PT2137143E - Derivados de pleuromutilina para o tratamento de doenças mediadas por micróbios - Google Patents

Derivados de pleuromutilina para o tratamento de doenças mediadas por micróbios Download PDF

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PT2137143E
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acetyl
cyclohexylsulfanyl
hydroxy
mutilin
diastereomer
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PT08714294T
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Rosemarie Mang
Werner Heilmayer
Rudolf Badegruber
Rodger Novak
Mathias Ferencic
Atchyuta Rama Chandra Murty Bulusu
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Nabriva Therapeutics Ag
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Description

ΡΕ2137143 1
DESCRIÇÃO
"DERIVADOS DE PLEUROMUTILINA PARA O TRATAMENTO DE DOENÇAS MEDIADAS POR MICRÓBIOS" A presente invenção relaciona-se com compostos orgânicos, nomeadamente pleuromutilinas.
A pleuromutilina, um composto com a fórmula A
é um antibiótico que ocorre naturalmente, por exemplo produzido pelos basidiomicetos Pleurotus mutilus e P. passeckerianus, veja-se, por exemplo, The Merck Index, 13a edição, item 7617. Têm sido desenvolvidas numerosas outras pleuromutilinas tendo a estrutura em anel principal da pleuromutilina e estando substituída no grupo hidroxilo, por exemplo como antimicrobianos. São conhecidos a partir da WO 02/04414 AI derivados de pleuromutilina, por exemplo 14-0-[(Aminociclo- 2 ΡΕ2137143 hexan-2-il (e -3-il)-sulfanil)-acetil]-mutilinas; a partir da WO 07/014409 AI por exemplo 14-0-[((Mono- ou dialquilamino)-cicloalquilsulfanil)-acetil)-mutilinas e a partir da WO 07/000004 AI por exemplo [((Acil-hidroxi-amino)-cicloalquilsulfanil)-acetil]-mutilinas.
Descobrimos agora pleuromutilinas com actividade interessante combinada com uma inesperada estabilidade metabólica notável.
Os derivados de pleuromutilina de acordo com a invenção são compostos com a fórmula (I)
n é de 0 a 4; m é 0 ou 1 com a condição de que o átomo de enxofre e R3 estejam numa posição vicinal (se m = 0 então R3 está na posição 2', e se m = 1 então R3 está na posição 1'); R é etilo ou vinilo;
Ri é hidrogénio ou alquilo (Ci-Cõ) , 3 ΡΕ2137143 R2 é hidrogénio ou cicloalquilo (C3-C6) , ou alquilo (Ci-C6) não substituído, ou alquilo (Ci-C6) substituído com um ou mais de hidroxilo; preferencialmente um ou dois, metoxilo, halogéneo, cicloalquilo (C3-C6) , ou
Ri e R2 conjuntamente com o átomo de azoto ao qual estão ligados formam um anel heterocíclico com 5 a 7 membros contendo pelo menos 1 átomo de azoto ou 1 átomo de azoto e 1 heteroátomo adicional, por exemplo seleccionado a partir de N ou 0, ou
Ri é hidroxilo e R2 é formilo; R3 é OH, OR4, um átomo de halogéneo, ou com a condição de que R3 está ligado a 2'R3 representa -0-(CH2)P-0- com p igual a 2 ou 3; R4 é alquilo (Ci-Cg) não substituído ou cicloalquilo (C3-Cg) . 4 ΡΕ2137143
Os compostos preferidos da invenção são os compostos com a fórmula (II)
em que n, R, Ri, R2 e R3 são como definido acima.
Compostos mais preferidos da presente invenção são compostos com a fórmula (III) R1-í/ R2
tf! em que n, R, Ri e R2 são como definido acima.
Os compostos mais preferidos da presente invenção são - um composto com a fórmula (IV) IVΡΕ2137143 5 Ρ*
- um composto com a fórmula (V)
- um composto com a fórmula (VI)
em que n, Ri e R2 são como definido acima. composto
Particularmente preferido, é um seleccionado a partir do grupo consistindo de 6 ΡΕ2137143 14-0-{[{IR,2R,4R)-4-Amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil] acetil}-mutilina 14-0-{[(15,25,45)-4-Amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil] acetil}-mutilina 14-0-{[{IR,2R,5S)-5-Amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil] acetil}-mutilina 14-0-{[(15,25,5R)-5-Amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil] acetil}-mutilina 14-0-{[{IR, 2R, 4S)-4-Amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil] acetil}-mutilina e o seu diastereómero (15,25,4R) 14-0-{[{IR,2R,5R)-5-Amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil] acetil}-mutilina 14-0-{[(15,25,55)-5-Amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil] acetil}-mutilina 14-0-{[{IR,2R,3R)-3-Amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil] acetil}-mutilina e o seu diastereómero (15,25,35) 14-0-{[(IR,2R,4R)-4-Dietilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsul fanil]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (15,25,45) 14-0-{[{IR,2R,4R)-4-Etilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsul-fanil]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (15,25,45) 7 ΡΕ2137143 14-0-{ [ (liR, 2iR, 55)-5-Etilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsul-fanil]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (15,25, 5R) 14-0-{[(lRr2R, 55)-5-Dietilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsul-fanil]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (15,25,5R) 14-0-([(IR,2R,45)-4-Dietilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsul-f anil ]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (15, 2S, 4í?) 14-0-{[(lRr2R, 5R)-5-Dietilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsul-fanil]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (15,25,55) 14-0-{[(1R,2R,3R)-3-Etilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsul-fanil]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (15,25,35) 14-0-{[(IR,2R,3R)-3-Dietilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsul-fanil]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (15,25,35) 14-0-{[{IR,2R,45)-4-(Formil-hidroxi-amino)-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (15, 25, AR) 14-0-{[{IR,2R;5S)-5-{Formil-hidroxi-amino)-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (15, 25, 5R) 14-0-{[(1R,2R,3R/S)-3-(Formil-hidroxi-amino)-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (15, 25, 3R/S) ΡΕ2137143 14-0-{[(1R,2R,55)-2-Hidroxi-5-metilamino-ciclo-hexilsul-fanil]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (1S,2S,5R) 14-0-{[(IR,2R,55)-5-Alilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsul-fanil]-acetil)-mutilina e o seu diastereómero (15,2S, 5R) 14-0-{[{IR, 2R, 5S)-2-Hidroxi-5-(2-metoxi-etilamino)-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (15, 25, 5R) 14-0-{[(IR,2R,4R*)-2-Hidroxi-4-(2-hidroxi-etilamino)-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (15, 25, 45*) 14-0-{ [{IR, 2R, AR*)-4-Ciclo-hexilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (1S, 2S, AS*) 14-0-{ [(IR, 2R, AR*)-4-Ciclopropilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (1S, 2S, AS*) 14-0-{ [ (IR,2Rr 5S*)-4-Ciclopropilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (15, 25, 5R*) 14-0-{[(1R,2R, 45*)-4-Ciclopropilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (15, 25, AR*) 9 ΡΕ2137143 14-0-{ [ {IR, 2R,5R*)-2-Hidroxi-5-morfolin-4-il-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (15, 25, 55*) 14-0-{ [ (IR, 2R,5S*)-2-Hidroxi-5-morfolin-4-il-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (15, 25, 5R*) 14-0-{[{IR,2R,5S)-5-Amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-19,2O-di-hidro-mutilina e o seu diastereómero (15, 25, 5R) 14-0-{[(IR,2R,55)-5-Etilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsul-fanil]-acetil}-19,20-di-hidro-mutilina e o seu diastereómero (15, 2S, 5R) 14-0-([[1R,2R,5R)-5-Amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-19,20-di-hidro-mutilina e o seu diastereómero (15, 2S, 55) 14-0-{[(IR,2R)-4-Aminometil-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (15,25) 14-0-([5-Amino-2-cloro-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina 14-0-([4-Amino-2-cloro-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina 10 ΡΕ2137143 14-0-[(4-Amino-l-hidroxi-ciclo-hexilmetilsulfanil)-acetil]-mutilina 14-0-{[(1R,2R)-2-Hidroxi-5-(3-metilamino-propil)-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (IS, 2S) 14-0-{[{IR,2R)-2-Hidroxi-4-(3-metilamino-propil)-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (IS, 2S) 14-0-{[[IR,2R)-5-(3-Amino-propil)-2-hidroxi-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (IS,2S) 14-0-{[{IR,2R)-4-(3-Amino-propil)-2-hidroxi-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (IS,2S) 14-0-{[(6R,8R)-8-Amino-1,4-dioxa-espiro[4.5]dec-6-ilsul-fanil]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (6S,8S) 14-0-{[4-Amino-2-metoxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina e 14-0-{[5-Amino-2-metoxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina. 11 ΡΕ2137143
Um composto proporcionado pela presente invenção é aqui também designado como "composto(s) da (de acordo com a) presente invenção". Um composto da presente invenção inclui um composto em qualquer forma, por exemplo na forma livre, na forma de um sal, na forma de um solvato e na forma de um sal e um solvato.
De acordo com outro aspecto, a presente invenção proporciona um composto da presente invenção na forma de um sal e/ou solvato.
Os sais incluem preferencialmente sais farmaceu-ticamente aceitáveis, embora estejam incluídos sais não aceitáveis farmaceuticamente, por exemplo para propósitos de preparação/isolamento/purificação.
Um sal de um composto da presente invenção inclui um sal básico ou um sal por adição de ácido. Os sais básicos farmaceuticamente aceitáveis incluem sais de amónio tais como o sal trimetilamónio, sais de metais alcalinos tais como os de sódio e potássio, sais de metais alcalino-terrosos tais como os de cálcio e magnésio, e sais com bases orgânicas, incluindo sais de aminas primárias, secundárias e terciárias, tais como isopropilamina, dietil-amina, etanolamina, trimetilamina, di-ciclo-hexilamina e N-metil-D-glucamina, preferencialmente sais de sódio. Os sais por adição de ácido incluem sais de um composto da presente invenção com um ácido, por exemplo ácido hidrogeno fumárico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido etano-1,2- 12 ΡΕ2137143 di-sulfónico, ácido maleico, ácido naftalino-1,5-sulfónico, ácido acético, ácido maleico, ácido succinico, ácido sali-cílico, ácido azelaico, ácido 2-[(2,6-diclorofenil)ami-no]benzeno-acético, ácido clorídrico, ácido clorídrico deuterado, preferencialmente o ácido clorídrico.
Um composto da presente invenção na forma livre pode ser convertido num composto correspondente na forma de um sal, e vice-versa. Um composto da presente invenção na forma livre ou na forma de um sal e/ou na forma de um solvato pode ser convertido num composto correspondente na forma livre ou na forma de um sal na forma não solvatada, e vice-versa.
Um composto da presente invenção pode existir na forma de isómeros e misturas deles, por exemplo isómeros ópticos, diastereoisómeros, confórmeros cis/trans. Um composto da presente invenção pode, por exemplo, conter átomos de carbono assimétricos e pode, assim, existir na forma de enantiómeros ou diastereoisómeros e suas misturas, por exemplo racematos ou misturas diastereoméricas. Qualquer átomo de carbono assimétrico pode estar presente na configuração (R)-, (S)- ou (R,S)-, preferencialmente na configuração (R)- ou (S)-.
Por exemplo, num composto com a fórmula (I), o átomo de carbono do anel cicloalquilo que está ligado ao grupo (CH2)mS, o átomo de carbono do anel cicloalquilo que está ligado ao grupo R3, e o átomo de carbono do anel 13 ΡΕ2137143 cicloalquilo ao qual está ligado o grupo (CH2) nN (RiR2) , todos são átomos de carbono assimétricos. Os substituintes ligados a tais átomos de carbono assimétrico podem assim existir na configuração (R) e (S) , incluindo misturas deles. Por exemplo, se num composto com a fórmula (I), R2 é alquilo substituído e este substituinte está ligado a um átomo de carbono da cadeia lateral de tal alquilo, o átomo de carbono ao qual tal substituinte está ligado é um átomo de carbono assimétrico e tal substituinte pode estar na configuração {R)- e (S)-, incluindo misturas deles. A configuração dos substituintes ligados a átomos de carbono assimétricos da mutilina-tricíclica é preferencialmente a mesma da pleuromutilina natural.
As misturas isoméricas podem ser separadas conforme o apropriado, por exemplo de acordo, por exemplo analogamente, a um método como o convencional, para se obterem isómeros puros. A presente invenção inclui um composto da presente invenção em qualquer forma isomérica e em qualquer mistura isomérica. A presente invenção também inclui tautómeros de um composto da presente invenção, onde possam existir tautómeros.
Os compostos da presente invenção apresentam actividade farmacológica e são, portanto, úteis como fármacos.
Por exemplo, os compostos da presente invenção 14 ΡΕ2137143 apresentam actividade antimicrobiana, por exemplo anti-bacterianas, contra bactérias gram positivas, tais como os estafilococos coagulase-positivos, por exemplo Staphylo-coccus aureus, estafilococos coagulase-negativos, por exemplo, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus haemolyti-cus, e estreptococos, por exemplo Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae, enterococos, por exemplo Ente-rococcus faecium e Listeriose e contra bactérias gram negativas tais como Moraxella, por exemplo Moraxella catarrhalis, e Haemophilus, por exemplo Haemophilus influ-enzae, e Legionella, por exemplo Legionella pneumophila, Neisseriaceae, por exemplo Neisseria gonorrhoeae, bem como contra Micoplasmas, Clamídia e anaeróbicos obrigatórios, por exemplo Bacteroides fragilis, Clostridium difficile, Fusobacterium spp., e Propionibacterium spp. A actividade in vitro contra bactérias aeróbicas foi determinada pelo Teste de Diluição de Ágar ou pelo Teste de Microdiluição de acordo com o Clinicai and Laboratory Standards Institute (CLSI, anterior NCCLS) Documento M7-A7 Vol. 26, N°. 2: "Methods for dilution Antimicrobial Susceptibility Tests for Bactéria that Grow Aerobically - Approved Standard; Seventh Edition (2006)"; e o teste contra bactérias anaeróbicas foi realizado de acordo com o Clinicai and Laboratory Standards Institute (CLSI, anterior NCCLS), Documento, M11-A6, Vol. 24, N° . 2: "Methods for Antimicrobial Susceptibility Testing of Anaerobic Bactéria - Approved Standard; Sixth Edition (2004)", e a actividade in vivo foi testada pelo modelo de septicémia em ratos contra o Staphylococcus aureus. 15 ΡΕ2137143
Os compostos da presente invenção são, portanto, adequados para o tratamento e prevenção de doenças que são mediadas por micróbios, por exemplo bactérias. As doenças que podem também ser tratadas incluem, por exemplo, doenças mediadas pelos Helicobacter, tais como o Helicobacter pylori, e doenças mediadas pela Mycobacterium tuberculosis. As doenças que podem também ser tratadas incluem em geral doenças inflamatórias, onde os micróbios estejam a mediar a dita inflamação, por exemplo incluindo a acne.
Num outro aspecto a presente invenção proporciona um composto da presente invenção para utilização como um fármaco, preferencialmente como um antimicrobiano, tal como um antibiótico, por exemplo um anti-anaeróbico.
Num outro aspecto a presente invenção proporciona um composto da presente invenção para utilizar no tratamento da acne.
Num ainda outro aspecto a presente invenção proporciona um composto da presente invenção para utilização na preparação de um medicamento para o tratamento de doenças, mediadas por micróbios, tais como bactérias, por exemplo - doenças mediadas por bactérias, por exemplo seleccionadas a partir de Estafilococos, Estreptococos,
Enterococos; 16 ΡΕ2137143 - doenças mediadas por bactérias, por e selec-cionadas a partir de Moraxella, Haemophilus, Legionella, Neisseriaceae; - doenças mediadas pelo Helicobacter; - doenças mediadas pela Mycobacterium tubercu- losis; - por exemplo doenças mediadas por Micoplasmas, Clamidia e anaeróbicas obrigatórias; e para o tratamento da acne.
Num aspecto adicional a presente invenção permite um método de tratamento de doenças mediadas por micróbios que inclui administrar a um indivíduo com necessidade de tal tratamento uma quantidade eficaz de um composto da presente invenção, por exemplo na forma de uma composição farmacêutica.
Num aspecto adicional a presente invenção permite um método de tratamento da acne que inclui administrar a um indivíduo com necessidade de tal tratamento uma quantidade eficaz de um composto da presente invenção, por exemplo na forma de uma composição farmacêutica.
Tratamento, inclui tratamento e profilaxia. 17 ΡΕ2137143
Para o tratamento antimicrobiano e da acne, a dosagem apropriada variará, naturalmente, dependendo de, por exemplo, a natureza química e dos dados farmacoci-néticos de um composto da presente invenção empregue, do receptor individual, do modo de administração e da natureza e gravidade das condições a serem tratadas. No entanto, em geral, para resultados satisfatórios em mamíferos de grande porte, por exemplo humanos, uma dosagem diária indicada está na gama de cerca de 0,5 mg a 3 g de um composto da presente invenção administradas convenientemente, por exemplo, em doses divididas até quatro vezes ao dia.
Um composto da presente invenção pode ser administrado por qualquer via convencional, por exemplo entericamente, por exemplo incluindo a administração nasal, bocal, rectal ou oral; parentericamente, por exemplo incluindo a administração intravenosa, intramuscular, ou subcutânea; ou topicamente, por exemplo incluindo a administração epicutânea, intranasal ou intratecal; por exemplo na forma de comprimidos revestidos ou não revestidos, cápsulas; soluções ou suspensões injectáveis, por exemplo na forma de ampolas, frascos, na forma de cremes, geles, pastas, pós inaláveis, espumas, tinturas, batons, rebuçados, nebulizações, ou na forma de supositórios, por exemplo de uma maneira análoga a macrólidos, tal como eritromicinas, por exemplo claritromicina ou azitromicina. 18 ΡΕ2137143
Um composto da presente invenção pode ser administrado na forma de um sal f armaceuticamente aceitável, por exemplo um sal por adição de ácido ou um sal por adição de base, por exemplo um sal de metal, ou na forma livre, opcionalmente na forma de um solvato. Um composto da presente invenção na forma de um sal apresenta a mesma ordem de actividade do composto na forma livre, opcionalmente na forma de um solvato.
Um composto da presente invenção pode ser utilizado, sozinho, para o tratamento farmacêutico de acordo com a presente invenção sozinho, ou em combinação com um ou mais outros agentes farmaceuticamente activos. Tais outros agentes farmaceuticamente activos incluem, por exemplo, outros antibióticos e agentes anti-inflamatórios, e, se um composto da presente invenção é utilizado no tratamento da acne, outros agentes farmacêuticos incluem agentes adicionais que sejam activos contra a acne.
As combinações incluem combinações fixas, nas quais dois ou mais agentes activos farmaceuticamente estão na mesma formulação; estojos de componentes, nos quais dois ou mais agentes farmaceuticamente activos em formulações separadas são vendidos na mesma embalagem, por exemplo com instruções para a co-administração; e combinações livres nas quais os agentes farmaceuticamente activos são embalados separadamente, mas em que são fornecidas instruções para a administração simultânea ou sequencial. 19 ΡΕ2137143
Num outro aspecto a presente invenção proporciona uma composição farmacêutica incluindo um composto da presente invenção na forma livre ou na forma de um sal farmaceuticamente aceitável e/ou na forma de um solvato em associação com pelo menos um excipiente, por exemplo veiculo ou diluente, por exemplo incluindo enchimentos, agregantes, desagregantes, condicionadores de fluxo, lubrificantes, açúcares e adoçantes, fragrâncias, conservantes, estabilizantes, agentes humectantes e/ou emulsio-nantes, solubilizantes, sais para regularem a pressão osmótica e/ou tampões farmacêuticos.
Num outro aspecto a presente invenção proporciona uma composição farmacêutica de acordo com a presente invenção, incluindo adicionalmente outro agente farmaceu-ticamente activo.
Tais composições farmacêuticas podem ser fabricadas de acordo, por exemplo analogamente, a um método convencional, por exemplo por processos de mistura, granulação, revestimento, dissolução ou liofilização. A forma de dosagem unitária pode conter, por exemplo, desde cerca de 0,5 mg a cerca de 2000 mg, tais como 10 mg a cerca de 500 mg.
Os compostos da presente invenção são adicionalmente adequados como agentes veterinários, por exemplo compostos veterinariamente activos, por exemplo na profilaxia e no tratamento de doenças microbianas, por exemplo 20 ΡΕ2137143 bacterianas, em animais, tais como galinhas, porcos e vitelos, por exemplo, e para diluir fluidos para a inseminação artificial e para técnicas de imersão de ovos.
Num outro aspecto a presente invenção proporciona um composto da presente invenção para utilização como agente veterinário.
Num aspecto adicional a presente invenção proporciona um composto da presente invenção para a preparação de uma composição veterinária que é útil como agente veterinário.
Num outro aspecto a presente invenção proporciona um método veterinário para a profilaxia e o tratamento de doenças microbianas, por exemplo bacterianas, que inclui administrar a um indivíduo com necessidade de tal tratamento uma quantidade eficaz de um composto da presente invenção, por exemplo na forma de uma composição veterinária .
Os Exemplos 1 a 37 seguintes subsequentemente apresentam MICs ^ 2 pg/mL contra o Staphylococcus aureus ATCC49951 e Streptococcus pneumoniae ATCC49619.
A estabilidade metabólica para os compostos da presente invenção foi determinada utilizando hepatócitos primários humanos crioconservados. Foram incubadas 1 x 106 células/mL na ausência e na presença de 5 pg/mL e 25 pg/mL 21 ΡΕ2137143 dos compostos de teste a 37°C, 5% de CO2 durante 4 horas. Para avaliar a degradação in vitro sob as condições do ensaio, uma amostra de cada composto de teste foi incubada também na ausência de hepatócitos. A incubação foi parada congelando a mistura reaccional. Após ultrafiltração e lavagem do filtro com acetonitrilo, a solução com a amostra foi analisada em relação ao desaparecimento do composto parental ou ao aparecimento de metabolito utilizando LC/MS (armadilha de iões). 0 valor da estabilidade metabólica corresponde ao composto parental detectado em % após incubação.
Nos compostos da presente invenção, a introdução do grupo R3, preferencialmente um grupo hidroxilo, numa posição vicinal ao substituinte enxofre ligado ao anel ciclo-hexilo revelou melhorias inesperadas na estabilidade metabólica dos componentes microbiologicamente activos. 0 composto parental ou metabolito activo era mais estável após a incubação com hepatócitos primários humanos em comparação com derivados sem o grupo R3, preferencialmente o grupo hidroxilo, ligado à espécie ciclo-hexilo da cadeia lateral da pleuromutilina.
Por exemplo, após 4 horas de incubação com hepatócitos humanos a uma concentração do composto de 5 pg/mL, para uma mistura de cloridrato de 14-0-{[(1R,2R,5S)-5-amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-ace-til}-mutilina e o seu diastereómero (IS,2S,5R) cloridrato -Exemplo 2 da presente invenção - foram encontrados 66% do composto parental, enquanto para a mistura de cloridrato de 22 ΡΕ2137143 14—0—{[(IR,3R)-3-amino-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-muti-lina e o seu diastereómero (IS, 3S) cloridrato - derivado análogo sem o grupo hidroxilo - apenas puderam ser detec-tados 24% do composto parental.
Exemplos 0 nome trivial mutilina refere-se ao nome sis- temático da IUPAC (IS, 2N, 3S, 4S, 6N, 7N, 8iR, 14iR)-3, 6-di-hidro-xi-2,4,7, 14-tetra-metil-4-vinil-triciclo [5.4.3.01,R] tetra-decan-9-ona. Nos exemplos, os derivados de pleuromutilina são numerados em analogia com o sistema de numeração da mutilina descrito por H. Berner (Berner, H.; Schulz, G.; Schneider H. Tetrahedron 1980, 36, 1807-1811.):
O 0 pleuromutilina tiol e o tosilato de pleuromutilina são compostos com as fórmulas:
O o 23 ΡΕ2137143
Exemplo 1 - Cloridrato de 14-0-{[(ΙΛ,2R,4R)-4- amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,2S,4S) cloridrato.
Passo AI. 14-0-{ [ (1J?, 2R, 4R) -4-terc-Butoxicarbo- nilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS, 2S, 4S) e 14-0-{[(IR,2Rr5S)-5-terc-Butoxi-carbonilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-muti-lina + diastereómero (IS, 2S, 5.R) e 14-0-{ [ (ÍE, 2.R, 4S) 4-terc-Butoxicarbonilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,2S,4B). A uma solução de éster terc-butilico do ácido 3,4-epoxi-ciclo-hexil-carbâmico (Gómez-Sáncez, E.; Marco-Contelles J. Tetrahedron 2005, 61, 1207-1219.) (4,27 g, 20 mmol) e pleuromutilina tiol (Nagarajan, R. Eli Lilly and Company 1978, US 4 130 709) (7,10 g, 18 mmol) em 200 mL de tetra-hidrofurano, foi adicionado óxido de alumínio (40 g, Brockmann actividade I, neutro) e a mistura resultante foi agitada durante 40 horas à temperatura ambiente. A suspensão foi filtrada e concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi sujeito a cromatografia (sílica, ciclo-hexa-no/acetato de etilo = 1/1) para render 14-0-{[(lR,2R,4R)-4-terc-butoxicarbonilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (1S,2S,4S) (a) (Rf = 0,38, 1,34 g, 12%) bem como uma mistura de 14-0-{[(lR,2R,5S)-5-terc-butoxicarboilamino-2-hidroxi-ciclco-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,2S,5R) e 14-0- - 24 - ΡΕ2137143 {[{IR,2R,4S)-4-terc-butoxicarbonilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfan.il ] -acetil} -mutilina + diastereómero (1S,2S,4R) (b) (Rf = 0,26, 2,81 g, 25%) como espumas amorfas inco lores . (a) : RMN de 1H (400 MHz, DMSO-de, δ, ppm, in ter ali a) : 6, , 74 (d, 1H, NH, J = 7 Hz ), 6,13 ( dd, 1H, 19 -H, J = : 11 Hz ; e 18 Hz ), 5,54 (d, 1H, 14 -H, J = 8 Hz) 1 , 5, . 05 (m, 2H, 20' -h: ), 4,90 (d, 1H, 2'- -OH, J = 5 Hz) , 4, 48 ( d, 1H, 11- OH, J = 6 Hz) , 3,55 - 3, 20 (m, 6H, l’-H , 2 :'-h, 4 ' -H, 11- H, 22- H) , 2,40 (bs, 1H , 4- -H) , 1,36 (s, 3H, 15 -ch3; i , 1 , 35 (s, 9H r terc-butilo) , 1, 06 (s, 3H, I8-CH3) , 0, 81 ( d, 3H, 17-CH3, J = 7 Hz), 0,62 (d, 3H, I6-CH3, J = 7 Hz). MS-ESI (m/z) : 630 (MNa+) , 1237 (2MNa+) . (b) : RMN de (400 MHz, DMSO-de , δ, ppm, in ter alia ) : 6, 70 (d. f 1H, NH, J = 7 Hz) f 6, 12 (dd, 1H, 19 -H, J = 11 Hz e 1 8 Hz ), 5, 34 (d, 1H, 14- -H, J = 8 Hz) , 5, 05 (m, 2H, 20 -H), 4, 82, 4,78 (d , 1H, 2 ' -OH, J = 4 Hz) , 4, 48 (d, 1H, 11 -OH, J = 6 Hz) , 3, 55 - 3, 20 (m, 5H, 2 ’ -H :, 4’ /5' -H, 11-H f 22-H), 2, 97 (m, 1H, , 1’- H) , 2, 40 (bs, 1H, 4-H) , 1 , 35 (s, 12H, I5-CH3, terc-butilo), 1,05 (s, 3H, I8-CH3) , 0,82 (d, 3H, I7-CH3, J = 7 Hz), 0,62 (d, 3H, I6-CH3, J = 7 Hz) . MS-ESI {m/z): 630 (MNa+) , 1237 (2MNa+) . ou Passo A2. 14-0-{[(IR,2R,4R)-4-terc-Butoxicar- bonilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,2S,4S) e 14-0-{[(IR,2R,5S)5-terc-Buto-xicarbonilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}- 25 ΡΕ2137143 mutilina + diastereómero (IS, 2S, 5R) e 14-0-{ [ (1.R, 2.R, 4S)-4-terc-Butoxicarbonilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (1£>, 2S, 4J?) . A uma solução de éster terc-butilico do ácido 3, 4-epoxi-ciclo-hexil-carbâmico (10 g, 47 mmol) e pleuromu-tilina tiol (16,6 g, 42 mmol) em 200 mL de metanol e 20 mL de dioxano, foi adicionado NaOH a 2N (21 mL, 42 mmol) e a mistura resultante foi agitada durante 16 horas à temperatura ambiente. Após o final da reacção, o pH foi ajustado a 7 com HC1 diluído e a mistura reaccional foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi diluído com água e com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio e extraída três vezes com acetato de etilo. As fases orgânicas foram secadas sobre sulfato de sódio e filtradas. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida e, após cromatografia (sílica, ciclo-hexano/acetato de etilo = 1/1) obteve-se 14-0-{[(IR,2R,4R)-4-terc-butoxicarbonilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS, 2S, AS) (Rf = 0,40, 3,1 g, 12% de rendimento) bem como uma mistura de 14-0-{[(IR,2R,5S)-5-terc-butoxicarbo-nilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,2S,5R) e 14-0-{[(IR,2R,4S)-4-terc-butoxi-carbonilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,2S,4R) (Rf = 0,25, 6,35 g, 25%) na forma de espumas amorfas incolores. ou Passo A3. 14-0-{[(IR,2R,4R)-4-terc-Butoxicar- bonilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina 26 ΡΕ2137143 + diastereómero (IS,2S,4S) e 14-0-{[(1.R,2R, 5S)-5-terc-Butoxicarbonilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS, 2S, 5.R). A uma solução de Pleuromutilina tiol (9,25 g, 23,5 mmol) em 100 mL de acetonitrilo (secado sobre crivo molecular de 4Á) , foi adicionado 1,5-diazabiciclo [ 4.3.0]-non-5-eno (DBN, 2,9 pL, 23,5 mmol) e, após 1 hora de agitação à temperatura ambiente sob atmosfera de árgon, a mistura foi carregada com éster terc-butílico do ácido sin-3,4-epoxi-ciclo-hexil-carbâmico (4,17 g, 19,5 mmol) e foi agitada durante mais 16 horas à temperatura ambiente. A mistura reaccional foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi carregado com água e com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio e extraída três vezes com diclorometano. As fases orgânicas foram secadas sobre sulfato de sódio e filtradas. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida e sujeito a cromatografia (sílica, ciclo-hexano/acetato de etilo = 1/1) para render 14-0- { [ (IR, 2R, 4R) -4-terc-butoxicarbonilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS, 2S, 45) (Rf = 0, 38, 5, 07 g, 43%) bem como 14-0-{[(IR,2R,5S)-5-terc-butoxicarbonilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (15,25,5R) (Rf = 0,25, 2,95 g, 16,5%) na forma de espumas amorfas incolores.
Passo B. 14-0-{ [ (1.R, 2.R, 4.R)-4-Amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS, 25, 45) . 27 ΡΕ2137143 A uma solução de 1A-0-{[(IR,2R,AR)-A-terc-buto-xicarbonilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (15,25,45) (1,34 g, 2,20 mmol) em 75 mL de diclorometano, foi adicionado ácido trifluoro-acético (4 mL) a 4°C e agitou-se durante 5 horas à temperatura ambiente. A mistura reaccional foi diluída com diclorometano e cuidadosamente vertida para uma solução saturada de NaHC03. As fases foram separadas e a fase aquosa foi lavada duas vezes com diclorometano. As fases orgânicas combinadas foram secadas sobre sulfato de sódio e filtradas. Após cromatografia (sílica, acetato de etilo/me-tanol/solução de amoníaco a 35% = 50/50/1) foi obtido 14-0-{[(1R,2R, AR)-4-amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (15,25,45) (745 mg, 67% de rendimento) na forma de espuma amorfa incolor. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-dõ, δ, ppm, inter alia): 6,14 (dd, 1H, 19- -H, J = 11 Hz e 18 Hz) , 5,54 (d , 1H , 14 -H, J = 8 Hz) , 5, 05 ( m, 2H, 20-H), 4, 50 (d, 1H, 11- -OH, J = 6 Hz) , 3,50-3, 20 (m, 5H, 2'· -H, 4 ' -H, 11-H, 22- -H) , 2, 55 (m, 1H, 1’-H), 2,40 (bs, 1H, 4-H ) , 1,35 (s, 3H, 15- ch3) f 1, 06 (s, 3H, 18- -CH3) , 0,82 (d, 3H, . 17-CH3, J = = 7 Hz) , 0, 62 (d, 3H, I6-CH3, J = 7 Hz) . MS-ESI (m/z) : 508 (MH+) , 530 (MNa+) , 1015 (2MH+) , 1037 (2MNa+) .
Passo C. Cloridrato de 14-0-{ [ (1.R, 2.R, 4.R)-O—Amino-2—hidroxi—ciclo—hexilsulfanil]—acetil}-mutilina + cloridrato do diastereómero (15,25,45). 28 ΡΕ2137143 A uma solução de 14-0-{ [ (IR, 2.R, 4.R)-4-amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereó-mero (15,25,45) (325 mg, 0,64 mmol) em 20 mL de dioxano foi tratada com HC1 a IN (0,64 mL, 0,64 mmol). Após agitação à temperatura ambiente durante 30 minutos, a solução foi liofilizada para se obter cloridrato de 14-0-{[(IR,2R,4R)-4-amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + cloridrato do diastereómero (15,25,45) (rendimento quantitativo) na forma de um sólido amorfo incolor. RMN de (500 MHz, DMSO-de, δ, ppm, inter a lia ) : 7, 6 (bs, 3H, nh3 + ), 6, 14 (dd, 1H, 19-H, J = 11 Hz e 18 Hz) f 5, 55 (d, 1H, 14- -H, J = 8 H: z) , 5,05 (m, 2H, 20-H), 4, 52 (d, 1H, 11- OH, J = : 6 Hz ), 3, 50-3,20 ( m, 4H, 2 '-H, 11- H, 22· -H) , 3, 03 (m, 1H, 4 ' -H) , 2,53 (m, 1H, 1 ’-H), 2, 40 (bs, 1H, 4· -H) , 1,37 (s, 3H, 15-CH3) , 1,06 (s, 3H, I8-CH3), 0,82 (d, 3H, 17-CH3, J = 7 Hz), 0,62 (d, 3H, I6-CH3, J = 7 Hz). MS-ESI (m/z) : 508 (MH+) , 530 (MNa+) , 1015 (2MH+) , 1037 (2MNa+), 542 (MCI).
Exemplo IA - 14-0-{[(IS,2S,4S)-4-Amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina e 14-0-{[(IR,2R,4R)-4-Amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina. A uma mistura de 14-0-{[(IR,2R,4R)-4-Amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (15,25, 45) (12 g, 23,6 mmol) proveniente do Exemplo 1
Passo B, foi separada numa coluna quiral (250 x 20 mm CHIRALCEL OD-H, n-heptano/etanol/dietilamina = 80/20/0,1) 29 ΡΕ2137143 para render 14-0-{[(IS*,2S*,4S*)-4-amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina (a) (composto que eluiu primeiro, 4,76 g, 37% de rendimento, não corrigido) e 14-0-{[(1R*,2R*, 4R*)-4-amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina (b) (composto que eluiu posteriormente, 3, 63 g, 30% de rendimento, não corrigido) na forma de espumas amorfas incolores. (a) : RMN de XH 1 (400 MHz, DMSO-de, δ, r ppm, inter alia) : 6, 13 (dd, 1H, 19-H, J = 11 Hz e 18 Hz), 5,54 (d, 1H, 14-H, J = 8 Hz) , 5,05 (m, 2H, 20-H) , 4,50 (d. , 1H, 11-OH, N II l~D ), 3,50-3,20 (m, 5H, 2 '-H, 4'-H, 11-H, 22-H), 2,55 (m, 1H, 1' -H) , 2,40 (bs, 1H, 4-H) , 1,35 (s, 3H, I5-CH3) , 1,05 (s, 3H, I8-CH3), 0,82 (d, 3H, I7-CH3, J = 7 Hz) , 0, 62 (d, 3H, 16-CH3, J = 7 Hz). MS-ESI (m/z) : 508 (MH+) , 530 (MNa+) , 1015 (2MH+) , 1037 (2MNa+) , 506 (M-H) , 542 (MCI") . (b) : RMN de 1H (400 MHz, DMSO-dõ, δ, ppm, inter alia) : 6,13 (dd, 1H, 19-H, J = 11 Hz e 18 Hz), 5, 54 (d, 1H, 14-H, J = 8 Hz) , 5, 05 (m, 2H, 20-H), 4,50 (d, 1H, 11-OH, J = 6 Hz), 3,50-3,20 (m, 5H, 2 '-H, 4’-H, 11-H, 22-H) , 2,55 (m, 1H, l'-H), 2,40 (bs, 1H, 4-H), 1,35 (s, 3H, 15-CH3) , 1,05 (s, 3H, I8-CH3), 0, 82 (d, 3H, I7-CH3, J = 7 Hz) , 0, 62 (d, 3H, I6-CH3, J = 7 Hz) . MS-ESI (m/z) : 508 (MH+ ) , 530 (MNa+) , 1015 (2MH+) , 1037 (2MNa+) , 506 (M-H-) , 542 (MCI"). 30 ΡΕ2137143
Exemplo 2 - Cloridrato de 14-0-{ [ (1.R, 2.R, 5S)-5-
Amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + cloridrato do diastereómero (IS,2S,5R).
