PT1853271E - Método e composição para o tratamento de doenças vasculares periféricas - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO

"MÉTODO E COMPOSIÇÃO PARA O TRATAMENTO DE DOENÇAS VASCULARES PERIFÉRICAS"

CAMPO TÉCNICO A presente invenção refere-se à utilização de um composto de 11-desoxi-prostaglandina para a preparação de uma composição para tratamento de uma doença vascular periférica num indivíduo mamífero.

TÉCNICA ANTECEDENTE

As doenças vasculares são, muitas vezes, o resultado da perfusão diminuída no sistema vascular ou lesão física ou bioquímica no vaso sanguíneo.

Doença vascular periférica (PVD) é definida como uma doença dos vasos sanguíneos muitas vezes observada como o estreitamento dos vasos dos membros. Existem dois tipos principais de distúrbios deste tipo, doença funcional que não envolve defeitos nos vasos sanguíneos, mas em vez disso surge de estímulos tais como frio, stress ou o acto de fumar e doença orgânica que surge de defeitos estruturais na vasculatura, tais como lesões ateroscleróticas, inflamação local ou lesão traumática. Isto pode conduzir à obstrução do vaso, fluxo sanguíneo anormal e, por último, isquemia. 1

Uma das formas clinicamente mais significativas da PVD é a doença arterial periférica (PAD). A PAD é muitas vezes tratada por angioplastia e implante de uma endoprótese expansível ou por cirurgia de bypass arterial. A apresentação clínica depende da localização do vaso obstruído. Por exemplo, o estreitamento da artéria que fornece o sangue ao intestino resulta em dor pós-prandial grave no abdómen inferior, resultando de incapacidade do vaso obstruído para ir de encontro à exigência de oxigénio aumentado que surge de processos digestivos e absortivos. As formas graves de isquemia podem conduzir à necrose nos intestinos. De um modo semelhante, a PAD na perna pode conduzir a dor intermitente, normalmente no gémeo, que aparece e desaparece com a actividade. Este distúrbio é conhecido como claudicação intermitente (IC) e pode evoluir até dor persistente durante o descanso, ulceração isquémica e até mesmo amputação. A doença vascular periférica manifesta-se também na estenose ateroesclerótica da artéria renal, que pode levar à isquemia renal e disfunção do rim.

Uma doença na qual as doenças vasculares e as suas complicações são muito comuns é a diabetes mellitus. A diabetes mellitus provoca várias irregularidades fisiológicas e anatómicas, sendo a de maior relevo a incapacidade do corpo para utilizar a glucose normalmente, que resulta em hiperglicemia. A diabetes crónica pode levar a complicações do sistema vascular que incluem aterosclerose, anormalidades envolvendo os vasos sanguíneos de tamanho médio e grande (macroangiopatia) e anormalidades envolvendo os vasos sanguíneos pequenos (microangiopatia), tais como arteríolas e capilares. 2

Os doentes com diabetes mellitus estão em risco elevado de desenvolverem uma ou mais úlceras do pé como resultado de complicações estabelecidas da doença de longo termo, que incluem função nervosa insuficiente (neuropatia) e/ou isquemia. A isquemia local dos tecidos é um factor de contribuição chave para a ulceração do pé em diabéticos. Além da doença dos grandes vasos, os doentes com diabetes sofrem também de ameaça à sua perfusão na pele de, pelo menos, dois modos adicionais. Inicialmente, por envolvimento das artérias não condutoras, que são prejudicialmente afectadas pelo processo de aterosclerose. Em segundo, e talvez o mais importante, por insuficiência dos mecanismos de controlo da microcirculação (doença dos pequenos vasos). Normalmente, quando uma parte do corpo sofre de trauma, a parte do corpo irá, como parte do mecanismo de cicatrização do corpo, experimentar um fluxo sanguíneo aumentado. Quando a doença dos pequenos vasos e isquemia estão presentes, como no caso de muitos diabéticos, esta resposta do fluxo sanguíneo aumentado naturalmente é significativamente reduzida. Acredita-se que este facto, em conjunto com a tendência dos diabéticos para formar coágulos sanguíneos (trombose) no sistema microcirculatório, durante os níveis baixos de fluxo sanguíneo, seja um factor importante na patogénese da úlcera. A neuropatia é um termo geral que descreve um processo de doença que conduz à disfunção do sistema nervoso e uma das complicações principais da diabetes mellitus sem terapias bem estabelecidas, para qualquer dos seus tratamentos sintomáticos ou para prevenção do declínio progressivo na função do nervo. 0 espessamento e ruptura dos capilares provocados pela diabetes, afecta inicialmente os olhos (retinopatia) e rins 3 (nefropatia). 0 espessamento e ruptura dos capilares, provocados pela diabetes estão também associados a distúrbios de pele e distúrbios do sistema nervoso (neuropatia). As doenças do olho associadas com a diabetes são a retinopatia diabética não proliferativa, retinopatia diabética proliferativa, maculopatia diabética, glaucoma, cataratas e semelhantes.

Outros, embora não conhecidos como estando relacionados com a diabetes, são semelhantes nos seus efeitos fisiológicos no sistema vascular periférico. Tais doenças incluem a síndrome de Raynaud, sindrome de CREST, doenças autoimunes, tais como eritematose, doença reumatóide e semelhantes.

As prostaglandinas (daqui em diante referidas como PG) são membros da classe dos ácidos carboxilicos orgânicos, que estão inseridos nos tecidos ou órgãos de humanos ou outros mamíferos e exibem uma gama vasta de actividade fisiológica. As PG encontradas na natureza (PG primárias) têm, geralmente, um esqueleto de ácido prostanóico como mostrado na fórmula (A): (cadeia a)

Por outro lado, alguns dos análogos sintéticos das PG primárias têm esqueletos modificados. As PG primárias são classificadas em PGA, PGB, PGC, PGD, PGE, PGF, PGG, PGH, PGI e 4 PGJ de acordo com a estrutura da porção do anel com cinco membros e também classificadas nos seguintes três tipos, pelo número e posição da ligação não saturada na porção da cadeia de carbono:

Subscrito 1: 13,14-insaturado-15-OH

Subscrito 2: 5,6- e 13,14-di-insaturado-15-OH

Subscrito 3: 5,6-, 13,14-,e 17,18-tri-insaturado-15-OH.

Além disso, as PGF são classificadas de acordo com a configuração do grupo hidroxilo na posição 9, em tipo α (o grupo hidroxilo está na configuração a) e em tipo β (o grupo hidroxilo está na configuração β) . A PGEi, PGE2 e PGE3 são conhecidas como tendo actividade vasodilatadora, hipotensora, de diminuição da secreção gástrica, melhoria do movimento do tracto intestinal, de contracção uterina, diurética, broncodilatadora e anti-úlcerativa. As PGFla, PGF2a e PGF3o( têm sido conhecidas como tendo actividade hipertensora, vasoconstrictora, de melhoria do movimento do tracto intestinal, contracção uterina, atrofia do corpo luteinico e broncoconstrictora.

Algumas 15-ceto (i. e., com oxo na posição 15 em vez de hidroxi)-PG e 13,14-di-hidro (i. e., com uma ligação simples entre a posição 13 e 14)-15-ceto-PG, são conhecidas como as substâncias produzidas naturalmente pela acção das enzimas durante o metabolismo das PG primárias. 5 A patente U.S. N° 6197821 de Ueno et al. descreve que alguns compostos de 15-ceto-PGE são antagonistas da endotelina que é considerada como tendo uma relação com a hipertensão, doença de Buerger, asma, doenças do fundo do olho e semelhantes. A patente U.S. N° 6197821 indica que quando a ligação entre a posição 13 e 14 é insaturada, pode ser formado, por vezes, um equilíbrio ceto-hemiacetal pela formação de um hemiacetal entre o grupo hidroxilo na posição 11 e o grupo ceto na posição 15. A Patente U.S. N° 5317032 de Ueno et al. descreve os compostos de prostaglandina catárticos, incluindo a existência de tautómeros bicíclicos e Patente U.S. N° 6414016 de Ueno descreve os tautómeros bicíclicos como tendo actividade pronunciada como agentes anti-obstipação

Os tautómeros bicíclicos, substituídos por um ou mais átomos de halogéneo podem ser empregues em doses pequenas para o alívio da obstipação. Especialmente na posição C-16, os átomos de flúor podem ser empregues em doses pequenas para o alívio da obstipação.

Os fármacos orais utilizados actualmente para doenças vasculares periféricas incluem cilostazole (nome comercial: Pletaal) e preparações de prostaglandina (PG) (nomes comerciais: Dorner, Opalmon, etc.) com um efeito vasodilatador bem como um efeito antiplaquetário, a ticlopidina tem principalmente um efeito antiplaquetário (nome comercial: Panaldina), sarpogrelato (nome comercial: Anplag) e icosapentato de etilo (nome comercial: Epadel) que é também adaptável a hiperlipemia. Têm diferentes mecanismos de acção, então, deste modo pode ser necessário utilizar duas ou três preparações combinadas, 6 dependendo do estado. Particularmente em doença moderada, os fármacos múltiplos são mais provavelmente aplicados. As preparações injectáveis incluem preparações de prostaglandina El, preparações antitrombina (nome comercial: Argatrobano). São, em principio, utilizadas para doença média ou mais grave que requer hospitalização. A eficácia dos fármacos existentes não é completamente satisfatória. Particularmente, os antiplaquetários, tais como ticlopidina ou icosapentato de etilo são menos eficazes, provavelmente porque não é evidente até que extensão as plaquetas estão envolvidas em cado estado ou se o efeito vasodilatador é suficiente mesmo se um fármaco mostra tal efeito ou se a corrente sanguínea em locais isquémicos pode ser selectivamente garantida o suficiente.

SUMARIO DA INVENÇÃO A presente requerente conduziu um estudo extenso e verificou que os compostos de 11-desoxi-prostaglandina possuem efeitos selectivos significativos nas doenças vasculares periféricas, que resultam na conclusão da presente invenção.

Nomeadamente, a presente invenção refere-se à utilização de um composto de 11-desoxi-prostaglandina para a preparação de uma composição para o tratamento da doença vascular periférica num indivíduo mamífero, em que a composição compreende uma quantidade eficaz de um composto de 11-desoxi-prostaglandina, em que o referido composto de 11-desoxi-prostaglandina é um composto representado pela fórmula (III): 7 em que L é hidrogénio, hidroxilo, halogéneo, alquiloCl-6 linear ou ramificado, hidroxialquilo(C1 — 6 linear ou ramificado), alcanoiloxiloCl-6 linear ou ramificado ou oxo, o anel com cinco membros por ter, opcionalmente, pelo menos uma ligação dupla; A é -CH3, -CH2OH, -COCH2OH, -COOH ou um seu sal, éter, éster ou amida; B é -CH2-CH2-; Z é r4

R4 R5 ou 0 em que R4 e R5 são hidrogénio, hidroxilo, halogéneo, alquiloCl-β linear ou ramificado, alcoxiloCl-β linear ou ramificado ou hidroxialquilo(Cl—6 linear ou ramificado), em que R4 e R5 não são hidroxilo e alcoxiloCl-6 linear ou ramificado ao mesmo tempo;

Xi e Χ2 são ambos halogéneo;

Ri é um grupo hidrocarboneto de cadeia bivalente, linear ou ramificada, saturada ou insaturada, com 1 a 14 átomos de carbono, que é não substituída ou substituída com halogéneo, grupo alquilo, hidroxilo, oxo, arilo ou heterocíclico e, pelo menos, um de carbono no hidrocarboneto alifático é opcionalmente substituído por oxigénio, azoto ou enxofre; e R2 é uma ligação simples ou alquilenoCl-6 linear ou ramificado; R3 é alquiloCl-6 linear ou ramificado, alcoxiloCl-6 linear ou ramificado, alcanoiloxiloCl-6 linear ou ramificado, cicloalquilo(C3-6), cicloalquiloxilo(C3-6), arilo, ariloxilo, grupo heterocíclico ou grupo heterocíclico-oxilo e, pelo menos, um de átomo de carbono no hidrocarboneto alifático é opcionalmente substituído por oxigénio, azoto ou enxofre.

