PT604910E - Eteres fosfono-oximetilicos de derivados do taxano - Google Patents

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Robert Kevin Perrone
John K Thottathil
Dolatrai Vyas
Henry Wong
John F Kadow
Jerzy Golik
John J Wrigth
Wen-Sen Li
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Description

6ok. 3lo
DESCRIÇÃO “ÉTERES FOSFONO-OXIMETÍLICOS DE DERIVADOS DO TAXANO” ANTECEDENTES DA INVENÇÃO 1. Campo da Invenção A presente invenção diz respeito a compostos antitumor. Mais particularmente, a invenção proporciona novos derivados do taxano, composições farmacêuticas que os contêm e a sua utilização como agentes antitumor. 2. Técnica Anterior O Taxol* (paclitaxel) é um produto natural extraído da casca de teixos do (
Pacífico, Taxus brevifolia. Verificou-se que tem uma excelente actividade antitumor em modelos animais in vivo, e estudos recentes elucidaram o seu modo único de acção, o qual envolve a polimerização anormal de tubulina e a disrupção da mitose. Encontra-se correntemente a ser submetido a ensaios clínicos no que diz respeito ao cancro do ovário, da mama bem como outros tipos de cancro nos Estados Unidos da América e na França e os resultados preliminares confirmaram que se tratava de um agente quimioterapêutico muito promissor. Os resultados dos estudos clínicos do paclitaxel encontram-se revistos em Rowinsky e Donehower, “The Clinicai Pharmacologv and Use of Antimicrotubule Agents in Câncer Chemotherapeutics" Pharmac. Ther.. 52.35 - 84, 1991.
Recentemente, descobriu-se igualmente que um análogo semi-sintético do paclitaxel denominado Taxoterê* tinha uma boa actividade antitumor em modelos de animais. O Taxotere® encontra-se também correntemente a ser submetido a ensaios clínicos na Europa e nos Estados Unidos da América. As estruturas de paclitaxel e Taxotere® encontram-se representadas mais abaixo, proporciona-se o sistema de numeração convencional da molécula do paclitaxel.
Taxol * : R = Ph; R/ = acetilo
Taxotere* : R = t-butoxi; R’ = hidrogénio
Um inconveniente do paclitaxel é a sua solubilidade em água muito limitada que exige que o mesmo seja formulado em veículos farmacêuticos não aquosos. Um veículo correntemente utilizado é o Cremophor EL o qual pode em si mesmo apresentar efeitos secundários indesejáveis no homem. Por consequência, o número de equipas de investigadores prepararam derivados de paclitaxel solúveis em água os quais são descritos nas referências seguintes : (a) Haugwitz et al, patente de invenção norte-americana n° 4 942 184; (b) Kingston et al, patente de invenção norte-americana n° 5 059 699; (c) Stella et al, patente de invenção norte-americana n° 4 960 790; (d) Pedido de patente de invenção europeia n° 0 558 959 Al publicada em 8 de Setembro de 1993. (e) Vyas et al, Biooraanic & Medicinal Chemistrv Letters. 1993, 3:1357- - 1360 e (f) Nicolaou et al, Nature, 1993, 364 : 464 - 466.
Os compostos de acordo com a presente invenção são éteres fosfono--oximetílicos de derivados do taxano e os seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico. A solubilidade em água dos sais facilita a preparação das formulações farmacêuticas.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO A presente invenção diz respeito a derivados do taxano de fórmula geral (A) : T —[0CH2(0CH;)m0P(0)(0H)2]n (A) na qual o símbolo T representa um radical taxano que comporta no átomo de carbono C13 um grupo 3-amino-2-hidroxipropanoíloxi substituído; o símbolo n representa o número 1, 2 ou 3; o símbolo m representa o número 0 ou um número inteiro compreendido entre 1 e 6 inclusive; ou um seu sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico.
Um outro aspecto da presente invenção proporciona derivados do taxano de fórmula geral (B): Τ' — [OCH2(OCH2)niSCH3]„ (B) na qual o símbolo Τ’ representa o símbolo T no qual os grupos hidroxi não reactivos foram bloqueados e os símbolos m e n têm os significados definidos na fórmula geral (A).
Ainda um outro aspecto da presente invenção diz respeito a 4 intermediários de fórmula geral (C): Τ’ —[0CH2(0CH2)m0P(0)(0Ry)2]n (C) na qual os símbolos T’, men têm os significados definidos antes na fórmula geral (A), e o símbolo Ry representa um grupo protector do radical fosfono.
Um outro aspecto da presente invenção diz respeito a compostos de fórmula geral (D) : 13-OH-txn — [OCH2(OCH2)mSCH3]n (D) na qual os símbolos m e n têm os significados definidos antes; e o símbolo txn representa um radical taxano; ou um seu alcóxido metálico em Ci3.
Um outro aspecto da presente invenção diz respeito a um método para inibir tumores em um hospedeiro mamífero que compreende a administração ao referido hospedeiro mamífero de uma quantidade eficaz antitumor de um composto de fórmula geral (A).
Ainda um outro aspecto da presente invenção proporciona uma composição farmacêutica que compreende uma quantidade eficaz antitumor de um composto de fórmula geral (A) e um veiculo aceitável sob o ponto de vista farmacêutico.
DESCRIÇÃO PORMENORIZADA DA INVENÇÃO
No presente pedido de patente de invenção, a menos que se especifique explicitamente de outro modo ou no contexto, aplicam-se as seguintes definições. “Alquilo” significa uma cadeia carbonada linear ou ramificada saturada com entre 1 e 6 átomos de carbono; exemplos incluem metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, sec-butilo, isobutilo, t-butilo. n-pentilo, sec-pentilo, isopentilo e n-hexilo.
“Alcenilo” significa uma cadeia carbonada linear ou ramificada comportando pelo menos uma ligação dupla carbono-carbono e tendo entre 2 e 6 átomos de carbono; exemplos incluem etenilo, propenilo, isopropenilo, butenilo, isobutenilo, pentenilo e hexenilo. “Alcinilo” significa uma cadeia carbonada linear ou ramificada comportando pelo menos uma ligação tripla carbono-carbono e tendo entre 2 a 6 átomos de carbono; exemplos incluem etinilo, propinilo, butinilo e hexinilo. “Anlo” significa um hidrocarboneto aromático com entre 6 e 10 átomos de carbono; exemplos incluem fenilo e naftilo. “Arilo substituído” significa anlo substituído por pelo menos um grupo escolhido de entre alcanoíloxi C^, hidroxi, halogéneo, alquilo Ci^, trifluorometilo. alcoxi C^, arilo, alcenilo C2.6, alcanoílo C i_6, nitro, ammo e amido. “Halogéneo” significa flúor, cloro, bromo e iodo. “Fosfono-“ significa o grupo -P(0)(0H)2 e “fosfono-oximetoxi” ou “éter fosfono-oximetílico” significa genericamente o grupo -OCH2( OCH2).„0 P(0 )(OH)2 “(Metiltio)tiocarbonilo” significa o grupo -C(S)SCH3. “Metiltiometilo” (também abreviado como MTM) refere-se genericamente ao grupo -CH2SCH3. “Radical taxano” (também abreviado como txn) significa radicais que contêm a estrutura do núcleo do taxano com 20 átomos de carbono representado pela fórmula estrutural indicada a seguir com a configuração absoluta. 19
H
6 O sistema de numeração indicado anteriormente é o que se utiliza na nomenclatura convencional do taxano e é seguida no decurso da presente memória descritiva. Por exemplo, a notação Cl refere-se ao átomo de carbono marcado como “1”; oxetano C5-C2o refere-se a um anel oxetano formado pelos átomos de carbono marcados com 4, 5 e 20 com um átomo de oxigénio; e C9 oxi refere-se a um átomo de oxigénio, ligado ao átomo de carbono marcado como “9”, podendo o referido átomo de oxigénio ser um grupo oxo, a- ou β-hidroxi, ou a- ou β-aciloxi. “3-Amino-2-hidroxipropanoíloxi substituído” indica um resíduo representado pela fórmula geral
X—yH 0 ÕX’ (o símbolo X representa um grupo não hidrogenado e o símbolo X’ representa um átomo de hidrogénio ou um grupo não hidrogenado). A estereoquímica deste resíduo é a mesma que a da cadeia lateral do paclitaxel. Este grupo é por vezes referido na presente memória descritiva como a “cadeia lateral Co”. “Derivado do taxano” (abreviado como T) refere-se a um composto tendo um radical taxano que comporta uma cadeia lateral C13. “Heteroarilo” significa um anel aromático pentagonal ou hexagonal contendo pelo menos 1 e até 4 átomos diferentes do átomo de carbono escolhidos de entre oxigénio, enxofre e azoto. Exemplos de heteroarilo incluem tienilo, furilo, pirrolilo, imidazolilo. pirazolilo, tiazolilo. isotiazolilo, oxazolilo, isoxazolilo. 7 triazolilo. tiadiazolilo, oxadiazolilo, tetrazolilo, tiatnazolilo, oxatriazolilo, piridilo, pirimidilo, pirazinilo, piridazinilo, triazinilo, tetrazinilo e anéis semelhantes. “Grupos protectores do radical fosfono” significam radicais que podem ser utilizados para bloquear ou proteger o grupo funcional fosfono; de preferência, tais grupos protectores são aqueles que podem ser eliminados por métodos que não afectam de maneira apreciável o resto da molécula. Grupos protectores fosfono-oxi apropriados são bem conhecidos dos especialistas na maténa e incluem, por exemplo, grupos benzilo e alilo. “Grupos protectores do radical hidroxi” incluem, mas não ficam limitados a estes, éteres tais como éteres metilico, t-butilico, benzílico, p-metoxi-benzílico, p-nitrobenzílico, alílico, tritílico, metoximetílico, metoxietoximetílico, etoxietílico, tetra-hidropiranílico, tetra-hidrotiopiranílico e éteres trialquilsililicos tais como éter tnmetilsilílico e éter t-butildimetilsilílico; ésteres tais como ésteres benzoílico, acetílico, fenilacetílico, formílico, mono-, di- e tri-haloacetílico tais como cloroacetilico, dicloroacetílico, tricloroacetílico, trifluoroacetílico; e carbonatos tais como carbonato de metilo, etilo, 2,2,2-tricloroetilo, alilo, benzilo e p-nitrofenilo.
Exemplos adicionais de grupos protectores dos radicais hidroxi e fosfono podem ser encontrados em trabalhos de referência correntes tais como os trabalhos de Greene e Wuts, Protective Groups in Orgamc Svnthesis. 2a Ed., 1991, John Wiley & Sons, e McOmie, Protective Groups m Orçamc Chemistry. 1975, Plenum Press. Métodos para a introdução e a eliminação dos grupos protectores encontram-se também em tais livros de texto. 8 “Sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico” significa um sal de metal ou um sal de amina do grupo fosfono acídico em que o catião não contribui significativamente para a toxicidade ou a actividade biológica do composto activo. Sais metálicos apropriados incluem sais de titio, sódio, potássio, cálcio, bário, magnésio, zinco e alumínio. Os sais metálicos preferidos são os sais de sódio e de potássio. Sais de amina apropriados são por exemplo, amónia, trometamina (TRIS), trietilamina, procaína, benzatina, dibenzi lamina, cloroprocaína, colina, dietanolamina, trietanolamina, etilenodiamina, glucamina, N-metilglucamina, lisina, arginina, etanolamina, para nomear apenas alguns. Os sais de amina preferidos são os sais de lisina, arginma e N-metilglucamma.
Na presente memória descritiva e nas reivindicações, o termo ADCH2(0CH2)m0P(0)(0H)2 pretende-se que englobe tanto o ácido livre como os seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, a menos que o contexto indique especificamente que se pretende significar o ácido livre.
Um aspecto da presente invenção diz respeito a derivados do taxano de fórmula geral (A) T —[0CH2(0CH2)m0P(0)(0H)2]n (A) na qual o símbolo T representa um radical taxano que comporta no átomo de carbono C13 um grupo 3-amino-2-hidroxipropanoíloxi substituído; o símbolo n representa o número 1, 2 ou 3; o símbolo m representa o número 0 ou um número inteiro compreendido entre 1 e 6 inclusive; ou um seu sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico.
Numa forma de realização, o radical taxano contém pelo menos as 9 funcionalidades seguintes : Cphidroxi, C2-benzoíloxi, C4-acetiloxi, C5-C20-oxetano, Cç-oxi e a ligação dupla C1 i-Ci2.
Numa forma de realização preferida, o radical taxano deriva de um resíduo de fórmula geral
na qual o símbolo R2e representa um átomo de hidrogénio e o símbolo R'e representa um átcmo de hidrogénio ou um grupo hidroxi, -0C(0)Rx ou -0C(0)0Rx; ou o símbolo R2e representa um átomo de hidrogénio e o símbolo R2e representa um átomo de flúor; o símbolo R1e representa um átomo de hidrogénio ou um grupo hidroxi-, -OC(0)R\ Ci-6-alquiloxi, ou -0C(0)0Rx; um dos símbolos R6e ou R7e representa um átomo de hidrogénio e o outro representa um grupo hidroxi ou -0C(0)Rx; ou os símbolos R6t e R e formam conjuntamente um grupo oxo; o símbolo Rx tem os significados definidos a seguir.
Numa outra forma de realização, a cadeia lateral C13 é derivada de um resíduo de fórmula geral
R4(0)pC0fcH 0 =OR1e 10 na qual o símbolo R,e representa um átomo de hidrogénio ou um grupo -C(0)Rx, -C(0)ORx; os símbolos R4 e R5 representam, cada um, independentemente um do outro, um grupo alquilo C^, alcenilo C2^, alcinilo C2-6 ou -Z-R6, o símbolo Z representa uma ligação directa ou um grupo alquilo Ci^ ou alcenilo C2^; o símbolo R6 representa um grupo arilo, arilo substituído, cicloalquilo C3^ ou heteroarilo; e o símbolo Rx representa um grupo alquilo Ct^ eventualmente substituído por 1 a 6 átomos de halogéneo iguais ou diferentes, ou um grupo cicloalquilo C^, alcenilo C2-6 ou um radical de fórmula geral
Ra
na qual o símbolo D representa uma ligação ou um grupo alquilo e os símbolos Ra, Rb e Rc representam, cada um, independentemente, um átomo de hidrogénio ou grupo amino, alquilamino C]_6, di-alquilammo-C]_6, halogéneo, alquilo ou alcoxi Ci.6; 0 símbolo p representa um número 0 ou I.
Numa forma de realização preferida, o símbolo R4 representa um grupo alquilo C|^ e o símbolo p representa o número 1, ou o símbolo R4 é ou -Z-R6 e o símbolo p representa o número 0. Mais preferivelmente, R4(0)p representa t-butoxi. fenilo, isopropiloxi, n-propiloxi ou n-butoxi.
De acordo com uma outra forma de realização preferida o símbolo R5 representa um grupo alcenilo C2^, ou -Z-R6 e os símbolos Z e R6 têm os significados definidos antes. Mais preferivelmente, o símbolo R5 representa um
grupo fenilo, 2-furilo, 2-tienilo, isobutenilo, 2-propenilo ou cicloalquilo C3^.
Numa outra forma de realização, o composto de fórmula geral (A) pode ser mais especificamente representado pela fórmula geral (I)
na qual o símbolo R1 representa um grupo hidroxi, -0CH2(0CH2)m0P(0)(0H)2, -0C(0)Rx ou -OC(0)OR\ o símbolo R2 representa um átomo de hidrogénio e o símbolo R2 representa um átomo de hidrogénio ou um grupo hidroxi, -0CH2(0CH2)m0P(0)(0H)2. -0C(0)0Rx; ou o símbolo R2 representa um átomo de flúor e o símbolo R2 representa um átomo de hidrogénio; o símbolo R3 representa um átomo de hidrogénio ou um grupo hidroxi, acetoxi, -0CH2(0CH2)m0P(0)(C)H)2 ou -0C(0)0Rx; um dos símbolos R6 ou R7 representa um átomo de hidrogénio e o outro representa um grupo hidroxi, alcanoíloxi C|^ ou -OCH2(OCH2)mOP(0)(OH)2; ou os símbolos R6 e R7 formam conjuntamente um grupo oxo; com a condição de pelo menos um dos símbolos R1, R2, R3, R6 ou R7 representar um grupo -OCH2(OCH2)mOP(0)(OH)2, os símbolos R4, R5, R\ m e p têm os significados definidos antes; ou um seu sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico.
Nos compostos de fórmula geral (I), os exemplos de Rx incluem metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, clorometilo, 2,2,2-tricloroetilo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclo-hexilo, etenilo, 2-propenilo, fenilo, 75t 12 benzilo, bromofenilo, 4-aminofenilo, 4-metilaminofenilo, 4-metilfenilo, 4-metoxi-fenilo e similares. Exemplos de R4 e R5 incluem 2-propenilo, isobutenilo, 3-furaniío (3-fúrilo), 3-tienilo, fenilo, naftilo, 4-hidroxifenilo, 4-metoxifenilo, 4-fluorofenilo, 4-trifluorometilfenilo, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, t-butilo, etenilo, 2-propenilo, 2-propinilo, benzilo, fenetilo, feniletenilo, 3,4-dimetoxifenilo, 2-furanilo (2-furilo), 2-tienilo, 2-(2-furanil)-etenilo, 2-metil-propilo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclo-hexilo, ciclo-hexilmetilo, ciclo-hexiletilo e similares.
Numa forma de realização preferida, a presente invenção proporciona compostos de fórmula geral (I) na qual o símbolo R' representa um grupo alcenilo C2_6 ou -Z-R6 e os símbolos Z e R6 têm os significados definidos antes. Mais preferivelmente, o símbolo R5 representa um grupo fenilo, 3-furilo, 3-tienilo, 2-propenilo, isobutenilo, 2-furilo, 2-tienilo ou cicloalquilo C3.0.
Numa outra forma de realização preferida, o símbolo R4 dos compostos de fórmula geral (I) representa um grupo alquilo C^, caso esse em que o símbolo p representa o número 1; ou o símbolo R4 representa um grupo de fórmula geral -Z-R6 e os símbolos Z e R6 têm os significados definidos antes, e caso esse em que o símbolo p representa o número 0. Mais preferivelmente R4(0)p- representa um grupo t-butoxi, fenilo, isopropiloxi, n-propiloxi, n-butoxi.
Numa outra forma de realização preferida, a presente invenção proporciona compostos de fórmula geral (I) na qual o símbolo R1 representa um grupo -OCH2(OCH2)mOP(0)(OH)2. Numa forma de realização mais preferida o símbolo R2 representa um grupo hidroxi, -0CH2(0CH2)m0P(0)(0H)2, ou
-0C(0)Rx, e o símbolo Rx representa de preferência um grupo alquilo C,-Q. Numa outra forma de realização mais preferida, o símbolo RJ representa um grupo hidroxi ou acetoxi,
Numa outra forma de realização preferida, a presente invenção proporciona um composto de fórmula geral (I) na qual o símbolo R2 representa um grupo -OCH2(OCH2)mOP(0)(OH)2; o símbolo R1 representa um grupo hidroxi ou -OC(0)ORx; e o símbolo R3 representa um átomo de hidrogénio, ou um grupo hidroxi, acetoxi, -OCH2(OCH2)mOP(0)(OH)2 ou -OC(0)OR\ e o símbolo Rx tem os significados definidos antes. Numa forma de realização mais preferida, o símbolo R1 representa um grupo hidroxi ou -0C(0)0Rx e o símbolo Rx representa de preferência um grupo alquilo C]-C6; e o símbolo R3 representa um grupo hidroxi ou acetoxi.
Numa outra forma de realização preferida, a presente invenção proporciona um composto de fórmula geral (I) na qual o símbolo R3 representa um grupo -0CH2(0CH2)m0P(0)(0H)2; o símbolo R1 representa um grupo hidroxi ou -OC(0)0Rx; o símbolo R2 representa um átomo de hidrogénio e o símbolo R2 representa um átomo de hidrogénio ou um grupo hidroxi ou -0C(0)0Rx; ou o símbolo R2 representa um átomo de flúor e o símbolo R2 representa um átomo de hidrogénio; e o símbolo Rx tem os significados definidos antes. Numa forma de realização mais preferida, o símbolo R1 representa um grupo hidroxi ou um grupo de fórmula geral -0C(0)0R\ e o símbolo Rx representa de preferência um grupo alquilo Cj.C6. Numa outra forma de realização mais preferida o símbolo R2 representa um grupo hidroxi. 14
Numa outra forma de realização preferida, o símbolo m representa o número 0 ou 1 quando se encontra presente o grupo fosfono-oximetoxi no C7 do radical taxano.
Os sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico preferidos de um composto de fórmula geral (A) são sais de metais alcalinos incluindo os sais de lítio, sódio e potássio; e sais de amina incluindo os sais de trietilamina, trietanolamina, etanolamina. arginina, lisina e N-metilglucamina. Sais ainda mais preferidos são os sais de arginina, lisina e N-metilglucamina.
As formas de realização mais preferidas dos derivados de taxano de fórmula geral (A) incluem os compostos seguintes : (1) 7-O-fosfono-oximetil-paclitaxel, (2) 2’-0-(etiloxicarbonil)-7-0-fosfono-oximetilpaclitaxel; (3) 2’-0--fosfono-oximetilpaclitaxel; (4) 2,,7-bis-0-(fosfono-oximetil)-paclitaxel; (5) 3’-N--desbenzoíl-3,-desfenil-3,-N-(t-butiloxicarbonil)-3’-(2-furil)-2’-0-etiloxicarbonil-7--O-fosfono-oximetilpaclitaxel; (6) 3 ’-N-desbenzoíl-3 ’-desfenil-3 ’-N-(t-butiloxi-carbonil)-3,-(2-tienil)-2’-0-etiloxicarbonil-7-0-fosfono-oximetilopaclitaxel; (7) 10--desacetil-3 ’-N-desbenzril-3’-N-(t4xitiloxicarbonil)-10-O-(fosfono-oximetil)-paclitaxel; (8) 2’-0-fosfono-oximetoximetilpaclitaxel e os seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico respectivos, em particular os sais de sódio, potássio, arginina, lisina, N-metilglucamina, etanolamina trietilamina e trietanolamina.
Podem preparar-se os compostos de fórmula geral (A) a partir de um derivado do taxano como composto inicial T-[OH]n na qual os símbolos T e n têm os significados definidos antes. A identidade de T-[OH]n não é particularmente limitada desde que haja pelo menos um grupo hidroxi reactivo presente em qualquer dos 15 radicais taxano da cadeia lateral Ci3 para permitir a formação do ligação éter fosfono-oximetílico. Deve entender-se que o grupo hidroxi reactivo pode ser ligado directamente à estrutura propaniloxi C13 (por exemplo o grupo 2’-hidroxi de paclitaxel) ou à estrutura do núcleo do taxano (por exemplo o grupo 7-hidroxi de paclitaxel); ou pode encontrar-se presente num substituinte na cadeia lateral C)3 ou num substituinte no núcleo do taxano. Pode utilizar-se a sequência reaccional indicada no Esquema I para preparar os compostos de fórmula geral ( A)
Esquema I T—(OH --► T—[OCHjtOCHjJnjSCH^ (Aa) | (B) T-i0CHj(0CH2)m0P(0}(0R>)2h (C) (A)
No Esquema I o símbolo Τ’ representa um derivado do taxano em que os grupos hidroxi não reactivos foram bloqueados; o símbolo RJ representa um grupo protector do radical fosfono; e os símbolos nem têm os significados definidos antes. Assim, um grupo Τ’ apropriadamente protegido comportando um ou mais grupos hidroxi reactivos é convertido primeiramente num éter metiltiometílico correspondente de fórmula geral (B). Utilizando paclitaxel como exemplo, o símbolo T' pode ser o paclitaxel propriamente dito (para efectuar a 2’,7-bismetil-tiometilação), 7-O-trietilsililpaclitaxel, ou 2’-0-etoxicarbonilpaclitaxel. Pode preparar-se um composto de fórmula geral (B) na qual o símbolo m representa o número 0 mediante tratamento de um composto de fórmula geral T’-[OH]n com 75* dimetilsulfóxido/anidrido acético, ou com sulfureto de dimetilo e um peróxido orgânico. Estas reacções são discutidas mais completamente numa secção subsequente. O éter MTM tendo uma unidade metilenoxi interveniente (isto é compostos de fórmula geral (B) na qual m = 1) pode ser preparado seguindo diversas vias possíveis. Numa, faz-se reagir um composto de fórmula geral (B) na qual o símbolo m representa o número 0 com N-iodossuccinimida (NIS) e metiltiometanol para prolongar a cadeia de uma unidade metilenoxi. Γ—[OCHjSCRjJn + Π CHjSCH^—OH MS— T—[OCHjOCHjSCHJ,, O composto de metiltiometanol e a sua preparação encontram-se descritos em Svn. Comm.. 1986, 16 (13): 1607 - 1610.
Num método alternativo, faz-se reagir o T-alcóxido (Ad) gerado mediante tratamento de um composto de fórmula geral (Aa) com uma base tal como n-butil-lítio, diisopropilamida de lítio ou hexametildisilazida de lítio com éter clorometil-metiltiometílico para se obter um composto de fórmula geral (B) na qual o símbolo m representa o número 1. Γ—[σΐη + n CH3SCHj—OCHjCI -- Τ'—[OCHjOCHjSCH·^ (Ad) (Ae)
Prepara-se o composto de fórmula geral (Ae) mediante reacção de metiltiometóxido (obtido a partir de metiltiometanol mediante tratamento com uma base tal como n-butil-litio, diisopropilamida de lítio ou hexametildisilazida de lítio) com cloroiodometano. Pode igualmente preparar-se o composto de fórmula geral 17 (Ae) mediante tratamento do éter Ι,Γ-diclorodimetílico (C1CH20CH2C1) com uma quantidade estequiométrica ou inferior (por exemplo igual a cerca de 0,8 equivalente) de iodeto de sódio seguido por tiometóxido de sódio. O éter Ι,Γ-diclorodimetílico é referido em Ind. J. Chem,, 1989, 28B, pp. 454 - 456.
Num outro método, faz-se reagir um composto de fórmula geral (Aa) com éter bis-(MTM), CH3SCH2OCH2SCH3, e NIS para se obter um composto de fórmula geral (B) na qual o símbolo m representa o número 1. T - [OH]n + n CH3SCH2OCH2SCH3-> ΊΓ - [OCH2OCH2SCH3]n
Prepara-se o éter bis(MTM) mediante reacção do éter Ι,Γ-dicloro-dimetílico com iodeto de sódio seguido por tiometóxido de sódio. O processo descrito anteriormente que utiliza metiltiometanol e NIS pode ser aplicado a qualquer reagente tendo um grupo MTM para prolongar a cadeia de uma unidade metilenoxi de uma só vez. Por exemplo, pode fazer-se reagir um composto de fórmula geral (B) na qual o símbolo m representa o número 1 com metiltiometanol e NIS para se obter um composto de fórmula geral (B) na qual 0 símbolo m representa o número 2. Pode repetir-se o processo para se obter compostos de fórmula geral (B) na qual o símbolo m representa o número 3, 4, 5 ou 6.
Na segunda fase ilustrada no Esquema I, converte-se o éter metiltiometílico no éter fosfono-oximetílico protegido correspondente. Consegue-se isto mediante tratamento do éter MTM com NIS e fosfato protegido HOPÍOXOR/)?. Na terceira fase, elimina-se o grupo protector do radical fosfono e quaisquer grupo(s) protector(es) do radical hidroxi para se obter um composto de fórmula geral 18 (A). Por exemplo, um grupo protector do radical fosfono apropriado é o grupo benzilo que pode ser eliminado mediante hidrogenólise catalítica; os grupos protectores do radical hidroxi tais como trialquilsililo podem ser eliminados pelo ião fluoreto, e o tricloroetoxicarbonilo pode ser eliminado pelo zinco. A eliminação de grupos protectores encontra-se descrita em livros de texto tais como Green e Wuts, Protective Groups in Organic Svnthesis. John Wiley & Sons, 1991, e McOmie, Protective in Organic Chemistrv. Plenum Press, 1973. Ambas as fases encontram-se descritas em pormenor numa secção ulterior na presente memória descritiva.
No Esquema II proporciona-se uma variação do esquema reaccional ilustrado no Esquema I.
Esquema II TV-{OHJn + n CH3SCH2(OCH2)mOP(0)(ORy)2 (Aa) (Ca)
(Q
No Esquema II, faz-se reagir um composto de fórmula geral (Aa) com um composto de fórmula geral (Ca) e NIS para se obter um composto de fórmula geral (C), que é então desbloqueado para se obter um composto de fórmula geral (A). Podem preparar-se os compostos de fórmula geral (Ca) na qual o símbolo m representa o número 0 tratando em primeiro lugar metiltiometanol com uma base tal como hexametildisilazida de Na, Li ou K para se obter o metiltiometóxido; faz-se então reagir o metóxido com um clorofosfato protegido tal como clorofosfato de
19 dibenzilo para se obter o composto desejado. Podem preparar-se os compostos de fórmula geral (Ca) na qual o símbolo m representa o número 1 mediante tratamento de CH3SCH2OCH2CI com um sal fosfato diprotegido, por exemplo sais de sódio, potássio, tetra-(n-butil)-amónio de fosfato de dibenzilo; ou pode converter-se primeiramente o CH3SCH2OCH2CI no composto iodado correspondente utilizando iodeto de sódio antes de se fazer reagir com o sal fosfato. Como alternativa, podem preparar-se os compostos de fórmula geral (Ca) na qual o símbolo m representa o número 1 mediante tratamento de CICH2OCH2CI com iodeto de sódio seguido por tiometóxido de sódio para se obter CH3SCH2OCH2SCH3; trata-se então este composto com NIS e um fosfato diprotegido tal como fosfato de dibenzilo para se obter o produto desejado. Qualquer dos reagentes mencionados anteriormente comportando um grupo MTM pode ser prolongado de uma unidade metilenoxi de uma só vez fazendo reagir o referido reagente com metiltiometanol e NIS.
Num outro método para a preparação de um composto de fórmula geral (A), faz-se reagir o T-alcóxido (Ad) com um iodofosfato tal como se ilustra no Esquema III.
Esquema III T-IO-ln + ICHjCOO^OPtOHOR^ (Ad) o
(Q
No Esquema III, obtém-se o composto iodofosfato mediante reacção de ClCH2(OCH2)mCl, com um sal fosfato diprotegido para se obter o composto
20
ClCH2(0CH2)m0P(0)(0Ry)2 que se trata então com iodeto de sódio para se obter o produto desejado.
Ainda um outro método apropriado para a preparação de um subconjunto de compostos de fórmula geral (A) em que pelo menos um dos grupos fosfono--oximetóxi se encontra ligado ao radical taxano encontra-se ilustrado no Esquema IV
Esquema IV
1S-OH—txn —[OCH^OCH^SCHjl,, (D) (Ba)
No Esquema IV, os símbolos m e n têm os significados definidos antes; o símbolo X representa um grupo diferente do átomo de hidrogénio, o símbolo P representa um grupo protector do radical hidroxi; o símbolo txn representa um radical taxano. Os compostos de fórmula geral (D) são taxanos tendo um grupo 13a-hidroxi e um ou mais éteres metiltiometílicos ligados directamente ou indirectamente ao núcleo do taxano; também se encontram incluídos alcóxidos de metal Cl3 de fórmula geral (D). Um exemplo de um composto de fórmula geral (D) é a 7-O-metiltiometilbacatina III:
21 O acoplamento do taxano (D) com a azetidinona é análogo ao ilustrado no Esquema VI, infra: assim, o processo aí descrito para a,preparação de um composto de fórmula geral (Id) é igualmente aplicável à preparação de um composto de fórmula geral (Ba) [isto é um composto de fórmula geral (B) na qual pelo menos um dos grupos MTM se encontra ligado directa ou indirectamente ao radical taxano], se se utilizar um composto de fórmula geral (D) em vez de um composto de fórmula geral (Π) no Esquema VI. O taxanon (D) é de preferência convertido primeiramente num alcóxido metálico Cl3 tal como um alcóxido de sódio, potássio ou litio; prefere-se o alcóxido de lítio. A azetidinona serve como precursor da cadeia lateral Cl3. Após a reacção de acoplamento com um taxano, elimina-se o grupo P protector do radical hidroxi e, se necessário, o grupo hidroxi livre na cadeia lateral pode ser convertido no éter MTM ou derivatizado num éster ou num carbonato tal como descrito na presente memória descritiva.
Pode preparar-se a azetidinona recorrendo aos métodos descritos mais adiante os quais são também métodos geralmente conhecidos na especialidade. Podem preparar-se os compostos de fórmula geral (D) pelo processo geral descrito anteriormente para a preparação de compostos de fórmula geral (B) utilizando um taxano apropriadamente protegido. Contudo, mais convenientemente, eles podem ser obtidos a partir de um composto de fórmula geral (Ba) mediante cisão da cadeia lateral 13 utilizando um hidreto de boro tal como boro-hidreto de sódio ou tetrabutilamónio; por exemplo, trata-se 7-0-MTM de paclitaxel com boro-hidreto de tetrabutilamónio para se obter a 7-0-MTM bacatina III. O processo geral do Esquema I para a preparação de um composto de
I 22 fórmula geral (A) é mais particularmente exemplificado no Esquema V que ilustra a preparação de um composto de fórmula geral (Γ) (isto é um composto de fórmula geral (I) na qual o símbolo m representa o número 0). O processo utilizado nesta sequência sintética é aplicável de uma maneira geral a outros derivados do taxano não englobados especificamente na fórmula geral (I). Além disso, o processo no Esquema V pode ser modificado de acordo com os ensinamentos contidos na presente memória descritiva por um especialista na matéria para chegar aos derivados do taxano de fórmula geral (A) na qual o símbolo m representa o número 1 ou 2.
Deve entender-se que no Esquema V bem como noutras partes da presente memória descritiva, a expressão “grupo protector do radical hidroxi” pode englobar carbonatos (-OC(0)ORx); assim, quando se utiliza um carbonato como grupo protector do radical hidroxi, pretende-se eliminá-lo numa fase ulterior para gerar o grupo hidroxi livre, pois de outro modo o radical carbonato permanece como parte do produto final:
23Esquema V
(Ia)
(Ib) (2) NIS/H0P(0)(ORy}2
(Ic) (3) remoção do grupo protector do radical fosfono e, se presente, do grupo protector do radical hidroxi
No Esquema V, o símbolo Rlri representa um grupo hidroxi, hidroxi 24 protegido, -0C(0)Rx ou -0C(0)0Rx; o símbolo R2 representa um átomo de hidrogénio, e o símbolo R2a representa um átomo de hidrogénio ou um grupo hidroxi, hidroxi protegido, ou -OC(0)ORx, ou o símbolo R2 representa um átomo de flúor e o símbolo R2a representa um átomo de hidrogénio; o símbolo R3a representa um átomo de hidrogénio, ou um grupo hidroxi, hidroxi protegido, acetoxi, ou -0C(0)0Rx; um dos símbolos R6a ou R7a representa um átomo de hidrogénio e o outro representa um grupo hidroxi, hidroxi protegido ou alcanoíloxi Ci_6, ou os símbolos R6a e R7a formam conjuntamente um grupo oxo; com a condição de pelo menos um dos símbolos Rla, R2a ou R3a, R6a ou R/a representar um grupo hidroxi. O símbolo R,b representa um grupo hidroxi, hidroxi protegido, -OCH2SCH3, -0C(0)Rx ou -OC(0)ORx; o símbolo R^ representa um átomo de hidrogénio e o símbolo R2b representa um átomo de hidrogénio ou um grupo hidroxi, hidroxi protegido, -OCH2SCH3 ou -0C(0)0Rx; ou o símbolo R2 representa um átomo de flúor e o símbolo R2b representa um átomo de hidrogénio; o símbolo R3b representa um átomo de hidrogénio ou um grupo hidroxi, hidroxi protegido, acetoxi, -OCH2SCH3 ou -0C(0)0Rx; um dos símbolos R6b ou R711 representa um átomo de hidrogénio e o outro representa um grupo hidroxi, hidroxi protegido, alcanoíloxi Ci_c, ou -OCH2SCH3; ou os símbolos Reb e R7b formam conjuntamente um grupo oxo; com a condição de pelo menos um dos símbolos Rlb, Rib, R3b, R6b ou R™ representar um grupo -OCH2SCH3. O símbolo RIc representa um grupo hidroxi, hidroxi protegido, -OCH2OP(0)(ORy)2, -OC(0)Rx ou -0C(0)0Rx; o símbolo R2 representa um átomo de hidrogénio e o símbolo R2c representa um átomo de hidrogénio ou um grupo hidroxi, hidroxi protegido, -0CH20P(0)(0R>)2 ou -0C(0)0Rx; ou o símbolo
R2 representa um átomo de flúor e o símbolo R2° representa um. átomo de hidrogénio; o símbolo R3c representa um átomo de hidrogénio, ou um grupo hidroxi, hidroxi protegido, acetoxi, -0CH20P(0)(0Ry)2 ou -0C(0)0RN, um dos símbolos R6·" ou R7c representa um átomo de hidrogénio e o outro representa um grupo hidroxi, hidroxi protegido, alcanoíloxi C|_6 ou -OCH2OP(0)(ORy)2; com a condição de pelo menos um dos símbolos Rlc, R2c, R3c, R6c ou R7c representar um grupo -0CH20P(0)(0R>)2. O símbolo R1 representa um grupo hidroxi, -OCH2OP(0)(OH)2, -0C(0)Rx ou -0C(0)0Rx; o símbolo R2 representa um átomo de hidrogénio e o símbolo R2 representa um átomo de hidrogénio ou um grupo hidroxi, -0CH20P(0)(0H)2 ou -0C(0)0Rx; ou o símbolo R2 representa um átomo de flúor e o símbolo R2 representa um átomo de hidrogénio; o símbolo R3 representa um átomo de hidrogénio ou um grupo hidroxi, acetoxi, -0CH20P(0)(0H)2 ou -0C(0)0Rx; um dos símbolos R6 ou R7 representa um átomo de hidrogénio e o outro representa um grupo hidroxi, alcanoíloxi ou -0CH2P(0)(0H)2; com a condição de pelo menos um dos símbolos R1, R2, R3, R6 ou R7 representar um grupo -0CH20P(0)(0H)2. Os símbolos R4, R5 e Rx têm os significados definidos antes e o símbolo Ry representa um grupo protector do radical fosfono.
