PT1819227E - Formulação farmacêutica de decitabina - Google Patents

Description

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DESCRIÇÃO "FORMULAÇÃO FARMACÊUTICA DE DECITABINA"

DOMÍNIO DA INVENÇÃO A presente invenção refere-se na generalidade a formulações farmacêuticas de decitabina contendo um composto de ciclodextrina e métodos de preparação e utilização das formulações farmacêuticas para o tratamento de várias doenças e condições, tais como cancro e perturbações hematológicas.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

Alguns nucleósidos aza-citosina, tal como 5-aza-2'-desoxicitidina (também designados decitabina) e 5- azacitidina (também designada azacitidina) têm sido desenvolvidos como antagonistas dos respectivos nucleósidos naturais relacionados, 2'-desoxcitidina e citidina, respectivamente. A única diferença estrutural entre azacitosina e a citosina reside na presença de um átomo de azoto na posição 5 do anel citosina em azacitosina, em comparação com um átomo de carbono na mesma posição da citosina.

Podem ser distinguidas duas formas isoméricas de decitabina. 0 β-anómero é a forma activa. Os modos de decomposição da decitabina em solução aquosa são (a) conversão do β-anómero activo no α-anómero inactivo (Pompon et al. (1987) J. Chromat 388:113-122); (b) clivagem do anel do anel aza-pirimidina para formar N-(formilamidine)-Ν'-β- 2 D-2'-deoxi-(ribofuranosi)-ureia (Mojaverian e Repta (1984) J. Pharm. Pharmacol. 36:728. 733)e (c) formulação posterior de compostos de guanidina (Kissinger and Stenm (1986) J. Chromat. 353:309-318). A decitabina possui múltiplas características farmacológicas. A um nível molecular, depende da fase S para incorporação no ADN. A um nível celular, a decitabina pode induzir a diferenciação celular e exercer toxicidade hematológica. Apesar de uma curta semi-vida in vivo, a decitabina possui uma excelente distribuição nos tecidos (Van Groeningen CJ, et al. (1986) Câncer Res. 46:4831-4836; e Chabot GG e Momparler RL (1990) Proceedings of the Workshop on 5-aza-2'-deoxycytidine (Momparler RL and De Vos D. eds), PCH Publication, pp. 105-115).

Uma das funções da decitabina reside na sua capacidade de inibir especificamente e intensamente a metilação do ADN. A metilação da citosina em 5-metilcitosina ocorre ao nível do ADN. Dentro da célula, a decitabina é primeiro convertida na sua forma activa, a 5-aza-desoxicitidina fosforilada, por desocicitidina quinase que é sintetizada principalmente durante a fase S do ciclo celular. A afinidade da decitabina para o local catalítico da desoxicitidina quinase é idêntica ao substrato natural, desoxicitidina. Momparler et al. (1985) 30:287-299. Depois da conversão na respectiva forma trifosfato pela desoxicitidina quinase, a decitabina é incorporada no ADN em replicação a uma velocidade idêntica à do substrato natural dCTP. Bouchard and Mompaler (1983) Mol. Pharmacol. 24:109-114. 3 A incorporação da decitabina da cadeia de ADN possui um efeito de hipometilação por inversão da hipermetilação aberrante caracteristica do cancro enquanto doença. Cada classe de células diferenciadas possui o seu próprio padrão de metilação. Depois da duplicação cromossómica, a fim de conservar este padrão de metilação, a 5-metilcitosina na cadeia progenitora serve para dirigir a metilação na cadeia de ADN filha complementar. A substituição do carbono na posição 5 da citosina por um azoto interfere com este processo normal de metilação do ADN. A substituição de 5-metilcitosina por decitabina num local específico de metilação produz uma a inactivação irreversível da ADN metiltransferase, presumivelmente devido à formação de uma ligação covalente entre a enzima e a decitabina. Juttermann et al. (1994) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 91:11797-11801. Ao inibir especificamente a ADN metiltransferase, a enzima necessária para a metilação, pode ser evitada a metilação aberrante dos genes supressores do tumor. A decitabina é vulgarmente fornecida sob a forma de um pó liofilizado, estéril, para injecção, em conjunto com sal para tamponamento, tal como di-hidrogenofosfato de potássio e um modificador do pH, tal como hidróxido de sódio. Por exemplo, a decitabina é fornecida pela SuperGen, Inc., sob a forma de um pó liofilizado em frascos de vidro de 20 ml, contendo 50 mg de decitabina, di-hidrogenofosfato de potássio monobásico e hidróxido de sódio. Quando reconstituído com 10 mL de água estéril para injecção, cada mL contém 5 mg de decitabina, 6,8 mg de KH3P04 e aproximadamente 1,1 mg de NaOH. O pH da solução resultante oscila entre 6,5 e 7,5. A solução reconstituída pode ainda ser diluída numa concentração de 1,0 ou 0,1 mg/mL em 4 fluidos de perfusão frios, isto é, cloreto de sódio a 0,9 % ou dextrose a 5 % ou glucose a 5 % ou Lactato de Ringer. Oa frascos por abrir são vulgarmente guardados à temperatura ambiente (2-25° C; 32-77° F) na embalagem original. A decitabina é vulgarmente administrada em doente por meio de injecção, tal como injecção i.v. de bolus, perfusão i.v. continua ou perfusão i.v. Tal como a decitabina, a azacitidina é também formulada sob a forma de solução aquosa e administrada por via intravenosa em doentes. De acordo com estudos clinicos sobre a azacitidina, perfusões prolongadas ou continuas revelaram-se mais eficazes do que as curtas. Santini et al. (2001) Ann. Int. Med. 134: 573-588. No entanto, o tempo da perfusão i.v. é limitado pela decomposição/instabilidade da decitabina ou azacitidina e baixa solubilidade dos fármacos em soluções aquosas. A presente invenção proporciona soluções inovadoras para estes problemas

RESUMO DA INVENÇÃO A presente invenção apresenta formulações de conjuntos de decitabina e métodos de utilização da decitabina para a prevenção ou tratamento de várias doenças ou condições. De acordo com a invenção, a decitabina é formulada com um composto de ciclodextrina, solvatada em solvente aquoso compreendendo pelo menos 60 % v/v de água. A abordagem inovadora contorna os problemas associados às actuais formulações clinicas aquosas de decitabina ou 5-azacitidina em tampão de fosfato, tal como a instabilidade clinica, a armazenagem inconveniente e transporte, para além do desconforto para os doentes devido às perfusões frias. 5

Num aspecto da invenção, é apresentada uma composição farmacêutica que inclui: Decitabina e um composto de ciclodextrina, de preferência em forma sólida. A composição pode ainda compreender um sal, ácido, composto alcalino de tamponamento e/ou excipiente. Com a dissolução em solução aquosa, a decitabina forma um complexo com o composto ciclodextrina. A composição farmacêutica pode encontrar-se em várias formas de dosagem adequadas à administração num sujeito animal por via oral, parentérica, tópica, intraperitonial, intravenosa, intra-arterial, transdérmica, sublingual, intramuscular, rectal, transbucal, intranasal, lipossomal, por inalação, por via vaginal, intraocular, administração local (por exemplo por cateter ou stent), subcutânea, intra-adiposa, intra-articular ou intratecal. A composição farmacêutica é solvatada com solvente aquoso e é adequada para administração ao sujeito por via intravenosa, intramuscular ou subcutânea. A decitabina pode encontrar-se sob a forma de um sal, de preferência um farmaceuticamente aceitável. Exemplos de sais incluem, sem constituir limitação, sais farmaceuticamente aceitáveis preparados a partir de um ácido inorgânico ou um ácido orgânico. Constituem exemplos destes ácidos inorgânicos o ácido clorídrico, bromídrico, iodídrico, nítrico, carbónico, sulfúrico e fosfórico. Os ácidos orgânicos apropriados podem ser seleccionados de entre as classes alifática, cicloalifática, aromática, arilalifática, heterocíclica, carbocíclica e sulfónica de ácidos orgânicos, dos quais se podem apontar como exemplos o ácido fórmico, acético, propiónico, succínico, glicólico, glucónico, maleico, embónico (pamóico), metanossulfónico, etanossulfónico, 2-hidroxietanossulfónico, pantoténico, 6 benzenossulfónico, toluenossulfónico, sulfanílico, mesílico, ciclo-hexilaminossulfónico, esteárico, algénico, β-hidroxibutírico, malónico, galáctico e galacturónico. De preferência, o ácido é seleccionado do grupo constituído por ácido clorídrico, L-láctico, acético, fosfórico, (+)-L-tartárico, cítrico, propiónico, butírico, hexanóico, L-aspártico, L-glutâmico, succínico, EDTA, maleico, metanossulfónico, HBr, HF, Hl, nítrico, nitroso, sulfúrico, sulfuroso, fosforoso, perclórico, clórico, cloroso, carboxílico, sulfónico, ascórbico, carbónico e fumárico. Em particular, o ácido sulfónico é seleccionado do grupo constituído por ácido etanossulfónico, 2-hidroxietanossulfónico e toluenossulfónico. 0 composto de ciclodextrina pode ser cristalino e amorfo. De preferência, o composto de ciclodextrina é a-ciclodextrina, β-ciclodextrina ou γ-ciclodextrina amorfa, mais preferencialmente alquilada ou hidroxialquil ciclodextrina seleccionada do grupo constituído por derivados de hidroxipropilo, hidroxietilo, glucosilo, maltosilo e maltotriosilo de β-ciclodextrina, carboxiamidometil-β-ciclodextrina, carboximetil-β-ciclodextrina, hidroxipropil^-ciclodextrina e dietilamino-β-ciclodextrina.

Opcionalmente, o composto de ciclodextrina é um derivado de éter sulfoalquílico ciclodextrina, de preferência sal sódico do éter sulfobiutílico β-ciclodextrina monossubstituída, tetrassubstituída ou heptassubstituída e mais preferencialmente sal 7 sódico do éter sulfobutílico de β-ciclodextrina (CAPT1S0L®). 7

De acordo com a forma de realização, a quantidade de decitabina na formulação farmacêutica situa-se entre 0,1 e 200 mg por ml de solvente, opcionalmente entre 1 e 100, entre 2 mg e 50 mg, 5 mg e 30 mg, entre 10 mg e 25 mg por ml do solvente. A proporção do peso de decitabina para o peso de composto de ciclodextrina pode situar-se entre 1:1 e 1:5000, opcionalmente entre 1:10 e 1:300, entre 1:1 e 1:200 ou entre 1:5 e 1:50- A formulação farmacêutica compreende pelo menos 60 %, 70%, 80%, 90%, 95%, 98% ou 99% v/v de água. A concentração do composto de ciclodextrina na formulação farmacêutica aquosa situa-se entre 0,1% e 80% p/p, opcionalmente entre 1% e 60% p/p, opcionalmente entre 5% e 50% p/p, opcionalmente entre 10% e 40% p/p ou opcionalmente entre 20% e 40% p/p.

Também opcionalmente, a formulação farmacêutica pode ainda incluir propilenoglicol, glicerina e/ou polietilenoglicol (PEG) tal como PEG300, PEG400 e PEG1000.

Também de acordo com a forma de realização, a composição farmacêutica pode ainda incluir um agente acidificante adicionado à formulação numa proporção tal que a formulação possui um pH resultante entre 4 e 8. Ao adicionar um agente acidificante para controlar o pH da formulação, pensa-se que irá facilitar a rapidez da dissolução do análogo/derivado de citidina no solvente e aumentar a estabilidade a longo-prazo da formulação. O agente acidificante pode ser um ácido orgânico. Exemplos de ácidos orgânicos incluem, sem constituir limitação, ácido ascórbico, ácido cítrico, ácido tartárico, 8 ácido láctico, ácido oxálico, ácido fórmico, ácido benzenossulfónico, ácido benzóico, ácido maleico, ácido glutâmico, ácido succínico, ácido aspártico, ácido diatrizóico e ácido acético. 0 agente acidificante pode ainda ser um ácido inorgânico, tal como ácido clorídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico e ácido nitrico.

