam átomo de oxigénio ou de enxofre; o símbolo Ri representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo C1-C.4 de cadeia linear ou ramificada; o símbolo Y representa um resíduo de um aminoácido de fórmula geral

-NH-CH-T 3

na qual: o símbolo T representa um grupo -CH2OH; o símbolo Q representa a ramificação de um α-aminoácido natural da série (L) ou da série (D) ; o símbolo Y representa um grupo de fórmula geral -NH-M, na qual o símbolo M representa um grupo alquilo C1-C4, cicloalquilo ou arilalquilo C7-C14 com um centro assimétrico na posição <x da função amina; os seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico e as formas diastereoméricas e enantioméricas simples.

Um primeiro grupo de compostos preferidos são os compostos de fórmula geral (A) na qual o símbolo Ri se escolhe entre os grupos etilo, metilo ou um átomo de hidrogénio, o símbolo Y representa um grupo de fórmula geral -NH-CH-T, na qual os símbolos Q e T têm os

I

Q significados definidos antes; ou o símbolo Y representa um grupo de fórmula geral -NH-M, na qual o símbolo M tem o significado definido antes.

Um segundo grupo de compostos particularmente preferidos são os compostos de fórmula geral (A) na qual o símbolo Ri representa um átomo de hidrogénio ou um grupo metilo, o símbolo Y representa um grupo de fórmula geral -NH-CH-T, na qual os símbolos Q e T têm í

Q os significados definidos antes; ou o símbolo Y representa um grupo de fórmula geral -NH-M, na qual o símbolo M tem o significado definido antes. 4 f

Particularmente preferidos são os compostos de fórmula geral (A) na qual: - o símbolo X representa um átomo de oxigénio; o símbolo Ri representa um grupo metilo; o símbolo Y representa a D(+)-a-metilbenzilamina e a ligação carbono-carbono na posição 1-2 do anel esteroidal é uma ligação simples (composto Vg); - o símbolo X representa um átomo de oxigénio; o símbolo Ri representa um grupo metilo; o símbolo Y representa a L(-)-a-metilbenzilamina e a ligação carbono-carbono na posição 1-2 do anel esteroidal é uma ligação simples (composto Vh).

Exemplos de grupos alquilo Ci-Cs de cadeia linear ou ramificada são os grupos metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, n-butilo, sec-butilo, ter-butilo, n-pentilo, neo-pentilo, hexilo e octilo.

Exemplos de grupos alquilo C4-C14, tal como definido para o símbolo M, são os grupos: 2-butilo, 2-pentilo, 2-hexilo, 3-hexilo, 2-heptilo, 3-heptilo, 2-octilo, 3-octilo, 4-octilo, 2-decilo, 4-decilo.

Exemplos de grupos ciloalquilo C4-C14, tal como definido para o grupo representado pelo símbolo M são os grupos: 1-metilciclopropilo, 1-metilciclobutilo, 1-metilciclopentilo, 1-metilciclohexilo.

Exemplos de grupos arilalquilo Cb-C™, tal como definido para o grupo representado pelo símbolo M, são os grupos: a-metilbenzilo, a-etilbenzilo, a-propilbenzilo, a-metil-l-naftilo, a-metil-2-naftilo. 5

Exemplos de grupos representados pelo símbolo Q, que representam a ramificação do α-aminoácido natural de fórmula geral -NH-CH-T, são os resíduos de Ala, Glu, Gli,

Q

Asn, His, Asp, Ile, Leu, Glu, Met, Fen, Trp, Vai.

Um outro objecto da presente invenção é um processo para a preparação de compostos de fórmula geral (A) .

Um outro objecto da presente invenção é a utilização dos compostos de fórmula geral (A) para a preparação de um medicamento com actividade inibidora no enzima 5-a-redutase da testoesterona.

Ainda outro objecto da presente invenção é uma composição farmacêutica contendo pelo menos um composto de fórmula geral (A) como ingrediente activo.