Na primeira fase, converte-se o grupo hidroxi livre de um composto de fórmula geral (Ia) no grupo éter metiltiometílico correspondente (-OCH2SCH3). Esta conversão pode ser realizada tanto num como em dois processos (1 a - o método do sulfúreto de dimetilo) e (lb - o método do dimetilsulfóxido). O método do sulfureto de dimetilo para converter álcoois em éteres metiltiometílicos encontra-se referido em Medina et al, Tet. Lett., 1988, pp. 3773 - 3776, cujas partes relevantes do
mesmo se encontram incorporadas na presente memória descritiva a título de referência. O método do dimetilsulfóxido é a reacção bem conhecida vulgarmente conhecida como reacção de Pummerer.
Deve salientar-se que a reactividade de um grupo hidroxi difere na dependência da sua localização no derivado do taxano como composto inicial de fórmula geral (Ia). Embora de uma maneira geral o grupo 2’-hidroxi seja mais reactivo nas reacções de acilação do que o grupo 7-hidroxi que por sua vez é mais reactivo do que o grupo 10-hidroxi, descobriu-se que, surpreendentemente, o grupo 7-hidroxi é mais facilmente convertido no éter metiltiometílico do que o grupo 2’-hidroxi. O grupo hidroxi terciário em C-l é habitualmente o menos reactivo. A diferença da reactividade do grupo hidroxi pode ser explorada no controlo do sítio e do grau de metiltiometilação.
Assim, com um composto de fórmula geral (Ia) na qual os símbolos R,a e R2j representam, cada um, um grupo hidroxi, o produto predominante da metiltiometilação é o éter correspondente 7-0-metiltiometílico. A fim de se obter um composto de fórmula geral (Ib) na qual o símbolo Rlb representa um grupo metiltiometoxi, sem também converter o grupo 7-hidroxi, se presente, num éter metiltiometílico, bloqueia-se o grupo 7-hidroxi com um grupo protector convencional do radical hidroxi tal como o grupo trietilsililo. De maneira análoga, pode obter-se o éter 10-metiltiometílico sem também converter os grupos 7- e/ou 2’-hidroxi, se presentes, quando estes últimos grupos se encontram bloqueados pelos mesmos ou por grupos protectores do radical hidroxi diferentes. Muito embora o grupo 7-hidroxi seja o sítio de metiltiometilação preferencial, é ainda preferível 27 proteger o grupo 2’-hidroxi se o éter 7-monometiltiometílico for o produto desejado.
Além disso, podem manipular-se as condições reaccionais para favorecer a formação de éter bis- ou tris-metiltiometílico de derivados do taxano. Por exemplo, no caso do paclitaxel, o aumento do tempo de reacção ou a utilização de um excesso maior de reagentes de metiltiometilação pode ter como resultado uma razão mais elevada de éter-2’,7-bis-(metiltiometílico) paclitaxel na mistura produzida.
Voltando agora ao Esquema V, no processo (la) trata-se um composto de fórmula geral (Ia) com sulfureto de dimetilo e um peróxido orgânico tal como peróxido de benzoilo. Realiza-se a reacção no seio de um solvente orgânico inerte tal como acetonitrilo, cloreto de metileno e similares, a uma temperatura que conduz à formação do produto; tipicamente, realiza-se a reacção numa gama de temperaturas compreendida entre cerca de —40°C e próximo da temperatura ambiente. Utiliza-se sulfureto de dimetilo e peróxido de benzoilo em excesso em relação ao derivado do taxano como material inicial (Ia), e utiliza-se o sulfureto de dimetilo em excesso em relação ao peróxido de benzoilo.
As quantidades relativas de materiais iniciais utilizados dependerão do grau de metiltiometilação a ser alcançado. Assim, quando se pretende converter um grupo hidroxi livre do derivado de taxano como material inicial (Ia) no éter metiltiometílico, pode utilizar-se sulfureto de dimetilo e peróxido de benzoilo em um excesso de até 10 vezes em relação ao derivado do taxano de fórmula geral (Ia); e, de preferência, utiliza-se sulfureto de dimetilo em um excesso de cerca de 2 a 3 vezes em relação ao peróxido de benzoilo. No caso em que o material inicial (Ia) tem tanto grupos 2’- e 7-hidroxi, a quantidade de éter 2’,7-bis-(metiltiometílico) 28 obtido aumenta com as quantidades relativas de sulfiireto de dimetilo e peróxido de benzoílo. Quando o éter 2\7-bis-(metiltiometílico) é o produto desejado, utiliza-se de preferência o sulfureto de dimetilo em uma quantidade em excesso de cerca de 15 a cerca de 20 vezes a do derivado de taxano como material inicial; e utiliza-se o peróxido de benzoílo em um excesso de cerca de 5 a cerca de 10 vezes em relação ao derivado do taxano como material inicial.
Como alternativa, pode preparar-se um composto de fórmula geral (Ib) mediante reacção de um composto de fórmula geral (Ia) com dimetilsulfóxido e ácido acético (processo lb). Este processo é apropriado para derivatizar um grupo não-2’-hidroxi no seu éter metiltiometílico. No processo (lb), dissolve-se um composto de fórmula geral (Ia) em dimetilsulfóxido e adiciona-se anidrido acético à solução. Realiza-se habitualmente a reacção à temperatura ambiente e durante 18a 24 horas para produzir o éter monometiltiometílico.
Na segunda fase da sequência reaccional, converte-se o éter metiltiometílico no éter fosfono-oxunetíhco protegido correspondente. Pode realizar-se a metiltiometilação para a conversão do fosfono-oximetilo protegido pelo método geral referido em Veeneman et al, Tetrahedron. 1991, v47, pp. 1547 - 1562, cujas partes relevantes do mesmo são incorporadas na presente memória descritiva a título de referência. Deste modo, trata-se um composto de fórmula geral (lb) com pelo menos um grupo éter metiltiometílico com N-iodossuccinimida e um ácido fosfórico protegido tal como fosfato de dibenzilo. Realiza-se a reacção no seio de um solvente orgânico inerte tal como tetra-hidrofurano ou um hidrocarboneto halogenado tal como 1,2-dicloroetano ou cloreto de metileno, e eventualmente na 29 presença de um agente de desidratação tal como peneiros moleculares. Pode também adicionar-se um catalisador tal como trifluorometano-sulfonato de prata para acelerar a reacção. Realiza-se a reacção a uma temperatura compreendida entre cerca de 0°C e cerca da temperatura ambiente, de preferência à temperatura ambiente. Utiliza-se N-iodossuccinimida e o ácido fosfórico protegido em cerca do mesmo equivalente molar como o éter metiltiometílico (Ib), mas utilizou-se de preferência em um ligeiro excesso, por exemplo cerca de 1,3 a cerca de 1,5 equivalentes em relação ao composto de fórmula geral (Ib).
Na terceira fase da sequência reaccional, eliminam-se, se presentes, o grupo protector do radical fosfono e o grupo protector do radical hidroxi. Realiza-se o desbloqueamento mediante métodos convencionais bem conhecidos na especialidade tais como hidrólise catalisada por ácidos ou por bases, hidrogenólise, redução e similares. Por exemplo, pode utilizar-se a hidrogenólise catalítica para eliminar o grupo protector do radical benzil-fosfono bem como o grupo protector do radical benziloxicarbonil-hidroxi. Podem descobrir-se metodologias de desprotecção em textos correntes tais como Greene e Wutz, ou McOmie, supra.
Podem formar-se os sais da base de um composto de fórmula geral (I) mediante técnicas convencionais que envolvem o contacto de um composto de fórmula geral (I) sob a forma de ácido livre com uma base metálica ou com uma amina. As bases metálicas apropriadas incluem hidróxidos, carbonatos e bicarbonatos de sódio, potássio, lítio, cálcio, bário, magnésio, zinco e alumínio; e as aminas apropriadas incluem trietilamina, amónia, lisina, arginma, N-metilglucamina, etanolamina, procaína, benzatina, dibenzilamina, trometamina (TRIS),
30 cloroprocaína, colina, dietanolamina, trietanolamina e similares. Os sais de bases podem ser ainda purificados mediante cromatografia seguida por liofilização ou cristalização.
DERIVADOS DO TAXANO COMO COMPOSTOS INICIAIS
Os processos descritos anteriormente podem ser aplicados a quaisquer derivados do taxano de fórmula geral T-[OH]n para formar compostos de fórmula geral (A). Muitos exemplos de compostos de fórmula geral T-[OH]n foram referidos na literatura e alguns deles encontram-se indicados mais abaixo, (a) paclitaxel, (b) Taxotere*'; (c) 10-desacetilpaclitaxel; (d) derivados do taxano descritos no pedido de patente de invenção PCT n° 93/06079 (publicado em 1 de Abril de 1993) com a fórmula geral
na qual o símbolo R! representa um grupo -OR^, -SR7 ou -NR8R9; o símbolo R2 representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo, alcenilo, alcinilo, arilo ou heteroarilo; os símbolos R3 e R4 representam, cada um, independentemente, um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo, alcenilo, alcinilo, arilo, heteroarilo ou acilo, com a condição, contudo, de os símbolos R3 e R4 não poderem representar simultaneamente um grupo acilo; o símbolo R5 representa um grupo -COR]0, 31 -COORio, -COSRio, -CONR8Rio, -S02Rn, ou -POR12Ru; o símbolo R$ representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo, alcenilo, alcinilo, arilo, heteroarilo, um grupo protector do radical hidroxi ou um grupo funcional que aumenta a solubilidade em água do derivado do taxano; 0 símbolo R7 representa um grupo alquilo, alcenilo, alcinilo, arilo, heteroarilo ou um grupo protector do radical sulfídrilo; o símbolo R8 representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo, alcenilo, alcinilo, arilo, heteroarilo; o símbolo R9 representa um grupo protector do radical amino; o símbolo Rio representa um grupo alquilo, alcenilo, alcinilo, arilo, heteroarilo; o símbolo Ru representa um grupo alquilo, alcenilo, alcinilo, arilo, heteroarilo, -OR10 ou -NR8Ri4; os símbolos R|2 e Ru representam, cada um, independentemente um grupo alquilo, alcenilo, alcinilo, arilo, heteroarilo, -OR]0 ou -NR8R14; o símbolo Ri4 representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo, alcenilo, alcinilo, arilo, heteroarilo; os símbolos Ru e R16 representam, cada um, independentemente, um átomo de hidrogénio ou um grupo hidroxi, alcanoíloxi inferior, alcenoíloxi, alcinoíloxi, ariloíloxi ou os símbolos Ru e Ru formam conjuntamente um grupo oxo; os símbolos R17 e Ru representam, cada um, independentemente, um átomo de hidrogénio ou um grupo hidroxi, alcanoíloxi inferior, alcenoíloxi, alcinoíloxi, ariloíloxi ou os símbolos R17 e R)8 formam conjuntamente um grupo oxo; os símbolos R19 e R20 representam, cada um, independentemente, um átomo de hidrogénio ou um grupo hidroxi ou alcanoíloxi inferior, alcenoíloxi, alcinoíloxi ou ariloíloxi; os símbolos R2i e R22 representam, cada um, independentemente. um átomo de hidrogénio ou um grupo alcanoíloxi inferior, alcenoíloxi, alcinoíloxi, ou ariloíloxi ou os símbolos R21 e R22 formam 32 conjuntamente um grupo oxo; o símbolo R24 representa um átomo de hidrogénio ou um grupo hidroxi ou alcanoíloxi inferior, alcenoíloxi, alcinoíloxi ou ariloíloxi; os símbolos R.23 e R24 formam conjuntamente um gmpo oxo ou metileno ou os símbolos R23 e R24 conjuntamente com o átomo de carbono ao qual se encontram ligados formam um anel oxirano ou os símbolos R23 e R22 conjuntamente com o átomo de carbono ao qual se encontram ligados formam um anel oxetano; o símbolo R25 representa um átomo de hidrogénio ou um grupo hidroxi ou alcanoíloxi inferior, alcenoíloxi, alcinoíloxi ou ariloíloxi; ou o símbolo R26 representa um átomo de hidrogénio ou um grupo hidroxi ou alcanoíloxi inferior, alcenoíloxi, alcinoíloxi ou ariloíloxi; ou os símbolos R26 e R25 considerados conjuntamente formam um grupo oxo; e o símbolo R27 representa um átomo de hidrogénio ou um grupo hidroxi ou alcoxi inferior, alcanoíloxi inferior, alcenoíloxi, alcinoíloxi ou ariloíloxi, (e) derivados do taxano descritos na patente de invenção norte-amencana n° 5 227 400 derivados de 3,-desfenil-3’-(2-furilo) ou 3’-(2-tienilo) de paclitaxel, Taxoteré*; (f) derivados do taxano descritos na patente de invenção EP 534 709 publicada em 31 de Março de 1993 (derivados de paclitaxel nos quais os grupos fenilo da cadeia lateral são substituídos independentemente por grupos naftilo, estirilo ou fenilo substituído). Veja-se também a patente de invenção PCT 92/09589 publicada em 11 de Junho de 1992; (g) derivados do taxano descritos na patente de invenção EP 534 707 publicada em 31 de Março de 1993 (derivados de paclitaxel em que o grupo 3’-N-benzoílo é substituído por etoxicarbonilo ou metoxicarbonilo); (h) pedido de patente de invenção PCT 93/06093 publicado em 1 de Abnl de 1993 (derivados de 10-desacetoxi de paclitaxel e Taxotere®); (i) patente de invenção EP 524 093 33 publicada em 20 de Janeiro de 1993, (denvados do taxano 10-, 7- ou 7,10-bis-O-(N-carbamoílo substituídos); (j) o análogo do 9-a-hidroxi de paclitaxel encontra-se descrito em Klein, “Synthesis of 9-Dihidrotaxol; A New Bioactive Taxane”, Tetrahedron Letters, 1993, 34(13):2047-2050; (k) os análogos de 14-3-hidroxi de paclitaxel e Taxatere® preparados a partir de 14P-hidroxi-10-desacetilbacatma III encontram-se descritos no 205th ACS National Meeting no Colorado, 1993. (Med. Chem. Division., Abstract N° 28); e (1) outros taxanos, tais como C7-fluorotaxanos e diversos taxanos C10 substituídos, tal como descritos no nosso pedido de patente de invenção norte-americana ainda pendente U.S.S.N.. 08/062 687 depositado em 20 de Maio de 1993 o qual é incorporado na presente memória descritiva a título de referência na sua totalidade. O grupo ou os grupos hidroxi livres do derivado do taxano podem ser convertidos de acordo com métodos convencionais nos correspondentes ésteres ou carbonatos; por exemplo nos compostos de fórmula geral (Ia) um dos símbolos Rhl, R2a ou R3a representa um grupo -OC(0)Rx ou -OC(0)ORx e o símbolo Rx tem os significados definidos antes. Assim, pode fazer-se reagir um derivado do taxano de fórmula geral T-OH com um composto de fórmula geral L-C(0)ORx (o símbolo L representa um grupo eliminável) tal como um cloroformato na presença de uma base tal como uma amina terciária para se obter o carbonato correspondente, por exemplo, o paclitaxel reage com cloroformato de etilo na presença de diisopropiletilamina para se obter o 2,-0-etiloxicarbonilpaclitaxel. Pode também fazer-se reagir o T-OH com um ácido carboxilico de fórmula geral RXC02H ou com um seu equivalente de acilação (por exemplo um anidrido, éster activo ou um
34 halogeneto de acilo) para se obter o éster correspondente.
Adicionalmente, podem-se preparar derivados do taxano de fórmula geral T-[OH]n mediante acilação de um radical taxano tendo um grupo hidroxi C13 com um ácido 3-amino-2-hidroxipropanóico apropriadamente substituído, um seu equivalente de acilação ou um seu precursor. Precursores apropriados do ácido 3-amino-2-hidroxipropanóico substituído são por exemplo azetidinonas de fórmula geral (ΙΠ). Esta reacção de acilação encontra-se exemplificada pelo acoplamento da bacatina III hidroxi protegida ou da I O-desacetilbacatina III hidroxi protegida e um derivado de fenilisoserina para se obter derivados de paclitaxel conforme descrito por exemplo em Denis et al., patentes de invenção norte-americanas n° 4 924 011 e 4 924 012; e no acoplamento de uma bacatina III protegida e de uma azetidinona para se obter o paclitaxel e os seus derivados conforme descrito no pedido de patente de invenção europeia publicado n° 400 971, publicado em 5 de Dezembro de 1990 (agora patente de invenção norte-americana n° 5 175 315) e na patente de invenção norte-americana n° 5 229 526. O processo tal como descrito na patente de invenção EP 400 971 (o processo de Holton) envolve a reacção de l-benzoíl-3-(l-etoxi)-etoxi-4-fenil-2--azetidinona com 7-O-trietilsililbacatina III na presença de N,N-dimetilamino-piridina e piridina à temperatura de 25°C durante 12 horas; obtém-se o paclitaxel após eliminação dos diversos grupos protectores do radical hidroxi. Um aperfeiçoamento do processo de Holton encontra-se descrito por Ojima et al em “New and Efficient Approaches to the Semisynthesis of Taxol and its C-13 Side Chain Analogs by Means of β-Lactam Synthon Method” Tetrahedron. 1992, 35 48(34) 6985-7012. O processo de Ojima envolve primeiramente a produção do sal de sódio de 7-trietilsililbacatina ΙΠ com hidreto de sódio; faz-se reagir então este sal com l-benzoíl-3-(l-etoxi)-etoxi-4-fenil-2-azetidinona quiral para se obter o paclitaxel após eliminação dos grupos protectores do radical hidroxi. Na patente de invenção norte-americana n° 5 229 526, Holton descreve o acoplamento de um alcóxido metálico de bacatina III ou um seu derivado com uma 2-azetidinona para se obter taxanos com uma cadeia lateral Cl3. Este processo é referido como sendo altamente diastereoselectivo; por consequência, podem utilizar-se misturas racémicas do precursor da cadeia lateral da 2-azetidinona. Recentemente, Ojima et al referiram em “A Highly Efficient Route to Taxotere by the β-Lactam Synthon Method”, Tetrahedron Letters. 1993, 34(26):4149-4152, o acoplamento de alcóxidos metálicos de 7,10-bis-O-(tncloroetoxicarbonil)-10-desacetilbacatina III com l-(t-butoxicarbonil)-4-fenil-3-(hidroxi protegido)-2-azetidinona quiral para se obter Taxotere® após desprotecção. O processo da bacatma/azetidinona generalizado à preparação dos compostos de fórmula geral (Ia) encontra-se ilustrado no Esquema IV. Mais uma vez, podem também preparar-se outros derivados do taxano não especificamente englobados na fórmula geral (Ia) por este processo recorrendo a materiais iniciais apropriados.
Esquema VT
(Ia)
No Esquema IV, o símbolo R2 representa um átomo de hidrogénio e o símbolo R2d representa um átomo de hidrogénio ou um grupo hidroxi protegido ou um grupo de fórmula geral -0C(0)0Rx; ou o sómbolo R2 representa um átomo de flúor e o símbolo R2d representa um átomo de hidrogénio; o símbolo R3d representa um átomo de hidrogénio, um grupo acetoxi, um grupo hidroxi protegido ou um grupo de fórmula geral —0C(0)0Rx, um dos símbolos R6d ou R7d representa um átomo de hidrogénio e o outro representa um grupo hidroxi, hidroxi protegido ou alcanoíloxi C]^, ou os símbolos R6d e R7d formam conjuntamente um grupo oxo; o símbolo P representa um grupo protector do radical hidroxi; o símbolo M representa um átomo de hidrogénio ou um metal do Grupo IA tal como lítio, sódio ou potássio; 37 e os símbolos p, R4, R5 e Rx têm os significados definidos antes. Pode conduzir-se a reacção de acordo com o processo descrito na patente de invenção EP 400 971 em que se faz reagir o derivado de bacatina III de fórmula geral (II) na qual o símbolo M representa um átomo de hidrogénio com uma azetidinona de fórmula geral (III) na presença de uma base orgânica tal como Ν,Ν-dimetilaminopiridina. De preferência, contudo, converte-se primeiramente o derivado de bacatina III num 13-alcóxido mediante tratamento do primeiro com uma base forte tal como hidretos, alquilamidas e bis-(trialquilsilil)-amidas de metais do Grupo IA conforme descrito na patente de invenção norte-americana n° 5 229 526 e nas referências de Ojima, supra. Mais preferivelmente, o 13-alcóxido é um alcóxido de lítio. Consegue-se a formação de um sal de lítio mediante reacção de um composto de fórmula geral (II) na qual o símbolo M representa um átomo de hidrogénio com uma base forte de metal, tal como diisopropilamida de lítio, C,^ alquil-lítio, bis-(trimetilsilil)-amida de lítio, fenil-lítio, hidreto de lítio, ou a base semelhante. A reacção de acoplamento entre um taxano de fórmula geral (II) e uma azetidinona de fórmula geral (ΠΙ) é conduzida no seio de um solvente orgânico inerte tal como o tetra-hidrofurano a uma temperatura reduzida na gama de cerca de 0°C até cerca de -78°C. Podem utilizar-se as azetidinonas de fórmula geral (III) como uma mistura racémica para acoplamento com os alcóxidos metálicos do taxano de fórmula geral (II) na qual o símbolo M representa o metal do Grupo 1 A; em um tal caso, utiliza-se de preferência o reagente azetidinona em pelo menos 2 equivalentes em relação ao reagente taxano, e mais preferivelmente entre cerca de 3 e cerca de 6 equivalentes. Podem também utilizar-se as azetidinonas quirais e, em 38 tais casos, pode ser suficiente um equivalente da azetidinona em relação ao taxano, mas de preferência utiliza-se a azetidinona em um ligeiro excesso, por exemplo de até 1,5 equivalentes.
Os grupos protectores do radical hidroxi podem ser os mesmos ou podem ser escolhidos de uma maneira a permitir a eliminação selectiva de um ou mais grupos protectores sem afectar substancialmente os outros; por exemplo, num composto de fórmula geral (Id), os símbolos R2d e PO podem representar simultaneamente trietilsililoxi, e o símbolo R3d pode representar um grupo benziloxicarbonilo; a hidrogenólise catalítica na presente de paládio sobre carvão elimina o grupo protector benziloxicarbonilo sem eliminar o grupo trietilsililo. Deste modo, os grupos protectores do radical hidroxi de um composto de fórmula geral (Id) podem ser eliminados selectivamente para se obter um composto de fórmula geral (Ia).
Os compostos de fórmula geral (II) ou são conhecidos na literatura, v.g. bacatina III, 10-desacetilbacatina ΠΙ e os seus derivados hidroxi protegidos, ou podem ser preparados a partir de compostos conhecidos recorrendo a métodos convencionais, por exemplo convertendo um grupo hidroxi num carbonato. Podem preparar-se compostos adicionais de fórmula geral (II) de acordo com os processos descritos a seguir na secção PREPARAÇÃO DOS COMPOSTOS INTCIAIS.
Podem preparar-se os compostos de fórmula geral (III) a partir de um composto de fórmula geral (HIa) de acordo com o método geral descrito na patente de invenção EP 400 971 e Ojima et al, Tetrahedron. 48:6985-7012, 1992. 39 PO R5 PO, XR5 \ *· / base *1—1' R4(O)pCO-L ^-A^(0>pR« 0 0 (Illa) (III)
Deste modo, trata-se primeiramente um composto de fórmula geral (Illa) com uma base tal como n-butil-lítio ou trietilamina, e então segue-se com um composto de fórmula geral R4(0)pC0-L na qual o símbolo L representa um grupo eliminável para se obter um composto de fórmula geral (III).
Podem preparar-se os compostos de fórmula geral (Illa) de acordo com um método geral descrito na patente de invenção EP 400 917 indo através de um composto intermediário 3-acetoxi-4-substituído-2-azetidinona (Illb); ou pelo método descrito na patente de invenção US 5 229 526 indo através de um composto intermediário 3-trietilsililoxi-4-substituído-2-azetidinona. Num processo aperfeiçoado pode obter-se um composto de fórmula geral (Illb) mediante condensação do cloreto de acetoxiacetilo com uma bis-imina seguido por hidrogenólise ou cisão ácida para eliminar o grupo N-imina; este processo encontra-se ilustrado no esquema seguinte no qual o símbolo R5 representa um grupo arilo eventualmente substituído ou um grupo heteroarilo eventualmente substituído tal como um grupo furilo ou tienilo. Este processo encontra-se descrito no pedido de patente de invenção co-pendente U.S.S.N. 08/052 434 depositado em 23 de Abril de 1993. CH3CP)OCH2C<0)0 r5OHN=CHR5). base
'cisão com ácido
Os produtos (Illb) obtidos a partir destas reacções de cicloadição são habitualmente uma mistura racémica das duas cis-azetidinonas. Pode desdobrar-se a mistura racémica recorrendo a métodos convencionais tais como a conversão em diastereómeros, a absorção diferencial em coluna carregada com adsorventes quirais, ou enzimaticamente. Por exemplo, pode fazer-se contactar uma mistura racémica de compostos de fórmula geral (Illb) com uma enzima que catalisa a hidrólise de um éster, por exemplo uma esterase ou uma lipase, para cindir selectivamente o grupo 3-acilo de um enantiómero sem afectar o outro. (Veja-se, por exemplo Brieva et al, J. Org. Chem.. 1993, 58:1068-1075; também o pedido de patente de invenção co-pendente U.S.S.N. 092 170 depositado em 14 de Julho de 1993, o pedido de patente de invenção europeia com o número 552041 publicado em 29 de Julho de 1993). Como alternativa, pode-se submeter primeiramente a mistura racémica a uma hidrólise catalisada por base para eliminar o grupo 3-acilo e para gerar uma mistura racémica da 3-hidroxi β-lactama correspondente; a mistura racémica de 3-hidroxi β-lactama é então contactada com uma enzima susceptível de acilação por catálise de um grupo hidroxi para acilar selectivamente o grupo hidroxi de um enantiómero sem afectar o outro. Ou pode acilar-se a mistura racémica de 41 3- hidroxi β-lactama com um ácido carboxílico quiral e pode então separar-se a mistura diastereoisomérica resultante utilizando métodos conhecidos na especialidade, e eliminar-se o auxiliar quiral para se obter o enantiómero desejado.
Ojima et al em J. Org. Chem.. 56:1681-1683, 1991; Tet. Lett., 33:5737--5740, 1992; e Tetrahedron. 48:6985-7012, 1992 referiram a síntese de um número de azetidinonas quirais de fórmula geral (Illa) e/ou do congénere correspondente N-(p-metoxifenilo); em que o símbolo P representa o grupo triisopropilsililo protector do radical hidroxi; e o símbolo R5 representa um grupo 4- metoxifenilo, 3,4-dimetoxifenilo, fenilo, 4-fluorofenilo, 4-trifluorometilfenilo, 2-fúrilo, 2-femletenilo, 2-(2-fúril)-etenilo; 2-metilpropilo, ciclo-hexilmetilo, isopropilo, fenetilo, 2-ciclo-hexiletilo ou n-propilo. As partes relevantes destas referências são incorporadas na presente memória descritiva a título de referência. Podem preparar-se outras azetidinonas incluídas na definição da fórmula geral (III) mas não especifícamente descritas nessas referências por uma pessoa especializada na matéria seguindo as metodologias geralmente conhecidas na especialidade.
AVALIAÇÃO BIOLÓGICA
Os compostos de acordo com a presente invenção constituem agentes antitumor novos; avaliaram-se compostos representativos de fórmula geral (A) em ensaios de citotoxicidade in vitro e em modelos de tumor animal in vivo.
Valores da citotoxicidade in vitro
Os compostos de acordo com a presente invenção apresentaram in vitro actividade citotóxica contra células do carcinoma do cólon humano HCT-116 e HCT-116/VM46. As células HCT-116/VM46 são células que foram previamente
escolhidas para a resistência ao teniposido e exprimem a resistência fenotípica multi-fármaco, incluindo resistência ao paclitaxel. A citotoxicidade foi avaliada em células de carcinoma de cólon humano HCT-116 por ensaio XTT (hidróxido de 2,3-bis-(2-metoxi-4-nitro-5-sulfeml)-5-[(femlamino)-caibornl]-2H-tetrazólio) conforme referido em D. A. Scudiero, et al., “Evaluation of soluble tetrazolium/formazan assay for cell growth and drug sensitivity in culture using human and other tumor cell lines”, Câncer Res., 48:4827 - 4833, 1988. Plaquearam-se as células à razão de 4000 células/cavidade em placas de microtitulação de 96 cavidades e 24 horas mais tarde adicionaram-se fármacos e diluíram-se em séne. Incubaram-se as células à temperatura de 37°C durante 72 horas altura em que se adicionou o corante de tetrazólio, XTT. A enzima desidrogenase em células vivas reduz o XTT para formar uma forma que absorve a luz a 450 nm que pode ser quantificada espectrofotornetricamente. Quanto maior for a absorvência maior será o número de células vivas. Os resultados são expressos como uma CI50, que é a concentração de fármaco necessária para inibir a proliferação das células (isto é, absorvância a 450 nm) até 50 % da das células de controlo não tratadas. Os valores da CI50 para os compostos avaliados neste ensaio encontram-se indicados no Quadro I.
Quadro I Valores da citotoxicidade in vitro contra células do carcinoma do cólon humano
Composto CIjo ÍUM) HCT-116 HCT-116/VM461 Taxotere* 0,004 0,213 (53) Paclitaxel 0,004 0,44(124) Exemplo 1 0,020 1,30 (66) Exemplo 3 0,266 6,67 (25) Exemplo 4 0,044 5,36(122)
43 1 O valor entre parêntesis representa a resistência dobrada em relação a células HCT-116.
Ensaiou-se igualmente o composto 7-O-metiItiometilpacIitaxel (Exemplo 1 (a)) no ensaio de citotoxicidade e ele mostrou CI50 de 0,003 μΜ contra HCT-116 e 0,025 μΜ contra HCT-116/VM46.
Actividade antitumor in vivo
Implantaram-se por via subcutânea murganhos híbridos (sc) Balb/c x DBA2 F, (CDF() com 0,1 ml de brei a 2 % (p/v) de carcinoma do pulmão Ml 09 (tal como descrito em W. Rose “Evaluation of Madison 109 Lung Carcinoma as a Model for Screening Antitumor Drugs”, Câncer Treatment Reoorts. 65, N° 3 - 4 pp. 299 - 312 (1981). Administraram-se por via intravenosa os compostos em estudo e o fármaco de referência, paclitaxel, a grupos de murganhos; cada grupo recebeu um composto para um nível de dosagem diferente, e avaliaram-se por composto três ou quatro níveis de dosagem diferentes. Os murganhos foram seguidos diariamente quanto à sobrevivência até à sua morte ou cerca do dia 75 post-implantação do tumor, conforme o que ocorrer primeiro. Um grupo de murganhos por experiência permaneceu não tratado e serviu como controlo. Mediram-se igualmente os tumores uma ou duas vezes por semana e usou-se o tamanho em mm para calcular o peso do tumor de acordo com o processo publicado (ibid).
Compararam-se os tempos de sobrevivência médios de murganhos tratados com o composto (T) com o tempo de sobrevivência médio de murganhos de controlo paralelos (C). Multiplicou-se a razão dos dois valores por cada grupo de 44 murganhos tratado com o composto por 100 e exprimiu-se como uma percentagem (i.e. % de T/C) no Quadro II para os compostos representativos. Adicionalmente, a diferença entre o tempo médio para os grupos tratados e o para o grupo de controlo do crescimento do tumor até 1 gm, expresso como valores T-C em dias, encontra-se também representado no Quadro II. Quanto maior for o valor de T-C maior será o atraso no crescimento do tumor principal. Os compostos que apresentam % de T/C > 125 % e/ou T-C >4,0 dias são considerados como sendo activos no modelo Ml 09 SC.
Quadro II
Composto Efeito Máximo Dose Opt. % de T/C T-C (dias) (mg/kg/inj;) Exemplo 1 131 14,0 45a Paclitaxel 134 14 48/24“·° Exemplo 3 160 18,8 24* Paclitaxel 151 15 18b a O composto foi administrado i.v. uma vez ao dia, nos dias 4, 5, 6, 7 e 8 post-implantação do tumor. b O composto foi administrado i.v. uma vez ao dia, nos dias 5, 6, 7, 8 e 9 post-implantação do tumor. c A dose mais elevada conseguiu um aumento máximo do tempo de vida; a dose mais pequena encontra-se associada com um atraso causal máximo do crescimento do tumor. O composto do Exemplo 3 (tal como o sal de trietanolamina) foi ainda avaliado em modelos de tumor e xenoenxertados murinos e humanos (Ml 09, A2780/cDDP - carcinoma do ovário humano, resistente à cisplatina, e HCT-116 -carcinoma do cólon humano) contra paclitaxel como controlo positivo. Descreve-se 45 um modelo A2780/cDDP em Rose e Basler, In Vivo, 1990, 4:391-396, o modelo HCT-116 encontra-se descrito em Rose e Basler, In Vivo. 1989 3:249-254. Faz-se passar Ml09 sc duas vezes por semana em murganhos Balb/C e implantou-se por via sc em murganhos CDF1 para a avaliação antitumor. Desenvolveram-se A2780/cDDP e HCT-116 em murganhos atímicos tanto para experiências de passagem (cada 2 a 3 semanas) e terapêuticas. O composto do Exemplo 3 foi administrado iv em água, ou por via oral em água com algumas gotas de Tween 80, enquanto que o paclitaxel ou foi suspenso em água mais Tween 80 ou foi dissolvido em cremofore/etanol (50 % / 50 %) e diluído com soro fisiológico. O regime de tratamento para os ensaios de tumor sc Ml 09 foi uma vez ao dia durante 5 dias consecutivos com início no dia 4 após a implantação do tumor. Para os ensaios de xenoenxerto de tumor humano, administraram-se os compostos uma vez ao dia todos os outros dias para 5 administrações com início quando os tumores estagiaram entre 50 e 100 mg.
Em uma experiência com Ml 09, o composto do Exemplo 3 administrado iv atingiu o máximo de % de T/C de 155 (T-C de 19 dias) para 36 mg/kg/inj. (cf. paclitaxel máximo de % de T/C de 132 (T-C de 13 dias) para 36 ou 18 mg/kg/inj.). Na mesma experiência, o composto do Exemplo 3 administrado por via oral atingiu um máximo de % de T/C de 158 (T-C de 22,8 dias) para uma dose de 160 mg/kg/adm. enquanto que o paclitaxel para a mesma dose (ensaiado ao mais alto nível) suspenso em água e em Tween 80 não apresentou actividade. Em uma outra experiência com Ml09, administrou-se iv o composto do exemplo 3 e produziu max. de % de T/C de 170 (T-C de 17 dias) a 48 mg/kg/inj. (cf. paclitaxel max. de % de 46
T/C de 167 (T-C de 14 dias) a 48 ou 36 mg/kg/inj.). Na mesma experiência, o composto do Exemplo 3 administrado por via oral produziu um máximo de % de T/C de 172 (T-C de 17 dias) para uma dose de 200 mg/kg/adm. enquanto que o paclitaxel dissolvido em cremofore/etanol/soro fisiológico não mostrou qualquer actividade para 60 mg/kg/inj. Nesta experiência, o paclitaxel dissolvido em cremofore/etanol/soro fisiológico não pode ser administrado para um valor superior a 60 mg/kg/inj. devido a problemas de solubilidade e de toxicidade.
Na experiência de A2780/cDDP, os compostos do Exemplo 3 administrados iv apresentaram um valor máximo de T-C de 29,8 dias para 36 mg/kg/inj. (cf. paclitaxel max. de T-C de 26,3 dias para 36 mg/kg,inj.). O composto do Exemplo 3 administrado por via oral produziu um máximo de T-C de 20 dias para uma dose de 160 mg/kg/adm. Na experiência com HCT-116, o tratamento por via i.v. com 24 ou 36 mg/kg/inj. de paclitaxel produziu 6 curas de 7 ou 6 curas de 8 murganhos tratados, respectivamente, e 160 ou 240 mg/kg/adm. de composto oral do Exemplo 3 curou 6 ou 7 de 8 murganhos tratados, respectivamente. A cura significa isenção do tumor no dia 80 após a implantação do tumor.
Os compostos de acordo com a presente invenção são éteres fosfono--oximetílicos de derivados do taxano. As formas salinas aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico apresentam uma solubilidade em água melhorada relativamente ao paclitaxel permitindo assim formulações farmacêuticas mais convenientes. Sem se ficar ligado por qualquer teoria, julga-se que os éteres fosfono-oximetílicos de acordo com a presente invenção são profármacos do paclitaxel ou os seus derivados; o radical fosfono-oximetílico é cindido por contacto com fosfatase in vivo para gerar 47 subsequentemente o composto principal. Conforme ilustrado anteriormente, os compostos de acordo com a presente invenção constituem agentes inibidores de tumores eficazes. Deste modo, um outro aspecto da presente invenção diz respeito a um método para inibir tumores de mamíferos que compreende a administração a um hospedeiro que possui um tumor e uma quantidade eficaz antitumor de um composto de fórmula geral (A).
