PT2291185E - Composição de octenidina - Google Patents

Description

ΡΕ2291185 1 DESCRIÇÃO "COMPOSIÇÃO DE OCTENIDINA" A presente invenção diz respeito à área das fórmulas para desinfectar e antisépticas, tal como a sua utilização. 0 dicloridrato de octenidina é uma substância activa microbiocida, que é utilizado sobretudo como antiseptico da pele, mucosa e feridas. A comercialização ocorre com o nome de mercado Octenisept ®. Devido por um lado ao seu largo espectro de efeito e por outro à sua boa tolerância fisiológica, esta substância activa tem vindo a ganhar importância como antiséptico e tem substituído, nalgumas indicações substâncias antisépticas clássicas como clorohexidina, triclosano e iodopovidona.

Octenidina é adsorvida fortemente em superfícies celulares negativas. Aí reage com polissacáridos aniónicos da parede celular microbiana e fosfolípidos da membrana celular, deteriora o sistema enzimático, perturba as funções celulares e conduz a fugas na membrana plasmática. Assim é perturbada a função das mitocôndrias. Estudos mostram uma forte aderência aos componentes lipídicos em membranas celulares (p.ex. cardiolipina), o que explica a elevada acção antimicrobiana e simultânea boa tolerância 2 ΡΕ2291185 para o epitélio humano e tecido da ferida. A octenidina é eficaz, a um tempo de actuação de 30 min, a uma concentração de 22 ou 17 mg/1 (=0,0022% ou 0,0017%) contra E.coli ou S. aureus (Kramer A, Muller G; Octedidindihydrochlorid; in: WallhàuPers Praxis der Sterilisation, Desinfektion, Antiseptik und Konservierung; Stuttgart: Thieme; 2007). A octenidina ou o dicloridrato de octenidina e os seus derivados são descritos nas patentes US 4,206,215 e US 4,442,125 como substâncias antimicrobianas. DE 3 925 540 Cl diz respeito a uma composição aquosa antiséptica, contendo octenidina e fenoxietanol e/ou fenoxipropanol que são utilizados como solubilizantes. DE 10 2004 052 308 AI e WO 2006/039961 dizem respeito a comprimidos de chupar, que contêm octenidina que se pretende numa matriz de açúcar. Esta matriz é uma massa sólida de açúcar no intervalo de 70-99,95% de peso, que funciona como veiculo e disfarça o gosto amargo da octenidina . WO 2007/023066 AI diz respeito a uma solução de dicloridrato de octenidina e um álcool univalente ou bivalente ou glicerina. Estes álcoois são considerados como alternativa ao fenoxietanol ou fenoxipropanol de preparações anteriores de dicloridrato de octenidina. WO 2007/0031519 A2 diz respeito a preparações de dicloridrato de octenidina na forma de lipossomas de reves- 3 ΡΕ2291185 timento. Através da utilização de lipossomas de fosfoli-pidos deve reduzir-se a citotoxicidade da octenidina. EP 1 683 416 A diz respeito à adição de álcool às soluções de octenidina. A fórmulas exemplificativas foram adicionados sorbitol ou glicerina. EP 1 683 417 A tem como centro fórmulas de octenidina que contêm determinados éteres de glicerina. Exemplos de fórmulas apresentam glicerina ou gluconato de sódio como aditivo. US 4 420 484 A diz respeito a soluções de compostos antimicrobianos amino e amónio. Também é apresentada octenidina numa fórmula com PEG. W02007/023066 A diz respeito a soluções de di-cloridrato de octenidina para desinfecção de feridas e mucosas, em que era um objectivo, substituir aditivos, como p.ex. fenoxietanol por outros álcoois. É então sugerida, por exemplo, a adição de pentano-1,2-diol. A glicerina é mencionada como aditivo.

Kramer et al., Skin Pharmacology and Physiology 17 (2004): 141-146, diz respeito a um estudo para comparar o potencial antiséptico de octenidina e poli-hexanida. O resultado foi que octenidina era menos eficaz do que a poli-hexanida e esta diminuição não era devida à adição de fenoxietanol que está presente em Octenisept®. 4 ΡΕ2291185 US 2001/03693 AI descreve fórmulas de octenidina com álcoois univalentes.

Apesar das vantagens de octenidina era desejável obter um preparado que apresente efeitos melhorados particularmente na utilização terapêutica para antiséptico de feridas e mucosas.

Por conseguinte, a presente invenção diz respeito num aspecto a octenidina ou a um sal farmacêutico deste, particularmente dicloridrato de octenidina destinado para administração terapêutica conjunta da octenidina em solução com um poliálcool da Fórmula 1: (H-C-OH)a(HO-C-OH)b(H-C-H)c em que a, b, c são números inteiros, em que a+b é pelo menos 2, preferivelmente pelo menos 3, c é seleccionado de 0, 1 ou um número de 2 a a+b, adicionalmente com um ou mais grupos aldeido desde que eles formem hemiacetais ou acetais (ciclicos) com um dos grupos hidroxilo e/ou um ou mais grupos ceto se for caso disso como acetal (ou cetal) com um dos grupos hidroxilo, sendo caso disso, adicionalmente com um ou mais grupos ácido carboxilico desde que o poliálcool seja um hemiacetal ou acetal ciclico, preferencialmente com um tamanho de anel de 5 a 7 átomos, ou um polimero, poliéter ou poliéster deste, desde que o poliálcool exista como um polimero, poliéter ou poliéster com pelo menos duas unidades da fórmula 1 se a+b é 2 ou 3. 5 ΡΕ2291185

Num aspecto particularmente preferencial, a presente invenção diz respeito a uma composição farmacêutica com octenidina e glucose como mistura ou como substâncias separadas num estojo ("kit") para administração conjunta em solução.