Numa variação, o agente acidificante é ácido ascórbico a uma concentração de 0,01 a 0,2 mg/ml do solvente, opcionalmente 0,04 a 0,1 mg/ml ou 0,03 a 0,07 mg/ml do solvente. O pH da formulação farmacêutica pode ser ajustado entre pH 4 e pH 8, de preferência entre pH 5 e pH 7 e mais preferencialmente entre pH 5,5 e pH 6,8. A formulação farmacêutica inclui ainda opcionalmente um excipiente adicionado numa quantidade suficiente para aumentar a estabilidade da composição, manter o produto em solução ou prevenir efeitos secundários (por exemplo, potenciais ulcerações, irritação vascular ou extravasamento) associados à administração da formulação da invenção. Exemplos de excipientes incluem, sem constituir limitação, manitol, sorbitol, lactose e dextrose. A formulação farmacêutica é preferivelmente pelo menos 80%, 90%, 95% ou mais estável em armazém entre 2 e 8o C durante 5, 10, 15, 24 horas ou 2, 4, 7, 14, 21, 28 ou mais dias. A formulação farmacêutica é também preferivelmente pelo menos 80%, 90%, 95% ou mais estável em armazém entre 20 e 25° C durante 5, 10, 15, 24 horas ou 2, 5, 7, 14, 21, 28 ou mais dias.

Noutra forma de realização, a formulação farmacêutica é preparada mediante dissolução de decitabina e um composto 9 de ciclodextrina num solvente aquoso que inclui pelo menos 60% v/v de áqua, opcionalmente pelo menos 70%, 80%, 90%, 95% ou 99% v/v de água. O solvente aquoso pode ainda incluir sal de tamponamento, tal como fosfato de potássio dissolvido.

De acordo com a forma de realização, pode ainda incluir: adição de um agente acidificante à solução que contém o análogo/derivado de citidina e o solvente de forma que o pH da solução resultante se situe entre pH 4 e pH 8, de preferência entre pH 5 e pH 7 e mais preferencialmente entre pH 5,5 e pH 6,8. A formulação farmacêutica pode também incluir opcionalmente um ou mais agentes terapêuticos diferentes da decitabina, por exemplo, a formulação farmacêutica pode incluir ainda opcionalmente um agente terapêutico seleccionado do grupo constituído por agentes anti-neoplásicos, agentes alquilantes que são membros da superfamília dos retinóides, agentes hormonais, agentes derivados de plantas, agentes biológicos, interleuquinas, interferões, citoquinas, agentes imunomoduladores e anticorpos monoclonais.

Outro aspecto da invenção refere-se a um recipiente esterilizado contendo uma formulação farmacêutica de acordo com a presente invenção. O recipiente, por exemplo, pode ser um frasco, uma seringa ou ampola. O recipiente pode assumir diferentes tamanhos. Por exemplo, o recipiente pode conter entre 1 e 50, 1 e 25, 1 e 20 ou 1 e 10 ml da formulação farmacêutica.

Ainda outro aspecto da invenção refere-se a um conjunto que compreende decitabina sob forma sólida, de preferência 10 pó ou mais preferencialmente pó liofilizado e um diluente aquoso que inclui um composto de ciclodextrina e pelo menos 60% v/v de água. A mistura do análogo/derivado sólido e do diluente tem como resultado a formação de uma formulação farmacêutica de acordo com a presente invenção.

Por exemplo, o conjunto pode compreender um primeiro recipiente contendo a decitabina e um composto de ciclodextrina sob forma sólida, de preferência em pó ou mais preferencialmente em pó liofilizado e um segundo recipiente contendo um diluente aquoso, que compreende pelo menos 60% v/v de água, em que a adição do diluente resulta na formação da formulação farmacêutica para administração da decitabina.

Opcionalmente, o conjunto pode compreender um primeiro recipiente contendo a decitabina sob forma sólida e um segundo recipiente contendo um composto de ciclodextrina dissolvido num diluente aquoso, que compreende pelo menos 60% v/v de água, em que a adição do diluente resulta na formação da formulação farmacêutica para administração da decitabina.

Ainda opcionalmente, o conjunto pode compreender um primeiro recipiente contendo a decitabina sob forma sólida, um segundo recipiente contendo um composto de ciclodextrina sob forma sólida e um terceiro recipiente que contém um diluente aquoso, que compreende pelo menos 60% v/v de água, em que a adição do diluente resulta na formação de uma solução aquosa que é depois adicionada à decitabina sólida para produzir uma formulação farmacêutica para administração da decitabina. 11 A mistura da decitabina sólida e o diluente pode opcionalmente uma formulação farmacêutica que contém entre 0,1 e 200 mg de decitabina por ml de diluente, opcionalmente entre 1 e 100, entre 2 mg e 50 mg, 5 mg e 30 mg, entre 10 mg e 25 mg por ml do solvente. O conjunto pode opcionalmente incluir ainda instruções. As instruções podem descrever a forma como o(s) composto(s) sólido(s) e o diluente devem ser misturados para formar uma formulação farmacêutica. As instruções podem também descrever como administrar a formulação farmacêutica resultante a um doente. Atenção, as instruções podem opcionalmente descrever os métodos de administração de acordo com a presente invenção. O diluente e a decitabina podem encontrar-se em recipientes separados. Os recipientes podem assumir diferentes tamanhos. Por exemplo, o recipiente pode conter entre 1 e 50, 1 e 25, 1 e 20 ou 1 e 10 ml do diluente.

Ainda outro aspecto da invenção refere-se à utilização de uma composição farmacêutica na preparação de um medicamento destinado ao tratamento de uma doença, seleccionado do grupo constituído por tumores benignos, cancro, perturbações hematológicas, aterosclerose, agressões nos tecidos corporais devido a cirurgia, cicatrização anómala de feridas, angiogénese anómala, doenças que produzem fibrose dos tecidos, perturbações causadas por movimentos repetitivos, perturbações dos tecidos que não são muito vascularizados e respostas proliferativas associadas a transplantes de órgãos. A formulação farmacêutica da presente invenção pode destinar-se a administração por via oral, parentérica, tópica, 12 intraperitonial, intravenosa, intra-arterial, transdérmica, sublingual, intramuscular, rectal, transbucal, intranasal, lipossomal, por inalação, por via vaginal, intraocular, por administração local (por exemplo por cateter ou stent), subcutânea, intra-adiposa, intra-articular ou intratecal. Preferencialmente, a formulação farmacêutica destina-se a ser administrada por via intravenosa, intramuscular ou subcutânea.

De preferência, a composição farmacêutica é ainda mais diluída com um diluente aquoso antes da administração ao doente. De preferência, o diluente aquoso é um fluido de perfusão e a composição farmacêutica diluída destina-se a perfusão intravenosa. De preferência, a diluição é efectuada 10 h, 2 h, 1 h, 30 min, 10 min, 5 min ou menos antes da administração ao doente. De preferência, o referido medicamento destina-se a administração com um agente terapêutico diferente da decitabina. 0 agente terapêutico pode ser seleccionado do grupo constituído por agentes anti-neoplásicos, agentes alquilantes, agentes que sejam membros da superfamília dos retinóides, agentes hormonais, agentes derivados de plantas, agentes biológicos, interleuquinas, interferões, citoquinas, agentes imunomoduladores e anticorpos monoclonais.

Relativamente ao conjunto, é também apresentado um método que compreende a mistura de uma decitabina e um composto de ciclodextrina que se encontram sob forma sólida, de preferência com um diluente aquoso compreendendo pelo menos 60% v/v de água para formar uma composição farmacêutica. 13

Noutra forma de realização, o método compreende: misturar a decitabina que se encontra em forma sólida, de preferência em pó, com um diluente aquoso que inclui um composto ciclodextrina solvatado em pelo menos 60% v/v de água para formar uma formulação farmacêutica.

De modo vantajoso, a formulação farmacêutica pode ser formada mediante mistura da decitabina com o diluente pouco tempo antes da administração a um doente (por exemplo, no espaço de um dia ou mesmo 6, 5, 4, 3, 2 ou 1 hora ou menos antes da administração). Este facto reduz a decomposição do análogo/derivado de citidina. Opcionalmente, como presentemente descrito, a formulação farmacêutica é adequada para a administração mediante a mistura de aliquotas da formulação farmacêutica com uma solução aquosa (por exemplo, fluido de perfusão) e perfundindo a solução resultante no corpo do doente, opcionalmente com um conector Y, tal como igualmente descrito no presente documento.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS A figura 1 mostra os resultados de um estudo sobre a estabilidade da decitabina formulada com ciclodextrinas entre 2 e 8o C. A figura 2 mostra os resultados de um estudo sobre a estabilidade da decitabina formulada com ciclodextrinas a 25° C. A figura 3 mostra os resultados de um estudo sobre a estabilidade da decitabina em soluções com várias concentrações de HPBCD a 25° C. 14 A figura 4 mostra espectros de UV da decitabina em soluções de ciclodextrina a 25° C. A figura 5 mostra os espectros de UV da decitabina em soluções com diferentes concentrações de HPBCD a 25° C. A figura 6 é um gráfico de Delta A de 262 nm contra 1/[HPBCD] .

DESCRIÇÃO DETALHADA DA PRESENTE INVENÇÃO A presente invenção apresenta formulações farmacêuticas de análogos da citidina aperfeiçoadas, por exemplo decitabina que pode ser utilizada para o tratamento de várias doenças e condições, tais como sindrome mielodisplásico (myelodysplastic syndrome - MDS), cancro pulmonar das células não pequenas (non-small cell lung câncer - NSCL) e anemia falsiforme (sickle-cell anemia -SCA) . Esta abordagem inovadora tem por objectivo ultrapassar três grandes obstáculos que têm tido um impacto negativo no desenvolvimento comercial deste tipo de fármacos: Degradação hidrolítica em ambiente aquoso; fraca solubilidade na maioria dos solventes farmaceuticamente aceitáveis e biodisponibilidade oral minima.

Como anteriormente discutido, na actual formulação clinica a decitabina é apenas ligeiramente solúvel em soluções aquosas tais como soro fisiológico normal e sofre uma rápida degradação assim que é dissolvida. A instabilidade e solubilidade limitada da decitabina em solução aquosa cria graves inconvenientes tanto ao nivel da produção como do uso clinico do produto farmacológico decitabina. A instabilidade da decitabina em solução aquosa implica a refrigeração dos fluidos de perfusão a frio de produção da solução de decitabina destinados à diluição do 15 fármaco antes da administração intravenosa e um tempo de armazenagem curto das soluções aquosas de decitabina. A solubilidade limitada em solução aquosa também implica a administração de um grande volume do fármaco, o que torna difícil administrar o fármaco por via subcutânea. A presente invenção apresenta soluções inovadoras para os problemas enunciados, associados à actual formulação clínica da decitabina. Os autores da invenção descobriram que os compostos de ciclodextrina podem aumentar significativamente a solubilidade da decitabina em soluções aquosas e melhorar dramaticamente a respectiva estabilidade nas soluções aquosas. Os autores da presente invenção acreditam que presente invenção iria minimizar ou eliminar muitos dos graves inconvenientes da produção, armazenamento e transporte do produto farmacológico decitabina. Mais importante, em aplicações clínicas de um produto farmacológico de decitabina, a presente invenção pode reduzir o desconforto e inconvenientes do doente ao eliminar a necessidade de perfusão fria e diminuir o volume da solução farmacológica a ser administrada, especialmente no caso da administração subcutânea. I. Ciclodextrina nas Formulações da Presente Invenção

Segundo a presente invenção, o composto de ciclodextrina pode ser uma α-ciclodextrina, β-ciclodextrina, γ-ciclodextrina. As ciclodextrinas são oligómeros cíclicos de glucose, estes compostos formam complexos de inclusão com outro composto cuja molécula caiba nas cavidades que buscam lipófilos da molécula de ciclodextrina. Especificamente, a α-ciclodextrina contém seis unidades glucopiranose; a β-ciclodextrina contém sete 16 unidades glucopiranose e a α-ciclodextrina contém oito unidades glucopiranose. Tipicamente, pensa-se gue uma molécula de ciclodextrina forma um cone truncado com uma abertura central de 4,7-5,3 Á, 6,0-6,5 Á e 7,5-8,3 Á na a-ciclodextrina, β-ciclodextrina, y-ciclodextrina respectivamente. O composto de ciclodextrina pode ser cristalino e amorfo. De preferência, o composto de ciclodextrina é amorfo. Em geral, a ciclodextrina amorfa é preparada por meio de adições não-selectivas, especialmente alquilação das espécies de ciclodextrina desejadas. São executadas reacções para produzir misturas contendo vários componentes, impedindo assim a cristalização da ciclodextrina. Várias ciclodextrinas alquiladas e hidroxialquílicas podem ser produzidas e, evidentemente divergirão dependendo das espécies de partida de ciclodextrinas e do agente de adição utilizado. Entre as ciclodextrinas amorfas adequadas para as composições de acordo com a invenção contam-se os derivados de hidroxipropilo, hidroxietilo, glucosilo, maltosilo e maltotriosilo da β-ciclodextrina, carboxiamidometil-β-ciclodextrina, carboximetil^-ciclodextrina, hidroxipropil-β-ciclodextrina e dietilamino-p-ciclodextrina.