Os compostos de fórmula geral (A) de acordo com a presente invenção podem ser utilizados de uma maneira análoga à do paclitaxel; por consequência, um oncologista especializado na técnica do tratamento do cancro será capaz de determinar, sem experimentação indevida, um protocolo de tratamento apropriado para a administração de um composto da presente invenção. A dosagem, o modo e o escalonamento da administração para os compostos da presente invenção não são particularmente restritivos, e variarão com o composto particular utilizado. Deste modo, um composto de acordo com a presente invenção pode ser administrado por meio de qualquer via apropriada de administração, de preferência parentericamente; a dosagem pode ser por exemplo, variável entre cerca de 1 e cerca de 100 mg/kg de peso do corpo, ou encontrar-se compreendida entre cerca de 20 e cerca de 500 mg/kg. Os compostos de fórmula geral (A) podem ser igualmente administrados por via oral; a dosagem oral pode encontrar-se compreendida entre cerca de 5 e cerca de 500 mg/kg de peso do corpo. A dose real utilizada variará consoante a composição particular formulada, a via de administração e o sítio particular, hospedeiro e tipo de tumor a ser tratado. Muitos factores que modificam a acção do fármaco serão tomados em consideração na determinação da dosagem incluindo a idade, o peso, o sexo, a dieta e o estado físico do paciente. A presente invenção proporciona igualmente composições farmacêuticas que compreendem uma quantidade eficaz antitumor de um composto de fórmula geral (A) em combinação com um ou mais veículos aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, excipientes, diluentes ou adjuvantes. Exemplos de formulação de paclitaxel ou os seus derivados podem encontrar-se em, por exemplo, as patentes de invenção norte-americanas N° 4 960 790 e 4 814 470. Por exemplo, podem formular-se os compostos de acordo com a presente invenção sob a forma de comprimidos, pastilhas, misturas de pó, cápsulas, injectáveis, soluções, supositórios, emulsões, dispersões, pré-misturas alimentares e em outras formas apropriadas. Elas podem ser também fabricadas sob a forma de composições sólidas estéreis, por exemplo, liofilizadas e, se desejado, combinadas com outros excipientes aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico. Tais composições sólidas podem ser reconstituídas com água estéril, soro fisiológico ou uma mistura de água e um solvente orgânico, tal como propileno-glicol, etanol e similares, ou outro meio injectável estéril imediatamente antes da utilização para administração parentérica.
Veículos aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico típicos são, por exemplo, manitol, ureia, dextranos, lactose, amidos de batata e de milho, estearato de magnésio, talco, óleos vegetais, polialquileno-glicóis, etil-celulose, poli-(vinil-pirrolidona), carbonato de cálcio, oleato de etilo, miristato de isopropilo, benzoato de benzilo, carbonato de sódio, gelatina, carbonato de potássio, ácido silícico. A preparação farmacêutica pode conter igualmente substâncias auxiliares não tóxicas tais como agentes emulsionantes, conservantes e molhantes, e similares como por
49 exemplo, monolaurato de sorbitano, oleato de trietanolamina, monoestearato de polioxietileno, tripalmitato de glicerilo, sulfosuccinato de dioctilo e sódio, e similares.
Nos processos experimentais que se seguem, todas as temperaturas devem ser entendidas como expressas em graus centígrados (C) quando não especificado. As características espectrais de ressonância magnética nuclear (RMN) referem-se a desvios químicos (δ) expressos em partes por milhão (ppm) versus tetrametilsilano (TMS) como referência padrão. A área relativa reportada para os diversos desvios nos dados espectrais do protão de RMN corresponde ao número de átomos de hidrogénio de um tipo funcional particular na molécula. A natureza dos r desvios quanto à multiplicidade é referida como singuleto largo (bs), dupleto largo (bd), tripleto largo (bt), quarteto largo (bq), singuleto (s), multipleto (m), dupleto (d), quarteto (q), tripleto (t), dupleto de dupleto (dd), dupleto de tripleto (dt) e dupleto de quarteto (dq). Os solventes utilizados para tomar os espectros de RMN são acetona-dé (acetona deuteratada). DMSO-d^ (perdeuterodimetilsulfóxido), D20 (água deuteratada); CDC13 (deuteroclorofórmio) e outros solventes deuterados convencionais. A descrição dos espectros de infravermelho (IV) incluem apenas os números de onda de absorção (cm1) com o valor de identificação do grupo funcional. A Celite é uma marca registada da Johns-Manville Products Corporation para terra de diatomáceas.
As abreviaturas utilizadas na presente memória descritiva são abreviaturas convencionais largamente utilizadas na especialidade. Algumas delas 50 são : EM (espectrometria de massa); HRMS (espectrometria de massa de alta resolução); Ac (acetilo); Ph (fenilo); v/v (volume/volume); FAB (bombardeamento atómico rápido); ΝΟΒΑ (álcool m-nitrobenzílico); min (minuto(s)); h ou hr(s) (hora(s)); NIS (N-iodosuccinimida); BOC (t-butoxicarbonilo); CBZ (benziloxicarbonilo); Bn (benzilo); Bz (benzoílo); TES (trietilsililo); DMSO (dimetilsulfóxido); THF (tetra-hidrofurano); HMDS (hexametildisilazano).
PREPARAÇÃO DOS MATERIAIS INICIAIS
Exemplifícam-se a seguir as preparações de diversos materiais iniciais específicos úteis na preparação dos compostos de fórmula geral (A).
Preparação 1. 10-Desacetoxipaclitaxel
(a) 2’,7-O-bis-(2,2,2-tricloroetoxicarbonil)-10-desacetil-paclitaxel Trata-se 10-desacetil-paclitaxel (140 mg, 0,173 mmol) em diclorometano anidro (3,5 ml) à temperatura de 0°C com piridina (0,028 ml, 0,346 mmol) e cloroformato de tricloroetilo (0,0724 ml, 0,260 mmol). Após uma hora a esta temperatura, retira-se o banho frio e agita-se a mistura à temperatura ambiente durante a noite. Evapora-se o solvente e cromatografa-se o resíduo sobre gel de sílica (30 - 50 % de acetato de etilo em hexano) para se obter o composto do título sob a forma de uma espuma (92,3 ml, 46 %). A eluição ulterior proporciona o 51 material inicial que não reagiu (35 mg, 25 %) e 2’,10-O-bis-(2,2,2-tricloro-etoxicarbonil)-10-desacetilpaclitaxel com 16 % de rendimento. (b) 2’-7-0-bi&-(2,2,2-tricloroetoxicarbonil)-10-desacetoxi-11,12-di-hidro-paclitaxel-10,12( 18)-dieno
Trata-se o produto obtido na fase (a) (92,3 mg, 0,079 mmol) em 2 ml de diclorometano anidro à temperatura ambiente com l,l,2-trifluoro-2-clorotrietilamina (0,0384 ml, 0,238 mmol). Agita-se a solução durante a noite. Evapora-se o solvente e purifica-se o resíduo mediante cromatografia de coluna (acetato de etilo a 25 % em hexano) para se obter o composto do título sob a forma de um pó branco (42,8 mg, 47,3 %). (c) 10-Desacetoxi-11,12-di-hidropacli taxei-10,12(18)-dieno
Dissolve-se o produto da fase (b) (39 mg, 0,034 mmol) em metanol (0,5 ml) e ácido acético (0,5 ml) e trata-se corn zinco em pó lavado com ácido (66,4 mg, 1,020 mmol). Aquece-sé ao suspensão à temperatura de 40°C durante uma hora, filtra-se e evapora-se o filtrado. A cromatografia do resíduo com acetato de etilo a 60 % / hexano permite obter o composto do título sob a forma de uma espuma (22 mg, 81 %). (d) 10-Desacetoxipaclitaxel
Hidrogena-se o produto da fase (c) (22 mg, 0,028 mmol) em acetato de etilo (0,7 ml) à pressão atmosférica na presença de paládio sobre carvão (10 %, 14,7 mg, 0,014 mmol de Pd). Decorridas 5 horas e meia à temperatura ambiente, filtração (lavagem com acetato de etilo), evaporação e cromatografia (acetato de etilo a 60 % em hexano) obtém-se o composto do título (15,0 mg, 68 %) sob a forma de uma espuma branca.
Preparação 2. 7-Desoxi-7a-fluoropaclitaxel
(a) 2’-0-Benziloxicarbonil-7-desoxi-7a-fluoropaclitaxel Dissolve-se trifluoreto de dietilamino-enxofre (DAST, 18,7 μΐ, 0,141 mmol) em 0,5 ml de diclorometano anidro e arrefece-se esta solução à temperatura de 0°C. Adiciona-se uma solução de 2,-0-(benziloxicarbonil)-paclitaxel (71 mg, 0,072 mmol) em diclorometano (1 ml) e mantém-se a solução resultante à temperatura de 0°C durante 30 minutos e à temperatura ambiente durante 4 horas. Em seguida, adicionam-se 0,15 ml de água à mistura reaccional a fim de extinguir a reacção e concentra-se a mistura resultante para deixar um resíduo. Cromatografa-se o resíduo sobre uma coluna de gel de sílica (eluída com acetato de etilo a 40 % em hexano) para se obter 61 mg (R : 85,7 %) de uma mistura a 1 : 1 do composto do título e 2-0-benziloxicarbonil-8-desmetil-7,8-ciclopropapaclitaxel. (b) 7-Desoxi-7a-fluoropaclitaxel
Dissolve-se a mistura de produtos obtida na fase (a) (89 mg) em 3 ml de acetato de etilo e agita-se a mistura sob ligeira pressão de uma atmosfera de hidrogénio na presença de paládio sobre carvão (10 % Pd, 29 mg, 0,027 mmol). Decorridas 12 horas, elimina-se o solvente e purifica-se o resíduo mediante cromatografia sobre gel de sílica (eluindo com acetato de etilo a 40 % em hexano) 53 para se obter 67,7 mg do composto do título, conjuntamente com 8-desmetil-7,8--ciclopropapaclitaxel.
Utiliza-se o método seguinte de HPLC para separar o 7-desoxi-7a--fluoropaclitaxel e 8-desmetil-7,8-ciclopropapaclitaxel.
Equipamento
Bomba : PE Série 4
Coluna: Shandon Hypercarb (carvão grafitizado), 7 μ, 100 x 4,6 mm, #59864750 (a informação sobre colunas dimensionadas preparativas pode ser obtida a partir de Keystone Scientific, Bellefonte, PA)
Injector: PEISS-100
Detector: HP-1040M
Condições
Fase móvel. cloreto de metileno : hexano a 85 : 15
Separação não perdida de cloreto de metileno : hexano : álcool isopropílico a 80 : 19 : 1 Caudal: 2,5 ml/min
Detector : 254 nm
Diluente : Amostra dissolvida em cloreto de metileno
Preparação 3. 7-Desoxi-7a-fluorobacatina III
7SS 54 A um balão seco sob atmosfera inerte adiciona-se 2’-0-(benziloxi-carbonil)-paclitaxel (4 g, 4 mmol) e 80 ml de tolueno anidro. Agita-se a suspensão resultante à temperatura ambiente enquanto se adiciona gota a gota 16 ml de tetra--hidrofurano anidro até se obter uma solução incolor. Arrefece-se a solução anterior até -78°C em um banho de neve carbónica / acetona e trata-se então com trifluoreto de dietilamino-enxoffe (DAST, 1,2 ml, 2,5 eq.). Deixa-se a mistura reaccional sob agitação durante 16 horas à medida que se aquece gradualmente até à temperatura âmbiente. Filtra-se a suspensão resultante e lava-se o filtrado (diluído com 30 ml de acetato de etilo) com uma solução saturada aquosa de bicarbonato de sódio seguida por salmoura. Seca-se a ffacção orgânica (MgS04) e concentra-se para se obter um produto bruto sob a forma de uma espuma branca. Purifica-se parcialmente o material bruto mediante cromatografia de coluna sobre gel de sílica (eluída com 10 % de CH3CN em CH2Cl2) para se obter 1,45 g de uma mistura de 2’-0-(benziloxicarboml)-8-desmetil-7,8-ciclopropapaclitaxel (mistura a 82:18 por ΙΙΜΝ-'Η).
Retoma-se 1,45 g da mistura anterior em 60 ml de acetato de etilo e trata-se com 300 mg de paládio sobre carvão. Após agitação durante 4 horas sob 50 libras por polegada quadrada (psi) de hidrogénio, ventila-se a reacção e filtra-se através de um tampão curto de gel de sílica e concentra-se. Isto proporciona a mistura de produto desejado, 7-desoxi-7a-fluoropaclitaxel e 8-desmetil-7,8-ciclo-propapaclitaxel, sob a forma de uma espuma branca (1,24 g, R : 99 %, mistura a 99:10 por RJVÍN-'Η) Retoma-se esta mistura em 30 ml de cloreto de metileno anidro e.trata-se com boro-hidreto de tetra-butilamónio (745 mg, 2,9 mmol, 2 eq) e deixa-se
55 sob agitação durante 6 horas. Extingue-se então a reacção com 1 ml de ácido acético, diluí-se com mais 30 ml de cloreto de metileno e lava-se com uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio. Seca-se a fracção orgânica (MgS04) e concentra-se. Purifica-se parcialmente a mistura de núcleo do taxano substituído bruta mediante cromatografía de coluna sobre gel de sílica (eluída com 10 % de CH3CN em CH2CI2) para se obter uma mistura a 90:10 (tal como determinada por RMN-‘H) de 7-desoxi-7a-fluorobacatina ΠΙ e 8-desmetil-7,8-ciclopropabacatina ÍII (510 mg, 60 %) sob a forma de uma espuma branca. Cristaliza-se a espuma resultante em isopropanol quente para se obter a 7-desoxi-7a-fluorobacatina III (sob a forma de agulhas brancas pequenas, (R : 410 mg); P.F. 234 - 236°C (decomposição)).
Preparação 4. 10-Desacetoxi-7-desoxi-7a-fluoropaclitaxel
(a) 2’-O-Benziloxicarbonil-10-desacetoxipaclitaxel Trata-se 10-desacetoxipaclitaxel (27 mg, 0,034 mmol) em diclorometano (1 ml) com cloroformato de benzilo (0,0146 ml, 0,102 mmol), seguido por dnsopropiletilamina (0,0177 ml, 0,102 mmol). Agita-se a mistura reaccional à temperatura de 0°C durante 45 minutos e à temperatura ambiente durante 12 horas. A evaporação do solvente e a cromatografía sobre gel de sílica (eluindo com acetato 56 de etilo a 40 % em hexano) proporciona 25,5 mg (R : 81 %) do composto do título sob a forma de uma espuma. (b) 10-Desacetoxi-7-desoxi-7a-fluoropaclitaxel.
Trata-se o produto obtido na fase (a) (25,5 mg, 0,028 mmol) em diclorometano (0,8 ml) à temperatura de 0°C com DAST (0,0071 ml, 0,055 mmol). Decorridos 45 minutos à temperatura de 0°C deixa-se prosseguir a reacção durante 5 horas à temperatura ambiente. A evaporação do solvente e a cromatografia proporcionam o 2,-0-benziloxicarbonil-7-desoxi-7a-fluoropaclitaxel sob a forma de uma espuma bruta. Dissolve-se este composto em 1 ml de acetato de etilo e agita-se sob uma pressão ligeiramente superior a uma atmosfera de hidrogénio na presença de paládio sobre carvão (10 %, 8,9 mg) durante 12 horas à temperatura ambiente. Elimina-se o catalisador mediante filtração e a cromatografia sobre gel de sílica do produto permite obter 10 mg (R : 40 % em duas fases) do composto do título sob a forma de uma espuma.
Preparação 5. 10-Desacetil-7-desoxi-7a-fluoropaclitaxel
Arrefece-se até à temperatura de 0°C uma solução de 2’,10-O-bis-(2,2,2--tricloroetoxicarbonil)-10-desacetilpaclitaxel (120 mg, 0,103 mmol) em diclorometano (2 ml) e trata-se com DAST (0,0266 ml, 0,207 mmol). Agita-se a 57 solução à temperatura de 0°C durante 30 minutos e à temperatura ambiente durante 4 horas. Extingue-se a reacção mediante adição de 0,05 ml de água. Concentra-se a mistura reaccional e purifica-se o resíduo mediante cromatografia sobre gel de sílica (eluindo com acetato de etilo a 30 % em hexano) para se obter 81 mg (R . 68 %) de 2’,10-O-bis-(2,2,2-tricloroetoxicarbonil)-7-desoxi-7a-fluoropaclitaxel sob a forma de uma espuma. Dissolve-se este composto (63 mg, 0,054 mmol) em 0,5 ml de metanol e 0,5 ml de ácido acético e trata-se com pó de zinco (104 mg, 1,62 mmol) durante 90 minutos à temperatura de 45°C. Filtra-se a mistura reaccional e concentra-se o filtrado. A cromatografia sobre gel de sílica (eluindo com hexano a 40 % em acetato de etilo a 60 %) do resíduo proporciona 38 mg (R : 86 %) do composto do título sob a forma de um sólido branco.
Preparação 6. 7-Desoxibacatina III
(a) 7-0-[(metiltio)-tiocarbonil]-bacatina III
Dissolve-se bacatina III (750 mg, 1,278 mmol) em 20 ml de tetra-hidrofurano anidro e adiciona-se de uma só vez ímidazol (8,7 mg, 0,128 mmol). Adiciona-se hidreto de sódio (50 % em óleo mineral, 77 mg, 1,597 mmol) à temperatura ambiente. Uma vez terminada a libertação gasosa (10 minutos), 58 adiciona-se de uma só vez 4,6 ml de dissulfureto de carbono. Decorridas 3 horas à temperatura ambiente, trata-se a solução amarela com iodeto de metilo (0,238 ml, 3,835 mmol) e agita-se durante a noite. Processa-se com acetato de etilo e com água para se obter o composto do título sob a forma de um óleo bruto.
Experiência alternativa:
Dissolve-se Bacatina ΙΠ (394 mg, 0,672 mmol) em tetra-hidrofurano (5 ml) e 1 ml de dissulfureto de carbono. A esta solução adiciona-se hidreto de sódio (40,3 mg, 60 %, 1,009 mmol). Adiciona-se igualmente uma quantidade catalítica de imidazol. Agita-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante uma hora e meia e adiciona-se então iodeto de metilo (122,8 μΐ 2,016 mmol). Decorridos 40 minutos, elimina-se o solvente sob vazio e cromatografa-se o resíduo sobre gel de sílica (eluindo com 20 % - 50 % - 60 % de acetato de etilo em hexanos) para se obter o composto do título (260 mg, R : 57,2 %) conjuntamente com 7-epi-bacatina (98,5 mg, 25 %).
(b) 7-0-[(Metiltio)-tiocarbonil]-13-0-trietilsililbacatina III
Dissolve-se o produto da fase (a) sob a forma de um óleo bruto em 5 ml de dimetilformamida anidra e trata-se com imidazol (870 mg, 12,78 mmol) e com cloreto de trietilsililo (2,10 ml, 12,78 mmol) à temperatura ambiente durante 15 horas. A adição de água foi seguida por extracção em acetato de etilo. Lava-se a fase orgânica extensivamente com água e depois seca-se. A cromatografía intermitente sobre gel de sílica (eluindo com 20 % de acetato de etilo em hexanos) proporciona o composto do título sob a forma de um produto sólido vítreo (R : 209 mg, rendimento 20 % em duas fases). 59
Experiência alternativa :
Dissolve-se o produto da fase (a) (193,4 mg, 0,286 mmol) em 2,86 ml de dimetilformamida anidra. A esta solução adiciona-se imidazol (77,9 mg, 1,14 mmol), seguindo-se cloreto de trietilsillilo (192 μΐ, 1,14 mmol). Agita-se a mistura reaccional durante a noite à temperatura ambiente. Decorridas 12 horas, dilui-se a mistura reaccional com 150 ml de acetato de etilo. Lava-se a camada orgânica com água (3 x 10 ml) e com salmoura (1 x 10 ml), seca-se, e concentra-se sob vazio. Cromatografa-se o resíduo sobre gel de sílica (eluindo com 20 % de acetato de etilo em hexanos) para se obter o composto do título (163 mg, R : 72,0 %).
(c) 7-Desoxi-13-0-tnetilsililbacatina III
Aquece-se à temperatura de 80°C na presença de hidreto de tributil-estanho (0,310 ml, 1,150 mmol) e 2,2’-azobisisobutironitrilo (AIBN, 10 mg) o produto da fase (b) (182 mg, 0,230 mmol) em 5 ml de benzeno anidro. Decorridas 3 horas deixa-se arrefecer a solução e evapora-se o solvente sob vazio. A cromatografia sobre gel de sílica do resíduo (eluindo com 20 % de acetato de etilo em hexano) fornece o composto do título sob a forma de um óleo.
(d) 7-Desoxibacatina III
Dissolve-se o produto da fase (c) em 5 ml de tetra-hidrofurano e trata-se com fluoreto de tetrabutilamónio (1M em tetra-hidrofurano, 0,50 ml, 0,50 mmol) durante 2 horas à temperatura ambiente. A diluição com acetato de etilo e a lavagem com água e com salmoura, seguindo-se a cromatografia sobre gel de sílica (eluindo com acetato de etilo/hexano a 1:1) proporciona o composto do título sob a forma de um produto sólido branco vítreo (63 mg, R : 58 % em duas fases). 60
Preparação 7. 10-Desacetoxibacatina III
(a) 10-Desacetil-10-O-(pentafluorofenoxi)-tiocarbonil-7-O-trietilsilil-bacatina III
Dissolve-se a 7-O-trietilsilil-lO-desacetilbacatina III (veja-se Greene et al, J. Am. Chem, Soc.. 110, p. 5917, 1988) (319 mg, 0,485 mmol) em 5 ml de tetra--hidrofurano anidro, arrefece-se até à temperatura de -40°C, e trata-se com n-butil--lítio (1,58 M em hexanos, 0,384 ml, 0,606 mmol). Após 40 minutos a esta temperatura, adicionam-se clorotionoformato de pentafluorofenilo puro (0,086 ml, 0,536 mmol) por meio de uma seringa. Agita-se a mistura reaccional à temperatura de -20°C durante 90 minutos, extingue-se com uma solução saturada de cloreto de amónio e extrai-se com acetato de etilo. Seca-se a camada de acetato de etilo e concentra-se. Purifica-se o resíduo mediante cromatografia sobre gel de sílica (eluindo com 40 % de acetato de etilo em hexano) para se obter o composto do título sob a forma de uma espuma (320 mg, R : 74 %).
(b) 10-Desacetoxi-7-O-trietilsililbacatinaIII
Dissolve-se o produto da fase (a) (119 mg, 0,135 mmol) em 3 ml de tolueno anidro e trata-se com AIBN (2 mg). Desgasa-se a solução com azoto anidro, 61 e em seguida adiciona-se hidreto de tributilestanho (0,055 ml, 0,202 mmol). Subsequentemente, aquece-se a solução à temperatura de 90°C durante uma hora. Evapora-se então o solvente e submete-se o resíduo a cromatografia sobre gel de sílica (eluindo com 40 % de acetato de etilo em hexano) para se obter o composto do título (87 mg, R : 99 %) sob a forma de uma espuma incolor.
(c) 10-DesacetoxibacatinaIII
Dissolve-se o produto da fase (b) (120 mg, 0,187 mmol) em acetonitrilo (3,5 ml) e arrefece-se a solução até -10°C. Adiciona-se HC1 concentrado (36 %, 0,060 ml) e agita-se a solução durante 30 minutos. Dilui-se a mistura com 75 ml de acetato de etilo e lava-se com uma solução saturada aquosa de bicarbonato de sódio após o que se seca e se concentra. Purifica-se o resíduo mediante cromatografia intermitente sobre gel de sílica (eluindo com 70 % de acetato de etilo em hexano) para se obter a 10-desacetiloxibacatina ΠΙ sob a forma de uma espuma (75 mg, R : 76 %).
Preparação 8. 10-Desacetoxi-7-desoxibacatina III
O
(a) 7-O-[(Metiltio)-tiocarbonil]-10-desacetoxibacatina III
Dissolve-se a 10-desacetoxibacatma III (75 mg, 0,142 mmol) em 2 ml de 62 tetra-hidrofurano anidro e 0,5 ml de dissulfureto de carbono. Adiciona-se então hidreto de sódio (60 % em óleo mineral, 8,5 mg, 0,213 mmol) e agita-se a mistura à temperatura ambiente durante 2 horas. Adiciona-se iodometano (0,026 ml, 0,426 mmol) e deixa-se a reacção prosseguir durante a noite. Elimina-se então o solvente e purifica-se o resíduo mediante cromatografia sobre gel de sílica (eluindo com 50 - 70 % de acetato de etilo em hexano) para se obter o composto do título sob a forma de uma espuma (46,4 mg, R : 53 %).
(b) 10-Desacetoxi-7-desoxi-bacatina III
Aquece-se a refluxo o produto da fase (a) (36 mg, 0,058 mmol) em 1 ml de benzeno na presença de AIBN (2 mg) e hidreto de tributil-estanho (0,079 ml, 0,290 mmol) sob atmosfera de árgon durante 3 horas. A concentração da mistura reaccional e a cromatografia intermitente sobre gel de sílica do resíduo (eluindo com 40 % de acetato de etilo em hexanos) seguida por separação por HPLC (cromatografia líquida de alta pressão) dos outros componentes proporciona o composto do título sob a forma de uma espuma (16,8 mg, R : 56 %).
Experiência alternativa: A uma solução de 7-0-[(metiltio)-carbonotioil]-13-0-trietilsililbacatina III (produto da preparação I, fase (b), 416,3 mg, 0,527 mmol) em 10,5 ml de tolueno anidro adiciona-se uma quantidade catalítica de AflBN e desgasa-se a solução resultante com azoto anidro durante 5 minutos. Adiciona-se hidreto de tributil-estanho (708,7 μΐ, 2,63 mmol) e aquece-se a mistura reaccional à temperatura de 100°C durante 2 horas após o que se adiciona uma outra porção de hidreto de tributilestanho (425,3 μΐ, 1,581 mmol). Aquece-se a mistura reaccional durante 5 63 horas e meia à temperatura de 100°C e deixa-se então arrefecer até à temperatura ambiente. A cromatografia sobre gel de sílica (eluindo com 20 % de acetato de etilo em hexanos) proporciona a 7-desoxi-10-desacetoxi-13-O-(trietilsilil)-bacatina III (320 mg, R : 97 %). A uma solução do produto da fase anterior (160 mg, 0,255 mmol) em 2 ml de tetra-hidrofurano anidro à temperatura ambiente adiciona-se fluoreto de tetra-butil-amónio (766 μΐ, 1 M, 0,766 mmol). Agita-se a mistura reaccional durante uma hora à temperatura ambiente. Elimina-se o solvente e cromatògrafa-se o resíduo sobre gel de sílica (eluindo com 50 - 70 % de acetato de etilo em hexanos) para se obter o composto desejado do título (115 mg, R : 87,9 %).
Preparação 9. (3R,4S)-l-t-Butoxicarbonil-4-fenil-3-trietilsi]iloxi-2-azetidinona .Ph (C2H5)3SiQ,
OtBu A uma solução agitada de (3R, 4S)-4-fenil-3-trietilsililoxi-2-azetidinona (2,200 g, 7,92 mmol) em 25 ml de tetra-hidrofurano anidro adiciona-se N,N-diisopropiletilamina (1,65 ml, 9,510 mmol, 1,2 eq.) à temperatura de 0°C sob uma atmosfera de árgon. Agita-se a solução durante 5 minutos seguindo-se a adição de dicarbonato de di-t-butilo (2,080 g, 9,510 mmol, 1,2 equiv.) e 4-dimetilamino-piridina (193,6 mg, 1,581 mmol, 0,20 equiv). Agita-se a mistura reaccional à
64 temperatura de 0°C durante 60 minutos e dilui-se em seguida com 25 ml de acetato de etilo. Lava-se a solução resultante com salmoura, com NaHC03 a 10 %, com uma solução de HC1 a 10 %, seca-se (MgS04) e concentra-se para se obter um produto bruto (óleo). Purifica-se ainda o composto mediante cromatografia intermitente sobre gel de sílica (eluindo com 15 % de acetato de etilo em hexanos) para se obter o composto do título sob a forma de um sólido branco (2,4 g, R : 83 %).
Preparação 10. (±)-cis-3-Acetiloxi-4-fenilazetidin-2-ona CH3C(0)0^ J-L· o (a) A um balão de fundo redondo de três tubuladuras com a capacidade de 1 litro equipado com um termómetro, agitador magnético e ampola de carga adiciona-se hidrobenzamida (30,00 g, 100,5 mmol) e 150 ml de acetato de etilo. Com agitação e sob atmosfera de árgon arrefece-se a mistura reaccional até 5°C e adiciona-se trietilamina (16,8 ml, 121 mmol). Adiciona-se então uma solução de cloreto de acetoxiacetilo (12,4 ml, 116 mmol) em 300 ml de acetato de etilo, gota a gota, no decurso de um intervalo de tempo de 90 minutos. Após 16 horas a esta temperatura, deixa-se aquecer a mistura reaccional até 20°C (1,5 h) e transfere-se para uma ampola de carga. Lava-se a camada orgânica sucessivamente com NH4CI aquoso (sat) (150 ml, 100 ml), NaHC03 aquoso (saturado) (120 ml) e salmoura (120 ml). Para as finalidades de caracterização, pode isolar-se o composto do título neste estádio mediante secagem da fase orgânica sobre MgS04, filtração e eliminação do solvente sob vazio. IstDprcpcracnaa(±)-cis-3-acetiloxi-l-[(fenil)-(benzilidenimino)- 65 -metil]-4-femlazetidin-2-ona com um rendimento bruto quantitativo sob a forma de um vidro vermelho. (b) Transfere-se cuidadosamente uma solução do composto obtido na parte (a) em 500 ml de acetato de etlo sob uma corrente de árgon para um frasco de Parr com a capacidade de 2,0 litros contendo paládio a 10 % sobre carvão activado (6,00 g). Trata-se esta mistura com hidrogénio (4 atm) durante 20 horas após o que se elimina o catalisador mediante filtração através de uma almofada de Celite. Suspende-se o bolo do filtro em 200 ml de acetato de etilo, agita-se (10 minutos) e filtra-se. Enxagua-se o bolo do filtro com 10 ml de acetato de etilo e reúnem-se os filtrados. Lava-se a fase orgânica com 300 ml de HC1 a 10 % e filtram-se ambas as camadas através de uma ampola de vidro sinterizado para eliminar o precipitado branco (dibenzilamina*HCl) que se lava com 100 ml de acetato de etilo. Separaram-se as fases e lava-se a camada orgânica com uma outra porção de 200 ml de HC1 a 10 %. Voltam a extrair-se as águas de lavagem reunidas de HC1 a 10 % com 200 ml de acetato de etilo e lavam-se as camadas orgânicas reunidas com NaHC03 aquoso (saturado) (300 ml) e com 250 ml de salmoura. Seca-se a camada orgânica sobre MgS04, filtra-se e concentra-se sob vazio até um volume final de 75 ml. Arrefece-se esta mistura até 4°C e isola-se mediante filtração o produto precipitado. Lava-se o bolo do filtro com 200 ml de hexano para se obter 16,12 g (rendimento global de 78,1 % a partir de hidrobenzamida) do composto do título sob a forma de agulhas brancas. P.F. = 150-151°C.
Preparação 11. (+)-cis-3-Trietilsililoxi-4-(2-fúril)-N-t-butoxicarbonil- 66
azetidin-2-ona
(a) Segue-se o processo descrito na Preparação 10, parte (a), com a excepção de se utilizar hidrofuramida [isto é, 2-furil-CH-(N=CH-2-fúril)2] em vez de hidrobenzamida e realiza-se a reacção em uma escala de 18,6 mmol (vs 100 mmol). Deste modo, a hidrofuramida (5,00 g, 18,6 mmol), a trietilamina (3,11 ml, 22,3 mmol) e o cloreto de acetoxiacetilo (2,30 ml, 21,4 mmol) proporcionam 6,192 g (R : 90,4%) de (±)-cis-3-acetiloxi-l-[(2-furil)-(2-furilmetilenimino)-metil]-4-(2--fúril)-azetidin-2-ona sob a forma de um xarope de cor vermelha pálida. (b) Segue-se o processo descrito na Preparação 10, parte (b), com a excepção de se isolar o produto mediante CCF preparativa e de se realizar a reacção numa escala de 2,7 mmol com base na quantidade original de hidrofuramida. Deste modo, volta a dissolver-se o produto bruto obtido na parte (a) anterior em 50 ml de acetato de etilo e adiciona-se a 150 mg de paládio a 10 % sobre carvão activado. A purificação do produto sólido bruto mediante CCF preparativa (2 mm de gel de sílica, eluindo com acetato de etilo/hexano a 1:1) proporciona 386 mg (65,8 % de rendimento global corrigido a partir de hidrofuramida) de (±)-cis-3-(acetiloxi)-4-(2--furil)-azetidin-2-ona sob a forma de um produto sólido amarelo. Recristaliza-se este último em acetato de etilo/hexano. P.F. = 118- 119°C.
(c) Agita-se o composto obtido na parte (b) anterior (3,78 g, 19,4 mmol) em 60 ml de metanol com K2C03 (20 mg, 0,14 mmol) durante 90 minutos e neutraliza-se a solução com Dowex 50W-X8 após o que se filtra. Concentra-se o filtrado e dissolve-se o resíduo em 80 ml de THF anidro e agita-se à temperatura de 0°C com imidazol (1,44 g, 21,2 mmol) e TESC1 (3,4 ml, 20,2 mmol) durante 30 minutos. Dilui-se a solução com acetato de etilo e lava-se com salmoura, seca-se sobre MgS04 e concentra-se. Cromatografa-se o resíduo sobre gel de sílica (eluindo com hexano/acetato de etilo a 3:1) para se obter 4,47 g (R : 86 %) de (±)-cis-3-tri-etilsililoxi-4-(2-furil)-azetidm-2-ona sob a forma de um óleo incolor. (d) Agita-se o produto da parte (c) (2,05 g, 7,7 mmol) em 30 ml de diclorometano à temperatura de 0°C com diisopropiletil-amina (1,5 ml, 8,6 mmol) e dicarbonato de di-t-butilo (2,0 g, 9,2 mmol) além de uma quantidade catalítica de dimetilaminopiridina (DMAP). Dilui-se a solução com diclorometano e lava-se com salmoura, seca-se sobre MgS04 e concentra-se. Cromatografa-se o resíduo sobre gel de sílica (eluindo com hexano/acetato de etilo a 8:1) para se obter 2,0 g (R : 70 %) do composto do título sob a forma de um sólido ceroso.
Pode utilizar-se a mistura racémica obtida na parte (b) como substrato para a hidrólise enzimática utilizando uma lipase tal como PS-30 a partir de Pseudomonas sp. (Amano International Co.) para se obter (3R, 4R)-3-hidroxi-4-(2--furil)-azetidin-2-ona. O método de resolução enzimática que utiliza a lipase PD-30 e outras enzimas encontra-se descrito no nosso pedido de patente de invenção também pendente U.S.S.N. 092 170, depositado em 14 de Julho de 1993 o qual é incorporado na presente memória descritiva na sua totalidade a título de referência. 68
Segue-se o processo nas partes (c) e (d) utilizando (3R, 4R)-3-hidroxi--4-(2-furil)-azetidin-2-ona para se obter a (3R, 4R)-N-(t-butoxicarbonil)-3-tri-etilsililoxi-4-(2-furil)-azetidin-2-ona.
Preparação 12. (±)-cis-3 -T rietilsililoxi-4-(2-tienil)-N-t-butoxicarbonil-azetidin-2-ona
O (a) Segue-se o processo descrito na preparação 10, fase (a) com a excepção de se utilizar hidrotienamida [isto é 2-tienil-CH-(N=CH-2-tienil)2] em vez de hidrobenzamida. Deste modo, a hidrotienamida (30 g, 94,7 mmol), a trietilamina (15,84 ml, 114 mmol) e o cloreto de acetoxiacetilo (11,6 ml, 108 mmol) proporciona a (±)-cis-3-acetiloxi-l-[(2-tieril)-(2-trienilmetilenimino)-metil]-4-(2-tienil)-azetidin-2--ona sob a forma de um óleo viscoso.
(b) Adiciona-se uma solução aquosa a 70 % de ácido acético (0,35 ml de ácido acético glacial e 0,15 ml de água) de uma só vez a uma solução agitada do produto obtido na parte (a) (0,431 g, 1,03 mmol) em diclorometano (2,93 ml) a 25°C. Leva-se a mistura reaccional a refluxo e agita-se durante 2 horas e meia. Dilui-se a mistura reaccional com 50 ml de diclorometano e lava-se então com duas porções de 75 ml de bicarbonato de sódio aquoso saturado e em seguida com uma porção de 50 ml de salmoura saturada. Concentra-se o extracto orgânico in vacuo até se obter um óleo castanho, dissolve-se na quantidade mínima de diclorometano e coloca-se então sobre uma coluna de gel de sílica com as medidas de 4” por 0,5”. A eluição utilizando um gradiente de 10 através de EtOAC a 60 % em hexano proporcionou menos produtos secundários polares e em seguida a (±)-cis-3--acetiloxi-4-(2-tienil)-azetidin-2-ona (0,154 g, R : 75 %) sob a forma de um sólido branco. (c) Dissolve-se uma solução do produto obtido na parte (b) (2,5 g, 11,8 mmol) em metanol (10 ml) e trata-se com uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (10 ml) e deixa-se a suspensão resultante sob agitação à temperatura ambiente durante 3 horas. Dilui-se então a mistura reaccional com 20 ml de acetato de etilo e lava-se com 15 ml de água. Volta a extrair-se a ffacção aquosa várias vezes com acetato de etilo e secam-se então as fracções orgânicas reunidas (MgS04) e concentram-se para se obter um sólido amarelo (R : 1,7 g). Dissolve-se o material bruto em 20 ml de tetra-hidrofurano anidro e arrefece-se a solução até 5°C com um banho de gelo/água. Adiciona-se então imidazol (752 mg, 1,1 eq.). Após agitação durante 5 minutos adiciona-se gota a gota trietilclorosilano (1,85 ml, 1,1 eq.). Deixa-se a suspensão resultante sob agitação durante 3 horas a essa temperatura; em seguida eliminam-se os sólidos mediante filtração. Lava-se a ffacção orgânica com água (2 x 20 ml), seca-se então (MgS04) e concentra-se. Purifica-se o produto bruto mediante cromatografia de coluna sobre gel de sílica (eluindo com hexanos/acetato de etilo a 7:3) para se obter a (±)-cis-3-trietilsililoxi-4--(2-tienil)-azetidin-2-ona sob a forma de um produto sólido incolor (1,5 g, R : 45 %). P.F. 70 - 71°C.
