PT542708E - Derivados de beta-amino acido substituidos uteis como inibidores de agregacao de plaquetas - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO " DERIVADOS DE BETA-AMINO ÁCIDO SUBSTITUÍDOS ÚTEIS COMO INIBIDORES DE AGREGAÇÃO DE PLAQUETAS ”

Antecedentes do invento Campo do invento

Este invento pretende substituir derivados β amino ácidos os quais inibem a agregação de paquetas. Técnica relacionada

Fibrinogénio é uma glicoproteína presente como um componente normal de plasma do sangue. Participa na agregação de plaquetas e formação de fibrina no mecanismode coagulação do sangue.

As plaquetas são elementos celulares encontrados no sangue completo que também participam na coagulação do sangue. A ligação fibrinogénio às plaquetas é importante na função normal das plaquetas no mecanismo de coagulação do sangue. Quando um vaso sanguíneo sofre uma agressão, a ligação das plaquetas ao fibrinogénio inicia a agregação e forma um trombo. A interacção de fibrinogénio com as plaquetas ocorre através de um complexo glicoproteína membrana, conhecido como gpIIb/IIIa; isto é um aspecto importante da função das plaquetas. Inibidores dstea interacção são úteis na modulação ou prevenção da formação de trombos de plaquetas. -2-

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Também se sabe que uina outra grande glicoproleína chamada

fibronectina, que é uma proteína matricial extracelular maior, interage com fibri-nogénio e fíbrina, e com outras moléculas estruturais tais como actina, colagénio e proteoglicanos. Descobriu-se que vários fragmentos de polipéptido relativamente grandes no domínio de ligação de célula fibronectina tinham actividade de ligação de célula, (ver Patente U.S., 4.517.686; 4.589.881; e 4.661.111). Descobriu-se que certos fragmentos de péptido relativamente pequenos da mesma molécula promovem ligação de células a um substracto quando imobilizados no substracto ou que inibem a ligação quando numa forma solubilizada ou suspensa. (Ver Patentes U.S. 4.578.079 e 4.614.517).

Na Patente U.S. 4.683.291, a inibição da função das plaquetas é revelada com péptidos sintéticos delineados por serem antagonistas de alta afinidade de ligação de fibrinogénio a plaquetas. A Patenet U.S. 4.857.508 revela ter utilidade como inibidores de agregação de plaquetas.

Outros péptidos sintéticos e a sua utilização como inibidores de fibrinogénio de ligação a plaquetas são revelados por Koczewiak et al., Biochem. 23, 1767-1771 (1984); Plow et al.. Proc. Natl. Acad. Sei. 82. 8057-8061 (1985);

Ruggeri et al., Ibid. 83, 5708-5712 (1986); Ginsberg et al, J. Biol. Chem. 260 (7), 3931-3936 (1985); Haverstick et al, Bloood 66 (4), 946-952 (1985); e Ruoslahti and Pierschbacher, Science 238, 491-497 (1987). Ainda outros inibidores de péptido são revelados nos Pedidos de Patente EP 275.748 e 298.820. A Patente U.S. 4.879.313 revela compostos úteis como inibidores de agregação de plaquetas com a fórmula -3-

HN HN- (CH2)x-CO-Asp-NH-CHZ- (CH^'*1’

HzN na qual x = 6 a 10, y = 0 a 4, z = H, COOH, CONH2 ou alquilo Cl-6, Ar = fenilo, bifenilo ou naftilo, cada um substituído por 1 a 3 grupos metoxi, ou um grupo fenilo, bifenilo, naftilo, piridilo oiu tienilo insubstituído, e Asp = resíduo ácido aspártico. O Pedido de Patente Europeia 372.486 revela derivados de β amino ácido N-acilo de fórmula:

R1-CONH- -CQNH -CHR3 -CHrCOiH e seus sais. Os referidos compostos são úteis para a inibição de agregação de plaquetas no tratamento de trombose, acidente vascular cerebral, infarto de miocárdio, inflamação e arterosclerose, e para inibição de metástases. O Pedido de Patente Europeia 381.033 descreve derivados do ácido alcanoico amidino ou guanidinoaril substituído utéis no tratamento da trombose, apoplexia, infarte cardíaco, inflamações , arteriosclerose e tumores. O Pedido de Patente Europeia 445.796 revela derivados de ácido acético úteis como ligandos para proteínas adesivas nas plaquetas do sangue. Como tal estes compostos são úteis para modular e/ou inibirem a agregação das plaquetas.

Sumário do Invento

De acordo com o presente invento são fornecidos novos derivados β amino ácidos substituídos os quais modulam e/ou inibem a agregação de plaquetas. Estes novos compostos inibidores podem ser representados pela seguinte fórmula química.

seu sal, éster ou prodroga farmaceuticamente aceitável, em que R1 é seleccionado a partir do grupo que consiste em hidrogénio, radicais alquilo inferior, radicais alquenilo inferior, radicais hidrocarboneto aromático, radicais hidrocarboneto alicíclico aromático, radicais benzilo, radicais fenetilo, em que os referidos radicais são opcionalmente substituídos por halogé-nio, alcoxi inferior, hidroxi e alquilo inferior; R2 é seleccionado a partir do grupo que consiste em hidrogénio, radicais alquilo inferior, radicais alquenilo inferior, radicais alquinilo inferior, radicais hidrocarboneto alcíclico, radicais hidrocarboneto aromático, em que os referidos radicais são opcionalmente substituídos por hidroxi, alcoxi inferior, alquilo inferior, halogénio, nitro, ciano, azido, ureído, ureileno, carboxilo ou derivados car-bonilo, trifluorometilo, aciloxi, alquiltio, ariltio, alquilsulfenilo, arilsulfenilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, amino, alquilamino, trialquilsililo, aminosulfonilo, dialquilamino, alcanoilamino, aroilamino, fenilo, naftilo, alquinilo inferior, os quais são opcionalmente substituídos por um ou mais dos seguintes: halogénio, nitro, alcoxi inferior, alquilo inferior, trialquil sililo, azida e fenilo. -5- 1/^ A é seleccionado a partir do grupo que consiste nos radicais alquilo inferior, radicais alquenilo inferior, radicais alquinilo inferior, radicais alicíclico, em que os referidos radicais são opcionalmente substituídos por hidroxilo, alcoxi inferior, alquilo inferior, halogénio, alcoxicarbonilalquilo, amino, alquilamino, dialquilamíno, acilamino, alquiltio, sulfonilo, e hidrocarbonetos aromáticos os quais são opcionalmente substituídos por halogénio, nitro, alcoxi inferior e alquilo inferior; W é seleccionado a partir do grupo que consiste em hidrogénio, radicais alquilo inferiro, radicais alquenilo inferior, radicais alquinilo inferior, radicais hidrocarboneto alicíclico e radicais hidrocarboneto aromático, em que os referidos radicais são opcionalmente substituídos por hidroxilo, alcoxi inferior, alquilo inferior, halogénio, nitro, amino, aciloxi, e fenilo e naftilo os quais podem ser opcionalmente substituídos por halogénio, nitro, aciloxi inferior, e alquilo inferior; Z, Z’, Z” são seleccionados independentemente a partir do grupo que consiste em hidrogénio, radicais alquilo inefrior, halogénio, alcoxi, ciano, sulfonilo, carboxilo, alcoxicarbonilo, e radicais hidroxilo; q é um inteiro a partir de 0 até cerca de 6; e com a condição de que quando A é trimetileno e q é 0 então R2 não é hidrogénio, radical metilo ou radical fenilo e também que quando A é trimetileno e q é 1 então R2 não é hidrogénio. O anterior é de preferência o composto, seu sal ou éster farmaceu-ticamente aceitável. R1 é de preferência hidrogénio, radicais alquilo ou benzilo, R1 é mais preferivelmente hidrogénio. - 6 - í/bUj R2 é de preferência alquenilo inferior e alquinilo inferior, R2 é mais preferivelmente vinilo, etinilo, alquilfenilsulfonilo ou alquilmetoxicarbonilo. A é de preferência alquilo inferior o qual pode ser substituído como definido anteriormente. A é mais preferivelmente metileno, etileno, propileno, ciclopropileno; mais preferivelmente A é etileno ou ciclopropileno; ainda mais preferivelmente A é etileno. W é de preferência hidrogénio ou radicais alquilo inferior, mais preferivelmente W é hidrogénio ou etilo. Z, Z\ Z” são de preferência independentemente seleccionados a partir do grupo que consiste em hidrogénio, cloro, benzilo, metilo, etilo, hidroxi-lo, metoxi; mais preferencialmente, Z, Z’, Z” são seleccionados a partir de hidrogénio, benzilo, etilo; mais preferivelmente, Z, Z’, Z” são hidrogénio. q é de preferência um inteiro de 0 até cerca de 4; mais preferivelmente 0 até cerca de 2; mais preferivelmente 0 ou 1. Mais preferido 0. E um outro objectivo do invento fornecer uma nova composição farmacêutica que compreende compostos de fórmula I úteis na inibição ou modulação de agregação de plaquetas ou semelhantes, particularmente na inibição ou modulação de agregação de plaquetas pela administração de uma quantidade entre 0,5 mg/Kg até 10 mg/Kg de preferência 3 mg /Kg a um animal que dele necessite. É ainda outro objectivo do invento fornecer um método para inibir terapeuticamente ou modular a agregação de plaquetas ou semelhantes num -7- l/Ui 1

fs, mamífero que precise de um Lai tratamento compreendendo um composto de fórmula I em forma de dosagem única.

Muitos outros objectivos e fins do invento serão claros a partir da seguinte descrição detalhada do invento.

Descrição Detalhada do Invento

Uma execução do presente invento é um composto de fórmula I:

n1 i

| r-Ç-COjW N-CO* A -CO-NH—C—(CUjJo-R* H q seu sal, éster ou prodroga farmaceuticamente aceitáveis, em que Ri é seleccionado a partir de hidrogénio, radicais alquilo inferior de 1 até 6 átomos de carbono, radicais alquenilo inferior de 1 até cerca de 6 átomos de carbono, radicais hidrocarboneto aromático, radicais hidrocarboneto alicíclico de 3 até cerca de 6 átomos de carbono, radicais benzilo, radicais fenetilo, em que os referidos radicais são opcionalmente substituídos por halogénio, alcoxi inferior, hidroxi e alquilo inferior; R2 é seleccionado a partir de hidrogénio, radicais alquilo inferior de 1 até cerca de 6 átomos de carbono, radicais alquenilo inferior de 2 até cerca de 6 átomos de carbono, radicais alqinilo de 2 até cerca de 8 átomos de carbono, radicais hidrocarboneto alicíclico de 3 até 6 átomos de carbono, radicais hidrocarboneto aromático, em que os referidos ardicais são opcionalmente substituídos por hidroxilo, alcoxi inferior, alquilo inferior, halogénio, nitro, ciano, azido, ureído, azido, ureído, ureileno, amino, Irialquilsililo, alquilsulfonilo, fenilsulfonilo, trifluorometilo, acetoxi, acetilamino, benzoilamino, carbonilo, derivados carboxilo, alquilsulfonil animo, e fenilsulfonilo amino; A é seleccionado a partir de radicais alquilo inferior de 1 até cerca de 6 átomos de carbono, radicais alquenilo inferior de 2 até cerca de 6 átomos de carbono, radicais alquinilo inferior de 2 até cerca de 4 átomos de carbono, e radicais hidrocarboneto alicíclicos de 3 até cerca de 5 átomos de carbono, em que os referidos radicais são opcionalmente substituídos por hidroxilo, alcoxi inferior, halo-génio, alquiltio e amino; W é seleccionado a partir de hidrogénio, radicais alquilo inferior de 1 até cerca de 6 átomos de carbono, radicais alquenilo inferior de 2 até cerca de 6 átomos de carbono, e radicais hidrocarboneto aromático de 6 até 12 átomos de carbono, em que todos os referidos radicais são opcionalmente substituídos por hidroxilo, alcoxi inferior, alquilo inferior, halogénio, nitro, amino, e aciloxi; Z, Z’, Z” são independentemente seleccionados a partir do grupo que consiste em hidrogénio, halogénio, alcoxi, ciano, sulfonilo, carboxilo, alcoxicar-bonialquilo, alcoxicarbonilo e radicais alquilo inferior; e q é um inteiro desde 0 até cerca de 6. R1 é de preferência hidrogénio: R2 é de preferência hidrogénio radicais alquilo inferior de 1 até cerca de 6 átomos de carbono e é opcionalmente substituído como definido anteriormente. R2 é mais preferencialmente hidrogénio e alquilo inferior. A é de preferência alquilo inferior de 1 até cerca de 6 átomos de carbono o qual é opcionalmente substituído como definido anteriormente. A é mais preferencialmente alquilo inferior de 1 até cerca de 6 átomos de carbono. Z é de preferência hidrogénio, halogénio e alquilo inferior, mais preferencialmente Z’ é hidrogénio. -9- (Μη Ζ’ eZ” são de preferência seleccionados independentemente a partir de hidrogénio, alquilo inferior e hidroxi.

Outra execução preferida do presente invento é um composto de fórmula I ou um seu sal ou prodroga farmaceuticamente aceitável, em que Ri é seleccionado a partir de hidrogénio, radicais alquilo inferior, radicais alquenilo inferior, radicais hidrocarboneto aromático, radicais hidrocar-boneto alicíclico, radicais benzilo, radicais fenetilo, em que todos os referidos radicais são opcionalmente substituídos com halogénio, alcoxi inferior, hidroxi e alquilo inferior; R2 é seleccionado a partir de hidrogénio, radicais alquilo inferior, radicais cicloalquilo, radicais alquenilo inferior, radicais alquinilo inferior, radicais fenol, radicais fenilo, radicais naftilo, em que cada radical pode ter um ou mais substi-tuintes seleccionados do grupo que consiste em halogénio, alquilo inferior, alcoxi inferior, derivados carboxilo, nitro, ciano, azido, ureído, ureileno, alcoxicarboni-loxi, hidroxilo, alquilamino, alcoxicarbonilo, trialquilsililo, alcoxiimino, alquil-sulfonilo, fenilsulfonilo, alquilsulfonilo, amino, fenilsulfonilo amino e amino; A é seleccionado a partir de radicais alquilo inferior, cicloalquilo inferior e alquenilo inferior; W é seleccionado a partir do grup que consiste em hidrogénio, radicais alquilo inferior; Z, Z’, Z” são independentemente seleccionados a partir do grupo que consiste em hidrogénio, halogénio, alcoxi inferior e alcoxicarbonilo e alcoxicar-bonilmetilo e radicais alquilo inferior; e q é um inteiro desde 0 até cerca de 6. R1 é de preferência hidrogénio, alquilo inferior, benzilo, e fenilo. Mais preferentemente R1 é hidrogénio. -10- l/A*j R2 e dc preferência alquilo inferior e pode ser opcionalmcnte substituído como definido anteriormente. A é de preferência alquilo inferior e cicloalquilo. A é mais preferencialmente cicloalquilo inferior. Z é de preferência hidrogénio, halogénio e alquilo inferior. Z’eZ” são de preferência independentemente seleccionados a partir de hidrogénio, alquilo inferior e hidroxi. q é de preferência 0 até 4, mais preferencialmente 0 até 2, mais preferencialmente 1.

Considera-se que os seguintes compostos deviam ser exemplos demonstrativos:

Como aqui utilizado, o termo “alquilo inferior”, sozinho ou em combinação, significa um radical alquilo acíclico contendo desde 1 até cerca de 10, de preferência desde 1 até cerca de 8 átomos de carbono e mais preferencialmente 1 até cerca de 6 átomos de carbono. Exemplos de tais radicais incluem metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, terc-butilo, pen-tilo, iso-amilo, hexilo, octilo e semelhantes. O termo “alquenilo inferior” refere-se a um radical hidrocarboneto acíclico insaturado de tal maneira que contenha pelo menos uma ligação dupla. Tais radicais contêm desde cerca de 2 até 10 átomos de carbono, de preferência desde cerca de 2 até cerca de 8 átomos de carbono e mais preferencialmente 2 até 6 átomos de carbono. Exemplos de radicais alquenilo adequados incluem prope-nilo, buten-l-ilo, isobutenilo, pentenilen-l-ilo, 2-2-metilbuten-l-ilo, hexen-l-ilo, hepten-l-ilo e octen-l-ilo, e semelhantes. O termo “alquinilo inferior” refere-se a uns radicais hidrocarboneto insaturados de tal maneira que contenham uma ou mais ligações triplas, tais radicais contendo cerca de 2 até cerca de 10 átomos de carbono, de preferência

preferência tendo desde cerca de 2 até cerca de 8 átomos de carbono c mais preferencialmente tendo 2 até 6 átomos de carbono. Exemplos de radicais alquinilo adequados incluem radicais etinilo, propinilo, butin-l-ilo, butin-2-ilo, pentin-l-ilo, pentin-2-ilo, 3-metilbutin-l-ilo, hexin-l-ilo, hexin-2-ilo, hexin-3-ilo, 3,3-dimetilbutin-l-ilo e semelhantes. O termo “hidrocarboneto acíclico” ou “cicloalquilo” significa um radical alifático num anel com 3 até cerca de 10 átomos de carbono, e preferen-

cialmente desde 3 até cerca de 6 átomos de carbono. Exemplos de radicais acícli-cos adequados incluem ciclopropilo, ciclopropilenilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, 2-ciclohexen-l-ilenilo, ciclohexenilo e semelhantes. O termo “radical hidrocarboneto aromático” significa 4 até 6 átomos de carbono, de preferência 6 até cerca de 12 átomos de carbono, mais preferencialmente 6 até cerca de 10 átomos de carbono. Exemplos de radicais hidrocarbonetos aromáticos adequados incluem fenilo, naftilo, e semelhantes.

O termo “aciloxi” inclui acilo desde 1 até cerca de 8 átomos de carbono. Exemplos adequados incluem alqueniloxi, benziloxi e semelhantes. O termo “alcoxi inferior”, sozinho ou em combinação, significam radical éter alquílico em que o termo alquilo é como definido anteriormente e mais preferencialmente contendo desde 1 até cerca de 4 átomos de carbono. Exemplos de radicais éter alquílico adequados incluem metoxi, etoxi, n-propoxi, isopropoxi, n-butoxi, iso-butoxi, sec-butoxi, terc-butoxi e semelhantes. O termo “derivados carboxilo” refere-se a um derivado ácido car-boxílico, tais como os seguintes: 1. éster (COOR) em que R pode ser alquilo inferior, radical hidrocarboneto alicíclico ou radical hidrocarboneto aromático, 2. amida (CONR’R”) em que R’ e R” são seleccionados independentemente a partir do grupo que consiste em hidrogénio, hidrocarboneto linear ou alicíclico, radical hidrocarboneto aromático, hidroxi ou radical alcoxi, O termo “derivado carbonilo” é definido como:

X

II R-C-R’ R é como definido anteriormente. X pode ser oxigénio, enxofre ou N-R’ em que R’ é como definido anteriormente. O termo halogénio significa flúor, cloro, bromo ou iodo. O termo “sal farmaceuticamente aceitável” refere-se a um sal preparado por contacto com um composto de fórmula (I), com um ácido cujo anião é geralmente considerado adequado para consumo humano. Exemplos de sais far-macologicamente aceitáveis incluem os sais clorídrico, bromídrico, ioídrico, sulfato, fosfato, acetato, propionato, lactato, maleato, oxalato, malato, succinato, e tartrato e citrato. Todos estes sais podem ser preparados por meios convencionais fazendo reagir, por exemplo, o ácido apropriado com o composto correspondente de Fórmula (I).

Sais de adição de base farmaceuticamente aceitáveis de compostos de Fórmula I, II e III, incluem sais metálicos feitos a partir de alumínio, cálcio, lítio, magnésio, potássio, sódio e zinco ou sais orgânicos feitos a partir de N,N-dibenziletilenodiamina, cloroprocaína, colina, dietanolamina, etilenodiamina, meglumina (N-metilglucamina) e procaína. -13 -

Ο termo “prodroga” refere-se a um composto que é tomado mais activo in vivo. A dose diária administrada a um hospedeiro em doses singulares ou divididas pode ser em quantidades, por exemplo, diária desde 0,001 até 100 mg/Kg de peso corporal e mais usualmente 0,01 até 10 mg/Kg. As composições de dosagem única podem conter tais quantidades de seus submúltiplos para fazer a dose diária. A quantidade de ingrediente activo que pode ser combinada com os materiais transportadores para produzir uma forma de dosagem única poderão variar dependendo do hospedeiro e do particular modo de administração.

Será compreendido, porém, que o nível de dosagem específico para qualquer doente particular dependerá da uma variedade de factores incluindo a actividade do específico composto empregue, da idade, do peso corporal, saúde geral, sexo, dietas, tempo de administração, via de administração, velocidade de excreção, combinação de droga, e da gravidade da particular doença a ser tratada.

Os compostos do presente invento podem ser administrados oralmente, parenteralmente, por inalação de pulverização, rectalmente ou topicamente em formulações de dosagem única contendo transportadores, adjuvantes e veículos, como for desejado, convencionais, não tóxicos farmaceuticamente aceitáveis.

Preparações injectáveis, por exemplo, suspensões estéreis injectá-veis aquosas ou oleaginosas podem ser formuladas de acordo com a técnica con-nhecida utilizando agentes de dispersão ou humectantes adequados e agentes de suspensão. A preparação injectável estéril também pode ser uma solução ou sus- ι -14 - l/U-η

(Μ solução ou suspensão estéril injectável num diluente ou solvente não tóxico parenteralmente aceitável, por exemplo, como uma solução e, 1,3-butanodiol. Entre os veículos e solventes aceitáveis que podem ser empregues estão a água, solução de Ringer, e solução de cloreto de sódio isotónica. Adicionalmente, óleos fixos, estéreis são convencionalmente empregues como um solvente ou meio de suspensão. Para este fim qualquer óleo fixo brando pode ser empregue incluindo mono- ou digliceretos sintéticos. Adicionalmente, ácidos gordos tais como ácido oleico tem utilidade na preparação de injectáveis.

Supositórios para administração rectal da droga podem ser preparados misturando a droga com um excipiente adequado não irritante tal como manteiga de cacau e polietileno glicóis os quais são sólidos a uma temperatura ordinária mas são líquidos à temperatura rectal e serão portanto fundidos no recto e libertam a droga.

Formas de dosagem sólida para administração oral podem incluir cápsulas, comprimidos, pílulas, pós, e grânulos. Em tais formas de dosagem sólida, o composto activo pode ser misturado com pelo menos um diluente inerte tal como sucrose, lactose ou amido. Tais formas de dosagem também podem compreender, como na prática normal, substâncias adicionais diferentes de diluentes inertes, por exemplo, agentes lubricantes tais como estereato de magnésio. No caso de cápsulas, comprimidos, e pílulas, as formas de dosagem podem também compreender agents de tamponagem. Comprimidos e pílulas podem adicionalmente ser preparados com revestimentos entéricos.

Formas de dosagem líquida para administração podem incluir emulsões, soluções, suspensões, xaropes, e elixires farmaceuticamente aceitáveis contendo diluentes inertes geralmente utilizados na técnica, tais como a água. -15 - Ι/Μ

Tais composições também podem compreender adjuvantes, tais como agentes de suspensão, e agentes adoçantes, aromatizantes, e de perfume.

Enquanto os compostos do invento podem ser administrados como o agente farmaceuticamente activo único, também podem ser utiliados em combinação com um ou mais agentes farmaceuticamente activos. Quando administrados como uma combinação, os agentes terapêuticos podem ser formulados como composições separadas as quais são dadas ao mesmo tempo ou em tempos diferentes, ou os agentes terapêuticos podem ser dados como uma composição única.

Nestas estruturas e fórmulas, a ligação desenhada através de uma ligação de um anel aromático pode ser para qualquer átomo disponível no anel aromático.

Os compostos deste invento podem existir em várias formas isomé-ricas e todas tais formas isoméricas devem aqui ser incluídas. Formas tautoméri-cas também são incluídas no invento. Sais de tais isómeros e tautómeros farmaceuticamente aceitáveis também são incluídos.

Também é contemplado que Beta amino ácidos (H2N-CHR-CH2-C02H) utilizado neste invento podem ser substituídos por Homo Beta amino ácidos (H2N-CH2-CHR-C02H).

Os compostos referidos anteriormente podem ser preparados por métodos sintéticos normalizados combinados com métodos análogos à solução da síntese da fase péptido [ver: The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology (E. Gross and J. Meienhofer, eds.), Vol, 1-5, Academic Press, New York)], a revelação das quais é aqui incorporada por referência. 5.

Cinco sequências sintéticas gerais são delineadas nos Esquemas 1-

ESQUEMA I

s a. Anidrido succínico (2), piridina, DMAP.b. i-ButOCOCI, NMM . c. derivado β-Alanina d. NaOH ou LiOH.