Além disso, a invenção refere-se à utilização do composto de 11-desoxi-prostaglandina mencionado anteriormente para a preparação de uma composição para tratar a parede vascular periférica lesionada num indivíduo mamífero.

Outra forma de realização da presente invenção refere-se à utilização do composto de 11-desoxi-prostaglandina mencionado anteriormente para a preparação de uma composição para tratar células endoteliais vasculares periféricas lesionadas num indivíduo mamífero. 9

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS A Fig. IA é um gráfico que mostra o efeito do Composto A (ll-desoxi-13,14-di-hidro-15-ceto-16,16-difluoro-PGEi) na microcirculação periférica diminuída nos ratos, induzida por ET-1. No gráfico, os dados são apresentados como a média ± S.E., *p<0,05 comparada com o controlo tratado com veículo. CTBF: fluxo sanguíneo no tecido cutâneo. A Fig. 1B é um gráfico que mostra o efeito do Composto B (éster isopropílico de ll-desoxi-13,14-di-hidro-15-ceto-16,16-difluoro-PGEi) na microcirculação periférica diminuída em ratos, induzida por ET-1. Os dados são apresentados como a media ± S.E., *p<0,05 comparada com o controlo tratado com veículo. CTBF: fluxo sanguíneo no tecido cutâneo. A Fig. 2A é um gráfico que mostra o efeito do Composto A na Recuperação da Resistência Eléctrica Transendotelial (TEER). As culturas de células endoteliais vasculares foram trazidas a confluência, como medido pela resistência eléctrica transendotelial (TEER). As culturas celulares foram depois privadas de oxigénio, durante 30 minutos, por incubação numa atmosfera de azoto. As células foram depois tratadas com DMSO a 0,1% ou com Composto A 5 nM em DMSO a 0,1%. A significância estatística é indicada para todos os pontos de dados após tratamento com fármaco. N=10 células. 10 A Fig. 2B é um gráfico que mostra o efeito do Composto A na Recuperação do Nível de ATP. As células endoteliais microvasculares humanas (adultos) (HMVEC-AD) foram crescidas para a confluência. As células foram depois expostas, durante 30 minutos, a uma atmosfera de azoto e depois regressaram à atmosfera de ar normal. Os níveis de ATP foram monitorizados nos pontos de tempo indicados, utilizando um sistema de ensaio de luciferina-luciferase (ATPlite, Perkin Elmer). Os níveis de ATP são dados como luminiscência relativa. N=6 células a cada ponto de tempo. A Fig. 3 é um gráfico de RMN de 3H (200 MHz, CDCI3) do composto (6) obtido no Exemplo de Síntese 2 abaixo. A Fig. 4 é um gráfico de RMN de 13C (50 MHz, CDCI3) do composto (6) obtido no Exemplo de Síntese 2 abaixo. A Fig. 5 é um gráfico de RMN de XH (200 MHz, CDCI3) do composto (9) obtido no Exemplo de Síntese 3 abaixo. A Fig. 6 é um gráfico de RMN de 13C (50 MHz, CDCI3) do composto (9) obtido no Exemplo de Síntese 3 abaixo. A Fig. 7 é um gráfico de RMN de XH (200 MHz, CDCI3) do composto (12) obtido no Exemplo de Síntese 4 abaixo. A Fig. 8 é um gráfico de RMN de 13C (50 MHz, CDCI3) do composto (12) obtido no Exemplo de Síntese 4 abaixo. A Fig. 9 é um gráfico de RMN de (200 MHz, CDCI3) do composto (15) obtido no Exemplo de Síntese 5 abaixo. 11 A Fig. 10 é um gráfico de RMN de 13C (50 MHz, CDC13) do composto (15) obtido no Exemplo de Síntese 5 abaixo. A Fig. 11 é um gráfico de RMN de 3H (200 MHz, CDC13) do composto (18) obtido no Exemplo de Síntese 6 abaixo. A Fig. 12 é um gráfico de RMN de 13C (50 MHz, CDC13) do composto (18) obtido no Exemplo de Síntese 6 abaixo. A Fig. 13 é um gráfico de RMN de 3H (200 MHz, CDC13) do composto (21) obtido no Exemplo de Síntese 7 abaixo. A Fig. 14 é um gráfico de RMN de 13C (50 MHz, CDC13) do composto (21) obtido no Exemplo de Síntese 7 abaixo. A Fig. 15 é um gráfico de RMN de 3H (200 MHz, CDC13) do composto (23) obtido no Exemplo de Síntese 8 abaixo. A Fig. 16 é um gráfico de RMN de 13C (50 MHz, CDC13) do composto (23) obtido no Exemplo de Síntese 8 abaixo. A Fig. 17 é um gráfico de RMN de XH (200 MHz, CDC13) do composto (25) obtido no Exemplo de Síntese 9 abaixo. A Fig. 18 é um gráfico de RMN de 13C (50 MHz, CDC13) do composto (25) obtido no Exemplo de Síntese 9 abaixo. A Fig. 19 é um gráfico de RMN de 3H (200 MHz, CDC13) do composto (34) obtido no Exemplo de Síntese 10 abaixo. A Fig. 20 é um gráfico de RMN de 13C (50 MHz, CDC13) do composto (34) obtido no Exemplo de Síntese 10 abaixo. 12

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

Na presente invenção, o "composto de 11-desoxi-prostaglandina" (daqui em diante referido como "composto de 11-desoxi-PG") é como definido na reivindicação 1. A fórmula (A) mostra o esqueleto básico dos átomos C-20 de carbono, mas a presente invenção não está limitada à utilização daqueles com o mesmo número de átomos de carbono. Na fórmula (A), o número dos átomos de carbono que constituem o esqueleto básico dos compostos PG começa no ácido carboxilico (numerado com 1) e átomos de carbono na cadeia α são numerados de 2 a 7 em direcção ao anel de cinco membros, os do anel são de 8 a 12 e aqueles na cadeia ω são 13 a 20. Quando o número de átomos de carbono é diminuído na cadeia α, o número é eliminado de modo a começar da posição 2; e quando o número de átomos de carbono é aumentado na cadeia a, os compostos são denominados como compostos de substituição com os respectivos substituintes na posição 2 em vez do grupo carboxilo (C-l) . De um modo semelhante, quando o número de átomos de carbono é diminuído na cadeia ω, o número é eliminado de modo a começar da posição 20; e quando o número de átomos de carbono é aumentado na cadeia ω, os átomos de carbono para lá da posição 20 são denominados como substituintes. A estereoquímica dos compostos é a mesma que a da fórmula (A) acima a não ser que seja especificado o contrário.

Como referido acima, a nomenclatura dos compostos de 11-desoxi-PG baseia-se no esqueleto do ácido prostanóico. No entanto, no caso de o composto ter uma estrutura parcial semelhante como a prostaglandina, pode ser utilizada a 13 abreviatura de "PG". Assim, um composto 11-desoxi-PG do qual a cadeia α é estendida por dois átomos de carbono, isto é, com 9 átomos de carbono na cadeia α é denominado como composto de 2-descarboxi-2-(2-carboxietilo)-11-desoxi-PG. De um modo semelhante, o composto de 11-desoxi-PG com 11 átomos de carbono na cadeia α é denominado 2-descarboxi-2-(4-carboxibutil)-11-desoxi-PG. Além disso, o composto 11-desoxi-PG do qual a cadeia ω é estendida em dois átomos de carbono, isto é, com 10 átomos de carbono na cadeia ω é denominado como composto de 11-desoxi-20-etil-PG. No entanto, estes compostos podem também ser denominados de acordo com as nomenclaturas IUPAC.

Exemplos de análogos (incluindo derivados substituídos) ou derivados incluindo um composto de 11-desoxi-PG do qual o grupo carboxilo no final da cadeia α é esterifiçado; um composto do qual a cadeia α é estendida; sal fisiologicamente aceitável do mesmo; um composto com uma ligação dupla na posição 2-3 ou uma ligação tripla na posição 5-6, um composto com substituente (s) na posição 3, 5, 6, 16, 17, 18, 19 e/ou 20; e um composto com grupo alquilo inferior ou um hidroxialquilo (inferior) na posição 9 em vez do grupo hidroxilo.

De acordo com a presente invenção, os substituintes preferidos na posição 3, 17, 18 e/ou 19 incluem alquilo com 1-4 átomos de carbono, especialmente metilo e etilo. Os substituintes preferidos na posição 16 incluem alquilo inferior, tais como metilo e etilo, hidroxilo, átomos de halogéneo, tais como cloro e flúor e ariloxilo, tais como trifluorometilfenoxilo. Os substituintes preferidos na posição 17 incluem alquilo inferior, tais como metilo e etilo, hidroxilo, átomos de halogéneo tais como cloro e flúor, ariloxilo, tais como trifluorometilfenoxilo. Os substituintes 14 preferidos na posição 20 incluem alquilo inferior saturado ou insaturado, tal como alquilo Cl-4, alcoxilo inferior, tal como alcoxiloCl-4 e alcoxialquilo inferior, tal como alcoxiCl-4-alquiloCl-4. Os substituintes preferidos na posição 5 incluem átomos de halogéneo, tais como cloro e flúor. Os substituintes preferidos na posição 6 incluem um grupo oxo formando um grupo carbonilo. A estereoquimica das PG com hidroxilo, alquilo inferior ou hidroxialquilo(inferior) substituído na posição 9 pode ser α, β ou uma sua mistura.

Além disso, os análogos ou derivados anteriores podem ser compostos com um grupo alcoxilo, cicloalquilo, cicloalquiloxilo, fenoxilo ou fenilo no final da cadeia ω onde a cadeia é mais curta do que as PG primárias. A nomenclatura dos compostos de 11-desoxi-PG aqui utilizados baseia-se no sistema de numeração do ácido prostanóico representado na fórmula (A) acima.