Descrição detalhada da invenção

Contrariamente à patente de invenção EP O 271 220, a presente invenção permite a produção de compostos diastereomericamente puros que se podem preparar minimizando o risco de racemização do átomo de carbono na posição α relativamente ao grupo 17β-<20ΝΗ-,

De acordo com a presente invenção, os compostos de fórmula geral (A) podem preparar-se de acordo com o seguinte esquema 1. 6 Ρ ίΛ

Esquema 1 no qual os grupos têm os significados definidos antes. O processo inclui as seguintes etapas: a) reacção do composto de fórmula geral (I) com o composto de fórmula geral HY, na qual o símbolo Y tem o significado definido antes, para se obter o composto intermédio de fórmula geral (II) ; 7

b) transformação do produto intermédio de fórmula geral (II) no sec-esteroide de fórmula geral (III); c) reacção do sec-esteroide de fórmula geral (III) com uma amina de fórmula geral NH2Ri, na qual o símbolo Ri tem o significado definido antes, para se obter o aza-esteroide de fórmula geral (IV) insaturado nas posições 5 e 6; d) redução da ligação dupla na posição 5-6 do aza-esteroide para se obter um composto de fórmula geral (A) na qual a ligação carbono-carbono na posição 1-2 do esteroide é uma ligação simples; e, se desejado, e) insaturação da ligação carbono-carbono na posição 1-2 do esteroide para se obter um composto de fórmula geral (A) na qual a ligação carbono-carbono na posição 1-2 do esteroide é uma ligação dupla; e, se desejado, f) transformação de um composto de fórmula geral (A) na qual o símbolo Y representa um grupo de fórmula geral -NH-CH(Q)-T, no qual o símbolo T representa um grupo de fórmula geral -COOR3, num composto de fórmula geral (A) na qual o símbolo T representa um grupo -CH2OH; g) resolução da mistura enantiomérica de compostos de fórmula geral (A) obtida nas etapas anteriores; e, se desejado, h) tionação da posição 3 do anel do esteroide do composto de fórmula geral (A) obtido nas etapas anteriores e insaturação opcional da ligação carbono-carbono na posição 1-2 do esteroide; e, se desejado, 8

i) salificação do composto de fórmula geral (A) obtido nas etapas anteriores.

De acordo com um processo geral, prepararam-se os compostos de fórmula geral (A), na qual o símbolo Y representa um grupo de fórmula geral -NH-CH(Q)-T e o símbolo Q representa o resíduo dos aminoácidos Ala, Glu, Gli, Asn, His, Asp, Ile, Leu, Gin, Met, Fen, Trp, Vai, partindo do composto conhecido, de fórmula (I), de acordo com o esquema 2.

0 processo, de acordo com a presente invenção, inclui as seguintes etapas: a) faz-se reagir o composto de fórmula (I)

. COOH 9 (I)

com um composto de fórmula geral H2N-CH(Q)~T para se obter a amida de fórmula geral

CONH-CH(Q>

T b) transforma-se a referida amida no sec-esteroide de fórmula geral

CONH-CHCQ)

-T c) faz-se reagir o referido sec-esteroide com uma amina de fórmula geral NH2R1, na qual o símbolo Ri tem o significado definido antes, para se obter o azo-esteroide de fórmula geral

d) hidrogena-se o referido azo-esteroide para se obter um composto de fórmula geral (A) na qual a ligação carbono-carbono na posição 1-2 do anel do esteroide é uma ligação simples; e, se desejado, e) sujeita-se o referido composto de fórmula geral (A) obtido na etapa da d) a uma insaturação da referida posição 1-2; f) resolução da mistura enantiomérica do compostos de fórmula geral (A) obtida nas etapas anteriores; e, se desejado, 10

g) transformação do grupo 3-oxo no grupo 3-tioxo de um composto de fórmula geral (A) obtido nas etapas anteriores; e, se desejado, h) salificação do composto de fórmula geral (A) obtido nas etapas anteriores.

Protege-se na função carboxilo o aminoácido de fórmula geral NH2—CH (Q) -T, na qual os símbolos Q e T têm os significados definidos antes, usado na primeira etapa da reacção a), com grupos não convencionais conhecidos das sínteses de péptidos, grupos esses que não podem ser eliminados por hidrogenação catalítica, por exemplo um grupo éster ou amido com um álcool ou uma alquil-amina de cadeia linear ou ramificada, cíclica, policíclica ou heterocíclica. De acordo com este processo, faz-se reagir primeiro o composto de fórmula (I) dissolvido num dissolvente anidro aprótico (tal como tetra-hidrofurano, hexano, de preferência tolueno) em concentrações variando entre 0,01 e 0,5 M e piridina (cerca de 1,3 moles por mole de substrato), com cloreto de oxalilo (1,25 moles por mole de substrato), em atmosfera inerte, a uma temperatura variando entre -10° a +10°C e deixa-se em agitação vigorosa a esta temperatura durante um intervalo de tempo variando entre 30 minutos e uma hora. Após este período, adiciona-se uma suspensão do aminoácido protegido na função carboxilo, sob a forma de hidrocloreto (numa proporção compreendida entre 3 e 5 moles por mole de substrato) em tolueno e piridina (a última numa quantidade equimolar relativamente ao hidrocloreto de aminoácido) num intervalo de tempo compreendido entre 10 e 20 minutos. Aquece-se então a mistura reaccional a uma temperatura compreendida entre 40 e 60°C durante um período de tempo compreendido entre 0,5 e 6 horas. Após este período, trata-se a mistura reaccional como se segue: ajusta-se o pH para 5 (HC1 IN) e extrai-se a mistura com diclorometano. Seca-se então a fase orgânica sobre sulfato de sódio 11