Preferencialmente a presente invenção diz respeito num aspecto a uma composição contendo uma solução de Octenidina, de preferência dicloridrato de octenidina, ou um dos seus sais aceitáveis do ponto de vista farmacêutico e glucose com uma concentração de glucose de 0,01% a 12% (p/v), preferivelmente de 0,1% a 10%, particularmente preferida de 0,5% té 7,5%, mais preferivelmente de 2,5% a 5% e uma concentração de octenidina de 0,0001% a 5% (p/p), preferivelmente de 0,001% a 1%, particularmente preferida de 0,002% a 0,5%, sendo caso disso em conjunto com um veiculo. Objectos particulares e adicionais da patente são definidos nas reivindicações.

Octenidina é um agente bacteriostático/ bacteri-cida altamente eficaz, utilizado várias vezes na limpeza de ferimentos e pré-operatório para desinfecção da área a operar, especialmente como sal dicloridrato. Até agora tem sido utilizado principalmente como solução aquosa na concentração 0,1% (p/v) ou como diluição 1:1 com NaClphysioi. A excelente inibição em procariotas abrange também uma certa desvantagem para o crescimento de células eucariotas, que numa correcta cicatrização têm que proliferar e diferenciar, para produzir uma cicatriz densa com boa 6 ΡΕ2291185 adesão. A estabilidade da cobertura é dependente da formação de interacções moleculares da matriz do tecido com moléculas da superfície celular.

De acordo com a invenção, mostrou-se que a utilização de NaClfiSi0i causa precipitação em Octenisept®, que diminui a eficácia. Pode ainda mostrar-se que esta desvantagem pode ser evitada pela adição de poliálcoois, especialmente glucose. Esta fórmula, utilizada em determinadas concentrações favorece a formação reforçada de interacções célula-matriz, consequentemente chamada adesão celular, que foi medida em células fibroblastóides cultivadas por meio de ensaios de adesão celular. Com estes procedimentos de medida, pode ser determinado o modo de acção da composição de acordo com a invenção, e determinada a concentração óptima de poliálcool, particularmente de glucose. A interacção de octenidina e bactérias é um factor para a sua eficácia. Pelo que se que se sabe até agora, a superfície celular carregada negativamente, parece ser responsável pela ligação à octenidina, carregada positivamente. Se o Octenisept®, for aplicado como é normalmente o caso numa diluição 1:1 com solução salina fisiológica, é geralmente assim considerado - sem ser restrito a uma determinada teoria, que a camada mista de hidratos formada à volta da molécula de octenidina de NaCl e o dipolo de água conduz a redução da carga positiva efectiva e consequentemente a interacção reduzida com a parede celular bacteriana. De acordo com a invenção 7 ΡΕ2291185 observou-se que a adição de poliálcoois, principalmente glucose, melhora a cicatrização sem prejudicar o efeito antiséptico ou este efeito foi até aumentado.

Nos exemplos mostrou-se que a utilização de uma diluição com NaCl conduz à formação de um precipitado. Neste precipitado a octenidina encontra-se como substância inactiva cristalina, que mascara a disponibilidade da acção bactericida, interferindo com a cicatrização de modo indesejável, já que exerce adicionalmente um irritação mecânica.Esta interacção pode ser impedida através de diluição com hidratos de carbono não carregados, por exemplo solução de glucose 5%. A octenidina actua como antibacteriana, aparentemente através da sua afinidade para a superfície bacteriana. Adiconalmente a octenidina apresenta um efeito desinfectante/antimicrobiano contra fungos e virus, que se pode desenvolver completamente através de administração com um poliálcool de acordo com a invenção. 0 poliálcool apoia, além disso a estabilização do tecido, desejada para a cicatrização, como é aparente nos ensaios de adesão celular, apresentados nos exemplos.

As composições de acordo com a invenção mostram por um lado a eficácia no que diz respeito à melhoria da adesão celular, que se mostrou experimentalmente ser particularmente favorável no intervalo de 1 g/1 a 25 g/1 (0,1% a 2,5%) . Por outro lado ocorrem dores de ferimento ΡΕ2291185 aumentadas se é usado Octenisept hipotónico devido ao modo de acção de receptores e canais de iões que estão envolvidos em nocicepção. Por aplicação de composições de acordo com a invenção para a aconselhada administração conjunta em ferimentos e mucosas sensíveis com soluções aproximadamente isotónicas (correspondente a ~5% de glucose) ou também ocasionalmente soluções ligeiramente hipotónicas (correspondendo a 2,5% de glucose) é reduzido ou eliminado o efeito negativo na nocicepção. Assim consegue-se uma ausência de dor e uma melhoria substancial do tratamento e particularmente, evitadas consequêncais durante a aplicação por exemplo uma deslocação de líquidos no peritoneu.

De acordo com a presente invenção, está previsto assim que a octenidina seja administrada em conjunto com um poliálcool. Este poliálcool envolve preferencialmente uma estrutura de base da Fórmula 1: (H-C-OH) a(HO-C-OH)b(H-C-H)c.

Preferencialmente a+b são aí pelo menos 2, pelo menos 3, pelo menos 4, pelo menos 5, pelo menos 6 ou também pelo menos 7. Por si, a é preferencialmente 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou também pelo menos 7. Em combinação ou independentemente disto b pode ser escolhido de 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou pelo menos 7. As definições de a e b determinam o número dos grupos hidroxilo, que são importantes para a invenção. E particularmente preferido, que os poliálcoois possuam pelo menos 4, preferencialmente pelo menos 5, 6, 7 ΡΕ2291185 ou também pelo menos 8 grupos hidroxilo. No caso de a+b = 2 ou 3, noutros casos especiais também com a+b = 4 ou 5, está por isso previsto preferencialmente, que a estrutura de base da fórmula mencionada acima represente um polímero, particularmente policondensado, poliéter ou poliéster. Evidentemente podem também existir elementos estruturais maiores da fórmula 1 como polímeros, policondensados, poliéteres ou poliésteres, no qual um 0 ligado ou OC (0) do poliéter ou poliéster não foi mencionado na fórmula acima e que é possível como elemento estrutural de ligação adicional. A descrição de "poli" deve ser entendida como indicação dos elementos estruturais acima mencionados, que podem aparecer 2 vezes, preferivelmente 3 vezes, particularmente preferido 4 vezes, especialmente preferidos 5 vezes ou também pelo menos 6 vezes. No caso de polímeros podem ser previstos até 5000, até 4000, até 300, até 2000, até 1000, até 800, até 500 ou até 300 elementos da Fórmula 1.