Os compostos utilizados na presente invenção são representados pela fórmula (III):

L R1"

Xl/2 \ r (iin B C C Ro—R3 II z em que L é hidrogénio, hidroxilo, halogéneo, alquiloCl-6 linear ou ramificado, hidroxialquilo(Cl—6 linear ou 15 ramificado), alcanoiloxilo Cl-6 linear ou ramificado ou oxo, o anel com cinco membros pode ter, opcionalmente, pelo menos, uma ligação dupla; A é —CH3, -CH2OH, -COCH2OH, -COOH ou um seu sal, éter, éster ou amida; B é -CH2-CH2-; Z é

R4 R5

R4 R5 ou 0 em que R4 e R5 são hidrogénio, hidroxilo, halogéneo, alquiloCl-6 linear ou ramificado, alcoxilo Cl-6 linear ou ramificado ou hidroxialquilo (Cl-6 linear ou ramificado), em que R4 e R5 não são hidroxilo e alcoxilo Cl-6 linear ou ramificado, ao mesmo tempo;

Xi e X2 são ambos halogéneo;

Ri é um grupo hidrocarboneto de cadeia bivalente linear ou ramificada, saturada ou insaturada, com 1 a 14 átomos de carbono, que é não substituída ou substituída com halogéneo, alquilo, hidroxilo, oxo, arilo ou grupo heterociclico e, pelo menos, um de átomo carbono no hidrocarboneto alifático é opcionalmente substituído por oxigénio, azoto ou enxofre; e 16 R-2 é uma ligação simples ou alquilenoCl-β linear ou ramificado; R3 é alquiloCl-6 linear ou ramificado, alcoxilo Cl-6 linear ou ramificado, alcanoiloxiloCl-β linear ou ramificado, cicloalquilo(C3-6), cicloalquiloxilo(C3-6), arilo, ariloxilo, grupo heterocíclico ou grupo heterocíclico-oxilo e, pelo menos, um de átomo de carbono no hidrocarboneto alifático é opcionalmente substituído por oxigénio, azoto ou enxofre.

Na fórmula anterior, o termo "não saturado" nas definições para Ri entende-se como incluindo, pelo menos, uma ou mais ligações duplas e/ou ligações triplas que estão presentes isoladamente, separadamente ou em série entre átomos de carbono das cadeias principais e/ou laterais. De acordo com a nomenclatura normal, uma ligação insaturada entre duas posições em série é representada por marcação do número inferior das duas posições e uma ligação insaturada entre duas posições distais é representada por marcação das duas posições. 0 termo "hidrocarboneto alifático inferior ou médio" refere-se a um grupo hidrocarboneto de cadeia linear ou ramificada, com 1 a 14 átomos de carbono (para uma cadeia lateral, são preferidos 1 a 3 átomos de carbono) e, de um modo preferido, 1 a 10, especialmente, 6 a 10 átomos de carbono para Ri. O termo "halogéneo" abrange flúor, cloro, bromo e iodo. 17 0 termo "inferior" ao longo da descrição representa um grupo com 1 a 6 átomos de carbono, a não ser que seja especificado de outro modo. 0 termo "alquilo inferior" refere-se a um grupo hidrocarboneto saturado, de cadeia linear ou ramificada, contendo 1 a 6 átomos de carbono e inclui, por exemplo, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo e hexilo. 0 termo "alquileno inferior" refere-se a um grupo hidrocarboneto saturado bivalente de cadeia linear ou ramificada contendo 1 a 6 átomos de carbono e inclui, por exemplo, metileno, etileno, propileno, isopropileno, butileno, isobutileno, t-butileno, pentileno e hexileno. 0 termo "alcoxilo inferior" refere-se a um grupo alquil inferior-O-, em que alquilo inferior é como definido acima. 0 termo "hidroxialquilo(inferior)" refere-se a um alquilo inferior, como definido acima, que é substituído com, pelo menos, um grupo hidroxilo, tais como hidroximetilo, 1-hidroxietilo, 2-hidroxietilo e 1-metil-l-hidroxietilo. 0 termo "alcanoiloxilo inferior" refere-se a um grupo representado por uma fórmula RCO-O-, em que RCO- é um grupo acilo formado por oxidação de um grupo alquilo inferior, como definido acima, tal como acetilo. 0 termo "cicloalquilo(inferior)" refere-se a um grupo cíclico formado por ciclização de um grupo alquilo inferior, como definido acima, mas contém três ou mais átomos de carbono e 18 inclui, por exemplo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo e ciclo-hexilo. 0 termo "cicloalquiloxilo(inferior)" refere-se ao grupo de cicloalquilo(inferior)-0-, em que cicloalquilo(inferior) é como definido acima. 0 termo "arilo" pode incluir anéis de hidrocarboneto aromático, não substituídos ou substituídos (de um modo preferido, grupos monocíclicos), por exemplo, fenilo, tolilo, xililo. Exemplos dos substituintes são o átomo de halogéneo e haloalquilo(inferior), em que o átomo de halogéneo e alquilo inferior são como definido acima. 0 termo "ariloxilo" refere-se a um grupo representado pela fórmula ArO-, em que Ar é arilo, como definido acima. 0 termo "grupo heterocíclico" pode incluir o grupo heterocíclico mono- a tri-cíclico, de um modo preferido, monocíclico heterocíclico que tem 5 a 14, de um modo preferido, 5 a 10 membros no anel com átomo de carbono opcionalmente substituído e 1 a 4, de um modo preferido, 1 a 3 de 1 ou 2 tipos de heteroátomos seleccionados de átomo de azoto, átomo de oxigénio e átomo de enxofre. Exemplos do grupo heterocíclico incluem furilo, tienilo, pirrolilo, oxazolilo, isoxazolilo, tiazolilo, isotiazolilo, imidazolilo, pirazolilo, furazanilo, piranilo, piridilo, piridazinilo, pirimidilo, pirazinilo, 2-pirrolinilo, pirrolidinilo, 2-imidazolinilo, imidazolidinilo, 2-pirazolinilo, pirazolidinilo, piperidino, piperazinilo, morfolino, indolilo, benzotienilo, quinolilo, isoquinolilo, purinilo, quinazolinilo, carbazolilo, acridinilo, fenantridinilo, benzimidazolilo, benzimidazolinilo, 19 benzotiazolilo, fenotiazinilo. Exemplos do substituinte, neste caso, incluem halogéneo e halogéneo substituído pelo grupo alquilo inferior, em que o átomo de halogéneo e o grupo alquilo inferior são como descrito acima. 0 termo "grupo heterocíclico-oxilo" significa um grupo representado pela fórmula HcO-, em que Hc é um grupo heterocíclico, como descrito acima.

Os "sais farmaceuticamente aceitáveis" adequados incluem sais não tóxicos convencionalmente utilizados, por exemplo um sal com uma base inorgânica, tal como um sal de metal alcalino (tais como sal de sódio e sal de potássio), um sal de metal alcalino terroso (tais como sal de cálcio e sal de magnésio), um sal de amónio; ou um sal com uma base orgânica, por exemplo, um sal de amina (tais como sal de metilamina, sal de dimetilamina, sal de ciclo-hexilamina, sal de benzilamina, sal de piperidina, sal de etilenodiamina, sal de etanolamina, sal de dietanolamina, sal de trietanolamina, sal de tris(hidroximetilamino)etano, sal de monometil-monoetanolamina, sal de procaína e sal de cafeína), um sal de aminoácido básico (tais como sal de arginina e sal de lisina), sal de tetraalquilamónio e semelhantes. Estes sais podem ser preparados por um processo convencional, por exemplo, a partir do ácido e base correspondente ou por permuta de sal.

Exemplos de éteres incluem éteres de alquilo, por exemplo, éteres de alquilo inferior, tais como éter metílico, éter etílico, éter propílico, éter isopropílico, éter butílico, éter isobutílico, éter t-butílico, éter pentílico e éter 1-ciclopropiletílico; e éteres de alquilo médio e inferior, tais como éter octílico, éter dietil-hexílico, éter laurílico e éter cetílico; éteres insaturados, tais como éter oleílico e éter linolenílico; éteres de alcenilo inferior, tais como éter 20 vinílico, éter alílico; éteres de alcinilo inferior, tais como éter etinilico e éter propinílico; éteres de hidroxialquilo(inferior), tais como éter hidroxietilico e éter hidroxiisopropilico; éteres de alcoxilo inferior alquilo (inferior), tais como éter metoximetilico e éter 1-metoxietílico; éteres de arilo opcionalmente substituído, tais como éter fenílico, éter tosílico, éter t-butilfenílico, éter salicílico, éter 3,4-di-metoxifenílico e éter benzamidofenílico; e éteres de arilalquilo(inferior), tais como éter benzílico, éter tritílico e éter benzidrílico.

Exemplos dos ésteres incluem ésteres alifáticos, por exemplo, ésteres de alquilo inferior, tais como éster metílico, éster etílico, éster propílico, éster isopropílico, éster butílico, éster isobutílico, éster t-butílico, éster pentílico e éster 1-ciclopropiletílico; ésteres de alcenilo inferior, tais como éster vinílico e éster alílico; ésteres de alcinilo inferior, tais como éster etinilico e éster propinílico; éster hidroxialquilo(inferior), tal como éster hidroxietilico; ésteres de alcoxilo inferior alquilo(inferior), tais como éster metoximetilico e éster 1-metoxietílico; e ésteres arílicos opcionalmente substituídos, tais como, por exemplo, éster fenílico, éster tolílico, éster t-butilfenílico, éster salicílico, éster 3,4-di-metoxifenílico e éster benzamidofenílico; e éster arilalquílico(inferior), tal como éster benzílico, éster tritílico e éster benzidrílico. A amida de A significa um grupo representado pela fórmula -CONR/R", em que cada um de R' e R" é um átomo de hidrogénio, alquilo inferior, arilo, alquil- ou aril-sulfonilo, alcenilo inferior e alcinilo inferior e inclui, por exemplo, amidas de alquilo inferior, tais como metilamida, etilamida, dimetilamida 21 e dietilamida; arilamidas, tais como anilida e toluidida; e alquilo- ou aril-sulfonilamidas, tais como metilsulfonilamida, etilsulfonil-amida e tolilsulfonilamida.

Os exemplos preferidos de L incluem hidroxilo ou oxo que tem uma estrutura em anel com 5 membros do, denominado, tipo especialmente, PGF ou PGE. 0 Exemplo A preferido é -COOH, seu sal farmaceuticamente aceitável, éster ou amida. B é -CH2-CH2-, que proporciona a estrutura do denominado tipo 13,14-di-hidro.

Xi e X2 são halogéneo, especialmente, flúor que proporciona a estrutura do, denominado tipo 16,16-difluoro. 0 Ri preferido é um hidrocarboneto contendo 1-10 átomos de carbono, de um modo preferido, 6-10 átomos de carbono. Além disso, pelo menos, um átomo de carbono no hidrocarboneto alifático é opcionalmente substituído por oxigénio, azoto ou enxofre.