& g por mole de substrato) e NaI04 (1,56 Kg por mole de substrato) para prevenir uma acumulação de um excesso da mistura oxidante (cerca de 45 minutos). Quando a adição estiver completa, faz-se o refluxo da mistura reaccional por um periodo de tempo compreendido entre 1 e 3 horas. Trata-se então a mistura reaccional da seguinte forma: arrefece-se a mistura até à temperatura ambiente mantendo a agitação durante 30 minutos; filtra-se então o sólido formado e concentra-se o filtrado sob vácuo até a um volume de cerca de 1/3 do volume inicial. Acidifica-se lentamente a solução resultante (conservada a uma temperatura inferior a 15°C) até a um pH de 2 com HC1 concentrado sob agitação vigorosa. Recupera-se o precipitado resultante por filtração e seca-se sob vácuo a uma temperatura de 80°C, recuperando-se assim o sec-esteroide com um rendimento compreendido entre 70 e 85%. Dispersa-se este composto a uma temperatura de -10°C em etileno-glicol a uma concentração compreendida entre 0,2 e 0,4 M e adiciona-se então (etapa c) 10 a 30 moles de amónia liquida ou da desejada amina, por mole de substrato. Aquece-se então lentamente a mistura reaccional (num intervalo de tempo compreendido entre 30 e 60 minutos) a uma temperatura compreendida entre 140° e 180°C durante um periodo de tempo compreendido entre 5 e 20 minutos. Arrefece-se então a mistura reaccional até à temperatura ambiente, dilui-se com água (volume em volume) e acidifica-se para um pH de 2 com HC1 concentrado. Recupera-se o precipitado resultante por filtração em vácuo para se obter o desejado aza-esteroide com um rendimento compreendido entre 75 e 85%. A redução do carboxiéster a um grupo CH2OH origina os compostos de fórmula geral A.

Hidrogena-se o aza-esteroide (etapa d) em uma solução de metanol ou em ácido acético em concentrações compreendidas entre 12 ?kf 0,05 e 0,2 M com Pt/C a 5% ou com Pc/C a 10% (1/10 em peso comparado com o substrato) sob uma pressão compreendida entre 0,5 e 3 atm e a uma temperatura compreendida entre 40° e 80°C. Após um período de tempo que varia entre 30 minutos e 4 horas, trata-se a mistura reaccional por filtração sobre celite, evaporação do dissolvente sob vácuo e purificação por cristalização no seio de acetonitrilo ou purificação por meio de cromatografia, para se obter o produto desejado, isto é, um composto de fórmula geral (A) na qual a ligação carbono-carbono na posição 1-2 do anel de esteroide é uma ligação simples, com um rendimento compreendido entre 50 e 90%. A desidrogenação Δ 1 (etapa e) realiza-se de acordo com processos convencionais da química dos esteroides; assim dissolve-se o substrato em um dissolvente aprótico, tal como tolueno, diglime ou, de preferência clorobenzeno, em concentrações compreendidas entre 0,02 e 0,1 M, com anidrido fenil-selénico (1 a 1,5 equivalentes por mole de substrato). Aquece-se então a mistura reaccional a uma temperatura de 110°C, por um período de tempo compreendido entre 3 e 18 horas, e faz-se então evaporar o dissolvente sob vácuo. Purifica-se o produto impuro resultante por cromatografia em gel de sílica (solução com um gradiente de diclorometano/acetona numa proporção de 1/60) para se obter o produto desejado com um rendimento compreendido entre 50 e 85%. Alternativamente, pode-se obter o mesmo composto fazendo uma suspensão do substrato em dioxano anidro, numa concentração compreendida entre 0,1 e 0,4 M, adicionando em seguida, sequencialmente, 2,3-dicloro-5,6-diciano-l,4-benzoquinona (DDQ) (1 a 1,4 moles por mole de substrato) e N, 0-bis-(trimetilsilil)-trifluoroacetamida (BSTFA) (4 a 6 moles por mole de substrato) . Agita-se vigorosamente a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 4 horas e depois a 110°C durante um período de tempo compreendido entre 8 e 24 horas. Trata-se a mistura reaccional diluindo-a com diclorometano 1:2 e adicionando uma solução de bi- 13