Os elementos podem ai ser uniformes ou homogéneos ser compostos a partir dos mesmos elementos de base ou heterogéneos de misturas destes. Heterogéneos são preferencialmente polímeros de hidratos de carbono de monómeros de açúcar ou derivados destes.

Os poliálcoois de acordo com a invenção podem ser adicionalmente previstos com um ou mais grupos aldeido, desde que estes formem hemiacetais (cíclicos) ou acetais com um dos grupos hidroxilo ou sejam previstos com um ou 10 ΡΕ2291185 mais grupos ceto, se for caso disso como acetal com um grupo hidroxilo.A formação de aldeídos como acetais é particularmente preferida, já que os grupos aldeído actuam como potencialmente tóxicos devido à sua elevada reactividade. Em especial o aldeído existe em equilíbrio com o seu acetal, preferivelmente a 95%, particularmente pelo menos 98%, especialmente preferido pelo menos 99% como acetal em equilíbrio com a estrutura aldeído aberta a condições fisiológicas, particularmente a 37°C. Desde que seja previsto um grupo ceto, este está presente, em formas de realização preferidas a pelo menos 95%, preferivelmente a 95%, preferivelmente a 98%, pelo menos 99% como acetal com um dos grupos hidroxilo do poliálcool (intramolecular) em equilíbrio a condições fisiológicas, particularmente a 37°C. Os hemiacetais ou acetais formam preferivelmente anéis intramoleculares com 5, 6, 7, 8 ou também 9 átomos.

Preferivelmente o poliálcool compreende, particularmente na forma de um acetal, um glicósido.

Sendo caso disso o poliálcool da estrutura base da fórmula 1, pode apresentar um grupo ácido carboxílico, desde que o poliálcool seja um hemiacetal cíclico ou um acetal, preferivelmente com tamanhos de anéis de 5 -7 átomos. Embora tenha sido observado, de acordo com a invenção, que os grupos ácido são menos eficazes em conjunto com octenidina, mostrou-se por exemplo com a ajuda de ácido glucorónico que se observa um aumento de eficácia (em comparação com Octenisept® usual). Ácido glucorónico é um ácido carboxílico, que existe como análogo à glucose 11 ΡΕ2291185 como acetal cíclico de 6 átomos, em que o sexto átomo de carbono está oxidado a ácido carboxílico. A presente invenção também diz respeito para o efeito da octenidina ou do sal farmacêutico desta, num aspecto adicional um estojo ("kit") que compreende um poli-álcool como definido acima e octenidina ou sais farmacêuticos desta, particularmente dicloridrato de octenidina, preferencialmente destinado à administração conjunta em solução. A octenidina ou o seu sal pode particularmente ser previsto no contexto do estojo ("kit") como octenidina em solução. Alternativamente ou adicionalmente o poliálcool pode já estar em solução. Uma solução deste tipo permite uma utilização rápida da octenidina, particularmente para desinfecção.

Num aspecto adicional, a presente invenção diz respeito a uma composição farmacêutica na forma de uma solução, que compreende um poliálcool como definido acima e octenidina ou um sal farmacêutico desta, particularmente dicloridrato de octenidina. Também são reveladas misturas do poliálcool com octenidina como composição farmacêutica. Misturas sólidas podem ser previstas particularmente para posterior dissolução imediatamente anterior à administração .

Preferivelmente o poliálcool de acordo com a presente invenção é um hidrato de carbono da fórmula 2: Cn(H20)m, em que n é um número inteiro de pelo menos 3, 12 ΡΕ2291185 preferivelmente 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ou pelo menos 12 e m é um número inteiro no intervalo de n-15% a n+15% (arredondado a números inteiros) preferivelmente nl, n ou n+1. O arredondamento ocorre aqui matematicamente, i.e, virgulas de ..,5 são arredondados por excesso e ..., 4999... arredondados por defeito. Naturalmente estes hidratos de carbono podem também ser polimerizados, particularmente policondensados, a hidratos de carbono oligómeros ou polímeros. É particularmente preferida a capacidade de formação de soluções sem turbidez, através do poliálcool. Embora em formas de realização particularmente preferidas a preparação de acordo com a invenção esteja presente como gel, particularmente hidrogel, o poliálcool de acordo com a invenção não é entendido como agente formador de gel, particularmente porque um agente formador de gel não é considerado como substância solúvel, mas sim como estrutura solvatada, semi-sólida.

Em formas de realização particularmente preferidas o poliálcool está não carregado. Embora também sejam possíveis poliálcoois ligeiramente ácidos, como por exemplo o ácido glucurónico, os melhores resultados são obtidos com poliálcoois não carregados. Desde que o poliálcool seja um ácido fraco, o valor de pKa do poliálcool é preferivelmente maior do que 3, particularmente preferido maior do que 3,5, maior do que 4, maior do que 4,5 ou maior do que 5.

Em formas de realização particularmente preferidas o poliálcool é um mono ou dissacárido ou um derivado 13 ΡΕ2291185 de ácido desoxi ou monocarboxilico de um mono ou dissacá-rido. Em formas de realização especiais adicionais o poliálcool compreende uma aldose ou cetose, preferivelmente uma aldo-hexose, aldo pentose, ceto-hexose ou uma ceto-pentose. Exemplos especialmente preferidos dos poliálcoois de acordo com a invenção são glucose, galactose, frutose, fucose, maltose, ribose, desoxirribose, desoxiglucose, particularmente 2-desoxiglucose, sacarose, lactose, ácido glucurónico, dextrose, isomalte, xarope de maltitol, poli-glucose, glucano e oligasacárido de frutose.