Experiência alternativa:
Agita-se com K2S03 (60 mg, 0,43 mmol) durante 30 minutos o produto £
70 obtido na parte (b) (2,0 g, 9,37 mmol) em 40 ml de metanol e neutraliza-se a solução com Dowex 50W-X8 após o que se filtra. Concentra-se o filtrado e dissolve-se o resíduo em 50 ml de THF anidro e agita-se à temperatura de 0°C com imidazol (0,85 g, 11,3 mmol) e TESC1 (1,9 ml, 12,5 mmol) durante 30 minutos. Dilui-se a solução com acetato de etilo e lava-se com salmoura, seca-se sobre MgS04 e concentra-se. Cromatografa-se o resíduo sobre gel de sílica (eluindo com hexano/acetato de etilo a 3:1) para se obter 2,13 g (R : 86 %) do produto do título sob a forma de um óleo incolor. (d) Dissolve-se uma solução do produto obtido na parte (c) (425,7 mg, 1,48 mmol) em 10 ml de diclorometano e arrefece-se até à temperatura de 5°C com um banho de gelo/água. Trata-se a mistura reaccional com uma quantidade catalítica de DMAP seguida por diisopropiletilamma (TESC1, 0,25 ml, 1,0 eq.) e então por dicarbonato de di-t-butilo (388,4 mg, 1,2 eq.). Após agitação durante 2 horas a essa temperatura extingue-se a reacção com uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (5 ml) e lava-se então a fracção orgânica com 5 ml de água, seca-se então (MgS04), passa-se através de um tampão curto de gel de sílica e concentra-se para se obter o produto desejado sob a forma de um óleo incolor (525,3 mg, R : 93 %).
Pode adaptar-se o processo descrito anteriormente nas Preparações 9, 1 l(d) e I2(d) à preparação de outras azetidinonas N-substituídas úteis na preparação dos compostos de acordo com a presente invenção. Exemplos de tais azetidinonas encontram-se indicados no quadro seguinte; o símbolo P a seguir representa um grupo protector do radical hidroxi tal como trietil-sililo, triisopropilsililo e etoxietilo. 71 BO, XR5
+ R4(0)C{0)-L
L R4(0)„ R5 Cl Ph 4-CH30-Ph 3,4-diCH30-Ph- Ph- 4-F-Ph-4-CF3-Ph-2-furanilo-2-tienilo-PhCH=CH-2-furanilo-CH = CH-(CH3)2CHCH2-C6HirCH2-(CH3)2CH-PhCH2CH2-C6HirCH2CH2-CH3CH2CH2-4-Cl-Ph 2- F-Ph 3- F-Ph 4-CH3-Ph Cl 4-CH30-Ph- 3,4-diCH30-Ph-4-CFj-Ph-2-fiiranilo-PhCH = CH-(CH3)2CHCH2- c6h„-ch2- PhCH2CH2- (CH3)3CO- (CH3)3CO- 4-CH30-Ph-4-F-Ph-4-CF3-Ph-PhCH=CH-(CH3)2CH-PhCH2CH2-C6H, ]-CH2CH2- ch3ch2ch2- 72 L R4(0)p R3 Cl ch3- 4-CH30-Ph- Ph- 4-F-Ph-2-furanilo-2-furanilo-CH = CH-PhCH2CH2-C6HU-CH2CH2- ch3ch2ch2-
Preparação 13. 10-desoxitaxotere
Coloca-se num frasco sob atmosfera de árgon 10-desacetoxi-7-O-trietil-sililbacatina III (100 mg, 0,156 mmol) e dissolve-se em 1,5 ml de tetra-hidrofurano anidro. Com arrefecimento até -40°C adiciona-se gota a gota n-butil-lítio (1,45M em hexanos, 0,119 ml, 0,170 mmol), seguido por (3R, 4S)-l-terc.-butoxicarbonil-4--fenil-3-trietilsililoxi-2-azetidinona (94,2 mg, 0,25 mmol) em 0,5 ml de tetra-hidrofurano durante um intervalo de tempo de 2 minutos. Aquece-se imediatamente a mistura até 0°C e agita-se durante 45 minutos antes de se extinguir com 3 ml de cloreto de amónio saturado. Extrai-se a mistura com acetato de etilo, seca-se e concentra-se. A cromatografia sobre gel de sílica (eluindo com 30 % de 73 73 ff acetato de etilo em hexano) proporciona o 10-desoxi-2’,7-bis-O-(trietilsilil)-taxotere sob a forma de uma espuma (125 mg, R : 76 %). Dissolve-se imediatamente este composto (100 mg, 0,098 mmol) em 2 ml de acetonitrilo à temperatura de -5°C e trata-se com ácido clorídrico (0,037 ml, 36 %, 12M). Agita-se a mistura durante duas horas à temperatura de -5°C, extingue-se então com bicarbonato aquoso, extrai-se com acetato de etilo e seca-se. Segue-se a evaporação do solvente mediante cromatografia sobre gel de sílica (eluindo com 75 % de acetato de etilo em hexano) para se obter o composto do título sob a forma de uma espuma (80,5 mg, R: 80 %).
Pode adaptar-se o processo geral proporcionado na Preparação 13 para a preparação de outros compostos de fórmula geral (Ia) a partir do componente apropriado bacatina III e do componente azetidinona; exemplos de outros compostos de fórmula geral (Ia) encontram-se indicados no quadro seguinte. Deve compreender-se que mesmo que os compostos a seguir sejam representados com grupos hidroxi livres, mediante escolha judiciosa dos diversos grupos protectores do radical hidroxi, qualquer dos grupos protectores na posição 2’, 7 ou 10 podem ser eliminados selectivamente sem afectar outros grupos protectores presentes.
74 R2 R2a R3a HtOV R5 Η OH AcO Ph 4-CH30-Ph-3,4-diCH30-Ph-Ph-4-F-Ph-4-CFj-Ph-2-furanilo-2-tienilo-PhCH=CH-2-furanilo-CH - CH-(CH3)2CHCH2-C6Hn-CH2-(CH3)2CH-PhCH2CH2-C6H„-CH2CH2- ch3ch2ch2- 4-Cl-Ph 2- F-Ph 3- F-Ph 4-OH 3-Ph Η OH OH (CH3)3CO 4-CH30-Ph- Ph 4-F-Ph- 4-CF3-Ph- 2-furanilo- 2-tienilo- PhCH=CH- C6H„-CH2- (CH3)2CH- PhCH2CH2- OH H Ph 4-CH30-Ph-3,4-diCH30-Ph-4-F-Ph-4-CF3-Ph-2-furanilo-2-tienilo-PhCH=CH-2-furanilo-CH = CH-(CH3)2CHCH2-C6Hu-CH2-(CH3)2CH-PhCH2CH2-C6H„-CH2CH2- ch3ch2ch2- RJ..... ~R55- R33 R4ÍO)d R5 H H (CH3)3CO 4-CH30-Ph- 3,4-diCH30-Ph- Ph 4-F-Ph-4-CF3-Ph-2-furanilo-2-tienilo-PhCH=CH-2-furanilo-CH = CH-(CH3)2CHCH2-C6HirCHr (CH3)2CH-PhCH2CH2-C6Hu-CH2CH2- ch3ch2ch2- H OH AcO 2-naftilo 4-OH-Ph 4-CH30-Ph 4-F-Ph (CH3)3CO- ch3- (CH3)2CH- ch2=chch2- 4-Cl-Ph Ph F H AcO (CH3)3CO- Ph F H OH Ph Ph H H AcO Ph 4-CH30-Ph- 3,4-diCH30-Ph- Ph 4-F-Ph-4-CF3-Ph-2-furanilo-2-tienilo-PhCH=CH-2-furamlo-CH = CH-(CH3)2CHCH2- c6h„-ch2- (CH3)2CH- PhCH2CH2- c6hu-ch2ch2- ch3ch2ch2-
76
Preparação 14. Éter bis-(metiltiometílico) CH3SCH2OCH2SCH3
Adiciona-se iodeto de sódio (8,23 g, 55,23 mmol) a uma solução de éter Ι,Γ-diclorodimetílico (3,0 g, 26,3 mmol) em acetona (100 ml) à temperatura de 0°C e agita-se a mistura a esta temperatura durante 20 minutos. Adiciona-se então tiometóxido de sódio (1,84 g, 5,23 mmol) em quatro porções e agita-se a solução resultante durante mais uma hora. Filtra-se então a solução heterogénea através de uma almofada de celite e concentra-se o filtrado sob vazio. Distribui-se o óleo residual entre acetato de etilo e uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio. Elimina-se a camada aquosa e extrai-se ainda com acetato de etilo. Tratam-se as fases orgânicas reunidas com uma mistura a 1:1 (v:v) de uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio e uma solução aquosa a 5 % de tiossulfato de sódio. Lavam-se as fases orgânicas com salmoura, secam-se sobre sulfato de sódio e concentram-se sob vazio. Purifica-se o óleo residual mediante cromatografia intermitente (hexanos : acetato de etilo a 30:1) para se obter 1,9 g de um óleo amarelo que se destila subsequentemente utilizando um aparelho de kugelrhor (120 - 130°C, 20 mmHg) para se obter 1,5 g (45 %) do composto do título sob a forma de um óleo incolor . RMN-'H (300 MHz, CDClj) δ 4,73 (4H, s), 2,15 (6H, s).
Preparação 15. Metiltiometil-fosfato de dibenzilo CH3SCH20P(0)(0Bu)2 A uma solução de éter bis-(metiltiometílico) (30 mg, 2,34 mmol) e de 300 mg de peneiros moleculares em THF (100 ml) à temperatura ambiente 77 adiciona-se fosfato de dibenzilo (2,74 g, 9,85 mmol) seguido por N-iodosuccinimida (608 mg, 2,71 mmol) e agita-se a solução durante 4 horas. Dilui-se então a mistura reaccional com acetato de etilo e filtra-se através de uma almofada de celite. Trata-se o filtrado com uma solução a 1:1 (v:v) de bicarbonato de sódio aquoso saturado e tiossulfato de sódio aquoso a 5 %. Lava-se então o extracto orgânico incolor com salmoura, seca-se sobre sulfato de sódio e concentra-se sob vazio para se obter 600 mg (69 %) do composto do título : RMN *H (300 MHz, CDC13) δ 7,35 (10H, s), 5,29 (2H, d, J = 12,2 Hz), 5,08 (4H, dd, J = 8,0, 1,0 Hz), 4,68 (2H, s), 2,10 (3H, s).
EXEMPLOS
Proporcionam-se os exemplos seguintes a título ilustrativo da síntese de compostos representativos da presente invenção e os mesmos não devem ser construídos como limitativos de qualquer modo do âmbito da invenção. Um especialista na matéria será capaz de adaptar estes métodos, sem experimentação indevida, à síntese de compostos incluídos no âmbito da presente invenção mas não descritos especifícamente.
Exemplo 1. 7-O-fosfonooximetilpaclitaxel e o seu sal monossódico (a) preparação de 7-O-metiltiometilpaclitaxel.
Adiciona-se peróxido de benzoílo (0,98 g, 4 mmol) a uma mistura agitada vigorosamente de paclitaxel (0,85 g, 1 mmol) e sulfureto de dimetilo (0,72 ml, 8 mmol) em 10 ml de acetonitrilo anidro à temperatura de 0°C. Prossegue-se a agitação durante 2 horas e meia à temperatura de 0°C. Segue-se o progresso da reacção mediante GCF sobre gel de sílica em tolueno : acetona (2 : 1, v/v) como sistema solvente (Rftax. = 0,38, Rfprod. = 0,64) e quando se observar a formação de produtos de polaridade mais elevada extingue-se a reacção mediante evaporação dos solventes utilizando um Rotavapor a 30°C. A análise CCF da mistura reaccional indica a presença de algumas quantidades de paclitaxel que não reagiu e 2’,7-O-bis--(metiltiometil)-paclitaxel. Realizou-se a separação do composto do título da mistura reaccional mediante cromatografia de coluna intermitente sobre gel de sílica 60 (40 - 63 pm) EM Science (100 ml), diâmetro da coluna : 2 in. utilizando acetato de etilo : hexano (1:1, v/v) como sistema solvente (Rfprod. = 0,34). Isola-se o produto (552 mg, rendimento 60 %) a partir das fracções 12 a 18 (cada fracção cerca de 20 ml). EM (FAB/matriz ΝΟΒΑ, Nal, Kl) : [M + Hf, m/z 914; [M + Naf, m/z 936; [M + K]+, m/z 952
Análise elementar : C : 64,28 (calc. 64,39); H . 8,85 (calc. 6,07), N : 1,46 (calc. 1,53) UV (MeOH) : λmax = 226 nm, E( 1 % / 1 cm) = 150, A = 0,2653 IV (KBr) : 3432, 3066, 2940, 1726, 1668, 1602, 1582, 1514, 1484, 1452, 1372, 1242, 1178, 1142, 1108, 1068, 1026, 990, 916, 884, 852, 802, 774, 710, 608, 570, 538, 482 cm'1. RMN-‘H (CDC13) : 1,15 (3H, s), 1,19 (3H, s), 1,73 (3H, s), 1,79 (H, s), 1,90 (3H, 79 d), 2,09 (3H, s), 2,16 (3H, s), 2,29 (2H, d), 2,35 (3H, s), 2,77 (H, m), 3,70 (H, d), 3,83 (H, d), 4,17 (H, d), 4,26 (H, m, sobreposição com H, d), 4,63 2H, t), 4,77 (H, dd), 4,91 (H, d), 5,65 (H, d), 5,77 (H, dd), 6,16 (H, dd), 6,48 (H, s), 7,07 (H, d), 7,29 - 7,50 (10H, m), 7,57 (H, m), 7,73 (2H, d), 8,08 (2H, d). (b) preparação de 7-O-dibenzilfosfonooximetilpaclitaxel
Adiciona-se uma solução de N-iodossuccinimida (45 mg, 0,2 mM) e fosfato de dibenzilo (55 mg, 0,2 mM) em 4 ml de tetra-hidrofurano anidro a uma mistura de 7-O-metiltiometilpaclitaxel (119 mg, 0,13 mM) e peneiros moleculares em pó 4Â (cerca de 120 mg) em 5 ml de 1,2-dicloroetano anidro. Agita-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 16 horas. Segue-se o progresso da reacção mediante CCF em tolueno . acetona (2:1, v/v) como sistema (Rfpr0d = 0,48). Eliminam-se os peneiros moleculares mediante filtração através de Celite 545 e extrai-se o filtrado com 100 ml de cloreto de metileno. Lava-se a fase orgânica com uma solução a 1 % de tiossulfato de sódio (cerca de 100 ml) e com 100 ml de bicarbonato de sódio 0,5M e finalmente com salmoura. Filtra-se o extracto através de Whatman Phase Separator e evaporam-se os solventes. A purificação mediante cromatografia de coluna intermitente sobre Gel de Sílica 60 em cloreto de metileno : acetato de etilo (2:1, v/v) proporciona o 7-O-dibenzilfosfonooximetil-paclitaxel (41,5 mg).
80 (c) preparação de 7-O-fosfònooximetilpaclitaxel e do seu sal monossódico.
OOOPh jOPÍO) (OH) ,
Dissolve-se 7-O-dibenzilfosfonooximetilpaclitaxel (41,5 mg) em 5 ml de acetato de etilo e adiciona-se 20 mg de paládio sobre carvão a 10 %.
Realiza-se a hidrogenaçao à pressão de 40 PSI (275 kPa) e à temperatura ambiente durante uma hora. Segue-se o progresso da reacção mediante CCF em clorofórmio : metanol : água (120 : 45 : 8, v/v). A purificação mediante CCF preparativa (placa de gel de sílica 20 x 20 x 0,05 cm no sistema analítico) proporciona o 7-O-fosfonooximetilpaclitaxel (26 mg, rendimento 75 %).
Uma vez que se observa a decomposição do 7-O-dibenzilfosfooximetil-paclitaxel durante a purificação sobre gel de sílica modificou-se o processo de hidrogenação. Assim, hidrogenou-se um extracto bruto de 7-O-dibenzilfosfono-oximetilpaclitaxel sem qualquer purificação. Realiza-se a hidrogenação do extracto bruto de 7-O-dibenzilfosfonooximetilpaclitaxel a 60 PSI (400 kPa) durante 24 horas.
Dissolve-se 7-O-fosfonooximetilpaclitaxel (70 mg) em uma solução de 5 ml de acetona - água (1 : 1) e dilui-se com água até 50 ml. Adiciona-se bicarbonato de sódio anidro (18 mg, 1,2 eq.). Evapora-se a acetona à temperatura ambiente utilizando o Rotavapor e liofiliza-se a solução aquosa remanescente. Purifica-se o sal monossódico do 7-O-fosfonooximetilpaclitaxel bruto mediante cromatografia de coluna de fase inversa C18 em um sistema constituído por água : acetonitrilo (70 : 30, v/v). Controla-se o eluído mediante HPLC analítica (15 cm, coluna de Jones Cl8, 1 ml/min., 1 = 230 / 270 nm) em acetonitrilo : tampão de acetato de amónio 0,05M (45 : 55, v/v), pH - 7, Rt = 2,09 min. Reúnem-se as fracções que contêm o produto desejado, evapora-se o acetonitrilo e liofiliza-se a solução aquosa remanescente para se obter 112 mg do sal monossódico de 7-O-fosfonooximetil-paclitaxel. EM (FAB) : [M + h]~, m/z 986; [M + Na]", m/z 1008 UV (MeOH) :λ max = 230 nin, E (1 % /1 cm) = 248 IV (KBr) : 3430, 3066, 2948, 1724, 1652,1602,1580, 1518, 1486, 1452, 1372, 1316, 1246, 1178, 1154, 1108, 1070, 1000, 982, 946, 856, 802, 776, 710, 628, 538 cm·1 RMN-^ (acetone-de/DjO) 6 : 8,05 (2H, d), 7,92 (2H, d), 7,65 (1H, dd), 7,58 - 7,35 (9H, m, sobreposição), 7,23 (1H, dd), 6,38 (1H, s), 6,08 (1H, t), 5,65 (1H, d), 5,60 (1H, d), 5,10 (1H, br,s), 4,99 (1H, d), 4,97 (1H, br,s), 4,80 (1H, d), 4,28 (1H, dd), 4,11 (2H, s), 3,79 (1H, d), 2,94 (1H, m), 2,35 (3H, s), 2,35 — 2,10 (1H, m), 2,13 (3H,s), 1,95 (3H, s), 1,84 (1H, m), 1,67 (3H, s), 1,13 6H, s, sobreposição).
Exemplo 2. Método alternativo para a preparação de 7-O-fosfonooximetilpaclitaxel. (a) preparação de 2’-0-(benziloxicarbonil)-paclitaxel
A uma solução agitada de paclitaxel (150 mg, 0,176 mmol) e N,N-di-
82 isopropiletilamina (93 μΐ, 0,534 mmol, 3 eq.) em 4 ml de cloreto de metileno anidro à temperatura ambiente adiciona-se cloroformato de benzilo (75 μΐ, 0,525 mmol, 3 eq ). Agita-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 3 horas, concentra-se até 2 ml e purifica-se sobre uma coluna de gel de sílica utilizando acetato de etilo/hexanos a 1:1 como eluente, para se obter o composto do título sob a forma de um pó branco (150 mg, R : 86 %). P.F. 140 - 150°C (decomposição). (b) preparação de 2’-0-(benziloxicarbonil)-7-0-metiltiometilpaclitaxel
A uma solução arrefecida (neve carbónica - CCU; -30°C temperatura do banho) de 2’-0-(benziloxicarbonil)-paclitaxel (4,935 g; 5,0 mmol) em 80 ml de acetonitrilo anidro adiciona-se em sequência sulfureto de dimetilo (3,6 ml; 40 mmol) e peróxido de benzoílo (4,9 g; 20,247 mmol). Decorridos 10 minutos à temperatura de -30°C, elimina-se o banho frio e agita-se vigorosamente a mistura reaccional durante duas horas à temperatura ambiente. Dilui-se então a mistura reaccional com acetato de etilo até um volume de 200 ml e lava-se com água e com salmoura. Seca-se a camada orgânica (MgS04) e evapora-se então o solvente para se obter um resíduo que se mantém sob vazio durante 18 horas para eliminar qualquer sulfóxido de dimetilo que se encontre presente como um produto secundário da reacção. Purifica-se o resíduo sobre uma coluna de gel de sílica utilizando primeiramente acetato de etilo : hexano (1:2) como eluente para remover as impurezas menos 83 polares, seguida por acetato de etilo : hexano (1:1) para se obter o composto do título esperado sob a forma de uma espuma. Tritura-se esta última com éter anidro e filtra-se para se obter o composto do título sob a forma de um produto sólido fofo (5,0 g, 95 %). P.F. 120 - 122°C. EM (FAB): [MH]", m/z 1048; [M+Naf, m/z 1070; [M+Kf, 15 m/z 108 IV (KBr) 3440, 3066, 1750, 1722, 1664, 1602, 1583, 1538 cm'1
RMN (CDC13) δ : 1,177 (3H,s) 1,236 (3H, s) 1,745 (3H, s) 2,023 (3H, s) 2,121 (3H s) 2,162 (3H, s) 2,436 (3H, s) 3,887 (H, d) 4,134 (H, d) 4,197 (H, d) 4,295 (H, m), 4,964 (H, d) 5,161 (2H, d) 5,450 (H, d) 5,703 (H, d) 5,981 (H, dd) 6,257 (H, t) 6,541 (H, s) 6,920 (H, d, NH) 7,322 - 8,22 (15H, m).
Preparou-se igualmente o composto do título pelo seguinte método alternativo: , A uma solução de 2’-0-(benziloxicarbonil)-paclitaxel (2,0 g; 2,0263 mmol) em 10 ml de dimetilsulfóxido anidro adiciona-se gota a gota 10 ml de anidrido acético. Agita-se a mistura resultante à temperatura ambiente durante 18 horas sob atmosfera de N2, dilui-se com 100 ml de acetato de etilo e lava-se cuidadosamente com uma solução a 6 % de bicarbonato de sódio fria (6 x 30 ml), com água fria (6 x 30 ml) e com salmoura. Seca-se a camada orgânica (MgS04) e evapora-se o solvente para se obter um resíduo. Purifica-se este último mediante cromatografia de coluna sobre gel de sílica e elui-se com cloreto de metileno, cloreto de metileno - 5 % de acetonitrilo e cloreto de metileno - 10 % de acetonitrilo para se obter o composto do título esperado, (1,86 g, 87,7 %). Este composto é idêntico ao obtido pelo método descrito anterior do sulfureto de dimetilo/peróxido 84 84
de benzoílo. (c) preparação de 2’-0-(benziloxicarbonil)-7-0-dibenzilfosfonooximetilpaclitaxel.
A uma solução de 2’-0-(benziloxicarbonil)-7-0-metiltiometilpaclitaxel (5,0 g; 5,5396 mmol) em 1,2-dicloroetano anidro (120 ml) adicionam-se 5,0 g de peneiros moleculares activados em pó 4Â. A esta mistura adiciona-se gota a gota e à temperatura ambiente uma solução de uma mistura de N-iodossuccinimida (1,61 g; 7,1632 mmol) e fosfato de dibenzilo (1,97 g; 7,1632 mmol) em 90mldetetra--hidrofurano anidro. Após agitação vigorosa à temperatura ambiente durante 30 minutos filtra-se a mistura reaccional sobre Celite e evapora-se o filtrado até à secura para se obter um resíduo de cor vermelha. Retoma-se o resíduo com 100 ml de acetato de etilo, lava-se com uma solução fria de NaHS03 a 6 % (2 x 50 ml), com uma solução fria de NaHC03 a 6 % (2 x 50 ml) e com salmoura (1 x 50 ml). Seca-se a camada orgânica (MgS04) e evapora-se o solvente para se obter uma massa sólida que se tritura com éter anidro e se filtra para se obter o composto do título sob a forma de um produto sólido com cor de marfim (5,9 g, 97 %). P.F. 124 - 127°C. EM (FAB): [MHf, m/z 1278; [M+Naf, m/z 1301; [M+Kf, m/z 1316 IV (KBr): 3430, 3066, 3032, 1750, 1726, 1664, 1582, 1532 cm'1 RMN (CDC13) Ô : 1,160 (3H, s) 1,703 (3H, s) 1,985 (3H, s), 2,164 (3H, s) 2,420 (3H, s) 3,854 (H, d) 4,151 (H, d) 4,216 H, m) 4,298 (H, d) 4,873 (H, d) 5,043 (6H, 85 m) 5,140 (2H, d) 5,417 (H, d) 5,670 (H, d) 5,971 (H, dd) 6,241 (H, t) 6,317 (H, s) 6,912 (H, d, NH) 7,280 - 8,115 (25H, m) (d) preparação de 7-O-fosfonooximetilpaclitaxel. A uma solução de 2’-0-(benziloxicarbonil)-7-0-dibenzilfosfono-oximetilpaclitaxel (6,0 g; 4,7095 mmol) em 120 ml de acetato de etilo adiciona-se Pd a 10 %/C (6,0 g) e hidrogena-se a mistura a 60 psi (400 kPa) durante 24 horas. Filtra-se a mistura reaccional sobre Celite e evapora-se o solvente para se obter 4,07 g de um resíduo bruto. Purifica-se este último sobre uma coluna curta de gel de sílica por eluição sucessiva com clorofórmio : 10 %, 20 % e 40 % de metanol para se obter o composto do título sob a forma de um produto sólido branco (3,2 g, 71 %) P.F. 155 - 158°C.
Este produto tem a mesma Rf (CCF) e o mesmo tempo de retenção (HPLC) que uma amostra autêntica. EM (FAB): [MH] , m/z 964; [M+Na]~, m/z 986; [M+K]+, m/z 1002; [M+K~+Na"-
Hf, m/z 1024; [M+2K-H]", m/z 1040 UV (MeOH): λ max = 230 nm, E (1 % /1 cm) = 252,5 IV (KBr) : 3432, 3066, 2992, 1722, 1648, 1602, 1580, 1522, 1488, 1452, 1372, 1316, 1246, 1178, 1154, 1110, 1070, 1000, 980, 946, 854, 802, 776, 710, 628, 538 „ -i cm RMN (acetona-dé/DjO) δ : 1.08 (3H, s), 1.10 (3H, s), 1.63 (3H, s), 1.88 (3H, 5), 1.96 (H, m), 2.13 (3H, s), 2.32(3H, s), 2.89 (H, m), 3.76 (H, d), 4.19 (H, m), 4.89 (H, dd), 5.09 (H, dd), 5.55 - 5.60 (2H, sobreposição dos d), 6.04 (H, t), 6.32 (H, s), 720 (H, t), 7.34 - 7.67 (10H, sobreposição dos m), 7.87 (2H, dd), 8.02 (2H, dd). 86
Exemplo 3. 2 ’-0-(etoxicarbonil)-7-0-fosfonooximetilpaclitaxel (a) preparação de 2’-0-(etoxicarbonil)-paclitaxel
86 AcO O
A uma solução de paclitaxel (4,35 g, 5,1 mmol) em 51 ml de cloreto de metileno anidro adiciona-se N,N-diisopropiletilamina (2,67 ml, 15,3 mmol) seguido por cloroformato de etilo (1,46 ml, 15,3 mmol). Agita-se a mistura raeccional à temperatura de 0°C durante 2 horas e em seguida à temperatura ambiente durante mais 1 hora. Dilui-se a mistura reaccional com 400 ml de acetato de etilo, lavam-se as fases orgânicas com uma solução saturada de NaHC03 (2 x 30 ml) e com 30 ml de salmoura. Seca-se a fase orgânica resultante sob MgS04 para se obter o composto do título bruto (93 %) que se utiliza na fase seguinte sem purificação ulterior. EM (FAB/NOBA, Nal, ΚΙ) : [M + Hf, m/z 926; [M + Naf, m/z 948; [M + K]‘, m/z 964 HRMS (FAB/NOBA, Csl / Gly referência externa) : [M + H]T m/z 926,3588 observado, C5oH56NOi6, valor calculado : 926,3599 (desvio Δ = 1,2 ppm) RMN lH (CDC13): δ 1,13 (3H, s), 1,23 (3H, s), 1,30 (3H, t), 1,67 (3H, s), 1,92 (3H, s), 2,21 (3H, s), 2,37 (H, d), 2,45 (3H, s), 2,54 (H, m), 3,80 (H, d), 4,15 - 4,32 (4H, sobreposição dos m), 4,43 (H, dd), 4,96 (H, d), 5,42 (H, d), 5,68 (H, d), 5,98 (H, dd), 6,28 (2H, sobreposição dos m), 7,00 (H, d), 7,34 - 7,59 (11H, sobreposição dos m), 7,74 (2H, d), 8,12 (2H, d).
Experiência alternativa:
Arrefece-se paclitaxel (5,40 g, 6,324 mmol) em 63 ml de diclorometano anidro à temperatura de 0°C e trata-se com Ν,Ν-diisopropiletilamina pura (3,30 ml, 3 equiv) e em seguida com cloroformato de etilo puro (1,81 ml, 3 equiv) gota a gota no decurso de um intervalo de tempo igual a 5 minutos. Segue-se a reacção mediante CCF (acetato de etilo a 50 % em hexano). Decorridas 2 horas à temperatura de 0°C e 16 horas à temperatura ambiente a reacção encontra-se completa e dilui-se a solução amarela-laranja com 300 ml de acetato de etilo e lava-se com bicarbonato de sódio saturado (3 x 75 ml) e com 75 ml de salmoura. A secagem (MgS04) e a evaporação proporcionam o produto do título bruto que se purifica mediante precipitação : adiciona-se diclorometano (cerca de 100 ml) seguido por arrefecimento e adição de hexano (cerca de 60 ml) até ao ponto de turvaçâo. Após arrefecimento com gelo durante várias horas isola-se o sólido mediante filtração. Rendimento 5,17 g (88 %).
Experiência alternativa:
Em um balão de uma única tubuladura de 3 litros seco à chama dissolveu-se paclitaxel (99,0 g, 115,9 mmol) em 1350 ml de cloreto de metileno anidro sobre atmosfera de árgon. Arrefece-se a solução até -10°C. Adiciona-se lentamente N,N- diisopropiletilamina (52,4 g, 405,7 mmol) (tempo da adição -3 minutos), seguida por CICCriEt (31,45 g, 289,8 mmol, tempo da adição ~15 minutos). Agita-se a mistura resultante durante a noite (16 horas) à temperatura de -4°C. A reacção é considerada incompleta por CCF. Adicionou-se uma outra carga de N,N-diisopropiletilamina (2,62 g, 20,28 mmol) seguida por ClC02Et (2,20 g,
δδ 20,28 mmol) e prosseguiu-se a agitação durante 3 horas à temperatura de -4°C. Não se detectou qualquer composto inicial mediante CCF. Diluiu-se a mistura fria com 1,5 1 de acetato de etilo e transferiu-se para uma ampola de carga. Lavou-se então com KHS04 a 5 % (2 x 500 ml), água (1 x 500 ml), KHS04 a 5 % (1 x 500 ml), água (1 x 500 ml), NaHC03 saturado (2 x 500 ml) e salmoura (2 x 500 ml), secou-se (MgS04) e eliminaram-se os solventes in vácuo para se obter 147 g do produto bruto. Dissolveu-se o resíduo em 800 ml de cloreto de metileno quente (temperatura do banho 42°C), e adicionaram-se gota a gota hexanos (530 ml) com agitação enquanto se manteve a temperatura. Põe-se de lado a mistura que cristalizou durante 3 horas à temperatura ambiente e em seguida na câmara frigorífica (0°C) durante a noite. Isolaram-se os cristais brancos pesados mediante filtração e lavaram-se com hexanos / CH2CI2 1:1 (v/v) (2 x 200 ml). Após secagem no filtro com aspiração durante 1 hora secou-se in vacuo (-1,0 mmHg) durante a noite para se obter o composto 95,7 g (rendimento 89 %) do composto do título (índice de homogeneidade conforme medido por HPLC = 98,5 %). (b) preparação de 2’-0-(etoxicarbonil)-7-0-metiltiometilpaclitaxel
A uma solução de 2’-0-(etoxicarbonil)-paclitaxel (4,38 g, 4,7 mmol) em 12,5 ml de dimetilsulfóxido anidro adicionam-se 12,5 ml de anidrido acético. Agita-se a mistura reaccional durante 24 horas à temperatura ambiente e dilui-se então com 500 ml de acetato de etilo, lava-se com uma solução saturada de NaHC03 89 (3 χ 40 m I) e com água (2 x 40 ml). Seca-se a camada orgânica resultante sobre MgS04 e evaporam-se os solventes sob vazio até à secura. Purifica-se o resíduo mediante cromatografia sobre gel de sílica (40 % de acetato de etilo em hexanos) para se obter o composto do título desejado (4,39 g, 94 %). EM (FAB/NOBA, Nal, Kl) : [M + Hf, m/z 986; [M + Na]", miz 1008; [M + Kf, m/z 1024 HRMS (FAB/NOBA, Csl / Gly referência externa) : [M + H]+ m/z 986,3646 (valor calculado : 986,3633 (desvio Δ = 1,3 ppm) RMN ‘H (CDC13): 6 1,18 (3H, s), 1,20 (3H, s), 1,30 (3H, s), 1,75 (3H, s), 1,84 (1H, m), 2,09 (3H, s), 2,11 (3H, s), 2,16 (3H, s), 2,24 (H, d), 2,37 (H, d), 2,45 (3H, s), 2,80 (H, m), 3,68 (H, d), 4,08 - 4,33 (5H, m, sobreposição), 4,65 (2H, s), 4,96 (Fí, d), 5,43 (H, d), 5,69 (H, d), 5,98 (H, dd), 6,26 (H, t), 6,55 (H, s), 7,00 (H, d), 7,32 - 7,61 (11H, m, sobreposição), 7,73 (2H, dd), 8,11 (2H, dd).
Experiência alternativa:
Dissolve-se 2’-0-(etoxicarbonil)-paclitaxel (2,260 g, 2,4406 mmol) em 6 ml de dimetilsulfóxido anidro e adicionam-se 6 ml de anidrido acético de uma só vez à temperatura ambiente. Segue-se a reacção mediante HPLC (coluna analítica Cl8; 60 % de acetonitrilo - 40 % de tampão de fosfato amónio 10 mM; pH 6). Decomdas 30 horas, dilui-se a solução com 250 ml de acetato de etilo e lava-se três vezes com uma solução aquosa saturada de bicarbonato e em seguida com água e com salmoura. Após secagem sobre sulfato de magnésio e filtração, cromatografa-se o produto bruto sobre sílica (40 % de acetato de etilo em hexano) para se obter o composto do título sob a forma de uma espuma branca (2,030 g, 91 %) que tinha 90 uma pureza de 90 % mediante HPLC. Purificou-se ainda uma porção por uma segunda coluna (5 % de acetonitrilo em diclorometano) para se obter o composto que era cerca de 97 % puro por HPLC. Método alternativo para a preparação de 2’-0-(etoxicarbonil)-7-0-metiltiometil-paclitaxel
Dissolve-se 2’-0-(etoxicarbonil)-paclitaxel (4,170 g, 4,503 mmol) em 68 ml de acetonitrilo anidro à temperatura de —40°C e adiciona-se sulfureto de dimetilo (3,2 ml, 44,10 mmol) seguido por peróxido de benzoílo (4,400 g, 18,24 mmol). Çoloca-se a mistura num banho de gelo e agita-se à temperatura de 0°C seguindo-se o decurso da reacção por CCF (40 % de acetato de etilo em hexano). Decorridas 3 horas não se detectou qualquer composto inicial e processou-se a solução mediante adição de 250 ml de acetato de etilo e 100 ml de bicarbonato de sódio aquoso saturado. Lavou-se ainda a fase orgânica com bicarbonato, com água e com salmoura, secou-se em seguida sobre sulfato de magnésio e filtrou-se. Purificou-se o resíduo mediante cromatografia intermitente sobre gel de sílica (4 % de acetonitrilo em diclorometano), para se obter o composto do título sob a forma de uma espuma branca (2,571 g, rendimento 58 %). A pureza desta amostra foi julgada como > 97 % por HPLC. O espectro de RMN é idêntico ao indicado anteriormente.
Experiência alternativa para a preparação de 2’-0-(etoxicarbonil)-7-0-metiltiometil-paclitaxel
Coloca-se 2’-0-(etoxicarbonil)-paclitaxel (49,3 g, 53,2 mmol) num balão de 1 litro com uma única tubuladura e seco com uma chama e dissolve-se em 500 ml de acetonitrilo anidro à temperatura ambiente. Adiciona-se rapidamente por meio de 91 uma seringa sulfureto de metilo (39,1 ml, 0,532 mol). Arrefece-se a mistura reaccional agitada até -16°C num banho de gelo/sal e adiciona-se à mistura de uma só vez peróxido de benzoílo sólido (51,6 g 0,213 mol). (São necessários 4 equivalentes completos para que a reacção prossiga até ao fim). Prossegue-se a agitação durante 30 minutos, tempo durante o qual a temperatura sobe para —10°C. O meio reaccional permaneceu heterogéneo no decurso deste intervalo de tempo (o peróxido de benzoílo não se dissolveu completamente). Mudou-se o banho de gelo para gelo/água, levou-se a temperatura para 0°C e dissolveu-se o peróxido de benzoílo remanescente durante ~5 minutos após o que se aqueceu. A reacção foi considerada completa mediante CCF após agitação à temperatura de 0°C durante mais duas horas e meia. Reduziu-se o volume da solução para -200 ml mediante eliminação do solvente num rotovapor e transferiu-se em seguida para uma ampola de carga onde se lavou com heptano (5 x 500 ml). Dilui-se a camada de acetonitrilo com 1,5 litros de acetato de etilo e lavou-se com uma mistura a 3:1 de NaHC03 saturado / K2CO3 a 5 % (v/v) (2 x 500 ml), NaHC03 saturado (2 x 500 ml), com salmoura meio saturada (1 x 500 ml) e com salmoura (1 x 500 ml), secou-se (MgS04) e eliminaram-se os solventes sob vazio para se obter 67,0 g do produto bruto. Dissolveu-se em 200 ml de acetona, aqueceu-se até 40°C com um banho de água e adicionaram-se hexanos com agitação até se observar turvação (400 ml). Põe-se de parte a mistura que cristalizou durante 3 horas à temperatura ambiente e transferiu-se em seguida para um ambiente frio (0°C) onde se manteve durante a noite (16 horas). Formou-se um bolo espesso. Isolou-se o sólido mediante filtração e lavou-se com hexanos/acetona a 3:1 (v/v) (2 x 50 ml). Secaram-se os cristais brancos resultantes no filtro de aspiração durante uma hora e em seguida in vacuo (-0,5 mmHg) durante a noite para se obter 47,5 g (rendimento 91 %) do composto do título (índice de homogeneidade tal como medido por HPLC = 94,8 %). (c) preparação de 2’-0-(etoxicarbonil)-7-0-dibenzilfosfonooximetilpaclitaxel.