Exemplos de R2 incluem, por exemplo, os seguintes grupos: -ch2-ch2-ch2-ch2-ch2-ch2-, -ch2-ch=ch-ch2-ch2-ch2-, -ch2-ch2-ch2-ch2-ch=ch-, -ch2-c=c-ch2-ch2-ch2-, -ch2-ch2-ch2-ch2-ch (CH3) -ch2-, -ch2-ch2-ch2-ch2-o-ch2-, -ch2-ch=ch-ch2-o-ch2-, -ch2-c=c-ch2-o-ch2-, 22 -CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-, -ch2-ch=ch-ch2-ch2-ch2-ch2-, -ch2-ch2-ch2-ch2-ch2-ch=ch-, -ch2-c=c-ch2-ch2-ch2-ch2-, -CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH (CH3) -ch2-, -ch2-ch2-ch2-ch2-ch2-ch2-ch2-ch2-, -ch2-ch=ch-ch2-ch2-ch2-ch2-ch2-, -ch2-ch2-ch2-ch2-ch2-ch2-ch=ch-, -ch2-c=c-ch2-ch2-ch2-ch2-ch2-, -ch2-ch2-ch2-ch2-ch2-ch2-ch (ch3) -ch2- 0 R2 preferido é uma ligação simples e R3 preferido é alquilo inferior. R3 pode ter uma ou duas cadeias laterais com um átomo de carbono. A configuração do anel e as cadeias a- e/ou ω na fórmula (III) acima podem ser iguais ou diferentes das PG primárias. No entanto, a presente invenção inclui também uma mistura de um composto com uma configuração do tipo primário e um composto de uma configuração do tipo não primário. 0 exemplo tipico do presente composto é um composto de ll-desoxi-13,14-di-hidro-16,16-difluoro-PGE ou PGF, composto de ll-desoxi-13,14-di-hidro-15-ceto-16,16-difluoro-PGE ou PGF, composto de 2-descarboxi-2-(2-carboxietil)-ll-desoxi-13,14-di-hidro-15-ceto-16,16-difluoro-PGE ou PGF ou composto de ll-desoxi-13,14-di-hidro-15-ceto-16,16-difluoro-20-etilo-PGE ou PGF e o seu derivado ou análogo. 0 exemplo preferido do presente composto é um ll-desoxi-13,14-di-hidro-15-ceto-16,16-difluoro-PGEl, ll-desoxi-13,14-di-hidro-16,16-difluoro-PGEi, éster isopropilico de ll-desoxi-13,14-di-hidro-15-ceto-16,16-difluoro-PGE2, éster isopropilico de 2-descarboxi-2-(2-carboxietil)-11- 23 2-descarboxi- desoxi-13,14-di-hidro-15-ceto-16,16-difluoro-PGEi, 2-(2-carboxietil)-ll-desoxi-13,14-di-hidro-15-ceto-16,16-dif luoro-PGEi, éster isopropilico de ll-desoxi-13,14-di-hidro-15-ceto-16,16-difluoro-20-metil-PGEi, ll-desoxi-13,14-di-hidro-15- ceto-16,16-difluoro-20-metil-PGEi, ll-desoxi-13,14-di-hidro-15- ceto-16,16-difluoro-20-etil-PGEi, éster metilico ll-desoxi-13,14-di-hidro-15-ceto-16,16-difluoro-PGEi, éster isopropilico de ll-desoxi-13,14-di-hidro-15-ceto-16,16-difluoro-20-etil-PGE! ou éster isopropilico de ll-desoxi-13,14-di-hidro-15-ceto-16,16-dif luoro-PGFia.

Na presente invenção, pode ser utilizado qualquer um dos isómeros, tais como os isómeros tautoméricos individuais, a sua mistura ou isómeros ópticos, a sua mistura, uma mistura racémica e outros isómeros estéricos, com o mesmo objectivo.

Alguns dos compostos utilizados na presente invenção podem ser preparados pelo método divulgado nos documentos USP N° 5073569, 5166174, 5221763, 5212324 e 5739161 e 6242485.

Um indivíduo mamífero pode ser tratado por administração do composto descrito acima. O indivíduo pode ser qualquer indivíduo mamífero incluindo um humano. O composto pode ser aplicado sistemicamente ou topicamente. Normalmente, o composto pode ser administrado por administração oral, administração intranasal, administração por inalação, por injecção intravenosa (incluindo infusão), injecção subcutânea, administração intrarectal, administração intravaginal, administração transdérmica, administração local no olho (e. g., administração periocular (e. g., subTenon), subconjunctival, intraocular, intravitreal, intracameral, subretinal, supracoroidal e retrobulbar) e semelhantes. 24 A dose pode variar dependendo da estirpe do animal, idade, peso corporal, sintoma a ser tratado, efeito terapêutico desejado, via de administração, termo do tratamento e semelhantes. Pode ser obtido um efeito satisfatório por administração sistémica 1-4 vezes por dia ou por administração continua numa quantidade de 0,000001-500 mg/kg, de um modo mais preferido, 0,00001-100 mg/kg por dia. O composto pode, de um modo preferido, ser formulado numa composição farmacêutica adequada para administração de um modo convencional. Uma composição pode ser aquela adequada para administração oral, injecção ou perfusão, bem como pode ser um agente externo, supositório ou pessário. A composição obtida pela presente invenção pode conter também aditivos fisiologicamente aceitáveis. Os referidos aditivos podem incluir os ingredientes utilizados com os presentes compostos, tais como excipiente, diluente, enchimento, resolvente, lubrificante, adjuvante, ligando, desintegrador, agente de revestimento, agente de encapsulação, base de unguento, base de supositório, agente de aerossóis, emulsionante, agente dispersante, agente de suspensão, espessante, agente de tonicidade, agente tamponante, agente amaciante, conservante, antioxidante, corrector, aromatizante, corante, um material funcional, tal como ciclodextrina e polímero biodegradável, estabilizador. Os aditivos são bem conhecidos na técnica e podem ser seleccionados daqueles descritos nos livros de referência geral dos farmacêuticos. A quantidade do composto definido acima na composição obtida pela invenção, pode variar dependendo da formulação da 25 composição e, pode ser, geralmente, 0,000001-10, 0%, de um modo mais preferido, 0,00001-5,0%, de um modo muito preferido, 00001-1%.

Exemplos de composições sólidas para administração oral incluem comprimidos, trociscos, comprimidos sublinguais, cápsulas, pilulas, pós, grânulos e semelhantes. A composição sólida pode ser preparada por mistura de um ou mais ingredientes activos com, pelo menos, um diluente inactivo. A composição pode também conter aditivos, outros que não os diluentes inactivos, por exemplo, um lubrificante, um desintegrante e um estabilizador. Os comprimidos e pilulas podem ser revestidos com um filme entérico ou gastroentérico, se necessário.

Podem ser cobertos com uma ou mais camadas. Podem também ser absorvidos num material de libertação sustida ou microencapsulados. Além disso, as composições podem ser encapsuladas num material facilmente degradável tal como gelatina. Podem ser depois dissolvidos num solvente apropriado, tal como ácido gordo ou o seu mono, di ou triglicérido para ser uma cápsula mole. O comprimido sublingual pode ser utilizado caso seja necessária uma acção rápida.

Exemplos de composições liquidas para administração oral incluem emulsões, soluções, suspensões, xaropes e elixires e semelhantes. A referida composição pode, ainda, conter diluentes inactivos utilizados convencionalmente e. g., Água purificada ou álcool etílico. Uma composição pode conter aditivos outros que não diluentes inactivos, tais como adjuvantes e. g., agentes de humidificação e agentes de suspensão, adoçantes, aromatizantes, fragrâncias e conservantes. 26 A composição obtida pela presente invenção pode estar na forma de uma composição em vaporizador, que contém um ou mais ingredientes activos e pode ser preparada de acordo com um método conhecido.

Exemplos de composições injectáveis obtidas pela presente invenção para administração parentérica incluem soluções aquosas ou não aquosas estéreis, suspensões e emulsões.

Os diluentes para a solução ou suspensão aquosa podem incluir, por exemplo, água destilada para injecção, solução salina fisiológica e solução de Ringer.

Os diluentes não aquosos para solução e suspensão podem incluir, por exemplo, propilenoglicol, polietilenoglicol, óleos vegetais, tal como azeite, álcoois tais como etanol e polissorbato. A composição pode compreender ainda aditivos, tais como conservantes, agentes de humidificação, agentes emulsionantes, agentes dispersantes e semelhantes. Podem ser esterilizados por filtração através de, e. g., um filtro de retenção de bactérias, compostas por um esterilizador ou através de esterilização por irradiação com radioisótopo ou gás. A composição injectável pode também ser proporcionada como uma composição em pó esterilizada para ser dissolvida num solvente esterilizado para injecção antes da utilização.

Exemplos do agente externo incluem todas as preparações externas utilizadas nos campos da dermatologia e otolaringologia, que incluem unguentos, cremes, loção e spray. 27 0 presente composto é também aplicável através de uma solução oftálmica, gotas oculares, unguento ocular e semelhantes. A forma inclui todas as formulações para administração local no olho utilizadas no campo oftálmico. A solução oftálmica ou gotas oculares são preparadas por dissolução dos ingredientes activos numa solução aquosa estéril, tal como solução salina e solução tampão, ou através de composições em pó combinadas para serem dissolvidas antes da utilização. Os unguentos oculares são preparados por mistura do ingrediente activo na base. As formulações podem ser preparadas de acordo com qualquer um dos métodos convencionais.

Modificadores de osmolaridade, podem ser qualquer um dos utilizados no campo oftálmico. Exemplos de modificadores de osmolaridade incluem, mas não estão limitados a estes, cloreto de sódio, cloreto de potássio, cloreto de cálcio, bicarbonato de sódio, carbonato de sódio, sulfato de magnésio, hidrogenofosfato de sódio, di-hidrogenofosfato de sódio, di-hidrogenofosfato de potássio, ácido bórico, borax, hidróxido de sódio, ácido clorídrico, manitol, isosorbitol, propilenoglicol, glucose e glicerineas.

Além disso, os aditivos normalmente utilizados no campo oftalmológico podem ser adicionados à presente composição como desejado. Tais aditivos incluem, por exemplo, agente tampão (e. g., ácido bórico, mono-hidrogenofosfato de sódio e di-hidrogenofosfato de sódio), conservantes (e. g., cloreto de benzalcónio, cloreto de benzetónio e clorobutanol), espessantes (e. g., sacáridos, tais como lactose e manitol, maltose; e. g., ácido hialurónico ou seus sais, tais como hialuronato de sódio e hialuronato de potássio; e. g., mucopolissacáridos, tal como 28 sulfato de condroítina; e. g., poliacrilato de sódio, polímero de carboxivinilo e poliacrilato reticulado), todos eles estão incluídos aqui por referência.

Na preparação da presente composição como um unguento ocular, a composição pode conter, outros que não os aditivos acima, base de unguento ocular utilizada normalmente. Tal base de unguento ocular inclui, mas não está limitada a, base oleosa, tais como vaselina, parafina líquida, polietileno, selen 50, plastibase, macrogol ou uma sua combinação; a base de emulsão com fase oleosa e fase aquosa emulsionadas com tensioactivo; e base solúvel em água, tal como hidroxipropilmetilcelulose, carboxipropilmetilcelulose e polietilenoglicol. A presente composição pode ser formulada como um tipo de dose unitária estéril não contendo conservantes.

Outra forma obtida pela presente invenção são os supositórios ou pessários, que podem ser preparados por mistura dos ingredientes activos numa base convencional, tal como manteiga de cacau que amolece à temperatura ambiente e podem ser utilizados tensioactivos não iónicos com temperaturas de amolecimento adequadas para melhorar a capacidade de absorção. O termo "tratamento" aqui utilizado inclui quaisquer meios de controlo de doença ou estado, tais como prevenção, cuidado, alívio do estado, atenuação do estado e impedimento da progressão.