Preferivelmente octenidina ou o poliálcool estão em solução aquosa, preferivelmente dissolvidos em água. Se for caso disso podem ser previstas partes pequenas de álcool como solvente, por exemplo etanol, propanol, ou isobutanol. Nestes casos é o conteúdo em álcool inferior a 5%, inferior a 3%, inferior a 2% ou inferior a 1%.

Preferivelmente o poliálcool está previsto numa solução para administração com octenidina a uma concentração de pelo menos 0,001%, pelo menos 0,005%, ou pelo menos 0,01%, preferivelmente de pelo menos 0,025%, particularmente preferido de pelo menos 0,1%, pelo menos 0,5%, pelo menos 1% e mais preferido 2,5% (p/v) . A indicação da concentração (p/v) diz respeito aqui a uma concentração de peso por volume. Preferivelmente a concentração máxima do poliálcool em solução para administração com octenidina por volta de 12%, preferivelmente 10%, particularmente até 7,5%, a mais preferida 5% (p/v). 14 ΡΕ2291185

Em formas de realização preferidas adicionais a octenidina encontra-se, em solução para administração com o poliálcool ou na solução comum da composição, ou no estojo ("kit"), numa concentração de pelo menos 0,0001%, particularmente preferida pelo menos 0,001%, preferencialmente pelo menos 0,002%, pelo menos 0,005%, pelo menos 0,01% ou pelo menos 0,05% (p/v). Em formas de realização preferidas adicionais a octenidina está numa concentração até 5%, até 1%, até 0,5% ou até 0,2% (p/v).

Embora de acordo com a invenção tenha sido observado que o poliálcool de acordo com a invenção pode evitar o efeito "máscara" de sal, particularmente NaCl sobre a octenidina, é preferido, que a concentração de sal, particularmente a concentração de NaCl seja no máximo 0,5% (p/v), preferivelmente no máximo 0,1%, no máximo 0,05%, no máximo 0,01%, especialmente preferida no máximo 0,005%, o mais preferido no máximo 0,001%.

Em formas de realização preferidas o poliálcool e a octenidina encontram-se num veiculo. A invenção diz respeito por isso também a um veiculo, preferivelmente escolhido de um gel, preferivelmente um hidrogel ou uma ligadura ou compressa, impregnado com uma solução que contem o poliálcool e a octenidina de acordo com a invenção ou um sal farmacêutico desta, de preferência dicloridrato de octenidina para administração conjunta. Veiculos adicionais englobam veiculos de libertação lenta, que 15 ΡΕ2291185 libertam a combinação de substância activa como aplicação activa durante mais tempo ou retardada. Uma preparação deste tipo com um veiculo correspondente é apropriado para aplicação tópica e rápida. A octenidina, o estojo ("kit") ou a composição de acordo com a presente invenção com octenidina e o poli-álcool para administração terapêutica conjunta é destinado particularmente ao tratamento de ferimentos ou queimaduras, particularmente da pele ou mucosa, particularmente da vagina, da cavidade abdominal, de órgãos internos, particularmente em intervenções cirúrgicas ou como profilaxia antes de intervenções cirúrgicas ou para tratamento e prevenção de infecções, particularmento infecções de feridas, de preferência infecções de ferimentos de queimaduras, particularmente da pele, ou mucosa, particularmente da vagina, da cavidade abdominal, de órgãos internos, particularmente em intervenções cirúrgicas ou como profilaxia antes de intervenções cirúrgicas. Num aspecto adicional a presente invenção diz respeito ao poliálcool, preferencialmente glucose, destinado a aumentar o efeito da octenidina na sua utilização terapêutica assim como octenidina ou um sal terapêutico desta como p.ex. dicloridrato de octenidina, destinado à administração terapêutica conjunta com o poliálcool de preferência glucose. A utilização de glucose 5% como solvente fácil de aplicar, geralmente disponível e calculável permite à octenidina com afinidade não inibida se ligar à superfície 16 ΡΕ2291185 das bactérias já que o efeito bacteriostático está disponível e apoia por outro lado a estabilização do tecido desejável para a cicatrização, como é evidente pelos testes de adesão celular.

Num aspecto adicional a presente invenção diz respeito a um estojo ("kit") contendo glucose e octenidina ou um sal farmacêutico desta, particularmente dicloridrato de octenidina. 0 efeito de acordo com a invenção da cicatrização melhorada ocorre particularmente na administração conjunta deste estojo ("kit"). Também pode ser previsto um estojo ("kit"), no qual glucose e octenidina estejam separados. Os ingredientes podem ser destinados particularmente para administração conjunta. De preferência estão ou glucose ou octenidina ou ambos componentes, em solução. A utilização de glucose dissolvida ou octenidina, particularmente preferida, glucose dissolvida e octenidina dissolvida, permite uma rápida utilização por ex. através de mistura de ambas as substâncias ou de ambas as soluções e subsequente aplicação. A solução na qual está previsto o estojo ("kit") ou a composição farmacêutica de acordo com a presente invenção, é preferencialmente uma solução aquosa. Particularmente pode ser prevista água pura como solvente ou ainda com baixo teor noutros solventes orgânicos como por exemplo álcoois. Preferivelmente o teor em álcool de uma solução deste tipo encontra-se abaixo de 5%, particularmente preferido no máximo 2% ou abaixo de 1%. 17 ΡΕ2291185 A concentração de poliálcool, de preferência concentração de glucose numa solução de poliálcool do estojo ("kit") para administração com octenidina ou na composição farmacêutica na qual ambas as substâncias já estão misturadas é preferivelmente pelo menos 0,001%, pelo menos 0,005%, ou pelo menos 0,01%, particularmente preferida pelo menos 0,05%ou pelo menos 0,1%, especialmente preferida pelo menos 0,5%, pelo menos 1% ou pelo menos 2,5% (todos os dados de percentagem em p/v). Preferivelmente a concentração de poliálcool, preferivelmente concentração de glucose, no máximo 30%, no máximo 20%, no máximo 10%, no máximo 8%, no máximo 5% (p/v). o estojo ("kit") contendo uma solução de poliálcool e uma solução de octenidina previstos para mistura p.ex. numa proporção 1:1, as concentrações preferidas correspondentemente aumentadas, p.ex, de uma proporção de mistura dupla de 1:1, p.ex. para a solução de poliálcool é a mais preferida uma concentração de poliálcool de 5-10% e para a solução de octenidina a concentração de 0,004-1%.