sulfito de sódio a 1% (1,41 mL por mmole de DDQ). Filtra-se o precipitado formado e lava-se a fase orgânica com HC1 2N, seca-se sobre sulfato de sódio e evapora-se até à secagem. Purifica-se então o produto bruto resultante por cristalização no seio de acetonitrilo ou de metanol/água para se obter o desejado produto com um rendimento compreendido compreendido entre 55 e 80%.

Alternativamente, pode-se conjugar o amino-alcool com o aza-esteroide na posição 17β de acordo com o esquema CORs

CVIII)

COOB

no qual os símbolos Ri, Q e T têm os significados definidos antes e o símbolo R5 representa um grupo activador do grupo carboxi.

De acordo com a presente invenção, o processo inclui as seguintes etapas: a) activação do grupo carboxilo do 17-fi-carboxi-4-aza-esteroide de fórmula geral (VII); 14

b) reacção do produto intermédio resultante com um amino-alcool de fórmula geral H2N-CH(Q)-T, na qual os símbolos Q e T têm os significados definidos antes.

Seguindo este esquema de síntese, partindo dos aza-esteroides de fórmula geral (VII) conhecidos (Rasmusson, G. H.; Reynolds, G. F.; Steimberg N. G.; Walton, E.; Patel, G. F.; Liang, T.; Cacsieri M. A.; Cheung A. H.; Broocks J. R.; Berman C.; J. Med. Chem. 1986, 29, 2298-2315), que têm uma função carboxilo na posição 17-β, pode-se introduzir a função desejada para se obter os compostos finais, activando primeiro o ácido de fórmula geral (VII) com grupos de activação convencionais, tais como o grupo éster pentafluorofenílico ou o derivado de 2-tiopiridilo (Araki, M.; Sakata, S.; Takei, H.; Mukaiyama; T.; Buli. Chem. Soe. Jpn; 1974, 47, 1777) para se obter os produtos intermédios de fórmula geral (VIII), que se fazem reagir em seguida com o amino-alcool que se pretende introduzir. Utilizou-se este processo com sucesso em particular para a preparação de derivados com Arg, Cis, Tri, Tir, Ser, Lis, para além dos amino-alcoois já considerados. Deste modo, obtiveram-se os produtos desejados por exemplo, fazendo reagir uma suspensão do éster tio-piridílico, de fórmula geral (VIII) numa mistura de um dissolvente apoiar aprótico, de preferência tetra-hidrofurano, em concentrações compreendidas entre 0,04 e 0,2 M, com o amino-alcool desejado (numa razão molar compreendida entre 3 a 6 moles por mole de esteroide), agitando vigorosamente, a uma temperatura compreendida entre 5o e 60°C, durante um intervalo de tempo compreendido entre 8 e 48 horas. Os produtos obtidos podem ser purificados a partir da mistura reaccional por meio de cromatografia em gel de sílica (eluição com diclorometano/metanol) com um rendimento compreendido entre 55 e 95%. 15

De acordo com a presente invenção, os compostos diastereomericamente puros, de fórmula geral (A) , podem obter-se por meio de processos diferentes para a resolução de misturas diastereoméricas: por exemplo, por meio de um processo de cristalização fraccionada ou por hidrolase catalisada dos derivados de éster (com o símbolo R3 representando grupos alquilo de cadeia linear comportando até 8 átomos de carbono) (Santaniello E.; Ferraboschi P.; Grisenti P-; Manzocchi A.; Chem. Rev., 1992, 92, 1071-1140; Santaniello E.; Ferraboschi P.; Grisenti P.; Enzyme Microb. Technol., 1993, 1_5, 367-382) ou, finalmente, por cristalização dos derivados carboxílicos correspondentes com uma amina enantiomericamente pura.* Aplica-se este processo aos diferentes enquadramentos da preparação dos compostos de fórmula geral (A), de acordo com a presente invenção.