Numa forma de realização, o composto de ciclodextrina é um derivado de éter sulfoalquilico ciclodextrina, de preferência sal sódico do éter sulfobiutilico β-ciclodextrina monossubstituida, tetrassubstituida ou heptassubstituida e mais preferencialmente sal 7 sódico do éter sulfobutilico de β-ciclodextrina (CAPT1SOL®, Cydex, Inc, Lenexa, KS). 17

Noutra forma de realização, o composto de ciclodextrina é uma hidroxi-p-ciclodextrina, de preferência derivados hidroxipropilo, hidroxietilo, glucosilo, maltosilo e maltotriosilo β-ciclodextrina. 0 composto de ciclodextrina pode ser a-ciclodextrina, β-ciclodextrina, γ-ciclodextrina não-modifiçada ou modificada. No entanto, a a-ciclodextrina, β-ciclodextrina, γ-ciclodextrina não modificada ou modificada é menos preferida nas composições de acordo com a invenção porque as formas não modificadas têm tendência a cristalizar e são relativamente menos solúveis em soluções aquosas. São mais preferidas para as composições de acordo com a invenção as a-ciclodextrina, β-ciclodextrina, γ-ciclodextrina que são quimicamente modificadas ou substituídas. A substituição química dos grupos 2,3 e 6 hidroxilo das unidades glucopiranose dos anéis de ciclodextrina rende aumentos de solubilidade do composto de ciclodextrina.

As ciclodextrinas mais preferidas nas composições de acordo com a invenção são compostos de ciclodextrina amorfos. Ciclodextrina amorfa significa misturas não-cristalinas de ciclodextrinas, sendo a mistura preparada a partir de a-ciclodextrina, β-ciclodextrina, y-ciclodextrina. Em geral, a ciclodextrina amorfa é preparada por meio de alquilação não-selectiva das espécies de ciclodextrina desejadas. Os agentes de alquilação adequados para este fim incluem, sem constituírem limitação, óxido de propileno, glicidol, iodoacetamida, cloroacetato e cloreto de 2-dietilaminoetilo. São executadas reacções para produzir misturas contendo vários componentes, impedindo assim a cristalização da ciclodextrina. Várias ciclodextrinas alquiladas podem ser produzidas e, 18 evidentemente divergirão dependendo das espécies de partida de ciclodextrina e do agente de adição utilizado. Entre as ciclodextrinas amorfas adeguadas para as composições de acordo com a invenção contam-se os derivados de hidroxipropilo, hidroxietilo, glucosilo, maltosilo e maltotriosilo da β-ciclodextrina, carboxiamidometil-β-ciclodextrina, carboximetil^-ciclodextrina, hidroxipropil-β-ciclodextrina e dietilamino-p-ciclodextrina.

Nas composições de acordo com a invenção é preferida a hidroxipropil-p-ciclodextrina, embora os análogos α e γ sejam também adequados. A a-ciclodextrina, β-ciclodextrina ou γ-ciclodextrina alquilada especifica a ser utilizada com o análogo de citidina particular para formar as composições de acordo com a invenção será seleccionada com base no tamanho da molécula do análogo ou derivado de citidina e o tamanho relativo da cavidade do composto de ciclodextrina. Tal como no caso das ciclodextrinas não-substituídas mencionadas anteriormente, poderá ser vantajoso utilizar ciclodextrina alquilada com uma cavidade maior quando a composição de acordo com a invenção inclui também um excipiente. A utilização de uma α-ciclodextrina, β-ciclodextrina ou γ-ciclodextrina com um análogo/derivado de citidina particular ou análogo/derivado de citidina e excipiente nas composições de acordo com a invenção pode, evidentemente, ser optimizada com base na eficácia da manutenção do análogo/derivado de citidina particular em solução. A composição de acordo com a invenção pode compreender uma mistura de duas ou mais de entre α-ciclodextrina, β-ciclodextrina ou γ-ciclodextrina. De preferência, a composição de acordo com a invenção compreenderá apenas uma 19 de entre α-ciclodextrina, β-ciclodextrina ou γ-ciclodextrina. 2. Preparação de Formulações Farmacêuticas

As composições da presente invenção são adequadas para administração por qualquer via, de preferência sob a forma de uma composição farmacêutica adaptada a essa via, como ilustrado seguidamente, e dependem da condição em tratamento. As formulações são adequadas, por exemplo, para administração por via oral, parentérica, tópica, intraperitonial, intravenosa, intra-arterial, transdérmica, sublingual, intramuscular, rectal, transbucal, intranasal, lipossomal, por inalação, por via vaginal, intraocular, por administração local (por exemplo por cateter ou stent), subcutânea, intra-adiposa, intra-articular ou intratecal.

Para administração oral as composições podem encontrar-se sob a forma de, por exemplo, uma cápsula, suspensão ou liquido. A composição farmacêutica é feita preferencialmente, sob a forma de uma unidade de dosagem contendo uma quantidade com eficácia terapêutica do ingrediente activo.

Em alternativa, as composições da presente invenção podem encontrar-se sob a forma de um pó ou preferivelmente em pó liofilizado para reconstituição no veiculo farmaceuticamente aceitável apropriado no momento da administração.

As composições farmacêuticas são adequadas para administração via injecção. As formulações para administração por via parentérica podem encontrar-se sob a forma de soluções ou suspensões para injecção estéreis isotónicas aquosas. Como anteriormente descrito, estas 20 soluções ou suspensões podem ser preparadas a partir de pós estéreis ou granulados com decitabina e ainda incluindo um ou mais dos compostos de ciclodextrina. Os pós e os granulados podem ser dissolvidos em água, tampão aguoso ou um solvente contendo pelo menos 60% v/v de água.

Numa forma de realização preferida, a decitabina pode ser formulada numa composição farmaceuticamente aceitável gue contém a decitabina solvatada numa solução aquosa. Pensa-se que a solubilidade e/ou estabilidade da decitabina irá melhorar nestas formulações farmacêuticas, de forma que as formulações farmacêuticas podem ser guardadas por um período de tempo prolongado antes da utilização ou implicar menos volume de líquido para injecção.

Como anteriormente discutido, no tratamento clínico corrente com decitabina, para minimizar a decomposição do fármaco a decitabina é fornecida sob a forma de um pó liofilizado (em conjunto com KH2PO4 e NaOH) que é reconstituído com água estéril para injecção e diluído em fluidos de perfusão a frio antes da administração. Esta formulação e regime de tratamento sofre de algumas desvantagens. Primeiro, é essencial a refrigeração da decitabina em solução fria, o que dificulta a manipulação e é economicamente menos vantajoso do que uma formulação que pode suportar um armazenamento a temperaturas superiores. Segundo, devido à rápida decomposição da decitabina em solução aquosa, a solução de decitabina reconstituída e diluída pode apenas ser perfundida num doente por 3 horas no máximo se a solução foi guardada em frigorífico por menos de 7 horas. Além disso, a perfusão de fluido frio pode provocar grande desconforto e dor ao doente, o que induz resistência da parte do doente a este regime. 21

Ao formar um complexo entre a decitabina e o composto de ciclodextrina na solução, as formulações farmacêuticas podem contornar os problemas enumerados associados ao actual tratamento clínico com a decitabina. A decitabina pode ser formulada em soluções aquosas que contêm áqua me pelo menos 60% em vol. do solvente, opcionalmente pelo menos 80% ou opcionalmente pelo menos 90% em vol. do solvente. Pensa-se que estas formulações da invenção sejam mais estáveis do ponto de vista químico do que a actual formulação clínica.

As quantidades relativas da decitabina e composto de ciclodextrina irão variar conforme a quantidade relativa de cada uma das decitabinas e o efeito do composto de ciclodextrina na decitabina. Em geral, a proporção do peso da decitabina para o peso do composto de ciclodextrina pode oscilar entre 1:1 e 1:5000. Dentro deste intervalo, a solubilidade e/ou estabilidade da decitabina aumenta significativamente quando a proporção do peso de decitabina para o peso do composto de ciclodextrina se situa dentro de um intervalo entre a concentração à qual a decitabina não se transforma em solução à concentração particular da ciclodextrina amorfa e 1:2000. Pensa-se que uma proporção peso para peso entre 1:1 e 1:200 e, mais preferencialmente entre 1:5 e 1:50 de decitabina para o composto de ciclodextrina será a mais eficaz para proporcionar uma maior solubilidade e/ou estabilidade da decitabina. Por exemplo, prevê-se que a decitabina dissolvida numa solução aquosa do composto de ciclodextrina, numa proporção entre 1:10 e 1:300 (fármaco:ciclodextrina, p:p) e uma concentração final da solução para injecção de 40 mg/ml da 22 decitabina aumente significativamente a estabilidade em comparação com a decitabina em soro fisiológico normal.

De preferência, se a solução aguosa gue contém a decitabina e o composto de ciclodextrina se destina a ser administrada por via parentérica, especialmente via i.v., os composto de ciclodextrina encontrar-se-à substancialmente isento de contaminantes pirogénicos. 0 composto de ciclodextrina, de preferência hidroxipropil-β-ciclodextrina amorfa pode ser adguirido junto de vários vendedores, incluindo a Janssen Pharmaceuticals, com a designação comercial Encapsin. Além disso, existem disponíveis no comércio outras formas de ciclodextrina amorfa com diferentes graus de substituição ou número de resíduos de glucose. Um método de produção de hidroxipropil-p-ciclodextrina encontra-se divulgado em Pitha et aL, U.S. Pat. No.4, 727, 064, presentemente incluídos por referência.

Para produzir as formulações de acordo com a invenção, coloca-se uma quantidade previamente pesada de composto de hidroxipropil-p-ciclodextrina que seja substancialmente apirogénico num recipiente estéril despirogenado adequado. Os métodos de despirogenação dos recipientes e componentes de oclusão são bem conhecidos dos peritos na técnica e encontram-se descritos na íntegra na Farmacopeia Norte-Americana 23 United States Pharmacopeial Convention, Rockville, Md. EUA). Em geral, a despirogenação é conseguida por meio da exposição dos objectos a despirogenar a temperaturas acima de 250° C, por um período de tempo suficiente para incinerar toda a matéria orgânica. Conforme a medição em U.S.P. Unidades de Endotoxina Bacteriana, a formulação não irá conter mais de 10 Unidades 23 de Endotoxina Bacteriana por grama de ciclodextrina amorfa. Substancialmente apirogénico significa que a hidroxipropil-β-ciclodextrina contém menos de 10 U.S.P. unidades de endotoxina bacteriana por grama aplicando o método U.S.P. De preferência, a hidroxipropil-p-ciclodextrina irá conter entre 0,1 e 5 U.S.P. unidades de endotoxina bacteriana por mg nas condições especificadas na Farmacopeia Norte-americana 23.

Adiciona-se água estéril ou tampão aquoso suficiente à ciclodextrina amorfa substancialmente apirogénica até se encontrar na solução a concentração desejada de hidroxipropil-p-ciclodextrina. A esta solução adiciona-se uma quantidade previamente pesada de decitabina com agitação e com repouso adicional se necessário até estar completa a dissolução. A solução pode então ser filtrada através de um filtro estéril de 0,2 micrones para um recipiente de recolha estéril e é posteriormente colocada em frascos despirogenados estéreis, opcionalmente liofilizada e é tapada. Para produtos que podem ser guardados por longos periodos de tempo, pode ser acrescentado um conservante farmaceuticamente aceitável à solução de análogo/derivado de citidina e hidroxipropil-p-ciclodextrina antes da filtração, enchimento, liofilização opcional e rolhagem ou em alternativa pode ser adicionado em condições estéreis depois da filtração.