Os dados de concentração aqui utilizados (p/v) dizem respeito a peso por volume (do inglês weight per volume). Os dados de concentrações também aqui utilizados (p/p) dizem respeito a peso, por peso total da preparação correspondente, fórmula ou solução.

Preferivelmente a solução de octenidina para administração conjunta com glucose ou a composição farma- 18 ΡΕ2291185 cêutica compreendendo uma solução de octenidina, uma concentração de octenidina de pelo menos 0,0001% (p/p), preferivelmente de pelo menos 0,001% particularmente preferida pelo menos 0,002%, pelo menos 0,005%, pelo menos 0,01% ou pelo menos 0,05%. Preferivelmente as concentrações máximas de octenidina são até 10% (p/p), preferivelmente até 5%, até 1%, particularmente até 0,5%, especialmente preferido até 0,2%.

Como já aqui mencionado e também mostrado nos exemplos, o teor de sal, particularmente uma elevada concentração de NaCl p.ex. em condições fisiológicas, pode inibir a acção da octenidina. Embora a glucose possa impedir este efeito inibitório, nalgumas formas de realização preferidas da presente invenção, a concentração de NaCl é limitada. Preferencialmente a solução de octenidina para administração com glucose ou a fórmula farmacêutica de acordo com a invenção, compreende uma concentração de sal, particularmente concentração de NaCl inferior a 0,1% (p/v), preferivelmente inferior a 0,05% ou inferior a 0,01%, particularmente preferida inferior a 0,005% ou abaixo de 0,001%.

De acordo com o estojo ("kit") da presente invenção assim como com a preparação farmacêutica com octenidina e glucose, a glucose e/ou octenidina podem ser previstos num veiculo. De preferência o veiculo é um gel, particularmente um hidrogel. Um outro veiculo possivel é uma ligadura ou compressa que, se for caso disso é impre- 19 ΡΕ2291185 gnado com uma solução contendo glucose e/ou octenidina. Uma ligadura deste tipo ou um gel deste tipo podem ser directamente administrados ou através da adição de outros componentes escolhidos de glucose e/ou octenidina. Outros veiculos compreendem veiculos de libertação lenta, como microencapsulações, que libertam a combinação de substâncias activas como aplicação de acção lenta ou retardada. Um gel ou hidrogel ou hidrogel pode ser produzido com agentes formadores de gel comuns, como por exemplo derivados de celulose como hidrocelulose. Outros veiculos possíveis compreendem emulsões, preferencialmente emulsões de óleo em água ou água em óleo e lipossomas. Particularmente preferidas são as soluções de acordo com a invenção previstas na forma estéril.

De forma geral a presente invenção diz respeito, assim, a uma composição farmacêutica na forma de uma solução, compreendendo glucose e octenidina, preferencialmente como na composição de Octenisept. 0 estojo ("kit") de acordo com a invenção ou a composição é utilizado especialmente para a produção de medicamentos para administração terapêutica para tratamento de ferimentos ou queimaduras ou prevenção de infecções, particularmente infecções de ferimentos. Preferivelmente a composição ou o estojo ("kit") são usados para tratamento de ferimentos, infecções, particularmente infecções de ferimentos, queimaduras da pele ou mucosa, particularmente da vagina, de órgãos internos, da cavidade abdominal, 20 ΡΕ2291185 particularmente em intervenções cirúrgicas. Os preparados de acordo com a invenção constituem assim agentes particularmente práticos, que podem ser utilizados efectivamente em intervenções cirúrgicas, como agente desinfectante. A composição farmacêutica de acordo com a invenção ou a solução de glucose ou octenidina do estojo ("kit") são previstos particularmente a pH fisiológico. O valor de pH pode ser assim entre 5 e 9, preferencialmente até pH 8. Sendo necessário, o valor de pH pode previsto através de tampões apropriados, como por exemplo de ácidos orgânicos, como ácido cítrico, ácido acético, ácido fumárico ou ácido málico, assim como ácidos anorgânicos, como ácido clorídrico, ácido fosfórico, ou ácido sulfúrico, ou os seus alcali ou sais de metais alcalino-terrosos, particularmente sódio, potássio, magnésio e cálcio, ou através de tampões de bases aceitáveis do ponto de vista farmacêutico, p.ex. NaOH.

Particularmente a solução de octenidina ou a composição farmacêutica total uma solução límpida sem octenidina precipitada. Esta solução pode ser utilizada como tal no veículo da presente invenção, como por exemplo um gel ou hidrogel ou a ligadura. A presente invenção será explicada mais em detalhe com a ajuda das figuras e exemplos sem ser restrita a estes. Estas mostram: 21 ΡΕ2291185

Fig 1: Fotografia de microscópio de um cristal de octenidina de uma solução de octenisept®-NaCl

Fig. 2 Modificação do destacamento de células induzida por Octenisept® através da adição de NaCl ou glucose em ensaios de "Cell-Detachment" com violeta de cristal, a: as barras representam o valor médio ± desvio padrão de quatro experiências independentes. B: fotografia de camada de células.

Fig. 3 A e 3B: Modificação do destacamento celular induzida por Octenisept® através da adição de vários hidratos de carbono em ensaios de "cell-detachment" com violeta de cristal.

Fig.4: Dependência da concentração de adições de glucose no destacamento celular induzido por Octenisept® de substrato de cultura num ensaio de violeta de cristal. Após lavagem e coloração das células aderentes com violeta de cristal foi medida a extinção foi medida a 550 nm (as barras representam o valor médio ± desvio padrão de 3 valores de medida). A diluição ocorre partindo de uma solução de octenidina 0,1% (Octenisept®) com uma solução de glucose em proporções de 0,1:200 a 1:2.