Passo A. 14-0-{[(IA,2R,5S)-5-Amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,2S,5R) e 14-0-{[(IA,2A,4S)-4-Amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,2S,4A) . A uma mistura de 14-0-{[(IR,2R,5S)-5-terc-butoxi-carbonilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-muti-lina + diastereómero (IS, 2S, 5R) e 14-0-{[(ΙΑ,2A,4S)-4-terc-butoxicarbonilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,2S,4R) (1,12 g, 1,84 mmol) proveniente do Exemplo 1 Passo A, foi tratada de acordo com o método do Exemplo 1 Passo B. Após processamento e cromatografia da mistura reaccional (sílica, acetato de etilo/metanol/solução de amoníaco a 35% = 50/50/1) foram obtidos 14-0-{[[IR,2R,5S)-5-amino-2-hidroxi-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (1S,2S,5R) (a) (Rf = 0,33, 524 mg, 56% de rendimento) e 14-0-{[(lR,2R,4S)-4-amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (1S,2S,4R) (b) (Rf = 0,22, 160 mg, 17%) na forma de espumas amorfas incolores. (a) : RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, δ, ppm, inter alia): 6,13 (dd, 1H, 19-H, J = 11 Hz e 18 Hz), 5,53 (d, 1H, 14-H, J = 8 Hz), 5,05 (m, 2H, 20-H) , 4,51 (d, 1H, 11-OH, J= 6 Hz), 3,48 (m, 1H, 2’-H), 3,42 (m, 1H, 11-H), 31 ΡΕ2137143 sistema-AB (vA = 3,37, vB = 3,23, 22-H, J = 19 Hz), 2,98 (m, 1H, 1’-H), 2,82 (m, 1H, 5'-H), 2,40 (bs, 1H, 4-H), 1,36 (s, 3H, 15-CH3), 1,06 (s, 3H, I8-CH3) , 0,82 (d, 3H, 17-CH3, J = 7 Hz), 0,63 (d, 3H, I6-CH3, J = 7 Hz) . (b) : RMN de 1H (400 MHz, DMSO-dõ, δ, ppm, inter alia) : 6,14 (dd, 1H , 19-H, J = 11 Hz ; e 18 Hz), 5, 54 (d, 1H, 14-H, J = 8 Hz) , 5, 06 (m, 2H, , 20- Ή) , 4 ,51 (bs, 1H, 11- OH) , 3, 79 (m, 1H, 2'- H), 3, 42 (m, 1H, 11-H), sistema-AB (vA = 3,33, vB = 3, 23, 22 -H, J = 15 Hz) , 3 ,04 (m, 1H, 4'-H), r 2,82 (m, 1H, l’-H), 2, 40 (bs, 1H , 4-H), 1,37 (s, 3H, 15-CHs) , 1,06 (s, 3H, I8-CH3), 0,81 (d, 3H, 17-NCH3, J = 7 Hz), 0,63 (d, 3H, I6-CH3, J = 7 Hz) .
Passo B. Cloridrato de 14-0-{[(1J?,2R,5S)-5—Amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + cloridrato do diastereómero (IS, 2S, 5.R).
Trataram-se 14-0-{[{IR,2R,5S)-5-Amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil)-mutilina + diastereómero (15, 2S,5R) (516 mg, 1,02 mmol) de acordo com o método do Exemplo 1 Passo C, para se obter cloridrato de 14-0-{[(IR,2R, 5S)-5-amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + cloridrato do diastereómero (15,2S, 5R) (533 mg, 96% de rendimento) na forma de um sólido amorfo incolor. RMN de XH (500 MHz, DMSO-d6, δ, ppm, inter alia): 7,7 (bs, 3H, NH3+) , 6,13, 6,12 (2dd, 1H, 19-H, J = 11 Hz e 18 Hz), 5,55 (d, 1H, 14-H, J = 8 Hz) , 5,05 (m, 2H, 20-H) , 4,53 (d, 1H, 11-OH, J = 6 Hz), 3,70 (m, 1H, 2'-H), 3,42 (t, 1H, 32 ΡΕ2137143 11-H, J = 6 Hz), 3,35 (m, 2H, 22-H) , 3,09 (m, 2H, l'-H, 5' -H) , 2,40 (bs, 1H, 4-H) , 1,35 (s, 3H, 15-CH3) , 1,05 (s, 3H, 18-CH3), 0,82 (d, 3H, 17-CH3, J = 7 Hz), 0,63 (d, 3H, I6-CH3, J = 7 Hz) . MS-ESI (m/z) : 508 (MH+) , 530 (MNa+) , 1015 (2MH+) , 1037 (2MNa+) , 542 (MCI-) .
Exemplo 2A - 14-0-{[(1.R,2R,5S)-5-Amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina e 14-0-{[(IS,2S,5R)-5-Amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina. A mistura de 14-0-{[(ΙΑ,2A,55)-5-Amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (15, 2S,5R) (4,91 g, 9,67 mmol) proveniente do Exemplo 2 Passo A, foi separada numa coluna quiral (250 x 20 mm CHIRALCEL OD-H, n-heptano/isopropanol/dietilamina = 80/20/0,1) para render 14-0-{[{IR*,2R*,5S*)-5-amino-2-hidroxi-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina (a) (composto que eluiu primeiro, 2,07 g, 42% de rendimento, não corrigido) e 14-0-{[(15*,25*,5R*)-5-amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina (b) (composto que eluiu posteriormente, 2,36 g, 48% de rendimento, não corrigido) na forma de espumas amorfas incolores. (a) : RMN de 1H (400 MHz, DMS0-d6, δ, ppm, inter al ia) : 6, 13 (dd, 1H, 19-H, J = 11 Hz e 18 Hz) , 5,53 (d, 1H 14 -H, J = = 8 Hz) , 5, 05 (m, , 2H, 2 0-H), 4, 72 (d, 1H, 2 ' -OH J = 4 Hz ) , 4,50 (d, 1H, 11-OH, J = 6 : Hz) , 3,47 (m, 1H 2 ' -H) , 3, 45- 3,20 (m, 3H, 11-H, 22-H), 2, 98 (m, 1H, 1' -H) 33 ΡΕ2137143 2,80 (m, 1H, 5' -H) , 2,40 (bs, 1H, 4-H) , 1,36 (s, 3H, 15-CH3) , 1,06 (s, 3H, I8-CH3), 0,81 (d, 3H, 17-CH3, J = 7 Hz), 0,63 (d, 3H, I6-CH3, J = 7 Hz) . MS-ESI {m/z) : 508 (MH+) , 530 (MNa+) , 1015 (2MH+) , 1037 (2MNa+) , 506 (M-H) ", 542 (MCI-) . (b) : RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, δ, ppm, inter al ia) : 6, 13 (dd, 1H, 19-H, J = 11 Hz e li 3 Hz) f 5, 53 (d, 1H 14 -H, J = = 8 Hz), 5, 05 (m, . 2H, 20-H) , 4, ,72 (d, 1H, 2' -OH J = 4 Hz )/ 4,50 (d, 1H, 11-OH, J = = 6 Hz) , 3 ,47 (m, 1H 2' -H) , 3, 45-3,20 (m, 3H, 11-H, 22-H) , 2 ,98 (m, 1H, 1’ -H) 2, 80 (m, 1H, 5' -H) , 2,4 0 (bs, 1H, 4- -H) , 1, 36 1 (s, 3H 15 -CH3) f 1,06 ( s, 3H, I8-CH3), 0 ,81 (d, 3H, 17- ch3 J = 7 : Hz) , 0,63 ( d, 3H, 16 -CH3, J = 7 Hz) • MS -ESI {m/z) : _L . _ _ 508 (MH' f) , 530 (MNa + ), 1015 (2MH+) 1037 (2MNa+) , 506 (M-H)~, 542 (MCI-).
Exemplo 3 - Cloridrato de 14-0-{ [ (1.R, 2.R, 4S)-4-
Amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + cloridrato do diastereómero (IS, 2S, 4J?) .
Tratou-se 14-0-{[{IR,2R,4S)-4-Amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (15, 25,4.R) (152 mg, 0,30 mmol), proveniente do Exemplo 2 Passo A, de acordo com o método do Exemplo 1 Passo C para se obter cloridrato de 14-0-{ [ (IP, 2.R, 45)-4-amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + cloridrato do dias tereómero (15,2S, 4A) (148 mg, 91% de rendimento) na forma de um sólido amorfo incolor. 34 ΡΕ2137143 RMN de XH (500 MHz, DMSO-d6, δ, ppm, inter alia): 7,8 (bs, 3H, nh3+) , 6, 14, 6, 13 (2dd, 1H, 19- -H, J = 11 Hz e : 18 : Hz) , 5, 55 (d, 1H, 14- H, J = 8 Hz), r 5, 20 (d , 1H, 2'· -OH), 5 , 05 (m, 2H, 20-Η ) , 4 , 53 (d, 1H, 11· -OH, J = 6 Hz) , 3, 88 (m, 1H, 2 ' -H )/ 3, r 42 (t, 1H, 11-H, J = 6 Hz) , 3,32 ( m, 2H, 22 -H) , 3,22 (m, 1H, 4'- H), 2 , 92 (m, 1H, 1' -H ), 2,40 (bs, 1H / 4 -H) , 1,35 (s, 3H, 15 -CH3) , 1,05 (s, 3H f I8-CH3) , 0, 81 (d, 3H, 17-CH3, J = 7 Hz), 0,63 (d, 3H, I6-CH3, J = 7 Hz) . MS-ESI (m/z) : 508 (MH+) , 530 (MNa+) , 1015 (2MH+) , 1037 (2MNa+) , 542 (MCI-).
Exemplo 4 - 14-0-{[(lJ?,2R,5i?)-5-Amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]—acetil}—mutilina + diastereómero (1S,2S,5S) .
Passo A. terc-Butil-dimetil-(cis-3,4-epoxi-ciclo-hexiloxi)-silano. A uma solução de 3-ciclo-hexen-l-ol (Amburgey, J. C.; Shuey, S. W.; Pedersen, L. G.; Hiskey R., Bioorganic Chemistry 1994, 22, 172-197) (10 g, 102 mmol) em 200 mL de diclorometano foi adicionado acetilacetonato de vanadilo (0,5 g, cat.) e hidroperóxido de terc-butilo (20,4 mL a 5,5 M em decano, 112 mmol) e agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. A mistura reaccional resultante foi tratada com cloreto de terc-butildimetilsililo (16,9 g, 112 mmol), imidazole (9,02 g, 132 mmol) e 4-dimetil-aminopiridina (2,49 g, 20 mmol) a 4°C e agitada durante 5 horas à temperatura ambiente. A mistura reaccional foi 35 ΡΕ2137143 diluída com diclorometano e subsequentemente extraída com uma solução a 10% de NaHS03, com uma solução saturada de NaHC03 e com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A fase orgânica foi secada sobre sulfato de sódio e filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida e sujeito a cromatografia (sílica, ciclo-hexano/acetato de etilo = 15/1) para render terc-butildimetil-(cis-3, 4-epoxi-ciclo-hexiloxi)-silano (Rf = 0,35, 18,3 g, 79% de rendimento) na forma de um óleo incolor. RMN de ^ (500 MHz, DMSO-d6, δ, ppm) : 3,55 (m, 1H) , 3,00 (m, 2H), 2,15 (m, 1H), 2,00 (m, 1H), 1,80 (m, 1H), 1,50 (m, 1H), 1,35 (m, 1H), 1,35 (m, 1H), 1,25 (m, 1H), 0,83 (s, 9H, terc-butilo) , 0,0 (s, 9H, Si (013)2).
Passo B. 14-0-{[(IR,2R,55)-5-(terc-Butil-dimetil-sililoxi)-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetilj-mutilina + diastereómero (15, 25, 5.R).
Tratou-se terc-Butil-dimetil-{cis-3,4-epoxi-ci- clo-hexiloxi)-silano (6,41 g, 28 mmol) com pleuromutilina tiol de acordo com o método do Exemplo 1 Passo A2. Foi obtido 14-0-{[(lR,2R,5S)-5-(terc-butil-dimetil-sililoxi) -2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,2S,5R) em bruto na forma de uma espuma amorfa incolor, que foi utilizada directamente para o passo seguinte. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-dõ, δ, ppm, inter alia) : 6,13 (dd, 1H, 19-H, J = 11 Hz e 18 Hz), 5,52 (d, 1H, 14-H, J = 8 Hz), 5,05 (m, 2H, 20-H), 4,78 (dd, 1H, 2’-OH, J = 5 Hz e 6 Hz), 36 ΡΕ2137143 4,48 (d, 1H, 11-OH, J = 6 Hz), 3,88 (m, 1H, 5’-H), 3,15-3,45 (m, 4H, 2'-H, 11-H, 22-CH2) , 2,92 (m, 1H, l'-H), 2,38 (bs, 1H, 4-H) , 1,36 (s, 3H, 15-CH3) , 1,05 (s, 3H, I8-CH3) , 0,86 (s, 9H, terc-butilo) , 0,81 (d, 3H, I7-CH3, J = 7 Hz), 0,63 (d, 3H, I6-CH3, J = 7 Hz), 0,0 (s, 6H, Si (CH3)2) ·
Passo C. 14-0-{[(IR,2Λ,5S)-2,5-Di-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,2S,5R) . A uma solução de 14-0-{[(IR,2R,5S)-5-(terc-butil-dimetil-sililoxi)-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (15,25,5R) (9,46 g, 15,1 mmol) em 25 mL de tetra-hidrofurano foi adicionada uma mistura de ácido acético e de água (3:1, 100 m) e agitou-se durante 2 dias a 40°C. A mistura reaccional foi concentrada até perto da secura sob pressão reduzida e o resíduo foi dissolvido em acetato de etilo e submetido a cromatografia (sílica, ciclo-hexano/acetato de etilo = 1/3) para render o 14-0-{[{IR,2R,55)-2,5-di-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (15,2S,5R) (Rf = 0,27, 7,07 g, 92% de rendimento) na forma de uma espuma amorfa incolor. RMN de 1H (400 MHz, DMS0-d6, δ, ppm, inter alia): 6,12 (dd, 1H, 19-H, , J = 11 Hz e 18 Hz) , 5, 53 (d , 1H, , 14- -H, J = 8 Hz) , 5, 05 (m, 2H, 20-H), 4,72 (dd, 1H, 2'- -OH, J = 2 Hz e 5 Hz) , 4,48 (d, 1H, 11-OH, J = 6 Hz ) , 4 ,43 (t, 1H, 5'-OH), 3, 68 (m, 1H, 5 ’ -H ), 3,45 -3,20 (m, 4H, 2 ' -H, 11-H / 22-H), 2, 94 (m, 1H, 1-H) , 2,38 (bs, 1H, 4-H) f 1,36 (s, 3H, 15- ch3) , 37 ΡΕ2137143 1.06 (s, 3H, I8-CH3), 0,82 (d, 3H, 17-CH3, J = 7 Hz), 0,63 (d, 3H, I6-CH3, J = 7 Hz). MS-ESI (m/z) : 531 (MNa+) , 1039 (2MNa+) .
Passo D. 14-0-{ [ (IR, 2.R, 5S)-2-Hidroxi-5-metanos-sulfoniloxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diaste-reómero (IS, 2S, 5Λ) . A uma solução de 14-0-([(IR,2R,5S)-2,5-di-hi-droxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil)-mutilina + diastereómero (1S,2S,5A) (6,07 g, 11,9 mmol) em 36 mL de piridina, foi adicionado cloreto de metanossulfonilo (1,1 mL, 14,3 mmol) e a mistura resultante foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. Subsequentemente, o solvente foi evaporado sob pressão reduzida; o resíduo foi diluído com HC1 a IN e extraído três vezes com acetato de etilo. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secadas sobre sulfato de sódio e filtradas. O filtrado foi concentrado e purificado por cromatografia em coluna (sílica, ciclo-hexa-no/acetato de etilo = 1/1) para render 14-0-{ [ (1.R, 2R, 5S)-2-hidroxi-5-metanossulfoniloxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS, 2S, 5R) (Rf = 0,15, 2,55 g, 36% de rendimento) na forma de uma espuma amorfa incolor. RMN de ^ (400 MHz, DMSO-d6, δ, ppm, inter alia): 6,12 (dd, 1H, 19-H, J = 11 Hz e 18 Hz), 5,54 (d, 1H, 14-H, J = 8 Hz), 5.07 (m, 2H, 20-H) , 5,00 (t, 1H, 2’-OH, J = 5 Hz), 4,78 (m, 1H, 5’-H), 4,50 (d, 1H, 11-OH, J = 6 Hz), 3,55-3,25 (m, 4H, 2'-Η, 11-H, 22-H) , 2,91 (m, 1H, l’-H), 2,38 (bs, 1H, 4-H) , 38 ΡΕ2137143 1,36 (s, 3H, 15-CH3) , 1,05 (s, 3H, I8-CH3) , 0,80 (d, 3H, I7-CH3, J = 7 Hz), 0,63 (d, 3H, I6-CH3, J = 7 Hz).
Passo E. 14-0-{[(IR,2R,5K)-5-Azido-2-hidroxi-5-metanossulfoniloxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS, 2S, 5S) .
Uma solução de 14-0-{ [ (IR, 2.R, 5S)-2-hidroxi-5-metanossulfoniloxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,2S, 5R) (2,55 g, 4,35 mmol) e azida de sódio (0,85 g, 13 mmol) em 30 mL de dimetilformamida foi aquecida durante 6 horas a 80°C. A mistura reaccional foi diluída com água e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio e extraída três vezes com acetato de etilo. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com água e com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secadas sobre sulfato de sódio e filtradas. O solvente foi removido sob pressão reduzida e foi obtido 14-0-{ [ (IR, 2.R, 5R)-5-azido-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (1S,2S, 5S) (rendimento quantitativo, ciclo-hexano/ace-tato de etilo = 1/1, Rf = 0,35) em bruto, na forma de uma espuma amorfa que foi utilizada directamente para o passo seguinte. RMN de XH (400 MHz, DMSO-de, δ, ppm, inter alia) LO \—1 6, 13 (2dd, 1H, 19-H, J = 11 Hz e 182 Hz), 5, 56, 5, 54 (2d, 1H, 14-H, J = 8 Hz) , 5, 05 (m, 2H, 20-H), 4,90 (d, 1H, 2’-OH, J = 5 Hz), 4,50, 4,49 (2d, 1H, 11-OH, J = 6 Hz), 3, 50-3, 25 (m, 5H, 2'-H, 5'-H, 11-H, 22-H) , 2,64 (m, 1H, 1 ' -H) , 2,40 (bs, 1H, 4-H) , 1,36 (s, 3H, 15-CH3) , 1,06 (s, 39 ΡΕ2137143 3Η, 18-CH3) , 0,81 (d, 3H, 17-CH3, J = 7 Hz), 0,63 (d, 3H, 16-CH3, J = 7 Hz) .
Passo F. 14-0-{[(1Λ,2R,5R)-5-Amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (1S,2S,5S) .
Foi adicionada trifenilfosfina (1,18 g, 4,50 iranol) a uma solução de 14-0-{ [ (1.R, 2R, 5R)-5-azido-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (1S, 2S,5S) (2,4 g, 4,50 mmol) em 30 mL de tetra-hidrofurano e agitou-se de um dia para o outro à temperatura ambiente. Subsequentemente, foi-lhe adicionada água (aprox. 3 mL) e a mistura reaccional foi aquecida durante 1 hora sob refluxo. Após evaporação do solvente, o resíduo foi diluído com água e com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio e extraído três vezes com acetato de etilo. As fases orgânicas combinadas foram secadas sobre sulfato de sódio, filtradas e sujeitas a cromatografia (sílica, acetato de etilo/metanol/solução de amoníaco a 35% = 100/100/1) para render 14-0-{[(1R,2R,5R)-5-amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsul-fanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,2S,5S) (Rf = 0,3, 1,7 4 g, 7 9% de rendimento) na forma de uma espuma amorfa incolor. RMN de XH (400 MHz, DMSO-de, δ, ppm, inter alia) : : 7,25, 6, 65 (2bs, 1H, NH), 6, 14 (dd, 1H, 19-H, . J = 11 Hz e 18 Hz), 5, 54 (d, 1H , 14-H, J = = 8 Hz), 5,04 (m, 2H, 20- H) , 4, 50 (bs, 1H, 11-OH), 3,55-3,10 (m, 5H, 2 ' -H, 5'- -H, 11-H , 22-H ), 2,58 40 ΡΕ2137143 (m, 1H, 1' -H) , 2,40 (bs, 1H, 4-H) , 1,36 (s, 3H, 15-CH3) , 1,05 (s, 3H, 18-CH3), 0,81 (d, 3H, 17-CH3, J = 7 Hz), 0,62 (d, 3H, I6-CH3, J = 7 Hz) . MS-ESI {m/z) : 508 (MH+) , 530 (MNa+) , 1037 (2MNa+) .
Exemplo 4A - 14-0-{[(IR,2R,5R)-5-Amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina e 14-0-{[(IS,2S,5S)-5-Amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina. A mistura de 14-0-{ [ (IR, 2.R, 5.R)-5-Amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS, 2S,5S) (4 g, 7,87 mmol), proveniente do Exemplo 4 Passo F, foi separada numa coluna quiral (250 x 20 mm CHIRALPAK IC, n-heptano/tetra-hidrofurano/dietilamina = 70/30/0,1) para render 14-0-{[(IS*,2S*, 5S*)-5-amino-2-hidroxi-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina (composto que eluiu posterior-mente, 1,1 g, 28% de rendimento, não corrigido) na forma de uma espuma amorfa incolor. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, δ, ppm, inter alia) : 6,13 (dd, 1H , 19- -H, j = 11 . Hz e 18 Hz) , 5, 54 (d, 1H, 14- H, J = 8 Hz) , 5, 06 (m, 2H, 20- H) , 5, 76 (d, 1H, 2’ -OH, J = = 7 Hz), 4 , 50 (d, 1H , 11- -OH, J = 7 Hz ) , 3, 55-3 , 15 (m ., 5H, 2 '-H , 11-H , 5 ’"H, 22 -H) , 2, 48 (m, 1H, 1' -H) , 2, 40 (bs , 1H, 4- -H) , 1,36 (s, 3H, 15 -ch3) r 1,05 (s, 3H, 18- CH3) , 0, 81 (d, 3H, 17- -ch3, J : = 7 Hz) , 0, 62 (d, 3H , 1 6-CH3, J = 7 Hz) . MS -ESI (m/z) : 508 (MH+), 1037 (2MNa+ ) , 506 (M- -ΗΓ, 542 (MCI") . 41 ΡΕ2137143
Exemplo 5 - Cloridrato de 14-0-{[(li?,2R,3R)-3-Amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + cloridrato do diastereómero (1S,2S,3S).
Passo A. 14-0-{ [ (li?, 2R, 3R) -3-terc-Butoxicarbonil-amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS, 2S, 3S).
Tratou-se éster terc-butílico do ácido (cis)-2,3-Epoxi-ciclo-hexil-carbâmico (0'Brien, P.; Childs, A., C.; Ensor, G. Organic Letters 2003, 5(26), 4955 - 4957.) (1 g, 4,69 mmol) com pleuromutilina tiol de acordo com o método do Exemplo 1 Passo AI. Após processamento e cromatografia da mistura reaccional (sílica, ciclo-hexano/acetato de etilo = 1/1) foi obtido 14-0-( [ (IR, 2.R, 3.R)-3-terc-butoxi-carbonilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS, 25, 35) (Rf = 0,5, 1,32 g, 46%) na forma de uma espuma amorfa incolor. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-ds, δ, ppm, inter alia) : 6,12 (m 2H, NH, 19-Hz), 5,54 (d, 1H, 1 \—1 = 8 Hz), 5, 05 (m, 2H 2 0-H), 4,96 (d, 1H, 2'-OH, J = 4 Hz) , 4,50, 4,99 (2 d, 1H 11-OH, J = 6 Hz)), 3,65 (m, 1H, 2'-H) 1 , 3,57 ( (m, 1H, 3’- H) 3,42 (t , 1H, 11-H, J = 6 Hz ) . Sistema-AB (vA = 3,30, 3, 29 vR = 3,23, 3,22, 22-H, J = 15 Hz), 3,06 (m, 1H, l’-H), 2,40 (bs, 1H, 4-H) , 1,36 (s, 12H, terc-butilo, 15-CH3) , 1,05 (s, 3H, 18-CH3), 0,82 (d, 3H, 17-CH3, J = 7 Hz), 0,63 (d, 3H, 16-CH3, J = 6 Hz) . 42 ΡΕ2137143
Passo B. 14-0-{ [ (1.R, 2R, 3R) -3-Amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (1S,2S,3S) .
Tratou-se 14-0-{[(IR,2R,3R)-3-terc-Butoxicarbo-nilamino-2-hidroxi-ciclo-hexi1sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS, 2S, 3S) (400 mg, 0, 658 mmol) de acordo com o método do Exemplo 1 Passo B. Após processamento e cromatografia da mistura reaccional (silica, acetato de etilo/metanol = 1/5) foi obtido 14-0-{[(IR,2R,3R)-3-amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS, 2S, 3S) (Rf = 0, 1, 249 mg, 75%) na forma de uma espuma amorfa incolor. MS-ESI (m/z) : 508 (MH+) , 530 (MNa+) , 1015 (2MH+) , 1037 (2MNa+) .
Passo C. Cloridrato de 14—O—{ [ (IR, 2.R, 3.R) —3—Amino— 2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + cloridrato do diastereómero (15,25,45).
Tratou-se 14-0-{[{IR,2R,3R)-3-Amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (1S, 2S,3S) (249 mg, 0,49 mmol) de acordo com o método do Exem plo 1 Passo C, para se obter cloridrato de 14-0-{[(l-R, 2R,3R)-3-amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + cloridrato do diastereómero (IS,2S,3S) (247 mg, 93% de rendimento) na forma de um sólido amorfo incolor. RMN de XH (400 MHz, DMSO-d6, δ, ppm, inter alia): 7,8 (bs, 3H, NH3+) , 6,13 (d, 2H, 19-Hz, J = 11 Hz e 18 Hz), 5,80 (d, 43 ΡΕ2137143 1H, 2’- OH, J = 4 Hz) , 5, 55 (d, 1H, 1 4-H, J = 8 Hz) , 5, 05 (m, 2H, 20 -H) , 4,55, 4,54 ( 2d, 1H, 11· -OH, J = 6 Hz)), 3, 87 (m, 1H, 2 ' ’-H) , 3, 42 (t, 1H, 1 1-H, J = 6 Hz) . Sistema-AB (vA : = 3 ,35, f vB = = 3,24 , 22-H / J = 152 Hz) , 3,2 0, 3,13 (2m, 1H, 3’- H, 1 '-H) , 2,40 (bs, 1H, 4-H) 1,36 (s, 3H, 15- ch3) , 1,05 (s , 3H, 18 -ch3) , 0, 81 (d, 3H, 17· -ch3, J = 7 Hz) , 0, 63 (d, 3H, 16· -ch3, J = 7 Hz) . MS-ESI (m/z): 508 (MH+) , 1015 (2MH+) , 542 (MCI).
Exemplo 6 - 14-0-{ [ (1.R, 2.R, 4.R)-4-Dietilamino-2- hidroxi-ciclo-hexilsulfanill-acetil)-mutilina + diastereó-mero (IS, 2S, 4S) e 14-0-{ [ (IR, 2.R, 4.R)-4-Etilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (1S,2S,4S) . A uma solução de 14-0-{ [ (1.R, 2.R, 4.R)-4-amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereó- mero (1S,2S, 4S) (900 mg, 1, 77 mmol), proveniente do Exemplo 1 Passo B, em 10 mL de diclorometano, foi adicionado acetaldeído (2,77 mL, a 1M em diclorometano) e ácido acético (77 pL, 1,77 mmol) e agitou-se durante 30 minutos à temperatura ambiente . A mistura reaccional resultante foi tratada com triacetoxiboro-hidreto de sódio (750 mg, 3,54 mmol) e agitou-se de um dia para o outro à temperatura ambiente, diluiu-se com diclorometano e subsequentemente extraiu-se com uma solução de NaHCC>3 e com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A fase orgânica foi secada sobre sulfato de sódio e filtrada. O filtrado foi sujeito a cromatografia (sílica, acetato de etilo/meta- 44 ΡΕ2137143 nol/solução de amoníaco a 35% = 50/50/1) para render 14-0-{[(1Rr2Rr 4R)-4-dietilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,2S,4S) (a) (92 mg, 9% de rendimento) e 14-0-{ [ (IR, 2.R, 4.R)-4-etilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (1S, 2S,4S) (b) (163 mg, 17% de rendimento) na forma de espumas amorfas incolores. (a) : RMN de 1H (400 MHz, DMS0-d6, δ, ppm, inter alia): 6,14 (dd, 1H, 19-H, J = 11 Hz e 18 Hz), 5,55 (d, 1H, 14-H, J = 8 Hz), 5,05 (m, 2H, 20-H) , 4,83 (d, 1H, 2'-OH, J = 4 Hz), 4,47 (d, 1H, 1-OH, J = 6 Hz), 3,42 (m, 1H, 11-H). Sistema-AB (vA = 3,50, 3,42, vB = 3,30, 3,27, 22-H, J = 152 Hz), 3,25 (m, 1H, 2'-H), 2,50 (m, 2H, l'-H, 4'-H), 2,40 (m, 5H, NCH2, 4-H) , 1,36 (s, 3H, 15-CH3) , 1,05 (s, 3H, I8-CH3), 0,92 (t, 6H, NCH2CH3, J = 7 Hz), 0,81 (d, 3H, 17-CHs, J = 7 Hz), 0,63 (d, 3H, I6-CH3, J = 7 Hz). MS-ESI (m/z) : 564 (MH+) , 586 (MNa+) , 562 (M-H)_. (b) : RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, δ, ppm, inter alia) : 6,13 (dd, 1H, 19 -H, J = 11 Hz e 18 Hz), 5, 54 (d, 1H, 14-H, J = 8 Hz), 5,05 (m, 2H, 20-H) , 4,48 (d, , 1H , 11-OH, J = 6 Hz) , 3,42 (m, 1H, 11- H) . Sistema- AB (vA = 3,48, vB = 3,25, 22-H, J = 15 Hz) , 2, 55 (m, 2H, 1 ’-H, 4'- H) , 2,40 (bs, 1H, 4 -H) , 1,35 (s, . 3H , 15-CH3), 1,05 (s, 3H, I8-CH3) , 0, 95 (t, 3H, NCH2CH3, J = 7 Hz) , 0, 81 (d, 3H, 17-CH, J = 7 ' Hz) , 0,63 (d, 3H, 16- ch3, J = 6 Hz) . MS-ESI (m/z) : 536 (MH+) , 558 (MNa+) , 534 (M-H) . 45 ΡΕ2137143
Exemplo 7 - Cloridrato de 14-0-{[(IA,2R,5S)-5-Etilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + cloridrato do diastereómero (IS,2S,5R).
Passo A. Éster terc-butilico do ácido N-Etil-N-(ciclo-hex-3-enil)-carbâmico. A uma solução de éster terc-butílico do ácido ciclo-hex-3-enil-carbâmico (Kapferer, P.; Vasella, A. Helvetica Chimica Acta 2004, 87, 2764-2789) (4,34 g, 22 mmol) em 20 mL de DMSO, foi adicionado hidreto de sódio (880 mg, dispersão a 60%, 22 mmol) e, após uma hora de agitação, iodeto de etilo (1,78 mL, 22 mol) . Após agitação adicional durante 2 horas à temperatura ambiente, a mistura reaccional foi concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi diluído com água e com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio e extraído três vezes com acetato de etilo. As fases orgânicas foram secadas sobre sulfato de sódio e filtradas. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida e, após cromatografia (sílica, ciclo-hexano/ace- tato de etilo = 12/1) , foi obtido o composto do título (Rf = 0,30, 2,88 g, 58% de rendimento) na forma de um sólido incolor. RMN de ^ (4 00 MHz, CDC13, δ, ppm) : 5,61 ( (m, 2H, dupla ligação) , 4,08 (bs, 1H, NCH) , 3,15 (m, 2H, NCH2), 2,15, 1,75 (2m, 6H) , 1,47 (s, 9H, terc-butilo) , 1,13 (t, 3H, nch2ch3, J = 7 Hz). 46 ΡΕ2137143
Passo B. Éster terc-butilico do ácido N-etil-N-(cis-3,4-epoxi-ciclo-hexil)-carbâmico.
Dissolveu-se éster terc-butilico do ácido N-Etil-N-(ciclo-hex-3-enil)-carbâmico (2,87 g, 12,7 mmol) em 75 mL de diclorometano e tratou-se com ácido 3-cloroperbenzóico (4,50 g, 70%, 19 mmol). Após agitação à temperatura ambiente durante 20 horas, a mistura reaccional foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi diluído com acetato de etilo e subsequentemente extraído com uma solução a 10% de NaHSC>3, com uma solução saturada de NaHCC>3 e com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A fase orgânica foi secada sobre sulfato de sódio e filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida e, após cromatografia (sílica, ciclo-hexano/dioxano = 5/1) foi obtido o composto do título (Rf = 0,2, 1,50 g, 49% de rendimento). RMN de XH (400 MHz, CDC13, δ, ppm) : 4,0 (bs, 1H, NCH) , 3,14 (m, 2H, NCH2) , 3,06 (bs, 2H, epóxido) , 2, 13, 2,08, 1, 88, 1, 60, 1,36 (4m, 6H) , 1,47 (s, 9H, terc-butilo) , 0,08 (t, 3H, NCH2CH3) .
Passo C. 14-0-{[(1.R,2R,5S)-5-(terc-Butoxicarbo-nil-etil-amino)-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,2S,5R).
Tratou-se éster terc-butílico do ácido N-Etil-N-(cis-3,4-epoxi-ciclo-hexil)-carbâmico (1,5 g, 6,2 mmol) com pleuromutilina tiol, de acordo com o método do Exemplo 1 47 ΡΕ2137143
Passo AI. Após processamento e cromatografia da mistura reaccional (sílica, ciclo-hexano/dioxano = 3/1) foi obtido 14-0-([{1R,2R,5S)-5-(terc-butoxicarbonil-etil-amino)-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastere-ómero (lS,2S,5í?) (Rf = 0,4, 2,57 g, 65% de rendimento) na forma de uma espuma amorfa incolor. MS-ESI {m/z) : 536 (MH+) , 558 (MNa+) , 534 (Μ-ΗΓ.
Passo D. 14-0-{[(IR,2R,5S)-5-Etilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (1S,2S,5R) .
Tratou-se 14-0-{[(lR,2R,5S)-5-(terc-Butoxicar-bonil-etil-amino)-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (1S,2S,5R) (2,57 g, 4,04 mmol) de acordo com o método do Exemplo 1 Passo B. Após processamento e cromatografia da mistura reaccional (sílica, acetato de etilo/metanol/solução de amoníaco a 35% = 100/100/1), foi obtido 14-0-([(IR,2R,5S)-5-etilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS, 2S, 5R) (Rf = 0,3, 1,08 g, 50%) na forma de uma espuma amorfa incolor. RMN de 1H (500 MHz, CDCI3, δ, ppm, ínter alia) : 6,48 (dd, 1H, 19- -H, J = 10 Hz e 18 Hz) , 5 ,77 (m, 1H, 14 -H) , 5, 36 (m, 1H, 20 -H) f 5, 22 (d, 1H, 20-H, J = 17 Hz), 3,45 (d, 1H, 2 ' -H ) , 3, 37 (d, 1H, 11-H , J = 6 Hz) , 3,25 (m, 1H, 22 -H) , 2, 97 (m, 1H, , i’- H) , 2,91 (m, 1H , 5'-H) , 2, 63 (q, 2H, NCH2, J = 7 Hz) 1 , 2, 10 (bs , 1H, 4-H) , 1,46 ( s, 3H, 15- -ch3) , 1,18 48 ΡΕ2137143 (s, 3H, I8-CH3), 1,12 (t, 3H, NCH2CH3, J = 7 Hz), 0,98 (d, 3H, I7-CH3, J = 7 Hz), 0,73 (d, 3H, I6-CH3, J = 7 Hz).