Os compostos de fórmula geral (A), na qual o símbolo Y representa o grupo de fórmula geral -NH-M na qual o símbolo M tem o significado definido antes, podem obter-se por meio dos esquemas de síntese descritos antes, utilizando a amina quirálica de fórmula geral H2N-M em vez do derivado do aminoácido.

No que respeita à preparação dos derivados 3-tioxo correspondentes (nos quais o símbolo X representa o mesmo que o símbolo S) dos derivados diastereomericamente puros descritos antes, ela faz-se por meio de um processo simples utilizando o reagente de Lawesson como agente de tionação (R. A. Cherkasov e outros, Tetrahedron, 41(13), 1985, 2567-2624). Esse processo já foi descrito na patente de invenção WO/9413691, publicada em 23 de Junho de 1994, e permite obter os compostos correspondentes tionados na posição 3 com um elevado grau de selectividade química no que respeita às outras funções presentes (por exemplo ligações amino e éster). Prepararam-se estes produtos com rendimentos 16 compreendidos entre 47 e 89%, de acordo com o esquema 4, numa única etapa, partindo dos correspondentes derivados 3-oxo(X=0) de fórmula geral (A).

Esquema 4

Partindo dos derivados do aminoácido obtidos de acordo com os esquemas 1, 2 ou 3, também se podem preparar os correspondentes derivados selectivamente reduzidos na função carboxilica esterifiçada do aminoácido. Desta forma, partindo dos compostos de fórmula geral (V) (na qual o símbolo T representa um grupo de fórmula geral -COOR3) , podem preparar-se os correspondentes derivados alcoólicos de fórmula geral (IX) (na qual o símbolo T representa um grupo -CH2OH) , de acordo com o esquema reaccional 5.

17

Seguindo um processo geral, pode realizar-se esta reacção no seio de dissolventes apróticos apoiares, tais como o tetra-hidrofurano ou o éter dietilico, em concentrações variando entre 0,01 e 0,1 M, com agitação, à temperatura ambiente, com um hidreto como o boro-hidreto de litio ou de cálcio (1 a 1,4 mmoles por mole de substrato). A reação realiza-se com uma agitação vigorosa, à temperatura ambiente, durante um intervalo de tempo compreendido entre 1 e 18 horas e, depois da decomposição do excesso de hidreto com ácidos , obtem-se o produto desejado com um rendimento compreendido entre 79 e 90%.

Os compostos de fórmula geral (A) são activos como inibidores de testoesterona 5-alfa-redutase e por isso são úteis na medicina humana, particularmente no tratamento de estados hiper-androgenéticos, tais como acne vulgar, hirsutismo feminino, alopécia androgenética. Os compostos da presente invenção são particularmente úteis no tratamento da hipertrofia prostática e no carcinoma prostático. Por isso, um outro objecto da presente invenção é a utilização dos compostos de fórmula geral (A) para a preparação de um medicamento com actividade inibidora sobre a testoesterona 5-alfa-redutase, em particular no tratamento das doenças hiper-androgenéticas mencionadas antes, especificamente no tratamento da hipertrofia prostática e carcinoma prostático.

Os compostos da presente invenção são inibidores de testoesterona 5-alfa-redutase. Avaliou-se a eficácia farmacológica dos compostos por meio de um ensaio in vitro, com o fim de avaliar a interferência directa na actividade enzimática do tecido e um ensaio biológico in vivo.