Exemplos: A constelação ideal para tratamento de ferimentos é I. A destruição superficial do biofilme bacteriano no ferimento e II. A estimulação dos processos de cicatrização 22 ΡΕ2291185 que conduzem a uma cobertura estável do tecido que se encontra por baixo. A ancoragem de células em proliferação com o esqueleto do tecido corresponde na cultura de células à formação de ligações estáveis entre o citoesqueleto, integrinas e a matriz no fundo das placas de cultura. Para quantificar estes parâmetros é determinada a resistência contra a descolagem da camada de células a efeitos mecânicos tais como lavagem. A camada de células restante é corada com violeta de cristal e quantificada com medidas de absorção fotométrica. São mostrados efeitos adicionais, através da utilização de determinadas soluções em diluições definidas com Octenisept®, que melhoram a adesão celular e explicam a melhoria da cicatrização observada.

Exemplo 1: Reagentes

Octenisept® (Schulke & Mayr) solução dicloridrato de octenidina (0,1% (p/p) e 2-fenoxietanol 2% (p/p) em H2O; glucose 5% (Mayrhofer Pharmazeutika) solução de glucose 5% (p/v) em H2O; Lactose, 2-desoxiglucose, sacarose, frutose, polietilenoglicol, 4-sulfato de condroitina, 6-sulfato de condroitina, sulfato de dermatano e sulfato de dextrano foram utilizados numa concentração de 5% (p/v) em H20 filtrados esterilmente.

Para a incubação com culturas de células foram misturados os mesmos volumes de Octenisept® e o correspondente aditivo e armazenados a 4°C até uma semana antes da utilização. 23 ΡΕ2291185

Exemplo 2: Cultura de células A linha celular humana de glioblastoma U373 cultivada em Dulbecco's Modified Eagle Médium (DMEM) suplementado com 10% PCS (Gibco™) , Glutamina 1 mM (PAA) e Penicilina/streptomicina (PAA) lOOU/ml a 37°C e C02 5%. As células foram cultuvadas em monolayer e feita apassagem a 80% de confluência. Antes da realização das experiências de adesão celular as células foram transferidas para placas de 96 poços e deixadas chegar à confluência.

Exemplo 3: Desterminação da adesão celular A adesão celular foi realizada como descrito em detalhe na citação (Uchide, N. e H. Toyoda (2007) J Immunol Methods 328(1-2):215-9). Foram incubadas células U373 em placas de 96 poços com Octenisept® (concentração de 5% (v/v) Octenisept®, que corresponde a 0,005% de dicloridrato de octenidina) sozinha ou com as adições indicadas (5% v/v) 1 hora em meio Leibovits sem glucose. Após a remoção do sobrenadante foi utilizada 3x o procedimento Standard de lavagem e em seguida adicionado PBS com uma pipeta ligada a um motor, o que levou à libertação das células não-aderentes. Só as células cuja matriz tinha uma ligação estável, foram então fixadas com glutaraldeído e, após remoção do glutaraldeído, coradas com violeta de cristal. O corante precipitado foi dissolvido com tampão SDS e a extinção medida a 550 nm num leitor de picas ELISA. - 24 - ΡΕ2291185

Exemplo 4: Ensaio de precipitação A estabilidade da solubilidade dos componentes de Octenisept® em solução de NaCl como indicador das suas interacções foi determinada através da análise do precipitado. Após coincubação de Octenisept® com o mesmo volume de NaCl 0,9% p/v ou hidrato de carbone 5% em água estéril-bidest durante 3, 12, 24 e 72 horas a 4°C, as soluções foram centrifugadas a 2500 rpm, 5 min e o precipitado assim obtido avaliado com um microscópio invertido Zeiss com uma máquina fotográfica digital com um sistema de documentação META-VIEW.

Exemplo 5: Adição de NaCl a Octenisept® conduz 'formação de cristais e precipitação: A Octenidina carregada positivamente e as cargas negativas à superfície de bactérias inicia a sua eficácia. Se se aplicar, como até agora usual octenisept® numa diluição 1:1 com solução salina fisiológica, forma-se à volta da molécula de octenidina uma camada mista de hidrato de NaCl e o dipolo água. A elevada força iónica por diluição com NaClfiSi0i conduz - sem estar restrito a uma determinada teoria- a uma diminuição da carga positiva da octenidina que é a base da sua acção bactericida. A diluição com NaCl perturba assim a eficácia. Foi agora mostrado que não só se trata de uma perturbação diminuta, mas também de uma formação de cristais induzida. ΡΕ2291185

Microfotografia do precipitado cristalino

Após 96 horas de incubação a 4°C aparece ao misturar Octenisept® com solução salina fisiológica um precipitado cristalino (Fig.l) que se redissolve por aquecimento a 60°C (Objectiva 20x) . Em misturas de Octenisept® com 5% de glucose (1:1) não se detecta precipitado mesmo após 30 dias. Outros Outros hidratos de carbono polares, não carregados também não formam cristais como solvente, mas não outros hidrocarbonetos sulfatados poliméricos, tais como sulfato de condroitina, sulfato de dermatano e sulfato de heparano que conduzem a rápida turbidez de microcristais ou coloidal.