Em que WeR2 tem valores descritos na fórmula I

No Esquema I. A aminobenzamidina 1 (isto é, Z é hidrogénio) é acoplada com um diácido alcanóico alquenoico (ambos substituídos ou não) ou alquinóico. Uma forma activada do diácido é utilizada preferencialmente. Estas formas activadas incluem anidridos, anidrido interno, cloreto de ácido ou uma das várias formas activadas como descrito nas Principies of Peptide Svnthesis. Bodansky, 1984, Springer-Verlag, a revelação da qual está aqui incorporada por referência. Um processo altamente preferido envolve a condensação de um anidrido (por exemplo, anidrido succínico 2) com um sal aminobenzamina JL A reacção é melhor conduzida num solvente polar tal como cloreto de metileno, acetonitrilo, dioxano, dimetilformamida, dimetilsulfóxido ou uma mistura de tais solventes na presença de um agente de ligação ácido tal como sódio, potássio ou carbonato de césio, trietilamina, piridina, hidreto de sódio, dimetilaminopiridina, diazabicicloundeceno, ou uma mistura de tais agentes, a temperaturas que abrangem entre 0°C e 120°C. Os compstos finais são obtidos por acoplamento dos derivados amidina 3 com um β-aminoácido protegido apropriadamente. As ligações amida são formadas utilizando reagentes de acoplamento normalizados, por exemplo, diciclohexilcarbodiimida (DCC), carbonildiimidazole (CDI), carbonato disuccinimidilo (DSC), benzotriazol-l-il-oxi-tris(dimetilamino)fosfónio hexa-fluorofosfato (BOP) ou cloroformato de isobutilo (método de anidrido misto). Quando o β-amino ácido utilizado no acoplamento foi protegido como um éster da função ácido carboxílico (4, W = alquilo, arilo, ...), os ácidos livres 5 são obtidos por um método de desprotecção adequado como descrito por T.H. Greene em “Protective Group in Organic Svnthesis”. Wiley-Interscience, 1980, a revelação do qual está aqui incorporada por referência.

ESQUEMA II

a.diácido actívado. b. H2S, piridina; Mel, acetona; NH hexametilo disilazano em éter dietílico. c. Anidrido. d. Base ou ácido. A, W e R2 têm os valores descritos na fórmula geral

Altemativamente, um aminobenzonitrilo 6, pode ser utilizado para condensação com o desejado diácido ou derivado diácido. Neste caso, o nitrilo pode ser convertido na amidina directamente ou num estádio posterior. Quando o aminobenzonitrilo é utilizado na reacção de condensação (Esquema II), o grupo ciano do intermediário 7 resultante é convertido na amidina 8 por meio de tioimi-dato com aproximadamente um rendimento quantitativo. O tioimidato é formado tratando primeiro o composto ciano com sulíureto de hidrogénio (H2S) seguido

seguido de alquilação com iodeto de metilo. Em seguida, o tratamento do tioimidato com acetato de amónio consegue a amidina como o sal (Hl). Aletmativamente, o nitrilo 7 pode ser convertido na amidina 8 pela utilização de lítio bis(trimetilsilil)amida num solvente inerte tal como éter dietílico [R.T. Boere et al, J. Organomet. Chem.. 331, 161-67, (1987)], a revelação do qual é aqui incorporada por referência. Os compostos desejados são obtidos por acoplamento do derivado amidina 8 com um β-aminoácido funcionalizado apropriadamente. As ligações amida são formadas utilizando reagentes de acoplamento

normalizados como descrito anteriormente para o Esquema I.

ESQUEMA III

fi

ll

-20-

a. Anidrido Succínico, piridina, DMAP. b. Anidrido misto, NMM. c.derivados b-Allanina d. H2S, piridina; Mel, acetona; NH40ac ou Hexametil disilazano em éter dietílico. O Esquema III ilustra a obtenção de derivados utilizando nitrilos amino como reagentes. O grupo ciano é mantido sem mudanças como um precursor para a função amidina através de duas fases de formação de ligações amida. O primeiro intermediário 10 é directamente utilizado na reacção com o amino ácido desejado. O intermediário 10 é então convertido em benzemidina. Um método de escolha para produzir a função amidina é por meio do processo tioimidato como descrito no Esquema II. É desejável, no Esquema III, preparar o intermediário li como um éster. O éster mais desejável é o éster t-butílico que pode ser desprotegido para o ácido pelo contacto com um meio acídico forte como HBr/AcOH ou ácido trifluoroacético/diclorometano.

ESQUEMA IV E V

Aminonitrilo substituído pode ser utilizado para preparar derivados N-aminobenzamidina succinilo substituída como ilustrado especificamente no Esquema IV pelo derivado cloro 14. Os beta amino ácidos podem ser ou comprados ou preparados a partir de materiais de partida disponíveis comercialmente utilizando métodos conhecidos como ilustrado no Esquema V. Os beta amino ácidos beta aril racémicos podem ser preparados a partir dos apropriados arilaldeído, ácido malónico, e acetato de amónio como se mostra no Esquema V - método 1 (Johnson and Livak J. Am. Chem. Soe. 299 (1936)]. Os beta amino ácidos beta alquil racémicos podem ser preparados a partir do correspondente alqueno e isocianato de clorossulfonilo (CSI) os quais partem através do intermediário beta lactamo como se mostra no Esquema V - método 2 [W.A. Szabo Aldrichimica Acta 23 (1977); R. Graf Abgew Chem. Intemat. Edit, 172 (1968)]. O beta 172 (1968)]. O beta lactamo pode ser aberto ao éster etílico por tratamento com ácido clorídrico anidro em etanol como se mostra no Esquema V. Por exemplo, 1,3-butadieno e 3-fenil-l-propeno feito reagir com CSI par formar o beta lactamo e seguindo a subsequente abertura com HC1 anidro em etanol foram utilizados nos Exemplos 28 e 34 respectivamente. Um método alternativo para formar beta amino ésteres é mostrado no Esquema V método 3. Nucleófílos podem ser adicionados a 4-benzoiloxi-2-azetidinona para se conseguir uma variedade de beta amino ésteres 3-substituídos depois de tratamento com HC1 anidro em etanol. Por exemplo, foi adicionado l-lítio-2-trimetilsililetina a 4-benzoiloxi-2-azetidinona para se consgeuir o beta amino éster do Exemplo 36 depois da abertura do anel [para uma reacção semelhante ver: D.H. Hua and A. Vema Tetrahedron Lett. 547-550 (1985) ou T. Kametani, Heterocvcles Vol. 17 463 (1982)]. Num outro exemplo, Exemplo 30, 4-benzoiloxi-2-azetidinona foi feita reagir com aliltrimetilsilano sob catalisador ácido Lewis [tetracloreto de titânio -K. Prasad et al., Vol. 19 Heterocvcles 2099 (1982)]. No Exemplo 28, o derivado ciclopropilo foi preparado a partir de

-22- / ESQUEMA IV

-23- ESQUEMA V Método 1 o o

«ΛΑ* * A «5 Método 2 OSOíN=C«rt> +

ΊΛ/Λ' 8 NH«OAC R»wc"OR' H %

HCl EtOH

X o u ,C-OE> >V4-'R2 7 -24- ΐΜη ~7rts- /s.

LM Método 3

CH2N2, Pd(OAc)a

Método 5

1. A partir de anidrido misto

Oxidação de Swern 2. NaBH*

Método 6

1)A partir de O^CHN, % Y * anidrido misto Ag*, EtOH f BOCN-^fi H BOCN^Sf H 2) CHjNj bocn-^Sr, A * Indica um centro quiral

Retenção da estereoquímica ESQUEMA V (continuação) Método 7

Pt^CH-HN jf PhjOH-WHí

Xe * 8-(p-fenoxifenilmetil)

jc—oxe l)Hidrogenólise 2)NaOH * Indico um centro quiral

Método 8

HidrogenaçSo Ênatiosefectiva^ ;—OPt

Y * B* H Método 9

fV

1) Hidrogenólise 2) NaOH

* Indico um centro quiral composto vinilo correspondente por tratamento com diazomeano e acetato de paládio [U. Mande et al., Tetrhedron Lett. 629 (1975)] como se mostra no Esquema V método 4. Os beta amino ácidos racémicos podem ser resolvidos util-zando métodos clássicos como descrito na literatura [E. Fischer, H. Scheibler, R. Groh Ber. 2020 (1910); E. Fisher, H. Scehibler Annalen 337 (1911)].

Beta amino ácidos quirais podem sei preparados utilizando muitas aproximações diferentes incluindo os seguintes métodos: homologação ds beta amino ácidos utilizando uma reacção Amdt-Eistert como se mostra no Esquema V método 5 [Meier and Zeller Angew. Chem. Int. Eng. 32-43 (1975)] como se mostra no Esquema F método 3 [M. Rodriguez et al Tetrahedron Lett 5153 (1990); WJ. Greenlee J. Med. Chem. 434 (1985) e suas referências]; a partir de precursores enanteomericamente puros a partir de ácido aspártico [isto é, Esquema V método 6, ver: M. Rodriguez Tetrahedron Lett. 923 (1991)]; através da adição de aminas quirais a ésteres alfa, beta insaturados transportando um auxiliar quiral como se mostra no Esquema V método 7 [J. D'Angelo and J. Maddaluno J. Am. Chem. Soe. 8112-14 (1986); através de uma hidrogenação enanteoselectiva de um ácido dehidroamino como se mostra no Esquema V método 8 [ver: Asymmetric Synthesis, Vol. 5, (J.D. Morrison, ed.) Academic Press, New York, 1985]; através da adição de aminas enanteomericamente puras a ésteres alfa, beta insaturados como se mostra no Esquema V método 9 [ver: S.G. Davies and O. Ichihara Tetrahedron: Asvmmetrv 183-186 (1991)]. Método 6 do Esquemas V foi utilizado para se obter um intermediário aldeído versátil enanteomericamente puro. O aldeído foi feito reagir com metoxilamina para formar a oxima que foi utilizada no Exemplo 40. O organome-tálico apropriado foi adicionado ao aldeído para se conseguir o álcool correspondente.

Os substituintes Z, (em que Z é hidrogénio ou halogénio, ou um radical alquilo ou radical alcoxi) podem ser introduzidos no estádio aminobenzo-nitrilo. O grupo fenilo pode ser halogenado utilizando bromo, iodo, ou cloro. O grupo alquilo pode ser introduzido por troca de halogénio lítio a temperatura baixa seguido de tempera com o aldeído apropriado [ver: W.E. Parham, C.K. Brad-sher Acct. Chem. Res. 300 (1982)], a revelação do qual está aqui incorporada por aqui incorporada por referência. O álcool resultante pode ser convertido em alquilo por hidrogenólise [Reductions in Organic Chemistry (M. Hudicky, ed.), John Wiley & Sons, New York, 1994], a revelação do qual está aqui incorporada por referência. Onde Z é hidroxi ou alcoxi, tais substituintes podem ser introduzidos por troca de halogénio lítio a baixa temperatura seguido de tempera com peróxido bis(trimetilsilil) electrofílico [(ΤΕΜΡΟ)2] M. Taddei and A. Ricci Svnthesis 633-635 (1986)], a revelação do qual está aqui incorporada por referência, a qual consegue o éter silílico. O éter silílico pode ser convertido no derivado hidroxi por tratamento com ácido clorídrico [M. Taddei and A. Ricci ibidl. O hidroxi na presença de uma base fraca (K2 CO3) e um haleto de alquilo apropriado [Rg -Hal, Allen C.F. and Gates J.W., Org. Synth. Coll. Vol 2 3 140 (1955), a revelação do qual está aqui incorporada por referência.] a qual formará 0 éster da mesma maneira. O éster pode ser selectivamente clivado na presença do éter com um equivalente de hidróxido de sódio.

Para os derivados em que R1 é diferente de hidrogénio, tais derivados podem ser obtidos utilizando um aminobenzontrilo apropriadamente substituído. Por exemplo, o N-metilaminoonitrilo pode ser feito reagir com cloreto de 3-carbonmetoxipropionilo para formar o intermediário requerido. A purificação dos compostos finais é feita por cromatografia líquida de fase reversível a alta pressão (HighPerformance Liquid Cromatographv Protein and Peptide Chemistry. F. Lottspeich, A. Henscher, K.P. Hupe, eds. Wal-ter DeGruyter, New York, 1981, a revelação do qual está qui incorporada por referência) ou cristalização.

Equivalentes comtemplados das fórmulas gerais estabelecidas ante-riormente para os inibidores de agregação de plaquetas e derivados assim como os intermediários são compostos correspondentes e tendo as mesmas proprieda- propriedades gerais em que um ou mais dos vários grupos R são variações simples dos substituintes como aí referido, por exemplo, em que R é um grupo alquilo mais alto do que o indicado. Adicionalmente, onde um substituinte é designado como, ou podendo ser, um hidrogénio, a exacta natureza química de um substituinte que é diferente de hidrogénio nessa posição, por exemplo, um radical hidrocarbilo ou um halogénio, hidroxi, amino e grupo funcional semelhante, não é crítica desde que não afecte adversamente a totalidade da actividade e/ou processo de síntese.

As reacções químicas descritas anteriormente são geralmente reveladas em termos da sua mais larga aplicação na preparação dos compostos deste invento. Ou as reacções podem ser sucessivamente executadas por modificações convencionais conhecidas dos técnicos, por exemplo, por protecção apropriada dos grupos que interferem, mudando para reagentes convencionais alternativos, por modificação de rotina das condições de reacção, e semelhantes, ou outras reacções aqui reveladas ou de outra maneira convencional, será aplicável na preparação dos compostos correspondentes deste invento. Em todos os métodos preparativos, todos os materiais de partida são conhecidos ou prontamente preparáveis a partir de materiais de partida conhecidos.

As seguintes execuções específicas preferidas, são, portanto, construídas como meramente ilustrativas e não limitam o restante da revelação de nenhuma maneira.

Os seguintes exemplos são fornecidos para ilustrar o presente invento. Todas as temperaturas expressas estão em graus centígrados. Dentro da seguinte descrição sintética e exemplos que se seguem, a abreviaturas têm os seguintes significados: -29-

CHCI3 = clorofórmio DMF = dimetilformamida DMSO = dimetilsulfóxido G = grama

MeOH = metanol

Min = minuto H = hora

Mol = mole

Mmol = mmole MW = peso molecular TLC = cromatografia d ecamada fina NMM = N-metilmorfolina RPHPLC = Cromatografia líquida de fase reversível a alta pressão TDA-1 = Tris[2-(2-metoximetoxi)etil]amina PTC = Catalisador de Fase Transfer EXEMPLO 1 Ácido 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-1,4-dioxobutil]amino]-3-fenil-propiónico

Fase 1

Preparação de ácido 4-[[4-(aminoiminometil)fenil]-amino]-4- oxobutanóico.

4-Aminobenzamidina di-HCl (25 g, 120 mmol) a qual está disponível comercialente, particularmente de Aldrich, foi adicionada a DMF seca (100 ml). A esta solução foram adicionados piridina seca (100 ml) e anidrido succínico (12 g, 120 mmol) seguido de dimetilaminopiridina (DMAP 1,5 g, 0,012 mmol). O produto precipitou depois do aquecimento durante % hora a 100°C. O produto foi filtrado, lavado com água, acetonitrilo e éter. O sólido leve foi suspenso em dioxano, foi adicionado HC1 a 4N em dioxano (100 ml) e a suspensão foi agitada durante 1 hora, filtrada e seca num secador para dar 28 g, 88% de ácido 4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-4-oxo-butanóico como um sólido amarelo esbranquiçado o qual se decompõe entre 270°C e 290°C.

Fase 2: Preparação de ácido D,L-3-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]- l,4-dioxobutil]amino]-3-fenilpropiónico

Hidrocloreto de ácido 4-[[4-(aminoiminometil)fenil]-amino]-4-

oxobutanóico preparado na Fase 1 (1 g, 3,7 mmol) foi adicionado a DMF seca (35 ml seguido de N-metilmorfolina (0,39 g, 1 eq.) e cloroformato de isobutilo (0,53 g, 3,9 mmol) a 25°C. A mistura foi agitada durante 5 minutos. Foi adicionado ácido D,L-3-amino-3-fenilpropiónico (0,67 g, 4,05 mmol) seguido de diiso-propilamina (0,68 ml, 3,9 mmol) e uma quantidade de dimetilaminopiridina. Depois de 1 hora, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto foi purificado por cromatografia de fase reversível (0,05% TFA água/acetonitrilo) e hidrolizado para dar 340 mg de sólido branco: Ή RMN (dé-DMSO) δ 2,45 (m, 2H), 2,6 (m, 2H), 2,7 (d, 2H, J=7Hz), 4,2 (dd, 1H, J=7Hz e 8Hz), 7,3 (m, 4H), 7,8 (s, 4H), 8,45 (d, 1H, J=8Hz), 9,0 (bs, 2H), 9,2 (bs, 2H), 10,4 (s, 1H); MS (FAB) m/z 383,2 (MH+). -31- /

Análise elemenlar requerida para C20H22N4O4 . F3C2O2H . H2O: C 51,36 H 4,90 N 10,90

Encontrado: C 51,67 H 4,74 N 10,72 EXEMPLO 2 Ácido 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-l,5-dioxopentil]amino]-3-fenil-propiónico

Fase 1 Preparação de ácido 4-[[4-(aminoiminometil)feni])-amino]-5-oxopentanóico. 4-Aminobenzamidina di-HCl (1 g, 4,8 mmol), foi adicionada a DMF seca (20 ml). A esta solução foram adicionados piridina seca (5 ml) e ani-drido glutárico (0,68 g, 5,3 mmol) seguido de 10 mg de dimetilaminopiridina (DMAP). O produto começou a precipitar depois do aquecimento durante Vi hora a 100°C. O aquecimento continuou durante 2 horas e foi adicionada água (25 ml) depois do arrefecimento até à temperatura ambiente. Um precipitado abundante foi filtrado e seco num secador para dar 0,8 g, 50% do produto sólido branco. H RMN (D6-DMSO) Ô 1,95 (m, 2H), 2,4 (m, 2H), 2,5 (m, 2H), 7,85 (s, 4H), 9,05 (bs, 2H), 9,25 (bs, 2H), 10,4 (s, 1H), MS (FAB) m/z 250,1 (MH+).

Fase 2:

Preparação de ácido D,L-3-[[4-[[4-(aminoiminurneLil)feíiil]amiiio]-1,5-dioxopentil] amino]-3 -fenilpropiónico 1 Alíquota de ácido 4-[[4-(aminoiminometil)fenil]-amino]-5-oxopentanóico preparado na Fase 1 (1 g, 3,5 mmol) foi dissolvida em DMF seca (35 ml) e foram adicionados N-metilmorfolina (0,39 g, 1 eq.) e cloroformato de isobutilo (0,5 g) a uma mistura arrefecida até 0°C. A mistura foi agitada durante 5 minutos. Foi adicionado ácido D,L-3-amino-3-fenilpropiónico (0,58 g) seguido de uma quantidade catalisadora de dimetilaminopiridina. Depois de 1 hora, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto foi purificado por cromatografia de fase reversível (0,056% TFA água/acetonitrilo) para dar 440 g de sólido fofo e branco: lU RMN (de-DMSO) δ 1,80 (m, 2H), 2,18 (t, 2H, J=7Hz), 2,4 (t, 2H, J=7Hz), 2,65 (d, 2H, J=7Hz), 4,2 (dd, 1H, J=7Hz e 8Hz), 7,3 (m, 4H), 7,8 (s, 4H), 8,35 (d, 1H, J=8Hz), 8,95 (bs, 2H), 9,18 (bs, 2H), 10,34 (s, 1H); MS (FAB) m/z 397,2 (MH+), 351,232.

Análise elementar requerida para C21H24N4O4 . F3C2O2H. H2Or C 52,27 H 5,15 N 10,60

Encontrado: -33- f J, EXEMPLO 3 Ácido 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-1,4-dioxobutil]amino]-butanóico

Uma alíquota de ácido 4-[[4-(aminoiminometil)fenil]-amino]-4-oxobutanóico preparado no Exemplo 1, Fase 1 (2 g) foi adicionada a DMF seca (65 ml) seguido de N-metilmorfolina (0,75 g, 1 eq.) e cloroformato de isobutilo (1 g) a 25°C. A mistura foi agitada durante 5 minutos. Foi adicionado ácido 3-aminobutírico (1,1 g, 1,1 eq) seguido de trietilamina (1,5 g, 1,3 eq) e dimetila-minopiridina. Depois de 1 hora, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto foi purificado por cromatografia de fase reversível (0,05% TFA água/acetonitrilo) para dar 750 mg de sólido branco: *H RMN (d6-DMSO) δ 1,06 (d, 3H, J=7Hz), 2,2-2,6 (m, 6H), 4,05 (m, 1H), 7,8 (m, 4H), 7,85 (d, 1H, J=8Hz), 9,05 (bs, 2H), 9,15 (bs, 2H), 10,4 (s, 1H); MS (FAB) m/z 321,1 (MH+), 236.

Análise elementar requerida para C15H20N4O4 . F3C2O2H. 0,75 H20: C 45,66 H 4,90 N 12,52

Encontrado: C 45,54 H 4,27 N 12,41 l/ÍA/ή EXEMPLO 4 -34-

3- [[4-[[4-(aminoiminometil)feniljamino]-1,4-dioxobutil]amino] butanoato de eti-lo

HN

HtN

Hidrocloreto de ácido 4-[[4-(aminoiminometil)fenil]-aino]-4-oxobutanóico preparado no Exemplo 1, Fase 1 (5 g, 18 mmol) foi adicionado a DMF seca (100 ml) seguido de N-metilmorfolina (2,2 g, 22 mmol) e cloroforma-to de isobutilo (2,8 g, 22 mmol) a 25°C. A mistura foi agitada durante 5 minutos. Foi adicionado 3-amino butirato de etilo (2,5 g, 22 mmol) seguido de dimetilami-nopiridina. Depois de 1 hora, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto foi purificado por cromatografia de fase reversível (0,05% TFA água/acetonitrilo) para dar 4,4 g de sólido branco: 'H RMN (dô-DMSO) δ 1,06 (d, 3H, J=7Hz), 2,3-2,6 (m, 6H), 4,05 (m, 3H), 7,8 (m, 4H), 7,9 (d, 1H, J=8Hz), 9,1 (bs, 2H), 9,2 (bs, 2H), 10,4 (s, 1H); MS (FAB) m/z 349,2 (MH+), 321,218.

Análise elementar requerida para C17H24N4O4 . F3C202H : C 49,35 H 5,44 N 12,11

Encontrado: C 49,18 H 5,44 N 11,98 -35- -35-

EXEMPLO 5 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-l,4-dioxobutil]amino]propanoato de etilo

Uma alíquota de hidrocloreto de ácido 4-[[4-(aminoimino-metil)fenil]-amino]-4-oxobutanóico preparado no Exemplo 1, Fase 1 (1,36 g) foi adicionada a DMF seca (50 ml) seguido de N-metilmorfolina (0,6 ml) e cloro-formato de isobutilo (0,65 ml) a 0°C sob atmosfera de azoto. A mistura foi agitada durante 5 minutos, depois 0,45 g de hidrocloreto de éster etílico β-alanina foi adicionado seguido de 0,6 mL de N-metilmorfolina. Depois de 4 horas, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto foi purificado por cromatografia de fase reversível (0,05% TFA água/acetonitrilo) para dar 4,4 g de sólido branco: ]H RMN (dõ-DMSO) δ 1,2 (t, 3H, J=7Hz), 2,45 (m, 4H), 2,6 (m, 2H, 3,25 (m, 2H), 4,05 (q, 2H, J=7Hz), 7,8 (s, 4H), 8,0 (m, 1H), 9,18 (bs, 2H), 10,4 (s, 1H); MS (ES) m/z 335,1 (MH+).

Análise elementar requerida para Ci6H22N404.1,5F3C202H . 0,5 H20: C43,21 H4,53 NI 1,20

Encontrado: -36-

c._ ./ y/yi

J C43,56 H4,70 NI 1,07 EXEMPLO 6 Ácido 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amxno]-i54.dioxobutil]amino]. propiónico

Uma porção de 3-[[4-(aminoiminometil)feniI]-amino]-l,4-dioxobutiljamino] propanoato de etilo (300 mg) foi dissolvido em 10 ml de água. Foi adicionado hidróxido de sódio (2N) até o pH atingir 10. A mistura de reacção foi deixada agitar a 25°C durante 30 minutos durante os quais apareceu um precipitado. A mistura foi acidificada com HC1 para pH 5. O precipitado foi filtrado, lavado com água e éter dietílico e foi purificado por RPHPLC (acetonitrilo/água) para dar 50 mg de um pó branco: 'H RMN (d6-DMSO) δ 2,4 (m, 4H), 2,6 (m, 2H), 3,25 (m, 2H), 7,8 (s, 4H), 8,0 (t, 1H, J=7Hz), 8,80 (bs, 2H), 9,18 (bs, 2H), 10,4 (s, 1H); MS (ES)m/z 307,1 (MH+).