Adiciona-se uma solução de N-iodossuccinimida (1,953 g, 8,65 mmol) e fosfato de dibenzilo (2,41 g, 8,65 mmol) em tetra-hidrofurano a uma mistura de 2’-0-(etoxicarbonil)-7-0-metiltiometilpaclitaxel (5,677 g, 5,76 mmol) e 5,7 g de peneiros moleculares de 4Â em 100 ml de cloreto de metileno à temperatura ambiente. Agita-se a mistura reaccional durante 40 minutos à temperatura ambiente. Decorrido este intervalo de tempo a reacção é considerada completa tal como julgado ou verificado por CCF. Filtra-se a mistura reaccional através de Celite e concentra-se o filtrado sob vazio para se obter um resíduo acastanhado que se dilui com 800 ml de acetato de etilo, lava-se a fase orgânica com Na2S03 a 1 % (2 x 80 ml), e lava-se em seguida com salmoura a 5 % (2 x 50 ml). Concentra-se a fase orgânica sob vazio e seca-se. A cromatografia do resíduo resultante (50 - 60 % de acetato de etilo em hexanos) proporcionou o composto do título desejado (6,23 g, 89 %). EM (FAB/NOBA, Nal, ΚΙ) : [M + Na]~, m/z 1238; [M + K]+, m/z 1254 93 HRMS (FAB/NOBA, Csl/Gly referência externa) : [M + Na]* m/z 1216,4291 (C65H71NO20P valor calculado : 1216,4307; desvio Δ =1,3 ppm) ‘HNMR (CDC13), δ : 1,18 (3H, s), 1,21 (3H, s), 1,30 (3H, t), 1,67 (6H, s), 1,80 (H, s), 1,93 (H, m), 1,99 (3H, d), 2,18 (3H, s), 2,23 (H, m), 2,38 (H, m), 2,45 (3H, s), 2,80 (H, m), 3,86 (H, d), 4,14 - 4,32 (5H, sobreposição dos m’s), 4,88 (H, d), 5,00 - 5,07 (4H, sobreposição dos m’s), 5,42 (H, d), 5,68 (H, d), 5,96 (H, dd), 6,26 (H, t), 6,33 (H, s), 6,95 (H, d), 7,30 - 7,61 (11H, sobreposição dos m’s), 7,75 (2H, dd), 8,12(2H,dd).
Experiência alternativa: A uma solução de 2’-0-(etoxicarbonil)-7-0-metiltiometilpaclitaxel (350 mg, 0,355 mmol) em 8 ml de tetra-hidrofurano anidro adiciona-se uma solução de N-iodossuccinimida (120 mg, 0,532 mmol) e fosfato de dibenzilo (148 mg, 0,532 mmol) em tetra-hidrofurano ( 5ml). Segue-se a reacção mediante HPLC (coluna Cl8; 70 % de acetonitrilo, 30 % de fosfato de amónio 10 mM, pH 6). Decorridas duas horas, detectou-se menos do que 5 % de composto inicial e processou-se a reacção. Dilui-se a solução com 75 ml de acetato de etilo e lavou-se com uma solução aquosa a 1 % de bissulfíto de sódio (2 x 50 ml) e com 50 ml de salmoura. Após secagem rápida sobre sulfato de magnésio e filtração, evaporou-se o solvente. A cromatografia intermitente sobre gel de sílica (45 % de acetato de etilo/hexano) proporcionou o composto do título sob a forma de uma espuma branca (281 mg, 65 %). A análise de HPLC indicou uma pureza de cerca de 95 %.
Experiência alternativa:
Colocaram-se peneiros moleculares esmagados de 4 Á num balão de 1 94 litro com uma tubuladura e seco à chama que foi depois ligado a uma tubagem de vácuo (~0,5 mmHg). Aqueceram-se os peneiros com uma pistola de calor durante ~10 minutos, enquanto se agitavam manualmente. Após arrefecimento sob vazio introduziu-se árgon no balão e adicionou-se 2’-0-(etoxicarbonil)-7-0-metil-tiometilpaclitaxel (37,5 g, 38,03 mmol) seguido por fosfato de benzilo (14,8 g, 53,24 mmol) e THF (400 ml). Agitou-se vigorosamente a mistura à temperatura ambiente com um agitador magnético. Num balão separado seco com chama, dissolveu-se N-iodossuccinimida (10,.7 g, 47,54 mmol) em THF (50 ml) sob atmosfera de árgon. (Durante a preparação a solução de NIS, a transferência de líquido e durante o curso da reacção, cobriram-se os recipientes com uma folha de alumínio para protecção contra a luz). Adicionaram-se então lentamente (10 minutos) à mistura reaccional por intermédio de uma seringa. Lavou-se o frasco que contém NIS com 5 ml de THF e transferiu-se a mistura reaccional, que foi então agitada durante duas horas à temperatura ambiente. A análise de CCF mostrou a ausência de composto inicial. Filtrou-se a solução de cor vermelha profunda através de uma almofada de Celite* directamente para uma mistura bifásica agitada vigorosamente contendo 500 ml de acetato de etilo, 300 ml de uma solução aquosa a 10 % de tiossulfato de sódio e 200 ml de uma solução saturada de bicarbonato de sódio. A cor vermelha desaparece após alguns segundos proporcionando uma solução incolor. Lavou-se a almofada de Celite® com EtOAc (~100 ml) e transferiram-se ambas as camadas líquidas para uma ampola de carga. Diluiu-se a camada orgânica com 1 litro de EtOAc, separaram-se as camadas orgânicas e lavou-se a camada orgânica com uma mistura de NaHC03 saturado e K2C03 a 5 % (3:1 v / v, 2 x 500 ml), em seguida com
NaHC03 saturado (2 x 500 ml), com salmoura semi-saturada (1 x 500 ml) e com salmoura (1 x 500 ml). Secou-se o extracto com MgS04 anidro e filtrou-se. Tratou-se com 5,0 g de Norit neutro (carvão) mediante agitação à temperatura ambiente durante 15 minutos. Filtrou-se novamente através de uma almofada de Celite® e eliminou-se o solvente sob pressão reduzida para se obter 52 g do produto bruto. Dissolveu-se em tolueno/cloreto de metileno (280 ml / 25 ml) e adicionaram-se gota a gota 20 ml de hexanos. Após ter sido posta de parte durante 3 horas à temperatura ambiente a mistura de cristalização foi deixada à temperatura de 0°C durante a noite. Formou-se um produto sólido de cor amarela pálida nas paredes do balão. Após decantação da água mãe, triturou-se o resíduo com 50 ml de tolueno, fíltrou-se, lavou-se com tolueno e secou-se no filtro de aspiração durante 30 minutos. Transferiu-se então para um excicador com Drierité® e secou-se ainda in vacuo (~0,5 mmHg) durante quatro horas para se obter 24,4 g (rendimento 53 %) do composto do título (índice de homogeneidade tal como medido por HPLC ^ 95,9 %). Evaporou-se a água mãe até à secura,. Triturou-se com 100 ml de tolueno, filtrou-se, lavou-se com tolueno e secou-se no filtro de aspiração durante 30 minutos. Após secagem num excicador tal como descrito anteriormente obteve-se 12,5 g (rendimento 27 %) do mesmo produto (índice de homogeneidade tal como medido por HPLC = 97,1 %). v (d) preparação de 2’-0-(etoxicarbonil)-7-0-fosfonooximetilpaclitaxel; os seus sais de monossódio, monopotássio, trietilamina, arginina, lisina, etanolamina, N-metilglucamina e trietanolamina. 96
A uma solução de 2’-0-(etoxicarbonil)-7-0-dibenzilfosfonooximetil-paclitaxel (1,23 g, 1,01 mol) em 40 ml de acetato de etilo anidro adiciona-se paládio a 10 % sobre carvão (428 mg, 10 %, 0,404 mmol). Submete-se a mistura reaccional a hidrogenação (60 PSI = 400 kPa) com agitação contínua durante 24 horas. Elimina-se o produto sólido mediante filtração através de Celite, lava-se então a Celite várias vezes com acetato de etilo. Concentra-se o filtrado para se obter a forma ácido livre do composto do título (1,01 g, uma pureza de 80 % conforme verificado por HPLC). Eliminam-se as impurezas na fase seguinte mediante coluna cromatográfica preparativa Cl8. EM (FAB/NOBA, Nal, Kl) : [M + Naf, m/z 1058; [Μ + ΚΓ, m/z 1074; [M + 2Na - Hf, m/z 1080, [M + Na + K - Hf, m/z 1096; [Μ + 2K - hf, m/z 1112 HR-EM (FAB/NOBA, Csl / Gli, referência externa) :[M + Naf, m/z 1058,3163 (C5iH58N02oPNa valor calculado : 1058,3188; desvio Δ = 2,3 ppm) RMN (acetona - cVD20) δ : 1,13 (3H, s), 1,21 (3H, s), 1,66 (3H, s), 1,87 (H, m), 1,93 (3H, s), 2,14 (3H, s), 2,18 (H, m), 2,44 (3H, s), 2,95 (H, m), 3,81 (H, d), 4,12 (2H, s), 4,15 - 4,27 (3H, sobreposição dos m’s), 4,92 - 4,99 (2H, sobreposição dos br,m’s), 5,15 (H, br.s), 5,48 (H, d), 5,61 (H, d), 5,84 (H, dd), 6,07 (H, t), 6,36 (H, s),7,25 (H, t), 7,28 - 7,69 (10H, sobreposição dos m’s), 7,89 (2H, dd), 8,08 (2H, dd), 8,86 (H, d). 97
Experiência alternativa:
Hidrogena-se 2’-0-(etoxicarbonil)-7-0-(dibenzilfosfonooximetil)--paclitaxel (490 mg, 0,402 mmol) em 20 ml de acetato de etilo num agitador de Parr a 60 psi (400 kPa) na presença de paládio sobre carvão (10 % p/p, 150 mg). Realiza-se o controlo mediante CCF e HPLC. Quando deixou de se detectar qualquer material inicial ou qualquer produto intermediário (26 h) (presumivelmente o fosfato de monobenzilo), filtrou-se a suspensão através de Celite e evaporou-se até à secura. A análise HPLC revelou uma pureza de 88 - 92 %.
Experiência alternativa:
Distribuiu-se sal de trietilamina de 2’-0-(etoxicarbonil)-7-0-fosfono-oximetilpaclitaxel conforme descrito mais abaixo (5,4 g, 4,75 mmol) vigorosamente entre EtOAc (100 ml) e NaHS04 a 5 % (45 ml) com agitação à temperatura de 0°C durante 30 minutos. Separou-se a camada aquosa e extraiu-se com EtOAc (20 ml). Lavou-se a camada reunida de EtOAc com semi-salmoura (25 ml), com salmoura (25 ml x 2), secou-se sobre NaS04 e filtrou-se para se obter uma solução do ácido (-4,75 mmol) em EtOAc (-150 ml). Concentrou-se então esta solução de EtOAc até à secura num evaporador rotativo para se obter 3,75 g do composto do título sob a forma de ácido livre com um rendimento de 95 %. A análise de HPLC mostrou um índice de homogeneidade igual a 96,1 %.
Preparou-se o sal monossódico da seguinte maneira :
Dissolveu-se uma amostra de 2’-0-(etoxicarbonil)-7-0-fosfonooximetil-paclitaxel (1,6 g, 1,55 mmol) em acetonitrilo (30 ml) mediante sonicação. Dilui-se esta solução com 30 ml de água e adicionou-se uma solução 1,1 M de NaHC03
98 (2,11 ml, 2,32 mmol), agitando alternadamente e sonicando para se obter uma solução (5 - 20 minutos). Aplicou-se a solução um tanto ou quanto leitosa a uma coluna C-18, lavando com 2 volumes da coluna de água, eluindo em seguida o sal monossódico com 25 % de acetonitrilo/água. Reuniram-se as fracções apropriadas, evaporou-se o acetonitrilo e liofilizou-se a fase aquosa para se obter o sal monossódico do composto do título (850 mg, cerca de 50 %), com uma pureza por HPLC de 97 % EM (FAB / ΝΟΒΑ, Nal, Kl) : [M + Naf, m/z 1180 HR - EM (FAB / ΝΟΒΑ, Csl/Gly referência externa) : [M + Na]', m/z 1080,2968 (C5iH57N02oPNa2 valor calculado : 1080,3007, desvio D = 3,6 ppm)
Análise elementar : C : 52,65 (calc. 56,72), H: 5,06 (calc. 5,23), N : 1,20 (calc. 1,30), Na: 2,74 (calc. 2,12) IV (KBr) : 3430, 3066, 2988, 1746, 1722, 1660, 1602, 1582, 1526, 1488, 1452, 1374, 1246, 1178, 1150, 1108, 1070, 1052, 1026, 1002, 966, 912, 834, 792, 776, 710, 628, 538 cm’1. RMN (DMSO-dé, D20, acetona-de) δ : 1,10 (6H, s), 1,23 (3H, t), 1,64 (3H, s), 1,70 (H, m), 1,90 (3H,s), 1,99 (H, m), 2,14 (3H, s), 2,37 (3H, s), 2,98 (H, m), 3,74 (H, d), 4,07 (2H, s), 4,13- 4,26 (3H, sopbreposição dos m's), 4,80 (H, b.,dd), 4,97 (H, d), 5,09 (H, br.t), 5,44 (H, d), 5,55 (H, d), 5,99 (H, t), 6,34 (H, s), 7,22 (H,t), 7,43- 7,69 (10H, m, sobreposição), 7,92 (2H, dd), 8,06 (2H, dd).
Pode igualmente preparar-se o sal de sódio pela maneira seguinte : Tratou-se o 2’-0-(etoxicarbonil)-7-0-fosfonooximetilpaclitaxel bruto (89 99 %, 70 mg, 0,060 mmol), em EtOAc (2 ml) com uma solução de etil-hexanoato de sódio (87,5 mM em EtOAc, 1,0 ml, 0,0875 mmol) à temperatura ambiente com agitação. Após agitação à temperatura ambiente durante uma hora, adicionou-se hexano (1,2 ml) até ao ponto de turvação. Após armazenagem à temperatura de -20°C durante 2 horas, filtrou-se o pó amorfo fino (com alguma dificuldade, muito lentamente) através de papel de filtro fino para se obter 45 mg (70 %) do sal de sódio. Este tinha uma pureza de 95,2 % medida por HPLC e continha uma pequena quantidade de ácido etil-hexanóico (RMN).
Preparou-se o sal de trietanolamma pela maneira seguinte :
Dissolveu-se 2’-0-(etoxicarboml)-7-0-fosfonooximetilpaclitaxeI bruto a partir da hidrogenação (89 % por HPLC) (0,69 g, 0,593 mmol após correcçao para as impurezas) em 10 ml de acetato de etilo e agitou-se lentamente enquanto se adicionou gota a gota uma solução de trietanolamina (0,11 M em EtOAc, usou-se 5,1 ml, 0,95 eq.). Digeriu-se a solução leitosa obtida por este processo à temperatura de 0°C durante duas horas, filtrou-se então sobre papel de filtro fino e lavou-se com EtOAc frio. Rendimento : 499 mg (80 %) de um pó amorfo, fino, não electrostático que se secou durante a noite in vacuo. A HPLC mostrou uma pureza de 96,6 % (C-18, 45 % 5 mM Qn + fosfato de amónio 10 mM pH 6, acetonitrilo a 55 %). O espectro de RMN (D20/acetona/DMSO) mostra vestígios de acetato de etilo e ausência de outras impurezas definidas. A sua análise faz-se para um 2 - 3 x hidrato. O sal de trietanolamina de menor prioridade obtido a partir de uma outra experiência foi ainda purificado pelo processo seguinte. Dissolveu-se o sal de trietanolamina (aproximadamente 2 g) em cerca de 30 % de acetonitrilo/água. 100
Eluiu-se esta solução sob uma pressão de azoto ligeira através de uma coluna de Cl8 (Bakerbond) com um gradiente de 20 % a 40 % de acetonitrilo em água. Isolaram-se as fracções que continham o sal de trietanolamina desejado; eliminou-se o acetonitrilo mediante evaporação rotativa sob pressão reduzida. Congelaram-se as soluções aquosas e Iiofílizaram-se durante a noite para se obter 1,4 g do sal de trietanolamina com uma pureza de 97,5 %.
Pode preparar-se igualmente o sal de trietanolamina pela maneira seguinte :
Distribuiu-se o sal de trietilamina de 2,-0-(etoxicarbonil)-7-0-fosfono-oximetilpaclitaxel (3,0 g, 2,64 mmol) entre EtOAc (60 ml) e NaHS04 a 5 % (30 ml) com agitação vigorosa à temperatura de 0°C durante 15 minutos. Separou-se a camada aquosa e extraiu-se com EtOAc (10 ml). Lavou-se a camada reunida de EtOAc com 15 ml de salmoura, secou-se sobre NaS04, filtrou-se para se obter uma solução do ácido (-2,64 mmol) em EtOAc (~70 ml). A esta solução de EtOAc à temperatura ambiente adicionou-se gota a gota com agitação vigorosa N(CH2CH2OH)3 (0,35 ml, 2,64 mmol) no decurso de um intervalo de tempo de 5 minutos. Agitou-se a suspensão resultante durante mais uma hora e filtrou-se em seguida, lavou-se com EtOAc (15 ml x 2), secou-se in vácuo para se obter 2,8 g do sal de trietanolamina com um rendimento de 89 %. A análise de HPLC mostrou um índice de homogeneidade de 98,7 %; P.F. : > 157°C com decomposição.
Análise elementar calculada para C5éH73N2023P · 2,0 H20 · 0,3 EtOAc : C, 55,60, H, 6,48; N, 2,27; KF (H20), 2,92.
Encontrada : C, 55,94; H, 6,59; N, 2,43; KF (H20), 3,50. 101
Preparou-se o sal de trietilamina pela maneira seguinte : A solução de 2’-0-(etoxicarbonil)-7-0-dibenzilfosfonooximetilpaclitaxel (10 g, 8,23 mmol), em EtOAc (350 ml), à temperatura ambiente, adicionou-se paládio a 10 % sobre carvão (2 g, 20 % de carga). Desgasou-se á suspensão resultante mediante evacuação do ar e em seguida mediante purga com árgon. Repetiu-se este processo mais duas vezes. Substituiu-se então o árgon por hidrogénio seguindo-se o mesmo processo de desgasagem. Agitou-se a suspensão resultante sob uma pressão de balão de hidrogénio (2-3 libras por polegada quadrada) durante 16 horas à temperatura ambiente com agitação vigorosa. Evacuou-se o hidrogénio e substituiu-se por árgon 3 vezes seguindo-se o processo de desgasagem. Filtrou-se a suspensão resultante através de uma almofada de Celite. A este filtrado homogéneo adicionou-se lentamente Et3N (8,23 mmol, 1,14 ml) durante um intervalo de tempo de 5 minutos com agitação vigorosa. Agitou-se a suspensão branca fina resultante durante mais 30 minutos. Filtrou-se através de uma ampola sinterizada com o tamanho poroso E. Secou-se o bolo do filtro in vacuo (1 mmHg) durante 16 horas para se obter 8,22 g do sal de trietilamina do título com um rendimento de 88 %. A análise de HPLC mostrou um índice de homogeneidade igual a 97,4 %; P.F.: > 178°C com decomposição.
Análise elementar calculada para C57H73N2O20P · 4,5 H20 : C, 56,19, H, 6,79; N, 2,30; KF (H20), 6,65. Encontrada . C, 56,33; H, 6,87; N, 2,32; KF (H20), 7,96. Experiência alternativa para a preparação do sal de trietilamina : Adicionou-se 2’-0-(etoxicarbonil)-7-0-dibenzilfosfonooximetil- paclitaxel (5,67 g, 4,66 mmol) a um balão de 250 ml e dissolveu-se em 150 ml de 102 acetato de etilo. O balão encontrava-se equipado com uma válvula de 3 vias com uma ligação a uma câmara de vácuo e uma ligação a uma tubagem de árgon. Utilizando a válvula, evacuou-se parcialmente o balão e purgou-se então com água. Repetiu-se este processo mais duas vezes. Adicionou-se paládio sobre carvão activado (Pd a 10 %) (0,85 g) ao balão. Substituiu-se a tubagem de árgon ligada à válvula de três vias por um balão cheio com hidrogénio. Utilizando a válvula, evacuou-se parcialmente o balão e purgou-se então com hidrogénio. Repetiu-se este processo mais 4 vezes. Agitou-se a mistura resultante à temperatura ambiente sob atmosfera do balão de hidrogénio durante a noite. A análise de CCF 17 horas após a exposição inicial ao hidrogénio mostrou que o composto inicial se encontrava ausente. Substituiu-se o balão de hidrogénio ligado à válvula de três vias por uma tubagem de árgon. Utilizando a válvula, evacuou-se parcialmente o balão e purgou-se então com água. Repetiu-se este processo mais duas vezes. Filtrou-se sob vazio o conteúdo do balão através de uma almofada de Celite. Enxaguou-se a Celite com acetato de etilo (2x10 ml). Ao filtrado com agitação adicionou-se NEt3 (0,650 ml, 4,66 mmol). Agitou-se a suspensão resultante à temperatura ambiente durante duas horas e reduziu-se então o volume para ~150 ml através do um rotovapor. Filtrou-se o sólido, lavou-se com acetato de etilo (2x10 ml) e secou-se sob vazio para se obter 4,76 g (rendimento igual a 90 %) do sal de trietilamma de título sob a forma de um pó branco (o índice de homogeneidade do produto foi determinado como sendo igual a 96,6 % por análise de HPLC).
Experiência alternativa para a preparação do sal de trietilamina :
Adíciona-se 2’-0-(etoxicarbonil)-7-0-dibenzilfosfonooximetilpaclitaxel 103 (5,17 g, 4,25 mmol) a um balão de 250 ml e dissolve-se em 150 ml de acetato de etilo. O balão encontrava-se equipado com uma válvula de três vias com uma ligação a uma câmara de vácuo e uma ligação a uma conduta de árgon. Utilizando a válvula, evacuou-se parcialmente o balão e purgou-se então com árgon. Repetiu-se este processo mais duas vezes. Adicionou-se ao balão paládio sobre carvão activado (Pd a 10 %) (0,86 g). Substituiu-se a tubagem de árgon ligada à válvula de três vias por um balão cheio de hidrogénio. Utilizando a válvula, evacuou-se parcialmente o balão e então purgou-se com hidrogénio. Repetiu-se este processo mais cinco vezes. Agitou-se a mistura resultante à temperatura ambiente sob a pressão da atmosfera do balão de hidrogénio durante a noite. A análise por CCF 16 horas após a exposição inicial ao hidrogénio mostrou que o material inicial se encontrava ausente. Substituiu-se o balão de hidrogénio ligado à válvula de três vias por uma tubagem de árgon. Utilizando a válvula, evacuou-se parcialmente o balão e purgou-se então com árgon. Repetiu-se este processo mais duas vezes. Filtrou-se sob vazio o conteúdo do balão através de uma almofada de Celite. Enxaguou-se a Celite com acetato de etilo (4x10 ml). Ao filtrado agitado adicionou-se NEt3 (0,590 ml, 4,25 mmol). Agitou-se a suspensão resultante à temperatura ambiente durante uma hora e reduziu-se o volume para ~ 140 ml através de um roto vapor. Filtrou-se o sólido, lavou-se com 10 ml de acetato de etilo e secou-se sob vazio para se obter 4,46 g (rendimento 92 %) do sal de trietilamina do título sob a forma de um pó branco (o índice de homogeneidade tal como determinado por análise de HPLC era igual a 96,7 %).
Preparou-se o sal de lisina pela maneira seguinte :
Adicionou-se gradualmerite 2’-0-(etoxicarbonil)-7-0-dibenzilfosfono- 104 oximetilpaclitaxel (15,0 g, 12,34 mmol) a uma suspensão de paládio a 10 % sobre carvão (20 % de carga, 3 g) em EtOH (600 ml, 200 proof) a 0°C. Desgasou-se a suspensão resultante mediante evacuação do ar e purga com árgon. Repetiu-se este processo mais duas vezes. Substituiu-se então o árgon por hidrogénio seguindo o mesmo processo de desgasagem com agitação vigorosa. Agitou-se a mistura resultante à temperatura de 0°C durante duas horas. Removeu-se o banho de arrefecimento e agitou-se a solução reaccional à temperatura ambiente durante mais 4 horas e meia. Desgasou-se a mistura reaccional mediante evacuação do hidrogénio e purga com árgon 3 vezes. Filtrou-se sob atmosfera de árgon através de uma almofada de Celite. Ao filtrado resultante adicionou-se lentamente uma solução de lisina (1,63 g, 0,94 eq.) em uma mistura a 1:1 de H20 : EtOH (200 proof) (20 ml) durante um intervalo de tempo de 5 minutos com um agitação vigorosa. A suspensão pronta resultante adicionou-se 110 ml de água destilada e agitou-se durante 30 minutos. Aqueceu-se até cerca de 55°C. Manteve-se a solução homogénea resultante num banho de óleo ajustado a 50°C e arrefeceu-se lentamente até à temperatura ambiente durante 16 horas e 4°C durante 3 horas. Filtrou-se e secou-se com aspiração durante 16 horas para se obter 11,8 g (rendimento -80 %) do sal de lisina com um índice de homogeneidade igual a 99,0 % tal como determinado por HPLC; P.F. : > 170°C com decomposição.
Análise elementar calculada para Ο^γΗ-^^Ο^Ρ · 8,0 H20 : C, 51,62; H, 6,69; N, 3,17; KF (H20), 10,87. Encontrada : C, 51,76; H, 6,57, N, 3,48; KF (H20), 11,42.
Preparou-se o sal de etanolamina pela maneira seguinte :
Distribui-se sal de trietilamina de 2’-0-(etoxicarbonil)-7-0-fosfono- 105 oximetilpaclitaxel (3,0 g, 2,64 mmol) entre EtOAc (60 ml) e 5 % de NaHS04 (30 ml) com agitação vigorosa à temperatura de 0°C durante 15 minutos. Separou-se a camada aquosa e extraiu-se com EtOAc (15 ml). Lavou-se a camada de EtOAc reunida com 15 ml de salmoura, secou-se sobre Na2S04 e filtrou-se para se obter uma solução de ácido livre (~2,64 mmole) em EtOAc (~70 ml). A esta solução de EtOAc à temperatura ambiente adicionou-se gota a gota com agitação vigorosa uma solução de H2NCH2CH2OH (0,15 ml, 2,64 mmol) em EtOAc (5 ml) durante um intervalo de tempo de 5 minutos. Agitou-se a suspensão resultante durante mais 1 hora e filtrou-se em seguida, lavou-se com EtOAc (15 ml x 2) e secou-se sob vazio para se obter 2,6 g do sal de etanolamina do título com um rendimento de 89 %. A análise de HPLC msotrou um índice de homogeneidade de 97,8 %; P.F. : > 130°C com decomposição.
Análise elementar calculada para C53Hé5N2021P · 2,5 H20 . C, 55,73; H, 6,18; N, 2,45; KF (H20), 3,94. Encontrada : C, 55,76; H, 6,39; N, 2,45; KF (H20), 6,00.
Preparou-se o sal de arginina pela maneira seguinte :
Adicionou-se gradualmente 2’-0-(etoxicarbonil)-7-0-dibenzilfosfono-oximetilpaclitaxel (30,0 g, 24,69 mmol) a uma suspensão a paládio a 10 % sobre carvão (20 %, carga, 6 g) em EtOH (900 ml, 200 proof) a 0°C. Desgasou-se a suspensão resultante mediante evacuação do ar e purga com árgon. Repetiu-se este processo mais duas vezes. Substituiu-se então o árgon por hidrogéino seguindo-se o processo de desgasagem anterior com agitação vigorosa. Agitou-se a mistura resultante à temperatura de 0°C durante duas horas. Removeu-se o banho de arrefecimento e agitou-se a solução reaccional à temperatura ambiente durante mais 106 24 horas. Desgasou-se a mistura reaccional mediante evacuação do hidrogénio e purga com árgon 3 vezes e seguindo-se o processo de desgasagem anterior. Filtrou--se sob atmosfera de árgon e através de uma almofada de Celite. Dividiu-se o filtrado em duas partes iguais e adicionou-se a cada parte EtOH (190 ml, 200 proof). A uma parte adicionou-se lentamente (~630 ml) de uma solução de arginina (2,0 g, 0,94 eq.) em uma mistura a 2:1 de H20 : EtOH (200 proof) (20 ml) durante um intervalo de tempo de 5 minutos com agitação vigorosa. A suspensão branca resultante adicionou-se 100 ml de água destilada e agitou-se durante 30 minutos após o que se aqueceu até cerca de 60°C. Filtrou-se enquanto quente e manteve-se o filtrado num banho de óleo ajustado a 50°C, deixou-se arrefecer até à temperatura ambiente e manteve-se a temperatura ambiente durante 2 horas e à temperatura de 4°C durante 2 horas. Filtrou-se e lavou-se com H20 a 3 % fria em EtOH (100 ml) e secou-se com aspiração durante 16 horas para se obter 12,95 g (rendimento ~86 %) do sal de arginina do título com um índice de homogeneidade de 96,7 %.
Dissolveu-se 12,95 g deste material numa mistura de H20 a 15 % em EtOH (~700 ml) a 55°C. Arrefeceu-se a solução e manteve-se à temperatura de 30°C durante 3 horas e meia, à temperatura ambiente durante 16 horas e à temperatura de 4°C durante 3 horas Filtraram-se os cristais resultantes, lavaram-se com 2 % de H20 fria em EtOH (50 ml x 2 ), secou-se com aspiração durante 4 horas e secou-se então in vácuo (1 mmHg) durante 16 horas para se obter 10,2 g (rendimento ~80 %) do sal de arginina do título (o índice de homogeneidade era igual a 98,5 %); P.F. : > 176°C com decomposição.
Análise elementar calculada para Cj7H72N5022P · 6,4 H20 : C, 51,65; H, 6,45; N,
5,28; KF (H20), 8,7. Encontrada : C, 51,86, H, 6,65, N, 5,53; KF (H20), 8,72.
Preparou-se o sal de N-metilglucamina pela maneira seguinte :
Adicionou-se gradualmente 2’-0-(etoxicarbonil)-7-0-dibenzilfosfono-oximetilpaclitaxel (30,0 g, 24,69 mmol) a uma suspensão de paládio a 10 % sobre carvão (20 % de carga, 6 g) em EtOH (900 ml, 200 proof) a 0°C. Desgasou-se a suspensão resultante mediante evacuação do ar e purga com árgon. Repetiu-se este processo mais duas vezes. Substitui-se então o árgon por hidrogénio seguindo-se o processo de desgasagem anterior com agitação vigorosa. Agitou-se a mistura resultante à temperatura de 0°C durante 2 horas. Removeu-se o banho de arrefecimento e agitou-se a solução reaccional à temperatura ambiente durante mais 24 horas. Desgasou-se a mistura reaccional mediante evacuação do hidrogénio e purga com árgon três vezes seguindo-se o processo de desgasagem anterior. Filtrou-se sob árgon através de uma almofada de Celite. Dividiu-se o filtrado em duas partes iguais e adicionou-se a cada porção EtOH (190 ml , 200 proof). Adicionou-se lentamente a uma porção (-630 ml) de uma solução de N-metil-glucamina (2,24 g, 0,94 eq.) em uma mistura a 1 : 1 de H20 . EtOH (200 proof) (20 ml) durante um intervalo de tempo de 5 minutos com agitação vigorosa. A suspensão branca resultante adicionou-se 100 ml de água destilada e agitou-se a suspensão durante 30 minutos após o que se aqueceu até cerca de 49°C. Manteve-se a solução homogénea límpida em um banho de óleo ajustado a 50°C, deixou-se arrefecer até à temperatura ambiente e manteve-se à temperatura ambiente durante duas horas e à temperatura de 4°C durante uma hora e meia. Filtrou-se e lavou-se com H20 a 3 % em EtOH (100 ml), secou-se com aspiração à temperatura ambiente 108 durante 16 horas para se obter 9,65 g (rendimento ~64 %) do sal de N-metil-glucamina do título com um índice de homogeneidade de 96,4 %.
Dissolveu-se 9,65 g deste material numa mistura de H20 a 15 % em EtOH (~450 ml) a 52°C. Em seguida, arrefeceu-se a solução e manteve-se à temperatura de 28°C durante 3 horas e meia, à temperatura ambiente durante 16 horas e à temperatura de 4°C durante 3 horas. Filtraram-se os cristais resultantes, lavaram-se com uma solução fria de H20 a 2 % em EtOH (50 ml x 2), secou-se com aspiração durante 4 horas e secou-se então in vacuo (1 mmHg) durante 16 horas para se obter 7,5 g (rendimento ~80 %) do sal de N-metilglucamina do título (o índice de homogeneidade tal como determinado por HPLC era igual a 98,6 %); P.F. > 154°C com decomposição.
Análise elementar calculada para C5gH75N2025P · 5,0 H20 : C, 52,72; H, 6,48; N, 2,12; KF (H20), 6,82. Encontrada : C, 53,09; H, 6,50; N, 2,08; KF (H20), 7,12. Exemplo 4. 2’-0-(Fosfonooximetil)-paclitaxel (a) Preparação de 2’-0-(metiltiometil)-7-0-(trietilsilil)-paclitaxel
A uma solução arrefecida (0 a -5°C) de 7-0-(trietilsilil)-paclitaxel (2,46 g; 2,5439 mmol) em 100 ml de acetonitrilo adiciona-se sulfiireto de dimetilo (1,348 g; 1,59 ml; 21,6976 mmol) seguido por peróxido de benzoílo (2,628 g; 10,8488 109 mmol). Agita-se a mistura heterogénea à temperatura de 0°C durante 1 hora e mantém-se à temperatura de 5°C durante 18 horas. Observa-se uma solução amarela. Evapora-se esta última até à secura e purifica-se mediante cromatografia de coluna sobre gel de sílica (eluindo com acetato de etilo : hexano, 1 : 4, 1 : 3 e 1 : 2) para se obter o composto do título (1,0 g, 38 %). Utiliza-se este último tal qual na etapa seguinte. EM : [Μ + H]+, 1028; [M + Na]", 1050; [Μ + K] , 1066 (b) Preparação de 2’-0-(metiltiometil)-paclitaxel
A uma solução arrefecida (-15°C) do produto da fase (a) (1,0 g; 0,9737 mmol) em 30 ml de acetonitrilo anidro adiciona-se gota a gota HC1 0,5N (3 ml). Agita-se a solução resultante à temperatura de -15°C durante 1 hora e à temperatura de 5°C durante 18 horas. Dilui-se com 20 ml de acetato de etilo e lava-se com uma solução fria de NaHC03 a 6 % e com salmoura. Seca-se (MgS04) e evapora-se até à secura. Purifica-se mediante placa de gel de sílica (cloreto de metileno : 15 % de acetonitrilo) para se obter o composto do título (280 mg, 31,4 %). IV (KBr) : 3446, 3064, 2940, 1726, 1666, 1582, 1516, 1486. IV (KBr): 3446, 3064, 2940, 1726, 1666, 1582, 1516, 1486. RMN (CDC13): δ 1,118 (s, 3H), 1,229 (s, 3H), 1,662 (s, 3H), 1,689 (s, 3H), 1,871 (s,
110 3Η), 2,209 (s, 3Η), 2,450 (s, 3H), 3,800 (d, H), 4,119 (d, h), 4,305 (d, H), 4,413 (m, H), 5,63 (d, h), 4,703 (d, H), 4,940 (d, h), 4,958 (dd, H), 5,667 (d, h), 5,822 (dd, h), 6,263 (m, 2H), 7,019 (d, NH), 7,293 - 8,127 (m, 15H). EM : [M + Hf, 914; [M + Na]+, 936; [M + Kf, 952 HRMS : ΜΙΓ : 914,3394 (calculado = 914,3422) (c) Preparação de 2’-0-(dibenzilfosfonooximetil)-paclitaxel
A uma solução agitada de um produto da fase (b) (0,89 g; 0,9748 mmol) em 12 ml de 1,3-dicloroetano anidro adiciona-se 1,0 g de peneiros moleculares em pó de 4Â seguido pela adição gota a gota de uma solução da mistura de N-iodo--succinimida (0,33 g; 1,4622 mmol) e fosfato de dibenzilo (0,41 g; 1,4622 mmol) em 8 ml de tetra-hidrofúrano anidro. Agita-se a mistura resultante à temperatura ambiente durante 1 hora e filtra-se então sobre Celite. Evapora-se o filtrado até à secura e retoma-se o resíduo de cor vermelha com 50 ml de acetato de etilo após o que se lava com NaHS03 a 6 % frio, NaHC03 frio e com salmoura. Seca-se (MgS04) e evapora-se para se obter uma espuma. Purifica-se esta última mediante placa de gel de sílica (cloreto de metileno : 20 % de acetonitrilo) para se obter o produto puro (0,77 g, 69 %). 111 IV (KBr): 3854, 3744, 3362, 3066, 1960, 1722, 1602, 1580. RMN (CDCI3) : δ 1,075 (s, 3H), 1,167 (s, 3H), 1,651 (s, 3H), 1,799 (s, 3H), 2,209 (s, 3H), 2,296 (s, 3H), 2,464 (m, H), 3,686 (d, H), 4,121 (d, H), 4,240 (d, H), 4,293 (m, H), 4,808 - 4,957, (m, 6H), 5,006 (m, 1H), 5,565 - 5,649 (m, 2H), 6,034 (t, H), 6,194 (3, H), 7,100 - 8,132 (m, 26H). EM : [Μ + H]+, 1144; [M + Na]+, 1166; [Μ + K]", 1182 (d) Preparação de 2’-0-(fosfonooximetil)-paclitaxel.