Exemplo 6: Efeito da adição de glucose e NaCl no destacamento induzido por Octenisept® do substrato de cultura no ensaio de violeta de cristal A precipitação cristalina pode ser evitada através de diluição com solução de glucose 5%. Foi agora investigado de esta adição produz efeitos que possam contribuir para melhorar a cicatrização. Células U373 foram incubadas com Octenisept® sem e com adições (glucose 5% 1:1 ou NaCl 0,9%) em meio Leibovits durante 1 hora. 5μ de cada solução foram adicionadas a 100 μΐ de meio. Após lavagem e coloração das células aderentes com violeta de cristal foi medida a extinção a 550 nm (Fig. 2 a). A extinção dos controles foi atribuído 1. A significância estatística foi determinada por meio do teste de comparação múltipla de Bonferroni (**:p<0,01, ***p<0,001). 26 ΡΕ2291185 Células que foram tratadas só com Octenisept® (barras pretas), apresentaram estabilidade reduzida a 50%, comparada com as células tratadas só com meio Leibovits, e ainda era mais reduzida se diluida com NaCl 0,9% (colunas com riscas horizontais) . Com glucose 5% a resistência contra destacamento melhorou, com elevada significância a 80% do valor controle (barras cinzentas) . Uma série de diluições com glucose mostrou que a adição óptima encontra-se a 2% na solução de adição ou 0,1% na concentração final (Fig. 4) . O número das células ligadas ao substrato após tratamento com Octenisept® + glucose era significativamente maior do que com Octenisept® - NaCl, em que à concentração mais elevada de Octenisept® + NaCl todas as células estavam destacadas enquantoque com Octenisept® + glucose conseguiu-se uma ancoragem mais estável que conservou uma camada de células intacta (Fig 2b).

Exemplo 7: Modificação do destacamento celular induzido por Octenisept® através de poliálcoois diferentes

Poliálcoois constituem uma larga classe de ligação e por isso foi investigado, se subgrupos individuais produzem diferentes efeitos em testes de adesão. Células U373 foram incubadas só com Octenisept® (-) ou com adições (1:1 com poliálcool 5%, glucose, 2-desoxiglucose (2-desoxiG), lactose, sacarose, frutose, ácido glucurónico, polietilenoglicol (PEG), 4-sulfato de condroitina (Ch4-S), 6-sulfato de condroitina (Ch6-S), sulfato de dermatano (Dermatan-S) ou sulfato de dextrano 27 ΡΕ2291185 (Dextran-S) em meio Leibovits durante 1 hora com adição de 5μ1 em cada caso para 100 μΐ de meio. Após lavagem e coloração das células aderentes com violeta de cristal foi medida a extinção a 550 nm. As barras representam o valor médio ± SD (desvio padrão) de 2 experiências independentes (medidas em triplicado). A extinção dos controles foi ajustada a 1. A significância estatística foi determinada por meio do teste de comparação múltipla de Bonferroni (**:p<0,01, ***p<0,001).

Da Fig.3 é evidente que, por outro lado o Octenisept® conduziu a uma redução significativa da adesão celular, que foi de novo melhorada através de monómeros polares como glucose, 2-desoxiglucose, frutose e ácido glucurónico, mas também dissacáridos como lactose, sacarose e polímeros como polietilenoglicol. Polímeros carregados como 4-sulfato de condroitina e 6-sulfato de condroitina, sulfato de dermatano e sulfato de dextrano não conseguiam produzir este efeito, reduziram ainda a adesão, de forma significativa a valores abaixo dos com NaCl.

A eficácia de poliálcoois como adição à octenidina foi provada em experiências com hidratos de carbono não carregados ou ligeiramente ácidos. No entanto os hidratos de carbono poliméricos sulfatados testados, não apresentaram efeito. Em detalhe, as aldo-hexoses e aldopentoses actuam de modo igualmente positivo e não existe diferença entre aldoses e cetoses nesta classe. Nos derivados sem grupos aldeído observa-se um efeito ligeiramente positivo (açucares-álcoois, PEG). Grupos OH 28 ΡΕ2291185 gi icosídicos podem estar ligados, como mostrado no exemplo da sacarose, sem afectar o efeito. Os grupos ácidos que se podem ligar a catiões parecem desempenhar um papel mais importante. Assi, o ácido glucurónico, como éster interno tem um efeito positivo em contraste com carbohidratos derivatizados como fosfatos ou sulfatos, que adicionalmente aumentam o destacamento de células por octenidina. Estas descobertas estão de acordo com a hipótese do modo de acção antiséptico, na medida em que uma acção bactericida reduzida foi postulada devido a uma neutralização de carga que é atingida na presença de formadores de sais fortes. A utilização de hidratos de carbono reduz a concentração de NaCl e apoia o efeito antiséptico já bem documentado.

Exemplo 8: Dependência da concentração da glucose adicionada do destacamento celular induzido por Octenisept® do substrato de cultura num ensaio de violeta de cristal

Para determinar a concentração ou diluição óptimas à qual a fórmula com glucose adicionada contrabalança o destacamento celular que é significamente reduzida por Octenisept® só ou Octenisept® diluído com NaCl, foi utilizada uma série de diluições de fórmulas com glucose 5% de 1:2 a 1:200. Foram incubadas células U373 durante uma hora com só com Octenisept® (1:20 em meio) (GO) ou com Octenisept® e diferentes volumes de uma solução de glucose 5% (diluição final resultante 1:200-1:2 em meio Leibovits). Os efeitos na adesão celular foram determinados por meio do teste de violeta de cristal e apresentados na Fig.4. 29 ΡΕ2291185

Octenisept® conduz a uma redução significativa da adesão celular, com tendência para melhorar por adição de glucose 1:200 ou 1:100. 0 óptimo do efeito protectivo foi determinado a uma diluição de 1:20 e concentrações aumentadas mostram grandes variações, mas não mostram efeito protectivo considerável.

Em experiências envolvendo cultura de células pôde confirmar-se: o número de células ligadas ao substrato após procedimento de lavagem Standard após tratamento com Octenisept® + glucose era significativamente maior do que no caso de Octenisept® + NaCl, em que à concentração mais elevada de Octenisept® + NaCl estavam destacadas todas as células enquanto que no caso de Octenisept® + glucose conduziu a ancoragem estável. Por analogia à cicatrização in vivo este parâmetro indica que uma diluição de Octenisept® + glucose apoia a formação de um conjunto de células ligadas mecanicamente estável e assim acelera a cicatrização (Cai et al. (2008) Invest Ophtalmol Vis Sei 49(5):2163-71; Chiang et al. (1991) Dev Biol 146 (2): 377- 85; Guo et al. (2008) Câncer Investigation 26 (4): 369-374;

Wilkinson et al. (1994) Exp Dermatol 3(5): 239-45). O intervalo de aplicação óptimo foi determinado a uma diluição de 1:20 da solução de glucose 5% ou 0,25% de glucose absoluta, na solução de Octenisept.