Ensaio in vitro: 18

Ensaiou-se a actividade dos compostos de fórmula geral (A) sobre o enzima testoesterona 5-alfa-redutase na próstata de ratos (Liang e outros; Endocrinology, 117, 571, 1985) . Realizou-se a incubação de uma certa quantidade de próstata de rato fresca e homogeneizada contendo cerca de 100 pg de proteínas em 250 pL de tampão Krebs/Ringer na presença de um sistema gerador do sal di-sódico NaDPH (11,76 x 10’2M) e glucose 6-fosfato des-hidrogenase (3,5 x 10”2M U.I.) e de [14C]-testoesterona (3,16 x 10"6M, actividade específica de cerca de 56,9 mCi/mmole) como substrato marcado. Utilizaram-se frascos sem proteínas para determinar os brancos (padrões) . Faz-se a incubação num banho agitado e com controlo termostático a 37°C durante duas horas com um fluxo de O2/CO2 98:2. No fim da incubação, pára-se a reacção colocando as amostras em gelo. Para se qualificar correctamente os dois principais metabolitos de 5-alfa-redutase que se formam na próstata nestas condições (DHT e 3-alfa-diol), adiciona-se a cada amostra, antes da extracção, DHT e 3-alfa-diol marcada com tritío (cerca de 5.000 dpm) para avaliar a recuperação. Extraem-se duas vezes os metabolitos formados com 5,5 mL de éter dietílico. Separam-se os extractos, depois de os dissolver em 200 pL de etanol contendo DHT e 3-alfa-diol não marcado, como amostra de referência, por meio de cromatografia em camada fina utilizando pratos de gel de sílica. Faz-se a eluição três vezes com uma mistura de diclorometano/éter dietílico 11:1 a uma temperatura de 4°C. Revelam-se as manchas de DHT e 3-alfa-diol com vapores de iodo e as de testoesterona por meio de exposição a raios UV (absorção UV da ligação dupla 4-5, conjugada com o grupo ceto na posição 3). Raspam-se as áreas do gel de sílica em que foram evidenciados os grupos de DHT e 3-alfa-diol e colocam-se em tubos de ensaio para serem contadas. Depois de se adicionar 0,5 mL de água para desactivar a ligação do esteroide à sílica e 6 mL de líquido de cintilação, colocam-se as amostras num agitador horizontal e agita-se durante 15 minutos. Depois de se 19

decantar o gel de sílica em suspensão, contam-se as amostras num espectrómetro de cintilação de líquido. Corrigem-se os valores em dpm, obtidos a partir de uma curva de calibração normalizada, com base na percentagem de recuperação calculada nos esteroides tritiados adicionados a cada amostra antes da extracção. Os resultados expressam-se em pg do esteroide formado durante as duas horas de incubação por mg de proteínas. Em cada ensaio, avaliou-se o IC50 da molécula ensaiada usando concentrações diferentes da substância, variando entre 10~5 e IO-9 M.

Os compostos da presente invenção exibem um IC50 compreendido entre 222 e 9 nM.

Ensaio in vivo:

Estudaram-se in vivo os compostos de fórmula geral (Ά) , que são activos na inibição in vitro do enzima testoesterona 5-alfa-redutase, para avaliar a actividade inibidora no peso da próstata das vesículas seminais em ratos adultos normais (Rittmaster R.S. e outros Molec. Endocrin., 1023, 1991) Tratam-se ratos machos CRL:CD(SD)BR, pesando 200-250 g, por via oral, durante 4 dias consecutivos, com uma dose de 40 mg/Kg/dia, de acordo com o seguinte esquema: um grupo de controlo recebendo o dissolvente; um grupo recebendo finasteride como padrão; outros grupos tratados com as substâncias ensaiadas. 24 horas após o último tratamento, matam-se os ratos e remove-se a próstata e as vesículas seminais. Os resultados estão expressos em percentagem do decréscimo do peso dos dois orgãos comparados com o grupo de controlo. 0 decréscimo do peso da próstata na dose 20

ensaiada foi de 43-52% e o decréscimo no peso das vesículas foi de 60-75%. A presente invenção também tem por objecto composições farmacêuticas para administração oral, parentérica e tópica contendo pelo menos um composto de fórmula geral (A) como ingrediente activo, numa mistura com veículos convencionais e excipientes.

Exemplos de composições farmacêuticas para administração por via oral são comprimidos, cápsulas, saquetas e suspensões; exemplos de composições parentéricas são ampolas secas no gelo ou suspensões estéreis; exemplos de composições tópicas são cremes, unguentos, geles, aerossois e espumas.

As composições, de acordo com a presente invenção, preparam-se por métodos convencionais, como por exemplo os descritos no

Remington's Pharmaceutical Sciences Handbook, Mack Pub., XVII Ed.; N.Y. E.U.A.. A dose diária varia entre 5 e 50 mg; a dose unitária pode conter 2,5 a 25 mg de ingrediente activo.

Para a administração tópica, a concentração do ingrediente activo varia entre 0,1 e 10%, de preferência 5%; as administrações diárias podem ser de uma ou duas.