Análise elementar requerida para C14H18N4O4 . F3C2O2H . 0,5 H20: C 44,86 H 4,47 N 13,08

Encontrado: C 45,03 H 4,55 N 12,99

EXEMPLO 7

Preparação de 3-rr4-rf4-('aminoiminometil')-fenil1amino1-1.4-dioxobutil]amino1- 3- fenilpropanoato de etilo

Num frasco de fundo redondo sob uma atmosfera estática de azoto seco foram misturados 1,3 g de ácido D,L-3-[[4-[[4-(aminoiminometil)-fenil]amino]-l,4-dioxobutil]anúno]-3-fenilpropanóico preparado como descrito no Exemplo 1, Fase 2, 200 ml de etanol absoluto e 10 ml de HC1 a 4N em dioxa-no. A mistura de reacção foi agitada a 25°C durante 16 horas. Os voláteis foram removidos no vácuo e o sólido branco restante foi purificado por RPHPLC (.05% TFA água/acetonitrilo gradiente; 95/5 para 30/70 durante 30 minutos) para fornecer 0,62 g do éster desejado como um sólido branco: • !H RMN (dó-DMSO) δ 1,1 (t, 3H, J=7Hz), 2,45 (m, 2H), 2,6 (m, 2H), 2,75 (d, 2H, J=7Hz), 4,0 (q, 2H, J=7Hz), 4,2 (dd, 1H, J=7Hz e 8Hz), 7,3 (m, 4H), 7,8 (s, 4H), 8,45 (d, 1H, J=8Hz), 9,05 (bs, 2H), 9,2 (bs, 2H), 10,4 (s, 1H); MS (FAB) m/z 411,2 (MH+), 135,2.

Análise elementar requerida para C22H2eN404 . F302H . H20: C 53,13 H 5,41 N 10,24

Encontrado: C 53,13 H 5,39 N 10,33 -38- ΙΑΜή / /. S/ιΛ i< pis- EXEMPLO 8 Ácido 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)-fenil]amino]-l,4-dioxobuten-(Z)-il]amino]-fenilpropanóico

0 composto foi preparado a partir de anidrido maleico, amino-benzamidina e ácido 3-amino fenilpropiónico de uma maneira semelhante à descrita no Exemplo 1. lR RMN (dô-DMSO) δ 2,45 (m, 2H), 3,6 (m, 2H), 7,05 (m, 2H), 7,85 (m, 4H), 8,6 (m, 1H), 8,9 (bs, 2H), 9,1 (d, 1H, J=7Hz), 9,25 (bs, 2H), 10,85 (s, 1H); MS (ES) m/z 381,2 (MH+), 216.

Análise elementar requerida para C20H20N4O4. F3C202H . 1,5H20: C 50,67 H 4,64 N 10,74

Encontrado: C 50,28 H 4,15 N 10,63 FVFMPLO 9 Ácido 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)-fenil]amino]-l,4-dioxobuten-(E)-il]amino]-propanóico

Fase 1 Preparação de ácido 4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-4-oxobuten(E)-óico

Num frasco de fundo redondo sob uma atmosfera estática de azoto seco foram misturados 1,4 g de fumarato de isobutilo e 1,01 g de N-metilmorfolina em 100 mL de DMF. Dihidrocloreto de 4-aminobenzamidina (2,06 g) e 2,02 g de N-metilmorfolina foram adicionados à temperatura ambiente e a mistura de reacção foi agitada a 25°C durante 30 minutos. Água e hidróxido de sódio foram adicionados a pH 10 e depois de uma hora de agitação a reacção foi neutralizada para pH 7 para precipitar o zuiterião. A filtração forneceu 1 g do desejado composto como um sólido branco: 'H RMN (ck-DMSO) δ 1,1 (t, 3H, J=7Hz), 2,45 (m, 2H), 2,6 (m, 2H), 2,75 (d, 2H, J=7Hz), 4,0 (q, 2H, J=7Hz), 4,2 (dd, 1H, J=7Hz e 8Hz), 7,3 (m, 4H), 7,8 (s, 4H), 8,45 (d, 1H, J=8Hz), 9,05 (bs, 2H), 9,2 (bs, 2H), 10,4 (s, 1H);

Fase 2 Preparação de 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-l,4-dioxobuten-(E)-il]amino]~propanoato de etilo -40-

Ácido 4- [ [4-(aminoiminometil) fenil] amino]-4-oxob uten-(E)-óico preparado no Exemplo 9, Fase 1 (1,35 g) foi adicionado a DMF seca (50 ml) seguido de N-metilmorfolina (0,55 mL e cloroformato de isobutilo (0,65 mL) sob uma atmosfera de azoto. A mistura foi agitada durante 5 minutos, e depois 0,75 g de hidrocloreto éster etílico β-alanina foi adicionado seguido de 0,55 mL de N-metilmorfolina. Depois de 2 horas, os solventes foram removidos sob pressão reduzida e o produto foi purificado por RPHPLC (água/acetonitrilo) para dar 700 mg de sólido branco.

Fase 3 Ácido 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-l,4-dioxobuten-(E)-il]amino] -propanóico

Uma porção de 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-l,4-dioxobuten-(Z)'il]amino]-propanoato de etilo (150 mg do sal trifluoroacetato) preparado como no Exemplo 9, Fase 2 foi dissolvido em 10 ml de água e foram adicionados 10 ml de acetonitrilo e 5 gotas de hidróxido de sódio a 50%. A mistura de reacção foi deixada agitar a 25°C durante 1 hora, e foi então acidificada para pH 5. O precipitado foi recolhido por filtração, lavado com acetonitrilo, água, e éter dietílico para dar 120 mg de um pó branco o qual foi liofilizado a partir de HC1 para dar o sal hidrocloreto: !H RMN (dfi-DMSO) δ 2,45 (m, 2H), 3,6 (m, 2H), 7,0 (m, 2H), 7,85 (m, 4H), 8,63(m, 1H), 8,85 (bs, 2H), 9,20 (bs, 2H), 10,9 (s, 1H); MS (ES)m/z 333,1 (MH+).

Análise elementar requerida para C14H17N4O4 .1,5 F3C202H .0,5H2O: C 41,39 H 3,98 N 11,36

Encontrado; C41,55 H3,83 NI 1,72 EXEMPLO 10

Preparação de ácido 3-[[4-[[4-(ammoiminometil)-fenil]amino]-l,4-dioxobutil]-amino]-3-(2-hidroxifenil)lpropanóico

HN

Num frasco sob azoto, o derivado succinilo preparado no

Exemplo 1, Fase 1 (5,7 g) foi activado com cloroformato (2,9 g) e acoplado com 4,2 g de hidrocloreto de 3-amino-3,4-dihidro-2-oxo-2H-l-benzopirano de uma maneira semelhante à Fase 2, Exemplo 1. A mistura de reacção foi trabalhada como habitualmente e o produto foi purificado por RPHPLC para dar 2,9 g de ácido 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-l,4-dioxobutil]amino]-3-(2-hidro-xifenil)propanóico como um pó branco: Ή RMN (de-DMSO) δ 2,5 (m, 6H), 4 (m, 1H), 6,7 (t, 1H, J=7,5Hz), 6,8 (d, 1H, J=7,5Hz), 7,05 (t, 1H, J=7,5Hz), 7,2 (d, 1H, J=7,5Hz), 7,8 (s, 4H), 8,25 (d, 1H, J=8Hz), 8,95 (bs, 2H), 9,2 (bs, 2H), 10,4 (s, 1H); MS (FAB) m/z 399,1 (MH+), 235.

Análise elementar requerida para C20H22N4O5. F3C3O2H. 2H20: -42-

L/y1

Encontrado: C 48,25 114,95 N 10,25 C 48,72 H 5,56 N 10,21

EXEMPLOU Ácido 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)-fenil]amino]-2(3)-metil-l ,4- dioxobutil]amino]-3-fenilpropiónico

Fase 1 Preparação de ácido 4-[[4-(axninoixninometil)feml]amino]-2(3)-metil-4-oxobutanóico.

Um processo semelhante à Fase 1 do Exemplo 1 utilizando 5 g de aminobenzamidina di-HCl e 2,85 g de anidrido metil succínico foi utilizado. O produto foi filtrado, lavado com água, acetonitrilo e éter. O sólido branco (4,5 g) foi suspenso em dioxano, HC1 a 4N em dioxano (100 nol) foi adicionado e a suspensão foi agitada durante 1 hora, filtrada e seca.

Fase 2 Preparação de Ácido D,L-3-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-2(3)-metil-l,4-dioxobutil]amino]-3-fenilpropiónico.

Hidrocloreto de N-2(3) metil-4-succinilamidobenzamidina preparado na Fase 1 (1,68 g, 5,8 mmol) foi activado com cloroformato de isobutilo (0,78 mL, 6 mmol) e acoplado com ácido D,L-3-amino-3-fenilpropiónico (0,96 g, 5,8 -43-

fenilpropiónico (0,96 g, 5,8 mmol) de uma maneira semelhante ao Exemplo 12. Depois do trabalho habitual, a mistura de reacção foi purificada por cromatografia de fase reversível (0,05% TFA água/acetonitrilo). Dois picos (A e B) foram isolados e liofilizados. O pico A deu 340 mg de sólido amarelo: Ή RMN (dg-DMSO) δ 1,0 (m, 3H), 2,4-2,6 (m, 4H), 2,8 (m, 2H), 4,1 (m, 1H), 7,15 (m, 4H), 7,7 (s, 4H), 8,45(m, 1H), 9,0 (bs, 2H), 9,2 (bs, 2H), 10,4 (d, 1H, J=8Hz);

MS (FAB) m/z 397,3 (MH+).

Análise elementar requerida para C23H27N4O7. F3C2O2H .1,5H20: C 51,40 H 5,25 N 10,42

Encontrado: C 51,69 H4,86 N 10,38 EXEMPLO 12

Ácido 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)-fenil]amino]-3(2)-metiI-l,4-dioxobutil]-amino]-3-fenilpropiónico

HN

O

H

COjH

M H

O

Hidrocloreto de N-2(3)Metil-4-succinilarnidobenzarnidiim prepara do na Fase 1 Exemplo 11 (1,68 g, 5,8 mmol) foi activado com cloroformato de isobutilo (0,78 mL, 6 mmol) e acoplado com ácido D,L-3-fenipropiónico (0,96 g, 5,8 mmol) de uma maneira semelhante à Fase 2 do Exemplo 11. Depois do trabalho habitual, a mistura de reacção foi purificada por cromatografia de fase reversível (0,05% TFA água/acetonitrilo). Dois picos (A e B) foram isolados e liofili-zados. O Pico A foi descrito no Exemplo 11, Fase 2. O Pico B isolado da mistura de reacção em bruto do Exemplo 11, Fase 2 deu 540 mg de sólido branco:

'H RMN (dô-DMSO) δ 1,05 (m, 3H), 2,2-2,6 (m, 5H), 2,85 (m, 1H), 5,15 (m, 1H), 7,2 (m, 1H), 7,25 (s, 4H), 7,8 (s, 4H), 8,45 (m, 1H), 8,75 (bs, 2H), 9,15 (bs, 2H), 10,4 (bs, 1H); MS (FAB) m/z 397,3 (MH+). EXEMPLO 13

3-[[4-[[4-(aminoiminometil)-fenil]amino]-l,4-dioxobutil]amino]-pentanodioato de dimetilo o

Fase 1 Preparação de 3-aminoglutarato de dimetilo 3-oxoglutarato de dimetilo (lOg, 57 mraol) foi adicionado a metanol (225 ml) seguido de formato de amónio (36 g, 570 mmol) a 25°C. Depois de 24 horas, o metanol foi removido no vácuo para deixar uma massa branca. Foi adicionado cloreto de metileno e a mistura foi filtrada. O cloreto de metileno foi evaporado resultando num óleo que foi dissolvido em HC1 a IN (200 ml) e extraído com éter (100 ml). A camada de éter foi descartada e a camada aquosa foi tomada básica utilizando K2C03 sólido. O produto extraído em cloreto de metileno, foi seco sobre Na2S04, e evaporado para dar 3-aminoglutarato de dimetilo (7,5 g). ]H RMN (d^-DMSO) δ 1,76 (bs, 2H), 2,45 (dd, 4H, J=8,lHz, 16 Hz), 3,69 (s, 6H), 5,45 (m, 1H); MS (FAB) m/z 176,0 (MH+).

Fase 2 Preparação de 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)-fenil]amino]-l,4-dioxobutil]-amino]-pentanodioato de dimetilo

Hidrocloreto de ácido 4-[[4-(aminoiminometil)fenil]-amino]-4-oxobutanóico preparado Exemplo 1, Fase 1 (4,6 g, 17 mmol) foi adicionado a DMF seca (225 ml) seguido de N-metilmorfolina (1,2 g, 17 mmol) e cloro formato de isobutilo (2,3 g, 17 mmol) a 25°C. A mistura foi agitada durante 5 minutos. 3-aminoglutarato de dimetilo (3,0 g, 17 mmol) foi adicionado seguido de dimeti-laminopiridina. Depois de 1 hora, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto foi purificado por cromatografia de fase reversível (0,05% TFA água/acetonitrilo) para resultar em 3,5 g de um sólido branco 'H RMN (ds-DMSO) δ 2,37 (t, 2H, J=7,3Hz), 2,55 (m, 2H), 2,57 (t, 2H, J=7,lHz), 3,57 (s, 6H), 4,35 (m, 1H), 7,79 (s, 4H), 7,99 (d, 1H, J=8,lHz), 9,1 (bs, 2H), 9,19 (bs,2H),10,42 (s, 1H); MS (FAB) m/z 393,2 (MH+).

Análise elementar requerida para CigH^N^ . F3C2O2H .H2O: C 47,42 H4,91 N 11,14

Encontrado: C 47,12 H 4,97 N 10,99 EXEMPLO 14 Ácido 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)-fenil]amino]-1,4-dioxobutil]amino]-pentano-dióico, éster monometílico

3- [[4- [ [4-(aminoiminometil)fenil] amino] -1,4-dioxobutil] amino]-pentanodioato de dimetilo preparado no Exemplo 13, Fase 2 (700 mg) foi adicionado a água/acetonitrilo (20 ml) seguido de hidróxido de lítio (100 mg) a 25°C, A mistura foi agitada durante 30 minutos. O decorrer da reacção foi monitorada por RPHPLC. Depois de uma quantidade satisfatória de monoéster se ter formado a reacção foi neutralizada com TFA e purificada por RPHPLC (0,05% TFA água/acetonitrilo) para resultar em 460 mg de um sólido branco: -47- -47-

£ /, 2Α/·^· 'Η ΚΜΝ (dó-DMSO) δ 2,39 (t, 2Η, J=7,3Hz), 2,55 (m, 2Η), 2,57 (t, 1H, J=7,lHz), 3,57 (s, 3H), 4,32 (m, 1H), 7,78 (s, 4H), 7,99 (d, 1H, J=8,lHz), 8,92 (bs, 2H), 9,16 (bs, 2H), 10,39 (s, 1H); MS (FAB) m/z 379,2 (MH+).

Análise elementar requerida para C17H22N4O6. F3C2O2H. H20: C 45,92 H 4,63 N 11,28

Encontrado: C 45,88 H 4,34 N 10,69 EXEMPLO 15 Ácido 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)-fenil]amino]-1,4-dioxobutil]amino]-pentano-dióico o

OJ

0

OH 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-l,4-dioxobutil]amino]-pentanodioato de dimetilo preparado no Exemplo 13, Fase 2 (700 mg) foi adicionado a água/acetonitrilo (20 ml) seguido de hidróxido de lítio (100 mg) a 25°C. A mistura foi agitada durante 30 minutos. O decorrer da reacção foi monitorada por RPHPLC. Depois de uma quantidade satisfatória de monoéster se ter formado a -48-

se ter formado a reacção foi neutralizada com TFA e purificada por RPHPLC (0,05% TFA água/acetonitrilo) para resultar em 620 mg de um sólido branco: 'H RMN (de-DMSO) 5 2,38 (t, 2H, J=7,3Hz), 2,44 (d, 2H, J=6,4Hz), 2,56 (t, 2H, J=7,3Hz), 4,32 (m, 1H), 7,78 (s, 4H), 7,99 (d, 1H, J=8,lHz), 8,92 (bs, 2H), 9,16 (bs, 2H), 10,39 (s, 1H); MS (FAB) m/z 365,2 (MH+).

Análise elementar requerida para C16H2oN406. F3C2O2H . H20: C 43,54 H 4,64 N 11,13

Encontrado: C43,40 H4,52 NI 1,18 EXEMPLO 16 Ácido 3-(R)-[[4-[[4-(aminoiminometil)-fenil]amino]-l,4-dioxobutil]amino]-4-cianobutanóico 0

OM m

NH

CN 0

HgN 0

Fase 1 Preparação de 3-amino-4-ciano butirato de benzilo 3-N-t-Boc-amino-4-hidroxi-(3S)-butirato de benzilo (20 g, 64,77

mmol) foi dissolvido em 200 ml de cloreto de metileno seguido de trietilamina (9,8 g, 97 mmol) e arrefecido para 0°C. Foi adicionado cloreto de metanossulfo-nilo (9,6 g, 84 mmol) e a solução foi agitada durante 2-3 horas. Depois deste tempo foi adicionado mais cloreto de metileno (100 ml) e a solução foi lavada com água, e seca sobre MgSQt para dar 27 g de mesilato depois da remoção do solvente. Ή RMN (d^-DMSO) δ 1,45 (s, 9H), 2,71 (d, 2H, J=6Hz), 2,95 (s, 3H), 4,37 (bs, H), 4,7 (bs, 2H), 5,15 (s, 2H), 7,37 (bs, 5H). O mesilato (27 g, 64 mmol) isolado anteriormente foi adicionado a

DMF seca seguido de KCN, 18-crown-6, DMAP catalítico e aquecido a 70°C durante 2-3 horas. Depois da reacção estar completa, foi adicionada água e o produto foi extraído com éter (2 x 150 ml). Os extractos de éter foram lavados com água, depois secos sobre MgSO,*, e o solvente foi evaporado para dar 3-N-t-Boc-amino-4-ciano(3S)-butirato de benzilo (22 g). O 3-N-t-Boc-amino-4-ciano-(3S)-butirato de benzilo em bruto foi dissolvido em dioxano (100 ml), e depois foi adicionado a esta solução HC1 a 4N em dioxano. Depois de 6 horas, o dioxano foi removido no vácuo para deixar um óleo que foi dissolvido em água (200 ml), e foi extraído com éter (100 ml). A camada de éter foi descartada e a camada aquosa foi tomada básica utilizando K2C03 sólido. O produto foi extraído em cloreto de metileno, seco sobre Na2S04, e evaporado para dar 3-amino-4-ciano-(3S)-butirato de benzilo (8 g). - 50 - l/UUj í^7'' 'h RMN (dé-DMSO) 8 1,6 (bs, 2H), 2,5-2,7 (m, 4H), 3,5 (m, 1H), 5,16 (s, 2H), 7,36 (bs, 5H), 4,05 (m, 3H), 7,8 (s, 4H). MS (FAB) iti/z 219,0 (MH+).

Fase 2 Preparação de ácido 3-(R)-[[4-[[4-(ammoiminometil)-feral]amino]-l,4-dioxobutil]aminobutil]amino]-4-cianobutanóico.

Hidrocloreto de ácido 4-[[4-(aminoiminometil)fenil]-amino]-4-oxobutanóico preparado Exemplo 1, Fase 1 (5,1 g, 18,9 mmol) foi adicionado a DMF seca (250 ml) seguido de N-metilmorfolina (1,8 g, 18,9 mmol) e clorofor-mato de isobutilo (2,7 g, 18,9 mmol) a 25°C. A mistura foi agitada durante 5 minutos. 3-amino-4-ciano-butirato de benzilo (3,0 g, 18,9 mmol; da fase 1) foi adicionado seguido de dimetilaminopiridina. Depois de 1 hora, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto foi purificado por RPHPLC (0,05% TFA água/acetonitrilo) para resultar em 3,5 g de um sólido branco. Uma porção deste material foi então sujeita a condições de saponificação como previamente descrito e purificado por cromatografia de fase reversível (água/acetonitrilo) para resultar em 425 mg de um sólido branco. 'H RMN (de-DMSO) δ 2,44 (m, 2H), 2,5 (m, 2H), 2,60 (m, 2H), 2,74 (dd, 2H, J=6,9,11,8Hz), 4,25 (m, 1H), 7,78 (s, 4H), 8,29 (d, 1H, J=7,7Hz), 8,89 (bs, 2H), 9,14 (bs, 2H),10,40 (s, 1H); MS (FAB) m/z 346,1 (MH+).

Análise elementar requerida para C16H19N5O4. F3C2O2H .H20: C 46,15 H 4,48 N 14,95

Encontrado: -51 - l/Mj C 46,15 H4,2S N 14,76 EXEMPLO 17 (±)-3-[[4-[[4-(aminoiminometil)-fenil]amino]-1,4-dioxobutil]amino]-heptanodioato de dietilo h2n

0

Fase 1 Preparação de 3-aminopimaleato de dietilo 3-oxopimaleato de dietilo (10 g, 43 ramol) foi adicionado a metanol (225 ml), seguido de formato de amónio (27,4 g, 430 mmol) e NaBH3CN (2,7 g, 43 mmol) a 25°C. Depois de 24 horas, o metanol foi removido no vácuo para deixar uma massa branca. Foi adicionado cloreto de metileno e a mistura foi filtrada. O cloreto de metileno foi evaporado resultando num óleo que foi dissolvido em HC1 a IN (200 ml) e extraído com éter (100 ml). A camada de éter foi descartada e a camada aquosa foi tomada básica utilizando K2C03 sólido. O produto extraído em cloreto de metileno, foi seco sobre Na2S04, e evaporado para dar 3-aminopimaleato de dietilo (7,5 g). 'H RMN (de-DMSO) Ô 1,25 (t, 3H, J=7Hz), 1,26 (t, 3H, J=8Hz), 1,45 (m, 2H), 1,7 (m, 2H), 2,01 (bs, 2H), 2,45 (m, 2H), 3,2 (m, 1H), 4,13 (q, 4H, J=8Hz) MS (FAB) m/z 132,1 (MH+) 186,2. -52- l/íyU/: ~2λΧ·^'τ~-,

Fase 2 Preparação de 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)-feml]amino]-l ,4-dioxobutil] amino]-heptanodioato de dietilo

Hidrocloreto de ácido 4-[[4-(aminoiminometil)fenil]-amino]-4-

oxobutanóico preparado Exemplo 1, Fase 1 (5,0 g, 18,5 irnnol) foi adicionado a DMF seca (250 ml) seguido de N-metilmorfolina (2,2 g, 18,5 mmol) e clorofor-mato de isobutilo (2,7 g, 18,5 mmol) a 25°C. A mistura foi agitada durante 5 minutos. 3-aminopimaleato de dietilo (4,25 g, 18,5 mmol; da Fase 1) foi adicionado seguido de dimetilaminopiridina. Depois de 1 hora, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto foi purificado por RPHPLC (0,05% TFA água/acetonitrilo) para resultar em 4,1 g de um sólido branco: 'H RMN (dg-DMSO) δ 1,15 (t, 3H, J=7,3Hz), 1,16 (t, 3H, J=8Hz), 1,4 (m, 2H), 2,50 (t, 2H, J=7,lHz), 4,04 (m, 5H), 7,78 (s, 4H), 7,99 (d, 1H, J=12,4Hz), 8,95 (bs, 2H), 9,15 (bs,2H), 10,40 (s, 1H); MS (FAB) m/z 449,0 (MH+).

Análise elementar requerida para C22H32N4O6 . F3C2O2H .H2O: C 50,44 H 5,95 N 9,80

Encontrado: C 50,33 H 6,02 N9,67 -53-

Lu» EXEMPLO 18 Ácido 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)-fenil]amino]-l,4-dioxobutil]amino]-heptano-dióico

3-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-l,4-dioxobutil]-amino]heptanodioato de dietilo preparado no Exemplo 17, Fase 2 (700 mg) foi adicionado a água/acetonitrilo (20 ml) seguido de hidróxido de lítio (100 mg) a 25°C. A mistura foi agitada durante 30 minutos. O decorrer da reacção foi monitorada por RPHPLC. Depois de monoéster satisfatório se ter formado a reacção foi neutralizada com TFA e purificada por cromatografia de fase reversível (0,05% TFA água/acetonitrilo) para resultar em 550 mg de um sólido branco: ’H RMN (de-DMSO) δ 1,4 (m, 2H), 2,50 (t, 2H, J=7,lHz), 2,49 (m, 4H), 2,58 (t, 2H, J=7,lHz), 4,02 (m, 1H), 7,77 (s, 4H), 7,78 (d, 1H, J=5,2Hz), 8,90 (bs, 2H), 9,14 (bs, 2H), 10,39 (s, 1H); MS (FAB) m/z 393,4 (MH+).