Passo E. Cloridrato de 14-0-{[(IR,2R,5S)-5-Etilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + cloridrato do diastereómero (IS,2S,5R).
Tratou-se 14-0-{[{IR,2R,5S)-5-Etilamino-2-hidro-xi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS, 2Sf 5R) (86 mg, 0,16 mmol) de acordo com o método do Exemplo 1 Passo C para se obter cloridrato de 14-0-{[(1R,2R,5S)-5-etilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + cloridrato do diastereómero (1S,2S,5R) (83 mg, 90% de rendimento) na forma de um sólido amorfo incolor. RMN de 1H (400 MHz , CDCI3, δ, ppm, inter alia) : 9,3 (bs, 2H, NH2+) , 6, 45 (m, 1H, 19-H), 5, 73 (d, 1H, 14-H, J = 10 Hz), 5, 35 (m, 1H, 20-H), 5,22 (d, 1H, 22-H, J = 18 H) , 3, 85 (m, 1H, 2' ’-H) , 3,33 (m, 3H, 11-H, 22- -H) , 3,07 (m, 2H, NCH2) , 2 ,10 (bs , 1H, 4-H), 1,50 (t, 3H, NCH2CH3, J = 7 Hz), 1, 45 (s, 3H, I5-CH3) , 1,18 (s, 3H, I8-CH3) , 0, 90 (d, 3H, 17- ch3, J = 7 Hz), 0, 73 (d, 3H, I6-CH3, J = 7 Hz) . MS-ESI (m/z) : 536 (MH+) , 570 (MCI-) .
Exemplo 8 - Cloridrato de 14-0-( [ (1.R, 2.R, 5S)-5-
Dietilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + cloridrato do diastereómero (IS,2S,5R). 49 ΡΕ2137143
Passo A. 14-0-{ [ (1.R, 2R, 5S) -5-Dietilamino-2-hi-droxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS, 2Sf 5R) .
Tratou-se 14-0-{[(IR,2R,5S)-5-Etilamino-2-hidro-xi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,2S,5R) (250 mg, 0,47 mmol), proveniente do Exemplo 7 Passo D, com acetaldeido (53 pL, 0,93 mmol) de acordo com o método do Exemplo 6. Após processamento e cromatografia da mistura reaccional (sílica, acetato de etilo/metanol = 1/1) foi obtido 14-0-{ [ (IR, 2.R, 5S)-5-dietilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (1S,2S,5R) (Rf = 0,2, 230 mg, 87%) na forma de uma espuma amorfa incolor. RMN de 1H (4 00 MHz, CDC1 3 r δ, ppm, r inter alia) : 6, 4 8 (dd, 1H, 19-H, J = = 11 Hz e 17 Hz) , 5, 77 (d, 1H, 14-H, J = 8 Hz) , 5,36 (m, 1H, 2 0-H), 5, 22 (d, 1H, 20-H, J = 17 Hz) , 3,57, 3,36 , 3,2 1, 3, 03, 2,72 (5m, 6H, 1'-H, 2 ’-H, 5 ’-H, 11-H, 22-H) , 2,59 (m, 4H, NCH2) , 2,11 (bs, 1H, 4-H) , 1,46 (s, 3H,
I5-CH3) , 1,18 (s, 3H, I8-CH3), 0,98 (t, 6H, NCH2CH3 J = 7 Hz) , 0,88 (d, 3H, I7-CH3, J = 7 Hz) , 0,73 (d, 3H 16-CH3, J = 7 Hz) .
Passo B. Cloridrato de 14-0-{[{IR,2R,5S)-5-Dietilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + cloridrato do diastereómero (IS, 2S, 5J?) .
Tratou-se 14-0-{[(IR,2R, 5S)-5-Dietilamino-2-hi-droxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero 50 ΡΕ2137143 (IS, 2S, 5R) (230 mg, 0,41 mmol) de acordo com o método do Exemplo 1 Passo C para se obter cloridrato de 14-0-{[(1R,2R,5S)-5-dietilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + cloridrato do diastereómero {1S,2S,5R) (223 mg, 91% de rendimento) na forma de um sólido amorfo incolor. RMN de ^ ( ;400 MHz , CDCI3, δ, ppm , inter alia): \—1 \—1 5 (bs, 3H, NH+) , 6, ,46 (dd, 1H, 19- -H, J = 11 Hz e 17 Hz) 1 , 5 / , 74 (d, 1H, 14-H, J = 8 Hz) , 5, 34 (m, 1H, 20-H), 5, 22 (d , 1H, , 22-H, J = 17 H) , 3, 98 (m, 1H, 2’- H) , 3,60-2,90 (m, 9H, 1 '-H, 1 LO 11-H, 22- -H, nch2) 1, 2 ,10 (bs , 1H, 4-H) , 1, 48 1 (m, 9H, NCH2CH3, 15- ch3) , 1, 18 1 (s, 3H, I8-CH3), 0 ,89 ( d, 3H, 17- ch3, J = 7 Hz) , 0,73 (d, 3H, 16- -ch3 , J = = 7 Hz) φ MS-ESI [m/z) : 564 (MH+) , 586 (MNa+) , 1149 (2MNa+) , 598 (MCI-) .
Exemplo 9 - 14-0-{ [ (IR, 2.R, 4S)-4-Dietilamino-2- hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mitilina + diastereómero (IS, 2S, AR).
Tratou-se 14-0-{[(IR,2R,AS)-4-Amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS, 2S,AR) (680 mg, 1,34 mmol), proveniente do Exemplo 2 Passo A, de acordo com o método do Exemplo 6. Após processamento e cromatografia da mistura reaccional (sílica, acetato de etilo/metanol = 1/1), foi obtido 14-0-{ [ (IR, 2R, 4S)-4-dietilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (1S,2S,4R) (Rf = 0,2, 129 mg, 17%), na forma de uma espuma amorfa incolor. 51 ΡΕ2137143 RMN de XH (500 MHz, DMSO-d6, δ, ppm, inter alia): 6,13 (dd, 1H , 19· -H, J = 11 Hz e 18 Hz) , 5, 54 (d, 1H, 14 -H, J = 8 Hz) , 5, 05 l [m, 2H, 20 -H) , 4, 70 (d, 1H v 2’ -oh; ) , 4, 49 ( :d, 1H, 11 -OH, J = 6 Hz) , 3, 70 (m, 1H, 2 ' ’-H) , 3,- 42 (t. , 1H, , 11-H, J = 6 H. z) , sis tema- -AB (vA = 3 ,36, vB = 2 5, 22, 22-H, J = 15 Hz ) , 2 ,72 (m, 2H , 1’ -H, 4 ’ -H) , 2,4 7 (m, 2H, NCH2) , 2, 40 ( :bs, 1H, , 4- -H) , 1, 35 (s, 3H, , 15- -ch3 ) , 1, 04 ( Is, 3H, 18 -ch3) f 0, 95 (t , 3H , ] NCH2CH3, J = 7 Hz ) , 0, 81 ( !d, 3H, 17 -ch3; . J = 7 Hz) , 0, 62 (d, 3H, 16- ch3, J = 7 Hz) 1 # MS -ESI {m/z) : 536 (MH' f), 558 (MNa+) , 534 : (M- -H)
Exemplo 10 - 14-0-( [ (1Λ, 2R, 5R) -5-Dietilamino-2- hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereó-mero (IS, 2S, 5S) .
Tratou-se 14-0- { [ (IR, 2R, 5R) -5-Amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS, 2S,5S) (420 mg, 0,827 mmol), proveniente do Exemplo 4 Passo F, de acordo com o método do Exemplo 6. Após processamento e cromatografia da mistura reaccional (sílica, acetato de etilo/metanol/solução de amoníaco a 35% = 50/50/1), foi obtido 14-0-([(1R,2R,5R)-5-dietilamino-2-hidroxi-ciclo- hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,2S,5S) (Rf = 0,2, 95 mg, 20%) na forma de uma espuma amorfa incolor. RMN de 1H (400 MHz, DMS0-d6, δ, ppm, inter alia): 6,13 (dd, 1H, 19-H, J = 11 Hz e 18 Hz), 5,55 (d, 1H, 14-H, J = 8 Hz) , 5,05 (m, 2H, 20-H) , 4,79 (m, 1H, 2’-OH), 3,55-3,15 (m, 2 ’ -H, 5 ’ -Η, 11-H, 22-H) , 2,58 (m, 1H, l'-H), 2,40 (m, 5H, 52 ΡΕ2137143 NCH2, 4-H) , 1,37 (s, 3H, 15-CH3) , 1,06 (s, 3H, 18-CH3), 0,92 (t, 3H, NCH2CH3, J = 7 Hz), 0,83 (d, 3H, 17-CH3, J = 7 Hz), 0,63 (d, 3H, I6-CH3, J = 7 Hz) . MS-ESI (m/z) : 564 (MH+) , 586 (MNa+) , 562 (M-H)”, 598 (MCI-) .
Exemplo 11 - 14-0-{[(1.R,2R,3R)-3-Etilamino-2-hi-droxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (1S,2S,3S) .
Passo A. Éster terc-butilico do ácido [(1R,2R, 3R)-2-Hidroxi-3-(2,4,6-trimetil-benzilsulfanil)-ciclo-hexil]-carbâmico + diastereómero (IS,2S,3S). A uma solução de éter terc-butilico do ácido (cis)-2,3-epoxi-ciclo-hexil-carbâmico (0'Brien, P.; Childs, A., C.; Ensor, G. Organic Letters 2003, 5(26), 4955-4957.) (14,9 g, 68,9 mmol) e mercaptano de 2,4,6-trimetilbenzilo (11,5 g, 68,9 mmol) em 50 mL de metanol, foi adicionado
NaOH a 10N (5 mL, 50 mmol) e a mistura resultante foi agitada durante 16 horas à temperatura ambiente. A mistura reaccional foi diluída com água e com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio e extraída três vezes com acetato de etilo. As fases orgânicas foram secadas sobre sulfato de sódio e filtradas. O filtrado foi sujeito a cromatografia (sílica, ciclo-hexano/acetato de etilo = 5/1) para render éster terc-butílico do ácido [(IR,2R, 3R)-2-hidroxi-3-(2,4,6-trimetil-benzilsulfanil)-ciclo-hexil]-carbâmico + diastereómero (IS, 2S, 3S) (Rf = 0, 25, 5, 92 g, 23% de rendimento) na forma de uma espuma amorfa incolor. 53 ΡΕ2137143 RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, δ, ppm) : 6,78 (s, 2H, aromático-H) , 6,15 (bd, OH), 4,95 (bd, NH) , 3,75 (d, 1H, SCH2), 3,68 (m, 2H) , 3,02 (m, 1H, SCH) , 2,30 (s, 9H, CH3) , 2,30, 1,90, 1,40 (3m, 6H), 1,35 (s, 9H, terc-butilo).
Passo B. Éster terc-butilico do ácido [(IR, 2R, 3R)-2-(terc-Butil-dimetil-silaniloxi)-3-(2,4,6-trimetil-benzilsulfanil)-ciclo-hexil]-carbâmico + diastereómero (15, 25, 35) .
Uma solução de éster terc-butílico do ácido [(IR,2R, 3R)-2-hidroxi-3-(2,4,6-trimetil-benzilsulfanil)-ciclo-hexil]-carbâmico + diastereómero (IS,2S,3S) (2,46 g, 6,49 mmol) em 50 mL de dimetilformamida, foi tratada com cloreto de terc-butildimetilsililo (978 mg, 6,49 mmol) e imidazole (552 mg, 8,11 mmol) e foi a 80°C durante 5 dias. A mistura reaccional foi concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi diluído com HC1 a 0,IN e extraído três vezes com acetato de etilo. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secadas sobre sulfato de sódio e filtradas. Após cromatografia (sílica, ciclo-hexano/acetato de etilo = 10/1) foi obtido éster terc-butílico do ácido [(1R,2R,3R)~ 2-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-3-(2,4, 6-trimetil-benzilsulf anil)-ciclo-hexil]-carbâmico + diastereómero (IS,2S,3S) (Rf = 0,25, 3,0 g, 94% de rendimento). RMN de 1H (500 MHz, DMSO-d6, δ, ppm): 6,80 (s, 2H, aromático-H), 6,20 (bd, NH), 3,90, 3,75, 3,63 (3m, 4H, NCH, OCH, SCH2) , 2,98 (m, 1H, SCH), 2,30 (s, 9H, CH3) , 1,90, 54 ΡΕ2137143 1,50, 1,33 (3m, 6H), 1,35 (s, 9H, C-terc-butilo) , 0,85 (s, 9H, Si-terc-butilo) , 0,0 (s, 6H, Si(CH3)2).
Passo C. Éster terc-butílico do ácido [(IR,2R, 3R)-2-(terc-Butil-dimetil-silaniloxi)-3-(2,4,6-trimetil-benzilsulfanil)-ciclo-hexil]-etil-carbâmico + diastereómero (1S,2S,3S) .
Uma solução de éster terc-butílico do ácido [(1R,2R,3R)-2-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-3-(2,4,6-trimetil-benzilsulfanil)-ciclo-hexil]-carbâmico + diastereómero (IS, 2S, 3S) (3,0 g, 6,08 mmol) , foi tratada com iodeto de etilo de acordo com o método do Exemplo 7 Passo A. Após processamento e cromatografia da mistura reaccional (sílica, ciclo-hexano/acetato de etilo = 3/1), foi obtido éster terc-butílico do ácido [(IR,2R, 3R)-2-(terc-butil-dimetil-silaniloxi )-3-(2,4,6-trimetil-benzilsulfanil) -ciclo-hexil]-etil-carbâmico + diastereómero (IS,2S,3S) (1,20 g, 38%). MS-ESI (m/z) : 544 (MNa+) , 1065 (2MNa+) .
Passo D. Éster terc-butilico do ácido [(IR,2R, 3R)-2-(terc-Butil-dimetil-silaniloxi)-3-mercapto-ciclo-hexil]-etil-carbâmico + diastereómero (IS,2S,3S).
Uma solução de éster terc-butílico do ácido [(lR,2R,3R)-2-(terc-butil-dimetil-silaniloxi )-3-(2,4,6-trimetil-benzilsulfanil)-ciclo-hexil]-etil-carbâmico + diastereómero (1S,2S,3S) (1,20 g, 2,30 mmol) em 10 mL de 55 ΡΕ2137143 tetra-hidrofurano e 20 mL de amoníaco líquido, foi tratada a -78°C sob uma atmosfera de árgon com sódio (106 mg, 4,60 mmol) e foi agitada a -78°C durante uma hora. Então, foi-lhe adicionado cloreto de amónio sólido e a mistura reaccional foi amornada até à temperatura ambiente, diluída com tetra-hidrofurano e lavada com um jacto de azoto. A mistura residual foi filtrada e concentrada sob pressão reduzida para render éster terc-butílico do ácido [(1R,2R,3R)-2-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-3-mercapto-ciclo-hexil]-etil-carbâmico + diastereómero (IS,2S,3S) (rendimento quantitativo) em bruto, que foi utilizado directamente para o passo seguinte. MS-ESI (m/z) : 412 (MNa+) , 801 (2MNa+) .
Passo E. 1,4-0-{ [ (1.R, 2R, 3R) -3- (terc-Butoxicar-bonil-etil-amino)-2-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,2S,3S).
Dissolveu-se éster terc-butílico do ácido [{IR,2R,3R)-2-{terc-butil-dimetil-silaniloxi)-3-mercapto-ciclo-hexil]-etil-carbâmico + diastereómero (IS,2S,3S) (895 mg, 2,30 mmol), em bruto, em 30 mL de tetra-hidrofurano e tratou-se subsequentemente com tosilato de pleuromutilina (979 mg, 1,84 mmol) e terc-butóxido de potássio (206 mg, 1,84 mmol) e a mistura resultante foi agitada durante 16 horas à temperatura ambiente. Após evaporação do solvente, o resíduo foi diluído com HC1 a IN e extraído três vezes com acetato de etilo. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com uma solução de 56 ΡΕ2137143
NaHC03 e com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secadas sobre sulfato de sódio e filtradas. Após cromatografia (sílica, ciclo-hexano/acetato de etilo 10/1), foi obtido 14-0-{[(IR,2R,3R)-3-(terc-butoxicarbonil-etil-amino)-2-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,2S,3S) (Rf = 0,5, 468 mg, 27% de rendimento). RMN de ^ (400 MHz, DMSO-de, δ, ppm, inter alia): 6 \—1 (dd 1H, 19- -H, J = 11 Hz e 18 Hz), 5,55 ( d, 1H, 14-H, J = 8 Hz) 5, 05 ( m, 2H, 20-H), 4,49 (m, 1H, 11-OH), 3,94 (m, 1H 2'-H), 3,43 ( t, 1H, 11-H, J = 6 Hz ), 3,28, 3,04 (2m, 5H 1 ' -H, 22-H, NCH2), 2,40 (bs, 1H, 4-H), 1,40 (s, 9H terc-butilo) , 1,36, 1,35 (2s, 3H, I5-NCH3) , 1,05 (s, 3H I8-CH3) , 0,87 (s; 9H, Si-terc-butilo) , 0,81 (d, 3H, 17- -ch3 J = 7 Hz), 0, 64, 0, 62 (2d, 3H, I6-CH3, J = 7 Hz) 0,05, 0,05 (2s, 6H, Si (CH3) 2) ·
Passo F. 14-0-{[(1Λ,2R,3R)-3-Etilamino-2-(terc-butil-dimetil-silaniloxi) -ciclo-hexilsuffanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,2S,3S) e 14-0-{[(IR,2R,3R)-3-Etilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil}-acetil}-mutilina + diastereómero (IS, 2S, 3S) .
Tratou-se 14-0-{((IR,2R, 3R)-3-(terc-Butoxicar-bonil-etil-amino)-2-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-ciclo-hexilsulfanil)-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,2S,3S) (468 mg, 0, 624 mmol) com ácido trifluoroacético de um dia para o outro, de acordo com o método do Exemplo 1 Passo B. Após processamento e cromatografia da mistura reaccional (sílica, acetato de etilo/metanol = 1/2) foram obtidos 14- 57 ΡΕ2137143 Ο-{[(IR,2R,3R)-3-etilamino-2-(terc-butil-dimetil-silanilo-xi)-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (15,2S, 3S) (a) (Rf = 0,6, 144 mg, 36% de rendimento) e 14- 0-{[(IR,2R,3R)-3-etilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (1S,2S,3S) (b) (Rf = 0,25, 177 mg, 53% de rendimento) na forma de sólidos incolores. (a): MS-ESI (m/z) : 672 (MNa+) , 1321 (2MNa+) . (b) : RMN de XH (400 MHz, DMSO-d6, δ, ppm, inter al ia) : 6,14 (dd, 1H, 19- -H, J = 11 Hz e 18 Hz), 5, 54 (d, 1H 14 -H, J = 8 Hz) / 5, 05 (m, 2H, 20-H ), 4,76 (m , 1H, 2’- OH) 4, 49, 4,48 (2d, 1H, 11- •OH, J = 6 Hz) , 3, 55 (m, 1H / 2’ -H) 3, 42 (t, 1H, 1 . 1-H, J = 6 Hz) , sistema-AB (vA = 3 ,37 vB = 3 ,18, 22-H, J = = 15 Hz ) , 3, 05 (m, 1H, 3'· -H) , 2, 66 (m 1H , i' -H) , 2,50 (m, 2H, NCH2) , 2, 40 (bs, 1H, 4 -H) , 1, 36 (s 3H , 15-CH3 ) , 1/ 05 ( s, 3H, 18 -CH3) , 0,98 (t, 3H, NCH2CH3 J = 7 Hz) , 0, 81 (d, 3H , 17-CHs, J = 7 Hz), 0, 62 (d, 3H 16 -ch3 , J = = 7 Hz ) · MS -ESI {m/z) : 53 6 S (MH+) 1 , 558 (MNa+) , 1071 (2MH+) 1093 (2MNa+) , 534 (M-H)-.
Exemplo 12 - 14-0-{ [ (1.R, 2.R, 3.R)-3-Dietilamino-2- hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS, 2S, 3S) .
Passo A. 14-0-{ [ (1.R, 2.R, 3.R)-3-Dietilamino)-2-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,2S,3S). 58 ΡΕ2137143
Tratou-se 14-0-{[{IR,2R,3R)-3-Etilamino-2-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (15,25,35) (144 mg, 0,222 mmol), proveniente do Exemplo 11 Passo F, com acetaldeido (25 pL, 0, 444 mmol) de acordo com o método do Exemplo 6. Após processamento e cromatografia da mistura reaccional (sílica, acetato de etilo/metanol = 2/1), foram obtidos 14-0-{[(1R,2R,3R)-3-dietilamino)-2-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (15,25,35) (Rf = 0,5, 110 mg, 73%), na forma de uma espuma amorfa incolor. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-de, δ, ppm, inter alia): 6,14 (dd 1H, 19-H, J = 11 Hz e 18 Hz), . 5,53 (d, 1H, 14· -H, J = 7 Hz), 5, 05 (m, 2H, 2 0-H ) , 4,98 (m, 1H, 11-OH), 3,97 (m, 1H 2 ' -H ), 3,42 (t, 1H, , 11-H, J = 6 Hz), 3,24 ( m, 2H, H-22) 3, 00 (m, 1H, 1'-H), 2, 70 (m, 1H, 3'-H), 2,55 (m, 4H, NCH2) 2,40 (bs, ih, 4-h; 1 , 1,36 ( s, 3H, I5-CH3) , 1,05 (s, 3H 18-CH3), 0,87 (m, 15H , NCH2CH3, Si-terc-butilo) , 0,81 (d 3H, I7-CH3, J = 7 Hz) , 0, 62, 0, 60 (2d, 3H, I6-CH3 J = 7 Hz), 0,07 (s, 6H, Si(CH3)2).
Passo B. 14-0-{[(IR, 2R, 3R)-3-Dietilamino-2-hi-droxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (15, 25, 35) . A uma solução de 14-0-{[(IR,2R,3R)-3-dietilamino-2-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (15,25,35) (101 mg, 59 ΡΕ2137143 0,149 mmol) em 5 mL de tetra-hidrofurano, foi adicionado fluoreto de tetrabutilamónio (0,44 mL, a 1 M em tetra-hidrofurano, 0,447 mmol). Após agitação à temperatura ambiente durante 2 dias, a mistura reaccional foi concentrada sob pressão reduzida, diluída com uma solução de NaHC03 e extraída duas vezes com acetato de etilo. As fases orgânicas combinadas foram secadas sobre sulfato de sódio e filtradas. O filtrado foi sujeito a cromatografia (sílica, acetato de etilo/metanol = 1/2) para se obter 14-0- {[(IR,2R,3R)-3-dietilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (1S,2S,3S) (Rf = 0,2, 8 mg, 10% de rendimento) , na forma de uma espuma amorfa incolor. RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO-de, δ, ppm, inter alia): 6,15, \—1 :2dd, 1H, 19-H, J = 11 Hz e 18 Hz), 5, 54 (d, 1H co II 1~D Hz) , 5, 05 (m, 2H, 20- -H) , 4,99, 4,42 (2m, 2H, 2'-OH), 3,87 (m, 1-H, 2'-H), 3,42 (t, 1H, 11H, J = 6 Hz), 3,25 (m, 2H, H-22), 3,05 (m, 1H, l'-H), 2,60 (m, 3H, 3'-H, NCH2), 2,40 (bs, 1H, 4-H) , 1,35 (s, 3H, 15-CH3) , 1,05 (s, 3H, 18-CH3), 0,90 (m, 6H, NCH2CH3) , 0,81 (d, 3H, 17-CH3, J = 7 Hz) , 0, 62, 0, 61 (2d, 3H, 16-CH3, J = 7 Hz) . MS-ES1 (m/z): 564 (MH+) , 58 6 (MNa+) , 1149 (2MNa+) , 562 (M-H)".
Exemplo 13 - 14-0-{[(1£,2R,4S)-4-(Formil-hidroxi-amino)-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,2S,4.R) . 60 ΡΕ2137143
Passo AI. 14-0-{ [ (7.R, 8R) -7-Hidroxi-l, 4-dioxa-es piro [4 . 5] dec-8-ilsulfanil] -acetil}-mutilina + diastereómero (7S, 8S) .
Tratou-se 7,8-Epoxi-l,4-dioxa-espiro[4.5]decano (Zhang, L.; Koreeda, M. Organic Letters 2002, 4(21), 3755-3758.) (6, 25 g, 40 mmol) e pleuromutilina tiol (8 g, 20 mmol) de acordo com o método do Exemplo 1 Passo A2. Após processamento e cromatografia da mistura reaccional (sílica, ciclo-hexano/acetato de etilo = 1/1), foi obtido 14-0-{[(7R,8R)-7-hidroxi-l,4-dioxa-espiro[4.5]dec-8-ilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (7S, 8S) (Rf = 0,3, 8,40 g, 76% de rendimento), na forma de uma espuma amorfa incolor. RMN de XH (500 MHz, DMSO- -d6, δ, ppm, inter alia): 6, 14 (dd, 1H, 19-H, J = 11 Hz e 18 Hz) , 5,55 (d, 1H, 14-H, J = 8 Hz) , 5, 05 (m, 2H, 2 0-H), 4, 95 (d, 1H, 2'-OH, J : = 6 Hz) , 4,50 (d, 1H, 11-OH, J = 6 Hz), 3,82 (m, 4H, 0CH2CH20) , 3, 55-3, 25 (m, 4H, 2 ’ -H, 11 -Η, H -22) , 2,58 (m, 1H, . 1’-H) , 2,40 (bs, 1H, 4-H) , 1,35, 1,34 (2 s, 3H, 15 -ch3) , 1,05 i (s, 3H, 18- CH3) , 0, 81 (d, 3H, , 17- ch3, J = 7 Hz) , 0, 62 (d, 3H, 16 -CH3, J = 7 Hz) . MS-ESI (m/z) : 573 (MNa+ ) , 549 (M-H)”. ou Passo A2 . 14-0-{[(7Λ,8R)-7-Hidroxi-l,4-dioxa- espiro [4.5]dec-8-ilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (7S, 8S) e 14-0-{ [ (7.R, 8.R)-8-Hidroxi-l, 4-dioxa-espiro-[4.5]dec-7-ilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (7S,8S) . 61 ΡΕ2137143
Trataram-se 7,8-Epoxi-l,4-dioxa-espiro[4.5]decano (6,24 g, 39,95 mmol) e pleuromutilina tiol (16,4 g, 41,7 mmol) de acordo com o método do Exemplo 1 Passo A3. Após processamento e cromatografia da mistura reaccional (silica, acetato de etilo/tolueno = 1/1), foi obtida uma mistura de 14-0-{ [ (7R, 8.R)-7-hidroxi-l, 4-dioxa-espiro [ 4.5] -dec-8-ilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (7S,8S) bem como 14-0-{ [(7R, 8R)-8-hidroxi-l,4-dioxa-espiro[4.5]dec-7-ilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (75, 85) (Rf = 0,24, 4,40 g, 20% de rendimento ) , na forma de um sólido incolor. RMN de ^ (500 MHz, DMSO-dg, δ, ppm, inter alia) : 6,14, 6,12 (2dd, 1H, 19-H, J = 11 Hz e 18 Hz), 5, 55, 5, 53 (2d, 1H, 14 -H, J = 8 Hz) , 5, 05 (m, 2H , 20· -H) , 4,95, 4,87 (d+dd, 1H, 2 ’ -OH , J = 6 Hz) , 4,50 , 4,49 (2 d, 1H, 11-OH, J = 6 Hz) , 3, 83 (m, 4H, OCH2CH2O), 3,55-3 , 25 (m, 4H, 2'-H, 11-H, H-22) , 2, 77, 2 ,57 (2m , 1H, l'-H), 2,4 0 (bs, 1H, 4-H), . 1,36, 1,36 ( 2s, 3H, I5-CH3) , 1, 05 (s, 3H, I8-CH3), 0,81 ( d, 3H, 17-NCH3, J = 7 Hz), 0,62 (d, 3H, I6-CH3, J = 7 Hz) .
MS-ESI (m/z) : 573 (MNa+) , 549 (M-H)A
Passo B. 14-0-{ [ (7.R, 8R) -7- (terc-Butil-difenil-silaniloxi)-1,4-dioxa-espiro[4.5]dec—8—ilsulfanil]—acetil}— mutilina + diastereómero (7S,8S).
Uma solução de 14-0-{ [ (7.R, 8.R)-7-hidroxi-l, 4-dioxa-espiro[4.5]dec-8-ilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (7S,8S) (8,4 g, 15,3 mmol), proveniente do Passo
Al, em 50 mL de dimetilformamida, foi tratada com cloreto 62 ΡΕ2137143 de terc-butildifenilsililo (5,16 mL, 19,8 mmol) e imidazole (1,66 g, 24,4 mmol) e agitou-se de um dia para o outro a 80°C. A mistura reaccional foi concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi diluído com água e com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio e extraído três vezes com acetato de etilo. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com água e com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secadas sobre sulfato de sódio e filtradas. Após cromatografia (sílica, ciclo-hexano/acetato de etilo = 1/1), foi obtido 14-0-{[(IR, 8R)-Ί-(terc-butildif enil-silaniloxi)-1,4-dioxa-espiro[4.5]dec-8-ilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (7S, 8S) (Rf = 0,7, 8,03 g, 67% de rendimento). RMN de 1H (400 MHz, DMSO-ds, δ, ppm, inter alia) : 7,7-7,35 (m, 10H, aromático-H), 6,15, 6,13 (2dd, 1H, 19-H, J = 11 Hz e 18 Hz ), 5,57, 5,53 (2 d, 1H , 14-H, J = 7 Hz ), 5, 05 (m, 2H, 20-h; > , 4,50 (m, 1H, 11-OH), 3,30 (m, 1H , 2 ' -H) , 3, 70- 2,80 (m, 8H, och2ch2o, 1 '-H, 11- Η, 22-H), 2, 40 (bs, 1H, , 4 -H) , 1,39, , 1 ,36 (2s, 3H, I5-CH3) , 1,05 (s, 3H, 18- -CH3) , 1, 00 (s, 9H, Si-terc-butilo) , 0,81 (d, 3H, 17-CH3, J = 7 Hz), 0,62, 0,60 (2d, 3H, 16-CH3, J = 7 Hz) . MS-ESI (m/z) : 811 (MNa+) .
Passo C. 14-0-{[(lRr2R)-2-(terc-Butil-difenil-silaniloxi)-4-oxo-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,2S).
Dissolveu-se 14-0-([{IR,8R)-7-(terc-Butil-dife-nil-silaniloxi)-l,4-dioxa-espiro[4.5]dec-8-ilsulfanil]- 63 ΡΕ2137143 acetil}-mutilina + diastereómero {1S,8S) (8,03 g, 10,2 mmol) em 100 mL de diclorometano e tratou-se com montmori-lonite K10 (10 g) durante 3 dias à temperatura ambiente.
Após filtração sobre Celite, a mistura reaccional foi concentrada sob pressão reduzida e sujeita a cromatografia (sílica, ciclo-hexano/acetato de etilo = 2/1) para render 14 — 1— { [ (1-R, 2R) -2- (terc-butildifenil-silaniloxi) -4-oxo-ci-clo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,2S) (Rf = 0,38, 5,24 g, 69% de rendimento). RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, δ, ppm, inter alia): 7,65-7,40 (m, 10H, aromático-H), 6, 15, 6, 13 (2dd, 1H, 19-H, J = 11 Hz e 18 Hz), 5,53 (d, 1H, 14-H, J = 7 Hz), 5,00 (m, 2H, 20-H), 4,47 (m, 1H, 11-OH), 4,24 (m, 1H, 2'-H), 3,41 (t, 1H, 11-H, J = 6 Hz), 3,20-3, 00 (m, 2H, 22-H) , 2,60 (m, 1H, l'-H), 2,40 (bs, 1H, 4-H) , 1,35, 1,33 (2s, 3H, 15-CH3) , 1,06 (s, 3H, 18-CH3) , 0,97 (s, 9H, Si-terc-butilo) , 0,81 (d, 3H, 17-CHs, J = 7 Hz), 0,58 (d, 3H, I6-CH3, J = 7 Hz) .
Passo D. 14-0-{[(IR,2R)-2-(terc-Butil-difenil-silaniloxi)-4-hidroxi-imino-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,2S). A uma solução de 14-0-{[(1-R, 2R)-2-(terc-butildifenil-silaniloxi )-4-oxo-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS, 2S) (2,50 g, 3,36 mmol) em 10 mL de dimetilformamida, foi adicionado cloridrato de hidroxilamina (233 mg, 3,36 mmol) e trietilamina (0,47 mL, 3,36 mmol) e agitou-se à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura reaccional foi concentrada sob 64 ΡΕ2137143 pressão reduzida, diluída com água e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio e extraída três vezes com acetato de etilo. As fases orgânicas combinadas foram lavadas duas vezes com água e secadas sobre sulfato de sódio e filtradas. 0 solvente foi removido sob pressão reduzida e foi obtido 14-0-{[(IR, 2R)-2-(terc-butil-difenil-silaniloxi)-4-hidroxi-imino-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,2S) (rendimento quantitativo, ciclo-hexano/acetato de etilo = 2/1, Rf = 0,25, 0, 35) em bruto, que foi utilizado para o passo seguinte sem purificação adicional.
Passo E. 14-0-{[(1R,2R,4S)-2-(terc-Butil-difenil-silaniloxi)-4-hidroxiamino-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS, 2S, 4.R) e 14-0-{ [ (IR, 2.R, 4.R)-2-(terc-butil-difenil-silaniloxi)-4-hidroxiamino-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,2S,4S) .