Os exemplos seguintes, no que se refere ao esquema referido antes, ilustram melhor a presente invenção. 21

Preparação 1

Faz-se uma dispersão de 2,420 g (12,38 mmole) de hidrocloreto de éster etílico de L-leucina, com agitação vigorosa, à temperatura ambiente, em uma mistura de tetra-hidrofurano anidro (50 mL) e piridina (1 mL) . Passados 10 minutos, adiciona-se o derivado de tiopiridilo de fórmula geral (VIII) (na qual o símbolo Rs representa um grupo tiopiridilo e o símbolo Ri representa um grupo metilo) (939 mg, 2,204 mmole) e agita-se a suspensão resultante, à temperatura ambiente, durante 24 horas. Concentra-se a mistura reaccional até cerca de H do seu volume inicial e depois purifica-se por cromatografia sobre alumina básica (eluição com CH2CI2/CH3OH = 98/2). Obtém-se 980 mg (2,086 mmole) do produto desejado (Vc), em cuja fórmula geral o símbolo X representa um átomo de oxigénio, o símbolo Ri representa um grupo metilo, o símbolo Y, de fórmula geral -NH-CH(Q)-T, representa o resíduo de éster etílico de L-leucina e a ligação carbono-carbono na posição 1-2 do anel de esteroide é uma ligação simples (rendimento de 94%). MS m/e:474 (M) , 459 (M-15), 429 (M-45), 418 (M-56), 401 (M-73), 316 (M-158), 288 (M-186) 1H-RMN (60 MHz) : 0,65 (s, 3H) , 0,90 (m, 9H) , 0,92-2,65 (sistema complexo), 1,20 (sobreposta ao sistema anterior), 2,9 (s, 3H), 2,9-3,1 (m, 1H), 4,15 (q, 2H), 4,56 (m, 1H), 5,56 (d, 1H).

Análise elementar calculada para C28H46O4N2

Requerido:

Encontrado: C = 70,85%, H = 9,77%, N = 5,90% C = 70,87%, H = 9,75%, N = 5,93%.

[alfa] d = +21,0. [alfa] 546 = +26, 0 . [alfa] 436 = +49, 9 (c = 1 CHCI3) Exemplo 1

Com um processo semelhante ao descrito na preparação 1, prepararam-se compostos de fórmula geral (A) na qual o símbolo X a 22

representar um átomo de oxigénio, o símbolo Ri representa um grupo metilo, o símbolo Y representa alfa-metilbenzilamina D( + ) e L(-), respectivamente composto Vg e Vh. 1H-RMN (60 MHz) : do derivado de alfa-metilbenzilamina D( + ): 0,70 (s, 3H) , 0,90 (s, 3H) , 0,60-2,70 (sistema complexo), 1,45 (d,

sobreposta ao sistema anterior), 3,00 (s, 3H) , 2,90-3,15 (m, 1H sobreposta ao sistema anterior), 5,2 (m, 1H) , 6,80 (m, 1H) , 7,45 (s, 5H) . 1H-RMN (60 MHz): do derivado de alfa-metilbenzilamina L(-): 0,60 (s, 3H) , 0,85 (s, 3H) , 0,50-2,80 (sistema complexo), 1,50 (d,

sobreposta ao sistema anterior), 3,00 (s, 3H), 2,90-3,15 (m, 1H sobreposta ao sistema anterior), 5,2 (m, 1H) , 6,80 (m, 1H) , 7,45 (s, 5H) . MS m/e:437 (M), 422 (M-15), 332 (M-105), 317 (M-120), 289 (M-148) Análise elementar calculada para C28H40O2N2

Requerido: C = 77,02%, H = 9,23%, N = 6, 42% Encontrado para Vg: C = 77,03%, H = 9,26%, N = 6, 46%. Encontrado para Vh: C = 77,05%, H = 9,25%, N = 6, 47%.

Exemplo 2

Dissolve-se 420 mg (0,886 mmole), do composto (Vc) obtido na preparação 1, em tetra-hidrofurano anidro (16 mL) com agitação, à temperatura ambiente. Depois disso, adiciona-se LÍBH4 (23 mg), 1,056 mmole), agitando à temperatura ambiente. Agita-se a mistura reaccional, à temperatura ambiente, durante 12 horas e neutraliza-se então com HC1 N. Evapora-se a fase orgânica sob vácuo e extrai-se a fase aquosa com diclorometano (3 x 9 mL) . Secam-se então os extractos orgânicos sobre sulfato de sódio e evapora-se até à secagem para se obter um produto impuro que se purifica em seguida por meio de cromatografia em gel de sílica (1/40; eluição com diclorometano/metanol 95/5). Obtém-se 341 mg (rendimento de 89%) do 23 composto de fórmula geral (IX), na qual o símbolo X representa um átomo de oxigénio, o símbolo Ri representa um grupo metilo, o símbolo Y representa um grupo de fórmula geral -NH-CH(Q)-T que é o resíduo de (L)-leucina, com o símbolo T a representar um grupo CH2OH e a ligação carbono-carbono na posição 1-2 do anel esteroidal é uma ligação simples. MS m/e:432 (M+), 417 (M-15), 414 (M-18), 402 (M-30), 316 (M-116) 1H-RMN (60 MHz): 0,65 (s, 3H), 0,85-0,91 (m, 9H), 0,70-2,40 (sistema complexo), 2,85 (s, 3H), 2,90-3,10 (m, 1H), 3,5 (m, 3H) , 4,0 (m, 1H) , 5,55 (m, 1H) .