Devido à maior estabilidade, a formulação da invenção pode ser guardada e transportada à temperatura ambiente, reduzindo assim significativamente o custo de manuseamento do fármaco. Além disso, a formulação da invenção pode ser 24 guardada convenientemente por muito tempo antes de ser administrada ao doente. Além disso, a formulação da invenção pode ser diluída com fluido de perfusão regular (sem arrefecimento) e administrada a um doente à temperatura ambiente, evitando assim provocar no doente desconforto associado à perfusão de fluido frio. A decitabina pode ser dissolvida numa solução de composto de ciclodextrina a diferentes concentrações. Por exemplo, a formulação pode conter opcionalmente entre 100 e 0,1, e 200, entre 1 e 100, entre 1 e 50, entre 2 e 50, entre 2 e 100, entre 5 e 100, entre 10 e 100 ou entre 20 e 100 mg de decitabina por ml da solução. Exemplos específicos da decitabina por concentrações de solução incluem, sem constituírem limitação 2, 5, 10, 20, 27, 25, 30, 40 e 50 mg/ml. A formulação farmacêutica pode ainda incluir um agente acidificante adicionado à formulação numa proporção tal que a formulação possui um pH resultante entre 4 e 8. O agente acidificante pode ser um ácido orgânico. Exemplos de ácidos orgânicos incluem, sem constituir limitação, ácido ascórbico, ácido cítrico, ácido tartárico, ácido láctico, ácido oxálico, ácido fórmico, ácido benzenossulfónico, ácido benzóico, ácido maleico, ácido glutâmico, ácido succínico, ácido aspártico, ácido diatrizóico e ácido acético. O agente acidificante pode ainda ser um ácido inorgânico, tal como ácido clorídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico e ácido nítrico.

Pensa-se que a adição de um agente acidificante à formulação para manter um pH relativamente neutro (por exemplo entre pH 4 a 8) facilita a rápida dissolução da 25 decitabina no solvente e aumenta a estabilidade a longo prazo da formulação. Em solução alcalina verifica-se uma rápida decomposição reversível da decitabina em N-(formilamidino)-Ν'-p-D-2-desoxibofunossilurea, que se decompõe irreversivelmente em 1 -p-D-2'-deoxiribofuranasil-3-guanilurea. A primeira etapa da degradação hidrolítica envolve a formação de formato de N-aminidio-N' - (2-desoxi-p-D-eritropentofuranosil)ureia (AUF). A segunda fase da degradação a uma temperatura elevada envolve a formação de guanidina. Em solução ácida formam-se N-(formilamidino) N' -p-D-2-desoxirribofuranesilurea e alguns compostos não-identifiçados. Em solução fortemente ácida (a pH <2,2) produz-se 5-azacitosina. Assim, pode ser vantajoso manter um pH relativamente neutro para a formulação contendo a decitabina.

Numa variação, o agente acidificante é ácido ascórbico a uma concentração de 0,01 a 0,2 mg/ml do solvente, opcionalmente 0,04 a 0,1 mg/ml ou 0,03 a 0,07 mg/ml do solvente. O pH da formulação farmacêutica pode ser ajustado entre pH 4 e pH 8, de preferência entre pH 5 e pH 7 e mais preferencialmente entre pH 5,5 e pH 6,8. A formulação farmacêutica é preferivelmente pelo menos 80%, 90%, 95% ou mais estável em armazém entre 2 e 8o C durante 5, 10, 15, 24 horas ou 2, 4, 7, 14, 21, 28 ou mais dias. A formulação farmacêutica é também preferivelmente pelo menos 88%, 90%, 95% ou mais estável em armazém entre 20 e 25° C durante 5, 10, 15, 24 horas ou 2, 5, 7, 14, 21, 28 ou mais dias. 26

Opcionalmente, pode-se proceder de forma a aumentar a taxa de solvatação da decitabina pela solução contendo um composto de ciclodextrina. Exemplos de etapas adicionais que podem ser executadas incluem, sem constituir limitação, agitação, aquecimento, prolongamento do período de solvatação e aplicação do análogo/derivado de citidina micronizado e combinações destes.

Numa variação aplica-se agitação. Exemplos de agitação incluem, sem constituir limitação, agitação mecânica, sonicação, mistura convencional, agitação convencional e combinações destas. Por exemplo, a agitação mecânica das formulações pode ser executada segundo os protocolos do fabricante por Silverson homogeneizador, fabricado por Silverson Machines Inc., (East Longmeadow, MA).

Numa variação pode ser aplicado calor. Opcionalmente, as formulações podem ser aquecidas em banho-maria. De preferência, a temperatura das formulações aquecidas pode ser inferior a 70° C, mais preferencialmente entre 25° C e 40° C. A título de exemplo, a formulação pode ser aquecida a 37° C.

Ainda noutra variação, pode também ser empregue uma forma micronizada da decitabina para aumentar a cinética da solvatação. Opcionalmente, a micronização pode ser executada pelo processo de moagem. A título de exemplo, a micronização pode ser executada de acordo com os protocolos do fabricante, pelo processo de moagem a jacto executado em Malvern Mastersizer, Mastersizer recorrendo a um moinho de jacto de ar fabricados pela Micron Technology Inc. (Boise, ID). IncFluid Energy Aljet Inc. (Boise, ID Telford, PA). 27

Opcionalmente, o pH das formulações farmacêuticas pode ser ajustado pelos métodos vulgarmente utilizados. Numa variação, o pH é ajustado por meio da adição de ácido, tal como ácido ascórbico, ou base, tal como hidróxido de sódio. Noutra variação, o pH é ajustado e estabilizado por meio da adição de soluções tampão, tal como uma solução de sla dissódico de ácido tetraacético (etiolenodinitrilo) (EDTA). Dado que a decitabina é conhecida como sendo sensivel ao pH, o ajuste do pH das formulações farmacêuticas a aproximadamente pH 7 pode aumentar a estabilidade do componente terapêutico.

Opcionalmente, a separação de decitabina não-dissolvida pode ser efectuada para as formulações farmacêuticas. A separação pode ser efectuada por qualquer técnica adequada. Por exemplo, um método de separação adequado pode incluir uma ou mais de entre filtração, sedimentação e centrifugação das formulações farmacêuticas. 0 entupimento eventualmente provocado por partículas por dissolver do análogo/derivado de citidina pode tornar-se um obstáculo à administração das formulações farmacêuticas e um risco em potência para o doente. A separação de decitabina por dissolver a partir das formulações farmacêuticas pode facilitar a administração e aumentar a segurança do produto terapêutico.

Opcionalmente, a esterilização das formulações farmacêuticas pode ser efectuada. A esterilização pode ser efectuada por qualquer técnica adequada. Por exemplo, um método de esterilização adequado pode incluir uma ou mais de entre esterilização por filtração, irradiação química, filtração térmica e adição de um produto químico desinfectante à formulação farmacêutica. 28 A formulação farmacêutica inclui ainda opcionalmente um excipiente adicionado numa quantidade suficiente para aumentar a estabilidade da composição, manter o produto em solução ou prevenir efeitos secundários (por exemplo, potenciais ulcerações, irritação vascular ou extravasamento) associados à administração da formulação da invenção. Exemplos de excipientes incluem, sem constituir limitação, manitol, sorbitol, lactose e dextrose.

Opcionalmente, a decitabina pode ser formulada numa forma de dosagem oral. A formulação é preferencialmente uma composição farmacêutica adaptada para administração oral, compreendendo decitabina e um composto de ciclodextrina.

Também opcionalmente, a decitabina pode ser formulada numa forma de dosagem tópica. A formulação é preferencialmente uma composição farmacêutica adaptada para administração oral, compreendendo: decitabina e um composto de ciclodextrina.

Para utilização tópica, as composições da presente invenção pode também ser preparada em formas adequada para serem aplicadas sobre a pele ou membranas mucosas do nariz e garganta e pode assumir a forma de cremes, pomadas, sprays líquidos ou inaladores, losangos ou tinturas para a garganta. Estas formulações tópicas podem ainda incluir compostos químicos tais como dimetilsulfóxido (DMSO) para facilitar a penetração superficial do ingrediente activo.

Também opcionalmente, a decitabina pode ser formulada numa forma de dosagem adequada para aplicação nos olhos ou ouvidos. A decitabina e composto de ciclodextrina podem ser apresentados em forma líquida ou semilíquida, formulada em 29 bases hidrofóbicas ou hidrofílicas tais como pomadas ~, cremes, loções, tinturas ou pós.

Também opcionalmente, a decitabina pode ser formulada numa forma de dosagem adequada para administração por meio de inalação. A decitabina ou ciclodextrina podem estar presentes em sprays líquidos ou misturadas com inalantes, losangos ou tinturas para a garganta.

Em alternativa, a decitabina ou o composto de ciclodextrina podem encontrar-se sob a forma de um pó para reconstituição no veículo farmaceuticamente aceitável apropriado no momento da administração.

Quando a decitabina ou a ciclodextrina se encontram sob forma sólida. Com a dissolução em líquido, de preferência solução aquosa, a decitabina forma um complexo com a ciclodextrina na composição. A composição pode ainda compreender um sal, de tamponamento que possa estabilizar o complexo de ciclodextrina. 3. Recipientes e conjuntos A decitabina e/ou o composto de ciclodextrina descritos na presente invenção podem estar contidos num recipiente esterilizado, tal como frascos para seringas e frascos de vidro ou ampolas de vários tamanhos e capacidades. 0 recipiente esterilizado pode conter opcionalmente a decitabina e/ou o composto de ciclodextrina sob a forma de pó ou cristais ou a respectiva formulação em solução com um volume, por exemplo, 1-50 ml, 1-25 ml, 1-20 ml ou 1-10 ml. Os recipientes esterilizados permitem manter a esterilidade das formulações farmacêuticas, facilitar o transporte e armazenamento e permitir a administração da formulação farmacêutica sem proceder previamente à esterilização. 30 A presente invenção apresenta ainda um conjunto para administração da decitabina a um hospedeiro necessitado desta que inclui: decitabina sob forma sólida e um diluente aquoso que compreende um composto de ciclodextrina e pelo menos 60% v/v de água. Numa forma de realização, o conjunto compreende decitabina e o composto de ciclodextrina sob forma sólida, de preferência em pó e um diluente aquoso que compreende água, tampão, excipiente ou combinações destes. A mistura dos compostos sólidos e do diluente tem preferencialmente como resultado a formação de uma formulação farmacêutica de acordo com a presente invenção. Opcionalmente, o conjunto pode compreender um primeiro recipiente contendo a decitabina, o composto de ciclodextrina e opcionalmente sal de tamponamento (por exemplo fosfato de potássio) sob forma sólida e um recipiente contendo um diluente que inclui água, em que a adição do diluente aos compostos sólidos resulta na formação da formulação farmacêutica. A mistura dos compostos sólidos e do diluente pode opcionalmente formar uma formulação farmacêutica que contém entre 0,1 e 200 mg do análogo/derivado de decitabina por ml de diluente, opcionalmente entre 0,1 e 100, entre 2 mg e 50 mg, 5 mg e 30 mg, entre 10 mg e 25 mg por ml do solvente.

Numa forma de concretização o diluente é um fluido para injecção ou perfusão. Constituem exemplos de fluido para injecção ou perfusão incluem, sem constituir limitação AIB (Água para Injecção Bacteriostática), AEI (Água Estéril para Injecção), D5A (Dextrose 5% em Água), D10A (Dextrose 10% em Água), D5LR(Dextrose em Solução de Lactato de Ringer D51/2s (Dextrose 5% em Soro Fisiológico a 1/4 (5% Dextrose e 0,22 % injecção de cloreto de sódio )), D51/2S (Dextrose 31 5% em Soro Fisiológico 1/2 (5% Dextrose e 0,45% injecção cloreto de sódio)), D5NS (Dextrose 5% em Soro Fisiológico normal (5% Dextrose e 0,9% injecção de cloreto de sódio)). D5R (Dextrose 5% em injecção de Ringer), D10NS (Dextrose 10% em Soro Fisiológico normal (10% Dextrose e 0,9% injecção de cloreto de sódio)). IS10W (açúcar invertido 10% em soro fisiológico (10% açúcar invertido em 0,9% injecção de cloreto de sódio)), I.R (injecção de lactato de Ringer), Pr (injecção de hidrolisado proteico), R (injecção de Ringer). Cloreto de sódio NS Sodium Chloride 0.9% (Normal Saline - soro fisiológico normal), SOD CL 5 (cloreto de sódio 5% (5% injecção de cloreto de sódio) e Sod Lac (Lactato de sódio, 1/6 Molar(M/6 injecção de lactato de sódio)).