Dissolveu-se 14-0-{[{IR,2R)-2-{terc-Butil-dife-nil-silaniloxi)-4-hidroxi-imino-ciclo-hexilsulfanil]-ace-til}-mutilina + diastereómero (1S,2S) (2,55 g, 3,36 mmol) em 10 mL de ácido acético e tratou-se com cianoboro-hidreto de sódio (210 mg, 3,36 mmol) durante 90 minutos à temperatura ambiente. A mistura reaccional foi concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi diluído com uma solução de NaHC03 e extraído três vezes com acetato de etilo. As fases orgânicas combinadas foram secadas sobre sulfato de sódio e filtradas. 0 filtrado foi submetido a cromatografia (sílica, ciclo-hexano/acetato de etilo = 2/3) para render 14-0- 65 ΡΕ2137143 {[(lR,2R,4S)-2-(terc-butil-difenil-silaniloxi)-4-hidroxi-amino-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS, 2S, 4R) (a) (Rf = 0,5, 590 mg, 23% de rendimento) e 14- 0-{[(IR,2R,4R)-2-[terc-butil-difenilsilaniloxi)-4-hidroxi-amino-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS, 2S, 4S) (b) (Rf = 0, 3, 670 mg, 26% de rendimento) . (a) : RMN de 1H (4 00 MHz, DMSO-dõ, δ, ppm, inter alia): 7,6-7,35 (m, 10H, aromático-H), 6,93 (bs, 1H, NH/OH), 6,12, 6,08 (2dd, 1H, 19-H, J = 11 Hz e 18 Hz), 5,50 (m, 2H, 14-H, NH/OH), 5,00 (m, 2H, 20-H) , 4,47 (m, 1H, 11-OH), 3,95 (m, 1H, 2'-H), 3,40 (t, 1H, 11-H, J = 6 Hz), 3,10-2,60 (m, 4H, l'-H, 4'-H, 22-H) , 2,40 (bs, 1H, 4-H) , 1,31, 1,30 (2s, 3H, 15-CH3) , 1,00 (s, 12H, I8-CH3,
Si-terc-butilo), 0,81 (d, 3H, I7-CH3, J = 7 Hz), 0,55 (d, 3H, 16-CH3, J = 7 Hz) . (b) : RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, δ, ppm, inter alia): 7,7-7,35 (m, 10H, aromático-H), 6,85 (s, 1H, NH/OH), 6,16, 6, 04 (2dd, 1H, 19-H, J = 11 Hz e 18 Hz) , 5, 55 (m, 2H, 14-H, NH/OH), 5, 05 (m, 2H, , 20-H), 4,49 (d, 1H, 11- OH, J = 6 Hz) , 3,55 (ni/ 1H, 2’-H), 3,42 (t, 1H, 11 -H, J = 6 Hz) , sistema-AB (vA = 3,37 r VB = 3,18, 22 -H, N \—1 II l~D 2,88 (m, 1H, 1 ' -H) , 2,54 (m, 1H, 4 ’ -H) , 2 ,40 (bs, 1H, 4- -Η) , 1 ,39, 1,37 (2s, 3H, 15-CH3) , 1,06 ( :s, 3H, I8-CH3) , 1,00 (s, 9H, Si-terc-butilo) , 0,83 (d, 3H, 17-CH3, J = 7 Hz), 0, 64, 0, 62 (2d, 3H, I6-CH3, J = 7 Hz). 66 ΡΕ2137143
Passo F. 14-0-{[(IR,2R,4S)-2-(terc-Butil-difenil-silaniloxi) -4—(formil-hidroxi-amino-ciclo-hexilsulfanil]-acetilj-mutilina + diastereómero (IS, 2S, 4.R) . A uma solução de 14-0-{[(IR,2R,4S)-2-(terc-butil-difenil-silaniloxi)-4-hidroxiamino-ciclo-hexilsulfanil]-acetilj-mutilina + diastereómero (IS,25,AR) (474 mg, 0, 622 mmol) em 15 mL de éter terc-butil metilico, foi adicionado formato de 2,2,2-trifluoroetilo (594 pL, 6,22 mmol) e aqueceu-se até refluxo durante 5 horas. A mistura reaccional foi arrefecida até à temperatura ambiente e foi adicionada gota a gota a 150 mL de heptano. 0 precipitado resultante foi isolado por filtração para dar 14-0-{[(lRr2R,AS) -2- (terc-butil-difenil-silaniloxi)-4-(formil-hidroxi-amino-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero {1S,2S, AR) (307 mg, 62% de rendimento, ciclo-hexano/acetato de etilo = 1/3, Rf = 0,5) na forma de um sólido incolor. RMN de XH (400 MHz, DMSO-d6, δ, ppm, inter alia): 9,6, 9,2 (2bs, 1H, NOH), 8,2, 7,9 (2s, 1H, CHO), 7,65-7,35 (m, 10H, aromático· -H) , 6, 12, 6, 08 (2dd, 1H, 19-H, J = 11 Hz e 18 Hz )/ 5 , 50 (d, 1H, 14 -H, J = 7 Hz) , 5, 05 (m, 2H, 20-H), 4, 47 (m, 1H, 11- •OH) , 3 ,40 (t, 1H, 11- -H, J = 6 Hz) , 2,37 (bs, 1H, 4-H) / 1 ,31, 1/ 30 (2s, 3H, 15 -ch3) , 1, 03 (s, 12H, 18-CH3, Si-terc-butilo) , 0,81 (d, 3H, 17-CH3, J = 7 Hz), 0,55 (d, 3H, I6-CH3, J = 6 Hz) .
Passo G. 14-0-{ [ (1.R, 2.R, 4S)-4-(Formil-hidroxi-ami-no)-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS, 2S, 4Λ) . 67 ΡΕ2137143
Tratou-se 14-0-{[{IR,2R,4S)-2-{terc-Butil-dife-nil-silaniloxi)-4-(formil-hidroxi-amino-ciclo-hexil-sulfa-nil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,2S,4R) (215 mg, 0,272 mmol) em 10 mL de tetra-hidrofurano, com fluoreto de tetrabutilamónio (1,36 mL, a 1M em THF, 1,36 mmol) e agitou-se durante 24 horas à temperatura ambiente. A mistura reaccional foi diluída com uma mistura de água, uma solução de NaHC03 e com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio (1:1:1) e extraiu-se três vezes com acetato de etilo. As fases orgânicas combinadas foram secadas sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. 0 resíduo foi adicionado gota a gota a 250 mL de heptano. 0 precipitado resultante foi isolado por filtração para render 14-0-{[(IR,2R,4S)-4-(formil-hidroxi-amino)-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (1S,2S,4R) (97 mg, 65% de rendimento, diclorometano/metanol = 9/1, Rf = 0,4) na forma de um sólido incolor. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, δ, ppm, ínter alia) : 9,65, 9,25 (2bs, 1H, NOH) , 8,2, 7,9 (2s, 1H, CHO) , 6,13 (m, 1H, 19-H ) , 5, 54 (d, 1H, 14- H, J = 8 Hz) , 5, 05 (m, 2H, 20-H), 4,49 (d, 1H, 11-OH, J = 6 H z) , 3,42 (t, 1H, 11-H, J = 6 Hz) , 2,40 (bs, 1H 4-H) , 1 ,36 (s, 3H, 15- -ch3) , 1,06 (s, 12H, I8-CH3) , 0,81 (d, 3H, 17 -ch3, J = 7 Hz) , 0, 63 (d, 3H, I6-CH3, J = 6 Hz) . MS-ESI {m/z) : 574 (MNa+) , 550 (Μ-ΗΓ, 1101 (2Μ-ΗΓ. 68 ΡΕ2137143
Exemplo 14 - 14-0-([(1.R,2R,5S)-5-(Formil-hidroxi-amino)-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (1S,2S,5J?).
Passo A. (7.R, 8.R)-8-(2,4,6-Trimetilbenzilsufanil) - 1.4- dioxa-espiro[4.5]decan-7-ol + diastereómero (7S, 8S).
Tratou-se 7, 8-Epoxi-l,4-dioxa-espiro[4.5]decano (Zhang, L.; Koreeda, M. Organic Letters 2002, 4(21), 3755-3758.) (22 g, 120 mmol) com mercaptano de 2,4,6-trime-tilbenzilo (20 g, 120 mmol) , de acordo com o método do Exemplo 1 Passo A2. Após processamento e cromatografia da mistura reaccional (sílica, ciclo-hexano/acetato de etilo = 2/1), foi obtido (7R,8R)-8-(2,4,6-trimetilbenzilsufanil)- 1.4- dioxa-espiro[4.5]decan-7-ol + diastereómero (7S, 8S) (Rf = 0,4, 33 g, 85% de rendimento) na forma de um óleo. MS-ESI [m/z) : 345 (MNa+) , 667 (2MNa+) .
Passo B. Éster (7.R, 8.R)-7-(2,4, 6-trimetilbenzil-sufanil)-1,4-dioxa-espiro[4.5]dec-8-ilico do ácido acético + diastereómero (7S, 8S). A uma solução de trifenilfosfina (26,5 g, 101 mmol) em 500 mL de tetra-hidrofurano sob uma atmosfera de árgon, foi adicionado azodicarboxilato de isopropilo (19,6 mL, 101 mmol) e agitou-se durante 30 minutos. Então, foram-lhe adicionados (7.R, 8.R)-8-(2,4, 6-trimetilbenzilsufanil) - 1.4- dioxa-espiro[4.5]decan-7-ol + diastereómero {1S,8S) (27,7 g, 86 mmol) em 150 mL de tetra-hidrofurano e ácido acético (7,7 mL, 135 mmol), e a mistura reaccional foi 69 ΡΕ2137143 aquecida até 80°C durante 24 horas. A mistura reaccional resultante foi concentrada sob pressão reduzida e sujeita a cromatografia (silica, ciclo-hexano/acetato de etilo/meta-nol = 3/1) para render éster (7R, 8R)-7-(2,4,6-trimetilben-zilsufanil)-1,4-dioxa-espiro[4.5]dec-8-ílico do ácido acé- tico + diastereómero ( 7 S, 8S) ( Rf 0 II 7,0 g, 22% de rendimento). RMN de 1H (500 MHz, CDC13, δ, ppm) : 6, 81 (s, 2H, aromático-H) , 4,85 (m, 1H, CHO) f 3,96 (m, 4H, OCH2CH2O), sistema-AB (VA = 3,83, v b = 3,79, J = 11 Hz, sch2) , 2,99 (m, 1H, CHS), 2,36 (s, 6H, CH3), 2, 23 (s, 3H, ch3) , 2,18 (m, 1H) , 2,12 (m, 1H) , 2,11 (s, 3H, COCH3) , 1,90-1,58 (m, 4H) . MS-ESI {m/z) : 387 (MNa+) .
Passo C. (7R, 8Λ)-7-Mercapto-l,4-dioxa-espiro- [4.5]decan-8-ol + diastereómero (7S, 8S).
Tratou-se éster (7R, 8.R)-7-(2, 4, 6-trimetilben-zilsufanil)-1,4-dioxa-espiro[4.5]dec-8-ílico do ácido acético + diastereómero (7S,8S) (6,33 g, 17,4 mmol), com sódio (1,6 g, 69,5 mmol) de acordo com o método do Exemplo 11 Passo D. Após processamento e cromatografia da mistura reaccional (silica, ciclo-hexano/acetato de etilo = 1/1), foi obtido (7R,8R)-7-mercapto-l,4-dioxa-espiro[4.5]decan-8-ol + diastereómero (7S,8S) (Rf = 0,4, 1,36 g, 38%). RMN de 1H (4 00 MHz, DMSO-de, δ, ppm) : 4,89 (d, 1H, OH) , 3, 83 (m, 4H, 0CH2CH20) , 3,17 (m, 1H, CHO) , 2,76 (m, 1H, CHS) , 2,43 (s, 1H, SH), 1,90-1, 30, 6H). MS-ESI [m/z): 189 (M-H) . 70 ΡΕ2137143
Passo D. 14-0-{ [ (7.R, 8.R)-8-Hidroxi-l, 4-dioxa-espi-ro[4.5]dec-7-il-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (7S, 8S) .
Tratou-se (7R,8R)-7-Mercapto-l,4-dioxa-espiro-[4.5]decan-8-ol + diastereómero (7S,8S) (1,36 g, 7,15 mmol) com tosilato de pleuromutilina (3,8 g, 7,15 mmol), de acordo com o método do Exemplo 11 Passo E. Após processamento e cromatografia da mistura reaccional (sílica, ciclo- hexano/acetato de etilo = 1/1), foi obtido 14-0-{[(IR, QR)-8-hidroxi-l,4-dioxa-espiro[4.5]dec-7-ilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (7S,8S) (Rf = 0,25, 1,90 g, 48%), na forma de uma espuma amorfa incolor. MS-ESI (m/z) : 573 (MNa+) , 1123 (2MNa+) , 549 (Μ-ΗΓ, 585 (MCI-) .
Passo E. 14-0-{[(7.R,8.R)-8-(terc-Butil-difenil- silaniloxi)-1,4-dioxa-espiro[4.5]dec-7-ilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (7S,8S).
Tratou-se 14-0-{[(IR,SR)-8-Hidroxi-l,4-dioxa-es-piro[4.5]dec-7-il-sulfanil)-acetil}-mutilina + diastereómero (7S, SS) (1,90 g, 3,45 mmol) de acordo com o método do Exemplo 13 Passo B. Após processamento e cromatografia da mistura reaccional (sílica, ciclo-hexano/acetato de etilo = 3/2), foi obtido 14-0-{[(7R,8R)-8-(terc-butil-difenil- silaniloxi)-1,4-dioxa-espiro[4.5]dec-7-ilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (7S, 8S) (Rf = 0,6, 1,65 g, 61%) na forma de uma espuma amorfa incolor. 71 ΡΕ2137143 RMN de 1 H (400 MHz, DMSO-de, δ, ppm, inter alia) : 7 ,7-7,35 (m, 10H, aromático-H), 6,13, 6,12 (2dd, 1H, 19-H, J = 11 Hz e 18 Hz) , 5,53 (d, 1H, 14-H, J = 7 Hz), 5,05 (m, 2H, 2 0-H), 4,50 (m, 1H, 11-OH), 3,78 1 (m, 4H, 0CH2CH20) , 3,70 (m, 1H, 1' -H ), 3 ,42 (m, 1H, 11-H) , 3,05 (m, 3H, 2'-Η, 22-H ), 2,40 (bs, 1H, 4-H) , 1,36, 1,34 (2s, 3H, 15- CH3), 1,05 (s, 3H, I8-CH3) , 1,00 (s, 9H, Si-terc-butilo), 0 ,81 (d, 3H, 17-CH3, J = 7 Hz), 0, 60, 0,58 (2d, 3H, 16-NCH3, J = 7 Hz).
Passo F. 14-0-{[(1Λ,2R)-2-(terc-Butil-difenil-silaniloxi) -5-oxo-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,2S).
Tratou-se 14-0-{[{IR,8R)-8-(terc-Butil-difenil-silaniloxi) -1,4-dioxa-espiro[4.5]dec-7-ilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (7S, 8S) (1,65 g, 2,09 mmol) de acordo com o método do Exemplo 13 Passo C. Foi obtido 14-0-{[(1R,2R)-2-(terc-butil-difenil-silaniloxi)-5-oxo-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS, 25) (1,34 g, 86% de rendimento, ciclo-hexano/acetato de etilo = 2/1, Rf = 0,3), na forma de uma espuma amorfa incolor, que foi utilizada directamente para o passo seguinte. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-dõ, δ, ppm, inter alia) : 7, 7-7,35 (m, 10H, aromático- H) , 6,11, 6; , 09 (2dd, 1H, 19-H, J = 11 Hz e 18 Hz) , r 5,48 (d, 1H, 14-H, J = 7 Hz) , 4,98 (m, 2H, 20-H), 4,47 (m, 1H, 11-OH) , 4 , 03 (m f 1H, l'-H) , 3,45-2, 95 (m, 4H, 11-H, 2' -H, 22-H), 2,37 (bs, 1H, 4-H), 1,31, 1,29 (2s, 3H, 15-CH3) , 1,02 (s, 12H, I8-CH3, Si-terc-butilo) , 0, 81 (d, 72 ΡΕ2137143 3Η, 17-CH3/ J = 7 Hz), 0,53 (d, 3H, 16-CH3, J = 7 Hz). MS-ESI (m/z) : 767 (MNa+) , 779 (MCI').
Passo G. 14-0-{[{IR,2R)-2-(terc-Butil-difenil-silaniloxi)-5-hidroxi-imino-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,2S).
Tratou-se 14-0-{[(IR,2R)-2-{terc-Butil-difenil-silaniloxi)-5-oxo-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,2S) (1,34 g, 1,80 mmol) de acordo com o método do Exemplo 13 Passo D. Foi obtido 14-0-{[(IR,2R)-2-(terc-butil-difenil-silaniloxi)-5-hidroxi-imino-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS, 2S) em bruto (rendimento quantitativo, ciclo-hexano/acetato de etilo = 1/1, Rf = 0,6), na forma de uma espuma amorfa incolor, que foi utilizada directamente para o passo seguinte.
Passo H. 14-0-{[(li?,2R,5S)-2-(terc-Butil-difenil-silaniloxi)-5—hidroxiamino-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}— mutilina + diastereómero (IS, 2S, 5R) e 14-0-{[(lJ?,2J?,5J?)-2-(terc-Butil-difenil-silaniloxi)-5-hidroxiamino-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,2S,5S).
Tratou-se 14-0-{[{IR,2R)-2-(terc-butil-difenil-silaniloxi) -5-hidroxi-imino-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS, 2S) (2,55 g, 3,36 mmol) de acordo com o método do Exemplo 13 Passo E. Após processamento e cromatografia da mistura reaccional (sílica, 73 ΡΕ2137143 ciclo-hexano/acetato de etilo = 1/3), foram obtidos 14-0-{[ (IR,2R,5S)-2-(terc-butildifenil-silaniloxi)-5-hidroxi-amino-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (1S,2S,5R) (a) (Rf = 0,4, 220 mg, 16% de rendimento) e 14- 0-{[(IR,2R,5R)-2-(terc-butil-difenil-silaniloxi)-5-hidroxi-amino-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS, 2S, 5S) (b) (Rf = 0,25, 560 mg, 41% de rendimento) . (a) : RMN de ^ (400 MHz, DMSO-d6, δ, ppm, inter alia): 7,65-7,35 (m, 10H, aromático-H), 7,00 (bs, 1H, NH/OH), 6,11, 6,09 (2dd, 1H, 19-H, J = 11 Hz e 18 Hz), 5,50 (d , 1H, 14-H , J = 8 Hz) , 5,00 (m, 2H, 20- H) , 4,47 (m, 1H 11 -OH) , 3, 80 (m, 1H, 2 ' -H) , 3, 40 (t, 1H, 11- H, J = 6 Hz) 3, 00 (m , 1H, 1 ' -H) , sistema-AB (vA = 3 ,93, vB = 3, 80 , 22-H J = 15 Hz) , 2, 68 (m, 1H, 5' -H) , 2,40 (bs, 1H, 4-H) , 1 ,31 1, 29 (2s, 3H, I5-CH3) , 1,00 (s, 12H, 18- -ch3 Si -terc -butilo), 0 ,81 (d, 3H, I7-CH3, J = 7 Hz) , 0 , 55 (d 3H, 16-CH3, J = 7 Hz) . (b) : RMN de ^ (400 MHz, DMSO-d6, δ, ppm, inter alia): 7,7-7,35 (m, 10H, aromático-H), 6,97 (s, 1H, NH/OH), 6, 16, 6, 14 (2dd, 1H , 19-H, J = = 11 Hz e 18 Hz) , 5 , 56 (m, 2H, 14 -H) , 5 ,40 (bs, 1H , NH/OH), 5,07 (m, 2H, 20- H) , 4, 49, 4,48 (2d, 1H, 11-OH, J = 6 Hz), 3,48 (m, 1H, 2 ' -H) , 3 ,43 (t, 1H, 11 -H, J = 6 Hz) , 3 ,24 (m, 2H 22-H), 2, 79 (m, 1H , 1' -H) , 2, 40 (bs , 1H, 4- Ή) , 2,33 (m, 1H, 5'-H), 1 ,38, 1, 35 (2s, 3H, 15 -ch3) , 1,05 ( s, 3H, I8-CH3) , 0, 98 (: 3, 9H, Si -terc- butilo), 0, 81 (d, 3H, I7-CH3, J = 7 Hz) , 0, 63, 0, 61 (2d, 3H, I6-CH3, J = = 6 Hz). - 74 - ΡΕ2137143
Passo 1. 14-0-( [ (IR, 2R, 5S) -2- (terc-Butil-difenil-silaniloxi)-5-(formil-hidroxi-amino-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,2S,5R).
Tratou-se 14-0-{[(IR,2R, 5S) -2- (terc-butil-dife-nil-silaniloxi)-5-hidroxiamino-ciclo-hexilsulfanil]-ace-til}-mutilina + diastereómero (IS,2S,5R) (215 mg, 0,282 mmol) de acordo com o método do Exemplo 13 Passo F. 0 isolamento do precipitado por filtração resultou em 14-0-{ [ (IR,2R,5S)-2-(terc-butil-difenil-silaniloxi)-5-(formil-hidroxi-amino-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,2S,5R) (135 mg, 61% de rendimento, ciclo-hexano/acetato de etilo = 1/3, Rf = 0,65) na forma de um sólido incolor. RMN de 1H (400 MHz, DMS0-d6, δ, ppm, inter alia): 9,8, 9,3 (2bs, 1H, N0H), 8,2, 7,9 (2bs,1H, CHO), 7,60-7,35 (m, 10H,
aromático-H) , 6,11, 6,09 (2dd, 1H, 19-H, J = 11 Hz 18 Hz), 5, 50 (d, 1H, 14-H, J = 8 Hz) , 5, 00 (m, 2H, 20-H) 4,47 ( d, 1H, ll-OH, J = 6 Hz) , 3, 40 (t, 1H, 11-H J = 6 Hz), 2,37 (bs, 1H, 4-H) , 1,32, 1,30 (2s, 3H, 15-CH3) , 1,03 (s, 12H, 18-CH3, Si-terc-butilo) , 0, 82, 0, 80 (d, 3H, I7-CH3, J = 7 Hz), 0,55 (d, 3H, I6-CH3, J = 6 Hz) .
Passo J. 14-0-([(IR,2R,5S)-5-(Formil-hidroxi-amino)-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS, 2S, 5Λ) .
Tratou-se 14-0-{[(1R,2R, 5S)-2-(terc-Butil-dife-nil-silaniloxi)-5-(formil-hidroxi-amino-ciclo-hexil-sulfa- 75 ΡΕ2137143 nil]-acetil}-mutilina + diastereómero (15,25,5R) (130 mg, 0,164 mmol) de acordo com o método do Exemplo 13 Passo G. O isolamento do precipitado por filtração resultou em 14-0-{[(1R,2R, 55)-5-(formil-hidroxi-amino)-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (15,25,5R) (77 mg, 85% de rendimento, diclorometano/metanol = 9/1, Rf 0 II na forma de um sólido incolor. RMN de XH (400 MHz, DMSO-de, δ, ppm, inter alia): 9,7, 9,3 (2bs, : 1H, NOH) , 8,2, 7,9 (2s, 1H, CHO), 6,13 (dd, 1H, 19-H, J = 11 Hz e 18 Hz) , 5,53 (d, 1H, 14-H, J = 8 Hz), 5, 06 (m, 2H, 20-H), 4,91 (d, 1H, 2’-OH), 4,49 (d, 1H, 11-OH, J = 6 Hz), 4,2, 3,7 (2m, 2H, 2'-H, 5'-H), 3,41 (t, 1H, 11-H, J = 6 Hz), 3,28 (m, 2H, 22-H) , 3,13 (m, 1H, l'-H), 2,40 (bs, 1H, 4-H) , 1,35 (s, 3H, 15-CH3) , 1,06 (s, 12H, I8-CH3), 0,81 (d, 3H, I7-CH3, J = 7 Hz), 0,63 (d, 3H, I6-CH3, J = 6 Hz) . MS-ESI (m/z) : 574 (MNa+) , 1125 (MNa+) , 550 (Μ-ΗΓ, 1101 (2M-H)- .
Exemplo 15 - 14-0-{ [ (li?, 2R, 3R/S) -3- (Formil—hidro-xi-amino)-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS, 2S, 3R/S) .
Passo A. 14-0-{[(6R,7R)-6-Hidroxi-l,4-dioxa-espi-ro[4.5]dec-7-il-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (6S, 7S) .
Tratou-se 6,7-Epoxi-l,4-dioxa-espiro[4.5]decano (Vankar, Y.D.; Reddy Μ. V.; Chaudhuri, N. C. Tetrahedron 76 ΡΕ2137143 1994, 50 (37), 11057-11078.) (16,24 g, 104 mmol) e pleuro-mutilina tiol (20,5 g, 52 mmol) de acordo com o método do Exemplo 1 Passo AI. Após processamento e cromatografia da mistura reaccional (sílica, ciclo-hexano/dioxano = 2/1), foi obtido 14-0-{[(6R,IR)-6-hidroxi-l,4-dioxa-espiro[4.5]-dec-7-il-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (6S,1S) (Rf = 0,5, 15,6 g, 55% de rendimento), na forma de uma espuma amorfa incolor. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-dõ, δ, ppm, inter alia): 6,13 (dd, 1H , 19-H, J = 11 Hz e 18 Hz), 5 , 53 (d, 1H, 14-H, J = 7 Hz) , 5, 05 (m, 2H, 20-H), 4,90 l (m, 1H, 2 :'-oh) , 4,47 ( (m, 1H 11 -OH), 3,97 i (m, 1H, 2'-H), 3, 32 ( m, 1H, 11-H), 3, 50- 3,2i (m , 2H, 22-H) , 2, 80 (m, 1H f 1' -H ) , 2,40 (bs, 1H, 4 -H) 1, 35, 1,34 (2s , 3H, I5-CH3), 1, 05 ( s, 3H, I8-CH3) , 0 ,81 (d. 3H , 17-CH3, J = = 7 Hz), 0, 62 ( d, 3H, 16- -ch3, J = 6 Hz)
Passo B. 14-0-{[(ΙΛ,2R)-2-Hidroxi-3-oxo—ciclo- hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,2S).
Tratou-se 14-0-{[(6R,1R)-6-Hidroxi-l,4-dioxa-espiro [4.5]dec-7-il-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (6S,ΊS) (15,6 g, 28,4 mmol) de acordo com o método do Exemplo 13 Passo C. Após processamento e cromatografia da mistura reaccional (sílica, ciclo-hexano/acetato de etilo = 1/1), foi obtido 14-0-{[(IR,2R)-2-hidroxi-3-oxo-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,2S) (Rf = 0,4, 3,14 g, 22% de rendimento), na forma de uma espuma amorfa incolor. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-dõ, δ, ppm, inter alia) : 6,13 (dd, 77 ΡΕ2137143 1H, 19-H, J = 11 Hz e 18 Hz) , 5, 55 (d, 1H, 14-H, J = 8 Hz) , 5,23 (m, 1H, 2'-OH), 5, . 05 (m, 2H, 20-H), 4, 49 ( :d, 1H, 11-OH, J = 6 Hz), 4, 00 (m, 1H, 2'-h; ) , 3,50-3, . 30 (m, 3H, 11-H, 22- H) , 2,86 (m, 1H , 1’ -H) , 2, 40 (bs, 1H, 4-H ) , 1,35 (s, 3H, I5-CH3) , 1,06 (s, 3H, 18- •CH3) , 0,80 (d, 3H, 17- -ch3, J = 7 Hz), 0,61 (d, 3H, 16-CH3, J = 7 Hz). MS-ESI (m/z) : 529 (MNa+) , 1035 (2MNa+) .
Passo C. 14-0-{[{IR,2R)-2-Hidroxi-3-hidroxi-imi-no-ciclo-hexil-sulfanil)-acetil}-mutilina + diastereómero (15, 25) .
Tratou-se 14-0-{[(1R,2R)-2-Hidroxi-3-oxo-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS, 2S) (3,14 g, 6,19 mmol) de acordo com o método do Exemplo 13 Passo D. Após processamento e cromatografia da mistura reaccional (sílica, ciclo-hexano/acetato de etilo = 1/1), foi obtido 14-0-{[(IR,2R)-2-hidroxi-3-hidroxi-imino-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,2S) (Rf = 0,2, 1,75 g; 54% de rendimento), na forma de uma espuma amorfa incolor. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-dõ, δ, ppm, inter alia) : 10,5 (s, 1H, NOH) , 6,13, 6, 12 (2dd, 1H, 19-H, J = 11 Hz e 18 Hz) , 5,54 (d. , 1H, 14-H, J = 8 Hz) , 5,33 (d, 1H, 2' -OH, J = : 4 Hz ), 5,05 (m, 2H, 20- Ή) , 4,50 (m, 1H, 11-OH), 3, 96 (m, 1H, 2'-H), 3, 42 (t, 1H, 11· -H, J = 6 Hz), 3,25 (m, 2H, 22- H), 3 ,14 (m, 1H, 1 ’-H) , 2 ,40 (bs, 1H, 4-H), 1,35 (s, 3H, 15- CH3) , 1, 05 (s, 3H, 18 -ch3) , 0 ,81 (d, 3H, 17- -ch3, J = 7 Hz), 0,63 (d, 3H, I6-CH3, J = 7 Hz). 78 ΡΕ2137143
Passo D. 14-0-{[(IR,2R,3R/S)-2-Hidroxi-3-hidroxi-amino-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereó-mero (IS, 2S, 3R/S) .
Tratou-se 14-0-{ [ (IR, 2.R)-2-Hidroxi-3-hidroxi-imi-no-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS, 2S) (1/75 g, 3,35 mmol) de acordo com o método do Exemplo 13 Passo E. Após processamento e cromatografia da mistura reaccional (silica, acetato de etilo/metanol = 10/1), foi obtido 14-0-{ [ (IR, 2.R, 3R/S)-2-hidroxi-3-hidroxi-amino-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,2S,3R/S) (Rf = 0,2, 1,34 g, 65% de rendimento), na forma de uma espuma amorfa incolor. RMN de ^ ( 400 MHz , DMSO-d6, δ, ppm , inter ali a) : 7, 1 (bs, 1H, NH/OH), 6,12, 6, 11 (2dd, 1H, 19 -H, J = 11 Hz e 18 Hz) , 5,53 (d, 1H :, 14-H, J = 8 Hz) , 5,05 (m, 2H, 20- H) , 4, 90 (m, 1H, 2’-OH) , 4,5 (m, 1H, 11-OH), 3,41 (t, 1H :, 1 1-H, J = 6 Hz) , 3,73, 3,53, 3,30, 3,14 , 3,01, 2, 87 (6m, 5H, 1’- H, 2'-H, 3 1 -H, 22-H) , 2,40 (bs, 1H, 4-H ), 1 , 35 (2 s, 3H, 15- ch3) , 1 , 05 (s , 3H , 18-CH3), 0, 81 ( d, 3H, 17- -ch3, J = 7 Hz) , 0,63 (d , 3H, I6-CH3, J = 7 Hz) .
Passo E. 14-0-{[(1R,2R,3R/S)-3-(Formil-hidroxi-amino)-2-hidroxi-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (1S,2S,3R/S).
Tratou-se 14-0-{[(1R,2R,3R/S)-2-hidroxi-3-hidro-xi-amino-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + diaste- 79 ΡΕ2137143 reómero (IS, 25, 3R/S) (899 mg, 1,72 mmol) de acordo com o método do Exemplo 13 Passo F. Após isolamento do precipitado por filtração, foi obtido 14-0-{[(IR,2R,3R/S)-3-(formil-hidroxi-amino)-2-hidroxi-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (1S,2S,3R/S) (724 mg, 76% de rendimento, diclorometano/metanol = 9/1, Rf = 0,5), na forma de um sólido incolor. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, δ, ppm, inter alia): 9,6, 9,4, 9,1 (3bs, 1H, NOH) , 8,2, 7,9 (2s, 1H, CHO) , 6,13, 6,11 (2dd, 1H :, 19· -H, J = 11 Hz e 18 Hz) / 5, 54 (d, 1H, 1< 4-H, J = 8 Hz ) , 5, 24 (m, 1H, 2' -OH) , 5, 05 (m, . 2H , 20-H) 4,49 (m, 1H, 11-OH), 3,86 , 3, 60 (2m, 1H, 2'- H) , 3,39 ( :t, 1H, 11-H, J = 6 Hz) , 3, 28, 3, 13, 2 , 64 (3m, 4H, r l’-H, 3 '-H, 22-H), 2 , 38 (bs, 1H, 4-h: ) , 1,36 (s, 3H, 15-ch3), 1, . 06 (s, 12H, 18-' ch3) , 0,81 (d , 3H f I7-CH3, , J : = 7 Hz) , 0, 63 (d, 3H, 16-CH3, J = 7 Hz) • MS-ESI {m/z) : 574 (MNa+) , 1125 (2MNa+) , 550 (M- Η)-, 1101 (2M-H) .
Exemplo 16 - Cloridrato de 14-0-{[(IR,2Rr5S)—2— Hidroxi-5-metil-amino-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}— mutilina + cloridrato do diastereómero (IS, 2S, 5R) .
Passo A. Éster terc-butilico do ácido N-Metil-N-(ciclo-hex-3-enil)-carbâmico.
Tratou-se éster terc-butilico do ácido ciclo-hex-3-enil-carbâmico (Kapferer, P.; Vasella, A. Helvetica Chimica Acta 2004, 87, 2764-2789) (3 g, 15,2 mmol) e iodeto 80 ΡΕ2137143 de metilo (0,95 mL, 15,2 mmol) durante 1 hora de acordo com o método do Exemplo 7 Passo A. Após processamento e croma-tografia da mistura reaccional (sílica, ciclo-hexano/ace-tato de etilo = 10/1), foi obtido o composto do título (Rf = 0,22, 2,04 g, 64% de rendimento), na forma de um sólido incolor. RMN de 1H (200 MHz, CDC13, δ, ppm) : 5,64 (bs, 2H, dupla ligação), 4,17 (bs, 1H, NCH) , 2,74 (s, 3H, NCH3) , 2,13, 1,70 (2m, 6H), 1,47 (s, 9H, terc-butilo).
Passo B. Éster terc-butilico do ácido N-Metil-N-(cis-3,4-epoxi-ciclo-hexil)-carbâmico.
Tratou-se éster terc-butílico do ácido N-Metil-N-(ciclo-hex-3-enil)-carbâmico (2 g, 9,5 mmol) e ácido 3-clo-roperbenzóico (2,2 g, 70%, 8,9 mmol) durante 1 hora de acordo com o método do Exemplo 7 Passo B. Após processamento, foi obtido o composto do título em bruto (sílica, ciclo-hexano/acetato de etilo = 3/1, Rf = 0,25, 1,70 g, 79% de rendimento). RMN de XH (200 MHz, CDC13, δ, ppm): 4,0 (bs, 1H, NCH), 3,15 (bs, 2H, epóxido) , 2,67 (s, 3H, NCH3) , 2,30-1,10 (m, 6H) , 1,45 (s, 9H, terc-butilo).
Passo C. 14-0=([(IR,2R,5S)-5-(terc-Butoxicarbo-nil-metil-amino)-2-hidroxi-ciclo-hexil-sulfanil)-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,2S,5R).
Tratou-se éster terc-butílico do ácido N-Metil-N- 81 ΡΕ2137143 (cis-3, 4-epoxi-ciclo-hexil)-carbâmico (1,7 g, 7,5 mmol) com pleuromutilina tiol (2,95 g, 7,5 mmol), de acordo com o método do Exemplo 1 Passo A3. Após processamento e croma-tografia da mistura reaccional (sílica, ciclo-hexano/ace-tato de etilo = 2/1), foi obtido 14-0-{[(IR,2R,55)-5-(terc-Butoxicarbonil-metil-amino)-2-hidroxi-ciclo-hexil-sulfa-nil)-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,25,5R) (Rf = 0,23, 1,3 g, 28% de rendimento), na forma de um sólido incolor. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, δ, ppm, inter alia) : 6,12 (2dd, 1H, 19-H, J = 11 Hz e 18 Hz) , 5, 54 (d, , 1H, 14-H, J = 8 Hz) , 5, 05 (m, 2H, 20-H), 4,9 (d, 1H, 2 ' -OH, J = 4 Hz) , 4,47 (d, 1H, 11-OH, J = 6 Hz), 3, 97 ( m, 1H, 5’- H) , 3, 70 (bs, 1H, 2'- •H), 3,42 ( m, 1H, 11 -H ), 3, 28 (m, 2H, 22-H) , 3,11 (m, 1H, l’-H), 2, 62 (s, 3H f nch3) f 2, 40 (bs r 1H, 4-H) , 1,37 (s, 9H, terc -butilo), 1, 35 ( s, 3H, 15- ch3 ) , 1,04 ( (s, 3H, 18-CH3) , 0, 81 (d, 3H, 17- -ch3, J = 7 Hz) , 0,63 (d, 3H, 1 6-CH3, J = 7 Hz) .
Passo D. 14-0-{(1K,2Λ,5S)-2-Hidroxi-5-metilamino-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS, 2S, 5R) .
Tratou-se 14-0-{[{1R,2R,55)-5-(terc-Butoxicarbo-nil-metil-amino)-2-hidroxi-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (15,2S, 5R) (1,3 g, 2,1 mmol) de acordo com o método do Exemplo 1 Passo B. Após processamento e cromatografia da mistura reaccional (sílica, diclorometano/metanol/i-propanol/água/ácido acético = 82 ΡΕ2137143 80/20/6/3/2) com subsequente extracção básica, foi obtido 14-0-{[(IR,2R,5S)-2-hidroxi-5-metilamino-ciclo-hexil- sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (1S,2S,5R) (Rf = 0,4, 690 mg, 63%) na forma de um sólido incolor. RMN de (500 MHz, DMSO -d6, δ, ppm, inter ai. ia ) : 6, 14 (dd, 1H, 19 -H, J = 11 Hz e 18 Hz) , 5, 54 (d , 1H, 14· -H , J = 8 Hz) , 5, 06 (m, 2H, 20-H) , 4, 81 (bs, 1H, 2 ’ -OH ) , 4 , 52 (d, 1H, 11-OH, J = 6 Hz ), 3 ,51 (m, 1H, 2 ' - H) , 3,4 3 (m, • 1H, 11 -H) , 3,30 (: m, 2H, 22- H) , 3, 00 (m, 1H, 1 ' - -H ) , 2,63 (m , 1H, 5’ -H) , 2,41 (bs , 1H, 4-H) , 2 ,29 (s, 3H f NCH3) f 1, 37 ( :s, 3H, 15-CH3: ) , O \—1 (s, 3H, 18 >-ch3 .) , 0 , 82 1 :d, 3H, 17- -ch3, r-~ II l“D Hz) , 0,64 (d, 3H, I6-CH3, J = 7 Hz) .
Passo E. Cloridrato de 14-0-{ [ (1.R, 2.R, 5S)-2-Hi-droxi-5-metil—amino-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + cloridrato do diastereómero (IS, 2S, 5J?) .