Hidrogena-se a 60 psi (400 kPa) durante 24 horas uma mistura de produto da fase (c) (0,9 g; 0,7874 mmol) e Pd a 10 % / C (1,0 g) em 20 ml de acetato de etilo.
Filtra-se a mistura reaccional sobre C elite e evapora-se o filtrado até à secura. Purifica-se o resíduo mediante placa de gel de sílica (cloreto de metileno : metanol a 40 %) para se obter o produto do título (0,254 g; 33,4 %). P.F. 202 - 205°C (d). IV (KBr) :3438, 3066, 2942, 1722, 1652, 1602 cm'1. RMN (acetona-dô/DjO): δ 1,081 (s, 6H), 1,571 (s, 3H), 1,847 (s, 3H), 2,115 (s, 3H), 2,357 (s, 3H), 3,707 (d, H), 4,08 (m, 2H), 4,275 (m, H), 4,941 - 5,085 (m, 4H), 5,231 (t, H), 5,430 (d, h), 5,544 (d, h), 5,970 (t, H), 6,376 (s, H), 6,961 - 8,017 (m, 112 16H). EM : [M + Na]", 986; [M + Kf, 1002; [M + 2Na - H]~, 1008; [M+Na+K-H]*, 1024; [Μ+2Κ-ΗΓ, 1040 HRMS : MNa\ 986,2955 (Calculado = 986,2976)
Exemplo 5. Sal de sódio de 2\7-0-bis-(fosfonooximetil)-paclitaxel (a) Preparação de 2’,7-0-bis-(metiltiometil)-paclitaxel
Adiciona-se peróxido de benzoílo sólido (1,995 g, 8 mmol) a uma solução agitada de paclitaxel (0,853 g, 1 mmol) e sulfureto de dimetilo (1,465 g, 20 mmol) em 20 ml de acetonitrilo à temperatura de 0°C. Agita-se vigorosamente a mistura reaccional à temperatura de 0°C durante 3 horas. Segue-se o seu progresso mediante CCF em hexano : acetato de etilo (1:1, v/v), Rfpaciitaxei = 0,24, Rf pro<luto = 0,60. Logo que o material inicial desapareceu (após cerca de 3 horas) extingue-se a reacção mediante evaporação dos solventes até à secura à temperatura de 25°C utilizando uma câmara de vácuo. Separa-se o resíduo seco utilizando uma coluna de gel de sílica (EM Science, 40 - 63 pm), 100 ml de gel de sílica anidra, tamanho da coluna : Φ = 3á in., sistema solvente: hexano : acetato de etilo (3 : 2, v/v), volume de cada fracção : cerca de 25 ml. Isolou-se o composto do título (0,515 g, rendimento 53 %) a partir das fracções 15 a 19. EM (FAB/matnz ΝΟΒΑ, Nal ΚΙ) : [M + Hf, m/z 974; [M + Naf, m/z 996; 113 [M + K]+,m/z 1012 UV (MeOH) : λ max = 204 nm, E (1 % / 1 cm) = 243,45; λ max = 228 nm, E(1 %/l cm) = 313,99 IV (KBr) : 3440, 3064, 2926, 1724, 1668, 1602, 1582, 1514, 1484, 1452, 1372, 1314, 1266, 1242, 1178, 1142, 1068, 1026, 990, 916, 886, 848, 800, 774, 710, 646, 606, 570, 540,480 cm*', RMN-Ή (CDC13) δ : 1,17 (3H, s), 1,20 (3H, s), 1,68 30 (3H, s), 1,74 (3H, s), 1,84 (H, dd), 2,04 (3H, d), 2,09 (3H, s), 2,15 (3H, s) sobreposição com (H, m), 2,37 (H, dd), 2,51 (3H, s), 2,79 (H, ddd), 3,78 (H, d), 4,18 (H, d), 4,28 (H, m), 4,31 (H, d), 4,53 - 4,74 (4H, sobreposição de dois AB m), 4,93 (H, d), 4,95 (H, d), 5,68 (H, d), 5,82 (H, dd), 6,24 (H, dd), 6,54 (H, s), 7,05 (H, d), 7,28 - 7,59 (10H, sobreposição de m), 7,57 (H, m), 7,76 (2H, d), 8,09 (2H, d). (b) Preparação de 2’,7-0-bis-(dibenzilfosfonooximetil)-paciitaxel
Adiciona-se uma solução de N-iodosuccinimida, (135 mg, 0,5 mmol) e de dibenzilo, (167 mg, 0,5 mmol) em 8 ml de tetra-hidrofurano anidro a uma mistura de 2\7-0-bis-(metiltiometil)-paclitaxel (198 mg, 0,2 mmol) e peneiros moleculares de 5 Á (cerca de 200 mg) em 12 ml de cloreto de metileno à temperatura ambiente. Agita-se a mistura reaccional durante uma hora e meia, eliminam-se em seguida os peneiros moleculares mediante filtração sobre Celite, lavam-sé com 10 ml de cloreto de metileno e evaporam-se os solventes até à secura à temperatura ambiente utilizando uma câmara de vácuo. Dissolve-se o resíduo em 100 ml de acetato de etilo e lava-se numa ampola de carga com 50 ml de tiossulfato de sódio a 1 %, com 50 ml de bicarbonato de sódio 0,5 M e duas vezes com água (2 x 50 ml). Seca-se a fase orgânica sobre sulfato de magnésio, evapora-se até à secura e volta a dissolver-se em 1 ml de acetato de etilo. Precipita-se o produto com 50 ml de éter etílico : hexano (1 : 1) e lava-se duas vezes com o mesmo sistema solvente (2 x 50 ml). Obtém-se 218 mg de um produto bruto com um rendimento de 74 %. Realizou-se a purificação deste produto mediante carregamento de 3 ml da sua solução em cloreto de metileno sobre gel de sílica (Φ = 3A in. x L — 1 in.) eluindo o produto com 50 ml de cloreto de metileno : acetato de etilo (3:1) como sistema solvente. Obtém-se o composto do título (172,7 mg) com um rendimento de 59,3 %. EM (FAB, matriz NOBA/Nal, ΚΙ) : [M + Na]T, m/z 1456; [M + K]+, m/z 1472 UV (MeCN) : λ max = 194 nm, E (1 % /1 cm) = 1078,36; λ max = 228 nm, E (1 %/l cm)= 311,95 IV (KBr) 3430, 3066, 3032, 2958, 1744, 1726, 1664, 1602, 1582, 1532, 1488, 1456, 1372, 1270, 1244, 1158, 1108, 1068, 1016, 1000, 952, 886, 800, 776, 738, 698, 604, 498 cm·' RMN-'H (CDCI3) Ô : 1,12 (3H, s), 1,14 (3H, s), 1,56 (H, m), 1,67 (3H, s), 1,84 (3H, d), 1,90 (H, m), 2,17 (3H, s), 2,29 (3H, s), 2,73 (H, m), 3,73 (H, d), 4,08 (H, d), 4,15 (H, m), 4,20 (H, d), 4,77 (H, m), 4,79 (H, d), 4,91- 5,04 (10H, sobreposição dos m's), 5,25 (H, dd), 5,38 (H, dd), 5,54 - 5,64 (2H, sobreposição de m), 5,99 (H, br.
dd), 6,25 (H, s), 7,11 - 7,14 (2H, m), 7,24 - 7,64 (28H, sobreposição de m), 7,94 (2H, dd), 8,04 (2H, dd), 8,30 (H, d). (c) Preparação de sal de sódio de 2’,7-0-bis-(fosfonooximetil)-paclitaxel
Dissolve-se uma amostra de 2,,7-0-bis-(dibenzilfosfonooximetil)-paclitaxel (112 mg, 0,078 mmol) em 7 ml de acetato de etilo e hidrogena-se sobre paládio a 10 % sobre carvão (50 mg) à temperatura ambiente, 60 psi (400 kPa), durante 2 horas. Elimina-se o catalisador mediante filtração sobre Celite. Enxagua-se a Celite com 10 ml de acetato de etilo. Trata-se o filtrado com dicarbonato de sódio sólido (20 mg, 3 eq.) e evapora-se então o solvente até à secura. Volta a dissolver-se o resíduo anidro em 5 ml de água : acetona (4:1, v/v) e purifica-se mediante cromatografia de coluna de fase inversa C-l 8 (55 - 105 μ C-l 8, Waters, 50 ml de C-l 8 anidra, Φ = 3á in. em água : acetona (4:1, v/v). Segue-se o eluente mediante coluna analítica de HPLC de Jones C-l8 (15 cm, 1 ml/min., λ = 230 mn) em acetonitrilo : tampão de fosfato pH 6 (50/50, v/v) com a adição do cocktail do par iónico Q12 (Regis); Rt = 4,7 minutos. Reúnem-se as fracções que contêm o composto do título, evapora-se a acetona sob câmara de vácuo à temperatura de 20°C e liofiliza-se a solução. Obtém-se 44,2 mg do composto do 116 título com um rendimento de 58,8 %. EM (FAB, matriz NOBA/Nal, Kl) : [M + Hf, m/z 1118; [M + Naf, m/z 1140 UV (MeCN): λ max = 192 nm, E (1 % / 1 cm) = 129,73; Xmax = 230 nm, E (1 %/l cm) = 26,43 IV (KBr) : 3430, 3066, 2956, 1724, 1658, 1604, 1582, 1520, 1486, 1452, 1374, 1316, 1256, 1152, 1110, 1070, 1026, 966, 914, 802, 772, 710, 538 cm*1 RMN-'H (acetona-dé/DjO) δ : 0,97 (3H, s), 1,02 (3H, s), 1,47 (H, m), 1,54 (3H, s), 1,70 (H, m), 1,75 (3H, s), 1,85 (H, m), 2,11 (3H, s), 2,30 (3H, s), 2,88 (H, m), 3,64 (H, d), 4,03 (H, m), 4,06 (H, d), 4,16 (H, d), 4,74 (H, m), 4,86 (H, m), 5,11 (H, br.t), 5,22 (H, d), 5,42 (H, d), 5,90 (H, br.t), 6,21 (H, s), 7,06 (H, br.t), 7,32 - 7,69 (10H, sobreposição de m), 7,80 (2H, d), 7,93 (2H, d).
Exemplo 6. 7-O-metiltiometilbacatinaIII
A uma solução de 2’-0-etiloxicarbonil-7-0-metiltiometilpaclitaxel (composto do Exemplo 3(b), 27 g, 27,4 mmol) em 100 ml de THF e 500 ml de metanol adiciona-se K2CO3 recentemente moído (2,7 g, 19 mmol). Agita-se a solução durante 30 minutos e neutraliza-se com resina IR-120 (ET), filtra-se e concentra-se. Dissolve-se então o filtrado bruto em 200 ml de diclorometano e agita-se durante 24 horas com 10 g de boro-hidreto de tetrabutilamónio. Dilui-se a
117 solução com diclorometano e lava-se com água, com bicarbonato de sódio saturado e com salmoura. Seca-se então a fracção orgânica sobre MgS04 e concentra-se. Cromatografa-se o resíduo sobre gel de sílica (hexano / acetato de etilo a 1:1) para se obter 9,4 g do composto do título (53 %) com um ponto de fusão de 269°C. FABMS (ΝΟΒΑ) Μ + H calculada para C33H43SOu : 647. Encontrada : 647. IV (KBr) 3473, 1746, 1724, 1712, 1270, 1240, 1070 cm'1 RMN-'H (CDCIj, 300 MHz) δ 8,08 (d, J = 7,1 Hz, 2H), 7,58 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 7,45 (t, J = 7,8 Hz, 2H), 6,55 (s, IH), 4,94 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 4,83 (br q, J = 5,1 Hz, 1H), 4,66 (ABq, J = 14,7, 12,3 Hz, 2H), 4,30 (m, 2H), 4,13 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 3,91 (d, J=6,6 Hz, 1H), 2,79 (m, 1H), 2,27 (s, 3H), 2,25 (m, 2H), 2,19 (s, 3H), 2,16 (s, 3H), 2,10 (s, 4H), 1,81 (ii, 1H), 1,72 (s, 3H), 1,61 (m, 2H), 1,16 (s, 3H), 1,03 (s, 3H), RMN 13C (CDC13, 75,5 Hz) δ 202,3, 170,8, 169,3, 167,0, 144,2, 132,6, 132,1, 130,1, 129,4, 128,6, 83,9, 80,9, 78,7, 75,7, 74,5, 73,9, 67,9, 57,6, 47,6, 42,7, 38,3, 26,7, 22,6, 21,0, 20,1, 15,2, 15,0, 10,8.
Exemplo 7, Sal de trietanolamina de 3,-N-desbenzoíl-3’-desfenil-3’-N-(t-butil-oxicarbonil)-3 ,-(2-furil)-2,-0-etiloxicarbonil-7-0-fosfonooximetilpaclitaxel (a) preparação de 3,-N-desbenzoíl-3,-desfenil-3’-N-(t-butiloxicarbonil)-3,-(2-furil)--7-O-metiltiometilpaclitaxel
118 A uma solução de HMDS (0,40 ml, 1,90 mmol) em 15 ml de THF adiciona-se uma solução de n-BuLi (0,75 ml, 2,5 M em hexanos, 1,88 mmol) e agita-se durante 5 minutos à temperatura de -55°C. A esta solução adiciona-se 7-MTM bacatina III (composto do exemplo 6, 1,03 g, 1,59 mmol) em 10 ml de THF e agita-se durante 10 minutos antes da adição de 10 ml de uma solução de (3R, 4R)-l-(t-butiloxicarbonil)-4-(2-furil)-3-(trietilsililoxi)-2-azetidinona (883 mg, 2,40 mmol). Remove-se o banho de arrefecimento e substitui-se por um banho à temperatura de 0°C após o que se agita a mistura reaccional durante 30 minutos. Dilui-se a solução com acetato de etilo e lava-se com uma solução saturada de NH4C1, seca-se com uma solução de MgS04 e concentra-se. Cromatografa-se o resíduo sobre gel de sílica (hexano / acetato de etilo a 2,5 : 1) para se obter 1,5 g do produto de acoplamento 3’-N-desbenzoíl-3’-desfenil-3’-N-(t-butiloxicarbonil)-3’-(2--furil)-7-0-metiltiometil-2,-0-txietilsililpaclitaxel (93 %). FABMS (ΝΟΒΑ) M + Na calculada para C5oH71NSSiOi6: 1036. Encontrada : 1036. IV (película) 3446 (s), 1720, 1368, 1242, 1166, 1144, 1124, 1066 cm'1. RMN JH (CDCI3, 300 MHz) δ 8,07 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 7,56 (m, 1H), 7,46 (t, J = 7,5 Hz, 2H), 7,36 (m, 1H), 6,56 (s, 1H), 6,33 (m, 1H), 6,20 (m, 2H), 5,67 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 5,29 (br s, 2H), 4,94 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 4,75 (s, 1H), 4,65 (s, 2H), 4,28 (m, 2H), 4,16 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 3,89 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 2,80 (m, 1H), 2,46 (s, 3H), 2,37 (m, 1H), 2,22 (m, 1H), 2,16 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 2,04 (s, 3H), 1,84 (m, 1H), 1,74 (s, 3H), 1,65 (m, 1H), 1,33 (s, 9H), 1,20 (s, 3H), 1,19 (s, 3H), 0,81 (t, J = 7,8 Hz, 9H), 0,47 (m, 6H). RMN °C (CDCI3, 75,5 Hz) δ 202,0, 171,2, 170,3, 169,3, 167,1, 155,3, 152,0, 119 141,9, 141,0, 133,6, 132,9, 130,2, 129,2, 128,7, 110,7, 107,3, 84,0, 81,1, 80,2, 78,7, 76,1, 75,7, 74,7, 74,1, 72,4, 71,1, 57,4, 52,8, 47,1, 43,3, 35,2, 33,0, 28,1, 26,3, 22,9, 21,2,21,0,15,0,14,5,10,9, 6,5,4,3. A uma solução de éter 2’-trietilsilílico obtido anteriormente (330 mg, 0,32 mmol) em 7 ml de THF adiciona-se fluoreto de tetra-butil-amónio (0,35 ml, 1,0 M em THF, 0,35 mmol) e agita-se durante 10 minutos. Dilui-se a solução com acetato de etilo e lava-se com salmoura, seca-se sobre MgS04 e concentra-se após o que se cromatografa o resíduo sobre gel de sílica (hexano / acetato de etilo a 2 : 1) para se obter 301 mg do composto do título (95 %). FABMS (ΝΟΒΑ) Μ + H calculada para C45H58NC)i6S : 900. Encontrada : 900. IV (película) 3442, 1720, 1242, 1066, 1026 cm·'. RMN Ή (CDC13, 300 MHz) δ 8,07 (d, J=7,3 Hz, 2H), 7,57 (t, J=7,3 Hz, 1H), 7,45 (t, J=7,8 Hz, 2H), 7,38 (s, 1H), 6,53 (s, 1H), 6,34 (d, J=3,2 Hz, 1H), 6,29 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 6,17 (t, J=8,l Hz, 1H), 5,65 (d, J=6,9 Hz, 1H), 5,29 (m, 2H), 4,92 (d, J=8,0
Hz, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,64 (d, J=4,6 Hz, 2H), 4,29 (m, 2H), 4,14 (d, J=8,3 Hz, 1H), 3,86 (d, J=6,8 Hz, 1H), 3,37 (d, J = 5,8 Hz, 1H), 2,77 (m, 1H), 2,38 (s, 3H), 2,32 (m, 2H), 2,16 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 2,02 (s, 3H), 1,77 (m, 3H), 1,73 (s, 3H), 1,33 (s, 9H), 1,17 (s, 3H), 1,12 (s,3H). RMN 13C (CDC13, 75,5 Hz) δ 202,0, 172,6, 170,3, 169,2, 167,0, 155,2, 151,3, 142,4, 140,4, 133,7, 133,2, 130,2, 129,1, 128,7, 110,7, 107,4, 83,9, 81,2, 80,5, 78,6, 76,5, 76,1, 75,4, 74,6, 74,0, 72,5, 71,8, 57,4, 51,7, 47,2, 43,2, 35,2, 32,8, 28,1, 26,4, 22,6, 20,9,15,2,14,6,10,9,8,3. (b) preparação de 3’-N-desbenzoíl-3’-desfeml-3’-N-(t-butiloxicarbonil)-3,-(2-furil)-
120 -2’-0-etiloxicarboml-7-0-metiltiometi]pacl]taxel
A uma solução do produto da fase (a) (864 mg, 0,96 mmol) em 50 ml de diclorometano a 0°C adiciona-se diisopropiletil-amina (2,0 ml, 11,5 mmol) e cloroformato de etilo (0,50 ml, 5,25 mmol) e agita-se durante 4 horas. Dilui-se a solução com diclorometano e lava-se com bicarbonato saturado e seca-se sobre MgS04 após o que se concentra. Cromatografa-se o resíduo sobre gel de sílica (hexano / acetato de etilo 1:1) para se obter 884 mg do carbonato de 2’-etiIo, composto do título, (95 %). FABMS (ΝΟΒΑ) Μ + H calculada para C48H62N018S : 972,3688. Encontrada : 972,3654. IV (película) 1752, 1720, 1370, 1244, 1196, 1176, 1064 cm'1. RMN Ή (CDC13, 300 MHz) δ 8,09 (d, J=7,8 Hz, 2H), 7,57 (t, J=7,5 Hz, 1H), 7,46 (t, J=7,8 Hz, 2H), 7,38 (s, 1H), 6,55 (s, 1H), 6,35 (m, 1H), 6,27 (m, 1H), 6,22 (t, J=7,8 Hz, 1H), 5,67 (d, J=7,2 Hz, 1H), 5,51 (d, J=9,9 Hz, 1H), 5,34 (d, J=2,4 Hz, 1H), 5,25 (d, J= 10,2 Hz, 1H), 4,95 (d, J=8,I Hz, 1H), 4,65 (s, 2H), 4,30 (m, 2H), 4,22 (m, 2H), 3,88 (d, J=7,2 Hz, 1H), 2,81 (m, 1H), 2,41 (s, 3H), 2,36 - 2,21 (m, 2H), 2,16 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 2,09 (s, 3H), 1,83 (m, 1H), 1,74 (s, 3H), 1,67 (s, 1'H), 1,59 (s, 1H), 1,34 (s, 9H), 1,29 (t, J=7,2 Hz, 3H), 1,20 (s, 3H), 1,18 (s, 3H), 121 RMN 13C (CDC13, 75,5 Hz) δ 202,1, 169,9, 169,1, 167,6, 167,0, 154,0, 150,1, 142,6, 141,0, 133,6, 132,9, 130,2, 129,2, 128,7, 110,7, 107,5, 83,9, 81,1, 80,7, 78,7, 76,0, 75,7, 75,1, 74,7, 74,2, 71,8, 65,1, 57,4, 49,7, 47,1, 43,2, 35,0, 33,0, 28,1, 26,3, 22,6, 21,1,20,9,15,1,14,5,14,1,10,9. (c) preparação de 3,-N-desbenzoíl-3’-desfeníl-3’-N-(t-butiloxicarbonil)-3’-(2-funl)--2’-0-etiloxicarbonil-7-0-dibenzilfosfonooximetilpaclitaxel
A uma solução do produto da fase (b) (230 mg, 0,236 mmol) em 10 ml de THF anidro adicionam-se 300 mg de peneiros 4À, fosfato de dibenzilo (270 mg, 0,98 mmol) e NIS recristalizado (62 mg, 0,28 mmol). A esta solução adiciona-se trifluorometano-sulfonato de prata (45 mg, 0,17 mmol) e agita-se a solução durante 3 horas. Filtra-se a solução através de Celite e dilui-se com acetato de etilo após o que se lava com NaS208 a 10 %, bicarbonato saturado e salmoura, seca-se sobre MgSC>4 e concentra-se. Cromatografa-se o resíduo sobre gel de sílica (15 % de acetonitrilo/clorofórmio) para se obter 219 mg do fosfato de dibenzilo composto do título (77 %). FABMS (ΝΟΒΑ) M + Na calculada para C61H72NP022Na 1224. Encontrada : 1224. IV (película) 3422, (br), 1750, 1722, 1370, 1244, 1160, 1036, 1016, 1000, 976, 944 122 RMN *H (CDC13, 300 MHz), δ 8,08 (d, J = 6,9 Hz, 2H), 7,58 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 7,46 (t, J = 7,8 Hz, 2H), 7,39 (s, 1H), 7,31 (m, 10), 6,35 (m, 2H), 6,28 (s, 1H), 6,21 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 5,64 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 5,50 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 5,39 (d, J = 6,6 Hz, 1H), 5,32 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 5,25 (d, J=9,9 Hz, 1H), 5,01 (dd, J=8,l, 6,3 Hz, 5H), 4,86 (d, J=8,4 Hz, 1H). 4,29 - 4,09 (m, 4H), 3,85 (d, J=6,9 Hz, 1H), 2,77 (m, 1H), 2,40 (s, 3H), 2,30 (m, 2H), 2,16 (s, 3H), 1,99 (s, 3H), 1,94 (m, 1H), 1,70 (s, 3H), 1,67 (s, 1H), 1,54 (s, 1H), 1,34 (s, 9H), 1,28 (t, J=7,2 Hz, 3H), 1,20 (s, 3H), 1,17 (s,3H). RMN 13C (CDCI3, 75,5 Hz) δ 201,8, 169,9, 169,2, 167,7, 10 167,0, 155,1, 154,0, 150,0, 142,74, 141,1, 133,7, 132,9, 130,2, 129,1, 128,7, 128,5, 128,4, 128,0, 110,7, 107,6, 93,8, 84,1, 81,6, 80,8, 80,7, 78,8, 76,3, 75,1, 74,6, 71,8, 69,3, 69,2, 65,1, 57,0, 49,7, 46,7,43,2, 35,0, 28,1, 26,4, 22,6, 21,2, 20,8, 14,6, 14,1, 10,5. (d) preparação de sal de trietanolamina de 3 ’-N-desbenzoíl-3 ’-desfeml-3 ’-N-(t-butil-oxicarbonil)-3 ’-(2-fiiril)-2 ’-0-etiloxicarbonil-7-O-fosfonooximetilpaclitaxel
A uma solução do produto da fase (c) (311 mg, 0,259 mmol) em 25 ml de acetato de etilo adicionam-se 60 mg de Pd sobre carvão (10 %) e agita-se a solução sob uma atmosfera de H2 durante 30 minutos. Elimina-se 0 catalisador mediante filtração através de Celite e concentra-se o filtrado in vacuo. Dissolve-se o 12
resíduo em 3 ml de acetato de etilo e adiciona-se trietananolamina (2,3 ml, 0,1M em acetato de etilo, 0,23 mmol). Concentra-se a solução e cromatografa-se o resíduo sobre Ctg (40 % de acetonitrilo / água) e liofíliza-se para se obter 205 mg do sal do fosfato de trietanolamina (67 %). FABMS (ΝΟΒΑ) M + Na calculada para C47H6oNP022Na 1044. Encontrada : 1044. IV (película) 3432, (br), 1752, 1722, 1372, 1246, 1158, 1108, 1096, 1070, 1002 cm'1 RMN 'H (deacetona/DaO, 300 MHz) δ 8,09 (d, J=7,2 Hz, 2H), 7,62 (m, 2H), 7,52 (t, J=7,5 Hz, 2H), 6,48 (d, J=3,3 Hz, 1H), 6,42 (m, 2H), 6,16 (t, J=8,7 Hz, 1H), 5,65 (d, J=6,9 Hz, 1H), 5,46 (d, J=3,6 Hz, 1H), 5,30 (d, J=3,6 Hz, 1H), 5,17 (br s, 1H), 5,01 (br d, J=9,0 25 Hz, 1H), 4,19 (br s, 1H), 4,18 (m, 5H), 3,95 (m, 6H), 3,87 (d, J=6,9 Hz, 1H), 3,68 (s, 7H), 3,50 (br t, J=4,8 Hz, 6H), 2,95 (m, 1H), 2,44 (s, 3H), 2,41 (m, 2H), 2,16 (s, 3H), 1,9 (s, 3H), 1,94 (m, 1H), 1,68 (s, 3H), 1,34 (s, 9H), 1,24 (t, 1=6,9 Hz, 3H), 1,17 (s, 6H).
Exemplo 8. Sal de trietanolamina de 3’-N-desbenzoíl-3’-desfenil-3’-N-(t-butil-oxicarbonil)-3,-(2-tieniI)-2’-0-etiloxicarbonil-7-0-fosfonooximetilpaclitaxel (a) preparação de 35 -N-desbenzoíl-3 ’ -desfeml-3 ’ -N-(t-butiloxicarbom l)-3 ’-(2- -ti enil )-7 -O-fosfonooximetilpaclitaxel O OCH^SCRj
A uma solução de HMDS (0,5 ml, 2,4 mmol) em 18 ml de THF a -55°C 124 adiciona-se n-BuLi (0,85 ml, 2,5 M em hexanos, 2,1 mmol). Decorridos 10 minutos adiciona-se gota a gota 7-MTM bacatina ΙΠ (1,15 g, 1,78 mmol) em 18 ml de THF e agita-se no frio durante 10 minutos. Adiciona-se (±)-cis-l-(t-butiloxicarbonil)-4-(2--tienil)-3-(trietilsililoxi)-2-azetidinona (2,80 g, 7,3 mmol) em 18 ml de THF e deixa--se aquecer lentamente o banho frio até 0°C no decurso de 30 minutos. Dilui-se a solução com acetato de etilo e lava-se com uma solução saturada de NH4CI, seca-se sobre MgS04 e concentra-se. Cromatografa-se o resíduo sobre gel de sílica (hexano / acetato de etilo a 5:1) para se obter 1,87 g da lactama isolada (hexano / acetato de etilo a 3:1) para se obter 1,44 g do produto de acoplamento 3 ’-N-desbenzoíl- 3 ’ -desfenil-3 ’-N-(t-butiloxicarbonil)-3 ’ -(2-tieml)-7-0-metMornetil-2 ’ --O-trietilsililpaclitaxel (78 %). FABMS (ΝΟΒΑ) M + Na calculada para C5iH7iNOi5S2SiNa 1052. Encontrada : 1052. IV (película) 3442 (br), 1720, 1490, 1368, 1270, 1242, 1162, 1110, 1064, 1024, 984, 754 cm'1 RMN lH (CDCI3, 300 MHz) δ 8,09 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 7,57 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,47 (t, J = 7,8 Hz, 2H), 7,22 (m, 1H), 6,95 (m, 2H), 6,55 (s, 1H), 6,21 (t, J = 9,2 Hz, 1H), 5,68 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 5,49 (br d, 1H), 5,39 (br d, J - 9,6 Hz, 1H), 4,94 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 4,65 (s, 2H), 4,57 (s, 1H), 4,28 (m, 2H), 4,17 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 3,88 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 2,80 (m, 1H), 2,46 (s, 3H), 2,37 (m, 1H), 2,20 (m, 1H), 2,17 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 2,03 (s, 3H), 1,84 (m, 1H), 1,74 (s, 3H), 1,68 (s, 1H), 1,62 (s, 1H), 1,31 (s, 9H), 1,20 (s, 6H), 0,84 (t, J ? 7,8 Hz, 9H), 0,50 (m, 6H). RMN13C (CDCI3, 75,5 Hz) δ 201,9, 171,1, 170,7, 170,1, 169,3, 167,0, 155,1, 142,8, 125 140,9, 133,6, 132,9, 130,2, 129,2, 128,7, 126,9, 124,6, 83,9, 81,2, 80,1, 78,8, 77,4, 76,0, 75,7, 75,2, 74,8, 74,1, 71,3, 57,4, 53,8, 47,0, .43,3, 35,3, 33,3, 28,1, 26,3, 23,0, 21,3,20,9,14,9,14,4,10,9,6,6,4,5. / A uma solução de éter 2’-trietilsilílico obtido anteriormente (1,41 g, 1,37 mmol) em 14 ml de THF adiciona-se fluoreto de tetrabutilamónio (1,4 ml, 1,0 M em THF, 1,40 mmol). Agita-se a solução durante 30 minutos, dilui-se com acetato de etilo e lava-se com salmoura, seca-se sobre MgS04 e concentra-se. Cromatografa-se o resíduo sobre gel de sílica (hexano / acetato de etilo a 1:1) para se obter 1,16 g do composto do título (92 %). FABMS (ΝΟΒΑ) M + Na calculada para CjsHjyNOi^Na 938. Encontrada : 938. IV (película) 3440 (br), 1720, 1368, 1242, 1168, 1106, 1066, 710 cm'1 RMN Ή (CDC13, 300 MHz) δ 8,08 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 7,59 (m, 1H), 7,47 (t, J = 7,8 Hz, 2H), 7,24 (m, 1H), 7,07 (m, 1H), 6,99 (m, 1H), 6,53 (s, 1H), 6,18 (t, J = 8,1 Hz, 1H), 5,66 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 5,49 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 5,32 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 4,92 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 4,63 (m, 3H), 4,28 (m, 2H), 4,15 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 3,86 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 2,80 (m, 1H), 3,47 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 2,78 (m, 1H), 2,36 (s, 3H), 2,34 (, 2H), 2,17 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 2,00 (s, 3H), 1,83 (m, 1H), 1,74 (s, 3H), 1,72 (s, 1H), 1,61 (s, 1H), 1,33 (s, 9H), 1,21 (s, 3H), 1,18 (s, 3H). RMN 13C (CDC13, 75,5 Hz) 6 201,9,172,3, 170,3, 169,2, 25 167,0, 154,0, 141,5, 140,2, 133,7, 133,3, 130,2, 129,1, 128,7, 127,0, 125,4, 125,4, 83,9, 81,3, 80,4, 78,6, 76,1, 75,4, 74,5, 74,0, 73,4, 72,5, 57,5, 52,8, 47,2, 43,2, 35,3, 32,9, 28,2, 26,4, 22,6, 20,9, 15,1, 14,7, 10,8. (b) preparação de 3 ’-N-desbenzoíl-3 ’-desfenil-3 ’-N-(t-butiloxicarbonil)-3’-(2- 126 -tienil)-2’-0-etiloxicarbonil-7-0-metiltiometilpacIitaxel
A uma solução do produto da fase (a) (621 mg, 0,677 mmol) em 35 ml de diclorometano a 0°C adiciona-se diisopropiletil-amina (1,20 ml, 6,89 mmol) e cloroformato de etilo (0,35 ml, 3,7 mmol) e agita-se durante 1 hora. Remove-se o banho de arrefecimento e agita-se a solução durante 2 horas após o que se dilui com diclorometano e se lava com bicarbonato de sódio saturado, secando-se sobre MgS04 e concentrando-se. Cromatografa-se o resíduo sobre gel de sílica (hexano / acetato de etilo a 1:1) para se obter 528 mg do composto do título (79 %). FABMS (ΝΟΒΑ) M + Na calculada para C^H^NOpSíNa 1010. Encontrada : 1010. IV (película) 3510, 3440, 1752, 1720, 1370, 1244, 1198, 1170, 1026, 988, 756 cm’1 RMN ’H (CDC13, 300 MHz) δ 8,09 (d, J=7,2 Hz, 2H), 7,58 (m, 1H), 7,48 (t, J=7,8
Hz, 2H), 7,26 (m, 1H), 6,99 (, 2H), 6,55 (s, 1H), 6,23 (t, 3=9,0 Hz, 1H), 5,68 (d, J=6,9 Hz, 2H), 5,33 (d, J=9,9 Hz, 1H), 5,25 (d, 3=2,4 Hz, 1H), 4,94 (d, J=7,8 Hz, 1H), 4,65 (s, 2H), 4,33 - 4,08 (m, 5H), 3,88 (d, J=6,9 Hz, 1H), 2,80 (m, 1H), 2,40 (s, 3H), 2,40 - 2,20 (m, 2H), 2,16 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 2,07 (s, 3H), 1,83 (m, 1H), 1,74 (s, 3H), 1,69 (s, 1H), 1,60 (s, 1H), 1,33 (s, 9H), 1,31 (t, J=7,2 Hz, 3H), 1,20 (s, 3H), 1,19 (s,3H). RMN 13C (CDClj, 75,5 Hz) δ 202,0, 169,7, 169,1, 167,5, 167,1, 154,0, 140,9, 133,6, (c) preparação de 3’-N-desbenzoíl-3’-desfenil-3’-N-(t-butiloxicarbonil)-3’-(2~ -tienil)-2’-0-etiloxicarbonil-7-0-dibenzilfosfonooximetilpaclitaxel
A uma solução do produto da fase (b) (516 mg, 0,522 mmol) em 15 ml de THF anidro adicionam-se 530 mg de peneiros de 4Â, fosfato de dibenzilo (576 mg, 2,09 mmol) e NIS recristalizado (136 mg, 0,604 mmol). A esta solução adiciona-se trifluorometano-sulfonato de prata (50 mg, 0,194 mmol) e agita-se a solução durante 1 hora. Filtra-se a solução através de Celite e dilui-se com acetato de etilo após o que se lava com NaS208 a 10 %, bicarbonato saturado e salmoura, seca-se sobre MgS04 e concentra-se. Cromatografa-se o resíduo sobre gel de sílica (acetonitrilo a 15 % / clorofórmio) para se obter 535 mg do composto do título (84 %)· FABMS (ΝΟΒΑ) M + Na calculada para C6iH72N02iPSNa 1240. Encontrada : 1240. IV (película) 3424 (br), 1750, 1722, 1370, 1244, 1016, 1000, 944 cm"1. RMN 'H (CDC13, 300 MHz) δ 8,08 (d, J = 7,0 Hz, 2H), 7,58 (m, 1H), 7,47 (t, J = 7,5 128
Hz, 2H), 7,28 (m, 11H), 6,99 (m, 2H), 6,33 (s, 1H), 6,22 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 5,66 (m, 2H), 5,39 (t, J = 6,6 Hz, 1H), 5,34 (d, J = 12 Hz, 1H), 5,22 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 5,01 (dd, J = 8,1, 6,0 Hz, 5H), 4,86 (d, J - 7,8 Hz, 1H), 4,29 - 4,08 (m, 5H), 3,85 (d, J = 6,6 Hz, 1H), 2,76 (m, 1H), 2,39 (s, 3H), 2,35 - 2,18 (m, 2H), 2,16 (s, 3H), 1,97 (s, 4H), 1,69 (s, 4H), 1,33 (s, 9H), 1,30 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 1,20 (s, 3H), 1,17 (s, 3H). RMN 13C (CDC13, 75,5 Hz) δ 197,4, 165,4, 164,9, 163,3, 162,7, 150,6, 149,7, 136,7, 136,0, 129,4, 128,6, 125,9, 124,7, 124,3, 124,2, 124,1, 123,6, 122,9, 121,1, 121,0, 89,4, 79,8, 77,3, 76,5, 76,3, 74,4, 72,0, 70,7, 70,3, 67,7, 64,9, 64,9, 60,9, ,52,7, 46,5, 42,3, 38,9, 30,7, 23,8, 22,0, 18,3, 17,0, 16,4, 10,3, 9,8, 6,2.