Lisboa, 9 de Abril de 2012

Claims (15)

1. ΡΕ2291185 1 REIVINDICAÇÕES 1. Octenidina ou um sal farmacêutico desta, em particular dicloridrato de octenidina, para utilização na administração terapêutica conjunta da octenidina em solução com um poliálcool da fórmula 1 (H-C-OH)a(HO-C-OH)b(H-C-H)c em que a, b, c são números inteiros, em que a+b é pelo menos 2, preferivelmente pelo menos 3, c é seleccionado de 0, 1 ou um número de 2 a a+b, adicionalmente com um ou mais grupos aldeido desde que os referidos grupos aldeido formem acetais (ciclicos) com um dos grupos hidroxilo ou um ou mais grupos ceto, se for caso disso, como acetal com um dos grupos hidroxilo, se for caso disso, adicionalmente com um ou mais grupos ácido carboxilico desde que o poliálcool seja um acetal cíclico ou acetal, preferencialmente com um tamanho de anel de 5 a 7 átomos, ou um polímero, poliéter ou poliéster com pelo menos duas unidades da fórmula 1 se a+b é 2 ou 3.
2. 2. Estojo ("kit") compreendendo um poliálcool da fórmula 1 como definido na reivindicação 1 e octenidina ou sais farmacêuticos desta, em particular dicloridrato de octenidina, para utilização na administração terapêutica combinada, em solução.
3. 3. Composição farmacêutica na forma de uma solução, que compreende um poliálcool da fórmula 1 como definido na reivindicação 1 e octenidina ou sais farmacêuticos desta, em particular dicloridrato de octenidina. 2 ΡΕ2291185
4. 4. Octenidina, estojo ("kit") ou composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizada por o poliálcool ser um hidrato de carbono com a fórmula quimica 2: Cn(H20)m, em que n é um número inteiro de pelo menos 3 e m é um número inteiro no intervalo de n-15% a n+15% (arredondado a um número inteiro), preferivelmente n-1, n ou n+1.
5. 5. Octenidina, estojo ("kit") ou composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada por o poliálcool ser não carregado.
6. 6. Octenidina, estojo ("kit") ou composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizada por o poliálcool ser um mono- ou dissacárido ou derivado de ácido desoxi- ou monocarboxilico de um mono-ou dissacárido.
7. 7. Octenidina, estojo ("kit") ou composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizada por o poliálcool compreender uma aldose ou cetose, preferivelmente uma aldo-hexose, aldopentose, ceto-hexose ou cetopentose.
8. 8. Octenidina, estojo ("kit") ou composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizada por o poliálcool ser seleccionado de glucose, galactose, frutose, fucose, maltose, ribose, desoxiribose, 3 ΡΕ2291185 desoxiglucose, em particular 2-desoxiglucose, sacarose, lactose, ácido glucurónico.
9. 9. Octenidina, estojo ("kit") ou composição de acordo com uma das reivindicações 1 a 8, caracterizada por o poliálcool e/ou octenidina estar em solução, preferivelmente numa solução aquosa, preferivelmente com água como solvente puro.
10. 10. Octenidina, estojo ("kit") ou composição de, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado por o poliálcool em solução para a administração com octenidina ter uma concentração de 0,01% a 12% (p/v), preferivelmente de 0,1% a 10%, particularmente preferido de 0,5% a 7,5%, o mais preferido de 2,5% a 5%.
11. 11. Octenidina, estojo ("kit") ou composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizada por a octenidina em solução para a administração com o poliálcool ter uma concentração em octenidina de 0, 0001% a 1% (p/p) , preferivelmente de 0,001% a 0,1%, particularmente preferido de 0,002% a 0,01%.
12. 12. Octenidina, estojo ("kit") ou composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizada por uma solução para a administração de octenidina com o poliálcool ter uma concentração de NaCl inferior a 0,1% (p/v), preferivelmente inferior a 0,05%, mais particularmente preferido inferior a 0,01%, o preferido inferior a 0,005%. 4 ΡΕ2291185
13. 13. Octenidina, estojo ("kit") ou composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizada por a octenidina e o poliálcool serem para uso na administração terapêutica para o tratamento de ferimentos ou queimaduras, em particular da pele, da mucosa, em particular a vagina ou o peritoneu, em particular no caso de intervenções cirúrgicas ou profilactica-mente antes de intervenções cirúrgicas, ou para o tratamento e prevenção de infecções, em particular infecções de feridas, preferivelmente infecções de ferimentos por queimaduras, em particular da pele, da mucosa, em particular da vagina, do peritoneu, de órgãos internos, em particular no caso de intervenções cirúrgicas ou profilacti-camente antes de intervenções cirúrgicas.
14. 14. Veiculo, preferivelmente seleccionado de um gel, preferivelmente um hidrogel, ou uma ligadura ou compressa impregnado com uma solução contendo o poliálcool da fórmula 1 como definido na reivindicação 1 e octenidina ou um sal farmacêutico desta, preferivelmente dicloridrato de octenidina para uso na administração combinada, preferivelmente como ainda definido em qualquer uma das reivindicações 4 a 13.
15. 15. Agente farmacêutico compreendendo uma solução de octenidina ou um dos seus sais aceitáveis do ponto de vista farmacêutico e glucose com uma concentração de glucose de 0,01% a 12% (p/v) , preferivelmente de 0,1% a 5 ΡΕ2291185 10%, particularmente preferido de 0,5% a 7,5%, o mais preferido de 2,5% a 5% e uma concentração de octenidina de 0,0001% a 1% (p/p), preferivelmente de 0,001% a 0,1%, particularmente preferido de 0,002% a 0,01%, sendo caso disso em combinação com um veiculo. Lisboa, 9 de Abril de 2012