Análise elementar calculada para C26H44O3N2 Requerido: C = 72,18%, H = 10,25%, N = 6,47%

Encontrado: C = 72,20%, H = 10,22%, N = 6,49%.

Lisboa, 26 de Novembro de 2001

/ D Aasníe Oficiai da Propriedade industriai

A.O.P.l. Rua do Salitre. 19?. r/e-Drt. 1269-063 LISBOA 24

Claims

REIVINDICAÇÕES 1. Compostos de fórmula geral (A) :

(A) na qual: a ligação carbono-carbono na posição 1-2 pode ser simples ou dupla, o simbolo X representa um átomo de oxigénio ou de enxofre; o simbolo Ri representa um átomo de hidrogénio ou um residuo de alquilo C1-C4 de cadeia linear ou ramificada; o simbolo Y representa um residuo de fórmula geral -NH-CH-T \ Q na qual: o símbolo T representa um grupo -CH2OH; o símbolo Q representa a ramificação de um α-aminoácido natural das séries (L) ou das séries (D); o símbolo Y representa um grupo de fórmula geral -NH-M, na qual o símbolo M representa um grupo alquilo C4-Ci4/ cicloalquilo ou arilalquilo C7~C14 com um centro assimétrico na posição α da função amina; 1

ou os seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico e as formas diastereoméricas e enantioméricas simples.
2. Compostos de acordo com a reivindicação 1, em que o símbolo Y representa um grupo de fórmula geral -NH-M, na qual o símbolo M representa um grupo arilalquilo C7-C14, escolhido entre um grupo constituído por α-metilbenzilo, a-etilbenzilo, a-propilbenzilo, a-metil-l-naftilo, a-metil-2-naftilo.
3. Compostos de acordo com a reivindicação 1, em que o símbolo Ri representa um grupo escolhido entre os grupos etilo ou metilo ou um átomo de hidrogénio.
4. Compostos de acordo com a reivindicação 1, em que o símbolo Ri representa um átomo de hidrogénio ou um grupo metilo.
5. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que: - o símbolo X representa um átomo de oxigénio, o símbolo Ri representa um grupo metilo, o símbolo Y representa D(+)-a-metilbenzilamina e a ligação carbono-carbono na posição 1-2 do anel esteroidal é uma ligação simples (composto Vg); o símbolo X representa um átomo de oxigénio, o símbolo Ri representa um grupo metilo, o símbolo Y representa L(-)-a-metilbenzilamina e a ligação carbono-carbono na posição 1-2 do anel esteroidal é uma ligação simples (composto Vh).
6. Compostos das reivindicações 1 a 5 como agentes inibidores da testoesterona 5-a-redutase.
7. Utilização dos compostos das reivindicações 1 a 5 como princípios activos para a preparação de um medicamento com actividade inibidora sobre a testoesterona 5-a-redutase.
8. Utilização dos compostos das reivindicações 1 a 5 para a preparação de um medicamento útil para o tratamento de condições hiperandrogenéticas.
9. Utilização dos compostos das reivindicações 1 a 5 para a preparação de um medicamento útil para o tratamento de acne vulgar, seborreia, hirsutismo feminino, alopécia androgenética.
10. Utilização dos compostos das reivindicações 1 a 5 para a preparação de um medicamento útil para o tratamento de hipertrofia prostática.
11. Utilização dos compostos das reivindicações 1 a 5 para a preparação de um medicamento útil para o tratamento de carcinoma da próstata.
12. Composições farmacêuticas contendo pelo menos um dos compostos das reivindicações 1 a 5, misturados com veículos aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico e excipientes. Lisboa, 26 de Novembro de 2001

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