(d) preparação do sal de trietanolamina de 3’-N-desbenzoíl-3’-desfenil-3’-N-(t-butil-oxicarbonil)-3’-(2-tienil)-2’-0-etiIoxtcarbonil-7-0-fosfonooximetiIpaclitaxeI
A uma solução do produto da fase (c) (512 mg, 0,42 mmol) em 30 ml de acetato de etilo adicionam-se 53 mg de Pd sobre carvão (10 %) e agita-se a solução sob uma atmosfera de H2 durante 3 horas. Elimina-se o catalisador mediante filtração através de Celite e concentra-se o filtrado in vacuo. Dissolve-se o resíduo em 2 ml de acetato de etilo e adiciona-se trietananolamina (4,0 ml, 0,1M em acetato de etilo, 0,40 mmol). Concentra-se a solução e cromatografa-se o resíduo sobre C|S (40 % de acetonitrilo/água) e liofíliza-se para se obter 280 mg de sal de fosfato de
129 trietanolamina (56 %). A análise de HPLC mostrou a pureza do sal como sendo igual a 96 %. FABMS (NIOBA) M + Na calculada para C47H60NO21PS 1060. Encontrada : 1060. IV (KBr) 3422 (br), 1750, 1720, 1372, 1246, 1162, 1096, 1068, 1000 cm'1 RMN 'H (d* acetona/D20, 300 MHz) 8 8.06 (d, J=7.2 Hz, 2H), 7.63 (t, J=7.2 Hz, 1H), 7.52 (t, J=7.8 Hz, 2H), 7.38 (d, J=4.2 Hz, 1H), 7.16 (d, J=3.5 Hz, 1H), 7.01 (dd, J=5.1, 3.6 Hz, 1H), 6.37 (s, 1H), 6.11 (t, J=8.7 Hz, 1H), 5.61 (d, J=6.9 Hz, 1H), 5.60 (s, 1H), 5.26 (d, J=4.5 Hz, 1H), 5.14 (d, J=6.6 Hz, 1H), 5.00 (d, 20 J=8.4 Hz, 1H), 4.86 (dd, J=12.0, 6.3 Hz, IH), 4.17 (m, 5H), 4.00 (s, 7H), 3.92 (t, J=4.8 Hz, 6H), 3.84 (d, J=6.9 Hz, 1H), 3.48 (t, J=5.4 Hz, 6H), 2.94 (m, 1H), 2.42 (s, 3H), 2.36 (m, 1H), 2.27 (m, 1H), 2.15 (s, 3H), 1.95 (s, 4H), 1.66 (s, 3H), 1.30 (s, 9H), 1.23 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.14 (s, 6H).
Exemplo 9. 10-Desacetil-3 ’-N-desbenzoíl-3 ’-N-(t-butiloxicarbonil)-10-O-(fosfono-oximetil)-paclitaxel
(a) preparação de 10-desacetil-10-O-benziloxicarbonil-7-O-trietilsililbacatina III CBZO 0
A um balão seco sob atmosfera de árgon contendo 7-O-trietilsilil-10--desacetil-bacatina III (2,093 g, 3,177 mmol) adicionam-se 30 ml de THF anidro e arrefece-se até à temperatura de -70°C. Adiciona-se gota a gota n-butil-lítio 1,6M (2,38 ml, 3,81 mmol). Após agitação durante 15 minutos adiciona-se gota a gota
cloroformato de benzilo (0,91 ml, 6,35 mmol). Agita-se a mistura resultante durante 3 horas com aquecimento gradual até à temperatura ambiente. Extingue-se a reacção com 25 ml de NH4CI saturado, lava-se com salmoura e seca-se com MgS04. A cromatografia intermitente (gel de sílica, 30 - 45 % de acetato de etilo / hexano) fornece 2,24 g (89 %) do composto do título sob a forma de uma espuma branca. RMN *H (300 MHz, CDC13) δ 8,10 (d, J = 8,0, 2H); 7,63 - 7,58 (m, 1H), 7,47 (t, J = 8,0 Hz, 2H); 7,41 - 7,26 (m, 5H); 6,29 (s, 1H); 5,61 (d, J = 7,0, 1H); 5,20 (q, J = 12,2, 2H); 4,96 (d, J = 9,0, 1H); 4,87 - 4,84 (m, 1H); 4,48 (dd, J = 6,7, J = 10,4, 1H); 4,30 (d, J = 8,5, 1H); 4,14 (d, J = 8,5, 1H); 3,84 (d, J = 7,0, 1H); 2,58 - 2,48 (m, 1H); 2,29 (m, 4H); 2,20 (s, 3H); 2,03 (D, J = 5,0, 1H); 1,92 - 1,83 (m, 1H); 1,68 (s, 3H); 1,17 (s, 3H); 1,04 (s, 3H); 0,91 (t, J = 7,5, 9H); 0,57 (q, J = 7,4, 6H). (b) preparação de 10-desacetil-10-0-benziloxicarbonil-3’-N-desbenzoíl-3’-N-(t--butiloxicarbonil)-2,,7’-bis-0-trietilsililpaclitaxel
A um balão seco que contém o produto da fase (a) (3,50 g, 4,42 mmol) adiciona-se uma pequena quantidade de tolueno e concentra-se então a solução sob vazio. Coloca-se este balão sob uma atmosfera de árgon e adicionam-se 100 ml de tetra-hidrofurano anidro. Arrefece-se o balão até -70QC e adiciona-se gota a gota hexametildisilazida de lítio 1,0M (6,19 ml, 6,19 mmol). Após agitação durante 20 minutos, ãdiciona-se gota a gota a solução de (3R, 4R)-l-(t-butiloxicarbonil)-4- 131 -fenil-3-trietilsililoxi-2-azetidinona (2,58 g, 7,07 mmol) em 10 ml de THF anidro. Agita-se a mistura reaccional durante 3 horas e meia, aquecendo gradualmente até à temperatura ambiente. Extingue-se então com 70 ml dè NH4CI saturado, lava-se com salmoura e seca-se com MgS04. A cromatografia intermitente (gel de sílica, 5-15 % de acetato de etilo / hexanos) proporciona 5,12 g (99 %) do composto do título sob a forma de uma espuma branca. RMN ‘Η (300MHZ, CDC13) δ 8,11 (d, J=8,0, 2H); 7,60 - 7,58 5 (m, 1H); 7,48 (t, J=8,0, 2H); 7,24 - 7,26 (m, 10H); 6,32 - 6,26 (m, 2H); 5,69 (d, J=7,0, 1H); 5,47 (bd, J=9,7, 1H); 5,31 - 5,10 (m, 3H); 4,94 (d, J=8,5, 1H); 4,56 (s, 1H); 4,46 (ad, J=6,9, J=10,6, 1H); 4,31 (d, J=8,3, 1H); 4,17 (d, J=8,3, 1H); 3,81 (d, J=7,0, 1H); 2,53 (s, 3H); 2,48 - 2,33 (m, 1H); 2,22 - 2,17 (m, 1H); 2,09 (s, 3H), 1,95 - 1,86 (m, 111); 1,70 (s, 3H); 1,65 (s, 1H); 1,52 (s, 1H); 1,30 (s, 9H); 1,26 - 1,19 (m, 6H); 0,94 - 0,87 (m, 9H); 0,80 - 0,75 (m, 9H); 0,61 - 0,53 (m, 6H); 0,48 - 0,30 (m, 6H). (c) preparação de 10-desacetil-3’-N-desbenzoíl-3’-N-(t-butiloxicarbonil)-7-O-trietil-sililpaclitaxel
Dissolve-se o produto da fase (b) (5,12 g, 4,40 mmol) em 100 ml de acetato de etilo, transfere-se para um aparelho de Parr e coloca-se sob atmosfera de árgon. A esta adiciona-se paládio a 10 % sobre carvão (2,4 g) e coloca-se a mistura 132 reaccional num aparelho de hidrogenação de Parr (55 psi) durante um intervalo de tempo de 8 horas. Filtra-se a mistura reaccional através de um tampão de Celite e concentra-se. A cromatografia intermitente (gel de sílica, 15 - 20 % de acetato de etilo / hexano) proporciona 3,24 g (79 %) do composto do título sob a forma de uma espuma branca. A hidrólise do grupo 2’-trietilsililo do produto da fase (b) foi o resultado dos resíduos acídicos vestigiais do equipamento de Parr. RMN !H (300MHZ, CDC13) 6 8,10 (d, J=8,0, 2H); 7,63 - 7,58 10 (m, 1H), 7,49 (d, J=8,0, 2H); 7,39 - 7,26 (m, 5H); 6,27 - 6,17 (m, 1H); 5,64 (d, J=7,2); 5,42 (d, J=9,4, 1H), 5,28-5,25 (m, 1H); 5,12 (s, 1H); 4,92 (d, J=8,6, 1H); 4,62 (bs, 1H); 4,38 - 4,28 (m, 3H); 4,17 (d, J=8,5, 1H); 3,85 (d, J=6,7, 1H); 3,36 (d, J=5,3, 1H); 2,49 - 2,40 (m, 1H); 2,36 (s, 3H); 2,25 (bd, J=8,7, 2H); 1,99 - 1,91 (m, 1H); 1,85 (s, 3H); 1,74 (s, 3H); 1,69 (s, 1H), 1,67 (s, 1H); 1,35 (s, 9H); 1,22 (s, 3H); 1,11 (s, 3H); 0,93 (t, J=7,5, 9H); 0,61 - 0,49 (m, 6H). (d) preparação de 10-desacetil-2,-O-benziloxicarbonil-3’-N-desbenzoíl-3’-N-(t--butiloxicarbonil)-7-0-trietilsililpaclitaxel
A um balão contendo o produto da fase (c) (3,24 g, 3,51 mmol) adiciona--se 30 ml de diclorometano anidro. Coloca-se o balão sob atmosfera de árgon e arrefece-se até 0°C. Adiciona-se N,N-diisopropiletilamina (1,22 ml, 7,02 mmol) à 133 mistura reaccional, seguida pela adição gota a gota de cloroformato de benzilo (1,00 ml, 7,02 mmol). Decorridos 15 minutos, remove-se o banho de arrefecimento e deixa-se agitar a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 7 horas. Extingue-se a mistura com 30 ml de NH4CI saturado, lava-se com salmoura e seca-se som MgS04. A cromatografia intermitente (gel de sílica, 7-20 % de acetato de etilo/ hexano) proporciona 3,24 g (89 %) do composto do título sob a forma de um sólido branco. RMN Ή (300MHZ, CDC13) δ 8,10 (d, J - 8,0, 2H); 7,62 - 7,57 (m, 1H); 7,48 (t, J=8,0, 2H); 7,40 - 7,26 (m, 10H); 6,33 - 6,27 (m, 1H); 5,66 (d, J=7,0, 1H); 5,49 -5,42 (m, 2H); 5,31 (s, 1H); 5,22 - 5,13 (m , 3H); 4,93 (d, J-9,4, 1H); 4,38 (dd, J=6,5, J=10,7, 1H); 4,34 - 4,28 (m, 2H); 4,18 (d, J = 8,3, 1H); 3,90 (d, J=6,7, 1H); 2,52 -2,30 (m, 4H); 2,24 - 2,20 (m, 1H); 1,97 - 1,87 (m, 3H); 1,74 (s, 3H); 1,59 (s, 3H); 1,32 (s, 9H); 1,26, (s, 3H); 1,11 (s, 3H); 0,96 - 0,88 (m, 9H); 0,61 - 0,48 (m, 6H), (e) preparação de 10-desacetil -2 ’ -O-benzi loxi carboni 1 -3 ’ -N-desbenzoíl -3 ’ -N-(t--butiloxicarbonil)-10-O-(dibenzilfosfonooximetil)-7-O-trietilsililpaclitaxel
BnO O
Dissolve-se o produto da fase (d) em 13,5 ml (54 %) de DMSO, 8,75 ml (35 %) de anidrido acético e 2,75 ml (11 %) de ácido acético glacial e coloca-se sob atmosfera de árgon. Agita-se a mistura reaccional durante 56 horas, após o que se 134
dilui com acetato de etilo até um volume de 60 ml. Lava-se a solução com NaHC03 saturado até à neutralidade mediante papel de pH e lava-se então com salmoura. Seca-se a fase orgânica com MgSC>4 e concentra-se. A cromatografia intermitente com 15 - 20 % de EtOAc / hexano proporciona 3,12 g de uma espuma branca bruta com o produto desejado tiometil-acetal (isto é, 10-descaetil-2’-O— benziloxicarbonil-3 ’ -N-desbenzoíl-3 ’-N-(t-butiloxicarbonil)-10 -O- (metiltiometil)--7-O-trietilsililpaclitaxei que representa 70 % do material por RMN.
Dissolve-se então 3,12 g da mistura bruta anterior em 1,2-dicloroetano (61 ml) e coloca-se sob uma atmosfera de árgon. Adicionam-se 3,12 g de peneiros moleculares em pó de 4Â e agita-se vigorosamente a mistura heterogénea resultante. A esta adicionou-se uma solução de N-iodosuccinimida recristalizada (0,830 g, 3,69 mmol) de fosfato de benzilo (1,027 g, 3,69 mmol) em 46 ml de THF anidro através de uma cânula. Agita-se a mistura resultante durante 5 horas, filtra-se através de um tampão de Celite e dilui-se até um volume de 250 ml com acetato de etilo. Lava-se com (2 x 125 ml) de NaHS03 frio a 2 %, 6 % de NaHC03 frio (2 x 125 ml) e com salmoura. Seca-se a fase orgânica com MgS04 e concentra-se. A crmatografia intermitente (gel de sílica, 25 - 35 % de acetato de etilo / hexano) proporciona 1,52 g (40 %) do composto do título sob a forma de um sólido branco. RMN *H (CDC13, 300 MHz) δ 8,08 (d, J=7,0, 2H); 7,59 - 7,55 (m, 1H); 7,46 (t, J = 7,2, 2H); 7,38-7,25 (m, 20H); 6,30 (t, J =8,5, 1H); 5,65 (d, J=6,8, 1H); 5,49 - 5,39 (m, 4H); 5,32 (s, 1H); 5,18 - 4,19 (m, 4H); 4,93 (d, J=9,2, 1H); 4,44 (dd, J=6,6, J= 0,2, 1H); 4,31 (d, J=8,4, 1H), 4,16 (d, J=8,5, 1H); 3,80 (d, J=6,9, IH); 2,69 - 2,39 (m, 4H), 2,33 - 2,23 (m, 3H); 2,03 (s, 3H); 1,90 (t, J=12,6, 1H); 1,68 - 1,63 (m, 6H);
135 1,28 (s, 9H); 1,16 - 1,10 (m, 6H); 0,93 (t, J=7,4,9H); 0,55 (q, J=7,8,6H). RMN l3C (CDClj, 75,5 MHz) δ 204,1, 169,7, 167,9, 167,1, 151,1, 140,7, 135,7, 133,6, 130,2, 129,2, 128,9, 128,8, 128, 7, 128,6, 128,5, 128,4, 128,3, 128,2, 128,0, 127,8, 126,4, 90,4, 84,2, 81,1, 80,4, 79,3, 78,8, 74,9, 72,8, 72,0, 70,5, 69,2, 69,1, 69,0, 58,1, 46,8, 43,2, 37,1, 35,0, 28,1, 26,5, 22,8, 21,0, 14,1, 10,0, 6,9, 5,5. EM (FAB) mJz+ : 1345 (f) preparação de 10-desacetil-2’-O-benziloxicarbonil-3’-N-desbenzoíl-3’-N-(t--butiloxicarbonil)-10-O-(dibenzilfosfonooximetil)-paclitaxel
Arrefece-se uma solução do produto da fase (e) (50,8 mg, 0,038 mmol) em 2,5 ml de THF anidro, sob atmosfera de árgon, até à temperatura de -40°C. A esta solução adicionou-se gota a gota fluoreto de tetra-butil-amónio (0,057 ml, 0,057 mmol) em THF (1,0 M). Agita-se a mistura reaccional durante 1 hora e meia com aquecimento gradual até -20°C. Extingue-se a mistura com 15 ml de NH4CI saturado e dilui-se com 30 ml de EtOAc. Lava-se a fase orgânica com 2 x 15 ml de NaHCC>3, e com salmoura. Seca-se com MgS04 e concentra-se. A cromatografía de camada preparativa (gel de sílica, 50 % de acetato de etilo / hexano) proporciona 36 mg (77 %) do composto do título sob a forma de pó branco. ΙΙΜΝ-Ή (CDC13, 300 MHz) δ 8,10 (d, J = 8,5 Hz, 2H); 7,60 - 7,55 (m, 1H); 7,49 - 136 7,44 (m, 2H); 7,36 - 7,18 (m, 20H); 6,27 - 6,22 (m, 1H), 5,78 (s, 1H); 5,67 (d, J = 7,0, 1H); 5,44 - 5,34 (m, 3H); 5,27 (d, J = 2,2, 1H); 5,24 - 5,05 (m, 4H); 5,01-4,91 (m, 4H); 4,39 - 4,28 (m, 2H); 4,17 (d, J = 8,2, 1H); 3,87 (d, J = 7,0, 1H); 2,58 - 2,51 (m, 1H); 2,41 (s, 3H); 2,40 - 2,18 (m, 2H); 2,00 - 1,87 ()m, 5H); 1,73 - 1,69 (m, 4H); 1,30 (s, 9H); 1,22 - 1,15 (m, 6H). EM(FAB)m/z+: 1231 (g) preparação do sal de trietanolamina de lO-desacetil^-N-desbenzoíl-S^N-ít--butiloxicarbonil)-10-O-(fosfonooximetil)-paclitaxel
HO O
Carrega-se uma garrafa de Parr de 500 ml com 10-desacetil-2’-O-benzil-oxicarbonil-3 ’-N-desbenzoíl-3 ’-N-(t-butiloxicarbonil)-l O-O-(dibenziliòsfcnoQximetil)--paclitaxel (264,9 mg, 0,215 mmol) e 20 ml de acetato de etilo. Lava-se o frasco com árgon e adiciona-se Pd a 10 % / C (318 mg). Coloca-se a mistura resultante num aparelho de Parr com 55 libras por polegada quadrada (psi) de atmosfera de hidrogénio. Segue-se a reacção por HPLC (tampão de CH3CN/Q8 a 70 : 30 pH 6,0, 1,00 ml/min., coluna Zorbax C-18, 25,0 cm, λ = 230 nm) até deixar de se notar material inicial (12,5 horas). Filtra-se a mistura através de um tampão de Celite, que se lava com acetato de etilo e com uma pequena quantidade de diclorometano. Concentra-se o filtrado resultante e retoma-se o resíduo com 5 ml de diclorometano. 137 A adição de hexano provocou a formação de um precipitado branco do qual se isolam 140,3 g do ácido livre (pureza de 80 % por HPLC) sob a forma de um sólido branco. Faz-se passar este material directamente para a fase segumte. A um balão que contém o ácido livre anterior (140 mg, 0,153 mmol) adiciona-se 10 ml de diclorometano. Trata-se então a solução resultante com uma solução de trietanolamina 0,100 M em acetato de etilo (1,16 ml, 0,116 mmol) o que faz com que a solução se tome turva. Adicionam-se aproximadamente 2 ml de hexano e coloca-se a mistura à temperatura de -20°C durante a noite. Filtra-se o precipitado resultante através de uma ampola de vidro sinterizado 4,0 - 5,5 pm. Elimina-se o sólido e coloca-se sob vazio durante 4 horas para se obter 69,9 mg (42 %) do sal de trietanolamina do título sob a forma de um pó cinzento, o qual se determina ter uma pureza de 95 - 96 % mediante análise de HPLC. (Tr = 2,05 min, tampão de CH3CN/Q8 a 70: 30pH6,0, 1,00 ml/minuto, Zorbax C-18 25,0 cm, λ = 230 nm). Ι^ΜΝ-Ή (dé-acetona/DíO, 300 MHz) : δ 8,03 (d, J = 7,4, 2H); 7,65 (t, J = 7,3 Hz, 1H); 7,54 (t, J = 7,6, 2H), 7,42 - 7,33 (m, 5H); 7,21 (t, J=7,0, 1H); 6,09 (t, J=9,0, 1H); 5,81 (s, 1H); 5,59 (d, J=7,0, 1H); 5,12 (bs, 2H); 4,93 (d, J=8,4, 2H), 4,56 (d, J = 4,9, 1H); 4,31 - 4,26 (m, 1H); 4,11 (s, 2H), 3,41 - 3,37 (m, 6H); 2,42 - 2,32 5 (m, 5H); 2,15 (bs, IH); 1,97 (s, 3H); 1,77 - 1,64 (m, 2H); 1,58 (s, 3H); 1,13 (s, 9H); 1,15-1,07 (m, 6H). RMN 13C (dó-acetona, D20, 75,6 MHz): δ 171,6, 166,9, 156,6, 141,8, 135,1, 134,2, 131,0, 130,7,129,4, 129,3, 128,4, 128,1, 88,3, 85,4, 81,9, 79,7, 78,6, 78,1, 76,8, 76,0, 74,8, 71,9, 71,2, 47,4, 44,0, 37,1, 36,3, 28,5, 27,0, 23,1, 22,0, 14,7, 10,4.
138 HRMS: MNa~, 940,3142 (calculado para C^séNOigPNa = 940,3133)
Exemplo 10. 2’-O-Fsofonooximetoximetilpaclitaxel (a) preparação de 2’-0-(metiltiometoximetil)-7-0-trietilsililpaclitaxel
PhCfOJÕ A uma solução de 7-O-trietilsililpaclitaxel (70,0 mg, 72,2 mmol), bis-(metiltiometil)-éter (90 mg, 72,2 mmol), 70 mg de peneiros moleculares e N-iodosuccmimida (160 mg, 72,2 mmol) em 2,0 ml de THF à temperatura ambiente adiciona-se triflato de prata (5,0 mg, 19,5 mmol) e agita-se a solução resultante durante 2 horas. Dilui-se então a mistura reaccional com acetato de etilo e filtra-se através de uma almofada de celite. Lava-se o filtrado com uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio, seguida por uma mistura a 1:1 (v:v) de bicarbonato de sódio aquoso saturado e uma solução aquosa a 5 % de tiossulfato de sódio e finalmente salmoura. Secam-se então as fases orgânicas sobre sulfato de sódio e concentram-se sob vazio. Purifica-se o óleo residual mediante cromatografia intermitente (3 : 1, hexanos : acetato de etilo) para se obter 22,0 mg (29 %) do composto do título sob a forma de um sólido branco : RMN *H (300MHZ,· CDClj) δ 8,12 - 7,20 (15H, m), 7,04 (1H, d, J=8,9 Hz), 6,41 (1H, s), 6,25 (1H, m), 5,81 (1H, dd, J=8,9, 2,4 Hz), 5,68 (1H, d, J=7,0 Hz), 4,93 (1H, d, 8,0 Hz), 4,79 (2H, M), 4,71 (1H, d, 2,4 Hz), 4,45 (1H, dd, J=10,5, 6,6 Hz), 139 4,30 (1Η, d, J=8,3 Hz), 4,28 (1H, d, J=11,7 Hz), 4,17 (1H, d, J=8,3 Hz), 4,04 (1H, d, J=11,7 Hz), 3,80 (1H, d, J=6,9 Hz), 2,48 - 1,13 (25H, m, incluindo singuletos a 2,51, 2,13, 2,05, 2,01, 1,69, 1,19, 1,16), 0,98 - 0,85 (9H, m), 0,65 - 0,50 (6H, m). (b) preparação de 2’-0-(dibenzilfosfonooximetoximetil)-7-trietilsililpaclitaxel
A uma solução do produto obtido na fase (a) (15 mg, 0,0141 mmol) e 15 mg de peneiros moleculares em 0,5 ml de THF à temperatura ambiente adicionou-se fosfato de dibenzilo (20,0 mg, 0,089 mmol) seguido por N-iodo-succinimida (4,2 mg, 0,0187 mmol) e agitou-se a solução durante 1 hora. Uma análise por CCF da mistura reaccional nesta altura indica a presença de apenas material inicial. Adiciona-se então triflato de prata (5,0 mg, 0,019 mmol) em três porções no decurso de duas horas e agita-se a mistura reaccional durante mais 1 hora. Dilui-se então a mistura reaccional com acetato de etilo e filtra-se a solução resultante através de uma almofada de celite. Trata-se o filtrado com uma solução a 1:1 (v:v) de bicarbonato de sódio aquoso saturado e com uma solução aquosa a 5 % de tiossulfato de sódio. Lava-se então o extracto orgânico com salmoura, seca-se sobre sulfato de sódio e concentra-se sob vazio. Purifica-se o óleo residual mediante cromatografia intermitente (1:1, hexanos / acetato de etilo) para se obter 5,0 mg (33 %) do composto do título : 140 RMN ‘Η (300 ΜΗζ, CDC13) δ 8,08 - 7,16 (25Η, m), 7,18 (1Η, d, J=8,8 Hz), 6,41 (1H, s), 6,21(1H, m), 5,82 (1H, dd, J=9,0, 3,1 Hz), 5,66 (1H, d, 7,0 Hz), 5,01 - 4,65 (10H, m), 4,56 (1H, dd, J=14,7, 5,6 Hz), 4,43(1H, dd, J=10,4, 6,7 Hz), 4,29 (1H, d, J-8,3 Hz), 4,16 (1H, d, J=8,3 Hz), 3,78 (1H, d, J7,0 Hz), 2,60 -1,13 (22H, m, incluindo singuletos a 2,49, 2,15, 1,93, 1,66, 1,15, 1,13, 3H cada), 0,95 - 0,84 (9H, m), 0,63 - 0,45 (6H, m). (c) preparação de 2’-0-fosfonooximetoximetilpaclitaxel
Trata-se o produto da fase (b) com fluoreto de tetrabutilamónio de acordo com o processo indicado no exemplo 9(f) para eliminar o grupo protector do radical 7-O-trietilsililo. Submete-se o composto assim obtido a hidrogenação catalítica de acordo com o processo descrito nos exemplos anteriores para se obter o composto do título.
Exemplo 11, 2’-0-Fosfonooximetoximetilpaclitaxel (via alternativa) (a) preparação de 2’-0-trietilsililpaclitaxel
141
A uma solução de paclitaxel (20,0 g, 0,0234 moí) e imidazol (3,59 g, 0,052 mol) em 150 ml de DMF (dimetilformamida) a 0°C adiciona-se cloreto de trietilsililo (6,0 ml, 0,053 mol) em quantidades de 2,0 ml no decurso de 20 minutos. Agita-se então a mistura reaccional à temperatura de 0°C durante 1 hora. Dilui-se então a mistura com acetato de etilo e com cloreto de amónio aquoso saturado. Remove-se a camada orgânica, lava-se com salmoura, seca-se sobre sulfato de sódio e concentra-se no vazio para se obter um óleo amarelo. A purificação do produto bruto mediante cromatografia intermitente (hexanos . acetato de etilo a 1 : 3 e depois 1:1) proporciona 21,07 g (rendimento 98 %) do composto do título desejado sob a forma de um produto sólido branco incolor. RMN-lH (300 MHz, CDC13) δ 8,15 (12H, m), 7,70 (2H, m), 7,65 - 7,30 (11H, m), 7,15 (1H, d, J = 8,9 Hz), 6,30 (1H, s), 6,25 (1H, m), 6,70 - 6,10 (2H, m), 4,94 (1H, d, J = 7,9 Hz), 4,67 (1H, d, 2,0 Hz), 4,40 (1H, m), 4,29 (lh, d, J = 8,4 Hz), 4,18 (1H, d, J = 8,4 Hz), 3,81 (1H, d, J = 7,1 Hz), 2,65 — 1,10 (22H, incluindo singuletos a 2,55, 2,20, 1,88, 1,69, 1,22, 1,13, 3Hcada) (b) preparação de 2,-0-trietilsilil-7-0-benziloxicarbonilpaclitaxel
Adiciona-se gota a gota no decurso de 10 minutos butil-lítio (1,6 M em hexanos, 12,9 ml, 8,06 mmol) a uma solução de 2’-0-tríetilsililpaclitaxel (22,3 g, 24,1 mmol) em THF (250 ml) arrefecida a -50°C. Agita-se a solução resultante durante 20 minutos e mantém-se a temperatura compreendida entre —50°C e -35°C. Arrefece-se então a mistura reaccional até -50°C e adiciona-se gota a gota no decurso de 5 minutos cloroformato de benzilo (5,08 ml, 29,8 mmol). Mantém-se a mistura reaccional à temperatura de -40°C durante 30 minutos e equilibra-se então até 0°C durante aproximadamente 30 minutos. Dilui-se então a mistura com acetato de etilo e com cloreto de amónio aquoso saturado e lava-se com a camada orgânica resultante com salmoura, seca-se sobre sulfato de sódio e concentra-se sob vazio. Uma análise de RMN lH da mistura reaccional bruta mostra a presença do 2’-0-tri-etilsilil-7-O-benziloxicarbonilpaclitaxel desejado bem como o 2’-0-trietilsilil-7-epi--hidroxipaclitaxel (na razão de 3 : 1, respectivamente). Utiliza-se esta mistura de produto na fase seguinte sem purificação ulterior e separam-se subsequentemente os isómeros. Purifica-se uma amostra analítica do produto principal 2’-O-trietilsilil-7--O-benziloxicarbonilpaclitaxel mediante cromatografia intermitente; RMN-lH (300 MHz, CDC13) δ 8,12 (2H, m), 7,72 (1H, m), 7,65 - 7,27 (1H, d, J = 8,8 Hz), 6,41
5,16 (lh, d, J = 12,3 Hz), 4,95 (1H, d, J = 8,7 Hz), 4,69 (1H, s), 4,35 (1H, d, J = 8,3
Hz), 4,25 (1H, d, J = 8,3 Hz), 3,94 (1H, d, J - 6,8 Hz), 2,70 - 1,12 (22H, incluindo singuletos a 2,54, 2,14, 2,01, 1,80, 1,20, 1,15, 3H cada), 0,81 - 0,73 (9H, m), 0,55-0,31 (6H, m). (c) preparação de 7-O-benziloxicarbonilpaclitaxel OAc
BzO
143
Adiciona-se ácido clorídrico (6N, 1,0 ml, 6,0 mmol) a uma solução do produto da fase (b) (24,0 g, 22,6 mmol) em acetonitrilo (250 ml) arrefecida até 0°C. Decorridos 10 minutos uma análise de CCF (hexanos : acetato de etilo, 1:1) indica que a reacção se encontra completa. Dilui-se a mistura reaccional com bicarbonato de sódio aquoso saturado seguido por acetato de etilo e remove-se a camada orgânica, lava-se com salmoura, seca-se utilizando sulfato de sódio e concentra-se no vazio. Purifica-se o óleo residual utilizando cromatografía intermitente (hexanos : acetato de etilo a 1 : 3, e depois a 1 : 1) para se obter 11,4 g (48 % no decurso das duas fases) do composto do título e 4,8 g (20 %) de 7-epi-hidroxi-paclitaxel. RMN Ή (300 MHz, CDC13) δ 8,09 (2H, m), 7,71 (2H, m), 7,65 - 7,27 (16H, m), 7,10 (1H, d, 8,9 Hz), 6,39 (1H, s), 6,16 (1H, m), 5,81 (1H, d, J = 8,9, 2,4 Hz), 5,65 (1 H, d, J = 6,9 Hz), 5,49 (1H, dd, J = 10,6, 7,2 Hz), 5,20 (1H, d, J = 11,9 Hz), 5,12 (1H, d, J = 11,9), 4,91 (1H, d, J = 8,4 Hz), 4,78 (1H, m), 4,30 (1H, d, J = 8,4 Hz), 4,15 (1H, d, J = 8,4 Hz), 3,91 (1H, d, J - 6,8 Hz), 3,69 (1H, d, J = 4,9 Hz), 2,65 - 1,10 (22H, incluindo smguletos a 2,39, 2,18, 1,81, 1,75, 1,21, 25 1,15, 3H cada). (d) preparação de 2’-0-(metiltiometoximetil)-7-0-benziloxicarbonilpaclitaxel
144 <
Adiciona-se triflato de prata (300 mg, 1,17 mmol) a uma solução de 7-O-benziloxicarbonilpaclitaxel (5,53 g, 5,71 mmol), éter Ι,Γ-ditiometildimetílico (7,8 g, 57,1 mmol), N-iodosuccinimida (6,35 g, 28,3 mmol) e seca-se na estufa, 5,0 g de peneiros moleculares em pó em THF (110 ml) à temperatura ambiente. A análise de CCF (hexanos : acetato de etilo, 1 : 1) da mistura reaccional decorridos 20 minutos indica a conversão de cerca de 40 % do material inicial num produto superior. Adicionam-se então triflato de prata (150 mg, 0,585 mmol) e segue-se a reacção mediante CCF o que indica que após 30 minutos a reacção estava aproximadamente 65 % completa. Dilui-se a mistura com 100 ml de acetato de etilo, filtra-se utilizando uma almofada de celite e despeja-se o filtrado numa ampola de decantação contendo 200 ml de uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio e 50 ml de uma solução aquosa a 5 % de tiossulfato de sódio. Remove-se a camada orgânica, lava-se com salmoura, seca-se sobre sulfato de sódio e concentra-se sob vazio. Purifica-se o óleo residual mediante cromatografia intermitente (hexanos : acetato de etilo, eluição gradiente 4 : 1 a 3 : 2) para se obter 3,0 g (rendimento 54 %) do produto do título sob a forma de um sólido amarelo claro. RMN Ή (300 MHZ, CDC13) Ô 8,10 (2H, m), 7,74 (2H, m), 7,66 - 7,25 (18H, m), 7,05 (1H, d, J = 8,9 Hz), 6,40 (1H, s), 6,26 (1H, m), 5,77 (1H, dd, J = 8,8, 2,5 Hz), 5,71 (1H, d, J = 6,9 HZ), 5,51 (1H, dd, J = 10,6, 7,1 Hz), 5,21 (1H, d, J =11,9 Hz), 5,14 (1 H, d, J = 11,9 Hz), 4,92 (1H, m), 4,79 (2H, m), 4,68 (1H, d, J = 2,5 Hz), 4,31 (1H, d, J = 11,8 Hz), 4,30 (1H, d, J = 8,5 Hz), 4,16 (1H, d, J = 8,5 Hz), 4,10 (1H, d, J = 11,8 Hz), 3,93 (1H, d, J = 6,9 Hz), 2,65 - 1,10 (25H incluindo singuletos a 2,50,
145 2,15, 2,05, 1,74, 1,72, 1,20, 1,15, 3Η cada). (e) preparação de 2’-0-(dibenzilfosfonooximetoximetil)-7-0-benziloxicarbonil-paclitaxel
A uma solução de 2’-0-(metiltiometoximetil)-7-0-benziloxicarbonil-paclitaxel (1,06 g, 1,07 mmol) seca na estufa, 1,0 g de peneiros moleculares em pó em 20 ml de THF à temperatura ambiente adicionou-se fosfato de dibenzilo (1,49 g, 5,30 mmol) seguida imediatamente por N-iodosuccinimida (2,65 g, 1,18 mmol). Uma análise de CCF (hexanos : acetato de etilo a 1:1) da mistura reaccional decorridas 2 horas e meia indica que a reacção se encontrava aproximadamente 60 % completa. Adicionou-se então N-iodosuccinimida (175 mg, 0,78 mmol) e agitou-se a reacção durante mais 30 minutos tempo após o qual uma análise de CCF indicou que a reacção se encontrava completa. Diluiu-se então a mistura reaccional com 50 ml de acetato de etilo e filtrou-se utilizando uma almofada de celite. Despejou-se o filtrado numa ampola de decantação contendo 100 ml de uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio e 20 ml de uma solução aquosa a 5 % de tiossulfato de sódio. Removeu-se a camada orgânica, lavou-se com salmoura, secou-se sobre sulfato de sódio e concentrou-se sob vazio. Purificou-se o óleo 146 residual utilizando cromatografia intermitente (hexanos : acetato de etilo, eluição gradiente, 3 : 1 a 1 : 1) para se obter 750 mg (rendimento 62 %) do composto do título desejado sob a forma de um produto sólido branco. RMN ‘H (360 MHz, CDC13) δ 8,10 (2H, m), 7,79 (2H, m), 7,65 - 7,24 (26H, m), 7,10 (1H, m), 6,41 (1H, s), 6,20 (1H, m), 5,79 (1H, dd, J = 8,8, 3,6 Hz), 5,65 (1H, d, J = 7,0 Hz), 5,52 (1H, m), 5,20 (1H, d, J = 11,8 Hz), 5,11 (1H, d, J =11,8 Hz), 5,04 -4,85 (6H, m), 4,75 - 4,60 (4H, m), 4,30 (1H, d, 8,4 Hz), 4,15 (lH„d, J = 8,4 Hz), 3,92 (1H, d, J = 7,0 Hz), 2,65 - 1,10 (22 H incluindo singuletos a 2,48, 2,19, 1,95, 1,80, 1,20, 1,10, 3H cada). (f) preparação do sal de trietanolamina de 2’-0-fosfonooximetoximetilpaclitaxel
Adiciona-se paládio a 10 % sobre carvão a uma solução de 2’-0-(di-benzilfosfonooximetoximetil)-7-0-benziloxicarbonilpaclitaxel (500 mg, 0,382 mmol) em 40 ml de acetato de etilo alojado numa garrafa de Parr. Fixou-se o balão a um aparelho de Parr e submeteu-se a mistura reaccional a hidrogénio à pressão de 50 psi. Agitou-se a mistura reaccional durante 6 horas e meia e depois filtrou-se utilizando uma ampola de vidro sinterizado. Adicionou-se trietanolamina (0,1 N em acetato de etilo, 4,0 ml) a este filtrado e concentrou-se a solução resultante sob vazio. Suspendeu-se o produto sólido bruto em cerca de 5,0 ml de acetato de etilo e decantou-se o solvente. Repetiu-se este processo 3 vezes e obteve-se 300 mg do sal de trietanolamina do título resultante com uma pureza de 87 % conforme determinado pela análise de HPLC. A purificação ulterior deste composto via cromatografia 08 (água : acetonitrilo, 3:1) proporciona o composto do título desejado (120 mg, 34 %) com uma pureza de 95 % por HPLC. 147 RMN-'Η (300 MHz, CD3COCD3, D20) δ 9,05 (1H, d, J - 8,7 Hz), 8,5 - 7,12 (21H, ra), 6,40 (1H, m), 6,05 (1H, m), 5,69 - 5,55 (2H, m), 5,01 - 4,85 (6H, m), 4,35 (1H, m), 4,14 (2H, m), 3,96 - 3,85 (6H, m), 3,25 (1H, d, J = 7,1 Hz), 3,30 - 3,15 (6H, m), 2,50 - 1,04 (22H, incluindo singuletos a 2,49, 2,15, 2,05, 1,81, 1,60, 3H cada).