Análise elementar requerida para C18H24N406 . F3C2O2H . H20: C 46,60 H 5,04 N 10,87

Encontrado: C 46,64 H 5,11 N 10,77 i -54-

EXEMPLO 19 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)-feml]amino]-l,4-dioxobutil]amino]-hexanodioato de dietilo «2n

NH o

Fase 1 Preparação de 3-aminoadipato de dietilo 3-oxopimaleato de dietilo (10 g, 46 mmol) foi adicionado a metanol (225 ml), seguido de formato de amónio (27,4 g, 460 mmol) e NaBH3CN (2,7 g, 46 mmol) a 25°C. Depois de 24 horas, o metanol foi removido no vácuo para deixar uma massa branca. Foi adicionado cloreto de metileno e a mistura foi filtrada. O cloreto de metileno foi evaporado resultando num óleo que foi dissolvido em HC1 a IN (200 ml) e extraído com éter (100 ml). A camada de éter foi descartada e a camada aquosa foi tomada básica utilizando K2CO3 sólido. O produto foi extraído em cloreto de metileno, foi seco sobre Na2S04, e evaporado para dar 3-aminoadipato de dietilo (7,5 g). ‘H RMN (d6-DMSO) δ 1,25 (t, 3H, J=8Hz), 1,26 (t, 3H, J=8Hz), 1,8 (m, 2H), 1,55 (bs, 2H), 3,18 (m, 1H), 4,13 (q, 4H, J=8Hz), 4,15 (q, 4H, J=8Hz) MS (FAB) m/z 218,3 (MH+). -55 _ Ι/Λη

Fase 2 Preparação de 3-[[4-[[4-(aniinoimiiiometil)-fenÍl]amino]-1,4-dioxobutiI]-amino]-hexanodioato de dietilo.

Hidrocloreto de ácido 4-[[4-(aminoiminometil)fenil]-amino]-4-oxobutanóico preparado Exemplo 1, Fase 1 (5,0 g, 18,5 mmol) foi adicionado a DMF seca (250 ml) seguido de N-metilmorfolina (1,8 g, 18,5 mmol) e clorofor-mato de isobutilo (2,7 g, 17 mmol) a 25°C. A mistura foi agitada durante 5 minutos. 3-aminoadipato de dietilo (4,0 g, 18,5 mmol) foi adicionado seguido de dime-tilaminopiridina. Depois de 1 hora, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto foi purificado por cromatografia de fase reversível (0,05% TFA água/acetonitrilo) para resultar em 3,0 g de um sólido branco: ]H RMN (dô-DMSO) δ 1,14 (t, 6H, J=7Hz), 1,55 (m, 1H), 1,7 (m, 1H), 2,3 (m, 2H), 2,57 (m, 2H), 2,67 (m, 2H), 4,02 (q, 4H, J=7Hz), 4,03 (m, 1H), 7,79 (s, 4H), 7,99 (d, 1H, J=8,lHz), 9,06 (bs, 2H), 9,15 (bs, 2H), 10,22 (s, 1H); MS (FAB) m/z 435,2 (MH+).

Análise elementar requerida para C2iH30N4O6 . F3C202H .H20: C 49,55 H 5,75 N 10,05

Encontrado: C 49,36 H 5,42 N9,92 EXEMPLO 20 Ácido 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)-fenil]amino]-l,4-dioxobutil]ammo]-hexano-dióico

ΝΜ ο 3 - [ [4-[ [4-(aminoiminometil)fenil] amino] -1,4-dioxobutil] -amino]hexanodioato de dietilo (700 mg) preparado no Exemplo 19, Fase 2 foi adicionado a água/acetonitrilo (20 ml) seguido de hidróxido de lítio (150 mg) a 25°C. A mistura foi agitada durante 30 minutos. O decorrer da reacção foi monitorada por RPHPLC. Depois do produto satisfatório se ter formado a reacção foi neutralizada com TFA e purificada por cromatografia de fase reversível (.05% TFA água/acetonitrilo) para resultar em 350 mg de um sólido branco: lH RMN (cVDMSO) δ 1,55 (m, 1H), 1,7 (m, 2H), 2,57 (m, 2H), 2,67 (m, 2H), 4,03 (m, 1H), 7,79 (s, 4H), 7,99 (d, 1H, J=8Hz), 8,86 (bs, 2H), 9,17 (bs, 2H), 10,2 (s, 1H); MS (FAB) m/z 379,2 (MH+).

Análise elementar requerida para C17H22N4O6 . F3C202H . H20: C 45,51 H 4,79 N 11,18

Encontrado: C 45,57 H 4,49 N 11,18 EXEMPLO 21 Ácido 3-(S)-[[4-[[4-(aminoiminometil)-fenil]amino]-l,4-dioxobutil]ammo]-4-(hidroxiamino)-4-oxobutanóico ο ΜΗ

Fase 1 Preparação de 3-amino-4-oxo-(N-hidroxilamino)-(S)-butirato de benzilo Ácido N-t-Boc-aspártico, éster β-benzílico (10 g, 3,0 mmol) foi dissolvido em 100 ml de cloreto de metileno e adicionado gota a gota durante um eríodo de 10 minutos a uma solução de DCC (6,3 g, 3,0 mmol) em cloreto de metileno (20 ml) a 25°C sob uma atmosfera de N2. Depois da solução ter agitado durante 0,5 hora, trimetilsilil hidroxilamina (3,0 g, 3 mmol) foi adicionado à mistura de reacção seguido de DMAP (0,5 g). Depois da reacção estar completa, foi adicionado éter à mistura, e foi removido DCU por filtração através de uma almofada de celite. A solução foi concentrada para dar um óleo que foi dissolvido em dioxano. A essa solução foi adicionado HC1 a 4N em dioxano (20 ml). O produto foi isolado por filtração (4g) assim como o seu sal hidrocloreto. *H RMN (d6-DMSO) Ô 2,95 (m, 2H), 4,36 (m, 1H), 5,12 (d, 2H, J=7Hz), 7,37 (bs, 5H).

Fase 2 Ácido 3-(S)-[[4-[[4-(aminoiminometil)-fenil]amino]-1,4-dioxobutil]-amino]-4-(hidroxiamino)-4-oxobutanóico.

Hidrocloreto de ácido 4-[[4-(aminoiminometil)fenil]-amino]-4-oxobutanóico preparado no Exemplo 1, Fase 1 (5,0 g, 18,5 mmol) foi adicionado a DMF seca (250 ml) seguido de N-metilmorfolina (1,8 g, 18,5 mmol) e cloro-formato de isobutilo (2,7 g, 18,5 mmol) a 25°C. A mistura foi agitada durante 5 -58-

-u durante 5 minutos. Hidrocloreto 3S-amino-4-oxo-4-(N-hidruxilammu)buliralu de benzilo (3,0 g, 18,5 mmol; da fase 1) foi adicionado seguido de dimetilaminopiridina. Depois de 1 hora, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto foi purificado por cromatografia de fase reversível (.05% TFA água/acetonitrilo) para resultar em 2,1 g de um sólido branco. Uma porção deste material foi então sujeita a condições de saponificação como previamente descrito e purificado por cromatografia de fase reversível (água/acetonitrilo) para resultar em 225 mg de um sólido branco. ’H RMN (d^-DMSO) δ 2,44 (m, 3H), 2,60 (m, 2H), 2,4 (m, 1H), 4,49 (m, 1H), 6,98 (d, 1H, J=8,0Hz), 7,78 (s, 4H), 8,62 (d, 1H, J=7,7Hz), 8,94 (bs, 2H), 9,16 (bs, 2H),10,20 (s, 1H); MS (FAB) m/z 348,1 (MH+).

Análise elementar requerida para C15H19N5O5. F3C202H ,H20: C 44,25 H 3,90 N 15,18

Encontrado: C 44,13 H 4,07 N 13,68 u - 59 - (/Wíí MS' EXEMPLO 22 Ácido 3-(R)-[[4-[[4-(amínoiminometil)-fenil]amino]-1,4-dioxobutil]amino]-4-azidobutanóico

Fase 1 Preparação de 3-amino-4-azido butirato de benzilo O mesilato (27 g, 64 mmol) da Fase 1, Exemplo 16 foi adicionado a DMF seca seguido de NaN3 (12, 6 g, 194 mmol), TDA-1 (0,5 g), DMAP (1,0 g), e foi aquecido a 70°C durante 2-3 horas. Depois da reacção estar completa, foi adicionada água e o produto foi extraído com éter (2 x 150 ml). Os extractos de éter foram lavados com água, depois secos sobre MgS04, e o solvente foi evaporado para dar 3-N-t-Boc-amino-4-azido-(3S)-butirato de benzilo (20 g). O 3-N-t-Boc-amino-4-azido-(3S)-butirato de benzilo em bruto foi dissolvido em dioxano (100 ml), e a esta solução foi adicionado HC1 a 4N em dioxano. Depois de 6 horas, o dioxano foi removido no vácuo para deixar um óleo para dar hidrocloreto 3-amino-4-azido-(3S)-butirato de benzilo (11 g). Ή RMN (dg-DMSO) δ 2,9 (dd, 2H, J=5,65, 15Hz), 3,83 (bs, 2H), 4,2 (m, 1H), 5,16 (s, 2H), 7,36 (bs, 5H); -60-

MS (FAB) m/z 235,1 (MH+).

Fase 2 Preparação de ácido 3-(R)-[[4-[[4-(aminoiminometil)-fenil]amino]-l,4-dioxobutil] aminobutil] amino]-4-azidobutanóico.

Hidrocloreto de ácido 4-[[4-(aminoiminometil)fenil]-amino]-4-oxobutanóico preparado no Exemplo 1, Fase 1 (4,6 g, 18,5 mmol) foi adicionado a DMF seca (250 ml) seguido de N-metilmorfolina (1,8 g, 18,5 mmol) e cloro-formato de isobutilo (2,8 g, 17 mmol) a 25°C. A mistura foi agitada durante 5 minutos. Hidrocloreto de 3-amino-4-azido-(3S)-butirato de benzilo (1 eq.; da fase 1, Exemplo 22) foi adicionado seguido de dimetilaminopiridina. Depois de 1 hora, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto foi purificado por cromatografia de fase reversível (água/acetonitrilo) para resultar em 3,0 g de um sólido branco. Uma porção (750 mg) do éster benzílico sujeita a condições de saponificação como previamente descrito e purificado por cromatografia de fase reversível (água/acetonitrilo) para resultar em 340 mg de um sólido branco. *H RMN (de-DMSO) δ 2,44 (m, 2H), 2,6 (m, 2H), 3,35 (bs, 2H), 4,18 (m, 1H), 7,78 (s, 4H), 8,1 (d, 1H, J=8Hz), 8,27 (bs, 2H), 9,15 (bs, 2H), 10,40 (s, 1H); MS (FAB) m/z 362,1 (MH+).

Análise elementar requerida para Ci5Hi9N704 . F3C202H .H20: C 42,63 H 4,18 N 20,48

Encontrado: C 42,49 H4,06 N 20,06 EXEMPLO 23 [[[4-[[4-(aminoiimnonxetil)-fenil]amino]-l,4-dioxobutil]amino]metil]-propanodioato de dimetilo

Fase 1 Preparação de 2-(aminometil)malonato de dimetilo

Malonato de dimetilo (10 g, 75,8 mmol) foi adicionado a DMF/água (70:30), K2CO3 (15 g, 100 mmol), PTC (1 g), ΝΑΙ (1 g), e bromoace-tato terc-butílico (14,7 g, 75,8 mmol) a 25°C. A mistura foi vigorosamente agitada durante 24 horas. Depois deste tempo foi adicionada água (250 ml) e o produto foi extraído com éter e foi seco sobre MgS04. Um óleo que resultou depois da concentração da solução foi dissolvido em cloreto de metileno (80 ml) e TFA (20 ml), e a mistura resultante foi agitada durante 3-6 horas. Depois deste tempo, a solução foi concentrada no vácuo para dar um óleo viscoso (8g). Uma porção deste óleo (5 g, 26,3 mmol) foi dissolvida em DMF (50 ml). Difenil fosforilazida (7,5 g, 26,3 mmol) foi adicionado e a mistura resultante foi arrefecida para 0°C. Foi adicionada trietilamina (2,7 g, 26,3 mmol) e a solução foi agitada durante 2 horas. Depois deste tempo, foi adicionada água (200 ml) e a acil azida foi extraída em éter, foi seca sobre MgS04, e 0 solvente foi removido. O óleo foi dissolvido em dioxano seguido da adição de HC1 a 4N em dioxano (10 ml). O produto, um sólido branco, depressa se separou assim como o seu sal hidrocloreto (3g).

'η RMN (cVDMSO) δ 3,25 (m, 2H), 3,70 (s, 3H), 4,0 (t, 1H, J-7Hz), 8,4 (bs, 2H) MS (FAB) m/z 162,2 (MH+), 145,2,133,3.

Fase 2 Preparação de [[[4-[[4-(aminoiminometil)-fenil]amino]-l,4-dioxobutil]-amino] -propanodioato de dimetilo

Hidrocloreto de ácido 4-[[4-(ammoiminometil)fenil]-ammo]-4- oxobutanóico preparado no Exemplo 1, Fase 1 (5,0 g, 18,5 mmol) foi adicionado a DMF seca (250 ml) seguido de N-metilmorfolina (1,7 g, 18,5 mmol) e cloro-formato de isobutilo (2,8 g, 17 mmol) a 25°C. A mistura foi agitada durante 5 minutos. 2-(aminometil)malonato de dimetilo (da Fase 1; leq) foi adicionado seguido de dimetilaminopiridina. Depois de 1 hora, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto foi purificado por cromatografia de fase reversível (água/acetonitrilo) para resultar em 2,0 g de um sólido branco:

‘H RMN (dé-DMSO) δ 2,57 (m, 2H), 2,67 (m, 2H), 3, 47 (m, 2H), 3,5 (s, 6H), 3,51 (m, 1H), 7,79 (s, 4H), 8,1 (t, 1H, J=7Hz), 8,7 (bs, 2H), 9,09 (bs, 2H), 10,32 (s, 1H); MS (FAB) m/z 379,0 (MH+).

Análise elementar requerida para C17H22N4O6. F3C2O2H .H20: C 45,50 H 4,72 N 11,18

Encontrado: C 45,20 H 4,66 N 11,17 -63-

EXEMPLQ 24 Ácido [[[4-[[4-(aminoiminometil)-fenil]amino]-l,4-dioxobutil]amino]-propano-dióico o o

[[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-l,4-dioxobutil]- aminometiljpropanodioato de dimetilo preparado no Exemplo 23, Fase 2 (500 mg) foi adicionado a água/acetonitrilo (20 ml) seguido de hidróxido de lítio (100 mg) a 25°C. A mistura foi agitada durante 30 minutos. O decorrer da reacção foi monitorada por RPHPLC. Depois do produto satisfatório se ter formado a reacção foi neutralizada com TFA e purificada por cromatografia de fase reversível (0,5% TFA água/acetonitrilo) para resultar em 350 mg de um sólido branco: 'H RMN (dô-DMSO) δ 2,41 (m, 2H), 2,57 (m, 2H), 3,35 (m, 1H), 3,47 (m, 2H), 7,79 (s, 4H), 8,1 (t, 1H, J=6,lHz), 7,78 (s, 4H), 8,02 (m, 1H), 8,87 (bs, 2H), 9,15 (bs, 2H), 10,39 (s, 1H); MS (FAB) m/z 350,0 (MH+).

Análise elementar requerida para Ci5Hi8N406 . F3C202H. H20: C 44,32 H 4,32 N 13,66

Encontrado; EXEMPLO 25 3-[[4-[[4-(aminoiminometÍl)-fenil]amino]-l,4-dioxobutil]ammo]-4-metoxi-pentanoato de metilo

Fase 1 Preparação de 5-metoxi-3-aminovalerato de metilo 5-metoxi-3-oxovalerato de metilo (10 g, 62,5 mmol) foi adicionado a metanol (200 ml), seguido de formato de amónio (39,4 g, 620 mmol) e NaBH3CN (3,9 g, 46 mmol) a 25°C. Depois de 24 horas o metanol foi removido no vácuo para deixar uma massa branca. Cloreto de metileno foi adicionado e a mistura foi filtrada. O cloreto de metileno foi evaporado resultando num óleo que foi dissolvido em HC1 a IN (200 ml) e extraído com éter (100 ml). A camada de éter foi descartada e a camada aquosa foi tomada básica utilizando K2C03 e evaporada para dar cloreto de metileno seca sobre Na2S04 e evaporada para dar 5-metoxi-3-aminovalerato de metilo (7,5 g). ’H RMN (dô-DMSO) Ô 1,25 (m, 3H), 1,66 (m, 2H), 1,86 (bs, 2H), 2,9 (Μ, 2H), 3,33 (s, 3H), 3,39 (Μ, 2H), 3,7 (s, 3H) MS (FAB) m/z 161,2 (MH+). -65-

Fase 2 Preparação de 3-[[4-[[4-(axiiinoiininometil)-feml]amino]-l,4-dioxobutil]-amino]-4-metoxipentanoato de metilo

Hidrocloreto de ácido 4-[[4-(aminoiminometil)fenil]-amino]-4-oxobutanóico preparado no Exemplo 1, Fase 1 (5,0 g, 18,5 mmol) foi adicionado a DMF seca (250 ml) seguido de N-metilmorfolina (1,7 g, 18,5 mmol) e cloro-formato de isobutilo (2,8 g, 17 mmol) a 25°C. A mistura foi agitada durante 5 minutos. 5-metoxi-3-aminovalerato de metilo (3,0 g, 18,5 mmol) foi adicionado seguido de dimetilaminopiridina. Depois de 1 hora, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto foi purificado por cromatografia de fase reversível (.05% TFA água/acetonitrilo) para resultar em 2,8 g de um sólido branco: Ή RMN (de-DMSO) δ 1,74 (m, 2H), 2,4 (m, 4H), 2,6 (m, 2H), 3,16 (s, 3H), 3,33 (m, 2H), 3,56 (s, 3H), 4,12 (m, 1H), 7,78 (s, 4H), 7,81 (d, 1H, J=8,5Hz), 9,02 (bs, 2H), 9,15 (bs, 2H), 10,40 (s, 1H); MS (FAB) m/z 379,5 (MH+).

Análise elementar requerida para CigE^l^Os. F3C2O2H .H2O: C 48,78 H 5,49 NI 1,38

Encontrado: C 48,35 H 5,55 N 10,32 EXEMPLO 26 Ácido 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)-fenil]amino]-l,4-dioxobutil]amino]-4- metoxipentanóico -66-

ο

NH 3“[[4-[[4-(ammoiminometil)fenil]amino]-l,4-dioxobutil]amino]-4-metoxipropanoato de metilo preparado no Exemplo 25, Fase 2 (500 mg) foi adicionado a água/acetonitrilo (20 ml) seguido de hidróxido de lítio (100 mg) a 25°C. A mistura foi agitada durante 30 minutos. O decorrer da reacção foi monitorada por RPHPLC. Depois do produto satisfatório se ter formado a reacção foi neutralizada com TFA e purificada por cromatografia de fase reversível (água/acetonitrilo) para resultar em 450 mg de um sólido branco: Ή RMN (dô-DMSO) δ 1,74 (m, 2H), 2,4 (m, 4H), 2,6 (m, 2H), 3,16 (s, 3H), 3,33 (m, 2H), 4,12 (s, 1H), 7,78 (s, 4H), 7,81 (d, 1H, J=8,5Hz), 9,02 (bs, 2H), 9,15 (bs, 2H), 10,40 (s, 1H); MS (FAB) m/z 365,4 (MH+).

Análise elementar requerida para C17H24N4O5. F3C202H . H2O: C 46,82 H 5,33 N 11,49

Encontrado: C 46,68 H 5,13 NI 1,05 EXEMPLO 27 2-[ 1 -[[4-[[4-(aminoiminometil)-fenil]amino]-l ,4-dioxobutiI]amino]etil]-succinato de dimetilo

MU

HjH

Fase 1 Preparação de 2-(aminoetil)succinato de dimetilo

Acetilsuccinato de dimetilo (10 g, 53 mmol) foi adicionado a metanol (200 ml), seguido de formato de amónio (34 g, 530 mmol) e NaBH3CN (3,4 g, 53 mmol) a 25°C. Depois de 24 horas o metanol foi removido no vácuo para deixar uma massa branca. Cloreto de metileno foi adicionado e a mistura foi filtrada. O cloreto de metileno foi evaporado resultando num óleo que foi dissolvido em HC1 a IN (200 ml) e extraído com éter (100 ml). A camada de éter foi descartada e a camada aquosa foi tomada básica utilizando K2CO3. O produto foi extraído em cloreto de metileno, seco sobre Na2S04 e evaporado para dar 2-(aminoetil)succinato de dimetilo (6 g). JH RMN (de-DMSO) δ 0,97 (d, 3H, J=7,lHz), 2,66 (m, 2H), 3,05 (m, 1H), 3,56 (s, 3H), 3,60 (s, 3H), 4,15 (m, 1H). MS (FAB) m/z 190,2 (MH+), 158,2, 141,2.

Fase 2 Preparação de (2-[l-[[4-[[4-(aminoiminometil)-fenil]amino]-l,4-dioxo-butil]amino]etilj-succinato de dimetilo

Hidrocloreto de ácido 4-[[4-(aminoiminometil)fenil]-amino]-4-oxobutanóico preparado no Exemplo 1, Fase 1 (5,0 g, 18,5 mmol) foi adicionado a DMF seca (250 ml) seguido de N-metilmorfolina (1,8 g, 18,5 mmol) e cloro- -68- (/Μ* 7 cloroformato de isobutilo (2,7 g, 18,5 mmol) a 25°C. A mistura foi agitada durante 5 minutos. (2-aminoetil)succinato de dimetilo (3,5 g, 18,5 mmol) foi adicionado seguido de dimetilaminopiridina. Depois de 1 hora, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto foi purificado por cromatografia de fase reversível (.05% TFA água/acetonitrilo) para resultar em 2,1 g de um sólido branco: ]H RMN (dé-DMSO) δ 0,98 (d, 3H, J=7,lHz), 2,44 (m, 2H), 2,55 (m, 4H), 3,1 (m, 1H), 3,55 (s, 3H), 3,58 (s, 3H), 4,15 (m, 1H), 7,78 (s, 4H), 7,92 (d, 1H, J=7,7Hz), 8,84 (bs, 2H), 9,16 (bs, 2H), 10,20 (s, 1H); MS (FAB) m/z 407,2 (MH+).

Análise elementar requerida para Ci9H26N406 . F3C202H .H20: C 48,46 H 5,19 N 10,76

Encontrado: C 48,83 H 5,33 N 10,75 EXEMPLO 28 P-[[4-[[4-(aminoiminometil)-fenil]amino]-l,4-dioxobutil]amino]-ciclopropanoato de etilo o

72-

ο

O composto em título foi preparado da mesma maneira do Exemplo 1 substituindo 3-amino-4-pentenoato de etilo por ácido D,L-3-amino-3-fenil-propiónico. O produto foi purificado por HPLC de fase reversível utilizando as condições do Exemplo 1 para se conseguir o composto em título. O produto foi verificado por ,3C RMN (CD3OD) δ 12,8, 29,5, 31,0, 47,5, 59,5, 69,3, 113,8, 118,2, 121,1, 128,2, 136,5, 143,7, 165,9, 169,9, 170,9, 171,0; Espectrometria de massa de bombardeamento de átomo rápido (MH4} = 361.