Os compostos utilizados na presente invenção têm um efeito significativo na recuperação da circulação periférica insuficiente, paredes vasculares periféricas e/ou células endoteliais vasculares periféricas lesionadas. 29

Consequentemente, os compostos são úteis para o tratamento de doenças vasculares periféricas, especialmente doenças vasculares periféricas e microvasculares. As doenças vasculares periféricas e microvasculares nesta descrição e reivindicações podem incluir doenças da retina, pele, circulação geral, rim ou sistema nervoso periférico ou autónomo. Todas estas doenças são associadas, frequentemente, com a diabetes mellitus e podem ocorrer como sintomas associados com complicações agudas ou crónicas da diabetes mellitus. Além disso, outras doenças, embora não conhecidas como estando relacionadas com a diabetes, são semelhantes nos seus efeitos fisiológicos no sistema vascular periférico e tais doenças são também tratadas, de modo eficaz, pelo método da presente invenção. A presente invenção será também benéfica em neuropatias periféricas e autónomas ou quaisquer outras doenças que resultam de uma doença dos pequenos vasos e directamente de doença dos grandes vasos. Acredita-se que o efeito benéfico do método seja devido ao aumento do fluxo de sangue nos pequenos vasos e protecção das células endoteliais vasculares. 0 termo "doenças vasculares periféricas" aqui utilizado compreende qualquer doença vascular periférica incluindo neuropatias periféricas e autónomas. Exemplos de "doença vascular periférica" incluem doença arterial periférica, tais como oclusão arterial crónica incluindo arteriosclerose, arteriosclerose obliterante e tromboangite obliterante (doença de Buerger), macroangiopatia, microangiopatia, diabetes mellitus, tromboflebite, flebempraxia, doença de Raynaud, sindrome de Raynaud, sindrome de CREST, alteração de saúde devido a vibração, sindrome de Sudeck, claudicação intermitente, 30 sensação de frio nas extremidades, sensação anormal nas extremidades, sensibilidade ao frio, enfraquecimento, falta de sensibilidade, anestesia, dor de descanso, causalgia (dor de queimadura), distúrbio da função circulatória periférica, distúrbio da função nervosa, distúrbio da circulação periférica diabética, estenose do canal espinal lombar, neuropatia diabética, choque, doença auto-imune, tal como eritematose, doença reumatóide e artrite reumatóide, neuropatia autónoma, neuropatia autónoma diabética, desequilíbrio autónomo, hipotensão ortostática, disfunção eréctil, disfunção sexual feminina, lubrificação vaginal insuficiente, intolerância ao exercício, desnervação cardíaca, intolerância ao calor, complicações diabéticas, glaucoma neovascular, retinopatia, retinopatia diabética, maculopatia diabética, oclusão da artéria retinal, obstrução da artéria central da retina, oclusão da veia retinal, edema macular, edema macular cistóide, edema da pálpebra, edema retinal, corioretinopatia, maculopatia neovascular, úlcera de Moorenp progressiva, lesão na pele, úlcera na pele, incluindo úlcera no pé, úlcera diabética, úlcera de queimadura, úlcera da perna inferior, úlcera de pós-operatório, úlcera traumática, úlcera de radiação, frostbite (lesão pelo frio), frieira, gangrena e gangrena repentina, nefropatia diabética e decúbito. A presente composição pode conter um único agente activo ou uma combinação de dois ou mais ingredientes activos. Numa combinação de ingredientes activos múltiplos, os seus respectivos conteúdos podem ser aumentados ou diminuídos adequadamente, considerando os seus efeitos terapêuticos e segurança. 31 A composição farmacêutica obtida pela presente invenção pode conter também os outros ingredientes farmacológicos desde que não entrem em contradição com o objectivo da presente invenção. A presente invenção será descrita em detalhe relativamente ao seguinte exemplo, que, no entanto, não tem como objectivo limitar o âmbito da presente invenção. EXEMPLO 1

Composto de Teste A: ll-desoxi-13,14-di-hidro-15-ceto-16,16-difluoro-PGEi

Composto de Teste B: éster isopropilico de ll-desoxi-13,14-di-hidro-15-ceto-16,16-difluoro-PGEi

Neste estudo foram utilizados ratos Wistar machos (7 semanas de idade). Os animais foram anestesiados por injecção intraperitoneal de tiobutabarbital de sódio (80 mg/kg). A temperatura corporal (temperatura rectal) dos animais foi mantida a, aproximadamente, 37 °C, através da experiência com uma almofada de aquecimento. Após ter sido depilado o peito do pé do membro traseiro direito com um creme depilatório, o fluxo sanguineo do tecido cutâneo foi medido continuamente, utilizando um doseador de fluxo Doppler a laser do tipo não contacto (FLO-Nl, Omegawave Inc., Japão). Para as medições da pressão sanguínea arterial média, um cateter de polietileno colocado na artéria femoral esquerda foi ligado a um transdutor de pressão (TP-400T, Nihon Koden Inc., Japão) associado a um amplificador (AP-641G, Nihon Koden Inc., Japão). O fluxo sanguíneo do tecido cutâneo e pressão sanguínea foram registados e analisados 32 utilizando um sistema computadorizado (HEM Ver. 3.5, Notocord Systems, França). A endotelina-1 (ET-1) foi administrada por infusão na artéria femoral a uma propovelocidade de 200 pmol/kg/min, com uma bomba de seringa via o cateter de polietileno inserido, de modo retrógrado, na artéria epigástrica caudal ramificada da artéria femoral direita durante 15 minutos. A taxa de infusão da ET-1 foi diminuida para 20 pmol/kg/min após o final da infusão de 200 pmol/kg/min, e a quantidade diminuida de infusão de ET-1 foi mantida até ao final deste estudo. O fluxo sanguíneo no tecido cutâneo foi diminuído pela infusão da ET-1 na artéria femoral. Quando o fluxo sanguíneo do tecido cutâneo alcançou um novo nivel de equilíbrio (25 a 50 minutos após o inicio da infusão de ET-1), foi administrado aos animais o veiculo ou cada composto de teste, durante 2 minutos, num volume de 1 mL/kg via o cateter de polietileno colocado na veia femoral esquerda. A quantidade administrada do composto de teste foi de 100 pg/kg. O fluxo de sangue no tecido cutâneo e pressão sanguínea foram medidos continuamente e registados a cada 5 minutos durante 60 minutos após a administração do veículo ou cada solução de teste.

Como mostrado nas Fig. IA e 1B, através da infusão arterial femoral de ET-1, o fluxo sanguíneo cutâneo, foi diminuído para, aproximadamente, 37% do valor da linha de base entre 25 e 50 minutos após início da infusão de ET-1. Não se verificou alteração no fluxo de sangue do tecido cutâneo com o tratamento com o veículo (Fig. IA e 1B).

No grupo de 100 pg/kg de composto A (ll-desoxi-13,14-di-hidro-15-ceto-16,16-difluoro-PGEi), o fluxo sanguíneo do tecido cutâneo, que foi diminuído para, aproximadamente, 35% do valor 33 de linha de base pela infusão de ET-1, foi significativamente aumentado pela administração do Composto A (Fig. IA).

No grupo de 100 pg/kg de Composto B (éster isopropilico de ll-desoxi-13,14-di-hidro-15-ceto-16,16-difluoro-PGEi), o fluxo sanguíneo do tecido cutâneo, que foi diminuído para, aproximadamente, 38% do valor de linha de base pela infusão de ET-1, foi significativamente aumentado pela administração do Composto B (Fig. 1B). A pressão sanguínea não foi afectada pela infusão de ET-1. O Composto A e Composto B a 100 pg/kg não apresentaram efeito significativo na pressão sanguínea. EXEMPLO 2

Composto de Teste A: ll-desoxi-13,14-di-hidro-15-ceto-16,16-dif luoro-PGEi

Foram utilizados oito coelhos brancos Japoneses machos (Std:JW/CSK) pesando, aproximadamente, 2,5-3,5 kg, neste estudo. Foi tratado o mesmo olho de cada animal com os compostos de teste e o outro olho com o veículo, de um modo consistente ao longo deste estudo com um período de lavagem entre cada tratamento. Foram aplicados trinta microlitros de solução de cada composto de teste, topicamente, num olho de cada animal utilizando uma micropipeta (Pipetman, Gilson, Inc., França). O olho de controlo contralateral recebeu um volume igual de veículo. As soluções foram administradas aos animais, aproximadamente, ao mesmo tempo durante todas as manhãs. Após os animais terem sido contidos numa gaiola, foi aplicada uma gota 34 de anestesia tópica (0,4% de cloridrato de oxibuprocaina) em ambos os olhos e foi medido a IOP com um pneumatonometro de planamentro (Modelo 30 Classic”, Mentor O & O, Inc., EUA) antes do doseamento e a 1, 2, 4, 6 e 8 horas após doseamento.

Como mostrado na Tabela 1, o Composto A diminuiu significativamente a pressão intraocular.

Tabela 1 Pressão intraocular (IOP) após Tratamento com o Composto de Teste

Tratamento Concentração o o n IOP (mmHg) Tempo após administração (h) Pre 1 2 4 6 8 16,4 18,3 18,9 18,4 19,5 19,0 Veiculo - 8 ± ± ± ± ± ± 0, 9 1,6 1,6 1,3 1,7 1,1 17, 0 13,1 14,5 13, 8 15,1 17,5 Composto A 0,0016 8 ± ± ± ± ± ± 0, 8 0, 6** 0,6* 0,8* 1,0* 1,3

Os dados são apresentados como a média ± SE, *p.<0,05, **p < 0,01 comparativamente aos olhos de controlo contralaterais tratados com veiculo (teste de t de Student emparelhado). 35

Composto 16-difluoro-PGEi A: ll-desoxi-13,14-di-hidro-15-ceto-16; EXEMPLO 3 A diabetes foi induzida por uma injecção intravenosa única de 50 mg/kg de estreptozotocina (STZ) em ratos Crl:CD(SD) com 7 semanas de idade. Neste estudo foram utilizados os animais com niveis de glucose no plasma de 400 mg/dL ou mais, no dia 19, após o tratamento com STZ. Três semanas após a injecção de STZ, os animais foram anestesiados através de uma injecção de tiobutabarbital de sódio. A temperatura corporal (temperatura rectal) dos animais foi mantida a, aproximadamente, 37 °C, ao longo da experiência, com uma almofada de aquecimento. Após ter sido depilada a planta da parte interior do membro posterior direito com um creme depilatório, o fluxo sanguíneo do tecido cutâneo (CTBF) foi medido continuamente utilizando um doseador de fluxo Doppler a laser do tipo não contacto (FLO-N1, Omegawave Inc., Japão). A pressão sanguínea e taxa cardíaca foram monitorizadas simultaneamente. O Composto A ou o veículo foram administrados intravenosamente aos animais durante 10 min.

Como mostrado na Tabela 2, o Composto A aumentou significativamente o fluxo sanguíneo do tecido cutâneo quando comparado com o veículo. O composto A não apresentou efeitos na pressão sanguínea (BP) e taxa cardíaca. 36

Tabela 2. Efeito de SAG-017 no fluxo sanguíneo no tecido cutâneo em ratos diabéticos induzidos com estreptozotocina

Fluxo Sanguíneo no Tecido Cutâneo Dose (mL/min/lOOg de tecido) Grupo pg/kg n Tempo após Início do Doseamento i. v. Pre (min) 5 10 30 Controlo com 0 5 3,8 ± 0,2 3,8 ± 0,2 3,7 ± 0,2 3,6 ± 0,2 Veículo) Composto A 30 5 4,8 ± 0,5 6,2** ± 5,9** ± 0,5 0,5 5,2* ± 0, 5 Os dados são apresentados como a média ± S.E., *p<0,05, **p<0,01 comparativamente ao grupo de controlo com veículo.