Exemplos adicionais
Os processos gerais proporcionados nos exemplos e nas descrições anteriores são seguidos na preparação dos compostos seguintes dentro do âmbito da fórmula geral (A) da presente invenção. ττ τ
HQ * OCOPh R1 R11 Ru Rm Rlv Rv OH H -0CH20P(0)(0H)2 AcO Ph 4-F-Ph-4-CH3-Ph 2-fur anilo 2-tienilo (CH3)2CH-isobutenilo (2-metil-1 -propenilo) * C-C3H6- 3-furanilo 3-tienilo 2-propenilo 148
R1 Rír R“ R1^ Rv -0CH20P(0)(0H)2 H OH AcO Ph 4-CF3-Ph 2-furanilo (CH3)2CH- 2- tienilo isobutenilo ciclopropilo 3- tienilo 3-furanilo 2-propenilo iosopropilo CH3CH20H(0)0- H -0CH20P(0)(0H)2 AcO Ph 4-F-Ph 2- tienilo isopropilo 2-propenilo isobutenilo ciclopropilo 2- furanilo 3- furanilo 3- tienilo -0CH20P(0)(0H)2 H OH H CH3CH20C(0)0- OH (CH3)3CO- Ph OH CH3CH20C(0)0- H -0CH20P(0)(0H)2 OH (CH3)3CO- Ph -OCH2OP(0)(OH)2 H H CH3-CH20C(0)0- AcO Ph Ph OH CH30C(0)0- CH3CH20C(0)0- 043(0^)200(0)0- 0Η3(0Η2)5Ο0(Ο)Ο- CC13CH20C(0)0- CH3C(0)0- CH3CH2(0)O- CH3(CH2)2C(0)0- CH3(CH2)2C(0)0- PhC(0)0- Ph0C(0)0- ΟΗ,^ΉΟ^ΧΧΟΡ- PhCH20C(0)0- H -0CH20P(0)(0H)2 AcO Ph Ph 149
R1 R11 R11 R1” RÍV ” Rv OH H OH -OCtWiPiOXOHh Ph Ph OH H H -OCHzOP(OXOH>2 Ph Ph -OCHzOHOXOH^ H H H (CH3XCO- 4-CH30-Ph OH H -ΟΟΪΟΡ(ΟΧΟΗ)2 AcO (CH3XCO- Isobutenilo 2- propemlo ciclcpropilo 3- furarrilo 3-tienilo isopropilo dclobutilo isopropilo CH3OC(OX> H -0Ο40Ρ(0Χ0Η)2 AcO (CH3)jCO- Isobutenilo 2- propemlo aclopropilo 3- furanilo 3-tienilo isopropilo dclobutilo isopropilo CH3CFyX(O.X> H -OCH20P(OXOH)2 AcO (CH3),CX> Isobutenilo 2- propemlo aclopropilo 3- fiiramlo 3-tienilo iscpropilo dclobutilo isopropilo ^(CHz^OP- H -OC^OP(OXOH)2 AcO (CH^CO- Isobutenilo 2- propemlo ddcpropilo 3- fimanilo 3-tiemlo isopropilo dclobutilo isopropilo 1 150
R1 Rir R11 R111 R1^ Rv O^CTWXXOP- H -OCI^OP(OXOH)2 AcO (CH^CO Isobutenifo 2- propemlo aclcprcpilo 3- furanrlo 3-tienilo isopropilo ddobutilo isopropilo ca3a^oc(op- H -ΟΟΪΟΡ(ΟΧΟΗ)2 AoO (OttO> Isobutemlo 2- propenilo cicloproptlo 3- furanilo 3-tienilo isopropilo dclobutrlo isopropilo CH3C(OX> H -OC^OP(OXOH)2 AcO (CH3^CX> Isobutenilo 2- propemlo dclopropilo 3- furanilo 3-tienilo isopropilo aclobutilo isopropilo CH3CH(0P- H -οσ^ορ(οχοΗ)2 AcO (CH^CO- Isobutenilo 2- propenilo acloproprlo 3- firranilo 3-tienilo isopropilo ddobutilo isopropilo 151
R1 R11 ~ R11 R111 R1V Rv chxo^aop- H -0ΟφΡ(0Χ0Η)2 AcO (CH3XCX> Isobutenilo 2-piopanlo ciclcprcpilo 3-íuranilo 3-tienilo isoprcpilo ddobutilo isopropilo aumhQon H -OCHOP(OXOH)2 AcO (CH3)jCO- Isobutenilo 2- propenilo dcloprcplo 3- íuranilo 3-tienilo isopropilo ddobutilo isopropilo PhC(0)0- H -οα-^ορ(οχοΗ)2 AcO (CH^CO- Isobutenilo 2- prcpemlo ddopropilo 3- furanilo 3-tienilo isopropilo ddobutilo isopropilo PhOC(OX> H -0Ο-Ι20Ρ(0χ0Η)2 AcO (CH^CO- Isobutenilo 2- propenilo ddcpropilo 3- fijranilo 3-tisiilo iscprcpilo ddobutilo isoprcpilo CHr=CHCH20C(0)0- H -(ΧΗ20Ρ(0Χ0Η)2 AcO (CH3),ca Isobutenilo 2- propenilo acloprcpilo 3- furanilo 3-tiatilo isopropilo ddobutilo isopropilo 152
Rl R11 R11 R111 R1V Rv PhC^0C(0)0- H -OCWP(OXOH)2 AcO (CH3XCO- Isobuíenilo 2-properulo aclopropilo 3-furarnlo 3-tiemlo isopropilo dclobuíilo isopropilo -OCQzCHjCHj H -OCHX)P(OXOH)2 AcO CH3CH2C h2o^o- 2- furaralo 3- furanilo isobuíenilo 2-propemlo aclopropilo ddobutilo 3-tienilo 2-tienilo isopropilo OH H -ΟΟΪΟΡ(ΟΧΟΗ)2 AcO CH3CH2C Η,α^σ 2- furamlo 3- furanilo isobuíenilo 2-propenilo aclopropilo dclobuíilo 3-tienilo 2-tienilo isopropilo -OCO2CH2CH3 H -OOiOP(OXOH)2 AcO isopropiloxi 2- íuranilo 3- furanilo 2- tienilo isobuíenilo 2-propernlo aclopropilo ddobutilo 3- tiemlo isopropilo OH H -ΟΟίζΟίχΟχΟΗ), AcO isopropiloxi 2- furamlo 3- furanilo 2- íienilo isobuíenilo 2-piopenilo ddcpropilo ddobutilo 3- tienilo isopropilo 153 c R1 ~W~ R11 Rtíl R^ R7 -OCOCH^ H -OCHOP(OXOH)2 AcO isopnopiloxi 2- ánanilo 3- furarrilo 2- tienilo isobuíeralo 2-propenilo ddcpropilo ddobutilo 3- tienilo isopropilo OH H -OC^OP(OXOH)2 AcO iscpcpiloxi 2- furanilo 3- furanilo isobutarilo 2-propenilo dclopropilo ddobulilo 3-tienilo 2-tienilo isopropilo OH CH30C(0)0- CH3CH20C(0)0- CH3(a^0C(0)0- CH3(CH2),OC(0)0- CC13CH20C(0)0- CH3C(0)0- CH3CH2(0)0- CH3(CH2)2C(0)0- CH3(CH2)2C(0)0- PhC(0)0- Ph0C(0)0- ΟΗΚΉΟΗζΟΟίΟΡ- PhCH20C(0)0- H _:0CH20CH20P(0)(0H)2 AcO (CH3XCO- 2-furanilo -OCQ2CH2CH3 H -OCHíOCHOP(0)(OH)2 AcO (CH3)jCX>- 3-furanilo isobuíenilo 2-propernlo 2- tienilo 3- tienilo ddopropilo
R1 R11 -Π Rlll RIV Rv OH H -OOíOC^OP(OXOH)2 AcO (CHjXca 2-furanilo isobutenilo 2- denilo 2- propenilo íscpropilo ddopropilo 3- tiaiilo 3- furanilo -OCOzCH^CH, H -OC^OCHzOPÍOXOH): AcO CHjCHCH^CHP- 2-furaralo -OCC^CHzCH, H -OOiOCH20P(OXOH)2 AcO Isopropiloxi 2-furanilo OCOjCBCH, H -OCHOP(OXOH)2 -OCOzCHj (CH3xca 2- fiiranilo 3- furanilo 3-tienilo isopropilo ddopropilo isobutaiilo 2-tiaiilo 2-propaiilo OH H -0CH20P(0)(0H)2 -000£Η3 (CHihCO- 2- furanilo 3- furanilo 3-denilo iscpropilo ciclopropilo isobutaiilo 2-tiaiilo 2-propaiilo -OCO2CH2CH5 H -OCH2OP(0)(OH)2 OMe (CHÚCO- 2- íuranilo 3- furanilo 3-tiaiilo isopropilo ddopropilo isobutaiilo 2-tiaiilo 2-propaiilo OH H -0CH20P(0)(0H)2 OMe (CH3)}CO- 2- furanilo 3- furanilo 3-baiilo isopropilo dclqiropilo isobutaiilo 2-daiilo 2-propaiilo 155
R1 R11' Ru ' R111' R1^ Rv -OCOCHzCH H -οσ^ορ(οχοΗ)2 -0C(0)Ph ✓ (OIjXOO- 2- furanilo 3- furanilo 3-tienilo iscpropilo ciclopropilo isobutenilo 2-tienilo 2-propenilo OH H -ΟΟΗ£>Ρ(ΟΧΟΗ)2 -0C(0)Ph (CH3)jCO- 2- furarrilo 3- furanilo 3-tienilo isoprcpilo adopropilo isobutenilo 2-tienilo 2-propenJo -OCOÍ2CH2CH3 H -ΟΟΪΟΡ(ΟΧΟΗ)2 ΌΟΟ£Η3 Ph CHCHCHtCHzO- Isopropiloxi 2-furanilo OH H -OCftOP(OXOH)2 -oco£h3 Ph CHAJjC^crço- Isopropiloxi 2-furanilo -OCO£H£H, H -οσωρ(οχοΗ)2 OMe Ph CHjCFiCHzC^O- Isopropiloxi 2-furanilo OH H -οσ^οΡ(οχοΗ)2 OMe Ph CH3CH2CH2CH7O- Isopropiloxi 2-furanilo OCObCF^CH, H -οσ^ορ(οχοΗ)2 -0C(0)Ph Ph οη3οηοη2ο^> Isopropiloxi 2-furanilo OH H -ΟΟΗζΟΡ(θχθΗ)2 -0C(0)Ph Ph CHaCl^CHjCHa Isopropiloxi 2-furarrilo -OCOj H -oci^ochop(oxoh)2 -ΟΟΟ,ΟΗ, (CHshCO- Iscpropiloxi CH3CH2CH2CH20- 2-furanilo OH H -OC^OC^OP(OXOH)2 -OCOzC^ (chúco- Isopnopiloxi CHjCHzCHjC^O- 2-furanilo 156 R' Rn Ru RÍ1I RIV Rv OCO2CH2CH3 H -OCT^OCHzOHOXOH),. OMe mico- Jsopnopiloxi CHjO-tCHsCI^O- 2-furanilo OH H -OCHzOCHzOPCOXOH): OMe (CHàCO- Isoprcpiloxi CHjCH^aCHO- 2-furanilo -OCOzCHíCH, H -OCHzOCHzOPíOXOHIí -0C(0)Ph (CH3),CO- IsopnopJoxi CHsCHzCHjCHA 2-furanilo OH H -0C^0CH20P(0X0H)2 -0C(0)Ph (O^CO- Iscpncpibxi OTjCH^CHA 2-íuranilo -OCO2CH2CH3 H -OC^OC^OP(OXOH)2 -OCOjCHj (CHàCO- Isobutenilo -OCO2CH2CH3 H -οα^οσ^οιχοχοΗ), OMe (CH3)3CO- Isobutanlo OCO2CH2CH5 H -OCHOCH20P(OXOH)2 -OC(0)Ph (^CO- bobutaulo OH H -OCHOCHOP(OXOH)2 -OCO£R3 Ph 2-furanilo OH H -OG^OCHOP(OXOH)2 OMe Ph 2-íuramlo OH H -0CH20CH20P(0X0H)2 -0C(0)Ph Ph 2-furamlo -OCO^aCH, H -OC^OC^OP(OXOH)2 -OCOzCH, (CHj^CO- 2-propernlo -OCO2CH2CH3 H -OCH20CHOP(OXOH)2 OMe (CH3)}CO- 2-propaTilo -OCOtCH^CH, H -OCH20CHzOP(OXOH)2 -OC(0)Ph (CH^CO- 2-properulo
Rl R1 Ru Rm R1V Rv OOMXMOPíOXOHfe H OH AcO (CHaXCO- 2-filCTlflo 2- tiaiilo 3- finanilo 3-tienilo isobutaiilo 2-prcpaiilo ddcprcpilo <XIWOWP(OXOHk H OH AcO aija-rapA Isaprcpilcixi (CH3XCO- 2-finanilo -OCHOCHO^OXOHX H OH -OCO7CH3 (CH3XCO- Fh bopropiloxi 2-finanilo OCHzOCHOPíOXOl-Oz H OH OMe (CH3XCO- Fh Iscpropilaxi 2-fiuanilo -OCHOCHOPÍOXOH), H OH -0C(0)Fh (CH3XCO- Fh Isopropiloxi 2-finanilo -OCOCHCHa H OCHOCHOPíOXOH), AcO Fh Ph OH F H Όσχαχοχαί); (CH3XCO- Fh Fh OCOCrtCH, F H OCHOHOXOH); (CH3XCO- Fh Ph -OCOOHOXOHX F H AcO Fh 2^uianiio isobutenilo 3-finanilo 2- tienilo 2-propenilo acioprcpilo 3- tienilo isopropilo -OCHtOCHjOPíOXOHX F H AcO Fh 2- finanilo isobutenilo 3- finanilo 2- tienilo 2-prcpoiilo deloprcpib 3- tienilo isopropilo 158 Ri Rtf Ru RUl R,v Rv -OCHOPIOXOH), F H AcO (C^xco- 2- fiuanflo 3- denilo rsobutenílo 3-finanilo adcpropilo 2-tiarilo Fh 2-prcpaiflo -OCHOCHtOIXOXOH), F H AcO (CFfcXCO- 2- finanflo 3- tienilo isobutaiilo 3-finanilo adcpropilo 2-tienilo Fh 2-propenilo OCHOPíOXOH), F H -OCO7CH3 (CH3XCO- 2-finanilo -OOfcOP(OXOH)2 F H OMe (CHXCO- 2-finarrilo -OCHtOPÍOXOHX F H -0C(0)Ph (CK&00- 2-finanilo -OCHOCHOHOXOHX F H -ocacH, (CHjXCO- 2-fiiianilo OQíXXHtOPíOXOHX F H OMe (CHJsCO- 2-finarrilo -OCHXXHOPíOXOHX F H -0C(0)Hi (CH3XCO- 2-finarrilo -OCHOCHiOPíOXOH), H OH OH (CHjxea Hi OH H -OCHOaíOXOXCHfc OH (CH&CO- Ph -OCOCHjCH, H OCHÍXJMfXOXOHb OH (cmco- Ph OH H OH OCBOCHXDRQXOHX (OiXCO- Hi -OCOzCHtCH, H OH OCHXXHOXOXCHX (CHXCO- Hi ÒH F H ΌακχΗΟχοχαιχ (chxco- Fh 2- finarrilo 3- finanflo 2- tiarilo 3- denilo isobutenilo adcpropilo 2-propenilo -oco£H£h; F H OCHjOOiOXOXOHX (CH3XC0- Fh 2- finarrilo 3- finanilo 2- denilo 3- denilo isobutenílo adcpropilo 2-propenilo Lisboa, 16 de Junho//de 2000 fj/l €> Agente riedcde Industrial
Rua do Salitre, 195, r/c-Drt 1250 LISBOA

Claims (32)

1 REIVINDICAÇÕES 1. Composto de fórmula geral T — [0CH2(0CH2)m0P(0)(0H)2]n (A) na qual o símbolo T representa um radical taxano que comporta no átomo de carbono C!3 um grupo 3-amino-2-hidroxipropanoíloxi substituído; o símbolo m representa o número 0 ou um número inteiro compreendido entre 1 e 6 inclusive; o símbolo n representa o número 1, 2 ou 3; ou um seu sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico. 1. Composto de acordo com a reivindicação 1 em que o referido resto taxano é ainda caracterizado pelo facto de conter pelo menos uma ligação dupla C„-Ci2, um grupo hidroxi Q, benziloxi C2, acetiloxi C4, oxi C9 e oxetano C5-C20
2. Composto de acordo com a reivindicação 1 em que o referido resto taxano é derivado de um resíduo com a fórmula geral
na qual o símbolo R2e representa um átomo de hidrogénio e o símbolo R2° representa um álono de hidrogénio ou um grupo hidroxi, -OC(0)Rx ou -0C(0)0Rx; ou o símbolo R2e representa um átomo de hidrogénio e o símbolo R2e representa um átomo de flúor; o símbolo R3e representa um átomo de hidrogénio ou um grupo hidroxi-, 0C(0)Rx, Ci-6-alquiloxi, ou -0C(0)0Rx; um dos símbolos R6e ou R7e representa um átomo de hidrogénio e o outro representa um grupo hidroxi ou -0C(0)Rx; ou os símbolos R6e e R7e formam conjuntamente um grupo oxo; o símbolo Rx representa um grupo alquilo Ct^ eventualmente substituído por 1 a 6 átomos de halogéneo iguais ou diferentes, grupos cicloalquilo C3-Q, alcenilo C2-C6 ou um radical de fórmula aeral
na qual o símbolo D representa uma ligação ou um grupo alquilo Ci^; e os símbolos Ra, Rb e Rc representam, cada um, índependentemente, um átomo de hidrogénio ou grupo amino, alquilamino Ci^, di-alquilamino-Cj^, halogéneo, alquilo ou alcoxi
3. Composto de acordo com uma qualquer das reivindicações anteriores em que o referido grupo 3-amino-2-hidroxipropanoíloxi substituído é derivado de um resto com a fórmula geral
na qual o símbolo R,e representa um átomo de hidrogénio ou um grupo -C(0)Rx, -C(0)0Rx; os símbolos R4 e R5 representam, cada um, independentemente um do outro, um grupo alquilo Ct^, alcenilo C2^, alcimlo C2^ ou -Z-R6; o símbolo Z representa uma ligação directa ou um grupo alquilo ou alcenilo C2-ó; o símbolo R6 representa um grupo arilo, arilo substituído, cicloalquilo C3^ ou heteroarilo; o símbolo p representa o número 0 ou 1, e o símbolo Rx tem os significados definidos antes.
4. Composto de acordo com a reivindicação 1 de fórmula geral
o símbolo R1 representa um grupo hidroxi, -0CH2(0CH2)m0P(0)(0H)2, -0C(0)Rs ou -0C(0)0Rx, o símbolo R2 representa um átomo de hidrogénio e o símbolo R2 representa um átomo de hidrogénio ou um grupo hidroxi, -OCH2(OCH2)mOP(0)(OH)2, -OC(0)ORx, ou o símbolo R2 representa um átomo de flúor e o símbolo R2 representa um átomo de hidrogénio; o símbolo R3 representa um átomo de hidrogénio ou um grupo hidroxi, acetoxi.
-0CH2(0CH2)m0P(0)(0H)2 ou -0C(0)0Rx; um dos símbolos R6 ou R7 representa um átomo de hidrogénio e o outro representa um grupo hidroxi, alcanoiloxi ou -OCH2(OCH2)mOP(0)(OH)2; ou os símbolos R6 e R7 formam conjuntamente um grupo oxo; com a condição de pelo menos um dos símbolos R1, R2, R3, R6 ou R7 representar um grupo -0CH2(0CH2)m0P(0)(0H)2; o símbolo m representa o número 0, 1 ou 2; os símbolos R4, R5, Rx, m e p têm os significados definidos antes; ou um seu sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico.
5. Composto de acordo com a reivindicação 5 na qual o símbolo R2 representa um átomo de hidrogénio e o símbolo R2 representa um grupo -0CH20P(0) (OH)2; ou um seu sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico.
6. Composto de acordo com a reivindicação 6 na qual o símbolo R1 representa um um grupo hidroxi ou -OC(0)ORN; e o símbolo Rx tem os significados definidos antes, em particular alquilo C|^.
7. Composto de acordo com a reivindicação 7 na qual o símbolo R3 representa um átomo de hidrogénio ou um grupo hidroxi ou acetoxi.
8. Composto de acordo com a reivindicação 7 ou 8 em que o símbolo R4(0)p representa um grupo fenilo ou t-butoxi.
9. Composto de acordo com uma qualquer das reivindicações 7 a 9 em que o símbolo R' representa um grupo fenilo, 2-furilo ou 2-tienilo.
10. Composto de acordo com a reivindicação l que é o 2-0-(etoxi-carbonil)-7-0-(fosfonooximetil)-paclitaxel, ou um seu sal aceitável sob o ponto de 5 vista farmacêutico, em particular o sal de sódio, o sal de trietanolamina, o sal de trietilamina, o sal de arginina, o sal de lisina, o sal de etanolamina e o sal de N-metilglucamina; 7-0-(fosfonooximetil)-paclitaxel, ou um seu sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, em particular um sal de sódio; 3’-n-desbenzoíl-3’-des-fenil-3’-N-(t-butiloxicarbonil)-3’-(2-furil)-2’-0-etiloxicarbonil-7-0-fosfixiooximetil-paclitaxel, ou um seu sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, em particular um sal de trietanolamina; ou 3’-N-desbenzoíl-3’-desfenil-3’-N-(t-butiloxicarbonil)--3,-(2-tienil)-2’-0-etiloxicarbonil-7-0-fosfonooximetilpaclitaxel ou um seu sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, em particular o sal de trietanolamina.
11. Composto de acordo com a reivindicação 5 em que o símbolo R1 representa um grupo -0CH20P(0)(0H)2, ou um seu sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico.
12. Composto de acordo com a reivindicação 12 em que o símbolo R2 representa um átomo de hidrogénio, o símbolo R2 representa um átomo de hidrogénio ou um grupo hidroxi ou -0C(0)0Rx e o símbolo Rx tem os significados definidos na reivindicação 5.
13. Composto de acordo com a reivindicação 13 em que o símbolo R3 representa um átomo de hidrogénio ou um grupo hidroxi ou acetoxi.
14. Composto de acordo com a reivindicação 13 ou 14 em que o símbolo R4(0)p representa um grupo femlo ou t-butoxi.
15. Composto de acordo com uma qualquer das reivindicações 13 a 15 em que o símbolo R5 representa um grupo fenilo.
16. Composto de acordo com a reivindicação 1 que é o 2’-0-(fosfono- 6 oximetil)-paclitaxel, ou um seu sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico; 2’,7-0-bis-(fosfonooximetil)-paclitaxel ou um seu sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, em particular o sal de sódio; 10-desacetil-3’-N-desbenzoil-3’-N-(t--butiloxicarbonil)-10-O-(fosfonooximetil)-paclitaxel, ou um seu sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, em particular o sal de trietanolamina.
17. Composto de acordo com a reivindicação 5 em que os símbolos R1 e R2 representam ambos um grupo -OCH2OP(0)(OH)2, ou um seu sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico; ou em que o símbolo R1 representa um grupo -0CH20CH20P(0)(0H)2, ou um seu sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico; ou em que o símbolo R3 representa um grupo -0CH20P(0)(0H)2, ou um seu sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico.
18. Composto de fórmula geral 13- CH - txn - [OCH2(OCH2)mSCH3]n em que o símbolo txn representa um resto taxano, os símbolos m e n têm os significados definidos antes , ou um seu alcóxido metálico em Cl3.
19. Composto de acordo com a reivindicação 19 em que o referido resto taxano é derivado de um resíduo de fórmula geral
7 na qual os símbolos R2e, R2e, R3e, Rf>tí e R'e têm os significados definidos antes.
20. Composto de acordo com a reivindicação 19 de fórmula
ou um seu alcóxido metálico em Cl3.
21. Composto de fórmula geral r-[OCH2(OCH2)raSCH3]n na qual o símbolo T tem o significado do símbolo T em que os grupos hidroxi que não reagiram foram bloqueados e os símbolo m e n têm os significados definidos antes.
22. Composto de acordo com a reivindicação 22 de fórmula geral
na qual o símbolo Rlb representa um grupo hidroxi, hidroxi protegido, -OCH2SCH3, -0C(0)Rx ou -0C(0)0Rx, o símbolo R^ representa um átomo de hidrogénio e o símbolo R2b representa um átomo de hidrogénio ou um grupo hidroxi, hidroxi protegido, -OCH2SCH3 ou -OC(0)ORx; ou o símbolo R2 representa um átomo de flúor e o símbolo R2b representa um átomo de hidrogénio; o símbolo R3b representa 8 um átomo de hidrogénio, ou um grupo hidroxi, hidroxi protegido, acetoxi, -OCHjSCHj ou -0C(0)0Rx; um dos símbolos R6b ou R71* representa um átomo de hidrogénio e o outro um grupo hidroxi, hidroxi protegido, alcanoíloxi ou -OCH2SCH3; ou os símbolos R6b e R715 formam conjuntamente um grupo oxo; com a condição de pelo menos um dos símbolos Rlb, R2b, R3b, R6b, R71* representar um grupo -OCH2SCH3; e os símbolos p, R4, R5 e Rx têm os significados definidos antes.
23. Composto de acordo com a reivindicação 23 que é o 7-O-metil-tiometilpaclitaxel; 2’-0-(benziloxicarbonil)-7-0-metiltiometilpaclitaxel; 2'-0--(etoxicarbonil)-7-0-metiltiometilpaclitaxel; 2’-0-(metiltiometil)-7-0-(trietilsilil)--paclitaxel; 2,-0-(metiltiometil)-paclitaxel, 2’,7-0-bis-(metiltiometil)-paclitaxel; 3’-N-desbenzoíl-3,-desfenil-3’-N-(t-butiloxicarbonil)-3’-(2-furil)-7-0-metiltiometil-paclitaxel; 3,-N-desbenzoíl-3,-desfenil-3,-N-(t-butiloxicarbonil)-3,-(2-furil)-2’-0--etiloxicarbonil-7-O-metiltiometilpaclitaxel; 3 ’-N-desbenzoíl-3 ’-desfenil-3 ’-N-(t--butiloxicarbonil)-3 ,-(2-tienil)-7-0-metiltiometilpaclitaxel, ou 3’-N-desbenzoíl-3’--desfenil-3,-N-(t-butiloxicarboml)-3,-(2-tienil)-2’-0-etiloxicarbonil-7-0-metiltio-metilpaclitaxel.
24. Composto de acordo com a reivindicação 22 de fórmula geral
na qual os símbolos R2, R2b, R3h, R4, R5, R6b, R71* e p têm os significados definidos antes.
25. Composto de fórmula geral T’ - [0CH2(0CH2)m0P(0)(0Ry)2]n na qual os símbolos Τ’, m e n têm os significados definidos antes e o símbolo Ry representa um grupo protector do radical fosfonò.
26. Composto de acordo com a reivindicação 26 de fórmula geral
na qual o símbolo R,c representa um grupo hidroxi, hidroxi protegido, -0CH20P(0) (OR-)2 ou -OC(0)ORx; o símbolo R2 representa um átomo de hidrogénio, o símbolo R2° representa um átomo de hidrogénio ou um grupo hidroxi, hidroxi protegido, -0CH20P(0) (ORy)2 ou -0C(0)0Rx; ou o símbolo R2 representa um átomo de flúor, o símbolo R2c representa um átomo de hidrogénio; o símbolo R3tí representa um átomo de hidrogénio, ou um grupo hidroxi, hidroxi protegido, acetoxi, -0CH20P(0)(0Ry)2 ou -OC(0)ORx, um dos símbolos Rr,c ou R7c representa um átomo de hidrogénio e o outro um grupo hidroxi, hidroxi protegido, alcanoíloxi Ct^ ou -0CH20P(0)(0Ry)2; ou os símbolos R6c e R7c formam conjuntamente um grupo oxo; com a condição de pelo menos um dos símbolos Rlc, R2c, R3c, R6c ou R7c representar um grupo -OCH2OP(O)(ORy)2; e os símbolos p, R4, R5, Rx e Ry têm os significados definidos antes.
27. Composto de acordo com a reivindicação 26 ou 27 de fórmula geral RvC R*CXR7o
HO OCOPh RMOipCO^H O (RyO)2P(O)OCH2OCH2Õ na qual os símbolos R2, R2l, R^, R4, R5, R6\ R'c, Ry e p têm os significados definidos antes.
28. Composição farmacêutica que compreende uma quantidade eficaz anti-tumor de um composto de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 a 18 e um veículo aceitável sob o ponto de vista farmacêutico.
29. Utilização de um composto de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 a 18 para a preparação de uma composição farmacêutica, em particular uma composição para administração por via oral, para inibir o crescimento de um tumor.
30. Processo para a preparação de um composto de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 a 18 que compreende : a remoção do grupo(s) protector(es) dos radicais hidroxi e fosfono de um composto de fórmula geral (C) T - [0CH2(0CH2)m0P(0)(0Ry)2]n (C) na qual o símbolo Ry representa um grupo protector do radical fosfono e o símbolo Τ’ representa um derivado do taxano em que os grupos hidroxi que não reagiram 11 foram bloqueados.
31. Processo para a preparação de um composto de acordo com uma qualquer das reivindicações 22 a 25 que compreende : a reacção de um composto de fórmula geral (Aa) Τ’ - [OH]n (Aa) com dimetilsulfóxido e anidrido acético, ou com sulfureto de dimetilo e um peróxido orgânico, ou que compreende : a reacção de um composto de fórmula geral (Aa) T’ - [OH]n (Aa) com CH3SCH2OCH2SCH3 e N-iodosuccinimida.
32. Processo de acordo com a reivindicação 32 em que o peróxido orgânico é peróxido de benzoílo. Lisboa, 16 de Junho de 2000
1 RESUMO “ÉTERES FOSFONO-OXIMETÍLICOS DE DERIVADOS DO ΧΑΧΑΝΟ” A presente invenção diz respeito a novos éteres fosfono-oximetílicos de derivados do taxano solúveis em água, à sua utilização como agentes anti-tumor e às composições farmacêuticas que contêm os novos compostos. Lisboa, 16 de Junho de 2000
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TW (1) TW410228B (pt)

Families Citing this family (44)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK0552041T3 (da) * 1992-01-15 2000-10-09 Squibb & Sons Inc Enzymatiske fremgangsmåder til spaltning af enantiomerblandinger af forbindelser, der er nyttige som mellemprodukter ved fr
EP0667772B9 (en) * 1992-11-13 2004-08-04 Florida State University Taxanes having an alkyl substituted side-chain and pharmaceutical compositions containing them
FR2698871B1 (fr) 1992-12-09 1995-02-24 Rhone Poulenc Rorer Sa Nouveau taxoïdes, leur préparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent.
EP1251127B1 (en) * 1992-12-23 2005-11-09 Bristol-Myers Squibb Company Novel sidechain-bearing taxanes and intermediates thereof
US6593482B2 (en) * 1993-02-01 2003-07-15 Aventis Pharma S.A. Methods for preparing new taxoids and pharmaceutical compositions containing them
TW397866B (en) * 1993-07-14 2000-07-11 Bristol Myers Squibb Co Enzymatic processes for the resolution of enantiomeric mixtures of compounds useful as intermediates in the preparation of taxanes
CA2129288C (en) * 1993-08-17 2000-05-16 Jerzy Golik Phosphonooxymethyl esters of taxane derivatives
FR2712289B1 (fr) * 1993-11-08 1996-01-05 Rhone Poulenc Rorer Sa Nouveaux dérivés de taxicine, leur préparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent.
US5677470A (en) * 1994-06-28 1997-10-14 Tanabe Seiyaku Co., Ltd. Baccatin derivatives and processes for preparing the same
US6201140B1 (en) * 1994-07-28 2001-03-13 Bristol-Myers Squibb Company 7-0-ethers of taxane derivatives
US6458976B1 (en) 1994-10-28 2002-10-01 The Research Foundation Of State University Of New York Taxoid anti-tumor agents, pharmaceutical compositions, and treatment methods
US6500858B2 (en) 1994-10-28 2002-12-31 The Research Foundation Of The State University Of New York Taxoid anti-tumor agents and pharmaceutical compositions thereof
JPH10508022A (ja) * 1994-10-28 1998-08-04 ザ リサーチ ファウンデーション オブ ステート ユニバーシティ オブ ニューヨーク タキソイド誘導体、それらの製造、およびそれらの抗腫瘍薬としての使用
CA2162759A1 (en) * 1994-11-17 1996-05-18 Kenji Tsujihara Baccatin derivatives and processes for preparing the same
US5489589A (en) * 1994-12-07 1996-02-06 Bristol-Myers Squibb Company Amino acid derivatives of paclitaxel
IT1275936B1 (it) * 1995-03-17 1997-10-24 Indena Spa Derivati della 10-deacetilbaccatina iii e della 10-deacetil-14b- idrossibaccatina iii loro metodo di preparazione e formulazioni
US5847170A (en) * 1995-03-27 1998-12-08 Rhone-Poulenc Rorer, S.A. Taxoids, their preparation and pharmaceutical compositions containing them
US6372780B2 (en) 1995-03-27 2002-04-16 Aventis Pharma S.A. Methods of treating cell lines expressing multidrug resistance P-glycoprotein
MA23823A1 (fr) 1995-03-27 1996-10-01 Aventis Pharma Sa Nouveaux taxoides, leur preparation et les compositions qui les contiennent
US5840929A (en) * 1995-04-14 1998-11-24 Bristol-Myers Squibb Company C4 methoxy ether derivatives of paclitaxel
TW354293B (en) * 1995-06-06 1999-03-11 Bristol Myers Squibb Co Prodrugs of paclitaxel derivatives
US6441025B2 (en) 1996-03-12 2002-08-27 Pg-Txl Company, L.P. Water soluble paclitaxel derivatives
EP0932399B1 (en) 1996-03-12 2006-01-04 PG-TXL Company, L.P. Water soluble paclitaxel prodrugs
US5635531A (en) * 1996-07-08 1997-06-03 Bristol-Myers Squibb Company 3'-aminocarbonyloxy paclitaxels
US5977386A (en) * 1996-12-24 1999-11-02 Bristol-Myers Squibb Company 6-thio-substituted paclitaxels
US5902822A (en) * 1997-02-28 1999-05-11 Bristol-Myers Squibb Company 7-methylthiooxomethyl and 7-methylthiodioxomethyl paclitaxels
US6156789A (en) * 1998-03-17 2000-12-05 Rhone-Poulenc Rorer S.A. Method for treating abnormal cell proliferation in the brain
US6204257B1 (en) 1998-08-07 2001-03-20 Universtiy Of Kansas Water soluble prodrugs of hindered alcohols
US6362172B2 (en) 2000-01-20 2002-03-26 Bristol-Myers Squibb Company Water soluble prodrugs of azole compounds
SK13632001A3 (sk) 2000-02-02 2002-06-04 Florida State University Research Foundation, Inc. C10 karbonátom substituované taxány ako protinádorové činidlá
US6649632B2 (en) 2000-02-02 2003-11-18 Fsu Research Foundation, Inc. C10 ester substituted taxanes
NZ514380A (en) 2000-02-02 2005-03-24 Univ Florida State Res Found C7 carbonate substituted taxanes as antitumor agents
US20020077290A1 (en) 2000-03-17 2002-06-20 Rama Bhatt Polyglutamic acid-camptothecin conjugates and methods of preparation
AU2001290636A1 (en) * 2000-09-22 2002-04-02 Bristol-Myers Squibb Company Method for reducing toxicity of combined chemotherapies
CA2422964A1 (en) * 2000-09-22 2002-03-28 Bristol Myers Squibb Company Method for reducing toxicity of combined chemotherapies
US6448401B1 (en) 2000-11-20 2002-09-10 Bristol-Myers Squibb Company Process for water soluble azole compounds
EP1451168A4 (en) 2001-11-30 2005-08-24 Bristol Myers Squibb Co PACLITAXELSOLVATE
US7834043B2 (en) 2003-12-11 2010-11-16 Abbott Laboratories HIV protease inhibiting compounds
HN2005000054A (es) 2004-02-13 2009-02-18 Florida State University Foundation Inc Taxanos sustituidos con esteres de ciclopentilo en c10
BRPI0512970A (pt) 2004-07-06 2008-04-22 Abbott Lab prodrogas de inibidores da hiv protease
ES2389518T3 (es) 2008-01-18 2012-10-26 Indena S.P.A. Formas sólidas de ortataxel
US8242166B2 (en) 2008-03-31 2012-08-14 Florida State University Research Foundation, Inc. C(10) ethyl ester and C(10) cyclopropyl ester substituted taxanes
CN101648973B (zh) * 2009-09-03 2012-05-30 漆又毛 水溶性紫杉烷及制备方法
BR122020014853B8 (pt) * 2011-08-25 2023-02-28 Bonac Corp Éter, e, método de produção de um éter

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4942184A (en) * 1988-03-07 1990-07-17 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Water soluble, antineoplastic derivatives of taxol
US4960790A (en) * 1989-03-09 1990-10-02 University Of Kansas Derivatives of taxol, pharmaceutical compositions thereof and methods for the preparation thereof
US5059699A (en) * 1990-08-28 1991-10-22 Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. Water soluble derivatives of taxol
FR2678930B1 (fr) * 1991-07-10 1995-01-13 Rhone Poulenc Rorer Sa Procede de preparation de derives de la baccatine iii et de la desacetyl-10 baccatine iii.
US5272171A (en) * 1992-02-13 1993-12-21 Bristol-Myers Squibb Company Phosphonooxy and carbonate derivatives of taxol
CA2129288C (en) * 1993-08-17 2000-05-16 Jerzy Golik Phosphonooxymethyl esters of taxane derivatives

Also Published As

Publication number Publication date
GR3034312T3 (en) 2000-12-29
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IL108111A (en) 2002-09-12
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