Análise elementar requerida para C18H24N4O4 . 1,0 CF3CO2H . 0,5 H20: C 49,69 H 5,42 NI 1,59

Encontrado: C 49,93 H 5,30 NI 1,39 69- iyU^ 0 composto em título foi preparado da mesma maneira que o Exemplo 1, substituindo 3-amino-3-ciclopropilpropanoato de etilo por ácido D,L-3-amino-3-fenilpropiónico. O produto foi purificado por HPLC de fase reversível utilizando as condições do Exemplo 1 para se conseguir o composto em título. O produto foi verificado por 13C RMN (CD3OD) δ 2,5, 3,2, 13,6, 15,0, 30,8, 32,5, 40,1, 51,4, 60,8, 119,8, 122,7, 129,2, 144,9, 166,8, 172,1, 172,6, 173,0, Espectrometria de massa de ionização química (MH4) = 375. EXEMPLO 29 Ácido P-[[4-[[4-(aminoiminometil)-fenil]amino]-l,4-dioxobutil]amino]-ciclo-propanopropanóico t

NW

Esterase de fígado de porco (200 pL, Sigma, 11 mg/mL em 3,2 M (NH4)2S04 a pH = 8) foi adicionado ao produto final do Exemplo 28 em 20 mL de fosfato tampão a 0,1M (pH = 7,4). Depois de 20 horas a 23°C, a mistura de reacção foi concentrada in vácuo. O resíduo foi dissolvido em IIC1 a IN (3 mL) e subsequentemente diluído com acetonitrilo (5 mL) seguido de purificação imediata por HPLC de fase reversível utilizando as condições do Exemplo 1 para se conseguir 23,0 mg (83%) do composto em título. O produto foi verificado por -70-

~2Α

l3C RMN (CD3OD) δ 1,8, 2,6, 15,0, 30,3, 31,8, 39,1, 50,6, 119,2, 122,1, 128,6, 144,3, 166,8, 172,0, 172,4, 173,4; Espectrometria de massa de bombardeamento de átomo rápido (MbT) = 347. EXEMPLO 30 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)-fenil]amino]-l,4-dioxobutil]ammo]-5-hexanoato de etilo

O composto em título foi preparado da mesma maneira que o Exemplo 1, substituindo 3-amino-5-hexanoato de etilo por ácido D,L-3-amino-3-fenilpropiónico. O produto foi purificado por HPLC de fase reversível utilizando as condições do Exemplo 1 para se conseguir o composto em título. O produto foi verificado por 13C RMN (CD3OD) δ 12,6, 29,8, 31,3, 37,9, 45,9, 59,9, 116,5, 118,7, 121,5, 128,1, 133,4, 143,7, 165,6, 171,1, 171,6, 172,2; Espectrometria de massa de bombardeamento de átomo rápido (MH+) = 375. EXEMPLO 31 Ácido 3-[[4-[[4-(aminoimmometil)-fenil]amino]-ls4-dioxobutil]amino]-5-hexanóico -71 -

7

OH Ο composto em título foi preparado tratando o produto final do exemplo anterior com esterase de fígado de porco da mesma maneira do Exemplo 29. O produto foi purificado por HPLC de fase reversível utilizando as condições do Exemplo 1 para se conseguir o composto em título. O produto foi verificado por 13C RMN (CD3OD) δ 31,3, 32,8, 39,0, 39,2, 47,0, 117,8, 120,2, 123,1, 129,5, 135,1, 145,2, 165,6, 173,0, 173,6, 174,4; Espectrometria de massa de bombardeamento de átomo rápido (MH+) = 347.

Análise elementar requerida para C17H22N4O4 . 1,0 CF3CO2H . 0,6 H20: C 48,43 H 5,18 NI 1,89

Encontrado: C 48,14 H 4,86 N 11,72 EXEMPLO 32 3 -[[4-[[4-(amínoiminometil)-fenil] amino]-1,4-dioxobutil]amino]-4-pentenoato de etilo 6£‘ZIM \>L‘p H LZ'Ç1?0 :opBjjuooug

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UH O composto em título foi preparado tratando o produto final do exemplo 40 com esterase de fígado e porco da mesma maneira do Exemplo 29. O produto foi purificado por HPLC de fase reversível utilizando as condições do Exemplo 1 para se conseguir o composto em título. O produto foi verificado por 13C RMN (CD3OD) δ 30,2, 31,8, 36,2, 47,4, 61,0, 119,2, 122,4, 128,8, 144,6, 148,8,166,0,171,8, 172,1, 172,4;

Espectrometria de massa de bombardeamento de átomo rápido (MH+) = 364.

Análise elementar requerida para C16H2iN505.1,25 CF3CO2H. 0,5 H20: C 43,15 H 4,55 N 13,60

Encontrado: C 43,26 H 4,19 N 13,36 EXEMPLO 42 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)-3-clorofenil]amino]-l,4-dioxobutil]ammo]butanoato de etilo

NH Cl 0

Fase I Preparação de hidrocloreto de ácido 4-[[4-(ammoiminometil)-3-clorofenil]amino]-4-oxobutanóico A uma mistura de 4-amino-2-clorobenzonitrilo (3,05 g, 20,0 mmol), diisopropiletilamina (5,0 mL, 30,0 mmol), e cloreto de metileno (20 ml) a 0°C sob azoto foi adicionado cloreto de 3-carbometoxipropionilo (4,50 g, 30,0 mmol) gota a gota durante 3 minutos. Depois de 10 minutos a 0°C, a mistura de reacção foi deixada aquecer até 23°C. Depois de 2 horas, a mistura de reacção foi concentrada in vacuo. diluída com acetato de etilo (150 mL), lavada com KHS04 a IN (1 x 80 ml), salmoura (1 x 80 mL), seca (Na2S04), e concentrada in vacuo. O resíduo foi diluído com éter (80 mL), filtrado, e concentrado in vacuo. Este processo conseguiu material (4,5 g, 85%) de pureza suficiente a ser utilizada na fase seguinte sem purificação adicional. O éster (4,0 g, 15 mmol) foi hidrolisado por tratamento com NaOH a N: metanol (15 ml:60 mL) durante 15 minutos. A reacção foi concentrada in vacuo. diluída com NaHCC>3 a 5% (150 mL), e extraída com acetato de etilo (60 mL). A camada aquosa foi acidificada (pHl-2) com KHS04 a IN e extraída com acetato de etilo (2 x 100 mL). Depois de secar (MgS04), o acetato de etilo foi removido in vacuo para se conseguir o ácido livre (3,1 g, 82%).

Sulfureto de hidrogénio foi feito borbulhar através de uma solução de 4,0 g (15,9 mmol) do ácido anterior em piridina:trietilamina (24 mL:2,4 mL) durante 5 minutos a 23°C. Depois de 24 horas a 23°C num frasco fechado, a mistura de reacção foi concentrada sob uma corrente estável de azoto. O resíduo foi diluído com acetato de etilo (300 mL), lavado com KHS04 (IN, 2 x 100 mL), salmoura (1 x 50 mL), e seco (Na2S04). A concentração in vacuo conseguiu uma recuperação quantitativa de massa de tioamida. -83-

A tioamida (4,53 g, 15,8 mmol) foi dissolvida numa solução de ace-tona:iodometano (28 mL:2 mL). A mistura de reacção foi aquecida para se conseguir refluxo durante 40 minutos. A concentração in vacuo seguida de trituração com éter e filtração conseguiu um rendimento quantitativo de sal Hl.

Uma solução de tioamidato (15,8 mmol) e acetato de amónio (1,83 g, 23,7 mmol) em metanol (10 mL) foi aquecida para se conseguir refluxo durante 4 horas. Depois do arrefecimento para 23°C, a mistura de reacção foi concentrada sob uma corrente uniforme de azoto numa campânula. O resíduo foi dissolvido em H20 (20 mL) e diluído com acetona (80 mL) para se conseguir o zuite-rião (2,53 g, 59,4%). O sal hidrocloreto foi formado por tratamento com HC1 a 6N em dioxano (40 mL) durante 1 hora a 23 °C. A concentração in vacuo conseguiu o sal hidrocloreto que foi azeotropado com benzeno antes de se utilizar.

Fase 2 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)-3-clorofenil]amino]-l,4-dioxobutil]-aminojbutanoato de etilo O composto em título foi preparado da mesma maneira que o Exemplo 1 substituindo 3-aminobutanoato de etilo por ácido D,L-3-amino-3-fenilpropiónico e utilizando o ácido preparado na Fase 1 do Exemplo 42. O produto foi purificado por HPLC de fase reversível utilizando condições do Exemplo 1 para se conseguir o composto em título. O produto foi verificado por 13C RMN (CD3OD) δ 15,5, 21,5, 31,3, 33,0, 43,2, 61,2, 118,5, 120,5, 124,7, 132,0,132,3,144,6,144,8,165,7,171,6, 172,9,;

Espectrometria de massa de ionização química (MH*) = 383. -84-

EXEMPLO 43 Ácido 3-[[4-[[4-(ammoiminometil)-3-clorofenil]amino]-l,4-dioxobutil]amino]-butanóico

O composto em título foi preparado tratando o produto final do exemplo anterior com esterase de fígado de porco da mesma maneira do Exemplo 29. O produto foi purificado por HPLC de fase reversível utilizando as condições do Exemplo 1 para se conseguir o composto em título. O produto foi verificado por ,3C RMN (CD3OD) δ 18,6, 29,8, 31,3, 39,8, 42,0, 117,2, 119,9, 123,5, 129,7, 131,4, 143,5, 166,0, 172,0, 172,1, 173,1;

Espectrometria de massa de bombardeamento de átomo rápido (MH*) = 355. Análise elementar requerida para C15H19N4O4CI. 1,0 CF3CO2H . 1,0 H2O: C41,94 H4,55 NI 1,51

Encontrado: C 41,63 H 4,23 NI 1,89 EXEMPLO 44 Ácido 3S-[[4-(aminoiminometil)-3-clorofenil]amino]-l,4-dioxobutil]amino]-4-(metroximetilamino)-4-oxobutanóico

Fase 1 Preparação de ácido 3S-amino-4-(metoximetilamino)-4-oxobutanóico A ácido N-tBoc-L-aspártico, éster beta-benzílico (10 g, 31 mmol) dissolvido em 50 mL de cloreto de metileno foi adicionado trietilamina (4,31 mL, 31 mmol). A este foi adicionado benzotriazole-l-iloxitris(dimetilamino)-fosfónio hexafluorofosfato (BOP) (10,8 g, 31 mmol). Depois de vários minutos hidroclo-reto de Ο,Ν-dimetilhidroxil amina (3,40 g, 33,5 mmol) e trietilamina (4,31 mL, 32,3 mmol) foi adicionado e a reacção foi agitada a 25°C durante várias horas. A mistura de reacção foi diluída para 200 mL pela adição de cloreto de metileno e a mistura de reacção foi lavada sucessivamente com ácido clorídrico aquoso, hidrogeno carbonato de sódio aquoso saturado, e solução saturada de cloreto de sódio aquoso. A camada orgânica foi seca com sulfato de magnésio e concentrada no vácuo para dar o produto em bruto. Este produto foi dissolvido em acetato de etilo e passada sobre uma almofada de 4 x 4 cm de Merck 60 de gel de sílica. O acetato de etilo foi evaporado para dar 8,9 g do produto desejado. (78%). O éster N-BOC amino benzílico preparado anterioi mente (7,9 g, 21,6 mmol) foi dissolvido em 50 ml de metanol. A solução foi transferida com 0,5 gm de catalisador de paládio sobre carvão a 3% para um aparelho de hidroge-nação de meios à pressão equipado com uma vareta de agitação magnética, manómetro, e válvulas de entrada e saída de gás. O hidrogénio foi introduzido (54 psig) e a reacção foi deixada continuar durante a noite. O catalisador foi removido por filtração sobre uma almofada de celite e o solvente foi removido no vácuo para dar o desejado N-BOC amido ácido: 'H RMN (300 MHz, d6-DMSO) δ 1,45 (s, 9H), 2,8 (m, 2H), 3,20 (s, 3H), 3,72 (s, 3H), 4,55 (m, 1H). FABMS 283 (M+ Li). O N-BOC amino ácido preparado anteriormente foi dissolvido num mínimo de 1,4-dioxano e 50 mL de HC1 a 4N em dioxano foi adicionado à temperatura ambiente. A reacção foi adicionada à temperatura ambiente. A reacção foi deixada prosseguir até não se notar mais evolução de gás (30 minutos) e o solvente evaporar. O amino ácido desejado assim como o sal trifluoroacetato foi isolado por RPPHPLC e liofilizado para dar um pó branco (2,33 gramas, 8 mmol, 38% rendimento total isolado): Ή RMN (300 MHZ, de-DMSO) δ 3,02 (bs, 2H), 3,12 (s, 3H), 3,69 (s, 3H), 4,18 (m, 1H); FABMS 177,1 (MH+).

Fase 2Preparação de ácido 3S-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-l,4-dioxo-butil]amino]-4-(metoximetilamino)-4-oxobutanóico. O acoplamento de ácido 3S-amino-4-(metoximetilamino)-4-oxo-butanóico com ácido 4-[[4-(aminoiminometil)fenil]-amino]-4-oxobutanóico foi conseguido de uma maneira semelhante à do Exemplo 1 Fase 2. Deste modo, o hidrocloreto de ácido 4-[[4-(aminoiminometÍl)fenil]amino]-4-oxobutanóico (0,70 - 87-

g, 2,6 mmol) foi feito reagir com isobutilcloroformato (0,34 mL, 2,6 mmol) e um equivalente de N-metilmorfolina (0,29 mL, 2,6 mmol) em DMF. Em seguida a activação do ácido 3S-amino-4-(metoximetilamino)-4-oxobutanóico (0,5 g, 1,7 mmol) foi adicionado a um equivalente de N-metilmorfolina e a reacção foi deixada prosseguir durante a noite. O solvente foi removido e o produto foi isolado por hplc preparativa e as ffacções contendo o desejado produto foram levadas para pH 6 com hidróxido de lítio. O sal de lítio foi isolado por liofílização. Ή RMN (300 MHZ, de-DMSO) δ 2,65 (m, 6H), 3,05 (s, 3H), 3,10 (s, 3H), 3,65-3,7 (s, 3H), 7,8 (m, 5H), 9,5 (m, 4H), 10,6 (d, 1H); FABMS 394 (M+H), 400,3 (M + Li). EXEMPLO 45 Ácido 2S-[[4-[[4-(aminoiminometil)-fenil]amino]-1,4-dioxobutil]amino]-butano-dióico o

NH Ácido 3S-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-l,4-dioxobutil]-amino}-4-(metoximetilamino)-4-oxobutanóico (1,6 g ) do Exemplo 44 foi retirado em 300 mL de água, tomado acídico (pH 2) com ácido trifluoroacético e -88- l/ÍM/i aquecido a 60°C durante várias horas. O produto foi isolado por RPHPLC preparativa e liofílizado para dar o produto desejado (0,84g). 'H RMN (300 MHZ, dg-DMSO) δ 2,55 (bm, 6H), 4,5 (m, 1H), 7,8 (s, 4H), 8,2 (d, 1H), 9,15 (bs, 4H), 10,4 (d, 1H); FABMS 351,3 (MH+).

Análise elementar requerida para C23H27N4O7. F3C2O2H . H20: C 52,27 H 5,15 N 10,78

Encontrado: C 52,08 H 4,84 N 10,45 EXEMPLO 46 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)-fenil]amino]-l,4-dioxobutil]amino]-2-hidroxi-propanoato de etilo o 0

HH O composto em título foi preparado da mesma maneira do Exemplo 1 substituindo 3-amino-2-hidroxipropanoato de etilo por ácido D,L-3-amino-3-fenilpropiónico do Exemplo 1 para se conseguir o composto em título. O produto foi verificado por -89-

l3C RMN (CD3OD) δ 15,6, 29,1, 31,9, 42,1, 60,8, 69,1, 119,2, 122,2, 128,8, 144,3,166,1,172,0,172,9, 173,6;

Espectrometria de massa de bombardeamento rápido de átomo (MH4) = 351. EXEMPLO 47 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)-fenil]amino]-l,4-dioxobutil]amino]-2-metil-propanoato de etilo o

NH

NH 0 H2n O composto em título foi preparado da mesma maneira do Exemplo 1 substituindo 3-aminoisobutanoato de etilo por ácido D,L-3-amino-3-fenilpropiónico do Exemplo 1 para se conseguir o composto em título.

Espectrometria de massa de bombardeamento de átomo rápido (MH4) = 349. EXEMPLO 48 Ácido 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)-fenil]amino]-1,4-dioxobutil]amino]-2-metil-propanóico -90-

Q

WM O composto em título foi preparado tratando o produto final do exemplo anterior com esterase de fígado de porco da mesma maneira do Exemplo 29.0 produto foi purificado por HPLC de fase reversível utilizando as condições do Exemplo 1 para se conseguir o composto em título. O produto foi verificado por

Espectrometria de massa de bombardeamento de átomo rápido (MH4) = 321. EXEMPLO 49 Ácido 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-1,4-dioxobutil]amino]-4-fenil- sulfonil butanóico o

Fase 1 Preparação de ácido 3-amino-4-fenilsulfonil butanóico

Tiofenol (5g, 45 mmol) foi adicionado a K2CO3 (9,4 g, 67,5 mmol) em DMF seca (100 ml). À esta mistura foi adicionado 4-cloroacetoacetato de metilo (6,8 g, 45 mmol). O progresso da reacção foi monitorado por tlc (acetato -91 - (μ* ( de etilo/hexano 30%). Depois da reacção estar completa (~31i) foi adicionado HC1 aquoso a 10% e o cetoéster foi extraído em éter para deixar 10 g de um óleo âmbar. O cetoéster em bruto foi dissolvido em metanol (200 ml). A esta solução foi adicionado formato de amónio (28 g, 670 mmol) seguido de NaBH3CN (2,8 g, 67 mmol) e a solução foi agitada durante 24 horas. O metanol foi removido sob pressão reduzida para deixar uma massa sólida que foi diluída com cloreto de metileno. O excesso de formato de amónio foi removido e o filtrado foi concentrado para deixar 3-amino éster em bruto. O amino éster foi extraído em HC1 aquoso a 10% e extraído com éter. Os extractos de éter foram descartados e a camada aquosa tomada básica com NaOH aquoso. O produto foi purificado por RPHPLC (0,05% TFA água/acetonitrilo) para resultar em 3,5 g de um sólido branco: 'H RMN (dg-DMSO) δ 2,7 (2H), 3,2 (2H), 3,5 (m, 1H), 7,33 (m, 5H), 8,02 (bs, 2H).

Fase 2 Preparação de ácido 3-[[4-[[4-(ammoiminometil)fenil]amino]-l,4-dioxobutil]amino]-4-fenilsulfonilbutanóico.

Hidrocloreto de ácido 4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-4-oxobutanóico preparado no Exemplo 1, Fase 1 (3,0 g, 11,3 mmol) foi adicionado a DMF seca (200 ml) seguido de N-metilmorfolina (1,2 g, 11,3 mmol) e cloro-formato de isobutilo (1,5 g, 17 mmol) a 25°C. A mistura foi agitada durante 5 minutos. Ácido 3-amino-4-fenilsulfonil butanóico (4,0 g, 11,3 mmol) foi adicionado seguido de trietilamina (2,7 g) e dimetilaminopiridina. Depois de 1 hora, o solvente foi removido sob pressão reduzida e a massa sólida foi dissolvida numa mistura de ácido acético :H20: H202 30% (2:2:1) e agitada a 25°C durante 48 horas. A mistura de reacção foi concentrada no vácuo e o resíduo foi purificado -92-

3

J purificado por cromatografia de fase reversível (.05% TFA água/acetoniLrilo) para resultar em 3,5 g de um sólido branco: 'H RMN (d^-DMSO) δ 2,55 (m, 2H), 2,53 (m, 4H), 3,55 (m, 2H),4, 33 (m, 1H), 7,44 (m, 5H), 7,79 (s, 4H), 7,99 (d, 1H, J=8,lHz), 9,1 (bs, 2H), 9,19 (bs, 2H), 10,42 (s, 1H); MS (FAB) m/z 461,2 (MH+).

Análise elementar requerida para C2iH24N406S. F3C2O2H . H2O: C 46,27 H 4,64 N9,38

Encontrado: C 46,01 H 4,21 N9,12 EXEMPLO 50 3- [[4- [ [4-(aminoiminometil)-fenil] amino]-1,4-dioxobutil] amino] -4-feniIsulfonil butanoato de etilo

Ácido etilo-3-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-1,4-dioxo- butiI]amino]-4-fenilsulfonil butanóico (1,2 g ) do Exemplo 49 foi suspenso em etanol seco (40 ml), e HC1 a 4N em dioxano (20 ml) foi adicionado. O progresso da reacção foi monitorado por RPHPLC. Depois de 2 horas, o solvente foi remo- -93-

/ removido por evaporador rotativo para deixar um sólido branco que se purificou por cromatografia de fase reversível (água/acetonitrilo) para resultar em 1,1 g de um sólido branco: !H RMN (de-DMSO) δ 1,1 (t, 3H, J=7,5Hz), 2,25 (m, 2H), 2,53 (m, 4H), 3,55 (m, 2H), 4,0 (q, 2H, J=7,5Hz), 4,33 (m, 1H), 7,44 (m, 5H), 7,79 (s, 4H), 7,99 (d, 1H, J=8,lHz), 9,1 (bs, 2H), 9,19 (bs, 2H), 10,42 (s, 1H); MS (FAB) m/z 489,3 (MH+).

Análise elementar requerida para C23H28N6S . F3C2O2H . H20: C 48,38 H 5,03 N9,03

Encontrado: C 48,72 H 4,74 N9,03 EXEMPLO 51 Ácido 3 - [[4-[ [4-(aminoiminometil)-fenil] (fenilmetil)amino] -1,4-dioxobutiI] - aminobutil]amino]-4-pentenóico

O éster etílico do composto em título foi preparado da mesma maneira do Exemplo 1 substituindo hidrocloreto de ácido 4-[[4-(amino-iminometil)fenil](fenilmetil)amino]-4-oxobutanóico por hidrocloreto de ácido 4-[[4-(aminoiminometil)feml]amino]-4-oxobutanóico. O éster etílico foi clivado -94-

por tratamento com esterase de fígado de porco da mesma maneira que no Exemplo 29. O produto foi purificado por HPLC de fase reversível utilizando as condições do Exemplo 1 para se conseguir o composto em título. O produto foi verificado por ,3C RMN (CD3OD) δ 29,4, 30,5, 38,6, 52,4, 114,3, 127,2, 128,0, 128,2, 129,0, 136,7,136,9, 147,0,166,1,172,2,172,3,172,8,;

Espectrometria de massa de ionização química (MH*) = 423.

Análise elementar requerida para C23H26N4O4.1,0 CF3CO2H . 2,0 H20: C 52,45 H 5,46 N9,79

Encontrado: C 52,53 H 5,25 N9,60 EXEMPLO 52 3-[[4-[[4-(ammoiminometil)-naftil](fenilmetil)amino]-l,4-dioxobutil]amino]-4-pentenoato de etilo 0

0 O composto em título foi preparado da mesma maneira do Exemplo 1 substituindo hidrocloreto de ácido 4-[[4-(aminoiminometil)naftil]amino]-4-oxobutanóico por hidrocloreto de ácido 4-[[4-(aminoiminometil)-3-fenil]amino]-4-oxobutanóico e utilizando 3-amino-4-pentenoato de etilo. O produto foi purifi- purificado por HPLC de fase reversível utilizando as condições do Exemplo 1 para se conseguir o composto em título. O produto foi verificado por

Espectrometria de massa de ionização química (MH+) = 411.

Análise elementar requerida para C22H26N4O4 . 1,25 CF3CO2H : C 53,21 H 4,97 N 10,13

Encontrado: C 53,23 H 5,01 N 10,24 EXEMPLO 53 Ácido 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)naffil](fenilmetil)-amino]-l,4-dioxobutil]-amino] -4-pentenóico

O composto em título foi preparado tratando o produto final do exemplo anterior com esterase de fígado de porco da mesma maneira do Exemplo 29. O produto foi purificado por HPLC de fase reversível utilizando as condições do Exemplo 1 para se conseguir o composto em título. O produto foi verificado nC RMN (CD3OD) δ 30,4, 31,2, 38,6, 48,2, 114,3, 120,3, 123,0, 123,8, 126,5, 126,9,127,9, 128,0,130,2, 136,8,137,3,167,5,172,5, 172,8,172,9;

Espectrometría de massa de ionização química (MH*) = 383.

Análise elementar requerida para C20H22N4O4 . 1,25 CF3CO2H: C 51,48 H 4,46 N 10,67

Encontrado: C 51,05 H 4,41 N 10,66 EXEMPLO 54 3-[[4-[[4-(aminoimínometil)-2-etilfenil]amino]-l,4-dioxobutil]amino]-4-pentenoato de etilo 0

NH O composto em título foi preparado da mesma maneira do Exemplo 1 substituindo hidrocloreto de ácido 4-[[4-(aminoiminometil)-2-etilfenil]amino]-4-oxobutanóico por hidrocloreto de ácido 4-L[4-(aminoiminometil)fenilJamino]-4-oxobutanóico e utilizando 3-amino-4-pentenoato de etilo. O produto foi purificado por HPLC de fase reversível utilizando as condições do Exemplo 1 para se conseguir o composto em título. O produto foi verificado por -97- lM-ή

13C RMN (CD3OD) 8 12,8, 13,1, 23,7, 30,5, 31,3, 38,9, 48,4, 60,4, 114,5, 124,6, 125,2, 125,6, 128,1,136,8, 138,0, 140,9,166,8, 171,0, 171,1,172,5;

Espectrometria de massa de ionização química (MH+) = 389.