Tratou-se 14-0-{[(IR,2R,5S)-2-Hidroxi-5-metil-amino-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,2S,5R) (690 mg, 1,32 mmol) de acordo com o método do
Exemplo 1 Passo C, para se obter cloridrato de 14-0- {[(IR,2R,5S)-2-hidroxi-5-metil-amino-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + cloridrato do diastereómero (IS,2S,5R) (731 mg, rendimento quantitativo), na forma de um sólido incolor. RMN de ^ (400 MHz, DMS0-d6, δ, ppm, inter alia): 8,65 (bs, 2H, NH2+) , 6,14 (2dd, 1H, 19-H, J = 11 Hz e 18 Hz), 5,54 (d, 1H, 14- -H, J = 8 Hz) / 5, 06 (m, 2H, 20-H) , 4, 51 (d, 1H 11-OH, J = 6 Hz) , 3, 72 (m, 1Η, 2' -H) , 3, 43 (m, 1H, 11· -H) 3,37-3, 00 (m, 4H, 22-H, 1’- -H, 5'· -H) , 2,50 (s, 3H, nch3) 83 ΡΕ2137143
(bs, 1H, 4-H) , 1,36 (s, 3H, I5-CH3) , 1, 06 (s, 3H ), 0,82 (d, 3H, 17-CH3, J = 7 Hz) , 0, 63 (d, 3H I6-CH3, J = 7 Hz) . MS-ESI {m/z) : 522 (MH+) , 556 (MCI-) .
Exemplo 17 - Cloridrato de 14-0-{[(1.R,2R,5S)-5-Alilamino-2-hidroxi-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + cloridrato do diastereómero (lSr2Sr5R).
Passo A. Éster terc-butilico do ácido N-Alil-N-(ciclo-hex-3-enil)-carbâmico.
Tratou-se éster terc-butílico do ácido ciclo-hex-3-enil-carbâmico (Kapferer, P.; Vasella, A. Helvetica Chimica Acta 2004, 87, 2764-2789) (3 g, 15,2 mmol) e iodeto de alilo (1,4 mL, 15,2 mmol) de um dia para o outro de acordo com o método do Exemplo 7 Passo A. Após processamento e cromatografia da mistura reaccional (sílica, ciclo-hexano/acetato de etilo = 10/1), foi obtido o composto do título (Rf = 0,55, 2,0 g, 55% de rendimento), na forma de um sólido incolor. RMN de (200 MHz, CDCI3, δ, ppm) : 5, 60 (m, 2H, ligação) O 00 LO 5,10, 3, 64 ( 3m, 5H, alilo), 4,18 (bs NCH), 2, 14, 1,74 (2m, \—1 45 (s, 9H, terc-butilo).
Passo B. Éster terc-butilico do ácido N-Alil-N-(cis-3,4-epoxi-ciclo-hexil)-carbâmico.
Tratou-se éster terc-butílico do ácido N-Alil-N-(ciclo-hex-3-enil)-carbâmico (2 g, 8,4 mmol) e ácido 84 ΡΕ2137143 3-cloroperbenzóico (2,2 g, 70%, 8,9 mmol) de um dia para o outro de acordo com o método do Exemplo 7 Passo B. Após processamento, foi obtido o composto do titulo em bruto (sílica, ciclo-hexano/acetato de etilo = 3/1, Rf = 0,31, 1,90 co % de rendimento). RMN de 1H (200 MHz, CDC13, δ, ppm) : 5,7 6, 5,10, 3,66 (3m 5H, alilo) , 4,04 (bs, 1H, NCH) , 3,12 (bs, 2H, epóxido) 2,30 -1,20 03 r- \—1 K 9H, terc-butilo).
Passo C. 14-0-{ [ (1.R, 2.R, 5S)-5-(terc-Butoxicarbo-nil-alil-amino)-2-hidroxi-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,2S,5Λ).
Tratou-se éster terc-butílico do ácido N-Alil-N-(cis-3,4-epoxi-ciclo-hexil)-carbâmico (1,9 g, 7,5 mmol) com Pleuromutilina tiol (2,95 g, 7,5 mmol), de acordo com o método do Exemplo 1 Passo A-2. Após processamento e cromatografia da mistura reaccional (sílica, ciclo-hexano/acetato de etilo = 3/1 -> 1/1), foi obtida uma mistura de 14-0-{[(l-R,2A,5S)-5-( terc-Butoxi-carbonil-alil-amino) -2-hidroxi-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS, 2S,5R) e dissulfureto de Pleuromutilina (ciclo-hexano/acetato de etilo = 1/1, Rf = 0,21, 2,49 g) . RMN de ^ (400 MHz, DMSO-de, δ, ppm, inter alia ): 6,12 (2dd, 1H, 19-H, J = 11 Hz e 18 Hz), 5,74 ( (m, 1H, NCH2CHCH2) , 5, 54 (d, 1H, 14-H, J = 8 Hz), 5,05 (m, 4H, 20-H, NCH2CHCH2), 4,87 (d, 1H, 2'-OH, J = 3 Hz) , 4, 49 (d, 1H, 11-OH, J = 6 Hz), 3,95 (m, 1H, 5' -H) t 3, 68 (bs, 3H, 2 ' -H, NCH2CHCH2), 3,42 (t, 1H, 11-H, J = 6 Hz) , 3,26 (m, 85 ΡΕ2137143 2H, 22-H) , 3,09 (m, 1H, l’-H), 2,39 (bs, 1H, 4-H) , 1, 37 (s, 9H, terc-butilo) , 1, 35 (s, 3H, I5-CH3) , 1,05 (s, 3H, 18-CH3), 0,81 (d, 3H, 17-CHs, J = 7 Hz), 0, 63 (d, 3H, 16-NCH3, J = 7 Hz) . MS-ESI (m/z) : 670 (MNa+) , 1317 (2MNa+) , 646 (M-H)'.
Passo D. 14-0-{[(li?,2J?,5S)-5-Alil-amino-2—hidro-xi-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS, 2S, 5.R) . A mistura de 14-0-{[(IR,2R,5S)-5-(terc-Butoxi-carbonil-alil-amino)-2-hidroxi-ciclo-hexil-sulfanil]-ace-til}-mutilina + diastereómero (1S,2S,5R) e dissulfureto de Pleuromutilina (2,4 g) foi tratada de acordo com o método do Exemplo 1 Passo B. Após processamento e cromatografia da mistura reaccional (sílica, diclorometano/metanol/i-propa-nol/água/ácido acético = 80/20/6/3/2) com subsequente extracção básica, foi obtido 14-0-{ [ (IR, 2.R, 5S)-5-alil-amino-2-hidroxi-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,2S,5R) (Rf = 0,5, 250 mg), na forma de um sólido incolor. RMN de ΧΗ (500 MHz, DMSO-dg, δ, ppm, inter alia) : 6,14 (dd, 1H, 19-H, J = 11 Hz e 18 Hz), 5,82 (m, 1H, NCH2CHCH2) , 5,55 (d, 1H, 14-H, J = 8 Hz), 5,10 (m, 4H, 20-H, NCH2CHCH2) , 4,77 (m, 1H, 2'-OH), 4,51 (d, 1H, II 0 1 \—1 \—1 6 Hz) , 3, 50 -3, 10 (m( 6H, 2 ' -H , 11-H, 22-H, NCH2CHCH2) , 2, 99 (m, 1H, 1’-H), 2, 68 (m, 1H, 5'-H), 2,40 (bs, 1H, 4-H), 1, 37 (s, 3H, 15-CHs) , 1 ,06 (s, 3H, 18- -ch3) , 0,82 (d, 3H, 17- -ch3, J = 7 Hz) , 0, 63 (d, 3H, I6-CH3, J = 7 Hz) . MS-ESI {m/z): 548 (MH+) , 546 (M-H) , 582 (MCI'). 86 ΡΕ2137143
Passo E. Cloridrato de 14-0-{[(1Λ,2R,5S)-5-Alil-amino-2-hidroxi-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + cloridrato do diastereómero (IS,2S,5R).
Tratou-se 14-0-{[{IR,2R,5S)-5-Alil-amino-2-hidro-xi-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS, 2S, 5R) (250 mg, 0,46 mmol) de acordo com o método do Exemplo 1 Passo C para se obter cloridrato de 14-0-{[(1R,2R,5S)-2-hidroxi-5-etilamino-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + cloridrato do diastereómero (IS,2S, 5R) (273 mg, rendimento quantitativo não corrigido) na forma de um sólido incolor. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-de, δ, ppm, inter alia): 8,85 (bs, 2H, nh2+) , 6,13 (2dd, 1H, 19- H, J = 11 Hz e lí 3 Hz) f 5, 87 (m, 1H, NCH2CHCH2), 5,55 (d, 1H, 14- -H, J = 8 Hz) , 5 ,47, 5, 37 (2d, , 2H, NCH2CHCH2, J = 17 Hz e 10 Hz) , 5 , 06 (m, 2H, 2 0-H ) , 4, ,51 (d, 1H, 11-OH, J = 6 Hz) , 3 ,72 (m, 1H, 2' -H) , 3,56 (d, 2H, NCH2CHCH2, J = 6 Hz) , 3 ,43 (t, 1H, 1 1-H, J = 6 Hz) , 3,34 (m, 2H, 22-H ) , 3, 13 (m, , 2H, 1 '-Η, 5' -H) , 2,40 (bs , 1H, 4-H) , 1,36 (s f 3H, ] -5-CH3) , 1, 06 ( s, 3H, I8-CH3) , 0,81 (d, 3H, 17-CHs ) , J = 7 Hz) , 0, 63 ( d, 3H, 16-CH3, J = 7 Hz) . MS-ESI (m/z) : 548 (MH+) , 582 (MCI-) .
Exemplo 18 - Cloridrato de 14-0-{ [ (IA, 2R, 5S) -2-Hidroxi-5-(2-metoxi-etilamino)-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + cloridrato do diastereómero (IS,2S,5R). 87 ΡΕ2137143
Passo A. Éster terc-butilico do ácido N-(2-metoxi-etil)-N-(ciclo-hex-3-enil)-carbâmico.
Tratou-se éster terc-butilico do ácido ciclo-hex-3-enil-carbâmico (Kapferer, P.; Vasella, A. Helvetica
Chimica Acta 2004, 87, 2764-2789) (3 g, 15,2 mmol) e éter 2-bromoetil metilico (1,43 mL, 15,2 mmol) de um dia para o outro de acordo com o método do Exemplo 7 Passo A. Após processamento e cromatografia da mistura reaccional (sílica, ciclo-hexano/acetato de etilo = 7/1), foi obtido o composto do título (Rf = 0,33, 1,2 g, 31% de rendimento), na forma de um sólido incolor. RMN de 1H (200 MHz, CDCI3, δ, ppm) : 5, 61 (m, 2H, dupla li gação) , 4,10 (bs, 1H, NCH) , 3,50-3,15 (m, 7H, NCH2CH2OCH3) , 2,15, 1,72 (2m, 6H), 1,47 (s, 9H, terc-butilo).
Passo B. Éster terc-butilico do ácido N-(2-
Metoxi-etil)-N-(cis-3,4-epoxi-ciclo-hexil)-carbâmico.
Tratou-se éster terc-butilico do ácido N-(2-
Metoxi-etil)-N-(ciclo-hex-3-enil)-carbâmico (1,2 g, 4,7 mmol) e ácido 3-cloroperbenzóico (1,2 g, 70%, 4,87 mmol) ao longo do fim de semana de acordo com o método do Exemplo 7 Passo B. Após processamento, foi obtido o composto do título em bruto (sílica, ciclo-hexano/acetato de etilo = 3/1, Rf = 0,33, 1,08 g, 85% de rendimento). RMN de XH (200 MHz, CDC13, δ, ppm): 3,94 (bs, 1H, NCH), 3, 50-3, 05 (m, 9H, NCH2CH2OCH3, epóxido) , 2,30-1,20 (m, 6H) , 1,45 (s, 9H, terc-butilo). ΡΕ2137143
Passo C. 14-0-{[(ΙΛ,2R,5S)-5-(terc-Butoxicar- bonil-(2-metoxi-etil)-amino)-2-hidroxi-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,2S,5R).
Tratou-se éster terc-butílico do ácido N-(2-Metoxi-etil)-N-(cis-3, 4-epoxi-ciclo-hexil)-carbâmico (1,08 g, 4,0 mmol) com pleuromutilina tiol (1,57 g, 4,0 mmol) de acordo com o método do Exemplo 1 Passo A2. Após processamento e cromatografia da mistura reaccional (silica, ciclo-hexano/acetato de etilo = 1/2), foi obtido 14-0-{[(IR,2R,5S)-5-{terc-Butoxicarbonil-(2-metoxi-etil)-amino)-2-hidroxi-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,2S,5R) (Rf = 0,5, 500 mg, 19% de rendimento), na forma de um sólido incolor. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-dõ, δ, ppm, inter alia) : 6,13 (2dd, 1H, 19-H, J = 11 Hz e 18 Hz) , 5 ,54 (d, 1H, 14-H J = 8 Hz) , 5, 05 (m, 2H, 20-H) , 4 , 88 (d, f 1H, 2 1 -OH, J = 4 Hz) , 4, 48 (d, 1H, 11- -OH, J = 6 Hz) , 3, 85 ( m, 1H, 5'-H), 3, 68 (bs, 1H, 2 ’ -H) , 3, 42 (t, 1H, 11- Ή, J = 6 Hz) 3,35-3 , 05 (m, 10H, 22-H, NCH2CH2OCH3, 1’- H) , 2, ' 40 (bs, 1H 4-H) , 1, 38 (s, 9H , terc-buti. lo) , 1,35 (s, 3H, i5-ch3; 1, o. (s, 3H :, 18- -ch3) , 0, 81 (d, 3H , 17- -nch3, J = 7 Hz ) , o, 63 (d 3H, 16 -ch3, J = 7 Hz) .
Passo D. 14-0-{[(1Λ,2R,5S)-2-Hidroxi-5-(2-metoxi-etilamino)-ciclo-hexil-sulfani]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS, 2S, 5R) . 89 ΡΕ2137143
Tratou-se 14-0-{[(1R,2R,5S)-5-(terc-Butoxicar-bonil-(2-metoxietil)-amino)-2-hidroxi-ciclo-hexil-sulfa-nil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,2S,5R) (500 mg, 0,75 mmol) de acordo com o método do Exemplo 1 Passo B. Após processamento e cromatografia da mistura reaccional (sílica, diclorometano/metanol/i-propanol/água/ácido acético = 80/20/6/3/2) com subsequente extracção básica, foi obtido 14-0-{[(1R,2R,5S)-2-hidroxi-5-(2-metoxi-etilamino)-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS, 2S, 5P) (Rf = 0, 6, 330 mg, 78%), na forma de um sólido incolor. RMN de (500 MHz, DMSO-de, δ, PPm, - in ter alia): 6,14 (dd, 1H, 19- -H, J = 11 Hz e 18 Hz) , 5 ,54 (d, 1H, 14-H, J = 8 Hz), 5, 06 ( m, 2H, 2 0-H) / 4,74 (m, 1H, 2'- -OH) , 4,51 (2d, 1H, 11-OH, J = 6 Hz) , 3,50-3, 20 (m, 9H, 11 -H, 2' -Η, 22-H, NCH2CH2OCH3) , 2,97 (m, 1H, l'-H), 2,63 (m, 3H, 5'-H, NCH2CH2OCH3) , 2,40 (bs, 1H, 4-H) , 1,37 (s, 3H, 15-CH3) , 1,06 (s, 3H, I8-CH3), 0,82 (d, 3H, 17-CH3, J = 7 Hz), 0,63 (d, 3H, I6-CH3, J = 7 Hz) .
Passo E. Cloridrato de 14-0-{ [ (li?, 2R, 5S) —2— Hidroxi-5-(2-metoxi-etilamino)-ciclo-hexil-sulfanil]— acetil}-mutilina + cloridrato do diastereómero (IS, 2S, 5J?) .
Tratou-se 14-0-{[(IR,2R,5S)-2-Hidroxi-5-(2-metoxi-etilamino) -ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (1S,2S,5R) (330 mg, 0,58 mmol) de acordo com o método do Exemplo 1 Passo C, para se obter cloridrato de 14-0-{ [(IR, 2R, 5S)-2-hidroxi-5-(2-metoxi-etilamino)-ciclo- 90 ΡΕ2137143 hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + cloridrato do diastereó-mero (15, 25, 5.R) (355 mg, rendimento quantitativo, não corrigido) na forma de um sólido incolor. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-dõ, δ, ppm, ínter alia): 8,65 (bs, 2H, nh2+ ) , 6,13 (2dd, 1H, 19-H, J = 11 Hz e 18 Hz ) , 5, 55 (d, 1H, 14 -H, J = 8 Hz), 5, 06 ( m, 2H, : 2 0-H), 4,51 (d, , 1H, 11- OH, J = 6 Hz), 3,7 (m, 1H, 2 ' - -H), 3,57 ( m, 5H, nch2ch2och3: ), 3,42 (t, 1H, 11-H, J = 6 Hz), 3,33 (m, 2H, 22- H) , 3 ,2( 0-3,00 (m, 4H, 1 ' -H, 5 ’-H , NCH2CH2OCH3) , 2, 40 (bs, 1H, 4-H) r 1,36 (s, 3H, 15 -ch3) , 1,05 (s , 3H, 18-CH3), 0, 81 (d, 3H, 17- -CH3, J = 7 Hz) , 0, 63 (2d, 3H, 16-CH3, J = 7 Hz) . MS-ESI (m/z) : 566 (MH+) , 600 (MCI') .
Exemplo 19 - Cloridrato de 14-0-{[(IR,2R,4R*)-2-Hidroxi-4-(2-hidroxi-etilamino)-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + cloridrato do diastereómero (IS,2S,4S*).
Passo A. 14-0-{[(1R,2R,4R/S)-2-(terc-Butil-dife-nil-silaniloxi)-4-(2-hidroxi-etilamino)-ciclo-hexil-sulfanil] -acetil} -mutilina + diastereómero (IS,2S,4R/S). A uma solução de 14-0-{ [ (1.R, 2.R)-2-(terc-butil-difenil-silaniloxi)-4-oxo-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (15,25) (1,50 g, 2,01 mmol), pro veniente do Exemplo 13 Passo C, em 20 mL de diclorometano, foi adicionada etanolamina (0,12 mL, 2,01 mmol) e isopropóxido de titânio(IV) (0,7 mL, 2,52 mmol) e agitou-se durante 2 horas à temperatura ambiente. A mistura reaccional resultante foi tratada com cianoboro-hidreto de 91 ΡΕ2137143 sódio (126 mg, 2 mmol) de um dia para o outro à temperatura ambiente, diluído com mais diclorometano e extraída com uma solução de NaHC03. A fase orgânica foi secada sobre sulfato de sódio e filtrada. 0 filtrado foi sujeito a cromatografia (sílica, diclorometano/metanol = 30/1) para render 14-0-{ [ (IR, 2R, 4R/S)-2-(terc-butil-difenil-silaniloxi)-4 - (2-hidroxi-etilamino)-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (1S,2S,AR/S) (Rf = 0,3, 230 mg, 14% de rendimento). RMN de 1H (500 MHz, CDC13, δ, ppm, ínter alia) : 7,8-7,30 (m, 10H, aromático-H) , 6,47 (m, 1H, 19-H), 5, 75, 5, 69 (2d, 1H, 14-H, , J = 8 Hz) , 5 O 1 Cn ,15 (m, 1H, 20-H) , 4 ,04, 3, 65 (2m, 1H, 2 ' -H) , 3,64, 3,51 (2m, 2H, NCH2CH2OH) , 3, 36 (m, 1H, 11-H ), 2,74, 2,54 (2m, 2H, NCH2CH2OH) , 2,11 (bs, 1H, 4-H), 1, 44, 1, 45 (2s, 3H, I5-CH3) , 1,17, 1,16 (s, 3H, I8-CH3) , 1,08 (s, 9H, Si- terc- -butilo), 0,88 (2d, 3H, 17-CH3) , 0, 75-0, 65 (m, 3H, I6-CH3). MS-ESI {m/z) : 790 (MH+) , 824 (MCI-) .
Passo B. 14—O—{[(1R,2R,AR*)-2-Hidroxi-4-(2-hidro-xi-etilamino)—ciclo-hexil-sulfanil}-acetil}-mutilina + diastereómero (IS, 2S, AS*).
Uma solução de 14-0-{[(IR,2R,AR/S)-2-(terc-butil-dif enil-silaniloxi)-4-(2-hidroxi-etilamino)-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (1S,2S,AR/S) (230 mg, 0,29 mmol) em 15 mL de acetonitrilo, foi tratada com HF (aquoso a 40%, 2 gotas) e agitou-se de um dia para o outro à temperatura ambiente. A mistura reaccional foi 92 ΡΕ2137143 carregada com uma solução de NaHC03 e extraída com diclo-rometano. As fases orgânicas combinadas foram secadas sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. Após cromatografia (sílica, diclorometano/metanol = 6/1), foi obtido o composto do título (Rf = 0,4, 50 mg, 31% de rendimento). RMN de 1H (400 MHz, CDCI3, δ, ppm, inter alia) : 6,48 (dd, 1H, 19-H, J = 11 Hz e 17 Hz), 5, 76, 5, 68 (2d, 1H, 14-H, J = 8 Hz) , 5, 40 -5, 15 (m, 1H, 20- -H) , 3, 66 (t, 2H, NCH2CH2OH, J = 5 Hz) , 3, 50· -3, 15 (m, 4H, 2’- H, 11-H, 22H) / 2, 80 (m, 2H, NCH2CH2OH) , 2,63 (m, 2H, l'-H, 4'-H), 2,11 (bs, 1H, 4-H) , 1,46 (s, 3H, I5-CH3) , 1,18 (s, 3H, I8-CH3), 0,89 (d, 3H, I7-CH3) , 0,73 (2d, 3H, I6-CH3) . MS-ESI (m/z) : 552 (MH+) .
Passo C. Cloridrato de 14-0-{[(IR,2R,4R*)—2— Hidroxi-4-(2-hidroxi-etilamino)-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + cloridrato do diastereómero (IS,2S,4S*) .
Tratou-se 14-0-{[(IR,2R,4R*)-2-Hidroxi-4-(2-hi-droxi-etilamino)-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS, 2S, 4S*) (50 mg, 0,091 mmol) de acordo com o método do Exemplo 1 Passo C, para se obter cloridrato de 14-0-{ [ (IR, 2R, 4R*) -2-Hidroxi-4-(2-hidroxi-etilamino)-ciclo-hexil-sulfanil ]-acetil}-mutilina + cloridrato do diastereómero (IS, 2S, 4S*) (43 mg, 80% de rendimento), na forma de um sólido incolor. RMN de ^ (500 MHz, CDCI3, δ, ppm, inter alia): 6,4 6 (dd 1H, 19-H, J = 11 Hz e 17 Hz), 5,76 (d, 1H, 14-H, J = 8 Hz) 93 ΡΕ2137143 5, 37 (d, 1H, 2 0-H, J = 11 Hz), 5,23 (d, 1H, 2 0 -H, J = 17 Hz) , 3 / , 95 (m, 2H, NCH2CH2OH, J = 5 Hz), 3 , 58 ( (m, 1H, 2 ’ -H) , 3,40-3 ,10 (m, 5H , 11-H, 22H, NCH2CH2OH) , 2, 72 (m, 1H , í'· -H) , 2, 11 (bs, 1H, 'X* \—1 K 1 's, 3H, 15- nch3) t 1 ,18 (s , 3H , 18- -CH 3) , 0, 89 (d , 3H, 17-CHs, J = 7 Hz) 1 , 0, 73 (d, 3H , 16- -ch3, J = 7 Hz) . MS -ESI (m/z ) : 552 (MH+) , 586 (MCI-) .
Exemplo 20 - Cloridrato de 14-0-{ [ (1.R, 2.R, 4.R*)-4-Ciclo-hexilamino-2-hidroxi-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + cloridrato do diastereómero (IS, 2S, 4S*) .
Passo A. 14-0-{ [ (1.R, 2.R, 4.R*)-2-(terc-Butil-dife-nil-silaniloxi)-4-(2-hidroxi-etilamino)-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS, 2S, 4S*).
Fez-se reagir 14-0-{ [ (IR, 2.R)-2-(terc-butil-dif e-nil-silaniloxi)-4-oxo-ciano-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,2S) (1,50 g, 2,01 mmol), proveniente do Exemplo 13 Passo C, com ciclo-hexilamina (0,23 mL, 1,01 mmol), de acordo com o método do Exemplo 19 Passo A. Após processamento e cromatografia da mistura reaccional (sílica, diclorometano/metanol = 30/1), foi obtido 14-0-{[{lR,2R,4R*)-2-{terc-butil-difenil-silanilo- xi)-4-ciclo-hexilamino-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS, 2S, 4S*) (Rf = 0,13, 150 mg, 9% de rendimento). RMN de 1H (500 MHz, CDCI3, δ, ppm, inter alia) : 7,8-7,3 (m, 10H, aromático-H) , 6,48 (dd, 1H, 19-H, J = 11 Hz e 17 Hz), 94 ΡΕ2137143 5,76 (d, 1H, 14-H, J = 8 Hz), 5,40-5,15 (m, 1H, 20-H), 3,62 (m, 1H, 2'-H), 3,40-3,10 (m, 3H, 11-H, 22-H), 2,77 (m, 1H, 1' -H) , 2,11 (bs, 1H, 4-H) , 1,46 (s, 3H, 15-CH3) , 1,16 (s, 3H, 18-CH3) , 1,07 (s, 9H, Si-terc-butilo) , 0,88 (2d, 3H, I7-CH3) , 0, 74, 0, 73 (2d, 3H, I6-CH3) . MS-ESI {m/z) : 828 (MH+) , 862 (MCI").
Passo B. 14-O-í[(IR,2R,4Λ*)-4-Ciclo-hexil-2-hidroxi-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastere-ómero (IS, 2S, 4S*) .
Tratou-se 14-0-{ [{1R,2R, AR*) -2- {terc-butil-dife-nil-silaniloxi)-4-ciclo-hexilamino-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (15,25,45*) (100 mg, 0,121 mmol) com HF (aquoso a 40%, 30 gotas) durante 5 horas, de acordo com o método do Exemplo 19 Passo B. Após processamento e cromatografia da mistura reaccional (sílica, diclorometano/metanol = 10/1), foi obtido o composto do título (Rf = 0,13, 23 mg, 32% de rendimento). RMN de XH (500 MHz, CDC1 3, δ, ppm, inter alia) : 6,46 (dd, 1H, 19-H, J = 11 Hz e 17 Hz), 5,75 (m, 1H, 14-H) , 5,40-5,15 (m, 1H, 20-H), 3,49 (m, 1H, 2 ' -H) , 3,35 (m, 1H, 11-H), sistema-AB (vA = 3,30, vB = 3, 20, 22-H, J = 15 Hz), 3,01 (m, 1H, 4'-H), 2,67 (m, 1H, l’-H) 2,09 (bs, 1H, 4-H), 1,45 (s, 3H, I5-CH3) , 1,16 (s, 3H, I8-CH3), 0,87 (d, 3H, 17-CH3, J = 7 Hz), 0,72 (d, 3H, I6-CH3, J = 7 Hz). MS-ESI {m/z) : 591 (MH+) . 95 ΡΕ2137143
Passo C. Cloridrato de 14-0- [ { (IA, 2A, 4A*) —4— Ciclo-hexil-2—hidroxi-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + cloridrato do diastereómero (IS,2S,4S*) .
Tratou-se 14-0-{[(AR,2R,AR*)-4-Ciclo-hexil-2- hidroxi-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (AS, 25, 4S*) (23 mg, 0, 039 mmol) de acordo com o método do Exemplo 1 Passo C para se obter cloridrato de 14-0-{[(AR,2R,AR*)-4-Ciclo-hexil-2-hidroxi-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + cloridrato do diastereómero (AS,2S,AS*) (26 mg, rendimento quantitativo, não corrigido), na forma de um sólido incolor. RMN de ( 500 MHz, • CDCI3, δ, ppm, inter alia): 9, 3 (bs, 2H, NH2+) , 6 ,46 (dd, 1H, 19- -H, J = 11 Hz e 17 Hz), 5, 75 (d, 1H, 14-H, J = 8 Hz) , 5,38 (d, 1H, 20-H, J = 12 Hz) , 5,22 (d, 1H, 2 0- H, J = 17 Hz), 3, 50-3,00 (m, 6H, 2' -H, 11-H, 22H, NcHex), 2,65 (m, 2H, l'-H, 3a'-H), 2,10 (bs, 1H, 4-H) , 1,45 (s, 3H, 15-CH3) , 1,18 (s, 3H, I8-CH3) , 0,88 (d, 3H, 17-CHs, J = 7 Hz), 0,73 (d, 3H, I6-CH3, J = 7 Hz) . MS-ESI (m/z) : 591 (MH+) , 624 (MCI").
Exemplo 21 - 14-0-([(IA,2A,4A*)-4-Ciclopropilami-no-2-hidroxi-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS, 2S, 4S*) .
Passo A. 14—O—{[(IA,2R,4R*)-2-(terc-Butil-dife-nil-silaniloxi)-4-ciclopropilamino-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,2S,4S*). 96 ΡΕ2137143
Fez-se reagir 14-0-{[(IR,2R)-2-(terc-butil-dife-nil-silaniloxi)-4-oxo-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-muti-lina + diastereómero (15,25) (750 mg, 1,01 mmol) , proveni ente do Exemplo 13 Passo C, com ciclopropilamina (0,07 mL, 1,01 mmol) em 40 mL de diclorometano, de acordo com o método do Exemplo 19 Passo A. Após o tratamento com cianoboro-hidreto de sódio, foi adicionado etanol (0,7 mL), e a mistura foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. Após processamento e cromatografia da mistura reaccional (sílica, diclorometano/metanol = 30/1), foi obtido 14-0-{[(IR,2R,AR*)-2-(terc-butil-difenil-sila-niloxi)-4-ciclopropilamino-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS, 25,45*) (Rf = 0, 35, 283 mg, 36% de rendimento). RMN de 1H (500 MHz, DMSO-d6, δ, ppm, inter alia): 7,65-7,35 (m, 10H, aromático-H), 6,12 (m, 1H, 19-H), 5,52, 5,51 (2d, 1H, 14-H, J = 8 Hz), 5,00 (m, 1H, 20-H) , 4,50 (t, 1H, 11-OH, J = 5,52 Hz), 3,94 (m, 1H, 2'-H), 3,41 (m, 1H, 11-H), 3,05-2,80 (m, 4H, 22-H, l'-H, 4'-H), 2,39 (bs, 1H, 4-H) , 1,86 (m, 1H, cPr) , 1,33 (2s, 3H, 15-CH3) , 1,12 (s, 12H, 18-CH3, Si-terc-butilo) , 0,81 (d, 3H, 17-CH3, J = 7 Hz), 0, 57, 0, 56 (2d, 3H, I6-CH3, J = 7 Hz), 0,25, 0,06 (2m, 4H, cPr) . MS-ESI (m/z) : 786 (MH+) , 784 (M-H)".
Passo B. 14-0-{ [ (IR, 2R, 4R*) -4-Ciclopropilamino-2-hidroxi-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (1S,2S, 4S*). 97 ΡΕ2137143
Tratou-se 14-0-{[(1R,2R,AR*) -2- {terc-butil-dife-nil-silaniloxi)-4-ciclopropil-amino-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (1S,2S,AS*) (223 mg, 0,284 mmol) de um dia para o outro com fluoreto de tetrabutil-amónio, de acordo com o método do Exemplo 13 Passo G. Após processamento e cromatografia da mistura reaccional (sílica, diclorometano/metanol = 10/1), foi obtido o composto do título (Rf = 0,2, 10 mg, 6% de rendimento). RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de, δ, ppm, inter alia): 6 ,13 (dd, 1H, 19-H, J = 11 Hz e 17 Hz) , 5,50 (d, 1H, 14-H, J = 7 Hz) , 5, 05 (m, 1H, 20-H) , 4,87 (m, 1H, 2’-OH), 4,50 (d, 1H, 11-OH, J : = 6 Hz), 3, 55-3,20 (m, 4H, 22-H, 2'-H, 11- H) , 2,50 (m, 2H, 1 ’-H, 4'-H), 2,40 (bs, 1H, 4-H), 2,01 (m, 1H, cPr) , 1,35 (s, 3H, I5-CH3) , 1,04 (s, 3H, I8-CH3), 0,81 (d, r 3H, 17-CH3, J = 7 Hz) , 0,62 (d, 3H, I6-CH3, J = 6 Hz ) , 0, 32, 0,15 (2m, 4H, cPr) . MS-ESI [m/z) : 548 (MH+) , 1095 (2MH+) , 1117 (2MNa+) , 582 (MCI-) .
Exemplo 22 - Cloridrato de 14-0-{[(IR,2R,5S*)-4-Ciclopropilamino-2-hidroxi-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil)-mutilina + cloridrato do diastereómero (IS,2S,5R*).
Passo A. 14-0-{[(IR,2R)-2-Hidroxi-4-oxo-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,2S) e 14-0-{[(1R,2R)-2-Hidroxi-5-oxo-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,2S).
Dissolveu-se 14-0-{[(IR,8R)-7-hidroxi-l,4-dioxa-espiro[4.5]dec-8-ilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereó- 98 ΡΕ2137143 mero (75, 85), bem como 14-0-{ [ (7.R, 8.R)-8-hidroxi-l, 4-dioxa-espiro[4.5]dec-7-ilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereó-mero (75,85) (3, 96 g, 7,19 mmol) , em 50 mL de dioxano, e tratou-se com HC1 a 4N (5 mL, 20 mmol) durante 6 horas à temperatura ambiente. A mistura reaccional foi concentrada sob pressão reduzida, carregada com uma solução de NaHC03 e extraída três vezes com acetato de etilo. As fases orgânicas foram secadas sobre sulfato de sódio e filtradas. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida e sujeito a cromatografia (sílica, ciclo-hexano/dioxano = 2/1) para render uma mistura dos compostos do título (Rf = 0, 30, 860 mg, 24% de rendimento). RMN de 1H (500 MHz, DMSO-dõ, δ, ppm, inter alia) : 6, 13 (m, 1H, 19-H) , 5,56, 5,54 ( T3 CM 1H, 14-H, J = 8 Hz), 5,38, 5,32 (2m, 1H, 2'-OH), 5, 05 (m, 2H, 20-H), 4, ,50 (d, 1H, 11-OH, J = 5 Hz) , 3,95, 3, 83 (2m, . 1H , 2'-H), 3,50-3, 20 (m, 3H, 11-H, 22-H), 3,17, 3,07 (2m, 1H, l'-H), 2,40 (bs, 1H, 4-H), 1,35, 1,33 (2s, 3H, 15-CH3) , 1,05 (s, 3H, I8-CH3) , 0,81 (d, 3H, I7-CH3, J = 7 Hz), 0, 63, 0, 62 (2d, 3H, I6-CH3). MS-ESI {m/z) : 529 (MNa+) , 505 (Μ-ΗΓ.
Passo B. 14-0-{[(1R,2R,5S*)-5-Ciclopropilamino-2-hidroxi-ciclo—hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereó-mero (IS, 2S, 4R*) e 14-0-{ [ (1£, 2i?, 4S*)-4-Ciclopropilamino-2-hidroxi-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereó-mero (IS, 2S, 4J?*) .