Composto A: ll-desoxi-13,14-di-hidro-15-ceto-16, 16-difluoro-PGEi EXEMPLO 4

Coelhos Kbs: J. W. machos com quatro meses de idade foram colocados em gaiolas de alumínio numa sala de animais controlada para a temperatura ambiente (23-24 °C), humidade relativa (55-74%), taxa de ventilação (10-20 vezes/hora) e ciclo de luz/escuro de 12 horas (luz: 7:00 a.m. - 7:00 p.m.). Os animais foram alimentados com uma dieta sólida para coelhos (120 g/animal/dia) e água ad libitum a partir de um sistema de alimentação automático. Os animais foram submetidos a, pelo menos, 6 dias de quarentena e habituação. Durante o período, 37 foram efectuadas medições do peso corporal e observações de sinais gerais e os animais foram considerados de boa saúde para utilização neste estudo.

Foi inserida uma cânula na artéria carótida comum do coelho sob inalação de anestesia de isoflurano. Nove partes das amostras de sangue obtidas através da cânula foram misturadas com 1 parte de 3,8 p/v% de citrato de sódio. Após centrifugação das amostras de sangue durante 10 min a 1000 rpm, foi recolhido o plasma rico em plaquetas (PRP) da camada superior. Depois a camada do fundo foi centrifugada durante mais 15 min, a 3000 rpm, e foi recolhido o plasma pobre em plaquetas (PPP) da camada superior. As contagens de plaquetas das fracções de PRP e PPP foram efectuadas utilizando um sistema de Hematologia ADVIA120 (ADVIA120, Bayer Medicai Ltd.). A fracção de PRP foi diluída com a fracção de PPP de modo a que a contagens de plaquetas fosse ajustada para, aproximadamente, 30xl04 células/pL. O PRP assim obtido (0,178 mL) foi colocado numa cuvete e pré-incubado num banho quente a 37 °C durante cerca de 5 minutos. A solução de teste (0,022 mL) contendo prostaglandina EI ou Composto A foi adicionada a PRP. Um minuto mais tarde, foram adicionados 25 μΜ de uma solução de ADP (0,022 mL) e foi medido o grau de agregação das plaquetas utilizando um dispositivo de medição da agregação das plaquetas (NBS hematolaser, Nikko Bioscience Inc.). Para cada solução de teste, foi efectuado um teste em duplicado com amostras sanguíneas de 3 animais. A taxa de inibição (%) foi avaliada por comparação da agregação no grupo da substância de teste com o mesmo no grupo de controlo com veículo (100%).

Como mostrado na Tabela 3, a prostaglandina Ex (PGEX) inibiu a agregação das plaquetas em 20,9%, 91,2% e 89,0% a 38 concentrações de lxlCT8, lxlCT7 e lxlCT6 g/mL, respectivamente. Por outro lado, o Composto A não mostrou efeito na agregação das plaquetas até à concentração mais elevada (lxlCT5 g/mL) testada. Os resultados indicam que o Composto A não mostra efeito na agregação das plaquetas.

Tabela 3

Grupo Concentração n (g/mL) Agregação máxima (%) Inibição (%) Controlo (solução salina 3 37,5 ± 3,1 _ fisiológica) Controlo com veiculo 3 36,3 ± 2,8 - Composto A 1χ10~7 3 35,2 ± 3,9 3, 0 1χ10~6 3 36,2 ± 4,0 0,3 1χ10~5 3 36,8 ± 3,1 -1,4 PGEx lxl0~a 3 28,7 ± 3, 6 20,9 lxl0~7 3 3,2 ± 0 , 6** 91,2 lxl0~6 3 4,0 ± 0 7** f 1 89,0 Agregação máxima (%) representa a média ± S.E de 3 coelhos. **: P<0,01; Diferença significativa dc i controlo de veiculo (teste de comparação múltiplo de Dunnett) EXEMPLO 5

Os ratos Crl:CD(SD) machos foram anestesiados com uma injecção intraperitoneal de tiobutabarbital de sódio. A temperatura corporal (temperatura rectal) dos animais foi 39 mantida a, aproximadamente, 37 °C ao longo da experiência com uma almofada de aquecimento. Após depilação do peito da pata do membro posterior direito com um creme depilatório, o fluxo sanguíneo do tecido cutâneo (CTBF) foi medido antes e 30 minutos após a administração intravenosa do Composto C (ll-desoxi-13,14-di-hidro-16,16-difluoro-PGEi) ou o veículo utilizando um doseador de fluxo Doppler de laser do tipo não contacto (FLO-N1, Omegawave Inc., Japão). A pressão sanguínea e taxa cardíaca foram também monitorizadas.

Como mostrado na Tabela 4, o Composto B aumentou significativamente o fluxo sanguíneo do tecido cutâneo quando comparado com o tratamento com o veículo. O composto B não apresentou efeitos na pressão sanguínea e taxa cardíaca.

Tabela 4. Efeito do Composto B no fluxo sanguíneo no tecido cutâneo em ratos

Grupo Dose pg/kg, i. V. n Fluxo Sanguíneo (mL/min/100 no g Tecido Cutâneo de tecido) Antes da administração Após administração Veículo 0 5 11,4 ± 1,1 10,4 ± 0,8 (Controlo) Composto B 10 5 11,6 ± 0,3 13,0 ± 0,2* Os dados são apresentados como a média ± S.E., *p<0,05 comparativamente ao grupo de controlo com veículo • 40 EXEMPLO 6

Uma cultura de células endoteliais vasculares humanas foi trazida à confluência, como medido pela resistência eléctrica transendotelial (TEER). A cultura celular foi depois privada de oxigénio durante 30 minutos por incubação numa atmosfera de azoto. As células foram depois tratadas com DMSO a 0,1% ou com a combinação do Composto A 5 nM e 0,1% de DMSO (concentrações finais). A densidade celular foi determinada por TEER nos pontos de tempo indicados.

Como mostrado na Fig. 2A, as células tratadas com DMSO apresentaram pouca recuperação de TEER. As células tratadas com o Composto A apresentaram uma recuperação imediata de TEER.

Os resultados demonstraram que o TEER lesionado, uma função de barreira medida das células endoteliais, recupera rapidamente após o tratamento com o Composto A. EXEMPLO 7

As células endoteliais microvasculares humanas (adultos) (HMVEC-AD) foram crescidas para confluência. As células foram depois expostas a uma atmosfera de azoto durante 30 minutos e regressaram à atmosfera ambiente normal. Os níveis de ATP foram monitorizados nos pontos de tempo indicados utilizando um sistema de ensaio de luciferina-luciferase (ATPlite, Perkin Elmer). 41

Como mostrado na Fig. 2B, os níveis de ATP diminuíram quando as células foram expostas a atmosfera de azoto. Os níveis de ATP regressaram mais rapidamente nas células tratadas com Composto A 5 nM, comparativamente às células tratadas com DMSO a 0,01% sozinho. EXEMPLO 8

Os ratos GK/Jcl machos, um modelo espontâneo de diabetes não dependente de insulina, foram anestesiados com uma injecção intraperitoneal de tiobutabarbital de sódio. A temperatura corporal (temperatura rectal) dos animais foi mantida a, aproximadamente, 37 °C ao longo da experiência, com uma almofada de aquecimento. Após a depilação do peito da para do membro posterior direito com um creme depilatório, o fluxo sanguíneo do tecido cutâneo (CTBF) foi medido antes (linha de base) e 20 minutos após a administração intravenosa do Composto A ou do veículo utilizando um doseador de fluxo Doppler laser do tipo não contacto (FLO-Nl, Omegawave Inc., Japão). Os dados foram expressos como a % comparativamente ao fluxo sanguíneo do tecido cutâneo de linha de base.

Como mostrado na Tabela 5, o Composto A aumentou significativamente o fluxo sanguíneo do tecido cutâneo nos ratos com diabetes espontânea, quando comparado com o veículo. 42

Tabela 5. Efeito do Composto A no fluxo sanguíneo no tecido cutâneo em ratos com diabetes espontânea

Grupo Dose pg/kg, i. V. n Fluxo sanguíneo no Cutâneo comparado linha de base Tecido com a (%) Veículo (Controlo) 0 5 103 ± 2 Composto A 20 5 122 ± 1* Os dados são apresentados como a média + S.E., *p<0,05 comparativamente a grupo de controlo com veículo.

Exemplo de síntese 1

Composto (1) 100.6 mg 457.6 mg

Composto (2) 87,1 mg (90,4%) 391,6 (88, 9%) Composto (3) 57,6 mg (91,7%) 298,5 mg (95,7%) Síntese do éster benzílico de 16,16-difluoro-PGAi (2) 0 éster benzílico de 16,16-difluoro-PGEi (1) (457,8 mg, 0,95 mmol) foi dissolvido em ácido acético (13,7 mL, 0,24 mol) e a solução foi agitada a 80 °C durante 18 horas. A mistura reaccional foi arrefecida para a temperatura ambiente. Foram adicionados 10 mL de tolueno à solução e concentrados sob pressão reduzida. Esta operação foi repetida cinco vezes para remover o ácido acético. O resíduo foi purificado por 43 cromatografia em coluna de sílica gel (sílica gel: FL60D (70 g), Fuji Silysia, hexano/acetato de etilo(2:l)) para obter o composto (2) como um óleo amarelo. Rendimento: 391,6 mg (88,9%). Síntese de ll-desoxi-13,14-di-hidro-16,16-difluoro-PGEi (3) O éster benzílico de 16,16-difluoro-PGAi (composto (2)) (382,5 mg, 0,83 mmol) foi hidrogenado em acetato de etilo (10 mL) sob a presença de paládio em carbono a 10% (57,4 mg, humidificado com 50% p/p de água) à temperatura ambiente, à pressão atmosférica durante 2 horas. A mistura reaccional foi filtrada através de uma almofada de Celite, o bolo filtrado foi lavado com acetato de etilo e depois o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (sílica gel BW-300SP (50 g, humidificada com 15% p/o de água), Fuji Silysia, hexano/acetato de etilo (1:1)) para obter o composto em bruto (3) (298,5 mg, 95,7%). O composto em bruto (3) foi combinado com outro lote do composto em bruto. E, depois, um total de 350 mg do composto em bruto foi purificado por HPLC preparativo (YMC-Pack D-SIL-5-06 20x250 mm, hexano/2-propanol/ácido acético (250:5:1), 20 mL/min) para obter o composto (3) como um óleo incolor. Rendimento: 297,3 mg (Purificação por HPLC recuperação: 83,5%). RMN de XH (200 MHz, CDC13) δ 0,94 (3H, t, J=7,l Hz), 1,22-2,29 (28H, m), 2,34 (2H, t, J=7,3 Hz), 3,65-3,81 (1H, m) . RMN de 13C (50MHz, CDCI3) δ 13,70, 22,40, 23,25, 24,32, 26,28, 26,63), 27,18, 27,58, 28,49, 29,09, 30,39, 31,77 (t, J=24,4 Hz), 33,67, 37,63, 41,05, 54,76, 72,73 (t, J=29,0 Hz), 124,09 (t, J=244,3 Hz), 179,07, 220,79. 44

Exemplo de síntese 2

De acordo com o modo semelhante descrito no Exemplo de síntese 1, o éster isopropílico de ll-desoxi-13,14-di-hidro-15-ceto-16,16-difluoro-PGEx (Composto (6)) foi obtido como um óleo incolor através da reacção acima em dois passos. Rendimento: 0,285 g (Io passo: 96,2%, 2o passo: 97,6%, purificação por HPLC: recuperação de 81,0%). A RMN de 3H (200 MHz, CDC13) e a RMN de 13C (50 MHz, CDCI3) do composto (6) são mostradas nas Figuras 3 e 4, respectivamente. 45

Exemplo de síntese 3

em AcOH

80 °C, 20 h 94, 9%

Ρϊβρ,ΗΡυΟ

ÍV, YF.(C(EI) aOxEMrríTl ta 5 h n-hexano/Acetato de 92,2% Etilo (100:7) 83,1% de recuperação

De acordo com o modo semelhante descrito no Exemplo de síntese 1, o éster isopropílico de 2-descarboxi-2-(2-carboxietil)-ll-desoxi-13,14-di-hidro-15-ceto-16,16-difluoro-PGEi (Composto (9)), foi obtido como um óleo incolor. Rendimento: 0,402 g (Io passo: 94,9%, 2o passo: 92,2%, Purificação por HPLC: recuperação 83,1%). A RMN de :Η (200 MHz, CDC13) e a RMN de 13C (50MHz, CDC13) do composto (9) são mostradas nas Figuras 5 e 6, respectivamente.