Análise elementar requerida para C20H28N4O4 . 1,0 CF3CO2H . .25 H20: C 52,12 H5,86 NI 1,04

Encontrado: C 52,04 H 6,15 N 11,15 EXEMPLO 55 Ácido 3 - [[4- [[4-(aminoiminometil)-2-etilfenil]amino] -1,4-dioxobutiI]amino]-4- pentenóico

O composto em título foi preparado tratando o produto final do Exemplo 54 com esterase de fígado de porco da mesma maneira do Exemplo 29.0 produto foi purificado por RPHPLC de fase reversível utilizando as condições do Exemplo 1 para se conseguir o composto em título. O produto foi verificado por: 13C RMN (CD3OD) δ 11,9, 22,9, 29,6, 30,4, 37,8, 47,3, 113,5, 123,6, 124,4, 124,7, 127,3, 136,0, 137,4,140,1, 166,5,171,7,171,8,172,5; .98-

Espectromelria de massa de ionização química (MH4} = 361.

Análise elementar requerida para C18H24N4O4 . 1,25 CF3CO2H . 0.25 H20: C48,52 H5,11 NI 1,04

Encontrado: C 48,31 H 5,04 N 10,95 • EXEMPLO 56 Ácido 2-[ 1 -[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-1,4-dioxobutil]amino]etil]-succínico

3-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]-amino]-l,4-dioxobutil]amino-butil]amino]-2-(aminoetil)succinato de dimetilo preparado no Exemplo 15 a, Fase 1 (600 mg) foi adicionado a água/acetonitrilo (20 ml) seguido de hidróxido de lítio (150 mg) a 25°C. A mistura foi agitada durante 30 minutos. O decorrer da reacção foi monitorizado por RPHPLC. Depois do produto satisfatório se ter formado a reacção foi neutralizada com TFA e purificada por cromatografia de fase reversível (0,05% TFA água /acetonitrilo) para resultar em 250 mg de um sólido branco: -99- I, ^AsC-z

‘Η RMN (de-DMSO) δ 0,99 (d, 3H, J=7,lHz), 2,44 (m, 2m , « , , ^ <£,55 (m, 4H), 3,14 (m, 1H), 3,14 (m, 1H), 4,15 (m, 1H), 7,78 (s, 4H), 7,92 (d - . 0 0/( ’ J—/,/riz), o,84 (bs, 2H), 9,16 (bs, 2H), 10,25 (s, 1H); MS (FAB) m/z 379,1 (MH+).

Análise elementar requerida para C17H22N4O6. F3C2O2H. H20· C 43,18 H 5,11 N 10,60

Encontrado: C 43,25 H4,62 N 10,17 EXEMPLO 57 P-[[4-[[4-(aminoiminometil)feml]amino]-l,4-dioxobutil]amino]-(3 5-difluoro fenil)propanoato de etilo

Fase 1 Hidrocloreto de ácido 4[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-4- oxobutanóico preparado no Exemplo 1, Fase 1 (5,0 g, 18,5 mmol) foi adicionado a DMF seca (250 ml) seguido de N-metilmorfolina (1,7 g, 18,5 mmol) e cloro-formato de isobutilo (2,8 g, 17 mmol) a 25°C. A mistura foi agitada durante 5 -100-

5 minutos. 3-amino-3-(3,5-diJQuoiOfeiiil)piOpaiioato dc ctilo (3,0 g, 18,5 mmol) foi adicionado seguido de dimetilaminopiridina. Depois de 1 hora, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto purificado por croamatografia de fase reversível (.05% TFA água/acetonitrilo) para resultar em 2,0 g de um sólido branco:

Ή RMN (dô-DMSO) δ 2,57 (t, 2H, J=7,31Hz), 2,07 (t, 2H, J=7,lHz), 3,47 (t, 2H, J=7,0Hz), 3,5 (s, 6H), 3,51 (m, 1H), 7,79 (s, 4H), 8,1 (t, 1H, J=7,lHz), 8,7 (bs, 2H), 9,09 (bs, 2H), 10,32 (s, 1H); MS (FAB) m/z 379,0 (MH+).

Análise elementar requerida para C17H22N4O6. F3C2O2H . H2O: C 45,50 H 4,72 N 11,18

Encontrado: C 45,20 H 4,66 N 11,17

EXEMPLO 58 p-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-l,4-dioxobutil]amino]-(3,5- difluorofenil)propanoato

P[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-l,4-dioxobutil]amino]-(3,5-difluorofenil)propanoato de etilo. Preparado no Exemplo 57, Fase 1 (700 mg) foi adicionado a água/acetonitrilo (20 ml) seguido de hidroxido de lítio (100 mg) a 25°C. A mistura foi agitada durante 30 minutos. O decorrer da reacção foi monitorada por RPHPLC. Depois de se ter formado o monoéster satisfatoriamente a reacção foi neutralizada com TFA e foi purificada por cromatografia de fase reversível (água/acetonitrilo) para resultar em 620 mg de um sólido branco: ’H RMN (de-DMSO) δ 2,38 (t, 2H, J=7,3Hz), 2,44 (d, 2H, J=6,4Hz), 2,56 (t, 2H, J=7,3Hz), 4,32 (m, 1H), 7,78 (s, 4H), 7,99 (d, 1H, J=8,lHz), 8,92 (bs, 2H), 9,169 (bs, 2H), 10,39 (s, 1H); MS (FAB) m/z 365,2 (MH+).

Análise elementar requerida para Ci6H2oN406. F3C2O2H . H20: C 43,54 H 4,64 N 11,13

Encontrado: C 43,40 H 4,52 N 11,18 EXEMPLO 59 P-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-l,4-dioxobutil]amino]-(pentafluoro-fenil)propanoato de etilo

Hidrocloreto de ácido 4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-4-oxobutanóico preparado no Exemplo 1, Fase 1 (5,0 g, 18,5 mmol) foi adicionado a DMF seca (250 ml) seguido de N-metilmorfolina (1,7 g, 18,5 mmol) e cloro-formato de isobutilo (2,8 g, 17 mmol) a 25°C. A mistura foi agitada durante 5 minutos. 3-amino-3-(3,5-difluorofenil)propanoato de etilo (3,0 g, 18,5 mmol) foi adicionado seguido de dimetilaminopiridina. Depois de 1 hora, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto purificado por croamatografia de fase reversível (.05% TFA água/acetonitrilo) para resultar em 2,0 g de um sólido branco: 'H RMN (dô-DMSO) δ 2,57 (t, 2H, J=7,3Hz), 2,07 (t, 2H, J=7,lHz), 3,47 (t, 2H, J=7,0Hz), 3,5 (s, 6H), 3,51 (m, 1H), 7,79 (s, 4H), 8,1 (t, 1H, J=7,lHz), 8,7 (bs, 2H), 9,09 (bs, 2H), 10,32 (s, 1H); MS (FAB) mJz 379,0 (MH+).

Análise elementar requerida para C17H22N4O6. F3C2O2H . H20: - 103 -

/ C 45,50 H 4,72 N 11,18

Encontrado: C 45,20 H 4,66 N 11,17 EXEMPLO 60 Ácido P-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-l,4-dioxobutil]amino]-(penta- fluorofenil)propanóico

p[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-l,4-dioxobutil]amino]-(pentafluorofenil)propanoato de etilo preparado no Exemplo 59 (600 mg) foi adicionado a água/acetonitrilo (20 ml) seguido de hidróxido de lítio (100 mg) a 25°C. A mistura foi agitada durante 30 minutos. O decorrer da reacção foi monitorada por RPHPLC. Depois de se ter formado satisfatoriamente o ácido a reacção foi neutralizada com TFA e foi purificada por cromatografia de fase reversível (água/acetonitrilo) para resultar em 620 mg de um sólido branco: 'H RMN (d^-DMSO) δ 2,38 (t, 2H, J=7,3Hz), 2,44 (d, 2H, J=6,4Hz), 2,56 (t, 2H, J=7,3Hz), 4,32 (m, 1H), 7,78 (s, 4H), 7,99 (d, 1H, J=8,lHz), 8,92 (bs, 2H), 9,16 (bs, 2H), 10,39 (s, 1H); MS (FAB) m/z 365,2 (MH+). I / - 104-

ΊΑ/—' í J .λ /\ζ ^

J

Análise elementar requerida para C]6H2oN406. F3C202H . H20: C 43,54 H 4,64 N 11,13

Encontrado: C 43,40 H 4,52 N 11,18 EXEMPLO 61 [[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-l,4-dioxobutil]amino]-(3,4-difluoro-fenil)propanoato de etilo

Hidrocloreto de ácido 4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-4-oxobutanóico preparado no Exemplo 1, Fase 1 (5,0 g, 18,5 mmol) foi adicionado a DMF seca (250 ml) seguido de N-metilmorfolina (1,7 g, 18,5 mmol) e cloro-formato de isobutilo (2,8 g, 17 mmol) a 25°C. A mistura foi agitada durante 5 minutos. 3-amino-3-(3,5-difluorofenil)propanoato de etilo (3,0 g, 18,5 mmol) foi adicionado seguido de dimetilaminopiridina. Depois de 1 hora, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto purificado por cromatografia de fase reversível (água/acetonitrilo) para resultar em 2,0 g de um sólido branco:

-105 - [/^η ‘Η RMN (dô-DMSO) δ 2,57 (t, 2H, J-7,3Hz), 2,07 (t, 2H, J-7,lHz), 3,47 (t, 2H, J=7,0Hz), 3,5 (s, 6H), 3,51 (m, 1H), 7,79 (s, 4H), 8,1 (t, 1H, J=7,lHz), 8,7 (bs, 2H), 9,09 (bs, 2H), 10,32 (s, 1H); MS (FAB) m/z 379,0 (MH+).

Análise elementar requerida para C17H22N4O6 . F3C2O2H . H20: C 45,50 H 4,72 N 11,18

Encontrado: C 45,20 H4,66 N 11,17 EXEMPLO 62 Ácido β-[[4-[ [4-(aminoiminometil)fenil] amino]-1,4-dioxobutil] amino]-(3,4-di- fluorofenil)propanóico

[[4- [ [4-(aminoiminometil)fenil] amino]-1,4-dioxobutil] amino]-(3,4-difluoro-fenil)propanoato de etilo preparado no Exemplo 61 (700 mg) foi adicionado a água/acetonitrilo (20 ml) seguido de hidróxido de lítio (100 mg) a 25°C. A mistura foi agitada durante 30 minutos. O decorrer da reacção foi monitorada por -106- /

RPHPLC. Depois de se ter formado satisfatoriamente o ácido a reacção foi neutralizada com TFA e foi purificada por cromatografia de fase reversível (água/acetonitrilo) para resultar em 620 mg de um sólido branco: Ή RMN (dô-DMSO) δ 2,38 (t, 2H, J=7,3Hz), 2,44 (d, 2H, J=6,4Hz), 2,56 (t, 2H, J=7,3Hz), 4,32 (m, 1H), 7,78 (s, 4H), 7,99 (d, 1H, J=8,lHz), 8,92 (bs, 2H), 9,16 (bs, 2H), 10,39 (s, 1H); MS (FAB) m/z 365,2 (MH+).

Análise elementar requerida para Ci6H20N4O6 . F3C202H . H20: C 43,54 H 4,64 N 11,13

Encontrado: C 43,40 H 4,52 N 11,18 EXEMPLO 63 [[4-[[4-(aminoimmometil)fenil]amino]-l,4-dioxobutil]amino]-pentanodioato de dietilo

-107 -

Λ.

Hidroclorcto dc ácido 4-[[4-(aminoiminomctil)fenil]amino]-4-oxobutanóico preparado no Exemplo 1, Fase 1 (4,6 g, 17mmol) foi adicionado a DMF seca (225 ml) seguido de N-metilmorfolina (1,2 g, 17 mmol) e cloroformato de isobutilo (2,3 g, 17 mmol) a 25°C. A mistura foi agitada durante 5 minutos. 3-aminoglutarato de dimetilo (3,0 g, 17 mmol) foi adicionado seguido de dimetila-minopiridina. Depois de 1 hora, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto purificado por cromatografia de fase reversível (.05% TFA água/acetonitrilo) para resultar em 3,5 g de um sólido branco: *H RMN (dõ-DMSO) δ 1,37 (t, 2H, J=7,8Hz), 2,55 (m, 2H), 2,57 (t, 2H, J=7,lHz), 3,57 (s, 6H), 4,22 (q, 4H, J=7,8Hz), 4,35 (m, 1H), 7,79 (s, 4H), 7,99 (d, 1H, J=8,lHz), 9,1 (bs, 2H), 9,19 (bs, 2H), 10,42 (s, 1H); MS (FAB) m/z 393,2 (MH+).

Análise elementar requerida para Ci8H24N406 . F3C2O2H . H20: C 47,42 H 4,91 N 11,14

Encontrado: C 47,12 H 4,97 N 10,99 EXEMPLO 64 Ácido 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-l,4-dioxobutiI]amino]-3-(2-hidroxi-4-metoxifenil)propanóico

Hidrocloreto de ácido 4-[[4-(aminoimmometil)fenil]amino]-4-oxobutanóico preparado no Exemplo 1, Fase 1 (4,6 g, 17 mmol) foi adicionado a DMF seca (225 ml) seguido de N-metilmorfolina (1,2 g, 17 mmol) e cloroforma-to de isobutilo (2,3 g, 17 mmol) a 25°C. A mistura foi agitada durante 5 minutos. Coumarin amino metoxi (3,0 g, 17 mmol) foi adicionado seguido de dimetilami-nopiridina. Depois de 1 hora, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto purificado por cromatografía de fase reversível (água/acetonitrilo) para resultar em 3,5 g de um sólido branco: !H RMN (d^-DMSO) δ 2,37 (t, 2H, J=7,3Hz), 2,55 (m, 2H), 2,57 (t, 2H, J=7,lHz), 3,57 (s, 6H), 4,35 (m, 1H), 7,79 (s, 4H), 7,99 (d, 2H, J=8,lHz), 9,1 (bs, 2H), 9,09 (bs, 2H), 10,42 (s, 1H); MS (FAB) m/z 393,2 (MH+).

Análise elementar requerida para . F3C2O2H . H20: C 47,42 H 4,91 N 11,14

Encontrado: C 47,12 H 4,97 N 10,99 EXEMPLO 65 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-l,4-dioxobutil]amino]-5-oxo-5-[(fenilmetil)amino]pentanoato de etilo

Fase 1 Hidrocloreto de ácido 4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-4-oxobutanóico preparado no Exemplo 1, Fase 1 (5,0 g, 18,5 mmol) foi adicionado a DMF seca (250 ml) seguido de N-metilmorfolina (1,7 g, 18,5 mmol) e cloro-formato de isobutilo (2,8 g, 17 mmol) a 25°C. A mistura foi agitada durante 5 minutos. 3-amino-3-(3,5-difluorofenil)propanoato de etilo (3,0 g, 18,5 mmol) foi adicionado seguido de dimetilaminopiridina. Depois de 1 hora, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto purificado por croamatografia de fase reversível (.05% TFA água/acetonitrilo) para resultar em 2,0 g de um sólido branco: lH RMN (de-DMSO) δ 2,57 (t, 2H, J=7,3Hz), 2,07 (t, 2H, J=7,lHz), 3,47 (t, 2H, J=7,0Hz), 3,5 (s, 6H), 3,51 (m, 1H), 7,79 (s, 4H), 8,1 (t, 1H, J=7,lHz), 8,7 (bs, 2H), 9,09 (bs, 2H), 10,32 (s, 1H); MS (FAB) m/z 379,0 (MH+). -110 - {Μη

Análise elementar requerida para Ci7H22N406 . F3C202H . H20: C 45,50 H 4,72 N 11,18

Encontrado: C 45,20 H 4,66 N 11,17 EXEMPLO 66 Ácido 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-l,4-dioxobutil]amino]-5-oxo-5-[(fenilmetil)amino]pentanóico

O produto final do Exemplo 65 (720 mg) foi adicionado a água/acetonitrilo (20 ml) seguido de hidróxido de lítio (100 mg) a 25°C. A mistura de reacção foi agitada durante 30 minutos. O decorrer da reacção foi monitorada com TFA e purificada por cromatografia de fase reversível (.05% TFA água/acetonitrilo) para resultar em 620 mg de um sólido branco: ]H RMN (dé-DMSO) δ 2,38 (t, 2H, J=7,3Hz), 2,44 (d, 2H, J=6,4Hz), 2,56 (t, 2H, J=7,3Hz), 4,32 (m, 1H), 7,78 (s, 4H), 7,99 (d, 1H, J=8,lHz), 8,92 (bs, 2H), 9,16 (bs, 2H), 10,39 (s, 1H); -111 -

1 MS (FAB) ni/z 365,2 (MH+).

Análise elementar requerida para Ci6H2oN406 . F3C202H . H20: C 43,54 H 4,64 N 11,13

Encontrado: C 43,40 H 4,52 N 11,18

EXEMPLO 67 P-[[[2-[[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]carbonil]ciclopropil]carbonil]amino]-fenilpropanoato de t-butilo

Fase 1 Preparação de ácido [2-[etoxicarbonil]ciclopropil]carboxílico.

Carboxilato de dietil ciclopropílico (50 g, 0,268 mol; isómero trans de Aldrich) em 100 ml de etanol foi adicionado a uma solução de 10 g de LiOH (0,238 mol) em 100 ml de H20. Depois de 5 minutos de agitação, uma mistura homogénea amarela foi observada e a agitação continuou durante 24 horas a 25°C. A mistura de reacção em bruto foi dividida entre acetato de etilo e água (pH = 9). Depois a camada aquosa foi tomada acídica (pH = 2) e extraída com acetato de elilo. O exlraclo de acetato de elilo foi seco (MgSC^) e concentrada para dar 23 g do mono ácido desejado como um sólido (p.f. 46°C).

Fase 2 Preparação de ácido 2-[[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]carbonil]-ciclopropil-carboxílico. A 6,0 g (0,038 mol) ciclopropanocarboxilato trans-2-carboxilato de etilo dissolvido em 100 ml de DMF anidro e 10 mL de piridina anidro foi adicionado 4,82 g (4,92 mL, 0,040 mol) cloreto de trimetilacetilo e uma quantidade catalisadora de DMAP. Depois de cerca de uma hora, 9,49 g (0,046 mol) benza-midina foi adicionada e deixada reagir sob argon à temperatura ambiente durante a noite. Os voláteis foram removidos por vácuo num evaporador rotativo a 55°C até ser obtido um óleo viscoso. O resíduo foi dissolvido em água (100 ml) e o pH ajustado para 12 pela adição de LiOH aquoso. Depois da agitação durante a noite formou-se um precipitado. O pH foi ajustado para 7 pela adição de HC1 aquoso diluído e os sólidos filtrados e secos num secador para dar 5,0 g (53%) do desejado produto zwitérionico. Este material foi convertido no sal hidrocloreto contactando com HC1 a 4N em dioxano (100 ml) durante várias horas. O sólido resultante foi recolhido, lavado com éter dietílico e seco.

Fase 2 p(S)-[[[2-[[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]carbonil]ciclopropil]-carbonil]amino]-fenilpropanoato de t-butilo 0,90 g (0,0036 mol) de ácido 2-[[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]carboni]ciclopropil-carboxílico foi tratado com 50 ml de DMF seca e o solvente foi removido a 55°C. Ao sólido restante foi adicionado 60 ml de DMF, 6 mL de piridina e 0,43 g (0,44 mL, 0,0036 mol) cloreto de trimetilacetilo. Depois de 5 horas à temperatura ambiente a mistura de reacção foi aquecida a 55°C durante 0,5 horas depois 0,93 g (0,004 mol) 3-amino-3-fenil propionato de terc-butilo e 0,36 g (0,40 mL, 0,004 mol) N-metilmorfolina foram -113- /

foram adicionados c a mistura de reacção foi deixada prosseguir durante a noite. Neste ponto os voláteis foram removidos e o produto desejado foi isolado por RPHPLC preparativa e liofilizado para dar uma mistura diastereomérica de P(S)-[[[2-[[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]carboni]ciclopropil]carbonil]amino]-3-fenilpropanoato de t-butilo como um pó branco (150 mg); ’H RMN (300 MHz) (de-DMSO) δ 1,19 (m, 2H), 1,28 (s), 1,31 (s, 9H), 2,21 (m, 2H), 2,65 (d, J=7,9Hz), 2,66 (d, J=7,7Hz, 2H), 5,2 (m, 1H), 7,32 (m, 5H), 7,78 (m, 4H), 8,86 (d, 1H, J=8,6Hz), 8,95 (bs, 2H), 9,10 (bs, 2H), 10,74 (s), 10,80 (s, 1H); MS (FAB) m/z 451,4 (MH+). EXEMPLO 68 P"[[[2-[[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-carbonil]ciclopropil]carbonil]amino]-butanoato de etilo, isómero 1.

A 1,0 g (0,0035 mol) hidrocloreto de ácido 2-[[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]carbonil]ciclopropil-carboxílico em 100 ml de DMF seca foi adicionado 0,36 g (0,39 mL, 0,0035 mol) N-metil-morfolina e 0,48 g (0,46 mL, 0,0035 mol) isobutilcloroformato. A reacção foi deixada prosseguir durante dez minutos à temperatura ambiente depois 0,515 g (0,570 mL, 0,0035 -114-

mol) de 3-aminobutirato de etilo foi adicionado. A reacção foi deixada prosseguir durante a noite. Os voláteis foram removidos sob vácuo a 55°C até que restou um óleo viscoso. O resíduo foi dissolvido em água (60 mL) e foi purificado por RPHPLC preparativa. Dois diastereómeros foram obtidos e separados por HPLC. O diastereómero que eluiu mais depressa, isómero 1, foi recolhido e liofilizado para 0,9 g de um sólido branco: !H RMN (300 MHz) (dô-DMSO) δ 1,17 (m, 8H), 2,07 (m, 1H), 2,38 (m, 1H), 4,04 (m, 3H), 7,77 (s, 4H), 8,28 (d, J=7,9), 8,80 (bs, 2H), 9,16 (bs, 2H), 10,78 (s, 1H); MS (FAB) m/z 361,3 (MH+). EXEMPLO 69 p-[[[2-[[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-carbonil]ciclopropil]carbonil]amino]-butanoato de etilo, isómero 2.

Este composto foi isolado a partir da reacção descrita no Exemplo 68. Foi o último diastereómero a ser diluído; 0,343 g de sólido branco fofo foram recolhidos depois da liofilização; // •"V-> -115 -

'Η RMN 1,15 (m, 8H), 2,04 (m, 1H), 2,19 (m, 1H), 4,05 (m, 3H), 7,75 (s, 4H), 8,29 (d, J=8,0Hz), 8,80 (bs, 2H), 9,15 (bs, 2H), 10,76 (s, 1H); MS (FAB) m/z 361,3 (MH+). EXEMPLO 70 Ácido 3-(S)-3-[[4-[[4-(aminoiminometiI)fenil]amino]-1,4-dioxobutil]amino]-4- pentenóico

O composto em título foi preparado tratando o produto final do exemplo 83 com esterase de fígado de porco da mesma maneira do Exemplo 29. O produto foi purificado por HPLC de fase reversível utilizando as condições do Exemplo 1 para se conseguir o composto em título. O composto em título tinha o C RMN idêntico ao material racémico do Exemplo 33. EXEMPLO 71 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-1,4-dioxobutil]amino]-4-pentinoato de (3S)etilo ν-' -116-

νη

ΜΗ CO^t Ο composto em título foi preparado da mesma maneira do Exemplo 38 substituindo 3-amino-4-pentinoato por D,L-3-amino-4-pentinoato de (S)-etilo. O produto foi purificado por HPLC de fase reversível utilizando as condições do Exemplo 1 para se conseguir o composto em título. O produto tinha a mesma RMN que o Exemplo 38. A proporção dos enanteómeros foi determinada para ser 98:2 por quiral HPLC utilizando uma coluna de proteína AGP.

Análise calculada para C20H26N4O4 .mais 0,2 CF3CO2H, 0,8 HC1 e l,0H2O: C 51,59 H 5,88 N 13,08

Encontrado: C 51,58 H 5,45 N 12,89 EXEMPLO 72 Ácido (3S)-3-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]-amino]-l,4-dioxobutil]amino]-4-pentinóico - 117- - 117-

O composto em título foi preparado tratando o produto final do exemplo anterior com esterase de fígado de porco da mesma maneira do Exemplo 29. 0 produto foi purificado por HPLC de fase reversível utilizando as condições do Exemplo 1 para se conseguir o composto em título. O produto tinha o mesmo C RMN que o Exemplo 39. Rotação óptica [a]D- 33,7 (c 1,45, CH3OH).