Fez-se reagir 14-0-{[(IR,2R)-2-Hidroxi-4-oxo- ciclo-hexi1-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero 99 ΡΕ2137143 (IS, 2S) e 14-0-{ [ (1-R, 2iR)-2-hidroxi-5-oxo-ciclo-hexil-sul-fanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,2S) (250 mg, 0, 493 mmol) com ciclopropilamina (0,03 mL, 0, 493 mmol) em 15 mL de diclorometano, de acordo com o método do Exemplo 19 Passo A. Após o tratamento com cianoboro-hidreto de sódio, foi adicionado etanol (0,7 mL) e a mistura foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. Após processamento e cromatografia da mistura reaccional (sílica, diclorometano/metanol = 20/1), foram obtidos 14-0- {[(1R,2R,5S*)-4-ciclopropilamino-2-hidroxi-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (1S,2S,5R*) (a) (diclorometano/metanol = 10/1, Rf = 0,22, 34 mg, 13% de rendimento) e 14-0-{[(IR, 2R,4S*)-4-ciclopropilamino-2-hi-droxi-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS, 2S, AR*) (b) (diclorometano/metanol = 10/1, Rf = 0,13, 26 mg, 4% de rendimento). (a) : RMN de 1H (500 MHz, DMS0-d6, δ, ppm, inter al ia) : 6 ,13 ( m, 1H, 19-H, J = 11 e 18 Hz), 5,53 (d , 1H, 14 -H, J = 8 Hz) , 5, 0' 6 (m, 1H, 20- H), 4,67 (t :, 1H, 2’ -OH) , 4, 47 (d, 1H, 1 1-OH, J = 6 Hz ) , 3,50-3,20 (m, 4H, 11-H, 2 ' -H, 22 -H) , 2, 92 (m, 1H, 1 ’ -H ) , 2,71 (m, 1H 5 ' -H) , 2,39 (b s, 1H, 4-H) f 1,96 (m, 1H, cPr) , 1,36 (s, 3H, 15- -ch3) , 1, 05 (s, 3H, 18 -ch3) , 0, 81 (d, 3H, I7-CH3, J = 7 Hz), 0, 62 (d , 3H, : L6-CH3, J = 7 Hz) , 0, 32, 0, 16 (2m, 4H, cPr) . MS -ES I (m/z) : 548 (MH + ) , 546 (M- -ΗΓ • (b) RMN de 1H (500 MHz , DMSO-de, δ, ppm, inter al ia) : 6 , 13 ( m, 1H, 19-H, J = 11 e 18 Hz), 5,54 (d , 1H, 100 ΡΕ2137143 14 -H, J = = 8 Hz) , 5,05 (m, 1H, 20-H) , 4 , 70 l Id, 1H, 2’-OH; J = 5 Hz) / 4 ,47 (d, 1H, 11- OH, J = 6 Hz) , 3, 68 (m, 1H, 2’ -H) , 3, 45- 3,15 (m, 3H, 11- H, 22-H) , 2 ,86 i (m, 1H, 4 1 —H) , 2, 71 (m, 1H, 1' -H) , 2,39 (bs , 1H, 4-: H) , 1,96 (m , 1H :, cPr) , 1, 35 (s, 3H, 15-CH3), 1, 05 (s, 3H, 18- CH3) , 0, 81 (d, 3H, 17 -ch3, j = 7 Hz), 0, 62 (d, 3H , 16- ch3, J = 7 Hz) , 0,32, o, 15 (2m, 4H, , cPr) . MS-ESI {m/z) : 548 (MH+) , 546 (M-H)".
Passo C. Cloridrato de 14-0-{ [ (li?, 2R, 5S*) —5— Ciclopropilamino-2-hidroxi-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + cloridrato do diastereómero (IS,2S,5R*).
Tratou-se 14-0-{[(1R,2R,5S*)-4-Ciclopropilamino-2-hidroxi-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS, 25,5R*) (34 mg, 0, 062 mmol) de acordo com o método do Exemplo 1 Passo C, para se obter cloridrato de 14-0-{ [{IR, 2R, 5R*)-4-Ciclopropilamino-2-hidroxi-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + cloridrato do diastereómero (IS, 2S, 5S*) (24 mg, 66% de rendimento), na forma de um sólido incolor. RMN de ^ (500 MHz, DMS0-d6, δ, ppm, inter alia) : 6, 13 (m 1H, 19-H, J = 11 e 18 Hz), 5,55 (d, 1H, 14-H, J : = 8 Hz) , 5, 05 (m, 1H, 20-H) , 5,00 (m, 1H, 2'-OH), 4,54 (d, 1H, 11-OH, J = 6 Hz), 3,66 (m, 1H, 2’-H), 3,45-3,05 (m, 5H 11-H, 22- Η, 1’-H, 5 ’-H), 2,41 (bs, 1H, 4-H), 1,36 (s, 3H 15-CH3) , 1,06 (s, 3H, 18-CH3), 0,82 (d, 3H, 17- -ch3. J = 7 Hz) , 0, 63 (m, 7H, 16-CH3, cPr) . MS-ESI {m/z) : 548 (MH+) , 582 (MCI-) . 101 ΡΕ2137143
Exemplo 23 - Cloridrato de 14-0-{ [ (1.R, 2R, 4S*) -4-Ciclopropilamino-2-hidroxi-ciclo-hexil-sulfanil)-acetil}-mutilina + cloridrato do diastereómero (IS,2S,4R*).
Tratou-se 14-0-{[(IR,2R,4S*)-4-Ciclopropilamino-2-hidroxi-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS, 2S, Ar*) (10 mg, 0,018 mmol) , proveniente do Exemplo 21 Passo B, de acordo com o método do Exemplo 1 Passo C, para se obter o composto do titulo (20 mg, rendimento quantitativo, não corrigido), na forma de um sólido incolor. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-dõ, δ, ppm, inter alia) : 8, 6 (bs, 2H , nh2+) , 6, 13 (m, 1H, 19-H, J = 11 e 18 Hz) , 5 , 55 (d, 1H, 14 -H, J = 8 Hz) , 5 ,26 (m, 1H, 2'-OH), 5, 05 (m, 1H, 20 -H) , 4, 52 (d, 1H, 11-OH, J = 6 Hz) , ; 3,93 ( m, 1H, 2 1 -H) , 3, 45-3,20 (m, 4H, 11-H , 22- H, 4'-H), 2,95 (m, 1H, 11 -H) , 2, 64 (m, 1H, cPr) ' / 2 ,40 (bs , 1H, 4-H) , 1/ 36 (s, 3H, 15 -ch3) , 1,05 (s, 3H , 18 -CH3), 0, 81 (d f 3H, 17- •ch3, J = 7 Hz), 0,74 (m, 4H, cPr), 0, 62 (d, r 3H, 16- ch3, J = 7 Hz). MS-ESI {m/z) : 548 (MH+) , 582 (MCI-) .
Exemplo 24 - Cloridrato de 14-0-{ [ (1.R, 2R, SR*) -2-Hidroxi-5-morfolin-4-il-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil)-mutilina + cloridrato do diastereómero (IS,2S,5S*).
Passo A. 14-0-{[(ΙΛ,2R,5R*)-2-Hidroxi-5-morfolin-4-il-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero 102 ΡΕ2137143 (IS, 2S, 5S*) e 14—O—{ [ (IR, 2R, 5S*) -2-Hidroxi-5-morfolin-4-il-ciclo—hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS, 2S, 5R*) .
Fez-se reagir 14-0-{[(IR,2R)-2-Hidroxi-4-oxo-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS, 2S) e 14-0-{[(IR,2R)-2-hidroxi-5-oxo-ciclo-hexil-sul-fanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,2S) (270 mg, 0,533 mmol), provenientes do Exemplo 22 Passo A, com morfolina (0,05 mL, 0,533 mmol) em 10 mL ed diclorometano, de acordo com o método do Exemplo 19 Passo A. Após a adição de cianoboro-hidreto de sódio, foi-lhe adicionado etanol (0,6 mL) e a mistura foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. Após processamento e cromatografia da mistura reaccional (silica, diclorometano/metanol = 20/1), foram obtidos 14-0-{[(IR,2R,5R*)-2-Hidroxi-5-morfolin-4-il-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS, 2S,5S*) (a) (diclorometano/metanol = 10/1, Rf = 0,32, 23 mg, 7% de rendimento) e 14-0-{[(IR,2R,5S*)-2-Hidroxi-5-morfolin-4-il-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS, 2S, 5R*) (b) (diclorometano/metanol = 10/1, Rf = 0,27, 40 mg, 13% de rendimento). (a) : RMN de (500 MHz, CDCI3, δ, ppm, inter alia) : : 6,47 (m, 1H, 19-H), 5,77, 5,75 ( 2d, 1H, 14-H, C-l II OO Hz), 5, 35 (dd, 1H, 2 0-H, J = 3 e 11 Hz ), 5,21 1 (d, 1H, 2 0-H, J = 17 Hz), 3,70 (s, 4H, morfolina), 3,40-3, 15 (m, 4H, 2'-Η, 11-H, 22H), 2,53 (m, 5H, l'-H, morfolina), 2,10 (bs, 1H, 4-H) , 1,45 (s, 3H, 15-CH3) , 1,17 (s, 3H, I8-CH3), 103 ΡΕ2137143 0,87 (d, 3H, 17-CH3, J = 7 Hz), 0, 73, 0, 72 (2d, 3H, I6-CH3, J = 7 Hz). MS-ESI (m/z) : 578 (MH+) , 600 (MNa+) , 576 (M-H)", 612 (MCI")· (b) : RMN de 1H (500 MHz, CDCI3, δ, ppm, inter alia) : 6, 47 (m, 1H, 19-H), 5,77, 5,75 (2d, 1H, 14-H, 00 II l~D Hz) , 5,40-1,15 (m, 2H, 20-H), 3, 70 (s, 4H, morfolina), 3, 47 (m, 1H, 2' -H) , 3,35 (m, 1H, 11-H), 3, 22 (m, 2H, 22-H), 2, 98 (m, 1H, 1 ’-H), 2,54, 2 r 45 (2m, 4H, morfolina), 2,10 (bs, 1H, 4-H) , 1,45 (s, 3H, 15- CH3), 1,17 (s, 3H, I8-CH3), 0, 88 (d, 3H, 17-CHs, J = 6 Hz), 0,72 (d, 3H, I6-CH3, J = 7 Hz) MS-ESI (m/z): 578 (MH+) , 600 (MNa+) , 576 (M-H)-, 612 (MCI").
Passo B. Cloridrato de 14-0-{ [ (1.R, 2.R, 5.R*)-2-Hidroxi-5—morfolin—4—il—ciclo—hexilsulfanil]—acetil}— mutilina + cloridrato do diastereómero (IS,2S,5S*).
Tratou-se 14-0-{[(1R,2R,5R*)-2-Hidroxi-5-morfo-lin-4-il-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS, 2S, 5S*) (10 mg, 0,017 mmol) , de acordo com o método do Exemplo 1 Passo C, para se obter cloridrato de 14-0-{[{IR,2R,5R*)-2-Hidroxi-5-morfolin-4-il-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + cloridrato do diastereómero (IS, 2S, 5S*) (20 mg, rendimento quantitativo, não corrigi do), na forma de um sólido incolor. RMN de 1H (500 MHz, CDCI3, δ, ppm, inter alia) : 13 (bs, 1H, NH+) , 6,47 (m, 1H, 19-H) , 5, 78, 5, 76 (2d, 1H, 14-H, J = 9 Hz); 5,36 (dd, 1H, 20-H, J = 4 e 11 Hz), 5,23 (d, 1H, 104 ΡΕ2137143 20-H, J = 172 Hz), 4,40, 3,98 (2bs, 4H, morfolina), 3, 45-3,20 (m, 4H, 2'-H, 11-H, 22-H) , 2,91, 2,56 (2m, 5H, morfolina, l'-H), 2,11 (bs, 1H, 4-H) , 1,46 (s, 3H, 15-(3¾) , 1,20, 1,19 (2s, 3H, I8-CH3) , 0,89 (d, 3H, 17-CH3, J = 7 Hz), 0, 74, 0, 73 (2d, 3H, I6-CH3, J = 7 Hz). MS-ESI (m/z) : 578 (MH+) , 600 (MNa+) , 612 (MCI").
Exemplo 25 - Cloridrato de 14-0-{ [ (IR, 2.R, S5*)-2-Hidroxi-5-morfolin-4-il-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + cloridrato do diastereómero (IS,2S,5R*).
Tratou-se 14-0-{[(IR,2R,S5*)-2-Hidroxi-5-morfo-lin-4-il-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (15,2S, 5R*) (26 mg, 0, 045 mmol) , proveniente do Exem- pio 24 Passo A, de acordo com 0 método do Exemplo 1 Passo c, para se obter 0 composto do titulo (15 mg, 54% de ren- dimento ), na forma de um sólido incolor. RMN de 1H (500 MHz, CDCI3, δ, ppm, inter alia) : 12,8 (bs, 1H, NH+) , 6,47 (m, 1H, 19-H), 5 ,75 (m, 1H, 14-h; 1, 5,40-5,15 (m, 2H, 20-H), 4,40, 3,98 (2bs, 4H, morfolina, 2'-H), 3,50 -3,15 (m, 6H, 5' -Η, 1 1-H, 22- H, morfolina), 2,98 (m, 2H, morfolina), 2,11 (bs, 1H, 4-H ), 1,46 (s, 3H, 15-CHs), 1, 19 (s, 3H, I8-CH3), 0, 89 (d, 3H, 17-CHs, J = 7 Hz) , 0,74 (d, 3H, I6-CH3, J = 7 Hz). MS-ESI {m/z) : 578 (MH+) , 600 (MNa+) , 612 (MCI").
Exemplo 26 - Cloridrato de 14-0-{[(IR,2R,5S)-5-Amino-2'-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-19,20-di-hidro-mutilina + cloridrato do diastereómero (IS,2S,5R). 105 ΡΕ2137143
Passo A. 14-0-{ [ (1.R, 2R, 5S) -5-terc-Butoxicarbonil-amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-19,20-di-hidromutilina + diastereómero (IS, 2S, 5.R). A uma solução de 14-0-{ [ (lí?, 2i3, 5S)-5-terc-butoxi-carbonilamino-2-hidroxi-ciclo-hexi1sulfanil]-acetil}-muti-lina + diastereómero (IS, 2S, SR) (1 g, 1,65 mmol) , proveniente do Exemplo 1 Passo A, em 20 mL de etanol, foi adicionado paládio sobre carvão (a 10%, 515 mg, 0,48 mmol) e hidrogenou-se de um dia para o outro à temperatura ambiente. A mistura reaccional foi tratada com diclorometano, filtrada, e o filtrado foi concentrado até à secura sob pressão reduzida, para se obter 14-0-{[(IP,2P,5S)-5-terc-butoxicarbonilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-19,20-di-hidro-mutilina + diastereómero (IS,2S,5R) (1 g, rendimento quantitativo), na forma de um sólido incolor. MS-ESI (m/z) : 632 (MNa+) .
Passo B. 14-0-{[(ΙΛ,2R,5S)-5-Amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-19,20-di-hidro-mutilina + diastereómero (IS, 2S, 5R) .
Tratou-se 14-0-{[(IR,2R,55)-5-terc-butoxicarboni lamino-2-hidroxi-ciclo-hexi1sulfanil]-acetil}-19, 2 0-di-hidro-mutilina + diastereómero (IS,2S,5R) (lg, 1,64 mmol) de acordo com o método do Exemplo 1 Passo B. Após processamento e cromatografia da mistura reaccional (sílica, acetato de etilo/metanol/solução de amoníaco a 35% = 106 ΡΕ2137143 33/66/1), foi obtido 14-0-{ [ (1.R, 2.R, 55)-5-amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-19,20-di-hidro-mutilina + di-astereómero (15,25,5R) (Rf = 0, 35, 590 mg, 71% de rendi mento), na forma de um sólido incolor. RMN de 1H (400 MHz, DMS0-d6, δ, ppm, inter alia): 5,51 (d, 1H, 14-H, J = 8 Hz) 1, 4,74 (bs, 1H, 2’-OH), 4,37 (m, 1H, 11-OH), 3,49 (m, 1H, 2'-H), 3,45-3,15 (m, 3H, 11-H, 22-H), 3, 00 (m, 1H, l’-H), 2,82 (m, 1H, 5'-H), 2,35 (bs, 1H, 4-H), 1, 34 (s, 3Η, 15-CH3) , 0,85 (s, 3H, I8-CH3), 0,80 (d, 3H, 17 -ch3, j = 7 Hz) , 0,63 (m, 6H, I6-CH3, 20-H) .
Passo C. Cloridrato de 14-0-{ [ (1.R, 2.R, 5S)-5—Amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-19,20-di-hidro-mutilina + cloridrato do diastereómero (IS,2S,5R).
Tratou-se 14-0-{[(IR,2R,5S)-5-Amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-19,20-di-hidro-mutilina + diastereómero (15,25,5R) (590 mg, 1,16 mmol) de acordo com o método do Exemplo 1 Passo C, para se obter cloridrato de 14-0-{[(IR,2R,5S)-5-amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-19,20-di-hidro-mutilina + cloridrato do diastereómero (15,2S,5R) (566 mg, 89% de rendimento), na forma de um sólido incolor. RMN de "'"H (500 MHz, DMSO-d, 6 r §, ppm, inter ali '.a) : 7,9 (bs, 3H, nh3+) , 5,52 (d, 1H, 14- H, J = 8 Hz), 3, 80- -3, 00 (m, 6H, 2 ’ -H v 11-H, 22-H, 1' ’-H, 5’- H) , 2,35 (bs, 1H, , 4- -H) , 1,35 (s, 3H, 15-CH3 ), 0,85 (s, 3H, 18- ch3) , 0, 80 (d, 3H, 17- ch3, J = 7 Hz) , 0, 63 (m, 6H, 16- ch3, 20-H) 1 . MS-ESI [m/z) : 510 (MH+) , 544 (MCI ). 107 ΡΕ2137143
Exemplo 27 - Cloridrato de 14-0-{[(1.R,2R,5S)-5-Etilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-19,20-di-hidro-mutilina + cloridrato do diastereómero (IS,2S,5R).
Passo A. 19,20-Di-hidro-pleuromutilina tiol.
Uma solução de tosilato de 19,20-di-hidro-pleuro-mutilina (Egger, H.; Reinshagen, H. Journal of Antibiotics 1976, 29, 915-927.) (11,5 g, 22,2 mmol) em 50 mL de acetona, foi tratada com tioureia (1,69 g, 22,2 mmol) sob refluxo durante 1,5 horas. A mistura reaccional foi evaporada até à secura sob pressão reduzida e dissolvida em etanol. A solução foi carregada com metabissulfito de sódio (4,57 g, 24,0 mmol) dissolvido em 20 mL de água e 100 mL de acetato de etilo. A mistura bifásica foi sujeita a refluxo durante 1,5 horas sob agitação vigorosa. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, as fases foram separadas e a fase aquosa foi extraída três vezes com acetato de etilo. As fases orgânicas combinadas foram secadas sobre sulfato de sódio, filtradas, e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. Após cromatografia (sílica, ciclo-hexano/acetato de etilo = 2/1), obteve-se 19,20-di-hidro-pleuromutilina tiol (ciclo-hexano/acetato de etilo = 4/3, Rf = 0,24, 3 g, 34% de rendimento). RMN de ^ (500 MHz, DMSO-de, δ, ppm, inter alia) : 5, 53 (d, 1H, 14-H, J = 8 Hz) , 4,40 (d, 1H, 11-OH, J = 6 Hz) , 3,36 (t, 1H, 11-H, J = 6 Hz), 3,25 (m, 2H, 22-H), 2, 85 ( t, 1H, 5H, J = 8 Hz), 2,38 (bs, 1H, 4-H) , 1,37 (s, 3H, 15-CH3) , 108 ΡΕ2137143 0,87 (s, 3H, I8-CH3), 0,83 (d, 3H, 17-CH3, J = 7 Hz), 0,65 (m, 6H, I6-CH3, 2 0-H) .
Passo B. 14-0-{ [ (1J?, 2R, 5S) -5- (terc-Butoxicarbo-nil-etil-amino)-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}- 19.20- di-hidro-mutilina + diastereómero (IS,2S,5R).
Tratou-se éster terc-butílico do ácido N-Etil-N-(cís-3,4-epoxi-ciclo-hexil)-carbâmico (2,8 g, 11,6 mmol), proveniente do Exemplo 7 Passo B, com 19,20-di-hidro-pleuromutilina tiol (4,60 g, 11,6 mmol), de acordo com o método do Exemplo 1 Passo A3, ao longo do fim de semana à temperatura ambiente. Após processamento e cromatografia da mistura reaccional (silica, ciclo-hexano/acetato de etilo = 1/1), foi obtido 14-0-{[(IR,2R,5S)-5-(terc-Butoxicarbonil-etil-amino)-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-19, 2 0-di-hidro-mutilina + diastereómero (IS,2S,5R) (Rf = 0,35, 1,98 g, 27% de rendimento).
Passo C. 14-0-{ [ (1.R, 2R, 5S) -5-Etilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-19,20-di-hidro-mutilina + diastereómero (IS, 2S, SJ?) .
Tratou-se 14-0-{[(lR,2A,5S)-5-(terc-Butoxicar- bonil-etil-amino)-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}- 19.20- di-hidromutilina + diastereómero (1S,2S,5R) (1,98 g, 3,10 mmol) de acordo com o método do Exemplo 1 Passo B. Após processamento e cromatografia da mistura reaccional (silica, acetato de etilo/metanol/solução de amoníaco a 35% 109 ΡΕ2137143 = 100/10/1), foi obtido 14-0-{ [ (1.R, 2Λ, 5S)-5-etilamino-2- hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-19, 20-di-hidro-muti- lina + diastereómero (IS,2S,5R) (acetato de etilo/meta-nol/solução de amoníaco a 35% = 100/100/1, Rf = 0,7, 150 mg, 9% de rendimento), na forma de um sólido incolor. RMN de ^ (4 00 MHz, DMS0-d6, δ, ppm, inter alia) : 5, 52 (d, 1H, 14- H, J = 7 Hz ), 4,72 (m , 1H, 2 ’ -OH ), 4,36 ( d, 1H, 11-OH, J = 6 Hz ), 3, 50-3,15 (m, 4H, 2 ' -Η, 1 1-H, 22-H) , 2 ,97 (m, 1H, l'-H), 2, 62 (m, 1H, 5'- H) , 2, 47 (m, 2H, NCH2) r 2 , 35 (bs, 1H , 4-H), 1,35 (s, 3H, 15- -ch3) , 0, 98 1 (m, 3H, NCH2CH3) , O 00 Cn (s , 3H, li 3-CH3) , 0, 80 (d, 3H, 7 -ch3, J = 7 Hz) r 0 , 63 (m, 6H, 16-CH3, 20-h; ) . MS-ESI (m/z) : 538 (MH+) , 560 (MNa+) , 536 (Μ-ΗΓ, 572 (MCI-) .
Passo D. Cloridrato de 14-0-{ [ (1.R, 2.R, 5S)-5-Etil-amino—2—hidroxi—ciclo—hexilsulfanil]—acetil}—19,20—di— hidro—mutilina + Cloridrato do diastereómero (1S,2S,5Λ) .
Tratou-se 14-0-{[(1R,2R,5S)-5-Etilamino-2-hidroxi -ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-19,20-di-hidro-mutilina + diastereómero (IS,2S,5R) (38 mg, 0,071 mmol) de acordo com o método do Exemplo 1 Passo C, para se obterem os compostos do título (40 mg, rendimento quantitativo) , na forma de um sólido incolor. RMN de (400 MH z, DMSO- -d6, δ, ppm, in\ ter alia ) : 5, 53 (d, 1H, 14 -H, J = 8 Hz) , 4, 97 (m, 1H, 2 ' -OH) , 4, 40 (d, 1H, 11-OH, J = 6 Hz) / 3, 64 (m, 1H, , 2’· -H) , 3, 45-3, 20 (m, 3H, 11-H, 22-H) l, 2 ,98 (m, 1H, , 1' ’-H) , 2, 94 (m, 1H, 5'- H) , 2,88 (m, 2H, NCH2) , 2,37 (bs, 1H, 4-H) , 1,34 (s, 3H, 15-CH3) , 110 ΡΕ2137143 0,98 (t, 3H, NCH2CH3, J = 7 Hz), 0,85 (s, 3H, I8-CH3), 0,80 (d, 3H, I7-CH3, J = 7 Hz), 0,63 (m, 6H, I6-CH3, 20-H). MS-ESI {m/z) : 538 (MH+) .
Exemplo 28 - 14-0-{[(IA,2R,5R)-5-Amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-19,20-di-hidro-mutilina + di-astereómero (IS, 2S, 5S).
Passo A. 14-0-{[(IA,2A,5S)-5-(terc-Butil-dimetil-sililoxi)-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-19,20-di-hidro-mutilina + diastereómero (IS,2S,5A) .
Tratou-se terc-Butil-dimetil-{eis-3,4-epoxi-ci- clo-hexiloxi)-silano (864 mg, 3,78 mmol), proveniente do Exemplo 4 Passo A, com 19,20-di-hidro-pleuromutilina tiol (1,5 g, 3,78 mmol), proveniente do Exemplo 27 Passo A, de acordo com o método do Exemplo 1 Passo A3. Após processamento e cromatografia da mistura reaccional (sílica, ciclo-hexano/acetato de etilo = 3:1), foi obtido 14-0- {[(1R,2R,5S)-5-(terc-butil-dimetil-sililoxi)-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil ]-acetil}-19,20-di-hidro-mutilina + diastereómero (IS,2S,5R) (ciclo-hexano/acetato de etilo = 1/1, Rf = 0,45, 1,2 g, 51% de rendimento), na forma de um sólido incolor. RMN de XH (500 MHz, DMSO-dg, δ, ppm, inter alia): 5, 50 (d, 1H, 14-H, J = > 8 Hz), 4,81 (m, 1H, 2’-OH), 4,38 (d, 1H, 11-ON, J = 6 Hz), 3,88 (m, 1H, , 5’- H) , 3,50-3,20 (m, 4H, 2'-Η, 11H , 22- •H) , 2,95 (m, 1H, 1' -H) , 2,34 (bs, 1H, 4- -H) , 1,34 (s, 3H, I5-CH3) , 0,84 (m, 12H, I8-CH3, terc- -butilo) , 111 ΡΕ2137143 0,80 (d, 3H, I7-NCH3, J = 7 Hz), 0,63 (m, 6H, I6-CH3, 20-H) , 0,02 (s, 6H, Si(CH3)2).
Passo B. 14-0-{ [ (IR, 2.R, 5S)-2,5-Di-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil)-acetil)-19,20-di-hidro-mutilina + diastereó-mero (IS, 2S, 5R) .
Tratou-se 14—0—{[(1R, 2R,5S)-5-(terc-butil-dime-til-sililoxi)-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-19,20-di-hidro-mutilina + diastereómero (IS,2S,5R) (1,2 g, 1,92 mmol), de acordo com o método do Exemplo 4 Passo C. Após processamento e cromatografia da mistura reaccional (sílica, ciclo-hexano/acetato de etilo = 1/4), foi obtido 14-0-{[(1R,2R,5S)-2,5-di-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-19,20-di-hidro-mutilina + diastereómero (IS,2S,5R) (ciclo-hexano/acetato de etilo = 1:1, Rf = 0,2, 720 mg, 73% de rendimento), na forma de um sólido incolor. de "H (500 MHz, DMSO-de, δ, ppm, inter a ilia) : 5 O LO (d, 14- -H, J = 8 Hz) , 4,74 ( :d, 1H, 2' ' -OH , J = 3 Hz ) , ‘ 4,42 1H, 5 '-OH), 4,38 (d, 1H, 11- -OH, J = 6 Hz) , 3, . 67 (m, 1H, H) , 3, 50-3,20 (m, 4H, 2 ' -N, 11-H, 22 -H) , • 2, 96 (m, 1H, H) , 2, 34 (bs, 1H, 4-H) , 1,34 (s, 3H, 15- ch3) , 0 ,84 (s, 18- -CH3), 0,80 (d, 3H, 17-CHs, J = = 7 Hz) , 0, 63 (m, 6H, I6-CH3, 20-H) .
Passo C. 14-0-{[(IR,2R,5S)-2-Hidroxi-5-metanos-sulfoniloxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-19,20-di-hidro-mutilina + diastereómero (IS,2S,5R). 112 ΡΕ2137143
Tratou-se 14-0-([{IR,2R,5S)-2,5-di-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-19,20-di-hidro-mutilina + diastereó-mero (IS,2S,5R) (720 mg, 1,41 mmol) de acordo com o método do Exemplo 4 Passo D. Após processamento e cromatografia da mistura reaccional (sílica, ciclo-hexano/acetato de etilo = 1/1), foi obtido 14-0-{ [ (IA, 2.R, 5S)-2-hidroxi-5-metanos-sulfoniloxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-19,20-di-hidro-mutilina + diastereómero (IS,2S,5R) (ciclo-hexano/acetato de etilo = 1/2, Rf = 0, 4, 640 g, 77% de rendimento), na forma de um sólido incolor. RMN de XH (500 MHz, DMSO-de, δ, PPm, inter alia) : 5, 51 (d, 1H, 14-H, J = 8 Hz), 4,79 (m, 1H, 5 ’ -H) , 4,38 (bs, 1H, 11-OH), 3, 00 1 0 20 (m, 7H, 2 ’-H, 11- Η, 22-H, SO2CH3) , 2,93 (m, 1H, 1' -H) , 2,35 (bs, 1H, 4-H) , 1,35 (s, 3H, 15-CH3) , 0,84 (s, 3H, 18-CH3), 0,80 (d, 3H, 17-CH3, J = 7 Hz), 0,63 (m, 6H, I6-CH3, 2 0-H) .
Passo D . 14-0-{ [ (1J?, 2R, 5R) -5-Azido-2-hidroxi- ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-19,20-di-hidro-mutilina + diastereómero (15,25,55).
Tratou-se 14-0-([(IR,2R,5S)-2-hidroxi-5-metanos-sulfoniloxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-19,20-di-hidro-mutilina + diastereómero (IS,2S,5R) (640 mg, 1,09 mmol) com azida de sódio, de acordo com o método do Exemplo 4 Passo E. Após processamento, foi obtido 14-0-{ [ (IR, 2.R, 5.R)-5-azido-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-19,20-di-hidro-mutilina + diastereómero (IS,2S,5S) (rendimento quantitativo, ciclo-hexano/acetato de etilo = 1/2, Rf = 113 ΡΕ2137143 0,7) em bruto, que foi utilizado directamento para o passo seguinte.
Passo E . 14-0-{[(ΙΛ,2R,5R)-5-Amino-2-hidroxi-ci- clo-hexilsulfanil]-acetil}-19,20-di-hidro-mutilina + dias-tereómero (IS, 2S, 5S).
Tratou-se 14-0-{[{IR,2R,SR)-5-Azido-2-hidroxi- ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-19,20-di-hidro-mutilina + di-astereómero (IS, 2S, 5S) (584 mg, 1,09 mmol) com trifenilfos- fina (342 mg, 1,30 mmol) de acordo com o método do Exemplo 4 Passo F. Após processamento e cromatografia (sílica, diclorometano/metanol/i-propanol/água/ácido acético = 80/20/6/3/2), com subsequente extracção básica, foi obtido 14-0-{[(IR,2R,SR)-5-amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-19,20-di-hidro-mutilina + diastereómero (IS,2S,5S) (sílica, diclorometano/metanol/solução de amoníaco a 35% = 100/10/1,
Rf = 0,3, 50,5 mg, 9% de rendimento), na forma de uma espuma incolor. RMN de λΕ (500 MHz, DMSO-de, δ, ppm, inter alia ) : 3/ , 51 (d, 1H, 14- -H, J = 8 Hz ) , 4,77 (m, 1H, 2'-OH) , 4, 38 ( :d, 1H, 11- OH, J = 8 Hz ), 3, 60- 3,15 (: m, 4H, 2 '-H, 11 -H, 22- -H ), 2, 60 (m, 1H, 1’- -H) t 2,50 (m, 1H, 5 ’-H), 2, 35 (bs, 1H, 4- -H ), 1,34 (s, 3H, 15- -ch3) , 0,84 ( s, 3H, 18-CH3) , 0, 80 (d, 3H, f 17- -ch3, J = 7 Hz) , 0, 63 (m, 6H, 16-CH 3, 2 0-H) φ MS-ESI (m/z) : 510 (MH+) . 114 ΡΕ2137143
Exemplo 29 - Diastereómeros de 14-0-{ [ (1.R, 2.R)-4-Aminometil-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,2S).
Passo A. Éster terc—butilico do ácido ciclo—hex— 3—enil—metil—carbâmico. A uma solução de C-Ciclo-hex-3-enil-metilamina (3,28 g, 29,5 mmol) e N-metilmorfolina (2,98 g, 29,5 mmol) em 70 mL de diclorometano anidro, foi adicionado dicar-bonato de di-terc-butilo (6,44 g, 29,5 mmol) sob arrefecimento. A mistura resultante foi agitada durante 20 horas à temperatura ambiente e o solvente foi removido sob pressão reduzida. 0 resíduo foi diluído com acetato de etilo e lavado com HC1 a IN. A fase aquosa foi extraída três vezes com acetato de etilo e as fases orgânicas combinadas foram lavadas com água e com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A fase orgânica resultante foi secada sobre sulfato de magnésio, filtrada e o solvente foi removido sob pressão reduzida para render 6,57 g de um óleo castanho. A cromatografia em coluna (sílica, éter de petróleo/acetato de etilo = de 12/1 a 8/1) resultou em éster terc-butilico do ácido ciclo-hex-3-enilmetil-carbâmico (éter de petróleo/acetato de etilo = 10/1,
Rf = 0, 62, 3, 0 6 g, 4 9% de rendimento), na forma de um sólido incolor. RMN de 1H (200 MHz, DMSO-d6, δ, ppm, inter alia): 6,90-6,83 (m, 1H, NH), 5,66-5,63 (m, 2H, olef. H), 2,86 (t, 2H, CH2N, J = 6 Hz), 2,21-1,50 (m, 6H, 2 x CH2) , 2,21-0,95 (m, 16H, terc-butilo, 3 x CH2 e CH). 115 ΡΕ2137143
Passo B. Éster terc-butílico do ácido (7-0xa-biciclo[4.1.0]hept-3-ilmetil)-carbâmico. A uma solução de éster terc-butílico do ácido ciclo-hex-3-enilmetil-carbâmico (1,5 g, 7,10 mmol) em 20 mL de diclorometano anidro, foi adicionado ácido 3-cloropero-xibenzóico (2,45 g, 14,2 mmol) sob arrefecimento. A mistura resultante foi agitada durante 19 horas à temperatura ambiente e lavada com uma solução saturada de bicarbonato de sódio e uma solução aquosa a 0,5 M de tiossulfato de sódio. A fase aquosa foi extraída três vezes com diclorometano e as fases orgânicas combinadas foram lavadas com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A fase orgânica resultante foi secada sobre sulfato de magnésio, filtrada e o solvente foi removido sob pressão reduzida, para render 1,48 g de produto em bruto. A cromatografia em coluna de 3,17 g de produto em bruto (silica, éter de petróleo/acetato de etilo = 3/1) resultou éster terc- butílico do ácido (7-oxa-biciclo[4.1.0]hept-3-ilmetil)-carbâmico (Rf = 0,19, 2,68 g, 81% de rendimento), na forma de um sólido incolor. RMN de 1H (200 MHz, DMSO-dõ, δ, ppm, inter alia) : 6,84-6,78 (m, 1H, NH) , 3, 09-3, 03 (m, 2H, CHO) , 2,71-2,70 (m, 2H, CH2N), 1,37 (s, 9H, terc-butilo). MS-ESI {m/z) : 250 (MNa+) , 477 (2MNa+) .