Noutra forma de realização, o conjunto compreende decitabina sob forma sólida, de preferência em pó e um diluente aquoso que compreende e o composto de ciclodextrina dissolvido num solvente aquoso que pode incluir água, tampão, excipiente ou combinações destes. A mistura dos compostos sólidos e do diluente tem preferencialmente como resultado a formação de uma formulação farmacêutica de acordo com a presente invenção. Por exemplo, o conjunto pode compreender um primeiro recipiente contendo a decitabina sob forma sólida e um recipiente contendo um diluente líquido, em que a adição do diluente aos compostos sólidos resulta na formação da formulação farmacêutica. A mistura dos compostos sólidos e do diluente pode opcionalmente formar uma formulação farmacêutica que contém entre 0,1 e 200 mg do análogo/derivado de decitabina por ml de diluente, 32 opcionalmente entre 0,1 e 100, entre 2 mg e 50 mg, 5 mg e 30 mg, entre 10 mg e 25 mg por ml do solvente. O conjunto pode ainda incluir uma ou mais seringas e/ou agulhas de seringa para injecção da formulação farmacêutica no doente. Para a formulação em líguido viscoso, são preferidas agulhas de seringa com elevada capacidade de passagem de fluidos, tal como agulhas para seringa DEPOTONE (Imprint Pharmaceuticals Ltd., RU). O conjunto pode opcionalmente incluir ainda instruções. As instruções podem descrever a forma como o(s) composto(s) sólido(s) e o diluente devem ser misturados para formar uma formulação farmacêutica. As instruções podem também descrever como administrar a formulação farmacêutica resultante a um doente. Atenção, as instruções podem opcionalmente descrever os métodos de administração de acordo com a presente invenção. O diluente e a decitabina podem encontrar-se em recipientes separados. Os recipientes podem assumir diferentes tamanhos. Por exemplo, o recipiente pode conter entre 1 e 50, 1 e 25, 1 e 20 ou 1 e 10 ml do diluente.

As formulações farmacêuticas apresentadas em recipientes ou conjuntos podem encontrar-se numa forma que seja adequada para administração directa ou podem encontrar-se sob forma concentrada que implica diluição relativamente ao que é administrado ao doente. Por exemplo, as formulações farmacêuticas descritas na presente invenção podem encontrar-se sob uma forma que é adequada para administração directa por perfusão.

Os métodos e conjuntos descritos proporcionam flexibilidade sempre que a estabilidade e o efeito 33 terapêutico das formulações farmacêuticas compreendendo o composto da presente invenção podem ser intensificados ou complementados ainda mais. 4. Métodos de Administração A decitabina formulada com o composto de ciclodextrina é adequada para administração por qualquer via, de preferência sob a forma de uma composição farmacêutica adaptada a essa via, como ilustrado seguidamente, e dependem da condição em tratamento. Os compostos ou formulações são adequados, por exemplo, para administração por via oral, parentérica, tópica, intraperitonial, intravenosa, intra-arterial, transdérmica, sublingual, intramuscular, rectal, transbucal, intranasal, lipossomal, por inalação, por via vaginal, intraocular, por administração local (por exemplo por cateter ou stent), subcutânea, intra-adiposa, intra-articular ou intratecal. 0 composto e/ou composições de acordo com a invenção são ainda adequados para administração ou co-administração em formas de dosagem de libertação lenta. A decitabina formulada com um composto de ciclodextrina pode ser destinada à administração ou co-administração em qualquer forma de dosagem convencional. A co-administração no teor da presente invenção é definida com sendo a administração de mais do que um agente terapêutico durante um tratamento coordenado para atingir um resultado clínico melhorado. Esta co-administração pode ainda ser co-extensiva, isto é ocorrendo por períodos de tempo sobrepostos. A decitabina pode ser administrada a um hospedeiro, tal como um doente a uma dose de 0, 1-1.000 mg/m2, opcionalmente 34 1-200 mg/m2, opcionalmente 1-150 mg/m2, opcionalmente 1-130 mg/m2, opcionalmente 1-75 mg/m2, opcionalmente 1-50 mg/m2. Opcionalmente l-40mg/m2, opcionalmente 1-30 mg/m2, opcionalmente 1-20 mg/m2 ou opcionalmente 5-30 mg/m2.

Por exemplo, a decitabina e o composto de ciclodextrina podem ser fornecidos sob a forma de um pó liofilizado, estéril, opcionalmente em conjunto com sal para tamponamento, tal como di-hidrogenofosfato de potássio e um modificador do pH, tal como hidróxido de sódio. Esta formulação é preferencialmente guardada entre 2 e 25° C, esta temperatura deve manter o fármaco estável durante pelo menos 3 anos. Esta formulação em pó pode ser reconstituída com 10 ml de água estéril para injecção. Esta solução pode ainda ser diluída com fluido de perfusão conhecido na técnica, tal como injecção de cloreto de sódio 0,9%, injecção de dextrose 5% e injecção de lactato de Ringer, de preferência empregando um conector Y. É preferível que as soluções reconstituídas e diluídas sejam utilizadas no espaço de 10-11 horas para administração no máximo da potência.

Numa forma de realização preferida, a decitabina formulada com um composto de ciclodextrina é adequada para administração a um doente por meio de injecção, tal como injecção subcutânea, injecção i.v. de bolus, perfusão i.v. continua e perfusão i.v. durante 1 hora. Opcionalmente, o composto/composição da presente invenção destina-se a administração a um doente através de perfusão i.v. de 1 a 21 horas por dia durante 3 a 5 dias por ciclo de tratamento, a uma dose entre 0,1 e 1.000 mg/m2 por dia, opcionalmente a uma dose entre 1 e 200 mg/m2 por dia, opcionalmente a uma dose de 1 a 150 mg/m2 por dia, 35 opcionalmente a uma dose de 1 a 100 mg/m2 por dia, opcionalmente a uma dose de 2-50 mg/m2 por dia, opcionalmente a uma dose de 10- -30 mg/m2 por dia, ou opcionalmente a uma dose de 5-20 mg/m2 por dia.

Para decitabina, a dose abaixo de 50 mg/m2 é considerada como sendo muito inferior à utilizada na quimioterapia convencional. Recorrendo a uma dose tão baixa do análogo/derivado de decitabina pode ser activada a actividade transcricional dos genes silenciados nas células cancerosas devido a metilação aberrante, desencadeando uma transdução do sinal a jusante, conduzindo a uma paragem do crescimento celular, diferenciação e apoptose, o que eventualmente tem como resultado a morte destas células cancerosas. Esta baixa dosagem, contudo, deve ter um efeito citotóxico sistémico menor em células normais e, assim, terá menos efeitos secundários no doente em tratamento. A decitabina formulada com um composto de ciclodextrina pode ser co-administrada de qualquer forma convencional com um ou mais membro seleccionados do grupo que inclui fluidos de perfusão, compostos terapêuticos, fluidos nutritivos, fluidos antimicrobianos, agentes de tamponamento e estabilizantes.

Como anteriormente descrito, a decitabina pode ser formulada com um composto de ciclodextrina em forma liquida por meio de solvatação do fármaco e do composto de ciclodextrina num solvente aquoso. As formulações liquidas farmacêuticas proporcionam a vantagem adicional de serem directamente administráveis, isto é, sem diluição adicional, podendo assim ser armazenadas em forma estável até à administração. Além disso, porque a formulação pode 36 ser facilmente misturada com água ou fluido de perfusão/injecção, as formulações podem ser facilmente e rapidamente diluidas imediatamente antes da administração. Por exemplo, as formulações farmacêuticas podem ser diluidas com água ou fluido de perfusão/in jecção 180, 60, 40, 30, 20, 10, 5, 2, 1 minutos ou menos antes da administração a um doente.

Os doentes podem receber as formulações farmacêuticas parentericamente. A via de administração preferida é a perfusão ou injecção intravenosa ou a injecção subcutânea. Opcionalmente, as formulações farmacêuticas da presente invenção podem ser perfundidas directamente sem diluição prévia.

Numa forma de realização, a formulação farmacêutica que contém a decitabina e o composto de ciclodextrina é perfundida através de um conector, tal como um conector em Y que possui três braços, cada um ligado a um tubo. A titulo de exemplo podem ser utilizados conectores Y Baxter®. Um recipiente com a formulação farmacêutica é ligado a um tubo, ligado por se lado a um braço do conector. Os fluidos de perfusão, tal como cloreto de sódio 0,9% ou dextrose 5% ou glucose 5% ou Lactato de Ringer são perfundidos através de um tubo ligado ao outro braço do conector em Y. Os fluidos de perfusão e as formulações farmacêuticas são misturados dentro do conector Y. A mistura resultante é perfundida no doente através de um tubo ligado a um terceiro braço no conector Y. A vantagem desta abordagem de administração relativamente à técnica anterior reside na mistura do análogo/derivado de citidina com fluidos de perfusão antes entrar no corpo do doente, reduzindo assim o tempo de decomposição do análogo/derivado 37 de citidina devido ao contacto com água. Por exemplo, o análogo/derivado de citidina é misturado menos de 10, 5, 2 ou 1 minutos antes de entrar no corpo do doente.

Os doentes podem receber por perfusão as formulações farmacêuticas durante 1, 2, 3, 4, 5 ou mais horas em resultado da maior estabilidade das formulações. Períodos prolongados de perfusão permitem programas flexíveis de administração das formulações terapêuticas.

Em alternativa ou adicionalmente, a velocidade e o volume da perfusão podem ser regulados de acordo com as necessidades do doente. A regulação da perfusão das formulações farmacêuticas pode ser efectuada de acordo com os protocolos existentes.

As formulações farmacêuticas podem ser perfundidas concomitantemente de qualquer forma convencional com um ou mais membros seleccionados do grupo que inclui fluidos de perfusão, compostos terapêuticos, fluidos nutritivos, fluidos antimicrobianos, agentes de tamponamento e estabilizantes. Opcionalmente os componentes terapêuticos incluindo mas sem constituir limitação agentes anti-neoplásicos, agentes alquilantes que são membros da superfamília dos retinóides, agentes hormonais, agentes derivados de plantas, agentes biológicos, interleuquinas, interferões, citoquinas, agentes imunomoduladores e anticorpos monoclonais podem ser perfundidos concomitantemente com as formulações da invenção. A perfusão concomitante no contexto da presente invenção é definida com sendo a perfusão de mais do que um agente terapêutico durante um tratamento coordenado para atingir um resultado clínico melhorado. Esta perfusão 38 concomitante pode ser simultânea com sobreposição ou sequencial. Num exemplo em particular, a perfusão das formulações farmacêuticas e fluidos de perfusão pode ser realizada através de um conector tipo Y.

Em seres humanos, a decitabina apresentava uma fase de distribuição com uma semivida de 7 minutos e uma semivida terminal da ordem de 10-35 minutos, conforme medição em bioensaio. O volume de distribuição é cerca de 4,6 L/kg. A curta semivida no plasma deve-se à rápida inactivação da decitabina por desaminação por desaminase hepática da citidina. A eliminação em seres humanos é elevada, da ordem dos 126 mL/min/kg. A área média sob a curva plasmática num total de 5 doentes era 408 pg/h/L com uma concentração plasmática pico de 2,01 μΜ. Em doentes, as concentrações de decitabina eram cerca de 0,4 pg/ml (2 μΜ) quando administradas a 100 mg/m2 como perfusão de 3 horas. Durante um tempo de perfusão mais prolongado (até 40 horas), a concentração no plasma era cerca de 0,1 a 0,4 pg/mL. Com tempos de perfusão de 40-60 horas, a uma taxa de perfusão de 1 mg/kg/h atingiram-se concentrações no plasma de 0,43-0,76 pg/mL. A concentração plasmática em estado de equilíbrio a uma taxa de perfusão de 1 mg/kg/h é estimada como sendo 0,2-0,5 pg/mL. A semivida na sequência da descontinuação da perfusão é de 12-20 min. A concentração em estado de equilíbrio da decitabina fio estimada em 0,31-0,39 pg/mL durante uma perfusão de 6 horas de 100 mg/m2. O intervalo das concentrações durante uma perfusão de 600 mg/m2 foi de 0,4-16 pg/mL. A penetração da decitabina no fluido cerebroespinal no ser humano atinge 14-21% da concentração plasmática ao fim de uma perfusão intravenosa de 36 horas. A excreção urinária de decitabina inalterada é 39 baixa, entre menos de 0,01 % a 0,9% da dose total, e não há relação entre a excreção e dose ou níveis plasmáticos do fármaco. Valores de eliminação elevados e uma excreção urinária total inferior a 1 % da dose administrada sugerem que a decitabina é eliminada rapidamente e em grande parte por processos metabólicos.

Devido à sua maior estabilidade em comparação com as actuais formulações clínicas da decitabina, a formulação da invenção contendo um composto de ciclodextrina pode beneficiar de um prazo de validade mais longo quando armazenado e contornar os problemas associados ao uso clínico da decitabina ou azactidina Por exemplo, a decitabina pode ser apresentada como um pó liofilizado com um composto de ciclodextrina, opcionalmente com ácido (por exemplo ácido ascórbico), composto alcalino (hidróxido de sódio) ou sal tampão (di-hidrogenofosfato de potássio monobásico). O pó liofilizado pode ser reconstituído com água estéril para injecção, por exemplo i.v., i.p., im ou subcutaneamente. Opcionalmente, o pó pode ser reconstituído com solvente aquoso compreendendo um solvente miscível em água, tal como glicerina, propilenoglicol, etanol e PEG. A solução resultante pode ser administrada directamente ao doente ou mais diluída com fluido de perfusão, tal como cloreto de sódio 0,9%, dextrose 5%, glucose 5% e fluido de perfusão lactato de Ringer.