Análise calc. para Ci6HigN404 mais 1,85 HC1 e 0,95H2O : C 46,32 H 5,28 N 13,50 Encontrado: C 46,51 H5,38 N 13,52 EXEMPLO 73 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)-fenil]amino]-l,4-dioxobutil]amino]-5-fenil-4-pentinoato de etilo

- 118-

/

J Ο composto em título foi preparado da mesma maneira do Exemplo 1 substituindo 3-amino-5-feml-4-pentinoato de etilo por ácido D,L-3-amino-3-fenilpropiónico. O produto foi purificado por HPLC de fase reversível utilizando as condições do Exemplo 1 para se conseguir o composto em título. O produto foi verificado por 13C RMN (CD3OD) δ 13,6, 30,5, 31,9, 39,0,40,5, 61,1, 83,0, 119,7, 122,8, 128,6, 128,8,129,1,131,8,144,8, 166,7,170,6, 172,4,172,7;

Espectrometria de bombardeamento de massa de átomo rápido de massa (MH4) = 435. EXEMPLO 74 Ácido 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]-amino]-l,4-dioxobutil]amino]-fenil-4-pentinóico

O composto em título foi preparado tratando o produto final do exemplo anterior com esterase de fígado de porco da mesma maneira do Exemplo 29. O produto foi purificado por HPLC de fase reversível utilizando as condições do Exemplo 1 para se conseguir o composto em título. O produto foi verificado por H RMN (CD3OD) δ 2,59-2,82 (m, 3-CH2), 5,05-4,14 (m, CHN), 7,27-7,42 m, PhH), 7,73-7,84 (m, PhH), 8,72 (br s, NH), 9,13 (br s, NH);

Espectrometria de bombardeamento de massa de átomo rápido (MH-) = 519.

Análise cale. para C20H26N4O4 mais 1,6 CF3C02H e l,0H2O : C 47,48 H 5,08 N 9,55 Encontrado: C 47,30 H4,57 N 9,65 EXEMPLO 75 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)-fenil]amino]-l,4-dioxobutil]amino]-5,5-dimetil-4-heptinoato de etilo

O composto em título foi preparado da mesma maneira do Exemplo 1 substituindo 3-amino-5,5-dimetil-4-heptinoato de etilo por ácido D,L-3-amino-3-fenilpropiónico.O produto foi purificado por HPLC de fase reversível utilizando as condições do Exemplo 1 para se conseguir o composto em título. O produto foi verificado por 13C RMN (CD3OD) δ 13,7, 30,4, 32,0, 38,6, 41,2, 61,0, 76,7, 92,7, 119,7, 122,8, 129,0,144,7,166,7,170,7,172,5;

Espectrometria de bombardeamento de massa de átomo rápido (MH-) = 413. - 120 -

7 EXEMPLO 76 Ácido 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]-amino]-1,4-dioxobutil]amino]-555_^. metil-4-heptinóico

O composto em título foi preparado tratando o produto final do exemplo anterior com esterase de fígado de porco da mesma maneira do Exemplo 29. O produto foi purificado por HPLC de fase reversível utilizando as condições do Exemplo 1 para se conseguir o composto em título. O produto foi verificado por 13C RMN (CD3OD) δ 30,4, 30,5, 32,0, 38,6, 41,0, 76,9, 93,1,119,8,122,4,129,1,144,8, 166,7, 172,6, 172,6.

Análise calc. para C20H26N4O4 mais 1,6 CF3C02H e Ι,ΟΗ^Ο : C 47,48 H 5,08 N9,55 Encontrado: C 47,30 H 4,57 N 9,65 -121 - [/Ui*

/,- 7 EXEMPLO 77 3 - [ [4- [ [4-(aminoiminometil)-fenil]amino] -1,4-dioxobutil] amino] -6-hidroxi-4-hexinoato de etilo

O

O composto em título foi preparado da mesma maneira do Exemplo 1 substituindo 3-amino-6-hidroxi-4-hexinoato de etilo por ácido D,L-3-amino-3-fenilpropiónico. O produto foi purificado por HPLC de fase reversível utilizando as condições do Exemplo 1 para se conseguir o composto em título. O produto foi verificado por H RMN (CD3OD) 5 l,14,(t, J=6Hz, CH3), 2,57-2,78 (m, 3 CH2), 4,09-4,17 (m, CH2OH), 4,95-5,05 m(CHN), 7,75-7,87 (m, PhH). EXEMPLO 78 Ácido 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]-amino]-l,4-dioxobutil]amino]-6-hidroxi-4-hexinóico 122 - ΙΜη

Ο composto em título foi preparado tratando o produto final do exemplo anterior com esterase de fígado de porco da mesma maneira do Exemplo 29. O produto foi purificado por HPLC de fase reversível utilizando as condições do Exemplo 1 para se conseguir o composto em título. O produto foi verificado por H RMN (CD3OD) δ 2,57-2,78 (m, 3 CH2), 4,16 (d, J=2,5Hz, CH2OH), 5,00-5,09 (m, CHN), 7,75-7,87 (m, PhH). EXEMPLO 79 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)-fenil]amino]-l,4-dioxobutil]ammo]-6-metoxi-4-hexinoato de etilo

O composto em título foi preparado da mesma maneira do Exemplo 1 substituindo 3-amino-6-metoxi-4-hexinoato de etilo por ácido D,L-3-amino-3- 7,-^. Λ··' - 123 - (Μη fenilpropiónico.O produto foi purificado por HPLC de fase reversível utilizando as condições do Exemplo 1 para se conseguir o composto em título. O produto foi verificado por H RMN (CD3OD) δ l,25,(t, J=6,5Hz, CH3), 2,54-2,78 (m, 3CH2), 3,32 (s, OCH3), 4,08 (d, J=2,5Hz, CH2OCH3), 4,14 (q, J=6,5Hz, CH2), 5,05-5,14 (m,CHN), 7,73-7,84 (m, PhH), 8,82 (br s, NH), 9,13 (br s, NH). EXEMPLO 80 Ácido 3 - [ [4- [ [4-(aminoiminometil)fenil]-amino] -1,4-dioxobutil] amino] -6- metoxi-4-hexinóico

O composto em título foi preparado tratando o produto final do exemplo anterior com esterase de fígado de porco da mesma maneira do Exemplo 29. O produto foi purificado por HPLC de fase reversível utilizando as condições do Exemplo 1 para se conseguir o composto em título. O produto foi verificado por 13C RMN (CD3OD) δ 29,1, 30,6, 37,2, 38,7, 55,5, 58,2, 77,4, 83,5, 118,4, 121,3, 127,8, 143,4,165,7, 171,0,171,2,171,4;

Análise calculada para Ci8H22N405 .mais 1,1 CF3C02H. 0.65 H20: - 124-

C 47,61 H 4,83 N 10,99

Encontrado: C 47,24 H4,43 N 11,25 EXEMPLO 81 Ácido 3(S)-[[4-[[4-(aminoiminometil)-fenil]amino]-1,4-dioxobutil]amino]-4- hidroxibutanóico

O derivado lactona preparado como habitualmente por acoplamento de hidrocloreto de ácido 4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-4-oxobutanóico preparado no Exemplo 1, Fase 1 e 3-amino-4-hidroxifurano foi dissolvido em água (20 ml) e o pH foi ajustado para 10,5 pela adição de LiOH. H2O. A reacção foi deixada prosseguir à temperatura ambiente durante 2 horas e o produto foi isolado por RPHPLC. As fracções apropriadas foram ajustadas para pH 7 pela adição de LiOH anterior para a remoção do solvente. Liofilização subsequente deu um sólido branco: *H RMN (dôDMSO) δ 2,5,(m, 6H), 2,9 (m, 1H), 4,08 (m, 1H), 4,42 (m, 2H), 7,80 (s, 4H), 8,5 (d, 1H), 8,85 (s, 2H), 10,4 (s, 1H). MS (FAB) 337,1 (MH +), 319,2 (Μ -H20 + H).

Análise elementar requerida para C15H20N4O5 .CF3CO2H . 1.5 H20:

/ C 42,77 Η 5,07 NI 1,74

Encontrado: C43,06 H4,24 NI 1,45 EXEMPLO 82a Ácidos P(S)-[[4-[[4-(aminoiminometil)-fenil]amino]-l,4-dioxobutil]amino]-y-hidroxi-(4-fluoro)fenilbutanóico (diastereisómero A) 6

OH F

Hidrólise do éster cíclico preparado a partir de ácido 3-amino-4-hidrofurano e 4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-4-oxobutanóico foi efectuada como descrito no Exemplo 81 para dar os desejados ácidos hidroxi com RMN, MS (FAB) 431,2 (MH+), e análise elementar correctos. EXEMPLO 82b Ácidos p(S)-[[4-[[4-(ammoiminometil)-fenil]amino]-l,4-dioxobutil]amino]-y-hidroxi-(4-fluoro)fenilbutanóico (diastereisómero B)

Hidrólise do éster cíclico preparado a partir de ácido 3-amino-4-hidrofurano e 4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-4-oxobutanóico foi efectuada como descrito no Exemplo 81 para dar os desejados ácidos hidroxi com RMN, MS (FAB) 431,2 (MH+), e análise elementar correctos. EXEMPLO 83 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)-fenil]amino]-1,4-dioxobutil]amino]-4-pentenoato de φ 3-(S)-etilo

o C02£t

O composto em título foi preparado da mesma maneira que o Exemplo 1 com as seguintes modificações: substituindo 3S-amino-4-pentenoato de etilo por 3-fenil-beta-alanina. O 3S-amino-4-pentenoato de etilo foi preparado -127 -

de maneira análoga à literatura precedente como descrito anterionnente e a estrutura foi verificada por C RMN do sal hidrocloreto (CDC13) δ 14,9, 37,7, 51,4, 62,2,121,9,133,1, 171,0. A análise do beta amino éster por HPLC quiral utilizando coluna [CR(+)]de éter Crownpak arrefecida para 5°C utilizando metanol:água 10:90 com pH de 1 (HCL04) e uma corrente de 0,5 mL/min mostrou uma proporção enanteomérica de 100:0. O composto em título tinha ao C RMN idêntico ao material racémico do Exemplo 32. A rotação óptica do sal TFA do composto em título foi: [a]589 + 4,6 (c 1,03, CH3OH).

Os Exemplos seguintes são reveladores. EXEMPLO 84 [[[2-[[[4-(aminoimmometil)fenil]amino]carbonil]ciclopropil]carbonil]oxo]-amino]-4-pentinoato de etilo

Fase 1 Preparação [[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-l-oxo]ciclopropil]- carboxilatode etilo

Ciclopropanodicarboxilato de dietilo (25 g; isómero trans de Aldrich) é adicionado à solução de 5,65 g de LiOH em 50 mL H2O. A mistura de duas fases é agitada e são adicionados 50 mL de etanol. Depois de 5 minutos de agitação, é observada uma mistura homogénea amarela e a agitação continuou durante 24 horas a 25°C. A mistura de reacção em bruto é dividida entre acetato de etilo e água (pH = 9). O extracto de acetato de etilo deveria conter 15 g de uma mistura de 2:1 de éster monoetílico:diácido. Uma porção desta mistura (7,5 g) é suspensa em diclorometano e tratada com um total de 67 mL de cloreto de oxalilo à temperatura ambiente durante um tempo total de 20 horas. Depois da concentração no vácuo, o óleo residual é retirado em 20 mL de dimetilformamida e é lentamente adicionada uma mistura de hidrocloreto de aminobenzamidina (12,5 g, 0,06 mol) e 15 mL de trietilamina em 50 mL de dimetilformamida. Depois de 16 horas de agitação a 25°C, a reacção é concentrada e o resíduo é retirado em H20/acetonitrilo e purificado por HPLC. O pico maior (detecção a 225 nM) é recolhido (Rt num H20:ACN linear 5:95 -» 70:30 durante 25 minutos é 16 min.). A liofílização deveria dar cerca de 730 mg de um pó branco o qual deveria dar M+H a 276,2 (calculado para C14H17N3O3: 275,1).

Fase 2 Preparação de ácido 2-[[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-l-oxo]ciclo-propilcarboxílico O produto preparado anteriormente é agitado numa solução de 1 g de LiOH, 5mL de acetonitrilo e 10 mL de H20 durante 6 horas à temperatura ambiente. Deverá aparecer um precipitado depois de se ajustar o pH para 6 depois da concentração. O precipitado é arrefecido, redissolvido em H20.acetonitrilo e pH é trazido para 2 com HC1. Esta solução depois da liofílização deveria dar cerca de 480 mg de um sólido branco: !H RMN (CD3OD) 5 1,3 (m, 2H), 1,95 (m, 1H), 2,12 (m, 1H), 7,6 (m, 4H).

Fase 3 3-[[2-[[[ [4-(aminoiminometil)fenil]amino] -1 -oxo] ciclopropil] -2- oxo]amino]-4-pentinoato de etilo O composto em título é preparado da mesma maneira do Exemplo 1 substituindo 3-amino-4-pentinoato de etilo por ácido D-L, 3-amino-3-fenilpropiónico e hidrocloreto de ácido 2-[[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]oxo]ciclopropilcarboxílico por hidrocloreto de ácido 4-[[4-(aminoimmometil)fenil]amino-4-oxobutanóic0. O produto é verifica- EXEMPLO 85 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]l,4-dioxobutil]ammo]-6-azido-4-hexinoato de etilo O composto em título pode ser preparado da mesma maneira do Exemplo 1 substituindo 3-amino-6-azido-4-hexinoato de etilo por ácido D,L-3-amino-3-fenilpropiónico. O 3-amino-6-azido-4-hexinoato de etilo pode ser preparado a partir do intermediário do Exemplo 77, 3-amino-6-hidroxi-4-hexinoato de etilo, por métodos normalizados: protecção da amina (BOC), mesilação do álcool, deslocamento por azida, e depois desprotecção da amina (TFA). O produto pode ser purificado por HPLC de fase reversível utilizando condições do Exemplo 1 para se conseguir o composto em título. O produto pode ser verificado por C RMN. EXEMPLO 86 Ácido 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino] 1,4-dioxobutil]amino]-6-azido-4-hexinóico O composto em título pode ser preparado tratando o produto final do exemplo anterior com esterase de fígado de porco da mesma maneira do Exemplo 29. O produto pode ser purificado por HPLC de fase reversível utilizando as condições do Exemplo 1 para se conseguir o composto em título. O produto pode ser verificado por C RMN. EXEMPLO 87 3-[[4-[[4-(ammoiminometil)fenil]amino]l,4-dioxobutil]amino]-6-amino-4-hexinoato de etilo O composto em título pode ser preparado tratando o composto em título do Exemplo 85 com trifenilfosfina e água em THF como descrito na literatura [N. Knouzi, M. Vaultier, R. Carrie Buli. Of Chem. Soc. France. 815 (1985)] o qual pode produzir o composto em título directamente. O produto pode ser purificado por HPLC de fase reversível utilizando as condições do Exemplo 1 para se conseguir o composto em título. O produto pode ser verificado por C RMN. EXEMPLO 88 Ácido 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino] 1,4-dioxobutil]amino]-6-amino-4-hexinóico O composto em título pode ser preparado tratando o produto final do exemplo anterior com esterase de fígado de porco da mesma maneira do Exemplo 29. O produto pode ser purificado por HPLC de fase reversível utilizando as condições do Exemplo 1 para se conseguir o composto em título. O produto pode ser verificado por C RMN. EXEMPLO 89 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]l,4-dioxobutil]amino]-6-metilsulfo-namido-4-hexinoato de etilo - 131 - u U/yj L- 1 O composto em título pode ser preparado da mesma maneira do Exemplo 1 substituindo 3-amino-6-metilsulfonamido-4-hexinoato de etilo por ácido D,L-3-amino-3-fenilpropiónico. O 3-amino-6-metilsulfonamido-4-hexinoato de etilo pode ser preparado a partir do intermediário do Exemplo 85, N-BOC 3-amino-6-azido-4-hexinoato de etilo, por métodos normalizados: redução utilizando trifenilfosfina e água em THF [N. Knouzi, M. Vaultier, R. Carrie Buli. Of Chem. Soc. France. 815 (1985)] o qual pode ser seguido do tratamento com cloreto metanossulfonilo e base, e desprotecção (TFA). O produto pode ser purificado por HPLC de fase reversível utilizando as condições do Exemplo 1 para se conseguir o composto em título. O produto pode ser verificado por C RMN. EXEMPLO 90 Ácido 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino] 1,4-dioxobutil]amino]-6-metil-sulfonamido-4-hexinóico O composto em título pode ser preparado tratando o produto final do exemplo anterior com esterase de fígado de porco da mesma maneira do Exemplo 29. O produto pode ser purificado por HPLC de fase reversível utilizando as condições do Exemplo 1 para se conseguir o composto em título. O produto pode ser verificado pr C RMN. EXEMPLO 91 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]l,4-dioxobutil]amino]-3-ciano-propanoato de etilo -132- /

O composto em título pode ser preparado da mesma maneira do Exemplo 1 substituindo 3-amino-3-cianopropanoato de etilo por ácido D,L-amino-3-fenilpropiónico. O 3-amino-3-cinopropanoato de etilo pode ser preparado a partir de N-CBZ-3-amino-3-carboxixnidopropanoato de etilo utilizando os seguintes métodos normalizados: desidratação para o nitrilo (POCI3), e despro-tecção (TFA). O produto pode ser purificado por HPLC de fase reversível utilizando as condições do Exemplo 1 para se conseguir 0 composto em título. O produto pode ser verificado por C RMN. EXEMPLO 92 3-[[4-[[4-( ammoiminometil)fenil] amino] 1,4-dioxobutil]amino]-3-cianopropanoato O composto em título pode ser preparado tratando o produto final do exemplo anterior com esterase de fígado de porco da mesma maneira do Exemplo 29. O produto pode ser purificado por HPLC de fase reversível utilizando as condições do Exemplo 1 para se conseguir o composto em título. O produto pode ser verificado por C RMN.

Este invento também diz respeito a novos compostos intermediários formados quando se preparavam os compostos descritos anteriormente os quais são representados pela fórmula química

em que R1 é seleccionada a partir de hidrogénio, radicais alquilo inferior, radicais alquenilo, radicais hidrocarbonetos aromáticos, radicais hidrocarbonetos alicícli-cos, radicais benzilo, radicais fenetilo, em que todos os referidos radicais são opcionalmente substituídos por halogénio, alcoxi inferior, hidroxi e alquilo inferior; A é seleccionado a partir do grupo que consiste em radicais alquilo inferior, radicais alquenilo inferior, radicais alquinilo inferior, e radicais alicícli-cos; Z é seleccionado a partir do grupo que consiste em radicais hidrogénio, alquilo inferior, halogénio, alcoxi, ciano, sulfonilo, carboxilo, e hidroxilo. W é como definido anteriormente mas é de preferência hidrogénio ou alquilo inferior. Exemplos destes intermediários são descritos no Exemplo 1, Fase 1 e Exemplo 2, Fase 7 e Exemplo 42, Fase 1 e Exemplo 51. R1 é de preferência hidrogénio. A é de preferência alquilo inferior. Z é de preferência hidrogénio.

Agregação de Plaquetas em PRP In-Vitro Cães fêmeas ou machos saudáveis foram alimentados durante 8 horas antes da retirada de sangue; depois foram recolhidos 30 ml do sangue total utilizando uma agulha borboleta e uma seringa de plástico de 30 cc com 3 ml de citrato de sódio tamponado 0,129 M (3,8%). A seringa foi rodada cuidadosamente enquanto se retirava o sangue para misturar com citrato. O plasma rico e plaquetas (PRP) foi preparado por centrifugação a 975 x g durante 3,17 minutos à -134-

3,17 minutos à temperatura ambiente deixando a centrifugação chegar ao fim sem travagem. O PRP foi removido do sangue com uma pipeta de plástico e colocado num tubo de centrifugação estéril cónico Corning de 50 ml com tampa de plástico o qual foi mantido à temperatura ambiente. O plasma pobre em plaquetas (PPP) foi preparado por centrifugação do restante sangue a 2000 x g durante 15 minutos à temperatura ambiente deixando a centrifugação chegar ao fim travagem. O PRP foi ajustado com PPP para uma contagem de 2-3 x 108 plaquetas por mL. 400 uL da preparação de PRP e 50 uL da solução dos compostos a serem testados ou solução salina foram pré-incubados durante 1 minutos a 37°C em BioData, Horsham, PA). 50 uL de adenosina 5’ difosfato (ADP) (50 um concentração final) foi adicionado a cuvetes e a agregação foi monitorida durante 1 minuto. Todos os compostos são testados em duplicado. Os resultados são calculados como se segue: Percentagem de controlo = [(OD máximo menos OD inicial do composto) dividido por (OD máximo menos OD inicial do controlo da solução salina)] x 100. A % de inibição = 100 -(percentagem de controlo).

Os compostos testados e as suas concentrações inibidoras médias (IC50) são registadas no Quadro I. Os IC50 (dosagem na qual 50% da agregação de plaquetas é inibida) foram calculados por regressão linear da curva de resposta da dose Os resultados do ensaio para os compostos dos Exemplos 1 até 12 são estabelecidos no Quadro I, em seguida.

QUADRO I

Exemplos Cães PRPIC50 μιη Efeito ex vivo depois de administração IG. 1 0,200 NT 2 3,2 NT 3 0,17 NT 4 >10 + 5 >10 + 6 0,7 NT 7 NT + 8 >10 NT 9 >10 NT 10 0,21 NT 11 u NT 12 5,2 NT 13 >10 + 14 0,4 NT 15 1,3 NT 16 0,39 NT 17 >10 + 18 0,58 NT 19 NT _ 20 0,6 NT 21 >10 NT 22 0,26 NT 23 ΝΤ ΝΤ 24 >10 ΝΤ 25 >10 ΝΤ 26 0,48 ΝΤ 27 ΝΤ ΝΤ 28 ΝΤ ΝΤ 29 1,5 ΝΤ 30 ΝΤ ΝΤ 31 1,5 ΝΤ 32 >10 + 33 0,27 ΝΤ 34 >10 + 35 0,36 ΝΤ 36 ΝΤ ΝΤ 37 0,29 ΝΤ 38 3,0 + 39 0,15 ΝΤ 40 ΝΤ ΝΤ 41 0,19 ΝΤ 42 ΝΤ ΝΤ 43 0,52 ΝΤ 44 >10 ΝΤ 45 4,8 ΝΤ 46 ΝΤ ΝΤ 47 ΝΤ ΝΤ 48 1,7 ΝΤ 49 .06 ΝΤ 50 0,053 ΝΤ / -137- -J^j

51 1,8 NT 52 NT NT 53 >10 NT 54 NT NT 55 >2,1 NT 56 >10 NT 57 NT + 58 0,11 NT 59 NT NT 60 >10 NT 61 NT NT 62 NT NT 63 NT NT 64 NT NT 65 NT NT 66 NT NT 67 NT NT 68 NT NT 69 NT NT 70 0,13 + 71 4,6 + 72 0,07 + 73 NT NT 74 0,18 NT 75 NT NT 76 0,6 NT 77 NT NT 78 0,22 NT J / - 138 -

J 79 NT NT ~~ ~~ 80 0,23 NT 81 0,7 NT 82a 0,15 NT 82b 0,8 NT 83 NT + NT - não testado A finalidade deste ensaio é determinar os efeitos dos compostos antiplaquetas em agregação de plaquetas induzida por colagénio ex vivo quando administrados quer intravenosamente ou oralmente a cães.

Amostras de sangue pré-tratamento (controlo) são retiradas de cães conscientes ou anestesiados (Beagles) e centrifugadas para preparar plasma rico em plaquetas (PRP). A resposta agregatória ao colagénio é medida num agregó-metro e utilizada como controlo. Os compostos são administrados, ou intragastri-camente (ou por cápsula ou tubo no estômago ou intravenosamente). Amostras de sangue são retiradas em intervalos pre-determinados depois da administração do composto, preparado o PRP e determinada a agregação ao colagénio. A inibição do composto de agregação é determinada comparando a resposta de agregação depois da administração do composto com a resposta de pré-tratamento. O estudo prolonga-se num máximo de 24 horas ou até a agregação de plaquetas voltar aos níveis de controlo. (Se a agregação ainda estiver inibida depois de 7 horas, uma amostra de sangue é retirada na manhã seguinte e testada. A duração da activida-de é determinada pelo espaço de tempo em que a agregação de plaquetas é inibida depois da administração do composto.

Os compostos do Exemplo #32 e Exemplo #38 são mostrados por inibirem agregação de plaquetas a 100% depois de 24 horas quando administrados oralmente a cães numa dose de 20 mg/Kg. O composto do Exemplo 13 é igualmente mostrado por inibir agregação de plaquetas a 100% quando administrado oralmente a um cão numa dose de 12,5 mg/Kg. Adicionalmente quando dado oralmente nessa dose durante 10 (dez) dias consecutivos a cães, o composto do Exemplo 13 mostrou actividade de agregação sustida.

Os compostos dos exemplos 71 e 72 são correntemente os melhores compostos.