Passo C. Diastereómeros de 14-0-{[(1Λ,2Λ)-4-(terc-Butoxicarbonilamino-metil)-2-hidroxi-ciclo-hexilsul-fanil]-acetilj-mutilina + diastereómeros (15,25). 116 ΡΕ2137143 A uma solução de éster terc-butílico do ácido (7-oxa-biciclo[4.1.0]hept-3-il-metil)-carbâmico (1,34 g, 5.90 mmol) e Pleuromutilina tiol (2,32 g, 5,90 mmol) em 25 mL de metanol, foi adicionado NaOH a 2M (2,95 mL, 5.90 mmol) gota a gota sob arrefecimento. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O resíduo foi diluído com acetato de etilo e lavado com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A fase orgânica resultante foi secada sobre sulfato de magnésio, filtrada e o solvente foi removido sob pressão reduzida, para render 3,86 g de um produto em bruto. A cromatografia em coluna (sílica, éter de petróleo/acetato de etilo = 1/1) resultou nos diastereómeros 14-0-{[(IR,2R)-4-(terc-butoxicarbonilamino-metil)-2-hidroxi-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómeros (IS, 2S) (Rf = 0,24, 2,11 g, 58% de rendimento), na forma de um sólido incolor. RMN de 1H (500 MHz, CDCI3, δ, ppm, ínter alia) : 6,32-6,40 (m, 1H, 19-H), 5, 80-5,71 (m, 1H, 14-H), 5, 40- 5, 15 (m, 2H 20- Ή) , 4,64, 4 , 55 (2bs, 1H, NH) , 3, 19-3, , 67, 3, 58-3, . 45 (2m 1H, 2' -H), 3, 40- 3,31 (m, 1H, 11-H), 3,2 9-3 ,11 (m, 2H 22- Ή) , 3,10-2, 92 (m, 2H, CH2N) , 2,89-2, 77, 2, 74-2, 64 (2m 1H, 1'-H) , 1,45 (s, 3H, 15-CH3) , 1,43 (s, 9H, terc-butilo), 1,17 (s, 3H, I8-CH3), 0, 78-0, 66 (m, 3H, I6-CH3). MS-ESI (m/z) : 644 (MNa+) . 117 ΡΕ2137143
Passo D. Diastereómeros 14-0-{[(IR,2R)-4-Aminometil-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómeros (IS, 2S). A uma solução de diastereómeros 14-0-{[(IR,2R)-4-(terc-butoxicarbonilamino-metil)-2-hidroxi-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómeros (1S,2S) (1,14 g, 1,83 mmol) em 20 mL de diclorometano anidro, foram adicionados 20 mL de HC1 a 1M em éter dietilico, gota a gota e sob arrefecimento. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante dois dias e o solvente foi removido sob pressão reduzida. 0 resíduo foi diluído com diclorometano e lavado com uma solução saturada de bicarbonato de sódio. A fase aquosa foi extraída três vezes com diclorometano. As fases orgânicas resultantes foram combinadas e secadas sobre sulfato de magnésio, filtradas e o solvente foi removido sob pressão reduzida. A cromato-grafia em coluna (sílica, diclorometano/metanol = de 5/1 a 1/1), resultou nos diastereómeros 14—0—{ [ (liR,2iR)—4 — aminometil-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómeros (1S,2S) (39 mg, 8% de rendimento), na forma de um sólido incolor. RMN de 1H (400 MHz, CDCI3, δ, ppm, inter alia): 6,58-6,38 (m, 1H, 19-H), 5,87-5,68 (m, 1H, 14-H); 5,44-5,12 (m, 2H, 20-H), 4,52-4,34 (m, 1H, l'-H), 2, 68-2,52 (m, 2H, CH2N) , 1,46 (s, 3H, I5-CH3) , 1,19 (s, 3H, I8-CH3) , 0,89 (d, 3H, I7-CH3, J = 7 Hz), 0,74 (d, 3H, I6-CH3, J = 7 Hz). MS-ESI (m/z) : 544 (MNa+) . 118 ΡΕ2137143
Exemplo 30 - Acetato de 14-0-{[5-Amino-2—cloro-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina e acetato de 14-0-{[4-Amino-2-cloro-ciclo-hexilsulfanil]-acetilj-mutilina.
Passo A. Éster terc-butilico do ácido (IR, 3S, 6S)-(7-tia-biciclo[4.1.0]hept-3-il)-carbâmico + diastereómero (IS, 3R, 6R) . A uma solução de éster terc-butilico do ácido sin-3,4-epoxi-ciclo-hexil-carbâmico (3,55 g, 16,6 mmol) e cloreto de tetrabutilamónio (500 mg, 1,80 mmol) em 50 mL de éter terc-butil metilico, foi adicionada uma solução de tiocianato de potássio (8,07 g, 83,0 mmol) em 50 mL de água. A mistura resultante foi agitada durante 7 dias à temperatura ambiente e as fases foram separadas. A fase aquosa foi extraída duas vezes com acetato de etilo e as fases orgânicas combinadas foram lavadas com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A fase orgânica combinada foi secada sobre sulfato de magnésio, filtrada e o solvente foi removido sob pressão reduzida para render 4,33 g de um produto em bruto na forma de um sólido incolor. A cromatografia em coluna (sílica, éter de petróleo/acetato de etilo = de 7/1 para 3/1), resultou em éster terc-butilico do ácido (IR,3S,6S)-(7-tia-biciclo-[4.1.0]hept-3-il)-carbâmico + diastereómero [1S,3R,6R) (éter de petróleo/acetato de etilo = 5/1, Rf = 0,54, 1,88 g, 49% de rendimento, com base no material de partida recuperado), na forma de cristais incolores. Pf = 105-108 °C. 119 ΡΕ2137143 RMN de XH (500 MHz, CDC13, δ, ppm, inter alia) • 4,40 (bs, 1H, NH ) , 3,78 (bs , 1H, 1-H), 3,28-3,20 (m, 1H, 3-H) , 3, 18 -3, 09 (m, 1H, 4-H), 2 ,54 (dd, 1H, 2a-H, J = 5 Hz e J = 15 Hz) , 2, 40-2, 18 (m, 2H, 5-H), 1,98-1, 87 (m, 1H, 2b-H), 1, 86-1,72 (m, 1H, 6a-H), 1,58 (s, 9H, terc-butilo) , 1,34-1,20 (m, 1H, 6b-H). MS-ESI (m/z) : 252 (MNa+) .
Passo B. 14-0-{ [ (li?, 5R, 8R) -3-oxo-2-oxa-4-aza- biciclo[3.3.1]non-8-il-sulfanil]-acetil}-mutilina + diaste-reómero (15, 55, 8S). A uma solução de éster terc-butilico do ácido (IR,3S,65)-(7-tia-biciclo[4.1.0]hept-3-il)-carbâmico + di-astereómero (IS, 3R, 6R) (2,95 g, 12,9 mmol) em 160 mL de diclorometano, foi adicionado ácido p-toluenossulfónico (1,21 g, 6,50 mmol) sob arrefecimento. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro e o solvente foi removido sob pressão reduzida para render 3,26 g de um sólido incolor. O produto em bruto foi subsequentemente dissolvido em 150 mL de tetra-hidrofurano anidro, e foi-lhe adicionado tosilato de pleuromutilina (13,1 g, 24,6 mmol) seguido de 1,8-diaza-biciclo[5.4.0] -undec-7-eno (DBU, 4,2 mL, 28,2 mmol) sob arrefecimento. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro e foi-lhe adicionada água. A mistura foi extraída quatro vezes com acetato de etilo e as fases orgânicas combinadas foram lavadas com água e com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secadas sobre 120 ΡΕ2137143 sulfato de magnésio e o solvente foi removido sob pressão reduzida para render 9,32 g de um sólido incolor. A cromatografia (sílica, diclorometano/metanol = 1,9/1) resultou em 14-0-{ [ (IR, 5.R, 8.R)-3-oxo-2-oxa-4-aza-biciclo-[3.3.1]ηοη-8-il-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,5S,8S) (diclorometano/metanol = 20/1, Rf = 0,45, 4,36 g, 63% de rendimento), na forma de um sólido incolor. RMN de (50 0 MHz, CDC13, δ, ppm, inter ali, a) : 6, 46 (dd, 1H, 19' -H, J = 7 Hz e J = 11 Hz) , 5, 77 ( d, 1H, , 14-H, J = 8 H Iz) , 5, 52 (bs, 1H, NH ) , 5,40- -5,1 7 (m r 2H, 20- -H) , 1 co 55 ( m, 1H, 2 1 —H) , 3,63 (bs , 1H, 4 ' -H) , 3, 41-3 , 30 (m, 2H, 1'· -H, 11- -H) , 3,27-3,12 1 (m, 2H, 22- H) , 1, 45 (s, 3H, 15- ch3) , 1, 18 (s, 3H, I8-CH3) , 0 ,89 (d, 3H, 17 -ch3 , J = 7 Hz) , o, 73 ( dd, 3H, . I6-CH3, J = 2 Hz e J = 7 Hz ) · MS- ESI (m/z :) : 556 (MNa+) .
Passo C. Acetato de 14-0-{[5-Amino-2-cloro-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina e acetato de 14-0-{[4-Amino-2-cloro-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina. A uma solução de 14-0-{ [ (IR, 5.R, 8.R)-3-oxo-2-oxa-4-aza-biciclo[3.3.1]ηοη-8-il-sulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS, 5S, 8S) (500 mg, 0,94 mmol) em 2,5 mL de dioxano, foi adicionado HC1 a 6M (7 mL) sob arrefecimento. A mistura resultante foi agitada durante 23 horas e adicionada a uma solução saturada de bicarbonato de sódio. A solução resultante foi extraída duas vezes com acetato de etilo e as fases orgânicas combinadas foram lavadas com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A fase 121 ΡΕ2137143 orgânica combinada foi secada sobre sulfato de magnésio, filtrada e o solvente foi removido sob pressão reduzida, para render 473 mg de produto em bruto. A cromatografia em coluna (silica, diclorometano/metanol = 10/1 contendo 1% de ácido acético e diclorometano/metanol/éter di-isopropili-co/água/ácido acético = 80/20/6/3/2), resultou em acetato de 14-0-{[5-Amino-2-cloro-ciclo-hexilsulfanil]acetil}-mu-tilina (a) (diclorometano/metanol/éter di-isopropili-co/água/ácido acético = 80/20/6/3/2, Rf = 0,5, 178 mg, 36% de rendimento) e acetato de 14-0-{[4-Amino-2-cloro-ciclo-hexilsulfanil]acetil}-mutilina (b) (diclorometano/metanol/éter di-isopropilico/água/ácido acético = 80/20/6/3/2, Rf = 0,43, 91 mg, 18% de rendimento), na forma de sólidos incolores. (a) : RMN de 1H (500 MHz, CDCI3, δ, ppm, inter alia) : 6,46 (dd, 1H , 19-H, J = 11 Hz e J = 17 Hz ), 5 ,78 (d, 1H, 14- H, J = 8 Hz) , 5 ,45- 5, 15 (m ., 2H, 20' -H) , 4 , 32 (m, 1H, 2'-H), 3,41- -3,30 (: m, 2H, 11-H f 1'- H) , 3 ,28- 3, 14 ( 2H, 22-H), 3, 13 -3, 00 (m, 1H, 5’· -H) r 2, 02 (s, 3H, ch3 de acetato ), 1, 46 (s, 3H, 15- ch3) , 1 ,19 ( s, 3H, 18 -ch3: ), 0 ,89 (d, 3H, I7-NCH3, J = = 7 Hz) , 0,7! B ( d, 3H , 1' 6-CH3, J = 7 Hz :) · MS-ESI {m/z) : 52 6 (MH+) • (b) : RMN de (500 MHz, CDC1 3, δ f ppm, in ter alia) : 6,49 (dd, 1H , 19-H, J = 11 Hz e J = 17 Hz ), 5 ,77 (d, 1H, 14- H, J = 8 Hz) , 5, .40-! 5, 15 (m, 2H, 20- H) , 3, 88-3 ,73 (m,
1H, 2'-H), 3,50-3,15 (m, 3H, 11-H, 22-H), 3,00-2,70 (m, 2H 1' -H, 4 ' -H) , 2,03 (s, 3H, CH3 de acetato), 1,46 (s, 3H 122 ΡΕ2137143 15-CH3) , 1,18 (s, 3H, I8-CH3) , 0,88 (d, 3H, 17-CH3, J = 7 Hz), 0,74 (d, 3H, I6-CH3, J = 7 Hz) . MS-ESI (m/z) : 526 (MH+) .
Exemplo 31 - Cloridrato de 14-0-[(4-Amino-l-hi-droxi-ciclo-hexil-metilsulfanil)-acetil]-mutilina.
Passo A. Ester terc-butilico do ácido (1-Oxa-espiro[2.5]oct-6-il)-carbâmico.
Tratou-se éster terc-butilico do ácido (4-Meti-leno-ciclo-hexil)-carbâmico (Raju, B. et al, Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters 2004,14(12), 3103-3107) (2,3 g, 10,9 mmol) com ácido 3-cloroperbenzóico (70% de pureza, 3,76 g, 21,8 mmol, não corrigido), de acordo com o método do Exemplo 7 Passo B. Após processamento, foi obtido o composto do titulo (2,3 g, 93% de rendimento), na forma de um sólido amarelo.
RMN de *Η (DMSO- -d6, 400 MHz, δ, ppm) : 6, 77 (bd, 1H, NH J = 7 Hz), 3, 35 (m, 1H) , 2,55, 2,51 (2s, 2H) , 1, 86- 1,75 (m 2H) , 1,73- 1, 67 (m, 2H) , 1, 47· -1,28 (m, 2H) , 1,36 (s, 9H terc-butilo), 1,22-1,13 (m, 2H).
Passo B. 14-0-(4-terc-Butoxicarbonilamino-l-hidroxi-ciclo-hexil-metilsulfanil)-acetil]-mutilina.
Tratou-se pleuromutilina tiol (2,6 g, 6,59 mmol) com éster terc-butilico do ácido (1-Oxa-espiro[2.5]oct-6-il)-carbâmico (1 g, 4,40 mmol), de acordo com o método do 123 ΡΕ2137143
Exemplo 1 Passo A3. Após processamento e cromatografia da mistura (sílica, tolueno/acetato de etilo = 5/1 -> 3/1), foi obtido o composto do título (tolueno/acetato de etilo = 1/1, Rf = 0,44, 0,41 g, 15% de rendimento, não corrigido), na forma de uma espuma incolor. RMN de 1H (DMSO-d6, 500 MHz, δ, ppm, inter alia) : 6, 66 (d, 1H, NH, J = 8 Hz), 6, 14 (dd, 1H, 19-H, J = 18 Hz e 11 Hz) , 5, 54 (d, 1H, 14 H, J = 8 Hz) , 5,10-5,02 (m, 2H, 20H) , 4, 49 (bs, 1H, 11-OH), 4,23 (bs, 1H) , 3,46· -3, ,28 (m, 3H) , 3, 08 (bs, 3H, 4'-H), 2, 60 (s , 2H, COHCH2S), 2, . 40 (bs, 1H, 4-H) , 2,18 (m, 1H) , 2 ,12 -2, 02 (m, 3H), 1, 69- 1,54 (m, 3H) , 1,52 -1,43 (m, 3H) f 1,35 (: 3, 3H, 15- CH3), 1,35 (s, 9H, terc -buti lo), 1,32-1 ,21 (m, 4H) , 1,08 (s , 3H , 18- ch3) , \—1 \—1 -0, 98 (m, 1H) , 0, 81 (d, 3H, 17-CHs, J = 7 Hz) , 0,62 (d, 3H, I6-CH3, J = 7 Hz) . MS-ESI (m/z) : 644 (MNa+) .
Passo C. 14-0-[(4-Amino-l-hidroxi-ciclo-hexilme-tilsulfanil)-acetil]-mutilina.
Tratou-se 14-0-[(4-terc-Butoxicarbonilamino-l-hidroxi-ciclo-hexilmetilsulfanil)-acetil]-mutilina (0,36 g, 0,58 mmol) com ácido trifluoroacético (0,72 mL) , de acordo com o método do Exemplo 1 Passo B. Após processamento e cromatografia da mistura (sílica, acetato de etilo/meta-nol/NH4OH (25%) = 50/50/1), foi obtido o composto do título (Rf = 0,04, 0,13 g, 43% de rendimento), na forma de uma espuma incolor. RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz, δ, ppm, inter alia): 6,13 (dd, 124 ΡΕ2137143 1H 19-H, J = 18 Hz e 11 Hz) , 5, 53 (d, \—1 14- -H, J = 8 Hz) , 5, 10 (d, 1H, 20-H, J = 2 Hz) , 5, 02 (d, 1H, 20- -H, J = 2 Hz) , 4, 49 (bs, 1H) 4, 21 (bs , 1H) , 3,42 (m v 1H) , 3 , 23 (q, 2H, H- 22 , J = 14 Hz) , 2, 60 ( s, 2H, COHCH2S) , 2 , 47- -2, 36 (m, 2H) , 2, 23 -2, 14 (m, 1H) , 2,12 -2, 04 (m, 3H) , 1, 68- 1,; 54 (m, 3H) , 1, 41 -1,20 (m, , 5H), 1,35 (s, 3H, 15- -ch3 ) , 1/ 05 (s, 3H, 18 -ch3) , 1 , 03 (m, 1H), 0, ,81 (d , 3H, 17- ch3, , J = 7 Hz) , 0, 62 (d, 3H, I6-CH3, J = 7 Hz) . MS-ESI (m/z) = 522 (MH+) , 544 (MNa+) .
Passo D. Cloridrato de 14-0-[(4-Amino-l-hidroxi-ciclo-hexilmetilsulfanil)-acetil]-mutilina.
Uma solução de 14-0-[(4-amino-l-hidroxi-ciclo-hexilmetilsulfanil)-acetil]-mutilina (0,1 g, 0,19 mmol) em 1 mL de dioxano, foi tratada com ácido clorídrico aquoso (a 0,05 M, 11,6 mL, 0,58 mmol) sob agitação, de acordo com o método do Exemplo 1 Passo C. Após 1 hora a mistura foi liofilizada de um dia para o outro para dar o composto do título (107 mg, 99% de rendimento), na forma de um sólido branco. RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz, δ, ppm, inter a lia) : 7, co co (s, 3H, NH3+) , 6,13 (dd, 1H, 19-H, J = 18 Hz e 11 Hz) , 5, 52 ( d, 1H, J = 8 Hz), 5, 08 (dd, 1H, 20- H, J = 5 Hz e 18 Hz ), 5 , 03 (dd, 1H, 20-H, J = = 5 Hz e 11 Hz) , 3,25 (q, 2H, 22 -H, J = 14 Hz) , 2,8 5 (m, 1H, 4 ' -H ), 2, 62 (s, 2H, COHCH2S ) , 2 ,40 (s, 1H, 4-H) , 2,23- 2,03 (m, 4H) , 1, 71-1,56 (m, 6H) f 1 ,47 (m, 1H), 1,36 (s, 3H, 15-CH3) / 1 ,41- 1,19 (m, 4H) , 1, , 05 (s, 3H, 18-CH3) , 1, 00 (m ., 1H ), 0, 81 (d, 3H, 17-CH3, J = 7 Hz) , c\] to 0 (d, 3H, 16 -ch3, J = 7 Hz) 125 ΡΕ2137143
Exemplo 32 - 14-0-{[(l.R,2.R)-2-Hidroxi-5-(3-metil-amino-propil)-ciclo-hexilsulfanil]-acetilj-mutilina + dias-tereómero (IS, 2S) e 14-0-{[(IA,2R)-2-Hidroxi-4-(3-metil-amino-propil)-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (1S,2S).
Passo A. 3-Ciclo-hex-3-enil-N-metil-propionamida.
Adicionou-se metilamina (a 8 M em EtOH, 75 mL, 600 mmol) a uma mistura de éster metilico do ácido 3-ciclo-hex-3-enil-propiónico (Patente Alemã DE 4023848 AI 19920130) (20,0 g, 119 mmol) em 75 mL de metanol. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante um dia. Foi adicionada mais metilamina à mistura (a 8 M em EtOH, 40 mL, 320 mmol) e a agitação continuou por mais um dia. A mistura foi concentrada e o resíduo foi tomado em acetato de etilo, lavado com HC1 aquoso a 0,5 M, secado e separado do solvente para dar o composto do titulo (19,50 g, 98% de rendimento, não corrigido), na forma de um sólido laranja pálido. RMN de ^ (CDC13, 200 MHz , δ, ppm) : 5, 58 (s, 2H olefinico H) , 5,57 (m, 1H, NH) , 2,74 (d, 3H, nch3 J = 5 Hz) , 2,20-1,90 (m, 5H) , 1,75- 1,40 (m, 5H) , 1,15 (m 1H) .
Passo B. (3-Ciclo-hex-3-enil-propil)-metlilamina.
Uma solução de 3-ciclo-hex-3-enil-N-metil-propio-namida (15,5 g, 92,7 mmol) em 55 mL de tetra-hidrofurano, 126 ΡΕ2137143 foi adicionada gota a gota, ao longo de um período de 25 minutos, a uma suspensão de hidreto de alumínio e lítio (95% de pureza, 5,3 g, 139 mmol, corrigido) em 120 mL de tetra-hidrofurano a 0°C sob agitação. A mistura foi sujeita a refluxo durante 4 horas, agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente e a reacção foi parada com NaOH aquoso a 2M, diluída com tetra-hidrofurano, agitada e filtrada. O filtrado foi concentrado e o resíduo foi acidificado com HC1 aquoso a 1M e lavado com diclorometano. A fase aquosa foi basificada com NaOH aquoso a 1M, e extraída com acetato de etilo. O extracto orgânico foi secado e concentrado para se obter o composto do título (9,38 g, 66% de rendimento), na forma de um óleo amarelo pálido. RMN de 1H (CDC13, 200 MHz, δ, ppm) : 5,58 (d, 2H, olefínico H, J = 2 Hz), 2,50 (t, 2H, J = 7 Hz), 2,36 (s, 3H, NCH3) , 2,15-1,90 (m, 3H) , 1,75-1,05 (m, 9H) .
Passo C. Éster terc-butilico do ácido (3-Ciclo-hex-3-enil-propil)-metil-carbâmico.
Adicionaram-se etil-di-isopropil-amina (11,3 mL, 66.0 mmol) e di-carbonato de di-terc-butilo (14,4 g, 66.0 mmol) a uma solução de (3-ciclo-hex-3-enil-propil)-metil-amina (7,50 g, 48,9 mmol) em 75 mL de dioxano. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 3 dias, diluída com acetato de etilo e lavada com HC1 aquoso a 0,1 M frio, e com uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio, foi secada sobre sulfato de sódio e concentrada in vacuo para dar uma mistura. Após cromato- 127 ΡΕ2137143 grafia da mistura (sílica, diclorometano), foi obtido o composto do título (14,24 g, rendimento quantitativo, não corrigido), na forma de um óleo amarelo pálido. RMN de XH (CDC13, 200 MHz, δ, ppm) : 5, 65 (d, 2H, olefínico H, J = 2 Hz), 3 ,19 (t, 2H, CH2N, J = 7 Hz) , 2, 84 (s, 3H, NCH3) , 2,15-1,90 (m, 3H) , 1,75-1,30 (m, 5H) , 1, 45 (s, 9H, terc-butilo), 1,30-1,05 (m, 3H).
Passo D. Éster terc-butilico do ácido metil-[3-(7-oxa-biciclo[4.1.0]hept-3-il)-propil]-carbâmico.
Tratou-se éster terc-butilico do ácido (3-Ciclo-hex-3-enil-propil)-metil-carbâmico (14,24 g, 56,2 mmol) com ácido 3-cloroperbenzóico (70% de pureza, 14,8 g , 60 mmol, corrigido) , de acordo com o método do Exemplo 7 Passo B e agitou-se durante 3 horas à temperatura ambiente. Após processamento, foi obtido o composto do título (14,6 g, 96% de rendimento, não corrigido), na forma de um óleo amarelo pálido. RMN de 1H (CDC13, 200 MHz, δ, ppm) : 3,15-3,00 (m, 4H) , 2,75 (s, 3H, NCH3) , 2,15-0,70 (m, 11H) , 1,38 (s, 9H, terc-butilo).
Passo E. 14-0-{{(IR,2R)-5-[3-(terc-Butoxicarbo- diastereómero nil-metil-amino)-propil]-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil}-acetilj-mutilina + diastereómero (15,2S) e 14-0-{{(II?,2R)-4-[3-(terc-Butoxicarbonil-metil-amino)-propil]-2-hidroxi-ciclo—hexilsulfanil}—acetil}—mutilina + (15, 25) . 128 ΡΕ2137143
Tratou-se éster terc-butilico do ácido metil-[3-(7-oxa-biciclo[4.1.0]hept-3-il)-propil]-carbâmico (3,00 g, 11,1 mmol) com pleuromutilina tiol (6,57 g, 16,7 mmol) de acordo com o método do Exemplo 1 Passo A3 e agitou-se durante 3 dias à temperatura ambiente. Após processamento e cromatografia da mistura (silica, ciclo-hexano/acetato de etilo = 1:1), foi obtida uma mistura dos compostos do titulo (Rf = 0,29, 3,20 g, 43% de rendimento, não corrigido), na forma de uma espuma branca. A mistura foi tomada para o passo seguinte.
Passo F. 14-0-{[(lJ?,2J?)-2-Hidroxi-5-(3—metil-amino-propil)-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + dias-tereómero (IS, 25) e 14-0-{ [ (IR, 2.R)-2-Hidroxi-4-(3—metil-amino-propil)-ciclo-hexilsulfanil]-acetil)-mutilina + dias-tereómero (IS, 2S) .
Adicionou-se HC1 (a 4 M em dioxano, 5,30 mL, 21,2 mmol) à mistura de compostos provenientes do Exemplo 32 Passo E (5,63 g, 8,48 mmol, não corrigido) em 50 mL de dioxano. A mistura foi agitada durante 4 horas e libertada do solvente. O resíduo foi separado entre diclorometano e uma solução aquosa saturada de bicarbonato e a fase orgânica foi separada, secada e libertada do solvente, para dar uma mistura. Após cromatografia (sílica, dicloro-metano/metanol/NH3 aquoso a 28% = 91/6/3), foram obtidos 14-0-{[{1R,2R)-2-Hidroxi-5-(3-metilamino-propil)-ciclo-hexilsulfanil ] -acetil } -mutilina + diastereómero (IS, 2S) (a) (diclorometano/metanol/NH3 aquoso a 28% = 88/8/4, Rf = 129 ΡΕ2137143 0,18, 117 mg, 3% de rendimento, não corrigido) e 14-0-{[(1R,2R)-2-Hidroxi-4-(3-metilamino-propil)-ciclo-hexilsul-fanil]-acetil}-mutilina (b) (diclorometano/metanol/NH3 aquoso a 28% = 88/8/4, Rf = 0,10, 172 mg, 4% de rendimento, não corrigido), na forma de espumas. (a) : RMN de 1H (400 MHz, DMS0-d6, δ, ppm, inter alia): 6 ,12 (dd, 1H, 19-H, J = 11 Hz e 18 Hz) , 5, 53 ! (d, 1H, 14-H, J = 8 Hz) , 5, 1-5,0 (m , 2H, 2 0-H) , 4,74 (bs, 1H, 2'-OH) r 4,49 (bs , 1H, 11-OH), 3, 59 (m, 1H) , 3,42 (m, 1H, 11-H), 3 ,20 (m), 2,90 (m, 1H) , 2, 42- -2,36 (m, 3H) , 2,24 (s, 3H, CH3- N) , 2,21 -2,01 (m) , 1, 72- 1,J 56 (m) , 1,55-1 ,10 (m) , 1,36 (s, 3H, 15- ch3) , 1,05 (s, , 3H, 18-CH3) , 1, 00 (m, 1H) , 0, 81 (d, 3H, 17 -ch3, J = 7 Hz) r 0,62 (d, 3 H, 16- -ch3, J = 7 Hz). (b) : RMN de ^ (500 MHz, DMSO- dõ r δ, ppm, inter alia) : 6, 13 (m, 1H, 19-H) , 5,54 (d, 1H, H-14, J = 9 Hz), 5, 10-5,00 (m, 2H, 2 0-H) , 4,74 (bs, 1H, 2'-OH) , 4,48 (bs, 1H, 11-OH) , 3,70 (bs, 1H, 2'-H), 3,41 (m, 1H, 11-H), 3,20 (m, 2H, H-22), 2,85 (m, 1H) , 2,43- -2,37 (m, 3H) , 2,24 (s 3H, CH3-N), 2, 22-1, 89 (m) , 1,70-0 , 96 (m) , 1,35 (s, 3H 1 LO \—1 CH3), 1,05 (s, 3H, 18- CH3) , 0, 81 (d, 3H, 17- -ch3 J = 7 Hz), 0,62 (d, 3H, 16-CH 3, J = 7 Hz) φ
Exemplo 33 - 14-0-{ [ (1.R, 2.R)-5-(3-Amino-propil)-2-hidroxi-ciclo—hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereó-mero (IS, 2S) e 14—O—{ [ (1.R, 2R) -4- (3-Amino-propil) -2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS, 2S) . 130 ΡΕ2137143
Passo A. Éster terc-butilico do ácido N-terc-Butoxicarbonil-(3-ciclo-hex-3-enil-propil)-carbâmico.
Adicionou-se hidreto de sódio (a 60% em óleo mineral, 2,5 g, 62,5 mmol, corrigido) em várias porções, ao longo de um período de 15 minutos, a uma mistura gelada de iminodicarboxilato de di-terc-butilo (22,0 g, 100 mmol) em 60 mL de dimetilformamida e 180 mL de tetra-hidrofurano sob agitação. Foi carregada sobre esta, gota a gota ao longo de 30 minutos, uma solução de éster 3-ciclo-hex-3-enil-propílico do ácido tolueno-4-sulfónico (Marvell, E.;
Stummer, D.; Kunston, R. Journal of Organíc Chemístry 1968, 33, 2991-2993) (14,8 g, 50,0 mmol) numa mistura de 15 mL de dimetilformamida e 45 mL de tetra-hidrofurano. A mistura foi agitada durante 7 horas a 70°C e 16 horas à temperatura ambiente, foi diluída com água e extraída com éter terc-butil metílico. O extracto orgânico foi lavado com água e com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, e libertada do solvente, para dar uma mistura. Após cromatografia da mistura (sílica, tolueno/ciclo-hexano = 75/25), foi obtido o composto do título (acetato de etilo/tolueno = 15/85, Rf = 0,19, 14,7 g, 8 6% de rendimento, não corrigido), na forma de um óleo límpido. RMN de "H (CDC13, 200 MHz, δ, ppm): 5,57 (d, 2H, olefínico H, J = 2 Hz) , 3, 46 (t, 2H, CH2N, J = 8 Hz), 2,15-1,90 (m, 3H) , 1,75· -1,30 (m, 5H), 1,43 (s, 18H, terc-butilo), 1,30-1,00 (m, 3H). 131 ΡΕ2137143
Passo B. Éster terc-butilico do ácido N-terc-Butoxicarbonil-[3-(7-oxa-biciclo[4.1.0]hept-3-il)-propil]-carbâmico.
Tratou-se éster terc-butilico do ácido N-terc-Butoxicarbonil-(3-ciclo-hex-3-enil-propil)-carbâmico (12,2 g, 29,4 mmol, corrigido) com ácido 3-cloroperbenzóico (70% de pureza, 8,7 g, 35,3 mmol, corrigido), de acordo com o método do Exemplo 7 Passo B e agitou-se à temperatura ambiente durante 4,5 horas. Após processamento, foi obtido o composto do titulo (9,38 g, 90% de rendimento), na forma de um óleo amarelo claro. RMN de 1H (CDC13, 200 MHz, δ, ppm) : 3,43 (t, 2H, CH2N, J = 8 Hz), 3,06 (bs, 2H) , 2,15-0,70 (m, 11H) , 1,43 (s, 18H, terc-butilo).
Passo C. 14-0-{[(IR,2R)-5-(3-N,N-Bis-(terc-buto-xicarbonil)-amino-propil)-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (1S,2S) e 14-0-{[(IR,2R)-4-(3-N,N-Bis-(terc-butoxicarbonil)-amino-propil)-2-hidroxi-ciclo—hexilsulfanil]—acetil}—mutilina + diastereómero (1S,2S) .
Tratou-se éster terc-butilico do ácido N-terc-Butoxicarbonil-[3-(7-oxa-biciclo[4.1.0]hept-3-il)-propil]-carbâmico (3,00 g, 8,44 mmol) com pleuromutilina tiol (5,00 g, 12,7 mmol), de acordo com o método do Exemplo 1 Passo A3 e agitou-se durante 24 horas. Após cromatografia da mistura (sílica, benzeno de petróleo/acetato de etilo = 132 ΡΕ2137143 7/3 -> 1/1), foi obtida uma mistura dos compostos do titulo (benzeno de petróleo/acetato de etilo = 3/2, Rf = 0,30, 3,68 g, 58% de rendimento, não corrigido), na forma de uma espuma branca. RMN de (DMSO-de, 500 MHz , δ, ppm , inter alia ) : 6, 12 (dd 1H, 19 -H, J = 11 Hz e 18 Hz ), 5,53 (d, 1H, 14-H , J = 8 Hz) 5, 10-5 , 00 (m, 2H, 2 0-H), 4,75 (bs, 1H), 4,' 48 (bs, 1H 11-OH) , 3, 69 (m, 0,5H) , 3, ( 50 (m, 0 ,5H), 3, 45-3 , 38 (m, 3H) 3,26 (d, 1H, 22-H, J = 12 Hz) i, 3,21 (d, 1H, 22-H J = 13 Hz) , 2,91 (m, 0,5H) , 2,85 ( m, 0,5H) i , 2, . 39 (bs, , 1H 4-H) , 2,18 (dd, 1H, 2-H, J = 11 Hz e 19 Hz ), 2 ,12 -2, 0 1 (m 3H) , 1,92 (m, 1H) , 1, 70-0,96 (m) , 1,41 (s, 18H terc-butilo) , 1,35 (s, 3H, 15-CHs) , 1,05 (s, 3H, 18- ch3) 0, 81 (d, 3H, 17-CH3, J = : 7 Hz) , 0, 62 (d, 3H, , ie í-CH3 J = 7 Hz).
Passo D. 14-0-{[(IR,2R)-5-(3-Amino-propil)—2—hi— droxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (IS,2S) e 14-0{[(IR,2R)-4-(3-Amino-propil)-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetilj-mutilina + diastereómero (IS,2S).
Uma mistura da mistura proveniente do Exemplo 33 Passo C (250 mg, 0,33 mmol) foi tratada com ácido trifluo-roacético (6 mL), de acordo com o método do Exemplo 1 Passo B, e agitou-se à temperatura ambiente durante 5 dias. Após processamento e cromatografia (sílica, diclorometano/me-tanol/NH40H aquoso a 28% = 86:10:4), foi obtida uma mistura dos compostos do título (Rf = 0,08 e 0,12, 50 mg, 27% de rendimento, não corrigido), na forma de uma espuma branca. 133 ΡΕ2137143 RMN de XH (DMSO-de, 500 MHz, δ, ppm, inter alia) : 6, 14 (dd, 1H, 19-H, J = 11 Hz e 18 Hz), 5,55 (d, 1H, 14-H, J = 8 Hz) , 5,13-5,02 (m, 2H, 20-H), 4 ,75 (bs, 1H) , 4,50 (bs, 1H, 11-OH), 3 ,72 (m, 0, 5H) , 3,61 (m, 0, 5H) / 3, 50-3, 05 (m) , 2,92 (m, 0, 5H) , 2, 86 (m , 0,5H), 2,47 (m, 2H, CH2N) , 2,41 (bs, ih, 4-h; ), 2,19 (dd, 1H, 2-H) , 2,13-2,03 (m, 3H) , 1,94 (m, 1H), 1, 73-0, 82 (m) , 1, 37 (s, 3H, I5-CH3) , 1,06 (s, 3H, 18-CH3) , 0,82 (d, 3H, 17 -ch3, j = 7 Hz), 0,63 (d, J = 7 Hz, 3Η, I6-CH3) . MS-ESI (m/z) : 550 (MH+) , 572 (MNa+) .
Exemplo 34. 14-0-[(4-Amino-2-oxo-ciclo-hexilsul- fanil)-acetil]-mutilina.
Passo A. Éster S- ((IR, 2R, 4J?) -4-terc-butoxicarbo-nilamino-2-hidroxi—ciclo—hexilico) do ácido tiobenzóico + diastereómero (IS, 2S, 4S) e éster S-((1.R, 2.R, 5S)-5-terc-butoxicarbonilamino—2—hidroxi—ciclo—hexilico) do ácido tiobenzóico + diastereómero (IS, 2S, 5J?) . A uma solução de éster terc-butílico do ácido sin-3,4-epoxi-ciclo-hexil-carbâmico (63,3 g, 0,29 mol) em 630 mL de tolueno, foi adicionado ácido tiobenzóico (105,13 mL, 0,90 mmol), seguido de cloreto de tetrabutil-amónio mono-hidratado (2,66 g, 9,00 mmol). A mistura foi agitada sob árgon durante 3,5 horas e foi carregada com uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio, foi agitada durante 10 minutos e a fase orgânica foi separada. A fase orgânica foi lavada com uma solução aquosa saturada 134 ΡΕ2137143 de bicarbonato de sódio, com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, foi secada e o solvente foi removido sob vácuo, para se obter uma mistura em bruto dos compostos do titulo. A mistura foi cristalizada a partir de uma mistura de tolueno/heptano (1/1) para dar éster S-((IR,2R,4R)-4-terc-butoxicarbonilamino-2-hidroxi-ciclo-hexílico) do ácido tiobenzóico + diastereómero (1S,2S,4S) (a) (22,1 g, 21 % de rendimento), na forma de um sólido. As águas mães foram cromatografadas (sílica, tolueno/acetato de etilo = 8/1 -► 7/1), para se obter éster S-((IR,2R,4R)-4-terc-butoxicarbo-nilamino-2-hidroxi-ciclo-hexílico) do ácido tiobenzóico + diastereómero (IS, 2S, 4S) (a) (tolueno/acetato de etilo = 3/1, Rf = 0,35, 4,09 g, 4% de rendimento), na forma de um sólido, e éster S-((IR,2R,5S)-5-terc-butoxicarbonilamino-2-hidroxi-ciclo-hexílico) do ácido tiobenzóico + diastereómero (1S,2S,5R) (b) (tolueno/acetato de etilo = 3/1, Rf = 0,25, 16,57 g, 16% de rendimento), na forma de um óleo. (a): RMN de (500 MHz, DMSO-d6, δ, ppm) : 7,88 (d, 2H, aromático H, J =7 Hz), 7,66 (t, 1H, aromático H, J = 7 Hz ), 7,53 (t, 2H, aromático H, J = = 8 Hz) , 6,82 (d, 1H, NH, J = 8 Hz) , 5, 08 (d, 1H, OH, J = = 6 Hz) , 3,41 (m, 1H) , 3, 33-3,28 (m, 2H) , 2,08 (bd, 1H) , i ,98 (m, 1H), 1,75 (m, 1H) , 1,36 (s, 9H, terc-butilo) , 1, 49-: L, 18 (m, , 3H) . (b) : RMN de 1H (500 MHz, DMSO- d6, δ, ppm) : 7,91 (d, 2H, aromático H, J = 8 Hz), 7,67 (t, 1H, , aromático H, J = 7 Hz ), 7,53 (t, 2H, aromático H, J = = 8 Hz) , 6,85 (d, 1H, NH, J = 7 Hz) , 5, 12 (d, 1H, OH, J = 3 Hz) , 3, ,89 (d, 1H, 135 ΡΕ2137143 J = 4 Hz), 3,62 (bs, 1H) , 3,41 (bs, 1H) , 2,10 (m, 1H) , 1,69-1,48 (m, 5H), 1,35 (s, 9H, terc-butilo).