As formulações da invenção podem ser armazenadas em condições ambientais ou num ambiente controlado a 2-25° C (32-77° F) . Além disso, devido à complexa formação e maior estabilidade química, as formulações da invenção podem ser mais resistentes à desaminação enzimática e degradação hidrolítica e devem possuir uma semivida plasmática mais 40 longa comparativamente com a actual formulação clínica da decitabina.

Além disso, devido à sua maior estabilidade química, as formulações da invenção devem ter uma semivida plasmática mais longa comparativamente com a actual formulação clínica da decitabina. Assim, a decitabina pode ser administrada ao doente a uma dose inferior com menor freguência do que no caso da decitabina. 5. Indicações Para as Formulações Farmacêuticas e Terapia Combinada

As formulações da invenção descritas possuem muitas aplicações terapêuticas e profiláticas. Numa forma de realização preferida, a decitabina formulada com um composto de ciclodextrina destina-se a utilização no tratamento de uma grande variedade de doenças sensíveis ao tratamento com um análogo/derivado da citidina, tal como decitabina ou azacitidina. As indicações preferidas que podem ser tratadas utilizando as formulações da invenção, incluindo as que envolvem proliferação celular indesejada ou descontrolada. Estas indicações incluem tumores benignos, vários tipos de cancros, tais como tumores primários e metástases de tumores, restenoses (por exemplo, lesões coronárias, da carótida e encefálicas), perturbações hematológicas, estimulação anómala das células endoteliais (aterosclerose), agressões de tecidos do corpo devido a cirurgia, cicatrização anómala de feridas, angiogénese anómala, doenças que produzem fibrose de tecidos, perturbações derivadas de movimentos repetitivos, perturbações de tecidos que não são muito vascularizados e 41 respostas proliferativas associadas a transplantes de órgãos.

Geralmente as células num tumor benigno retêm as suas características diferenciadas e não se dividem de uma forma completamente descontrolada. Um tumor benigno é normalmente localizado e não metástático. Tipos específicos de tumores benignos que podem ser tratados utilizando a presente invenção incluem hemamgiomas, adenoma hepatocelular, hemangioma cavernoso, hiperplasia nodular focal, neuromas acústicos, neurofibroma, adenoma do dueto biliar, cistanoma do dueto biliar, fibroma, lipomas, leiomiomas, mesoteliomas, teratomas, mixomas, hiperplasia regenerativa nodular, tracoms e granulomas piogénicos.

Num tumor maligno as células de tumor tornam-se indiferenciadas, não respondem aos sinais de controlo do crescimento do corpo e multiplicam-se de forma descontrolada. 0 tumor maligno é invasivo e capaz de se disseminar por locais distantes (formação de metástases) . Os tumores malignos são geralmente divididos em duas categorias: primários e secundários. Os tumores primários têm origem directamente no tecido onde foram encontrados. Um tumor secundário, ou metástase, é um tumor que teve origem noutro local do corpo mas que se disseminou para um órgão distante. As vias comuns de metástase consistem em crescimento directo nas estruturas adjacentes, disseminação através dos sistemas vascular ou linfático e através de planos tecidulares e espaços corporais (fluido peritoneal, fluido cerebrospinal, etc.)

Tipos específicos de cancros de tumores malignos, seja primários ou secundários, que podem ser tratados utilizando 42 a presente invenção incluem cancro da mama, cancro cutâneo, cancro ósseo, cancro da próstata, cancro hepático, cancro pulmonar, cancro cerebral, cancro da laringe, da vesícula biliar, pancreático, do reto, paratiróide, tiróide, adrenal, tecido neurológico, cabeça e pescoço, cólon, estômago, brônquios, rins, carcinoma das células basais, carcinoma das células escamosas do tipo ulcerante como papilar, carcinoma cutâneo metastático, osteossarcoma, sarcoma de Ewing, sarcoma das células veticulo, mieloma, tumor das células gigantes, tumor pulmonar das células pequenas, pedras biliares, tumor das ilhotas, tumor cerebral primário, tumores linfocíticos e granulocíticos agudos e crónicos, tumor das células pilosas, adenoma, hiperplasia, carcinoma medular, feocromocitoma, neuromas mucosais, ganglionomas, tumor hiperplásico do nervo corneano, tumor habitus marfanóide, tumor de Wilm, seminoma, tumor do ovário, tumor leiomiomater, displasia cervical e carcinoma in situ, neuroblastoma, retinoblastoma, sarcoma do tecido mole, carcinoide maligno, lesão tópica cutânea, micose fungóide, rabdomiossarcoma, sarcoma de Kaposi, sarcoma osteogénico e outros sarcomas, hipercalcemia maligna, tumor das células renais, policitemia vera, adenocarcinoma, glioblastoma multiforma, leucemia, linfomas, melanomas malignos, carcinomas epidermóides e outros carcinomas e sarcomas.

As perturbações hematológicas incluem crescimento anómalo de células sanguíneas, o que pode conduzir a alterações displásicas das células sanguíneas e malignidades hematológicas, tais como leucemias várias. Exemplos de perturbações hematológicas incluem, sem constituir limitação leucemia mielóide aguda, leucemia 43 promielocítica aguda, leucemia linfoblástica aguda, leucemia mielogena crónica, as sindromes mielodisplásicos e anemia falsiforme.

Nalgumas formas de realização, as formulações da invenção destinam-se à utilização no tratamento de perturbações do sangue, incluindo perturbações do sangue hereditárias e/ou perturbações que envolvem deficiência em hemoglobina, por exemplo, anemia falsiforme. Nalgumas realizações, as formulações da invenção podem ser utilizadas no tratamento de cancros, incluindo leucemia, pré-leucemia e outros cancros relacionados com a medula óssea, por exemplo sindrome mielodisplásico (MDS), bem como cancro do pulmão, por exemplo cancro do pulmão das células não-pequenas (NSCL), o NSCL pode incluir o carcinoma epidermóide ou escamoso, adenocarcinoma e carcinoma das células grandes, o MDS pode incluir anemia refractária, anemia refractária com sideroblastos anelares anemia refractária com excesso de blastos, anemia refractária com excesso de blastos em transformação e leucemia mielomonocitica crónica. A presente invenção apresenta composições farmacêuticas e conjuntos para utilização no tratamento de sujeitos animais. 0 termo "sujeitos animais" tal como presentemente utilizado inclui seres humanos bem como outros mamíferos. 0 termo "tratamento" tal como presentemente utilizado inclui a obtenção de um benefício terapêutico e/ou benefício profiláctico. Benefício terapêutico designa a erradicação ou melhoria da doença subjacente em tratamento. Por exemplo, num doente com anemia falsiforme, o benefício terapêutico inclui a erradicação ou melhoria da anemia falsiforme subjacente. Igualmente, consegue-se um benefício 44 terapêutico com a erradicação ou melhoria de um ou mais dos sintomas fisiológicos associados à doença subjacente, de forma a ser observada uma melhoria no doente muito embora o doente possa ainda sofrer da doença subjacente. Por exemplo, as formulações da invenção apresentam benefícios terapêuticos não só quando a anemia falsiforme é erradicada, mas também quando se observa uma melhoria do doente relativamente a outras doenças ou desconfortos que acompanham a anemia falsiforme, como síndrome mão-pé, fadiga e/ou gravidade ou duração da dor sentida durante uma crise (episódios dolorosos). De modo idêntico, as formulações da invenção podem proporcionar uma vantagem terapêutica na melhoria dos sintomas associados a cancros, por exemplo, MDS ou NSCr, incluindo anemia, formação de hematomas, infecções persistentes, o tamanho de um tumor pulmonar e semelhantes.

Quanto aos benefícios profilácticos, as formulações da invenção podem ser administradas a um doente em risco de desenvolver um cancro ou doença do sangue ou a um doente com um ou mais sintomas fisiológicos de uma condição dessas, mesmo na ausência de um diagnóstico da condição.

Se necessário ou desejável, a formulação da invenção pode destinar-se à administração em combinação com outros agentes terapêuticos. A opção dos agentes terapêuticos que podem ser co—administrados com os compostos e composições da invenção depende, em parte, da condição em tratamento.

Exemplos de agente terapêutico diferente da decitabina incluem, sem constituir limitação, os agentes alquilantes, agentes antibióticos, agentes antimetabólicos, agentes 45 hormonais, agentes derivados de plantas e agentes biológicos.

Constituem exemplos de agentes alquilantes, sem constituir limitação, biscloroetilaminas (mostardas de azoto, por exemplo clorambucil, ciclofosfamida, ifosfamida, mecloretamina, melfalan, mostardas de uracilo), aziridinas (por exemplo tiotepa), sulfonatos de alquil alcone (por exemplo busafan), nitrosoureias (e.g. canustina, lomustina, streptozocina), agentes alquilantes não-clássicos (altretamina, dacarbazina e procarbazina), compostos de platina (carboplastina e cisplatina).

Exemplos de agentes antibióticos incluem, sem constituir limitação antraciclinas (por exemplo doxorubicina, daunorrubicina, epirrubicina idarubicina e antracenediona), mitomicina C, bleomicina, dactinomicina, plicatomicina.

Exemplos de agentes antimetabólicos incluem, sem constituir limitação fluorouracil (5-FU), floxuridina (5-FUdR), metotrexato, leucovorina, hidroxiureia, tioguanina (6-TG), mercaptopurina (6-MP) citarabina, pentostatina, fosfato de fludarabina , cladribina (2-CDA), asparaginase, mesilato de imatinib (ou GLEEVAC®) e gemcitabina.

Constituem exemplos destes agentes hormonais estrogénios sintéticos (por exemplo, dietilstibestrol), antiestrogénios (por exemplo, tamoxifen, toremifene, fluoximesterol e raloxifene), antiandrogénios (bicalutamide, milutamide, flutamide), inibidores da aromatase (por exemplo, aminoglutetimida, anastrozol e tetrazol), cetoconazol, acetato de goserelin, leuprolide, acetato de megestrol e mifepristona. 46

Exemplos de agentes derivados de plantas incluem, sem constituir limitação camptotecinas (20(S)-camptotecina, 9-nitro- 20(S)-camptotecina, 9 amino-20(S)-camptotecina, irotecan, CPT-11), vinca alcaloids (por exemplo, vincristina, vinblastina, vindesina, vinzolidina e vinorelbina), podofilotoxinas (por exemplo, etoposide (VP-16) e teniposide (VM-26)), e taxanes (e.g., paclitaxel e docetaxel).

Exemplos de agentes biológicos incluem, sem constituir limitação proteínas imunomoduladoras tais como citoguinas, anticorpos monoclonais contra antigénios de tumor, genes supressores do tumor e vacinas contra o cancro. Exemplos de interleuquinas que podem ser utilizadas em conjunto com CPT incluem, sem constituir limitação, interleuquina 2 (IL-2), e interleuquina 4 (IL-4), interleuquina 12 (IL-12). Exemplos de interferões que podem ser utilizados em conjunto com CPT incluem, sem constituir limitação, interferão a, interferão b (interferão fibroblasto) e interferão g (interferão fibroblasto)- exemplos destas citoquinas incluem, sem constituir limitação, eritropoietina (epoietin a), granulócito CSF (filgrastina) e granulócito, macrófago CSF (sargramostim)- Outros agentes imunomoduladores que não sejam citoquinas incluem, sem constituir limitação bacilus Calmette-Guerin, lovamisole e octreótidos.

Exemplos de anticorpos monoclonais contra antigénios de tumor que podem ser utilizados em conjunto com CPT incluem, sem constituir limitação herceptin® (Trastuzumab), RITUXAN® (Rituximab), MYLOTARG® (gemtuzumab ozogamicin), CAMPATH® (alemtuzumab), ZEVALIN® (ibritumomab yiuxetan), PANOREX® 47 (edrecolomab), BEXXAR® (tositumomab), ERBITUX® (cetuximab) e AVASTIN® (bevacizumab).

Exemplos de genes supressores de tumores incluem, sem constituir limitação DPC-4, NF-J, NF-2, RB, p53, WTI, BRCAl e BRCA2.