Exemplo de síntese 4

Prap.HPLC Mortk (Dlol) 2Ex260fTim

Kj . itífc MC ta, 6 h 99,3% n-Hexano/2-propanol/AcOH (100:2:0,2) 87,4% de recuperação

De acordo com o modo semelhante descrito no Exemplo de síntese 1, o 2-descarboxi-2-(2-carboxietil)-ll-desoxi-13,14-di-hidro-15-ceto-16,16-difluoro-PGEi (Composto. (12)), foi obtido como um óleo incolor. Rendimento: 0,696 g (Io passo: 95,6%, 2° passo: 99,3%, Purificação por HPLC: recuperação: 87,4%). A RMN de 3H (200 MHz, CDC13) e a RMN de 13C (50 MHz, CDC13) do composto (12), são mostradas nas Figuras 7 e 8, respectivamente. 47

Exemplo de síntese 5

em AcOH 80 °C, 16 h 91, 4% H,, Píffi HPLC Prep. Tiicrsti) 20x280 mm

:i5> n-hexano/Acetato de ta, 6 h Etilo 97'3% (100:7) 79% de recuperação

De acordo com o modo semelhante descrito no Exemplo de síntese 1, o éster isopropílico de ll-desoxi-13,14-di-hidro-15-ceto-16,16-difluoro-20-metil-PGEi (Composto (15)) foi obtido como um óleo incolor. Rendimento: 0,271 g (Io passo: 91,4%, 2o passo: 97,3%, Purificação por HPLC: recuperação: 79,0%). RMN de 1H (200 MHz, CDC13) e RMN de 13C (50 MHz, CDC13) do composto (15) são mostradas nas Figuras 9 e 10, respectivamente. 48

Exemplo de síntese 6 \ ,^^£Ú0^NQ /7 e c

m 80 °C, 16 h 93,3%

em AcOH

O HPLC Prep. Win* (CIdI) 25 x 5 5ΰ mm

MO

ta, 6 h 96,6% n-hexano/2-Propanol/Ac (100:2:0,2) 73,9% de recuperação

'C; ÍM>

1/AcOH

De acordo com o modo semelhante descrito no Exemplo de síntese 1, o ll-desoxi-13,14-di-hidro-15-ceto-16,16-difluoro-20-metil-PGEi (Composto (18)), foi obtido como um óleo incolor. Rendimento: 0,637 g (Io passo: 93,3%, 2o passo: 96,6%,

Purificação por HPLC: recuperação: 73,9%). A RMN de 1H (200 MHz, CDC13) e a RMN de 13C (50 MHz, CDC13) do composto (18), são mostradas nas Figuras 11 e 12, respectivamente. 49

Exemplo de síntese 7

De acordo com o modo semelhante descrito no Exemplo de síntese 1, o ll-desoxi-13,14-di-hidro-15-ceto-16,16-difluoro-20-etil-PGEi (Composto (21)), foi obtido como um óleo incolor.

Rendimento: 0,401 g (Io passo: 90,6%, 2o passo: 92,7%,

Purificação por HPLC: recuperação: 29,2%). A RMN de (200 MHz, CDC13) e a RMN de 13C (50 MHz, CDC13) do composto (21), são mostradas nas Figuras 13 e 14, respectivamente.

Exemplo de síntese 8

O éster metílico do ll-desoxi-13,14-di-hidro-15-ceto-16,16-dif luoro-PGEi (Composto (23) foi obtido como um óleo incolor por 50 esterificação do composto (22) com diazometano. Rendimento: 0,860 g (72,9%, após purificação por cromatografia em coluna de sílica gel) . A rmn de XH (200 MHz, CDC13) e a rmn de 13C (50 MHz, CDC13) do composto (23) são mostradas nas Figuras 15 e 16.

Exemplo de síntese 9

O Composto (24) (0, 67 g, 1,66 mmol) foi dissolvido em DMF (13 mL) e foi adicionado K2C03 (460,1 mg, 3,33 mmol) e iodeto de isopropilo (831 pL, 8,32 mmol). A solução foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. A mistura reaccional foi arrefecida com gelo, foi adicionada água (10 mL) e solução salina e foi extraída com acetato de etilo (30 mL) . A camada orgânica foi lavada com solução salina (10 mL), seca com sulfato de magnésio anidro e depois concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (sílica gel FL60D (50 g), Fuji Silysia, hexano/acetato de etilo (5:1)), para obter o éster isopropílico de ll-desoxi-13,14-di-hidro-15-ceto-16,16-difluoro-20-etilo-PGEi em bruto (composto (25)) (0,70g, 94,6%). O composto em bruto (25) foi purificado por HPLC preparativa para obter o composto (25) como um óleo incolor. Rendimento 245,8 mg (35,1%). A RMN de 1ft (200 MHz, 51 CDCI3) e a RMN de 13C (50 MHz, CDCI3) para o Composto (25) são mostradas nas Figuras 17 e 18, respectivamente.

Exemplo de síntese 10

AcO

AcO

,Me TBAF (3 eq) AcO

T S (1.5eq) 70¾. 1-3 h

Tolueno VV.OTBDMS refluxo ~

Thf ^VOH ./**! VVOTBDMS ( ' NVN_Ó

T s ®>

AcO

FVF l^x-vC^Me ^ç5o Ac^^c^e Ac^A^^C02Me^oh CL. ———- 0 CHO (30)

AcO )^//s/*s/\y'C02M$

AcO

AcOEt ta, 2 h O ¢51) J-^/N/s/s^CX^Me H5, Pd-C a 10%

0 (32)

NaOH 1 N (4 eq) un 0 (33)

HO fcrl(7eq)

HO

/'svv^S/S/C02H K2C0j (3 eq) HPLC prep.O DMF ta 3 h YMC-Pack d-sil 20 x 250 1 Hexano/AcOEt (5:1) HPLCpiep. YMC-Pack D-SIL 20 X 250 1 Hexano/ACQEt (14:1) (33) 0 (34) O Composto (26) (8,71 g, 20,2 mmol) foi dissolvido em 1,2-dicloroetano (70 mL) e foi adicionado 1,1'—tiocarbonildiimidazole (5,41 g, 30,3 mmol). A solução foi agitada a 70 0 C durante uma hora. A mistura reaccional foi 52 arrefecida para a temperatura ambiente e depois foi concentrada sob pressão reduzida. 0 residuo foi purificado por cromatográfica em coluna de sílica gel (sílica gel BW-300SP (650 g), Fuji Silysia, hexano/acetato de etilo (1:1) para obter o composto (27) como um óleo amarelo claro (10,61 g, 97,0%). O BusSnH (11,21 g, 38,5 mmol) foi dissolvido em tolueno (224 mL) e submetido a refluxo por aquecimento. A solução do Composto (27) (10,41 g, 19,2 mmol) em tolueno (208 mL) foi vertida na mistura reaccional, a uma temperatura de refluxo, durante 70 minutos. E, depois, a mistura reaccional foi arrefecida para a temperatura ambiente, concentrada sob pressão reduzida, para obter o composto em bruto (28) como um óleo amarelo claro.

0 composto em bruto (28) (19,2 mmol) foi dissolvido em THF (52 mL) e solução de TBAF (1,0 M em THF, 38,5 mL, 38,5 mmol) foi vertida durante 10 minutos. Após uma hora, foi vertida uma solução de TBAF (1,0 M m THF, 19,2 mL, 19,2 mmol) na solução. Após agitar durante um total de 3,5 horas, a mistura reaccional foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (sílica gel BW-300SP (1, 000 g), Fuji Silysia, hexano/acetato de etilo (1:1)) para obter o composto (29) como um óleo amarelo (4,01 g, 69,3%). O Composto (31) foi obtido a partir do composto (29) por oxidação de Swern e introdução da cadeia ω. O Composto (31) (807,4 mg, 1,88 mmol) foi hidrogenado em acetato de etilo (8 mL), sob a presença de paládio em carbono a 10%, à temperatura ambiente durante 2 horas. A mistura reaccional foi filtrada através de uma almofada de Celite e o 53 filtrado foi concentrado sob pressão reduzida, para obter o composto em bruto (32), como um óleo castanho claro. 0 composto em bruto (32) (1,88 mmol) foi dissolvido em EtOH (8 mL). Foi vertido uma solução de NaOH 1 N (7,4 mL, 7,4 mol) na solução, à temperatura ambiente, durante 10 minutos. A mistura reaccional, agitada à temperatura ambiente durante 10 horas e depois foi arrefecida com gelo. Foi vertida uma solução de HC1 1 N (7,1 mL) na mistura reaccional para ajustar o pH a cerca de 3-4. Depois a mistura reaccional foi extraída com tbme (30 mL) . A camada orgânica foi lavada com água (10 mL) e solução salina (10 mL), seca com sulfato de magnésio anidro e depois concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (sílica gel com 15% de água incluindo FL-60D (80 g), Fuji Silysia, hexano/acetato de etilo (2:1)), para obter o composto (33) como um óleo amarelo claro (481,4 mg, 68,8%).

De acordo com um modo semelhante descrito no Exemplo de síntese 9, foi obtido o éster isopropílico de ll-desoxi-13,14-di-hidro-15-ceto-16,16-difluoro-PGFla (composto (34)) a partir do composto (33), como um óleo incolor. Rendimento: 166,6 mg (passo reaccional 91,9% : Purificação por HPLC: recuperação: 55,4%) . A RMN de 1R (200 MHz, CDC13) e a RMN de 13C (50 MHz, CDCI3) do composto (34) são mostradas nas Figuras 19 e 20, respectivamente.