Passo B. Éster S-(4-terc-butoxicarbonilamino-2-oxo-ciclo-hexilico) do ácido tiobenzóico.
Uma mistura de éster S-((IR,2R,AR)-4-terc-butoxi-carbonilamino-2-hidroxi-ciclo-hexílico) do ácido tiobenzóico + diastereómero (IS,2S, 4S) (5 g, 14,2 mmol), crivo molecular de 4Â (3 g), e 1,1-di-hidro-l,1,1-triacetoxi-l,2-benziodoxol-3 (1H)-ona (6,33 g, 15 mmol) em 100 mL de diclorometano, foi agitada sob árgon a 5°C durante 1 hora e durante 1 hora à temperatura ambiente. A mistura foi filtrada sobre Celite, secada e concentrada sob vácuo, para dar o produto em bruto. Após cromatografia da mistura (silica, tolueno/acetato de etilo = 7/1), foi obtido o composto do titulo (tolueno/acetato de etilo = 3/1, Rf = 0,48, 4,18 g, 84% de rendimento), na forma de um sólido branco. RMN de 1H (DMS0-d6, 200 MHz, δ, ppm): 7, 83 (d, 2H, aromático H, J = 7 Hz,), 7,71 (t, 1H, aromático H, J = 7 Hz), 7,57 (t, 2H, aromático H, J = 7 Hz), 7,16 (bd, 1H, NH, J = = 8 Hz), 4, 48 (m, 1H) , 3,98, 3,7 (2m, 1H) , 2,58 (m, 2H), 2, 31-1,68 (m, 4H), 1,39 (s, 9H, terc -butilo).
Passo C. 14-0-[(2-Benzoiloxi-4-terc-butoxicarbo-nilamino-ciclo-hex-l-en-ilsulfanil)-acetil]-mutilina.
Uma mistura de éster S-(4-terc-butoxicarbonilami- 136 ΡΕ2137143 no-2-oxo-ciclo-hexílico) do ácido tiobenzóico (2 g, 5,72 itimol) , tosilato de pleuromutilina (3,96 g, 7,44 mmol), carbonato de potássio (1,58 g, 11,44 mmol) e cloreto de tetrabutilamónio mono-hidratado (0,2 g, 0,68 mmol) em 20 mL de dimetilformamida e 2 mL de água, foi agitada durante 24 horas. A mistura foi tomada em acetato de etilo, lavada com uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio e com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, foi secada e concentrada sob vácuo. Após cromatografia da mistura (sílica, tolueno/acetato de etilo = 5/1), foi obtido o composto do título (tolueno/acetato de etilo = 3/1, Rf = 0,24, 2,36 g, 58% de rendimento), na forma de uma espuma branca. RMN de 1H (DMSO-de, 400 MHz, δ, ppm, inter alia): 7,99 (d, 2H, aromático H, J = 7 Hz), 7,70 (t , 1H, aromático H, J = 7 Hz) , 7,54 (t, 2H, aromático H, J 8 Hz) , 6,91 (bd, 1H, NH, J = 5 Hz), 6,13 (dd, 1H, 19-H, ' = 18 Hz e 11 Hz), 5, 53 (dd, 1H, 14-H, J = 3 Hz e 8 Hz) , 5, 10 (dd, 1H, 20-H, J = 2 Hz e 17 Hz), 5,04 (dd, 1H, 20-H, J = 2 Hz e 11 Hz), 4, 49 (d, 1H, , 11-OH, J — 6 Hz) , 3,64 (bs, 4 '-Η, 1H) , 3, 49 -3, 35 (m, , 3H), 2, 46 -2, 34 (m, 3H :), 2,28-2, 02 (m, 4H) , 1/ 87 (m, 1H) , 1,67-1, 42 (m, 5H) , 1, 41- -1,36 (m / 1H) , 1,37 (s f 9H, terc -butilo), 1, , 34 (s, 3H, 15- CH3), 1, 23 (m, 1H) , 1/ 06 (s, 3H, 18-CH3) , 1 , 00 (m, 1H) , 0 ,81 (d, 3H, 17- -ch3, J = 7 Hz) , o, 58 (d, 3H 16- CH3, J = 7 Hz !, 3H) . MS-ESI (m/z) : 732 (MNa+) .
Passo D. 14-0-[(4-terc-Butoxicarbonilamino-l-oxo- ciclo-hexilsulfanil)-acetil]-mutilina. 137 ΡΕ2137143
Uma solução de 14-0-[(2-benzoiloxi-4-terc-butoxi-carbonilamino-ciclo-hex-l-en-ilsulfanil)-acetil]-mutilina (0,8 g, 1,13 mmol) em 8 mL de metanol e 1,25 mL de hidróxido de sódio aquoso a 1 M (1,25 mmol), foi agitada durante 0,5 horas. A mistura foi diluída com água e extraída com diclorometano. 0 extracto orgânico foi secado sobre sulfato de magnésio e concentrado sob vácuo, para dar uma mistura. Após cromatografia da mistura (sílica, tolueno/acetato de etilo = 5/1), foi obtido o composto do título (tolueno/acetato de etilo = 3/1, Rf = 0,13, 0,57 g, 83% de rendimento), na forma de uma espuma branca. RMN de '"H (DMSO-de, 400 MHz, δ, ppm, inter alia) : 7,04 (m 1H, NH) , 6,12 (m, 1H, 19-H), 5,53 (m , 1H, 14-H), 5,09-5,02 (m, 2H , 20-H) , 4,49 (m, 1H , 11-OH) , 3, 65 (m, 1H, 4 ' -H) 3,40 ( |m, 1H) , 3,32-3,14 ( m, 2H), 2,39 (s, 1H, 4-H) 2,40-0, 95 (m) , 1,35 (s, 9H, terc-butilo) , 1,34 (s, 3H, 15-CH3) , 1,05 (s, 3H, I8-CH3), 0,81 (d, 3H, 17-CH3, J = 7 Hz), 0,60 (d, 3H, I6-CH3, J = 7 Hz). MS-ESI (m/z) : 628 (MNa+) .
Passo E. 14-0-[(4-Amino-2-oxo-ciclo-hexilsulfa-nil)-acetil]-mutilina.
Tratou-se 14-0-[(4-terc-Butoxicarbonilamino-2- oxo-ciclo-hexilsulfanil)-acetil]-mutilina (0,55 g, 0,91 mmol) com 2,3 mL de HC1 a 4M em dioxano (9,2 mmol), de acordo com o método do Exemplo 32 Passo F e agitou-se durante 2 horas à temperatura ambiente. Após processamento, 138 ΡΕ2137143 foi obtido o composto do titulo (0,42 g, 91 % de rendi mento), na forma de uma espuma branca. RMN de 1H (DMSO-dõ, 400 MHz, δ, ppm, inter alia) : 6, 13 (m, 1 Η, 19-H) , 5,53 (d, 1H, 14-H, J = 4 Hz), 5,05 (m, 2H, 20-H), 4,48 (bs, 1H, 11-OH), 3,55-3,10 (m), 2,41-2,30 (m) , 2,22-2,13 (m, 2H) , 2,12-1,99 (m, 3H) , 1, 69-1,55 (m, 3H) , 1,55-1,20 (m) , 1,35 (s, 3H, 15-CH3) , 1,05 (s, 3H, 18-CH3) , 0,99 (m, 1H) , 0,81 (d, 3H, 17-CH3, J = 7 Hz), 0,61 (d, 3H, I6-CH3) .
Exemplo 35 - Sal 14-0-[(5-Amino-2-oxo-ciclo- hexilsulfanil)-acetil]-mutilina do ácido succinico.
Passo A. Éster S-(5-terc-butoxicarbonilamino-2-oxo-ciclo-hexílico) do ácido tiobenzóico.
Tratou-se éster S-((IR,2R,5S)-5-terc-butoxicarbo-nilamino-2-hidroxi-ciclo-hexílico) do ácido tiobenzóico + diastereómero {1S,2S,5R) (8,7 g, 24,8 mmol), proveniente do
Exemplo 34 Passo A, com 1,1-di-hidro-l,1,1-triacetoxi-l, 2-benziodoxol-3(1H)-ona (11,02 g, 26 mmol), de acordo com o método do Exemplo 34 Passo B. Após processamento e cromatografia da mistura (sílica, tolueno/acetato de etilo = 6/1), foi obtido o composto do título (tolueno/acetato de etilo = 3/1, Rf = 0,43, 7,15 g, 83% de rendimento), na forma de um sólido branco. RMN de 1H (DMS0-d6, 200 MHz, δ, ppm): 7,91 (d, 2H, aromático H, J = 7 Hz), 7,71 (t, 1H, aromático H, J = 7 Hz), 7,55 (t, 2H, aromático H, J = 7 Hz), 6,97 (d, 139 ΡΕ2137143 1Η, NH, J = 7 Hz), 4,70 (m, 1H) , 4,02 (m, 1H) , 2,79 (m, 1H) , 2,46-2,22 (m, 2H) , 2,18-1,93 (m, 2H) , 1,75 (m, 1H) , 1,39 (s, 9H, terc-butilo).
Passo B. 14-0-[(2-Benzoiloxi-5-terc-butoxicarbo-nilamino-ciclo-hex-l-en-ilsulfanil)-acetil]-mutilina.
Tratou-se éster S-(5-terc-butoxicarbonilamino-2-oxo-ciclo-hexílico) do ácido tiobenzóico (1 g, 2,86 mmol) com tosilato de pleuromutilina (1,98 g, 3,72 mmol), de acordo com o método do Exemplo 34 Passo C. Após processamento e cromatografia (sílica, tolueno/acetato de etilo = 5/1) da mistura, foi obtido o composto do título (tolueno/acetato de etilo = 3/1, Rf = 0,23, 1,33 g, 65% de rendimento), na forma de uma espuma branca. RMN de 1H (DMSO- -d6, 500 MHz , δ, ppm, int er a ilia ) : 8 0 0 (d, 2H, aromático H b J = 8 H !z), 7,7 '0 (t, 1H, aromático H, J = 7 Hz) , 7, 54 (t, 2H, aromático H, J = 8 Hz ) , 6 , 96 (d, O (_n H, J = = 8 Hz ), 6, 92 ( d, 0,5H, , J = 8 Hz) , 6, 12 ( dd, 1H, 19- H, J = 18 Hz e 11 Hz( ) , 5,52 (dd, 1H, . 14- -H, J = 3 H z e 82 Hz) , 5, 08 (dd, 1H !, H- 20 , J = 2 H; 1 e 18 Hz) r 5, 05 ( dd, 1H, H-20, J = 2 Hz e ii : Hz) , 4,51 (t ou 2d, 1H, j : 6 H :z), 3, 63 (bs, 1H) r 3,47- 3,33 (m, 3H) , 2, 55 (m, 1H) r 2, 44-2 , 32 (m, 2H) , 2,2! 9-2 ,14 (m, 3h; ), 2,10- -2, 01 (m, 3H) 1 / 1 , 84 (m, 1H) co ÍD \—1 -í, 57 (m, 3H) f \—1 (m, 1H) , 1,39 ( s, 9H, terc-butil o) , 1, , 34, 1,32 ( 2s, 3H, 1 5-CH3) , 1, 29- -1 ,18 (m, 3H) , 1,05 (s f 3H, 18-CH3) , 0,98 (m, 1H) , 0, 81 (d, 3H, 17- ch3, J = = 7 Hz ), o, 58 ( d, 3H, 16- ch3 , J = 7 Hz ) · MS-ESI {m/z) : 732 (MNa+) . 140 ΡΕ2137143
Passo C. 14-0-[ (5-te.rc-Butoxicarbonilamino-2-oxo-ciclo-hexilsulfanil)-acetil]-mutilina.
Tratou-se 14-0-[(2-Benzoiloxi-5-terc-butoxicar-bonilamino-ciclo-hex-l-en-ilsulfanil)-acetil]-mutilina (1 g, 1,41 mmol) com 1,55 mL hidróxido de sódio aquoso a 1M (1,55 mmol), de acordo com o Exemplo 34 Passo D. Após processamento e cromatografia da mistura (sílica, tolue-no/acetato de etilo = 5/1), foi obtido o composto do título (tolueno/acetato de etilo = 3/1, Rf = 0,22, 0,6 g, 70% de rendimento), na forma de uma espuma branca. RMN de L H (DMSO- d6, 400 MHz, δ, ppm, int er alia): 6 <J\ 00 (d, 0,5H , NH , J = = 6 Hz) , 6, 86 (d, 0,5 H, J = 8 Hz) , 6, 17- 6, 05 (m, 1H, 19-H) , £ >, 51 (d, 1H, 14- -H, J = = 8 Hz ), 5,09-4 ,99 (m, 2H, 20-H ), 4, 47 (m, 1H, 11-OH), 3,92, 3, 55 (2m, 1H, 1' -H) , 3,79 (m, 1H, 5'- H) , 3, 40 (t, 1H , 11-H , J = 6 Hz), 3, 35- 3, 12 (m, 2H) , 2,77 , 2 , 50 (2m, 1H) , 2 ,41-1, 90 (m) , 1,71-1, 18 (m) , 1,37 (s, 9H, terc-butilo) , 1,35 (s, 3H, 15-CH3) , 1,04 (s, 3H, 18-CH3), 0,99 (m, 1H) , 0,80 (d, 3H, 17-CH3, J = 7 Hz), 0,59 (d, 3H, 16-CH3, J = 6 Hz) .
Passo D. 14-0-[(5-Amino-2-oxo-ciclo-hexilsulfa-nil)-acetil]-mutilina.
Tratou-se 14-0-[(5-terc-Butoxicarbonilamino-2-oxo-ciclo-hexilsulfanil)-acetil]-mutilina (0,3 g, 0,5 mmol) com 1,25 mL de HC1 a 4M em dioxano (5 mmol), de acordo com o método do Exemplo 32 Passo F e agitou-se durante 2 horas. 141 ΡΕ2137143
Após processamento, foi obtido o composto do titulo (0,26 g, rendimento quantitativo, não corrigido), na forma de uma espuma branca, que foi directamente tomada para o passo seguinte. MS-ESI (m/z) : 506, 0 (MH+) .
Passo E. Sal 14-0-[(5-Amino-2-oxo-ciclo-hexilsul-fanil)-acetil]-mutilina do ácido succinico.
Uma solução de ácido succinico (59 mg, 0,5 mmol) em 5 mL de isopropanol, foi adicionada, sob agitação, ao longo de um período de 5 minutos, a uma solução de
14-0-[(5-Amino-2-oxo-ciclo-hexilsulfanil)-acetil]-mutilina (0,26 g, 0,5 mmol) em 10 mL de éter metil terc-butílico e 5 mL de isopropanol. A mistura foi agitada durante 4 horas e foi libertada do solvente. 0 resíduo foi dissolvido em 2 mL de isopropanol e foram-lhe adicionados 20 mL de éter metil terc-butílico, e agitou-se durante 1 hora. O precipitado foi filtrado, lavado com 5 mL de éter metil terc-butílico e secado sob vácuo para se obter o composto do título (0,18 g, 58% de rendimento), na forma de um sólido branco. RMN de (DMSO dg, 400 MHz, δ, ppm , inter a '.lia) : 6,18- LO O LD (m, 1H, H- 19) r 5, 52 (d, 1H, 14- -H, , J = 7 Hz) , 5,12-4,98 (m, 2H, 20- H) , 4, 50 (bs, 1H, . 11- -0H) , 3, 89, 3,53 (2m, 1H, 1' -H) , 3,42 -3, 14 (m) r 2,39 (s, 1H) , 2 ,27 (s, 2H) , 2,23-1,96 (m) , 1, 69 -1, 17 (m) r 1,34 (s, 3H, 15 -ch3 ), 1,08 ( s, 3H, 18-CH3) , 1,13 -o, 93 (m) f 0, 80 (d, 3H, 17- ch3, J = 7 Hz ), 0,59 (d, 3H, 16-CH3, J = 6 Hz) . 142 ΡΕ2137143
Exemplo 36 - Sal 14-0-{ [ (6.R, 8.R)-8-Amino-l, 4-di-oxa-espiro[4.5]dec-6-ilsulfanil]-acetil}-mutilina do ácido succínico + diastereómero (6S,8S) do sal de ácido succí-nico.
Passo A. Ester S-( (6.R, 8.R)-8-terc-butoxicarbo-nilamino-1,4-dioxa-espiro[4.5]dec-6-ilico) do ácido tioben-zóico + diastereómero (6S,8S) .
Uma mistura do composto do Exemplo 35 Passo A (2,00 g, 5,72 mmol), 1,2-etanodiol (2,0 mL, 35,8 mmol) , 25 mL de diclorometano e BF3 (48% de pureza, 0,60 mL, 4,25 mmol), foi agitada durante 2 dias. A mistura foi diluída com diclorometano e lavada com uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio e com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, foi secada e libertada do solvente. Após cromatografia (sílica, acetato de etilo/ci-clo-hexano = 1/9 -> its/85), foi obtido o composto do título (tolueno/acetato de etilo = 9/1, Rf = 0,28, 632 mg, 28% de rendimento), na forma de uma espuma branca. RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz, δ, ppm) : 7,89 (m, 2H, aromático H), 7,66 (t, 1H, aromático H, J = 8 Hz), 7,53 (t, 2H, aromático H, J = 8 Hz), 6,86 (d, 1H, NH, J = 8 Hz), 4,04 -3,83 (m, 5H) , 3,48 (m, 1H) , 2, 09-1,40 (m, 6H) , 1,35 (s, 9H, terc-butilo).
Passo B. Éster terc-butilico do ácido {{6R,8R)-6-Mercapto-1,4-dioxa-espiro[4.5]dec—8—il)—carbâmico + dias— tereómero (6S,8S). 143 ΡΕ2137143
Uma mistura de éster S-( ( 6.R, 8.R)-8-terc-butoxicar-bonilamino-1,4-dioxa-espiro[4.5]dec-6-ílico) do ácido tio-benzóico + diastereómero (65,85) (695 mg, 1,77 mmol) e hidrazina (solução aquosa a 80%, 0,10 mL, 2,65 mmol) em 7 mL de diclorometano, foi agitada durante 24 horas. A mistura foi diluída com diclorometano e lavada com HC1 aquoso a 1 M, secada e libertada do solvente, para se obter o composto do título (4 90 mg, 95% de rendimento) , na forma de um óleo amarelo acinzentado. RMN de 1H (CDCI3, 400 MHz, δ, ppm, inter alia) : 4,34 (bs, 1H, NH) , 4,13-4,05 (m, 2H) , 3, 95-3, 85 (m, 2H) , 3,49 (bs, 1H) , 2,98 (m, 1H), 2,25 (m, 1H) , 1,90-1,75 (m, 2H), \—1 •EJ1 \—1 1 CD \—1 (m) , 1,37 (s, 9H, terc-butilo).
Passo C. 14-0-{[{6R,8R)-8-terc-Butoxicarbonilami-no-1,4-dioxa-espiro[4.5]dec-6-ilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (65,85).
Tratou-se éster terc-butílico do ácido ((6R,8R)~ 6-Mercapto-l,4-dioxa-espiro[4.5]dec-8-il)-carbâmico + diastereómero (65, 85) (410 mg, 1,42 mmol) com tosilato de pleuromutilina (910 mg, 1,71 mmol), de acordo com o método do Exemplo 1 Passo A3 e agitou-se durante 2,5 horas. A mistura foi concentrada in vacuo e o resíduo foi tomado em acetato de etilo, lavado com água, com HC1 aquoso a 0,1 M, com uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio e com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, foi secado e libertado do solvente. Após cromatografia da 144 ΡΕ2137143 mistura (sílica, acetato de etilo/tolueno = 1/4), foi obtido o composto do título (Rf = 0,18, 613 mg, 66% de rendimento), na forma de uma espuma amarelo pálido. RMN de 1H (DMSO-dõ, 400 MHz, δ, ppm, inter alia) : 6,77 (bm, 1H , NH) t 6,13 (dd, 1H, 19-H, J = 11 Hz e 18 Hz), 5, 54 (d, 1H , 14- H, J = 8 Hz) / 5, 11-5, 02 (m, 2H, H-20), 4,47 (m, 1H, 11 -0H) , 4 ,04-3,81 (m, 4H) , 3,39 (m, 1H, 11-H), 3 , 35- 3, 17 (m , 3H) t 3,02 (m, 1H) , 2,39 (s, 1H, 4-H), 2,25-1 ,93 (m) , 1/ 75-1, 18 (m) , 1 , 36 (2s, 12H, I5-CH3, terc- buti lo) , 1, 05-0, 95 (m) , 1,05 (s , 3H, I8-CH3) , 0,81 (d, 3H, 17- ch3, J = 7 H :z), , 0,62 (d, 3H, 16-CH3, J = 7 Hz) . MS-ESI (m/z) : 672 (MNa+) .
Passo D. 14-0-{ [ (6J?, 8J?) -8-Amino-l, 4-dioxa-espiro-[4.5]dec-6-ilsulfanil]-acetilj-mutilina + diastereómero (6S, 8S) .
Tratou-se 14-0-{[(6R,8R)-8-terc-Butoxicarbonil-amino-1,4-dioxa-espiro[4.5]dec-6-ilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (6S,8S) (250 mg, 0,39 mmol) com 1,5 mL de ácido trifluoroacético, de acordo com o método do Exemplo 1 Passo B, e agitou-se durante 6 horas à temperatura ambiente. Após processamento e cromatografia (sílica, diclorometano/metanol = 19/1), foi obtido o composto do título (diclorometano/metanol = 9/1, Rf = 0,15-0,54, 160 mg, 76% de rendimento), na forma de uma espuma branca, que foi directamente tomada para o passo seguinte. 145 ΡΕ2137143
Passo E. Sal 14-0-{ [ (6.R, 8.R)-8-Amino-l, 4-dioxa-espiro[4.5]dec-6-ilsulfanil]-acetil}-mutilina do ácido suc-cinico 4- diastereómero (6S, 8S) do sal de ácido succinico.
Tratou-se 14-0-{[{6R,8R)-8-Amino-l, 4-dioxa-espi-ro[4.5]dec-6-ilsulfanil]-acetil}-mutilina + diastereómero (6S, 85) (120 mg, 0,22 mmol) com ácido succinico (25,7 mg, 0,22 mmol), de acordo com o método do Exemplo 35 Passo E, para se obter o composto do titulo (100 mg, 69% de rendimento), na forma de um sólido amarelo pálido. RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz, δ, ppm, inter alia) : 6,16, 6,15 (2dd, 1H, 19-H, J = 11 Hz e 18 Hz), 5,56 (d, 1H, 14-H, J = 8 Hz), 5,14-5,02 (m, 2H, 20-H), 4,53 (bs), 4,08-3,85 (m) , 3,48-3,21 (m) , 3,12-3,01 (m) , 2,42 (bs, 1H, 4-H) , 2,30 (s, 4H, ácido succinico), 2,26-2, 02 (m) , 1,84-1,21 (m) , 1,38 (s, 3H, 15-CH3) , 1,08 (s, 3H, I8-CH3) , 0,83 (d, 3H, I7-CH3, J = 7 Hz), 0,64 (d, 3H, I6-CH3, J = 7 Hz) .
Exemplo 37 - 14-0-{[5-Amino-2-metoxi-ciclo-hexil-sulfanil]-acetil}-mutilina e 14-0-{[4-Amino-2-metoxi—ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina.
Passo A. 14-0-{ [5-tejrc-Butoxicarbonilamino-2-metoxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina e 14-0-{[4-terc-Butoxicarbonilamino-2-metoxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina.
Uma solução gelada de 14-0-{[(1.R, 2.R, 5S)-5-terc-butoxicarbonilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}- 146 ΡΕ2137143 mutilina + diastereómero (1S,2S,5R) (4,00 g, 6,58 mmol), proveniente do Exemplo 1 Passo A, em 120 mL de dicloro-metano, foi tratada com BF3 (48% de pureza, 0,20 mL, 1,65 mmol), seguido de trimetilsilildiazometano (a 2M em hexano, 0,82 mL, 1,64 mmol) sob agitação. Após 20 minutos, foram adicionadas 3 quantidades adicionais de BF3 (48% de pureza, 0,20 mL, 1,65 mmol) seguidas de 3 quantidades adicionais de trimetilsilildiazometano (a 2M em hexano, 0,82 mL, 1,64 mmol) de cada vez a 20 minutos de intervalo. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 30 minutos, foi carregada com 200 mL de uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio e agitada. A fase orgânica foi separada e lavada com uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio, foi secada e libertada do solvente, para dar uma mistura. Após cromatografia (sílica, acetato de etilo/ciclo-hexano = 1/4 -> 1/1), foi obtida uma mistura dos compostos do título (0,49 g, 12% de rendimento), na forma de uma mistura de espuma branca. RMN de 1H (DMS0-d6, 500 MHz, δ, ppm, inter alia) : 6,72 (bm, 1H, NH), 6,17-6,09 (2dd, 1H, 19-H, J = 11 Hz e 18 Hz), 5,54 (2d, 1H, 14-H, J = 8 Hz), 5, 10-5,00 (m, 2H, 20-H), 4,49 (d, 11-OH, J = 6 Hz), 3,50-3, 17 (m), 3,21 (2s, 3H, OMe), 2,40 (bs, 1H, 4-H) , 2,26-2,01 ( m) , 1,73-1,56 (m) , 1,53-0, 96 (m) , 1,35 (2s, 12H , 15-CH3, terc- -butilo), 1, 05 ( s, 3H, 18-CH3), 0,81 (d, 3H, 17-CH3, J = 7 Hz), 0, 62 ( d, 3H, 16-CH3, J = 7 Hz).
Passo B. 14-0{[5-Amino-2-metoxi—ciclo—hexil— sulfanil]-acetil}-mutilina e 14-0-{[4-Amino-2-metoxi—ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina. 147 ΡΕ2137143
Tratou-se 14-0-( [5-te.rc-Butoxicarbonilamino-2-metoxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina e 14-0-([4-terc-Butoxicarbonilamino-2-metoxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina (80 mg, 0,13 mmol) com 0,32 mL de HCl a 4M em dioxano (1,28 mmol), de acordo com o método do Exemplo 32 Passo F e agitou-se durante 2 horas. Após processamento e cromatografia (silica, acetato de etilo/meta-nol/NH3 aquoso a 28% = 500/100/1), foi obtida uma mistura dos compostos do titulo (12 mg, 18% de rendimento, não corrigido), na forma de uma espuma branca. RMN de 1H (DMSO-d6, 500 MHz, δ, ppm, inter alia) : 6,18-6,05 (m, 1H, 19-H), 5,55 (m, 1H, 14-H), 5,10-5,00 (m, 2H, 20-H), 4, 58, 4,50 (2m, 1H, 11-OH), 3,55-3,20 (m) , 2,86-2,72 (m) 2, 44, 2,40 (2s, 1H, 4-H) , 2,22-1,99 (m) , 1,78-1,20 (m) 1/ 06, 1,05 (2s, 3H, 18-CH3) , 1,03 (m, 1H) , 0,81 (m, 3H 17 -CH3), 0, 62 (m, 3H, I8-CH3) . MS-ESI (m/z) : 522 (MH+) .
Lisboa, 5 de Dezembro de 2011

Claims (14)

  1. ΡΕ2137143 1 REIVINDICAÇÕES 1. Composto com a fórmula (I)
    n é de 0 a 4; R3 na m é 0 ou 1 com a condição de que o átomo de enxofre e estejam numa posição vicinal (se m = 0 então R3 está posição 2', e se m = 1 então R3 está na posição 1'); R é etilo ou vinilo; Ri é hidrogénio ou alquilo (Ci-C6) , R2 é hidrogénio ou cicloalquilo (C3-C4) , ou alquilo (Ci-Cõ) não substituído, ou alquilo(Ci-Cõ) substituído com um ou mais de ΡΕ2137143 2 hidroxilo; preferencialmente um ou dois metoxilo, halogéneo, cicloalquilo (C3-C6) , ou Ri e R2 conjuntamente com o átomo de azoto ao qual estão ligados formam um anel heterociclico com 5 a 7 membros contendo pelo menos 1 átomo de azoto ou 1 átomo de azoto e 1 heteroátomo adicional, por exemplo seleccionado a partir de N ou 0, ou Ri é hidroxilo e R2 é formilo; R3 é OH, OR4, um átomo de halogéneo, ou R3 está ligado a 2' e representa -0-(CH2)P-0- com p igual a 2 ou 3 ; R4 é alquilo (Ci-C6) não substituído ou cicloalquilo (C3—Οβ) ·
  2. 2. Composto de acordo com a Reivindicação 1, que tem a fórmula (II)
    K* O 3 ΡΕ2137143 em que n, R, Ri, R2 e R3 são como definido na Reivindicação 1.
  3. 3. Composto de acordo com a Reivindicação 1, que tem a fórmula (III)
    em que n, R, Rlf e R2 são como definido na Reivindicação 1.
  4. 4. Composto de acordo com a Reivindicação 1, que tem a fórmula (IV)
    em que n, Ri, e R2 são como definido na Reivindicação 1.
  5. 5. Composto de acordo com a Reivindicação 1, que tem a fórmula (V) 4 ΡΕ2137143 OH
    •JL
    O em que n, Ri, e R2 são como definido na Reivindicação 1.
  6. 6. Composto de acordo com a Reivindicação 1 que tem a fórmula (VI)
    em que n, Ri, e R2 são como definido na Reivindicação 1.
  7. 7. Composto de acordo com uma das Reivindica ções 1 a 6, seleccionado a partir do grupo consistindo de 14-0-{[(IR,2Rr 4R)-4-Amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina 14-0-{[(IS,2S, 4S)-4-Amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina 14-0-{[{IR,2R,5S)-5-Amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina 5 ΡΕ2137143 14-0-{[(15,2S,5R)-5-Amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina 14-0-{[(IR,2R,4S)-4-Amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (15, 2S, 4R) 14-0-{[(1R,2R,5R)-5-Amino-2-hidroxi-ciclo-hexi1sulfanil]-acetil}-mutilina 14-0-{[(1S,2S,5S)-5-Amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina 14-0-{[(1R,2R,3R)-3-Amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (15, 25, 35) 14-0- { [ (1-R, 2R, 4R) -4-Dietilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsul-fanil]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (15, 25, 4S) 14-0- { [ (1-R, 2R, AR) -4-Etilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsul-fanil]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (15,25,45) 14-0- { [ (1-R, 2R, bS) -5-Etilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsul-fanil]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (IS, 2S, 5R) 14-0-{[(IR,2R,5S)-5-Dietilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsul-fanil]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (IS,2S,5R) 14-0-{[(IR,2R,AS)-4-Dietilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsul-fanil]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (15,2S,AR) 6 ΡΕ2137143 14-0-{[(1R,2R,5R)-5-Dietilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsul-fanil]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (15, 25, 55) 14-0-{[(1R,2R, 3R)-3-Etilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsul-fanil]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (15, 25, 35) 14-0-{[(IR,2R,3R)-3-Dietilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsul-fanil]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (15,25,35) 14-0-{[(1R,2R,45)-4-(Formil-hidroxi-amino)-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (15, 25, 4R) 14-0-{[(1R,2R,5S)-5-(Formil-hidroxi-amino)-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (15, 25, 5R) 14-0-{[(IR,2R,3R/S)-3-(Formil-hidroxi-amino)-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (15, 25, 3R/S) 14-0-{[(1R,2R, 55)-2-Hidroxi-5-metilamino-ciclo-hexilsul-fanil]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (15,25,5R) 14-0-([{1R,2R,55)-5-Alilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsul-fanil]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (15,25,5R) 7 ΡΕ2137143 14-0-{[(IR, 2R, 5S)-2-Hidroxi-5-(2-metoxi-etilamino)-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (15, 25, 5R) 14-0-([{1R,2R,AR*)-2-Hidroxi-4-(2-hidroxi-etilamino)-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (15, 25, 45*) 14-0-([{1R,2R,AR*)-4-Ciclo-hexilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (15,25, 45*) 14-0-{[(1R,2R, AR*)-4-Ciclopropilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (15, 25, 4S*) 14-0-([{IR, 2R, 5S*)-4-Ciclopropilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (15, 2S, 5R*) 14-0-([(1R,2R,45)-4-Ciclopropilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (15, 25, AR*) 14-0-([(1R,2R,5R*)-2-Hidroxi-5-morfolin-4-il-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (15, 25, 55*) ΡΕ2137143 14-0-{[(IR,2R,5S)-2-Hidroxi-5-morfolin-4-il-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (15, 25, 5R*) 14-0-{[(IR,2R,5S)-5-Amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-19,2O-di-hidro-mutilina e o seu diastereómero (15, 25, 5R) 14-0-{[(1R,2R,55)-5-Etilamino-2-hidroxi-ciclo-hexilsul-fanil]-acetil}-19,2O-di-hidro-mutilina e o seu diastereómero (15, 2S, 5R) 14-0-{[{IR,2R,5R)-5-Amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-19,2O-di-hidro-mutilina e o seu diastereómero (15, 25, 55) 14-0-{[{1R,2R)-4-Aminometil-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (15,25) 14-0-{[5-Amino-2-cloro-ciclo-hexilsulfanil]-acetil-mutilina 14-0-{[4-Amino-2-cloro-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina 14-0-[(4-Amino-l-hidroxi-ciclo-hexilmetilsulfanil)-acetil]-mutilina 14-0-{[{1R,2R)-2-Hidroxi-5-(3-metilamino-propil)-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (15, 25) 9 ΡΕ2137143 14-0-{[(IR,2R)-2-Hidroxi-4-(3-metilamino-propil)-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (1S,2S) 14-0-([(IR,2R)-5-(3-Amino-propil)-2-hidroxi-ciclo-hexilsul-fanil]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (IS,2S) 14-0-([(IR,2R)-4-(3-Amino-propil)-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (1S, 2S) 14-0-([(6R,8R)-8-Amino-l,4-dioxa-espiro[4.5]dec-6-ilsul-fanil]-acetil}-mutilina e o seu diastereómero (6S,8S) 14-0-([4-Amino-2-metoxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina e 14-0-([5-Amino-2-metoxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina.
  8. 8. Composto de acordo com a Reivindicação 7, que é 14-0-([(IR,2R,4R)-4-amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina. 10 ΡΕ2137143
  9. 9. Composto de acordo com a Reivindicação 7, que é 14-0-{[(15,25,45)-4-amino-2-hidroxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina.
  10. 10. Composto de acordo com qualquer das Reivindicações 1 a 9 na forma de um sal e/ou solvato.
  11. 11. Composto de acordo com qualquer das Reivindicações 1 a 10 para utilização como substância medicamentosa farmacêutica.
  12. 12. Utilização de um composto de qualquer uma das Reivindicações 1 a 10 na preparação de um medicamento para o tratamento de doenças mediadas por micróbios.
  13. 13. Composição medicamentosa farmacêutica incluindo um composto de qualquer uma das Reivindicações 1 a 10, em associação com pelo menos um excipiente farmacêutico.
  14. 14. Composição medicamentosa farmacêutica de acordo com a Reivindicação 13, incluindo adicionalmente outro agente farmaceuticamente activo. Lisboa, 5 de Dezembro de 2011
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