Exemplos de vacinas contra o cancro incluem, sem constituir limitação gangliósidos (GM2), antigénio especifico da próstata (PSA), α-fetoproteina (AFP), antigénio carcinoembriónico (CEA), (produzido por cancros do cólon e outros adenocarcinomas, por exemplo cancros da mama, pulmão, gástrico e pâncreas), antigénios associados ao melanoma (MART-1 gplOO, MAGE 1,3 tirosinase), fragmentos E6 e E7 de papillomavirus, células interiras ou porções/lisados de células de tumor autólogas e células de tumor alogénicas.

Pode ser em gue um adjuvante para aumentar a resposta imunitária ao TAAS. Exemplos de adjuvantes incluem, sem constituir limitação, bacilus Calmette-Guerin (BCG), endotoxina de lipopolissacarideos, hemocianina de megatura (GKLH), interleuquina-2 (IL—2), factor estimulante da colónia granulócitos-macrófagos (GS-CSF) e citoxan, um agente quimioterapêutico que se pensa reduzir a supressão induzida pelo tumor quando administrado em baixas doses. A presente invenção refere-se também a uma formulação farmacêutica de acordo com a invenção destinada ao tratamento de angiogénese indesejada ou descontrolada. Um ou mais agentes anti-angiogénicos podem ser também utilizados em combinação com a formulação da invenção.

Exemplos de anti-angiogénicos incluem, sem constituir limitação ácido retinóico e respectivos derivados proteína 48 2-metoxiestradiol ANGIOSTATIN™, proteína ENDOSTATIN™, suramina, squalamina, inibidor de tecido de metaloproteinase-1, inibidor de tecido de metaloproteinase-2, inibidor-1 activador do plasminogénio, inibidor-2 activador do plasminogénio, inibidor derivado de cartilagem, paclitaxel, factor 4 plaquetário, sulfato de protamina (clupeine), derivados de quitina sulfatados (preparados a partir das cascas de caranguejo-das-neves), complexo peptidoglicano polissacarídeo sulfatado (sp-pg), staurosporina, moduladores do metabolismo da matriz, incluindo, por exemplo, análogos da prolina ((ácido 1-azotidina-2-carboxílico (LACA.), cis-hidroxiprolina, d, 1-3,4-desidroprolina, tiaprolina], a, a-dipiridilo, beta, -aminopropionitrilo fumarato, 4-propil-5-(4-piridinil)- 2(3h)-oxazolona; metotrexato, mitoxantrona, heparina, interferões, soro 2 macroglobulina, chimp-3, quimostatina, tetradecasulfato de beta-ciclo-dextrina, eponemicina; fumagillina, tiomalato sódico de ouro, d-penicillamina (CDPT), soro beta.-1-anticolagenase, alfa-2-antiplasmina, bisantreno, lobenzarit dissódico, ácido n-(2-carboxifenil-4-cloroantronílico dissódico ou "CCA", talidomida; esteróide angostático, carboxinaminolmidazol; inibidores de metaloproteinase tais como BB94. Outros agentes anti-angiogénicos incluem anticorpos, tais como anticorpos monoclonais contra os seguintes factores de crescimento angiogénicos: bFGF, aFGP, FGF-5, isoformas VEGF, VEGF-C, HGF/SF e Ang-l/Ang-2.

EXEMPLOS

Os exemplos seguintes destinam-se a ilustrar pormenores da invenção sem constituir qualquer forma de limitação. 49

Como descrito nos exemplos apresentados seguidamente, o uso de ciclodextrinas como excipientes numa solução aquosa pode aumentar significativamente a solubilidade e/ou estabilidade de um análogo ou derivado de citidina, tal como a decitabina e 5-azacitidina. 1. Solubilidade da Decitabina em Soluções de Ciclodextrina

Foram preparadas soluções aquosas de ciclodextrina a pH 6,7-7,2 mediante dissolução de 4 partes de ciclodextrinas (hidroxipropil α-ciclodextrina (HPACD), hidroxipropil β-ciclodextrina (HPBCD), β-ciclodextrina (BCD), hidroxipropil γ-ciclodextrina (HPBCD), ou CAPTISOL) em 6 partes de tampão de fosfato de potássio (50 mM de KH2P04, pH 7,0), resultando em soluções de 40% p/p de ciclodextrinas. Adicionou-se decitabina sólida (SuperGen, Inc., Dublin, CA) à solução aquosa de ciclodextrina e misturou-se à temperatura ambiente (20-25° C). 0 quadro 1 enumera a solubilidade da decitabina em cada uma das soluções de ciclodextrina em comparação com a do tampão de fosfato de potássio (pH 7,0).

Como se mostra no quadro 1, as β-ciclodextrinas, tais como HOBCD e Captisol são mais eficazes no aumento da solubilidade da decitabina em soluções aquosas do que a a-ciclodextrina, β-ciclodextrina ou γ-ciclodextrina (tal como HPACD e HPGCD). O aumento da solubilidade poderia traduzir-se em menor volume necessário por dose clinica e tornaria a administração subcutânea do fármaco decitabina mais prático. 50

Quadro 1 KPi (pH 40% 40% 40% 40% 7,0) HPBCD Captisol HPGCD HPACD (p/p, pH (p/p, pH (p/p, pH (p/p, pH 7,2) 6,7) 7,0) 7,0) Solubilidade (mg/mL) 18 44 42 22 18 2. Estabilidade da Decitabina em Soluções de Ciclodextrina

Foi determinada a estabilidade química da decitabina nas soluções de ciclodextrina e no tampão de fosfato tal como preparado anteriormente. A concentração inicial de decitabina para todas as soluções foi 17-18 mg/Ml no início da experiência a 2-8° C, 9-10 mg/mL no início da experiência a 25° C. A potência da decitabina foi analisada pelo método HPLC e expressa em percentagem das áreas de pico totais a 220 nm. A figura 1 e 2 mostra que a utilização das ciclodextrina como excipientes numa solução aquosa pode melhorar dramaticamente a estabilidade da decitabina na solução, tanto entre 2 e 8o C como a 25° C. O efeito estabilizante das ciclodextrinas na decitabina em soluções aquosas é mais evidente quando são empregues β-ciclodextrinas, tal como HPBCD e Captisol, em comparação com a α-ciclodextrina e γ-ciclodextrina (HPACD e HPGCD). Este efeito estabilizante depende também da concentração como se mostra na figura 3. 51

Sem ficar limitado à teoria ou mecanismos de acção, os autores da presente invenção crêem que tanto o aumento da solubilidade como melhoria da estabilidade da decitabina em soluções aquosas contendo ciclodextrina se deve à formação de complexos entre a decitabina e as moléculas de ciclodextrina e por as β-ciclodextrinas formarem um complexo reversível mais estreito com a decitabina do que as oí-ciclodextrina ou γ-ciclodextrinas.

Um estudo de espectroscopia UV da decitabina em soluções aquosas contendo ciclodextrina foi realizado para demonstrar a formação de complexos entre a decitabina e as β-ciclodextrinaa. Cada um dos espectros foi medido a 0,01-0,02 mg/mL de decitabina à temperatura ambiente depois de apagados com a mesma solução desprovida de decitabina. Todos os espectros são normalizados a 69 μΜ de decitabina, assumindo que o coeficiente de extinção de decitabina no ápice entre 243 nm e 246 permanece igual (7000 M“1cm“I) . A figura 4 mostra alterações do espectro UV da decitabina quando as β-ciclodextrinas se encontram presentes (figura 4), sugerindo fortemente a formação de complexos entre a decitabina e as β-ciclodextrinas.

Verifica-se também que a extensão das alterações do espectro UV da decitabina ou decitabina em soluções de ciclodextrina depende da concentração (figura 5) . Cada um dos espectros foi medido a 0,01 mg/mL de decitabina à temperatura ambiente.

Depois de apagada com a mesma solução desprovida de decitabina. Todos os espectros são normalizados a 47 μΜ de decitabina, assumindo que o coeficiente de extinção de decitabina no ápice entre 243 nm e 246 permanece igual 52 (7000 M_1cm_I) . Com base na adsorvância a 262 mn derivada de cada um dos espectros apresentados na figura 5 e a concentração de HPBCD correspondente, a constante de formação de complexos para o complexo de decitabina:HPBCD pode ser calculada com base na seguinte eguação (1), assumindo a estoguiometria do complexo decitabina/HPBCD é 1:1. 1/ΔΑ = 1 /(AAo*Kf* [HPBCD]) + 1/ΔΑο (1)

Neste caso ΔΑ0 é a diferença na absorvância a 262 nm entre a decitabina livre e em complexos e ΔΑ é a diferença da absorvância a 262 nm entre a decitabina HPBCD e a decitabina KPi a [HPBCD] específico (concentração de HPBCD). A figura 6 mostra o gráfico l/AA(l/delta A) em comparação com 1/[HPBCD]. No gráfico, delta A (ΔΑ) é a diferença da absorvância a 262 nm entre a decitabina-HPBCD e a decitabina-KPi em cada concentração HPBCD especifica ([HPBCD]). A linha é um minimo quadrado com a equação (1). A partir da curva de ajuste, o Kr da complexação decitabina-HPBCD é calculada como sendo 23 M_1.

Os efeitos das α-ciclodextrina ou γ-ciclodextrinas tanto na solubilidade como na estabilidade da decitabina são menos dramáticos em comparação com as β-ciclodextrina, tal como HPBCD e CAPTISOL, provavelmente devido à formação de complexos menos estáveis entre as α-ciclodextrinas ou y-ciclodextrinas e moléculas de decitabina. Pensa-se que a interacção entre a decitabina e a ciclodextrina seja não-covalente e reversível. Em condições de dosagem de um fármaco clínico normais para a decitabina e com base no Kf (23 M1) calculado para decitabina-HPBCD, espera-se que a maior parte da decitabina deve dissociar-se do seu complexo 53 com HPBCD assim que perfundido no doente e não deve haver formação de uma nova entidade farmacológica.

Os resultados anteriores demonstram que a utilização de ciclodextrinas como excipientes em solução aquosa pode aumentar a solubilidade da decitabina na solução para mais do dobro e ainda aumentar dramaticamente a estabilidade da decitabina em solução. Podem ser aplicadas ciclodextrina como excipientes para fármacos de decitabina durante a produção do produto farmacológico ou utilizadas na solução de injecção para solubilizar o pó de decitabina liofilizado imediatamente antes da administração. A administração da formulação de decitabina com ciclodextrina como excipientes a um doente pode ser efectuada através de todos os métodos de administração de medicamentos, conjuntos, cassetes e recipientes. A grande melhoria da solubilidade e estabilidade da decitabina em soluções aquosas que contêm ciclodextrina iria minimizar ou eliminar uma série de graves inconvenientes tanto a nível da produção como da aplicação clínica do actual produto farmacológico da decitabina. 3. Exemplo Comparativo: Solubilidade da em Soluções de Ciclodextrina

Foram preparadas soluções aquosas de ciclodextrina a pH 6,7-7,2 mediante dissolução de 4 partes de ciclodextrinas (hidroxipropil α-ciclodextrina (HPACD), hidroxipropil) β-ciclodextrina (HPBCD), hidroxipropil γ-ciclodextrina (HPBCD), ou CAPTISOL) em 6 partes de tampão de fosfato de potássio (50 mM de KH2P04, pH 7,0), resultando em soluções de 40% p/p de ciclodextrinas. Adicionou-se 5-azacilidina sólida (Sigma-Aldrich) à solução aquosa de ciclodextrina e 54 misturou-se à temperatura ambiente (20-25° C). O quadro 2 enumera a solubilidade da 5-azacitidina em cada uma das soluções de ciclodextrina em comparação com a do tampão de fosfato de potássio (pH 7,0).

Como se mostra no quadro 2, a utilização das ciclodextrinas como excipientes numa solução aquosa pode aumentar a solubilidade da 5-azacitidina na solução de β-ciclodextrinas, tais como HPBCD e Captisol são mais eficazes no aumento da solubilidade da 5-azacitidina em soluções aquosas do que a α-ciclodextrina, ou γ-ciclodextrina (tal como HPBCD e HPGCD) . O aumento da solubilidade poderia traduzir-se em menor volume necessário por dosagem clínica.

Quadro 2 KPi (pH 7,0) 40% HPBCD (p/p, pH 7,2) 40% Captisole (p/p. pH 6,7) 40% HPGCD (p/p, pH 7,0) 40% HPACD (p/p, pH 7,0) Solubilida de (mg/mL) 19 26 26 22 20

Será evidente para um perito na técnica que podem ser introduzidas muitas alterações e modificações na presente invenção sem romper com o espírito ou âmbito das reivindicações anexas e estas alterações e modificações encontram-se contempladas no âmbito da presente invenção. 55

REFERÊNCIAS CITADAS NA DESCRIÇÃO

Esta lista das referências citadas pelo requerente serve apenas para conveniência do leitor. Esta lista não faz parte do documento da patente europeia. Apesar da compilação cuidadosa das referências, os erros ou as omissões não podem ser excluídos e o IEP rejeita toda a responsabilidade a este respeito.