Lisboa, 20 de Janeiro de 2010 54

Claims (16)

1. REIVINDICAÇÕES 1. Utilização de um composto de 11-desoxi-prostaglandina para a preparação de uma composição para o tratamento de uma doença vascular periférica num indivíduo mamifero, em que a composição compreende uma quantidade efectiva de um composto de 11-desoxi-prostaglandina, em que o referido composto de 11-desoxi-prostaglandina é um composto representado pela fórmula (iii): L d Ri-AV2

   z em que L é hidrogénio, hidroxilo, halogéneo, alquiloCl-6 linear ou ramificado, hidroxialquilo(C1 — 6 linear ou ramificado), alcanoiloxiloCl-6 linear ou ramificado ou 0X0, o anel com cinco membros pode ter, opcionalmente, pelo menos uma ligação dupla; A é -CH3, -CH2OH, -COCH2OH, -COOH ou um seu sal, éter, éster ou amida; B é -CH2-CH2-; z é 1

   R4 r5

   R5 ' R4 R5 ou 0 em que R4 e R5 são hidrogénio, hidroxilo, halogéneo, alquiloCl-6 linear ou ramificado, alcoxiloCl-6 linear ou ramificado ou hidroxialquilo(Cl—6 linear ou ramificado), em que R4 e R5 não são hidroxilo e alcoxiloCl-6 linear ou ramificado ao mesmo tempo; Xi e X2 são ambos halogéneo; Ri é um grupo hidrocarboneto de cadeia bivalente, linear ou ramificada, saturada ou insaturada, com 1 a 14 átomos de carbono, que é não substituída ou é substituída com halogéneo, grupo alquilo, hidroxilo, oxo, arilo ou heterocíclico e, pelo menos, um de carbono no hidrocarboneto alifático é opcionalmente substituído por oxigénio, azoto ou enxofre; e R2 é uma ligação simples ou alquilenoCl-β linear ou ramificado; R3 é alquiloCl-6 linear ou ramificado, alcoxiloCl-6 linear ou ramificado, alcanoiloxiloCl-6 linear ou ramificado, cicloalquilo(C3-6), cicloalquiloxilo(C3-6), arilo, ariloxilo, grupo heterocíclico ou grupo heterocíclico-oxilo e, pelo menos, um de átomo de carbono no hidrocarboneto alifático é opcionalmente substituído por oxigénio, azoto ou enxofre. 2
2. 2. Utilização como descrito na Reivindicação 1, em que o referido composto de 11-desoxi-prostagladina é um composto de ll-desoxi-15-ceto-prostaglandina.
3. 3. Utilização como descrito na Reivindicação 1, em que o referido composto de 11-desoxi-prostagladina é um composto de ll-desoxi-13,14-di-hidro-16-di-halogeneo-prostaglandina.
4. 4 Utilização como descrito na Reivindicação 1, em que o referido composto de 11-desoxi-prostagladina é um composto de ll-desoxi-15-ceto-16-di-halogeneo-prostaglandina.
5. 5. Utilização como descrito na Reivindicação 1, em que o referido composto de 11-desoxi-prostagladina é um composto de ll-desoxi-13,14-di-hidro-15-ceto-16-di-halogeneo- prostaglandina.
6. 6. Utilização como descrito na Reivindicação 1, em que o referido composto de 11-desoxi-prostagladina é um composto de ll-desoxi-13,14-di-hidro-15-ceto-16-difluoro- prostaglandina.
7. 7. Utilização como descrito na Reivindicação 1, em que o referido composto de 11-desoxi-prostaglandina é um composto de ll-desoxi-13,14-di-hidro-15-ceto-16-di-halogeneo- prostaglandina E ou F.
8. 8. Utilização como descrito na Reivindicação 1, em que o referido composto de prostaglandina é um composto de ll-desoxi-13,14-di-hidro-15-ceto-16-difluoro-prostaglandina E ou F. 3
9. 9. Utilização como descrito na Reivindicação 1, em que o referido composto de prostaglandina é um composto de ll-desoxi-13,14-di-hidro-15-ceto-16,16-difluoro-prostaglandina Εχ.
10. 10. Utilização como descrito na Reivindicação 1, em que o referido composto de prostaglandina é seleccionado do grupo consistindo de: composto de ll-desoxi-13,14-di-hidro-16,16-difluoro-PGE, composto de ll-desoxi-13,14-di-hidro-16,16-difluoro-PGF, composto de ll-desoxi-13,14-di-hidro-15-ceto-16,16- dif luoro-PGE, composto de ll-desoxi-13,14-di-hidro-15-ceto-16,16- dif luoro-PGF, composto de 2-descarboxi-2-(2-carboxietil)-ll-desoxi- 13, 14-di-hidro-15-ceto-16,16-difluoro-PGE, composto de 2-descarboxi-2-(2-carboxietil)-ll-desoxi- 13, 14-di-hidro-15-ceto-16,16-difluoro-PGF, composto de ll-desoxi-13,14-di-hidro-15-ceto-16,16- dif luoro-20-etil-PGE, composto de ll-desoxi-13,14-di-hidro-15-ceto-16,16- dif luoro-20-etilo-PGF. 4
11. 11. Utilização como descrito na Reivindicação 1, em que o referido composto de prostaglandina é seleccionado do grupo consistindo de: ll-desoxi-13,14-di-hidro-15-ceto-16,16-difluoro-PGEi, ll-desoxi-13,14-di-hidro-16,16-difluoro-PGEi, éster isopropilico de ll-desoxi-13,14-di-hidro-15-ceto- 16.16- difluoro-PGEi, éster isopropilico de 2-descarboxi-2-(2-carboxietil)-ll-desoxi-13, 14-di-hidro-15-ceto-16,16-difluoro-PGEi, 2-descarboxi-2-(2-carboxietil)-ll-desoxi-13,14-di-hidro-15-ceto-16,16-difluoro-PGEi, éster isopropilico de ll-desoxi-13,14-di-hidro-15-ceto- 16.16- difluoro-20-metil-PGEi, ll-desoxi-13,14-di-hidro-15-ceto-16,16-difluoro-20-metil-PGEl, ll-desoxi-13,14-di-hidro-15-ceto-16,16-difluoro-20-etil-PGEi, éster metilico do ll-desoxi-13,14-di-hidro-15-ceto-16,16-dif luoro-PGEi, éster isopropilico de ll-desoxi-13,14-di-hidro-15-ceto- 16.16- difluoro-20-etil-PGEi e 5 éster isopropílico de ll-desoxi-13,14-di-hidro-15-ceto-16,16-difluoro-PGFia
12. 12. Utilização como descrito na Reivindicação 1, em que o referido composto de prostaglandina é ll-desoxi-13,14-di-hidro-15-ceto-16,16-difluoro-PGEi.
13. 13. Utilização como descrito em qualquer uma das Reivindicações 1-12, em que a referida doença vascular periférica é a doença arterial periférica.
14. 14. Utilização como descrito na Reivindicação 12, em que a referida doença arterial periférica é a arteriosclerose.
15. 15. Utilização de um composto de 11-desoxi-prostaglandina para a preparação de uma composição para tratar a parede vascular periférica lesionada num indivíduo mamífero, em que o referido composto de 11-desoxi-prostagladina é um composto representado pela fórmula (III): L

    Ri-A (III) X1 *2 B—C—C—R0-R3 II z em que L é hidrogénio, hidroxilo, halogéneo, alquiloCl-6 linear ou ramificado, hidroxialquilo(Cl—6 linear ou ramificado), alcanoiloxiloCl-6 linear ou ramificado ou oxo, 6 o anel com cinco membros pode ter, opcionalmente, pelo menos uma ligação dupla; A é -CH3, -CH2OH, -COCH2OH, -COOH ou um seu sal, éter, éster ou amida; B é -CH2-CH2-; Z é

    R4 R5 ou 0 em que R4 e R5 são hidrogénio, hidroxilo, halogéneo, alquiloCl-6 linear ou ramificado, alcoxiloCl-6 linear ou ramificado ou hidroxialquilo(Cl—6 linear ou ramificado), em que R4 e R5 não são hidroxilo e alcoxiloCl-6 linear ou ramificado ao mesmo tempo; Xi e X2 são ambos halogéneo; Ri é um grupo hidrocarboneto de cadeia bivalente, linear ou ramificada, saturada ou insaturada, com 1 a 14 átomos de carbono, que é não substituída ou substituída com halogéneo, grupo alquilo, hidroxilo, oxo, arilo ou heterocíclico e, pelo menos, um de carbono no hidrocarboneto alifático é opcionalmente substituído por oxigénio, azoto ou enxofre; R2 é uma ligação simples ou alquilenoCl-6 linear ou ramificado; e 7 R.3 é alquiloCl-β linear ou ramificado, alcoxiloCl-6 linear ou ramificado, alcanoiloxiloCl-6 linear ou ramificado, cicloalquilo(C3-6), cicloalquiloxilo(C3-6), arilo, ariloxilo, grupo heterociclico ou grupo heterociclico-oxilo e, pelo menos, um de átomo de carbono no hidrocarboneto alifático é opcionalmente substituído por oxigénio, azoto ou enxofre.
16. 16. Utilização de um composto de 11-desoxi-prostaglandina para a preparação de uma composição para o tratamento de células endoteliais vasculares periféricas lesionadas num indivíduo mamífero, em que o referido composto de 11-desoxi-prostagladina é um composto representado pela fórmula (III) : Ri-A B—CII X1 X2 \ / C R2-R3 (III) z em que L é hidrogénio, hidroxilo, halogéneo, alquiloCl-6 linear ou ramificado, hidroxialquilo(Cl—6 linear ou ramificado), alcanoiloxiloCl-6 linear ou ramificado ou oxo, o anel com cinco membros pode ter, opcionalmente, pelo menos uma ligação dupla; 8 A é -CH3, -CH2OH, -COCH2OH, -COOH ou um seu sal, éter, éster ou amida; B é -CH2-CH2-; Z é

    R4 R5 , r4 r5 ou o em que R4 e R5 são hidrogénio, hidroxilo, halogéneo, alquiloCl-6 linear ou ramificado, alcoxiloCl-6 linear ou ramificado ou hidroxialquilo(Cl—6 linear ou ramificado), em que R4 e R5 não são hidroxilo e alcoxiloCl-6 linear ou ramificado ao mesmo tempo; Xi e X2 são ambos halogéneo; Ri é um grupo hidrocarboneto de cadeia bivalente, linear ou ramificada, saturada ou insaturada, com 1 a 14 átomos de carbono, que é não substituída ou substituída com halogéneo, grupo alquilo, hidroxilo, oxo, arilo ou heterociclico e, pelo menos, um de átomo de carbono no hidrocarboneto alifático é opcionalmente substituído por oxigénio, azoto ou enxofre; R2 é uma ligação simples ou alquilenoCl-6 linear ou ramificado; e R3 é alquiloCl-6 linear ou ramificado, alcoxiloCl-6 linear ou ramificado, alcanoiloxiloCl-6 linear ou 9 ramificado, cicloalquilo(C3-6), cicloalquiloxilo(C3-6), arilo, ariloxilo, grupo heterociclico ou grupo heterociclico-oxilo e, pelo menos, um de átomo de carbono no hidrocarboneto alifático é opcionalmente substituído por oxigénio, azoto ou enxofre. Lisboa, 20 de Janeiro de 2010 10