Lisboa, 10 de Agosto de 2001

Agente Oficial da Propriedade Industrial RUA VICTOR CORDON, 14 1200 USBOA

Claims (21)

1. -1-

   REIVINDICACÔES 1. Um derivado ácido β amino ou um seu sai farmaceuticamente aceiotável tendo a fórmula

   v 1 | Z*-Ç-COaW N-CO- A ΌΟ-ΝΗ—C-(CHj)a-R* H s em que R1 é seleccionado a partir de hidrogénio, radicais alquilo de desde 1 a 10 átomos de carbono, radicais alquenilo de desde 2 até 10 átomos de carbono, radicais hidrocarboneto aromático de desde 4 até 16 átomos de carbono, radicais hidrocarboneto alicíclico tendo um radical alifático no anel com desde 3 até 10 átomos de carbono, radicais benzilo, radicais fenetilo, em que os referidos radicais são opcionalmente substituídos por halogénio, alcoxi tendo desde 1 até 10 átomos de carbono na porção alquilo, hidroxi e alquilo de desde 1 até 10 átomos de carbono; R2 é seleccionado a partir hidrogénio, radicais alquilo de desde 1 até 10 átomos de carbono, radicais alquenilo de desde 2 até 10 átomos de carbono, radicais alquinilo tendo desde 2 até 10 átomos de carbono, radicais hidrocarboneto alicíclico tendo um radical alifático num anel com desde 3 até 10 átomos de carbono, radicais hidrocarboneto aromático de desde 4 até 16 átomos de carbono, em que os referidos radicais são opcionalmente substituídos por hidroxi, alcoxi tendo desde 1 até 10 átomos de carbono na porção alquilo, alquilo desde 1 até 10 átomos de carbono, halogénio, nitro, ciano, azido, ureído, ureileno, caiboxilo ou derivados carboxilo, trifluorometilo, aciloxi, alquiltio, ariltio, alquilsulfenilo, arilsulfenilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, amino, alquilamino, trialquilsililo, aminosulfonilo, dialquilaxnino, alcanoilamino, aroilamino, fenilo, naftilo, alquinilo tendo desde 2 até 10 átomos de carbono, os quais são opcionalmente substituídos por um ou mais dos seguintes: halogénio, nitro, alcoxi tendo desde 1 até 10 átomos de carbono na porção alquilo, alquilo de desde 1 até 10 átomos de carbono, trialquilsililo, azida e fenilo. A é seleccionado a partir de radicais alquilo de desde 1 até 10 átomos de carbono, radicais alquenilo de desde 2 até 10 átomos de carbono, radicais alquinilo tendo desde 2 até 10 átomos de carbono, radicais alicíclicos tendo um radical alifático num anel com desde 3 até 10 átomos de carbono, em que os referidos radicais são opcionalmente substituídos por hidroxilo, alcoxi tendo desde 1 até 10 átomos de carbono na porção alquilo, alquilo de desde 1 até 10 átomos de carbono, halogénio, alcoxicarbonilalquilo, amino, alquilamino, dialquilamino, acilamino, alquiltio, sulfonilo, e hidrocarbonetos aromáticos de desde 4 até 16 átomso de carbono, os quais são opcionalmente substituídos por halogénio, nitro, alcoxi tendo desde 1 até 10 átomos de carbono; W é seleccionado a partir de hidrogénio, radicais alquilo de desde 1 até 10 átomos de carbono, radicais alquenilo de desde 2 até 10 átomos de carbono, radicais alquinilo de desde 2 até 10 átomos de carbono, radicais hidrocarboneto alicíclico tendo um radical alifático num anel com desde 3 até 10 átomos de carbono e radicais hidrocarboneto aromáticode desde 4 até 16 átomos de carbono, em que os referidos radicais são opcionalmente substituídos por hidroxilo, alcoxi tendo desde 1 até 10 átomos de carbono na porção alquilo, alquilo de desde 1 até 10 átomos de carbono, halogénio, nitro, amino, aciloxi, e fenilo e naftilo os quais podem ser opcionalmente substituídos por halogénio, -3-

   7 nitro, aciloxi tendo desde 1 até 10 átomos de carbono na porção alquilo e alquilo de desde 1 até 10 átomos de carbono; Z, Z’, Z” são seleccionados independentemente a partir de hidrogénio, radicais alquilo de desde 1 até 10 átomos de carbono, halogénio, alcoxi, ciano, sulfonilo, carboxilo, alcoxicarbonilo, e radicais hidroxilo; q é um inteiro a partir de 0 até 6; e com a condição de que quando A é trimetileno e q é 0 então R2 não é hidrogénio, radical metilo ou radical fenilo e também que quando A é trimetileno e q é 1 então R2 não é hidrogénio.
2. 2. Um derivado ácido β amino ou um seu sal farmaceuticamente aceitável tendo a fórmula:

   v ' | r-ç-coaw N-CO* A -CO-NH-—C-{CHa)a.R* H H em que R1 é seleccionado a partir de hidrogénio, radicais alquilo de desde 1 a 10 átomos de carbono, radicais alquenilo de desde 2 até 10 átomos de carbono, radicais hidrocarboneto aromático de desde 4 até 16 átomos de carbono, radicais hidrocarboneto alicíclico tendo um radical alifático no anel com desde 3 até 10 átomos de carbono, radicais benzilo, radicais fenetilo, em que os referidos radicais são opcionalmente substituídos por halogénio, alcoxi, hidroxi e alquilo de desde 1 até 10 átomos de carbono; -4- (yU R2 é seleccionado a parlir hidrogénio, radicais alquilo de desde 1 até 10 átomos de carbono, radicais alquenilo de desde 2 até 10 átomos de carbono, radicais alquinilo tendo desde 2 até 10 átomos de carbono, radicais hidrocarboneto alicíclico tendo um radical alifático num anel com desde 3 até 10 átomos de carbono, em que os referidos radicais são opcionalmente substituídos por hidroxi, alcoxi tendo desde 1 até 10 átomos de carbono na porção alquilo, alquilo desde 1 até 10 átomos de carbono, halogénio, nitro, ciano, azido, ureído, ureileno, carboxilo ou derivados carbonilo, trifluorometilo, aciloxi, alquiltio, ariltio, alquilsulfenilo, arilsulfenilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, amino, alquilamino, trialquilsililo, sulfonilamino, dialquilamino, alcanoilamino, aroilamino, fenilo, naftilo e alquinilo tendo desde 2 até 10 átomos de carbono, os quais são opcionalmente substituídos por um ou mais dos seguintes: halogénio, nitro, alcoxi tendo desde 1 até 10 átomos de carbono na porção alquilo, alquilo de desde 1 até 10 átomos de carbono, trialquilsililo, azida e fenilo. A é seleccionado a partir de radicais alquilo de desde 1 até 10 átomos de carbono, radicais alquenilo de desde 2 até 10 átomos de carbono, radicais alquinilo tendo desde 2 até 10 átomos de carbono, radicais alieiclicos tendo um radical alifático num anel com desde 3 até 10 átomos de carbono, em que os referidos radicais são opcionalmente substituídos por hidroxilo, alcoxi tendo desde 1 até 10 átomos de carbono na porção alquilo, alquilo de desde 1 até 10 átomos de carbono, halogénio, alcoxicarbonilalquilo, amino, alquilamino, dialquilamino, acilamino, alquiltio, sulfonilo, e hidrocarbonetos aromáticos de desde 4 até 16 átomos de carbono, os quais são opcionalmente substituídos por halogénio, nitro, alcoxi tendo desde 1 até 10 átomos de carbono na porção alquilo e alquilo tendo desde 1 até 10 átomos de carbono; W é seleccionado a partir de hidrogénio, radicais alquilo de desde 1 até 10 átomos de carbono, radicais alquenilo de desde 2 até 10 átomos de carbono, radicais alquinilo de desde 2 até 10 átomos dc carbono, radicais hidrocarboneto alicíclico tendo um radical alifático num anel com desde 3 até 10 átomos de carbono e radicais hidrocarboneto aromático de desde 4 até 16 átomos de carbono, em que os referidos radicais são opcionalmente substituídos por hidroxilo, alcoxi tendo desde 1 até 10 átomos de carbono na porção alquilo, alquilo de desde 1 até 10 átomos de carbono, halogénio, nitro, amino, aciloxi, e fenilo e naftilo os quais podem ser opcionalmente substituídos por halogénio, nitro, aciloxi tendo desde 1 até 10 átomos de carbono na porção alquilo e alquilo de desde 1 até 10 átomos de carbono; Z, Z’, Z” são seleccionados independentemente a partir de hidrogénio, radicais alquilo de desde 1 até 10 átomos de carbono, halogénio, alcoxi, ciano, sulfonilo, carboxilo, alcoxicarbonilo, e radicais hidroxilo; q é um inteiro a partir de 0 até 6; e com a condição de que quando A é trimetileno e q é 0 então R2 não é hidrogénio, radical metilo ou radical fenilo e também que quando A é trimetileno e q é 1 o R2 não é hidrogénio.
3. 3. Os derivados ácido β amino substituídos de acordo com a Reivindicação 1 em que; R1 é seleccionado a partir de hidrogénio, radicais alquilo de desde 1 a 6 átomos de carbono, radicais alquenilo de desde 2 até 6 átomos de carbono, radicais hidrocarboneto aromático de desde 4 até 16 átomos de carbono, radicais -6- Umi -6- Umi

   hidrocarboneto alicíclico tendo um radical alifático no anel com desde 3 até 6 átomos de carbono, radicais benzilo, radicais fenetilo, em que os referidos radicais são opcionalmente substituídos por halogénio, alcoxi tendo desde 1 até 10 átomos de carbono na porção alquilo, hidroxi e alquilo de desde 1 até 10 átomos de carbono; R2 é seleccionado a partir hidrogénio, radicais alquilo de desde 1 até 6 átomos de carbono, radicais alquenilo de desde 2 até 6 átomos de carbono, radicais alquinilo tendo desde 2 até 8 átomos de carbono, radicais hidrocarboneto alicíclico tendo um radical alifático num anel com desde 3 até 6 átomos de carbono, radicais hidrocarboneto aromático de desde 4 até 16 átomos de carbono, em que os referidos radicais são opcionalmente substituídos por hidroxilo, alcoxi tendo desde 1 até 10 átomos de carbono na porção alquilo, alquilo desde 1 até 10 átomos de carbono, halogénio, nitro, ciano, azido, ureído, ureileno, amino, trialquilsililo, alquilsulfonilo, fenilsulfonilo, trifluorometilo, acetoxi, acetilamino, benzoilamino, derivados carbonilo, alquilsulfonil amino, e fenilsulfonil amino; A é seleccionado a partir de radicais alquilo de desde 1 até 6 átomos de carbono, radicais alquenilo de desde 2 até 6 átomos de carbono, radicais alquinilo tendo desde 2 até 4 átomos de carbono, e radicais alicíclicos tendo um radical alifático num anel com desde 3 até 5 átomos de carbono, em que os referidos radicais são opcionalmente substituídos por hidroxilo, alcoxi tendo desde 1 até 10 átomos de carbono na porção alquilo, halogénio, alquiltio e amino; W é seleccionado a partir de hidrogénio, radicais alquilo de desde 1 até 6 átomos de carbono, radicais alquenilo de desde 2 até 6 átomos de carbono, radicais hidrocarboneto alicíclico tendo um radical alifático num anel com desde 3 até 6 átomos de carbono e radicais hidrocarboneto aromáticode desde 6 até 12 -7- Uuj átomos de carbono, em que todos os referidos radicais são opcionalmente substituídos por hidroxilo, alcoxi tendo desde 1 até 10 átomos de carbono na porção alquilo, alquilo de desde 1 até 10 átomos de carbono, halogénio, nitro, amino, e aciloxi; Z, Z’, Z” são seleccionados independentemente a partir de hidrogénio, halogénio, alcoxi tendo desde 1 até 10 átomos de carbono na porção alquilo, ciano, sulfonilo, carboxilo, alcoxicarbonilalquilo, e radicais alquilo de desde 1 até 10 átomos de carbono; e q é um inteiro a partir de 0 até 6.
4. 4. Um derivado ácido β amino substituído de acordo com a Reivindicação 1 em que R1 é seleccionado a partir de hidrogénio, radicais alquilo de desde 1 a 10 átomos de carbono, radicais alquenilo de desde 2 até 10 átomos de carbono, hidrocarbonetos aromáticos de desde 4 até 16 átomos de carbono, radicais hidrocarboneto alicíclico tendo um radical alifático num anel com desde 3 até 10 átomos de carbono, radicais benzilo, radicais fenetilo, em que todos os referidos radicais são opcionalmente substituídos por halogénio, alcoxi tendo desde 1 até 10 átomos de carbono na porção alquilo, hidroxi e alquilo de desde 1 até 10 átomos de carbono; R2 é seleccionado a partir hidrogénio, radicais alquilo de desde 1 até 10 átomos de carbono, radicais cicloalquilo tendo u radical alifático num anel de desde 3 até 10 átomos de carbono, radicais alquenilo de desde 2 até 10 átomos de carbono, radicais alquinilo tendo desde 2 até 10 átomos de carbono, radicais fenol, radicais fenilo, radicais riaflilu, em que cada radical pode ter um ou mais substituintes seleccionados a partir o grupo que consiste em halogénio, alquilo desde 1 até 10 átomos de carbono, alcoxi tendo um radical alifático de desde 3 até 10 átomos de carbono, derivados carboxilo, nitro, ciano, azido, ureído, ureileno, alcoxicarboniloxi, hidroxilo, alquilamino, alcoxicarbonilo, trialquilslilo, alcoxiimino, alquilsulfonilo, fenilsulfonilo, alquilsulfonilo amino, fenilsulfonilo amino e amino; A é seleccionado a partir de radicais alquilo de desde 1 até 10 átomos de carbono, cicloalquilo tendo um radical alifático de desde 3 até 10 átomos de carbono, e radiacis alquenilo de desde 2 até 10 átomos de carbono; W é seleccionado a partir de hidrogénio, radicais alquilo de desde 1 até 10 átomos de carbono; Z, Z’, Z” são seleccionados independentemente a partir de halogénio, hidrogénio, e alcoxi tendo desde 1 até 10 átomos de carbono na porção alquilo, e alcoxicarbonilmetilo, e radicais alquilo de desde 1 até 10 átomos de carbono; q é um inteiro a partir de 0 até 6;
5. 5. Um derivado ácido β amino substituído de acordo com a Reivindicação 1 em que: em que R1 é seleccionado a partir de hidrogénio, radicais alquilo de desde 1 a 10 átomos de carbono, radicais benzilo, radicais fenilo; -9-

   t^t-Ί R2 é seleccionado a partir hidrogénio, radicais alquilo de desde 1 até 10 átomos de carbono, alquenilo de desde 2 até 10 átomos de carbono, alquinilo tendo desde 2 até 10 átomos de carbono, cicloalquilo tendo um radical alifáico num anel com desde 3 até 10 átomos de carbono, radicais fenilo e benzilo em que os referidos radicais são opcionalmente substituídos por carboxilo, alcoxicarbonilo, ciano, hidroxiaminocarbonilo, hidroxilo, ureído, alcoximetilaminocarbonilo, halogénio, acetoxi, alcoxi, metoxiimino, azido, trimetilsililo, fenilsulfonilo, metilsulfonilo amino, fenilsulfonilo amino, fenilo e t-butilo; A é seleccionado a partir de radicais alquilo de desde 1 até 10 átomos de carbono, cicloalquilo tendo um radical alifático num anel com desde 3 até 10 átomos de carbono e radicais alquenilo de desde 2 até 10 átomos de carbono em que os referidos radicais podem ser opcionalmente substituídos por radicais alquilo de desde 1 até 10 átomos de carbono; W é seleccionado a partir de hidrogénio e radicais alquilo de desde 1 até 10 átomos de carbono; Z, Z’, Z” são seleccionados independentemente a partir de hidrogénio, metilo, etilo, hidroxi, metoxi, cloro, flúor, alcoxicarbonilo, e alcoxicarbonilmetilo; q é um inteiro a partir de 0 até 4; 6. Ácido β amino substituído de acordo com a Reivindicação 1 em que: -10- (Μη (yOvl^ R1 é seleccionado a partir dc hidrogénio c radicais benzilo; R2 é seleccionado a partir hidrogénio, radicais alquilo de desde 1 até 10 átomos de carbono, em que os referidos radicais alquilo podem ser opcionalmente substituídos por carboxilo, alcoxicarbonilo, ciano, hidroxiaminocarbonilo, hidroxilo, ureído, alcoximetilaminocarbonilo, acetiloxi, alcoxi, metoxiimino, azido, trimetilsililetinilo, e fenilo sulfonilo; A é seleccionado a partir de radicais alquilo de desde 1 até 10 átomos de carbono e é opcionalment substituído por radicais alquilo de desde 1 até 10 átomos de carbono; W é seleccionado a partir de hidrogénio e alquilo de desde 1 até 10 átomos de carbono; Z é seleccionado a partir de hidrogénio, halogénio e alquilo de desde 1 até 10 átomos de carbono; Z’, Z” são seleccionados independentemente a partir de hidrogénio, alquilo de desde 1 até 10 átomos de carbonoe hidroxi; q é 0 até 2. 7. Ácido β amino substituído de acordo com a Reivindicação 1 em que: R1 é seleccionado a partir de hidrogénio e radicais benzilo; - 11 -

   R2 é seleccionado a partir hidrogénio, radicais alquilo de desde 1 até 10 átomos de carbono, em que os referidos radicais alquilo podem ser opcionalmente substituídos por carboxilo, alcoxicarbonilo, ciano, hidroxiaminocarbonilo, hidroxilo, ureído, alcoximetilaminocarbonilo, acetoxi, alcoxi, metoxiimino, azido, trimetilsililetinilo, e fenilsulfonilo; A é um radical cicloalquilo tendo um radical alifático num anel com desde 3 até 10 átomos de carbono; W é seleccionado a partir de hidrogénio e alquilo de desde 1 até 10 átomos de carbono; Z é seleccionado a partir de hidrogénio, halogénio e alquilo de desde 1 até 10 átomos de carbono; Z’, Z” são seleccionados independentemente a partir de hidrogénio, alquilo de desde 1 até 10 átomos de carbonoe hidroxi; q é 0 até 2. 8. Ácido β amino substituído de acordo com a Reivindicação 1 em que: R1 é seleccionado a partir de hidrogénio e radicais benzilo; R2 é seleccionado a partir de alquenilo de desde 2 até 10 átomos de carbono, e alquinilo tendo desde 2 até 10 átomos de carbono; - 12-

   A é um radical alquilo de desde 1 até 10 átomos de carbono e pode ser substituído por alquilo de desde 1 até 10 átomos de carbono; W é seleccionado a partir de hidrogénio e radicais alquilo de desde 1 até 10 átomos de carbono; Z é seleccionado a partir de hidrogénio, halogénio e alquilo de desde 1 até 10 átomos de carbono; Z’, Z” são seleccionados independentemente a partir de hidrogénio, alquilo de desde 1 até 10 átomos de carbonoe hidroxi; q é um inteiro desde 0 até 2. 9. Ácido β amino substituído de acordo com a Reivindicação 1 em que: R1 é seleccionado a partir de hidrogénio e radicais benzilo; •y R é seleccionado a partir alquenilo de desde 2 até 10 átomos de carbono, e alquinilo tendo desde 2 até 10 átomos de carbono; A é um radical cicloalquilo tendo um radical alifático num anel com desde 3 até 10 átomos de carbono; W é seleccionado a partir de hidrogénio e radicais alquilo de desde 1 até 10 átomos de carbono; -13-

   LA 'i/ Z é seleccionado a partir de hidrogénio, halogénio e alquilo de desde 1 até 10 átomos de carbono; Z\ Z” são seleccionados independentemente a partir de hidrogénio, alquilo de desde 1 até 10 átomos de carbonoe hidroxi; q é um inteiro desde 0 até 2.
6. 10. Derivado ácido β amino substituído de acordo com a Reivindicação 5 em que "A” é seleccionado a partir de radicais metilenilo, propenilo, vinilenilo, alilenilo, etilidenilo, e etilenilo.
7. 11. Derivado de ácido β amino substituído de acordo com a Reivindicação 5 que é 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-l,4-dioxobutil]amino]pentanodioato de dimetilo. 12. Ácido β amino substituído de acordo com a Reivindicação 5 que é : Ácido 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-l,4-dioxobutil]amino]pentano-dióico, monometiléster. 13. Ácido β amino substituído de acordo com a Reivindicação 5 que é : Ácido 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-1,4-dioxobutil]amino]pentano- dióico. 14. Ácido β amino substituído de acordo com a Reivindicação 5 que é: 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-l,4-dioxobutillamino]-4-fenilsulfonilo butanoato de etilo. - 14-

   ί^~.

   -Ίτ-ν'ΐ 15. Ácido β amino substituído de acordo com a Reivindicação 5 que é : Ácido 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-1,4-dioxobutil]amino]-4-fenil-sulfonilo butanóico.
8. 16. Derivado de ácido β amino substituído de acordo com a Reivindicação 5 que é : 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-l,4-dioxobutil]amino]-5-hexanoato de etilo.
9. 17. Derivado de ácido β amino substituído de acordo com Reivindicação 5 que é : Ácido 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-l,4-dioxobutil]amino]-4 pentenóico.
10. 18. Derivado de ácido β amino substituído de acordo com a Reivindicação 5 que é : 3-[[4-[[4-(aminoiminometiI)fenil]amino]-l,4-dioxobutil]amino]-4-pentinoato d.e etilo
11. 19. Derivado de ácido β amino substituído de acordo com a Reivindicação 5 que é: Ácido 3- [[4- [ [4-(aminoiminometil)fenil] amino]-1,4-dioxobutil] amino] -4- pentinóico.
12. 20. Derivado de ácido β amino substituído de acordo com a Reivindicação 5 queé : - 15- (/Λη 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]ammo]-l,4-diuAubutil]ainÍno]-4-pentinoato de (3S)-etilo.
13. 21. Derivado de ácido β amino substituído de acordo com a Reivindicação 5 que é: Ácido (3S)-3-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-l,4-dioxobutil]amino]-4-pentinóico.
14. 22. Derivado de ácido β amino substituído de acordo com a Reivindicação 5 queé β -[[ [2-[ [ [4-aminoiminometil)fenil]amino] carbonil] ciclopropil]carbonil] amino] fenilpro-panoato de t-butilo
15. 23. Derivado de ácido β amino substituído de acordo com a Reivindicação 5 que é : P-[[[2-[[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]carbonil]ciclopropl]carbonil]amino]-butanoato, isómero 1.
16. 24. Derivado de ácido β amino substituído de acordo com a Reivindicação 5 que é: P-[[[2-[[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]carbonil]ciclopropil]carbonil]amino]-butanoato, isómero 2.
17. 25. Composição farmacêutica que compreende pelo menos um veículo não-tóxico farmaceuticamente aceitável e pelo menos um composto de acordo com a Reivindicação 1. -16-

    7
18. 26. Composição farmacêutica de acordo com a Reivindicação 25 que compreende pelo menos um veículo não-tóxico farmaceuticamente aceitável e pelo menos um composto de acordo com a Reivindicação 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15,16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, oou 24 em conjunto com o referido veículo.
19. 27. Utilização de pelo menos um composto de acordo com a Reivindicação 1 para amnufactura de um medicamento para inibir a agregação de plaquetas num mamífero.
20. 28. Utilização de acordo com a Reivindicação 27 em que o composto está de acordo com a Reivindicação 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14,15,16, 17,18,19, 20, 21,22, 23 e 24.
21. 29. Composto com a fórmula:

    R» I N-CO- A -COaW em que R1 é seleccionado a partir de hidrogénio, radicais alquilo de desde 1 a 6 átomos de carbono, radicais alquenilo de desde 2 até 6 átomos de carbono, radicais hidrocarboneto alicíclico tendo um radical alifático num anel com 3 até 6 átomos de carbono, radicais hidrocarboneto aromático de desde 4 até 16 átomos de carbono, radical benzilo, e radicais fenetilo; A é seleccionado a partir de radicais alquilo de desde 1 ate 6 átomos de carbono, radicais alquenilo tendo desde 2 até 6 átomos de carbono, radicais alquinilo tendo desde 2 até 6 átomos de carbono e radicais alicíclico tendo radicaia alifáticos num anel com 3 até 6 átomos de carbono; Z é seleccionado a partir de hidrogénio, radicais alquilo tendo desde 1 até 6 átomos de carbono, halogénio, alcoxi, ciano, sulfonilo, carboxilo e hidroxilo;; W é hidrogénio e alquilo tendo desde 1 até 6 átomos de carbono. Lisboa, 10 de Agosto de 2001 ALHO de Industria! f LUÍS SILVA CARVALHO Agente Oficial da Propriedade RUA VICTOR CORDON, 14 1200 LISBOA