Documentos de patente citados na descrição: • US 4727064 A, Pitha

Literatura, não relacionada com patentes, citada na descrição: • Pompon et al. J. Chromat, 1987, vol. 388, 113-122 • Kissinger; Stenm. J. Chromat., 1986, vol. 353, 309-318 • Groeningen CJ et al. Câncer Res., 1986, vol. 46, 4831-4836 • Chabot GG ; Momparler RL. Proceedings of the

Workshop on 5-aza-2'-deoxycytidine. PCH Publication, 1990, 105-115 • Momparler et al. MOL. PHARMACOL., 1985, vol. 30, 287-299 • Bouchard ; Mompaler. Mol. Pharmacol., 1983, vol. 24, 109-114 • Juttermann et al. Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 1994, vol. 91, 11797-11801 56 56 vol. • Santini et al. Ann. Int. Med., 2001, 134,573-588

Claims (54)

1 REIVINDICAÇÕES 1. Composição farmacêutica que inclui: decitabina e um composto de ciclodextrina solvatados em solvente aquoso compreendendo, pelo menos, 60% v/v de água.

2. composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por a decitabina se encontrar sob a forma de um sal farmaceuticamente aceitável.

3. Composição de acordo com a reivindicação 2, caracterizado por o sal farmaceuticamente aceitável ser seleccionado do grupo constituído por ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido iodídrico, ácido nítrico, ácido carbónico, ácido sulfúrico, e ácido fosfórico.

4. Composições farmacêuticas de acordo com a reivindicação 2, caracterizadas por o sal farmaceuticamente aceitável ser seleccionado do grupo constituído por ácidos alifáticos, cicloalifáticos, aromáticos, arilalifáticos, heterocíclicos, carboxílico, fórmico, acético, propiónico, succínico, glicólico, glucónico, maleico, embónico, metanossulfónico, etanossulfónico, 2-hidroxietanossulfónico, pantoténico, benzenossulfónico, toluenossulfónico, sulfanílico, mesílico, ciclo-hexilaminossulfónico, esteárico, algénico, β-hidroxibutírico, malónico, galáctico e galacturónico, L-láctico, acético, (+)-L-tartárico, cítrico, butírico, hexanóico, L-aspártico, L-glutâmico, succínico, EDTA, maleico, metanossulfónico, HBr, HF, Hl, nítrico, nitroso, sulfúrico, sulfuroso, fosforoso, perclórico, clórico, cloroso, carboxílico, sulfónico, 2 ascórbico, carbónico, fumárico, etanossulfónico, 2-hidroxietanossulfónicoe toluenossulfónico.

5. Composição farmacêutica de acordo com reivindicação 1, em que o composto de ciclodextrina é amorfo ou cristalino.

6. Composição farmacêutica de acordo com reivindicação 1, em que o composto de ciclodextrina é a-ciclodextrina, β-ciclodextrina ou γ-ciclodextrina amorfa.

7. Composição farmacêutica de acordo com reivindicação 1, caracterizada por o composto de ciclodextrina ser um composto de ciclodextrina alquilado ou hidroxialquilo.

8. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por o composto de ciclodextrina ser seleccionado do qrupo constituído por os derivados de hidroxipropilo, hidroxietilo, glucosilo, maltosilo e maltotriosilo da β-ciclodextrina, carboxiamidometil-β-ciclodextrina, carboximetil^-ciclodextrina, hidroxipropil^-ciclodextrina e dietilamino-β- ciclodextrina.

9. Composição farmacêutica de acordo com reivindicação 1, caracterizada por o composto de ciclodextrina ser um derivado de éter sulfoalquílico ciclodextrina.

10. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por o composto de ciclodextrina ser seleccionado do grupo constituído por sal sódico do éter sulfoalquílico de β-ciclodextrina monossubstituída, tetrassubstituída ou heptassubstituída.

11. Composição farmacêutica de acordo com reivindicação 1, caracterizada por o composto de ciclodextrina ser sal 7 3 sódico do éter sulfobutílico de β-ciclodextrina ou CAPTISOL.

12. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por a quantidade de decitabina na composição farmacêutica se situar entre 0,1 e 200 mg por ml de solvente.

13. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por a quantidade de decitabina na composição farmacêutica se situar entre 2 e 50 mg por ml de solvente.

14. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por a proporção do peso da decitabina para o peso do composto de ciclodextrina poder oscilar entre 1:1 e 1:5000.

15. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por a proporção do peso da decitabina para o peso do composto de ciclodextrina poder oscilar entre 1:1 e 1:200.

16. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por a proporção do peso da decitabina para o peso do composto de ciclodextrina poder oscilar entre 1:5 e 1:50.

17. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 1, em que o solvente aquoso inclui, pelo menos, 90% de água.

18. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 1, em que o solvente aquoso inclui, pelo menos, 98% de água.

19. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por o solvente aquoso incluir ainda 4 propilenoglicol, glicerina, polietilenoglicol ou uma combinação destes.

20. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 1, incluindo ainda: um agente acidificante adicionado à composição numa proporção tal que a composição possui um pH resultante entre 4 e 8.

21. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 20, em que o agente acidificante é um ácido orgânico.

22. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 21, caracterizada por o ácido orgânico ser seleccionado do grupo constituído por ácido ascórbico, ácido citrico, ácido tartárico, ácido láctico, ácido oxálico, ácido fórmico, ácido benzenossulfónico, ácido benzóico, ácido maleico, ácido glutâmico, ácido succinico, ácido aspártico, ácido diatrizóico e ácido acético.

23. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 20, em que o agente é um ácido inorgânico.

24. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 23, caracterizada por o ácido inorgânico ser seleccionado do grupo constituído por ácido clorídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico e ácido nítrico.

25. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 20, caracterizada por o agente acidificante ser ácido ascórbico a uma concentração de 0,01 a 0,2 mg/ml do solvente.

26. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 1, compreendendo ainda um excipiente seleccionado do grupo constituído por sorbitol, lactose e dextrose.

27. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por a composição ser, pelo menos, 80%, 5 estável em armazém entre 2 e 8o C durante 5, 10, 15, 24 horas ou 2, 4, 7, 14, 21, 28 ou mais dias.

28. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por a composição farmacêutica ser, pelo menos, 95%, estável em armazém entre 2 e 8o C durante 5, 10, 15, 24 horas ou 2, 4, 7, 14, 21, 28 ou mais dias.

29. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por a composição ser, pelo menos, 80%, estável em armazém entre 20 e 25° C durante 5, 10, 15, 24 horas ou 2, 5, 14, 21, 28 ou mais dias.

30. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por a composição ser, pelo menos, 95%, estável em armazém entre 20 e 25° C durante 5, 10, 15, 24 horas ou 2, 5, 7, 14, 21, 28 ou mais dias.

31. Processo para a preparação de uma composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 1, compreendendo o referido processo: dissolução de decitabina e um composto de ciclodextrina num solvente aquoso compreendendo, pelo menos, 60% v/v de água.

32. Processo de acordo com a reivindicação 31, caracterizado por o solvente aquoso conter ainda um sal tampão.

33. Processo de acordo com a reivindicação 32, caracterizado por o sal tampão ser fosfato de potássio.

34. Processo de acordo com a reivindicação 31, compreendendo ainda: adição de um agente acidificante à solução que contém decitabina e o solvente de forma que o pH da solução resultante se situe entre pH 4 e pH 8. 6

35. Processo de acordo com a reivindicação 31, compreendendo ainda: adição de um agente acidificante à solução que contém decitabina e o solvente de forma que o pH da solução resultante se situe entre pH 5,5 e pH 6,8.

36. Recipiente esterilizado contendo a composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 1.

37. Recipiente de acordo com a reivindicação 36, caracterizado por o recipiente ser um frasco, uma seringa ou uma ampola.

38. Recipiente de acordo com a reivindicação 36, caracterizado por o recipiente conter entre 1 e 50 ml da composição farmacêutica.

39. Conjunto que inclui decitabina sob forma sólida e um diluente aquoso que compreende um composto de ciclodextrina e, pelo menos, 60% v/v de água.

40. Conjunto de acordo com a reivindicação 39, caracterizado por a decitabina se encontrar num primeiro recipiente no conjunto e o diluente aquoso se encontrar num segundo recipiente no conjunto.

41. Conjunto que inclui: um primeiro recipiente que contém um composto de ciclodextrina e um segundo recipiente com diluente aquoso contendo, pelo menos, 60% de água.

42. Conjunto de acordo com a reivindicação 41, caracterizado por o diluente aquoso conter ainda sal tampão.

43. Utilização de uma composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 1, na preparação de um medicamento destinado ao tratamento de uma doença, seleccionada do grupo constituído por tumores benignos, cancro, 7 perturbações hematológicas, aterosclerose, agressões nos tecidos corporais devido a cirurgia, cicatrização anómala de feridas, angiogénese anómala, doenças que produzem fibrose dos tecidos, perturbações causadas por movimentos repetitivos, perturbações dos tecidos que não são muito vascularizados e respostas proliferativas associadas a transplantes de órgãos.

44. Utilização de acordo com a reivindicação 43, caracterizada por a composição farmacêutica se destinar a administração por via oral, parentérica, tópica, intraperitonial, intravenosa, intra-arterial, transdérmica, sublingual, intramuscular, rectal, transbucal, intranasal, lipossomal, por inalação, por via vaginal, intraocular, por administração local, subcutânea, intra-adiposa, intra-articular ou intratecal.

45. Utilização de acordo com a reivindicação 43, caracterizada por a composição farmacêutica se destinar a ser administrada por via intravenosa, intramuscular ou subcutânea.

46. Utilização de acordo com a reivindicação 43, caracterizada por a composição farmacêutica ser ainda mais diluída com um diluente aquoso antes da administração ao doente.

47. Utilização de acordo com a reivindicação 46, caracterizada por o diluente aquoso ser para perfusão e a composição farmacêutica se destinar a perfusão intravenosa.

48. Utilização de acordo com a reivindicação 46, caracterizada por a diluição ser efectuada 10 h, 2 h, 1 8 h, 30 min, 10 min, 5 min ou menos antes de ser administrada ao doente.

49. Utilização de acordo com a reivindicação 43, caracterizada por o referido medicamento se destinar a administração com um agente terapêutico diferente da decitabina.

50. Utilização de acordo com a reivindicação 49, caracterizada por o agente terapêutico consistir em agentes antimetabólicos, agentes alguilantes, compostos retinóides, agentes hormonais, agentes derivados de plantas, agentes biológicos, interleuquinas, interferões, citoquinas, anticorpos imunomoduladores e monoclonais.

51. Utilização de acordo com a reivindicação 43, caracterizada por a doença ser seleccionada do grupo constituído por síndrome mielodisplásico, leucemia, tumores malignos e anemia falsiforme.

52. Utilização de acordo com a reivindicação 43, caracterizada por o referido medicamento ser preparado por meio da mistura da decitabina e um composto de ciclodextrina que se encontram em forma sólida com um diluente aquoso, pelo menos, 60% v/v de água para formar uma formulação farmacêutica.

53. Utilização de acordo com a reivindicação 43, caracterizada por o referido medicamento ser preparado por meio da mistura da decitabina em forma sólida com um diluente aquoso contendo um composto de ciclodextrina solvatado em, pelo menos, 60% v/v de água para formar uma formulação farmacêutica.

54. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 1, para utilização no tratamento de uma doença, 9 seleccionada do grupo constituído por tumores benignos, cancro, perturbações hematológicas, aterosclerose, agressões nos tecidos corporais devido a cirurgia, cicatrização anómala de feridas, angiogénese anómala, doenças gue produzem fibrose dos tecidos, perturbações causadas por movimentos repetitivos, perturbações dos tecidos gue não são muito vascularizados e respostas proliferativas associadas a transplantes de órgãos. e Si * f $? g *U * * * I l·. í h .;/·'. .·/; ..tf f ·.* tf" :#> ' :/ tf tf 1/6 !*·' ,N\ s? 5*· « 7 - £ .jí / -O / /: . ,- : '- J / 4 :r >> ; .í- <· \r to ro Q / .'/ / 7 ::>V ·..// Stf · /# í,« m l-c -4*......,· tf tf. s ^\.,Q £: Potência DAC (%) Figura 1 2/6

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